KR100679853B1

KR100679853B1 - 가죽나무 추출물을 포함하는 천식 및 알러지 질환의 예방또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR100679853B1
Application number: KR1020050048702A
Authority: KR
Inventors: 장현욱; 강삼식; 배기환; 김현표; 손건호; 성용경
Original assignee: 영남대학교 산학협력단
Priority date: 2005-06-08
Filing date: 2005-06-08
Publication date: 2007-02-07
Also published as: KR20060130830A

Abstract

본 발명은 천식 또는 알러지 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명의 가죽나무(Ailanthus altissima (Mill.) Swingle) 추출물은 호산구 유주인자인 에오탁신과 알러지 반응의 주된 항체인 IgE의 생성에 필수적인 인터루킨(IL)-4와 알러지 및 천식에 관여하는 인터루킨(IL)-5, 13 및 류코트리엔 C₄ (LTC₄) 생성을 억제하여 천식 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강보조식품에 유용하게 사용될 수 있다.

가죽나무, 항천식, 항알러지

Description

가죽나무 추출물을 포함하는 천식 및 알러지 질환의 예방 또는 치료용 조성물{Composition comprising the extract of Ailanthus altissima for the prevention or treatment of asthma and allergic disease}

도 1은 가죽나무 추출물에 대한 쥐 골수유래 비만세포 (mouse bone marrow-derived mast cells, BMMC)에서 시클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2) 의존적인 프로스타글란딘 D₂ (prostaglandin D₂, PGD₂)생성 억제 도이며,

도 2는 가죽나무 추출물에 대한 쥐 골수유래 비만세포 (mouse bone marrow-derived mast cells, BMMC)에서 시클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2) 단백질의 발현 억제를 나타낸 도이며,

도 3은 기관지 천식 및 알러지반응을 일으키는 류코트리엔 C₄의 (leukotriene C₄, LTC₄) 합성에 관여하는 5-리폭시게나제의 저해활성 실험결과이고,

도 4는 가죽나무 추출물의 오발부민/알룸으로 유도한 천식모델의 폐조직으로부터 천식관련 유전자 발현에 미치는 결과를 나타낸 도이다.

본 발명은 가죽나무(Ailanthus altissima) 추출물을 유효성분으로 포함하는 천식 및 알러지 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

천식이란 가역적인 기도폐색과 기관지 과민증을 특징으로 하는 질환으로 이의 병태에는 여러 가지 매개물질이 관여한다. 천식에 관여하는 물질로는 SRS-A (slow reacting substance of anaphylaxis)로 알려진 5-리폭시게나제(lipoxygenase)의 대사산물인 류코트리엔(leukotriene;LT)-C4, D4, E4이외 염증성 사이토카인(cytokine)인 IL-4, 5, 13등이 관여함이 알려져 있다. 기관지 천식 역시 일종의 염증반응으로 일어나는 질환으로 염증이란 신체 국소에 일어나는 상해에 대하여 생체조직의 방어반응이다. 즉, 각종의 유해한 자극(stressor)에 응답하여, 자극에 의한 상해를 제거하여 원래의 상태로 회복하려는 생체방어반응이 염증반응이다. 염증의 자극에는, 감염 혹은 화학적, 물리적 자극 등이 있으며, 염증반응에 관련된 생체구성인자는 자유 라디칼(free radical), 단백질, 당질, 지질 등의 저분자나 고분자의 화학물질과, 혈장, 혈구, 혈관 및 결합조직 등이 있다. 염증의 과정은 보통 급성 및 만성 염증의 두 가지로 나눌 수 있다. 급성염증은 수일이내의 단기적인 반응이며, 혈장성분이나 혈구 등이 미소순환계를 게재하여 이물제거에 관련한다. 만성염증은 지속시간이 길며, 조직의 증식 등이 보여 진다.

염증 및 알러지성 질환을 유도하는 핵심적인 매개물질은 프로스타글란딘류(prostaglandines), 류코트리엔류(leukotriens), 혈소판활성화인자(PAF) 등의 포스 포리파아제 A₂ (phospholipase A₂), 시클로옥시게나제(cyclooxygenase) 및 리폭시게나제(lipoxygenase)에 의하여 전구체인 아라키돈산(arachidonic acid)으로부터 생성된다.

프로스타글란딘류(prostaglandines)는 특이한 세포표면 수용체와 결합하여 cAMP(경우에 따라서는 cGMP)의 세포내 농도를 증가시키는 작용을 한다. cAMP의 증가에 의한 효과는 세포 종류에 따라 다르며 PGA₂, PGB₂, PGC₂은 혈압을 강하시키고, PGD₂, PGE₁은 혈소판 응집을 억제하고 동통, 발열 등의 염증과정에 관여한다고 알려져 있다. PGD₂은 특히 기관지 천식환자의 평활근을 수축하여 천식을 악화시키는 주범으로 알려져있다.

류코트리엔은 아라키돈산으로부터 생체에서 생성되는 국소 작용성 호르몬 그룹을 구성하며, 중요한 류코트리엔으로는 류코트리엔 B₄(LTB₄), 류코트리엔 C₄(LTC₄), 류코트리엔 D₄(LTD₄) 및 류코트리엔 E₄(LTE₄)가 있다. 이들 류코트리엔의 생합성은 효소 5-리폭시게나아제가 아라키돈산에 대하여 작용하여 류코트리엔 A₄로서 알려진 에폭사이드를 생성시킴으로써 시작되며, 이것은 연속적인 효소 반응 단계에 의해 다른 류코트리엔(LTB₄, LTC₄, LTD₄, LTE₄)으로 전환된다. 류코트리엔은 폐동맥질환, 예를 들면, 천식, 만성 기관지염 및 관련 폐쇄성 기도 질환, 알러지성 비염, 접촉성 피부염, 알러지성 결막염 등의 알러지 및 알러지 반응, 관절염 또는 염증성 장 질환, 통증 등의 염증 등에 관여하는 것으로 알려져 있다. 최근에는 알 러지성 천식 치료제로서 주목을 받고 있는 약물들은 히스타민 유리억제, 류코트리엔 C₄ 생성 억제, 혈소판 활성화인자 생성 억제 활성을 동시에 가지는 약물들이다.

최근에는 독성이 상대적으로 적은 천연물 유래의 물질로부터 활성 성분을 찾으려는 노력이 진행되고 있는데, 그 예로서 한국특허공개번호 제1999-0039985호에는 전호에서 분리한 리그난 계통의 신규 화합물 안젤로일 포도필로톡신(Angeloyl podophyllotoxin)의 항종양 효과 및 그의 추출방법이 공개되었으며, 한국특허공개번호 제2003-0078565호에는 감초, 소자, 오미자, 천문동 및 전호의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유한 만성 기관지 천식 및 심장질환 치료용 조성물이 공개되었으나, 아직 가죽나무추출물이 천식 및 알러지 질환에 효과가 있다는 것에 대해서는 알려진 바 없다.

가죽나무는 갈잎 큰키나무, 높이 20m 가량, 꽃은 암수딴그루로 지름 7 ~ 8mm이며 녹색을 띠는 백색이다. 꽃받침은 5개로 갈라지며, 5개의 꽃잎은 끝이 안으로 꼬부라진다. 수술은 10개이며 5심피로 된 자방의 암술대가 5개로 갈라진다. 열매는 시과로 연한 적갈색이고 얇은 바늘 모양이며 길이 3~4cm, 너비 1cm로 1개의 종자가 들어있다. 뿌리껍질 또는 줄기껍질을 저근백피(樗根白皮)라 하며 청열, 조습, 지혈, 살충의 효능이 있고, 만성하리, 혈변, 대하, 유정을 치료한다. 잎을 저엽(樗葉)이라 하며, 옴이 수포진(水疱疹)을 치료하고, 열매를 봉안초(鳳眼草)라 하며 이질, 장풍에 의한 혈변, 혈뇨, 백대하를 치료한다(배기환, 한국의 약용식물, 교학사, pp293, 2000년)고 기재되어 있으며, 그러나 가죽나무의 천식 및 알러지 질환 치료 및 예방 효과와 관련된 용도에 관해서는 상기 문헌 어디에도 교시되거나 기재된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 가죽나무 추출물이 COX-2 의존적인 PGD₂생성을 억제하며, 천식동물모델, 알러지 동물모델서 호산구 유주인자인 에오탁신과 알러지 반응의 주된 항체인 IgE의 생성에 필수적인 인터루킨(IL)-4와 알러지 천식반응에 관여하는 IL-5,13 및 류코트리엔 C₄ (LTC₄)생성 억제효능이 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 가죽나무 추출물을 유효성분으로 하는 천식 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강보조식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 가죽나무(Ailanthus altissima) 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식 및 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 등과 같은 극성용매 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.

상기 천식 및 알러지 질환은 기관지천식, 알러지성 비염, 알러지성 천식 및 알러지성 피부염 등을 포함한다.

이하, 가죽나무 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 가죽나무 추출물은, 건조된 가죽나무의 전초, 뿌리 또는 지상부(잎, 줄기)를 세절하여 무게(㎏)의 약 1배 내지 20배, 바람직하게는 약 3배 내지 10배의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 에탄올로, 0℃ 내지 100 ℃, 바람직하게는 10 ℃ 내지 80 ℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 24시간, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간동안 냉침, 열수추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출방법, 바람직하게는 냉침추출법을 이용하여 수득한 추출액을 여과, 감압농축 또는 건조하여 수득할 수 있다.

또한 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed. pp6-7, 1998).

상기 제조공정으로 얻어진 가죽나무 추출물은 COX-2 의존적인 PGD₂생성을 억제하며, 호산구 유주인자인 에오탁신과 알러지 반응의 주된 항체인 IgE의 생성에 필수적인 인터루킨(IL)-4, 5, 13 및 알러지 및 천식에 관여하는 류코트리엔 C₄ (LTC₄) 생성을 탁월하게 억제하여 항알러지 및 항천식 효과를 가지고 있음을 확인하였다.

본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 가죽나무 추출물을 유효성분으로 함 유하는 천식 및 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 천식 및 알러지 예방 및 치료용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량 %로 포함한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사 용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 천식 및 알러지 질환의 예방 및 개선 효과를 나타내는 가죽나무 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품을 제공한다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품 류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 천식 및 알러지 질환의 예방 및 개선 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량 %로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 가죽나무 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 가죽나무의 전초 및 뿌리 1.3 kg을 세절하여 에탄올에 침지시킨 후 실온에서 추출액을 수득하고, 다시 에탄올을 가하여 1회 더 추출하였고, 상기 각 추출액을 여과한 후, 감압 회전농축기(Vaccum rotary evaporator; 일본 Nihon Seiko사, VR-205c)로 용매를 증발시켜 가죽나무 추출물 100 g을 수득하였다.

참고예 1. 실험용 세포 배양

쥐 골수 유래의 비만세포(BMMC, mouse bone marrow-derived mast cells)를 BALB/C 마우스로부터 무라카미(Murakami) 등의 방법(Murakami et al., J. Biol. Chem., 269, pp22269-22275, 1994)으로 골수에서 분리하여, IL-3 생산 세포인 WEHI-3 세포(일본 쇼와(Showa) 대학 약학부 쿠도 이치로 교수 제공)의 배양 상등액 을 함유한 50% WEHI-3 배지(conditioned medium, 10% FBS함유)에서 배양하였다.

실험예 1. PGD ₂ 생합성에 대한 영향 측정

본 발명의 가죽나무 추출물의 알러지성 질환에 대한 저해정도를 확인 하기 위해 프로스타글란딘D₂(PGD₂) 의 생성에 미치는 영향을 알아보는 하기와 같은 실험을 수행하였다. (Matsuoka T. et al., Science, 287(5460), pp2013-2017, 2000)

1-1. COX-2 의존적인 PGD ₂ 생성측정

참고예 1의 BMCC의 배양 3주후 세포농도 2Ｘ10⁵cells에 가죽나무 추출물을 30분간 전 처리한 후 100ng/ml의 SCF, 100 ng/ml의 LPS 및 100 U/ml의IL-10 혼합자극제(Sigma 사)를 처리한 다음, 세포 자극 8시간 후의 상층액의 PGD₂를 PGD₂ 분석 키트(Cayman 사)를 이용하여 EIA(Enzyme linked immuno assay)로 측정하였다. 이때 COX-1(시클로옥시게나제-1)에 의해서 생성되는 PGD₂의 생성을 억제시키기 위하여 BMMC에 아스피린(aspirin) 10 ㎍/㎖을 1시간 전에 미리 전처리한 후 사용하였다. 실험결과, 도 1에서 보이는 바와 같이 가죽나무 추출물의 농도 의존적으로 PGD₂의 생성이 억제됨을 확인할 수 있었다.

1-2. COX-2의 발현 확인(웨스턴 블럿 이용)

참고예 1의 BMMC에 가죽나무 추출물을 30분간 전 처리한 후 100ng/ml의 SCF, 100 ng/ml의 LPS 및 100 U/ml의IL-10 혼합자극제(Sigma 사)를 처리한 다음, 세포에 용해 완충액 (lysis buffer, 1% Triton X-100, 1 mM EDTA, 350 mM NaCl, 10% glycerol, and 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)를 넣고 얼음에서 30분 둔 후 교반하고 원심분리 하여 상층액 내의 단백질을 정량하였다. 20 mg의 단백질을 10% SDS-PAGE로 전기영동을 하고 20% MeOH, 25mM 트리스 (pH 7.4), 192mM 글리신이 포함된 완충액을 사용하여 니트로셀룰로스 페이퍼로 전기이동하였다. 단백질이 이동된 막은 폰소 용액으로 이동 유무를 확인한 후, 5% 탈지유 용액으로 30분간 실온에서 정지시켰다. 그리고 TTBS(50 mM Tris, 0.75 M NaCI, 0.25% Tween 20) 완충액으로 희석한 COX-2 (1 : 500희석) 항체와 막을 12 시간 이상 반응하였다. 반응이 끝난 후 TTBS로 6회 세척했다. 다시 홀스 래디쉬 퍼옥시다제가 부착된 2차 항체와 2시간 반응시키고 TTBS로 6회 세척했다. 세척이 끝나면 증류수로 세척하고 형광 시약을 사용하여 측정하였다. 실험결과, 하기 도 2에 보이는 바와 같이, 가죽나무추출물의 농도 의존적으로 COX-2의 발현이 억제되었고, COX-2의 발현이 억제됨으로써, PGD₂의 생성이 억제됨을 확인할 수 있었다.

실험예 2. 류코트리엔 생성에 대한 영향 분석 실험

실시예 1에서 제조된 가죽나무 추출물의 류코트리엔 C₄(LTC₄) 생성에 미치는 영향을 검토하기 위하여 하기 실험을 실시하였다.(Chang HW et al., Planta. Medica., 70(5), pp474-476, 2004)

참고예 1의 BMMC 배양 3주 후 비만세포에 SCF/LPS 혼합자극제(Sigma 사)를 30분 처리하였다. 세포 자극 후의 상층액의 LTC₄ 정량은 LTC₄ 분석 키트(Cayman 사)를 이용하여 EIA(Enzyme linked immuno assay)로 측정하였다. 가죽나무 추출물은 미리 15분간 전처리 한 후 자극제를 가하여 생성되는 LTC₄의 생성량을 측정하였다. 그 결과, 하기 도 3에 보이는 바와 같이 가죽나무 추출물이 LTC₄ 생성을 용량 의존적으로 저해하였으며, IC₅₀은 25.7 ㎍/㎖ 이었다.

실험예 3. 천식 동물 모델의 폐조직으로부터 유전자 발현억제 효과 측정

3-1. 천식 유도

쥐 (Balb/c 암컷 쥐, 6주령)에 오발부민 100 ug(Sigma) 및 알룸(Alum)의 1:1 혼합용액을 복강으로 0일, 7일, 14일, 총 3번 투여했다. 4 주째의 처음 3일은 하루 2번 경구투여하고 마지막 날은 1회 경구투여를 함으로써 4일 동안 총 7회의 경구투여를 하고, 2주째 둘째날 및 넷째날 오전, 가죽나무추출물을 경구투여 후, 1 % 오발부민을 에어졸 형태로 쥐의 코에 분한다.

3-2. 유전자 발현측정

천식유도 동물 모델에서 호산구수의 감소는 호산구 유주인자인 에오탁신(Garcia-Zepeda EA et al., Nature Medicine, 2(4), pp449-456, 1996)의 발현여부를 통해 측정가능하며, 알러지 질환에 대한 효과는 알러지 반응의 주된 항체인 IgE의 생성에 필수적인 인터루킨(IL)-4의 유전자(Arm JP. et al., Advance Immunology, 51, pp323-382, 1992) 및 인터루킨(IL)-5의 유전자(Hamid Q. et al., J. Clinic Invest, 87, pp1541-1546, 1991) 및 인터루킨(IL)-13의 유전자(Huang SK. et al., J. Immunol., 155, pp2688-2694, 1995)를 측정함으로 확인할 수 있다.

천식유도 동물을 5일째 되는 날 오전에 죽인 후, 총 RNA는 천식유도 쥐 및 비 처리 쥐의 폐조직으로부터 제조사의 지침에 따라 트리졸 시약(TRIzol reagent; Invitrogen 사, 미국)을 이용하여 분리하였다. 각 폐조직 1 g에 1 ml의 트리졸 시약을 넣은 후 분리한 RNA 1 ㎍은 역전사효소(reverse transcriptase; TAKARA 사, 일본), 1mM dNTP와 올리고(oligo; dT_12-18) 0.5㎍/㎕를 이용하여 역전사 되었으며, 이후 가열회전기(thermal cycler; Perkin Elmer Cetus co., 미국)를 이용하여 에오탁신, 인터루킨-4, 인터루킨-5, 인터루킨-13 및 β-액틴(β-actin) 유전자 발현을 검색하기 위하여 cDNA정제를 하여 PCR 분석이 수행되었다. 반응은 2.5 pmol 올리고(oligo; dT₂₀) 프라이머(primers), 5 유닛 AMV(Avian Myeloblastosis Virus) 역전사효소(Takara, 일본), 테그 DNA 중합효소(Taq DNA polymerase; Takara 1 Unit), 0.2mM dNTP, 반응 완충액(× 10)을 포함하는 20㎕내에서 수행하였다. 95 ℃에서 3분 동안의 초기 변성 후, 사이클 넘버는 94 ℃ 에서 30초, 57 ℃에서 30초, 72 ℃에서 30초에 지수 범위 내에서 사용하였다. PCR은 1.2% 아가로스 젤에서 전기 영동되었으며, 에티디움 브로마이드(ethidium bromide)로 염색하여 자외선으로 검출하였다. 실험에 사용한 프라이머 및 유전자 생성물의 크기는 하기 표 1와 같다.

에오탁신 프라이머	유전자 생성물	495 b.p
	전방향 프라이머	CCA AGG ACT TGG CRR CAT GTA G
	역방향 프라이머	ATT CTG GCT TGG CAT GGT AGC
인터루킨-4 프라이머	유전자 생성물	454 b.p
	전방향 프라이머	ACG GCA CAG AGC TAT TGA TG
	역방향 프라이머	ATG GTG GCT CAG TAC TAC GA
인터루킨-5 프라이머	유전자 생성물	313 b.p
	전방향 프라이머	GCA CAG TGG TGA AAG AGA CC
	역방향 프라이머	GCC CAC TCT GTA CTC ATC AC
인터루킨-13 프라이머	유전자 생성물	500 b.p
	전방향 프라이머	ACA GCT CCC TGG TTC TCT CA
	역방향 프라이머	CCA GCA AAG TCT GAT GTG AG
β-액틴	유전자 생성물	574 b.p
	전방향 프라이머	5'-CAC CCG CCA CCA GTT CGC CA-3'
	역방향 프라이머	5'-CAG GTC CCG GCC AGC CAG GT-3'

실험 결과 도 4 에 보이는 바와 같이, 가죽나무 추출물 100-800 mg/㎖ 처리 시, 에오탁신 및 인터루킨-4, 5, 13 mRNA는 현저하게 감소하여 천식 및 알러지 질환에 대한 탁월한 억제효과를 확인할 수 있었다.

하기에 본 발명의 추출물을 함유하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

가죽나무 추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

가죽나무 추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

가죽나무 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

가죽나무 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO_4,12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

가죽나무 추출물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

가죽나무 추출물 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

가죽나무 추출물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 가죽나무 추출물은 COX-2 의존적인 PGD₂생성을 억제하며, 천식 및 알러지 질환 동물모델에서 호산구 유주인자인 에오탁신과 알러지 반응의 주된 항체인 IgE의 생성에 필수적인 인터루킨(IL)-4와 알러지 천식반응에 관여하는 IL-5,13 및 류코트리엔 C₄ (LTC₄)생성을 탁월하게 억제함으로써, 천식 및 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강보조식품로 이용될 수 있다.

Claims

가죽나무(Ailanthus altissima) 추출물을 유효성분으로 포함하는 천식 및 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 메탄올 또는 에탄올 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물인 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 천식 및 알러지성 질환은 기관지천식, 알러지성 비염, 알러지성 천식 및 알러지성 피부염인 약학조성물.
제 1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.01 ~ 50 % 포함하는 약학조성물.
가죽나무(Ailanthus altissima) 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 천식 및 알러지성 질환의 예방 및 개선용 건강보조식품.
제 5항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태인 건강보조식품.