KR20140050299A

KR20140050299A - 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20140050299A
Application number: KR1020120116535A
Authority: KR
Inventors: 양재하; 정지욱; 박현정; 이은숙; 임언주; 오사랑; 여미진; 안은미; 심인섭
Original assignee: 대구한의대학교산학협력단
Priority date: 2012-10-19
Filing date: 2012-10-19
Publication date: 2014-04-29
Also published as: KR101410180B1

Abstract

본 발명은 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 세신 추출물은 생쥐의 강제수영법(Fored swimming test) 및 꼬리 현수 실험법(Tail suspension test)으로 항우울증 효과를 확인한 바, 기존의 우울증 치료제에 비하여 강력하게 우울증을 억제시킴을 확인하였으므로, 우울증의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품에 이용될 수 있다.

Description

세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료용 조성물 {Composition comprising the extract of Asarum heterotropoides Fr. mandshuricum for preventing and treating depression}

본 발명은 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

[문헌 1] Cho YJ, et al., Journal of Korean medical science., 26(2), pp279-83, 2011

[문헌 2] Arborelius L, et al., The Journal of endocrinology .,160(1), pp1-12, 1999.

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[문헌 4] Butterweck V. et al., Molecular psychiatry., 6(5), pp547-64, 2001

[문헌 5] Graeff FG. et al., Pharmacology , biochemistry , and behavior., 54(1), 129-41,1996

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[문헌 8] Falowski SM. et al., Neurosurgery. 69(6), pp1281-90, 2011

[문헌 9] Paxinos G. et al., Journal of neuroscience methods. 13(2),pp139-43.1985

우울증이란 우울한 기분에 빠져 의욕을 상실한 채 무능함, 고립감, 허무감 ,죄책감, 자살충동 등에 사로잡히는 일종의 정신질환으로 소화불량, 두통, 불면, 변비, 설사, 성욕감퇴 등의 신체적 증상을 동반한다.

우울증은 범세계적으로 유병률이 매우 높고, 다양한 기능 장애를 동반하며, 사회문화적 요인이 우울증의 증상발현과 건강추구형태에 미치는 영향이 크기 때문에 국가별로 최적화된 정신보건정책을 비롯한 대책 수립이 필요하며, 이를 위해서는 무엇보다는 정확하고 신뢰도 높은 역학조사 자료가 필수적이다.

또한 우리나라는 핵가족화, 개인화, 급속한 경제성장, 빠른 고령화 등 많은 변화를 겪고 있고 자살률은 이미 OEDC 국가에서 2010년 현재 1위로서 우울증의 중요성이 어느 때보다 강조되는 시점이다.

현재까지는 우울증의 발생기전이 명확히 밝혀져 있지 않으며, 중추신경계시냅스의 모노아민계 신경전달물질인 세로토닌, 노르에피네프린, 도파민 등의 결핍을 가장 유력한 가설로 여기고 있다. 따라서 대부분의 우울증 치료제는 중추신경계시냅스의 모노아민계 신경절달 물질의 농도를 높이는 약리작용을 갖고 있다.

현재 상용되는 대표적인 우울증 치료제로는 벤조디아제핀(benxodiazepine), 디아제팜(diazepam), 옥사제팜 (oxazepam), 로라제팜(lorazepam), 알프라졸람(alprazolam), 헬라제팜(helazepam), 클로나제팜(clonazepam) 등이 있는데 이 약품들은 진정 및 수면유도제로도 사용된다.

Corticotrophin-releasing factor (CRF)는 스트레스 반응에서 가장 중요한 역할을 한다. CRF는 불안 및 우울장애, 만성 통증, 피로, 불면증, 급성 또는 만성 신경퇴화 그리고, 알러지 반응 및 대사성 증후군을 조절한다(1). CRF는 스트레스에 대한 신경 내분비 조절뿐 아니라, 자율신경계 행동반응을 조절하는 펩타이드이며, 우울증환자에서 HPA축 과활성으로 인해 시상하부에서 과다 분비된다고 알려져 있다(2). 이러한 CRF의 과활성은 성공적인 항우울제 치료 후에 HPA 축의 과활성이 다시 정상화 되며 이는 우울증의 표지가 되었다(2). 항우울제가 장기 투여된 우울증 동물 모형에서는 시상하부 실방핵에서 CRF mRNA 발현이 감소됨을 보여주었고(3), 또한 만성구속 스트레스에 의해 증가된 CRF mRNA가 imipramine 의 장기투여 후에 감소되다(4). 급성 또는 만성 스트레스에서 불안, 화, 분노 등의 감정적인 변화가 야기되는데, 이는 신경전달물질인 세로토닌 5-HT의 변화에 따른다(5). 그리고 스트레스에 따른 corticosterone (CORT)의 증가는 5-HT의 신경전달을 증가시킨다. 이전의 동물연구에서는 항우울제인 prozac등을 처리 했을 때 CORT의 감소 및 5-HT가 serum 및 CSF내 감소되었다고 보고하였으며(6), 우울증의 원인은 세로토닌 외에도 도파민, 에피네프린의 신경전달물질이 균형을 잃어 우울증이 발생한다고 보고되고 있다. 세로토닌은 공격성을 나타나는 노르에피네프린, 중독성이 있는 엔도르핀과 도파민의 과잉분비를 조절한다(7). 예로부터 세로토닌이 부족한 사람은 쉽게 공격적인 행동을 보이거나 격정적인 흥분에 빠지기 쉽다고 한다. Tyrosine hydroxylase (TH)는 도파민과 노르에피네프린의 rate limit enzyme으로 도파민과 노르에피네프린의 발현을 간접적으로 알아보기 위해 사용된다(8).

세신(細辛)은 쥐방울과(Aristolochiaceae)에 속하는 여러해살이 초본식물인 족두리풀 (Asarum heterotropoides Fr. mandshuricum), 민족두리풀 (Asarum sieboldi Miq), 또는 섬족두리풀 (Asarum maculatum) 의 뿌리 달린 전초를 칭하는 것으로 메틸유게놀(methyl eugenol), 피넨(pinene), 유카르본(eucarvone), 등의 물질을 함유하고 있으며, 해열, 진통 및 진해작용을 갖는 것으로 알려져 있다 (정보섭외, 도해향약대사전, pp746-747, 1998).

그러나, 상기 문헌의 어디에도 세신 추출물의 항우울증제로서의 효능에 대하여 개시 또는 교시된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 천연물로부터 새로운 항우울 약물을 개발하기 위하여 여러 종의 천연물을 검색한 결과, 세신 추출물이 항우울증 약효의 생체 내(in vivo) 검색법인 생쥐 강제수영법(Fored swimming test)과 생쥐 꼬리 현수 실험법(Tail suspension test)에서 농도의존적으로 부동 시간(immobility duration)을 현저히 감소시킴을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

상기 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 상기 세신은 족두리풀 (Asarum heterotropoides Fr. mandshuricum), 민족두리풀 (Asarum sieboldi Miq), 또는 섬족두리풀 (Asarum maculatum)의 뿌리 달린 전초를 포함하나, 족두리풀 (Asarum heterotropoides Fr. mandshuricum)의 뿌리 달린 전초를 사용함이 바람직하다.

본원에서 정의되는 상기 추출물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 아세톤, 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 물 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 헥산 또는 클로로포름에 가용한 추출물을 포함한다.

이하, 본 발명의 세신 추출물은 당업계에 통상적인 추출방법으로 수득가능한데, 이하에 상기 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

예를 들어, 건조한 세신 시료 중량의 약 1 내지 100배(v/w), 바람직하게는 약 5 내지 20배(v/w)의 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 아세톤, 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 물 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 헥산 또는 클로로포름을 가하여 10 내지 110℃, 바람직하게는 실온에서 1시간 내지 5시간, 바람직하게는 1시간 내지 3시간동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각추출, 가열추출 등의 추출방법, 바람직하게는 냉침 추출 또는 초음파 추출법으로 추출한 후, 그 여과물을 여과하고 감압농축 및 건조하여 본 발명의 추출물을 수득할 수 있다.

따라서, 본 발명은 건조한 세신 시료 중량의 약 1 내지 100배(v/w)의 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 아세톤, 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 물 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 헥산 또는 클로로포름을 가하여 10 내지 110℃, 바람직하게는 실온에서 1시간 내지 5시간, 바람직하게는 1시간 내지 3시간동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각추출, 가열추출 등의 추출방법, 바람직하게는 냉침 추출 또는 초음파 추출법으로 추출하는 제 1단계; 그 여과물을 여과하고 감압농축 및 건조하는 제 2단계 공정을 포함하는 세신 추출물을 제조하는 제조방법을 제공한다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강기능식품을 제공한다. 본 발명의 세신 추출물에 대하여 항우울증 약효의 생체 내(in vivo) 검색법인 생쥐 강제수영법(Fored swimming test) 및 생쥐 꼬리 현수 실험법(Tail suspension test)을 수행한 결과, 본 추출물이 농도의존적으로 부동 시간(immobility duration)을 현저히 감소시킴을 확인하여 우울증의 예방 및 치료에 유용함을 확인하였다.

본 발명의 추출물을 함유하는 약학조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 추출물 자체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약재이다.

본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔스,사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.5g/kg 내지 5g/kg으로, 바람직하게는 1g/kg 내지 3g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

따라서, 또한, 본 발명은 우울증의 예방 및 개선 효과를 갖는 상기 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 및 식품첨가제를 제공한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 우울증의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 추출물은 우울증의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 1 내지 5 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료서 상이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈지 스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시쥴 덱스트린 등성물은 지통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 는 비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A함유할 시르히진 등) 및 합 비향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율 지본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 세신 추출물은 생쥐의 강제수영법(Fored swimming test) 및 생쥐 꼬리 현수 실험법(Tail suspension test)으로 항우울증 효과를 확인한 결과, 기존의 우울증 치료제에 비하여 강력하게 우울증을 억제시키는바, 인체에 무해한 우울증의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품에 이용될 수 있다.

도 1은 강제수영 시험 후 dorsal raphe nucleus내에 5-HT의 발현을 관찰한 결과를 나타낸 도이며,
도 2은 강제수영 시험 후 paraventricular nucleus내에 CRF의 발현을 관찰한 결과를 나타낸 도이며,
도 3는 본 발명의 세신 추출물을 투여한 생쥐에 대한 강제수영법에 있어서 부동 시간을 대조군 및 양성대조군과 비교한 도이며,
도 4는 본 발명의 세신 추출물을 투여한 생쥐에 대한 꼬리현수실험에 있어서 부동 시간을 대조군 및 양성대조군과 비교한 도이다.

이하, 본 발명을 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 세신 헥산100 % 추출물의 제조

대원한약국 세신1.2kg을 100% 헥산 5L 씩 2회 가하여 실온에서 24시간동안 추출한 후 Whatman (No. 1) 여과지(filter paper)로 여과하고, 남은 잔사에 다시 100% 헥산 5L를 가하여 2회 추출하고 다시 여과지로 여과한 뒤 여액을 합하여 40℃에서 감압 농축하여 농축물 95g을 얻어 하기 실험예의 시료로 사용하였다 (이하, 5-HT 라 함)

참고예 1. 실험동물의 준비

본 실험에서는 수컷의 ICR mouse (SPF/VAF CrljBgi: CD-1) 5주령을 주식회사 오리엔트 (경기도, 한국)에서 공급받아 사용하였다. 실험동물은 대구한의대 동물 실에서 7일간 적응 시킨 후 대조군, 세신향을 흡입한 실험 군으로 구분하여 사용하였다. 실험동물은 온도 23 ± 3℃, 습도 50 ± 10% 내외, 명암주기 12시간 주기로 일정하게 유지된 사육실에서 다섯 마리씩 케이지(polycarbonate mice cage)에 수용하여 사육하였으며 적응 기간 동안 사료와 물을 제한 없이 공급 받았다.

참고예 2. 통계처리

모든 실험 결과는 one way analysis of variance (ANOVA)를 이용하여 통계처리 하였고, 유의성이 인정될 경우 Student-Newman-Keuls Method 를 이용하여 P < 0.05 수준 이하에서 유의성 검정을 실시하였다.

실험예 1. 면역조직화학법 ( Immunohistochemistry )

상기 실시예의 세신 추출물의 행동실험이 마친 후 쥐의 면역조직화학적 변화를 분석하기 위하여, 문헌에 기재된 면역조직화학법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다.

행동실험이 끝난 쥐를 sodium pentobarbital (80mg/kg, i.p.)로 마취시킨 후, 0.9% saline 200ml에 이어 phosphate buffer로 준비한 4% formalin 용액 800ml로 심장을 통해 관류하였다. 고정이 끝난 쥐는 뇌를 꺼내 같은 고정액으로 2시간 후고정시키고, 20% sucrose가 함유된 phosphate buffered saline(PBS)에 넣어 4℃에서 하루 동안 보관하였다. 다음날 뇌를 급속 냉동한 후 뇌조직을 30um의 크기로 잘랐다. PBS로 조직을 몇 차례 씻고, serotonin (5-HT (1:200), rabbit monoclonal antibody, Abcam, Cambridge, USA), TH (1:2000), rabbit monoclonal antibody, santacruz, CA, USA) 또는 corticotrophin releasing factor (CRF (1:200), rabbit monoclonal antibody, Abcam, Cambridge, USA) primary antibody는 0.3% triton-X100 (PBST)에서 2% bovine serum (Sigma, ST. Louis, MO)에 희석하여 준비하였다. 뇌 조직은 primary antiserum에 4℃에서 72시간 동안 배양하였다. 그 후 뇌 조직을 PBST로 씻은 다음, 2시간 동안 실온에서 2% bovine serum을 함유한 PBST에서 200배로 희석한 biotinylated goat anti-rabbit serum (Vector Laboratories, Burlingame, CA)에서 반응시켰다. 다시 PBST로 씻은 다음, 뇌 조직은 실온에서 1시간 동안 Elite standard vectastain avidin biotin complex (ABC) reagent (Vector Laboratories, Burlingame, CA)에 담구어 반응시켰다. PBST로 몇 번 헹군 다음, 뇌 조직을 착색제인 3’-diamiinobenzidine tetrahydrochloride (DAB, Sigma, ST. Louis, MO)을 사용하여 발색시켰다. 발색이 끝난 조직은 slide glass에 얹어서 실온에서 건조시킨 후, xylene으로 투명화시켜 polymount로 봉입하였다. 뇌 조직의 각 부위는 발색 정도는 광학현미경(OLYMPUS BX51)으로 관찰하고 사진을 촬영하였다. 뇌의 각 부위의 명칭은 Paxinos 와 Wastson(9)의 부도를 참고하였다. 현상된 사진에서 격자 (200 X 200 μm)를 이용하여 동일한 지역에서 일정한 영역에 반응되어 나타난 염색성 정도를 counting 하였다.

1-1. 5- HT 면역조직화학법

강제수영 시험 후 dorsal raphe nucleus내에 5-HT의 발현을 관찰한 결과는 도 1과 같다. 대조군에서는 정상군에 비해 dorsal raphe nucleus내에 5-HT의 발현이 약 50% 정도 감소하였다 (F 3,23=16.7, p<0.001). 하지만, 세신 1mg군에서는 대조군에 비해 5-HT의 발현이 유의하게 증가하는 것을 알 수 있다.

1-2. CRF 면역조직화학법

강제수영 시험 후 paraventricular nucleus내에 CRF의 발현을 관찰한 결과는 도 2와 같다(F 3,23=60.2, p<0.001). 대조군에서는 정상군에 비해 paraventricular nucleus내에 CRF의 발현이 약 300% 정도 증가하였다. 하지만, 세신 0.5mg 그리고 1mg군에서는 대조군에 비해 CRF의 발현이 유의하게 감소하는 것을 알 수 있다.

1-3. TH 면역조직화학법

강제수영 시험 후 locus coeruleus (LC)내에 TH의 발현을 관찰한 결과는 다음과 같다 (F 3,23=15.6, p<0.001). 대조군에서는 정상군에 비해 LC내에 TH의 발현이 약 50% 정도 증가하였다. 하지만, 세신 1mg군에서는 대조군에 비해 TH의 발현이 유의하게 감소하는 것을 알 수 있다.

실험예 2. 강제수영법에 의한 항우울 활성 확인

강제수영법에 의한 세신 추출물의 항우울 활성을 측정하기 위하여, 문헌에 기재된 절망행동검사라고도 하는 표준화된 검사법인 FST를 이용한 방법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다(R.D. Porsolt, et al., Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants, Arch Int Pharmacodyn Ther, 229, pp.327-36, 1977).

인간의 질병 연구에 대한 동물모형이 제한점이 있듯이 FST도 일부 논란은 있었으나, 약물개발시의 항우울 효과를 검색하는 가장 기본적인 실험방법으로 알려져 있다. FST의 실험과정은 최초의 제안자인 Porsolt 등의 방법을 따라서 시행하였다.

약물 흡입이 종료된 후 항우울 효과의 측정은 자가 제조된 FST를 이용한다.

이 실험은 높이 25㎝, 지름 11㎝의 투명한 아크릴 원통형 수조를 제작하여 25 ± 1℃의 물에 마우스의 꼬리가 바닥에 닿지 않을 정도의 물 높이에 강제로 빠뜨린 다음 처음 2분간은 적응시키고 4분 동안 EthoVision program을 이용하여 immobility duration을 측정하여 항우울 효과를 측정하였다. 실험 중에 처음 2분 동안은 마우스가 이를 벗어나기 위해 심한 저항을 보이나, 시간이 흐를수록 점점 부동자세를 보이는 시간이 늘어나며 마지막은 거의 부동 상태로 몸을 유지하는 경향이 있다. 전형적인 부동 상태란 마우스가 얼굴의 일부분만 수면 위로 드러낸 채 몸의 균형을 유지하기 위하여 약간의 움직임만을 나타낼 뿐 물 위에 떠 있는 상태이다. FST가 끝난 마우스는 몸의 물기를 닦아준 다음 사육 cage로 돌려보냈으며 물의 온도는 항상 일정하게 25 ± 1℃를 유지하였다. 세신은 0.25, 0.5, 1 및 2g/kg 용량으로 알콜에 녹여 실험시작 3시간 전부터 흡입하도록 하였고, 대조군은 알콜만을 흡입하였다. 각 군은 5-7마리로 하였다.

세신향의 항우울 작용을 확인하기 위하여 FST를 이용하여 부동자세 시간을 측정하였다.

실험 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 대조군의 경우 immobility time이 182.61 ± 7.78초로 나타났고, 세신 0.5 g/㎏ 흡입군에서 immobility time이 119.05 ± 16.75초로 대조군에 비해 유의성 있게 감소하였음을 관찰할 수 있었다(P < 0.05).

실험예 3. 꼬리현수실험에 의한 항우울 활성 확인

꼬리현수법에 의한 항우울 활성의 측정은 스테루(Steru) 등의 방법으로 시행하였다(Steru L. et al., The tail suspension test: a new method for screening antidepressants in mice. Psychopharmacology 85, pp.367-370, 1985).

TST에 의한 항우울활성의 측정은 Steru 등의 방법으로 실시하였다. 꼬리가 매달린 마우스는 활동과 부동자세를 교대로 보이는데 항우울 약물은 용량의존적으로 부동자세를 보이는 시간을 감소시키므로 이 시간을 측정하여 항우울 활성을 확인하였다. 약물 흡입이 종료된 후 항우울 효과의 측정은 자가 제조된 TST을 이용한다. 이 실험은 높이 50㎝의 테이블 가장자리에 마우스의 꼬리 끝에서 1㎝된 부위에 테이프를 붙인 후에 10분 동안 immobility duration을 측정하여 항우울 효과를 측정하였다. 세신은 0.25, 0.5, 1 및 2g/kg 용량으로 알콜에 녹여 실험시작 3시간 전부터 흡입하도록 하였고, 대조군은 알콜만을 흡입하였다. 각 군은 5-7마리로 하였다.

TST를 이용하여 세신향의 항우울 작용을 확인하였다.

실험 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 대조군의 경우 immobility time이 218.55 ± 13.61초로 나타났고, 세신향 흡입군에서는 용량 의존적으로 immobility time이감소하는 것을 확인 할 수 있었다. 특히 2 g/kg 용량 흡입군에서 144.21 ± 11.29초로 대조군에 비해 유의성 있게 감소하였음을 관찰할 수 있었다(P < 0.05).

실험예 4. 급성독성시험

참고예 1의 생쥐를 사용하여 상기 실시예에서 수득한 세신 추출물(5-HT)을 경구투여하여 급성독성 시험을 실시하였다. 급성독성 시험 결과, 세신 추출물의 경우는 그 투여 가능 용량인 2g/kg에서 사망예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 세신 추출물의 경우는 안전한 약물임을 알 수 있었다.

하기에 본 발명의 세신 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

5-HT ------------------------------------ 20 mg

유당 ----------------------------------- 100 mg

탈크 ------------------------------------ 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

5-HT ------------------------------------ 10 mg

옥수수전분 ----------------------------- 100 mg

유당 ----------------------------------- 100 mg

스테아린산 마그네슘 ---------------------- 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

5-HT ------------------------------------ 10 mg

결정성 셀룰로오스 ------------------------ 3 mg

락토오스 ------------------------------ 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 ------------------ 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

5-HT ------------------------------------ 10 mg

만니톨 --------------------------------- 180 mg

주사용 멸균 증류수 -------------------- 2974 mg

Na₂HPO₄,12H₂O ---------------------------- 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

5-HT ------------------------------------ 20 mg

이성화당 --------------------------------- 10 g

만니톨 ------------------------------------ 5 g

정제수 ------------------------------------ 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

5-HT ------------------------------------ 1000 ㎎

비타민 혼합물 ------------------------------ 적량

비타민 A 아세테이트 ----------------------- 70 ㎍

비타민 E --------------------------------- 1.0 ㎎

비타민 B1 ------------------------------- 0.13 ㎎

비타민 B2 ------------------------------- 0.15 ㎎

비타민 B6 -------------------------------- 0.5 ㎎

비타민 B12 ------------------------------- 0.2 ㎍

비타민 C ---------------------------------- 10 ㎎

비오틴 ------------------------------------ 10 ㎍

니코틴산아미드 --------------------------- 1.7 ㎎

엽산 -------------------------------------- 50 ㎍

판토텐산 칼슘 ---------------------------- 0.5 ㎎

무기질 혼합물 ------------------------------ 적량

황산제1철 ------------------------------- 1.75 ㎎

산화아연 -------------------------------- 0.82 ㎎

탄산마그네슘 ---------------------------- 25.3 ㎎

제1인산칼륨 ------------------------------- 15 ㎎

제2인산칼슘 ------------------------------- 55 ㎎

구연산칼륨 -------------------------------- 90 ㎎

탄산칼슘 --------------------------------- 100 ㎎

염화마그네슘 ---------------------------- 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

5-HT ---------------------------------- 1000 ㎎

구연산 -------------------------------- 1000 ㎎

올리고당 -------------------------------- 100 g

매실농축액 -------------------------------- 2 g

타우린 ------------------------------------ 1 g

정제수를 가하여 ------------------- 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 치료용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 세신은 족두리풀 (Asarum heterotropoides Fr. mandshuricum), 민족두리풀 (Asarum sieboldi Miq), 또는 섬족두리풀 (Asarum maculatum) 의 뿌리 달린 전초인 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 아세톤, 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 물 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물인 약학 조성물.
세신 시료 중량의 1 내지 100배(v/w)의 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 아세톤, 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 물 또는 이들의 혼합용매를 가하여 10 내지 110℃에서 1시간 내지 5시간동안 냉침 추출 또는 초음파 추출법으로 추출한 후, 그 여과물을 여과하고 감압농축 및 건조하여 제 1항의 세신 추출물을 제조하는 제조방법.
세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방 및 개선용 건강기능식품.
우울증의 예방 및 개선 효과를 갖는 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품.
제 6항에 있어서, 상기 식품은 캔디류의 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 또는 건강보조 식품류인 식품.
우울증의 예방 및 개선 효과를 갖는 세신 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품첨가제.