KR20140010495A - 담자 및 자낭균류를 포함하는 버섯류의 육종방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯을 함께 재배사에 입상한 후 자연교배하는 것인 버섯의 육종 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기의 자연교배로 자실체가 생산되는 것인 버섯의 육종 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 상기 자연교배시 온도 10 ~ 30℃, 상대습도 85 ~ 95%, 조도량 150 ~ 300lux인 재배사에서 자연교배를 수행하는 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

Description

담자 및 자낭균류를 포함하는 버섯류의 육종방법{Mushroom breeding method includes Basidiomycota and Ascomycota}

본 발명은 담자 및 자낭균류를 포함하는 버섯류의 육종방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯을 자연교배하여 다양한 신품종을 개발할 수 있는 버섯의 육종방법에 관한 것이다.

상온에서 자생되어 오던 버섯은 항 바이러스효과, 혈중 콜레스테롤의 함량 저하 효과가 있다고 발표가 되었으며, 기타, 아미노산, 비타민, 단백질, 무기염류, 효소, 다당류등 인체에 중요한 영양소가 다량 함유되어 있을 뿐 아니라 혈액의 콜레스테롤을 감소시키는 에리타데닌 이라는 성분이 함유되어 항암작용을 한다는 사실이 최근 발표되었다. 이에 버섯은 식용 및 약용으로 사용이 증가하고 있으며, 다양한 버섯이 요구되고 있다.

이에 따라 버섯의 육종, 즉 종균개발이 활발하게 연구되고 있다. 버섯의 육종은 우수한 야생버섯의 자실체로부터 조직 분리하여 재배하는 방법, 재배과정에서 발생하는 우량한 자실체를 조직 분리하여 선발에 의한 품종개량, 교배에 의한 품종개량 등이 이용되고 있다. 이 중에서 인위적인 교배에 의한 품종개량이 주로 품종육성에 사용되고 있다. 이러한 이유는 모균주의 특정한유전적인 특징, 즉 생산성, 버섯형질, 온도특성, 발생형태 등을 이미 알고 있는 상태에서 이루어지고 있기 때문이다.

예를 들면, 일본공개특허 제2011-109941호는 새송이 버섯으로부터 새로운 품종을 육종하고, 이것을 종균에 이용하여 새로운 버섯을 발생시켜 재배하는 방법에 관한 것으로, 많은 포자 분리 방법 또는 조직 분리 방법에 의하여 새로운 품종의 종균을 얻을 수 있다. 그러나, 포자 분리 방법 또는 조직 분리 방법으로 새로운 품종의 종균을 얻는 것은 그 공정이 복잡하여 생산성의 미미하고, 우수 품종 보급에 시간과 비용이 과다한 제약이 따르는 단점이 있다.

일본공개특허 제2011-109941호 (2011.06.09)

상기의 문제점을 해결하기 위한 본 발명은, 단핵 종균과 2핵균사체 형태의 버섯을 자연교배하여 다양한 신품종을 개발할 수 있는 버섯을 육종 방법을 제공하는데 그 목적이 있다. 더욱 구체적으로 단핵 종균과 2핵균사체 형태의 버섯으로 자연교배함에 따라 다양한 신품종을 한 번의 공정으로 여러가지를 개발할 수 있고, 공정이 단순하며, 이에 따라 비용이 절감되는 효과가 있는 버섯의 육종 방법을 제공하는데 그 목적이 있다. 또한 우수한 품종을 짧은 시간에 대량으로 생산할 수 있는 가능성이 있고, 이에 우수한 품종 보급에 따른 전국 버섯재배 농가의 소득을 증가 시킬 수 있는 육종 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯을 함께 재배사에 입상한 후 자연교배하여 다양한 신품종을 개발할 수 있는 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기 자연교배로 자실체가 생산되는 것인 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기 자연교배시 온도 10 ~ 30℃, 상대습도 85 ~ 95%, 조도량 150 ~ 300lux인 재배사에서 자연교배를 수행하는 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기 단핵종균은 하기 a)단계 내지 c)단계를 포함하는 공정을 통해 얻어지는 것인 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

a) 활용하고자 하는 모본의 포자를 발아하여 단핵 균사체를 분리하고 암 배양하는 단계;

b)상기 a)단계에서 배양된 단핵 균사체를 액체배양배지에서 단핵 종균으로 암 배양하는 단계;

c) 상기 b)단계에서 수득된 단핵 종균을 재배용 배지에 접종하여 배양하는 단계.

또한 본 발명은 상기 a)단계 또는 b)단계의 암 배양은 20 ~ 30 ℃에서 1 ~ 15일 동안 하는 수행하고, 상기 c)단계의 배양은 20 ~ 30 ℃에서 15 ~ 30일 배양하는 것인 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명에서 상기 버섯은 느타리, 표고, 꽃송이, 목이, 노루궁뎅이, 새송이, 팽이, 망태버섯, 아위, 영지, 상황, 동충하초 등 에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 버섯을 포함하는 것인 버섯의 육종 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기의 버섯 육종 방법에 따라, 다양한 신품종을 한 번의 공정으로 육종 할 수 있으며, 이에 따라 시간과 비용이 절감되는 효과가 있다. 또한 우수한 신품종을 선택적으로 대량생산 할 수 있으며, 이에 우수한 품종 보급에 따른 전국 버섯재배 농가의 소득을 증가 시킬 수 있는 효과가 있다.

이하 각 구성에 대하여 자세하게 설명한다.

버섯은 분류학적으로 대부분 자낭균류와 담자균류에 속하는 것으로, 자낭균류는 약 3,200여속, 32,000여종 가량의 균군이 있으며, 균사체가 발달하여 유성생식에 의해 자낭을 만들고 자낭포자를 형성할 수 있다. 상기 담자균류는 핵의 융합과 감수분열이 이루어지는 기관으로서 담자기(Basidium)를 형성하며 그 선단에 담자포자(Basidiospore)를 외생하는 균류로서 이는 1,400여속 22,000종이 알려져 있다. 상기 자냥균류의 예로는 동충하초속, 투구버섯속, 주발섯속, 곰보버섯속 등이 있으며, 상기 담자균류 예로는 흰목이속, 목이속, 좀목이속, 혓바늘목이속, 주걱목이속, 아교뿔버섯속 등을 들 수 있다.

본 발명은 상기의 자냥균류 또는 담자균류의 육종 방법에 관한 것으로 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯을 함께 재배사에 입상한 후 자연교배하여 버섯을 육종하는 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명인은 상기 육종 방법에 따라 다양한 신품종을 한 번의 공정으로 개발할 수 있으며, 또한 목적하는 신품종을 용이하게 개발 할 수 있다.

본 발명에서 “목적하는 신품종”이란 수확량이 높은 버섯, 내병성이 강한버섯, 시장이 요구하는 우수 품질을 가지는 버섯, 대량생산이 가능한 버섯, 식감 및 맛이 좋은 버섯, 조직이 치밀하고 탄력이 있는 버섯, 기능성이 좋은 버섯, 관상용 버섯 등을 의미한다.

본 발명의 일예로, 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯을 함께 재배사에 입상한 후 자연교배시, 온도 10 ~ 30℃, 상대습도 85 ~ 95%, 조도량 150 ~ 300lux인 재배사에서 수행 하는 것이 바람직하며, 이는 상기 재배사의 온도, 상대 습도 및 조도량일때 목적하는 교잡이 원활하게 잘 일어날 수 있 수 있고, 이에 따라 생산되는 자실체를 육안으로 확인이 가능하기 때문이다.

상기 단핵 종균은 바람직하게 재배용 배지에 접종하여 2핵균사체형태의 버섯과 함께 재배사에 입상할 수 있으며, 이때 단핵종균을 접종한 재배용 배지와 2핵균사체 형태의 버섯 갯수를 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 비율로 입상하는 것이 바람직한데, 이는 단핵종균과 2핵균사체형태의 버섯에서 비산되는 포자와 교잡율이 좋아지기 때문에, 다양한 품종을 개발할 수 있기 때문이다.

상기 단핵 종균은 하기 a)단계 내지 c)단계를 포함하는 공정을 통해 얻어 질 수 있다.

a) 활용하고자 하는 모본의 포자를 발아하여 단핵 균사체를 분리하고 암 배양하는 단계;

b)상기 a)단계에서 배양된 단핵 균사체를 액체배양배지에서 단핵 종균으로 암 배양하는 단계;

c) 상기 b)단계에서 수득된 단핵 종균을 재배용 배지에 접종하여 배양하는 단계.

상기 a)단계에서 모본이란 육종하여 획득하고자 하는 고유의 우수 형질을 보유한 개체를 의미하는 것으로, 모본의 포자를 얻는 방법에 대하여 일예를 들어 설명하면, 플라스틱 용기에 얇은 철사를 고정하고, 철사 하단을 낚시 바늘 형태로 만들어 준비한 후 모본의 갓과 대가 만나는 부위를 멸균한 메스로 절단한다. 이후 유산지를 깔고 그 위에 절단한 모본의 갓을 메달아 두고 공기의 흐름이 없도록 하여 포자를 24시간 유산지에 자유낙하 시킨다. 이렇게 채집된 포자를 건조하고 클린부스에서 백금구를 이용하여 기밀용기에 옮겨 얻을 수 있다. 이렇게 얻은 모본의 포자로부터 희석평판법으로 단핵 균사체를 분리 할 수 있다.

본 발명에서 상기 “희석평판법”이란 미생물을 분리하는 하나의 방법으로 멸균된 배지 또는 희석수에 시료를 혼합하여 그중의 일정량을 미생물배양용 접시(petri dish)에 부어서 배양하는 방법을 의미한다.

상기“희석평판법”을 일예로 들어 설명하자면, 증류수 5개를 준비하여 110 ~ 150℃로 25 ~ 30분간 멸균하고 클린룸에서 냉각시킨 후 상기 모본의 포자를 멸균된 증류수에 극소량을 첨가하고, 1/10로 4번을 희석한다. 그리고 최종적으로 희석된 용액을 준비한 PDA(potato dextrose agar medium) 배지, YMG배지, 차팩스배지, 맥아배지, 퇴비추출배지, 참나무톱밥 추출배지, 하마다배지, 버섯완전배지(MCM), 한천배지(무영양배지), 기타 천연물추출배지에 계대하여 루프 및 스프레더등을 이용하여 평판하고 파라필름으로 마감한 후 20 ~ 30 ℃에서 1 ~ 15일 동안 인규베이터에서 암 배양하면, 여러개의 단핵균사체를 얻을 수 있다. 상기 배지 pH는 4 ~ 7인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 pH 5 ~ 6인 것이 좋다.

상기 배양 후 배지를 살펴보면, 육안으로 단일균사체 확인이 가능하기 때문에 단핵균사체를 각각 분리할 수 있다. (도1 참조) 상기 분리된 단핵균사체 각각을 다른 배지에 이식하여 재배양 하는 것이 각각의 단핵균사체들이 성장하면서 혼합되는 것을 막을 수 있기 때문에 바람직하다.

상기 분리된 단핵 균사체의 배양은 20 ~ 30 ℃에서 1 ~ 15일 동안 인규베이터에서 암 배양할 수 있으며, 이는 단핵 균사체가 빠르게 성장 할 수 있도록 해 주기 때문에 바람직하다. 그러나 이에 제한되지는 않는다.

상기 b)단계는 상기 배양된 단핵 균사체를 액체배양배지에서 단핵 종균으로 배양하는 단계로, “종균”이란 동일한 유전 형질을 보유한 버섯균을 곡립이나 액체 및 톱밥배지에 순수 배양한 증식체로 작물에서 종자와 같은 역할을 하는 것을 의미한다.

일예로 상기 종균은 상기 배양된 단핵균사체를 한천을 첨가하지 않은PDB(potato dextrose broth)배지, YMG배지, 차팩스배지, 맥아배지, 퇴비추출배지, 참나무톱밥 추출배지, 하마다배지, 버섯완전배지(MCM), 기타 천연물추출배지의 액체 배지에 계대하여 생산 할 수 있으며, 이때 사용하는 액체 배지의 pH는 4 ~ 7인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 pH 5 ~ 6인 것이 좋다.

상기 c)단계는 b)단계에서 수득된 단핵 종균을 재배용 배지에 접종하여 배양하는 단계로, 상기 재배용 배지는 고체톱밥배지 일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 배양은 20 ~ 30 ℃에서 15 ~ 30일 배양하는 것이 바람직하다

본 발명은, 상기 b)의 단계를 거치지 않고 바로 상기 c) 단계로의 실시도 가능하나 이 경우 생산성이 극도로 낮아지는 단점이 있기 때문에, 상기 b)단계를 수행하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 버섯의 육종 방법은 느타리, 표고, 꽃송이, 목이, 노루궁뎅이, 새송이, 팽이, 망태버섯, 아위, 영지, 상황, 동충하초 등에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 버섯을 육종 할 수 있는 방법으로, 알려져 있는 버섯은 모두 육종할 수 있다.

또한 본 발명에 따른 버섯의 육종 방법으로 버섯을 육종시 서로 다른 두 가지 형태의 버섯이 1개의 배지에서 발생할 수 있으나, 자실체 조직배양을 통해 충분히 두 품종간 2핵균사체의 균주 확보가 가능하기 때문에 문제가 되지 않는다.

본 발명은 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯에서 발생한 포자가 자연교배함을 이용함에 따라 버섯 신품종 육종시 육종기간의 단축 및 이에 따른 비용 절감과, 품질이 우수한 다양한 신품종을 대량 생산 할 수 있는 효과가 있다. 또한 우수 품종 보급에 따른 전국 버섯재배 농가의 소득을 증가 시킬 수 있으며, 국제신품종보호동맹(UPOV)협정의 발효에 대응하여 우수 국산 신품종 버섯종자 개발에 활용되어 국가 버섯자원 활용 및 품종경쟁력 향상에도 기여할 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 모본의 포자를 배양한 배지의 이미지 사진이다.
도 2는 실시예 1에서 생산한 다양한 신품종들의 비교 사진이다.
도 3는 실시예 1에서 생산한 신품종1에 대한 사진이다.
도 4는 실시예 1에서 생산한 신품종2에 대한 사진이다.
도 5는 실시예 1에서 생산한 신품종3에 대한 사진이다.
도 6은 실시예 1에서 생산된 신품종1과 김제 6호 버섯과 대치배양한 사진이다.

이하에서 본 발명의 실시예를 통해 상세히 설명한다. 단 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명이 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

이하 생산된 버섯은 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

1. 생산된 버섯의 형태

갓의 평균 직경, 대의 평균 길이, 대의 평균 굵기를 직접 측정하였으며, 갓의 모양 및 갓이 색깔을 육안으로 확인하여 하기 표 1에 나타내었다.

2. 생산된 버섯의 관능검사

관능검사를 위해서 생산된 신품종 4개를 다듬은 후 가식부분을 통째로 100 g/500 ㎖의 물에서 95℃에서 3분 동안 데친 후, 5 mm두께로 잘라서 성인 28명을 대상으로 하였다. 상기 시료는 관능검사에 선발된 패널로 하여금 향기, 구수한 맛 및 질감에 대해서 선척도(scoring test)를 이용하여 최저 0에서 최고 5점으로 평가하도록 하였다. 실험 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

3. 대치배양

대치배양에는 느타리 균사 배양에 적합한 PDA(pH 6.0)배지를 사용하였다. 대치배양을 위해 미리 준비한 PDA 배지에 신품종 자실체를 조직배양하여 26℃ 인큐베이터에서 10일 간 암배양 하고, 이를 새로운 PDA 배지의 1/3 지점에 상치하고, 반대 1/3 지점에는 포자 공여체인 김제6호를 상치하여 26℃에서 15일간 배양하여 균사의 대선 형성 여부를 관찰하였다. 대치배양 결과는 도 1과 같다.

[실시예 1]

모본의 포자를 발아하여 단핵균사체를 분리하고 배양하는 하는단계;

플라스틱용기에 얇은 철사를 고정하고 철사 하단을 낚시 바늘 형태로 만들어 준비한 후 모본이 되는 느타리버섯(김제10호. 머쉬타운, 이하 “김제 10호”로 기재함.)의 갓과 대가 만나는 부위를 멸균한 메스로 절단하였다. 플라스틱용기안에 유산지를 깔고 그 위에 플라스틱에 연결된 고리로 절단한 김제 10호의 갓 상단을 메달고, 공기의 흐름이 없도록 하여 버섯 포자를 24시간 유산지에 자유낙하 시켰다. 채집된 포자를 건조시키고 클린부스에서 백금구등을 이용해 기밀용기에 옮겨 김제10호의 포자를 얻었다.

삼각플라스크 5개에 각각 증류수 100 ml를 담아 121℃에서 30분간 멸균하고 클린부스에서 상온으로 냉각하고, 상기 모본의 포자 5mg을 하나의 삼각플라스크에 첨가하여 30분간 쉐이킹하였다. 그리고 10%를 멸균팁으로 덜어 멸균한 증류수가 담긴 다른 삼각플라스크에 첨가하여 희석시켰으며, 상기와 같은 방법으로 3번을 더 희석하였다. 이렇게 희석된 포자용액을 루프를 이용하여 준비한 감자한천배지(potato dextrose agar medium, PDA, pH 6.0)에 평판하고 파라 필름으로 마감하였다. 작업이 완료된 배지를 26℃ 인큐베이터에서에서 5일 동안 암 배양하여, 배지에서 발아력이 우수한 5개의 김제10호 단핵균사를 선별하고, 새로운 배지에 계대하여 배양하였다. 10일간 배양하여 이 중 균사의 배양이 빠르고 우수한 개체 2개를 다시 선별하여 새로운 감자한천배지에 26℃에서 15일 동안 각각 계대하여 배양하였다.

단핵 균사체를 단핵 종균으로 배양하는 단계;

상기 배양된 단핵균사를 PDB(Potato Dextrose Broth,PDB, pH 6.0)배지 300ml에 계상기 표 1을 살펴보면 동일한 단핵균사체에서 상기 육종법을 통해 다양한 버섯의 발생이 확인되며, 품종2의 경우 기존의 느타리버섯보다 갓의 직경은 유사하나, 대의 굵기가 굵고 갓의 모양은 중심형의 깔데기 형이며, 갓 색깔이 짙어 상품성이 우수한 새로운 품종임을 알 수 있었다.

또한 상기 표2는 실시예 1에서 제조된 품종 1내지 3의 버섯의 맛과 향기 및 질감을 평가한 것으로, 기존의 제품인 김제 6호 보다 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이에 향후 본 발명에 따른 버섯 육종방법으로 다양하고 우수한 형질을 보유한 버섯을 개발할 수 있는 발판이 될 것으로 기대된다.

대하고 인큐베이터에서 26℃에서 10일 동안 1일 3회 손으로 쉐이킹하며 배양하여 김제10호의 단핵균사체 액체 종균을 얻었다.

단핵 종균을 접종하는 단계;

포플러톱밥 80중 량%와 미강 20중량%를 혼합하고 수분함량을 65%을 조절하여 내열성 폴리프로필렌재질의 병에 담아 톱밥배지를 8개 제조하였다. 그리고 상기 제조한 배지는 121℃, 1.2kg/cm의 압력으로 90분간 멸균하고, 멸균 완료 후 바로 무균실에서 표면온도를 25℃ 이하로 냉각시켰다. 그리고 상기 제조한 김제10호 단핵균사체의 액체종균을 멸균한 호모게나이져로 균질 후 톱밥배지 8개에 30ml씩 접종하고 23℃에서 23일간 빛이 없는 조건으로 배양하여 고체 접종원을 생산하였다. 생산된 접종원 중 잡균이 없고, 균사 밀도가 높은 4개의 접종원을 선별하였다.

그리고 상기와 같은 조건으로 톱밥배지를 96개 제조하여, 상기 4개의 접종원 5g씩을 접종하였다. 그래서 총 96개의 톱밥배지를 생산하였으며, 톱밥배지는 균사배양실에서 26℃로 25일 동안 암 배양하였다.

김제10호의 단핵 종균과 김제6호의 자연교배

상기 김제10호의 단핵종균을 접종한 고체톱밥배지 96개와 느타리버섯(김제 6호, 머쉬타운)32개를 재배사에 같이 입상하고, 재배사의 온도를 16± 1℃, 상대습도 92± 2%, 조도 300lux(주간(晝間), 야간 소등)의 조건으로 30일간 재배하여 다양한 자실체를 생산하였으며, 이를 하기 도 2에 나타내었다. 또한 이 중 우수한 신품종 3개를 얻을 수 있었으며. 하기 도 3내지 5에 나타내었다.

본 발명에 따른 버섯의 육종방법에 따라 실험한 결과, 96개의 단핵 균사 톱밥배지 중 91개의 단핵균사 톱밥배지에서 자실체가 발생하여 약 95%의 교잡 성공률을 보였다. 이중 5개체에서는 서로 다른 두 가지 형태의 버섯이 1개 배지에서 발생하였으나, 자실체 조직배양을 통해 충분히 두 품종 간 균주 확보가 가능하였다. 하기 도 2내지 4는 상기 실시예 1에 따라 제조된 새로운 육종의 버섯의 이미지를 나타낸 것으로, 교잡이 성공하였음을 보여주는 것이다.

또한 새로운 신품종이 생산되었음을 확인하기 위하여 서로 다른 품종을 동일 배지 상에 배양 하였을 경우 동일 품종일 경우에는 균사 간 접촉부위에 융합이 일어나고, 서로 상이한 품종일 경우 균사의 접촉부위에 대선이 형성되는 원리를 이용한 대치배양법으로 서로 다른 품종임을 확인하였다. 이에 실시예 1에서 개발한 품종 1과 김제6호와 대치배양을 하였으며. 이는 도 6에 나타내었다. 하기 도6을 살펴보면 대선이 형성되어 김제 6호와 유전적으로 서로 다른 개체임을 확인할 수 있으며, 품종 2 내지 3도 역시 하기 도 6과 같은 결과를 얻을 수 있었다.

[표 1]

[표 2]

상기 표 1을 살펴보면 동일한 단핵균사체에서 상기 육종법을 통해 다양한 버섯의 발생이 확인되며, 품종2의 경우 기존의 느타리버섯보다 갓의 직경은 유사하나, 대의 굵기가 굵고 갓의 모양은 중심형의 깔데기 형이며, 갓 색깔이 짙어 상품성이 우수한 새로운 품종임을 알 수 있었다.

또한 상기 표2는 실시예 1에서 제조된 품종 1내지 3의 버섯의 맛과 향기 및 질감을 평가한 것으로, 기존의 제품인 김제 6호 보다 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이에 향후 본 발명에 따른 버섯 육종방법으로 다양하고 우수한 형질을 보유한 버섯을 개발할 수 있는 발판이 될 것으로 기대된다.

Claims (6)

1. 단핵 종균과 2핵균사체형태의 버섯을 함께 재배사에 입상한 후 자연교배하는 것인 버섯의 육종 방법.
2. 제 1항에 있어서,
   상기 자연교배로 자실체가 생산되는 것인 버섯의 육종 방법.
3. 제 1항에 있어서,
   상기 자연교배는 온도 10 ~ 30℃, 상대습도 85 ~ 95%, 조도량 150 ~ 300lux인 재배사에서 수행하는 버섯의 육종 방법.
4. 제 1항에 있어서,
   상기 단핵종균은 하기 a)단계 내지 c)단계를 포함하는 공정을 통해 얻어지는 것인 버섯의 육종 방법.
   a) 활용하고자 하는 모본의 포자를 발아하여 단핵 균사체를 분리하고 암 배양하는 단계;
   b)상기 a)단계에서 배양된 단핵 균사체를 액체배양배지에서 단핵 종균으로 암 배양하는 단계;
   c) 상기 b)단계에서 수득된 단핵 종균을 재배용 배지에 접종하여 배양하는 단계.
5. 제 4항에 있어서,
   상기 a)단계 또는 b)단계의 암 배양은 20 ~ 30 ℃에서 1 ~ 15일 동안 하는 수행하고, 상기 c)단계의 배양은 20 ~ 30 ℃에서 15 ~ 30일 배양하는 것인 버섯의 육종 방법.
6. 제 1항 내지 제 5항에서 선택되는 어느 한 항에 있어서,
   상기 버섯은 느타리, 표고, 꽃송이, 목이, 노루궁뎅이, 새송이, 팽이, 망태버섯, 아위, 영지, 상황, 동충하초에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 버섯을 포함하는 것인 버섯의 육종 방법.

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