KR20140041362A - 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물 - Google Patents

크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20140041362A
KR20140041362A KR1020130114533A KR20130114533A KR20140041362A KR 20140041362 A KR20140041362 A KR 20140041362A KR 1020130114533 A KR1020130114533 A KR 1020130114533A KR 20130114533 A KR20130114533 A KR 20130114533A KR 20140041362 A KR20140041362 A KR 20140041362A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
chromen
osteoporosis
hydroxy
formula
derivative
Prior art date
Application number
KR1020130114533A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101539978B1 (ko
Inventor
임승길
노경태
김은진
장병하
최지원
Original Assignee
사단법인 분자설계연구소
임승길
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 사단법인 분자설계연구소, 임승길 filed Critical 사단법인 분자설계연구소
Publication of KR20140041362A publication Critical patent/KR20140041362A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101539978B1 publication Critical patent/KR101539978B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/035—Organic compounds containing oxygen as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/306—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on bone mass, e.g. osteoporosis prevention

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용, 골다공증 또는 골절의 예방 또는 치료용 조성물 에 관한 것으로, 본 발명에 따른 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 조성물은 재조합 스클레로스틴, 인간 스클레로스틴 및 인간 DKK-1 활성을 억제하고, 세포 독성이 적으며, 두정 부위의 골형성을 촉진하는 효과가 우수하므로 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증, 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증 등의 골다공증, 골절, 골형성 장애증, 다발성 골수암, 류마티스 관절염, 퇴행성 관절염, 당뇨병성 신장애 등의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물{Chromen-4-one derivative or pharmaceutically acceptable salts thereof and pharmaceutical composition for stimulating bone-forming}
본 발명은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물, 골다공증 또는 골절의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
골다공증은 폐경기 여성뿐만 아니라 장기간 부신피질호르몬 제제 사용자, 염증성 장질환자, 기타 자가 면역성 질환자 등에서도 발병율이 증가하고 있으며, 최근에는 고혈압, 당뇨 등과 같은 기타 대사질환과도 연관성이 발표되고 있다 (Biomedicine & Pharmacotherapy 2004, 58:500-504; Am J Med. 2009 122(7):599-604; Journal of the American College of Nutrition, 2005, 24: 200-209; Acta Medica Medianae 2009, 48: 8-14; Clinical Diabetes, 2002, 20: 153-157; Osteoporos Int, 2003, 14: 843-847; N. Engl J Med 2011, 365: 62-70; Immunological Review 2005, 208: 228-251; Osteoporos Int 2003, 14: 617-630).
기존의 골다공증 약제는 부갑상선 호르몬제(PTH)를 제외하고는 모두 골흡수 억제제이다. PTH 제제는 고가이며 주사제로 사용하여 불편하다. 골다공증 약제 시장을 대부분 차지하고 있는 골흡수 억제제는 극심한 골 소실을 보인 환자에게서는 그 효과가 미미하여 새로운 골형성 촉진제의 필요성이 절실하다.
스클레로스틴(Scleostin)은 골세포(Osteocyte)에서 분비되어 Osteoblast(조골세포) 및 골세포의 LRP4,5,6에 결합하여 골형성을 강력하게 억제하는 물질로 알려져 있다(J Bone Joint Surg Am. 2008 Feb;90 Suppl 1:31-5; J Biol Chem. 2005 May 20;280(20):19883-7.). 스클레로스틴의 가장 큰 매력은 뼈에서만 특이하게 표현되는 물질이란 점이다. 스클레로스틴의 돌연변이(inactivation mutation)가 생긴 Sclerostosis 환자에서 과도한 골형성에 의한 이상 임상 소견 이외에는 타기관의 이상이 나타나지 않았다는 것도 스클레로스틴 이 골다공증 치료제로서 이상적인 표적 물질이 될 수 있는 조건이라고 할 수 있다.
높은 골 질량(bone mass)을 보이는 다양한 사례들의 유전자 검사상 스클레로스틴의 유전자인 SOST 유전자의 돌연변이(mutation)에서 발견되었으며 스클레로스틴 기능의 연구에서 스클레로스틴은 골세포(osteocyte)에서 발현되는 단백질로, 골형성을 촉진하는 Wnt 시그널링(signaling)에서 길항제(antagonist)로 작용하여 골형성을 억제하는 것으로 알려져 있다(J Bone Joint Surg Am. 2008 Feb;90 Suppl 1:31-5; J Biol Chem. 2005 May 20;280(20):19883-7; J Biol Chem. 2003 Jun 27;278(26):24113-7). 동물 실험을 통해서도 스클레로스틴이 과발현된 쥐에서 낮은 골밀도가 관찰되었고, 반대로 스클레로스틴이 발현되지 않은 쥐에서 높은 골밀도가 관찰되었으며 이는 스클레로스틴이 골형성과 밀접한 관련이 있으며 골다공증 치료 표적으로서의 좋은 후보물질이 될 수 있음을 이야기해주고 있다. 또한, 스클레로스틴의 돌연변이(inactivation mutation)가 생긴 Sclerostosis 환자에서 과도한 골형성에 의한 이상 임상 소견 이외에는 타기관의 이상이 나타나지 않았다는 것도 스클레로스틴이 골다공증 치료제로서 이상적인 표적 물질이 될 수 있는 조건이라고 할 수 있다(J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005, 90: 63926395; Genes Dev. 2006, 20: 2492-2506).
또한, 태아 발생(embryogenesis) 과정 중에 세포의 성장 조절 및 분화(differentiation)에 중추적 역할을 하며 조직 항상성 및 복구를 위하여 요구되는 중요한 유전자 또는 단백질이 포함된 Wnt 신호(signaling) 경로를 Dickkopf-1(DKK1)이라는 억제자(inhibitor)가 억제하는 것이 보고되고 있다. 특히, 이러한 Wnt 신호 경로 및 길항제(antagonist)인 DKK1의 발현은 성인의 뼈형성(bone formation), 뼈의 복구(bone repair) 또는 뼈의 질환(bone disease)의 중요한 표적이 되고 있다(Niehrs, C., Oncogene, 25(57):7469-7481, 2006; Pinzone, J.J., et al., Blood, 113(3):517-525, 2009; Gavriatopoulou, M., et al., Expert Opin. Ther. Targets, 13(7)839-848).
최근 암젠 그룹은 스클레로스틴을 효과적으로 막는 단일 항체를 만들어 임상 시험 중이다. 그러나 최근 발표된 단계 I 실험 결과에 따르면 일부 환자이지만 극심한 부작용이 발생하였고, 단일 항체에 대한 항체가 생겼을 뿐만 아니라 비 특이 간염이 발병하였다.
이에, 본 발명자들은 골다공증 치료제로서의 이상적 표적물질을 발굴하기 위하여, 골형성을 강력하게 억제하는 것으로 알려진 스클레로스틴 및 DKK-1의 구조와 기능을 조사하고, 이를 상동성 모델링(homology modeling)에 적용시켜 스클레로스틴이 LRP5/6에 결합하는 부위를 선택적으로 결합하는 화학물질의 구조를 형상화하여, 보유중인 후보 화합물을 고 출력 스크리닝(high output screening)을 통해 효과를 분석하고 SPR을 통해 선택적 결합력을 확인하고자 하였다. 이러한 과정을 통해 가장 선택적이고 효과적인 크로멘-4-온 유도체 화합물을 선택하여 세포주 실험 및 동물 실험을 통해, 상기 크로멘-4-온 유도체 화합물이 재조합 또는 인간 스클레로스틴 및 인간 DKK-1 활성을 억제하고, 세포 독성이 적으며, 두정 부위의 골형성을 촉진하는 효과가 우수하므로 골형성의 촉진, 골다공증 예방 또는 치료 및 골절 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00001
(상기 화학식 1에서,
Figure pat00002
는 단일 또는 이중결합이고;
X는 산소(O) 또는 -CH이고;
Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
나아가,본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 조성물은 재조합 스클레로스틴, 인간 스클레로스틴 및 인간 DKK-1 활성을 억제하고, 세포 독성이 적으며, 두정 부위의 골형성을 촉진하는 효과가 우수하므로 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증, 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증 등의 골다공증, 골절 치유 및 골형성 장애증, 다발성 골수암, 류마티스 관절염, 당뇨병성 신장애 등의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 가상 스크리닝한 결과, 본 발명의 실시예 1의 화합물(C2) 및 다른 화합물들의 스클레로스틴에 의해 저해된 Wnt 활성의 회복 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 화합물이 농도 의존적으로 재조합 스클레로스틴의 활성을 억제하는 것을 나타낸 그래프이다.
도 3의 a)는 인간 스클레로스틴 무처리한 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100% 기준으로, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 Wnt3a 시그널링 경로를 방해하는 인간 스클레로스틴의 활성을 억제하는 결과를 나타낸 그래프이고, b)는 상기 결과를 인간 스클로로스틴에 의해 저해된 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100%로 보정하여 나타낸 그래프이다.
도 4의 a)는 인간 DKK-1을 무처리한 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100% 기준으로, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 Wnt3a 시그널링 경로를 방해하는 인간 DKK-1의 활성을 억제하는 결과를 나타낸 그래프이고, b)는 상기 결과를 인간 DKK-1에 의해 저해된 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100%로 보정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예 1인 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물의 농도 및 시간에 따른 세포 독성 실험결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 실험예에 따른 대조군 및 본 발명의 실시예 1 화합물 실험군의 골 형성 촉진 생체 외 실험 결과에 대한 사진이다.
도 7의 a)는 본 발명의 실험예 6에 따른 본 발명의 실시예 1 화합물의 골 형성 촉진 생체 내 실험 결과에 대한 2주차 쥐의 두정 부위 마이크로 CT 사진이고, 도 7의 b)는 본 발명의 실험예 6에 따른 본 발명의 실시예 1 화합물의 골 형성 촉진 생체 내 실험 결과에 대한 4주차 쥐의 두정 부위 마이크로 CT 사진이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00003
상기 화학식 1에서,
Figure pat00004
는 단일 또는 이중결합이고;
X는 산소(O) 또는 -CH이고;
Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다.
바람직하게는, 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체를 보다 구체적으로 예시하면 다음과 같다:
(1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
(2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
(3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
(4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
(5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
(6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
(7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
(8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
(9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온.
상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체의 바람직한 구조를 하기 표 1에 나타내었다.
실시예 구조
1
Figure pat00005
2
Figure pat00006
3
Figure pat00007
4
Figure pat00008
5
Figure pat00009
6
Figure pat00010
7
Figure pat00011
8
Figure pat00012
9
Figure pat00013
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 다이카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 나이트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 다이하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-다이오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 다이클로로메탄, 아세토나이트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 수화물 등을 모두 포함한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
구체적으로, 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증, 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증 등의 다양한 원인에 의한 골다공증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물일 수 있다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 재조합 스클레로스틴의 억제 효과를 측정한 실험결과, Wnt3a의 활성을 100%로 기준으로, 재조합 스클레로스틴을 Wnt3a와 함께 처리한 경우, Wnt3a의 활성이 약 20% 정도로 나타나, 재조합 스클레로스틴이 Wnt3a의 활성의 약 80%를 저해하였고, 이를 기본 라인(basal line)으로 하여 비교하면, 본 발명의 실시예 1의 화합물이 농도 의존적으로 재조합 스클레로스틴의 활성을 억제하여, 재조합 스클레로스틴에 의해 Wnt3a의 활성이 저해되는 것을 억제하는 것을 알 수 있다(도 2 및 실험예 1 참조).
또한, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 인간 스클레로스틴의 억제 효과를 측정한 실험결과, 인간 스클레로스틴과 Wnt3a를 함께 처리한 경우, 인간 스클레오스틴이 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 저해하므로, 이를 기본 라인(basal line)으로 보았을 때, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 인간 스클로레스틴의 활성을 억제하여, 저해된 Wnt3a 활성을 복구시키므로, 스클레로스틴의 저해제로 작용하였다는 것을 알 수 있다. 특히, 인간 스클로레스틴에 의해 저해된 Wnt3a 활성에 대하여, 실시예 2 화합물은 30 μM의 농도에서 2.5 배, 실시예 3 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.7 배, 실시예 4 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.5 배, 실시예 5 화합물은 30 μM의 농도에서 3.5 배, 실시예 6 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.8 배, 실시예 8 화합물은 30 μM의 농도에서 1.7 배 및 실시예 9 화합물은 3 μM의 농도에서 2.7 배의 Wnt3a 활성을 복구하는 것을 보여, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체가 인간 스클레로스틴의 억제 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다(도 3 및 실험예 2 참조).
나아가, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체의 인간 DKK-1의 억제 효과를 측정한 실험결과, 인간 DKK-1과 Wnt3a를 함께 처리한 경우, 인간 DKK-1이 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 저해하였고, 이를 기본 라인(basal line)으로 보았을 때, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 인간 DKK-1의 활성을 억제하여, 저해된 Wnt3a 활성을 복구시키므로, DKK-1의 저해제로 작용하였다는 것을 알 수 있다. 특히, 인간 DKK-1에 의해 저해된 Wnt3a 활성에 대하여, 실시예 2 화합물은 30 μM의 농도에서 3.8 배, 실시예 3 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.1 배, 실시예 4 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.0 배, 실시예 5 화합물은 30 μM의 농도에서 3.1 배, 실시예 6 화합물은 0.3 μM의 농도에서 1.9 배, 실시예 7 화합물은 3 μM의 농도에서 1.3 배, 실시예 8 화합물은 30 μM의 농도에서 1.7 배 및 실시예 9 화합물은 3μM의 농도에서 1.7 배의 Wnt3a 활성을 복구하는 것을 보여, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체가 인간 DKK-1의 억제 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다(도 4 및 실험예 3 참조).
또한, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체의 세포 독성 확인 실험 결과, 세포 생존력은 24시간(1일) 및 48시간(2일) 내에서는 10 uM 농도 이하에서 80% 이상의 세포 생존력을 보이고, 72시간(3일) 내에서는 10 uM 농도 이하에서 약 60% 이상의 세포 생존력을 보이므로, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 세포 독성이 적은 것을 알 수 있다(도 5 및 실험예 4 참조).
나아가, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체의 두정 부위 골 형성 촉진에 대한 생체 외 실험결과, 골 성장 촉진을 위한 인자인 BMP-2로 처리한 대조군과 유사한 골형성 촉진 효과가 있음을 알 수 있다(도 6 및 실험예 5 참조).
또한, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체의 두정 부위 골 형성 촉진에 대한 생체 내 실험결과, 두정 부위 골형성 효과가 2주차에는 대조군과 비교하여 큰 차이를 관찰할 수 없으나, 3.5 mm 직경인 원내에 있는 뼈의 부피(파란색)가 4주차에서 골형성이 크게 증가된다. 구체적으로, 3.5 mm 직경인 원내에 있는 뼈의 부피(파란색)을 측정해 본 결과, 2 주차에서 왼쪽의 대조군 0.002 mm3 및 오른쪽의 실험군 0.005 mm3의 뼈 부피가 관측되었고, 4 주차에서 왼쪽의 대조군은 0.005 mm3 및 오른쪽의 실험군은 0.042 mm3로 약 8배의 차이를 보여, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 골 형성 촉진 효과가 우수한 것을 알 수 있다(도 7, 도 8 및 실험예 6 참조).
따라서, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 재조합 스클로로스틴, 인간 스클레로스틴 및 인간 DKK-1의 발현 또는 활성을 억제하고, 세포 독성이 적으며, 두정 부위의 골형성 촉진 효과가 우수하므로 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증, 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증 등의 다양한 원인에 의한 골다공증, 골절, 골형성 장애증, 다발성 골수암, 류마티스 관절염, 당뇨병성 신장애 등의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 Kg인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1 - 1000 mg/일이며, 바람직하게는 1 - 500 mg/일이며, 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 골형성 촉진 또는 골다공증 및 골절의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
구체적으로, 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물은 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증, 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증 등의 다양한 원인에 의한 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 재조합 스클레로스틴, 인간 스클레로스틴 및 인간 DKK-1의 발현 또는 활성을 억제하고(실험예 1 내지 3 참조), 세포 독성이 적으며(실험예 4), 두정 부위의 골형성 촉진 효과(실험예 5 및 6 참조)가 우수하므로 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증, 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증 등의 다양한 원인에 의한 골다공증, 골절, 골형성 장애증, 다발성 골수암, 류마티스 관절염, 당뇨병성 신장애 등의 예방 또는 개선 목적으로 상기 크로멘-4-온 유도체를 식품, 음료 등의 건강보조식품에 첨가할 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 크로멘-4-온 유도체는 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 크로멘-4-온 유도체는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체는 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 닥나무로부터 분리된 크로멘-4-온 유도체 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1 내지 9> 본 발명의 크로멘 -4-온 유도체 화합물
하기 표 2에 나타낸 실시예 1 내지 실시예 9의 화합물은 데이터베이스를 기반으로 가상 스크리닝하여, Wnt3a 활성을 저해하는 스클레로스틴을 억제하는 효과가 있는 것을 확인한 후, InterBioScreen Ltd(Moscow, Russia)에서 구입하였다.
실시예 화합물명
1 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올
2 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온
3 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온
4 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온
5 -하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온
6 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온
7 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올
8 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온
9 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온
< 실험예 1> 실시예 1 화합물의 재조합 스클레로스틴 억제 효과 검증
본 발명의 실시예 1 화합물이 Wnt 시그널링 경로(Wnt signaling pathway)를 방해하는 인자인 재조합 스클레로스틴(recombinant scleostin)의 작용을 억제하는 효과를 확인하기 위하여, 루시퍼라제(luciferase) 활성을 이용한 분석을 수행하였다.
구체적으로, 실험 하루 전 소태아혈청(Fetal Bovine Serum: Welgene, Korea)을 함유하는 알파(Alpha)-MEM(Minimum Essencial Medium: Welgene, Korea) 배지에서 MC3TOP(MC3T3E1 for subclone4-superTOPflash8X) 안정한 세포 라인 세포주(골아세포 MC3T3E1 cell(ATCC, USA)에서 제조한 안정한 세포 라인)를 8.0 x 104 cell/mL의 농도로 접종한 후 24 웰 플레이트에서 37℃의 5% CO2 농도의 배양기로 배양하였다. 24시간이 지나 배양 접시 바닥에 가득 자란 MC3TOP에 Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM, ATCC(American Type Culture Collection, secreated protein)서 구입)만을 처리한 것, 재조합 스클레로스틴을 처리한 후, Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM)을 처리한 것, 실시예 1의 화합물을 0.5 μg, 1.0 μg, 및 1.5 μg의 농도별로 처리하고, 재조합 스클레로스틴을 처리한 후, Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM)을 처리한 것을 24시간 동안 37℃ 및 5% CO2 농도로 배양기에서 배양하였다. 24시간 후, 배양액을 걷어내고 PBS(Phosphate buffered Saline)로 세척한 후, 세포를 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시킨 다음, -20℃에서 3시간 동안 배양하여, 라이시스 용액에 녹은 단백질을 얻었다. 얻어진 시료로 루시퍼라제 활성을 측정하고 단백질 정량하여(protein A280, UV/VIS Nano Spectrophotometer, (주)대명사이언스), 그 결과를 도 2에 그래프로 나타내었다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 화합물이 농도 의존적으로 재조합 스클레로스틴의 활성을 억제하는 것을 나타낸 그래프이다.
도 2에 나타난 바와 같이, Wnt3a의 활성을 100%로 비교하면, 재조합 스클레로스틴을 Wnt3a와 함께 처리하면, Wnt3a의 활성이 약 20% 정도로 나타나, 재조합 스클레로스틴이 Wnt3a의 활성의 약 80%를 저해하였고, 이를 기본 라인(basal line)으로 비교하면, 본 발명의 실시예 1 화합물이 농도 의존적으로 재조합 스클레로스틴의 활성을 억제하여, 재조합 스클레로스틴에 의해 Wnt3a의 활성이 저해되는 것을 억제하는 것을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 실시예 1 화합물은 재조합 스클레로스틴 활성의 억제제로 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 2> 크로멘-4-온 유도체의 인간 스클레로스틴 활성 억제 효과 검증
본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 Wnt 시그널링 경로(Wnt signaling pathway)를 방해하는 인자인 인간 스클레로스틴(recombinant scleostin)의 작용을 억제하는 효과를 확인하기 위하여, 루시퍼라제(luciferase) 활성을 이용한 분석을 수행하였다.
구체적으로, 실험 하루 전 소태아혈청(Fetal Bovine Serum: Welgene, Korea)을 함유하는 알파(Alpha)-MEM(Minimum Essencial Medium: Welgene, Korea) 배지에서 MC3TOP(MC3T3E1 for subclone4-superTOPflash8X) 안정한 세포 라인 세포주(전조골세포(preosteoblast cell)인 MC3T3E1 cell(ATCC, USA)에서 제조한 안정한 세포 라인)를 4.0 x 104 cell/mL의 농도로 접종한 후 24 웰 플레이트에서 37℃의 5% CO2 농도의 배양기로 배양하였다. 24시간이 지나 배양 접시 바닥에 가득 자란 MC3TOP에 Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM, ATCC(American Type Culture Collection, secreated protein)서 구입)만을 처리한 것, 인간 스클레로스틴을 처리한 후, Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM)을 처리한 것, 상기 실시예 1 내지 9의 화합물을 0.3 μM, 3.0 μM 및 30 μM의 농도별로 처리하고, 인간 스클레로스틴을 처리한 후, Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM)을 처리한 것을 24시간 동안 37℃ 및 5% CO2 농도로 배양기에서 배양하였다. 24시간 후, 배양액을 걷어내고 PBS(Phosphate buffered Saline)로 세척한 후, 세포를 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시킨 다음, -20℃에서 3시간 동안 배양하여, 라이시스 용액에 녹은 단백질을 얻었다. 얻어진 시료로 루시퍼라제 활성을 측정하고 단백질 정량하여(protein A280, UV/VIS Nano Spectrophotometer, (주)대명사이언스), 그 결과를 도 3에 그래프로 나타내었다.
도 3의 a)는 인간 스클레로스틴 무처리한 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100% 기준으로, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 Wnt3a 시그널링 경로를 방해하는 인간 스클레로스틴의 활성을 억제하는 결과를 나타낸 그래프이고, b)는 상기 결과를 인간 스클로로스틴에 의해 저해된 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100%로 보정하여 나타낸 그래프이다.
도 3의 a) 및 b)에 나타난 바와 같이, 인간 스클레로스틴과 Wnt3a를 함께 처리한 경우, 인간 스클레오스틴이 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 저해하였고, 이를 기본 라인(basal line)으로 보았을 때, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 인간 스클로레스틴의 활성을 억제하여, 저해된 Wnt3a 활성을 복구시키므로, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 스클레로스틴의 저해제로 작용하였다는 것을 알 수 있다. 특히, 인간 스클로레스틴에 의해 저해된 Wnt3a 활성에 대하여, 실시예 2 화합물은 30 μM의 농도에서 2.5 배, 실시예 3 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.7 배, 실시예 4 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.5 배, 실시예 5 화합물은 30 μM의 농도에서 3.5 배, 실시예 6 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.8 배, 실시예 8 화합물은 30 μM의 농도에서 1.7 배 및 실시예 9 화합물은 3 μM의 농도에서 2.7 배의 Wnt3a 활성을 복구하는 것을 보여, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 인간 스클레로스틴의 억제 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체는 인간 스클레로스틴의 활성 억제제로 유용할 수 있다.
< 실험예 3> 크로멘-4-온 유도체의 딕코프 -1( DKK -1)의 활성 억제 효과 검증
본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 Wnt 시그널링 경로(Wnt signaling pathway)를 방해하는 인자인 딕코프-1(DKK-1, Dickkopf-1)의 활성을 억제하는 효과를 확인하기 위하여, 루시퍼라제(luciferase) 활성을 이용한 분석을 수행하였다.
구체적으로, 실험 하루 전 소태아혈청(Fetal Bovine Serum: Welgene, Korea)을 함유하는 알파(Alpha)-MEM(Minimum Essencial Medium: Welgene, Korea) 배지에서 MC3TOP(MC3T3E1 for subclone4-superTOPflash8X) 안정한 세포 라인 세포주(전조골세포(preosteoblast cell)인 MC3T3E1 cell(ATCC, USA)에서 제조한 안정한 세포 라인)를 4.0 x 104 cell/mL의 농도로 접종한 후 24 웰 플레이트에서 37℃의 5% CO2 농도의 배양기로 배양하였다. 24시간이 지나 배양 접시 바닥에 가득 자란 MC3TOP에 Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM, ATCC(American Type Culture Collection, secreated protein)서 구입)만을 처리한 것, 인간 DKK-1을 처리한 후, Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM)을 처리한 것, 상기 실시예 1 내지 9의 화합물을 0.3 μM, 3.0 μM 및 30 μM의 농도별로 처리하고, 인간 DKK-1을 처리한 후, Wnt3a을 조정된 배양액(conditioned media, CM)을 처리한 것을 24시간 동안 37℃ 및 5% CO2 농도로 배양기에서 배양하였다. 24시간 후, 배양액을 걷어내고 PBS(Phosphate buffered Saline)로 세척한 후, 세포를 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시킨 다음, -20℃에서 3시간 동안 배양하여, 라이시스 용액에 녹은 단백질을 얻었다. 얻어진 시료로 루시퍼라제 활성을 측정하고 단백질 정량하여(protein A280, UV/VIS Nano Spectrophotometer, (주)대명사이언스), 그 결과를 도 4에 그래프로 나타내었다.
도 4의 a)는 인간 DKK-1을 무처리한 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100% 기준으로, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 Wnt3a 시그널링 경로를 방해하는 인간 DKK-1의 활성을 억제하는 결과를 나타낸 그래프이고, b)는 상기 결과를 인간 DKK-1에 의해 저해된 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 100%로 보정하여 나타낸 그래프이다.
도 4의 a) 및 b)에 나타난 바와 같이, 인간 DKK-1과 Wnt3a를 함께 처리한 경우, 인간 DKK-1이 Wnt3a 시그널링 경로의 활성을 저해하였고, 이를 기본 라인(basal line)으로 보았을 때, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 농도에 따라 인간 DKK-1의 활성을 억제하여, 저해된 Wnt3a 활성을 복구시키므로, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 DKK-1의 저해제로 작용하였다는 것을 알 수 있다. 특히, 인간 DKK-1에 의해 저해된 Wnt3a 활성에 대하여, 실시예 2 화합물은 30 μM의 농도에서 3.8 배, 실시예 3 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.1 배, 실시예 4 화합물은 0.3 μM의 농도에서 2.0 배, 실시예 5 화합물은 30 μM의 농도에서 3.1 배, 실시예 6 화합물은 0.3 μM의 농도에서 1.9 배, 실시예 7 화합물은 3 μM의 농도에서 1.3 배, 실시예 8 화합물은 30 μM의 농도에서 1.7 배 및 실시예 9 화합물은 3μM의 농도에서 1.7 배의 Wnt3a 활성을 복구하는 것을 보여, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체가 인간 DKK-1의 억제 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 크로멘-4-온 유도체는 인간 DKK-1의 발현 또는 활성 억제제로 유용할 수 있다.
< 실험예 4> 세포 독성 확인
본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물의 새포 독성을 확인하기 위하여 MTT 분석을 수행하였다.
구체적으로, 전조골세포(preosteoblast cell)인 MC3T3E1(ATCC)에 실시예 1 화합물을 3.5 μM, 10 μM 및 35 μM로 처리한 후, MTT로 세포 생존력(cell viablility)을 24 시간(1일), 48 시간(2일) 및 72 시간(3일) 간격으로 확인하여, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5는 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물의 농도 및 시간에 따른 세포 독성을 나타낸 그래프이다.
도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물에 의한 세포 생존력은 24시간(1일) 및 48시간(2일) 내에서는 10 uM 농도 이하에서 80% 이상의 세포 생존력을 보이고, 72시간(3일) 내에서는 10 uM 농도 이하에서 약 60% 이상의 세포 생존력을 보인다.
따라서, 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물은 세포 독성이 적은 것을 알 수 있다.
< 실험예 5> 두정 부위 골 형성 촉진에 대한 생체 외 실험
두정 부위 조직 배양(Calvarial Organ Culture)에서 골형성 촉진을 확인하기 위하여 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물을 사용하여 생체외(ex-vivo) 실험을 하였다.
구체적으로, 4일령 쥐의 두정엽 조직을 절개해 알파-MEM 배양액(Minimum Essential Media alpha modification with L-glutamine, with deoxyribonucleosides, with ribonucleosides, Welgene)에 아스코르브 산(Ascorbic acid) 및 베타 글리코포스페이트(Beta glycophosphate)를 첨가한 배지에 추가적으로 아무것도 첨가하지 않은 것을 음성 대조군, 골 성장 촉진을 위한 인자인 BMP-2(Bone-Morphogenic Protein-2, Peprotech)를 40 ng 처리한 것을 양성 대조군 1, BMP-2를 100 ng을 처리한 것을 양성 대조군 2, 본 발명의 실시예 1 화합물을 2 uM 처리한 것을 실험군 1 및 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물을 20 uM 농도로 처리한 것을 실험군 2로 구별하여, 이들 대조군들 및 실험군들을 각각 배양하여 37℃ 및 5% CO2 농도에서 배양하여 7일째 골형성을 확인하였고, 도 6에 이를 나타내었다.
도 6은 본 발명의 실험예 5에 따른 대조군 및 본 발명의 실시예 1 화합물 실험군의 골 형성 촉진 생체 외 실험 결과에 대한 사진이다.
도 6에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물은 골 성장 촉진을 위한 인자인 BMP-2 처리한 결과와 유사한 골형성 촉진 효과가 있음을 알 수 있다.
< 실험예 6> 두정 부위 골 형성 촉진에 대한 생체 내 실험
두정 부위 조직 배양(Calvarial Organ Culture)에서 골형성 촉진을 확인하기 위하여 본 발명의 실시예 1의 6,7-디메톡시-3-(4-메톡시-페닐)-나프탈렌-1-올 화합물을 사용하여 생체 내(ex-vitro) 실험을 하였다.
구체적으로, 쥐의 두정 부위에 왼쪽과 오른쪽에 각각 구멍을 뚫어 본 발명의 실시예 1의 화합물 225.6 mmol의 10 μl를 30% 플루로닉(pluronic) F-127 겔 50 μl에 섞어 10 μl를 상처(wound)에 주입하여 뼈의 성장을 관찰하였다. 대조군에는 DMSO 2 μl를 흡수시킨 동일한 양의 30% 플루로닉 F-127 겔에 섞어 10 μl를 상처에 주입하였다. 2주차와 4주차에 실험용 쥐를 희생시키고 두개골(calvaria)부분을 꺼내 4% 파라 포름알데히드 용액에 담가 고정시킨 후, 마이크로(micro)CT( SkyScan1076, SkyScan)로 확인하였고, 그 결과를 도 7 및 도 8에 나타내었다.
도 7의 a)는 본 발명의 실시예 1 화합물의 골 형성 촉진 생체 내 실험 2주차 결과에 대한 쥐의 두정 부위 마이크로 CT 사진이고, 도 7의 b)는 본 발명의 실시예 1 화합물의 골 형성 촉진 생체 내 실험 4주차 결과에 대한 쥐의 두정 부위 마이크로 CT 사진이다.
도 8의 a)는 본 발명의 실시예 1 화합물의 골 형성 촉진 생체 내 실험 2 주차에 대조군 및 실험군의 3.5 mm 직경의 원 내에 있는 뼈의 부피(파란색)를 나타낸 마이크로 CT 사진이고, 도 7의 b)는 본 발명의 실시예 1 화합물의 골 형성 촉진 생체 내 실험 4 주차에 대조군 및 실험군의 3.5 mm 직경의 원 내에 있는 뼈의 부피(파란색)를 나타낸 마이크로 CT 사진이다.
도 7 및 도 8에 나타난 바와 같이, 쥐를 이용한 두정 부위 골형성 효과를 마이크로 CT로 확인한 결과, 본 발명의 실시예 1의 화합물에 의한 두정 부위 골형성 효과가 2주차에는 대조군과 비교하여 큰 차이를 관찰할 수 없으나, 3.5 mm 직경인 원내에 있는 뼈의 부피(파란색)가 4주차에서 골형성이 크게 증가된 것을 알 수 있다.
구체적으로, 3.5 mm 직경인 원내에 있는 뼈의 부피(파란색)을 측정해 본 결과, 2 주차에서 왼쪽의 대조군 0.002 mm3 및 오른쪽의 실험군 0.005 mm3 의 뼈 부피가 관측되었고, 4 주차에서 왼쪽의 대조군은 0.005 mm3 및 오른쪽의 실험군은 0.042 mm3 로 약 8배의 차이를 보인다.
따라서, 본 발명의 화합물은 골 형성 촉진 효과가 우수한 것을 알 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체는 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 2로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
< 제제예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 500 ㎎
유당 100 ㎎
탈크 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 500 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
<1-3> 캅셀제의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 500 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
<1-4> 주사제의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 500 ㎎
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
<1-5> 액제의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 100 ㎎
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액체를 제조한다.
< 제제예 2> 건강기능식품의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 1000 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎎
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
< 제제예 3> 건강 음료의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85도에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l도 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
< 제제예 4> 기타 건강기능식품의 제조
<4-1> 음료의 제조
꿀 522 ㎎
치옥토산아미드 5 ㎎
니코틴산아미드 10 ㎎
염산리보플라빈나트륨 3 ㎎
염산피리독신 2 ㎎
이노시톨 30 ㎎
오르트산 50 ㎎
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 0.48-1.28 ㎎
물 200 ㎖
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
<4-2> 츄잉껌의 제조
껌베이스 20 %
설탕 76.36-76.76 %
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 0.24-0.64 %
후르츠향 1 %
물 2 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
<4-3> 캔디의 제조
설탕 50-60 %
물엿 39.26-49.66 %
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 0.24-0.64 %
오렌지향 0.1 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
<4-4> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
<4-5> 유제품( dairy products )의 제조
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<4-5> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화 시켜서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 검은콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 상기에서 제조한 곡물류 및 종실류와 본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체를 다음과 같은 비율로 배합하여 제조하였다.
현미 30 %
율무 15 %
보리 20 %
들깨 7 %
검정콩 7 %
검은깨 7 %
본 발명의 화학식 1로 표시되는 유도체 3 %
영지 0.5 %
지황 0.5 %

Claims (16)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00014

    (상기 화학식 1에서,
    Figure pat00015
    는 단일 또는 이중결합이고;
    X는 산소(O) 또는 -CH이고;
    Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
    R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 유도체는,
    (1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
    (2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
    (4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
    (5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
    (8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
    (9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물.
  3. 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00016

    (상기 화학식 1에서,
    Figure pat00017
    는 단일 또는 이중결합이고;
    X는 산소(O) 또는 -CH이고;
    Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
    R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
  4. 제3항에 있어서,
    상기 화학식 1의 유도체는,
    (1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
    (2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
    (4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
    (5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
    (8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
    (9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00018

    (상기 화학식 1에서,
    Figure pat00019
    는 단일 또는 이중결합이고;
    X는 산소(O) 또는 -CH이고;
    Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
    R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
  6. 제5항에 있어서,
    상기 화학식 1의 유도체는,
    (1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
    (2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
    (4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
    (5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
    (8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
    (9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 스클레로스틴(sclerostin) 또는 DKK-1의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증 및 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 골다공증; 골절, 골형성 장애증, 다발성 골수암, 류마티스 관절염, 퇴행성 관절염 또는 당뇨병성 신장애의 예방 또는 치료용인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 건강기능식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00020

    (상기 화학식 1에서,
    Figure pat00021
    는 단일 또는 이중결합이고;
    X는 산소(O) 또는 -CH이고;
    Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
    R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
  10. 제9항에 있어서,
    상기 화학식 1의 유도체는,
    (1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
    (2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
    (4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
    (5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
    (8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
    (9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 건강기능식품 조성물.
  11. 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00022

    (상기 화학식 1에서,
    Figure pat00023
    는 단일 또는 이중결합이고;
    X는 산소(O) 또는 -CH이고;
    Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
    R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
  12. 제11항에 있어서,
    상기 화학식 1의 유도체는,
    (1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
    (2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
    (4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
    (5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
    (8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
    (9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  13. 하기 화학식 1로 표시되는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00024

    (상기 화학식 1에서,
    Figure pat00025
    는 단일 또는 이중결합이고;
    X는 산소(O) 또는 -CH이고;
    Y는 산소(O) 또는 -OH이고;
    R1, R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소, 하이드록시, 브롬 및 직쇄 또는 측쇄의 C1 -C4알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종이거나, 또는 상기 R1 및 R2는 이들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 2개의 산소원자를 포함하는 5 원자 헤테로 고리를 형성한다).
  14. 제13항에 있어서,
    상기 화학식 1의 유도체는,
    (1) 6,7-다이메톡시-3-(4-메톡시페닐)나프탈렌-1-올;
    (2) 2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (3) 2-(3-브로모페닐)-6-메톡시-4H-크로멘-4-온;
    (4) 2-(2H-1,3-벤조다이옥솔-5-일)-4H-크로멘-4-온;
    (5) 6-하이드록시-2-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (6) 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온;
    (7) 3-(3,4-다이메톡시페닐)-6,7-다이메톡시나프탈렌-1-올;
    (8) 6-브로모-2-(3,4-다이메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온; 및
    (9) 2-(3,4-다이하이드록시페닐)-5,7-다이하이드록시-4H-크로멘-4-온;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골절 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  15. 제9항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 건강기능식품 조성물은 스클레로스틴(sclerostin) 또는 DKK-1의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 건강기능식품 조성물은 여성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 남성 호르몬 결핍에 따른 골다공증, 노화성 골다공증, 거동 장애에 의해 유발된 골다공증, 스테로이드 과용에 따라 발생하는 골다공증, 만성 염증에 의해 유도된 골다공증 및 제1형 또는 제2형 당뇨에 의해 유발된 골다공증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 골다공증; 골절, 골형성 장애증, 다발성 골수암, 류마티스 관절염, 퇴행성 관절염, 또는 당뇨병성 신장애의 예방 또는 개선용인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
KR1020130114533A 2012-09-27 2013-09-26 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물 KR101539978B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20120107800 2012-09-27
KR1020120107800 2012-09-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140041362A true KR20140041362A (ko) 2014-04-04
KR101539978B1 KR101539978B1 (ko) 2015-07-30

Family

ID=50651188

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020130114533A KR101539978B1 (ko) 2012-09-27 2013-09-26 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101539978B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220140918A (ko) * 2021-04-09 2022-10-19 대구가톨릭대학교산학협력단 닥나무 추출물 또는 이로부터 분리한 프레닐화 화합물을 포함하는 파골세포 분화 억제용 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0629185B2 (ja) * 1986-12-22 1994-04-20 キツセイ薬品工業株式会社 骨粗鬆症治療剤
CN101591321B (zh) * 2009-06-25 2011-08-17 昆明制药集团股份有限公司 5，6，7，4′-四羟基黄酮的制备方法
CN102283828B (zh) * 2010-06-17 2013-05-15 北京盛诺基医药科技有限公司 四羟基苯并吡喃酮类化合物的用途
KR101251783B1 (ko) * 2011-01-10 2013-04-08 강원대학교산학협력단 Ｂ-환 치환된 플라보노이드 유도체를 함유한 관절염 치료제

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220140918A (ko) * 2021-04-09 2022-10-19 대구가톨릭대학교산학협력단 닥나무 추출물 또는 이로부터 분리한 프레닐화 화합물을 포함하는 파골세포 분화 억제용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR101539978B1 (ko) 2015-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20080008773A1 (en) Food beverage or feed for the promotion of osteogenesis comprising umbelliferae, liliaceae or compositae plant species
JP2006256968A (ja) 骨代謝改善剤とその製造方法
KR101308144B1 (ko) 아젤라신 ｄ를 유효성분으로 함유하는 골질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102465894B1 (ko) 살비아놀산을 유효성분으로 함유하는 골질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102075836B1 (ko) 마키베리 추출물, 당귀 추출물 및 시계꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물
KR101067028B1 (ko) 산나물 추출물을 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물
KR20170069413A (ko) 발아 흑미 추출물을 유효성분으로 하는 비만 또는 골대사 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR20160057525A (ko) 우슬 추출물 및 인삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 및 치료용 조성물
KR101539978B1 (ko) 크로멘-4-온 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골형성 촉진용 약학적 조성물
KR20190017704A (ko) 자바강황 추출물 또는 이로부터 분리된 잔소리졸을 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물
KR20220152006A (ko) 귀리 추출물을 포함하는 골질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR101579820B1 (ko) 퀘시아 운둘라타의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 암 또는 암 전이 억제용 약학적 조성물
KR102230955B1 (ko) 당근잎을 유효성분으로 포함하는 뼈 성장 촉진용 조성물
KR102063962B1 (ko) 캄펜을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP5156298B2 (ja) 筋肉細胞糖輸送促進作用組成物
KR101826109B1 (ko) 고시페틴을 함유하는 골다공증 개선용 식품 조성물 및 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR102312737B1 (ko) 동과씨 추출물을 유효성분으로 함유하는 뼈 건강 개선용 조성물
KR20190118961A (ko) 구꼬아민 a 및 구꼬아민 b를 유효성분으로 함유하는 골격근 위축 예방 또는 개선용 조성물
KR102557984B1 (ko) 솔라닌을 유효성분으로 포함하는 골대사 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102541649B1 (ko) 엉겅퀴, 우슬, 칡, 아로니아, 석류, 하수오 및 생강을 포함하는 여성 갱년기 증상의 예방, 치료 또는 개선용 조성물
KR102312736B1 (ko) 동과 추출물을 유효성분으로 함유하는 뼈 건강 개선용 조성물
KR101401002B1 (ko) Ｈｓ1792 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 골량 저하 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품
KR102139994B1 (ko) 스티그마스테롤을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102612089B1 (ko) 생강나무 잎 추출물의 유효성분을 포함하는 골다공증 예방 및 치료용 조성물
KR100518686B1 (ko) 성장호르몬 분비촉진용 생약추출물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
N231 Notification of change of applicant
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180724

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190604

Year of fee payment: 5