KR20130119923A - 항인간 ｃｃｒ７ 항체, 하이브리도마, 핵산, 벡터, 세포, 의약 조성물 및 항체 고정화 담체 - Google Patents

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Abstract

조직의 섬유화나 암의 치료약으로서 유용한 신규의 항인간 CCR7 항체와, 해당 항인간 CCR7 항체를 포함하는 의약 조성물 등을 제공하는 것을 과제로 한다. 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 서열번호 7, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 또는 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 갖는 항인간 CCR7 항체가 제공된다. 서열번호 5 내지 10, 15 내지 20, 25 내지 30, 35 내지 40, 45 내지 50, 55 내지 60, 65 내지 70, 또는 75 내지 80으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 내지 3과 경쇄 CDR1 내지 3을 갖는 항인간 CCR7 항체도 제공된다. CCR7 리간드 자극에 의한 CCR7 의존적인 세포내 정보 전달 기구를 차단하는 활성을 갖는 것임이 바람직하다. 본 발명의 항인간 CCR7 항체는 조직의 섬유화나 암의 치료약의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.

Description

항인간 ＣＣＲ７ 항체, 하이브리도마, 핵산, 벡터, 세포, 의약 조성물 및 항체 고정화 담체{ANTIHUMAN CCR7 ANTIBODIES, HYBRIDOMA, NUCLEIC ACID, VECTOR, CELL, MEDICINAL COMPOSITION, AND ANTIBODY-IMMOBILIZED CARRIER}
본 발명은 항인간 CCR7 항체, 하이브리도마, 핵산, 벡터, 세포, 의약 조성물 및 항체 고정화 담체에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체, 해당 항체를 생산하는 하이브리도마, 해당 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산, 해당 핵산을 갖는 벡터, 해당 벡터를 갖는 세포, 해당 항체를 포함하는 의약 조성물 및 해당 항체가 고정화된 항체 고정화 담체에 관한 것이다.
케모카인은 여러 세포의 유주(遊走)나 세포 기능을 조절하는 사이토카인이다. 케모카인 및 그의 수용체의 기능 이상은 자기 면역 질환, 급성 및 만성 염증, 암이라는 다양한 병의 원인이 되고 있다. 지금까지, 케모카인 및 그의 수용체의 활성을 제어하는 약제의 개발이 이루어져, 임상 응용되고 있지만, 문제를 충분히 해결하고 있다고는 하기 어렵다.
특정한 케모카인이 세포의 유주나 세포 기능의 조절이라는 활성을 발현하기 위해서는, 케모카인 선택적인 세포막 수용체와 결합할 필요가 있다. 케모카인 수용체는 이미 약 20종류 발견되었으며, 어느 케모카인 수용체든 3량체 G 단백질과 결합하는 7회 막 관통형 단백질(GPCR)이다. 케모카인이 수용체에 결합하면, 3량체 G 단백질의 Gα 유닛을 유리시킨다. 그 결과, 세포 내의 Ca 농도를 상승시키거나, 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol) 3-키나제(kinase)(PI3K)나 스몰 로(small Rho) GTPases 경로나 그 밖의 경로를 활성화시켜 기능을 발현시킨다. 어느 케모카인 수용체든, 비교적 선택적인 케모카인에 활성화되기는 하지만, 단백질의 1차 구조나 세포 내의 활성화 기구는 매우 유사하다. 따라서, 특정한 케모카인 수용체의 기능을 선택적으로 차단하는 것은 용이하지 않다. 생리적 및 병의 용태에 있어서의 각 케모카인과 케모카인 수용체의 기능 발현은 각각의 단백질이 특정한 세포나 조직에 특정한 시기(염증 시)에 발현함으로써 제어되고 있다(비특허문헌 1).
인간 CC 모티프 수용체 7(CC 모티프(MOTIF), 리셉터(RECEPTOR) 7; 별칭: EBI1, CMKBR7; 이하, 「CCR7」이라고 칭함)은 당초, 엡스타인 바(EPSTEIN-BARR) 바이러스 감염에 의해 림프구 선택적으로 발현하는 GPCR로서 발견되었다(비특허문헌 2). 그 후, CCR7은, CCL19(별칭: ELC) 및 CCL21(별칭: SLC, 엑소더스(EXODUS) 2)의 선택적 케모카인 수용체인 것을 알았다. CCR7은 생리적 조건 하에서는, CD4 양성 T 세포(Th1, Th2, Treg 세포), 성숙 수상 세포, B 세포라는 세포에 비교적 선택적으로 발현하고 있다. CCR7을 통하여 염증 부위 등의 병소에 이러한 세포가 도인(導引)되어, 염증 반응이나 면역 반응이 항진되는 것이 알려져 있다. 또한 CCR7 이상 활성화가 자기 면역 질환, 급성 및 만성 염증 후의 섬유증, 암 전이라는 다양한 병의 원인이 되고 있다.
인간 CCR7의 아미노산 서열과 유전자의 염기 서열은 이미 알려져 있다(예를 들면, 젠뱅크(GenBank): EAW60669.1).
염증은 조직의 손상이나 감염에 대한 방어 반응이다. 다양한 염증 자극에 응답하여 염증성 분자(케모카인이나 사이토카인)의 발현 항진에 이어, 호중구 및 단구의 침윤을 촉진한다. 염증 반응이 더 항진되면, T 및 B 림프구의 유입으로 병의 용태가 만성화된다. 한편, 염증의 수렴 단계에서는, 지나친 백혈구의 아포토시스나 조직 매크로파지에 의한 탐식이 발생하여, 간질 세포(예를 들면 섬유아 세포)에 의한 손상 조직의 수복이 보인다.
지나친 간질 세포의 분화 증식은 다양한 섬유증(간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 심혈관 섬유증, 소화관 섬유증 및 다른 섬유성 질환)의 증악과 깊게 관련되어 있다. 만성 폐 섬유증은 폐 전체에 걸친 반흔 형성에 기인하며, 예후 불량한 질환이다. 항섬유화 작용을 갖는 피르페니돈, 코르티코스테로이드류(예를 들면 프레드니손) 및/또는 체내의 면역계를 억제하는 그 밖의 약물이 섬유증으로 이어지는 과정을 억제하기 위해 처방된다. 그러나, 지금으로서는 충분한 치료 성적을 올리고 있다고는 하기 어렵다.
한편, 최근, 염증 반응 후의 수복 과정에서의 섬유화의 분자 기구가 명확해지고 있다. 그와 같은 수복 기구로서는, 국소적인 휴지 섬유아 세포가 손상 영역으로 이동하여, 세포 외 매트릭스 단백질을 생성하여, 상처의 수축과 섬유 형성(반흔)을 촉진한다. 또한, 순환하는 섬유아 전구 세포, 섬유아 세포(이들은 혈액 중에 존재함)가 상처나 섬유 형성의 부위로 이동하여, 거기서 이들이 분화되어 조직의 수복이나 그 밖의 섬유화 반응을 중개하는 것이 시사되어 왔다.
혈액 중 섬유아 전구 세포는 CD14+말초 혈단구 전구 세포군이 염증 부위에 침윤하여, 국소로 간질 세포 모양(콜라겐 I형 및 III형, 및 피브로넥틴)으로 분화된다(비특허문헌 3). 이들 세포는, 염증성 사이토카인을 분비함과 동시에, 세포 외 매트릭스 단백질, 다른 사이토카인류를 분비하여, 이들이 섬유 형성을 초래할 수 있다. 혈액 중 섬유아 전구 세포의 염증 부위로의 지나친 침윤을 선택적으로 억제할 수 있으면, 섬유화를 최소한으로 막는 것을 기대할 수 있지만, 아직 임상 응용에는 이르지 않았다.
최근, 섬유아 전구 세포에서 발현하는 케모카인 수용체로서, 상기한 CCR7이 주목받고 있다(특허문헌 1). CCR7을 결손시킨 유전자 변환 동물에게 폐 섬유증이나 신장 섬유증을 발증시키는 자극을 부가해도, 섬유증을 발증하지 않는 것이 기재되어 있다(비특허문헌 4). 따라서, CCR7의 기능을 저분자 화합물, 모노클로날 항체, RNAi 등으로 저해할 수 있으면, 다양한 섬유화를 억제하는 것을 기대할 수 있다. 그러나, 케모카인 수용체의 단백질의 1차 구조나 세포 내의 활성화 기구는 매우 유사하기 때문에, CCR7을 보다 선택적으로 저해할 수 있는 물질이 요구된다. 지금까지 CCR7의 기능을 저해하는 물질(모노클로날 항체 또는 RNAi)의 연구가 행해지고 있지만, 임상 응용까지 도달한 사례는 없다.
또한 한편, 암 치료에 있어서는 원발암의 증식 억제와 원격 전이를 수반하는 재발 예방이 중요하다. 종래의 외과 요법이나 화학 요법 외에, 분자 표적약(예를 들면 키나아제 저해제)이나 항체 의약 요법에 의해 치료 성적은 향상되고 있다. 그러나, 원격 전이를 수반하는 재발암은 예후 불량하여, 새로운 치료약의 개발이 요망되고 있다. 원격 전이의 기구로서는, 원발암으로부터 혈관을 경유하는 경우와 림프 조직을 경유하는 경우가 있다. 지금까지, 세포 외 매트릭스 단백질 분해 효소 저해제(MMP 저해제) 등이 전이 예방약으로서 개발되기는 했지만, 임상 응용까지 도달한 사례는 없다.
다양한 연구에 의해, CCR7이 B 세포 만성 림프성 백혈병, 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 유방암 세포, 악성 유방 종양 등의 다양한 종양 세포에서 발현되는 것이 나타나고 있다. 또한, CCR7은 위암, 흑색종, 비소세포 폐암, T 세포 백혈병 세포 등의 다양한 암의 림프절 전이에 있어서 역할을 하고 있는 것이 밝혀지고 있다(비특허문헌 1). CCR7의 리간드인 CCL19 및 CCL21이 림프절에서 고발현하고 있다는 점에서, 선택적인 CCR7 기능 저해가 암 세포의 림프성 전이를 억제하는 것을 기대할 수 있다.
막 단백질(수용체)에 대한 항체 의약의 주요한 작용 메카니즘은, 해당 단백질을 발현시키는 세포를 항체가 인식한 후, 보체 의존성 세포 용해 작용(CDC) 및 항체 의존성 세포 매개성 세포 장해 작용(ADCC)에 기초하여 제거하는 것이 일반적이었다. 그러나, CDC나 ADCC는 매크로파지 등의 염증 세포의 활성화를 수반하여, 섬유증 치료로서는 반드시 적절하다고는 할 수 없다. 따라서, CCR7을 선택적으로 저해할 수 있는 모노클로날 항체를 섬유증 치료에 응용하는 경우에는, CDC나 ADCC에 의하지 않는 기능성 항체가 바람직하다. 즉, CCR7의 CCL19 또는 CCL21 의존적 세포 내 정보 전달을 선택적으로 차단하는 항체가 바람직하다. 그러나, 일반적으로, GPCR에 대한 기능성 항체를 효율적으로 취득하는 것은 곤란하다.
일본 특허 공표 2009-528977호 공보
Viola A, Luster AD "Chemokines and their receptors: drug targets in immunity and inflammation", Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2008; 48: 171-97 Birkenbach, M., Josefsen, K., Yalamanchili, R., Lenoir, G., Kieff, E., "Epstein-Barr virus-induced genes: first lymphocyte-specific G protein-coupled peptide receptors", J. Virol. 67: 2209-2220, 1993. Pilling D, Fan T, Huang D, Kaul B, Gomer RH. "Identification of markers that distinguish monocyte-derived fibrocytes from monocytes, macrophages, and fibroblasts", PLoS One. 2009 Oct 16; 4(10): e7475 Wada T, Sakai N, Matsushima K, Kaneko S. "Fibrocytes: a new insight into kidney fibrosis", Kidney Int. 2007 Aug; 72(3): 269-73.
본 발명은 섬유증이나 암의 치료약으로서 유용한 신규한 항인간 CCR7 항체와, 해당 항인간 CCR7 항체를 포함하는 의약 조성물 등을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 과제를 해결하기 위한 본 발명의 하나의 양상은, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 서열 번호 7, 서열 번호 17, 서열 번호 27, 서열 번호 37, 서열 번호 47, 서열 번호 57, 서열 번호 67, 또는 서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(중쇄 CDR3)을 갖는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체이다.
마찬가지의 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다른 양상은, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대해, 하기 (A1) 내지 (A8) 중 어느 하나를 만족시키는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체이다.
(A1) 서열 번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A2) 서열 번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A3) 서열 번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A4) 서열 번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A5) 서열 번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A6) 서열 번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A7) 서열 번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A8) 서열 번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐.
마찬가지의 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다른 양상은, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대해, 하기 (B1) 내지 (B8) 중 어느 하나를 만족시키는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체이다.
(B1) 서열 번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B2) 서열 번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B3) 서열 번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B4) 서열 번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B5) 서열 번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 48로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 49로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 50으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B6) 서열 번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 58로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 59로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B7) 서열 번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 69로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 70으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B8) 서열 번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 78로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 79로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 80으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐.
마찬가지의 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다른 양상은, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 그 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열에 대하여, 하기 (C1) 내지 (C8) 중 어느 하나를 만족시키는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체이다.
(C1) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C2) 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C3) 서열 번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C4) 서열 번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C5) 서열 번호 42로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C6) 서열 번호 52로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 54로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C7) 서열 번호 62로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C8) 서열 번호 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 74로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐.
바람직하게는, CCR7 리간드 자극에 의한 CCR7 의존적인 세포 내 정보 전달 기구를 차단하는 활성을 갖는다.
바람직하게는, 인간화 항체 또는 키메라 항체이다.
바람직하게는, 항체 단편, 단일쇄 항체, 또는 다이아바디(Diabody)이다.
본 발명의 다른 양상은, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, R7-01(FERM BP-11369), R7-02(FERM BP-11404), R7-05(FERM BP-11371), R7-09(FERM BP-11372), R7-11(FERM BP-11373), R7-18(FERM BP-11374), R7-25(FERM BP-11375), 또는 R7-47(FERM BP-11376)에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체이다.
본 발명의 다른 양상은, 상기한 항인간 CCR7 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체이다.
본 발명의 또 다른 양상은, R7-01(FERM BP-11369), R7-02(FERM BP-11404), R7-05(FERM BP-11371), R7-09(FERM BP-11372), R7-11(FERM BP-11373), R7-18(FERM BP-11374), R7-25(FERM BP-11375), 또는 R7-47(FERM BP-11376)인 것을 특징으로 하는 하이브리도마이다.
본 발명의 또 다른 양상은, 본 발명의 항인간 CCR7 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산이다.
바람직하게는, 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 51, 서열 번호 53, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 71, 또는 서열 번호 73으로 표시되는 염기 서열을 갖는다.
본 발명의 또 다른 양상은, 상기 핵산을 포함하는 벡터이다.
본 발명의 또 다른 양상은, 상기 벡터가 도입된 세포이다.
본 발명의 또 다른 양상은, 상기한 본 발명의 항인간 CCR7 항체와, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물이다.
바람직하게는, CCR7 리간드에 의한 CCR7 의존적인 세포 내 정보 전달 기구를 차단하는 것이다.
바람직하게는, 조직의 섬유화를 치료하기 위해서 이용된다.
바람직하게는, 상기 조직의 섬유화가 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 심혈관 섬유증, 소화관 섬유증 및 다른 섬유성 질환으로 이루어지는 군에서 선택되는 섬유증이다.
바람직하게는, 상기 간 섬유증이 간경변, 허혈 재관류, 간 이식 후 상해, 괴사성 간염, B형 간염, C형 간염, 원발성 담즙성 간경변, 및 원발성 경화성 담관염으로 이루어지는 군에서 선택된다.
바람직하게는, 상기 간경변이 알코올에 의한 유발, 약물에 의한 유발, 및 화학적인 유발로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나에 의한 것이다.
바람직하게는, 상기 신장 섬유증이 증식성 사구체 신염, 경화성 사구체 신염, 신원성 섬유화성 피부증, 당뇨병성 신증, 신뇨세관 간질성 섬유증, 및 국소 분절성 사구체 경화증으로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.
바람직하게는, 상기 폐 섬유증이 폐 간질성 섬유증, 약물 유발 사르코이도시스, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 천식, 만성 폐색성 폐 질환, 미만성 폐포 손상 질환, 폐 고혈압증, 및 신생아 기관지 폐 형성 이상으로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.
바람직하게는, 상기 피부 섬유증이 강피증, 켈로이드 반흔화, 건선, 비후성 반흔화, 및 의사성 강피증으로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.
바람직하게는, 상기 심혈관 섬유증이 아테롬성 동맥 경화, 관동맥 재협착, 울혈성 심근증, 심부전, 심장 이식, 및 심근 섬유증으로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.
바람직하게는, 상기 소화관 섬유증이 콜라겐 축적 대장염, 융모 위축, 음와 과형성, 폴립 형성, 크론병의 섬유증, 위궤양 치유, 및 복부 유착술 후 반흔으로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.
바람직하게는, 상기 섬유증이 뼈에 관련된 섬유화성 질환으로부터 생기는 상태를 갖고, 류마티스형 판누스 형성이다.
바람직하게는, 암의 전이를 치료하기 위해 이용된다.
바람직하게는, 상기 암이 인두암, 연골육종, 대장암, 췌장암, 백혈병, 유방암으로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.
본 발명의 또 다른 양상은, 상기한 본 발명의 항인간 CCR7 항체가 담체에 고정화되어 이루어지는 항체 고정화 담체이다.
바람직하게는, CCR7 발현 세포를 포함하는 혈액을 접촉시켜, 상기 체액으로부터 CCR7 발현 세포를 제거하기 위해 이용된다.
본 발명의 항인간 CCR7 항체에 따르면, 치료 곤란한 섬유증이나 림프성 암 전이 등에 대한 신규 의약품을 제공할 수 있다.
본 발명의 하이브리도마에 대해서도 마찬가지이며, 치료 곤란한 섬유증이나 림프성 암 전이 등에 대한 신규 의약품의 유효 성분이 되는 항인간 CCR7 항체를 제조할 수 있다.
본 발명의 핵산에 따르면, 본 발명의 항체를 재조합 기술로 생산할 수 있다. 또한, 유전자 치료에 대한 응용도 가능하다.
본 발명의 벡터에 대해서도 마찬가지이며, 본 발명의 항체를 재조합 기술로 생산할 수 있다. 또한, 유전자 치료에의 응용도 가능하다.
본 발명의 세포에 대해서도 마찬가지이며, 본 발명의 항체를 재조합 기술로 생산할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물에 따르면, 치료 곤란한 섬유증이나 림프성 암 전이 등에 대한 신규 의약품을 제공할 수 있다.
본 발명의 항체 고정화 담체에 따르면, 섬유증이나 암 등을 이환하고 있는 환자의 혈액으로부터, CCR7 발현 세포를 선택적으로 제거할 수 있다.
도 1은 R7-01의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 2는 R7-02의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 3은 R7-05의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 4는 R7-09의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 5는 R7-11의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 6은 R7-18의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 7은 R7-25의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 8은 R7-47의 가변 영역의 아미노산 서열과 CDR1 내지 3의 위치를 나타내는 설명도이고, (a)는 중쇄 가변 영역, (b)는 경쇄 가변 영역을 나타낸다.
도 9는 인간 CCR7 유전자 도입 세포와 마우스 컨트롤 IgG의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 막대그래프이다.
도 10은 인간 CCR7 유전자 도입 세포와 항인간 CCR7 항체 R7-47의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 막대그래프이다.
도 11은 세포 내 Ca2 + 농도와 각 첨가물의 농도의 관계를 나타내는 그래프이다.
도 12의 (a)는 아이소 타입 컨트롤 항체와 FITC 표지 항마우스 IgG 항체로 염색한 결과를 나타내는 막대그래프이고, (b)는 R7-47과 FITC 표지 항마우스 IgG 항체로 염색한 결과를 나타내는 막대그래프이다.
도 13은 폐 섬유증을 야기시킨 마우스에게 항인간 CCR7 항체 R7-11, R7-18, 또는 R7-47을 투여한 실험의 결과를 나타내는 그래프이다.
도 14의 (a)는 CHO-K1 세포와 하이브리도마 R7-02 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 2차원 도트 표시도와 막대그래프이고, (b)는 인간 CCR7 유전자 도입 세포와 하이브리도마 R7-02 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 2차원 도트 표시도와 막대그래프이다.
도 15의 (a)는 CHO-K1 세포와 하이브리도마 R7-11 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 2차원 도트 표시도와 막대그래프이고, (b)는 인간 CCR7 유전자 도입 세포와 하이브리도마 R7-11 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 2차원 도트 표시도와 막대그래프이다.
도 16의 (a)는 CHO-K1 세포와 하이브리도마 R7-18 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 2차원 도트 표시도와 막대그래프이고, (b)는 인간 CCR7 유전자 도입 세포와 하이브리도마 R7-18 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 2차원 도트 표시도와 막대그래프이다.
우선, 본 발명의 항체가 특이적으로 인식하는 인간 CCR7에 대하여, 그의 구조를 중심으로 설명한다. 상술한 바와 같이, CCR7은 G 단백질 공액형 수용체(GPCR)의 일종이고, 세포막을 7회 관통하여, 그의 N 말단은 세포 밖을 향하여, C 말단은 세포 내를 향하여 존재하고 있다. 인간 CCR7을 코딩하는 유전자(cDNA)는 이미 단리되어 있고, 인간 CCR7의 아미노산 서열도 알려져 있다. 해당 서열 정보는, 예를 들면 젠뱅크 등의 데이터베이스로부터 얻을 수 있다(예를 들면, 젠뱅크: EAW60669.1). 그 일례로서, 서열 번호 81에 인간 CCR7 유전자의 염기 서열과 상기 염기 서열에 대응하는 아미노산 서열을, 서열 번호 82에 아미노산 서열만을 나타낸다.
인간 CCR7의 각 도메인은, 서열 번호 82에 나타내는 아미노산 서열에 있어서의 이하의 부분에 상당한다고 생각된다. 좌측이 아미노산 번호, 우측이 각 도메인이다. 또한 각 도메인 사이의 경계에 대해서는, 다소의 전후(前後)가 생길 수 있다.
1 내지 24: 막 이행 시그널 펩티드 서열(발현 후에 절단·제거된다)
25 내지 59: N 말단 도메인
87 내지 95: 세포 내 제1 루프 도메인
117 내지 130: 세포 외 제1 루프 도메인
153 내지 170: 세포 내 제2 루프 도메인
192 내지 219: 세포 외 제2 루프 도메인
248 내지 263: 세포 내 제3 루프 도메인
290 내지 313: 세포 외 제3 루프 도메인
332 내지 378: C 말단 도메인
인간 CCR7에는, 서열 번호 82에 나타내는 것 이외에 아미노산 치환체 등의 각종 배리언트가 알려져 있다. 본 발명에서의 「인간 CCR7」에는, 세포 외 도메인을 가지면서 또한 CCR7로서의 기능을 갖는 한, 상기 배리언트가 포함된다.
본 발명의 항인간 CCR7 항체(이하, 단순히 「본 발명의 항체」라고 약기하는 경우가 있음)는 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 것이다. 1개의 양상(제1 양상)에 있어서, 본 발명의 항체는 서열 번호 7, 서열 번호 17, 서열 번호 27, 서열 번호 37, 서열 번호 47, 서열 번호 57, 서열 번호 67, 또는 서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(중쇄 CDR3)을 갖는다.
또한 다른 양상(제2 양상)에 있어서, 본 발명의 항체는, 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대하여, 하기 (A1) 내지 (A8) 중 어느 하나를 만족시킨다.
(A1) 서열 번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A2) 서열 번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A3) 서열 번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A4) 서열 번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A5) 서열 번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A6) 서열 번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A7) 서열 번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A8) 서열 번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐.
또한 다른 양상(제3 양상)에 있어서, 본 발명의 항체는, 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대하여, 하기 (B1) 내지 (B8) 중 어느 하나를 만족시킨다.
(B1) 서열 번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B2) 서열 번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B3) 서열 번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B4) 서열 번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B5) 서열 번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 48로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 49로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 50으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B6) 서열 번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 58로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 59로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B7) 서열 번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 69로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 70으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B8) 서열 번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 78로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 79로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 80으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐.
또한 다른 양상(제4 양상)에 있어서, 본 발명의 항체는, 그의 중쇄 가변 영역(이하, 「VH」라고 약기하는 경우가 있음)과 경쇄 가변 영역(이하, 「VL」이라고 약기하는 경우가 있음)의 아미노산 서열이 이하 (C1) 내지 (C8) 중 어느 하나를 만족시킨다.
(C1) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C2) 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C3) 서열 번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C4) 서열 번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C5) 서열 번호 42로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C6) 서열 번호 52로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 54로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C7) 서열 번호 62로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C8) 서열 번호 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 74로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐.
서열 번호 5(중쇄 CDR1), 서열 번호 6(중쇄 CDR2), 서열 번호 7(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 2(VH)의 아미노산 번호 27 내지 35, 50 내지 66, 97 내지 112의 부분에 상당한다(도 1의 (a)).
서열 번호 8(경쇄 CDR1), 서열 번호 9(경쇄 CDR2), 서열 번호 10(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 4(VL)의 아미노산 번호 24 내지 39, 55 내지 68, 94 내지 102의 부분에 상당한다(도 1의 (b)).
서열 번호 15(중쇄 CDR1), 서열 번호 16(중쇄 CDR2), 서열 번호 17(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 12(VH)의 아미노산 번호 43 내지 51, 66 내지 82, 113 내지 124의 부분에 상당한다(도 2의 (a)).
서열 번호 18(경쇄 CDR1), 서열 번호 19(경쇄 CDR2), 서열 번호 20(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 14(VL)의 아미노산 번호 24 내지 37, 53 내지 59, 87 내지 99의 부분에 상당한다(도 2의 (b)).
서열 번호 25(중쇄 CDR1), 서열 번호 26(중쇄 CDR2), 서열 번호 27(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 22(VH)의 아미노산 번호 30 내지 38, 53 내지 68, 100 내지 111의 부분에 상당한다(도 3의 (a)).
서열 번호 28(경쇄 CDR1), 서열 번호 29(경쇄 CDR2), 서열 번호 30(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 24(VL)의 아미노산 번호 23 내지 36, 52 내지 58, 91 내지 99의 부분에 상당한다(도 3의 (b)).
서열 번호 35(중쇄 CDR1), 서열 번호 36(중쇄 CDR2), 서열 번호 37(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 32(VH)의 아미노산 번호 28 내지 36, 51 내지 67, 98 내지 109의 부분에 상당한다(도 4의 (a)).
서열 번호 38(경쇄 CDR1), 서열 번호 39(경쇄 CDR2), 서열 번호 40(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 34(VL)의 아미노산 번호 23 내지 36, 52 내지 58, 91 내지 99의 부분에 상당한다(도 4의 (b)).
서열 번호 45(중쇄 CDR1), 서열 번호 46(중쇄 CDR2), 서열 번호 47(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 42(VH)의 아미노산 번호 29 내지 37, 52 내지 68, 98 내지 110의 부분에 상당한다(도 5의 (a)).
서열 번호 48(경쇄 CDR1), 서열 번호 49(경쇄 CDR2), 서열 번호 50(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 44(VL)의 아미노산 번호 24 내지 39, 55 내지 61, 94 내지 102의 부분에 상당한다(도 5의 (b)).
서열 번호 55(중쇄 CDR1), 서열 번호 56(중쇄 CDR2), 서열 번호 57(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 52(VH)의 아미노산 번호 30 내지 37, 53 내지 69, 99 내지 111의 부분에 상당한다(도 6의 (a)).
서열 번호 58(경쇄 CDR1), 서열 번호 59(경쇄 CDR2), 서열 번호 60(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 54(VL)의 아미노산 번호 24 내지 39, 55 내지 61, 94 내지 102의 부분에 상당한다(도 6의 (b)).
서열 번호 65(중쇄 CDR1), 서열 번호 66(중쇄 CDR2), 서열 번호 67(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 62(VH)의 아미노산 번호 30 내지 41, 54 내지 69, 100 내지 111의 부분에 상당한다(도 7의 (a)).
서열 번호 68(경쇄 CDR1), 서열 번호 69(경쇄 CDR2), 서열 번호 70(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 64(VL)의 아미노산 번호 24 내지 39, 56 내지 62, 95 내지 102의 부분에 상당한다(도 7의 (b)).
서열 번호 75(중쇄 CDR1), 서열 번호 76(중쇄 CDR2), 서열 번호 77(중쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 72(VH)의 아미노산 번호 27 내지 35, 50 내지 66, 96 내지 109의 부분에 상당한다(도 8의 (a)).
서열 번호 78(경쇄 CDR1), 서열 번호 79(경쇄 CDR2), 서열 번호 80(경쇄 CDR3)은 각각 서열 번호 74(VL)의 아미노산 번호 24 내지 39, 55 내지 61, 94 내지 102의 부분에 상당한다(도 8의 (b)).
본 발명에서 「항체」라는 문언은 「면역 글로불린」으로 치환할 수 있다.
본 발명에서의 항체에는, 그의 기능적 단편이 포함된다. 여기서 「항체의 기능적 단편」이란, 항체(즉 면역 글로불린)의 부분 단편으로서, 항원에 대한 작용을 적어도 1개 유지하는 것을 가리킨다. 상기 부분 단편의 예로서는, F(ab')2, Fab, Fv, 디술피드 결합 Fv, 단일쇄 항체(scFv, VH-VL), VH, 및 이들의 중합체, 및 이들과 중쇄 CH3 영역의 융합체를 들 수 있다. 또한, CDR1, CDR2, CDR3 등의 각 CDR, 및 이들 CDR의 연결체, 및 이들 CDR 또는 CDR 연결체와 중쇄 CH3 영역의 융합체를 들 수 있다. 즉 본 발명의 항체에는, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 것인 한, 상기한 바와 같은 항체의 부분 단편도 포함된다. 항체의 부분 단편을 「항체 단편」이라 칭하는 경우도 있다.
또한, 본 발명의 항체는 다중 특이성 항체일 수도 있다. 예로서는, 이중 특이성 항체의 일종인 다이아바디(국제 공개 제93/11161호 공보 등)를 들 수 있다.
본 발명의 항체가 기능적 단편인 경우에는, 예를 들면 이하와 같은 효과가 있다. 즉, 본 발명의 항인간 CCR7 항체를 후술하는 바와 같은 의약에 응용할 때에 IgG형 등의 전장의 항체를 사용하면, 표적 수용체의 시그널 저해 뿐만 아니라 표적 조직에 장해가 일어나, 이것이 부작용으로 이어지는 경우가 있다. 이러한 경우, 가변 영역만을 이용한 「항체의 기능적 단편」을 채용하면, 상기한 바와 같은 부작용을 회피하기 쉬워진다.
본 발명의 항체의 클래스(아이소타입)는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE 등 어떠한 클래스여도 상관없다. 또한, 본 발명의 항체의 서브 클래스에 대해서도 특별히 한정은 없으며, 예를 들면 IgG이면 IgG1, IgG2, IgG3 등 중 어떠한 서브 클래스여도 상관없다.
바람직한 실시 형태에서는, CCR7 리간드 자극에 의한 CCR7 의존적인 세포 내 정보 전달 기구를 차단하는 활성을 갖는다.
본 발명의 항체에 있어서의 또 다른 양상(제5 양상)은 R7-01(FERM BP-11369), R7-02(FERM BP-11404), R7-05(FERM BP-11371), R7-09(FERM BP-11372), R7-11(FERM BP-11373), R7-18(FERM BP-11374), R7-25(FERM BP-11375) 또는 R7-47(FERM BP-11376)에 의해 생산되는 항인간 CCR7 항체이다. 이들의 8종의 하이브리도마가 생산하는 항체는, 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 것이다.
후술하는 실시예에서 상세히 설명하는 바와 같이, 이들의 하이브리도마에 의해 생산되는 8종의 항체는, 각각 상기한 특정한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 경쇄 가변 영역(VL) 및 각 CDR을 갖는다. 표 1에 VH, VL, 각 CDR의 아미노산 서열의 서열 번호와, 대응하는 클론의 관계를 정리한다.
Figure pct00001
본 발명의 항체를 생산하는 상기 8종의 하이브리도마는 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터(IPOD, 수신자: 닛본 이바라기껭 쯔꾸바시 히가시 1쪼메 1반치 1 주오 제6)에 기탁되어 있다. 기탁의 상세는 이하와 같다.
표시: R7-01
수탁 번호: FERM BP-11369
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21988로부터 이관)
표시: R7-02
수탁 번호: FERM BP-11404
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21989로부터 이관)
표시: R7-05
수탁 번호: FERM BP-11371
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21990으로부터 이관)
표시: R7-09
수탁 번호: FERM BP-11372
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21991로부터 이관)
표시: R7-11
수탁 번호: FERM BP-11373
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21992로부터 이관)
표시: R7-18
수탁 번호: FERM BP-11374
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21993으로부터 이관)
표시: R7-25
수탁 번호: FERM BP-11375
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21994로부터 이관)
표시: R7-47
수탁 번호: FERM BP-11376
수탁일: 평성 22년(2010년) 7월 28일
(2010년 7월 28일에 기탁된 FERM-21995로부터 이관)
본 발명의 항체가 특이적으로 결합하는 인간 CCR7의 세포 외 도메인은 N 말단 도메인, 세포 외 제1 루프 도메인, 세포 외 제2 루프 도메인, 세포 외 제3 루프 도메인 중 어느 것일 수도 있다. 또한, 본 발명의 항체는 이들 세포 외 도메인 중 어느 1개에만 결합하는 것일 수도 있고, 2개 이상에 결합하는 것일 수도 있다.
본 발명의 항체에는, 상기한 제1 내지 제5 양상에 관한 항인간 CCR7 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항인간 CCR7 항체도 포함된다. 바꾸어 말하면, 상기한 제1 내지 제5 양상에 관한 항인간 CCR7 항체의 CDR과 「기능적으로 동등」한 CDR을 갖는 항인간 CCR7 항체도 포함된다. 예를 들면, 후술하는 실시예에서 구체적으로 나타내는 8종의 항인간 CCR7 항체의 에피토프를 인간 CCR7의 부분 펩티드 등을 이용한 에피토프 맵핑법에 의해 해석한다. 또한, 동정된 에피토프를 포함하는 합성 펩티드를 항원으로서 이용하여, 상기 8종의 항인간 CCR7 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항인간 CCR7 항체를 얻을 수 있다. 또한, 얻어진 항인간 CCR7 항체의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 결정하여, 중쇄 CDR1 내지 3과 경쇄 CDR1 내지 3의 아미노산 서열을 특정할 수 있다.
또한, 해당 항인간 CCR7 항체에서의 「기능적으로 동등」한 CDR의 아미노산 서열의 예로서는, 원래의 아미노산 서열(서열 번호 5 내지 10, 15 내지 20, 25 내지 30, 35 내지 40, 45 내지 50, 55 내지 60, 65 내지 70, 75 내지 80)에 있어서 1 또는 수개, 바람직하게는 1 내지 5개, 보다 바람직하게는 1 내지 3개, 더욱 바람직하게는 1개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열이며, CDR로서 동등한 기능을 갖는 것을 들 수 있다. 별도의 예로서는, 상기 원래의 아미노산 서열과의 상동성이 80 ％ 이상, 바람직하게는 90 ％ 이상, 보다 바람직하게는 95 ％ 이상인 아미노산 서열이며, CDR로서 동등한 기능을 갖는 것을 들 수 있다.
2개의 항체에 대하여 에피토프가 동일한지의 여부를 조사하는 방법으로서는, 경합 실험에 의한 방법을 들 수 있다. 예를 들면, 제1 항체인 상기 8종의 항인간 CCR7 항체와 수용체의 결합이 시험 대상인 제2 항체에 의해 경합 저해를 받는 경우에는, 해당 제2 항체는 상기 제1 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 것이라고 할 수 있다.
본 발명의 핵산은, 본 발명의 항체에 있어서의 중쇄 가변 영역(VH) 또는 경쇄 가변 영역(VL)을 코딩하는 것이다. 즉, 제1 양상에 관한 서열 번호 7, 서열 번호 17, 서열 번호 27, 서열 번호 37, 서열 번호 47, 서열 번호 57, 서열 번호 67, 또는 서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 갖는 항인간 CCR7 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산은 본 발명의 핵산에 포함된다. 또한, 제2 양상에 관한 상기 (A1) 내지 (A8) 중 어느 하나를 만족하는 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산은 본 발명의 핵산에 포함된다. 또한, 제3 양상에 관한 상기 (B1) 내지 (B8) 중 어느 하나를 만족하는 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산은 본 발명의 핵산에 포함된다. 또한, 제4 양상에 관한 상기 (C1) 내지 (C8) 중 어느 하나를 만족하는 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산은 본 발명의 핵산에 포함된다. 이들 핵산의 구체예로서는, 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 51, 서열 번호 53, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 71 또는 서열 번호 73으로 표시되는 염기 서열을 갖는 핵산을 들 수 있다.
본 발명의 핵산은 상기 8종의 하이브리도마로부터 PCR 등을 이용하여 취득할 수도 있다.
본 발명의 벡터는 본 발명의 핵산을 포함하는 것이다. 벡터의 종류로서는 특별히 한정은 없으며, 그 후에 도입되는 숙주 세포의 종류 등에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터에는 유전자 치료용 벡터가 포함된다. 이 경우에는, 벡터 그 자체를 생체 내에 직접 투여 가능하다.
본 발명의 세포는 본 발명의 벡터가 도입된 것이다. 세포의 종류로서는, 도입된 벡터가 기능하는 것이면 특별히 한정은 없다. 예로서는, 동물 세포(COS 세포, CHO 세포 등), 효모, 세균(대장균 등), 식물 세포, 곤충 세포 등을 들 수 있다.
본 발명의 항체는, 예를 들면 이하와 같이 하여 제조할 수 있다.
(하이브리도마에 의한 생산)
상기 8종 중 어느 하나의 하이브리도마를 배양하여, 상기 배양물로부터 본 발명의 항체를 생산할 수 있다. 배양의 방법으로서는, 하이브리도마의 배양 방법으로서 일반적으로 채용되고 있는 방법을 그대로 적용할 수 있다. 예를 들면, DMEM이나 RPMI1640과 같은 동물 세포용의 배지를 이용하여 하이브리도마를 배양하고, 그의 배양 상청으로부터 본 발명의 항체를 얻을 수 있다. 동물의 복강 내에서 하이브리도마를 배양하는 경우에는, 복수를 채취하고, 이 복수로부터 본 발명의 항체를 얻을 수 있다.
(유전자 재조합 기술에 의한 생산)
본 발명의 항체는 유전자 재조합법을 이용하여 생산할 수도 있다. 특히, 키메라형 항체, 인간화 항체, 항체의 기능적 단편 등을 생산하는 경우에는, 유전자 재조합법에 의해 생산하는 것이 일반적이다.
우선, 제4 양상에 관한 상기 (C1) 내지 (C8) 중 어느 하나를 만족하는 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 갖는 항체를 생산하는 방법에 대하여 키메라형 항체의 생산을 예로 설명한다. 여기서 「키메라형 항체」란, 중쇄 가변 영역(VH)과 경쇄 가변 영역(VL)이 인간 이외의 동물에서 유래하는 것이며, 중쇄 정상 영역(CH)이나 경쇄 정상 영역(CL) 등의 다른 영역이 인간에서 유래하는 것인 항체를 가리킨다.
우선, 서열 번호 2, 서열 번호 12, 서열 번호 22, 서열 번호 32, 서열 번호 42, 서열 번호 52, 서열 번호 62, 또는 서열 번호 72에 나타내는 아미노산 서열(VH)을 코딩하는 DNA를 제조한다. 마찬가지로, 서열 번호 4, 서열 번호 14, 서열 번호 24, 서열 번호 34, 서열 번호 44, 서열 번호 54, 서열 번호 64, 또는 서열 번호 74에 나타내는 아미노산 서열(VL)을 코딩하는 DNA를 제조한다. 이들의 DNA로서는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 51, 서열 번호 53, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 71, 또는 서열 번호 73에 나타내는 것이 예시되지만, 다른 염기 서열인 것일 수도 있다. DNA의 제조는 PCR 등의 공지된 방법을 이용하여 행할 수 있다. 화학 합성에 의해 해당 DNA를 제조할 수도 있다.
얻어진 VH 또는 VL을 코딩하는 DNA를 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 서열을 갖는 벡터에 각각 삽입하여, 키메라형 항체 발현 벡터를 구축한다. 또한, 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 서열을 갖는 벡터는 시장에서 입수할 수 있다. 구축한 발현 벡터를 숙주 세포에 도입함으로써, 키메라형 항체를 발현하는 재조합 세포를 얻는다. 또한, 이 재조합 세포를 배양하고, 상기 배양물로부터 원하는 키메라형 항체를 취득한다.
상기 숙주 세포로서는, 발현 벡터를 기능할 수 있는 것이면 특별히 한정은 없다. 상술한 바와 같은 동물 세포(COS 세포, CHO 세포 등), 효모, 세균(대장균 등), 식물 세포, 곤충 세포 등을 적절하게 채용할 수 있다.
이어서, 제3 양상에 관한 상기 (B1) 내지 (B8) 중 어느 하나를 만족하는 특정한 CDR을 갖는 항체를 생산하는 방법에 대하여, 인간화 항체의 생산을 예로 설명한다. 여기서 인간화 항체란, CDR이 인간 이외의 동물에서 유래하는 것이며, 그 이외의 영역(프레임 워크 영역이나 정상 영역 등)이 인간에서 유래하는 것인 항체를 가리킨다.
우선, 중쇄 CDR1 내지 3 및 경쇄 CDR1 내지 3을 코딩하는 DNA로서, 서열 번호 5 내지 10, 서열 번호 15 내지 20, 서열 번호 25 내지 30, 서열 번호 35 내지 40, 서열 번호 45 내지 50, 서열 번호 55 내지 60, 서열 번호 65 내지 70, 또는 서열 번호 75 내지 80에 나타내는 아미노산 서열을 코딩하는 각 DNA를 제조한다. 해당 DNA로서는, 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 51, 서열 번호 53, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 71 또는 서열 번호 73에 나타내는 염기 서열에 있어서의 각 CDR 상당 부분의 서열이 예시되지만, 다른 염기 서열인 것일 수도 있다. DNA의 제조는 PCR 등의 공지된 방법을 이용하여 행할 수 있다. 화학 합성에 의해 해당 DNA를 제조할 수도 있다.
이어서, 이들의 DNA를 이용하여, 임의의 인간 항체에 있어서의 VH의 프레임워크 영역(FR)에 중쇄 CDR1 내지 3이 이식된 가변 영역을 코딩하는 DNA를 제작한다. 마찬가지로, 임의의 인간 항체에 있어서의 VL의 FR에 경쇄 CDR1 내지 3이 이식된 가변 영역을 코딩하는 DNA를 제작한다. 제작한 각 DNA를 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 서열을 갖는 벡터에 삽입하여, 인간화 항체 발현 벡터를 구축한다. 구축한 발현 벡터를 숙주 세포에 도입함으로써, 인간화 항체를 발현하는 재조합 세포를 얻는다. 또한, 이 재조합 세포를 배양하여, 상기 배양물로부터 원하는 인간화 항체를 취득한다.
제2 양상에 관한 상기 (A1) 내지 (A8) 중 어느 하나를 만족하는 특정한 CDR을 갖는 항체에 대해서도, 동일한 절차로 생산할 수 있다.
제1 양상에 관한 서열 번호 7, 서열 번호 17, 서열 번호 27, 서열 번호 37, 서열 번호 47, 서열 번호 57, 서열 번호 67, 또는 서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 갖는 항인간 CCR7 항체에 대해서도, 동일한 절차로 생산할 수 있다.
본 발명의 항체의 정제 방법으로서는 특별히 한정은 없으며, 공지된 방법을 채용할 수 있다. 예를 들면, 상기 하이브리도마 또는 상기 재조합 세포의 배양 상청을 회수하고, 각종 크로마토그래피, 염석, 투석, 막 분리 등의 공지된 방법을 조합하여 본 발명의 항체를 정제할 수 있다. 항체의 아이소타입이 IgG인 경우에는, 프로테인 A를 이용한 친화성 크로마토그래피에 의해 간편히 정제할 수도 있다.
또한, 본 발명의 하이브리도마는, 후술하는 실시예에서 설명하는 바와 같이 공지된 하이브리도마 제작 기술을 이용하여 선발 및 취득된 것이다. 여기서, 동물(예를 들면 마우스)에 항원을 면역할 때에는, 정제된 인간 CCR7을 항원으로서 이용할 수도 있지만, 유전자 면역의 방법을 이용할 수도 있다. 특히, 대장균 샤페로닌인 GroEL의 유전자에 CCR7 유전자를 연결시킨 융합 유전자를 면역원으로서 이용함으로써, 항체 제작을 용이하게 행할 수 있는 경우가 있다. 해당 유전자 면역 방법의 상세는 국제 공개 제2006/041157호 공보에 기재되어 있다.
본 발명의 항체는 의약 조성물(치료제)의 유효 성분으로서 유용하다. 본 발명의 의약 조성물은, 본 발명의 항인간 CCR7 항체와, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 것이다. 바람직하게는, CCR7 리간드에 의한 CCR7 의존적인 세포 내 정보 전달 기구를 차단하는 것이다.
바람직한 실시 형태에 있어서, 본 발명의 의약 조성물은 조직의 섬유화를 치료하기 위해 이용된다. 조직의 섬유화의 예로서는 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 심혈관 섬유증, 소화관 섬유증 및 다른 섬유성 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 섬유증을 들 수 있다.
상기 간 섬유증의 예로서는 간경변, 허혈 재관류, 간 이식 후 상해, 괴사성 간염, B형 간염, C형 간염, 원발성 담즙성 간경변 및 원발성 경화성 담관염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 간 섬유증을 들 수 있다. 간경변에 대해서는, 알코올에 의한 유발, 약물에 의한 유발 및 화학적인 유발로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 1개에 의한 것을 들 수 있다. 상기 신장 섬유증의 예로서는 증식성 사구체 신염, 경화성 사구체 신염, 신원성 섬유화성 피부증, 당뇨병성 신증, 신뇨세관 간질성 섬유증 및 국소 분절성 사구체 경화증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 신장 섬유증을 들 수 있다. 상기 폐 섬유증의 예로서는 폐 간질성 섬유증, 약물 유발 사르코이도시스, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 천식, 만성 폐색성 폐 질환, 미만성 폐포 손상 질환, 폐 고혈압증 및 신생아 기관지 폐 형성 이상으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 폐 섬유증을 들 수 있다.
상기 피부 섬유증의 예로서는 강피증, 켈로이드 반흔화, 건선, 비후성 반흔화 및 의사성 강피증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 피부 섬유증을 들 수 있다. 상기 심혈관 섬유증의 예로서는 아테롬성 동맥 경화, 관동맥 재협착, 울혈성 심근증, 심부전, 심장 이식 및 심근 섬유증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 심혈관 섬유증을 들 수 있다. 상기 소화관 섬유증의 예로서는 콜라겐 축적 대장염, 융모 위축, 음와 과형성, 폴립 형성, 크론병의 섬유증, 위궤양 치유 및 복부 유착술 후 반흔으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 소화관 섬유증을 들 수 있다.
또한, 상기 섬유증이 뼈에 관련된 섬유화성 질환으로부터 생기는 상태를 갖고, 류마티스형 판누스 형성일 수도 있다.
또한, 본 발명의 의약 조성물은 암의 전이를 치료하기 위해서도 사용할 수 있다. 상기 암의 예로서는 인두암, 연골육종, 대장암, 췌장암, 백혈병, 유방암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 암을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 경구 또는 비경구적으로 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다. 투여의 형태로서는 주사제형, 경비 투여제형, 경폐 투여제형, 경피 투여형 등을 들 수 있다. 주사제형의 경우에는, 예를 들면 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 복강 내 주사, 피하 주사 등에 의해 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다. 또한, 환자의 연령, 증상에 따라 적절하게 투여 방법을 선택할 수 있다. 본 발명의 항체의 투여량으로서는, 예를 들면 1회에 대하여 체중 1 kg당 0.0001 mg 내지 1000 mg의 범위에서 선택할 수 있다. 또는, 예를 들면 환자당 항체 0.001 내지 100000 mg/body의 범위에서 투여량을 선택할 수 있다. 그러나, 본 발명의 항체의 투여량은 이들 범위로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 항체를 포함하는 의약 조성물은 통상법에 따라 제제화할 수 있다(예를 들면, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, latest edition, Mark Publishing Company, Easton, U.S.A]). 본 발명의 의약 조성물은 약학적으로 허용되는 담체나 첨가물을 포함한다. 상기 담체 또는 상기 첨가물의 예로서는 계면활성제(PEG, Tween 등), 부형제, 산화 방지제(아스코르브산 등), 착색료, 착향료, 보존료, 안정제, 완충제(인산, 시트르산, 다른 유기산 등), 킬레이트제(EDTA 등), 현탁제, 등장화제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 유동성 촉진제, 교미제 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않으며, 그 이외의 상용의 담체 등을 적절하게 사용할 수 있다. 구체적으로는, 경질 무수 규산, 젖당, 결정 셀룰로오스, 만니톨, 전분, 카르멜로오스칼슘, 카르멜로오스나트륨, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리비닐아세탈디에틸아미노아세테이트, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, 중쇄 지방산 트리글리세라이드, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60, 백당, 카르복시메틸셀룰로오스, 옥수수 전분, 무기 염류 등을 들 수 있다. 또한, 그 이외의 저분자량의 폴리펩티드, 혈청 알부민, 젤라틴이나 면역 글로불린 등의 단백질, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 및 리신 등의 아미노산을 포함하고 있을 수도 있다.
주사용의 수용액으로 하는 경우에는, 예를 들면 생리 식염수, 포도당이나 그 이외의 보조약을 포함하는 등장액, 예를 들면 D-소르비톨, D-만노오스, D-만니톨, 염화나트륨을 들 수 있으며, 적당한 용해 보조제, 예를 들면 알코올(에탄올 등), 폴리알코올(프로필렌글리콜, PEG 등), 비이온성 계면활성제(폴리소르베이트 80, HCO-50) 등과 병용할 수도 있다. 또한, 필요에 따라 본 발명의 항체를 마이크로 캡슐(히드록시메틸셀룰로오스, 젤라틴, 폴리[메틸메타크릴산] 등의 마이크로 캡슐)에 봉입하거나, 콜로이드 드러그 딜리버리 시스템(리포솜, 알부민 마이크로스페어, 마이크로에멀전, 나노 입자 및 나노 캡슐 등)으로 할 수도 있다(문헌 ["Remingto's Pharmaceutical Science 16th edition", Oslo Ed. (1980)] 등 참조).
또한, 약제를 서방시키는 기술이 알려져 있으며, 본 발명의 의약 조성물에 적용할 수 있다(문헌 [Langer et al., J. Biomed. Master. Res. 15: 167-277(1981)]; 문헌[Langer, Chem. Tech. 12: 98-105(1982)]; 미국 특허 제3,773,919호; 유럽 특허 출원 공개 제58,481호; 문헌 [Sidman et al., Biopolymers 22: 547-556 (1983)]; 유럽 특허 출원 공개 제133,988호).
또한, 항체에 다른 약제(항섬유화 작용제, 저분자 항암제, 사이토카인 등)를 직접 융합시켜 치료 효과를 높이는 기술이 알려져 있으며, 본 발명의 의약 조성물에 적용할 수 있다.
또한, 본 발명의 항체를 코딩하는 유전자를 유전자 치료용 벡터에 조입(
Figure pct00002
)하여, 유전자 치료약으로 하는 것도 생각된다. 해당 유전자 치료약(재조합 벡터)의 투여 방법으로서는, 네이키드 플라스미드에 의한 직접 투여 이외에, 리포솜 등에 패키징하여 투여하는 방법, 레트로바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터, 아데노 수반 바이러스 벡터, HVJ 벡터 등의 각종 바이러스 벡터에 조입하여 투여하는 방법(문헌 [Adolph 『바이러스 게놈법』, CRC Press, Florid(1996)] 참조), 콜로이드 금 입자 등의 비드 담체에 피복(국제 공개 제93/17706호 공보 등)하여 투여하는 방법 등을 들 수 있다. 즉, 상기 유전자 치료약은 생체 내에서 본 발명의 항체가 발현되고, 그의 작용을 발휘할 수 있는 한, 어떠한 방법에 의해 투여하여도 상관없다. 바람직하게는, 적당한 비경구 경로(정맥 내, 복강 내, 피하, 피내, 지방 조직 내, 유선 조직 내, 흡입 또는 근육 내의 경로를 통해 주사, 주입, 또는 가스 유도성 입자 충격법(전자총 등에 의함), 점비약 등 점막 경로를 통한 방법 등)에 의해 충분한 양이 투여된다. 또한, 상기 유전자 치료약은, 체외에서 리포솜 트랜스펙션, 입자 충격법(미국 특허 제4,945,050호), 또는 바이러스 감염을 이용하여 세포에 투여하고, 상기 세포를 동물에 재도입함으로써 투여할 수도 있다.
또한, 본 발명에는, CCR7 시그널의 이상 항진에 의해 발증하는 질환 또는 질병에 이환된 포유 동물의 상기 질환에 관한 치료 방법과 치료약도 포함된다.
여기서 「치료」란, 질환에 이환될 우려가 있거나 또는 이환된 포유 동물에 있어서, 상기 질환의 병태의 진행 및 악화를 저지 또는 완화하는 것을 의미하며, 이에 따라 상기 질환의 다양한 증상 등의 진행 및 악화를 저지 또는 완화하는 것을 목적으로 하는 치료적 처치의 의미로서 사용된다.
또한, 「질환」이란, CCR7 시그널의 이상 항진에 기인하여 발증하는 질환 전반을 의미하며, 특별히 한정되는 것은 아니고, 예를 들면 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 심혈관 섬유증, 소화관 섬유증 및 다른 섬유성 질환을 포함하는 개념이다. 또한, 인두암, 연골육종, 대장암, 췌장암, 백혈병, 유방암을 원발로 하는 암 전이를 포함하는 개념이다. 치료의 대상이 되는 「포유 동물」은 포유류로 분류되는 임의의 동물을 의미하며, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 인간 이외에 개, 고양이, 토끼 등의 애완 동물, 소, 돼지, 양, 말 등의 가축 동물 등을 말한다. 특히 바람직한 「포유 동물」은 인간이다.
본 발명의 항체 고정화 담체는, 본 발명의 항인간 CCR7 항체가 담체에 고정화되어 이루어지는 것이다. 바람직한 실시 형태에서는, 본 발명의 항체 고정화 담체는 CCR7 발현 세포를 포함하는 혈액을 접촉시켜, 상기 체액으로부터 CCR7 발현 세포를 제거하기 위해 이용된다. 담체에 고정화되는 항인간 CCR7 항체는 1종류 뿐일 수도 있고, 2종 이상일 수도 있다.
본 발명의 항체 고정화 담체의 구체적 형태로서는, 예를 들면 본 발명의 항체가 수불용성 담체에 고정되어, 용기에 충전된 것을 들 수 있다. 여기서, 수불용성 담체로서는 어떠한 재질도 사용 가능하지만, 성형성, 멸균성이나 세포 독성이 낮다는 점에서 바람직한 것을 열기하면, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 아크릴 수지, 나일론, 폴리에스테르, 폴리카르보네이트, 폴리아크릴아미드, 폴리우레탄 등의 합성 고분자, 아가로오스, 셀룰로오스, 아세트산셀룰로오스, 키틴, 키토산, 알긴산염 등의 천연 고분자, 히드록시 인회석, 유리, 알루미나, 티타니아 등의 무기 재료, 스테인리스, 티탄 등의 금속 재료를 들 수 있다.
담체의 형상으로서는 입상, 면상, 직포, 부직포, 스폰지상 다공질체, 평판상 등을 들 수 있지만, 부피당의 표면적이 크다는 점에서 입상, 면상, 직포, 부직포, 스폰지상 다공질체가 바람직하다. 예를 들면, 항체가 고정된 수불용성 담체를 미리 용기에 충전한 다공질체 필터에 말초 혈액을 통과시켜, 질환에 관한 CCR7 발현 세포를 효율적으로 제거할 수 있다.
본 발명의 항체 고정화 담체와 다른 구성 요소를 조합하여, CCR7 발현 세포 제거용 키트를 제작할 수 있다. 상기 다른 구성 요소로서는 항응고제, 체외 순환 회로 등을 들 수 있다.
본 발명은 하기 (1) 내지 (5)의 항인간 CCR7 항체를 포함한다.
(1) 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 서열 번호 7, 서열 번호 17, 서열 번호 27, 서열 번호 37, 서열 번호 47, 서열 번호 57, 서열 번호 67, 또는 서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(중쇄 CDR3)을 갖는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
(2) 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대하여, 하기 (A1) 내지 (A8) 중 어느 하나를 만족하는 것을 특징으로 하는, 상기 (1)에 기재된 항인간 CCR7 항체.
(A1) 서열 번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A2) 서열 번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A3) 서열 번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A4) 서열 번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A5) 서열 번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A6) 서열 번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A7) 서열 번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
(A8) 서열 번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐.
(3) 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대하여, 하기 (B1) 내지 (B8) 중 어느 하나를 만족하는 것을 특징으로 하는, 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 항인간 CCR7 항체.
(B1) 서열 번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B2) 서열 번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B3) 서열 번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B4) 서열 번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B5) 서열 번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 48로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 49로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 50으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B6) 서열 번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 58로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 59로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B7) 서열 번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 69로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 70으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
(B8) 서열 번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
서열 번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
서열 번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
서열 번호 78로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
서열 번호 79로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
서열 번호 80으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐.
(4) 그의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열에 대하여, 하기 (C1) 내지 (C8) 중 어느 하나를 만족하는 것을 특징으로 하는, 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 기재된 항인간 CCR7 항체.
(C1) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C2) 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C3) 서열 번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C4) 서열 번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C5) 서열 번호 42로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C6) 서열 번호 52로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 54로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C7) 서열 번호 62로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
(C8) 서열 번호 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 74로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐.
(5) R7-01(FERM BP-11369), R7-02(FERM BP-11404), R7-05(FERM BP-11371), R7-09(FERM BP-11372), R7-11(FERM BP-11373), R7-18(FERM BP-11374), R7-25(FERM BP-11375) 또는 R7-47(FERM BP-11376)에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는, 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 항인간 CCR7 항체.
본 발명은 유효량의 상기 항인간 CCR7 항체를 투여하는 조직의 섬유화 또는 암의 전이의 치료 방법을 포함한다. 조직의 섬유화와 암의 구체예는 상술한 바와 같다.
본 발명은 조직의 섬유화 또는 암의 전이의 치료제 제조를 위한 상기 항인간 CCR7 항체의 사용을 포함한다. 또한, 본 발명은 조직의 섬유화 또는 암의 전이의 치료용의 상기 항인간 CCR7 항체를 포함한다. 조직의 섬유화와 암의 구체예는 상술한 바와 같다.
실시예
이하, 실시예로 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
(1) 인간 CCR7(hCCR7) 유전자의 제조
유전자 뱅크 등록이 완료된 인간 CCR7 유전자 서열(NM_001838, 서열 번호 81)의 5' 말단에 GCTAGC 서열, 3' 말단에 GTCGACTAGGAATTC 서열(서열 번호 83)을 부가한 인공 합성 유전자를 DNA 합성 장치에 의해 제작하였다. 그 후, 이 유전자를 pUC57 클로닝 벡터에 도입하여, 인간 CCR7 유전자 클론을 제조하였다. 이하, 얻어진 벡터를 NheI와 SalI 사이트에서 절단하여 제조되는 유전자 단편을 「DNA 단편 A」라 칭하고, NheI와 EcoRI 사이트에서 절단하여 제조되는 유전자 단편을 「DNA 단편 B」라 칭한다.
(2) GroEL 서브 유닛 유전자의 단리
대장균 HMS174(DE3)주(노바젠사)로부터 게놈 DNA를 추출ㆍ정제하였다. 이어서, 정제한 게놈 DNA를 주형으로 하고, 서열 번호 84 및 85에 나타내는 염기 서열을 갖는 올리고 뉴클레오티드를 프라이머쌍으로서 PCR을 행하여, 서열 번호 86에 나타내는 염기 서열을 갖는 GroEL 서브 유닛 유전자를 포함하는 DNA 단편(이하, 「DNA 단편 C」라 칭함)을 증폭하였다. DNA 단편 C에는, 프라이머에서 유래하고, 5' 말단에 SalI 사이트, 3' 말단에 2개의 정지 코돈(TAATAG)을 코딩하는 서열 및 NotI 사이트가 도입되었다.
(3) 인간 CCR7과 GroEL 서브 유닛의 융합 단백질을 발현하는 유전자 면역용 벡터의 구축
포유 동물 발현 벡터 pCI 머메일리언 익스프레션 벡터(Mammalian Expression Vector)(프로메가사)를 제한 효소 NheI와 SalI로 소화하고, 박테리아 유래 알칼리 포스파타아제(BAP)로 말단을 탈인산화 처리한 후, 상기 (1)에서 제조한 DNA 단편 A를 삽입하였다. 또한, 이 발현 벡터를 SalI 및 NotI로 소화하고, BAP로 말단을 탈인산화 처리한 후, 상기 (2)에서 제조한 DNA 단편 C를 삽입하여, 벡터 pCI-hCCR7ㆍGroEL을 구축하였다. 즉, 벡터 pCI-hCCR7ㆍGroEL은 인간 CCR7을 코딩하는 유전자와 GroEL 서브 유닛을 코딩하는 유전자의 융합 유전자를 갖고 있다.
(4) 인간 CCR7 유전자 도입 안정 발현 세포의 제작
상기 (1)에서 제조한 DNA 단편 B를 pCIneo(프로메가사)의 NheI-EcoRI 사이트에 도입하여, pCIneo-hCCR7을 구축하였다.
리포펙타민(Lipofectamin) 용액 37.5 μL와, OPTI-MEMI 배지 625 μL와, 20 μg의 pCIneo-hCCR7을 포함하는 OPTI-MEMI 배지 625 μL를 혼화하였다. 이 혼화액을 이용하여, pCIneo-hCCR7을 2×105개의 CHO-K1 세포(다이니폰 세이야꾸사)에 도입하였다. 대조로서, pCIneo만을 CHO-K1 세포에 도입하였다. 유전자가 도입된 각 CHO-K1 세포를 Ham's F12K+10 ％ FBS 배지(ICN사)에서 30시간 동안 배양하였다. 또한, 각 세포를 박리, 현탁하여 100 mm 디쉬에 5×105개를 뿌리고, 항생 물질 G418(프로메가사)을 0.8 mg/mL의 농도로 함유하는 Ham's F12K+10 ％ FBS 배지에서 2주간 약제 처리를 행하였다. 약제 처리 후, 한계 희석법에 의해 G418 내성 세포를 클로닝하였다. 또한, Ca 시그널 응답을 증대시키기 위해, 클로닝한 세포에 pCEP-Gα16(몰레큘러 디바이스(Molecular Devices)사)을 유전자 도입하고, 항생 물질 하이그로마이신을 0.2 mg/mL의 농도하에 동일하게 약제 처리를 행하고, 그 후 하이그로마이신 내성 세포의 클로닝을 행하였다. 이상의 조작에 의해, 인간 CCR7 유전자 도입 안정 발현 세포를 제작하였다. 이어서, 이 세포 위의 CCR7 기능 활성을 확인하기 위해 이하의 평가를 행하였다. 세포는 2×104개/100 μL의 초기 세포 농도로 96 구멍 마이크로 타이터 플레이트를 이용하여 1일간 배양하고, 배양 종료 후, 10-6 내지 10-12 M의 농도 범위 내의 CCL21(R&D 시스템사)에 의해 각 세포를 자극한 바, 세포 내의 Ca2+ 농도가 일과적으로 상승하였다. Ca2 + 농도는, Ca2 + 시그널 해석 장치(FLIPR; 몰레큘러 디바이스사) 및 세포 내 Ca2 + 염색 키트(Ca3kit; 몰레큘러 디바이스사)를 이용하여 측정하였다. 이로부터, 활성형 인간 CCR7이 CHO-K1 세포막 위에 정상적으로 안정 발현하고 있다는 것을 알 수 있었다.
(5) 유전자 면역
생리 식염수에 벡터 pCI-hCCR7ㆍGroEL을 250 μg/mL의 농도가 되도록 용해하여, 면역용 조성물을 제조하였다. 이 면역용 조성물을 8주령의 마우스 BALB/c(암컷)의 양쪽 다리 대퇴근에 각 0.12 mL씩 주사를 행하여, 면역하였다(0일째). 이에 따라, pCI-hCCR7ㆍGroEL을 양쪽 다리에 각 30 μg씩, 즉 1마리에 대하여 1회당 60 μg 투여하였다. 그 후, 7일째, 21일째 및 28일째에도 동일하게 반복하여 면역하였다. 또한, 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42일째에 채혈을 행하여, 혈청을 제조하였다. 대조로서, hCCR7을 단독으로 발현하는 벡터 pCI-hCCR7을 이용하여 마우스를 면역하였다.
(6) 유세포 분석기에 의한 활성형 인간 CCR7에 대한 혈청 중 항체 결합성 평가
pCIneo-hCCR7이 도입되어 안정 발현을 확인한 CHO-K1 세포(이하, 「hCCR7 유전자 도입 세포」라 칭함) 및 pCIneo가 도입된 CHO-K1 세포(대조의 세포)를 PBS로 세정하였다. 면역 후 56일째의 혈청을 500배 희석하고, 각 세포와 함께 인큐베이팅하였다. 또한, 각 세포를 PBS로 세정하고, 2차 항체로서 피코에리트린 표지 항마우스 IgG 항체(벡크만 콜터사)를 첨가한 후, 유세포 분석기 FACScalibur(벡톤 디킨슨사)를 이용하여, 각 세포와 혈청 중의 항인간 CCR7 항체의 상호 작용을 해석하였다.
그 결과, 인간 CCR7 유전자 도입 세포를 이용한 경우에는, 유전자 면역 전의 혈청에서는 피코에리트린이 거의 검출되지 않지만, 유전자 면역 후의 혈청에서는 검출되었다. 이것은, 면역 후의 혈청 중의 항인간 CCR7 항체가 인간 CCR7 유전자 도입 세포에 결합하는 것을 나타내고 있었다. 한편, 대조의 세포를 이용한 경우에도, 유전자 면역 후의 혈청에서도 피코에리트린이 검출되지 않았다. 이것은, 면역 후의 혈청 중의 항인간 CCR7 항체가 대조의 세포에 결합하고 있지 않은 것을 나타내고 있었다.
이상의 점으로부터, 벡터-pCI-hCCR7·GroEL에 의한 유전자 면역에 의해서, 마우스 혈청 중에 활성형 인간 CCR7의 세포 외 도메인을 특이적으로 인식하는 항체의 생산을 유도할 수 있었다.
(7) 항인간 CCR7 모노클로날 항체의 제작
상기 (5)와 동일한 절차로 유전자 면역한 마우스 6마리에 대하여 추가 면역을 행하였다. 추가 면역의 3일 후에 비장을 적출하여, 비장 세포를 제조하였다. PEG법에 의해, 1×108개의 비장 세포와, 1×107개의 BALB/C 마우스 유래의 HAT 선택성의 미엘로마 SP2/0 세포를 융합하였다(세포 융합). 융합한 세포(하이브리도마)의 집단을 RPMI 배지에 현탁하여, 96 구멍 마이크로플레이트 14매의 각 구멍에 파종하였다. 이 단계에서 약 990종의 하이브리도마가 얻어졌다.
세포 융합의 다음날부터 2주간, 3일에 1번의 빈도로 상기 마이크로플레이트내의 배지를 HAT 미디어 서플리멘트(Media Supplement)(50×)(시그마사, 품번: H0262)를 첨가한 RPMI 배지로 대체하였다.
상기 (6)과 동일한 유세포 분석기에 의해서 항체 결합 평가를 행하고, 인간 CCR7 유전자 도입 세포와 각 구멍의 하이브리도마 배양 상청 중의 항체와의 결합성을 조사하였다. 그 결과, 8구멍에서 항체와의 결합성이 확인되었다.
항체와의 결합성이 확인된 8종의 하이브리도마에 대해서, 한계 희석법에 의한 클로닝을 행하였다. 즉, 8종의 하이브리도마에 대해서 96 구멍 마이크로플레이트에 세포 1개 이하/구멍이 되도록 파종하여 배양하였다. 2주간 후, 동일한 유세포 분석기를 행하여, 클로닝된 배양 상청 중의 항체(항인간 CCR7 모노클로날 항체)의 결합성을 확인하였다. 그 결과, 항인간 CCR7 모노클로날 항체를 생산하는 8종의 하이브리도마가 클로닝되었다.
각 하이브리도마에 대해서 RPMI 배지 100 mL 내에서 플라스크 배양을 2주간 행하였다. 각 배양 상청을 프로테인 G 칼럼(아마샴 바이오사이언스사)에 제공하여 정제·농축하고, 정제된 8종의 항인간 CCR7 모노클로날 항체를 각각 약 20 mg 얻었다.
각 하이브리도마를 IPOD에 기탁하였다. 각 하이브리도마의 표시와 수탁번호는 상술한 바와 같다.
각각의 항인간 CCR7 모노클로날 항체(이하, 단순히 「항인간 CCR7 항체」라고 칭함)에 대해서, 이하에 나타내는 시험을 행하였다. 이하의 기재에 있어서, 하이브리도마의 표시를 항체명으로서도 이용하는 것으로 한다.
(8) 유세포 분석기에 의한 인간 CCR7 유전자 도입 세포에 대한 결합성 평가
10 μg/mL 농도의 항인간 CCR7 모노클로날 항체 및 마우스 컨트롤 IgG(테르모(Thermo), 음성 대조)의 PBS 용액을 제조하였다(이하, 「항체 용액」이라고 칭함). 한편, 인간 CCR7 유전자 도입 세포를 PBS로 세정한 후, 항체 용액을 세포와 함께 인큐베이팅하였다. 또한, 세포를 PBS로 세정하고, 2차 항체로서 피코에리트린 표지 항마우스 IgG 항체(벡크만 콜터사)를 첨가한 후, 유세포 분석기 FACScalibur(벡톤 디킨슨사)를 이용하여, 세포와 항인간 CCR7 항체 및 마우스 컨트롤 IgG의 상호 작용을 해석하였다. 결과를 도 9, 10 및 표 2에 나타내었다. 도 9는 인간 CCR7 유전자 도입 세포와, 마우스 컨트롤 IgG과의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 막대그래프이다. 도 10은 인간 CCR7 유전자 도입 세포와, 항인간 CCR7 항체 R7-47의 상호 작용의 해석 결과를 나타내는 막대그래프이다. 표 2는 인간 CCR7 유전자 도입 세포와, 각 항인간 CCR7 항체와의 상호 작용의 해석 결과로부터 산출된 특이적 결합 세포의 비율을 나타낸다. 도 9, 10에 있어서, 종축은 세포수, 횡축은 피코에리트린(PE) 유래의 형광 강도를 나타낸다. 또한, 2개의 영역(M1, M2) 중, M2(우측 영역)에 속하는 세포가 항체와 결합한 세포를 나타낸다. 표 2에 있어서, 특이적으로 결합한 세포의 비율은 M2/(M1+M2)으로 표시된다.
그 결과, 인간 CCR7 유전자 도입 세포를 이용한 경우에는, M2의 영역에 많은 세포가 검출된다(도 10, 표 2). 이것은, 각 항인간 CCR7 항체가 인간 CCR7 유전자 도입 세포에 결합하는 것을 나타내고 있었다. 한편, 마우스 컨트롤 IgG을 이용한 경우(도 9)에는, M2의 영역에는 거의 세포가 검출되지 않았다. 이것은, 마우스 컨트롤 IgG이 인간 CCR7 유전자 도입 세포에 결합하고 있지 않은 것을 나타내고 있었다. 이상의 점으로부터, 얻어진 항인간 CCR7 항체는, 모두 활성형 인간 CCR7의 세포 외 도메인을 특이적으로 인식하는 것임이 나타내어졌다.
Figure pct00003
(9) 세포내 Ca2 + 시그널 전달 저해 활성 평가
인간 CCR7 유전자 도입 세포를, 2×104개/100μL의 초기 세포 농도로, 96 구멍 마이크로타이터 플레이트를 이용하여 1일간 배양하였다. 배양 종료 후, 각 구멍에 10-6 내지 10-11 M의 농도 범위 내의 항인간 CCR7 항체를 첨가하였다. 또한 대조로서, 마우스 컨트롤 IgG(테르모사, 음성 대조)를 마찬가지로 10-6 내지 10-11 M의 농도 범위 내로 첨가한 것도 제조하였다. 1시간 후, 1×10-7 M의 CCL21(R&D 시스템사)에 의해서 각 세포를 자극했을 때의 세포내 Ca2 + 농도의 일과적 상승의 항체 농도 의존적 감소도를 측정하였다. Ca2 + 농도의 측정은 Ca2 +시그널 해석 장치(FLIPR; 몰레큘러 디바이스사) 및 세포내 Ca 염색 키트(Ca3kit; 몰레큘러 디바이스사)를 이용하여 행하였다. 항인간 CCR7 항체 R7-47을 첨가한 결과를 도 11에 나타내었다. 도 11은 세포내 Ca2 + 농도와 각 첨가물의 농도와의 관계를 나타내는 그래프이다. 도 11에 나타낸 바와 같이, R7-47의 농도 의존적으로, 세포내 Ca2 + 농도의 저하를 볼 수 있었다. 이것은, R7-47이 CCL21과 인간 CCR7과의 결합을 경합적으로 저해한 결과, 세포내에의 시그널 전달이 저해된 것을 나타내고 있었다. 50％ 저해 농도(IC50)를 산출하면, R7-47에서는 7.4 nM이었다. 표 3은, R7-47 이외의 항인간 CCR7 항체의 IC50을 나타낸다.
이상으로부터, 얻어진 항인간 CCR7 항체는, 모두 인간 CCR7 리간드에 의한 CCR7 의존적인 세포내 정보 전달 기구를 차단할 수 있는 것이 나타내어졌다.
Figure pct00004
(10) 아이소타입 해석
마우스모노클로날 항체 아이소타이핑 키트(GE 헬스케어사)를 이용하여, 항인간 CCR7 항체의 아이소타입을 결정하였다. 검출은 호스라디슈 퍼옥시다아제 표지 마우스 IgG 항체를 이용한 샌드위치 ELISA에 의하였다. 결과를 표 4에 나타내었다.
Figure pct00005
(11) 항체 가변 영역의 cDNA 클로닝, 및 상보성 결정 영역(CDR)의 결정
상기 8종의 하이브리도마로부터, 각 항체의 L쇄 및 H쇄의 가변 영역을 코딩하는 DNA를 클로닝하고, 그의 염기 서열을 결정하였다. 클로닝은 이하와 같이 행하였다. 우선 하이브리도마로부터 알엔이지미니 키트(RNeasyMini Kit)(퀴아젠(QIAGEN)사)를 이용하여 RNA를 단리하였다. 다음으로, 「SMARTer-RACE cDNA 앰플리피케이션 키트(Amplification Kit)」(다카라바이오사)를 이용하여, 메이커 메뉴얼에 따라서 5'-RACE법에 의한 cDNA 합성, 및 PCR 산물을 얻었다. PCR의 3'측 프라이머로서, γ쇄의 경우에는 서열번호 87의 서열을, κ 쇄의 경우에는 서열번호 88 내지 90의 서열을, λ쇄의 경우에는 서열번호 91의 서열을 각각 사용하였다.
얻어진 DNA 단편을 pT7 블루 티 벡터(Blue T Vector)(노바젠사)에 DNA 라이게이션 키트(Ligation kit) ver.2(다카라바이오사)에 삽입하였다. 이 벡터로 XL10골드(Gold)(스트라타진사)를 트랜스폼하여, X-gal, 암피실린, IPTG 함유 플레이트에 파종 후, 흰 콜로니를 픽업하였다. 정상적인 크기의 인서트를 포함하는 클론 각 5종으로부터 플라스미드를 제조 후, ABI PRISM 3130형 자동 시퀀서를 이용하여 DNA 배열을 결정하였다. 결정한 배열은 일부에 PCR 에러에 기인한다고 생각되는 변이가 보인 것 이외에는 3클론 모두 동일 배열을 나타내었기 때문에, 그 배열을 갖고 목적으로 하는 DNA 배열로 하였다. 얻어진 염기 서열과 대응하는 아미노산 서열을 서열번호 1(R7-01의 VH), 서열번호 3(R7-01의 VL), 서열번호 11(R7-02의 VH), 서열번호 13(R7-02의 VL), 서열번호 21(R7-05의 VH), 서열번호 23(R7-05의 VL), 서열번호 31(R7-09의 VH), 서열번호 33(R7-09의 VL), 서열번호 41(R7-11의 VH)와 43(R7-11의 VL), 서열번호 51(R7-18의 VH), 서열번호 53(R7-18의 VL), 서열번호 61(R7-25의 VH), 서열번호 63(R7-25의 VL), 서열번호 71(R7-47의 VH), 서열번호 73(R7-47의 VL)에 나타내었다.
각 염기 서열에 대응하는 아미노산 서열만을 서열번호 2(R7-01의 VH), 서열번호 4(R7-01의 VL), 서열번호 12(R7-02의 VH), 서열번호 14(R7-02의 VL), 서열번호 22(R7-05의 VH), 서열번호 24(R7-05의 VL), 서열번호 32(R7-09의 VH), 서열번호 34(R7-09의 VL), 서열번호 42(R7-11의 VH)와 44(R7-11의 VL), 서열번호 52(R7-18의 VH), 서열번호 54(R7-18의 VL), 서열번호 62(R7-25의 VH), 서열번호 64(R7-25의 VL), 서열번호 72(R7-47의 VH), 서열번호 74(R7-47의 VL)에 나타내었다.
각 VH와 VL에 대해서, CDR1 내지 3을 특정하였다(서열번호 5 내지 10, 15 내지 20, 25 내지 30, 35 내지 40, 45 내지 50, 55 내지 60, 65 내지 70, 75 내지 80). 도 1 내지 9 및 표 1을 참조할 것.
(12) 인간 초대 배양 세포를 이용한 항인간 CCR7 항체의 결합 확인
건상인의 말초혈로부터, 통상법에 따라서 림포프레프(Lymphoprep)(아식스-쉴드(Axis-Shield)사)를 이용하여 단핵구세포(PBMC)를 단리하였다. 단리한 PBMC를, 1 mg/mL의 인간 감마 글로불린(잭슨 이뮤노 리서치 라보래토리(Jackson Immuno Research Laboratories)사)을 포함하는 포스페이트 버퍼드 살린(Phosphate Buffered Saline)(PBS) 용액에 현탁하고, 실온에서 30분간 인큐베이팅함으로써 블록킹하였다. 블록킹 후의 PBMC(3×105 세포)를 각 항인간 CCR7 항체(0.5 μg) 또는 아이소타입 컨트롤 항체(0.5 μg)와 같이 4℃에서 1시간 인큐베이팅하였다. 그 후, PBMC를 세정 버퍼(0.1％ 소태아혈청을 포함하는 PBS 용액)로 3회 세정하였다. 다음으로 2차 항체로서, 플루오레세인이소티오시아네이트(FITC) 표지 항마우스 IgG 항체(벡크만 콜터사)를 첨가하여, 4℃에서 1시간 인큐베이팅하였다. 이 PBMC를 재차 세정 버퍼로 3회 세정한 후, 유세포 분석기(벡크만 콜터사 제조)를 이용하여 분석하였다.
R7-47을 이용했을 때의 유세포 분석기의 결과를 도 12에 나타내었다. 도 12의 (a)는 아이소타입 컨트롤 항체와 FITC 표지 항마우스 IgG 항체로 염색한 결과를, 도 12의 (b)는 R7-47과 FITC 표지 항마우스 IgG 항체로 염색한 결과를 각각 나타낸다. 도 12의 (a), (b)의 양 화살표로 나타내는 부분은, 각각 아이소타입 컨트롤 항체와 R7-47이 특이적으로 결합한 세포 집단을 나타내고 있다. 또한 도면 중의 숫자는, 분석한 PBMC의 세포수를 100％로 했을 때의 상기 세포 집단의 비율을 나타낸다.
PBMC 중에서 각 항인간 CCR7 항체가 특이적으로 결합한 세포의 비율을 표 5에 나타내었다.
Figure pct00006
이들 결과로부터, 해당 항인간 CCR7 항체가 인간 천연형 CCR7을 인식하여, 인간 천연형 CCR7에 결합할 수 있는 것이 나타내어졌다.
(13) 인간 초대 배양 세포를 이용한 항인간 CCR7 항체의 기능성 확인
PBMC(1.6×105 세포)를 24웰 셀 컬쳐 인서트(벡톤 디킨슨사)의 인서트에 파종하였다. 또한, 각 항인간 CCR7 항체 또는 아이소타입 컨트롤 IgG 항체 10 μg/mL을 첨가하고, 실온에서 5분간 반응시켰다. 셀 컬쳐 인서트의 각 웰에는 인간 리콤비넌트 CCL21(150 ng/mL)를 첨가하였다. 인서트를 플레이트 상에 설치 후, 37℃에서 1.5시간 반응시켰다. 반응 후, 인서트를 제거하고, 각 웰 중에 유주한 세포수를 측정하였다. 표 6과 표 7에, CCL21 의존적 세포 유주에 대한 해당 항체에 의한 기능 저해의 결과를 나타낸다.
Figure pct00007
Figure pct00008
우선, CCL21 미첨가와 CCL21 첨가의 비교로부터, PBMC의 일부의 세포가 CCL21 의존적으로 세포 유주하는 것이 나타내어졌다. 그리고, 아이소타입 컨트롤(IgG1 또는 IgG2) 항체를 첨가하더라도, CCL21 의존적인 세포 유주에는 영향을 주지 않았다. 한편, 해당 항체를 첨가한 경우에는, 8종의 항체 모두가 CCL21 의존적인 세포 유주를 유의하게 억제하였다. 이들 결과로부터, 해당 항인간 CCR7 항체의 모두가 인간 천연형 CCR7의 기능을 억제하는 것이 나타내어졌다.
(14) 항인간 CCR7 항체의 폐 섬유증 모델에 있어서의 조직섬유화 형성의 저해 작용의 확인
인간 PBMC 중의, CCR7을 발현하는 CD14 양성 세포는, 폐섬유에 있어서의 섬유화 형성에 중요한 세포이다(문헌 [Abe R, Donnelly SC, Peng T, Bucala R, Metz CN, "Peripheral blood fibrocytes: differentiation pathway and migration to wound sites." J Immunol. 2001 Jun 15; 166(12): 7556-62]; 문헌 [Curnow SJ, Fairclough M, Schmutz C, Kissane S, Denniston AK, Nash K, Buckley CD, Lord JM, Salmon M, "Distinct types of fibrocyte can differentiate from mononuclear cells in the presence and absence of serum." PLoS One. 2010 Mar 18; 5(3): e9730]). 항인간 CCR7 항체의 폐 섬유증에 있어서의 유효성은, 면역 부전 마우스(예를 들면 SCID 마우스)에 폐 섬유증을 유발시키는 자극 물질(예를 들면 블레오마이신)을 투여 후, 인간 유래의 CCR7을 발현하는 CD14 양성 세포를 이입했을 때의 해당 세포의 폐조직에의 이행을 조사함으로써 나타낼 수 있다.
건상인의 말초혈로부터, 통상법에 따라서 PBMC를 단리하였다. 단리한 PBMC를, 추가로 인간 CD14 표지 자기 비드(밀테니 바이오테크사)에 접촉시켜, CD14 양성 세포를 분리하여, 마우스에의 세포 이입에 이용하였다. T 세포와 B 세포가 결여한 SCID 마우스에, 생리식염수에 용해한 블레오마이신(닛본 가야꾸사, 상품명: 블레오)을 5 mg/kg이 되도록 경기도 투여하고, 통상법에 따라서 폐 섬유증을 야기시켰다. 블레오마이신 투여일을 0일로 하고, 블레오마이신 투여 4일 전 및 투여 후부터 1, 4, 8, 11일째에, 생리식염수에 용해한 항인간 CCR7 항체 R7-11, R7-18, 또는 R7-47을 각각 20 mg/kg의 용량으로 복강 투여하였다. 대조로서, 아이소타입 컨트롤 IgG를 동일한 스케줄로 투여하였다. 블레오마이신 투여 후 4일째에, 상술한 방법으로 CCR7을 발현하는 세포를 포함하는 인간 CD14 양성 세포를 단리하고, PKH26PCL 적색 형광 세포 링커키트(시그마사)로 형광 표지하였다. 형광 표지 세포를 마우스 한마리당 1×106개, 꼬리 정맥으로부터 이입하였다. 블레오마이신 투여로부터 15일 후에 마우스를 부검하고, 통상법에 따라서 폐 조직을 중성 포르말린으로 고정하여 병리 세그먼트를 제작하였다. 병리 조직을 형광 현미경으로 관찰하고, 형광 표지된 인간 세포 유래의 세포수를 우측폐 전시야로 계측하였다. 그 결과, 아이소타입 컨트롤 IgG을 투여한 마우스와 비교하여, 항인간 CCR7 항체를 투여한 마우스에서는, 모두 폐에 있어서 형광 표지 세포수가 감소되어 있었다.
또한, 부검에 의해서 얻어진 좌측폐로부터 TRIzol 시약(인비트로젠(Invitrogen)사)에 의해 조직의 전체 RNA를 추출하고, 나노 드롭(Nano Drop) 1000(테르모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific)사)에 의해 추출한 RNA량을 정량하였다. 각 마우스폐로부터 얻어진 RNA 샘플 2 μg에 대하여 하이 커패시티 CDNA 리버스 트랜스크립션 키트(High Capacity cDNA Reverse transcription kit)(어플라이드 바이오시스템(Applied Biosystems)사)를 이용하여 역전사 반응을 행하고, 얻어진 cDNA 샘플을 리얼 타임 PCR법에 의해 폐조직 중의 인간 CCR7의 mRNA량의 측정을 행하였다. 리얼 타임 PCR에 의한 해석은, 태크맨 진 익스프레션 어세이(TaqMan Gene Expression Assays) 시스템(어플라이드 바이오시스템사)에 의해서 행하였다. 내부 표준으로서 태크맨 리보소멀 RNA 컨트롤 리어전트(TaqMan Ribosomal RNA Control Reagents)(어플라이드 바이오시스템사)를 이용하고, 인간 CCR7의 검출에는 Hs01013469_m1의 프로브 세트(어플라이드 바이오시스템사)를 이용하였다. 얻어진 데이터는 ΔΔCt법에 의해서 해석을 행하여, 아이소타입 컨트롤을 투여한 군을 기준으로 한 상대 발현량으로서 평가하였다. 그 결과, 아이소타입 컨트롤 IgG을 투여한 마우스와 비교하여, 항인간 CCR7 항체 R7-11, R7-18, 또는 R7-47을 투여한 마우스에서는, 모두 인간 CCR7의 mRNA량이 감소하고 있었다(도 13). 이 결과는, 해당 항인간 CCR7 항체가 폐 섬유증에 있어서, 섬유화에 중요한 세포의 폐조직에의 침윤을 억제하는 것을 반영하고 있다. 이들의 결과로부터, 해당 항CCR7 항체가 폐 섬유화 치료에 유용한 것이 나타내어졌다.
(15) 유전자 재조합 기술에 의한 항인간 CCR7 항체의 제조
서열번호 11로 표시되는 DNA를 포함하는 마우스 항체 중쇄 전장의 유전자를 클로닝하여, 분비 발현용 벡터-pSecTag2(인비트로젠사)에 도입하였다. 이 벡터를 pSecTag2-R702HC라고 명명하였다. 마찬가지로, 서열번호 41로 표시되는 DNA를 포함하는 마우스 항체 중쇄 전장의 유전자를 클로닝하여, 분비 발현용 벡터-pSecTag2에 도입하였다. 이 벡터를 pSecTag2-R711HC라고 명명하였다. 마찬가지로, 서열번호 51로 표시되는 DNA를 포함하는 마우스 항체 중쇄 전장의 유전자를 클로닝하고, 분비 발현용 벡터-pSecTag2에 도입하였다. 이 벡터를 pSecTag2-R718HC라고 명명하였다.
서열번호 13으로 표시되는 DNA를 포함하는 마우스 항체 경쇄 전장의 유전자를 클로닝하여, 분비 발현용 벡터-pSecTag2에 도입하였다. 이 벡터를 pSecTag2-R702LC라고 명명하였다. 마찬가지로, 서열번호 43으로 표시되는 DNA를 포함하는 마우스 항체 경쇄 전장의 유전자를 클로닝하여, 분비 발현용 벡터-pSecTag2에 도입하였다. 이 벡터를 pSecTag2-R711LC라고 명명하였다. 마찬가지로, 서열번호 53으로 표시되는 DNA를 포함하는 마우스 항체 경쇄 전장의 유전자를 클로닝하고, 분비 발현용 벡터-pSecTag2에 도입하였다. 이 벡터를 pSecTag2-R718LC라고 명명하였다.
리포펙타민 2000(인비트로젠사)을 이용하여, pSecTag2-R702HC 및 pSecTag2-R702LC를 HEK293 세포에 도입하였다. 이 세포를 2일간 배양하였다. 배양 상청을 프로테인(Protein)-G 칼럼에 제공하여, 하이브리도마 R7-02 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체를 제조하였다. 마찬가지로, 리포펙타민 2000을 이용하여, pSecTag2-R711HC 및 pSecTag2-R711LC를 HEK293 세포에 도입하였다. 이 세포를 2일간 배양하였다. 배양 상청을 프로테인-G 칼럼에 제공하여, 하이브리도마 R7-11 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체를 제조하였다. 마찬가지로, 리포펙타민 2000을 이용하여, pSecTag2-R718HC 및 pSecTag2-R718LC를, HEK293 세포에 도입하였다. 이 세포를 2일간 배양하였다. 배양 상청을 Protein-G 칼럼에 제공하여, 하이브리도마 R7-18 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체를 제조하였다.
상기 (6)과 동일하게 하여, 인간 CCR7 유전자 도입 세포 및 CHO-K1 세포(음성 대조)에 대하여 10 μg/mL의 각 재조합형 항인간 CCR7 항체가 결합하는지 어떤지를 유세포 분석기를 이용하여 확인하였다. 형광 2차 항체로서 피코에리트린 표지 항마우스 IgG 항체(벡크만 콜터사)를 유세포 분석기로서 FACScalibur(벡톤 디킨슨사)를 이용하여, 각 세포와 각 재조합형 항인간 CCR7 항체와의 상호 작용을 해석하였다. 결과를 도 14 내지 16에 도시하였다. 도 14는 하이브리도마 R7-02 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체를 이용한 결과를 도시한다. 도 15는 하이브리도마 R7-11 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체를 이용한 결과를 나타낸다. 도 16은 하이브리도마 R7-18 유래의 재조합형 항인간 CCR7 항체를 이용한 결과를 나타낸다. 도 14 내지 16에 있어서, (a)는 CHO-K1 세포를 사용한 경우의 2차원 도트 표시도(좌측)과 막대그래프(우측), (b)는 인간 CCR7 유전자 도입 세포를 사용한 경우의 2차원 도트 표시도(좌측)와 막대그래프(우측)이다. 각 2차원 도트 표시도에 있어서, 종축은 피코에리트린(PE) 유래의 형광 강도, 횡축은 플루오레세인이소티오시아네이트(FITC) 유래의 형광 강도를 나타낸다. 즉, 어느 재조합형 항인간 CCR7 항체와도, 인간 CCR7 유전자 도입 세포에는 결합하지만, CHO-K1 세포에는 결합하고 있지 않은 것이 나타났다. 이들 결과로부터, 유전자 재조합의 수법을 이용하여, 본 발명의 항체를, 마우스형 항체, 키메라형 항체, 인간화 항체, 항체의 기능적 단편 등의 형태로 생산할 수 있는 것이 나타났다.
SEQUENCE LISTING <110> SEKISUI CHEMICAL CO., LTD. NB HEALTH LABORATORY CO., LTD. <120> ANTIHUMAN CCR7 ANTIBODIES, HYBRIDOMA, NUCLEIC ACID, VECTOR, CELL, MEDICINAL COMPOSITION, AND ANTIBODY-IMMOBILIZED CARRIER <130> 11P00830 <150> JP2010-217096 <151> 2010-09-28 <160> 91 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 390 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(390) <223> <400> 1 gag gtt cag ctt cag cag tct gga cct gaa ctg gtg aag cct ggg act 48 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 tca gtg aag atg tcc tgt aag ggt tct gga tac aca ttc act gac tac 96 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 tac ata aac tgg gtg agg cag agt cat gga aag agc ctt gag tgg att 144 Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga cgt gtt aat cct ggc aat ggt ggt act agt tac aac cag agg ttc 192 Gly Arg Val Asn Pro Gly Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 aag ggc aag gcc aca ttg aca gta gac aaa ttc ctc agc aca gcc ttc 240 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 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Ala Arg Thr Gly Thr Tyr Tyr Asn Tyr Asp Arg Gly Gly Phe Ala Tyr 100 105 110 Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro 115 120 125 Pro Ser 130 <210> 3 <211> 324 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <223> <400> 3 gat gtt ttg ctg acc caa agt cca gtc tcc ctg cct gtc agt ctt gga 48 Asp Val Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 gat caa gcc tcc atc tct tgc aga tgt agt cag aac att gtg cat att 96 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Cys Ser Gln Asn Ile Val His Ile 20 25 30 aat gga aac acc tat tta gaa tgg ttc ctg cag aaa cca ggc cag tct 144 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cca aag ctc ctg atc tac aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca 192 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aaa atc 240 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 aga aga gtg gag gct gag gat ctg gga 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<213> Mus musculus <400> 22 Ile Trp Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg 1 5 10 15 Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile 20 25 30 Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 35 40 45 Asp Trp Ile Gly Arg Val Asp Pro Ala Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Ala 50 55 60 Pro Asn Phe His Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn 65 70 75 80 Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Tyr Asp Tyr Asp Leu Phe Ala Ser Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 <210> 23 <211> 315 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(315) <223> <400> 23 gat gct gtt gtg act cag gaa tct gca ctc acc aca tca cct ggt gaa 48 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 aca gtc aca ctc act tgt cgc tca agt act ggg gct gtt aca act agt 96 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 aac ttt gcc aac tgg gtc caa gaa aaa cca gat cat tta ttc act ggt 144 Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 ctg ata agt agt aac aac aaa cga gct cca ggt gtt cct gcc aga ttc 192 Leu Ile Ser Ser Asn Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 tca ggc tcc ctg att gga gac aag gct gcc ctc agt atc aca ggg gca 240 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Ser Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 cag act gag gat gag gca ata tat ttc tgt gct cta tgg tac agc aac 288 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 cat tgg gtg ttc ggt gga gga acc aaa 315 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 24 <211> 105 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Ser Ser Asn Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Ser Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 25 Phe Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His 1 5 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26 Arg Val Asp Pro Ala Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Asn Phe His 1 5 10 15 Asp <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 27 Ala Arg Ser Phe Tyr Asp Tyr Asp Leu Phe Ala Ser 1 5 10 <210> 28 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe Ala Asn 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 29 Ser Asn Asn Lys Arg Ala Pro 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 30 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 31 <211> 378 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(378) <223> <400> 31 att gag gtt cag ctc cag cag tct ggg act gaa ctt gtg agg cca ggg 48 Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 gcc tca gtc aag ttg tcc tgc aca gct tct ggc ttt aac att aaa gac 96 Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp 20 25 30 gac tat ata cac tgg gtg aag cag agg cct gac cag ggc ctg gag tgg 144 Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp 35 40 45 att gga agg att gat cct gcg aat ggt aat act aaa tat gcc ccg aag 192 Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys 50 55 60 ttc cag gac aag gcc act ata act tca gac aca tcc tcc aac aca gcc 240 Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala 65 70 75 80 tac ctg caa ctc agc agc ctg aca tct gag gac act gcc gtc tat tac 288 Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 tgt gct aga tcc ttc tat gat tac gac ttg ttt gct tcc tgg ggc caa 336 Cys Ala Arg Ser Phe Tyr Asp Tyr Asp Leu Phe Ala Ser Trp Gly Gln 100 105 110 ggg act ctg gtc tct gtc tct gca gcc aaa aca aca ccc cca 378 Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 <210> 32 <211> 126 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32 Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp 20 25 30 Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys 50 55 60 Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Phe Tyr Asp Tyr Asp Leu Phe Ala Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 <210> 33 <211> 315 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(315) <223> <400> 33 gat gct gtt gtg act cag gaa tct gca ctc acc aca tca cct ggt gga 48 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 aca gtc ata ctc act tgt cgc tca agt act ggg gct gtt aca act agt 96 Thr Val Ile Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 aac ttt gcc aac tgg gtc caa gaa aaa cca gat cat tta ttc tct ggt 144 Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Ser Gly 35 40 45 cta ata agt ggt aac aac aaa cga gct cca ggt gtt ccc gcc aga ttc 192 Leu Ile Ser Gly Asn Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 tca ggc tcc ctg att gga gac aag gct gcc ctc agt atc acc ggg gca 240 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Ser Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 cag act gag gat gag gca atg tat ttc tgt gct cta tgg tac aac aac 288 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Met Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Asn Asn 85 90 95 cat tgg gtg ttc ggt gga gga acc aaa 315 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 34 <211> 105 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 34 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Ile Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Ser Gly 35 40 45 Leu Ile Ser Gly Asn Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Ser Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Met Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Asn Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 35 Phe Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His 1 5 <210> 36 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 36 Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Asp <210> 37 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 37 Ala Arg Ser Phe Tyr Asp Tyr Asp Leu Phe Ala Ser 1 5 10 <210> 38 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 38 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe Ala Asn 1 5 10 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 39 Gly Asn Asn Lys Arg Ala Pro 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 40 Ala Leu Trp Tyr Asn Asn His Trp Val 1 5 <210> 41 <211> 378 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(378) <223> <400> 41 tgg att gag gtt cag ctt cag cag tct gga cct gac ctg gtg atg cct 48 Trp Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Met Pro 1 5 10 15 ggg gct tca gtg agg ata tcc tgc aag gct tct ggt tac tct ttc act 96 Gly Ala Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr 20 25 30 gcc tac tac atg cac tgg gtg aag cag agc cat gga ttg agc ctt gag 144 Ala Tyr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Leu Ser Leu Glu 35 40 45 tgg att gga cgt gtt aat cct aac aat ggt ggt act agc tac aac cgg 192 Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Arg 50 55 60 aaa ttc aag gac aag gcc ata tta act gta gac agg tca tcc agc aca 240 Lys Phe Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr 65 70 75 80 gcc ttc atg gag ctc cgc agc ctg aca tct gag gac tct gcg gtc tat 288 Ala Phe Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr 85 90 95 tac tgt gca aga tcg gag agt gac cat ttc tat gct atg gac tcc tgg 336 Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Ser Asp His Phe Tyr Ala Met Asp Ser Trp 100 105 110 ggt caa gga aat tct gtc tcc gtc tcc tca gcc aaa aca aca 378 Gly Gln Gly Asn Ser Val Ser Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 115 120 125 <210> 42 <211> 126 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 42 Trp Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Met Pro 1 5 10 15 Gly Ala Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr 20 25 30 Ala Tyr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Leu Ser Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Arg 50 55 60 Lys Phe Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr 65 70 75 80 Ala Phe Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Ser Asp His Phe Tyr Ala Met Asp Ser Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Asn Ser Val Ser Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 115 120 125 <210> 43 <211> 324 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <223> <400> 43 gac att gtg atg acc caa act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 gat caa gtt ttc atc tct tgc aga tct agt cag agc ctt gta cac agc 96 Asp Gln Val Phe Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 aat gga aac acc tat tta tgt tgg ttc ctg cag aag cca ggc cag tct 144 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cca aag ctc ctg atc tac agg gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca 192 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc 240 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 agc aga gtg gag gct gag gat ctg gga gtt tat ttc tgc ttt caa ggt 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly 85 90 95 tca cat gtt cct cat acg ttc gga tcg ggg acc aag 324 Ser His Val Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 100 105 <210> 44 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Val Phe Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 100 105 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 45 Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46 Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Arg Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 47 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 47 Cys Ala Arg Ser Glu Ser Asp His Phe Tyr Ala Met Asp 1 5 10 <210> 48 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys 1 5 10 15 <210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 49 Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 50 Phe Gln Gly Ser His Val Pro His Thr 1 5 <210> 51 <211> 387 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(387) <223> <400> 51 ata tgg att gag gtc cag ctg cag cag tct gga cct gac ctg gtg aag 48 Ile Trp Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 cct ggg gct tca gtg aag ata tcc tgc aag gct tct ggt tac tca ttc 96 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 20 25 30 act ggc tac tac atg cac tgg gtg aag cag agc cat gga aag agc ctt 144 Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 35 40 45 gag tgg att gga cgt gtt aat cct aac aat ggt gga act agt tac aac 192 Glu Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 50 55 60 aag aag ttc aag gtc aag gcc ata tta act gtt gac agg tca tcc agc 240 Lys Lys Phe Lys Val Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser 65 70 75 80 aca gcc tac atg gaa ttc cgc agc ctg aca ctc gag gac tct gcg gtc 288 Thr Ala Tyr Met Glu Phe Arg Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ala Val 85 90 95 tat tat tgt gca aga tcg gag agt aac aat ttc tat gct atg gac tat 336 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Ser Asn Asn Phe Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 110 tgg ggc caa gga aag tct gtc acc gtc tct tca gcc aaa aca aca ccc 384 Trp Gly Gln Gly Lys Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro 115 120 125 cca 387 Pro <210> 52 <211> 129 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 52 Ile Trp Ile Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 20 25 30 Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 50 55 60 Lys Lys Phe Lys Val Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser 65 70 75 80 Thr Ala Tyr Met Glu Phe Arg Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Ser Asn Asn Phe Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Lys Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro 115 120 125 Pro <210> 53 <211> 324 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <223> <400> 53 gat att ttg atg acc caa act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga 48 Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 gat caa gtt tcc atc tct tgc aga tct agt cag agc ctt gta cac agc 96 Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 aat gga aac acc tat tta tgt tgg tac ctg cag aag cca ggc cag tct 144 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cca aag ctc ctg atc tac agg gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc ccg 192 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc 240 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 agc aga gtg gag gct gag gat ctg gga gtt tat ttc tgc ttt caa ggt 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly 85 90 95 tca cat gtt cct cat acg ttc gga tcg ggg acc aag 324 Ser His Val Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 100 105 <210> 54 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 54 Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys 100 105 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 55 Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 56 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 56 Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Lys Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val <210> 57 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 57 Cys Ala Arg Ser Glu Ser Asn Asn Phe Tyr Ala Met Asp 1 5 10 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 58 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys 1 5 10 15 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 59 Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 60 Phe Gln Gly Ser His Val Pro His Thr 1 5 <210> 61 <211> 387 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(387) <223> <400> 61 ata tgg att gag gtg atg gtg gtg gag tca gga cct ggc ctg atg aaa 48 Ile Trp Ile Glu Val Met Val Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Met Lys 1 5 10 15 cct tct cag tca ctt tcc ctc acc tgc gct gtc act ggc tat tcc atc 96 Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Thr Gly Tyr Ser Ile 20 25 30 acc agt ggt tat gac tgg cac tgg atc cga cat ttt cca gga aac ata 144 Thr Ser Gly Tyr Asp Trp His Trp Ile Arg His Phe Pro Gly Asn Ile 35 40 45 ctg gag tgg atg ggc tac ata aac tac agt ggt agc act aac tac aaa 192 Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Lys 50 55 60 cca tcc ctc aag agt cga atc tcc atc act ctt gac aca tct aag aac 240 Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Leu Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 cat ttc ttc ctg aag ttg agt tct gtg act act gaa gac aca gcc aca 288 His Phe Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr 85 90 95 tat tac tgt gca aga ggg agt tac tat agt tat gag ttt gct tac tgg 336 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Tyr Tyr Ser Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp 100 105 110 ggc caa ggg act ctg gtc act gtc tct gca gcc aaa aca aca ccc cca 384 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 tct 387 Ser <210> 62 <211> 129 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 62 Ile Trp Ile Glu Val Met Val Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Met Lys 1 5 10 15 Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Thr Gly Tyr Ser Ile 20 25 30 Thr Ser Gly Tyr Asp Trp His Trp Ile Arg His Phe Pro Gly Asn Ile 35 40 45 Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Lys 50 55 60 Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Leu Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 His Phe Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Tyr Tyr Ser Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 Ser <210> 63 <211> 324 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <223> <400> 63 gac att gtg atg tca cag tct cca tcc tcc cta gct gtg tca gtt gga 48 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 gag aag gtt act atg agc tgc aag tcc agt cag aga ctt tta tat tat 96 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Arg Leu Leu Tyr Tyr 20 25 30 agc act caa aag aac tac ttg gcc tgg tac cag cag aaa cca ggg cag 144 Ser Thr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 tct cct aaa ctg ctg att ttc tgg gca tcc act agg gaa tct ggg gtc 192 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 cct aat cgc ttc aca ggc agt gga tct ggg aca gat ttc act ctc acc 240 Pro Asn Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 atc aac agt gtg aag gct gaa gac ctg gca gtt tat tac tgt cag caa 288 Ile Asn Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 tat tat acc tat cct acg ttc ggt gga ggg acc aag 324 Tyr Tyr Thr Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 64 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 64 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Arg Leu Leu Tyr Tyr 20 25 30 Ser Thr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asn Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asn Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Thr Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 65 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 65 Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Asp Trp His Trp Ile 1 5 10 <210> 66 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 66 Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Lys Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 67 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 67 Ala Arg Gly Ser Tyr Tyr Ser Tyr Glu Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 68 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 68 Lys Ser Ser Gln Arg Leu Leu Tyr Tyr Ser Thr Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 69 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 70 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 70 Gln Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Thr 1 5 <210> 71 <211> 387 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(387) <223> <400> 71 gag gtt cag ctg cag cag tct gga cct gac ctg gtg aag cct ggg acg 48 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 tca gtt aag ata tcc tgc aag gcc tct ggg tac aaa ttt act gac ttc 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Phe 20 25 30 aat atg gac tgg gtg agg cag aga cat gga aag agc ctt gag tgg att 144 Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Arg His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga gat gtg aat cct cag aat ggt gag att ttt tac aac cag aaa ttc 192 Gly Asp Val Asn Pro Gln Asn Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 agg ggc aag gcc aca ttg act gtg gtc aag tct tcc agc aca acc tac 240 Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Val Lys Ser Ser Ser Thr Thr Tyr 65 70 75 80 ttg gaa ctc cgc agc ctg aca tct gag gac act gca gtc tat ttc tgt 288 Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 aca aga tta gaa ttt gat tat acc ggc agt aac gga ttt gct tac tgg 336 Thr Arg Leu Glu Phe Asp Tyr Thr Gly Ser Asn Gly Phe Ala Tyr Trp 100 105 110 ggc caa ggg act ctg gtc acg gtc tct gca gcc aaa acg aca ccc cca 384 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 tct 387 Ser <210> 72 <211> 129 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 72 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Phe 20 25 30 Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Arg His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Val Asn Pro Gln Asn Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Val Lys Ser Ser Ser Thr Thr Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Thr Arg Leu Glu Phe Asp Tyr Thr Gly Ser Asn Gly Phe Ala Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 115 120 125 Ser <210> 73 <211> 324 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <223> <400> 73 gac att ttg atg acc caa act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga 48 Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 gat caa gcc tcc atc tct tgc aga tct agt cag acc ctt gta cat cgc 96 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Leu Val His Arg 20 25 30 aat gga aac acc tat tta gag tgg tac ctt cag aag cca ggc cag tct 144 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cca aaa ctc ctg atc tac aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca 192 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt ggc cgt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc 240 Asp Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 agc aga gtg gag gct gag gat cag gga att tat tac tgc ttt caa ggt 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Gln Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 tca cat gat ccg tgg acg ttc ggt gga ggg acc aag 324 Ser His Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 74 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 74 Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Leu Val His Arg 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Gln Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 75 Tyr Lys Phe Thr Asp Phe Asn Met Asp 1 5 <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 76 Asp Val Asn Pro Gln Asn Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 77 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 77 Cys Thr Arg Leu Glu Phe Asp Tyr Thr Gly Ser Asn Gly Phe 1 5 10 <210> 78 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 78 Arg Ser Ser Gln Thr Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 79 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 80 Phe Gln Gly Ser His Asp Pro Trp Thr 1 5 <210> 81 <211> 1137 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1137) <223> <400> 81 atg gac ctg ggg aaa cca atg aaa agc gtg ctg gtg gtg gct ctc ctt 48 Met Asp Leu Gly Lys Pro Met Lys Ser Val Leu Val Val Ala Leu Leu 1 5 10 15 gtc att ttc cag gta tgc ctg tgt caa gat gag gtc acg gac gat tac 96 Val Ile Phe Gln Val Cys Leu Cys Gln Asp Glu Val Thr Asp Asp Tyr 20 25 30 atc gga gac aac acc aca gtg gac tac act ttg ttc gag tct ttg tgc 144 Ile Gly Asp Asn Thr Thr Val Asp Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Leu Cys 35 40 45 tcc aag aag gac gtg cgg aac ttt aaa gcc tgg ttc ctc cct atc atg 192 Ser Lys Lys Asp Val Arg Asn Phe Lys Ala Trp Phe Leu Pro Ile Met 50 55 60 tac tcc atc att tgt ttc gtg ggc cta ctg ggc aat ggg ctg gtc gtg 240 Tyr Ser Ile Ile Cys Phe Val Gly Leu Leu Gly Asn Gly Leu Val Val 65 70 75 80 ttg acc tat atc tat ttc aag agg ctc aag acc atg acc gat acc tac 288 Leu Thr Tyr Ile Tyr Phe Lys Arg Leu Lys Thr Met Thr Asp Thr Tyr 85 90 95 ctg ctc aac ctg gcg gtg gca gac atc ctc ttc ctc ctg acc ctt ccc 336 Leu Leu Asn Leu Ala Val Ala Asp Ile Leu Phe Leu Leu Thr Leu Pro 100 105 110 ttc tgg gcc tac agc gcg gcc aag tcc tgg gtc ttc ggt gtc cac ttt 384 Phe Trp Ala Tyr Ser Ala Ala Lys Ser Trp Val Phe Gly Val His Phe 115 120 125 tgc aag ctc atc ttt gcc atc tac aag atg agc ttc ttc agt ggc atg 432 Cys Lys Leu Ile Phe Ala Ile Tyr Lys Met Ser Phe Phe Ser Gly Met 130 135 140 ctc cta ctt ctt tgc atc agc att gac cgc tac gtg gcc atc gtc cag 480 Leu Leu Leu Leu Cys Ile Ser Ile Asp Arg Tyr Val Ala Ile Val Gln 145 150 155 160 gct gtc tca gct cac cgc cac cgt gcc cgc gtc ctt ctc atc agc aag 528 Ala Val Ser Ala His Arg His Arg Ala Arg Val Leu Leu Ile Ser Lys 165 170 175 ctg tcc tgt gtg ggc atc tgg ata cta gcc aca gtg ctc tcc atc cca 576 Leu Ser Cys Val Gly Ile Trp Ile Leu Ala Thr Val Leu Ser Ile Pro 180 185 190 gag ctc ctg tac agt gac ctc cag agg agc agc agt gag caa gcg atg 624 Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Leu Gln Arg Ser Ser Ser Glu Gln Ala Met 195 200 205 cga tgc tct ctc atc aca gag cat gtg gag gcc ttt atc acc atc cag 672 Arg Cys Ser Leu Ile Thr Glu His Val Glu Ala Phe Ile Thr Ile Gln 210 215 220 gtg gcc cag atg gtg atc ggc ttt ctg gtc ccc ctg ctg gcc atg agc 720 Val Ala Gln Met Val Ile Gly Phe Leu Val Pro Leu Leu Ala Met Ser 225 230 235 240 ttc tgt tac ctt gtc atc atc cgc acc ctg ctc cag gca cgc aac ttt 768 Phe Cys Tyr Leu Val Ile Ile Arg Thr Leu Leu Gln Ala Arg Asn Phe 245 250 255 gag cgc aac aag gcc atc aag gtg atc atc gct gtg gtc gtg gtc ttc 816 Glu Arg Asn Lys Ala Ile Lys Val Ile Ile Ala Val Val Val Val Phe 260 265 270 ata gtc ttc cag ctg ccc tac aat ggg gtg gtc ctg gcc cag acg gtg 864 Ile Val Phe Gln Leu Pro Tyr Asn Gly Val Val Leu Ala Gln Thr Val 275 280 285 gcc aac ttc aac atc acc agt agc acc tgt gag ctc agt aag caa ctc 912 Ala Asn Phe Asn Ile Thr Ser Ser Thr Cys Glu Leu Ser Lys Gln Leu 290 295 300 aac atc gcc tac gac gtc acc tac agc ctg gcc tgc gtc cgc tgc tgc 960 Asn Ile Ala Tyr Asp Val Thr Tyr Ser Leu Ala Cys Val Arg Cys Cys 305 310 315 320 gtc aac cct ttc ttg tac gcc ttc atc ggc gtc aag ttc cgc aac gat 1008 Val Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Phe Ile Gly Val Lys Phe Arg Asn Asp 325 330 335 ctc ttc aag ctc ttc aag gac ctg ggc tgc ctc agc cag gag cag ctc 1056 Leu Phe Lys Leu Phe Lys Asp Leu Gly Cys Leu Ser Gln Glu Gln Leu 340 345 350 cgg cag tgg tct tcc tgt cgg cac atc cgg cgc tcc tcc atg agt gtg 1104 Arg Gln Trp Ser Ser Cys Arg His Ile Arg Arg Ser Ser Met Ser Val 355 360 365 gag gcc gag acc acc acc acc ttc tcc cca tag 1137 Glu Ala Glu Thr Thr Thr Thr Phe Ser Pro 370 375 <210> 82 <211> 378 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Met Asp Leu Gly Lys Pro Met Lys Ser Val Leu Val Val Ala Leu Leu 1 5 10 15 Val Ile Phe Gln Val Cys Leu Cys Gln Asp Glu Val Thr Asp Asp Tyr 20 25 30 Ile Gly Asp Asn Thr Thr Val Asp Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Leu Cys 35 40 45 Ser Lys Lys Asp Val Arg Asn Phe Lys Ala Trp Phe Leu Pro Ile Met 50 55 60 Tyr Ser Ile Ile Cys Phe Val Gly Leu Leu Gly Asn Gly Leu Val Val 65 70 75 80 Leu Thr Tyr Ile Tyr Phe Lys Arg Leu Lys Thr Met Thr Asp Thr Tyr 85 90 95 Leu Leu Asn Leu Ala Val Ala Asp Ile Leu Phe Leu Leu Thr Leu Pro 100 105 110 Phe Trp Ala Tyr Ser Ala Ala Lys Ser Trp Val Phe Gly Val His Phe 115 120 125 Cys Lys Leu Ile Phe Ala Ile Tyr Lys Met Ser Phe Phe Ser Gly Met 130 135 140 Leu Leu Leu Leu Cys Ile Ser Ile Asp Arg Tyr Val Ala Ile Val Gln 145 150 155 160 Ala Val Ser Ala His Arg His Arg Ala Arg Val Leu Leu Ile Ser Lys 165 170 175 Leu Ser Cys Val Gly Ile Trp Ile Leu Ala Thr Val Leu Ser Ile Pro 180 185 190 Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Leu Gln Arg Ser Ser Ser Glu Gln Ala Met 195 200 205 Arg Cys Ser Leu Ile Thr Glu His Val Glu Ala Phe Ile Thr Ile Gln 210 215 220 Val Ala Gln Met Val Ile Gly Phe Leu Val Pro Leu Leu Ala Met Ser 225 230 235 240 Phe Cys Tyr Leu Val Ile Ile Arg Thr Leu Leu Gln Ala Arg Asn Phe 245 250 255 Glu Arg Asn Lys Ala Ile Lys Val Ile Ile Ala Val Val Val Val Phe 260 265 270 Ile Val Phe Gln Leu Pro Tyr Asn Gly Val Val Leu Ala Gln Thr Val 275 280 285 Ala Asn Phe Asn Ile Thr Ser Ser Thr Cys Glu Leu Ser Lys Gln Leu 290 295 300 Asn Ile Ala Tyr Asp Val Thr Tyr Ser Leu Ala Cys Val Arg Cys Cys 305 310 315 320 Val Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Phe Ile Gly Val Lys Phe Arg Asn Asp 325 330 335 Leu Phe Lys Leu Phe Lys Asp Leu Gly Cys Leu Ser Gln Glu Gln Leu 340 345 350 Arg Gln Trp Ser Ser Cys Arg His Ile Arg Arg Ser Ser Met Ser Val 355 360 365 Glu Ala Glu Thr Thr Thr Thr Phe Ser Pro 370 375 <210> 83 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Linker <400> 83 gtcgactagg aattc 15 <210> 84 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 84 tggcgtcgac atggcagcta aagacgtaaa att 33 <210> 85 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 85 tggcgcggcc gcctattaca tcatgccgcc catgcca 37 <210> 86 <211> 1647 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 86 atggcagcta aagacgtaaa attcggtaac gacgctcgtg tgaaaatgct gcgcggcgta 60 aacgtactgg cagatgcagt gaaagttacc ctcggtccaa aaggccgtaa cgtagttctg 120 gataaatctt tcggtgcacc gaccatcacc aaagatggtg tttccgttgc tcgtgaaatc 180 gaactggaag acaagttcga aaatatgggt gcgcagatgg tgaaagaagt tgcctctaaa 240 gcaaacgacg ctgcaggcga cggtaccacc actgcaaccg tactggctca ggctatcatc 300 actgaaggtc tgaaagctgt tgctgcgggc atgaacccga tggacctgaa acgtggtatc 360 gacaaagcgg ttaccgctgc agttgaagaa ctgaaagcgc tgtccgtacc atgctctgac 420 tctaaagcga ttgctcaggt tggtaccatc tccgctaact ccgacgaaac cgtaggtaaa 480 ctgatcgctg aagcgatgga caaagtcggt aaagaaggcg ttatcaccgt tgaagacggt 540 accggtctgc aggacgaact ggacgtggtt gaaggtatgc agttcgaccg tggctacctg 600 tctccttact tcatcaacaa gccggaaact ggcgcagtag aactggaaag cccgttcatc 660 ctgctggctg acaagaaaat ctccaacatc cgcgaaatgc tgccggttct ggaagctgtt 720 gccaaagcag gcaaaccgct gctgatcatc gctgaagatg tagaaggcga agcgctggca 780 actctggttg ttaacaccat gcgtggcatc gtgaaagtcg ctgcggttaa agcaccgggc 840 ttcggcgatc gtcgtaaagc tatgctgcag gatatcgcaa ccctgactgg cggtaccgtg 900 atctctgaag agatcggtat ggagctggaa aaagcaaccc tggaagacct gggtcaggct 960 aaacgtgttg tgatcaacaa agacaccacc actatcatcg atggcgtggg tgaagaagct 1020 gcaatccagg gccgtgttgc tcagatccgt cagcagattg aagaagcaac ttctgactac 1080 gaccgtgaaa aactgcagga acgcgtagcg aaactggcag gcggcgttgc agttatcaaa 1140 gtgggtgctg ctaccgaagt tgaaatgaaa gagaaaaaag cacgcgttga agatgccctg 1200 cacgcgaccc gtgctgcggt agaagaaggc gtggttgctg gtggtggtgt tgcgctgatc 1260 cgcgtagcgt ctaaactggc tgacctgcgt ggtcagaacg aagaccagaa cgtgggtatc 1320 aaagttgcac tgcgtgcaat ggaagctccg ctgcgtcaga tcgtattgaa ctgcggcgaa 1380 gaaccgtctg ttgttgctaa caccgttaaa ggcggcgacg gcaactacgg ttacaacgca 1440 gcaaccgaag aatacggcaa catgatcgac atgggtatcc tggatccaac caaagtaact 1500 cgttctgctc tgcagtacgc agcttctgtg gctggcctga tgatcaccac cgaatgcatg 1560 gttaccgacc tgccgaaaaa cgatgcagct gacttaggcg ctgctggcgg tatgggcggc 1620 atgggtggca tgggcggcat gatgtaa 1647 <210> 87 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 87 cagatggggs tgtygttttg gc 22 <210> 88 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 88 tttkatttcc agyttggtcc c 21 <210> 89 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 89 ttttatttcc aactttgtcc c 21 <210> 90 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 90 tttcagctcc agcttggtcc c 21 <210> 91 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Designed oligonucleotide primer for PCR <400> 91 cctaggacag tcagtttgg 19

Claims (30)

  1. 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 서열번호 7, 서열번호 17, 서열번호 27, 서열번호 37, 서열번호 47, 서열번호 57, 서열번호 67, 또는 서열번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(중쇄 CDR3)을 갖는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
  2. 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대해서, 하기 (A1) 내지 (A8) 중 어느 하나를 만족시키는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체:
    (A1) 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A2) 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A3) 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A4) 서열번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A5) 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A6) 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A7) 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐,
    (A8) 서열번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및
    서열번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 가짐.
  3. 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 그의 상보성 결정 영역 1 내지 3(CDR1 내지 3)의 아미노산 서열에 대해서, 하기 (B1) 내지 (B8) 중 어느 하나를 만족시키는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체:
    (B1) 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B2) 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B3) 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B4) 서열번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B5) 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 46으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 48로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 49로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 50으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B6) 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 58로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 59로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B7) 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 67로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 69로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 70으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐,
    (B8) 서열번호 75로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1,
    서열번호 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,
    서열번호 77로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3,
    서열번호 78로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1,
    서열번호 79로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
    서열번호 80으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가짐.
  4. 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, 그 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열에 대해서, 하기 (C1) 내지 (C8) 중 어느 하나를 만족시키는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체:
    (C1) 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C2) 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C3) 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C4) 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C5) 서열번호 42로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C6) 서열번호 52로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 54로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C7) 서열번호 62로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐,
    (C8) 서열번호 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 74로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, CCR7 리간드 자극에 의한 CCR7 의존적인 세포내 정보 전달 기구를 차단하는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체 또는 키메라 항체인 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편, 단일쇄 항체, 또는 다이아바디(diabody)인 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
  8. 인간 CCR7의 세포 외 도메인에 특이적으로 결합하는 항인간 CCR7 항체로서, R7-01(FERM BP-11369), R7-02(FERM BP-11404), R7-05(FERM BP-11371), R7-09(FERM BP-11372), R7-11(FERM BP-11373), R7-18(FERM BP-11374), R7-25(FERM BP-11375), 또는 R7-47(FERM BP-11376)에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 기재된 항인간 CCR7 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항인간 CCR7 항체.
  10. R7-01(FERM BP-11369), R7-02(FERM BP-11404), R7-05(FERM BP-11371), R7-09(FERM BP-11372), R7-11(FERM BP-11373), R7-18(FERM BP-11374), R7-25(FERM BP-11375), 또는 R7-47(FERM BP-11376)인 것을 특징으로 하는 하이브리도마.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 항인간 CCR7 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산.
  12. 제11항에 있어서, 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 41, 서열번호 43, 서열번호 51, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 71, 또는 서열번호 73으로 표시되는 염기 서열을 갖는 핵산.
  13. 제11항 또는 제12항에 기재된 핵산을 포함하는 벡터.
  14. 제13항에 기재된 벡터가 도입된 세포.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 항인간 CCR7 항체와, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  16. 제15항에 있어서, CCR7 리간드에 의한 CCR7 의존적인 세포내 정보 전달 기구를 차단하는 것임을 특징으로 하는 의약 조성물.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 조직의 섬유화를 치료하기 위해서 이용되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 조직의 섬유화가 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 심혈관 섬유증, 소화관 섬유증 및 다른 섬유성 질환으로 이루어지는 군에서 선택되는 섬유증인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 간 섬유증이 간경변, 허혈 재관류, 간 이식 후 상해, 괴사성 간염, B형 간염, C형 간염, 원발성 담즙성 간경변, 및 원발성 경화성 담관염으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 간경변이 알코올에 의한 유발, 약물에 의한 유발, 및 화학적인 유발로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1개에 의한 것임을 특징으로 하는 의약 조성물.
  21. 제18항에 있어서, 상기 신장 섬유증이 증식성 사구체 신염, 경화성 사구체 신염, 신원성 섬유화성 피부증, 당뇨병성 신증, 신뇨세관 간질성 섬유증, 및 국소 분절성 사구체 경화증으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  22. 제18항에 있어서, 상기 폐 섬유증이 폐 간질성 섬유증, 약물 유발 사르코이도시스, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 천식, 만성 폐색성 폐 질환, 미만성 폐포 손상 질환, 폐 고혈압증, 및 신생아 기관지 폐 형성 이상으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  23. 제18항에 있어서, 상기 피부 섬유증이 강피증, 켈로이드 반흔화, 건선, 비후성 반흔화, 및 의사성 강피증으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  24. 제18항에 있어서, 상기 심혈관 섬유증이 아테롬성 동맥 경화, 관동맥 재협착, 울혈성 심근증, 심부전, 심장 이식, 및 심근 섬유증으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  25. 제18항에 있어서, 상기 소화관 섬유증이 콜라겐 축적 대장염, 융모 위축, 음와 과형성, 폴립 형성, 크론병의 섬유증, 위궤양 치유, 및 복부 유착술 후 반흔으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  26. 제18항에 있어서, 상기 섬유증이 뼈에 관련된 섬유화성 질환으로부터 생기는 상태를 갖고, 류마티스형 판누스 형성인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  27. 제15항에 있어서, 암의 전이를 치료하기 위해서 이용되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 암이 인두암, 연골육종, 대장암, 췌장암, 백혈병, 유방암으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  29. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 항인간 CCR7 항체가 담체에 고정화되어 이루어지는 항체 고정화 담체.
  30. 제29항에 있어서, CCR7 발현 세포를 포함하는 혈액을 접촉시켜, 상기 체액으로부터 CCR7 발현 세포를 제거하기 위해서 이용되는 것을 특징으로 하는 항체 고정화 담체.
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