KR20140058712A - 덴드로비움 속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 ａｐｅｔａｌａ3ａ 프로모터 - Google Patents

덴드로비움 속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 ａｐｅｔａｌａ3ａ 프로모터 Download PDF

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구자춘
엄완숙
황성수
오승철
박광우
김재현
구자정
최경
김현지
이동준
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Abstract

본 발명은 덴드로비움 (Dendrobium)속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 APETALA3A (AP3A) 프로모터에 관한 것이다. 본 발명에 따른 APETALA3A (AP3A) 프로모터는 꽃 기관에서 특이적으로 발현이 증가하기 때문에, 이를 이용하여 다른 기관에는 영향을 미치지 않으면서 꽃 기관을 선택적으로 조절할 수 있다.

Description

덴드로비움 속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 ＡＰＥＴＡＬＡ3Ａ 프로모터 {Flower Organ-specific APETALA3A Promoter derived from Dendrobium}
본 발명은 덴드로비움 (Dendrobium)속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 APETALA3A (AP3A) 프로모터에 관한 것이다.
분자 생물학이 발전하면서 유전자의 발현을 조절하는 여러 가지 기작이 밝혀져 왔다. 유전자의 발현은 세포 내에서 일어나는 전사(transcription) 및 번역(translation)을 통해 유전자에 입력되어 있는 코드에 따라 단백질을 합성하는 일련의 과정을 일컫는 것이다. 특히, 전사 과정은 유전자 발현의 초기 단계로서, RNA 중합 효소가 여러 보조 인자들의 도움을 받아 유전자의 상위에 존재하는 프로모터(promoter) 서열에 결합함으로써 개시되고, 전사인자(TF, transcription factor)는 보조 인자들 가운데 하나로서, 프로모터 서열에 직접 결합하는 것으로 알려져 있다.
프로모터에는 외래 유전자의 발현을 항시 발현하는 항구성 프로모터 및 식물체의 전신 및 특별한 조직에만 국한시켜 형질전환 목적을 달성하는데 이용되는 특이성 프로모터들로 구분되는데 이들은 그 기능에 따라서 다음과 같이 분류할 수 있다.
첫째, 항구성 전신 발현 프로모터이다. 식물 항구성 프로모터로는 꽃양배추 모자이크 바이러스(CaMV: cauliflower mosaic virus)의 35S RNA 유전자의 프로모터가 대표적인 쌍떡잎식물용 프로모터로 사용되고 있고, 벼 등의 외떡잎식물용 항구성 프로모터로는 벼 액틴(actin) 및 옥수수 유비퀴틴(ubiquithin) 유전자 프로모터들이 주로 이용되어 왔으며, 최근 벼 시토크롬 C 유전자(OsOc1)의 프로모터가 국내 연구진에 의해 개발되어 사용 중에 있다(대한민국 특허등록 제10-429335호). 이들은 식물 형질전환 기본 운반체 내에 선별 마커로 이용되는 항생제나 제초제 저항성 유전자 및 리포터 유전자의 발현을 유도하기 위해 이미 내재되어 있으며, 연구적인 측면에서 목적하는 유전자의 식물체 내 기능을 밝히고자 시도할 때 우선적으로 고려되는 프로모터들이다.
둘째, 종자 특이 프로모터이다. 벼 주요 저장 단백질 유전자의 프로모터들로서 황금쌀(golden rice) 개발에 사용된 벼 글루테린(glutelin) 프로모터가 외떡잎 식물의 종자 특이적 발현을 유도하는 경우에 많이 사용되고 있고, 쌍떡잎 식물의 종자 특이적 발현을 유도하는데 주로 사용되는 프로모터로는 콩 유래 렉틴(lectin) 프로모터, 배추 유래 나핀(napin) 프로모터 및 애기장대의 종자에서 감마 토코페롤 메틸기 전이효소(γ-tocopherol methyl transferase:γ-TMT) 유전자 발현을 유도함으로써 비타민 E 생성을 증진시킨 연구에 사용된 당근 유래 DC-3 프로모터 등이 있다. 상기 종자 특이적 프로모터들은 주로 종자 자체가 식량이나 식품 또는 식품의 원료로 사용되는 주요 작물에서 유용 단백질 축적 및 유용 물질 생성 등을 목적으로 주로 사용되고 있다.
셋째, 뿌리 특이 발현 프로모터이다. 아직 상용화된 사례는 없으나 애기장대 퍼옥시다제(peroxidase, prxEa)가 분리되어 뿌리 특이적 발현을 확인하였고, 최근 고구마 유래의 매즈 유전자(ibMADS)와 당 유도성 에이디피 글루코오스 파이로포스파타제(ADP-glucose pyrophosphatase, AGPase) 유전자가 분리되어 해당 프로모터가 뿌리에서 특이 발현을 유도하며 당근, 무에서 뿌리 특이적 일시적 발현을 유도함을 확인하여 특허 등록(대한민국 등록번호 제10-0604186호, 제10-0604191호)된 바 있다. 이들 프로모터는 식량이나 식품, 또는 식품의 원료로 사용되는 주요 뿌리작물에서 농업적 형질 개량이나 유용 단백질 축적 및 유용 물질 생성 등을 목적으로 주로 사용이 기대될 수 있다.
넷째, 잎 등의 기타 조직 특이 프로모터이다. 잎 등의 광합성 조직에서만 강력한 유전자의 발현을 유도하는 벼와 옥수수 유래의 알비씨에스 (rbcS: ribulose bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit)프로모터, 아그로박테리움 유래의 식물 뿌리 발현을 유도하는 RolD 프로모터, 감자 유래 괴경 특이 발현 유도 파타틴 (patatin) 프로모터, 토마토 유래의 과실 성숙 특이 발현 유도 피디에스 (PDS: phytoene synthase) 프로모터가 있다.
마지막으로 화분과 약에 특이적으로 발현하는 프로모터로 단백질 합성을 억제하는 유전자를 연결하여 인브레드 라인을 만들거나 특정 목적을 위하여 웅성 불임 등을 유도하기 위한 목적으로 화분 특이 프로모터가 개발되었고, 꽃의 웅성 기관 약의 융단조직 특이 BcA9 프로모터를 세포에 독성을 갖는 Bt 단백질 유전자의 발현을 유도케 함으로써 웅성 불임 작물을 개발한 바 있다.
이에 본 발명자들은 꽃 기관만을 선택적으로 조절할 수 있는 새로운 프로모터를 개발하기 위해 노력한 결과, 덴드로비움 속 난초 유래의 APETALA3A 프로모터가 꽃 기관 특이적으로 발현됨을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 덴드로비움 속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 APETALA3A 프로모터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 APETALA3A 프로모터를 포함하는 재조합 식물 발현 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 재조합 식물 발현 벡터로 형질전환된 식물체를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 APETALA3A 프로모터를 이용하여 외래 유전자를 형질전환된 식물체의 꽃 기관에서 발현시키는 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 덴드로비움 속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 APETALA3A 프로모터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 APETALA3A 프로모터를 포함하는 재조합 식물 발현 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 식물 발현 벡터로 형질전환된 식물체를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 APETALA3A 프로모터를 이용하여 외래 유전자를 형질전환된 식물체의 꽃 기관에서 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 APETALA3A (AP3A) 프로모터는 꽃 기관에서 특이적으로 발현이 증가하기 때문에, 이를 이용하여 다른 기관에는 영향을 미치지 않으면서 꽃 기관을 선택적으로 조절할 수 있다.
도 1은 난초의 각 기관에서 APETALA3A (AP3A) 유전자의 발현 정도를 전기영동을 통해 나타낸 도이다.
도 2는 APETALA3A (AP3A) 유전자의 부분적인 cDNA 서열을 나타낸 도이다 (밑줄 : 프라이머 서열).
도 3은 APETALA3A (AP3A) cDNA를 이용한 5-RACE 결과를 전기영동을 통해 나타낸 도이다.
도 4는 APETALA3A (AP3A) cDNA를 이용한 5-RACE결과, 전기영동 산물의 염기 서열을 나타낸 도이다 (붉은색 : 단백질 합성 개시 코돈, 파란색 : 5’UTR).
도 5는 APETALA3A (AP3A) gDNA를 이용한 Tail-PCR 결과를 전기영동을 통해 나타낸 도이다.
도 6은 APETALA3A (AP3A) gDNA를 이용한 Tail-PCR 결과, 전기영동 산물의 염기서열 분석을 토대로 작성한 피지컬 맵을 나타낸 도이다.
도 7은 APETALA3A (AP3A)의 프로모터를 나타낸 도이다 (붉은색 : 엑손, 파란색 : 5’UTR).
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 꽃 기관 특이적 APETALA3A 프로모터를 제공한다.
상기 APETALA3A 프로모터는 덴드로비움 속 난초로부터 유래되는 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않으며, 자연 유래 또는 인위적 합성한 것이 모두 이용될 수 있다. 상기 “덴드로비움 속 난초”는 석곡, 고귀석곡, 덴드로비움 핌브리아툼, 덴드로비움 덴시플로룸 등의 덴드로비움을 모두 포함할 수 있으며, 바람직하게는 석곡일 수 있다.
본 발명에서 “프로모터”는 코딩 서열 또는 기능적 RNA의 발현을 조절할 수 있는 DNA 서열을 의미한다.
본 발명의 APETALA3A 프로모터는 서열번호 1의 일부 염기가 치환, 결실 또는 부가되더라도 꽃 기관 특이적 발현 프로모터 활성을 나타내는 경우, 이러한 변형 염기서열도 포함할 수 있다. 보다 구체적으로 변형 염기서열은 서열번호 1의 염기서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다. 상기 %는 동일한 핵산 염기가 두 서열 모두에 존재하는 위치의 수를 확인하여 정합 위치의 수를 산출하고, 그 정합 위치의 수를 비교 영역 내의 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 상동성 %를 산출함으로써 계산된다. 비교를 위한 서열의 최적 배열은 공지된 연산방식의 컴퓨터에 의한 임플러먼테이션에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명에 따른 APETALA3A (AP3A) 프로모터는 꽃 기관에서 특이적으로 발현이 증가하기 때문에, 이를 이용하여 다른 기관에는 영향을 미치지 않으면서 꽃 기관을 선택적으로 조절할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 APETALA3A 프로모터를 포함하는 재조합 식물 발현 벡터를 제공한다.
본 발명에서 “벡터”는 적합한 숙주 내에서 목적 유전자를 발현시킬 수 있도록 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 유전자의 염기서열을 함유하는 DNA 제조물을 의미한다. 상기 조절 서열은 전사를 개시할 수 있는 프로모터, 그러한 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열, 및 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열을 포함한다. 본 발명에서 사용되는 벡터는 숙주 중에서 복제 가능한 것이면 특별히 한정되지 않으며 당업계에 알려진 임의의 벡터를 이용할 수 있으며, 예를 들어 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 박테리오파아지 벡터 또는 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터 같은 바이러스 벡터 등을 포함한다.
본 발명의 발현 벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선택성 마커를 포함할 수 있다. 상기 선택성 마커는 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질전환된 세포를 비형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해당되며, 예를 들어 글리포세이트(glyphosate) 또는 포스피노트리신(phosphinotricin)과 같은 제초제 저항성 유전자, 카나마이신(Kanamycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 내성 유전자등을 포함한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 식물 발현 벡터로 형질전환된 식물체를 제공한다.
본 발명에서 "형질전환"은 DNA를 숙주로 도입하여 DNA가 염색체 외 인자로서 또는 염색체 통합완성에 의해 복제 가능하게 되는 것을 의미한다. 본 발명의 벡터를 형질 전환시키는 방법은 핵산을 세포 내로 도입하는 어떤 방법도 포함되며, 숙주세포에 따라 당 분야에서 공지된 바와 같이 적합한 표준 기술을 선택하여 수행할 수 있다. 예를 들어, 전기천공법(electroporation), 인산칼슘(CaPO4) 침전, 염화칼슘(CaCl2) 침전, 미세주입법(microinjection), 폴리에틸렌글리콜(PEG)법, DEAE-덱스트란법, 양이온 리포좀법, 및 초산 리튬-DMSO법 등이 있다.
상기 숙주 세포로는 DNA의 도입효율이 높고, 도입된 DNA의 발현 효율이 높은 숙주를 사용하는 것이 좋은데, 원핵 및 진핵을 포함한 모든 미생물을 사용 가능하다.
본 발명에서 식물체는 덴드로비움 속 난초, 벼, 밀, 보리, 옥수수, 대두, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수 등의 식량 작물류; 애기장대, 배추, 무, 고추, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파 및 당근 등의 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무, 들깨, 땅콩 및 유채 등의 특용 작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 자두, 살구 및 바나나 등의 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립 등의 화훼류; 등일 수 있으며, 바람직하게는 덴드로비움 속 난초이다. 상기 덴드로비움 속 난초는 석곡, 고귀석곡, 덴드로비움 핌브리아툼, 덴드로비움 덴시플로룸 등의 덴드로비움을 모두 포함할 수 있으며, 바람직하게는 석곡일 수 있다.
또한, 본 발명은
(a) 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 꽃 기관 특이적 APETALA3A 프로모터를 포함하는 재조합 식물 발현 벡터에 외래 유전자를 삽입하는 단계; 및
(b) 상기 외래 유전자가 삽입된 재조합 식물 발현 벡터를 식물체에 형질전환 하는 단계;를 포함하는 외래 유전자를 형질전환된 식물체의 꽃 기관에서 발현시키는 방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 석곡의 각 조직 별 APETALA3A ( AP3A ) 유전자 발현 분석
석곡의 각 조직별 APETALA3A (AP3A) 유전자 발현 분석을 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 실험에 이용된 석곡은 바보난 농원에서 제공받은 진도산 석곡 (Dendrobium moniliforme)을 이용하였다. 석곡은 전북대학교 온실에서 14시간 명/10시간 암 주기의 조건에서 22℃에서 배양하였다. 꽃 기관의 시료는 4월 말에서 5월초 개화하는 어린 화아 (young flower bud)를 이용하였다.
먼저, 성숙한 석곡의 어린 잎, 꽃 기관, 뿌리를 채취한 다음 액체 질소를 이용하여 시료를 파쇄한 후, easy-spinTM II Plant RNA Extraction Kit (Intron Co.)를 사용하여, 제작사의 매뉴얼에 따라 전체 RNA를 분리하였다. 상기 전체 RNA로부터 SMARTerTM PCR cDNA library kit(Clonetech사)를 사용하여, 제작사의 매뉴얼에 따라 전체 길이의 cDNA를 합성하였다. 상기 전체 길이의 cDNA 및 하기 표 1의 프라이머를 이용하여 RT-PCR을 수행하였다. RT-PCR 반응 조건은 다음과 같다. 95℃에서 15초 동안 변성(denaturation), 55℃에서 30초 동안 결합(annealing), 72℃에서 1분간 신장(extension) 과정을 20 사이클 반복한 후, 마지막으로 72℃에서 10분간 신장 과정을 1회 수행하였다.
프라이머 이름 DNA 서열 표적 유전자
DenAP3A-Fd 5‘-GTGCTCTGCGACGCTCAASTCT-3’ AP3A forward
DenAP3A-Rd 5‘-GTGTCRGTTTGTGTGGCGATCACA-3’ AP3A reverse
최종 반응 산물은 0.8% 아가로즈 겔 전기영동을 통해 분석하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, APETALA3A (AP3A) 유전자는 석곡의 각 조직 중에서 꽃 기관에서 매우 높게 발현됨을 확인하였다.
실시예 2. APETALA3A ( AP3A ) 프로모터 분석
상기 실시예 1에서 확인한 cDNA 산물을 gel extraction kit를 이용하여 회수한 뒤, TOPcloner TA kit (Enzynomics사)를 이용해 클로닝하였다. 이 후 M13F와 M13R 프라이머를 이용하여 양방향 DNA 시퀀싱 (바이오니아 사)을 수행하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
또한, APETALA3A (AP3A) 프로모터 예상 부위와 유전자 구조를 분석하기 위해, 전사 개시 자리의 정보를 확인하였다. 이를 위해 실시예 1에서 제조한 전체 길이의 cDNA를 이용하여 5-RACE를 수행하였다. 5-RACE의 반응 조건은 다음과 같다. 95℃에서 15초 동안 변성(denaturation), 60℃에서 30초 동안 결합(annealing), 72℃에서 30초 동안 신장(extension) 과정을 20 사이클 반복한 후, 마지막으로 72℃에서 10분간 신장 과정을 1회 수행하였다. 반응 산물은 4℃에서 보존하였으며, 아가로즈 겔 전기영동을 통해 확인한 후, 염기서열을 분석하였다. 그 결과를 각각 도 3 및 도 4에 나타내었다.
또한, APETALA3A (AP3A) 유전자의 5’-flaking 염기서열을 찾기 위해 Tail-PCR을 수행하였다. cDNA 서열을 기초로 네스티드(nested) 프라이머 3개 및 임의의(arbitrary) 프라이머 6개를 디자인하였으며, 이를 하기 표 2에 나타내었다.
프라이머 이름 　DNA 서열 (5’-3’)
AP3A-R1 GAGASTTGAGCGTCGCAGAGCAM
AP3A-R2 AGTATGTCACTTGCCTGTTCGTTGG
AP3A-R3 CTTGCCTGYTCGTYGRGTTCTCTATC
AD1 NTCGASTWTSGWGTT
AD2 NGTCGASWGANAWGAA
AD3 WGTGNGGWANCANAGA
AP1 NGTCGASWGANAWGAA
AP2 TGWGNAGSANCASAGA
AP3 AGWGNAGWANCAWAGG
(상기 표 2에서 N은 A,T,G, 또는 C; W는 A 또는 T; S는 C 또는 G를 의미한다.)
6개의 임의의 프라이머를 독립된 PCR 튜브에 준비하고, 하기 표 3에 기재된 비율로 혼합한 후 1차 PCR을 수행하였다.
Genomic DNA 1 ㎕ (50 ng)
AP3A-R1 (10 pmol/㎕) 2 ㎕
임의의 프라이머 (100 pmol/㎕) 2 ㎕
물 7.5 ㎕
2x 마스터PCR 믹스 12.5 ㎕
1차 PCR 반응 조건은 다음과 같다.
93℃ 1분, 95℃ 1분;
[94℃ 30초, 62℃ 1분 30초, 72℃ 2분 30초] (5 사이클);
[94℃ 10초, 68℃ 1분, 72℃ 2분 30초, 94℃ 10초, 68℃ 1분, 72℃ 2분 30초, 94℃ 10초, 44℃ 1분, 72℃ 2분 30초] (12 사이클);
72℃ 1분.
상기 1차 PCR 반응액을 물로 1/50 희석하여, 하기 표 4에 기재된 비율로 혼합한 후 2차 PCR을 수행하였다.
1/50 희석한 1차 PCR 반응액 1 ㎕
AP3A-R2 (10 pmol/㎕) 2 ㎕
임의의 프라이머 (100 pmol/㎕) 2 ㎕
물 7.5 ㎕
2x 마스터PCR 믹스 12.5 ㎕
2차 PCR 반응 조건은 아래와 같다.
[94℃ 10초, 64℃ 1분, 72℃ 2분 30초, 94℃ 10초, 64℃ 1분, 72℃ 2분 30초, 94℃ 10초, 44℃ 1분, 72 2분 30초] (12 사이클)
72℃ 1분.
상기 2차 PCR 반응액을 물로 1/10 희석하여, 하기 표 5에 기재된 비율로 혼합한 후 3차 PCR을 수행하였다.
1/10 희석한 2차 PCR 반응액 1 ㎕
AP3A-R3 (10 pmol/㎕) 2 ㎕
임의의 프라이머 (100 pmol/㎕) 2 ㎕
물 7.5 ㎕
2x 마스터PCR 믹스 12.5 ㎕
3차 PCR 반응 조건은 아래와 같다.
[94℃ 15초, 44℃ 1분, 72℃ 2분 30초] (20 사이클)
72℃ 1분
각 PCR 반응물을 0.8% 아가로즈 겔 전기영동을 통해 확인하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 2차 PCR 반응물에서 특이적인 밴드가 증폭된 것을 확인하였다.
상기 증폭된 DNA를 분리하여 염기서열을 분석한 후, genomic DNA를 주형으로 한 PCR 산물의 염기서열과 cDNA 서열을 비교 분석하여 피지컬 맵을 작성하였으며, 전사 개시 자리와 번역 개시 코돈을 결정하였다. 그 결과를 각각 도 6 및 도 7에 나타내었다.
<110> NATIONAL ARBORETUM, KOREA FOREST SERVICE <120> Flower Organ-specific APETALA3A Promoter derived from Dendrobium <130> 32 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 600 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> APETALA3A Promoter <400> 1 ttgtgcagga gcagagtgcg ataaagagct taaagctgag aaactgtaaa aaaaatcaga 60 gaaagagagg gagaagattg agagaaaggg gaaagtaaag tggcctttgc tttaaataga 120 agaaaaacat cacatgttat ctctgcccgc aacttctttc acaaaaaagg caactctttc 180 cattctaaga aactatagct tttgcttcct gctctgtaaa tggaagctct ccatttctct 240 ctctctcttt tttctttaca gttctcttct ttttttttaa tccaaactgt taatataatg 300 gagaattatg cattaaaaag agcccgttta atcagaatct aaaacaaatt ggaggatcaa 360 tcgatccaag ttaaatatta agctctgata gaagttgtta gtaacggtaa gtgcatttca 420 atggaacaat caaagctgaa tttttagtaa aaatttaagc atagaagaat attctcactt 480 gtattaacca ccccctttct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct 540 ctctaaaaaa ctgatctttc tcttcctatt tatatgagag gaggaagaag aagaacgatt 600 600

Claims (6)

  1. 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 덴드로비움 속 난초 유래의 꽃 기관 특이적 APETALA3A 프로모터.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 덴드로비움 속 난초는 석곡 (Dendrobium monile), 고귀석곡, 덴드로비움 핌브리아툼 및 덴드로비움 덴시플로룸으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 프로모터.
  3. 제 1항의 APETALA3A 프로모터를 포함하는 재조합 식물 발현 벡터.
  4. 제 3항의 재조합 식물 발현 벡터로 형질전환된 식물체.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 식물체는 덴드로비움 속 난초, 벼, 밀, 보리, 옥수수, 대두, 감자, 밀, 팥, 귀리, 수수, 애기장대, 배추, 무, 고추, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파 및 당근, 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무, 들깨, 땅콩, 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 자두, 살구, 바나나, 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 식물체.
  6. (a) 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 꽃 기관 특이적 APETALA3A 프로모터를 포함하는 재조합 식물 발현 벡터에 외래 유전자를 삽입하는 단계; 및
    (b) 상기 외래 유전자가 삽입된 재조합 식물 발현 벡터를 식물체에 형질전환 하는 단계;를 포함하는 외래 유전자를 형질전환된 식물체의 꽃 기관에서 발현시키는 방법.
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