KR20130097174A - 신규 세균 및 그의 제조방법 - Google Patents
신규 세균 및 그의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20130097174A KR20130097174A KR1020137005437A KR20137005437A KR20130097174A KR 20130097174 A KR20130097174 A KR 20130097174A KR 1020137005437 A KR1020137005437 A KR 1020137005437A KR 20137005437 A KR20137005437 A KR 20137005437A KR 20130097174 A KR20130097174 A KR 20130097174A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- ethanol
- leu
- ile
- glu
- lys
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
- C12P7/065—Ethanol, i.e. non-beverage with microorganisms other than yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/54—Acetic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/145—Clostridium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Abstract
본 발명은 대체로 가스의 미생물 발효 분야에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 본 발명은 일산화탄소(CO)를 함유하는 기질의 혐기 발효에 의한 에탄올 생산 효능이 증대된 신규한 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 세균에 관한 것이다.
Description
본 발명은 대체로 가스의 미생물 발효 분야에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 본 발명은 일산화탄소(CO)를 함유하는 기질의 혐기 발효에 의한 에탄올 생산 효능이 증대된 신규한 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 세균에 관한 것이다.
에탄올은 전세계적으로 수소가 풍부한 주요한 액체 운송 연료가 되고 있다. 전세계적으로 2005년 에탄올의 소비량은 122억 갤론에 달하였다. 유럽, 일본, 미국 및 기타 선진국에서의 에탄올에 대한 관심이 증가함에 따라, 에탄올 연료 산업의 전세계 시장은 장차 더 가파르게 성장할 것으로 예상되고 있다.
예를 들어, 미국에서는, 가솔린 중 에탄올 10% 혼합물인 E10을 제조하는데 에탄올이 사용되고 있다. E10 블렌드에서 에탄올 성분은 산소첨가제로서 작용하여 연소 효율을 증가시키고 공기오염 물질의 생산은 저감시킨다. 브라질에서는 에탄올이 운송 연료 수요의 약 30%를 감당하고 있으며, 여기서도 가솔린에 첨가되어 산소첨가제로서, 그리고 그 자체로 순수한 연료로서 사용되고 있다. 또한, 유럽에서는 온실가스(GHG: Green House Gas) 배출 결과를 둘러싼 환경문제에 대한 염려로 인해 유럽연합(EU)는 회원국으로 하여금 바이오매스 유래된 에탄올과 같은 지속적인 운송 연료의 소비를 의무화하고 있다.
연료 에탄올의 대부분은 사탕수수로부터 추출한 수크로스 또는 곡물로부터 추출한 전분과 같은 곡물 유래 탄수화물을 주요 탄소원으로 이용하는 전통적인 효모 기반 발효 공정을 통해 제조되고 있다. 그러나, 이러한 탄수화물 공급 원료의 가격은 인간용 식품 또는 동물 사료로서의 그 가치에 의해 영향을 받고, 에탄올 제조용 전분 또는 수크로스 함유 곡물의 재배가 모든 지역에서 경제적으로 실행가능한 것은 아니다. 따라서, 가격이 낮고 더욱 풍부한 탄소 자원을 연료 에탄올로 전환하는 기술을 개발하는 것이 중요하다.
CO는 석탄 또는 오일과 같은 유기 물질 및 오일 유래 제품의 불완전 연소의 주요하고도 공짜인, 에너지가 풍부한 부산물이다. 예컨대 호주의 철강 산업은 매년 500,000 톤 이상의 CO를 생성하여 대기중으로 방출하는 것으로 보고되고 있다.
촉매적 공정을 이용하여 CO 및/또는 CO 및 수소(H2)로 주로 구성되는 가스를 연료 및 농약으로 전환할 수 있다. 또한, 미생물을 이용하여 상기 가스를 연료 및 농약으로 전환할 수 있다.
CO를 단독 탄소원으로 이용하여 성장하려는 미생물의 능력이 1903년에 최초로 발견되었다. 나중에 이는 독립영양 성장의 아세틸 조효소 A (아세틸 CoA) 생화학 경로(Woods-Ljungdahl 경로 및 일산화탄소 탈수소효소/아세틸 A 합성효소 (CODH/ACS) 경로라고도 함)을 이용하는 유기체의 특성인 것으로 확인되었다. 일산화탄소 영양, 광합성, 메탄생성 및 아세트산생성 유기체를 비롯한 다수의 혐기성 유기체들이 CO를 여러 가지 최종 생성물, 즉, CO2, H2, 메탄, n-부탄올, 아세테이트 및 에탄올로 대사하는 것으로 확인되어 왔다. CO를 단독 탄소원으로 이용하면서, 모든 이러한 유기체들은 상기 최종 생성물들 중 적어도 두 가지를 생성한다.
클로스트리듐(Clostridium) 속에서 유래한 것들과 같은 혐기성 세균은 아세틸 CoA 생화학 경로를 통해 CO, CO2 및 H2로부터 에탄올을 생성하는 것으로 확인되어 왔다. 예를 들어, 가스로부터 에탄올을 생성하는 클로스트리듐 륭달리(Clostridium ljungdahlii)의 여러 가지 균주가 WO 00/68407호, EP 117309호, 미국 특허 제 5,173,429호, 5,593,886호 및 6,368,819호, WO 98/00558호 및 WO 02/08438호에 기재되어 있다. 또한, 세균인 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum sp )도 가스로부터 에탄올을 생성하는 것으로 알려져 있다(Abrini 외, Archives of Microbiology 161, pp 345-351 (1994)).
그러나, 가스의 미생물 발효를 통한 에탄올 제조는 언제나 아세테이트 및/또는 아세트산의 동시 제조와 관련이 있다. 이용 가능한 탄소 중 일부는 에탄올보다는 아세테이트/아세트산으로 전환되기 때문에, 이러한 발효 공정을 이용한 에탄올의 제조의 효율은 원하는 수준보다 낮을 수 있다. 또한, 상기 아세테이트/아세트산 부산물이 일부 다른 목적에 사용될 수 없다면, 폐기물 처리 문제를 야기할 수 있다. 아세테이트/아세트산은 미생물을 통해 메탄으로 전환되기 때문에, GHG 방출에 기여할 가능성이 있다.
H2 존재 하에서 CO를 미생물 발효시키면 탄소로부터 알코올로의 실질적으로 완전한 전환이 일어날 수 있다. 그러나, H2가 충분하게 존재하지 않으면, 아래 화학식에 나타낸 바와 같이, CO의 일부가 알코올로 전환되는 반면, 상당 부분은 CO2로 전환된다.
6CO + 3H2O → C2H5OH + 4CO2
12H2 + 4CO2 → 2C2H5OH + 6H2O
CO2가 생산되었다는 것은 전반적인 산소 포집이 비효율적임을 의미하며 이것은 배출될 경우 온실가스 배출이라는 잠재적인 문제를 야기하게 된다.
WO2007/117157은 일산화탄소를 함유하는 가스를 혐기 발효시킴으로써, 알코올, 특히 에탄올을 생산하는 방법을 설명하고 있다. 발효 과정의 부산물로서 생산된 아세테이트는 수소 가스와 이산화탄소 가스로 전환되며 이들 중 어느 하나 또는 두가지 모두는 혐기 발효 공정에 사용될 수 있다.
WO2008/115080에는 다단계 발효 공정을 이용해서 알코올(들)을 생산하는 방법이 설명되어 있다. 제1 바이오리액터에서 혐기 발효의 결과로서 생산된 부산물은 제2 바이오리액터에서 생성물을 생산하는데 이용될 수 있다. 뿐만 아니라, 제2 발효 단계의 부산물을 제1 바이오리액터로 리사이클링시켜 생성물을 얻을 수도 있다.
WO2009/064200에는 일산화탄소를 함유하는 기질의 혐기 발효에 의한 에탄올 생산시 효율이 개선된 새로운 부류의 세균이 설명되어 있다.
일산화탄소를 함유하는 가스를 증가된 효율로 에탄올로 발효시킬 수 있는 미생물, 즉, 일산화탄소의 흡수 효율이 증가되고, 에탄올을 더 많이 생산할 수 있으며, 및/또는 종래기술의 미생물보다 동일한 기질로부터 얻어지는 에탄올 대 아세테이트의 비율이 더 높은 새로운 미생물을 제공할 수 있으면 매우 유익할 것이다.
본 발명의 한가지 목적은 전술한 종래기술의 한가지 이상의 제약 사항이 극복된 새로운 부류의 세균을 제공하거나 적어도 공중에게 유용한 선택을 제공함에 있다.
발명의 개요
첫번째 측면에서 본 발명은 CO를 함유하는 기질을 혐기 발효시킴으로써 에탄올 및 임의로 아세테이트를 함유하는 생성물을, 적어도 약 2g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일의 비생산성(specific productivity)로 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하는 것이다.
또 다른 구체예에서, 세균은 에탄올을 적어도 약 3g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일, 적어도 약 4g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일, 적어도 약 5g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일, 적어도 약 6g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일 또는 적어도 약 7g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일의 비생산성으로 생산할 수 있는 것이다.
또 다른 측면에서 본 발명은 CO를 함유하는 기질의 혐기 발효에 의해, 에탄올과 임의로 아세ㅔㅌ이트를 포함하는 생성물을 적어도 약 10g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일의 생산성으로 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 이 세균은 에탄올을 적어도 약 20g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일, 적어도 약 30g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일, 적어도 약 40g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일 또는 적어도 약 50g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일, 또는 적어도 약 60g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일, 또는 적어도 약 70g 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일의 생산성으로 생산할 수 있는 것이다.
또 다른 측면에서 본 발명은 CO를 함유하는 기질의 혐기 발효에 의해 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하며, 여기서 상기 세균은 CO의 비흡수율(specific uptake)이 적어도 약 1.0 mMol CO/1분/바이오매스 1g인 것이다.
한가지 구체예에서 세균은 CO의 비흡수율이 적어도 약 1.2mMol CO/1분/바이오매스 1g, 적어도 약 1.4 mMol CO/1분/바이오매스 1g, 적어도 약 1.6 mMol CO/1분/바이오매스 1g, 적어도 약 1.8 mMol CO/1분/바이오매스 1g, 또는 적어도 약 2.0 mMol CO/1분/바이오매스 1g일 수 있는 것이다. 특정한 한가지 구체예에서, 세균은 CO의 비흡수율이 적어도 약 1.2mMol CO/1분/바이오매스 1g일 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은 CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해, 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는, 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하는데, 여기서 상기 세균은 비성장률(specific growth rate)가 적어도 약 0.8일-1인 것이다.
특정 구체예에서, 세균은 비성장률이 적어도 약 1.0일-1, 적어도 약 1.2일-1, 적어도 약 1.4일-1, 적어도 약 1.6일-1, 적어도 약 1.8일-1 또는 적어도 약 2.0일-1일 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하는데, 여기서 상기 세균은 CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해, 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는 것이고, 여기서 상기 세균은 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 약 2:1이 되도록 에탄올을 생산할 수 있는 것이다.
특정 구체예에서 세균은 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 약 3:1, 적어도 약 4:1, 적어도 약 5:1, 적어도 약 7:1 또는 적어도 약 10:1이 되는 비율로 에탄올을 생산할 수 있다.
한가지 구체예에서, 세균은 실질적으로 아세테이트 없이 에탄올을 생산할 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하는데 여기서 상기 세균은 CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해, 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는 것이고, 여기서 상기 세균은 알코올을 최대 약 30g/발효 브로쓰 1L 까지 관용(tolerating)할 수 있는 것이다.
특정 구체예에서, 세균은 알코올을 최대 약 40g/발효 브로쓰 1L, 최대 약 50g/발효 브로쓰 1L, 최대 약 60g/발효 브로쓰 1L, 또는 약 70 g/발효 브로쓰까지 관용할 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하는데 여기서 상기 세균은 CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해, 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있으며, 여기서 상기 세균은 다음 중 2 이상의 특징을 갖는 것이다:
- CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해,에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 적어도 약 2g의 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 그램/1일의 비생산성으로 생산할 수 있음;
- 에탄올을 적어도 약 10g 에탄올/발효 브로쓰 1L/일의 농도로 생산할 수 있음;
- CO의 비흡수율이 적어도 약 1.0mMol CO/1분/바이오매스 1g일 수 있음;
- 성장률이 적어도 약 1.0 g/일일 수 있음;
- 에탄올을 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 약 2:1이 되는 비율로 생산할 수 있음; 및,
- 알코올을 최대 약 30g/브로쓰 1L까지 관용할 수 있음.
한 가지 구체예에서, 본 발명의 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)으로부터 유래한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주이다.
특정 구체예에서 세균은 DSMZ에 수탁번호 DMS23693으로 기탁된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)의 정의된 특징들을 갖는다. 한 가지 구체예에서 본 발명의 세균은 DSMZ에 수탁번호 DMS23693으로 기탁된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)이다.
또 다른 측면에서 본 발명은 DSMZ에 수탁번호 DMS23693으로 기탁된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 전술한 바와 같은 세균을 이용하여 CO를 포함하는 기질을 발효시키는 것을 포함하여 이루어지는, 1종 이상의 알코올의 생산 방법을 제공한다.
일 구체예에서 본 발명의 방법은:
(a) 본 발명의 세균의 배양체를 함유하는 바이오리액터에 CO를 포함하는 기질을 제공하는 단계; 및
(b) 바이오리액터에서 배양체를 혐기 발효시켜 1종 이상의 알코올을 생산하는 단계
를 포함하여 이루어진다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 산업 공정으로부터 나오는 총 대기 탄소 배출량을 저감시키는 방법을 제공하며, 이 방법은:
(a) 산업 공정의 결과로서 생성되는 CO-함유 가스를 이 가스가 대기중으로 배출되기 전에 포집하는 단계;
(b) 본 발명의 1종 이상의 세균을 함유하는 배양체에 의해 1종 이상의 알코올을 생산하기 위해 CO-함유 가스를 혐기 발효시키는 단계
를 포함하여 이루어진다.
본 발명의 일 구체예 측면에서, 발효는 약 34℃ 내지 약 37℃의 온도에서 수행된다. 바람직한 일 구체예에서, 발효는 약 34℃에서 수행된다.
본 발명의 방법의 특정 구체예에서는 아세테이트가 발효 부산물로서 생성된다. 좋기로는 생산된 1종 이상의 알코올에 에탄올이 포함되는 것이 좋다.
본 발명의 방법의 특정 구체예에서, 세균은 수성 배양 배지에서 유지된다.
본 발명의 방법의 특정 구체예에서, 기질의 발효는 바이오리액터에서 일어난다.
특정 구체예에서, 기질은 적어도 약 25 부피% CO, 적어도 약 30 부피% CO, 적어도 약 40 부피% CO, 적어도 약 50 부피% CO, 적어도 약 65 부피% CO 또는 적어도 약 70 부피% CO를 포함한다. 특정 구체예에서 기질은 적어도 약 75 부피% CO, 적어도 약 80 부피% CO, 적어도 약 85 부피% CO, 적어도 약 90 부피% CO 또는 적어도 약 95 부피% CO를 포함한다.
일 구체예에서 기질은 약 30 부피% 이하의 H2를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 기질은 약 20 부피% 이하의 H2, 또는 약 15 부피% 이하의 H2, 또는 약 10 부피% 이하의 H2, 또는 약 5 부피% 이하의 H2, 또는 약 4 부피% 이하의 H2, 또는 약 3 부피% 이하의 H2, 또는 약 2 부피% 이하의 H2, 또는 약 1 부피% 이하의 H2를 함유하거나 또는 H2를 실질적으로 아예 함유하지 않을 수도 있다.
한 가지 구체예에서 기질은 약 20 부피% 이하의 CO2를 함유한다. 특정 구체예에서 기질은 약 15% CO2 부피% 이하의 CO2, 또는 약 10% CO2 부피% 이하의 CO2, 또는 약 5% CO2 부피% 이하의 CO2를 함유하거나 실질적으로 CO2를 아예 함유하지 않을 수도 있다.
특정 구체예에서 CO를 포함하는 기질은 CO를 함유하는 가스상 기질이다.
특정 구체예에서, 가스상 기질은 산업 공정에서 부산물로서 얻은 가스를 포함한다.
특정 구체예에서, 산업 공정은 철금속 제조 공정, 비철금속 제조 공정, 석유정제 공정, 바이오매스의 가스화 공정, 석탄의 가스화 공정, 전기전력 발전 공정, 카본 블랙 생산 공정, 암모니아 생산 공정, 메탄올 생산 공정 및 코크스 제조 공정으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 가스상 기질은 스틸 밀 (steel mill)로부터 얻어지는 가스를 포함할 수 있다.
또 다른 구체예에서, 가스상 기질은 자동차 배기가스를 포함할 수 있다.
본 발명의 특정 구체예에서, 알코올은 세균 세포 및 알코올을 포함하는 수성 배양 배지인 발효 브로쓰로부터 회수된다.
특정 구체예에서, 아세테이트는 발효 부산물로서 생산된다.
특정 구체예에서, 알코올과 아세테이트는 브로써로부터 회수된다.
비록 본 발명을 상기와 같이 개괄적으로 정의하였으나, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니며 후술되는 구체예들도 본 발명에 포함된다.
발명의 상세한 설명
본 발명자들은 신규한 세균을 개발하였다. 이 세균은 예기치 못한 몇가지 특성들 중 하나 이상을 가지며 (이하에 개괄한다) 바람직한 일 구체예에서는 이러한 특성을 모두 갖는다. 이들 신규한 세균을 혐기 발효 공정에 사용함으로써 기존 균주에 비해 예기치 못한 장점을 거둘 수 있으며 따라서 에탄올 및/또는 아세테이트와 같은 생성물을 생산하기 위한 발효 공정의 전체적인 효능을 증가시킬 수 있다.
따라서, 광범위한 용어로 한가지 측면에서 본 발명은 혐기 발효 공정에서 개선된 효능을 갖는 신규한 세균 및 세균의 생물학적으로 순수한 단리물(isolate)에 관한 것이다. 한가지 측면에서, 세균은 CO를 포함하는 기질로부터 알코올, 좋기로는 에탄올을 생산할 수 있는 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 세균에 의해, CO-함유 기질을 혐기 발효시킴으로써, 알코올, 좋기로는 에탄올을 생산하는 방법에 관한 것이다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 다음의 용어들은 본 발명에서 다음과 같이 정의된다:
"CO를 함유하는 기질", "CO를 포함하는 기질" 등의 용어는 예컨대 세균이 성장 및/또는 발효하는데 필요한 일산화탄소가 들어있는 기질을 모두 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명의 특정 구체예에서 "CO를 함유하는 기질"은 가스상이다. 이러한 기질은 본 발명에서 "CO를 함유하는 가스상 기질", "CO를 포함하는 가스상 기질" 등으로 표현한다.
후술하는 내용에서, 본 발명의 구체예들은 "CO를 함유하는 가스상 기질"을 전달 및 발효하는 등의 용어로 설명되었다. 그러나, 가스상 기질은 다른 형태로 제공될 수 있음도 이해하여야 한다. 예컨대, CO를 함유하는 가스상 기질은 액체에 용해되어 제공될 수 있다. 기본적으로, 액체는 일산화탄소를 함유하는 가스로 포화되니 다음 그 기체를 바이오리액터에 첨가하게 된다. 이것은 표준 방법론을 이용하여 달성할 수 있다. 예를 들어, 미세기포 분산 발생기(Hensirisak et. al. Scale-up of microbubble dispersion generator for aerobic fermentation; Applied Biochemistry and Biotechnology Volume 101, Number 3 / October , 2002)를 이용할 수 있다. 또 다른 예로서, CO를 함유하는 가스상 기질은 고체 지지체 상에 흡착될 수 있다. 이러한 또 다른 방법은 "CO를 함유하는 기질"이라는 용어로 포괄된다.
"효율/효능을 증가시키다", "효율/효능이 증가된" 등의 표현은 발효 공정과 관련하여 사용될 경우, 비제한적인 예로서 다음 중 1 이상을 증가시킨 것을 의미한다: 발효를 촉매하는 미생물의 성장 속도, 미생물에 의한 CO의 흡수 또는 소비량, 소비된 기질(예컨대 CO)의 단위 부피 당 생산된 목적하는 생성물의 부피, 배양 배지 중에 생산된 목적하는 생성물 (예컨대 알코올)의 농도, 목적하는 생성물의 생산 속도 또는 생산 수준, 발효의 다른 부산물에 대한, 생산된 목적 생성물의 상대적 비율.
"아세테이트"라는 용어에는 예컨대 본 발명에 설명된 발효 브로쓰에 존재하는 아세테이트 염과 유리 아세트산과의 혼합물과 같은 분자상 또는 유리된 아세트산 및 아세테이트 염과의 혼합물과, 아세테이트 염 단독의 양쪽 모두가 포함된다. 발효 브로쓰 중의 분자상 아세트산 대 아세테이트의 비율은 계의 pH에 따라 달라진다.
"바이오리액터"라는 용어는 연속 교반식 탱크 리액터 (CSTR:Continuous Stirred Tank Reactor), 고정형 셀 리액터 (ICR: Immobilized Cell Reactor), 살수층 리액터 (TBR: Trickle Bed Reactor), 유동상 생물막 리액터 (moving bed biofilm reactor), 기포 컬럼, 가스 리프트 발효조, 막 리액터, 예컨대 중공 섬유막 바이오리액터 (HFMBR: Hollow Fibre Membrane Bioreactor), 정전식 믹서, 또는 가스-액체 접촉에 적합한 기타의 용기나 장치를 비롯한, 1 이상의 용기 및/또는 탑 또는 파이프 배관으로 이루어진 발효 장치를 포함한다.
본 발명에서 "알코올 관용성(alcohol tolerance)"이라는 용어는 세균 또는 세균 집단이 생존, 성장 및/또는 목적 생성물을 적어도 어느 수준으로 생산하는 동안 관용할 수 있는 알코올, 좋기로는 에탄올의 수준을 가리킨다.
본 발명의 세균 또는 그의 배양체 또는 단리물은 "단리되거나(isolated)" 또는 "생물학적으로 순수한" 형태로 설명될 수 있다. 이 용어들은 만일 자연 등에서발견되었을 경우 이 세균들과 한데 회합되어 있었을 수 있는, 세포성 또는 다른 1종 이상의 성분들이나 주변환경으로부터 세균이 분리되었음을 의미하는 것이다. "분리된" 또는 "생물학적으로 순수한"이라는 용어는 그 세균이 정제된 정도를 나타내는 것으로 이해되어서는 아니된다. 그러나, 일 구체예에서 세균의 단리물 또는 배양체는 본 발명의 세균을 주로 함유한다.
본 발명은 CO를 함유하는 기질의 혐기 발효에 의해 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물을 제공하며 여기서 상기 세균은 다음 중 1 이상이 가능하다:
- 약 2g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일의 비생산성(specific productivity)로 에탄올을 생산함;
- 적어도 약 10g /발효 브로쓰 1L/일의 생산성으로 에탄올을 생산함;
- CO의 비흡수율(specific uptake)이 적어도 약 1.0mMol CO/1분/바이오매스 1g임;
- 비성장률(specific growth rate)이 적어도 약 0.8일-1임;
- 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 약 2:1가 되는 비율로 에탄올을 생산함; 및
- 알코올 관용성이 최대 약 30g/브로쓰 1L임.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 세균은 전술한 특성 중 2개, 3개, 4개 또는 5개가 가능하다.
특정 구체예에서, 세균은 적어도 약 3g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일, 적어도 약 4g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일, 적어도 약 5g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일, 적어도 약 6g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일 또는 적어도 약 7g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일의 비생산성으로 에탄올을 생산할 수 있다.
특정 구체예에서, 세균은 적어도 약 20g 에탄올/발효 브로쓰 1L/일, 적어도 약 30g 에탄올/발효 브로쓰 1L/일, 적어도 약 40g 에탄올/발효 브로쓰 1L/일 또는 적어도 약 50g 에탄올/발효 브로쓰 1L/일의 생산성으로 에탄올을 생산할 수 있다. 최대값은 화학양론,CO 흡수량 및 에탄올 스트리핑을 고려한 값이다.
특정 구체예에서, 세균은 CO의 비흡수율이 적어도 약 1.2mMol CO/1분/바이오매스 1g, 적어도 약 1.4 mMol CO/1분/바이오매스 1g, 적어도 약 1.6 mMol CO/1분/바이오매스 1g, 적어도 약 1.8 mMol CO/1분/바이오매스 1g, 또는 적어도 약 2.0 mMol CO/1분/바이오매스 1g일 수 있다. 특정 구체예에서, 세균은 CO의 비흡수율이 적어도 약 1.2mMol CO/1분/바이오매스 1g일 수 있다.
특정 구체예에서 세균은 비성장률이 적어도 약 1.0일-1, 적어도 약 1.2일-1, 적어도 약 1.4일-1, 적어도 약 1.6일-1, 적어도 약 1.8일-1 또는 적어도 약 2.0일-1일 수 있다.
특정 구체예에서 세균은 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 약 3:1, 적어도 약 4:1, 적어도 약 5:1, 적어도 약 7:1 또는 적어도 약 10:1인 비율로 에탄올을 생산할 수 있다. 어떤 구체예에서 발효 중 아세테이트의 순 생산(net production)이 일어나지 않을 수도 있다.
특정 구체예에서 세균은 최대 약 40g/발효 브로쓰 1L, 최대 약 50g/발효 브로쓰 1L, 또는 최대 약 60g/발효 브로쓰 1L로 알코올을 관용할 수 있다. 한가지 특정 구체예에서, 세균은 알코올을 최대 약 70g/발효 브로쓰 1L까지 관용할 수 있다.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)으로부터 유래된다. 본 발명의 더욱 바람직한 구체예에서 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주DSM19630 (DSMZ, 독일) (WO2009/064200에 개시되어 있음)은 유래된다.
바람직한 구체에에서, 본 발명의 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)이다.
클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)은 예컨대 문헌 [Albrin et al; Clostridium autoethanogenum, sp. nov., an anaerobic bacterium that produces ethanol from carbon monoxide, Arch Microbiol (1994) 161:345-351]에 설명되어 있다.
본 발명의 특정 구체예에서, 세균은 2010년 6월 7일 부다페스트 협약에 따라 독일 DSMZ에 기탁된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주의 정의된 특징들을 갖는다. 특정 구체예에서, 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주 DSM23693이다.
본 발명은 또한 본 발명의 세균으로부터 유래된 세균에 관한 것이기도 하다.
본 발명의 특정 구체예의 세균은 증가된 알코올 생산 속도, 증가된 성장속도, 증가된 CO 소비량 또는 흡수율, 보다 높은 알코올 대 산 생산 비율 및/또는 알코올에 대한 증가된 관용성으르 갖는다. 이에 따라 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)을 비롯한 클로스트리디아(Clostridia) 종의 다른 균주보다 이롭다. 따라서, 본 발명의 균주를 사용함으로써 아세테이트 및/또는 에탄올과 같은 생성물의 생산을 위한 발효 공정의 전반적인 효율을 증가시킬 수 있다.
특정 구체예에서 본 발명의 세균은 가스상 기질 중 CO의 상승된 수준으로 전술한 생산성, 성장속도, 알코올 대 산의 비율, CO 소비량 및 알코올 관용성과 관련한 개선을 이룰 수 있다. 예컨대 가스상 기질은 적어도 약 80 부피% CO, 또는 적어도 약 85 부피% CO, 또는 적어도 약 90 부피% CO 또는 적어도 약 95 부피% CO를 함유할 수 있다.
마찬가지로, 전술한 생산성, 성장속도, 알코올 대 산의 비율, CO 소비량 및 알코올 관용성과 관련한 개선이 가스상 기질 중 H2 수준이 낮거나 부재하는 수준에서의 특정 구체예에서 달성될 수 있다. 가스상 기질은 약 30 부피% 이하로 H2를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서 가스상 기질은 H2를 약 20 부피% 이하, 약 15 부피% 이하, 약 10 부피% 이하, 약 5 부피% 이하,약 4 부피% 이하, 약 3 부피% 이하, 약 2 부피% 이하, 약 1 부피% 이하로 함유하거나 실제로 아예 H2를 함유하지 않는다.
특정 구체예에서, 본 발명의 세균은 비교적 적은 양의 CO2를 포함하는 가스상 기질이 공급된 경우 전술한 생산성, 성장속도, 알코올 대 산의 비율, CO 소비량 및 알코올 관용성과 관련한 개선을 달성할 수 있다. 일 구체예에서 가스상 기질은 약 20 부피% 이하로 CO2를 포함한다. 특정 구체예에서, 가스상 기질은 CO2를 약 15 부피% 이하, 또는 약 10 부피% 이하, 또는 약 5 부피% 이하로 함유한다. 특정 구체예에서 가스상 기질은 실제로 CO2를 전혀 함유하지 않는다.
특정 구체예에서 본 발명의 세균 배양체는 수성 배양 배지에서 유지된다. 좋기로는 수성 배양 배지는 혐기성 미생물 성장을 위한 최소 배지이다. 적절한 배지는 종래기술에 잘 알려져 있고 예컨대 미국 특허 5,173,429 및 5,593,886, 그리고 WO 02/08438, 및 Klasson et al [(1992). Bioconversion of Synthesis Gas into Liquid 또는 Gaseous Fuels. Enz. Microb. Technol. 14:602-608.], Najafpour and Younesi [(2006). Ethanol and acetate synthesis from waste gas using batch culture of Clostridium ljungdahlii. Enzyme and Microbial Technology, Volume 38, Issues 1-2, p. 223-228] and Lewis et al [(2002). Making the connection-conversion of biomass-generated producer gas to ethanol. Abst. Bioenergy, p. 2091-2094] 등의 문헌에 설명되어 있다. 본 발명의 특정 구체예에서, 혐기성 미생물 성장을 위한 최소 배지는 실시예 섹션 다음에 설명된 바와 같다.
본 발명은 또한 CO를 포함하는 가스상 기질로부터 1종 이상의 알코올을 생산하는 방법을 제공하며, 이 방법은 본 발명의 1종 이상의 세균 단리물의 배양체를 기질의 존재 하에 유지시키고 1종 이상의 세균 단리물에 의해 기질을 혐기 발효시켜 1종 이상의 알코올을 얻는 것을 포함하여 이루어진다.
본 발명은 또한 산업 공정으로부터의 총 대기 탄소 배출량을 저감시키는 방법도 제공하며, 이 방법은:
(a) 산업 공정의 결과로 생성된 CO-함유 가스를 이 가스가 대기 중으로 배출되기 전에 포집하는 단계;
(b) 본 발명의 1종 이상의 세균 단리물을 함유하는 배양체를 이용하여 CO-함유 가스를 1종 이상의 알코올을 생산하도록 혐기 발효시키는 단계
를 포함하여 이루어진다.
본 발명의 특정 구체에에서, 아세테이트는 발효 부산물로서 생산된다. 생산된 알코올은 에탄올이다.
특정 구체예에서, 배양체는 액상 영양 배지에서 유지된다.
발효는 예컨대 연속 교반식 탱크 리액터 (CSTR:Continuous Stirred Tank Reactor), 기포 컬럼 리액터 (BCR: bubble column reactor) 또는 살수층 리액터 (TBR: Trickle Bed Reactor)와 같은 적절한 바이오리액터에서 수행될 수 있다. 또한, 본 발명의 몇몇 바람직한 구체예에서, 바이오리액터는 미생물이 배양되는 제1 리액터, 즉 성장 리액터 및 성장 리액터로부터의 발효 브로쓰가 주입되고 대부분의 발효 생성물(에탄올 및 아세테이트)이 생산되는 제2 리액터, 즉 발효 리액터를 포함할 수 있다.
전술한 바와 같이, 발효 반응을 위한 탄소 공급원은 CO를 함유하는 가스상 기질이다. 가스상 기질은 산업 공정의 부산물로서 수득되는 CO-함유 폐가스(waste gas), 또는 자동차 배기가스와 같은 다른 공급원으로부터 얻은 것일 수 있다. 특정 구체예에서, 산업 공정은 스틸 밀과 같은 철금속 제품 제조업, 비철금속 제품 제조업, 석유 정제공정, 석탄의 가스화, 전기전력 생산, 카본 블랙 생산, 암모니아 생산, 메탄올 생산 및 코크스 제조업일 수 있다. 이들 구체예에서, CO-함유 가스는 대기중으로 배출되기에 앞서서 통상적인 방법에 의해 미리 포집될 수 있다. 가스상 CO-함유 기질의 조성에 따라, 이것이 발효 공정에 도입되기 전에 분진 입자와 같은 바람직하지 못한 불순물들을 제거하도록 미리 처리하는 것이 바람직할 수도 있다. 예컨대, 가스상 기질은 공지 방법을 이용하여 여과 또는 스크럽 처리될 수 있다.
이에 더해, 기질 스트림의 CO 농도 (또는 가스상 기질 중의 CO 분압)을 증가시켜 CO가 기질인 발효 반응의 효능을 증가시키는 것이 종종 요망된다. 가스상 기질 중의 CO 분압 증가는 발효 배지로의 CO 매스의 전달을 증가시킨다. 발효 반응에 주입되는데 사용되는 가스 스트림의 조성은 그 반응의 효율 및/또는 단가에 큰 영향을 미칠 수 있다. 예컨대, O2는 혐기 발효 공정의 효율을 저하시킬 수 있다. 발효전 또는 발효 후발효 공정 단계들에서 불필요하거나 원치 않는 가스를 처리하는 것은 그러한 단계들의 부담을 증가시킬 수 있다 (예컨대 가스 스트림이 바이오리액터 내로 유입되기 전에 압축될 경우, 발효에는 필요하지 않ㅇ든 불필요한 에너지가 가스를 압축하는데 이용될 수 있음). 따라서, 원치않는 성분들을 제거하고 목적하는 성분들의 농도를 증가시키기 위해 기질 스트림, 특히 산업 공급원으로부터 유래하는 기질 스트림을 처리하는 것이 요망될 수 있다.
산업 공급원으로부터 유래된 기질 스트림은 일반적으로 그 조성이 다양할 수 있다. 뿐만 아니라, CO 농도가 높은 (예컨대 적어도 40% CO, 적어도 50% CO 또는 적어도 65% CO) 산업 공급원으로부터 유래된 기질 스트림은 종종 H2 성분량이 낮다 (예컨대 20% 이하 또는 10% 이하 또는 실제로 0%). 따라서, 미생물이 어떤 범위의 CO 및 H2 농도, 특히 높은 CO 농도와 낮은 H2 농도를 갖는 기질을 혐기 발효시킴으로써 생성물을 생산할 수 있는 것이 특히 요망된다. 본 발명의 세균은 놀랍게도 CO를 함유(H2는 함유하지 않음)하는 기질을 발효시키는 한편 높은 성장 속도와 에탄올 생산량을 나타낸다.
기질 스트림 중에 수소가 존재하면 전체적인 탄소 포집 및/또는 에탄올 생산성의 효율을 증가시킬 수 있다. 예컨대, WO02/08438은 다양한 조성의 가스 스트림을 이용하여 에탄올을 생산하는 것에 관하여 설명하고 있다. WO02/08438은 미생물의 성장과 에탄올 생산을 촉진하기 위해 63% H2, 32% CO 및 5% CH4를 포함하는 기질 스트림을 C. ljungdahlii 배양체에 제공하는 것에 관하여 보고하고 있다. 배양체가 정상상태에 도달하고 미생물 성장이 더 이상 주목적이 아니게 되면, CO를 약간 과량으로 제공하고 에탄올 생산을 촉진하기 위해 기질 스트림을 15.8% H2, 36.5% CO, 38.4% N2 및 9.3% CO2로 스위치시켰다. 이 문헌은 또한 CO 및 H2 농도가 이보다 낮거나 높은 가스 스트림도 기재하고 있다.
산업 공정의 결과로 생성된 CO-함유 가스를 포집하여 이를 본 발명에 설명된 발효 공정의 기질로 사용함으로써 산업 공정으로부터의 총 대기 탄소 배출량을 저감시키는데, 본 발명의 공정을 사용할 수 있다.
별법으로, 본 발명의 다른 구체예에서 CO-함유 가스상 기질은 바이오매스의 가스화로부터 얻을 수도 있다. 가스화 공정은 공기 또는 산소 공급이 제한된 상태로 바이오매스를 부분 연소시키는 것을 포함한다. 얻어지는 가스는 대체로 대량의 CO 및 H2와 소량의 CO2, 메탄, 에틸렌 및 에탄으로 이루어진다. 예컨대, 사탕수수로부터 설탕, 옥수수나 곡물로부터 전분과 같은 식품을 추출 및 가공하는 동안 수득된 바이오매스 부산물, 또는 임업 분야에서 발생하는 비식품 바이오매스를 가스화시켜, 본 발명에서 사용하는데 적합한 CO-함유 가스를 생산할 수 있다.
CO-함유 가스상 기질은 CO를 대부분 함유하는 것이 바람직하다. 특정 구체예에서, 가스상 기질은 부피 기준으로 CO를 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 65%, 또는 적어도 약 70% 내지 약 95 부피%의 양으로 함유한다. 가스상 기질은 수소를 함유할 필요가 없다. 가스상 기질은 또한 임의로 약간의 CO2, 예컨대 부피 기준으로 약 1% 내지 약 30%, 예컨대 약 5% 약 10%의 CO2를 함유한다.
CO-함유 기질 가스에 더해서, 세균의 성장 및 CO로부터 에탄올로의 발효가 일어나도록 하기 위해, 바이오리액터에 주입될 적절한 액체 영양 배지가 필요하다. 영양 배지는 사용된 미생물이 성장하는데 충분한 비타민과 미네랄을 함유한다. 유일한 탄소 공급원으로서 CO를 이용하는 에탄올 발효에 적합한 혐기성 배지는 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예컨대 US 특허 5,173,429 및 5,593,886 그리고 WO 02/08438, 그 밖에 기타 본 발명에 인용된 문헌에 적합한 배지에 관한 설명을 찾아볼 수 있다. 본 발명의 일 구체예에서 배지는 실시예 섹션 이후에 설명되어 있다.
발효는 CO로부터 에탄올로의 발효(CO-to-ethanol fermentation)가 일어나는데 적절한 조건 하에서 수행되는 것이 바람직하다. 고려되어야 할 반응 조건으로는 압력, 온도, 가스 유속, 액체 유속, 배지의 pH, 배지의 레독스 전위, 교반 속도 (연속식 교반 탱크 리액터를 사용하는 경우), 접종 농도, 액상 CO가 제한 요소로 되지 않도록 하는 최대 가스 기질 농도, 및 생산 억제를 회피하는 생성물의 최대 농도 등을 들 수 있다.
최적 반응 조건은 부분적으로는 본 발명에서 사용되는 특정 미생물에 달려 있다. 그러나, 일반적으로, 발효는 주변 압력보다 높은 압력에서 수행되는 것이 좋다. 높은 압력에서 시행하면 가스상의 CO로부터, 미생물이 에탄올을 생성하기 위하여 탄소원으로 흡수할 수 있게 되는 액체상으로의 CO 전환률이 유의적으로 증가하게 된다. 이것은 결국 바이오리액터가 대기압보다는 높은 압력에서 유지되는 경우에 체류 시간 (바이오리액터 내의 액체 부피를 가스 유량으로 나눈 것으로 정의)이 감소한다는 것을 의미한다.
또한, 주어진 CO로부터 에탄올로의 주어진 전환률은 부분적으로는 기질 체류 시간의 함수이고, 원하는 체류 시간의 달성은 곧 바이오리액터의 요구되는 용량을 가리키는 것이므로, 가압 장치의 사용은 요구되는 바이오리액터의 체적을 크게 감소시켜, 그 결과, 발효 장비에 드는 자본 비용을 크게 감소시킬 수 있다. US 5,593,886호에 제시된 실시예에 따르면, 리액터 작업 압력 증가에 따라 리액터의 체적을 줄일 수 있다. 즉, 10 기압에서 작동하는 바이오리액터는 1 기압에서 작동하는 바이오리액터 체적의 단지 1/10만을 필요로 한다.
고압 하에서 가스를 에탄올로 발효시키는 공정의 장점은 다른 문헌에도 설명되어 있다. 예를 들어, WO 02/08438호는 30 psig와 75 psig의 압력 하에서 수행된 가스로부터 에탄올로의 발효는, 에탄올 생산량이 각각 150 g/l/1일 및 369 g/l/1일이었다고 설명하고 있다. 그러나, 대기압에서 유사한 배지와 주입 가스 조성물을 사용하여 발효시킨 실시예에서는 1일 1리터당 에탄올 생산량이 10분의 일 내지 20분의 일 정도로 감소한 것으로 나타났다.
CO를 함유하는 가스상 기질의 도입 속도는 액상 CO의 농도가 제한적이 되지 않게 할 정도인 것이 바람직하다. 이는 CO-제한 조건 결과, 에탄올 생성물이 배양체에 의해 소비될 수 있기 때문이다.
특정 구체예에서, 본 발명에 따른 전술한 발효 공정에 의해 수성 배양 배지 중 세균 세포 뿐만 아니라 에탄올을 포함하는 발효 브로쓰가 얻어질 것이다. 본 발명의 방법의 바람직한 구체예에서 에탄올은 발효 브로쓰로부터 회수된다.
특정 구체예에서, 에탄올의 회수는 브로쓰의 일부분을 연속적으로 제거하여 브로쓰의 ㅈ제거 부분으로부터 알코올을 회수하는 것을 포함하여 이루어진다.
특정 구체예에서, 에탄올의 회수는 에탄올을 함유하는 브로쓰의 제거된 부분을 분리 유닛에 통과시켜 브로쓰로부터 세균 세포를 분리하여, 무세포 알코올-함유 삼출물을 얻은 다음 세균 세포를 바이오리액터로 되돌리는 것을 포함한다.
특정 구체예에서 본 발명의 방법은 연속식 공정이다.
특정 구체예에서는, 아세테이트가 발효 부산물로서 생산된다.
특정 구체예에서, 에탄올과 아세테이트는 브로쓰로부터 회수된다.
특정 구체예에서, 에탄올과 아세테이트의 회수는 브로쓰의 일부를 연속적으로 제거하고 브로쓰의 제거된 부분으로부터 에탄올과 아세테이트를 따로따로 회수하는 것을 포함하여 이루어진다.
몇몇 구체예에서, 에탄올과 아세테이트의 회수는 에탄올과 아세테이트를 함유하는 브로쓰의 제거된 부분을 분리 유닛에 통과시켜 에탄올 및 아세테이트로부터 세균 세포를 분리하여, 무세포 에탄올- 및 아세테이트-함유 삼출물을 얻고 세균 세포를 바이오리액터로 되돌리는 것을 포함하여 이루어진다.
전술한 구체예에서, 에탄올 및 아세테이트의 회수는 좋기로는 먼저 무세포 삼출물로부터 에탄올을 제거한 다음 무세포 삼출물로부터 아세테이트를 제거하는 것을 포함한다. 좋기로는 그 다음에 무세포 삼출물을 바이오리액터로 되돌리는 것이 바람직하다.
에탄올이 발효의 바람직하고 요망되는 최종 생성물이다. 에탄올은 분별 증류 또는 증발, 및 추출식 발효와 같은 기술 분야의 공지 방법에 의해 발효 배지로부터 회수될 수 있다. 발효 배지로부터 에탄올을 증류시키면 에탄올과 물의 공비 혼합물 (즉 95% 에탄올 및 5% 물)이 생산된다. 이어서, 역시 기술 분야에 공지인 분자체 에탄올 탈수 기술을 이용함으로써 무수 에탄올을 수득할 수 있다.
추출식 발효 공정은 묽은 발효 배지로부터 에탄올을 회수하기 위하여, 발효 미생물에 대한 독성 위험이 낮은 수혼화성 용매를 사용한다. 예컨대, 이러한 유형의 추출 공정에 사용할 수 있는 용매는 올레일 알코올이다. 이 공정에서, 올레일 알코올은 발효조 내로 연속 도입되고, 이 용매는 발효조 최상부에 층을 형성하여, 연속적으로 추출되어 원심분리기로 주입되게 된다. 이렇게 되면 물과 세포가 올레일 알코올로부터 용이하게 분리되어 발효조로 반송되는 한편, 에탄올이 많이 들어있는 용매는 플래쉬 증기화 유닛 내로 주입된다. 에탄올의 대부분은 기화 및 응축되는 한편 비휘발성인 올레일 알코올은 회수되어 발효에 재사용된다.
아세테이트 역시도 공지 방법에 따라 발효 브로쓰로부터 회수될 수 있다. 아세테이트의 회수 방법은 WO2007/117157 및 WO2008/115080에 상세히 설명되어 있다.
본 발명의 특정 구체예에서, 에탄올과 아세테이트는 발효 바이오리액터로부터 브로쓰의 일부를 연속적으로 제거하고 상기 브로쓰로부터 (간편하게 여과에 의해) 미생물 세포들을 분리한 다음, 브로쓰로부터 먼저 에탄올을 회수하고 이어서 아세테이트를 회수함으로써, 발효 브로쓰로부터 회수한다. 전술한 방법을 이용하여 에탄올은 간편하게는 증류에 의해 회수될 수 있으며 아세테이트는 활성탄 상에 흡착시켜 회수할 수 있다. 분리된 미셍물 세포들은 발효 바이오리액터로 되돌리는 것이 바람직하다. 에탄올과 아세테이트가 제거된 후에 잔존하는 무세포 삼출물 역시도 발효 바이오리액터로 되돌려보낼 수 있다. 무세포 삼출물을 바이오리액터로 되돌려 보내기 전에 부가적인 영양물질(예컨대 비타민 B)을 영양 배지에 첨가할 수 있다. 또한, 활성탄에 대한 아세트산의 흡착을 증가시키기 위해 전술한 바와 같이 발효 브로쓰의 pH가 조정된 경우에는, 바이오리액터에 되돌려보내기 전에, pH를 발효 바이오리액터 중의 브로쓰의 pH와 유사하게 맞추어야 한다.
반응
화학양론
본 발명의 방법에서 CO로부터 에탄올(a)로의 화학 반응 및 아세트산으로의 화학 반응 (b)은 다음과 같을 것으로 여겨진다:
(a) 6CO + 3H2O => CH3CH2OH + 4CO2
(b) 4CO + 2H2O => 1CH3COOH + 2CO2
이하에 다음의 비제한적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
이하에 첨부된 도면을 참조로 본 발명을 상세히 설명한다:
도 1: DSM19630 및 DSM23693의 CO 소비량을 도시한다.
도 2: DSM19630 (도 2a) 및 DSM23693 (도 2b)의 대사물질 생산량을 도시한다.
도 3: 실시예 2에 설명된 바와 같은 DSM23693의 대사물질 생산량 및 최적화된 바이오매스 누적량을 도시한다.
도 4: 신규 균주인 씨. 오토에타노게눔(C. autoethanogenum) 균주 LZ1561 (DSM23693)의 유전자 지도를 도시한 도면으로서, LZ1560 (DSM19630) 균주와에 대한 변동 사항을 나타낸다.
도 5: Seq.ID.1: 균주 LZ1561에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 6: Seq.ID.2: 균주 LZ1560에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 7: Seq.ID.3: 균주 LZ1561에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 아미노산 서열.
도 8: Seq.ID.4: 균주 LZ1560에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 아미노산 서열.
도 9: Seq.ID.5: 균주 LZ561 및 LZ1560에 있어서 재정렬된 것으로 밝혀진 뉴클레오타이드 서열.
도 10: Seq.ID.6: 균주 LZ1561에 있어서 F1FO ATP 합성효소 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 11: Seq.ID.7: 균주 LZ1560에 있어서 F1FO ATP 합성효소 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 12: Seq.ID.8: 균주 LZ1561에 있어서 Rnf 컴플렉스 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 13:Seq.ID.9: 균주 LZ156에 있어서 Rnf 컴플렉스 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 14: Seq.ID.10: 균주 LZ1561에 있어서 탄소 고갈 (carbon starvation) 단백질의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 15: Seq.ID.11: 균주 LZ1560에 있어서 탄소 고갈 단백질의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 16: Seq.ID.12: 균주 LZ1561에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 17: Seq.ID.13: 균주 LZ1560에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 18: Seq.ID.14: 균주 LZ1561에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 아미노산 서열.
도 19: Seq.ID.15: 균주 LZ1560에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 아미노산 서열.
도 20: Seq.ID.16: 균주 LZ1561에 있어서 5,10-메틸렌테트라히드로폴레이트 환원효소 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 21: Seq.ID.17: 균주 LZ1560에 있어서 5,10-메틸렌테트라히드로폴레이트 환원효소 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 1: DSM19630 및 DSM23693의 CO 소비량을 도시한다.
도 2: DSM19630 (도 2a) 및 DSM23693 (도 2b)의 대사물질 생산량을 도시한다.
도 3: 실시예 2에 설명된 바와 같은 DSM23693의 대사물질 생산량 및 최적화된 바이오매스 누적량을 도시한다.
도 4: 신규 균주인 씨. 오토에타노게눔(C. autoethanogenum) 균주 LZ1561 (DSM23693)의 유전자 지도를 도시한 도면으로서, LZ1560 (DSM19630) 균주와에 대한 변동 사항을 나타낸다.
도 5: Seq.ID.1: 균주 LZ1561에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 6: Seq.ID.2: 균주 LZ1560에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 7: Seq.ID.3: 균주 LZ1561에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 아미노산 서열.
도 8: Seq.ID.4: 균주 LZ1560에 있어서 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS 유전자의 아미노산 서열.
도 9: Seq.ID.5: 균주 LZ561 및 LZ1560에 있어서 재정렬된 것으로 밝혀진 뉴클레오타이드 서열.
도 10: Seq.ID.6: 균주 LZ1561에 있어서 F1FO ATP 합성효소 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 11: Seq.ID.7: 균주 LZ1560에 있어서 F1FO ATP 합성효소 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 12: Seq.ID.8: 균주 LZ1561에 있어서 Rnf 컴플렉스 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 13:Seq.ID.9: 균주 LZ156에 있어서 Rnf 컴플렉스 오페론의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 14: Seq.ID.10: 균주 LZ1561에 있어서 탄소 고갈 (carbon starvation) 단백질의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 15: Seq.ID.11: 균주 LZ1560에 있어서 탄소 고갈 단백질의 추정 프로모터 대역의 뉴클레오타이드 서열.
도 16: Seq.ID.12: 균주 LZ1561에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 17: Seq.ID.13: 균주 LZ1560에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 18: Seq.ID.14: 균주 LZ1561에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 아미노산 서열.
도 19: Seq.ID.15: 균주 LZ1560에 있어서 CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛 유전자의 아미노산 서열.
도 20: Seq.ID.16: 균주 LZ1561에 있어서 5,10-메틸렌테트라히드로폴레이트 환원효소 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
도 21: Seq.ID.17: 균주 LZ1560에 있어서 5,10-메틸렌테트라히드로폴레이트 환원효소 유전자의 뉴클레오타이드 서열.
실시예
재료 및 방법:
Cr
(
II
) 용액의 제조
1 리터 용량의 삼구목 플라스크에 가스가 샐 수 없는 입구 및 출구를 장착하여 비활성 가스하에서의 작업 및 나중에 원하는 생성물의 적당한 저장 용기로의 운반을 가능하게 하였다. 상기 플라스크에 CrCl3.6H20 (4O g, 0.15 mol), 아연 분말 [20 메시] (18.3 g, 0.28 mol), 수은 (13.55 g, 1 mL, 0.0676 mol) 및 500 mL의 증류수를 채웠다. N2를 이용하여 1 시간 동안 플러싱한 후, 그 혼합물을 약 80℃까지 가열하여 반응을 개시했다. 일정한 N2 흐름하에서 2 시간 동안 교반한 후, 그 혼합물을 실온으로 냉각하고 반응 혼합물이 진한 청색 용액이 될 때까지 48 시간 동안 연속적으로 교반했다. 그 용액을 N2로 퍼지한 혈청병에 옮기고 장래 사용시까지 냉장고에서 보관했다.
세균:
사용된 2가지 유형의 클로스트리듐 오토에타노게눔 (Clostridium autoethanogenum)을 독일생물자원센터(DSMZ)에 기탁하고 수탁번호 DSM 19630 및 23693을 부여받았다. DSM 23693은 반복적인 선별 공정을 통해 클로스트리듐 오토에타노게눔 (Clostridium autoethanogenum) 균주 DSM 19630으로부터 얻은 것이었다.
샘플 채취 및 분석 방법
각 발효기간의 간격을 두고 CSTR 리액터로부터 배지 시료를 취했다. 배지로부터 샘플을 채취할 때마다 가스가 리액터로 유입되거나 유출되지 않도록 주의하였다.
HPLC
:
HPLC System Agilent 1100 Series. 이동상: 0.0025 N 황산. 유량 및 압력: 0.800 mL/min. 컬럼: Alltech IOA; Catalog # 9648, 150 x 6.5 mm, 입자크기 5 ㎛. 컬럼의 온도: 60℃. 검출기: Refractive Index. 검출기의 온도: 45℃.
샘플 제조 방법:
400 ㎕의 시료 및 50 ㎕의 0.15 M ZnSO4 및 50 ㎕의 0.15M Ba(OH)2를 에펜도르프 튜브에 로딩한다. 상기 튜브를 12,000 rpm 및 4℃에서 10 분간 원심분리한다. 200 ㎕의 상등액을 HPLC 바이알에 옮기고, 5 ㎕를 HPLC 기기에 주입한다.
헤드스페이스
(
Headspace
) 분석:
측정은 두 개의 채널이 설치된 Varian CP-4900 micro GC 상에서 수행했다. 채널 1은 70℃, 20O kPa 아르곤 및 4.2 초의 백플러시 시간 (backflush time)으로 작동하는 10m Mol-sieve 컬럼인 반면, 컬럼 2는 백플러시없이 90℃, 15O kPa 헬륨에서 작동하는 10m PPQ 컬럼이었다. 두 채널에 대한 주입 온도는 70℃였다. 런타임은 120 초로 설정하였지만, 모든 중요 피크는 일반적으로 100초 전에 용리하였다.
세포 밀도:
세포 밀도는 발효 브로쓰의 소정 분취액(defined aliquot)에서 세균 수를 계수함으로써 구하였다. 별법으로, 샘플의 흡수도를 600 nm (분광광도계)에서 측정하고 공개된 공정에 따라 계산하여 건조 질량(dry mass)을 구하였다.
서열결정(
Sequencing
):
게놈을 서열결정한 결과, 씨. 오토에타노게눔(C. autoethanogenum) 균주 LZ1560 (DSM19630)와 새로운 균주 LZ1561 (DSM23693) 간에 개선된 성능에 기여하는 것으로 여겨지는 몇가지 변화가 있는 것으로 나타났다.
두 가지 균주 모두 광학 밀도(OD600nm)가 1이 될 때까지 PETC 배지에서 혐기적으로 성장시켰으며 게놈 DNA를 100ml 오버나잇 배양체로부터 분리하였다. 세포들을 원심분리(6,000 x g, 15 min, 4℃)로 수확하고 인산칼륨 완충액(10 mM; pH 7.5)으로 세척한 다음 1.9 ml STE 완충액 (50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 200 mM 수크로스; pH 8.0)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 300 ㎕ 리소자임 (~ 100,000 U; 30분, 37℃) 및 280 ㎕의 SDS 용액 (10 % (w/v); 10분)으로 처리하였다. RNA를 240 ㎕의 EDTA 용액 (0.5 M; pH 8), 20 ㎕ Tris-HCl (1 M; pH 7.5), 및 10 ㎕ RNase A (50,000 U)로 1시간 동안 처리하였다. 100 ㎕ Proteinase K (0.5 U)를 37℃에서 1- 3시간 첨가하여 단백질 가수분해를 수행하였다. 마지막으로, 600 ㎕의 소듐 퍼클로레이트(5 M)를 첨가한 다음, 페놀-클로로포름 추출하고 이소프로판올 침전시켰다. DNA의 순도 및 양을 NanoDrop1000 분광광도계 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) 및 겔 전기영동에 의해 검정하였다.
454 GS (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA)를 이용하여 샷건 게놈 시퀀싱을 실시하였다. LZ1560(10x 커버리지)의 경우, 총 길이 44,424,523 염기로 191,368 싱글 리드를 생성한 반면, LZ1561 (47.5x 커버리지)의 경우에는 총 길이 202,591,572 bp로 579,545 페어드-엔드 리드를 생성하였다. Newbler 패키지 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA)를 이용하여 리드를 어셈블리하고 Geneious (Biomatters Ltd., Auckland, NZ) 및 MAUVE 패키지 (Darling et al., 2004, Genome Res . 14: 1394-1403), 그리고 Artemis Comparison Tool (Carver et al., 2008, Bioinformatics 24:2672-6)을 이용하여 서열들을 비교하였다.
LZ1560 (DSM19630) 및 새로운 균주 LZ1561 (DSM23693)의 정렬된 게놈 서열에서 총 64개의 변화가 발견되었다. (도 4). 대부분의 변화는 단일 염기 변이였으나, 21 bp 결실 (추정 DNA 미스맷치 복구 단백질 MutS를 코딩하는 유전자; Seq.ID.1-4)과 11개의 유전자 (질소 고정, 당 대사, 당 전달 및 이화 조절과 관련됨)를 함유하는 15,408 bp 대역(Seq.ID.5)에서 재정렬 이벤트가 일어난 것이 밝혀졌다. 62개의 단일 염기 변이 중 22개는 점 돌연변이였고 40개는 삽입/결실 변이였다. 이 변이들 중 18개는 유전자간 영역에서 발견되었고 44개는 코딩 영역에서 발견되었다. 코딩 영역의 변이들 중 5개는 침묵하는 변이로서 아미노산 서열의 변화를 일으키지 않은 반면, 14개는 단일 아미노산 변화를 일으키고 25개는 프레임시프트를 야기하였다.
가장 두드러진 것은 위치 212,530 (F1FO ATP 합성효소 오페론의 추정 프로모터 영역, Seq.ID.6-7), 1,171,874 (Rnf 컴플렉스 오페론의 추정 프로모터 영역, Seq.ID.8-9), 3,717,495 (탄소 고갈 단백질의 추정 프로모터 영역, Seq.ID.10-11)에 있어서의 변화 및 위치 3,741,730 (CO 데히드로게나제/CO-메틸화 아세틸-CoA 합성효소 컴플렉스 베타 서브유닛, Seq.ID.12-15) 및 3,748,058 (5,10-메틸렌테트라히드로폴레이트 환원효소 유전자, Seq.ID.16-17)에서의 Wood-Ljungdahl-유전자 클러스터였는데, 이것은 CO/H2 상에서의 성장 및 에너지 대사로 직접 역추적될 수 있다.
실시예
1:
A:
CSTR
에서의
회분식
발효
대략 1500mL의 용액 A를 1.5L 발효조에 넣고 질소를 살포하였다. 레사주린(Resazurin: 1.5mL의 2g/L 용액) 및 H3PO4 (85% 용액, 2.25mL)을 첨가하고 진한 NH4OH(aq)를 이용하여 pH를 5.3으로 맞추었다. 1.5ml의 용액 C에 앞서서 니트릴로트리아세트산 (0.3ml의 0.15M 용액)을 첨가하였다. 그 후에 NiCl2 (0.75ml의 0.1M 용액) 및 Na2WO3 (1.5mL의 0.01M 용액)을 첨가하였다. 15ml의 용액 B를 첨가하고 70 mL/분으로 용액에 N2를 살포한 다음 이를 CO 함유 가스 (50% CO; 28% N2, 2%H2, 20% CO2)로 스위치시켰다. 이어서 발효조에 200 ml의 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 19630 배양체를 접종하였다. 발효조를 37℃로 유지하고 300 rpm에서 교반하였다. 이 실험 동안 Na2S 용액 (0.2M 용액)을 약 0.3 ml/시간의 속도로 첨가하였다. 미생물 배양의 요구사항에 따라 기질 공급을 증가시켰다.
세균 배양체는 사용된 실험 조건에서는 증식하지 않았다. 배양체는 48시간 성장시킨 후 350 mM CO 흡수를 나타낸 반면 (도 1a 및 표 2), 배양체의 배가 시간 (doubling time)은 40.8 시간이었다 (도 2a). 이것은 0.41일-1의 비성장률에 달하였다. CO 비흡수율은 실험 기간 동안 증가하여 최대치 0.54 mM CO/1분/바이오매스 1g에 달하였다. 제1.0일 비흡수율: 0.28 mM CO/1분/바이오매스 1g (표 1). 제2.0일 비흡수율: 0.54 mM CO/1분/바이오매스 1g (표 2).
B:
CSTR
에서의
회분식
발효
대략 1500mL의 용액 A를 1.5L 발효조에 넣고 질소를 살포하였다. 레사주린(Resazurin: 1.5mL의 2g/L 용액) 및 H3PO4 (85% 용액, 2.25mL)을 첨가하고 진한 NH4OH(aq)를 이용하여 pH를 5.3으로 맞추었다. 1.5ml의 용액 C에 앞서서 니트릴로트리아세트산 (0.3ml의 0.15M 용액)을 첨가하였다. Na2WO3 (1.5mL의 0.01M 용액)을 첨가하였다. 15ml의 용액 B를 첨가하고 이 용액에 N2를 살포한 다음 CO 함유 가스 (50% CO; 50% N2)로 60mL/분으로 스위치하였다. 이어서 발효조에 180ml의 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 23693 배양체를 접종하였다. 이 실험 동안 Na2S 용액 (0.5M 용액)을 약 0.12 ml/시간의 속도로 첨가하였다. 미생물 배양의 요구사항에 따라 기질 공급을 증가시켰다.
실험 조건에서 증식된 세균 배양체를 이용하였다. 이 배양체는 43시간 성장 후 8400 mM CO 흡수를 나타낸 반면 (도 2b), 배양체의 배가 시간은 9.6 시간이었다 (도 2b). 이것은 1.73일-1의 비성장률에 달하였다. CO 비흡수율은 실험 기간 동안 증가하여 최대치 1.17 mMol CO/1분/바이오매스 1g에 달하였다. 제1.0일 비흡수율: 1.17 mM CO/1분/바이오매스 1g (표 1). 제2.0일 비흡수율: 1.03 mM CO/1분/바이오매스 1g (표 2). 이 발효 조건은 실시예 1A에 사용된 조건과 동일하거나 적어도 고도로 유사하였다. 배지들은 동일 성분들이 유사한 농도로 함유되었으나 두 가지 가스는 모두 CO를 적어도 50% (v/v)로 함유하였다. 발효 조건이 유사한 것에 비해 CO 흡수율이 크게 차이가 난다는 것은 모균주인 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 19630에 비해 개발된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 23693 배양체의 효율이 개선됨으로 해서 배양체 성능도 달라짐을 가리키는 것이다.
결과:
실시예
2
대략 1500mL의 용액 A를 1.5L 발효조에 넣고 질소를 살포하였다. 레사주린(Resazurin: 1.5mL의 2g/L 용액) 및 H3PO4 (85% 용액, 2.25mL)을 첨가하고 진한 NH4OH(aq)를 이용하여 pH를 5.3으로 맞추었다. 용액 C (1.5mL)를 첨가한 후 Na2WO3 (1.5mL의 0.01M 용액)를 첨가하였다. 15ml의 용액 B를 첨가하고 이 용액에 N2를 살포한 후 60mL/분으로 CO 함유 가스 (50% CO; 50% N2)로 스위칭하였다. 이어서 발효조에 100ml의 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 23693 배양체를 접종하였다. 발효조를 37℃로 유지하고 300 rpm으로 교반하였다. 이 실험 동안, Na2S 용액 (0.5M 용액)을 약 0.15 ml/시간의 속도로 첨가하였다. 기질 공급을 미생물 요구 사항에 따라 증가시켰다.
실험 조건에서 증식한 미생물 배양체를 사용하였다. 발효 조건들은 실시예 1A + B에서 사용된 조건과 동일하거나 적어도 고도로 유사하고 두 가지 가스 모두 CO를 적어도 50% (v/v) 함유하였다. 배양체는 정상 상태까지 성장하였으며, 여기서 최대 에탄올 농도값을 HPLC로 측정하였다 (55.8 g/L).
전술한 특정 방법과 조성은 바람직한 구체예를 나타내는 것으로 어디까지나 예시적인 것들이며 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 명세서를 참조로 다른 목적, 측면 및 구체예들이 당업자에게 가능할 것이며 이들 역시 본 발명의 범위와 정신에 포함된다. 당업자들에게는 본 발명의 정신과 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 치환과 변형이 가해질 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 이와 같이 예시적으로 설명된 본 발명은 본 발명에 필수적인 것으로 개시되지 않은 어떤 구성요소나 구성요소들 없이, 또는 제한이나 여러 제한없이 적절히 실시될 수 있다. 따라서, 예컨대, 각각의 경우에서, 본 발명의 구체예나 실시에에서, "포함하다", "함유하다", "함유하는", 등의 표현은 확장적으로, 그리고 한정없이 이해되어야 한다. 뿐만 아니라, 제목, 표제 등은 본 명세서를 읽는 독자의 이해를 돕기 위해 제공된 것으로, 본 발명의 범위를 어떤 의도로든 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다.
본 명세서에서 인용된 모든 출원, 특허 및 공개 간행물들은 본 발명에 참조 병합된다. 그러나, 본 명세서에 여하한 출원, 특허 및 공개문헌이 인용되었다고 해서 이들 문헌이 본 발명의 타당한 종래기술이라거나 전세계 어느 국가에서든 일반 상식의 일부를 형성하는 것으로 인정하는 것도 아닐 뿐더러 그러한 주장도 받아들여져서는 아니될 것이다.
SEQUENCE LISTING
<110> Lanzatech New Zealand Limited
Heijstra, Bjorn D
Liew, Fungmin
Koepke, Michael
Kern, Evgenia
Segovia, Simon
<120> NOVEL BACTERIA AND METHODS OF USE THEREOF
<130> 508947PCTPR
<150> US 61/368486
<151> 2010-07-28
<160> 17
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2655
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 1
gtggcattaa ctccaatgat gcagcagtat atggaagtaa aagaaagtta taaagactgt 60
atactgtttt ttagattagg tgatttttat gaaatgtttt ttgaagatgc aaaaatagca 120
tctagggaac tagaattagt acttacaggt agagattgcg gcttaaaaga aagggctcct 180
atgtgtggaa taccctatca tgccgcaaat tcatatatag gaaggcttat aaacaaggga 240
tataagatag ctatatgtga gcaactagaa gatccagctc tagcaaaagg tatagttaaa 300
aggggcataa tcaaggttgt aactcctggg acttatacgg actctacttt tttagaagaa 360
aataaaaata attatatagc gtgtttgtac atagatacca agacaaatat ttctgcattg 420
tgttttgcag atgtgtccac tggagaattc aattgtacgg acactccttt taatttatct 480
ataattttag atgaaatatc aaaatactct ccaagtgaac tagtgattca aggtagtata 540
agtgctgatt tattgaataa aatgaaggat atttttaatg gctcattcac taaattagat 600
gaaagctatt ttgcagacga aactaaaaat atattagagg atcagtttga aaattttaca 660
ggagaaaatt atagtaatga aattataaaa tgctgcggct cactactaaa atatataagg 720
gaaactcaaa agaatgatct atctcatata aataaatttt cctattacaa tatagtagat 780
tatctcacta tagatgggaa ttccagaaga aatttagaaa ttacagaaag cttaagagaa 840
aataataaaa aaggatctct cctctgggtt atagataaaa caaatacatc tatgggaggg 900
agacagctta gaagatggct ggaacagccc cttataaata aggttaagat agaagaaaga 960
ctggattctg tagaggaaat ttcaaataat atatcctatc atgaagatct aaaagaggct 1020
ttaaaaaaca tatatgatat tgagcgatta gttggaaaaa tatcttctaa aagtgtaaac 1080
gcaaaagaac taaatttttt aaaaaattct atagaaaaaa tacctgaagt aaaatccata 1140
ctatccaatt ttcatacaaa attattgaag gatatgtacg aaaacttgga tgaactaaag 1200
gacatatatt cacttttaga taaatctata ttagataatc ctgcaatatc tttaaaagaa 1260
ggtaacctta taaaaaaggg atataacagt gacatagatg aacttaaaga aataaaggct 1320
cacggtaagg agtggatagc ttctcttgag aattcagaaa gggaagttac taaaataaaa 1380
tctcttaaaa taggttataa taaagtattt ggttattata ttgaggttac taaaagtaat 1440
ttaagtcttg taccagaagg tagatatata agaaaacaaa ctcttacaaa tgcagaaaga 1500
tacataactc ctgaattgaa agaaatggaa gataaaatat taggtctaga atatagtgtc 1560
tttatagaag taagagataa aatagaaaat gaagtagaca gaatgcaaaa atccgctaaa 1620
ataatttcag aagtagattg cttaagctcc cttgcaagag ttgctataga aaataattat 1680
tgtaaacctg aaataacaaa ttcagataac ataattatag aagaaggtag acatcctgta 1740
gtagaaaaga tgattgactc tggagaattt atatcaaacg atataaacat agatactggt 1800
aaaaatcaac ttcttttaat aacagggcct aatatggcag gcaaatctac ctacatgagg 1860
cagatagctt tgatcgttat aatggcccaa attggtagct ttgtaccggc aaaaaatgct 1920
tctatatctg tttgtgataa gatatttaca aggataggtg catcagatga cctggcatca 1980
ggaaagagta cctttatggt ggaaatgtgg gaggtttcca acatacttaa aaatgcaact 2040
aacaaaagtt tgattttact ggatgaagta ggacgtggaa caagtactta cgacggcctt 2100
agcatagcct ggtcagtaat agaatatata tgtaaaaaca gcaaactaaa atgtaaaacc 2160
ttatttgcaa cccattatca tgaactaact aaattagaag gtaagataga tggagtcaaa 2220
aattactgtg tatccgttaa agaaatggag gataatatag tttttttgag aaaaattata 2280
agaggaggag ccgaccaatc ctacggcata gaagttgcaa agcttgcagg gcttccagaa 2340
gaagttttaa aaagagcagg agaaatacta aatagccttg aaagtaaaaa gctaaaagaa 2400
aataaatgtg ttgattctga aattgcatta gattcagagt attcaataaa tgagaaaaaa 2460
gcacctctta aaaatgagga gatgattaaa gaaaaagctc ctatgcttga accaaccaga 2520
caattaggat tttcagatat agaaaagaca aatttagtaa aagatattac ggatatagat 2580
atactaaaca tgactcctat ggacggattt aataaacttt atgatataat aagaagagca 2640
aagtccataa gataa 2655
<210> 2
<211> 2676
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 2
gtggcattaa ctccaatgat gcagcagtat atggaagtaa aagaaagtta taaagactgt 60
atactgtttt ttagattagg tgatttttat gaaatgtttt ttgaagatgc aaaaatagca 120
tctagggaac tagaattagt acttacaggt agagattgcg gcttaaaaga aagggctcct 180
atgtgtggaa taccctatca tgccgcaaat tcatatatag gaaggcttat aaacaaggga 240
tataagatag ctatatgtga gcaactagaa gatccagctc tagcaaaagg tatagttaaa 300
aggggcataa tcaaggttgt aactcctggg acttatacgg actctacttt tttagaagaa 360
aataaaaata attatatagc gtgtttgtac atagatacca agacaaatat ttctgcattg 420
tgttttgcag atgtgtccac tggagaattc aattgtacgg acactccttt taatttatct 480
ataattttag atgaaatatc aaaatactct ccaagtgaac tagtgattca aggtagtata 540
agtgctgatt tattgaataa aatgaaggat atttttaatg gctcattcac taaattagat 600
gaaagctatt ttgcagacga aactaaaaat atattagagg atcagtttga aaattttaca 660
ggagaaaatt atagtaatga aattataaaa tgctgcggct cactactaaa atatataagg 720
gaaactcaaa agaatgatct atctcatata aataaatttt cctattacaa tatagtagat 780
tatctcacta tagatgggaa ttccagaaga aatttagaaa ttacagaaag cttaagagaa 840
aataataaaa aaggatctct cctctgggtt atagataaaa caaatacatc tatgggaggg 900
agacagctta gaagatggct ggaacagccc cttataaata aggttaagat agaagaaaga 960
ctggattctg tagaggaaat ttcaaataat atatcctatc atgaagatct aaaagaggct 1020
ttaaaaaaca tatatgatat tgagcgatta gttggaaaaa tatcttctaa aagtgtaaac 1080
gcaaaagaac taaatttttt aaaaaattct atagaaaaaa tacctgaagt aaaatccata 1140
ctatccaatt ttcatacaaa attattgaag gatatgtacg aaaacttgga tgaactaaag 1200
gacatatatt cacttttaga taaatctata ttagataatc ctgcaatatc tttaaaagaa 1260
ggtaacctta taaaaaaggg atataacagt gacatagatg aacttaaaga aataaaggct 1320
cacggtaagg agtggatagc ttctcttgag aattcagaaa gggaagttac taaaataaaa 1380
tctcttaaaa taggttataa taaagtattt ggttattata ttgaggttac taaaagtaat 1440
ttaagtcttg taccagaagg tagatatata agaaaacaaa ctcttacaaa tgcagaaaga 1500
tacataactc ctgaattgaa agaaatggaa gataaaatat taggtgcaga ggaaaaactt 1560
ataaatctag aatatagtgt ctttatagaa gtaagagata aaatagaaaa tgaagtagac 1620
agaatgcaaa aatccgctaa aataatttca gaagtagatt gcttaagctc ccttgcaaga 1680
gttgctatag aaaataatta ttgtaaacct gaaataacaa attcagataa cataattata 1740
gaagaaggta gacatcctgt agtagaaaag atgattgact ctggagaatt tatatcaaac 1800
gatataaaca tagatactgg taaaaatcaa cttcttttaa taacagggcc taatatggca 1860
ggcaaatcta cctacatgag gcagatagct ttgatcgtta taatggccca aattggtagc 1920
tttgtaccgg caaaaaatgc ttctatatct gtttgtgata agatatttac aaggataggt 1980
gcatcagatg acctggcatc aggaaagagt acctttatgg tggaaatgtg ggaggtttcc 2040
aacatactta aaaatgcaac taacaaaagt ttgattttac tggatgaagt aggacgtgga 2100
acaagtactt acgacggcct tagcatagcc tggtcagtaa tagaatatat atgtaaaaac 2160
agcaaactaa aatgtaaaac cttatttgca acccattatc atgaactaac taaattagaa 2220
ggtaagatag atggagtcaa aaattactgt gtatccgtta aagaaatgga ggataatata 2280
gtttttttga gaaaaattat aagaggagga gccgaccaat cctacggcat agaagttgca 2340
aagcttgcag ggcttccaga agaagtttta aaaagagcag gagaaatact aaatagcctt 2400
gaaagtaaaa agctaaaaga aaataaatgt gttgattctg aaattgcatt agattcagag 2460
tattcaataa atgagaaaaa agcacctctt aaaaatgagg agatgattaa agaaaaagct 2520
cctatgcttg aaccaaccag acaattagga ttttcagata tagaaaagac aaatttagta 2580
aaagatatta cggatataga tatactaaac atgactccta tggacggatt taataaactt 2640
tatgatataa taagaagagc aaagtccata agataa 2676
<210> 3
<211> 884
<212> PRT
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 3
Met Ala Leu Thr Pro Met Met Gln Gln Tyr Met Glu Val Lys Glu Ser
1 5 10 15
Tyr Lys Asp Cys Ile Leu Phe Phe Arg Leu Gly Asp Phe Tyr Glu Met
20 25 30
Phe Phe Glu Asp Ala Lys Ile Ala Ser Arg Glu Leu Glu Leu Val Leu
35 40 45
Thr Gly Arg Asp Cys Gly Leu Lys Glu Arg Ala Pro Met Cys Gly Ile
50 55 60
Pro Tyr His Ala Ala Asn Ser Tyr Ile Gly Arg Leu Ile Asn Lys Gly
65 70 75 80
Tyr Lys Ile Ala Ile Cys Glu Gln Leu Glu Asp Pro Ala Leu Ala Lys
85 90 95
Gly Ile Val Lys Arg Gly Ile Ile Lys Val Val Thr Pro Gly Thr Tyr
100 105 110
Thr Asp Ser Thr Phe Leu Glu Glu Asn Lys Asn Asn Tyr Ile Ala Cys
115 120 125
Leu Tyr Ile Asp Thr Lys Thr Asn Ile Ser Ala Leu Cys Phe Ala Asp
130 135 140
Val Ser Thr Gly Glu Phe Asn Cys Thr Asp Thr Pro Phe Asn Leu Ser
145 150 155 160
Ile Ile Leu Asp Glu Ile Ser Lys Tyr Ser Pro Ser Glu Leu Val Ile
165 170 175
Gln Gly Ser Ile Ser Ala Asp Leu Leu Asn Lys Met Lys Asp Ile Phe
180 185 190
Asn Gly Ser Phe Thr Lys Leu Asp Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Glu Thr
195 200 205
Lys Asn Ile Leu Glu Asp Gln Phe Glu Asn Phe Thr Gly Glu Asn Tyr
210 215 220
Ser Asn Glu Ile Ile Lys Cys Cys Gly Ser Leu Leu Lys Tyr Ile Arg
225 230 235 240
Glu Thr Gln Lys Asn Asp Leu Ser His Ile Asn Lys Phe Ser Tyr Tyr
245 250 255
Asn Ile Val Asp Tyr Leu Thr Ile Asp Gly Asn Ser Arg Arg Asn Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Glu Ser Leu Arg Glu Asn Asn Lys Lys Gly Ser Leu Leu
275 280 285
Trp Val Ile Asp Lys Thr Asn Thr Ser Met Gly Gly Arg Gln Leu Arg
290 295 300
Arg Trp Leu Glu Gln Pro Leu Ile Asn Lys Val Lys Ile Glu Glu Arg
305 310 315 320
Leu Asp Ser Val Glu Glu Ile Ser Asn Asn Ile Ser Tyr His Glu Asp
325 330 335
Leu Lys Glu Ala Leu Lys Asn Ile Tyr Asp Ile Glu Arg Leu Val Gly
340 345 350
Lys Ile Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Lys Glu Leu Asn Phe Leu Lys
355 360 365
Asn Ser Ile Glu Lys Ile Pro Glu Val Lys Ser Ile Leu Ser Asn Phe
370 375 380
His Thr Lys Leu Leu Lys Asp Met Tyr Glu Asn Leu Asp Glu Leu Lys
385 390 395 400
Asp Ile Tyr Ser Leu Leu Asp Lys Ser Ile Leu Asp Asn Pro Ala Ile
405 410 415
Ser Leu Lys Glu Gly Asn Leu Ile Lys Lys Gly Tyr Asn Ser Asp Ile
420 425 430
Asp Glu Leu Lys Glu Ile Lys Ala His Gly Lys Glu Trp Ile Ala Ser
435 440 445
Leu Glu Asn Ser Glu Arg Glu Val Thr Lys Ile Lys Ser Leu Lys Ile
450 455 460
Gly Tyr Asn Lys Val Phe Gly Tyr Tyr Ile Glu Val Thr Lys Ser Asn
465 470 475 480
Leu Ser Leu Val Pro Glu Gly Arg Tyr Ile Arg Lys Gln Thr Leu Thr
485 490 495
Asn Ala Glu Arg Tyr Ile Thr Pro Glu Leu Lys Glu Met Glu Asp Lys
500 505 510
Ile Leu Gly Leu Glu Tyr Ser Val Phe Ile Glu Val Arg Asp Lys Ile
515 520 525
Glu Asn Glu Val Asp Arg Met Gln Lys Ser Ala Lys Ile Ile Ser Glu
530 535 540
Val Asp Cys Leu Ser Ser Leu Ala Arg Val Ala Ile Glu Asn Asn Tyr
545 550 555 560
Cys Lys Pro Glu Ile Thr Asn Ser Asp Asn Ile Ile Ile Glu Glu Gly
565 570 575
Arg His Pro Val Val Glu Lys Met Ile Asp Ser Gly Glu Phe Ile Ser
580 585 590
Asn Asp Ile Asn Ile Asp Thr Gly Lys Asn Gln Leu Leu Leu Ile Thr
595 600 605
Gly Pro Asn Met Ala Gly Lys Ser Thr Tyr Met Arg Gln Ile Ala Leu
610 615 620
Ile Val Ile Met Ala Gln Ile Gly Ser Phe Val Pro Ala Lys Asn Ala
625 630 635 640
Ser Ile Ser Val Cys Asp Lys Ile Phe Thr Arg Ile Gly Ala Ser Asp
645 650 655
Asp Leu Ala Ser Gly Lys Ser Thr Phe Met Val Glu Met Trp Glu Val
660 665 670
Ser Asn Ile Leu Lys Asn Ala Thr Asn Lys Ser Leu Ile Leu Leu Asp
675 680 685
Glu Val Gly Arg Gly Thr Ser Thr Tyr Asp Gly Leu Ser Ile Ala Trp
690 695 700
Ser Val Ile Glu Tyr Ile Cys Lys Asn Ser Lys Leu Lys Cys Lys Thr
705 710 715 720
Leu Phe Ala Thr His Tyr His Glu Leu Thr Lys Leu Glu Gly Lys Ile
725 730 735
Asp Gly Val Lys Asn Tyr Cys Val Ser Val Lys Glu Met Glu Asp Asn
740 745 750
Ile Val Phe Leu Arg Lys Ile Ile Arg Gly Gly Ala Asp Gln Ser Tyr
755 760 765
Gly Ile Glu Val Ala Lys Leu Ala Gly Leu Pro Glu Glu Val Leu Lys
770 775 780
Arg Ala Gly Glu Ile Leu Asn Ser Leu Glu Ser Lys Lys Leu Lys Glu
785 790 795 800
Asn Lys Cys Val Asp Ser Glu Ile Ala Leu Asp Ser Glu Tyr Ser Ile
805 810 815
Asn Glu Lys Lys Ala Pro Leu Lys Asn Glu Glu Met Ile Lys Glu Lys
820 825 830
Ala Pro Met Leu Glu Pro Thr Arg Gln Leu Gly Phe Ser Asp Ile Glu
835 840 845
Lys Thr Asn Leu Val Lys Asp Ile Thr Asp Ile Asp Ile Leu Asn Met
850 855 860
Thr Pro Met Asp Gly Phe Asn Lys Leu Tyr Asp Ile Ile Arg Arg Ala
865 870 875 880
Lys Ser Ile Arg
<210> 4
<211> 891
<212> PRT
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 4
Met Ala Leu Thr Pro Met Met Gln Gln Tyr Met Glu Val Lys Glu Ser
1 5 10 15
Tyr Lys Asp Cys Ile Leu Phe Phe Arg Leu Gly Asp Phe Tyr Glu Met
20 25 30
Phe Phe Glu Asp Ala Lys Ile Ala Ser Arg Glu Leu Glu Leu Val Leu
35 40 45
Thr Gly Arg Asp Cys Gly Leu Lys Glu Arg Ala Pro Met Cys Gly Ile
50 55 60
Pro Tyr His Ala Ala Asn Ser Tyr Ile Gly Arg Leu Ile Asn Lys Gly
65 70 75 80
Tyr Lys Ile Ala Ile Cys Glu Gln Leu Glu Asp Pro Ala Leu Ala Lys
85 90 95
Gly Ile Val Lys Arg Gly Ile Ile Lys Val Val Thr Pro Gly Thr Tyr
100 105 110
Thr Asp Ser Thr Phe Leu Glu Glu Asn Lys Asn Asn Tyr Ile Ala Cys
115 120 125
Leu Tyr Ile Asp Thr Lys Thr Asn Ile Ser Ala Leu Cys Phe Ala Asp
130 135 140
Val Ser Thr Gly Glu Phe Asn Cys Thr Asp Thr Pro Phe Asn Leu Ser
145 150 155 160
Ile Ile Leu Asp Glu Ile Ser Lys Tyr Ser Pro Ser Glu Leu Val Ile
165 170 175
Gln Gly Ser Ile Ser Ala Asp Leu Leu Asn Lys Met Lys Asp Ile Phe
180 185 190
Asn Gly Ser Phe Thr Lys Leu Asp Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Glu Thr
195 200 205
Lys Asn Ile Leu Glu Asp Gln Phe Glu Asn Phe Thr Gly Glu Asn Tyr
210 215 220
Ser Asn Glu Ile Ile Lys Cys Cys Gly Ser Leu Leu Lys Tyr Ile Arg
225 230 235 240
Glu Thr Gln Lys Asn Asp Leu Ser His Ile Asn Lys Phe Ser Tyr Tyr
245 250 255
Asn Ile Val Asp Tyr Leu Thr Ile Asp Gly Asn Ser Arg Arg Asn Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Glu Ser Leu Arg Glu Asn Asn Lys Lys Gly Ser Leu Leu
275 280 285
Trp Val Ile Asp Lys Thr Asn Thr Ser Met Gly Gly Arg Gln Leu Arg
290 295 300
Arg Trp Leu Glu Gln Pro Leu Ile Asn Lys Val Lys Ile Glu Glu Arg
305 310 315 320
Leu Asp Ser Val Glu Glu Ile Ser Asn Asn Ile Ser Tyr His Glu Asp
325 330 335
Leu Lys Glu Ala Leu Lys Asn Ile Tyr Asp Ile Glu Arg Leu Val Gly
340 345 350
Lys Ile Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Lys Glu Leu Asn Phe Leu Lys
355 360 365
Asn Ser Ile Glu Lys Ile Pro Glu Val Lys Ser Ile Leu Ser Asn Phe
370 375 380
His Thr Lys Leu Leu Lys Asp Met Tyr Glu Asn Leu Asp Glu Leu Lys
385 390 395 400
Asp Ile Tyr Ser Leu Leu Asp Lys Ser Ile Leu Asp Asn Pro Ala Ile
405 410 415
Ser Leu Lys Glu Gly Asn Leu Ile Lys Lys Gly Tyr Asn Ser Asp Ile
420 425 430
Asp Glu Leu Lys Glu Ile Lys Ala His Gly Lys Glu Trp Ile Ala Ser
435 440 445
Leu Glu Asn Ser Glu Arg Glu Val Thr Lys Ile Lys Ser Leu Lys Ile
450 455 460
Gly Tyr Asn Lys Val Phe Gly Tyr Tyr Ile Glu Val Thr Lys Ser Asn
465 470 475 480
Leu Ser Leu Val Pro Glu Gly Arg Tyr Ile Arg Lys Gln Thr Leu Thr
485 490 495
Asn Ala Glu Arg Tyr Ile Thr Pro Glu Leu Lys Glu Met Glu Asp Lys
500 505 510
Ile Leu Gly Ala Glu Glu Lys Leu Ile Asn Leu Glu Tyr Ser Val Phe
515 520 525
Ile Glu Val Arg Asp Lys Ile Glu Asn Glu Val Asp Arg Met Gln Lys
530 535 540
Ser Ala Lys Ile Ile Ser Glu Val Asp Cys Leu Ser Ser Leu Ala Arg
545 550 555 560
Val Ala Ile Glu Asn Asn Tyr Cys Lys Pro Glu Ile Thr Asn Ser Asp
565 570 575
Asn Ile Ile Ile Glu Glu Gly Arg His Pro Val Val Glu Lys Met Ile
580 585 590
Asp Ser Gly Glu Phe Ile Ser Asn Asp Ile Asn Ile Asp Thr Gly Lys
595 600 605
Asn Gln Leu Leu Leu Ile Thr Gly Pro Asn Met Ala Gly Lys Ser Thr
610 615 620
Tyr Met Arg Gln Ile Ala Leu Ile Val Ile Met Ala Gln Ile Gly Ser
625 630 635 640
Phe Val Pro Ala Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Cys Asp Lys Ile Phe
645 650 655
Thr Arg Ile Gly Ala Ser Asp Asp Leu Ala Ser Gly Lys Ser Thr Phe
660 665 670
Met Val Glu Met Trp Glu Val Ser Asn Ile Leu Lys Asn Ala Thr Asn
675 680 685
Lys Ser Leu Ile Leu Leu Asp Glu Val Gly Arg Gly Thr Ser Thr Tyr
690 695 700
Asp Gly Leu Ser Ile Ala Trp Ser Val Ile Glu Tyr Ile Cys Lys Asn
705 710 715 720
Ser Lys Leu Lys Cys Lys Thr Leu Phe Ala Thr His Tyr His Glu Leu
725 730 735
Thr Lys Leu Glu Gly Lys Ile Asp Gly Val Lys Asn Tyr Cys Val Ser
740 745 750
Val Lys Glu Met Glu Asp Asn Ile Val Phe Leu Arg Lys Ile Ile Arg
755 760 765
Gly Gly Ala Asp Gln Ser Tyr Gly Ile Glu Val Ala Lys Leu Ala Gly
770 775 780
Leu Pro Glu Glu Val Leu Lys Arg Ala Gly Glu Ile Leu Asn Ser Leu
785 790 795 800
Glu Ser Lys Lys Leu Lys Glu Asn Lys Cys Val Asp Ser Glu Ile Ala
805 810 815
Leu Asp Ser Glu Tyr Ser Ile Asn Glu Lys Lys Ala Pro Leu Lys Asn
820 825 830
Glu Glu Met Ile Lys Glu Lys Ala Pro Met Leu Glu Pro Thr Arg Gln
835 840 845
Leu Gly Phe Ser Asp Ile Glu Lys Thr Asn Leu Val Lys Asp Ile Thr
850 855 860
Asp Ile Asp Ile Leu Asn Met Thr Pro Met Asp Gly Phe Asn Lys Leu
865 870 875 880
Tyr Asp Ile Ile Arg Arg Ala Lys Ser Ile Arg
885 890
<210> 5
<211> 15408
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 5
taagtttttt ggccagatag ctcagtcggt agagcagagg actgaaaatc ctcgtgtccc 60
tggttcgatt cctggtctgg ccaccaaaag tttcagatat aatctgaaac tttttttatt 120
ttatatagaa aaaataattg aactatgtaa taattaagta taaaatataa aaatattaag 180
gagaaactta tatgcaaaat aatgtgttag caattgtaaa tggaatggaa ataaaagaaa 240
gcgatcttaa agaagcaatt aatagatttc cacaagataa gagaaatcaa ttaaatacag 300
ctgaaggtaa gaaatattta cttaatgaga tggtattttt tgaattagca tatagttacg 360
ctaaagatga aaacttagaa aaagatgatg agtatttaaa gatgctggaa tctgctaaaa 420
aagaaatatt aactcaaata gctatatcta aagttatgaa taaggttaat gtaactgata 480
aagaaagtca ggattattat gaagccaata aagatatgta taaaaagcct gaaagattaa 540
aagcaaagca tatattagta gatagtatag aaaaagctaa gaaaatttca aaagagatct 600
cagaaggtat gccttttgaa gaagctgcac aaaaatattc aacttgtcca tctaaggctc 660
aaggtggcag tttaggtgaa tttgctagag gacaaatggt tccagaattt gagaacgctg 720
catttagttt agatatagat gtagttagtg aacctgtaaa aactcaattt ggataccacc 780
ttataaaagt ggaagagaaa atagaacctt ctatagcatc ttatgatgaa gtaaagaacg 840
ctattaagaa tggattatta caggaaagac agaaatatga gtattcaaaa tttaataaag 900
aattgagaag taaatataaa gttgaaatga agtaatacat attgcaataa aaatgccaag 960
gtaataatgg acataggttt gtgtaaaaac aaaacctatg tccattattt tatgtaactt 1020
tttgaaattt aatggaaatt tatttcaaat taaactaaaa tggtatttaa tattatagca 1080
ttttctttta tttgcaggta atataatgtc accgaaattt ttataatgaa ttgcatcagg 1140
taatgtctgc ggttccaaag ctattcccat attggaaact aatttttgat tttgcacttt 1200
ccaagtgtca tctttaatat taagagtata aacgattaga gcattacgat ctgattcaat 1260
gtctaaacgc ctacatgtat catgattaat taaagtagca atatttttac catttacatt 1320
aaagggatgg tcaaagccat tgaggcccga ttcagtttgc aaatatttaa ttgcatcttc 1380
caaattttta ggctgctgga aatcaaaagg tgttccagaa acttctttta aagtaccagt 1440
tggtaataag gcttcattaa tttcagcata atgggatgca ttaatttgta gtgtatgacc 1500
tgagaacaac tttgtaatgt cattatttaa gttgaagtat gaatgtactg taggattaaa 1560
aagtgcatct ttattgctta atccactaaa agtgattaat aaatcattat tgttattaag 1620
tgtatattta acctctacat ttaatgtccc aggaaatcca tcttcgtcgg gagatatagt 1680
cctatgaaaa agtacactag tggcttcttc agagtcttct gtgctactat tccatataag 1740
agaattgaac ccataagtgc caccatgaag tgtattttca ccttcatttt taggaacgtt 1800
ataggagata cctttaattt taaaagagcc attagctatg cgaccagcta ctggtccgat 1860
agctgctcct agaaacatct ttctatcttt tatataacta tctaagttgt caaagcctaa 1920
taaaacgttt gaaaagttgc ctaacttatc gggtacaata atttctgtta aagtagctcc 1980
gtgtgagata caggaaactt tcataccatg tttgttagtc attgtatatt tataaatttt 2040
gtttcctttg aaagaaccaa aaacactttt ttctatcatt ttatatactc ctttaatatt 2100
taattttatc cgatgactac ctgctctaat actcacactt ttccaagtgg gagtaaagat 2160
cagctacgtc tctggataac gatttctaag catcaggcgg agttaaaaca ccgtctgatg 2220
cttagaactc tgtttataag ataaaaaatt taggtatgct taattatttg tgttatgata 2280
atattaaata ataagcatac ctttatataa ttaattattt tgtagtttct cttataacat 2340
ctcttaaatt tgtattatga tctataataa ttgattctaa attaaccatg cgggcccaat 2400
catatacttg ttcaactgtt aatcctagag taagaacagt atgatgacca ccaccagcat 2460
aaatccaggc ttttacacca tcagcaaagt ttggttcagg tttccatacc atcttagcta 2520
cagggagttc aggagtatcc tctgcaggtt ctacagcatt tacttcactg attatcaaac 2580
gataatgtgt tccaagatct agcattgtca ttgaagtacc tttaccagta gatccattga 2640
atatcaaacg tgcaggatct tcacgatcac ctattcctaa gggttttacc acaactctag 2700
gtttatcaga tgcaaatgtt ggatcaacct ccaacatatg agcgcctaag atttcctcat 2760
taccttcact taattcataa gtataatctt ccataaatcc tgtcttttta ttgtttgtca 2820
tgatttttat aagtctactt aaagcagcag ttttccaatc accttctcct gcaaagccat 2880
atccttcagc atttaaacgc tgaactgcaa gtccaggtaa ctgtttcata ccatataaat 2940
cttcgaaatt tgttgtaaat gcagtatagc ctcctgcttc taagaagtga cgaagtccaa 3000
tttcaatttt aatttgttct tttacttgat tctcatagaa tttagggtca ttttctccta 3060
catccataat ataaatcttt ttaaattctt cataagtatc atcaatgtct ttttgggaaa 3120
ctttattcat ttcagcaact aaatcaccaa taccaaaata atctactgtc catccaaact 3180
gaatttgagc ttcaatctta tcaccttcag taacagcaac attacgcata ttatcaccaa 3240
aacgtgcaac tttgatgtct tgacttaaga tataacctgc ggctacgttc atccaatcag 3300
caatttgttt ttgaacattt tcttttttcc aatgtcctac aacaatttta ttatgtttct 3360
ttaatctagc attaataaaa ccatattctc tatcaccatg agcactttga tgtaagttca 3420
tataatccat atcaattgtt ttccaaggaa tatgttcgta aaattgtgtt gctagatgaa 3480
gtaatggttt ttgtaataat ttagtaccag caatccacat tttagctggt gagaatgtgt 3540
gcatccatgt aataacacca gctacattat cattgtagtt tacttccttc ataagttttg 3600
ttatttggct cgcagaagtt gcaagagatt taaatacaat aggataaggt aatttgccac 3660
tcttatttaa agcatctgca atttccatag aatgttcttt tacttctgat agtgcctctt 3720
caccatataa atgttggctg cctacaataa accaaaattc catttcttta ttttttagca 3780
taattgaccc tctttccttg tttttattta ttattttgac catagtatgc attttttccg 3840
tgtttgcgtt taaaatgctt atctaataaa acttgatcca ttctaatatt atggggattt 3900
aattgtaagg aatgatatgt aatttttgca acctcttcca atacgactgc attatgaact 3960
gcatttttag gatcggttcc ccaagtaaat ggaccatgat catttacaag aactccaggt 4020
atatcatttg gattaatact attgtccttg aatgttctaa caattacatc tcctgtctgc 4080
ttctcataat ctgtcactat ttcatcttta gtcatctttg gtgttacagg aatatctccg 4140
tagaaataat cgccatgtgt agtaccagct gcaggaatgc aaatacctgc ttgagcaaaa 4200
gacacggccc aaggagaatg tgtgtgtaca atgcctaaga tgtcagggaa gtttctatat 4260
aatactaagt gagttgctgt atcacttgac ggatttaaat ctccttcaat tactttccca 4320
ttaagatcta caacgaccat atcacttgct ttcatttttg tatattcaac accactaggt 4380
ttaataacta caagactctg actgcgatca attccactta cgttgcccca tgtaaatgtt 4440
accatatggt attttggcaa catcaaatta gcctcgagca ctttttcttt taaatcttct 4500
aacatgagct aaccttcttt cactaataag ataaattatc ttagttgttt ttaacttatt 4560
catctagatt aaataatcta ctgcagcttg ttcaatagga attccatttt tataacgttt 4620
cataaattgt tcaaaacctt taacgtcttt tgcttcaggt tttacttcat cagctacata 4680
accagcaaaa actttttttg ataaaaattc tgctagcgtg gagttacttt ctttattatt 4740
caaataacta gctaatagtg caattcccca tgcaccgcct tcacctgcag tttccataac 4800
tgatactggt gtatttactg cagctgcaac tgcttcttgt cctacaatag gtgtcttgaa 4860
taatccacca tgaccaagta acttatcaag ctttacgcct tcatctttta ggagaatgtc 4920
cattccaatt ttcaaggctc ctaatgaagt aaagagatgt gctttcataa agtttggtag 4980
attaaaatta ctttttggtt ttcgtacaat tagaggtcta ccttccggaa cacctgtgat 5040
attttcgcct gcaaaatagt tatatgcaag aattcctcca caatcagggt cacctagaaa 5100
tgcttgagta tagagtccca tataaagaag atctcttgga atgttgacat ttattgcttc 5160
ggcaaattca tgaaagatat taatccatgc gtctatatca gaataaccat tatttgcatg 5220
aaccattcca actaagtctc ctgtaggtgt tgttaccata tcaatctctg gatgaacatt 5280
cttaagtgga ttctcaagga cgaccattgc aaaaattgat gtgcctgcag agatatttcc 5340
tgtacgtggt gcaactgaat ttgtagcaac cattcctgta cctgcatctc cttcaggtgg 5400
acatagtgga ataccacttt gaagatttcc acttacatca agtttattgg ctccttctgg 5460
agttaagacg ccagcatttt ctccggctag taagactttt ggtagaagct tctctacatt 5520
caatgaatac ttttcaactt ctggcaaatg attgaatgtt tctaacatat gtttatcgta 5580
attatgagtt ttcatatcaa ttggaaacat tcctgatgca tcacaaatac ccaaaacctt 5640
tttacctgtt aattcccaat gaatataacc agctaaagta gttataaaat caagcttttc 5700
aatatgaggt tctttatgga gaatagcctg atataaatga gctatactcc atctctcagg 5760
aatattgaag tgaaatgatt ctgttaactt tttggctgct tcctctgtca tggtattacg 5820
ccatgtccta aatggaacaa gtaggtttcc ttgtttatca aatgccatat atccatgcat 5880
cattgctgaa aaaccaattg aaccaatttt tgaaagtgtt acaccatatt tttcttttat 5940
ctcagcaaaa agtttttgat aactatattg taatcctttc cagatttctt ctagcgaata 6000
ggtccaaata ccatctctta agcttgtctc ccattcaaag ctgccactag ctaatggaga 6060
aaaatcgttt ccaataagaa cagctttaat acgagtagaa ccaaattcta ttcctaatga 6120
tgttttacca ttttgaattt cttttactct atccttattt atagtcaata gaattacctc 6180
ccccttacaa taatagtaaa cggtttttta tgataaatat atcatttata tacgtacatg 6240
tcaataaata tataaaaaaa gatacgtact tattttaaat gtatttagat aattacttat 6300
taaataatta tttttagtga tgatattatc gcgtttcatt acagcgtttt aaacaaatat 6360
aactactttt tcacaaacaa ttgctatatc attaaatatt aattttactt gtaaatttat 6420
tagtacaaat tgctcgatga ttgtaattat tttacttttt atatttttat gctttaatat 6480
aatatgatat gtattataat atgaggtgta atataataaa ctattatttt gtgcaggaga 6540
taaacatgaa acataaatat gaaaaagtaa aagaagaaat tattagctgg gcagttaatg 6600
aaaaatataa accacatgaa aaaattccaa cagaatcgga acttatggag ctatttaaag 6660
ttagtagaca tactataagg agagcaataa gtgatctagc ggcagagaaa tacttgtata 6720
gattgcaggg aagtggaata tatgtatctg attttaaaca aaatgaaatt tacttgacaa 6780
acaacaagaa tgttggggtg cttacaacat atatttccaa ctatatattc cctgatataa 6840
ttagaggaat tgaagataca ctatatgatg aatcatactc ccttttatta tcttctacga 6900
agaataatat aatgcttgaa agcagcaatt taaaaaattt attagcacac aaaatagatg 6960
gactcattgt agagcctaca aagagtgcat atcaaagtcc taacatggga tattttaata 7020
atttaataga gcaagatatt ccttttatta tgataaatgc atcttattct caagttaaag 7080
taccaagctt atgtgtagat gatttaaagg ggggcaatat agctgcaaag tatttaatta 7140
ctttaggaca taagaatata gctggtattt tcaaggtaga tgacctacaa ggtgtgcaca 7200
ggatgaatgg ttttattact ggatgtcagg aaagtaatgt attgttaagg caagataaaa 7260
ttttaaccta tctgtcagag gaaacaaata cactactacc tgaaaagata aagaatgttt 7320
taaaacagga aaaacgtcca acgggtatat tttgctataa tgatgaaatt gcatacatgg 7380
tgttaaatat tgcatatgat ctaaaattaa aggttccaga agatttatca attattggat 7440
ttgatgattc tccaatggca acaattatgg aaccgaaatt aacatcaata actcatccaa 7500
aggaaaagat gggaatagat gctgctaagt taattattag attaattaat aataataatc 7560
attttagtga atgtgattca atattatatg aacctgaaat tgttattaga agttctacag 7620
catcaattta aatttatgca cataataaaa taaaattttc aaaatgatcc ttatgaataa 7680
cataagggtc attttttgta aaaaaactaa taaaatgatc aaatttttaa gaaatacggg 7740
gatttatccc tataaaaata aaataaggtt gacatttgta cgaacaaata ttattattaa 7800
tttaagtaat cgctttcaaa aataaaatta aaggaggaat gttagtgtat aaatactcct 7860
ggtaatgtag tggcttacga tgatgtttga aagagtacgg tgatatggtt taaaggtact 7920
atcataattt attgcagatt ataaagattt ataattctct aaaaagttat attaagttat 7980
attttatcta taagaaagga gattgttata aaatgaaaaa agttagttat tattatgata 8040
atcattttaa gattggagat gttaatgaaa atttatatag ttcatttatt gagcatttag 8100
gcagggctgt atatagtgga atttatgaac cagggcatga aaaggccgat gaagatggat 8160
tcagaacaga tgctatggaa gtaataaaag atttaaaatt gggattggtt cgttaccctg 8220
gcggaaattt tgtttccaat tatgattgga aagatggtat tggaccaaag gaaaacaggc 8280
ctaaaagaat ggaatttgct tggtcaagtg ttgaaacaaa tcaatttgga attgatgatt 8340
tttgtcgttg ggcaaaaaaa gctggtattg aaccaatgat agcagttaat ttaggaacag 8400
gtagtgttaa aagtgcagct gaacttgtag aatattgtaa tcatcctggc gggacttact 8460
ggagtgatct tcgtatcaaa aatggaagta aggagcctta taatataaaa tattggtgcc 8520
ttggaaatga aatggaaggt acctggcaag caggtcactt atcagcagaa gactatgcaa 8580
aaaaagcttg tgaagctgct aaacttatga aatgggtaga caaagatatt aaattagttg 8640
cttgtggaag tagttatgaa atgcttccta cttatatgga ttgggataga attgtactta 8700
aagaacttta tccttatgtt gattacatat ctactcataa ttataatatg aataccaatc 8760
aaggaacgtc aaattttctt gcatcatata aacaacttga tgaccatata aaaaatacag 8820
aaagagttct tgattatgta aaggcaaaaa ataaggaaga aaaagatata aaaatatgtt 8880
tagatgaatg gaatgtatgg aacttccagg atataaaact tgatagtctc gacgacttac 8940
agggactgac gacttttgaa gtaacttcag ctgagaaatg ggaagaagct cctgcaatct 9000
tagaggaaaa atatagtctt ttagatgcac taacagttgg tggacttgca ataactttaa 9060
taaataatgc tgatagagta aagattgcat gtcttgcaca attaattaat gtaatagcac 9120
ctattacaac gcagagaaat ggaggagttt taaaacagtc gacttattat ccatttagta 9180
tggttagtaa ttatggtaga ggaactgtac ttaaaccatc tgttaatggt gcaagctaca 9240
aatgtgattt tggtgaatta cctttagtag aagcagctac tgtttatgat aaagaatctg 9300
atgaaattag agtatttgca ttaaattgta accaggatga agacacagaa ttagaccttc 9360
aatttaatgg atttggagat cgtaaaatct ctaagcaatt tgtattatct ggagatgact 9420
tagaacttag aaatacattt gaaagtcctg ataacgttac tgtaaaggaa aaagatcttt 9480
caaattgtga tggtacgaaa gttgttcttc caaagctttc ttggaatgtt ttaattataa 9540
agtaatttca ataaattatg aagggagtgg gaaggtaagt ggatatgaaa gtacaagata 9600
aagatgtttt taaagaaaat ttaaaattta gtgagaagtt tggttatgga tgtggtgatt 9660
tagccattaa ctttacttgg gcttctttgg gaatgtttgt agtttatttc tatactgatg 9720
ttgttggtat gtctgctgct attattggaa ctattatgtt gttctcacgt tgtttagatg 9780
gtgtcttaga tgttataatg ggcacaattg ttgataaaac taattcaaag tatggtaaag 9840
ctcgtccttg gatattatgg ggatcaattc cttttgttgt tttaacagta tcaatattta 9900
tggtaccaaa cataagcact tttggaaaga tagtgtatat tgtaatatcg tataatttac 9960
ttatgatagc gtttactgca attgctattc cttatggtac attaaattca ttggttactc 10020
aagatcaaca tcagagagaa gtattaaatc tttttagaat gtttttggca caaataggag 10080
tattaattgt tactaatctt acaatgccat tggtaaattt atttggagga aaacaacctg 10140
gatgggcttt aacttattca gttttaggag tagtttctct attattattt gtttatgttt 10200
ttaaaacgca aaaagaaaga gtaaaaccaa ttaaaaagga aaaaattcct ttgaagatta 10260
gtctaaaggc tttatgtcaa aataaatatt ggtttatagc aactatattt tttatagttt 10320
atagtattgg atatgctata aatcaaggta gtacggtata ttatgctaaa tatcttcttg 10380
gtaattcttc tctagttgga ggattaacta ttgcatattt agctccagta ttagtgggat 10440
tccttatgat ctcaaaagtt tatgataaat acggaaaaag aaatgctatg atcattggtt 10500
caataataag cataggtggt tacttaatta caataataaa tccgtatagt ttaacagttg 10560
ttatggtttc tcaaattgtt aaaggttttg gccaagcttt cttgctagga ggagtgtggg 10620
cattattccc tgatactata gaatatggtg aatggaaaac aggcataaga aatgaaggat 10680
tgctttatag cggaggtagt ttaggacaaa agatgggtat aggttttggt acagccataa 10740
caggatggat tttagcttgg ggaggatata atggtgcaca agcagtacaa gctagttctg 10800
cggtattttc aataaaagca ttgtttattc atgttccaat aataatatat gttgctcaaa 10860
ttatattatt gctctgttat ggacttgaca aagagtatcc acgcattatg aaggatttac 10920
aattaagaaa aagtaaaatg agtgcagaaa ataactaata aatgtacttg cagattttat 10980
acaatattgt aactgacata taaaaatgaa taagtgaaat aaggttttag tttcaataaa 11040
ataacaaata aataagaagt aaataatagg gagtgtcttt tctgatggtt tttttatcat 11100
tagagatgat actctctata ttttttaatt tgaatgtcaa aatatgccat taaaattcaa 11160
aagataataa ttaatagaaa gtaggttaat tttatgacaa aatataaaaa ttaatactga 11220
taatcacaaa aaacaattga catttgtacg aacaaatatt attataaatt taagaaatcg 11280
ctttcattta atggaatata agggactaat atggatacaa tgaagaccat aacagtaatt 11340
acaattgtta agattagtaa taaaaattta caatataaac ttgatttttt aattaaaagg 11400
agaggggatt taaaaatgat taaatttaaa tcaattagaa aaagcatgag gtcaattcta 11460
ttatgtggac ttgtattagt tctaagtgta ggtctcatgg catgtggaag tacaagtact 11520
tcaagttctg gtacaagcag taaaaagaaa acgatagcat ttattccacc atcacttgta 11580
agcccatttt atactcaggc tgttacagga gcaaagcaag aagcagctaa agaaggattt 11640
aacataaaag tattggctcc tcaaacagaa gacgatttca atggattatt aaaaatagtt 11700
gaagacgtta taactcagca agttgatgct attgcaatat gtaccacaga tgataaaact 11760
atggctgctg ttgtaaaaaa agcaaatgat gcaaagatac cagttattgt atttaactca 11820
ttaagtccaa taaagggtgc agatgtttat gcttatgttg gatatgacca aaaacaagca 11880
ggagctcagg ctgcagacta tttaggaact aaacttaaag acaagcaatt caatgttggt 11940
gtattagagg gtcttcctgg tgtatttaca gacaatagaa aaggtggatt tgtaaatgaa 12000
gctaaaaaat attcaaatgt aaagattgta gctacacaac cagctgattg gcagagagaa 12060
aaaggcatga atgttgcaac taacctttat caagctaata aggctataaa tatgttttat 12120
ggattgagtg atgaaatggc aataggtgca gcccaagctt ttaaatcagc aggggttaag 12180
gatggagtta ctattggtat agatggaaat ccagctactt tagattcaat cgcacaggga 12240
gaaactactg ctacaattta tacagatcca aaacaaattg gtaaagaaag tataatagat 12300
tgttctaaag ctttaaaagg tgaaaaaatg gcaaataaat tagatcagac aaagactttt 12360
gtagtagaca agagtaacgt tagtacttat aaagcaaaat aattctatat ttgctcttag 12420
aaaatgttag ctttaacatt ttctaagagt aaaatattta gttacgtaat ttgtggcaaa 12480
agggggggta atattgtcag aaactatatt gaaaatggag aacataacta aaagtttttc 12540
aggagttaca gttcttaaaa attcgggaat tgaagttaaa aaaggagaag ttcatatttt 12600
acttggtgaa aatggtgcag gtaaatcaac tcttatgaag atactttctg gagcatattc 12660
aaaagatagt ggagacatta tactaaacgg aaacaaagta gagataaatt ctccaaaaga 12720
tgctgagaaa cttggaataa gcataattta tcaggaattt aatttagttc cctatatgac 12780
tgttgctgag aatatatatc ttggaagaga acctgaatcc aaggtacctg gtaaggttaa 12840
tttcaaaaaa atgtacaatg atgcacaaaa gatgattgat tacttaaatg tagatatacc 12900
tgtagataaa ccaataaaga atttaggaat tgcccagcaa caaatggttg agatagcaaa 12960
agcactatcg gttcattctg atatcataat aatggatgag ccaacagcgg cactgacaga 13020
aaaagaaata gataatttat ttaaaataat gagaaaaatt aaatctgaag gagtttctat 13080
aatatacatt tctcatagac ttgaggaatt tgctcaaatt ggtgatagag ttactgttat 13140
gagagatgga gaaactgtag aaacagttaa tatcaaaggt acatctatag atgaacttat 13200
aaaattaatg gtaggaagag aaattaaaga aaaatttcct aaaataaagg ttgatttagg 13260
agaagaaata ttaagggtta agggattaac caaaaaagga gtttttgaaa atataaattt 13320
cagtttgaga tcaggcgaaa tactaggatt ttctggtctt atgggtgcgg gaagaacaga 13380
agtaatgagg gctatatttg gtatagattc atttgattct ggtgaaatat atttaaaagg 13440
taaaaaagtt gaaataaatt cccctatgaa agcaataaaa aatggtatag gatttgtaac 13500
ggaaaataga agagatgaag gtcttgtttt acagatgggt gtaggtcaaa atataacctt 13560
agcatccctt ggcaaatata ttagtaatcc tataaaatta aatcttagaa aagaagtcaa 13620
ggaaataaaa gattatatat ctaaattgtc aattaagtct tcaggatata gacaaattgc 13680
aggtacactg agcggtggaa accaacaaaa gattgttata gcaaagtggc tattatctga 13740
ttcaaaggtt ttaattgtgg atgaacctac tcgtggaata gatgtaggtg ctaaaataga 13800
aatttataat attatgaatg atttagttaa aagtggggta ggaataatta tggtttcttc 13860
agaacttcct gaagtacttg gcatgagtga tagaatatta gttatgtgta gagggaaaat 13920
aactggagaa ttaaataagg atgaggctac tcaagaaaaa ataatgcatt atgcaacagg 13980
aggtatagaa tgatgaatca gttagaagat actgaaaaaa agaaaaagac tagtataaat 14040
gacatactgg ataagctagg ggttgtcatt gcattagttg ttttaattgt agttatggct 14100
gtgttgtctc cagattttct tactgtaaaa aatgtattta acatattgca gcagattgca 14160
caaattggaa taatatctgt tggtatgact tttgtaatat tacttggagg aatcgactta 14220
tctgttggtt caattattgc atttacagga cttattatgg cattatgcat gaaagcagga 14280
atgtctgttg tgttagctat tttagtaggt attatactag gtgcagctat tggtttctta 14340
aatggaattt taatatcaaa ggttaaactc caacctttta tagctacact aggaactatg 14400
actatggcta gaggacttgc atatactata acaaatggac aaccagtata ttctttctca 14460
gctgggttta aaagctttgc tggatttatt ggagttgttc caattcctgc aattattatg 14520
gcagtaatat ttgcattagg ttattatgtg cttaaataca caaagtttgg aagatacatg 14580
tatgctattg gaggaaatag agtagcaagt aagctttcag gaataaatgt ggataaatat 14640
gagatgttgg tttatacgat ttcaggaata tgctgtgcta tagctgctat aattttaaca 14700
gcaaggcttg attcagcagt accagttgca ggtgatggaa acgaacttga tgctatagcg 14760
gcagtagcta taggtggaac aagtatgacc ggtggagaag gcggtatagt tggaacactt 14820
attggtgcct taattatggg agtaattgcg aatggaatga acctactaga tgtgcaacag 14880
ggaccacaga ggtttgctaa aggtgcaatt ataattttag ctgtaggaat tgatgtaata 14940
agaaagaaaa gaacttctaa ataatacttt ggataaattc acaaggtgct tattaatttt 15000
tattaaaaaa gtttcagatt atatccgaaa ctttttttgt atttaaatac tatagtttta 15060
tctccaatcc taaaagaaat ttgtttatta gggttattta atgatatgta ataggtatca 15120
tatttattaa aaatgggtaa tatagttctc tgttagaata aattaagtat aaacatatcc 15180
atgtgtatct atgtaagaaa aatggtgaat ataagtagta taaaggagaa aatgcaaatt 15240
aagttataaa aataccggag taagtgaact gagttaagta taagctgtga tataataaat 15300
ttcgttgtca tggagattac agaaacagat taaatcaata gttttttatt taaagaaaaa 15360
taataaaacg tattgacaga tgtaatttaa aatgatatac tataaagg 15408
<210> 6
<211> 300
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 6
atctgtatat tttttcccat tttaattatt tgtactataa tattacactg agtgtattgc 60
atatttaaaa aatatttggt acaattagtt agttaaataa attctaaatt gtaaattatc 120
agaatcctta ttaaggaaat acatagattt aaggagaaat cataaaaagg tgtaatataa 180
actggctaaa attgagcaaa aattgagcaa ttaagacttt ttgattgtat ctttttatat 240
atttaaggta tataatctta tttatattgg gggaacttga tgaataaaca tattctagac 300
<210> 7
<211> 300
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 7
atctgtatat tttttcccat tttaattatt tgtactataa tattacactg agtgtattgt 60
atatttaaaa aatatttggt acaattagtt agttaaataa attctaaatt gtaaattatc 120
agaatcctta ttaaggaaat acatagattt aaggagaaat cataaaaagg tgtaatataa 180
actggctaaa attgagcaaa aattgagcaa ttaagacttt ttgattgtat ctttttatat 240
atttaaggta tataatctta tttatattgg gggaacttga tgaataaaca tattctagac 300
<210> 8
<211> 300
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 8
tgttaatttt ttgtgtcaat aatttttgtt atattatttt aattaaattt ttcacatgta 60
taattaaaag taagatagat attctaatgt acttacttag gtagaaaaac atgtatacaa 120
aattaaaaaa ctattataac acatagtatc aatattgaag gtaatactgt tcaatatcga 180
tacagataaa aaaatatata atacagaaga aaaaattata aatttgtggt ataatataaa 240
gtatagtaat ttaagtttaa acctcgtgaa aacgctaaca aataatagga ggtgtattat 300
<210> 9
<211> 300
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 9
gttaattttt tgtgtcaata atttttgtta tattatttta attaaatttt tcacatgtat 60
aattaaaagt aagatagata ttctaatgta cttacttagg tagaaaaaca tgtatacaaa 120
attaaaaaac tattataaca catagtatca atattgaagg taatactgtt caatatcgat 180
acagataaaa aaaatatata atacagaaga aaaaattata aatttgtggt ataatataaa 240
gtatagtaat ttaagtttaa acctcgtgaa aacgctaaca aataatagga ggtgtattat 300
<210> 10
<211> 300
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 10
agttggataa atagggttta tccttaaaag ttttattcac agtgtgtatg aaaaaaaatt 60
cacactgtga atttttttta taaatttttc tacactgtaa aattcaatta tgttattcaa 120
ctcattgtaa ataccattca catgttattt ttgaccattc gcatccgttt ttttgcactt 180
tggaatattt gggtatgaaa atcaataaat tcagactatt ataaacatgt aataaaattc 240
atataattaa ttattaatga actatttata attattaaaa attaaaaagg aggtttttat 300
<210> 11
<211> 300
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 11
agttggataa atagggttta tccttaaaag ttttattcac agtgtgtata gaaaaaaaat 60
tcacactgtg aatttttttt ataaattttt cacactgtaa aattcaatta tgttattcaa 120
ctcattgtaa ataccattca catgttattt ttgaccattc gcatccgttt ttttgcactt 180
tggaatattt gggtatgaaa atcaataaat tcagactatt ataaacatgt aataaaattc 240
atataattaa ttattaatga actatttata attattaaaa attaaaaagg aggtttttat 300
<210> 12
<211> 2127
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 12
atgaatttat ttcaaactgt attcactggt tcaaagcaag ctttagcagc tgctgaaggc 60
atagttaagc aagctgttga cgagaagggt agagactata aagtagcatt tcctgatact 120
gaatattcat taccagtaat ttttgcagct acaggaaaaa agataactaa tgtaggagaa 180
ttagaaggtg cattagatat agtaagaagt ttgatagttg aggaggaaat gcttgataag 240
cttttaaatt caggacttgc aacagctgtt gcagcagaaa ttatagaagc tgcaaagtat 300
gttctttccg atgctcctta tgcagaacca tgtgtaggat ttatatctga cccaataatt 360
cgttctcttg gtgtaccact tgttaccgga gatataccag gtgtagcagt tatattagga 420
gaatgtccag attcagaaac cgcagctaaa attataaagg attatcaatc aaaaggtctt 480
ttaacatgct tagttggaaa agtaattgat caggcaatag aaggaaaagt taagatgggt 540
cttgacctca gagttattcc acttggatat gatgttacat ctgtaattca cgttgtaact 600
atagctataa gagctgcact tatattcgga ggaattaagg gtggtcagtt aaatgacata 660
ttgaaatata cagcagaaag ggtacctgct tttgtaaatg catttggacc attaagtgaa 720
cttgtagttt cagctggtgc aggagctata gcacttggat tccctgtatt aactgatcag 780
gttgtaccag aagttcctac attgttgtta actcaaaaag attatgataa aatggttaaa 840
acttcattag aagctagaaa tataaagata aagataactg agatcccaat tccagtttcc 900
tttgcagcag catttgaagg tgaaagaata agaaagaatg atatgcttgc agagtttggt 960
ggaaataaga ctaaagcttg ggaattagtt atgtgtgcag atcagggaga agttgaagat 1020
cacaagatag aagttatagg accagatata gatactatag ataaggctcc tggaagaatg 1080
cctcttggaa tgcttattaa agtaagtgga acaaatatgc agaaggattt tgagccagtg 1140
cttgaaagaa gacttcacta cttcttaaac tatatagaag gagtaatgca tgttggtcag 1200
agaaatctta cttgggtaag aataggtaag gaagcttttg aaaagggatt tagattgaaa 1260
cattttggtg aagtaatata tgctaaaatg ttagatgaat ttggttcagt tgtagataaa 1320
tgtgaagtaa ctataataac tgatccaggt aaggctgaag aattggaagg caaatatgct 1380
gtaccaagat ataaagaaag agatgcaaga cttgaatcat tagttgatga aaaagttgat 1440
actttctatt catgtaattt gtgtcaatcc tttgcacctg cacatgtatg tatagtaact 1500
cctgaaagac ttggactttg cggtgcagtt tcatggcttg atgctaaagc tacacttgaa 1560
ttaaatccta caggaccatg tcaggccgtt ccaaaagaag gcgtggttga tgaaaattta 1620
ggtatttggg aaaaagtaaa tgaaactgtt tcaaaaattt ctcaaggtgc tgtaactagt 1680
gttacattat acagtatatt acaagatcca atgacttcct gtggatgttt tgagtgtatt 1740
acaggtataa tgccagaagc aaatggtgtt gtaatggtaa acagagaatt tggtgcaaca 1800
actcctcttg gaatgacatt tggtgaactt gcatctatga caggtggtgg agttcagact 1860
ccaggattta tgggacatgg aagacaattc atagcttcaa agaagtttat gaaaggtgaa 1920
ggcggacttg gcagaatagt ttggatgcca aaagaattaa aagactttgt tgcagaaaaa 1980
ttaaataaga cagcaaagga attatataat atagataatt ttgcagatat gatctgtgat 2040
gaaactatag ctacagaatc tgaagaagta gtaaaattct tggaagaaaa aggtcatcct 2100
gcattaaaga tggatccaat aatgtag 2127
<210> 13
<211> 2127
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 13
atgaatttat ttcaaactgt attcactggt tcaaagcaag ctttagcagc tgctgaaggc 60
atagttaagc aagctgttga cgagaagggt agagactata aagtagcatt tcctgatact 120
gcatattcat taccagtaat ttttgcagct acaggaaaaa agataactaa tgtaggagaa 180
ttagaaggtg cattagatat agtaagaagt ttgatagttg aggaggaaat gcttgataag 240
cttttaaatt caggacttgc aacagctgtt gcagcagaaa ttatagaagc tgcaaagtat 300
gttctttccg atgctcctta tgcagaacca tgtgtaggat ttatatctga cccaataatt 360
cgttctcttg gtgtaccact tgttaccgga gatataccag gtgtagcagt tatattagga 420
gaatgtccag attcagaaac cgcagctaaa attataaagg attatcaatc aaaaggtctt 480
ttaacatgct tagttggaaa agtaattgat caggcaatag aaggaaaagt taagatgggt 540
cttgacctca gagttattcc acttggatat gatgttacat ctgtaattca cgttgtaact 600
atagctataa gagctgcact tatattcgga ggaattaagg gtggtcagtt aaatgacata 660
ttgaaatata cagcagaaag ggtacctgct tttgtaaatg catttggacc attaagtgaa 720
cttgtagttt cagctggtgc aggagctata gcacttggat tccctgtatt aactgatcag 780
gttgtaccag aagttcctac attgttgtta actcaaaaag attatgataa aatggttaaa 840
acttcattag aagctagaaa tataaagata aagataactg agatcccaat tccagtttcc 900
tttgcagcag catttgaagg tgaaagaata agaaagaatg atatgcttgc agagtttggt 960
ggaaataaga ctaaagcttg ggaattagtt atgtgtgcag atcagggaga agttgaagat 1020
cacaagatag aagttatagg accagatata gatactatag ataaggctcc tggaagaatg 1080
cctcttggaa tgcttattaa agtaagtgga acaaatatgc agaaggattt tgagccagtg 1140
cttgaaagaa gacttcacta cttcttaaac tatatagaag gagtaatgca tgttggtcag 1200
agaaatctta cttgggtaag aataggtaag gaagcttttg aaaagggatt tagattgaaa 1260
cattttggtg aagtaatata tgctaaaatg ttagatgaat ttggttcagt tgtagataaa 1320
tgtgaagtaa ctataataac tgatccaggt aaggctgaag aattggaagg caaatatgct 1380
gtaccaagat ataaagaaag agatgcaaga cttgaatcat tagttgatga aaaagttgat 1440
actttctatt catgtaattt gtgtcaatcc tttgcacctg cacatgtatg tatagtaact 1500
cctgaaagac ttggactttg cggtgcagtt tcatggcttg atgctaaagc tacacttgaa 1560
ttaaatccta caggaccatg tcaggccgtt ccaaaagaag gcgtggttga tgaaaattta 1620
ggtatttggg aaaaagtaaa tgaaactgtt tcaaaaattt ctcaaggtgc tgtaactagt 1680
gttacattat acagtatatt acaagatcca atgacttcct gtggatgttt tgagtgtatt 1740
acaggtataa tgccagaagc aaatggtgtt gtaatggtaa acagagaatt tggtgcaaca 1800
actcctcttg gaatgacatt tggtgaactt gcatctatga caggtggtgg agttcagact 1860
ccaggattta tgggacatgg aagacaattc atagcttcaa agaagtttat gaaaggtgaa 1920
ggcggacttg gcagaatagt ttggatgcca aaagaattaa aagactttgt tgcagaaaaa 1980
ttaaataaga cagcaaagga attatataat atagataatt ttgcagatat gatctgtgat 2040
gaaactatag ctacagaatc tgaagaagta gtaaaattct tggaagaaaa aggtcatcct 2100
gcattaaaga tggatccaat aatgtag 2127
<210> 14
<211> 708
<212> PRT
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 14
Met Asn Leu Phe Gln Thr Val Phe Thr Gly Ser Lys Gln Ala Leu Ala
1 5 10 15
Ala Ala Glu Gly Ile Val Lys Gln Ala Val Asp Glu Lys Gly Arg Asp
20 25 30
Tyr Lys Val Ala Phe Pro Asp Thr Glu Tyr Ser Leu Pro Val Ile Phe
35 40 45
Ala Ala Thr Gly Lys Lys Ile Thr Asn Val Gly Glu Leu Glu Gly Ala
50 55 60
Leu Asp Ile Val Arg Ser Leu Ile Val Glu Glu Glu Met Leu Asp Lys
65 70 75 80
Leu Leu Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ala Val Ala Ala Glu Ile Ile Glu
85 90 95
Ala Ala Lys Tyr Val Leu Ser Asp Ala Pro Tyr Ala Glu Pro Cys Val
100 105 110
Gly Phe Ile Ser Asp Pro Ile Ile Arg Ser Leu Gly Val Pro Leu Val
115 120 125
Thr Gly Asp Ile Pro Gly Val Ala Val Ile Leu Gly Glu Cys Pro Asp
130 135 140
Ser Glu Thr Ala Ala Lys Ile Ile Lys Asp Tyr Gln Ser Lys Gly Leu
145 150 155 160
Leu Thr Cys Leu Val Gly Lys Val Ile Asp Gln Ala Ile Glu Gly Lys
165 170 175
Val Lys Met Gly Leu Asp Leu Arg Val Ile Pro Leu Gly Tyr Asp Val
180 185 190
Thr Ser Val Ile His Val Val Thr Ile Ala Ile Arg Ala Ala Leu Ile
195 200 205
Phe Gly Gly Ile Lys Gly Gly Gln Leu Asn Asp Ile Leu Lys Tyr Thr
210 215 220
Ala Glu Arg Val Pro Ala Phe Val Asn Ala Phe Gly Pro Leu Ser Glu
225 230 235 240
Leu Val Val Ser Ala Gly Ala Gly Ala Ile Ala Leu Gly Phe Pro Val
245 250 255
Leu Thr Asp Gln Val Val Pro Glu Val Pro Thr Leu Leu Leu Thr Gln
260 265 270
Lys Asp Tyr Asp Lys Met Val Lys Thr Ser Leu Glu Ala Arg Asn Ile
275 280 285
Lys Ile Lys Ile Thr Glu Ile Pro Ile Pro Val Ser Phe Ala Ala Ala
290 295 300
Phe Glu Gly Glu Arg Ile Arg Lys Asn Asp Met Leu Ala Glu Phe Gly
305 310 315 320
Gly Asn Lys Thr Lys Ala Trp Glu Leu Val Met Cys Ala Asp Gln Gly
325 330 335
Glu Val Glu Asp His Lys Ile Glu Val Ile Gly Pro Asp Ile Asp Thr
340 345 350
Ile Asp Lys Ala Pro Gly Arg Met Pro Leu Gly Met Leu Ile Lys Val
355 360 365
Ser Gly Thr Asn Met Gln Lys Asp Phe Glu Pro Val Leu Glu Arg Arg
370 375 380
Leu His Tyr Phe Leu Asn Tyr Ile Glu Gly Val Met His Val Gly Gln
385 390 395 400
Arg Asn Leu Thr Trp Val Arg Ile Gly Lys Glu Ala Phe Glu Lys Gly
405 410 415
Phe Arg Leu Lys His Phe Gly Glu Val Ile Tyr Ala Lys Met Leu Asp
420 425 430
Glu Phe Gly Ser Val Val Asp Lys Cys Glu Val Thr Ile Ile Thr Asp
435 440 445
Pro Gly Lys Ala Glu Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ala Val Pro Arg Tyr
450 455 460
Lys Glu Arg Asp Ala Arg Leu Glu Ser Leu Val Asp Glu Lys Val Asp
465 470 475 480
Thr Phe Tyr Ser Cys Asn Leu Cys Gln Ser Phe Ala Pro Ala His Val
485 490 495
Cys Ile Val Thr Pro Glu Arg Leu Gly Leu Cys Gly Ala Val Ser Trp
500 505 510
Leu Asp Ala Lys Ala Thr Leu Glu Leu Asn Pro Thr Gly Pro Cys Gln
515 520 525
Ala Val Pro Lys Glu Gly Val Val Asp Glu Asn Leu Gly Ile Trp Glu
530 535 540
Lys Val Asn Glu Thr Val Ser Lys Ile Ser Gln Gly Ala Val Thr Ser
545 550 555 560
Val Thr Leu Tyr Ser Ile Leu Gln Asp Pro Met Thr Ser Cys Gly Cys
565 570 575
Phe Glu Cys Ile Thr Gly Ile Met Pro Glu Ala Asn Gly Val Val Met
580 585 590
Val Asn Arg Glu Phe Gly Ala Thr Thr Pro Leu Gly Met Thr Phe Gly
595 600 605
Glu Leu Ala Ser Met Thr Gly Gly Gly Val Gln Thr Pro Gly Phe Met
610 615 620
Gly His Gly Arg Gln Phe Ile Ala Ser Lys Lys Phe Met Lys Gly Glu
625 630 635 640
Gly Gly Leu Gly Arg Ile Val Trp Met Pro Lys Glu Leu Lys Asp Phe
645 650 655
Val Ala Glu Lys Leu Asn Lys Thr Ala Lys Glu Leu Tyr Asn Ile Asp
660 665 670
Asn Phe Ala Asp Met Ile Cys Asp Glu Thr Ile Ala Thr Glu Ser Glu
675 680 685
Glu Val Val Lys Phe Leu Glu Glu Lys Gly His Pro Ala Leu Lys Met
690 695 700
Asp Pro Ile Met
705
<210> 15
<211> 708
<212> PRT
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 15
Met Asn Leu Phe Gln Thr Val Phe Thr Gly Ser Lys Gln Ala Leu Ala
1 5 10 15
Ala Ala Glu Gly Ile Val Lys Gln Ala Val Asp Glu Lys Gly Arg Asp
20 25 30
Tyr Lys Val Ala Phe Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Leu Pro Val Ile Phe
35 40 45
Ala Ala Thr Gly Lys Lys Ile Thr Asn Val Gly Glu Leu Glu Gly Ala
50 55 60
Leu Asp Ile Val Arg Ser Leu Ile Val Glu Glu Glu Met Leu Asp Lys
65 70 75 80
Leu Leu Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ala Val Ala Ala Glu Ile Ile Glu
85 90 95
Ala Ala Lys Tyr Val Leu Ser Asp Ala Pro Tyr Ala Glu Pro Cys Val
100 105 110
Gly Phe Ile Ser Asp Pro Ile Ile Arg Ser Leu Gly Val Pro Leu Val
115 120 125
Thr Gly Asp Ile Pro Gly Val Ala Val Ile Leu Gly Glu Cys Pro Asp
130 135 140
Ser Glu Thr Ala Ala Lys Ile Ile Lys Asp Tyr Gln Ser Lys Gly Leu
145 150 155 160
Leu Thr Cys Leu Val Gly Lys Val Ile Asp Gln Ala Ile Glu Gly Lys
165 170 175
Val Lys Met Gly Leu Asp Leu Arg Val Ile Pro Leu Gly Tyr Asp Val
180 185 190
Thr Ser Val Ile His Val Val Thr Ile Ala Ile Arg Ala Ala Leu Ile
195 200 205
Phe Gly Gly Ile Lys Gly Gly Gln Leu Asn Asp Ile Leu Lys Tyr Thr
210 215 220
Ala Glu Arg Val Pro Ala Phe Val Asn Ala Phe Gly Pro Leu Ser Glu
225 230 235 240
Leu Val Val Ser Ala Gly Ala Gly Ala Ile Ala Leu Gly Phe Pro Val
245 250 255
Leu Thr Asp Gln Val Val Pro Glu Val Pro Thr Leu Leu Leu Thr Gln
260 265 270
Lys Asp Tyr Asp Lys Met Val Lys Thr Ser Leu Glu Ala Arg Asn Ile
275 280 285
Lys Ile Lys Ile Thr Glu Ile Pro Ile Pro Val Ser Phe Ala Ala Ala
290 295 300
Phe Glu Gly Glu Arg Ile Arg Lys Asn Asp Met Leu Ala Glu Phe Gly
305 310 315 320
Gly Asn Lys Thr Lys Ala Trp Glu Leu Val Met Cys Ala Asp Gln Gly
325 330 335
Glu Val Glu Asp His Lys Ile Glu Val Ile Gly Pro Asp Ile Asp Thr
340 345 350
Ile Asp Lys Ala Pro Gly Arg Met Pro Leu Gly Met Leu Ile Lys Val
355 360 365
Ser Gly Thr Asn Met Gln Lys Asp Phe Glu Pro Val Leu Glu Arg Arg
370 375 380
Leu His Tyr Phe Leu Asn Tyr Ile Glu Gly Val Met His Val Gly Gln
385 390 395 400
Arg Asn Leu Thr Trp Val Arg Ile Gly Lys Glu Ala Phe Glu Lys Gly
405 410 415
Phe Arg Leu Lys His Phe Gly Glu Val Ile Tyr Ala Lys Met Leu Asp
420 425 430
Glu Phe Gly Ser Val Val Asp Lys Cys Glu Val Thr Ile Ile Thr Asp
435 440 445
Pro Gly Lys Ala Glu Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ala Val Pro Arg Tyr
450 455 460
Lys Glu Arg Asp Ala Arg Leu Glu Ser Leu Val Asp Glu Lys Val Asp
465 470 475 480
Thr Phe Tyr Ser Cys Asn Leu Cys Gln Ser Phe Ala Pro Ala His Val
485 490 495
Cys Ile Val Thr Pro Glu Arg Leu Gly Leu Cys Gly Ala Val Ser Trp
500 505 510
Leu Asp Ala Lys Ala Thr Leu Glu Leu Asn Pro Thr Gly Pro Cys Gln
515 520 525
Ala Val Pro Lys Glu Gly Val Val Asp Glu Asn Leu Gly Ile Trp Glu
530 535 540
Lys Val Asn Glu Thr Val Ser Lys Ile Ser Gln Gly Ala Val Thr Ser
545 550 555 560
Val Thr Leu Tyr Ser Ile Leu Gln Asp Pro Met Thr Ser Cys Gly Cys
565 570 575
Phe Glu Cys Ile Thr Gly Ile Met Pro Glu Ala Asn Gly Val Val Met
580 585 590
Val Asn Arg Glu Phe Gly Ala Thr Thr Pro Leu Gly Met Thr Phe Gly
595 600 605
Glu Leu Ala Ser Met Thr Gly Gly Gly Val Gln Thr Pro Gly Phe Met
610 615 620
Gly His Gly Arg Gln Phe Ile Ala Ser Lys Lys Phe Met Lys Gly Glu
625 630 635 640
Gly Gly Leu Gly Arg Ile Val Trp Met Pro Lys Glu Leu Lys Asp Phe
645 650 655
Val Ala Glu Lys Leu Asn Lys Thr Ala Lys Glu Leu Tyr Asn Ile Asp
660 665 670
Asn Phe Ala Asp Met Ile Cys Asp Glu Thr Ile Ala Thr Glu Ser Glu
675 680 685
Glu Val Val Lys Phe Leu Glu Glu Lys Gly His Pro Ala Leu Lys Met
690 695 700
Asp Pro Ile Met
705
<210> 16
<211> 882
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 16
atgagcttat tgaaggaagc ttttgaaaag ggagagtttg caattacagc tgaaatggca 60
cctccaaagg gaacggatct ttctcattta attgaatgtg ccaaaaagat aaaaggaaga 120
gttcagggag ttaatgtaac ggattttcag tctgctacat taaaagctac atctttagct 180
acttgtaaag tattaaaaga tgcaggatta gagcctgtat ttcaaataac aggaagagat 240
agaaacagaa tagcaattca aggagaattg ttatctgcag gtgtttttgg aattgaaaac 300
gttttagctc ttactgggga ttatactgct acaggagatc accctggtgc aaagccagtt 360
tatgatctag atagtgttgg aatattacag gtggcaagca ttttaaatgg tggaaaagac 420
atgggtggaa ctgatttaaa agggaaacca gatttctttt taggggcctg tgttacacct 480
agatatgatc cgttagagct tcaagttata aagatgaaga agaaaattaa agctggagct 540
aaattctttc aaactcaagc tgtttatgat atggaaactt taaagaaatt caaagaagag 600
actaaagctc aaggtgtaga tgctaaagtt atggtaggca taataccttt aaagtcagct 660
ggtatggcta aatacatgaa taaaaacgta cctggtatat tcgtacctga tgaacttata 720
gatagaatga agaatgctga ggataaagtt caagaaggca taaagatagc aggagaattt 780
ataaaggccg taaaagaatc aggactttgc gatggagttc atataatggc aattggtgcg 840
gaagaaaatg tgccattaat attggatgaa gcaggattat aa 882
<210> 17
<211> 882
<212> DNA
<213> Clostridium autoethanogenum
<400> 17
atgagcttat tgaaggaagc ttttgaaaag ggagagtttg caattacagc tgaaatggca 60
cctccaaagg gaacggatct ttctcattta attgaatgtg ccaaaaagat aaaaggaaga 120
gttcagggag ttaatgtaac ggattttcag tctgctacat taaaagctac atctttagct 180
acttgtaaag tattaaaaga tgcaggatta gagcctgtat ttcaaataac aggaagagat 240
agaaacagaa tagcaattca aggagaattg ttatctgcag gtgtttttgg aattgaaaat 300
gttttagctc ttactgggga ttatactgct acaggagatc accctggtgc aaagccagtt 360
tatgatctag atagtgttgg aatattacag gtggcaagca ttttaaatgg tggaaaagac 420
atgggtggaa ctgatttaaa agggaaacca gatttctttt taggggcctg tgttacacct 480
agatatgatc cgttagagct tcaagttata aagatgaaga agaaaattaa agctggagct 540
aaattctttc aaactcaagc tgtttatgat atggaaactt taaagaaatt caaagaagag 600
actaaagctc aaggtgtaga tgctaaagtt atggtaggca taataccttt aaagtcagct 660
ggtatggcta aatacatgaa taaaaacgta cctggtatat tcgtacctga tgaacttata 720
gatagaatga agaatgctga ggataaagtt caagaaggca taaagatagc aggagaattt 780
ataaaggccg taaaagaatc aggactttgc gatggagttc atataatggc aattggtgcg 840
gaagaaaatg tgccattaat attggatgaa gcaggattat aa 882
Claims (29)
- CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 적어도 2g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일의 비생산성으로 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제1항에 있어서, 비생산성은 적어도 5g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일인 것인 세균.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 비생산성은 적어도 7g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일인 것인 세균.
- CO를 포함하는 가스상 기질의 혐기 발효에 의해 알코올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물로서, 여기서 상기 세균의 생산성은 적어도 약 10g의 에탄올/발효 브로쓰 1L/1일인 것인 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제4항에 있어서, 세균의 생산성은 적어도 약 50g의 에탄올/발효 브로쓰 1L/일인 것인 생물학적으로 순수한 단리물.
- 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 2:1인 비율로 에탄올을 생산할 수 있는 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제6항에 있어서, 세균은 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 7:1인 비율로 에탄올을 생산할 수 있는 것인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제7항에 있어서, 세균은 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 10:1인 비율로 에탄올을 생산할 수 있는 것인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- CO의 비흡수율(specific uptake)이 적어도 1.0mMol CO/1분/바이오매스 1g인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제9항에 있어서, 상기 세균의 CO의 비흡수율은 적어도 2.0mMol CO/1분/바이오매스 1g인 것인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 비성장률(specific growth rate)이 적어도 0.8일-1인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제11항에 있어서, 세균은 적어도 2.0일 -1의 비성장률을 갖는 것인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 알코올 관용성이 최대 30g/발효 브로쓰 1L인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제13항에 있어서, 상기 세균의 알코올 관용성은 최대 70g/L 발효 브로쓰인 것인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물.
- 세균의 생물학적으로 순수한 단리물로서, 상기 세균은 CO를 포함하는 기질의 혐기 발효에 의해, 에탄올 및 임의로 아세테이트를 포함하는 생성물을 생산할 수 있는 것이고, 상기 세균은 다음 특징들 중 2 이상이 가능한 세균인 것인 세균의 생물학적으로 순수한 단리물:
a. 약 2g 에탄올/발효 브로쓰 1L/바이오매스 1그램/1일의 비생산성으로 에탄올을 생산함;
b. 적어도 약 10g/발효 브로쓰 1L/일의 생산성으로 에탄올을 생산함;
c. CO의 비흡수율이 적어도 약 1.0mMol CO/1분/바이오매스 1g임
d. 비성장률이 적어도 약 0.8일-1임;
e. 에탄올 대 아세테이트의 비율이 적어도 약 2:1인 비율이 되도록 에탄올을 생산함; 및
f. 알코올 관용성이 적어도 30g/브로쓰 1L임. - 제1항 내지 제15항 중 어느 하나의 항에 있어서 세균은 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum)으로부터 유래된 것인 생물학적으로 순수한 단리물.
- 제16항에 있어서, 세균은 독일생물자원센터(German Collection of Microorganisms and cell cultures:DSMZ)에 수탁번호 DSM23693으로 기탁된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주의 특징을 갖는 것인 세균.
- 제17항에 있어서, 세균은 DSMZ에 수탁번호 DSM23693으로 기탁된 클로스트리듐 오토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum) 균주인 것인 세균.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 기재된 1종 이상의 세균을 이용하여 CO를 함유하는 기질을 발효시키는 것을 포함하는 1종 이상의 알코올의 생산 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 방법은 다음의 단계들을 포함하여 이루어지는 것인 방법:
a. 제1항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 기재된 세균의 배양체를 함유하는 바이오리액터에 CO를 함유하는 기질을 제공하는 단계; 및
b. 바이오리액터에서 배양체를 혐기 발효시켜 1종 이상의 알코올을 생산하는 단계. - 제19항 또는 제20항에 있어서, 1종 이상의 알코올에는 에탄올이 포함되고 에탄올 생산성은 적어도 2g의 에탄올/발효 브로쓰 1L/일인 것인 방법.
- 제19항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 있어서, CO를 함유하는 기질은 가스상 기질인 것인 방법.
- 제22항에 있어서, CO를 함유하는 가스상 기질은 산업 공정의 부산물로서 얻어지는 가스인 것인 방법.
- 제23항에 있어서, 산업 공정은 철금속 제품 제조, 비철금속 제품 제조; 석유 정제공정, 석탄의 가스화, 전기전력 생산, 카본 블랙 생산, 암모니아 생산, 메탄올 생산 및 코크스 제조로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제19항 내지 제24항 중 어느 하나의 항에 있어서, 기질은 적어도 30 부피% CO, 또는 적어도 40 부피% CO, 또는 적어도 50 부피% CO, 또는 적어도 65 부피% CO, 또는 적어도 70 부피% CO, 또는 적어도 80 부피% CO, 또는 적어도 90 부피% CO, 또는 적어도 95 부피% CO를 포함하는 것인 방법.
- 제19항 내지 제25항 중 어느 하나의 항에 있어서, 기질은 30 부피% 미만의 H2, 20 부피% 미만의 H2, 15 부피% 미만의 H2, 10 부피% 미만의 H2, 5 부피% 미만의 H2, 3 부피% 미만의 H2, 2 부피% 미만의 H2, 1 부피% 미만의 H2를 함유하거나 또는 실제로 H2를 함유하지 않는 것인 방법.
- 산업 공정으로부터의 총 대기 탄소 배출량을 저감시키는 방법으로서:
a. 산업 공정의 결과로 생성된 CO-함유 가스를 상기 가스가 대기 중으로 배출되기 전에 포집하는 단계;
b. 제1항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 기재된 1종 이상의 세균 단리물을 함유하는 배양체에 의해 CO-함유 가스를 혐기 발효시킴으로서 1종 이상의 알코올을 생산하는 단계
를 포함하여 이루어지는 것인 방법. - 제27항에 있어서, 1종 이상의 알코올에는 에탄올이 포함되는 것인 방법.
- 제27항 또는 제28항에 있어서, 아세테이트는 발효 부산물로서 생산되는 것인 방법.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US36848610P | 2010-07-28 | 2010-07-28 | |
US61/368,486 | 2010-07-28 | ||
PCT/NZ2011/000144 WO2012015317A1 (en) | 2010-07-28 | 2011-07-28 | Novel bacteria and methods of use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20130097174A true KR20130097174A (ko) | 2013-09-02 |
KR101375038B1 KR101375038B1 (ko) | 2014-03-14 |
Family
ID=45530328
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020137005437A KR101375038B1 (ko) | 2010-07-28 | 2011-07-28 | 신규 세균 및 그의 제조방법 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20130217096A1 (ko) |
EP (1) | EP2598630B1 (ko) |
JP (1) | JP5922657B2 (ko) |
KR (1) | KR101375038B1 (ko) |
CN (1) | CN103415612B (ko) |
AU (1) | AU2011283282C1 (ko) |
BR (1) | BR112013003644B1 (ko) |
CA (1) | CA2786903C (ko) |
EA (1) | EA025778B1 (ko) |
WO (1) | WO2012015317A1 (ko) |
ZA (1) | ZA201300612B (ko) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110256600A1 (en) * | 2011-02-02 | 2011-10-20 | Lanzatech New Zealand Limited | Recombinant Microorganisms and Methods of Use Thereof |
TWI537389B (zh) * | 2011-03-31 | 2016-06-11 | 藍瑟科技紐西蘭有限公司 | 用於控制丁二醇生產之發酵方法 |
KR101511639B1 (ko) * | 2012-01-31 | 2015-04-16 | 란자테크 뉴질랜드 리미티드 | 재조합 미생물 및 이의 사용 방법 |
US8735115B2 (en) * | 2012-03-30 | 2014-05-27 | Lanzatech New Zealand Limited | Method for controlling the sulphur concentration in a fermentation method |
US20130316364A1 (en) * | 2012-05-23 | 2013-11-28 | Lanzatech New Zealand Limited | Selection Method and Recombinant Microorganisms and uses Therefor |
US10233478B2 (en) | 2012-09-19 | 2019-03-19 | Ineos Bio Sa | Process for reducing CO2 emissions and increasing alcohol productivity in syngas fermentation |
US9850503B2 (en) | 2013-06-10 | 2017-12-26 | Ineos Bio Sa | Control of conductivity in anaerobic fermentation |
WO2015116737A1 (en) * | 2014-01-28 | 2015-08-06 | Lanzatech New Zealand Limited | Bacterium with increased tolerance to butyric acids |
CA2936252C (en) | 2014-01-30 | 2019-08-20 | Lanzatech New Zealand Limited | Recombinant acetogenic bacterium with mutated lactate biosynthesis pathway enzyme and methods of use thereof |
US9617566B2 (en) * | 2014-07-11 | 2017-04-11 | Lanzatech New Zealand Limited | Control of bioreactor processes |
EA036334B9 (ru) | 2015-05-27 | 2020-12-24 | Ланцатек Нью Зилэнд Лимитед | Генетически модифицированная бактерия clostridium для получения салицилата из хоризмата |
KR20180127632A (ko) | 2015-12-03 | 2018-11-29 | 란자테크 뉴질랜드 리미티드 | 가스 발효 아세토젠에서의 효율을 개선하기 위한 아르기닌 보충 |
JP2018153152A (ja) * | 2017-03-21 | 2018-10-04 | 積水化学工業株式会社 | 有機化合物生産システム、並びに、有機化合物の生産方法 |
CA3074292C (en) | 2017-09-08 | 2021-08-24 | Lanzatech, Inc. | Processes and systems for metabolite production using hydrogen rich c1-containing substrates |
US11355849B2 (en) * | 2017-09-29 | 2022-06-07 | Intel Corporation | Antenna package using ball attach array to connect antenna and base substrates |
CN111936631A (zh) | 2017-12-19 | 2020-11-13 | 朗泽科技有限公司 | 用于生物产生乙二醇的微生物和方法 |
JP7273834B2 (ja) | 2018-02-12 | 2023-05-15 | ランザテク,インコーポレイテッド | 炭素変換効率を改善するためのプロセス |
BR112020018577A2 (pt) | 2018-04-20 | 2020-12-29 | Lanzatech, Inc. | Método para operar um processo de fermentação |
JP7280951B2 (ja) | 2018-11-19 | 2023-05-24 | ランザテク,インコーポレイテッド | 発酵とガス化との統合 |
BR112021014626A2 (pt) | 2019-01-29 | 2021-10-05 | Lanzatech, Inc. | Método para produzir gás liquefeito de petróleo |
EP3921433A4 (en) | 2019-02-08 | 2022-11-23 | Lanzatech, Inc. | PROCESS FOR RECOVERING NEAR BOILING POINT PRODUCTS |
MY197253A (en) | 2020-06-06 | 2023-06-08 | Lanzatech Inc | Microorganism with knock-in at acetolactate decarboxylase gene locus |
US11788092B2 (en) | 2021-02-08 | 2023-10-17 | Lanzatech, Inc. | Recombinant microorganisms and uses therefor |
TW202307202A (zh) | 2021-08-06 | 2023-02-16 | 美商朗澤科技有限公司 | 用於改良乙二醇之生物產生的微生物及方法 |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5173429A (en) | 1990-11-09 | 1992-12-22 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Clostridiumm ljungdahlii, an anaerobic ethanol and acetate producing microorganism |
US5807722A (en) | 1992-10-30 | 1998-09-15 | Bioengineering Resources, Inc. | Biological production of acetic acid from waste gases with Clostridium ljungdahlii |
US5593886A (en) | 1992-10-30 | 1997-01-14 | Gaddy; James L. | Clostridium stain which produces acetic acid from waste gases |
UA72220C2 (uk) | 1998-09-08 | 2005-02-15 | Байоенджініерінг Рісорсиз, Інк. | Незмішувана з водою суміш розчинник/співрозчинник для екстрагування оцтової кислоти, спосіб одержання оцтової кислоти (варіанти), спосіб анаеробного мікробного бродіння для одержання оцтової кислоти (варіанти), модифікований розчинник та спосіб його одержання |
MXPA01011301A (es) | 1999-05-07 | 2003-07-14 | Bioengineering Resources Inc | Cepas clostridium que produce etanol a partir de gases que contienen substrato. |
EA006106B1 (ru) * | 2000-07-25 | 2005-08-25 | Эммаус Фаундейшн, Инк. | Способ стабильной непрерывной выработки этанола |
US20130252083A1 (en) * | 2004-01-13 | 2013-09-26 | John E. Stauffer | Lead-zinc battery |
NZ546496A (en) | 2006-04-07 | 2008-09-26 | Lanzatech New Zealand Ltd | Gas treatment process |
US7704723B2 (en) * | 2006-08-31 | 2010-04-27 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Isolation and characterization of novel clostridial species |
NZ553984A (en) | 2007-03-19 | 2009-07-31 | Lanzatech New Zealand Ltd | Alcohol production process |
EA022710B1 (ru) * | 2007-11-13 | 2016-02-29 | Ланзатек Нью Зиленд Лимитед | Штамм бактерии clostridium autoethanogenum, способный продуцировать этанол и ацетат путем анаэробной ферментации субстрата, содержащего co |
EA018720B1 (ru) | 2008-06-09 | 2013-10-30 | Ланзатек Нью Зиленд Лимитед | Способ получения бутандиола с помощью анаэробной микробной ферментации |
WO2010064932A1 (en) | 2008-12-01 | 2010-06-10 | Lanzatech New Zealand Limited | Optimised fermentation media |
WO2010064933A1 (en) * | 2008-12-01 | 2010-06-10 | Lanzatech New Zealand Limited | Optimised fermentation media |
US20110250629A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-10-13 | Lanza Tech New Zealand Limited | Alcohol production process |
US20130045517A1 (en) * | 2010-05-04 | 2013-02-21 | Lanzatech New Zealand Limited | Fermentation of waste gases |
CA2829702C (en) * | 2010-10-22 | 2015-02-10 | Lanzatech New Zealand Limited | Methods and systems for the production of hydrocarbon products |
US20130224839A1 (en) * | 2011-02-02 | 2013-08-29 | Lanzatech New Zealand Limited | Recombinant Microorganism and Methods of Production Thereof |
US9410130B2 (en) * | 2011-02-25 | 2016-08-09 | Lanzatech New Zealand Limited | Recombinant microorganisms and uses therefor |
WO2013138255A1 (en) * | 2012-03-12 | 2013-09-19 | Cobalt Technologies Inc. | Integrated biorefinery |
JP5842701B2 (ja) * | 2012-03-27 | 2016-01-13 | 信越化学工業株式会社 | 希土類元素が拡散された酸化物セラミック蛍光材料 |
-
2011
- 2011-07-28 US US13/812,029 patent/US20130217096A1/en not_active Abandoned
- 2011-07-28 JP JP2013521734A patent/JP5922657B2/ja active Active
- 2011-07-28 EP EP11812829.7A patent/EP2598630B1/en active Active
- 2011-07-28 EA EA201390179A patent/EA025778B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-07-28 AU AU2011283282A patent/AU2011283282C1/en active Active
- 2011-07-28 BR BR112013003644-3A patent/BR112013003644B1/pt active IP Right Grant
- 2011-07-28 WO PCT/NZ2011/000144 patent/WO2012015317A1/en active Application Filing
- 2011-07-28 CA CA2786903A patent/CA2786903C/en active Active
- 2011-07-28 CN CN201180046882.XA patent/CN103415612B/zh active Active
- 2011-07-28 KR KR1020137005437A patent/KR101375038B1/ko active IP Right Grant
-
2013
- 2013-01-23 ZA ZA2013/00612A patent/ZA201300612B/en unknown
-
2015
- 2015-10-05 US US14/874,665 patent/US10494600B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US10494600B2 (en) | 2019-12-03 |
EP2598630A4 (en) | 2013-10-23 |
JP2013532481A (ja) | 2013-08-19 |
BR112013003644A2 (pt) | 2018-07-31 |
EP2598630B1 (en) | 2015-11-25 |
CN103415612A (zh) | 2013-11-27 |
CA2786903C (en) | 2015-01-20 |
US20160017276A1 (en) | 2016-01-21 |
AU2011283282B2 (en) | 2013-10-03 |
CA2786903A1 (en) | 2012-02-02 |
ZA201300612B (en) | 2014-03-26 |
CN103415612B (zh) | 2016-01-20 |
JP5922657B2 (ja) | 2016-05-24 |
US20130217096A1 (en) | 2013-08-22 |
WO2012015317A1 (en) | 2012-02-02 |
BR112013003644B1 (pt) | 2020-11-17 |
KR101375038B1 (ko) | 2014-03-14 |
EP2598630A1 (en) | 2013-06-05 |
EA201390179A1 (ru) | 2013-08-30 |
EA025778B1 (ru) | 2017-01-30 |
AU2011283282A1 (en) | 2013-02-21 |
AU2011283282C1 (en) | 2014-03-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101375038B1 (ko) | 신규 세균 및 그의 제조방법 | |
KR101375029B1 (ko) | 신규 세균 및 이의 이용 방법 | |
EP2307556B1 (en) | Production of butanediol by anaerobic microbial fermentation | |
CN104508136A (zh) | 重组微生物及其用途 | |
KR102079274B1 (ko) | 효소 변경된 대사 산물의 활성 | |
ES2909579T3 (es) | Arginina como única fuente de nitrógeno para microorganismos fijadores de C1 | |
US8852918B2 (en) | Bacteria and methods of use thereof | |
CN113840909A (zh) | 从气态底物发酵生产2-苯乙醇 | |
CN114480239B (zh) | 一种利用wlp途径和还原性甘氨酸途径协同同化甲醇的重构嗜甲基丁酸杆菌及其应用 | |
AU2008321615B2 (en) | Novel bacteria and methods of use thereof | |
KR20150031562A (ko) | 합성가스를 이용하는 다탄소 화합물 생산용 균주 및 다탄소 화합물의 생산방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
A302 | Request for accelerated examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant | ||
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170307 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180228 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190227 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20200303 Year of fee payment: 7 |