KR20140078994A - 제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 제피한 천년초에서 분리된 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물은 알코올이나 침수성 스트레스 유발로 인한 위 점막 세포의 손상을 보호하고, 염증유발인자인 산화질소의 합성을 억제하여 위염 또는 위궤양 억제 효과를 나타내므로 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 건강 기능성 식품으로 이용될 수 있다.
본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물은 알코올이나 침수성 스트레스 유발로 인한 위 점막 세포의 손상을 보호하고, 염증유발인자인 산화질소의 합성을 억제하여 위염 또는 위궤양 억제 효과를 나타내므로 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 건강 기능성 식품으로 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 제피한 천년초에서 분리된 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
염증에 관여하는 인자로는 세로토닌(serotonin; hydroxytryptamine, 5-HT), 키닌(kinins), 히스타민(histamine), 프로스타글란딘(prostaglandins), 류코트리엔(leukotrienes, LTs), 트롬보잔(thromboxanes, TXs), 혈소판 활성인자(plateletactivation factor, PAF), 사이토카인(cytokine), 산소 대사산물(oxygen metabolites) 및 산화질소(nitric oxide, NO) 등이 있으며, 이들이 외부 자극시 활성화되어 염증 반응이 일어나게 된다. 특히, 산화질소는 생체 신경계의 약리학적 매개자로서 뿐만 아니라, 염증 반응, 면역반응 및 세포 독성 이외에도 세포 분화나 세포의 신호 전달 등의 중요한 조절 물질로 알려져 있으며, 산화질소를 합성하는 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)는 구성적 산화질소 합성효소(constitutive nitric oxide synthase, cNOS) 및 유도성 산화 질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)의 두 가지로 분류된다.
구성적 산화질소 합성효소의 이성체는 내피세포성 산화질소 합성효소(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)와 뉴론성 산화질소 합성효소(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)로 나뉘는데, 내피세포성 산화질소 합성효소는 내피세포 및 혈소판에서 혈관항상성을 조절하고(Nishida, K. et al., J. Clin. Invest ., 90:2092, 1992), 뉴론성 산화질소 합성효소는 중추신경체계와 말초신경체계에서 산화질소를 생성한다 (Moncada, S. et al., Pharmacol . Rev ., 49:137, 1997). 유도성 산화질소 합성효소는 대식세포, 간세포, 활면혈관근육, 호중성 백혈구 및 내피세포에 위치한 칼슘 의존 효소이다 (Anggard, E. et al., Lancet, 343:1199, 1994). 이 중 외부 자극인자에 의해 마크로파지(macropharge)에서 유도되는 유도성 산화질소 합성효소로 인한 다량의 산화질소는 혈관을 투과하거나, 부종 등 염증 반응을 야기하여, cyclooxygenase(COX)의 활성을 촉진시켜 프로스타글란딘 등 염증 매개체의 생합성으로 인한 염증 반응을 촉진시키는 작용을 하게 된다.
일반적으로 위장의 벽면은 위장에서 생성된 수소이온이나 유독한 물질로부터 점막을 보호하는데, 이러한 위벽의 기능은 위 손상에 의해 방해를 받게 된다 (Konturek, P.C. et al., J. Physiol . Pharmacol., 48:3, 1997). 특히 위의 미세 환경은 위의 보호 장벽에서 주요한 기능을 담당하고 있는데, 위 점막질 관류 방해는 위궤양이나 위염을 유도하고, 급기야는 위 출혈이나 만성적 궤양으로 발전하게 되며(Brzozowski, T. et al., J. Physiol . Pharmacol ., 52:583, 2001), 이러한 위 출혈은 대표적으로 프로스타글란딘과 산화질소와 같은 신호전달물질에 의해 조절되는 것으로 알려져 있다 (Pawlik, M. et al., J. Physiol. Pharmacol., 52:569, 2001).
위염 및 위궤양은 위 속에 기생하는 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 균의 감염에 의하여 생기거나, 위장관의 손상을 일으키는 인자인 위산 및 펩신(pepsin)의 영향과 이들로부터 위벽을 보호하는 방어인자인 점막(mucosa)의 기능 평형이탈로서 일어나며, 비스테로이드성 소염 진통제(non steroidal anti-inflammatory drug)를 비롯한 상당수의 약물이 위장관 출혈 등의 부작용을 일으키기 때문에 위염 및 위궤양 등을 일으키는 주요 요인으로 꼽히고 있다.
따라서, 위염이나 위궤양 치료를 위해서는 그 원인에 따라 헬리코박터 파일로리 균을 억제하는 항생제를 투여하거나 위산 분비를 억제하는 약물을 투여해야 하며, 이 두 가지 요법을 동시에 쓰는 경우도 많다. 지금까지 개발된 위염이나 위궤양 치료제는 위에서 분비되는 산을 제거하거나 저하시키는 작용을 하며 기작이 매우 다양하다.
위장 장애의 치료에 이용되어 온 약물로는 제산제(antacid)가 가장 잘 알려져 있으며, 위에서 분비되는 위산을 직접 중화시켜 위장을 보호하고 속쓰림을 제거하는 역할을 하기 때문에 증상에 대한 효과는 가장 빠르게 나타난다. 가장 대표적인 약물은 수산화알루미늄이나 수산화마그네슘의 혼합물을 현탁액으로 제조한 것이며, 탄산수소나트륨 등을 포함하는 드링크제도 시판 되고 있다. 그러나 제산제는 위산이 분비되는 것을 저지하지 못하고, 이미 분비된 위산을 일시적으로 중화시켜주는 역할을 하기 때문에 소화액이 과다하게 분비되는 한밤 중이나 새벽 등 시간대에는 증상이 악화되고 계속 투여해야 하는 단점이 있고, 변비, 설사, 요로 결석증 등의 부작용을 유발할 수 있다. 따라서, 보다 근본적으로 위산의 분비를 막을 수 있는 약물이 요구되어 이후 아세틸콜린 수용체 억제제 및 프로스타글란딘 수용체 활성 약물 등이 개발되었다. 하지만 이들은 혈액 내 및 말초신경계에 두루 작용할 수 있기 때문에 위장관이 아닌 다른 신경세포에 작용하여 부작용을 나타내어 널리 쓰이지는 못하고 있는 실정이다.
한편, 소화성 궤양 치료제가 다양한 계열의 약물로 개발되어 있으며, 각각의 약물을 이용한 치료전략이 제시될 수 있음에도 불구하고 이들이 근본적으로 소화성 궤양의 상처 부분을 아물게 하는 직접적인 치유효과를 보이는 것은 아니다. 이들 약물은 위산으로부터의 공격을 억제하여 상처를 악화시키지 않게 유지하는 역할만을 담당할 뿐, 궤양의 소멸은 결국 인체의 자연치유력에 의존할 수밖에 없다. 소화성 궤양의 치료에는 상당히 오랜 시간 동안의 약물 투여가 요구되며, 따라서, 약물 투여로 인한 단기적 급성 독성뿐만 아니라 만성 독성 및 그로 인한 부작용도 고려되어야 한다.
선인장의 종류는 4,000 여종이 현재까지 알려져 있다. 이들은 탄수화물, 비타민, 미네랄의 공급원으로서 예로부터 식용으로 이용되어 왔다. 천년초(Opuntia humifusa)는 한국 토종 선인장으로, 일반적으로 손바닥 선인장으로 알려진 백년초(Opuntia ficus-indica var saboten)가 1.5-2 m의 크기로 성장하며 길고 굵은 가시가 많은 반면, 천년초는 작은 가시를 보유하며 약 30-40 cm 크기로 자란다. 제주도에서 재배되는 백년초는 열대지방이 원산지로 저온에 약하여 노지재배가 어려운 반면, 한국 토종 선인장인 천년초는 휴면기인 겨울의 영하 20도에서도 자체 수분을 절반 이하로 감소시켜 얼어 죽지 않고 생명력을 유지하는 특성이 있으며 노지에서 생존하여 병충해에 강한 특징이 있다(이경석 등, 2004). 천년초를 이용한 특허로는 한국등록특허 제549506호(천년초 선인장 추출물을 함유하는 음료의 제조방법),한국등록특허 제698533호(월동선인장의 발효액을 이용한 항균 감염증 및 항암 작용에 대한 예방, 치료용 조성물의 제조 방법), 한국등록특허 제666283호(천년초선인장 발효액과 이를 이용한 식품), 한국등록특허 제961217호(알레르기성 접촉성 피부염을 예방 및 치료할 수 있는 천년초선인장 발효물), 한국등록특허 제1103035호(흑마늘과 천년초를 이용한 식음료 및 그 제조방법), 한국공개특허 제2009-54038호(기능성 강화 천년초 비누 및 그 제조 방법), 한국공개특허 제2009-54039호(건강기능성이 강화된 천년초 약주 및 그 제조 방법), 한국공개특허 제2009-54040호(기능성 강화 화장료용 천년초 추출액 및 그에 따른 화장품)이 알려져 있으며 이의 기능성으로는 간보호 활성, 항산화 활성, 항균활성, 항동맥경화 활성 등이 알려져 있다. 백년초(prickiy pear) 유래의 추출물의 위궤양 치료에 대한 효과는 알려져 있으나(Yoo-Ri kim et al., Korean Association for Laboratory Animal Science, 2005), 본 특허에서의 천연초 유래의 추출물의 위염 및 위궤양 억제 또는 완화활성에 대한 예는 전무한 실정이다.
이에 본 발명자들은 기존의 위염, 위궤양 치료제들의 한계를 극복하고자 이미 안전성이 입증된 다양한 전통 한약재, 천연식물, 및 식품소재들의 성분을 분석하고 위염 및 위궤양 치료 효과를 검색한 결과, 제피한 천년초의 젤성 추출물이 알코올 및 침수성 스트레스 유발로 인한 위 점막 세포의 손상을 보호하고, 염증 유발 인자인 산화질소의 합성을 억제하여 위염 또는 위궤양 억제 효과를 갖는다는 사실을 확인하고 본 발명을 완성하였다
본 발명의 목적은 제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명은 다른 목적은 제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다.
본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물은 알코올이나 침수성 스트레스 유발로 인한 위 점막 세포의 손상을 보호하고, 염증유발인자인 산화질소의 합성을 억제하여 위염 또는 위궤양 억제 효과를 나타내므로 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 건강 기능성 식품으로 이용될 수 있다.
도 1은 알코올성 스트레스를 유발시킨 마우스의 위 조직에서 점막 손상 상태를 나타낸 것이다.
도 2는 알코올성 스트레스에 노출시킨 마우스의 ulcer index을 나타낸 것이다.
도 3은 알코올성 스트레스에 노출시킨 마우스의 위 조직에서 내피성 산화질소 합성효소, 뉴론성 산화질소 합성효소 및 유도성 산화질소 합성효소의 전령 RNA 발현을 나타낸 것이다(마커:합성효소연쇄반응의 크기 마커; 1열:복강 투여한 대조군; 2열:경구 투여한 음성 대조군; 3열:오메프라졸 처리 양성 대조군; 4열:천년초 추출물 처리군).
도 4는 알코올성 스트레스에 노출시킨 마우스의 위 조직에서 마트릭스 금속단백질 효소-9(MMP-9)의 발현을 나타낸 것이다.
도 2는 알코올성 스트레스에 노출시킨 마우스의 ulcer index을 나타낸 것이다.
도 3은 알코올성 스트레스에 노출시킨 마우스의 위 조직에서 내피성 산화질소 합성효소, 뉴론성 산화질소 합성효소 및 유도성 산화질소 합성효소의 전령 RNA 발현을 나타낸 것이다(마커:합성효소연쇄반응의 크기 마커; 1열:복강 투여한 대조군; 2열:경구 투여한 음성 대조군; 3열:오메프라졸 처리 양성 대조군; 4열:천년초 추출물 처리군).
도 4는 알코올성 스트레스에 노출시킨 마우스의 위 조직에서 마트릭스 금속단백질 효소-9(MMP-9)의 발현을 나타낸 것이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 일 관점에서, 제피한 천년초의 젤성 추출물을 유효 성분으로 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 제피한 천년초 젤성 추출물은 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)의 발현을 선택적으로 억제하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 제피한 천년초의 젤성 추출물은 (a) 천년초 줄기의 껍질을 제거한 후, 천년초의 젤성 추출물을 파쇄하는 단계;(b) 파쇄된 천년초 젤성 추출물에 탄소수 3 내지 6의 저급 알콜, 물, 저급유기산, 저급알콜에스테르, 저급케톤 및 할로겐화탄화수소로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; 및 (c) 상기 추출액을 회수하는 단계에 의해 제조된 것을 특징으로 할 수 있으나 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 제피한 천년초의 젤성 추출물은 천년초를 수확하고 이를 수세하여 줄기의 껍질을 제거하였는데 이는 껍질에 플라보노이드성 물질과 셀룰로스 등의 세포벽 성분이 다량 함유되어 있으며 이들은 위염이나 위궤양에 효과가 없는 것을 확인하였기 때문이다.
본 발명에 있어서 상기 (b) 단계의 C3-6의 저급 알코올로는 에탄올(ethanol) 또는 메탄올(methanol)을 사용하는 것이 바람직하고, C3-6의 저급 유기산으로는 부티르산(butyric acid) 또는 캅로인산(caproic acid)를 사용하는 것이 바람직하다. 또한, C3-6의 저급 알코올에스테르로는 디메틸에테르(dimethyl ether), 에틸메틸에테르(ethyl methyl ether) 또는 디에틸에테르(diethyl ether)을 사용하는 것이 바람직하고, C3-6의 저급 케톤으로는 디메틸케톤(dimethyl ketone), 에틸메틸케톤(ethyl methyl ketone) 또는 디에틸케톤(diethyl ketone)을 사용하는 것이 바람직하며, C3-6의 할로겐화 탄화수소로는 사염화탄소(carbon tetrachloride) 또는 삼염화에틸렌(trichlorethylene)을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 실시예에서, 제피한 천년초에 에탄올을 가하여 추출한 후 30% 에탄올에 재현탁시킨다음, 원심분리하여 얻은 상등액을 회전식 증발 농축기로 건조시켜 흰색의 분말을 제조하였으며, 에탄올을 가한 후에 열수추출, 냉침추출, 환류냉각추출 또는 초음파추출 등의 추출방법을 사용하여 추출할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에서, 본 발명에서 분리한 제피한 천년호의 젤성 추출물을 처리한 마우스를 이용하여 알코올성 및 침수성 스트레스를 유발하여 위 점막 세포의 손상을 육안으로 확인한 결과, 점막 손상 및 혈액 응괴덩어리가 발견되지 않았으므로 제피한 천년초의 젤성 추출물의 위 손상 보호 효과를 확인할 수 있었다 (도 1).
본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물이 염증 유발 인자인 산화질소의 생성에 미치는 영향을 확인하기 위해 산화질소 생성량을 측정한 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 혈청 및 위 조직에서의 산화질소 생성량은 오메프라졸 처리군과 천년초 추출물 처리군 모두 음성 대조군에 비해 20~50% 정도 산화질소 생성량이 적게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 제피한 천년초의 젤성 추출물이 내피성 산화질소 합성효소(endothelial nitric oxide synthase, eNOS), 뉴론성 산화질소 합성효소(neuronal nitric oxide synthase, nNOS) 및 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)의 발현 수준의 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 상기 합성 효소들의 mRNA 발현정도를 확인해 본 결과, 침수성 구속스트레스에 의해 유발된 상기 3종의 산화질소 합성효소의 발현 중 유도성 산화질소 합성효소의 발현이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 이는 유도성 산화질소 합성효소의 발현의 감소로 인해 위 점막의 손상이 감소함을 의미하고, 실시예 2와 비교하였을 때, 유도성 산화질소가 위 점막 손상에 중요한 분자 마커인 것을 알 수 있었다. 따라서, 천년초 추출물의 처리에 의해 유도성 산화질소의 합성이 억제되어 위 점막 손상이 감소된 것임을 알 수 있었다.
본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물을 포함하는 조성물은 이미 사용되고 있는 항히스타민제, 소염진통제, 항암제 및 항생제 등의 약제와 함께 제제화하거나 병용하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 제피한 천년초의 젤성 추출물을 포함하는 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 경구 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서, 제피한 천년초의 젤성 추출물을 유효 성분으로 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품에 관한 것이다.
본 발명에서 '기능성 식품'이란, 일반 식품에 본 발명의 추출물을 첨가함으로써 일반 식품의 기능성을 향상시킨 식품을 의미한다. 기능성은 물성 및 생리기능성으로 대별될 수 있는데, 본 발명의 추출물을 일반식품에 첨가할 경우, 일반 식품의 물성 및 생리기능성이 향상될 것이고, 본 발명은 이러한 향상된 기능의 식품을 포괄적으로 '기능성 식품'이라 정의한다.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제,안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0.01~20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
천년초
추출물의 제조
천년초(Opuntia humifusa)는 겨울 동안 노지에서 자라 4월에 채취된 3년생을 사용하였으며, 참 좋은 먹을거리 영농조합법인으로부터 구입하였다. 잎은 가시를 절개하여 수세한 다음 절편하였으며, -70℃에서 급속냉동하여 동결건조시킨 후 사용하였다. 상기 천년초에 에탄올을 가하여 추출한 후에, 30% 에탄올에 재현탁시킨 다음, 원심 분리하여 얻은 상등액을 회전식 증발 농축기로 건조시켜 흰색의 분말을 최종적으로 수득하였다. 본 분말의 항위궤양 활성을 더욱 증진시키기 위하여 초미세 분쇄기(HKP-05, Korea Energy Tech. Co., Ltd., Seoul, Korea)를 이용하여 100, 400, 600 mesh로 분쇄하여 이의 항산화활성을 측정한 결과,100, 400 및 600 mesh로 분쇄하였을 때, 각각 45%, 72% 및 100%로 활성이 증가하는 것을 확인하였으며, 항궤양성 활성도 항산화활성에 비례하여 증가할 것으로 예측하였다.
천년초
추출물의
침수성
구속 스트레스로 인한 위 손상 예방효과 확인
본 발명의 천년초 추출물의 침수성 구속 스트레스로 인한 위 손상 예방효과 확인하기 위하여, 상기 실시예 1에서 추출한 천년초 추출물을 처리하였을 경우 위 손상 정도 및 산화질소 생성량을 측정하였다.
(1) 침수성 구속 스트레스로 인한 위 손상 정도 확인
먼저, 실험 동물로는 체중이 20~25ｇ의 6주령 수컷 BALB/c 계통의 마우스(Samtaco, Korea)를 사용하였으며, 시판되는 사료(PurinaKorea, Korea)와 물을 충분히 공급하면서, 1주간 실험실 환경에 적응시킨 후 사용하였다. 실험실 환경은 22±1°C, 습도 55±5%를 유지하면서 12시간 주기로 낮과 밤이 반복되도록 하였다.
양성 대조군(n=5)으로 식염수에 용해시킨 오메프라졸(100 mg/kg)을 경구 투여하였으며, 천년초 추출물 처리군(n = 5)에서는 상기 실시예 1에서 수득한 제피한 천년초의 젤성 추출물(0.02 ml/g)을 경구 투여하였다. 또한, 음성 대조군은 각각 등장의 식염수를 복강 투여(n = 5)하였으며, 투여 후, 마우스들은 약물이 충분히 흡수될 수 있도록 각각 독립적인 감금 우리에서 수직상태로 1 시간 동안 보관하였다.
상기 마우스에 침수성 구속 스트레스를 주기 위해, 20~22℃로 유지되는 수조에 6시간 동안 침수(Takagi, K.Y. et al., Chem . Pharm . Bull ., 12:465, 1964)시킨 후, 마우스를 에틸에테르(diethyl ether)로 마취시킨 다음, 위는 큰 굴곡을 따라 절개시키고, 위 점막은 작은 가위를 사용하여 절취하였다. 혈액은 각각의 마우스에서 위를 떼어낸 뒤, 바로 정맥하부에서 채취하였으며, 혈청은 원심 분리하여 수득하였다.
위 점막의 표면에 발생한 점, 선형으로 된 손상 및 부식을 육안으로 관찰한 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 식염수를 경구 투여한 음성 대조군(A 및 B)에서는 1~2 mm 크기의 많은 점막 손상과 큰 혈액 응괴덩어리가 발견되었는데 비하여, 양성 대조군인 오메프라졸을 처리한 시료(C)에서는 극소량의 점막 손상 및 중간 크기의 혈액 응괴덩어리만 발견되었다. 반면, 제피한 천년초의 젤성 추출물을 처리한 마우스의 시료(D)에서는 점막손상과 혈액 응괴덩어리를 거의 발견할 수 없었다.
한편, 궤양 지표의 측정은 점막 손상의 정도에 따라 점수를 매겨 환산하였다 (Nie, S.N. et al., World J. Gastroenterol., 9:1772, 2003). 미미할 정도의 원모양의 출혈 부식에는 1점, 1 mm 보다 작은 길이의 출혈부식에는 2점, 1~2 mm 정도의 길이의 출혈 부식에는 3점, 2~3 mm 정도의 길이의 출혈 부식에는 4점, 4 mm보다 긴 길이는 5점을 매겼다. 또한, 상처가 1 mm 이상의 폭을 가질 때는 2배의 점수를 매겼다. 상기 실험값은 평균±표준편차로 나타내었고, Dunnett’s 테스트에 따른 ANOVA(one-way analysis of variance)로 수행하여 p값이 0.05보다 미만일 경우, 통계학적으로 유의성이 있다고 판단하였다.
음성 대조군의 궤양 지표는 각각 23.0±4.1 및 23.3±7.8이었는데 반해, 양성 대조군의 궤양 지표는 8.0±5.5, 천년초 추출물 처리군의 궤양 지표는 2.5±3.3로, 상기 결과로부터, 제피한 천년초의 젤성 추출물이 침수성 구속 스트레스로 인한 위 손상을 예방하는 효과가 있다는 것을 알 수 있었다.
(2) 침수성 구속 스트레스로 인한 산화질소 생성량 확인
상기에서 수득한 혈청 및 위 조직을 대상으로 산화질소 생성량을 Griess assay을 응용하여 측정하였다 (Dirsch, V.M. et al., A.M. Planta Med., 64:423, 1998).
상기 혈청들을 활성제(LPS 10ng/well)가 든 96-웰 플레이트에 첨가하고, 실시예 1에서 수득한 제피한 천년초의 젤성 추출물을 최종 농도 30 ㎎/㎖가 되도록 첨가하였다. 24 시간 후, 상등액 100 ㎖에 동량의 그리스 시약(1% sulfanilamide, 0.1% naphthylethylene diamine dihydrochloride 및 5% phosphoric acid)을 첨가하여 상온에서 10분 동안 방치하였다. 각 시료의 광학적 농도는 마이크로플레이트 자동측정기 VICTOR3(Wallac Co., Finland)를 사용하여 550 nm에서 측정하였다. 측정 곡선은 표준 sodium nitrite을 사용하여 작성하였다. 상기 실험값은 3번 반복 실험한 결과로서, 평균±표준편차로 나타내었고, Dunnett’s 테스트에 따른 ANOVA(one-way analysis of variance)로 수행하여 p값이 0.05보다 미만일 경우, 통계학적으로 유의성이 있다고 판단하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 혈청 및 위 조직에서의 산화질소 생성량은 오메프라졸 처리군과 천년초 추출물 처리군 모두 음성 대조군에 비해 20~50% 정도 산화질소 생성량이 적게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 상기 결과로부터, 본 발명의 제피한 천년초의 젤성 추출물이 혈청과 위 조직에서 산화질소의 생성을 감소시키는 것을 알 수 있었다.
제피한
천년초의
젤성
추출물의 산화질소 생성 저해 활성 검색
혈청 및 위 조직에서의 산화질소 생성량 변화가 내피성 산화질소 합성효소(endothelial nitric oxide synthase, eNOS), 뉴론성 산화질소 합성효소(neuronal nitric oxide synthase, nNOS) 및 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)의 발현 수준의 변화에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 상기 효소들을 암호화하는 mRNA 전사 정도를 하기 표 2에 기재된 프라이머를 이용한 RT-PCR을 통하여 측정하였다.
동결된 위 조직(약 100 ㎎)을 1 ㎖ 트리졸(TRIZOL)시약을 사용하여 균질화하였고, total RNA(Roos-van Groningen et al., J.A. Kidney Int., 65:97, 2004)는 분광광도계(spectrophotometer; Perkin Elmer社, US)로 260 nm에서 측정하였다. 상기 RNA를 1% 포름알데하이드-아가로스 전기영동한 후, 에티디움브로마이드(EtBr)로 염색하여 RNA가 분리되었는지 확인하였다. 분리한 RNA는 사용하기 전까지 -80˚C에서 저장하였고, RT-PCR은 표 2의 프라이머(Bioneer Co., Korea)와 Maxime RT-PCR PreMix를 사용하여 수행하였으며, 상기 프라이머는 NCBI GenBank 데이터베이스에 저장되어 있는 eNOS, nNOS 및 iNOS의 염기서열에 상보적으로 결합하도록 Primer3 software(Whitehead Institute, MIT Center for Genome Research, US)를 사용하여 디자인하였다.
total RNA 500 ng을 45˚C에서 30분, 95˚C에서 5 분 동안 반응시켜 cDNA를 합성시킨 다음, PCR을 수행하였다. PCR 조건은 95°C에서 45초 동안 반응시킨 다음, 내피성 산화질소 합성효소, 뉴론성 산화질소 합성효소 및 유도성 산화질소 합성효소는 각각 54℃, 55℃ 및 53℃에서 32사이클(cycle), 글리세르알데히드 인산가수분해효소(GAPDH)는 54°C에서 27사이클 수행한 후, 72°C에서 60초 동안 재회복시켰다. PCR 과정 후, 생성물의 각 시료 20 ㎖를 1.5% 아가로스 젤 전기영동법에 의해 분석하였다. 예측된 생성물의 위치는 1kb DNA ladder(Solgent, Korea)와 비교하여 확인할 수 있었다.
대략적인 정량분석을 위하여 글리세르알데히드 인산가수분해 효소 유전자 발현을 기준으로 삼아, 각각의 시료는 그에 걸맞은 cDNA 상대적인 양을 분자 이미지 Gel Doc XR 시스템(Bio-Rad Co., Italy) 및 Quantity One 1-D 분석 소프트(Bio-Rad Co., US)를 사용하여 측정하였다. 실험값은 평균±표준편차로 나타내었고, Dunnett’s 테스트에 따른 ANOVA(one-way analysis of variance)로 수행하여 p값이 0.05보다 미만일 경우, 통계학적으로 유의성이 있다고 판단하였다.
그 결과, 도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이, 침수성 구속 스트레스를 유발시킨 마우스의 위 조직에서 유도성 산화질소 합성효소(iNOS)의 mRNA는 발현이 현저히 감소하였고, 내피성 산화질소 합성효소(eNOS) 및 뉴론성 산화질소 합성효소(nNOS)는 처리와 관계없이 모든 실험군에서 유사하였으며, 하우스키핑(housekeeping) 유전자인 글리세르 알데히드 인산가수분해효소는 발현의 정도가 유의한 차이를 보이지 않았다. 이는 곧 침수성 구속스트레스에 의해 유발된 상기 3종의 산화질소 합성효소의 발현 중 유도성 산화질소 합성효소의 발현이 감소됨으로 인해 위 점막의 손상이 감소함을 의미하고, 실시예 2와 비교하였을 때, 유도성 산화질소가 위 점막 손상에 중요한 분자 마커임을 나타낸다. 결론적으로, 천년초 추출물의 처리에 의해 유도성 산화질소의 합성이 억제되어 위 점막 손상이 감소된 것임을 알 수 있었다.
제제예
1 :
산제의
제조
본 발명의 제피한 천년초 추출물을 유효성분으로 함유하는 산제(가루약)을 제조하였다.
| 성분 | 함량 |
| 제피한 천년초의 젤성 추출물 | 20㎎ |
| 유당 | 100㎎ |
| 탈크 | 10㎎ |
상기 표 1의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제제예
2: 정제의 제조
본 발명의 제피한 천년초 추출물을 유효성분으로 함유하는 정제(알약)을 제조하였다.
| 성분 | 함량 |
| 제피한 천년초의 젤성 추출물 | 10㎎ |
| 옥수수전분 | 100㎎ |
| 유당 | 100㎎ |
| 스테아린산 마그네슘 | 2㎎ |
상기 표 2의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제제예
3: 캅셀제의 제조
본 발명의 제피한 천년초 추출물을 유효성분으로 함유하는 캅셀제를 제조하였다.
| 성분 | 함량 |
| 제피한 천년초의 젤성 추출물 | 10㎎ |
| 결정성 셀룰로오스 | 3㎎ |
| 락토오스 | 14.81㎎ |
| 마그네슘 스테아레이트 | 0.2㎎ |
통상의 캡슐제 제조 방법에 따라 상기의 표 3의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예
4: 주사제의 제조
본 발명의 제피한 천년초 추출물을 유효성분으로 함유하는 주사제를 제조하였다.
| 성분 | 함량 |
| 제피한 천년초의 젤성 추출물 | 10㎎ |
| 만니톨 | 180㎎ |
| 주사용 멸균 증류수 | 2974㎎ |
| Na2HPO4 ·12H2O | 26㎎ |
통상의 주사제의 제조 방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기 표 4의 성분 함량으로 제조하였다.
제제예
5:
액제의
제조
본 발명의 제피한 천년초 추출물을 유효성분으로 함유하는 액제(물약)를 제조하였다.
| 성분 | 함량 |
| 제피한 천년초의 젤성 추출물 | 20㎎ |
| 이성화당 | 10ｇ |
| 만니톨 | 5ｇ |
| 정제수 | 적량 |
통상의 액제의 제조 방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기 표 5의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (6)
- 제피한 천년초의 젤성 추출물을 유효 성분으로 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제1항에 있어서, 제피한 천년초 젤성 추출물은 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)의 발현을 선택적으로 억제하는 것을 특징으로 하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제1항에 있어서, 제피한 천년초의 젤성 추출물은 다음의 단계에 의해 제조된 것임을 특징으로 하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 치료용 조성물:
(a) 천년초 줄기의 껍질을 제거한 후, 천년초의 젤성 추출물을 파쇄하는 단계;
(b) 파쇄된 천년초 젤성 추출물에 탄소수 3 내지 6의 저급 알콜, 물, 저급유기산, 저급알콜에스테르, 저급케톤 및 할로겐화탄화수소로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; 및
(c) 상기 추출액을 회수하는 단계.
- 제피한 천년초의 젤성 추출물을 유효 성분으로 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품.
- 제4항에 있어서, 제피한 천년초 젤성 추출물은 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)의 발현을 선택적으로 억제하는 것을 특징으로 하는 위염 및 위궤양의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품.
- 제1항에 있어서, 제피한 천년초의 젤성 추출물은 다음의 단계에 의해 제조된 것임을 특징으로 하는 예방 또는 개선용 건강기능성 식품:
(a) 천년초 줄기의 껍질을 제거한 후, 천년초의 젤성 추출물을 파쇄하는 단계;
(b) 파쇄된 천년초 젤성 추출물에 탄소수 3 내지 6의 저급 알콜, 물, 저급유기산, 저급알콜에스테르, 저급케톤 및 할로겐화탄화수소로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; 및
(c) 상기 추출액을 회수하는 단계.
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020120148392A KR20140078994A (ko) | 2012-12-18 | 2012-12-18 | 제피한 천년초 젤성 추출물을 유효성분으로 함유하는 위염 및 위궤양 예방 또는 치료용 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20140078994A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104940258A (zh) * | 2015-06-11 | 2015-09-30 | 中国药科大学 | 一种具有保护胃黏膜功能的中药提取物组合 |
-
2012
- 2012-12-18 KR KR1020120148392A patent/KR20140078994A/ko active Search and Examination
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104940258A (zh) * | 2015-06-11 | 2015-09-30 | 中国药科大学 | 一种具有保护胃黏膜功能的中药提取物组合 |
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