KR20140089629A - 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물 - Google Patents

흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 굼벵이로 알려진 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법은 (a) 동결건조된 흰점박이꽃무지를 분쇄시키는 단계; (b) 분쇄된 흰점박이꽃무지와 용매를 혼합하여 흰점박이꽃무지 혼합액을 제조하는 단계; (c) 초음파 분쇄기로 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계; 및 (d) 미세화된 흰점박이꽃무지 혼합액을 원심분리 시킨 후, 상층액을 회수하고 여과시키는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 흰점박이꽃무지 현탁액을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물은 부작용이 없고, 안전성이 우수할 뿐만 아니라 항비만 효능을 가짐으로써 비만 및 비만과 연관된 질병의 예방 및 치료제로서 사용이 가능하다.

Description

흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물 {PREPARING METHOD FOR PROTAETIA BREVITARSIS SUSPENSION AND ANTI-OBESITY COMPOSITION CONTAINING THE SAME}
본 발명은 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 굼벵이로 알려진 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물에 관한 것이다.
현대사회에서 가장 중요한 건강문제로 알려진 비만은 식습관의 서구화, 유전적 영향, 약물과 스트레스에 인한 내분비적 요인, 개인의 정신적, 육체적인 환경적 요인 등의 변화로 인하여 체내의 항상성의 불균형으로 인해 일어난다고 알려져 있다.
비만은 자체로도 건강을 위협하지만 가장 큰 문제는 비만에 수반되는 동맥경화나 심장질환, 호흡장애, 암과 같은 치명적인 합병증을 유발할 수 있기 때문에 비만에 대한 관리와 치료는 현대인에 있어서 매우 중요하다.
2007년 국민영양건강조사에 의하면, 19세 이상 비만 유병율은 31.7%로 1998년 26%에 비해 지난 10년간 5.7%나 증가 하였다. 이는 미국의 34.3% 비하면 낮은 수준이지만, 같은 아시아권인 일본의 24%에 크게 웃도는 수준이다.
이와 같이 증가하는 비만에 대한 예방 및 치료법은 식습관 개선과 주기적인 운동이 요구되고 있지만 현대인의 특성상 비만억제를 위한 주요 노력은 비만치료제 약물과 건강보조 식품에 주로 초점이 맞춰져 있다.
현재 우리나라에서 주로 사용되고 있는 비만 치료제로서는 식욕억제제의 일종인 시부트라민(sibutramine)과 phntermine과 지방흡수 억제제인 orlistant가 있다 (Rolls B.J et al., Obes . Res. 6: 1-11, 1988; Hansen D.L. et al , Am . J. Clin. Nutr . 68: 1180-1186, 1998). 이들 약물은 비록 안정성이 FDA에 의해 승인 받고 사용되고 있지만, 혈압을 높이고 심장 박동을 빠르게 하거나 고혈압 및 심장질환계 질환을 가지고 있는 환자들은 복용을 주의해야 하는 등 부작용을 가지고 있다.
따라서 최근 비만의 예방과 치료를 위해서는 부작용이 없거나 적은 식품이나 천연물에서 치료제를 찾는 연구가 많이 진행되고 있다.
지방조직이 우리 몸에서 하는 기능은 주 에너지원인 지방을 합성하고 저장하며, 이를 분해하여 각종 장기에 영양분을 공급하고 다양한 내분비 호르몬과 사이토카인을 분비하여 체내 에너지를 조절하는 항상성을 유지하는 일을 수행한다. 따라서 지방세포를 조절하는 것은 비만에 대해 연구하고 이해하며 치료하는데 매우 중요한 근간이 되는 연구라 할 수 있다.
천연물을 이용한 항비만에 관한 연구는 주로 녹차, 율피, 알쏭이모자반 등 식물에 대한 특허와 논문이 주를 이루고 있다.
한편, 굼벵이는 한방으로부터 오랫동안 다양한 질환에 약으로 사용되어져 왔다. 굼벵이는 현재 농가에서 널리 사육되어져 한방이나 민간요법에 사용되고 있으며 딱정벌레목(Coleoptera), 꽃무지과(Cetoniinae) 곤충인 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis)가 주종이다.
현대사회의 건강에 대한 관심이 고조됨으로써 중국으로부터 무분별한 수입으로 인해 안전과 효능이 검증되지 않은 각종 천연물과 생약제 들이 국내에 수입되고 있으며, 굼벵이 또한 천연 생약제의 하나로써 중국에서 채집 건조된 동정되지 않은 불분명한 종들이 대량으로 사용되고 있다.
그러나, 이처럼 민간요법으로 다양하게 사용되는 흰점박이꽃무지를 비만 예방 및 치료에 이용한 연구는 보고되지 않았다.
이에, 본 발명자들은 우수한 항비만 효과를 가지는 신규 천연물 조성물을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 굼벵이로 알려진 흰점박이꽃무지를 분쇄시키고, 이를 용매와 혼합시킨 다음, 초음파 분쇄기로 더욱 미세화시킨 후, 원심분리 상층액을 회수할 경우, 우수한 항비만 효과를 가지는 흰점박이꽃무지 현탁액을 제조할 수 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 항비만 효과를 가지는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 비만 예방 및 치료능이 우수한 천연물 유래 항비만 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 동결건조된 흰점박이꽃무지를 분쇄시키는 단계; (b) 분쇄된 흰점박이꽃무지와 용매를 혼합하여 흰점박이꽃무지 혼합액을 제조하는 단계; (c) 초음파 분쇄기로 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계; 및 (d) 미세화된 흰점박이꽃무지 혼합액을 원심분리 시킨 후, 상층액을 회수하고 여과시키는 단계를 포함하는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 용매는 증류수, 디메틸설폭사이드(DMSO) 및 이들의 혼합액으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 용매 1L당 분쇄된 흰점박이꽃무지 0.5~1g을 혼합시키는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계는 초음파 분쇄기를 흰점박이꽃무지 혼합액에 5~20초간, 1~3회 작동시키는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한, 상기 방법으로 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 항비만 조성물은 비만예방 및 개선용 식품 조성물인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 항비만 조성물은 비만예방 및 치료용 약학 조성물인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 흰점박이꽃무지 현탁액을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물은 부작용이 없고, 안전성이 우수할 뿐만 아니라 항비만 효능을 가짐으로써 비만 및 비만과 연관된 질병의 예방 및 치료제로서 사용이 가능하다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액의 3T3-L1 세포에 대한 독성 평가 그래프이다 (A: 증류수 현탁액, B: DMSO 현탁액).
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액의 3T3-L1 세포 분화에 끼치는 영향을 관찰한 광학 현미경 사진이다(A: 증류수 현탁액, B: DMSO 현탁액).
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 3T3-L1 세포에 처리하고, Oil-red 염색 후 관찰한 광학 현미경 사진이다(A: 증류수 현탁액, B: DMSO 현탁액).
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 3T3-L1 세포에 처리하고, Oil-red 염색 후 이를 용출시켜 염색된 Oil-red의 양을 흡광도로 측정한 그래프이다 (A: 증류수 현탁액, B: DMSO 현탁액).
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 처리한 3T3-L1 세포의 분화과정에서 생성된 트리글리세라이드(triglyceride) 생성량을 측정한 그래프이다 (A: 증류수 현탁액, B: DMSO 현탁액).
본 발명에서는 굼벵이로 알려진 흰점박이꽃무지가 항비만 효과를 가진다는 것을 확인하고자 하였다.
본 발명의 일 실시예에서는, 동결건조된 흰점박이꽃무지를 분쇄시키고, 이를 용매와 혼합시킨 다음, 초음파 분쇄기로 더욱 미세화시키고, 원심분리시킨 후 그 상층액을 회수하여 흰점박이꽃무지 현탁액을 제조하였다. 그리고, 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 지방전구세포에 처리한 결과, 지방세포로 분화되는 것을 억제한다는 것을 확인 할 수 있었다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, (a) 동결건조된 흰점박이꽃무지를 분쇄시키는 단계; (b) 분쇄된 흰점박이꽃무지와 용매를 혼합하여 흰점박이꽃무지 혼합액을 제조하는 단계; (c) 초음파 분쇄기로 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계; 및 (d) 미세화된 흰점박이꽃무지 혼합액을 원심분리 시킨 후, 상층액을 회수하고 여과시키는 단계를 포함하는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis seulensis)는 딱정벌레목 꽃무지과에 속하는 곤충으로, 한국, 일본, 러시아 등에 분포하며 성충은 늦봄부터 가을까지 볼 수 있으나 한여름에 많이 활동하며, 참나무의 진뿐만 아니라 자두나무, 살구나무, 포도나무 등에도 모이며 수박과 같은 과일에도 잘 모이는 것으로 알려져 있다.
흰점박이꽃무지의 몸 길이는 보통 17~22mm이며, 몸은 광택이 강한 녹갈색이나 구릿빛 또는 붉은빛을 띠는데 녹색, 남색, 흑남색, 흑자색 등의 변이도 있다.
본 발명에 있어서, 상기 용매는 세포독성이 없고, 흰점박이꽃무지를 용해시킬 수 있는 것이라면 특별한 제한없이 이용할 수 있으며, 증류수, 디메틸설폭사이드(DMSO), 이들의 혼합액 등을 예시할 수 있다.
본 발명에 있어서, 분쇄된 흰점박이꽃무지와 용매를 혼합하여 흰점박이꽃무지 혼합액을 제조시, 용매와 분쇄된 흰점박이꽃무지의 혼합비율은 특별히 제한되지 않으나, 용매 1L당 분쇄된 흰점박이꽃무지 0.5~1g을 혼합시키는 것이 바람직하다. 상기 범위를 벗어날 경우, 번거로운 농축이나 희석 과정을 거쳐 적정 농도로 조절하는 추가 과정을 수행해야하는 문제점이 있을 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계는 흰점박이꽃무지 혼합액으로부터 항비만 효과를 가지는 유효성분을 추출하기 위한 단계로써, 통상적으로 알려진 초음파 분쇄기를 이용하여 특별한 제한없이 미세화시킬 수 있으나, 초음파 분쇄기를 흰점박이꽃무지 혼합액에 200~300줄(jule)의 에너지로 5~20초간, 1~3회 작동시키는 것이 바람직하다.
상기 초음파 분쇄기의 작동 시간 및 횟수가 상기 범위를 벗어날 경우, 목적하는 유효성분의 추출이 이루어지지 않거나, 유효성분이 파괴되거나 변성되는 문제가 발생될 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 방법으로 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물에 관한 것이다
상기 흰점박이꽃무지 현탁액은 필요에 따라 추가적으로 농축 또는 희석될 수 있다.
상기 항비만 조성물은 지방세포 분화 및 지방생성 억제 효과를 가질 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 항비만 조성물은 비만예방 및 개선용 식품 조성물인 것을 특징으로 한다.
상기 식품이란 건강보조식품, 건강 기능식품, 기능성 식품 등이나 이에 제한되는 것은 아니며, 천연식품, 가공식품, 일반적인 식자재 등에 본 발명의 조성물을 첨가한 것도 포함된다.
본 발명의 흰점박이꽃무지 현탁액을 포함하는 식품 조성물은, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 조성물과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 건강기능식품을 식품 또는 음료의 제조시에 원료에 대하여 0.01 내지 70.0%, 바람직하게는 0.01 내지 30.0%의 양으로 첨가될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 10.0%의 양으로 첨가될 수 있다. 식품 조성물의 상기 가수분해물의 유효용량은 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 흰점박이꽃무지 현탁액을 포함하는 식품 조성물은 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제의 형태로 이용될 수 있으며, 이들 제제는 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
상기 흰점박이꽃무지 현탁액을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있으나 이들 종류의 식품으로 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 항비만 조성물은 또한 비만예방 및 치료용 약학 조성물인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 흰점박이꽃무지 현탁액을 포함하는 약학적 조성물은 지방세포 분화 및 지방생성 억제 효과가 있다. 또한 본 발명의 흰점박이꽃무지 현탁액을 포함하는 약학적 조성물은 고지혈증, 지방간, 내장비만, 복부비만 등 부분적 비만 및 총체적 비만(즉, 일반적인 비만)을 예방 및 치료할 수 있다.
본 발명의 흰점박이꽃무지 현탁액을 포함하는 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 바람직한 약제학적 제제는 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제가 있으며 이들 약제학적 제제는 약제학적으로 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
본 발명의 흰점박이꽃무지 현탁액을 포함하는 약학적 조성물의 투여 용량은, 환자의 상태, 연령, 성별 및 합병증 등의 다양한 요인에 따라 전문가에 의해 결정될 수 있지만 일반적으로는 성인 1kg 당 0.1 mg 내지 10 g, 바람직하게는 10 mg 내지 1 g의 용량으로 투여될 수 있다. 또, 단위 제형당 상기 약학적 조성물의 1일 용량 또는 이의 1/2, 1/3 또는 1/4의 용량이 함유되도록 하며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 흰점박이꽃무지 현탁액 제조 및 세포배양
1.1: 흰점박이꽃무지 현탁액 제조
증기로 쪄서 멸균한 참나무 발효톱밥을 먹인 흰점박이꽃무지(판매처: 스머프 곤충나라 영농조합 법인)를 3일 동안 굶긴 후, 액체질소로 급속 동결시키고, -80℃의 초저온 냉동고에서 24시간 동안 동결시킨 다음 동결 건조기에서 수분이 완전히 제거될 때까지 건조시켰다.
동결건조된 흰점박이꽃무지를 분쇄기로 분쇄하고, 분쇄된 흰점박이꽃무지 1g을 증류수(D.W.) 및 DMSO 1L에 각각 넣은 후, 초음파 분쇄기 230줄(Jule)로 10초간 2회 미세화시켰다.
초음파 분쇄기로 미세화시킨 흰점박이꽃무지 혼합액을 4,500 rpm에서 10분 동안 원심분리 시키고, 상층액을 회수한 후 0.25 ㎛ 주사기 필터로 여과하여, 흰점박이꽃무지 현탁액(증류수, DMSO)을 제조하였다.
1.2: 지방전구세포 배양
지방전구세포인 3T3-L1 세포(입수처: 한국세포주은행)를 Penicillin-Streptomycin 100 unit/ml 및 10% Calf serum이 함유된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지에서, 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하였다. 3T3-L1 세포는 3일에 한 번씩 계대 배양을 실시하였다.
3T3-L1 세포는 송아지 혈청(Calf serum)이 첨가된 배지에서 성장이 유지되며, 인위적인 지방세포로 분화를 유도하면 세포가 G1 단계에 머물러 세포 분열이 중지 되고, 지방세포로 서서히 진행되는 것으로 알려졌다(Ailhaud G., Grimaldi P., Negrel R., Annu Rev Nutr., 12: 207-233, 1992).
실시예 2: 세포독성시험
실시예 1에서 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액(증류수, DMSO)을 0, 1, 10 및 100 ㎍/ml 농도로 3T3-L1 세포에 처리하고, 24시간 배양 후, CellTiter 96®AQueousONE Solution Cell proliferation Assay kit (판매처: Promega)를 이용하여 MTS 시약을 첨가한 다음, 4시간 배양하였다. 배양 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader) (Beckman, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1로부터, 흰점박이꽃무지 증류수 현탁액 및 흰점박이꽃무지 DMSO 현탁액 모두 대조군에 비해 세포 생장률이 저해 되지 않아, 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.
실시예 3: 흰점박이꽃무지 현탁액의 지방세포 분화 및 지방생성 억제능 평가
3-1: 흰점박이꽃무지 현탁액 처리
3T3-L1 세포를 1×103/ml 농도로 12웰플레이트(well plate)에 각각 분주하고, 10% calf serum+DMEM 배지로 2일 동안 배양한 후 세포가 더 이상 증식되지 않음을 확인 한 다음, 10% FBS(Fetal Bovine Serum)를 첨가한 DMEM 배지에 IBMX(isobutylmethylxanthine) 0.0115 mg/ml, 인슐린 1㎍/ml 및 덱사메타손(Dexamethasone) 10λM을 첨가하여 제조한 MDI 분화유도 배지에서 2일동안 배양시켰다.
다음으로, 배양시킨 3T3-L1 세포를 인슐린 1㎍/ml+10% FBS+DMEM 배지에서 2일동안 배양시키고, 다시 배양된 3T3-L1 세포를 10% FBS+DMEM 배지에서 2일동안 배양시킨 후, 흰점박이꽃무지 현탁액의 3T3-L1 세포 분화에 끼치는 영향을 광학 현미경으로 관찰하고, 도 2에 나타내었다.
도 2로부터, 흰점박이꽃무지 증류수 현탁액은 지방세포의 분화억제가 다소 미약하지만, 흰점박이꽃무지 DMSO 현탁액은 지방세포의 분화억제가 우수하다는 것을 확인 하였다.
실시예 1에서 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액(증류수, DMSO)은 0, 1, 10 및 100 ㎍/ml 농도로 MDI 분화유도 배지부터 이후 모든 배지에 동시처리 하였다.
3-2: Oil-red 염색을 통한 세포사진 관찰 및 OD 값 측정
지방전구세포 분화에서 형성되는 중성지방을 특이적으로 염색시키는 Oil-red 염색을 통해 흰점박이꽃무지 현탁액의 지방세포 분화 및 지방생성 억제능을 확인하였다.
실시예 3-1에서 흰점박이꽃무지 현탁액을 처리하고 지방으로의 분화를 유도시킨 3T3-L1 세포를 PBS(Phosphate Buffered Saline)로 2회 세척 후, 4% 포름알데하이드(formaldehyde)로 30분 동안 상온에서 고정시켰다. 다음으로 60% 아이소프로판올(isopropanol)으로 3회 세척 후 Oil-red working solution (0.5% Oil-red O in 70% isopropanol)으로 상온에서 2시간 동안 염색을 수행 하였다.
염색된 3T3-L1 세포를 증류수로 3회 세척 후 Vectashield solution (Vector Laboratories, USA)으로 세포핵을 염색시키고, 슬라이드 글라스에 고정 시킨 후 Oil-red 염색은 광학현미경, 핵은 형광 현미경으로 관찰 하고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3으로부터, 흰점박이꽃무지 증류수 현탁액은 100㎍/ml의 농도에서 지방세포의 지방과립(lipid droplet)을 약간 억제하는 효과를 나타냈으며, 흰점박이꽃무지 DMSO 현탁액은 1㎍/ml 농도부터 Oil-red 염색이 되지 않아 지방세포 분화 및 지방생성 억제능이 우수하다는 것을 확인하였다.
또한, Oil-red로 염색된 3T3-L1 세포에 100% 아이소프로판올(isopropanol)을 처리하여 염색된 Oil-red를 용출시키고, 염색된 Oil-red의 양을 DU®730 분광광도계(Beckman, USA)를 이용하여 510 nm에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4로부터, 흰점박이꽃무지 증류수 현탁액을 처리한 3T3-L1 세포에서는 흰점박이꽃무지 DMSO 현탁액을 처리한 3T3-L1 세포 보다 많은 Oil-red가 염색된 것으로 확인되었다. 이는 도 3의 광학 현미경하에서 확인된 결과와 일치한다.
3-3: 분화된 3T3-L1 세포의 트리글리세라이드(triglyceride) 생성량 측정
흰점박이꽃무지 현탁액의 항비만 효능을 효소학적으로 확인하기 위하여 지방전구세포 분화에서 형성되는 트리글리세라이드 생성량을 triglyceride assay kit(wako)를 이용해 측정하였다.
실시예 3-1에서 흰점박이꽃무지 현탁액을 처리하고 지방으로의 분화를 유도시킨 3T3-L1 세포를 PBS(Phosphate Buffered Saline)로 2회 세척 후, M-per® mamalian cell extraction reagent (Thermo)를 이용해 용해시키고, 아이스 컨디션(ice condition)하에서 15분 동안 방치시켰다.
다음으로 원심분리기를 통해 상층액을 수거하고, 이를 Triglyceride assay kit(Wako, Japan)를 이용하여 96 well plate에서 반응액과 반응시키고, 발색을 통해 595 nm에서 microplate reader (Beckman, USA)로 흡광도를 측정함으로써, 트리글리세라이드 생성량을 확인하고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5로부터, 흰점박이꽃무지 증류수 현탁액은 100㎍/ml에서 트리글리세라이드의 생성을 약간 억제하였으며, 흰점박이꽃무지 DMSO 현탁액은 농도 의존적으로 트리글리세라이드의 생성을 억제함으로써, 항비만 효과가 우수하다는 것을 확인하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

  1. (a) 동결건조된 흰점박이꽃무지를 분쇄시키는 단계;
    (b) 분쇄된 흰점박이꽃무지와 용매를 혼합하여 흰점박이꽃무지 혼합액을 제조하는 단계;
    (c) 초음파 분쇄기로 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계; 및
    (d) 미세화된 흰점박이꽃무지 혼합액을 원심분리 시킨 후, 상층액을 회수하고 여과시키는 단계를 포함하는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 용매는 증류수, 디메틸설폭사이드(DMSO) 및 이들의 혼합액으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 용매 1L당 분쇄된 흰점박이꽃무지 0.5∼1g을 혼합시키는 것을 특징으로 하는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 흰점박이꽃무지 혼합액을 미세화시키는 단계는 초음파 분쇄기를 흰점박이꽃무지 혼합액에 5~20초간, 1~3회 작동시키는 것을 특징으로 하는 흰점박이꽃무지 현탁액의 제조방법.
  5. 제1항 내지 제4항중 어느 한 항의 방법으로 제조된 흰점박이꽃무지 현탁액을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항비만 조성물은 비만예방 및 개선용 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 항비만 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 항비만 조성물은 비만예방 및 치료용 약학 조성물인 것을 특징으로 하는 항비만 조성물.
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