CN104713988B - 一种检测蒸馏酒醉度的方法及应用 - Google Patents
一种检测蒸馏酒醉度的方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种检测蒸馏酒醉度的方法及应用。该方法通过用乙醇标准溶液和待测蒸馏酒分别给小鼠灌胃,测定灌胃前后的小鼠行为参数和灌胃后小鼠血液乙醇浓度,再依次计算出小鼠行为醉酒指数、酒的平均行为致醉率、酒的平均血液致醉率、酒的综合致醉率;然后以综合致醉率为纵坐标、灌胃剂量为横坐标作图,进行线性回归分析,得到回归直线,分别求出斜率为K乙醇溶液和K蒸馏酒;得到酒的综合醉度Q=K蒸馏酒/K乙醇溶液。该方法是四个行为参数与血液乙醇浓度参数相结合的综合醉度检测方法,能科学准确的评价不同类型蒸馏酒的醉度,因此将其用于评价蒸馏酒的品质,利于优化制酒工艺,酿造出低醉度蒸馏酒,提高蒸馏酒的健康品质。
Description
技术领域
本发明属于酿造技术领域,特别涉及一种检测蒸馏酒醉度的方法及应用。
背景技术
蒸馏酒是指白酒、白兰地、威士忌等经发酵、蒸馏酿制而成的、高酒精度(含酒精18~70%)的酒,也包括用这些酒浸泡、勾兑形成的各种功能酒。由于酿酒原料很多,酿造方法各异,造成酒的风格各有千秋。如传统的白酒是利用淀粉质原料和辅料,以酒饼、酵母等为发酵剂,经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏、陈酿、勾兑等工序酿制而成,每一个环节都会对白酒的质量造成影响。因此,不同品牌、或同一品牌不同品种的酒,其质量优劣都有差异。如今消费者已经从注重白酒的香型、风格、口感等表观属性,提升到注重酒后的舒适度与健康度。不容易喝醉的酒——低醉度酒,成为消费者和生产厂商追求的一种趋势。
乙醇是一种中枢神经抑制剂,少量饮酒会使人感觉兴奋、愉悦、话多,但随着饮用剂量的增大,认知和记忆判断能力会减弱,运动技能下降,步伐不稳、左右摇摆、腿脚乏力等症状,或导致人昏睡、失去意识,这是测量行为学醉酒的依据。
酒后人的血液中乙醇浓度升高,浓度大小与喝酒量、酒的质量及酒后时间有直接关系,这是测量血液乙醇浓度醉酒的依据。
酒的醉度是反映酒固有特性的指标之一。对于同酒度的酒,原则上醉度越低,质量越好。白酒中水和乙醇的含量占到98%,影响酒的醉度的关键因素是其余2%左右的物质,包括杂醇、酯类、酸类和其他微量物质,以及由它们混合形成的酒体结构。从而,不同酒的醉度存在差异。但是,目前仍缺乏科学有效检测蒸馏酒醉度的方法。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足,提供一种检测蒸馏酒醉度的方法。
本发明的另一目的在于提供所述检测蒸馏酒醉度方法的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现:一种检测蒸馏酒醉度的方法,包括如下步骤:
(1)用色谱纯级无水乙醇和超纯水配制成一种体积浓度或不同体积浓度的乙醇标准溶液;
(2)用乙醇标准溶液和待测蒸馏酒分别给小鼠灌胃;其中,按纯酒精剂量计算,使用n个灌胃剂量的乙醇标准溶液对小鼠灌胃后得到的小鼠形成对照组,使用n个灌胃剂量的待测蒸馏酒对小鼠灌胃后得到的小鼠形成试验组;每个灌胃剂量设置至少2个重复;
(3)对对照组和试验组进行如下参数测定:
①测定小鼠灌酒前及灌酒后t时间点的行为参数值;t时间点为两个,定义为t1和t2;
站立参数At,一分钟内旷场站立次数,次/分钟;
跑滚筒参数Bt,一分钟内跑滚筒圈数,圈/分钟;
游泳参数Ct,一分钟内游泳距离,米/分钟;
翻正参数Dt,仰卧翻正需要的时间,秒;
②测定灌酒后t时间点的小鼠血液乙醇浓度,为Nt,单位为mg/L;
(4)对步骤(3)得到的测定数据进行如下处理:
I、站次比R1t=酒后t时间一分钟站立次数At/酒前一分钟站立次数A0;
II、滚圈比R2t=酒后t时间一分钟跑滚筒次数Bt/酒前一分钟跑滚筒次数B0;
III、游距比R3t=酒后t时间一分钟游泳的距离Ct/酒前一分钟游泳距离C0;
IV、翻正比R4t=(T-翻正时间Dt)/T;
其中T为小鼠酒后t时间后可翻正的最长时间,即在T时间内不能翻正的小鼠,在该时间段后5~10分钟内将不能翻正;大于T秒翻正按Dt=T计算;T的单位为秒;
V、小鼠行为醉酒指数St=1-(a*R1t+b*R2t+c*R3t+d*R4t)
其中,a=站立权重,b=跑滚筒权重,c=游泳权重,d=翻正权重,a+b+c+d=1,0≤St≤1;
St=0时,表示喝酒前,小鼠的行为参数正常,正常的站、跑、游、翻正,即R1t=R2t=R3t=R4t=1;
St=1时,表示完全醉,小鼠行为参数异常,失去行为能力,不能站、不能跑、不能游、不能翻正,即R1t=R2t=R3t=R4t=0;
以小鼠血液乙醇浓度Nt为横坐标,站次比R1t、滚圈比R2t、游距比R3t、翻正比R4t分别为纵坐标,作图,进行线性回归分析,得到回归直线方程以及R2;进行计算,得到a、b、c和d的值,从而计算出St值;
VI、酒的行为致醉率Xt
Xt=一定剂量酒后小鼠行为醉酒指数Stw/乙醇溶液标准剂量后小鼠行为醉酒指数Sts;
其中,乙醇溶液标准剂量是步骤(2)的乙醇标准溶液灌胃剂量中选定的一个灌胃剂量;
VII、酒的平均行为致醉率X
X=(Xt1+Xt2)/2;
其中,Xt1、Xt2表示t1时间和t2时间分别得到的X值;
VIII、酒的血液致醉率Yt
Yt=一定剂量酒后小鼠血液乙醇浓度Ntw/乙醇溶液标准剂量后小鼠血液乙醇浓度Nts;
此处的乙醇溶液标准剂量与Xt相同;
IX、酒的平均血液致醉率Y
Y=(Yt1+Yt2)/2;
X、酒的综合致醉率Z
Z=(X+Y)/2;
XI、酒的综合醉度Q
蒸馏酒醉度Q的定义:用蒸馏酒和乙醇标准溶液给小鼠灌胃,达到相同综合致醉率Z时,灌乙醇标准溶液纯酒精剂量/灌蒸馏酒纯酒精剂量的比值,即为蒸馏酒醉度;
乙醇标准溶液在n个灌胃剂量下就会得到n个综合致醉率Z乙醇溶液,同样蒸馏酒试样在n个灌胃剂量下也会得到n个综合致醉率Z蒸馏酒;以乙醇溶液的n个综合致醉率Z乙醇液为纵坐标,对应n个灌胃剂量为横坐标作图,进行线性回归分析,得到回归直线,求出斜率为K乙醇溶液,同样求出K蒸馏酒;
酒的综合醉度Q=K蒸馏酒/K乙醇溶液。
步骤(1)中所述的乙醇标准溶液优选为不同体积浓度的乙醇标准溶液,以便于在给小鼠灌胃时,控制在无影响灌胃剂量下达到不同的纯酒精剂量的目的;
步骤(2)中所述的蒸馏酒为白酒、白兰地或威士忌;
步骤(2)中所述的小鼠包括清洁(CL)级小鼠和无特定病原体动物(SPF)级小鼠;优选为SPF级小鼠;
步骤(2)中所述的小鼠优选为体重为20±3g的SPF级小鼠;
步骤(2)中所述的n为自然数,n的数值的设置以得到综合致醉率与灌胃剂量之间线性回归R2大于0.9为准;优选为4个;更优选为6~7个;
步骤(2)中所述的灌胃剂量的设置优选如下:最低的灌胃剂量为对小鼠行为反应略有影响的剂量,最高的灌胃剂量为使得小鼠完全失去行为能力的剂量;优选为按纯酒精剂量计算,0.356g纯酒精/100g小鼠体重、0.435g纯酒精/100g小鼠体重、0.514g纯酒精/100g小鼠体重、0.593g纯酒精/100g小鼠体重、0.672g纯酒精/100g小鼠体重、0.751g纯酒精/100g小鼠体重;
步骤(2)中所述的重复的数量优选为3个;
步骤(3)中所述的小鼠血液乙醇浓度优选通过气相色谱法测定,其具体测定步骤优选如下:
(A)血液预处理:在1.5mL离心管中预先加入10μL2mg/ml的肝素钠溶液,采用尾部取血100μL,加入500μL色谱纯乙腈、340μL超纯水和50μL10mg/ml的内标物,1200r/min离心5min,0.23μm有机膜过滤;
(B)气相色谱条件:使用岛津气相色谱GC2014C进行检测,色谱柱为WONDACAPWAX,其规格为30m*0.25mm*0.25μm;进样1μl;升温程序如下:初试柱温48℃,3℃/min升温至55℃,接着30℃/min升温至200℃保留2min;载气类型为氮气;进样模式为分流;压力为100.0KPa;总流量为18.7mL/min;柱流量为1.43mL/min;分流比为10.0;
(C)制备标准曲线:使用乙醇和内标物配制5个不同乙醇浓度的标准溶液,其中,乙醇的浓度分别为200mg/L、400mg/L、800mg/L、1200mg/L、1600mg/L,内标物的浓度固定为500mg/L;按步骤(B)气相色谱条件制作测定血液乙醇的标准曲线,得到乙醇和内标物出现的时间;
(D)血液乙醇浓度测定:将按步骤(A)预处理好的血液样品,按步骤(B)气相色谱条件分析,将得到的数据和步骤(C)比对,得到血液乙醇浓度。
所述的内标物优选为叔丁醇;
步骤(3)中所述的乙醇溶液标准剂量优选为步骤(2)中对照组的非两端值的灌胃剂量,更优选为中间值的灌胃剂量,最优选为0.593g/100g;
所述的检测蒸馏酒醉度的方法用于评价蒸馏酒的品质,特别适合用于在制备蒸馏酒过程的工艺优化中进行应用,得到满足消费者需求的低醉度的蒸馏酒。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:本发明所提供的方法是四个行为参数与血液乙醇浓度参数相结合的综合醉度检测方法,可以科学准确的评价不同类型蒸馏酒的醉度,有助于发现低醉度酒的关键组分,从而有利于指导发酵、蒸馏、陈化与勾兑等工艺的优化,酿造出低醉度蒸馏酒,提高蒸馏酒的健康品质。
附图说明
图1是使用乙醇标准溶液给小鼠灌胃后测得的小鼠血液乙醇浓度的时间曲线图。
图2是小鼠行为参数与小鼠血液乙醇浓度的关系图;其中,图A为站次比和血液乙醇浓度的关系图;图B为滚圈比和血液乙醇浓度的关系图;图C为游距比和血液乙醇浓度的关系图;图D为翻正比和血液乙醇浓度的关系图。
图3是分别将白酒和乙醇标准溶液给小鼠灌胃后得到的综合致醉率Z和灌胃剂量之间的线性回归关系图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种检测蒸馏酒醉度的方法,包括以下步骤:
1、检测试剂的制备:
用色谱纯级无水乙醇和超纯水配制浓度为体积百分比18~70%的乙醇标准溶液,用于在不同剂量对小鼠灌胃时进行选择合适的浓度;选用2种或超过2种的不同品种白酒进行检测;每种白酒选用六个灌胃剂量,按纯酒精剂量换算分别为:0.356g/100g、0.435g/100g、0.514g/100g、0.593g/100g、0.672g/100g、0.751g/100g。
其中,设定乙醇溶液标准剂量,即乙醇标准溶液对小鼠的灌胃剂量按纯酒精剂量换算:0.593g纯酒精/100g小鼠,对小鼠灌胃后得到的测定的值为基准参数。
2、检测反应对象的选定:选用6只特征相近(外观看上去没什么区别)的20g左右的SPF级KM小鼠(购自广州中医药大学实验动物中心)作为一组反应对象,每种评测试剂做至少3组重复试验。
3、蒸馏酒醉度的测定:测定灌酒前及灌酒后30min、120min行为致醉率和血液致醉率。
(1)行为致醉率:
①四个行为参数
站立参数At,一分钟内旷场站立次数,次/分钟;
跑滚筒参数Bt,一分钟内跑滚筒圈数,圈/分钟;通过小鼠滚筒运动测试仪检测;
游泳参数Ct,一分钟内游泳距离,米(M)/分钟;
翻正参数Dt,仰卧翻正需要的时间,秒。
②行为参数比率:
站次比(R1t)=酒后t时间一分钟站立次数At/酒前一分钟站立次数A0。
滚圈比(R2t)=酒后t时间一分钟跑滚筒次数Bt/酒前一分钟跑滚筒次数B0。
游距比(R3t)=酒后t时间一分钟游泳的距离Ct/酒前一分钟游泳距离C0。
翻正比(R4t)=酒后t时间(10-翻正时间Dt)/10。其中10为小鼠酒后某一时间点中的最大翻正时间(秒),10秒以内不能翻正的小鼠,在该时间段后短时间不能翻正,大于10秒翻正按Dt=10计算。另,酒前小鼠翻正时间约为0秒。
其中t是酒后时间,从0到若干小时,小鼠的行为周期为从清醒,到醉酒,再到醒酒或醉死,特征点取在t1和t2(如灌酒后30分钟和120分钟),对应血液乙醇浓度达到70%最大值附近以及达到最大值的时间点;一般而言,小鼠此时的行为反应能力降低,但是仍有少数小鼠保持兴奋状态,活动能力增大,此为异常值,相应检测结果被删除或将R1t、R2t、R3t和R4t的取值为1处理。可以看出,0≤R1t≤1,0≤R2t≤1,0≤R3t≤1,0≤R4t≤1。
③小鼠行为醉酒指数(St):
小鼠行为醉酒指数(St)=1-(a*R1t+b*R2t+c*R3t+d*R4t)
a=站立权重、b=跑滚筒权重、c=游泳权重、d=翻正权重(0≤St≤1,St=1时表示完全失去行为能力,不能站、不能跑、不能游、不能翻正,即R1t、R2t、R3t、R4t均等于零)。
④行为致醉率(Xt):
行为致醉率(Xt)=一定剂量白酒后小鼠行为醉酒指数Stw/乙醇溶液标准剂量后小鼠行为醉酒指数Sts
行为平均致醉率X=(X30+X120)/2
X30、X120表示30分钟和120分钟测到的X值。
(2)血液致醉率
①血液乙醇浓度mg/L,通过气相色谱法测定
A)血液预处理:在1.5mL离心管中预先加入10μL2mg/ml的肝素钠溶液,采用尾部取血100μL,加入500μL色谱纯乙腈、340μL超纯水和50μL内标物(即10mg/ml的叔丁醇,),1200r/min离心5min,0.23μm有机膜过滤。
B)气相色谱条件:使用岛津气相色谱GC2014C进行检测,色谱柱为WONDACAPWAX,其规格为30m*0.25mm*0.25μm;进样1μl;升温程序如下:初试柱温48℃,3℃/min升温至55℃,接着30℃/min升温至200℃保留2min;载气类型为氮气;进样模式为分流;压力为100.0KPa;总流量为18.7mL/min;柱流量为1.43mL/min;分流比为10.0。
C)制备标准曲线
按照乙醇浓度分别为200mg/L、400mg/L、800mg/L、1200mg/L、1600mg/L,内标物(叔丁醇)浓度固定为500mg/L,配制5个不同浓度的标准溶液,按步骤B)气相色谱条件制作测定血液乙醇的标准曲线;其中乙醇出峰时间为3.073min,内标物出峰时间为2.69min。
D)血液乙醇浓度Nt测定:将按步骤A)预处理好的血液样品,按步骤B)气相色谱条件分析,并记录相关数据。
②血液致醉率(Yt)
血液致醉率(Yt)=一定剂量白酒后小鼠血液乙醇浓度(Ntw)/乙醇溶液标准剂量后小鼠血液乙醇浓度(Nts)
血液平均致醉率(Y)=(Y30+Y120)/2
Y30、Y120表示30分钟和120分钟测到的Y值。
(3)综合致醉率:
综合致醉率(Z)=(X+Y)/2
乙醇标准溶液在6个灌胃剂量下就会得到6个综合致醉率Z乙醇溶液,同样白酒在6个灌胃剂量下也会得到6个综合致醉率Z白酒。
(4)白酒醉度检测
将乙醇溶液的6个综合致醉率Z乙醇溶液对灌胃剂量进行线性回归分析,找到直线的斜率K乙醇溶液,同样求出K白酒,则
白酒醉度Q=K白酒/K乙醇溶液。
(5)结果与分析:
将每一组反应对象中的评测单体编号为1、2、3、4、5、6,按纯酒精剂量灌胃:0.356g/100g、0.435g/100g、0.514g/100g、0.593g/100g、0.672g/100g、0.751g/100g,每个测试试剂重复3组试验,其中测定乙醇标准溶液的反应对象小组为对照组,测定白酒的反应对象小组为实验组。
①乙醇标准溶液在不同剂量下反应对象的血液乙醇浓度Nt和小鼠行为醉酒指数St
乙醇标准溶液在不同剂量下分析血液乙醇浓度Nt和站次比R1t、滚圈比R2t、游距比R3t、翻正比R4t的平均值、标准差,得到图1和图2。图1反映了不同灌胃剂量下小白鼠血液乙醇浓度随时间变化的情况,图2的四幅图分别反映了血液乙醇浓度变化引起行为参数随之变化的情况。根据四个回归方程可推导出四个行为参数比率R1-R4和血液乙醇浓度Nt之间的关系:
R1t=-0.00013419Nt+0.8109R2=0.8541
R2t=-0.0002524Nt+1.4727R2=0.852
R3t=-0.0002372Nt+1.3834R2=0.858
R4t=-0.0002536Nt+1.5834R2=0.8641
计算过程如下:
Nt=0.8109/0.00013419-1/0.00013419*R1t
Nt=1.4727/0.0002524-1/0.0002524*R2t
Nt=1.3834/0.0002372-1/0.0002372*R3t
Nt=1.5834/0.0002536-1/0.0002536*R4t
得:
Nt=-4893.6*(0.3807*R1t+0.2024*R2t+0.2154*R3t+0.2015*R4t)+5989
即:
Nt=-4893.6*(0.3807*R1t+0.2024*R2t+0.2154*R3t+0.2015*R4t)+5989
由此可推出四个行为参数比率和血液乙醇浓度之间的回归关系:
Nt=1095.4+4893.6*[1-(0.3807*R1t+0.2024*R2t+0.2154*R3t+0.2015*R4t)]
Nt=1095.4+4893.6*St
其中,小鼠行为醉度指数St=1-(0.3807*R1t+0.2024*R2t+0.2154*R3t+0.2015*R4t)
物理意义:小鼠醉倒没有活动能力时,St=1,血液乙醇浓度为5989mg/L。由此可知,四个行为参数比率的权重:
站立a=38.07%、跑滚筒b=20.24%、游泳c=21.54%、翻正d=20.15%。
②综合致醉率
同样方式测量不同蒸馏酒样品,计算出每个灌胃剂量血液致醉率Y和行为致醉率X,计算综合致醉率Z,求出综合致醉率Z关于灌胃剂量W之间的线性回归方程,得到回归直线的斜率K白酒和K乙醇溶液,如图3所示。
③白酒醉度
三种酒液的综合致醉率Z与灌胃剂量之间线性回归R2均大于0.9,说明综合醉酒系数值与灌胃剂量之间相关性强,且呈正相关关系,斜率K乙醇溶液=1.7121,K九江十二坊40°=1.3815,K某品牌白酒=2.4036。根据醉度计算公式,Q白酒=K白酒/K乙醇溶液,计算得出两种酒的醉度分别为:
Q九江十二坊40°=0.8069,
Q某品牌白酒=1.4039。
由此测定,“九江十二坊40°”为低醉度酒,与同浓度乙醇标准溶液比,可以喝得更多,对酒后醉酒危害和酒精进入血液有缓解保护作用,不容易醉,更健康;另一个样酒(某品牌白酒)则刚相反。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)用色谱纯级无水乙醇和超纯水配制成一种体积浓度或不同体积浓度的乙醇标准溶液;
(2)用乙醇标准溶液和待测蒸馏酒分别给小鼠灌胃;其中,按纯酒精剂量计算,使用n个灌胃剂量的乙醇标准溶液对小鼠灌胃后得到的小鼠形成对照组,使用n个灌胃剂量的待测蒸馏酒对小鼠灌胃后得到的小鼠形成试验组;每个灌胃剂量设置至少2个重复;
(3)对对照组和试验组进行如下参数测定:
①测定灌酒前及灌酒后t时间点的行为参数值;t时间点为两个,定义为t1和t2;
站立参数At,一分钟内旷场站立次数,次/分钟;
跑滚筒参数Bt,一分钟内跑滚筒圈数,圈/分钟;
游泳参数Ct,一分钟内游泳距离,米/分钟;
翻正参数Dt,仰卧翻正需要的时间,秒;
②测定灌酒后t时间点的小鼠血液乙醇浓度,为Nt,单位为mg/L;
(4)对步骤(3)得到的测定数据进行如下处理:
I、站次比R1t=酒后t时间一分钟站立次数At/酒前一分钟站立次数A0;
II、滚圈比R2t=酒后t时间一分钟跑滚筒次数Bt/酒前一分钟跑滚筒次数B0;
III、游距比R3t=酒后t时间一分钟游泳的距离Ct/酒前一分钟游泳距离C0;
IV、翻正比R4t=(T-翻正时间Dt)/T;
其中T为小鼠酒后t时间后可翻正的最长时间,即在T时间内不能翻正的小鼠,在该时间段后5~10分钟内将不能翻正;大于T秒翻正按Dt=T计算;T的单位为秒;
V、小鼠行为醉酒指数St=1-(a*R1t+b*R2t+c*R3t+d*R4t)
其中,a=站立权重,b=跑滚筒权重,c=游泳权重,d=翻正权重,a+b+c+d=1,0≤St≤1;
St=0时,表示喝酒前,小鼠的行为参数正常,正常的站、跑、游、翻正,即R1t=R2t=R3t=R4t=1;
St=1时,表示完全醉,小鼠行为参数异常,失去行为能力,不能站、不能跑、不能游、不能翻正,即R1t=R2t=R3t=R4t=0;
以小鼠血液乙醇浓度Nt为横坐标,站次比R1t、滚圈比R2t、游距比R3t、翻正比R4t分别为纵坐标,作图,进行线性回归分析,得到回归直线和回归方程以及R2;进行计算,得到a、b、c和d的值,从而计算出St值;
VI、酒的行为致醉率Xt
Xt=一定剂量酒后小鼠行为醉酒指数Stw/乙醇溶液标准剂量后小鼠行为醉酒指数Sts;
其中,乙醇溶液标准剂量是步骤(2)的乙醇标准溶液灌胃剂量中选定的一个灌胃剂量;
VII、酒的平均行为致醉率X
X=(Xt1+Xt2)/2;
其中,Xt1、Xt2表示t1时间和t2时间分别得到的X值;
VIII、酒的血液致醉率Yt
Yt=一定剂量酒后小鼠血液乙醇浓度Ntw/乙醇溶液标准剂量后小鼠血液乙醇浓度Nts;
此处的乙醇溶液标准剂量与Xt相同;
IX、酒的平均血液致醉率Y
Y=(Yt1+Yt2)/2;
X、酒的综合致醉率Z
Z=(X+Y)/2;
XI、酒的综合醉度Q
蒸馏酒醉度Q的定义:用蒸馏酒和乙醇标准溶液给小鼠灌胃,达到相同综合致醉率Z时,灌乙醇标准溶液纯酒精剂量/灌蒸馏酒纯酒精剂量的比值,即为蒸馏酒醉度;
乙醇标准溶液在n个灌胃剂量下就会得到n个综合致醉率Z乙醇溶液,同样蒸馏酒试样在n个灌胃剂量下也会得到n个综合致醉率Z蒸馏酒;以乙醇溶液的n个综合致醉率Z乙醇液为纵坐标,对应n个灌胃剂量为横坐标作图,进行线性回归分析,得到回归直线,求出斜率为K乙醇溶液,同样求出K蒸馏酒;
酒的综合醉度Q=K蒸馏酒/K乙醇溶液。
2.根据权利要求1所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的小鼠为CL级小鼠或SPF级小鼠。
3.根据权利要求1所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的n为自然数,n的数值的设置以得到综合致醉率与灌胃剂量之间线性回归R2大于0.9为准。
4.根据权利要求1所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的灌胃剂量的设置如下:最低的灌胃剂量为对小鼠行为反应略有影响的剂量,最高的灌胃剂量为使得小鼠完全失去行为能力的剂量。
5.根据权利要求4所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:对于SPF级小鼠,所述的灌胃剂量的设置如下:按纯酒精剂量计算,0.356g纯酒精/100g小鼠体重、0.435g纯酒精/100g小鼠体重、0.514g纯酒精/100g小鼠体重、0.593g纯酒精/100g小鼠体重、0.672g纯酒精/100g小鼠体重、0.751g纯酒精/100g小鼠体重。
6.根据权利要求1所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的重复的数量为3个。
7.根据权利要求1所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的小鼠血液乙醇浓度通过气相色谱法测定。
8.根据权利要求7所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:所述的气相色谱法测定的测定步骤如下:
(A)血液预处理:在1.5mL离心管中预先加入10μL2mg/ml的肝素钠溶液,采用尾部取血100μL,加入500μL色谱纯乙腈、340μL超纯水和50μL10mg/ml的内标物,1200r/min离心5min,0.23μm有机膜过滤;
(B)气相色谱条件:使用岛津气相色谱GC2014C进行检测,色谱柱为WONDACAPWAX,其规格为30m*0.25mm*0.25μm;进样1μl;升温程序如下:初试柱温48℃,3℃/min升温至55℃,接着30℃/min升温至200℃保留2min;载气类型为氮气;进样模式为分流;压力为100.0KPa;总流量为18.7mL/min;柱流量为1.43mL/min;分流比为10.0;
(C)制备标准曲线:使用乙醇和内标物配制5个不同乙醇浓度的标准溶液,其中,乙醇的浓度分别为200mg/L、400mg/L、800mg/L、1200mg/L、1600mg/L,内标物的浓度固定为500mg/L;按步骤(B)气相色谱条件制作测定血液乙醇的标准曲线,得到乙醇和内标物出现的时间;
(D)血液乙醇浓度测定:将按步骤(A)预处理好的血液样品,按步骤(B)气相色谱条件分析,将得到的数据和步骤(C)比对,得到血液乙醇浓度。
9.根据权利要求1所述的检测蒸馏酒醉度的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的乙醇溶液标准剂量为步骤(2)中对照组的灌胃剂量的中间值。
10.权利要求1~9任一项所述的检测蒸馏酒醉度的方法的应用,其特征在于:所述的检测蒸馏酒醉度在蒸馏酒生产过程的工艺优化中进行应用,或用于评价蒸馏酒的品质。
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