KR20140094180A

KR20140094180A - 보체인자 b 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물

Info

Publication number: KR20140094180A
Application number: KR1020130006595A
Authority: KR
Inventors: 백융기; 이민정
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2013-01-21
Filing date: 2013-01-21
Publication date: 2014-07-30

Abstract

본 발명은 췌장암 진단용 바이오 마커로서 보체인자 B 단백질의 개체 시료 내 수준을 분석하여 췌장암을 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법 및 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장용 진단용 조성물을 이용하여 혈장 내 보체인자 B 단백질의 발현량을 분석하여 조기에 췌장암을 진단할 수 있다.

Description

보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물{COMPOSITION FOR PANCREATIC CANCER DIAGNOSIS COMPRISING COMPLEMEMT FACTOR B-SPECIFIC BINDING POLYPEPTIDE OR ANTIBODY}

본 발명은 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물 및 이를 이용하여 췌장암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.

췌장암은 세계적으로 9번째로 많이 발병되는 주요 암으로서 사망률은 4번째로 높은 악성 종양이다(Lowenfels, A.B., et al., Best Pract Res Clin Gastroenterol, 197-209, 2006). 대개의 국가에서 췌장암이 전체 악성 종양 발생에서 차지하는 비중은 2-3% 에 지나지 않지만 사망자수가 차지하는 비중은 전체 종양 관련 사망 가운데 무려 6%를 차지한다. 그 이유는 췌장암의 2년 생존율이 10% 내외에 불과할 정도로 낮고 5년 생존율도 5%를 넘지 못할 정도로 예후가 불량하기 때문이다(Lee, C.N., et al., Pancreas, 94-94, 2012).

췌장암은 상당히 진행되기 전까지는 증상이 나타나지 않는 경우가 대부분이기 때문에 일단 췌장암이 진단되면 이미 매우 진전된 후여서 수술이 불가능한 경우가 많다. 또한 수술이 가능한 경우에도 수술한 환자의 80~90%가 재발하고 사망에 이르게 된다. 췌장암을 치료하기 위하여 수술요법 외에도 방사선 요법, 화학 요법 등이 시행되고 있지만 환자의 생존 기간에는 제한된 효과를 나타내는 경우가 대부분이다. 따라서 췌장암을 조기에 진단하는 것이 매우 중요하다.

췌장암을 진단하는 방법으로는 전산화 단층촬영(computed tomography; CT)이나 자기공명 영상장치(magnetic resonance imaging; MRI)를 사용하는 조직검사가 있으며 최근에는 췌장암을 진단할 수 있는 임상시료로서 혈장과 같은 체액에서의 단백질 분석을 동시에 측정하여 췌장암 존재 또는 발병 가능성 여부를 판단하고 있다. 현재 췌장암과 관련되어 가장 흔히 쓰이는 종양 표지자는 카보하이드레이트 안티젠 19-9 (carbohydrate antigen 19-9: CA 19-9) 이지만, 췌장암 이외에도 담도를 포함한 소화기계의 암 환자의 혈장에서 모두 상승 됨이 알려져 있어 특이도가 낮다는 문제점이 있고, 또 악성 종양이 없는 담관염과 담도 폐색이 있는 경우에도 상승 된다고 알려져 있다(출처: 국가건강정보포털). 또한 조기암에서는 CA 19-9 표지자의 혈중 농도가 정상으로 나타나는 경우가 많으므로 조기 진단에는 사용할 수 없고, 췌장암의 예후 판정과 치료 후의 추적 검사에만 제한적으로 사용된다.

보체인자 B (Complement factor b)는 CFB라고도 불려지는 단백질로서, 보체 활성의 대체 경로(Alternative pathway) 중 중요한 성분 중 하나이다. 대체경로는 항원-항체 복합체 형성과 상관없이, 병원체 세포 표면의 당 구조에 의해 활성화하기 시작되는데 먼저 혈액 중에 소량 존재하는 C3b가 미생물 표면에 결합함으로써 유도된다. C3b는 혈액중의 Factor B와 결합하면 Factor D에 의해 C3bBb와 Ba로 분해되고, C3bBb는 불안정하나 프로페리딘에 의해 안정화되어 대체경로의 C3 전환효소(con.vertase)가 되고 보다 많은 C3b를 만들어내는 증폭 과정(amplification phase)에 들어간다. 그 결과 보다 많은 C3 전환효소가 생성되며, 생성된 C3 전환효소와 C3b가 미생물 세포 표면에 결합하여 C3bBb3b 복합체를 형성한다. 이것이 대체경로의 C5 전환효소 작용을 나타내어, C5를 C5a와 C5b로 분해하게 되고 최종적으로 세균 표면에 MAC을 형성하게 되며, 그 결과 세균이 죽고 항원이 제거된다. 보체인자 B는 이 대체 경로의 초기 단계인 c3b 단백질과 결합하여 c5 생성에 중요한 역할을 하고 있고 분비 단백질 (secreted protein)로 알려져 있으며 당단백질로서 글라이칸 위치 (glycan site)가 5개가 존재하고 있다.

현재까지의 보고에 의하면 보체인자 B는 난소암 (Wu.J., et al., JPR, 4541-52, 2012), 상인두암(Seriramalu. R., et al., Electrophoresis, 2388-95, 2010), 유방암(Doustjalali, S.R., et al., Electrophoresis, 2392-401, 2004) 등의 다양한 환자의 혈청에서 분비된다고 알려져 있지만 혈액에서 보체인자 B와 췌장암의 발병 상관관계에 대하여는 알려진 바 없다.

따라서, 본 출원인은 보다 특이적이고 민감도가 높은 새로운 췌장암 진단용 바이오 마커로서 보체인자 B 단백질을 발견하고 이를 이용하여 췌장암 진단을 위한 정보의 제공방법 및 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물을 제공하고자 한다.

이에 본 발명자들은 조기에 췌장암을 진단할 수 있는 마커 및 췌장암 진단방법에 대해 연구하고자 췌장암 진단용 바이오 마커의 후보물질로 보체인자 B 단백질을 선정하고 정상인 및 췌장암 환자의 혈장에서 보체인자 B 단백질의 존재를 확인하고 변화를 관찰하였다. 연구 결과, 보체인자 B 단백질의 수준이 췌장암 환자의 혈장에서 정상 대조군에 비해 매우 높다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명은 개체의 시료 중에 보체인자 B 단백질의 수준을 정량하는 단계를 포함하는 췌장암 진단을 위한 정보의 제공방법을 제공한다. 본 발명의 한 구체예에서, 췌장암 후보 환자의 시료 및 정상 대조군의 시료의 보체인자 B 단백질의 수준을 정량한 후 비교하는 단계를 더 포함할 수 있다. 두 시료를 비교하여 췌장암 후보 환자의 시료의 보체인자 B 단백질 수준이 정상 대조군 시료의 보체인자 B 단백질 수준보다 높은 경우 상기 후보 환자를 췌장암 환자로 분류할 수 있다. 예를 들어, 췌장암 후보 환자의 시료의 보체인자 B 단백질 수준이 정상 대조군 시료의 보체인자 B 단백질 수준보다 2배 이상 높은 경우 상기 후보 환자를 췌장암 환자로 분류할 수 있다.

본 발명의 한 구체예에서, 개체의 시료에 있어서, 보체인자 B는 대식세포로부터 분비되는 분비 단백질 (secreted protein)이므로 단백질을 분석하기 위하여 정상인 혈장과 췌장암 환자의 혈장을 시료로 사용할 수 있다.

보체인자 B 단백질의 수준을 정량하는 방법은 2차원 형광전기영동, ELISA, 방사선 면역분석, 방사 면역확산법, 면역전기영동 또는 질량분석을 이용할 수 있다. 예를 들어, 췌장암 후보 환자 및 정상 대조군의 시료 내 보체인자 B 단백질의 수준을 정량하고 비교하는 방법으로 웨스턴 블롯을 이용할 수 있다. 웨스턴 블롯은 단백질을 검출하기 위해 널리 쓰이는 방법으로 항원과 항체반응을 이용하여 시료를 검출하는 방법이다. 구체적으로 전기영동을 통해 시료를 전개시키고, 이를 다시 막(membrane)으로 트랜스퍼시킨 다음 현상하여 단백질의 발현을 검출 분석한다. 도 8에 도시한 바와 같이, 웨스턴 블롯을 이용하여 정상인과 췌장암 환자의 혈장 내 보체인자 B 단백질 수준을 비교할 수 있다. 그 외에도, 도 3에 도시한 바와 같이 2차원 형광 전기영동을 이용하여 정상인의 혈장 보다 췌장암 환자의 혈장에서 보체인자 B 단백질의 수준이 증가함을 확인할 수 있다.

본 발명은 또한 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물 및 진단키트를 제공한다. 보체인자 B 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.

서열번호 1:

MGSNLSPQLCLMPFILGLLSGGVTTTPWSLARPQGSCSLEGVEIKGGSFRLLQEGQALEYVCPSGFYPYPVQTRTCRSTGSWSTLKTQDQKTVRKAECRAIHCPRPHDFENGEYWPRSPYYNVSDEISFHCYDGYTLRGSANRTCQVNGRWSGQTAICDNGAGYCSNPGIPIGTRKVGSQYRLEDSVTYHCSRGLTLRGSQRRTCQEGGSWSGTEPSCQDSFMYDTPQEVAEAFLSSLTETIEGVDAEDGHGPGEQQKRKIVLDPSGSMNIYLVLDGSDSIGASNFTGAKKCLVNLIEKVASYGVKPRYGLVTYATYPKIWVKVSEADSSNADWVTKQLNEINYEDHKLKSGTNTKKALQAVYSMMSWPDDVPPEGWNRTRHVIILMTDGLHNMGGDPITVIDEIRDLLYIGKDRKNPREDYLDVYVFGVGPLVNQVNINALASKKDNEQHVFKVKDMENLEDVFYQMIDESQSLSLCGMVWEHRKGTDYHKQPWQAKISVIRPSKGHESCMGAVVSEYFVLTAAHCFTVDDKEHSIKVSVGGEKRDLEIEVVLFHPNYNINGKKEAGIPEFYDYDVALIKLKNKLKYGQTIRPICLPCTEGTTRALRLPPTTTCQQQKEELLPAQDIKALFVSEEEKKLTRKEVYIKNGDKKGSCERDAQYAPGYDKVKDISEVVTPRFLCTGGVSPYADPNTCRGDSGGPLIVHKRSRFIQVGVISWGVVDVCKNQKRQKQVPAHARDFHINLFQVLPWLKEKLQDEDLGFL

본 명세서에서 폴리펩타이드는 특정 길이가 아닌 아미노산의 중합체를 지칭하는 것으로 펩타이드, 올리고펩타이드 및 단백질 단편을 포함한다. 본 발명의 한 구체예에서 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드는 보체인자 B 단백질의 결합 도메인을 갖는 폴리펩타이드일 수 있다. 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드는 당업계에 공지된 통상의 방법, 예를 들어 파아지 디스플레이 방식으로 얻을 수 있다(Smith GP, "Filamentous fusion phage: novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface". Science 228 (4705):13151317(1985); Smith GP, Petrenko VA, "Phage display". Chem.Rev.97(2):391410(1997)).

항체는 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자들, 또는 이것의 단편으로부터 유래되거나 이를 본떠서 만든 실질적으로 이에 의해 암호화된 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 나타낸다. 본 명세서에서 항체는 전체 항체 및 항체 단편을 포함하며 이에 제한되지 않는 다양한 형태의 항체 구조를 포함한다. 항체 단편은 전체 길이의 항체의 일부분, 항체의 가변 도메인, 또는 적어도 항체의 항원 결합 부위를 포함한다. 항체 단편의 예는 다이아바디(diabody), 단일-쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.

본 발명의 한 구체예에서, 항체는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체일 수 있다. 보체인자 B 단백질에 대한 항체는 당업계에서 통상적으로 실시되는 방법들, 예를 들어, 융합 방법(Kohler and Milstein, European Journal of Immunology, 6:511-519(1976)), 재조합 DNA 방법(미국 특허 제4,816,56호) 또는 파아지 항체 라이브러리 방법(Clackson et al, Nature, 352:624-628(1991) 및 Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597(1991))에 의해 제조될 수 있다. 항체 제조에 대한 일반적인 과정은 Harlow, E. and Lane, D., Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York, 1999; Zola, H., Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc., Boca Raton, Florida, 1984; 및 Coligan, CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, Wiley/Greene, NY, 1991에 상세하게 기재되어 있다. 예를 들어, 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 제조는 불사멸화 세포주를 항체-생산 림프구와 융합시켜 이루어지며, 이 과정에 필요한 기술은 당업자에게 잘 알려져 있으며 용이하게 실시할 수 있다. 폴리클로날 항체는 보체인자 B 단백질 항원을 적합한 동물에게 주사하고, 이 동물로부터 항혈청을 수집한 다음, 공지의 친화성(affinity) 기술을 이용하여 항혈청으로부터 항체를 분리하여 얻을 수 있다.

본 발명은 또한 보체인자 B의 발현 수준을 정량하는 단계를 포함하는 췌장암 진단을 위한 정보의 제공방법을 제공한다. 구체적으로 정상 췌장 세포 및 췌장암 후보 환자의 췌장 세포에서 보체인자 B의 발현 수준을 정량한 후 비교하여 췌장암 진단을 위한 정보를 제공할 수 있다. 비교 결과, 췌장암 후보 환자의 세포에서의 보체인자 B 발현이 정상 췌장 세포의 보체인자 B 발현 수준보다 높은 경우 상기 후보 환자를 췌장암 환자로 분류할 수 있다. 보체인자 B의 발현 수준을 정량하는 방법은 보체인자 B를 코딩하는 유전자에 대한 PCR 프라이머를 이용한 RT-PCR 또는 정량적 RT-PCR 등을 수행하거나 보체인자 B 유전자에 대한 프로브를 이용한 노던 블롯 분석 등을 이용할 수 있다.

본 발명에 따른 췌장암 진단용 바이오 마커로서 보체인자 B 단백질의 개체 시료 내 수준을 분석하여 췌장암을 진단하기 위한 정보를 제공할 수 있고 보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장용 진단용 조성물을 제공할 수 있다.

도 1은 정상인 혈장에 대한 2차원 전기영동 이미지와 보체인자 B의 위치를 나타낸 사진이다. 화살표가 가리키는 스팟(검은점) 부분이 보체인자 B 단백질을 나타낸다.
도 2는 췌장암 환자의 혈장에 대한 2차원 전기영동 이미지와 보체인자 B의 위치를 나타낸 사진이다.
도 3은 정상인 혈장과 췌장암 환자의 혈장에서 보체인자 B의 발현 차이를 보여주는 것으로 도 1 및 도 2의 스팟(검은점) 부분을 3차원 이미지로 나타낸 사진이다.
도 4는 도 1 및 도2의 스팟(검은점) 부분이 정상인과 췌장암 환자의 혈장에서 보체인자 B 단백질임을 질량 분석기기를 이용하여 확인한 결과이다.
도 5는 혈장 내 보체인자 B의 존재를 증명하기 위해 면역침강 후 1차원 전기영동으로 분리한 결과이다.
1DE: 1차원 전기영동
IP: 면역침강법
IP1,IP2,IP3: 3번 반복 실험
도 6은 도 5에서 보이는 겔 밴드를 잘라내어 단백질을 펩티드 형태로 잘라 내고, 질량 분석기를 사용하여 보체인자 B 단백질을 확인한 결과이다.
도 7은 대표적인 5명의 정상인과 췌장암 환자 혈장의 보체인자 B의 변화를 면역블롯팅으로 확인한 결과를 나타낸 사진이다.
N: 정상인
C: 췌장암 환자
도 8은 총 20명의 정상인과 췌장암 환자 혈장의 보체인자 B의 존재량에 대한 비교 그래프이다.
Normal: 정상인
PC: 췌장암 환자

이하, 본 발명을 실시예를 통해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

<실시예>

실시예 1. 혈장 수득

혈장의 수득은 세브란스 병원 유전자 은행과 소화기 내과로부터 공급받았고, 임상시험위원회(IRB) 규정에 따랐다. 혈장시료는 200μl씩 분주하여 -70°C에서 실험전 까지 보관하여 사용하였다.

실시예 2. 2차원 형광 전기영동

10명의 정상인 혈장 및 10명의 췌장암 환자 혈장의 시료에 대하여 각 분석시료와 그에 해당하는 표준시료 50 μg은 형광염료인 400 pmol Cy3, Cy5, Cy2 (GE Healthcare)로 암흑 조건에서 30분간 표지시켰고, 1 μL 10 mM 라이신(lysine)으로 반응을 정지시켰다. 형광 염료로 각각 표지된 3개의 시료는 서로 혼합시켜 최종 450 μL가 되도록 시료완충용액[6 M 우레아, 2 M 티오우레아, 4% 챕스, 60 mM 디티오트레이톨(dithiothreitol; DTT), 30 mM 트리스, pH 8.5]을 첨가하였고, 2% IPG 4-7NL 완충용액과 함께 상온에서 16시간 동안 재수화(rehydration)시켰다. 등전집속(isoelectric focusing; IEF)은 이모빌린 드라이스트립(Immobiline DryStrip) pH 4-7NL(GE Healthcare)을 사용하여 MultiPhor II 전기영동(electrophoresis) 시스템(GE Healthcare)에서 최적요건인 95,000 V까지 올려 실시 하였고, 트리부틸포스핀(Tributylphosphine) 완충용액[6 M 우레아, 2% 황산염(Sodium dodecyl sulfate, SDS), 30 mM 트리스, 20% 글리세롤(glycerol), 2.5% 아크릴아미드 용액(acrylamide solution), 5 mM 트리부틸포스핀]으로 25분 동안 원-스텝 환원 및 알킬화 시켰다.

2차 수직전기영동은 Ettan Dalttwelve 전기영동시스템(GE Healthcare)을 사용하여 9%~16% 폴리아크릴아마이드겔을 사용하여 분리하였고, 전기영동이 끝난 후 Typhoon 9400(GE Healthcare) 스캐너를 이용하여 Cy2, Cy3, Cy5에 해당하는 파장으로 스캔하였다. 각 겔 이미지는 DeCyder 2-D 분석소프트웨어(GE Healthcare)를 이용하여 분석하였다.

실시예 3. 2차원 형광 전기영동 겔의 단백질 동정

이미지 분석 후, 유의적으로 변화된 단백질 스팟은 쿠마시블루(Coomassie blue) 염료로 염색된 겔로부터 피킹(picking)하였고, 탈색하여 트립신으로 절단(digestion)한 후, 절단된 펩티드들은 포로스(Poros) R2 및 올리고(Oligo) R3 레진(resin) 혼합물을 사용하여 탈염(desalting)시켰다. 단백질 동정은 Q-TOF (Agilent)으로 분석하였으며, Q-TOF-MS로 얻은 스펙트럼은 MASCOT 데이터베이스를 이용하여 동정하였다.

실시예 4. 혈장 내 췌장암 마커 단백질 발현량 검증-면역블롯팅

췌장암 진단 마커 단백질의 췌장암 혈장에 존재하는 단백질 농도 차이를 검증하기 위하여, 10명에 대한 정상인 혈장과 10명의 췌장암 환자 혈장에서 동일한 단백질 양으로부터 항체를 이용한 면역블롯팅(Western blot analysis)을 수행하였다. 혈장 단백질 10μg을 10% SDS-PAGE 분석 후 면역 블롯팅을 위해 겔 전체를 니트로셀루로오스(nitrocellulose; NC) 막으로 전환(transfer)한 후 5% 탈지유(skimmed milk)가 포함된 TBS-T 완충용액 [20 mM 트리스, 137 mM 염화나트륨, 0.1% 트윈20(Tween-20), pH 7.6]으로 1시간동안 블로킹하였다. 항-보체인자 B 항체(CFB, Abcam)를 5% 탈지유가 포함된 TBS-T 완충용액에 1:1000배씩 희석하여 1차 처리하고 항-마우스(mouse) IgG-HRP (Santa Cruz)를 1:10000배를 2차 처리하였다. 최종 NC막은 ECL Plus 웨스턴블롯 시약(GE Healthcare)으로 1분간 반응시켰고, Typhoon 9400 스캐너로 스캔하여 분석하였다.

실시예 5. 혈장 내 보체인자 B 단백질 검증법

췌장암 환자의 혈장 100μg, 항-보체인자 B 항체 2μg, 단백질 G 아가로즈 10μl를 함께 1ml 튜브에서 2시간 동안 면역침강 시킨 후 보체인자 B 단백질을 분리하고 정상인과 췌장암환자 시료액은 용해완충용액에서 단백질 변형 (denaturation) 시킨 후, 1차원 전기영동으로 분리하여 약 100 kDa 위치의 겔 밴드(band)를 잘라내고 디티오트리에톨(dithiothrietol, DTT)/아이오도초산(iodoacetic acid, IAA)처리를 통하여 단백질 환원과 알킬화를 시켰으며, 트립신을 처리하여 펩티드로 절단시킨 후 질량 분석기 (MALDI-TOF)를 이용하여 겔 내의 보체인자 B 단백질을 동정하였다.

Claims

개체의 시료 중에 보체인자 B 단백질의 수준을 정량하는 단계를 포함하는 췌장암 진단을 위한 정보의 제공방법.
제1항에 있어서, 췌장암 후보 환자의 시료 및 정상 대조군의 시료의 보체인자 B 단백질의 수준을 비교하는 단계를 더 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 췌장암 후보 환자의 시료의 보체인자 B 단백질 수준이 정상 대조군 시료의 보체인자 B 단백질 수준보다 높은 경우 상기 후보 환자를 췌장암 환자로 분류하는 단계를 더 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 췌장암 후보 환자의 시료의 보체인자 B 단백질 수준이 정상 대조군 시료의 보체인자 B 단백질 수준보다 2배 이상 높은 경우 상기 후보 환자를 췌장암 환자로 분류하는 단계를 더 포함하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 시료가 혈액인 방법.
제1항에 있어서, 보체인자 B 단백질의 수준을 정량하는 방법은 2차원 형광전기영동, 면역블롯팅, ELISA, 방사선 면역분석, 방사면역확산법, 면역전기영동 또는 질량분석을 이용하는 것인 방법.
보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물.
제7항에 있어서, 보체인자 B 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것인 조성물.
제7항에 있어서, 폴리펩타이드는 보체인자 B 단백질 결합 도메인을 포함하는 폴리펩타이드인 조성물.
제7항에 있어서, 항체는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체인 것인 조성물.
보체인자 B 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단키트.
제11항에 있어서, 보체인자 B 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것인 조성물.
제11항에 있어서, 항체는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체인 것인 조성물.