KR20130119116A - 신규한 락토바실러스 아리조넨시스 ｂｃｎｕ 9200 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 생체 내 안정성이 우수하고, 식중독을 일으키는 병원균에 항균 효과를 가지며, 콜레스테롤 저하, 항암 및 항염증의 효과가 우수하고, 소화기관 내 저해 환경에서 생존률이 우수함으로, 생균제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

신규한 락토바실러스 아리조넨시스 ＢＣＮＵ 9200 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물{New Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 and probiotics composition comprising the same}

본 발명은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물에 관한 것이다.

생균제(Probiotics)는 숙주의 장내 미생물 균형을 유지시킴으로써 유익한 작용을 하는 미생물을 총괄하며, 인체 의약품인 정장제나 유산균 제제, 사료첨가제 및 건강식품 등으로 사용되고 있다. 일반적으로 생균제로 사용되는 미생물들은 안전하며, 섭취시 생체 내 저해환경 즉 위장의 위산, 담낭의 담즙 및 소장에서 분비되는 각종 소화효소에 저항력을 갖고, 대장과 직장에 도달해 증식하고 정착하는 능력을 갖는다.[FAO/WHO, 2002; Homma 1998]. 또한, 생균제는 장내 균총의 정상화, 유해 세균의 정착을 억제함에 따른 부패 산물의 생성 감소, 질병예방, 항암작용, 면역의 활성화, 혈중 콜레스테롤 저하 및 항산화 효과 등 균체 성분 자체로 체내에서 유용한 기능을 전제로 한다.

한편, 유산균은 보통 젖산균이라고도 불리우고, 최종 대사산물로 젖산을 상당량 생산하는 세균이다. 유산균은 인간이 오래전부터 이용하고 있는 미생물의 일종으로 우리나라에서는 김치 등에, 서양에서는 유가공 발효에 많이 이용되고 있다.

최근에는 유산균에 대한 연구가 활발히 진행되어 발효유 제조, 건강 및 기능성 식품, 정장제, 의약품 및 생균제 제제로 이용되며, 대표적인 균주로는 락토바실러스 와 비피더스균 등이 있다.

본 연구자들은 락토바실러스 속의 균주가 생균제로서 사용될 수 있다는 사실에 착안하여, 락토바실러스 속의 균주를 연구한 결과, 신규한 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 동정하였고, 상기 균주 및 이의 배양액이 콜레스테롤 저하능, 항암, 항염증 및 유해 병원균에 대해 항균능이 있음을 발견함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은, 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능이 있는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 제공함에 있다.

본 발명의 다른 목적은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물을 제공함에 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공함에있다.

본 발명의 또 다른 목적은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공함에 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 유산균 제제를 제공함에 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 발효유를 제공함에 있다.

상기와 같은 문제 해결을 위하여, 본 발명은 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능이 있는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 제공한다.

또한 본 발명은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 유산균 제제를 제공한다.

또한 본 발명은, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 발효유를 제공한다.

본 발명에 따른 균주 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 생체 내 안정성이 우수하고, 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균 효과를 가지며, 콜레스테롤 저하, 항암 및 항염증의 효과가 우수하고, 소하기관 내 저해 환경에서 생존률이 우수함으로 의약품, 건강식품 및 생균제에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주)의 16S rDNA 유전자의 염기서열을 기초로 한 다른 세균과의 계통수를 나타낸 도이다.
도 2는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 pH 2.5에서 3시간 배양 후 log cfu/ml를 그래프로 나타낸 도이다.
도 3는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 담즙산 첨가 농도에 따른 log cfu/ml를 나타낸 도이다.
도 4는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 BSH 활성에 의한 침전환을 나타낸 도이다.
도 5는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 콜레스테롤 동화율(%)을 나타낸 도이다.
도 6은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 Ikb-α 분해 저해능을 나타낸 도이다.
도 7은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 NF-κB 활성 저해능을 나타낸 도이다.

본 발명은 신규한 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 제공한다.

상기 균주는 인산완충용액(Postassium phosphate buffer,pH2)에 일반 가정의 김치 1g을 첨가하여 2시간 정치 후, CaCO₃를 함유한 MRS 한천배지에서 넓은 투명환을 생성하였고, 이를 분리하였다. 분리된 균주의 생리 화학적 특성을 Bergey`s Manual of Systematic Bacteriology에 기술된 방법으로 분석하였고, 분자생물학적 특성을 16S rDNA 유전자 염기서열로 분석하여 상기 분리된 균주가 Lactobacillus arizonensis 와 99% 상동성을 보이는 신규한 균주로 동정하였다. 상기 균주를 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주라고 명명하였으며, 농업유전자원정보센터에 2012년 3월 8일자로 기탁하여 기탁번호 KACC 91716P를 부여받았다.

본 발명의 균주는 유해 미생물에 대하여 항균능이 있다. 특히, 식중독을 일으키는 유해 미생물에 항균능이 있으며, 구체적으로는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 리스테리아 모노키토게네스(Listeria monocytogenes), 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli ), 살모렐라균(Salmonella typhimurium) 및 쉬겔라균(Shigella sonnei)에 대하여 항균능이 있다. 또한, 본 발명의 균주는 콜레스테롤 저하능, 항암 또는 항염증 효과가 우수하며 산성 및 인공 담즙에 대한 내성을 갖고 장내 부착능이 있어 소화기관 내 생존률이 우수하다. 또한 항생제에 대하여 저항성이 존재하고, 바람직하게는 콜러람페니콜에 대한 저항성이 있다.

또한, 본 발명은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물을 제공한다.

상기 배양액은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 제거할 수 있고, 바람직한 배양액은 원심 분리 후 상층액이다. 배양액은 배양액의 농축액 및 상기 배양액의 건조물을 모두 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 유해 미생물에 대한 항균능, 콜레스테롤 저하능, 항암 또는 항염증 효과가 우수하다. 따라서, 본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 생균제, 특히 인체 의약품인 정장제나 유산균 제제, 사료첨가제 및 건강식품에 유용하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 약학 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.

상기 병원성 미생물은 식중독을 일으키는 병원성 미생물인 것이 바람직하며, 상기 식중독을 일으키는 병원성 미생물은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus ), 리스테리아 모노키토게네스(Listeria monocytogenes), 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli ), 살모렐라균(Salmonella typhimurium) 및 쉬겔라균(Shigella sonnei) 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 질환으로는 급성 설사, 장염, 위장관염, 변비, 복통, 복부팽만, 콜레라 및 식중독으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 임상 투여시 경구 도는 비경구로 투여가 가능하며, 주성분인 상기 또는 이의 배양액의 유효량에 1종 또는 2종 이상의 약학적으로 허용가능한 통상적인 담체 또는 1종 또는 2종 이상의 첨가제를 선택하여 통상적인 약학적 제형의 조성물로 제조할 수 있다.

담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 방부제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 첨가제로는 향료, 비타민류, 항산화제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 담체 및 첨가제는 약학적으로 허용가능한 것은 모두 사용 가능하며, 구체적으로는 희석제로는 유당, 옥수수 전분, 콩기름, 미세결정 셀룰로오스 또는 만니톨이 좋고, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크가 바람직하며, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈(PVP) 또는 하이드록시프로필셀룰로오스(HPC) 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메틸셀룰로오스칼슘(Ca-CMC), 전분글리콜산나트륨(sodium starch glycolate), 폴라크릴린칼륨(polacrylin potassium) 또는 크로스포비돈(cross-linked polyvinylpyrrolidone) 중에서 선택되는 것이 바람직하고, 감미제로는 백당, 과당, 소르비톨(sorbitol) 또는 아스파탐(aspartame) 중에서 선택되고, 안정제로는 카르복시 메틸셀룰로오스나트륨(Ma-CMC), 베타-시클로덱스트린, 백납(white bee's wax) 또는 잔탄검(xanthan gum)중에서 선택되며, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 또는 소르빈산칼륨 중에서 선택하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물은 병원성 미생물로 인해 발생하는 질환을 효율적으로 예방 또는 치료하는 목적으로 사용되는 것으로 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바 없으며, 음료, 분말, 캅셀, 연질캅셀, 정제, 껌, 점착 타입 액제 조성물로 사용될 수 있으며, 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형으로 사용할 수 있고, 탕제, 환제, 정제, 산제, 과립제 등의 제제로 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물에는 상기 주요성분 이외에도 보조성분으로 비타민 B, C, E나 베타카로틴, Ca, Mg, Zn 등의 미네랄 함유 화합물이나 레시틴 등의 인지질 또는 말톨, 올리고당, 아미노산 등의 화합물을 사용할 수 있으며, 이 중에서도 비타민 C, E나 베타카로틴, 말톨 등 중에서 2 내지 3 성분을 혼합하여 사용하면 생체 활성 효과를 보강할 수 있기 때문에 더욱 바람직하다.

또한, 상기 성분 이외에도 공지의 첨가제로서 미각을 돋구기 위하여 매실, 레몬향, 파인애플향 또는 허브향과 같은 천연향료나 천연과즙, 클로르필린, 플라보노이드 등의 천연색소 및 감미 성분인 과당, 벌꿀, 당알코올, 설탕 등과 구연산, 구연산나트륨 같은 산미제를 혼합하여 사용할 수 있다.

또한 본 발명의 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 건강식품으로는 차, 젤리, 즙, 엑기스, 음료 등의 다양한 형태로 가공될 수 있으며, 본 발명의 건강식품은 인체에 부작용이 없으면서 복용이 용이하고 장기간 보관이 가능하다.

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 각각의 균주 또는 이의 배양액을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 무제가 없으므로 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸컬릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 슈크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 또는 이의 배양액 100 ㎖당 일반적으로 0.01 내지 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 내지 0.03 g 이다.

상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 프로바이오틱스는 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하지 않지만 본 발명의 생균제는 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 유산균 제제를 제공한다.

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 유산균 제제 100 중량부 당 0.01 내지 50 중량부인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며 당해 업계의 당업자가 제조시 중량부를 조절할 수 있다.

또한, 본 발명은 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 발효유를 제공한다.

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액은 발효유 100 중량부 당 0,01 내지 50 중량부인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며 당해업계의 당업자가 제조시 중량부를 조절할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 또는 제제예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예 또는 제제예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예 또는 제제예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1> Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 분리 및 동정

1.1 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 분리

균주의 1차적 선발을 위하여 인산완충용액(PBS, pH2)에 일반 가정의 김치 1g을 첨가하여 2시간 정치 후, CaCO₃를 함유한 MRS 한천배지에서 넓은 투명환을 생성하는 균주를 선발하였고, 하기의 분자생물학적 방법으로 동정하였다. 분리된 균주들 중 기본적인 독성 및 유해 인자를 가지고 있지 않은 균주 1종을 선택하여 BCNU 9200라고 명명하였다.

1.2 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 동정

Bergey`s Manual of Systematic Bacteriology에 기술된 방법으로, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 생리 화학적 특성을 조사하였다. 이를 표 1에 나타내었다. 하기 표 1에 기재된 +는 양성 반응을 의미하고, -는 음성반응을 의미한다.

내용	Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주
그람 염색	+
성장 pH 범위	2.5-9
NaCl 존재시 성장(%)	3-5
생산
겔라틴아제	-
인돌	-
아라비노스	-
셀로비오스(cellobiose)	-
프룩토스	-
갈락토스	-
글루코스	+
락토스	+
만노스	+
모니톨(monnitol	+
라피노스	+
수크로스	+
자이로스	-

하기의 표 2의 프라이머를 이용하여 16S rDNA 유전자의 염기서열을 분석함으로써, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 분자생물학적으로 동정을 하였다. 상기의 결과를 BLAST 프로그램을 이용하여 GeneBank의 데이타베이스에 등록된 다른 표준균주(type strain)의 16s rDNA 유전자들과 blastsearch한 결과, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주는 Lactobacillus arizonensis와 99% 상동성을 보였다. Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 16S rDNA의 염기서열은 서열번호 1에 나타내었다.

또한 Clustal X 2.0(CLC bio, Denmark), Mega 4 program을 사용하여 상동성을 분석하고, neighbor joining method를 기반으로 계통수를 구축하였다. 상기의 결과를 도 1에 나타내었다.

프라이머	염기서열
27F	5`-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’
1492R	5`-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’

도 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에서 분리한 균주는 계통적으로 Lactobacillus arizonensis 종에 속해 있는 것을 확인하였다. 따라서 본 발명의 균주를 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 라고 명명하였고, 이를 농업유전자원정보센터에 2012년 3월 8일 자로 기탁하여, 기탁번호 KACC 91716P를 부여받았다.

< 실시예 2> Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 생균제로서의 이용 가능성.

2.1 산 및 인공 담즙에 대한 내성 확인

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 생균제로서의 가능성을 확인하기 위하여, 산성 pH에 대한 분리 균주의 내성을 확인하였다.

분리 균주를 MRS 브로스(broth)에서 18시간 배양한 후, 1M의 염산을 이용하여 pH를 2.5 조정한 PBS(phosphate buffered saline; 0.8% 의 Nacl, 0.02%의 KH₂PO₄, 0.015%의 Na₂HPO₄ )에 배양액을 접종하고, 37℃를 유지하였다. 이 후, 3시간 동안 배양하였고, 0시간과 3시간이 지난 후의 시료를 채취하여 총균수(CFU/ml)을 측정하였다. 결과를 도 2에 나타내었다.

또한, 분리 균주를 MRS 브로스(broth)에서 18시간 배양한 후, 0.3%, 0.6%, 1%(w/v)의 Oxgall(Sigma Co., U.S.A)이 첨가된 9ml의 MRS 브로스(broth)에 1ml씩 접종하였다. 0시간과 24시간이 지난 후의 생균수를 측정하였다. 이의 결과를 도 3에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주는 pH 2.5에서 3시간이 지난 후에도 100%의 생존률을 보임을 확인하였다.

또한, 도 3에 나타난 바와 같이, 1%의 oxgall에서 86%의 생존률을 보임을 확인하였다.

상기결과를 통하여, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주는 담즙 및 pH에 내성 효과가 우수하다는 것을 확인하였다.

2.2 장내 부착능

Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 장내 부착능을 췌장세포인 Caco-2 세포를 이용하여 측정하였다.

구체적으로는, Caco-2 세포를 1ml 배양액과 24-웰에 10⁶ cells/well이 되도록 접종하였다. 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 배양한 후, 윈심분리를 통해 균체만 회수하고, 24 웰 플래트에 각 웰에 넣고 1시간 배양한다. 이 후, 인산완충용액과 0.1% Triton X 100을 사용하여 상기 균주 및 Caco-2 세포를 웰 플레이트 바닥에서 떼어내고, 총균수를 측정하였다. 이의 결과, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 초기 총균수는 7.44 log CFU/ml임을 확인하였고, 배양 후 총균수는 6.33 log CFU/ml 임을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주는 장내 부착능이 우수함을 알 수 있다.

< 실시예 3> Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 식중독 유발균에 대한 억제 활성

Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 식중독 원인균인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus ), 리스테리아 모노키토게네스(Listeria monocytogenes), 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus) , 대장균(Escherichia coli ), 살모렐라균(Salmonella typhimurium) 및 쉬겔라균(Shigella sonnei)에 대한 항균력을 조사하였다.

보다 구체적으로, 분리 균주를 37℃에서 24시간 배양한 후 균체를 제거한 뒤 pH를 중성화시킨 배양 상등액과 pH를 조정하지 않은 상등액 각각을 0.22 막필터로 여과하여 항균력 측정을 위한 시료로 사용하였다. 각각의 시료를 8mm의 페이퍼 디스크(paper disk)에 75㎕씩 흡수시켰으며, 식중독 원인균이 도말된 고체배지에 이들 페이퍼 디스크를 올려놓고 37℃에서 8-12시간 배양하였다. 이 후, 생육 억제환을 측정한 결과를 하기의 표 3에 나타내었다.

종	억제환(mm)
B. cereus ATCC 14579	11.0±1.5
L. monocytogenes ATCC 15313	16.5±2.1
S. aureus ATCC 6538	-
E. coli ATCC 10798	19.0±0.0
S. sonnei ATCC 25931	16.0±1.4
S. typhimiurium ATCC 14028	13.5±0.7

표 3에 나타난 바와 같이, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 식중독 원인균인 바실러스 세레우스( Bacillus cereus ), 리스테리아 모노키토게네스(Listeria monocytogenes), 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus) , 대장균(Escherichia coli ), 살모렐라균(Salmonella typhimurium) 및 쉬겔라균(Shigella sonnei) 에 대하여 항균력이 있음을 확인하였다.

< 실시예 4> lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 항생제 감수성 조사

항생제 감수성은 디스크 확산법(disk diffusion method)으로 측정하였다. 분리된 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 MacFarland scale 0.5로 보정하였고, MRS 평판배지에 100㎕ 분주하여 도말하였다. Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주가 도말된 배지에 농도별로 접종된 항생제 페이퍼 디스크를 올려놓고, 37℃에서 24시간 배양하였고, 항생제의 최소 억제 범위를 조사하였다. 이의 결과를 하기의 표 4에 나타내었다.

항생제	디스크 농도(㎍/ml)	BCNU 9200
엠피실린	10	감수성
클로람페니콜	30	저항성
젠타마이신	7.5	감수성
테트라사이클린	7.5	감수성

표 4에 나타난 바와 같이, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주는 젠타마이신 및 테트라사이클린에 대하여 감수성을 보이고, 클로람페니콜에 대하여 저항성을 갖는다.

< 실시예 5> Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P)균주의 콜레스테롤 저하능 확인

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 콜레스테롤 저하능을 측정하기 위하여, BSH 활성 조사 및 콜레스테롤 흡수 활성을 조사하였다.

보다 구체적으로, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 BSH 활성을 조사하기 위해 BSH 배지(MRS agar, 0.5% sodium salt of taurodeoxycholic acid (TDCA), 0.37 g/l CaCl₂)에 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 배양액을 10 ㎕ 점적하고, 37°C에서 72 시간 배양하였다. 이 후, 흰색환의 생성 여부를 확인하였고, 이의 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타난 바와 같이, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주가 흰색 침전환을 생성함을 확인하였다. 따라서 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주가 BSH활성이 있어 콜레스테롤 저하에 효과적일 것으로 판단된다.

한편, 콜레스테롤 흡수(cholesterol assimilation)활성 조사는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 0.5% (w/v) TDCA와 0.1 g/l 수용성 콜레스테롤을 첨가한 MRS 브로스(broth)에 접종하고, 37°C에서 24 시간 배양하였다. 배양액을 10,000 rpm으로 5 분간 원심분리하여 균체를 제거한 뒤 배양 상등액을 획득하였다. 콜레스테롤은 Rudel과 Morris 법에 준하여 정량적으로 측정하였다. 균주를 접종하지 않은 MRS 브로스(broth)를 대조구로 사용하였고, 잔존 콜레스테롤 양을 측정하였다. 이의 결과를 도 5 에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, 콜레스테롤 동화율은 54.2%로 확인되었다

상기의 결과들을 통하여, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주는 콜레스테롤 저하능이 우수하다고 판단하였다.

< 실시예 6> Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 항염증 및 항암 효과 확인

NF-κB의 과다 활성은 대장암, 위암, 간암 및 발생 염증을 유발한다. 또한 IkBα는 NF-κB에 결합하여, NF-κB의 핵 내 이동을 억제하여 표적 유전자의 발현을 억제한다. 따라서 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 항염증 및 항암 효과를 확인하기 위하여, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 IkBα 분해 저해 활성을 확인하였다.

구체적으로는, 상기 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 세포를 PBS로 두 번 세척한 후 수확하였고, 1.100rpm 및 4℃에서 8분 동안 원심분리 하여 상등액을 제거하였다. 세포에 완충액 A로 현탁한 후 얼음에서 15분 동안 반응시켰다. 이 후, 1mL 주사기에 25G 바늘을 이용해 주사하여 세포막을 파괴시켰다. 이 후 14000rpm 및 4℃에서 15분 동안 원심 분리하여 상등액을 수거하였다. 분리한 상등액을 단백질 정량과 웨스턴 블러팅(western blotting)에 사용하였다.

시료 단백질을 10% SDS 폴리아크릴아마이드 젤에서 전기영동하였고, 젤 상의 단백질을 실온에서 90V로 2시간 Hybond ECL membrane(Amersham)에 전기적 이동(electrotransfer)시켰다. 상기 막(membrane)을 5% 탈지 분유를 포함한 TBS-T(tris-buffered saline-tween; pH 7.6 Tris-HCl, 137mM NaCl, 0.1% Tween-20) 용액으로 1시간 동안 실온에서 블로킹(blocking)하였다. 상기 막을 실험 목적에 따른 1차 항체와 실온에서 반응시키고, TBS-T용액으로 세척한 후, 퍼옥시다아제와 결합된 2차 항체로 다시 실온에서 반응시켰다. 반응시킨 막을 세척한 후 화학 형광 반응(ECL, Enhanced chemiluminescence)에 의해 발광시킨 후 암실에서 방사선 감지 필름으로 감광시킨 후 현상하였다. 막의 스트립(strip)은 스트립 완충액(6.25mM TrisCl(pH6.7), 2% SDS, 100mM 2-mercaptoethanol)에 넣고, 50℃ 수욕조에서 30분간 반응시킨 후, TBS-T 용액으로 10분 간격으로 2번 세척하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에서 나타난 바와 같이, NIK만 처리하였을 때 IkBα의 분해를 유도한 것에 비하여, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 배양액은 IkBα의 분해를 저해하는 것을 확인하였다.

또한, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주가 NF-κB활성을 억제한다는 사실을 재확인하기 위하여, CAT 어세이를 수행하였다. 구체적으로, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 세포의 배지를 제거하고 냉각한 PBS로 2회 세척한 후 scrape하여 세포를 수거하였다. 수거한 세포는 0.25M Tris-HCl(pH7.8) 200㎕에 현탁한 후, 드라이아이스를 이용하여 6회의 freezing-thawing을 통하여 세포를 파쇄하였다. 세포 파쇄액은 4℃, 1,500rpm에서 20분간 원심분리하여 상층액을 수거하였고, 상기 상층액을 CAT 어세이를 위한 세포추출물로 이용하였다. CAT의 반응은 세포추출물을 Bradford방법으로 단백질을 정량하여 동일한 단백질양을 함유하는 각 세포추출물에 [¹⁴C]-chloramphenicol (54mCi/m㏖) 6㎕, 4mM acetyl CoA 60㎕, 및 Tris-HCl(pH7.8)을 첨가하고, 총 238㎕의 반응액으로 37℃에서 3시간 반응시켰다. 반응생성물은 1㎖의 에틸아세트산이고, 상기 반응생성물을 추출한 다음 원심 건조 농축기(speed vacuum dryer)를 통하여 농축시킨 후, TLC 플레이트(plate)에 점적하였다. 클로르포름 : 메탄올 (95:5)의 용매를 이용하여 전개시켰다. 전개 후 TLC 플레이트를 말린 다음 자기방사법(autoradiography)을 수행하였다. 클로람페니콜의 아세트화된 형태의 스팟(spot)에 대하여 GS-700 Imaging Densitometer (Bio-Red's Image Analysis System)를 이용하여 밀도 분석(density analysis)을 수행하였다. 이의 결과를 도 7에 나타내었다.

도 7에 나타난 바와 같이, NF-κB활성을 유도하는 Cat 유전자를 억제시키고 IkBα 분해를 저해하는 것을 확인하였다.

상기의 결과를 통하여, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 및 이의 배양액은 항염증 및 항암 효과가 있다고 판단하였다.

< 제제예 1>약학적 제제

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 약학적 제제를 제조하였다.

1. 산제의 제조

Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 및 이의 배양액 20mg

유당 100mg

탈크 10mg

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 및 이의 배양액 10mg

옥수수전분 100mg

유당 100mg

스테아린산 마그네슘 2mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

< 제제예 2> 식품의 제조

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

1. 조리용 양념의 제조

조리용 양념 100 중량부에 본 발명 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 8 ~ 12 중량부로 혼합하여 장 기능 개선용 조리용 양념을 제조하였다.

2. 스프 및 육즙의 제조

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 8 ~ 12 중량부, 인진호 추출물 0.1 ~ 4 중량부, 갈근 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 진피 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 창출 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 감초 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 홍삼 추출물 0.01 ~ 3.24 중량부를 스프 및 육즙 100 중량부에 첨가하여 장 기능 개선용 육가공 제품, 면류의 스프 및 육즙을 제조하였다.

3. 유제품( dairy products )의 제조

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 8 ~ 12 중량부, 인진호 추출물 0.1 ~ 4 중량부, 갈근 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 진피 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 창출 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 감초 추출물 0.1 ~ 3 중량부, 홍삼 추출물 0.1 ~ 3.24 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

4. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검은콩, 검은깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 진공 농축기에 감압, 농축하고 분무, 열풍 건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류, 및 본 발명의 추출물을 다음과 같은 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검은콩 8 중량부, 검은깨 7 중량부),

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액 건조분말(10 중량부),

영지(0.5 중량부), 및

지황(0.5 중량부).

< 제제예 3> 음료의 제조

1. 탄산음료의 제조

설탕 5 ~ 10 중량부, 구연산 0.05 ~ 0.3 중량부, 카라멜 0.005 ~ 0.02 중량부, 비타민 C 0.1 ~ 1 중량부, 본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액 10 중량부의 첨가물을 혼합하고 여기에 79 ~ 94 중량부의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 95 ~ 98℃에서 20 ~ 180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5 ~ 0.82 중량부를 주입하여 탄산음료를 제조하였다.

2. 기능성 음료의 제조

비타민 C 0.1 중량부, 과당 5.8 중량부, 백설탕 3.8 중량부, 구연산 0.12 중량부, 사과산 0.03 중량부, 구연산 타륨 0.04 중량부 및 치자청색소 0.02 중량부에 본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액 10 중량부를 배합하여 계량된 물에 완전히 용해시켰다. 상기 용해된 음료를 총량이 1 중량부가 되도록 계량된 정제수로 조정하였다.

3. 건강 음료의 제조

액상과당 0.5 중량부, 올리고당 2 중량부, 설탕 2 중량부, 식염 0.5 중량부, 물 75 중량부과 같은 부재료와 본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액 10 중량부를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강 음료를 제조하였다.

4. 야채 주스의 제조

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액의 진공건조물 10 g을 토마토 또는 당근 주스 1 ℓ에 가하여 건강 증진용 야채 주스를 제조하였다.

5. 과일 주스의 제조

본 발명의 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액의 진공건조물 10 g, 을 사과 또는 포도 주스 1 ℓ에 가하여 건강 증진용 과일 주스를 제조하였다.

< 제제예 4> 발효유의 제조

탈지분유를 이용하여 무지유 고형분 함량을 8 ~ 20 중량부로 조정한 원료유룰 72 ~ 75℃에서 15초간 살균하였다. 살균된 원료유를 일정온도까지 냉각시킨 후 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 10⁶ cfu/㎖의 농도로 접종하여 pH 4~5가 될 때까지 배양하였다. 배양원료 후 배양액을 냉각시켰다. 과즙농축액 0.1 ~ 50 중량부, 식이섬유 0.1 ~ 20 중량부, 포도당 0.5 ~ 30 중량부, 올리고당 0.1 ~ 15 중량부, 칼슘 0.001 ~ 10 중량부, 비타민 0.0001 ~ 5 중량부 등을 녹여 시럽을 제조하였다. 이렇게 제조된 시럽을 살균한 후 냉각하여 사기 배양액과 일정비율로 혼합, 교반하여 균질화시킨 용기에 포장하여 발효유를 제조하였다.

< 제제예 5> 유산균 균말의 제조

Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주를 MRS 브로스에 10⁶ cfu/㎖의 농도로 접종하여 37℃에서 18 ~ 24 시간 동안 pH-조절발효(pH-control fermentation)를 실시하였다. 배양완료 후 4℃에서 10,000 ×g로 원심분리하여 균체를 회수하였다. 회수된 균체는 5% 탈지 우유(skim milk)에 2.5% 유장(whey), 5% 수크로오스(sucrose)가 함유된 보호제와 동량으로 혼합된 후 동결건조기를 통해 분말화 하였다. 이렇게 제조한 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 건조분말은 모두 1 ×10¹¹ cfu/g 이상의 생균수를 나타내었다.

< 제제예 6> 유산균 제제의 제조

제제예 4에서 제조한 유산균 균말을 이용하여 유산균 식품, 정장제 등의 유산균 제제를 제조하였다. Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주의 건조 분말 20 중량부에 올리고당 10 중량부, 무수포도당 20 중량부, 결정과당 5 중량부, 비타민 C 2 중량부, 과일분말향 5 중량부, 알로에 5 중량부, 식이섬유 15 중량부, 차전자피 18 중량부를 혼합하여 스틱 또는 병에 일정량 분주하여 포자하였다. 이렇게 제조된 유산균 제제는 5 ×10⁸ cfu/g 이상의 생균수를 유지하였다.

농업생명공학연구원 KACC91716P 20120308

<110> CHANGWON NATIONAL UNIVERSITY Industry Academy Cooperation Corps <120> New Lactobacillus arizonensis BCNU9200 and probiotics composition comprising the same <130> 1-51P <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1449 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is Lactobacillus arizonesis`s 16S rDNA sequence <400> 1 gcggctggtt cctaaaggtt accccaccga ctttgggtgt tacaaactct catggtgtga 60 cgggcggtgt gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgcgg catgctgatc cgcgattact 120 agcgattccg acttcatgta ggcgagttgc agcctacaat ccgaactgag aatggcttta 180 agagattagc ttactctcgc gagttcgcaa ctcgttgtac catccattgt agcacgtgtg 240 tagcccaggt cataaggggc atgatgattt gacgtcatcc ccaccttcct ccggtttgtc 300 accggcagtc tcaccagagt gcccaactta atgctggcaa ctgataataa gggttgcgct 360 cgttgcggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacaaccat gcaccacctg 420 tatccatgtc cccgaaggga acgtctaatc tcttagattt gcatagtatg tcaagacctg 480 gtaagggttc ttcgcgtagc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc 540 cgtcaattcc tttgagtttc agccttgcgg ccgtactccc caggcggaat gcttaatgcg 600 ttagctgcag cactgaaggg cggaaaccct ccaacactta gcattcatcg tttacggtat 660 ggactaccag ggtatctaat cctgtttgct acccatactt tcgagcctca gcgtcagtta 720 cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata tatctacgca tttcaccgct 780 acacatggag ttccactgtc ctcttctgca ctcaagtttc ccagtttccg atgcacttct 840 tcggttgagc cgaaggcttt cacatcagac ttaaaaaacc gcctgcgctc gctttacgcc 900 caataaatcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960 ccgtggcttt ctggttaaat accgtcaata cctgaacagt tactctcaga tatgttcttc 1020 tttaacaaca gagttttacg agccgaaacc cttcttcact cacgcggcgt tgctccatca 1080 gactttcgtc cattgtggaa gattccctac tgctgcctcc cgtaggagtt tgggccgtgt 1140 ctcagtccca atgtggccga ttaccctctc aggtcggcta cgtatcattg ccatggtgag 1200 ccgttacccc accatctagc taatacgccg cgggaccatc caaaagtgat agccgaagcc 1260 atctttcaaa ctcggaccat gcggtccaag ttgttatgcg gtattagcat ctgtttccag 1320 gtgttatccc ccgcttctgg gcaggtttcc cacgtgttac tcaccagttc gccactcact 1380 caaatgtaaa tcatgatgca agcaccaatc aataccagag ttcgttcgac ttgcattata 1440 gctgnncca 1449

Claims (12)

1. 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능을 갖는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주.
2. 제1항에 있어서, 상기 병원균은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus ), 리스테리아 모노키토게네스(Listeria monocytogenes), 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus) , 대장균(Escherichia coli ), 살모렐라균(Salmonella typhimurium) 및 쉬겔라균(Shigella sonnei)으로 이루어진 군 중에 선택된 1종 이상의 병원균인 것을 특징으로 하는, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주.
3. 제1항에 있어서, 상기 균주는 콜레스테롤 저하능, 항암 또는 항염증 효과를 갖는 것을 특징으로 하는, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주.
4. 제1항에 있어서, 상기 균주는 산성 및 인공 담즙에 대한 내성을 갖고, 장내 부착능이 있는 것을 특징으로 하는, Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주.
5. 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능을 갖는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물.
6. 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능을 갖는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는, 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
7. 제 6항에 있어서, 상기 병원성 미생물은 식중독을 일으키는 병원성 미생물인 것을 특징으로 하는, 병원성 미생물에 의해 발생 되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
8. 제 7항에 있어서, 상기 식중독을 일으키는 병원성 미생물은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus ), 리스테리아 모노키토게네스(Listeria monocytogenes), 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli ), 살모렐라균(Salmonella typhimurium) 및 쉬겔라균(Shigella sonnei)으로 이루어진 군 중에 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
9. 제 6항에 있어서, 상기 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환은 급성 설사, 장염, 위장관염, 변비, 복통 ,복부팽만, 콜레라 및 식중독으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
10. 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능을 갖는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 병원성 미생물에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
11. 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능을 갖는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 유산균 제제.
12. 식중독을 일으키는 병원균에 대한 항균능을 갖는 Lactobacillus arizonensis BCNU 9200 (수탁번호: KACC 91716P) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 발효유.
    
    
    
    
    
    

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