KR20130084047A - 멜라토닌의 새로운 용도 - Google Patents

멜라토닌의 새로운 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20130084047A
KR20130084047A KR1020120004749A KR20120004749A KR20130084047A KR 20130084047 A KR20130084047 A KR 20130084047A KR 1020120004749 A KR1020120004749 A KR 1020120004749A KR 20120004749 A KR20120004749 A KR 20120004749A KR 20130084047 A KR20130084047 A KR 20130084047A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
disease
melatonin
prion
prp
composition
Prior art date
Application number
KR1020120004749A
Other languages
English (en)
Inventor
박상열
정재교
이유진
설재원
김재훈
박양규
이주희
Original Assignee
전북대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 전북대학교산학협력단 filed Critical 전북대학교산학협력단
Priority to KR1020120004749A priority Critical patent/KR20130084047A/ko
Priority to PCT/KR2013/000171 priority patent/WO2013109016A1/ko
Publication of KR20130084047A publication Critical patent/KR20130084047A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/4045—Indole-alkylamines; Amides thereof, e.g. serotonin, melatonin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Abstract

본 발명은 멜라토닌을 유효성분으로 포함하는 프리온 질병 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 멜라토닌은 세포의 생존율에는 영향을 미치지 아니하며, 프리온으로 유발된 신경독소를 선택적으로 억제하는 바, 이를 포함하는 조성물은 프리온 질병 예방 또는 치료에 효과적인 의약품과 식품으로 유용하게 이용할 수 있다.

Description

멜라토닌의 새로운 용도 {Novel use of melatonin}
본 발명은 프리온 질병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 멜라토닌을 유효성분으로 포함하는 프리온 질병 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
프리온(Prion)은 박테리아, 바이러스, 곰팡이, 기생충과 같은 기존의 병원체와는 전혀 다른 종류의 질병 감염인자로서, 보통의 바이러스보다 훨씬 작고, 유전물질인 핵산이 배제된 감염성 질환을 일으키는 특징을 가진다. 프리온이 사람을 포함하여 동물에 감염되면 뇌에서 스펀지 형태의 공포가 형성되어 신경세포사를 일으켜 퇴행성 신경질환을 유발한다.
프리온 질병은 현재까지도 정확한 발생기전이 밝혀져 있지 않으며, 많은 과학자들은 프리온 질병의 발생이 정상적인 프리온 단백질(PrPC)과 연관이 있을 것으로 추정하고 있다. PrPC는 세포막에 존재하는 당단백질로서 주로 대부분이 뇌에서 발현되며, 생체 내 기능에 대해서는 많이 밝혀져 있지 않으나 세포성장 및 부분적인 신호전달 기능을 갖는 것으로 알려져 있다. 특정 상황에서 PrPC는 비정상적인 형태를 취하는데, 이를 변형 프리온 단백질(PrPSc)이라고 한다. PrPSc는 PrPC와 달리 서로 응집하는 경향이 있고, 이러한 PrPSc의 응집체가 전염성 해면상 뇌증 (tansmissible spongiform encephalopathy; TSE)의 전염성을 일으킨다고 추정하고 있다. PrPC는 3개의 나선구조(α helix)와 2개의 병풍구조(β sheet)로 이루어져 있으며, 현재까지 잘 알려지지 않은 기전을 통해 PrPSc로 전환된다. PrPSc는 PrPC보다 병풍구조가 더 많으며, 서로 응집하여 수불용성(insoluble)이 되고, 단백분해효소 K(proteinase K)에 의해 완전히 분해되지 않는다. 또한, PrPSc는 PrPC와 입체구조가 전혀 다름에도 불구하고, 생체의 면역시스템은 PrPSc를 외부물질로 인식하지 못하고 있다.
모든 전염성 해면상 뇌증 질환에 있어서 발병 기전은 신경세포사를 유도함으로써 뇌에 스폰지 형태의 공동과 같은 병변을 일으켜 뇌의 손상을 야기하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 현재까지도 이러한 병변들이 PrPSc의 단독 작용에 의한 것인지 PrPC도 일부 관여를 하는지는 밝혀져 있지 않다. PrPSc는 다양한 포유류에서 진행성 신경질환을 일으키며, 그 치사율은 100%에 이른다.
대표적인 프리온 질병으로는 인간의 CJD(Creutzfeldt-Jakob disease), 소의 BSE(bovine spongiform encephalopathy), 양의 스크래피(scrapie), 사슴의 CWD (chronic wasting disease), 밍크의 TME(transmissible mink encephalopathy) 등이 알려져 있다. 일반적으로, 프리온 질병은 동종 내에서 전파되지만 이종으로 전이되었을 때 더 큰 문제를 야기한다. 이의 가장 대표적인 예로는, 소의 BSE로부터 전이되어 발병한 인간의 vCJD를 들 수 있다.
현재 알려져 있는 모든 프리온 질병들에 대한 예방 또는 치료제는 연구 및 개발 단계에 있어서 아직 실용화되어 있지 않다. 항프리온 효과를 갖는 물질로는 퀴나크린, 퀴놀린, RNA 앱타머 및 항 PrP 항체 등이 알려져 있으나, 이들 물질들은 세포 및 동물 실험단계에 머물러 있을 뿐 만족할 만한 효과를 얻지 못하여, 아직까지 이에 대한 연구 결과는 미미한 실정이다.
본 출원의 발명자들은 효과적인 프리온 질병 예방 및 치료가 가능한 약물을 개발하기 위해 연구를 수행한 결과, 멜라토닌이 프리온으로 유발된 신경독소를 선택적으로 억제한다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
이에 따라, 본 발명의 목적은 프리온 질병 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 멜라토닌을 유효성분으로 함유하는 프리온 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 프리온 질병은 바람직하게는 인간의 크로이츠펠트-야코프병 (Creutzfeldt-Jakob disease), 쿠루병(Kuru disease), 게르스트만-슈트로이슬러-샤인커병(Gerstmann-Strsyndrome), 치명적 가족성 불면증(fatal familial insomnia); 소의 BSE(bovine spongiform encephalopathy); 양의 스크래피(scrapie); 사슴의 CWD(chronic wasting disease); 또는 밍크의 TME(transmissible mink encephalopathy)일 수 있다.
또한, 본 발명은 멜라토닌을 함유하는 프리온 질병 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면 멜라토닌은 세포의 생존율에는 영향을 미치지 아니하며, 프리온으로 유발된 신경독소를 선택적으로 억제하는 바, 이를 포함하는 조성물은 프리온 질병 예방 또는 치료에 효과적인 의약품과 식품으로 유용하게 이용할 수 있다.
도 1은 SH-SY5Y 신경세포에 농도 비례적으로 멜라토닌 (12시간)을 선처리하고 24시간 동안 50 μM의 PrP (106-126)에 노출한 결과이다. 세포생존력은 아넥신 V 에세이 (annexin V assay)로 측정하였다.. M1은 아넥신 V 양성 세포의 분포를 나타낸다.
도 2는 아넥신 V 양성 세포의 평균을 나타내는 막대그래프이다. 대조구와 실험구 간의 유의적 차이는 *P　<　0.05, **P < 0.001, PrP (106-126) 처리구와 실험구와의 유의적 차이는 #P < 0.01 이다.
도3은 멜라토닌의 존재 (12시간) 및 비존재하에서, 50 μM의 PrP (106-126)에 노출된 TUNEL-양성 (초록색) SH-SY5Y세포의 면역형광 이미지이다. 세포는 세포의 핵을 나타내기 위하여 PI (빨간색)로 대비염색되었다. 확대율 400×, 스케일 바 (scale bar) = 100 μm.
본 발명은 멜라토닌을 유효성분으로 함유하는 프리온 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명의 발명자들은 PrP로 유발된 세포자멸을 나타내는 신경아세포종을 멜라토닌에 노출하였으며, 이를 대상으로 아넥신 V 에세이를 실시하였다. 초기 세포자멸의 표지자(marker)로서의 annexin V는 PS에 대하여 강한 결합 친화력을 가지고 있기 때문에 유세포 분석에서 널리 사용되는 단백질이다. PS는 세포막의 중요한 인지질로서 세포자멸 과정 초기에 세포막 표면의 바깥쪽으로 노출된다. PS는 세포자멸 과정에서 잘 알려진 “eat me” 신호이다. 세포와 세포자멸 유발제의 종류에 관계없이 세포자멸이 시작된 후 매우 초기에 PS가 외부 세포막에 발현된다. PS 수용체에 세포자멸에 의해 발현된 PS가 결합하는 것은 대식세포의 음세포 작용(pinocytosis)을 활성화시킨다. Annexin V는 칼슘 이온이 있을 시에 음이온을 가진 인지질 표면과 결합하는 단백질이다[14]. Annexin V는 320 개의 아미노산으로 구성되어 있으며 분자량은 36 kDa이다. PS의 위치 이동(PStranslocation)을 이용한 세포자멸의 검출에 annexin V를 사용한 여러 가지 연구들이 수행되어 왔다. 또한 annexin V를 개질하고 안정화시켜 세포의 죽음을 평가하는데 있어서 적절한 생물학적 표지로 사용할 수 있다는 것이 증명되어 왔다. 여러 가지 형광 물질이 표지된 annexin V가 세포자멸의 측정에 성공적으로 사용되어 왔다. 그 결과, 멜라토닌이 신경아세포종에서 프리온이 유발하는 신경독소를 선택적으로 억제하는 효과를 나타냄을 확인하였다.
본 발명에서의 멜라토닌 (melatonin, 5-methoxy-N-acetyl-trypamine)은 뇌의 송과선에서 분비되는 호르몬으로, 수면과 일일 주기성 리듬을 조절하고, 산소에서 유래한 자유라디칼을 탐식하고, 과산화 환원효소, 글루타치온 퍼옥사이드 효소, 글루타치온 환원효소, 글루코스-6-인산 탈수소 효소와 같은 항산화 효소를 자극하여 항산화 특성을 가지고 있다.
본 발명에서의 프리온 질병은 프리온 매개 세포자멸 (apoptosis) 와 관련된 신경질환을 모두 포함할 수 있으며, 구체적으로는 인간의 크로이츠펠트-야코프병 (Creutzfeldt-Jakob disease), 쿠루병(Kuru disease), 게르스트만-슈트로이슬러-샤인커병(Gerstmann-Strsyndrome), 치명적 가족성 불면증(fatal familial insomnia); 소의 BSE(bovine spongiform encephalopathy); 양의 스크래피(scrapie); 사슴의 CWD(chronic wasting disease); 또는 밍크의 TME(transmissible mink encephalopathy) 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 조성물은 멜라토닌과 함께 프리온 질병의 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
상기 멜라토닌은 전체 약학적 조성물에서 0.001 내지 50중량%, 바람직하게는 0.01 내지 20중량% 포함될 수 있다. 또한, 상기 멜라토닌은 전체 약학적 조성물에서 상기 약학적 조성물이 투여되는 개체의 1kg당 적정량이 투여될 수 있도록 함량을 조절할 수 있다. 예를 들어, 상기 투여되는 개체가 래트 (Rat)인 경우 상기 멜라토닌은 50mg/kg 내지 150mg/kg, 바람직하게는 80mg/kg 내지 120mg/kg의 함량으로 투여될 수 있도록 약학적 조성물에 포함되는 함량이 조절될 수 있다. 또한, 상기 투여되는 개체가 인간인 경우 상기 멜라토닌은 0.0001 내지 500mg/kg, 바람직하게는 0.001 내지 500mg/kg, 보다 바람직하게는 0.001 내지 300mg/kg의 함량으로 투여될 수 있도록 약학적 조성물에 포함되는 함량이 조절될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나, 약학적 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 성분을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 비타민 B1, B2, B6, C, E, 니아신, 카르니친, 베타인, 엽산 판토텐산, 비오틴, 아연, 철, 칼슘, 크롬, 마그네슘 및 이들의 혼합물 등의 무기 또는 유기 첨가물들을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 단독 사용하거나 기존에 사용된 프리온 질병에 대한 예방 또는 치료 활성을 가지는 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하고 경구 또는 비경구용의 인체 또는 수의용으로 제형화될 수 있다. 본 발명의 조성물을 제제화하는 경우 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose) 또는 락토오스 (Lactose) 및 젤라틴 등을 섞어 조제한다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘, 스티레이트, 탈크 같은 윤활제를 사용할 수 있다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 및 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은 개체에 투여하여 프리온 질병을 예방 또는 치료할 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어, “개체”는 프리온 질병 또는 이의 직, 간접적 원인에 의해 유발된 질환을 가지고 있으며, 본 발명의 상기 약학적 조성물을 투여하여 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간을 포함한 소, 양 사슴, 밍크 등의 포유동물을 의미한다.
본 발명에서 사용된 용어, “투여”는 어떠한 적절한 방법으로 개체에 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미한다. 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물이 표적 세포로 이동할 수 있도록 하는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 사용된 용어, “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 화합물을 포함하는 조성물의 투여방법은 경구투여 또는 정맥투여가 바람직하다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 성별, 연령, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여 방법, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 멜라토닌을 포함하는 프리온 질병 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 식품 조성물은 프리온 질병 억제를 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
음료의 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 식품 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 0.001 내지 0.4g, 바람직하게는 약 0.002 내지 0.03g 이다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 식품 조성물 100 중량부 당 0.001 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
시료와 방법
세포 배양
인간 신경아세포종 (neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y는 American Type Culture collection (ATCC, Rockville, MD, USA)로부터 얻었다. 세포는 10%의 소태아혈청 (fetal bovine serum) (FBS; Invitrogen-Gibco, Grand Island, NY, USA)과 겐타마이신 (gentamycin) (0.1 mg/ml)을 포함하는 Minimum Essential Medium (Hyclone Laboratories, Logan, UT, USA)에 배양되었으며, 가습 배양기 (humidified incubator)에 37°C에서 5% CO2조건에서 유지되었다.
PrP (106-126) 처리
합성 PrP (106-126) (sequence, Lys-Thr-Asn-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Ala-Val-Val-Gly-Gly-Leu-Gly, 서열번호1)은 Peptron (Seoul, Korea)에 의하여 합성되었다. 펩타이드를 살균 다이메틸설폭시화물 (sterile dimethylsulfoxide)에 12.5mM의 농도로 용해하였으며, -80°C에서 보관하였다.
아넥신 V 에세이 ( Annexin V assay )
세포자멸은 생산자가 제공하는 프로토콜에 따라 분리된 세포 (detached cells) (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)에 대하여 아넥신 V 에세이를 수행하여 결정하였다. 아넥신 V의 측량은 488 nm 의 여기파장 (excitation wavelength) 및 525 -530 nm 의 방출파장 (emission wavelength)에서의 형광측정에 의하며, 이는 Guava EasyCyte HT apparatus (Millipore, Billerica, MA, USA)를 이용한다.
Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling ( TUNEL ) 에세이
TUNEL 분석은 생산자가 제공하는 프로토콜에 따라서, in situ ApoBrdU DNA fragmentation assay kit (BioVision, San Francisco, CA, USA)를 이용하여 수행되었으며, 이는 세포자멸 정도를 측정하기 위하여 수행되었다. 세포는 인산완충식염수 (phosphate buffer saline, PBS)으로 워시되었으며 파라포름알데하이드 (paraformaldehyde)로 15분동안 고정되었다.
세포는 DNA-라벨링 용액 (10 μL의 TdT reaction buffer, 0.75 μL의 TdT enzyme, 8 μL의 Br-dUTP)과 함께 1시간동안 37oC에서 선배양된 뒤, 5 μL 항-BrdU-풀루오레세인 (fluorescein) 이소티오시안산 (isothiocynate) 헝체와 0.5시간동안 상온 (20 oC)에서 배양되었다. 최종적으로 세포는 DakoCytomation 형광 배지에 고정되었으며, 형광현미경을 이용하여 관찰되었다. 세포의 핵은 propodium iodide (PI)로 대조염색되었다.
결과
멜라토닌의 프리온 매개 신경독소 억제의 확인
아넥신 V 에세이 (annexin V assay)를 통하여 SH-SY5Y 세포에서의 PrP (106-126)-매개 세포독성에 대한 멜라토닌의 영향을 실험하였다. SH-SY5Y 세포는 PrP(106-126)가 존재하거나 존재하지 않는 조건에서 멜라토닌에 노출되었다. 세포는 PrP (106-126) 처리에 즉각 반응하였으며 (annexin V 양성 세포가 56.34% 로 증가), 멜라토닌 자체는 세포의 생존력에는 아무런 영향을 미치지 못하였다. 그러나, 멜라토닌과 PrP (106-126)가 동시에 처리된 경우 annexin V 양성 세포가 감소하였으며, 이러한 효과는 멜라토닌의 농도 비례적이었다 (도 1).
상기 실험결과를 바탕으로, 아넥신 V 양성 세포의 평균을 막대그래프로 나타낸 것은 도2와 같다.
TUNEL 에세이 결과
멜라토닌의 존재 (12시간) 및 비존재하에서, 50 μM의 PrP (106-126)에 노출된 TUNEL-양성 (초록색) SH-SY5Y세포의 면역형광 이미지는 도 3과 같다.
PrP(106-126)을 세포에 처리하는 경우, DNA분절이 유발되어 비오틴화 디옥시우디린 표지 DNA(초록색)의 양이 증가된 것을 확인할 수 있었다. 여기에 멜라토닌을 처리하는 경우 PrP(106-126)을 처리해도 PI만 염색(붉은색)되어 DNA의 분절이 일어나지 않음을 확인할 수 있었다.
<110> INDUSTRIAL COOPERATION FOUNDATION CHONBUK NATIONAL UNIVERSITY <120> Novel use of melatonin <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial PrP <400> 1 Lys Thr Asn Met Lys His Met Ala Gly Ala Ala Ala Ala Gly Ala Val 1 5 10 15 Val Gly Gly Leu Gly 20

Claims (3)

  1. 멜라토닌을 유효성분으로 함유하는 프리온 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 프리온 질병은 인간의 크로이츠펠트-야코프병 (Creutzfeldt-Jakob disease), 쿠루병(Kuru disease), 게르스트만-슈트로이슬러-샤인커병(Gerstmann-Strsyndrome), 치명적 가족성 불면증(fatal familial insomnia); 소의 BSE(bovine spongiform encephalopathy); 양의 스크래피(scrapie); 사슴의 CWD(chronic wasting disease); 및 밍크의 TME(transmissible mink encephalopathy)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 프리온 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 멜라토닌을 함유하는 프리온 질병 예방 또는 개선용 식품 조성물.
KR1020120004749A 2012-01-16 2012-01-16 멜라토닌의 새로운 용도 KR20130084047A (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120004749A KR20130084047A (ko) 2012-01-16 2012-01-16 멜라토닌의 새로운 용도
PCT/KR2013/000171 WO2013109016A1 (ko) 2012-01-16 2013-01-09 멜라토닌의 새로운 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120004749A KR20130084047A (ko) 2012-01-16 2012-01-16 멜라토닌의 새로운 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20130084047A true KR20130084047A (ko) 2013-07-24

Family

ID=48799407

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120004749A KR20130084047A (ko) 2012-01-16 2012-01-16 멜라토닌의 새로운 용도

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20130084047A (ko)
WO (1) WO2013109016A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117159539A (zh) * 2023-10-31 2023-12-05 南京农业大学三亚研究院 褪黑素在抗猪轮状病毒中的应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6274615B1 (en) * 1998-03-25 2001-08-14 South Alabama Medical Science Foundation Method for delaying the onset of alheimer's disease and for treatment or delaying the onset of other amyloidosis-related diseases/disorders
WO2004085392A1 (en) * 2003-03-25 2004-10-07 Faust Pharmaceuticals Melatonin derivatives and their use for treating neurological dysfunctions

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117159539A (zh) * 2023-10-31 2023-12-05 南京农业大学三亚研究院 褪黑素在抗猪轮状病毒中的应用
CN117159539B (zh) * 2023-10-31 2024-01-23 南京农业大学三亚研究院 褪黑素在抗猪轮状病毒中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013109016A1 (ko) 2013-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101308232B1 (ko) 오스모틴을 포함하는 신경질환의 예방 및 치료용 조성물
KR101800632B1 (ko) 엔테로코커스 패칼리스, 이의 배양액 또는 이의 사균체를 유효성분으로 함유하는 근육감퇴, 약화 및 근위축 예방, 개선 또는 치료용 약학 조성물, 식품 조성물 및 식품첨가제
EP3969010A1 (en) Compositions and methods to treat or prevent metabolic fatigue using at the compound oleuropein or a metabolite thereof
JP6669750B2 (ja) 環状ジペプチド含有血清カルノシン分解酵素阻害用組成物
WO2017010133A1 (ja) 動植物由来ペプチド含有血清カルノシン分解酵素阻害用組成物
JP2008143819A (ja) 酸化ストレス誘導細胞死の抑制剤
KR20130084047A (ko) 멜라토닌의 새로운 용도
US20210147482A1 (en) Peptide for inhibiting bone resorption
KR101915390B1 (ko) 계혈등 추출물을 포함하는 암의 예방 및 치료용 조성물
KR101840092B1 (ko) 에틸 파이루베이트(ethyl pyruvate)를 포함하는 말초신경계 퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JPWO2007020917A1 (ja) ユートロフィン産生の増強持続剤とこれを用いる加工食品
KR101448155B1 (ko) 3-메틸아데닌을 유효성분으로 함유하는 신경병증성 통증의 억제 또는 치료용 조성물
KR102380162B1 (ko) 효소처리 로얄젤리 분말을 포함하는 염증성 골관절질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20210122125A (ko) 갈색거저리 유충 단백질 또는 이의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 근감소증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
JP2022080307A (ja) 脂肪肝疾患の予防または治療用組成物
JP2022023012A (ja) β－ラクトグロブリン由来ペプチドを含有する神経細胞死の抑制剤
FR2995534A1 (fr) Medicament a activite neurotrophique, neuroprotectrice et/ou anti-neurodegenerative
JP6113325B2 (ja) 抗アレルギー用経口組成物
Sharma et al. Trehalose and its diverse biological potential
KR20150086429A (ko) 오스모틴을 포함하는 흥분독성 또는 시냅스 기능 장애에 의한 신경 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 및 이를 이용한 신경 질환의 예방 또는 치료 방법
US20230149475A1 (en) Composition for preventing, improving, or treating sarcopenia, comprising tenebrio molitor larval protein or hydrolysate thereof as active ingredient
JP2021505528A (ja) エンテロコッカス・フェカーリス、その培養液またはその死菌体を有効成分として含有する筋肉の減退、低下及び筋萎縮の予防、改善または治療用の薬学組成物、食品組成物及び食品添加剤
KR102588274B1 (ko) D-리모넨을 유효성분으로 포함하는 뇌전증 또는 발작 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
JP2010514752A (ja) アラザイムを有効成分とする肝機能保護用薬学的組成物
KR20170106627A (ko) 프로토파낙사디올류 진세노사이드 화합물을 포함하는 교모세포종 치료 및 전이 억제용 약학 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application