KR20130029063A - 결핵균 감염과 관련된 환자의 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법 - Google Patents

결핵균 감염과 관련된 환자의 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법 Download PDF

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Abstract

활동성 또는 잠복 결핵에서 전혈로부터 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis) 감염에 대한 감염 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법으로서:
·CD28, 또는 CD28 및 CD49d에 대한 항체의 존재하에서 정제된 단백질 유도체 (purified protein derivative, PPD)로 전혈의 제1 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포를 자극하는 단계;
·1.5 내지 2.5 시간, 특히 2시간 동안, 35 ℃ 내지 39 ℃, 특히 37 ℃에서, 선택적으로 CO2를 첨가하여 인큐베이션하는 것에 의해 항원제공세포 (antigen-presenting cell, APC)로 PPD를 처리하는 단계;
·그 후 분비 억제제 (secretion inhibitor)를 첨가하는 단계;
·집중 혼합 (intensive mixing)을 수행하는 단계;
·2.5 시간 이상의 기간 동안, 35 ℃ 내지 39 ℃의 온도에서 추가적인 인큐베이션을 수행하는 단계; 및
·상기 항원-특이적 T 세포의 세포내 INF-γ 생산 및 세포내 IL-2 생산으로부터 사이토카인의 프로파일 (profile)을 결정하는 단계;를 포함하고,
·활동성 결핵의 존재는 IFN-γ/IL-2 이중 양성 (double positive) T 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 상기 사이토카인 프로파일의 변화로 나타나는 것인 방법.

Description

결핵균 감염과 관련된 환자의 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법{In vitro process for the quick determination of a patient's status relating to infection with mycobacterium tuberculosis}
본 발명은 전혈 (whole blood)로부터 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis) 감염의 감염 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법에 관한 것이다.
결핵 (tuberculosis, TBC)은 치명적인 감염성 질환에 대한 전세계 통계에서 선두이고, 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis)에 감염된 자의 약 5 내지 10 % 만이 그들의 일생에서 결핵을 앓게 된다 (도 1). 진단 검사 (laboratory diagnostics)에 의한 병원균의 직접적인 검출에 의하여, 결핵은 임상적으로 확인된다. 피부 검사 또는 면역학적 검사에 의한 간접적인 검출에 의해서는, 결핵은 임상적으로 불충분하게 진단될 수 있을 뿐이다. 따라서, 이용 가능한 진단 검사 방법으로 결핵에 감염된 것으로 의심되는 환자의 감염 상태에 대하여, 단기간 내에, 즉 수시간 내에 신뢰할 수 있는 정보를 얻는 것은 현재로서는 기술적으로 불가능하다.
결핵의 진단은 배양에서의 병원균의 검출이 가능한 경우에만 확실시된다. 그러나, 결핵 조직 변화 (tuberculous tissue alteration)가 기관지계, 수출성 (efferent) 요로 또는 장에 관련되고 배출될 수 있는 경우에 한하여 어려움 없이 성공할 수 있다. 그렇지 않으면, 바늘에 의한 천공에 의해 직접적으로 조직을 샘플링하는 것에 의하여 시료를 얻기 위해 시도할 수 있다. 종래의 고체 배지 상에서의 결핵균의 느린 성장 때문에, 이러한 경우 결과를 얻기 위해서는 4주 내지 6주를 기다려야하고, 액체 배양에서는, 이 검출은 마이코박테리아 성장에 대한 최신 검출 방법에 의해 약 2주 후에 이미 성공적일 수 있다.
피부 검사 또는 면역학적 검출에 의한 간접적 검출에서, 예를 들어, 멘델-망투 피내 투베르쿨린 검사 (Mendel-Mantoux intracutaneous tuberculin test)에서, 마이코박테리아로부터 정제 및 여과된 항원 (투베르쿨린, tuberculine)의 정량이 표피 내로 주입된다. 검체 (tested subject)의 면역계가 이전에 마이코박테리아와 접촉되었다면, 피부 내로의 방어세포의 이동에 따른 방어 반응이 3일 이내에 각각의 위치에서 일어나서, 종창 (swelling)을 야기한다. 이것이 쿰스 (Coombs)에 따른 타입 IV 반응이다. 빠르면 결핵의 감염 후 6주에, 검사는 양성이 될 수 있다. 검사 부위에서의 뚜렷한 경결 (induration)이 양성 반응으로서 나타난다. 이는 결핵 감염이 일어났음을 의미할 수 있다. 그러나, 이 검사는 질병의 존재에 대하여 어떠한 것도 나타내지 않는다. 양성 검사 반응은 결핵 예방접종 후에도 나타날 수 있다. 만약 검사 부위에서 피부가 변하지 않거나 발진만을 보이는 경우, 이는 음성 결과로 간주 된다. 이때 높은 확률로써 결핵 감염이 배제된다.
결론적으로, 피내 투베르쿨린 검사는 매우 한정적으로 신뢰할 수 있다. 반면에, 심각한 경과 (severe course), 예를 들어 속립 결핵 (miliary tuberculosis)에서 또는 면역억제 (immunosuppression)에서도 음성으로 남을 수 있으며, 반면에, 조기 예방 접종 또는 이형 (atypical) 마이코박테리아와의 접촉은 위 양성 (false positive) 반응을 초래한다.
또 다른 가능한 진단 방법으로써, 면역학적 검사 방법, 이른바 인터페론-감마 (IFN-γ) 검사가, 2005년 이래로 가능해졌다. 이 검사에서, 혈액의 방어 세포는 결핵균으로부터의 항원의 혼합물에 의하여 자극된다. 만약 이러한 세포가 결핵 감염에 의해 결핵균과 접촉한 적이 있다면, 그들은 증가된 양의 메신저 IFN-γ(messenger IFN-γ)를 형성한다. 이는 세포 상청액 및 감염된 개체로부터의 혈액 샘플에서 결정될 수 있으며, 이는 함께 수반된 음성 대조군에 비하여 명확하게 더 높은 수준이다. 자극을 위하여, 항원 ESAT-6 (early secreted antigenic target), CFP-10 (culture filtrate protein) 및 Tb 7.7이 사용된다. 그들은 감염의 초기 (early phase)에 형성되며, 이른바 비-결핵 마이코박테리아 (non-tuberculosis mycobacteria)의 대부분 및 BCG 백신에 사용되는 마이코박테리아의 백신 스트레인에 의하여 생산되지 않는다. 이것은 진정한 결핵 감염과 이형 마이코박테리아의 감염 또는 예방접종에 의해 획득된 면역 간에 이 검사의 매우 높은 특이도 (specificity)를 설명한다. IFN-γ 검사를 위한 두 개의 검사 시스템, 즉, ELISA에 의해 IFN-γ 생산을 검출하는, Cellestis사의 QuantiFERON-TB? Gold In-Tube 및, IFN-γ 생산 검출 외에 Elispot에 의해 T 림프구의 생산 개수를 검출하는 Oxford Immunotec사의 T.SPOT.TB 검사가 최근 유럽 연합에서 승인되었다. 두 검사에서, 혈액 (QuantiFERON-TB?Gold In-Tube) 또는 단리된 단핵혈구 (T.SPOT.TB)가 20시간 동안 항원과 함께 인큐베이션되어야 하며, 따라서 검사 결과는 빨라도 다음날에 알 수 있다. 과거 결핵균과의 접촉에 대한 이 검사들의 민감도는 상이한 연구에서 82 내지 100 % 범위로 명시되며, 저-위험 대조군 (low-risk control)에서의 특이도는 98 %로 명시되고 있다. 그러나, 이 검사의 실시는 실제로 어려움 및 불확실성과 연관된다. 인큐베이션의 시간창 (time window)과 필요한 37℃의 일정한 온도가, 실험실에서 해당 방법에 대한 필요한 경험과 마찬가지로, 오류를 야기한다. 이에 따라, 실제로는 민감도 및 특이도의 명시된 값에 훨씬 미치지 못한다. 민감도 및 특이도가 100 % 미만인 모든 검사 방법에서와 같이, 유의성은 진정한 감염의 유병율 (prevalence rate)에 따라 감소한다. 따라서, 이러한 생체 외 검사들은 낮은 출현률 (low prevalence)을 갖는 집단 또는 직업군에서의 적용에 적합하지 않다.
Marcia Valeria B.S. Martins 등은 Tuberculosis (2007) 87, 202-211에서 혈액 중 PDD-특이적 IFN-γ 생산 CD4+ T 세포의 수준이 PPD에 대한 생체 내 반응을 예측함을 보고하였다. Uma Devi Ranganathan 등은 Vaccine 28 (2010), 152-161에서 재조합 세포사멸유도 (pro-apoptotic) 결핵균이 신생 쥐에서 HIV 타입 1 Env 및 결핵균에 대한 CD8+ T 세포의 반응을 발생시킨다는 것에 대하여 개시하였다. Stefan Winkler 등은 Microbes and Infection 7 (2005) 1161-1169에서 중앙 아프리카 유래의 활동성 폐결핵 (active pulmonary tuberculosis) 환자에서 증가된 특이적 T 세포 사이토카인 반응을 보고하였다. Corine Bronke 등은 Human immunology 66, 950-961 (2005)에서 HLA-DR3-제한 (HLA-DR3-restricted) 사이토메갈로바이러스 (cytomegalovirus) 및 결핵균-특이적 CD4+ T 세포의 직접적 탈체 (Ex Vivo) 검출에 대하여 게재하였다. Vernon C. Maino와 Louis Picker는 유동세포계수법 (flow cytometry)을 이용한 사이토카인 발현의 세포 내 검출을 기술하였다 (Cytometry 34:207-215 (1998)). T. Meier 등은 임상에서 결핵 진단을 위한 신규한 상업적 ELISA (enzyme-linked immunospot assay) (T SPOT-TB)의 민감도에 대하여 Eur J Clin Microbiol Infect Dis (2005) 24: 529-536에서 보고하였다. Holden T. Maecker 등은 BMC Immunology 2005, 6:13에서 사이토카인 유동세포계수 분석의 표준화 (standardization)에 대하여 보고하였다. Maria A. Suni 등은 유동세포계수법을 이용한 전혈 (whole blood)에서의 항원-특이적 T 세포 사이토카인 발현의 검출을 개시한다 (Journal of Immunological Methods 212 (1998) 89-98). Streitz M 등은 BCG 백신 집단에서 투베르쿨린-특이적 T 세포 반응이 낮은 진단적 특이도를 갖는다는 것을 보고하였다. 서브유닛-항원 (예를 들어, ESAT-6, CFP-10)에 기초한 검사가 잠복 결핵 감염의 진단에 유용한 반면, 활동성 폐결핵에 대한 신뢰할 수 있는 면역학적 검사는 없다. 특히, 현존하는 모든 면역학적 결핵-검사는 T-세포 반응 크기 (response size)에 기초하는 반면, T-세포 반응 질 (response quality)의 진단적 잠재력 (diagnostic potential)은 탐구된 적이 없었다. 이는 표면 마커 (surface marker) 발현 및 마이코박테리아 항원 특이적 T-세포의 기능성 (functionality)을 포함한다 ((2007) Loss of Receptor on Tuberculin-Reactive T-Cells Marks Active Pulmonary Tuberculosis. PLoS ONE 2(8): e735 doi:10.1371/journal.pone.0000735).
WO-A-2008/113119는 피험자로부터 수집된 소량의 희석되지 않은 전혈 (whole undiluted blood)에서 세포-매개 면역 (cell-mediated immune, CMI)을 측정하는 방법 및 키트를 개시한다. 특히, 상기 방법은 예를 들어, 50㎕ 내지 500㎕의 부피를 갖는 희석되지 않은 전혈 샘플에서의 반응을 측정하는 것이다. 따라서, 소아, 성인, 노인 피검체를 포함한 피검체에 대한 모세혈관 샘플링 및 신속한 검사가 가능하다.
US-A-2001/0006789는 항원 특이적 T 세포를 전례없는 명확성으로 정량하고, 특성을 규명하며, 중요하게 이는 전혈에서 수행되므로, 임상 면역 실험실에서 일상적인 (routine) 사용을 가능하게 하는 새로운 접근법을 개시한다. 이 방법은 단일 전혈 배양물로부터 다중 사이토카인을 발현하는 다중 T 세포의 서브세트를 동시에 측정할 수 있는 전혈에서의 개선된 세포계수적 세포내 사이토카인 분석법 (cytometric intracellular cytokine assay)을 제공한다. 전혈 항원 특이적 사이토카인 반응의 평가는 천연 샘플 (native sample)에 존재하는 모든 타입의 MHC 자가 항원 (autologous antigen) 제공 세포 존재하에서 T 세포 활성화를 평가하는 것의 중요한 장점을 갖는다. 또한 체계적인 환경 (즉, 약물 증가 또는 억제)의 항원을 포함한 특정 자극에 대한 T 세포 반응에 대한 영향을 반영할 수 있는 배양 체계 (culture system) (전혈)를, 그와 같은 약물의 존재하에서 배양하거나 또는 그와 같은 약물을 투여받고 있는 인간 또는 동물의 혈액을 분석하는 것에 의해 가능하게 하는 장점을 갖는다.
본 발명의 목적은 종래 기술의 단점을 회피하고, 추가적으로 급성 감염과 잠복 감염의 구별을 가능하게 하는 빠르고 믿을 수 있는 진단 방법을 제안하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적은 하기의 단계를 포함하는, 활동성 또는 잠복 결핵에서 전혈 (whole blood)로부터 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis) 감염의 감염 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법에 의해 달성된다:
·CD28, 또는 CD28 및 CD49d에 대한 항체의 존재하에서 정제된 단백질 유도체 (purified protein derivative, PPD)로 전혈의 제1 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포를 자극하는 단계;
·1.5 내지 2.5 시간, 특히 2시간 동안, 35 ℃ 내지 39 ℃, 특히 37 ℃에서, 선택적으로 CO2를 첨가하여, 인큐베이션하는 것에 의해 항원제공세포 (antigen-presenting cell, APC)로 PPD를 처리하는 단계:
·그 후, 분비 억제제 (secretion inhibitor)를 첨가하는 단계;
·집중 혼합 (intensive mixing)을 수행하는 단계;
·2.5 시간 이상의 기간 동안, 35 ℃ 내지 39 ℃의 온도에서 추가적인 인큐베이션을 수행하는 단계, 및
·항원-특이적 T 세포의 세포내 INF-γ 생산 및 세포내 IL-2 생산으로부터 사이토카인의 프로파일 (profile)을 결정하는 단계로서,
·활동성 결핵의 존재는 IFN-γ/IL-2 이중 양성 (double positive) T 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 상기 사이토카인 프로파일의 변화로 나타나는 것인 단계.
본 발명에 따른 방법의 일 구체예에서, PBS, SEB, ESAT-6 CFP-10 및/또는 백신 항원 (vaccination antigen)에 의한 또 다른 자극이 상기 PPD에 의한 자극에 추가하여 수행될 수 있다. 이는 항원-특이적 세포들이 결핵균과의 접촉에 기인한 것인지 또는 비-결핵 마이코박테리움과의 접촉에 기인한 것인지 또는 예방접종 반응에 기인한 것인지를 결정하기 위하여 항원-특이적 세포가 존재하는 때 필요할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 음성 대조군은 버퍼, 특히 PBS 0.9 % NaCl 또는 5 % 글루코스와 같은 생리학적으로 허용가능한 버퍼를 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제2 샘플에 존재하는 항원-특이적 세포에 첨가하는 것으로 수행된다 ("모사한 (authentic)"은 "동일한 근원으로부터 유래한"의 의미이다).
본 발명의 또 다른 구체예에서, 양성 대조군은 SEB를 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제3 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행될 수 있다.
일 구체예에서, 백신 (vaccination) 대조군, 특히 BCG-백신 대조군은 ESAT-6 (early secreted antigenic target) 및 CFP-10 (culture filtrate protein)을 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제4 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 전혈 제공자 내에서 비-결핵 마이코박테리아와의 접촉이 발생했는지 여부에 대한 대조군은 ESAT-6 (early secreted antigenic target) 및 CFP-10 (culture filtrate protein)를 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제4 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 백신 대조군은 백신 항원을 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제5 샘플에 존재하는 항원-특이적 T-세포에 첨가하는 것으로 수행할 수 있다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 구체예에서, 분비 억제제 (secretion inhibitor)는 브레펠딘 A (brefeldin A), 모넨신 (monensin) 또는 이들의 동등물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따르면, 사이토카인 프로파일의 결정은 유동세포계수법과 같은 적합한 방법에 의하여 수행된다.
본 발명에 따른 방법은 인간 또는 동물로부터의 전혈에 적용될 수 있다.
본 발명에 따른 방법은 특히 활동성 결핵 환자와 밀접하게 접촉한 사람 또는 활동성 결핵 환자와 밀접한 접촉했던 것으로 의심되는 사람으로부터 전혈을 얻는 것인 접촉자 추적 조사 (contact tracing)에 적용된다.
또한, 본 발명의 진단 분석법의 결과에 따라서 치료 결정 (treatment decision) 또는 계획 (regime)이 하기와 같이 수립된다:
a. IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화가 검출되는 경우, INH와 같은 예방 또는 사제요법 (quadruple therapy)과 같은 적극치료 (active treatment)가 권고되며;
b1. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내며 선행 검사에 대한 정보가 사용 가능하지 않은 경우, 급성 치료 (acute therapy)가 필요하지 않으며 환자는 2 내지 4주 이내에 재검사를 받아야하며;
b2. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내는 경우 및 결핵균의 잠복감염에 대한 선행 검사가 그 시점까지 결핵균과의 접촉이 없다는 것을 나타낸 경우, INH 치료 (INH therapy)와 같은 예방이 권고되며;
c1. 환자가 무반응을 보이는 경우, 급성 치료는 권고되지 않으며;
c2. 환자가 임상적 징후를 나타내는 경우, 재검사가 권고된다.
본 발명에 따른 방법은 또한, 면역억제제 (immunosuppressive drug)를 투여받기 전이거나 HIV 감염과 같은 면역-불능 상태 (immune-incompetent state)인 사람으로부터 얻은 전혈을 검사하는 데에 더 사용될 수 있다.
본 발명의 진단 분석법의 결과에 따라서, 치료 결정 또는 계획이 하기와 같이 수립된다:
a. IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화가 검출되는 경우, INH와 같은 예방 또는 사제요법과 같은 적극치료, 및 면역억제 치료의 선택적 지연이 권고되며;
b1. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내며 선행 검사에 대한 정보가 사용 가능하지 않은 경우, 면역억제 치료가 가능하며 환자는 2 내지 4 주 이내에 재검사를 받아야하며;
b2. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균에 의한 잠복감염을 나타내는 경우 및 결핵균의 잠복감염에 대한 선행 검사가 그 시점까지 결핵균과의 접촉이 없다는 것을 나타낸 경우, INH 치료 (INH therapy)와 같은 예방, 및 면역억제 치료의 선택적 지연이 2 내지 4 주 이내의 환자의 재검사와 함께 권고되며;
c1. 환자가 무반응을 보이는 경우, 면역억제 치료를 시작하며;
c2. 환자가 임상적 징후를 나타내는 경우, 재검사가 권고된다.
본 발명에 따른 방법은 또한 활동성 결핵균 감염으로 의심되는 사람에게서 얻은 전혈을 조사하는데에 사용될 수 있다.
본 발명의 진단 분석법의 결과에 따라서 치료 결정 및 계획이 하기와 같이 수립된다:
a. IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화가 검출되는 경우, 사제요법과 같은 적극치료가 권고되며;
b1. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균에 의한 잠복감염을 나타내며 선행 검사에 대한 정보가 사용 가능하지 않은 경우, 급성 감염은 개연성이 낮게, 대안적 진단이 고려되며, 환자는 2 내지 4 주 이내에 재검사를 받아야하며;
b2. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균에 의한 잠복감염을 나타내며 결핵균의 잠복감염에 대한 선행 검사가 그 시점까지 결핵균과의 접촉이 없다는 것을 나타낸 경우, INH와 같은 예방 또는 사제요법과 같은 적극치료가 권고되며 환자는 2 내지 4 주 이내에 재검사를 받아야하며;
c1. 환자가 무반응을 보이는 경우, 급성치료는 권고되지 않으며;
c2. 환자가 임상적 징후를 나타내는 경우, 재검사가 권고된다.
도 1은 결핵균의 감염 주기 (infection cycle)를 도시한다.
도 2는 사이토카인 IFN-γ 분석만으로 확인되었던, 항원-특이적 T 세포의 유동세포계수 분석을 나타낸다. 활동성 결핵 (active tuberculosis, A-TB)과 성공적으로 치료된 결핵 (treated tuberculosis, T-TB)간의 구별은 PPD, ESAT-6 또는 CFP-10에 의한 자극과는 독립적으로, IFN-γ 단일 분석으로는 불가능함이 밝혀졌다. ESAT-6 및 CFP-10는 결핵균과 접촉이 있었던 환자 (ESAT-6 및/또는 CFP-10 양성)와 순수 BCG 백신 반응 환자 (ESAT-6 및 CFP-10 음성, 표시되지 않음)간의 식별만을 가능하게 한다.
도 3은 활동성 결핵 (A-TB) 환자 및 성공적으로 치료된 결핵 (T-TB) 개체에서의 PPD-특이적 T 세포의 도수 분포를 나타낸다. T 세포는 CD69를 통한 활성화 및 PPD에 의한 IFN-γ의 특이적 유도로 확인했다. 활동성 결핵균 환자가 PPD-특이적 T 세포를 유의적으로 더 높은 빈도로 갖지만, 활동성 결핵 (A-TB)과 성공적으로 치료된 결핵 (T-TB)간의 구별은 개개의 경우에 있어서 광범위한 겹침 (overlap)때문에 IFN-γ 단일 분석으로는 불가능한 것으로 밝혀진다.
도 4는 4명의 성공적으로 치료된 결핵 환자에서의 PPD-반응성 T 세포의 IFN-γ/IL-2 사이토카인 프로파일을 예시적으로 보여준다. IFN-γ 단일 양성, IFN-γ/IL-2 이중 양성 및 IL-2 단일 양성 T 세포의 비율이 도면의 왼쪽에 수량화된다. 지배적인 비율의 세포가 두 사이토카인 모두를 발현한다.
도 5는 4명의 활동성 결핵 환자의 PPD-반응성 T 세포의 IFN-γ/IL-2 사이토카인 프로파일을 예시적으로 보여준다. IFN-γ 단일 양성, IFN-γ/IL-2 이중 양성 및 IL-2 단일 양성 T 세포의 비율이 도면의 오른쪽에 수량화된다. 활동성 결핵 환자는 IFN-γ/IL-2 이중 양성 T 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화를 보인다.
도 6은 활동성 결핵 (A-TB) 환자 및 성공적으로 치료된 결핵 (T-TB) 환자의 사이토카인 프로파일의 약식화된 묘사이다. 파선은 그 미만에서 활동성 결핵이 100%의 특이도 및 70%의 민감도로 진단될 수 있는 것인 IFN-γ/IL-2 이중 양성 T 세포의 한계 (56%)를 나타낸다. 이 한계는 ROC (receiver operating characteristic) 분석에 의하여 정해졌다.
본 발명은 이하의 실시예에 의하여 더 설명된다.
유리하게, 항원-특이적 세포의 INF-γ의 생산은 본 발명에 따른 방법으로 세포내적으로 (intracellularly) 결정된다. 따라서, 결핵 항원 PPD (purified protein derivative), ESAT-6 (early secreted antigenic target) 및 CFP-10 (culture filtrate protein)에 의한 항원-특이적 T 세포의 자극 시간을 선행 검사의 20시간에 비하여 6시간으로 단축시킬 수 있다 (도 2). 잠복 결핵 또는 성공적으로 치료된 결핵 환자에 비하여 활동성 결핵 환자에서 INF-γ를 발현하는 PPD-반응성 T 세포의 결정이 통계학적으로 유의성있게 더 높은 빈도로 발생하지만, 매우 광범위한 겹침 (overlap) 범위 때문에 개개의 환자에서 결핵의 두 병기 (stage)간의 구별이 이루어질 수 없다 (도 3). ESAT-6 및 CFP-10은 결핵균과 접촉한 바가 있는 환자 (ESAT-6 또는 CFP-10 양성)와 순수 BCG 백신 반응 환자 (ESAT-6 및 CFP-10 음성, 표시되지 않음)간의 식별을 가능하게 한다. 그러나, 활동성 결핵과 잠복 결핵 또는 성공적으로 치료된 결핵 간의 구별은 PPD-특이적 T 세포의 CD69로의 활성화를 통하여 및 IFN-γ 및 인터루킨-2 (IL-2)의 동시 결정 (simultaneous determination)으로 가능하다. 잠복 결핵 또는 성공적으로 치료된 결핵에서 PPD-반응성 T 세포의 지배적인 부분이 INF-γ 및 IL-2 모두를 발현하는 반면 (도 4), 활동성 결핵에서는 사이토카인 프로파일이 INF-γ 단일 양성 세포로 변화할 것이다 (도 5). ROC (receiver operating characteristic) 분석에 의해, 그 미만에서 활동성 결핵균이 특이도 100 %로 진단될 수 있는 것인 IFN-γ/IL-2 이중 양성 PPD-반응성 T 세포의 한계가 수립된다. 여기에 나타난 집단에서, 이 한계는 56 %의 IFN-γ/IL-2 이중 양성 T 세포이며, 이로 인하여 활동성 결핵 (A-TB) 환자는 민감도 70 %로, 성공적으로 치료된 결핵 (T-TB) 환자로부터 구별될 수 있다 (도 6).
또 다른 구체예에서, 사이토카인 프로파일의 결정은 표지된 항체에 의한 유동세포계수법에 의하여 수행된다. 따라서, INF-γ의 결정에 더하여, PD-1 (programmed death-1), CTLA-4 (cytotoxic T-lymphocyte antigen 4), TIM-3 (T-cell immunoglobulin domain and mucin domain 3)과 같은 추가적인 기능적으로 관련된 표면 분자, 또는 인터루킨-2, TNF-α (tumor necrosis factor α) 또는 IP-10 (chemokine (C-X-C motif) ligand 10)과 같은 추가적 사이토카인의 동시적 정량화 (simultaneous quantification)가 또한 가능하다.
유동세포계수법에 의한 항원-특이적 CD4 T 세포의 분석을 위하여, 특이적 T 세포를 활성화 및 사이토카인의 생산을 위한 항원 자극으로 흥분시키며, 흥분된 세포의 수는 그 뒤에 특이적 항체로 검출한다. 결핵균 (MTB) 특이적 T세포의 검사를 위하여 항원 PPD, ESAT-6 및 CFP-10를 이용한다. 잠복/성공적으로 치료된 결핵으로부터 활동성 결핵을 구별하기 위하여, PPD를 이용한 검사를 수행하며, 선행 예방접종으로부터 잠복/성공적으로 치료된 결핵 감염을 식별하기 위하여, ESAT-6 및 CFP-10를 이용한 검사를 수행한다. PBS는 비-특이적으로 반응하는 T 세포와 같은 백그라운드 신호 (background signal)가 수립될 수 있는 음성 대조군의 역할을 한다. SEB는 양성 대조군의 역할을 한다.
자극은 전혈로부터 직접적으로 수행할 수 있다. 처음에, 전혈을 CD28- 및 CD49d-특이적 항체와 각각 1 ㎍/ml의 농도로 혼합하며, 각각의 항원 (PPD: 7.32　㎍/ml, 투베르쿨린 RT-50; Statens Serum Institute, Copenhagen, Denmark)과 혼합하며, 자극은 ESAT-6 및 CFP-10를 포함하는 Mtb-유래 펩티드 풀 (peptide pool)로 수행하였다. CFP-10 및 ESAT-6 펩티드 풀은 11개의 아미노산에 의해 중첩되는 15량체 (15-mers)로 구성되며, 모든 펩티드는 HPLC에 의해 정제하였다 [>80% 순도, Hariri et al. Nature Medicine 2011;17: 372-376].
2 시간의 배양 시간 (37 ℃, 6 % CO2) 후, 자극에 의하여 유도된 사이토카인의 세포 외 방출 (exocytosis)은 사이토카인을 세포 내에 축적시키기 위하여 10㎍/ml 브레펠딘 A (brefeldin A, BFA)의 첨가로 중지시킨다. 또 다른 4시간의 인큐베이션 (37 ℃, 6 % CO2)으로 이어진다.
6 시간 뒤 자극을 중단하며, 세포를 고정시킨다. 처음에, 2nM EDTA를 각 샘플에 첨가하고, 뒤이어 10 초의 혼합 및 실온에서의 15 분간의 인큐베이션을 수행한다. 백혈구의 고정 (fixation)과 적혈구의 용혈 (lysis)을 실온에서의 10분의 인큐베이션 시간 동안 전혈 밀리리터당 9 ml의 Becton Dickinson 용혈 용액으로 수행한다. 원심분리 및 상청액의 흡입 후, 얻어진 세포 펠릿 (pellet)을 2　ml의 FACS 버퍼 (PBS-5 FCS-0.5% BSA-0.07% NaN3)로 세척한다. 이는 FACS 버퍼의 첨가로 수행하며, 뒤이어 원심분리 및 상청액의 흡입을 수행한다. 최종적으로, 고정된 세포를 FACS 버퍼에 취한다. 세포를 바로 염색하거나 또는 냉장고에서 4 ℃로 밤새 저장한다. 자극된 세포를 특이적 형광 색소-표지된 항체로 염색하기 위하여, 세포를 FACS 튜브에 재분배한다. 염색 혼합물 당 약 225-300 ㎕ 전혈로부터의 백혈구를 사용한다. 처음에, 2 ml 사포닌 (saponin) 버퍼 (FACS 버퍼/0.1 % 사포닌)를 10분 동안 샘플마다 첨가한다. 원심분리 및 SAP 버퍼의 흡입 이후에, 항체 혼합의 첨가를 FACS 버퍼/0.1 % 사포닌의 각 샘플마다 50 ㎕의 총부피로 수행한다 (항-CD4 클론 SK3, 항-IFN-γ 클론 4S.B3, 항-IL-2 클론 MQ1-17H12, 및 항-CD69 클론 L78). 상기 항체는 광-민감성이기 때문에, 30분 인큐베이션을 실온에서 암소에서 수행한다. 뒤이어, 결합되지 않은 항체를 제거하기 위하여 세포를 3 ml FACS 버퍼로 세척한다. 최종적으로, 세포 펠릿를 150㎕의 1 % 파라포름알데히드 용액에 취하고 유동세포계수법으로 분석한다.
성공적으로 치료된 결핵에서, 항원-특이적 T 세포의 지배적인 비율이 PPD에 의한 특이적 자극시, IFN-γ 및 IL-2 둘 다를 발현시킨다는 것이 확인된다. 놀랍게도, 활동성 결핵이 존재하는 경우, 사이토카인 프로파일은 IFN-γ/IL-2 이중 양성 T 세포의 동시 감소와 함께, IFN-γ 단일 양성 세포로 변화할 것이다. ESAT-6 및 CFP-10에 의한 자극에 의하여, 잠복 또는 성공적으로 치료된 결핵 감염은 백신 반응과 구별될 수 있다. ESAT-6 및 CFP-10은 결핵균과 접촉이 있었던 환자 (ESAT-6 및/또는 CFP-10 양성)와 순수 BCG 백신 반응 환자 (ESAT-6 및 CFP-10 음성)간의 식별을 가능하게 한다.

Claims (16)

  1. 활동성 또는 잠복 결핵에서 전혈 (whole blood)로부터 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis) 감염의 감염 상태를 신속하게 결정하는 생체 외 방법으로서:
    ·CD28, 또는 CD28 및 CD49d에 대한 항체의 존재하에서, 정제된 단백질 유도체 (purified protein derivative, PPD)로 전혈의 제1 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포를 자극하는 단계;
    ·1.5 내지 2.5 시간, 특히 2시간 동안, 35 ℃ 내지 39 ℃, 특히 37 ℃에서, 선택적으로 CO2를 첨가하여, 인큐베이션하는 것에 의해 항원제공세포 (antigen-presenting cell, APC)로 PPD를 처리하는 단계;
    ·그 후, 분비 억제제 (secretion inhibitor)를 첨가하는 단계;
    ·집중 혼합 (intensive mixing)을 수행하는 단계;
    ·2.5 시간 이상의 기간 동안, 35 ℃ 내지 39 ℃의 온도에서 추가적인 인큐베이션을 수행하는 단계; 및
    ·상기 항원-특이적 T 세포의 세포내 INF-γ 생산 및 세포내 IL-2 생산으로부터 사이토카인의 프로파일 (profile)을 결정하는 단계;를 포함하고,
    ·활동성 결핵의 존재는 IFN-γ/IL-2 이중 양성 (double positive) T 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 상기 사이토카인 프로파일의 변화로 나타나는 것인 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 PPD에 의한 자극에 더하여, SEB, ESAT-6 및 CFP-10 및/또는 백신 항원 (vaccination antigen)에 의한 또 다른 자극이 수행되는 것인 방법.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 음성 대조군은 PBS 0.9 % NaCl 또는 5 % 글루코스와 같은 생리학적 버퍼를 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제2 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행되는 것인 방법.
  4. 청구항 1 내지 3 중 하나 이상의 항에 있어서, 양성 대조군은 SEB를 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제3 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행되는 것인 방법.
  5. 청구항 1 내지 4 중 하나 이상의 항에 있어서, 백신 대조군은 백신 항원을 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제4 샘플에 존재하는 항원-특이적 T-세포에 첨가하는 것으로 수행되는 것인 방법.
  6. 청구항 1 내지 5 중 하나 이상의 항에 있어서, BCG-백신 대조군은 ESAT-6 (early secreted antigenic target) 및 CFP-10 (culture filtrate protein)을 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제4 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행되는 것인 방법.
  7. 청구항 1 내지 6 중 하나 이상의 항에 있어서, 전혈 제공자에서 비-결핵균과의 접촉이 발생했는지 여부에 대한 대조군은 ESAT-6 (early secreted antigenic target) 및 CFP-10 (culture filtrate protein)을 상기 제1 샘플을 모사한 전혈의 제5 샘플에 존재하는 항원-특이적 T 세포에 첨가하는 것으로 수행되는 것인 방법.
  8. 청구항 1 내지 7 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 분비 억제제는 브레펠딘 A (brefeldin A), 모넨신 (monensin) 또는 이들의 동등물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  9. 청구항 1 내지 8 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 사이토카인 프로파일의 결정은 유동세포계수법에 의하여 수행되는 것인 방법.
  10. 청구항 1 내지 9 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 샘플의 전혈은 인간 또는 동물로부터 유래한 것인 방법.
  11. 청구항 1 내지 10 중 하나 이상의 항에 있어서, 활동성 결핵 환자와 밀접하게 접촉한 사람 또는 활동성 결핵 환자와 밀접하게 접촉했던 것으로 의심되는 사람으로부터 전혈을 얻은 것인 접촉자 추적 조사 (contact tracing)에 적용되는 것인 방법.
  12. 청구항 11에 있어서, 치료 결정 (treatment decision)이 하기와 같이 이루어지는 것인 방법:
    a. IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화가 검출되는 경우, INH와 같은 예방 또는 사제요법 (quadruple therapy)과 같은 적극치료 (active treatment)가 권고되며;
    b1. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내며 선행 검사에 대한 정보가 사용 가능하지 않은 경우, 급성 치료 (acute therapy)는 필요하지 않고, 환자는 2 내지 4주 이내에 재검사를 받아야하며;
    b2. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내는 경우 및 결핵균에 의한 잠복감염에 대한 선행 검사가 그 시점까지 결핵균과의 접촉이 없다는 것을 나타낸 경우, INH 치료 (INH therapy)와 같은 예방이 권고되며;
    c1. 환자가 무반응을 보이는 경우, 급성 치료는 권고되지 않으며;
    c2. 환자가 임상적 징후를 나타내는 경우, 재검사가 권고된다.
  13. 청구항 1 내지 10에 따른 방법에 있어서, 전혈은 면역억제제 (immunosuppressive drug)를 투여받기 전이거나, 또는 HIV 감염과 같은 면역-불능 상태 (immune-incompetent)인 사람으로부터 얻은 것인 방법.
  14. 청구항 13에 있어서, 치료 결정이 하기와 같이 이루어지는 것인 방법:
    a. IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화가 검출되는 경우, INH와 같은 예방 또는 사제요법과 같은 적극치료, 및 면역억제 치료의 선택적 지연이 권고되며;
    b1. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내며 선행 검사에 대한 정보가 사용 가능하지 않은 경우, 면역억제 치료가 가능하고, 환자는 2 내지 4 주 이내에 재검사를 받아야하며;
    b2. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내는 경우 및 결핵균의 잠복감염에 대한 선행 검사가 그 시점까지 결핵균과의 접촉이 없다는 것을 나타낸 경우, INH 치료와 같은 예방, 및 면역억제 치료의 선택적 지연이 2 내지 4 주 이내의 환자의 재검사와 함께 권고되며;
    c1. 환자가 무반응을 보이는 경우, 면역억제 치료를 시작하며;
    c2. 환자가 임상적 징후를 나타내는 경우, 재검사가 권고된다.
  15. 청구항 1 내지 10에 있어서, 전혈은 활동성 결핵 감염으로 의심되는 사람으로부터 얻어진 것인 방법.
  16. 청구항 15에 있어서, 치료 결정은 하기와 같이 이루어지는 것인 방법:
    a. IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포의 감소를 동반한, IFN-γ 단일 양성 세포로의 사이토카인 프로파일의 변화가 검출되는 경우, 사제요법과 같은 적극치료가 권고되며;
    b1. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내고, 선행 검사에 대한 정보가 사용 가능하지 않은 경우, 급성 치료는 권고되지 않을 것이고, 대안적 진단이 고려되며, 환자는 2 내지 4 주 이내에 재검사를 받아야하며;
    b2. 진단 검사가 IFN-γ/IL-2 이중 양성 세포로 결핵균의 잠복감염을 나타내고, 결핵균의 잠복감염에 대한 선행 검사가 그 시점까지 결핵균과의 접촉이 없다는 것을 나타낸 경우, INH와 같은 예방 또는 사제요법과 같은 적극치료가 권고되며 환자는 2 내지 4 주 이내에 재검사를 받아야하며;
    c1. 환자가 무반응을 보이는 경우, 급성 치료는 권고되지 않으며;
    c2. 환자가 임상적 징후를 나타내는 경우, 재검사가 권고된다.
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WO (1) WO2011113953A1 (ko)
ZA (1) ZA201206950B (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210050063A (ko) * 2019-10-27 2021-05-07 바디텍메드(주) 결핵 진단 장치

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2655662A2 (en) 2010-12-23 2013-10-30 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Lausanne (CHUV) Methods for differentiating between disease states
WO2012167307A1 (en) * 2011-06-06 2012-12-13 The University Of Melbourne Diagnosis of mycobacterial infection
WO2013106338A1 (en) 2012-01-12 2013-07-18 Mayo Foundation For Medical Education And Research Detecting latent tuberculosis infections
US10401360B2 (en) 2013-04-29 2019-09-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Flow cytometry assay methods
GB201315748D0 (en) 2013-09-04 2013-10-16 Imp Innovations Ltd Biological methods and materials for use therein
US9549914B2 (en) 2014-04-03 2017-01-24 The Johns Hopkins University Treatment of human cytomegalovirus by modulating Wnt
JP6306124B2 (ja) * 2016-11-01 2018-04-04 国立大学法人高知大学 結核検査用バイオマーカー
EP3555630B1 (en) 2016-12-14 2023-05-31 Becton, Dickinson and Company Methods and compositions for obtaining a tuberculosis assessment in a subject
CN107831316A (zh) * 2017-10-31 2018-03-23 扬州大学 一种用于诊断牛结核病的流式细胞术检测试剂盒
CN109777852A (zh) * 2019-01-29 2019-05-21 浙江省人民医院 特异性抗原刺激cd4淋巴细胞表达cd69用于诊断结核杆菌感染的方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7514232B2 (en) 1996-12-06 2009-04-07 Becton, Dickinson And Company Method for detecting T cell response to specific antigens in whole blood
WO2002054072A2 (en) * 2001-01-08 2002-07-11 Isis Innovation Limited Assay to determine efficacy of treatment for mycobacterial infection
WO2006069460A2 (de) * 2004-12-30 2006-07-06 Medmix Systems Ag Mehrkomponenten-austragvorrichtung für flüssige und pulverförmige stoffe
EA012436B1 (ru) * 2005-01-05 2009-10-30 Айсис Инновейшн Лимитед Композиции для иммунизации против микобактерий
EP1767937A1 (en) * 2005-09-27 2007-03-28 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Method of diagnosis of tuberculosis related immune restoration syndrome (IRS)
GB0605474D0 (en) * 2006-03-17 2006-04-26 Isis Innovation Clinical correlates
ES2558543T3 (es) 2007-03-16 2016-02-05 Cellestis Limited Un ensayo de respuesta inmunitaria mediada por células y kits para el mismo

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210050063A (ko) * 2019-10-27 2021-05-07 바디텍메드(주) 결핵 진단 장치
KR20210135469A (ko) * 2019-10-27 2021-11-15 바디텍메드(주) 결핵 진단 키트

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