KR20140000689A

KR20140000689A - 술파미드 ｎｓ3 억제제의 염 및 다형체

Info

Publication number: KR20140000689A
Application number: KR1020137011801A
Authority: KR
Inventors: 리파 샤; 폴 알렌 서턴; 리준 장
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2010-10-08
Filing date: 2011-10-08
Publication date: 2014-01-03
Also published as: EA201390531A1; AU2011313665A1; WO2012045280A1; AU2011313665B2; EP2625167A1; EP2625167A4; CA2813337A1; CN103168029A; BR112013008388A2; JP2013543500A; MX2013003912A; EA022606B1; US20130338061A1

Abstract

본 발명은 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 (본원에서 화합물 X로 지칭됨)의 신규 염 및 다형체, 그를 함유하는 제약 조성물, 및 그의 제조 방법, 및 요법에서의 용도를 제공한다.

Description

술파미드 ＮＳ3 억제제의 염 및 다형체 {SALTS AND POLYMORPHS OF SULFAMIDE NS3 INHIBITORS}

본 발명은 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 염 및 다형체, 그를 함유하는 제약 조성물, 및 요법에서의 그의 용도에 관한 것이다.

만성 C형 간염 바이러스 (HCV) 감염은, 전세계적으로 1억 7천만명이 감염되어 있다고 추정되고, 매년 3백만 내지 4백만 명이 추가 감염되는 주요한 세계 보건상의 문제이다 (예를 들어, 문헌 [World Health Organization Fact Sheet No.164. October 2000] 참조). 신규 감염의 25%가 증후성일지라도, 환자의 60-80%가 만성 간 질환으로 진전될 것이고, 이들 중 20%로 추정되는 비율이 간세포 암종으로 진전될 연간 위험률이 1-4%인 간경변증으로 진행될 것이다 (예를 들어, 문헌 [World Health Organization Guide on Hepatitis C. 2002; Pawlotsky, J-M. (2006) Therapy of Hepatitis C: From Empiricism to Eradication. Hepatology 43:S207-S220] 참조). 전반적으로, HCV는 선진국에서 전체 간암 사례의 50-76% 및 전체 간 이식의 2/3의 원인이다 (예를 들어, 문헌 [World Health Organization Guide on Viral Cancers. 2006] 참조). 또한, 궁극적으로는 감염된 환자의 5-7%가 HCV 감염으로 인해 사망할 것이다 (예를 들어, 문헌 [World Health Organization Guide on Hepatitis C. 2002] 참조).

HCV 감염에 대한 현행 표준 요법은 리바비린과 조합된 PEG화 인터페론 알파 (IFN-α)이다. 그러나, 유전자형 1 바이러스를 갖는 환자 중 최대 50%만이 상기 인터페론-기재 요법으로 성공적으로 치료될 수 있다. 추가로, 인터페론 및 리바비린은 둘 다, 인터페론을 사용한 치료로부터의 인플루엔자-유사 증상 (발열 및 피로), 혈액계 합병증 (백혈구감소증, 혈소판감소증), 신경정신과적 문제 (우울증, 불면증, 과민증), 체중 감소 및 자가면역 기능장애 (갑상선기능저하증, 당뇨병)에서 리바비린을 사용한 치료로부터의 유의한 용혈성 빈혈에 이르는 유의한 부작용을 유발할 수 있다. 따라서, 보다 효과적이고 내약성이 우수한 약물이 여전히 크게 요구된다.

NS3은 대략 70 kDa의 단백질로서, 2개의 별개의 도메인: 180개 아미노산 (AA)의 N-말단 세린 프로테아제 도메인 및 C-말단 헬리카제/NTPase 도메인 (AA 181에서 631까지)을 갖는다. NS3 프로테아제는 단백질 서열, 전반적인 3차원 구조 및 촉매작용 메카니즘의 유사성으로 인해 키모트립신 패밀리의 구성원으로 간주된다. HCV NS3 세린 프로테아제는 NS3/NS4A, NS4A/NS4B, NS4B/NS5A 및 NS5A/NS5B 연결부에서 폴리단백질의 단백질분해 절단을 일으킨다 (예를 들어, 문헌 [Bartenschlager, R., L. et al. (1993) J. Virol. 67:3835-3844; Grakoui, A. et al. (1993) J. Virol. 67:2832-2843; Tomei, L. et al. (1993) J. Virol. 67:4017-4026] 참조). NS4A는 54개 AA의 대략 6 kDa 단백질로서, NS3의 세린 프로테아제 활성을 위한 보조인자이다 (예를 들어, 문헌 [Failla, C. et al. (1994) J. Virol. 68:3753-3760; Tanji, Y. et al. (1995) J. Virol. 69:1575-1581] 참조). NS3/NS4A 세린 프로테아제에 의한 NS3/NS4A 연결부의 자가절단은 분자내에서 일어나는 반면 (즉, 시스), 다른 절단 부위는 분자간에 프로세싱된다 (즉, 트랜스). HCV NS3 프로테아제가 바이러스 복제에 필수적이라는 것이 입증된 바 있으며, 따라서 이는 항바이러스 화학요법에 있어서 매력적인 표적을 제공한다.

HCV 감염 뿐만 아니라 HCV-연관 장애에 대한 신규 치료법 및 요법이 여전히 요구된다. 또한, HCV의 하나 이상의 증상의 치료 또는 예방 또는 개선에 유용한 화합물, 뿐만 아니라 HCV의 하나 이상의 증상의 치료 또는 예방 또는 개선 방법이 요구된다. 추가로, HCV-세린 프로테아제, 특히 HCV NS3/NS4a 세린 프로테아제의 활성을 조절할 수 있는 신규 화합물, 및 HCV 감염을 치료, 예방 또는 개선하기 위해 상기 화합물을 사용하는 것이 요구된다.

비공개 특허출원 번호 PCT/IB2010/000784는 HCV-연관 장애의 치료에 유용한 신규 부류의 화합물을 기재한다. 하나의 이러한 화합물은 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드이고, 하기 나타낸 구조를 갖는다. 상기 화합물은 본원에서 화합물 X로 지칭된다.

제약 제제의 제조에 있어서, 상업적으로 이용가능한 제조 방법을 얻기 위해, 활성 화합물은 편리하게 취급되고 처리될 수 있는 형태로 존재하는 것이 중요하다. 따라서, 활성 화합물의 화학적 안정성 및 물리적 안정성은 중요한 인자이다. 활성 화합물 및 그를 함유하는 제제는 활성 화합물의 물리화학적 특성 (예를 들어, 화학적 조성, 밀도, 흡습성 및 용해도)에 있어서 어떠한 유의한 변화도 나타내지 않으면서 상당한 기간에 걸쳐 효과적으로 저장될 수 있어야 한다.

추가로, 활성 화합물이 경구 투여를 위한 투여 형태, 예컨대 정제 내로 혼입되는 경우에, 활성 화합물이 용이하게 마이크로화되어 제조를 돕는 우수한 유동 특성을 갖는 분말을 생성하는 것이 바람직하다.

제약 성분의 특정한 고체-상 형태를 제조함에 있어 이점이 있다는 것이 일반적으로 밝혀져 있고, 이는 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use", P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.) (Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich)]에 기재되어 있다. 고체-상 형태를 제조하는 방법은 또한 문헌 ["Practical Process Research and Development", Neal G. Anderson (Academic Press, San Diego) 및 "Polymorphism: In the Pharmaceutical Industry", Rolf Hilfiker (Ed) (Wiley VCH)]에 기재되어 있다.

본 발명자들은 화합물 X의 다수의 염 및 결정질 다형체를 발견하였다. 염 및 결정 형성은, 생성된 신규한 물리적 형태가 유기 용매 중에서 보다 낮은 용해도를 나타낼 수 있기 때문에 수율을 향상시키기 위한 잠재력을 갖는다. 이는 향상된 제조 방법으로 이어질 수 있다. 추가로, 염은 단리 및 정제하기에 보다 쉬울 수 있다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 화합물 X 히드로클로라이드 염 또는 그의 제약상 허용되는 유도체를 제공한다. 한 실시양태에서, 염의 순도는 98% 이상이다. 또 다른 실시양태에서, 염의 순도는 99% 이상이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 화합물 X 헤미-히드로클로라이드 염 또는 그의 제약상 허용되는 유도체를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 화합물 X 메탄술폰산 염 또는 그의 제약상 허용되는 유도체를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 화합물 X 숙신산 염 또는 그의 제약상 허용되는 유도체를 제공한다.

추가로, 본 발명에 따라, 화합물 X의 다수의 결정질 다형체 및 그의 염이 제공된다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 7.7, 8.9, 11.8, 15.5 및 18.0을 나타내는 화합물 X 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 A)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 A는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 7.7, 8.9, 11.8, 15.5, 17.3, 18.0 및 19.9를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 A는 적어도 표 A에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 A는 도 1에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 7.8, 8.6, 11.3, 15.8 및 18.2를 나타내는 화합물 X 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 B)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 B는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 7.8, 8.6, 9.5, 11.3, 14.8, 15.8 및 18.2를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 B는 적어도 표 B에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 B는 도 2에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 9.2, 14.4, 15.3, 17.7 및 20.0을 나타내는 화합물 X 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 C)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 C는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 8.0, 9.2, 14.4, 15.3, 17.7, 19.3 및 20.0을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 C는 적어도 표 C에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 C는 도 3에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 8.0, 8.3, 14.3, 15.9 및 18.2를 나타내는 화합물 X 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 D)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 D는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 8.0, 8.3, 9.1, 10.0, 10.7, 14.3, 14.8, 15.9, 17.2 및 18.2를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 D는 적어도 표 D에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 D는 도 4에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 7.5, 8.8, 9.2, 15.6 및 17.8을 나타내는 화합물 X 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 E)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 E는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 7.5, 8.8, 9.2, 15.6, 17.8, 18.2 및 19.5를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 E는 적어도 표 E에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 E는 도 5에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.9, 11.3, 14.8, 16.0 및 18.2를 나타내는 화합물 X 헤미-히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 F)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 F는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 6.9, 7.8, 9.1, 11.3, 14.8, 16.0, 17.4 및 18.2를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 F는 적어도 표 F에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 F는 도 6에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 5.8, 6.5, 7.8, 10.4 및 15.7을 나타내는 화합물 X 메탄술폰산 염의 결정질 형태 (형태 G)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 G는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 5.8, 6.5, 7.8, 10.4, 12.9, 15.7 및 17.2를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 G는 적어도 표 G에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 G는 도 7에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 5.7, 6.9, 7.8, 14.4 및 18.5를 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 H)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 H는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 5.7, 6.9, 7.8, 9.2, 10.3, 12.4, 14.4, 15.5, 16.3, 16.7 및 18.5를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 H는 적어도 표 H에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 H는 도 8에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 9.5, 13.3, 14.5, 19.0 및 19.7을 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 I)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 I는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 6.8, 7.4, 7.9, 9.5, 13.3, 14.0, 14.5, 16.1, 17.9, 19.0 및 19.7을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 I는 적어도 표 I에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 I는 도 9에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.9, 8.3, 12.5, 13.6, 16.0, 16.8 및 17.1을 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 J)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 J는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 6.9, 8.3, 9.2, 12.5, 13.6, 16.0, 16.8, 17.1, 19.8 및 20.9를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 J는 적어도 표 J에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 J는 도 10에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.1, 7.4, 8.3, 22.1, 23.7, 24.1 및 24.6을 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 K)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 K는 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 5.2, 6.1, 7.4, 8.3, 9.7, 18.2, 19.6, 22.1, 23.2, 23.7, 24.1 및 24.6을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 K는 적어도 표 K에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 K는 도 11에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 5.7, 8.2, 16.9, 18.4 및 18.5를 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 L)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 L은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 5.7, 7.0, 8.2, 15.4, 16.0, 16.9, 18.4 및 18.5를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 L은 적어도 표 L에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 L은 도 12에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.7, 7.6, 7.7, 9.5 및 19.0을 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 M)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 M은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 6.7, 7.6, 7.7, 9.5, 13.1, 14.4, 15.4, 16.0, 17.8, 18.3, 19.0 및 19.6을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 M은 적어도 표 M에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 M은 도 13에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.3, 7.7, 8.7, 16.0, 18.1 및 20.5를 나타내는 화합물 X의 결정질 형태 (형태 N)를 제공한다. 한 실시양태에서, 형태 N은 적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크: 6.3, 7.7, 8.7, 10.2, 11.4, 13.8, 16.0, 17.2, 18.1, 18.6, 19.0 및 20.5를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 N은 적어도 표 N에 나타낸 특징적인 X선 분말 회절 피크를 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 형태 N은 도 14에 나타낸 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다.

본 발명의 한 측면에서, 본 발명의 다형체는 결정질 특성을 가지며, 바람직하게는 50% 이상 결정질, 보다 바람직하게는 60% 이상 결정질, 보다 더 바람직하게는 70% 이상 결정질, 가장 바람직하게는 80% 이상 결정질이다. 결정화도는 통상의 X선 회절측정 기술에 의해 또는 적외선 분광분석 기술에 의해 추정될 수 있다.

본 발명의 한 측면에서, 본 발명의 다형체는 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 내지 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 결정질이다.

본 명세서에서, X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐)는 1.5406 Å (알파1) 및 1.5444 Å (알파2)의 파장을 갖는 구리 X선을 사용하여 측정된다.

본 발명의 결정질 형태는 비용매화 및 용매화 형태 둘 다로 존재할 수 있다. 용어 '용매화물'은 본원에서 본 발명의 화합물 및 소정량의 하나 이상의 제약상 허용되는 용매를 포함하는 분자 복합체를 기재하는데 사용된다. 제약상 허용되는 용매의 예는 에탄올 및 물을 포함한다. 용어 '수화물'은 용매가 물인 경우에 사용된다.

한 측면에서, 본 발명은 요법에서 사용하기 위한 본원에 정의된 염 또는 결정질 형태를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 요법에 의한 치료를 필요로 하는 대상체에게 제약상 허용되는 양의 본 발명의 염 또는 결정질 형태를 투여하는 것을 포함하는, 요법에 의한 치료 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 요법에서 사용하기 위한 의약의 제조에서의 본원에 정의된 염 또는 결정질 형태의 용도를 제공한다.

한 실시양태에서, 요법은 HCV-연관 장애의 치료이다. 또 다른 실시양태에서, 요법은 HIV 감염의 치료이다. 또 다른 실시양태에서 요법은 HCV의 활성의 치료, 억제 또는 예방이다. 또 다른 실시양태에서, 요법은 NS2 프로테아제, NS3 프로테아제, NS3 헬리카제, NS5a 단백질 및/또는 NS5b 폴리머라제의 활성의 억제이다. 또 다른 실시양태에서, 요법은 NS3 프로테아제 및 NS4A 보조인자 사이의 상호작용의 파괴이다. 또 다른 실시양태에서, 요법은 HCV의 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A 및 NS5A-NS5B 연결부 중 하나 이상의 절단의 방지 또는 변경이다. 또 다른 실시양태에서, 요법은 세린 프로테아제의 활성의 억제이다. 또 다른 실시양태에서, 요법은 대상체의 HCV RNA 부하의 감소이다.

한 측면에서, 본 발명의 염 및 결정질 형태는 HCV 프로테아제 활성을 나타낸다. 한 실시양태에서, 염 및 결정질 형태는 HCV NS3-4A 프로테아제 억제제이다.

한 측면에서, 본 발명은 세포를 본 발명의 염 또는 결정질 형태와 접촉시키는 것을 포함하는, 세포에서 C형 간염 바이러스 복제를 억제하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 HCV-연관 장애를 치료하기 위해 유효량의 염 또는 결정질 형태를 사용하는 것에 대한 지침서와 함께 포장된, 본 발명의 염 또는 결정질 형태를 포함하는 포장된 HCV-연관 장애 치료제를 제공한다.

특정 실시양태에서, HCV-연관 장애는 HCV 감염, 간 경변증, 만성 간 질환, 간세포 암종, 한랭글로불린혈증, 비-호지킨 림프종, 간 섬유증 및 억제된 선천성 세포내 면역 반응으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 HCV 감염, 간 경변증, 만성 간 질환, 간세포 암종, 한랭글로불린혈증, 비-호지킨 림프종, 간 섬유증 및/또는 억제된 선천성 세포내 면역 반응의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제약상 허용되는 양의 본 발명의 염 또는 결정질 형태를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 치료될 HCV는 임의의 HCV 유전자형 중에서 선택된다. 또 다른 실시양태에서, HCV는 HCV 유전자형 1, 2 및/또는 3으로부터 선택된다.

HCV-연관 상태는 종종 HCV의 NS3 세린 프로테아제와 연관되며, 이는 HCV 폴리단백질을 보다 작은 기능성 단백질로 프로세싱하는 여러 단계를 담당한다. NS3 프로테아제는 효소 활성을 증진시키는 필수 보조인자인 NS4A 단백질과 이종이량체 복합체를 형성하고, HCV를 소포체에 앵커링하는 것을 돕는다고 여겨진다. NS3은 우선 NS3-NS4A 연결부의 가수분해를 자가촉매하고, 이어서 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A 및 NS5A-NS5B 교차지점에서 HCV 폴리단백질을 분자간 절단한다. 이러한 과정은 대상체에서의 HCV의 복제와 연관되어 있다. NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B 단백질 중 1종 이상의 활성의 억제 또는 조절은 대상체에서의 HCV의 복제를 억제 또는 조절하며, 이에 의해 HCV-연관 상태를 예방 또는 치료할 것이다. 특정한 실시양태에서, HCV-연관 상태는 NS3 프로테아제의 활성과 연관되어 있다. 또 다른 특정한 실시양태에서, HCV-연관 상태는 NS3-NS4A 이종이량체 복합체의 활성과 연관되어 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 결정질 형태의 제조 방법을 제공한다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 형태 A, B, C, D, E, F, G, H 및 I를 화합물 X의 용액으로부터 결정화시키는 것을 포함하는, 상기 형태 중 임의의 것의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 문맥에서, 본원에서 "치료"에 대한 언급은 달리 특정하게 언급되지 않는 한 치유적, 고식적 및 예방적 치료에 대한 언급을 포함한다. 용어 "요법", "치료적" 및 "치료상"은 동일한 방식으로 해석되어야 한다.

본 발명의 염 및 결정질 형태는 단독으로 또는 하나 이상의 다른 약물과 조합되어 투여될 수 있다. 일반적으로, 이들은 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제와 회합된 제제로서 투여될 것이다. 용어 "부형제"는 본원에서 기능적 (즉, 약물 방출 속도 제어) 및/또는 비-기능적 (즉, 가공 보조 또는 희석) 특성을 제제에 부여할 수 있는, 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기재하는데 사용된다. 부형제의 선택은 특정한 투여 방식, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과, 및 투여 형태의 성질과 같은 인자에 크게 좌우될 것이다.

본 발명의 염 및 결정질 형태의 전달에 적합한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 용이하게 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 조성물 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)]에서 찾아볼 수 있다.

인간 환자에게 투여하기 위해, 염 또는 결정질 형태의 총 1일 용량은 전형적으로, 물론 투여 방식에 따라, 0.01 mg 내지 1000 mg, 또는 0.1 mg 내지 250 mg, 또는 1 mg 내지 50 mg의 범위이다. 총 1일 용량은 단일 또는 분할 용량으로 투여될 수 있으며, 의사의 판단에 따라 본원에 주어진 전형적인 범위를 벗어날 수 있다. 이들 투여량은 약 60kg 내지 70kg의 체중을 갖는 평균적인 인간 대상체를 기준으로 한다. 의사는 체중이 상기 범위를 벗어나는 대상체, 예컨대 유아 및 노인을 위한 용량을 용이하게 결정할 수 있을 것이다.

제약 조성물은 예를 들어 크림, 용액, 현탁액, 헵타플루오로알칸 (HFA) 에어로졸 및 건조 분말 제제 형태로 국소적으로 (예를 들어, 피부로 또는 폐 및/또는 기도로); 또는 전신적으로, 예를 들어 정제, 캡슐, 시럽, 분말 또는 과립 형태로 경구 투여에 의해; 또는 용액 또는 현탁액 형태로 비경구 투여에 의해; 또는 피하 투여에 의해; 또는 좌제 형태로 직장내 투여에 의해; 또는 경피로 투여될 수 있다.

본 발명의 한 실시양태에서, 활성 성분은 경구로 투여된다. 경구 투여는 화합물이 위장관에 진입하도록 삼키는 것, 및/또는 화합물이 구강으로부터 혈류로 직접 진입하는 협측, 설측 또는 설하 투여를 포함할 수 있다.

경구 투여에 적합한 제제는 고체 플러그, 고체 마이크로미립자, 반고체 및 액체 (다중 상 또는 분산계 포함), 예컨대 정제; 다중- 또는 나노-미립자를 함유하는 연질 또는 경질 캡슐, 액체, 에멀젼 또는 분말; 로젠지 (액체-충전된 것 포함); 츄잉제; 겔; 신속 분산 투여 형태; 필름; 질좌제; 스프레이; 및 협측/점막부착성 패치를 포함한다.

경구 투여에 적합한 제제는 또한 즉시 방출 방식으로 또는 속도-유지 방식으로 염 및 결정질 형태를 전달하도록 고안될 수 있고, 여기서 방출 프로파일은 지연형, 펄스형, 제어형, 지속형, 또는 지연 지속형일 수 있거나, 또는 활성제의 치료 효능을 최적화하는 방식으로 변형될 수 있다. 속도-유지 방식으로 화합물을 전달하기 위한 수단은 당업계에 공지되어 있고, 상기 화합물과 함께 제제화되어 그의 방출을 제어할 수 있는 서방성 중합체를 포함한다.

속도-유지 중합체의 예는 확산에 의해 또는 확산과 중합체 부식의 조합에 의해 상기 화합물을 방출시키는데 사용될 수 있는 분해성 및 비-분해성 중합체를 포함한다. 속도-유지 중합체의 예는 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 크산탄 검, 폴리메타크릴레이트, 폴리에틸렌 옥시드 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

액체 (다중 상 및 분산계 포함) 제제는 에멀젼, 현탁액, 용액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 이러한 제제는 연질 또는 경질 캡슐 (예를 들어, 젤라틴 또는 히드록시프로필메틸셀룰로스로부터 제조됨)에서 충전제로서 제공될 수 있고, 전형적으로 담체, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 메틸셀룰로스, 또는 적합한 오일, 및 하나 이상의 유화제 및/또는 현탁화제를 포함한다. 액체 제제는 또한 고체의 재구성에 의해, 예를 들어 사쉐로부터 제조될 수 있다.

본 발명의 염 및 결정질 형태는 또한 신속-용해, 신속-분해 투여 형태, 예컨대 문헌 [Liang and Chen, Expert Opinion in Therapeutic Patents, 2001, 11 (6), 981-986]에 기재된 형태로 사용될 수 있다.

정제의 제제화는 문헌 [Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1, by H. Lieberman and L. Lachman (Marcel Dekker, New York, 1980)]에 논의되어 있다.

도면의 간단한 설명

본 발명은 하기 비제한적 실시예에 의해 예시될 것이다. 실시예에 하기 도면이 제시되어 있다:

도 1: 본원에 정의된 형태 A의 X선 분말 회절 패턴.

도 2: 본원에 정의된 형태 B의 X선 분말 회절 패턴.

도 3: 본원에 정의된 형태 C의 X선 분말 회절 패턴.

도 4: 본원에 정의된 형태 D의 X선 분말 회절 패턴.

도 5: 본원에 정의된 형태 E의 X선 분말 회절 패턴.

도 6: 본원에 정의된 형태 F의 X선 분말 회절 패턴.

도 7: 본원에 정의된 형태 G의 X선 분말 회절 패턴.

도 8: 본원에 정의된 형태 H의 X선 분말 회절 패턴.

도 9: 본원에 정의된 형태 I의 X선 분말 회절 패턴.

도 10: 본원에 정의된 형태 J의 X선 분말 회절 패턴.

도 11: 본원에 정의된 형태 K의 X선 분말 회절 패턴.

도 12: 본원에 정의된 형태 L의 X선 분말 회절 패턴.

도 13: 본원에 정의된 형태 M의 X선 분말 회절 패턴.

도 14: 본원에 정의된 형태 N의 X선 분말 회절 패턴.

일반적 실험 세부사항

약어 목록

Ac 아세틸

ACN 아세토니트릴

AcOEt / EtOAc 에틸 아세테이트

AcOH 아세트산

aq 수성

Ar 아릴

Bn 벤질

Bu 부틸 (nBu = n-부틸, tBu = tert-부틸)

CDI 카르보닐디이미다졸

CH₃CN 아세토니트릴

DBU 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-운데스-7-엔

DCE 1,2-디클로로에탄

DCM 디클로로메탄

DIPEA N-에틸디이소프로필아민

DMAP 디메틸아미노피리딘

DMF N,N'-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸술폭시드

EI 전기분무 이온화

Et₂O 디에틸에테르

Et₃N 트리에틸아민

Ether 디에틸에테르

EtOH 에탄올

FC 플래쉬 크로마토그래피

h 시간

HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-

테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

HBTU O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-

테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

HCl 염산

HOBt 1-히드록시벤조트리아졸

HPLC 고성능 액체 크로마토그래피

H₂O 물

IPA 이소프로필 알콜

L 리터

LC-MS 액체 크로마토그래피 질량 분광측정법

Me 메틸

MeI 아이오도메탄

MeOH 메탄올

mg 밀리그램

min 분

mL 밀리리터

MS 질량 분광측정법

Pd/C 목탄상 팔라듐

PG 보호기

Ph 페닐

Prep 정제용

Rf 전개율

RP 역상

Rt 체류 시간

rt 실온

SiO₂ 실리카 겔

TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드

TEA 트리에틸아민

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

X선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 대략 2-10 mg 의 샘플 중량을 이용하여 수집하였고, 이를 XRPD 0 백그라운드 단일 경사 절단 실리카 샘플 홀더 상에서 약하게 압축하였다. 이어서, 샘플을 브루커(Bruker) GADDS 내로 로딩하고, 하기 실험 조건을 이용하여 분석하였다:

튜브 애노드: (Cu)

발생기 전압: 40 kV

튜브 전류: 40 mA

출발 각 [2 θ]: 3

종료 각 [2 θ]: 4

스캔 시간 2분

본 발명의 화합물을 합성하는데 사용되는 모든 출발 물질, 빌딩 블록, 시약, 산, 염기, 탈수제, 용매 및 촉매는 상업적으로 입수가능하거나, 또는 당업자에게 공지된 유기 합성 방법 (문헌 [Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21])에 의해 제조할 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물은 하기 실시예에 나타낸 바와 같이 당업자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 제조할 수 있다.

방법 B:

HPLC

기기: 애질런트(Agilent) 시스템

칼럼: 워터스 시메트리(Waters Symmetry) C18, 3.5 마이크로미터, 2.1 x 50 mm, 유량 0.6 mL/분

용매: CH₃CN (0.1% CF₃CO₂H), H₂O (0.1% CF₃CO₂H)

구배: 0-3.5분: 20-95% CH₃CN, 3.5-5분: 95% CH₃CN, 5.5-5.55분 95% → 20% CH₃CN

방법 G:

LCMS

기기: 애질런트 시스템

칼럼: 할로(Halo) C18, 2.7 마이크로미터, 2.1 x 30 mm, 유량 1.1 mL/분

용매: CH₃CN (0.1% HCO₂H), H₂O (0.1% HCO₂H)

구배: 0-2분: 5-95% CH₃CN, 2-2.6분: 95% CH₃CN, 2.6-2.65분 95% → 5% CH₃CN, 2.65-3분 5% CH₃CN

방법 J:

MS

기기: 애질런트 시스템

방법: 흐름 주입

검출: API-ES, 양성/음성

화합물 X

비공개 특허 출원 번호 PCT/IB2010/000784에 기재된 바와 같은 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 제조법이 하기에 상세히 설명되어 있다.

반응물 A의 제조

단계 1a:

DCM (24 mL) 중 문헌 [Winum et al. (Organic Letters 2001, 3, 2241)]으로부터의 절차에 따라 제조된 N-(tert-부톡시카르보닐)-N-[4-(디메틸아자늄일리덴)-1,4-디히드로피리딘-1-일술포닐]아자니드 (3 g; 9.955 mmol)의 현탁액을 피롤리딘 (0.864 mL; 10.453 mmol)으로 처리하고, 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔 상에서 FC에 의해 크로마토그래피하여 (용리액: CH₂Cl₂/EtOAc 100:1), [N-(tert-부톡시카르보닐)]-피롤리딘-1-술폰산 아미드를 수득하였다. TLC: Rf (DCM/EtOAc 100:1) = 0.40. DCM (450 mL) 중 [N-(tert-부톡시카르보닐)]-피롤리딘-1-술폰산 아미드 (57.09 g; 223 mmol)의 용액을 TFA (120 mL; 1.56 mol)로 처리하고, 실온에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류 오일을 디이소프로필에테르로 연화처리하였다. 생성된 분말을 디이소프로필에테르로 세척하고, 고진공 하에서 건조시켜, 화합물 1a를 제공하였다.

단계 1b:

THF (160 mL) 중 WO2000/09558에 기재된 절차에 따라 제조된 (1R,2S)-1-tert-부톡시카르보닐아미노-2-비닐-시클로프로판카르복실산 (8.24 g; 36.3 mmol)의 용액을 CDI (9.09 g; 54.4 mmol)로 처리하고, 1시간 동안 가열 환류시켰다. 생성된 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 화합물 1a (7.62 g; 50.8 mmol)에 이어서 DBU (8.28 g; 54.4 mmol)로 처리하였다. 실온에서 16시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM에 용해시키고, 포화 KHSO₄ 수용액으로 세척하였다 (3x). 수성 상을 DCM으로 추출하고, 유기물을 합하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 (용리액: 헥산/EtOAc 4:1), 화합물 1b를 수득하였다.

단계 1c:

화합물 1b (7.84 g; 21.81 mmol)를 실온에서 디옥산 중 4 N HCl (84 mL)로 처리하였다. 1.5시간 후, 반응 혼합물을 고진공 하에 농축시켜, 그의 히드로클로라이드 염으로서 화합물 1c를 수득하였다.

중간체 II의 제조:

단계 2a:

DMF (1 L) 중 (5R,8S)-10,10-디메틸-7-아자-디스피로[3.0.4.1]데칸-7,8-디카르복실산 7-tert-부틸 에스테르 (32.84 g; 106 mmol - WO2009/047264에 기재된 절차에 의해 제조됨)를 K₂CO₃ (22.00 g; 159 mmol)에 이어서 메틸아이오다이드 (9.93 mL; 159 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물 및 EtOAc 사이에 분배시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기물을 합하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 (용리액: DCM/에틸에테르 120:1), 화합물 2a를 수득하였다.

단계 2b:

화합물 2a (6.3 g; 19.48 mmol)를 실온에서 디옥산 중 4 N HCl (84 mL)로 처리하여 화합물 2b 히드로클로라이드를 수득하였다. 1.5시간 후, 반응 혼합물을 고진공 하에 농축시켜 화합물 2b를 그의 히드로클로라이드 염으로서 수득하였다.

단계 2c:

DCM (15 mL) 중 화합물 2b 히드로클로라이드 (7.33 g; 27.93 mmol) 및 BOC-L-tert-류신 (0.248 g; 1.072 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시키고, DIPEA (0.46 mL; 2.68 mmol) 및 HATU (0.611 g; 1.608 mmol)로 처리하여 화합물 2c를 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 정제용 HPLC (방법 K)에 의해 정제하였다. 후처리 (후처리 2 = 분획물을 NaHCO₃으로 처리하고, 농축시키고; 잔류물을 물 및 EtOAc 사이에 분배시키고, EtOAc로 추출하고; 유기물을 합하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 농축시킴) 후 수득하였다.

단계 2d:

화합물 2c (10.55 g; 24.16 mmol)를 실온에서 디옥산 중 4 N HCl (84 mL)로 처리하여 화합물 2d 히드로클로라이드를 수득하였다. 1.5시간 후, 반응 혼합물을 고진공 하에 농축시켜 화합물 2d 히드로클로라이드를 수득하였다.

단계 2e:

DCM (65 mL) 중 화합물 2d (0.2 g; 0.456 mmol) 및 BOC-L-시클로헥실글리신 (1.582 g; 6.15 mmol)을 0℃로 냉각시키고, DIPEA (2.68 mL; 15.37 mmol)에 이어서 HATU (3.51 g; 9.22 mmol)로 처리하여 화합물 2e를 수득하였다. 실온에서 16시간 후, 반응 혼합물을 DCM 및 1 N HCl 사이에 분배시키고, 유기물을 포화 수성 NaHCO₃으로 추출하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 농축시켰다. 정제용 HPLC (방법 K)에 의해 정제하고, 이어서 후처리 (후처리 2)하여, 화합물 2e를 수득하였다.

단계 2f:

THF/MeOH/물 (6 mL; 2:1:1) 중 화합물 2e (1.136 g; 1.973 mmol) 및 LiOH.H₂O (0.09 g; 2.17 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 및 EtOAc 사이에 분배시켰다. 수성 상을 1 N HCl로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기물을 합하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 잔류물로 농축시켰으며, 이를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 (DCM/MeOH 100% → 9:1), 화합물 2f를 수득하였다.

단계 2g:

DCM (2 mL) 중 화합물 2f (0.050 g; 0.089 mmol) 및 피롤리딘-1-술폰산 ((1R,2R)-1-아미노-2-에틸-시클로프로판카르보닐)-아미드 - 반응물 A (0.030 g; 0.093 mmol - 본원의 절차에 기재된 바와 같이 제조됨)의 용액을 0℃로 냉각시키고, DIPEA (0.078 mL; 0.445 mmol) 및 HATU (0.102 g; 0.267 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, DCM 및 1 N HCl 사이에 분배시켰다. 유기물을 포화 수성 NaHCO₃ 용액으로 세척하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 진공 하에 잔류물로 농축시켰으며, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 후처리 후, 화합물 2g를 수득하였다.

단계 2h:

화합물 2g (0.02 g; 0.025 mmol)를 실온에서 디옥산 중 4 N HCl (84 mL)로 처리하여 중간체 II 히드로클로라이드를 수득하였다. 1.5시간 후, 반응 혼합물을 고진공 하에 농축시켜 중간체 II 히드로클로라이드를 수득하였다.

화합물 X의 합성

DMF (150 mL) 중 (S)-1-이소프로필-피페리딘-2-카르복실산 (1.39 g; 8.11 mmol)의 현탁액을 HATU (3.86 g; 10.14 mmol) 및 DIPEA (3.54 mL; 20.29 mmol)로 처리하고, 실온에서 교반하였다. 생성된 용액을 중간체 II 히드로클로라이드 (0.28 g; 0.378 mmol)로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 아르곤 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc에 용해시키고, 물로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하였다. 유기물을 합하고, 포화 수성 NaHCO₃으로 세척하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 갈색 오일로 농축시켰다. 실리카 겔에서 FC (용리액: 시클로헥산 → 시클로헥산/아세톤 3:2)에 의해 정제하여, 화합물 X 히드로클로라이드를 수득하였다.

화합물 X HCl 염 (형태 A)

유리 염기를 IPA 중에 용해시키고, 1 당량의 HCl을 첨가하였다. IPA를 증발시키고, 고체를 실온에서 아세토니트릴 중에서 평형화시켜 2-수화물 형태를 수득하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 A로 지칭됨)는 하기 표 A에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 1은 형태 A의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 A>

화합물 X HCl 염 (형태 B)

유리 염기 600 mg을 3 ml 에틸 아세테이트/아세토니트릴 (2:1) 중에 용해시키고, 700 μl 6N HCl을 첨가하였다. 용액을 1시간 동안 평형화시키고, 이어서 증발시켰다. 고체를 아세토니트릴 중에 재현탁시키고, 1시간 동안 슬러리화시킨 후, 단리하여 무수 형태를 수득하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 B로 지칭됨)는 하기 표 B에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 2는 형태 B의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 B>

화합물 X HCl 염 (형태 C)

유리 염기 2.54g을 3 ml 아세톤 중에 용해시켰다. 2.75 N HCl 1.075 ml를 약물 물질 용액에 첨가하였다. 이 용액을 2시간 동안 평형화시키고, 이어서 고체를 여과에 의해 수집하여 무수물을 수득하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 C로 지칭됨)는 하기 표 C에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 3은 형태 C의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 C>

화합물 X HCl 염 (형태 D)

HCl 염 (형태 C)을 72시간 동안 에틸 아세테이트 중에서 평형화시켜 2-수화물 형태를 제공하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 D로 지칭됨)는 하기 표 D에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 4는 형태 D의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 D>

화합물 X HCl 염 (형태 E)

형태 B를 72시간 동안 물 중에서 평형화시킨 후에 HCl 염을 단리하여 3-수화물 형태를 수득하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 E로 지칭됨)는 하기 표 E에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 5는 형태 E의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 E>

화합물 X 헤미-HCl 염 (형태 F)

91 mg 유리 염기를 0.5 ml THF 중에 용해시키고, 53 μl 6 N HCl을 첨가하였다. 2 ml 아세토니트릴을 첨가하고, 4시간 동안 계를 평형화시킨 후, 고체를 수집하여 2-수화물을 수득하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 F로 지칭됨)는 하기 표 F에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 6은 형태 F의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 F>

화합물 X MeSO₃H 염 (형태 G)

50 mg 유리 염기를 메틸 i-부틸 케톤 중에 용해시키고, 1 당량의 메탄술폰산을 첨가하고, 2시간 동안 평형화시킨 후, 고체를 수집하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 G로 지칭됨)는 하기 표 G에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 7은 형태 G의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 G>

화합물 X 유리 염기 (형태 H)

화합물 X 유리 염기를 CH₃CN (현탁액)으로 용매-교환하는 동안 이소 프로필 아세테이트 (투명한 용액)로부터 침전시키고, 24시간 동안 20℃에서 교반하였다. 최종 약물 물질을 CH₃CN의 현탁액으로부터 단리하고, CH₃CN에 의해 세척하여 무수 형태를 수득하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 H로 지칭됨)는 하기 표 H에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 8은 형태 H의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 H>

화합물 X (형태 I)

약물 물질을 에탄올 중에 용해시키고, 물을 1:1의 최종 비로 사용하여 침전시킴으로써 1-수화물 형태를 수득하여 형태 I를 제조하였다. 결정질 형태 (본원에서 형태 I로 지칭됨)는 하기 표 I에 나타낸 X선 분말 회절 피크를 보여주었다. 도 9는 형태 I의 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.

<표 I>

화합물 X (형태 J)

50℃에서 메탄올로부터 형태 H를 평형화시켜 형태 J를 수득하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 50℃에서 건조시켰다.

<표 J>

화합물 X (형태 K)

형태 K를 아세토니트릴을 첨가한 후에 에탄올 (100%)로부터 결정화시켰다. 고체를 원심분리에 의해 수집하고, 질소 흐름 하에 건조시켰다.

<표 K>

화합물 X (형태 L)

형태 L은 아세토니트릴 및 50℃에서 건조된 고체로부터 제조된 형태 H의 수화 형태였다. 고체를 상승된 습도에 노출시켜 형태 L을 생성하였다.

<표 L>

화합물 X (형태 M)

형태 M을 에탄올로부터 물로 침전시켜 단리하였다. 고체를 여과에 의해 단리하고, 50℃에서 건조시켰다. 고체를 상승된 습도에 노출시켜 형태 M을 생성하였다.

<표 M>

화합물 X (형태 N)

형태 N을 아세토니트릴의 첨가 후에 에탄올 (100%)로부터 결정화시켰다. 고체를 원심분리에 의해 수집하고, 질소 흐름 하에 건조시켰다.

<표 N>

생물학적 활성

HCV NS3-4A 프로테아제 검정

HCV NS3-4A 세린 프로테아제에 대한 화합물 X의 억제 활성을, 문헌 [Taliani, M., et al. 1996 Anal. Biochem. 240:60-67] (상기 문헌은 그 전문이 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이 전장 NS3-4A 단백질 (유전자형 1a, 균주 HCV-1) 및 상업적으로 입수가능한 내부-켄칭된 형광원성 펩티드 기질을 사용한 동종 검정으로 결정하였다.

루시페라제-기재 HCV 레플리콘 검정

화합물 X의 항바이러스 활성 및 세포독성을 루시페라제 리포터 유전자를 함유하는 서브게놈 유전자형 1b HCV 레플리콘 세포주 (Huh-Luc/neo-ET)를 사용하여 결정하였고, 상기 유전자의 발현은 HCV RNA 복제 및 번역에 의해 제어되었다. 간략하게, 5,000개의 레플리콘 세포를 96-웰 조직 배양 플레이트의 각 웰에 시딩하고, G418을 함유하지 않는 완전 배양 배지 중에서 밤새 부착되도록 하였다. 다음날, 배양 배지를 10% FBS 및 0.5% DMSO의 존재 하에 연속 희석된 화합물 X를 함유하는 배지로 교체하였다. 화합물로 48시간 처리한 후, 브라이트라이트(BriteLite) 시약 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer), 매사추세츠주 웰슬리 소재)을 사용하여 LMaxII 플레이트 판독기 (몰레큘라 프로브(Molecular Probe), 인비트로젠(Invitrogen))로 세포 내 잔류 루시페라제 활성을 결정하였다. 각각의 데이터 지점은 세포 배양물에서의 4회 반복값의 평균을 나타낸다. IC₅₀은 레플리콘 세포에서 루시페라제 활성이 50% 감소되는 화합물의 농도이다. 화합물의 세포독성을 MTS-기재 세포 생존율 검정을 이용하여 평가하였다.

화합물 X를 상기 프로테아제 검정으로 시험하였다. IC₅₀ 값이 하기에 제공되어 있다. 화합물 X를 또한 상기 레플리콘 검정으로 시험하였고, 약 100 nM 이하 미만의 IC₅₀을 나타내었다.

Claims

(5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 히드로클로라이드 염, 또는 그의 제약상 허용되는 유도체.
(5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 헤미-히드로클로라이드 염, 또는 그의 제약상 허용되는 유도체.
(5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 메탄술폰산 염, 또는 그의 제약상 허용되는 유도체.
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 7.7, 8.9, 11.8, 15.5 및 18.0을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 A).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 7.8, 8.6, 11.3, 15.8 및 18.2를 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 B).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 9.2, 14.4, 15.3, 17.7 및 20.0을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 C).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 8.0, 8.3, 14.3, 15.9 및 18.2를 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 D).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 7.5, 8.8, 9.2, 15.6 및 17.8을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 E).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.9, 11.3, 14.8, 16.0 및 18.2를 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 헤미-히드로클로라이드 염의 결정질 형태 (형태 F).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 5.8, 6.5, 7.8, 10.4 및 15.7을 포함하는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 메탄술폰산 염의 결정질 형태 (형태 G).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 5.7, 6.9, 7.8, 14.4 및 18.5를 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 H).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 9.5, 13.3, 14.5, 19.0 및 19.7을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 I).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.9, 8.3, 12.5, 13.6, 16.0, 16.8 및 17.1을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 J).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.1, 7.4, 8.3, 22.1, 23.7, 24.1 및 24.6을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 K).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 5.7, 8.2, 16.9, 18.4 및 18.5를 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 L).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.7, 7.6, 7.7, 9.5 및 19.0을 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 M).
적어도 하기 특징적인 X선 분말 회절 피크 (도 2θ로 나타내어짐): 6.3, 7.7, 8.7, 16.0, 18.1 및 20.5를 나타내는 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 (형태 N).
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 염 또는 제4항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 그의 결정질 형태를 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에서 사용하기 위한 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 염 또는 그의 결정질 형태.
제14항에 있어서, 요법이 HCV-연관 장애의 치료인 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 염 또는 그의 결정질 형태.
제15항에 있어서, HCV-연관 장애가 HCV 감염, 간 경변증, 만성 간 질환, 간세포 암종, 한랭글로불린혈증, 비-호지킨 림프종, 간 섬유증 및 억제된 선천성 세포내 면역 반응으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 염 또는 그의 결정질 형태.
HCV-연관 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필 피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 염 또는 제4항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 그의 결정질 형태의 용도.
제17항에 있어서, HCV-연관 장애가 HCV 감염, 간 경변증, 만성 간 질환, 간세포 암종, 한랭글로불린혈증, 비-호지킨 림프종, 간 섬유증 및 억제된 선천성 세포내 면역 반응으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 용도.
치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드 염 또는 제4항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 그의 결정질 형태를 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
제19항에 있어서, HCV-연관 장애의 치료를 위한 방법.
제19항에 있어서, HCV-연관 장애가 HCV 감염, 간 경변증, 만성 간 질환, 간세포 암종, 한랭글로불린혈증, 비-호지킨 림프종, 간 섬유증 및 억제된 선천성 세포내 면역 반응으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
(5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 결정질 형태 A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M 또는 N을 (5R,8S)-7-[(2S)-2-{[(2S)-2-시클로헥실-2-({[(2S)-1-이소프로필피페리딘-2-일]카르보닐}아미노)아세틸]아미노}-3,3-디메틸부타노일]-N-{(1R,2R)-2-에틸-1-[(피롤리딘-1-일술포닐)카르바모일]시클로프로필}-10,10-디메틸-7-아자디스피로[3.0.4.1]데칸-8-카르복스아미드의 용액으로부터 결정화시키는 것을 포함하는, 상기 형태의 제조 방법.