EA012436B1 - Композиции для иммунизации против микобактерий - Google Patents
Композиции для иммунизации против микобактерий Download PDFInfo
- Publication number
- EA012436B1 EA012436B1 EA200701440A EA200701440A EA012436B1 EA 012436 B1 EA012436 B1 EA 012436B1 EA 200701440 A EA200701440 A EA 200701440A EA 200701440 A EA200701440 A EA 200701440A EA 012436 B1 EA012436 B1 EA 012436B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antigen
- patient
- vector
- response
- immune response
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 46
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 title claims description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title description 48
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 202
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 190
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 184
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 66
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 53
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims abstract description 45
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims abstract description 35
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims abstract description 31
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 73
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 claims description 44
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 19
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 19
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 15
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 11
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 claims description 10
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 claims description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005871 monkeypox Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006448 Buruli Ulcer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023081 Buruli ulcer disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010066289 Mycobacterium ulcerans infection Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 claims 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 101100290666 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) ROX3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 49
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 10
- 230000010076 replication Effects 0.000 abstract description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 abstract description 4
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 75
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 67
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 48
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 48
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 44
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 102400000887 Cholecystokinin-7 Human genes 0.000 description 5
- 101800001542 Cholecystokinin-7 Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 4
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 3
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 2
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 2
- 102000016551 L-selectin Human genes 0.000 description 2
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 2
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- AEUTYOVWOVBAKS-UWVGGRQHSA-N ethambutol Chemical compound CC[C@@H](CO)NCCN[C@@H](CC)CO AEUTYOVWOVBAKS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 229940070741 purified protein derivative of tuberculin Drugs 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710095306 Alpha-crystallin Proteins 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 101100519151 Arabidopsis thaliana CEP10 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 206010060976 Bacillus infection Diseases 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 206010027259 Meningitis tuberculous Diseases 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 208000031998 Mycobacterium Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710172517 Replication gene A protein Proteins 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 208000001203 Smallpox Diseases 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 1
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 1
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000870995 Variola Species 0.000 description 1
- 208000004557 Vasovagal Syncope Diseases 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 208000036981 active tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002365 anti-tubercular Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003926 antimycobacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 210000000852 deltoid muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960005097 diphtheria vaccines Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229960000285 ethambutol Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229940029583 inactivated polio vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 229960003350 isoniazid Drugs 0.000 description 1
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 201000003265 lymphadenitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 208000001223 meningeal tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- HVAAHUDGWQAAOJ-UHFFFAOYSA-N n-benzylethanamine Chemical compound CCNCC1=CC=CC=C1 HVAAHUDGWQAAOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 229940100652 nasal gel Drugs 0.000 description 1
- 229940052404 nasal powder Drugs 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000009290 primary effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 229960005206 pyrazinamide Drugs 0.000 description 1
- IPEHBUMCGVEMRF-UHFFFAOYSA-N pyrazinecarboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CN=CC=N1 IPEHBUMCGVEMRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 108010068698 spleen exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229960004533 streptodornase Drugs 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229960002766 tetanus vaccines Drugs 0.000 description 1
- TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N tetrafluoromethane Chemical compound FC(F)(F)F TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 229960002109 tuberculosis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Способ формирования Т-клеточного иммунного ответа у хозяина, включающий введение векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена антигена 85А. Также предложены векторные вакцины и их применения. Также предложен способ индукции ответа CD8 и CD4 Т-клеток памяти против антигена с использованием аденовирусного вектора, экспрессирующего антиген или его иммуногенный фрагмент.
Description
Настоящее изобретение относится к способу формирования Т-клеточного иммунного ответа у хозяина. Данный способ включает стадию введения векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена антигена 85А (также именуемого здесь как ген Ад85А).
Все публикации, патенты и заявки на патент, процитированные здесь, полностью включены в данное описание изобретения посредством ссылки.
Предшествующий уровень техники
Туберкулез вызывается респираторным патогеном МусоЬас!ейит ЩЬетси1о818 и каждый год убивает 2 миллиона человек, преимущественно в развивающихся странах (1Шр://\у\у\у.\у1ю.т1/д1Ь/риЫ|са1юп8/д1оЬгер01/тйех.1Ит1). Единственная лицензионная вакцина против М. !иЬетси1о818, бацилла Кальметта-Герена (ВСС) (Са1тейе, А., Сиспп. (1924) Апп. 1п51. Райеиг. 38:371), представляет собой аттенуированный штамм МусоЬас!ейит Ьоу18, который в развивающихся странах обычно вводят интрадермально в виде однократной дозы новорожденным младенцам. Обзор многочисленных исследований свидетельствует о том, что вакцинация ВСС является защитной против детского менингеального туберкулеза и системных форм данного заболевания. Однако защитная эффективность является вариабельной (варьирует от 0 до 80%) (Со1йИг, С.А. е! а1. (1994). 1АМА 271:698) в отношении легочного заболевания взрослых, основной глобальной причины смертности от туберкулеза, и уменьшается со временем (81етпе, 1. А. е! а1. (1998) 1п!. 1. ТиЬегс. Ьипд Ό18. 2:200). Причина такой вариабельности не известна. Даже при этих условиях 80% младенцев во всем мире каждый год получают ВСС (1Шр://\у\у\у.\у1ю.т1/тГ-Г8/еп/Гас1104.111т1).
МусоЬас!ейит ШЬетси1о818 представляет собой внутриклеточный патоген, защитная эффективность против которого ассоциирована с поддержанием сильного, клеточно-опосредованного ответа на инфекцию, вовлекающего как СБ4+, так и СБ8+ Т-клетки, и со способностью отвечать цитокинами Т11-типа, в частности ΙΕΝ-γ (Е1упи, 1. Ь., 1. С1ап. (2001) Аппи. Вех. 1ттипо1. 19:93). Вакцинация ВСС индуцирует Тклетки, секретирующие ΙΕΝ-γ, преимущественно Т-клетки фенотипа СБ4+, которые перекрестно реагируют с белками М. ШЬегси1о818 (Ьаипок В е! а1, (1994) 1пГес1юп апй 1ттипйу 62(9):3679-87). Недавние исследования демонстрируют, что ВСС, введенная парентерально, не способна индуцировать Тклеточные иммунные ответы в слизистой оболочке легких, которые могут быть решающими для защиты против легочного заболевания.
Следовательно, существует потребность в разработке других вакцин против микобактериального заболевания.
Краткое описание сущности изобретения
В данной работе неожиданно обнаружили, что вирусные векторы, экспрессирующие микобактериальный антиген 85 А (Ад85А), могут индуцировать Т-клеточный иммунный ответ у пациента-человека при введении в виде иммуногенной композиции. Поэтому в изобретении предложен способ индукции Тклеточного иммунного ответа против микобактериального антигена у пациента-человека, включающий стадию введения указанному пациенту иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А. Предпочтительно, данная иммуногенная композиция представляет собой векторную вакцину. Этот подход с новой вакциной значительно улучшает силу и продолжительность Тклеточного иммунного ответа. Предпочтительно, Т-клеточный ответ представляет собой ответ Т-клеток памяти.
Антиген 85А (Ад85А) (регистрационные №№ САА17868 и ВХ842584) является членом комплекса Ад85. Он представляет собой семейство белков, включающее антигены 85А, 85В и 85С, секретируемые М. ЩЬетси1о818, ВСС и многими другими видами микобактерий (Найй, С. е! а1., (1996) 1пГес1. 1ттип. 64:3038-3047). Антиген 85А (Ад85А) является высококонсервативным у всех видов микобактерий и является иммунодоминантным в исследованиях животных и человека. Ад 85А (Ад85А) кодируется геном ГЬрА. Антиген 85А (Ад85А) из МусоЬас!епит ЩЬетси1о818 приведен в 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 1 и 2 в данном описании.
В современных стратегиях индукции усиленных Т-клеточных ответов в исследовании туберкулезных вакцин использовали технологию рекомбинантных ДНК с использованием плазмидных, бактериальных или вирусных векторов и рекомбинантного белка для экспрессии антигенов М. ШЬетси1о818. Было показано, что вакцинация мышей ДНК Ад85А, повторно иммунизируемых вектором МУА, экспрессирующим Ад85А, дает степень защиты, эквивалентную ВСС, после контрольного заражения М. ШЬетси1о818 (МсЗНапе. Н. е! а1, (2002). 1пГес!. 1ттип. 70:1623-1626). Однако иммунные ответы, формируемые однократной или повторной иммунизацией одним рекомбинантным вектором МУА, были слабыми.
Для долговременной защиты против микобактериального заболевания, такого как туберкулез, считается важным поддерживать Т-клетки памяти, которые могут продолжать стимулировать защитный иммунитет в течение десятилетий.
Вторичные иммунные ответы (тетогу 1ттипе ге8роп8е8) классически приписывают повторной активации долгоживущих антигенспецифических Т-лимфоцитов, которые происходят непосредственно из
- 1 012436 дифференцированных эффекторных Т-клеток и продолжают существовать равномерно в состоянии покоя. Полагают, что эффекторные Т-клетки и Т-клетки памяти распределяются по всем тканям в организме, в частности, по эпителиальным поверхностям (таким как кожа и кишечник), где вероятной является повторная встреча с патогенами.
Было показано, что Т-клетки памяти являются гетерогенными и включают в себя по меньшей мере две субпопуляции, наделенные разной способностью к миграции и эффекторной функции (К.ешйагб1, К.Ь. е! ай, (2001) Ыа!иге. 410, 101-105). Клетки из первой субпопуляции имеют сходство с эффекторными клетками, образующимися при первичном ответе, в том, что они не имеют Ь-селектина и ССК7, представляющих собой хоминг-рецепторы лимфатических узлов, и экспрессируют рецепторы для миграции в воспаленные ткани. При повторной встрече с антигеном эти эффекторные Т-клетки памяти (ТЕМ) могут быстро продуцировать ΙΕΝ-γ или 1Ь-4, или высвобождать предварительно запасенный перфорин. Клетки из второй субпопуляции экспрессируют Ь-селектин и ССК7 и не имеют немедленной эффекторной функции. Эти центральные Т-клетки памяти (ТСМ) имеют низкий порог активации и, при повторной стимуляции во вторичных лимфоидных органах, пролиферируют и дифференцируются в эффекторы Цет, 6. е! ай, (2001). 1. Ехр. Меб. 193, 987-994).
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий Ад 85А (Ад85А) (в данном случае проиллюстрированный примером МУА85А), может индуцировать высокие уровни антигенспецифических Т-клеток памяти, секретирующих интерферон-γ: как эффекторных Т-клеток памяти, так и центральных Т-клеток памяти, при использовании его одного у здоровых добровольцев, не подвергавшихся воздействию ВСС.
На протяжении последних 10 лет были разработаны новые иммунологические анализы для измерения и количественной оценки Т-клеточных ответов. Авторы настоящего изобретения использовали ЕЫ8РОТ (иммуноферментный спот-анализ от англ. Еигуте-йикеб 1ттипо5огЬеи1 зро!) анализ интерферона-гамма (ΙΕΝ-γ) в качестве основных иммунологических данных для клинических испытаний с МУА85А, поскольку секреция ΙΕΝ-у из антигенспецифических Т-клеток является самым лучшим доступным кореллятом защиты против М. 1иЬегси1о515. Кроме того, ЕБ18РОТ анализ является хорошо воспроизводимым и чувствительным методом количественной оценки числа антигенспецифических Тклеток, секретирующих ΙΕΝ-γ.
Авторы настоящего изобретения использовали два ЕЫ8РОТ анализа: ех-угуо (свежий) ЕЫ8РОТ анализ, где мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) инкубируют с антигеном в течение 18 часов для определения уровней ССК7-циркулирующих эффекторных Т-клеток, и ЕЫ8РОТ анализ в культуре, где РВМС инкубируют с антигеном в течение 10-14 суток для измерения уровней ССК7+ центральных Т-клеток памяти (Собкш е! а1, Л, 2002).
Авторы настоящего изобретения открыли, что вакцинация МУА85А индуцирует сильный ответ центральных Т-клеток памяти, специфичный в отношении антигена 85А (Ад85А), который все еще определяется через 3 недели после вакцинации, когда ответ циркулирующих эффекторных Т-клеток является практически неопределимым.
Это является первой демонстрацией того, что долговременная популяция центральных Т-клеток памяти может быть значительно усилена у пациента путем введения иммуногенной композиции, экспрессирующей микобактериальный антиген.
Подразумевается, что используемый в данном описании термин Т-клетка памяти включает как ССК.7- (эффекторные Т-клетки памяти), так и ССК7+ (центральные Т-клетки памяти) субпопуляции Тклеток. Это определение также включает как СЭ4 Т-клетки памяти, ограниченные классом II, так и СЭ8 Т-клетки памяти, ограниченные классом Ι. Предпочтительно, Т-клетки памяти, индуцированные векторными вакцинами по изобретению, характеризуются экспрессией ССК7+ на поверхности клеток. Они упоминаются в данном описании как центральные Т-клетки памяти.
Предпочтительно, ответ Т-клеток памяти, индуцированный иммуногенными композициями по изобретению, представляет собой защитный Т-клеточный ответ. Защитный иммунный ответ можно измерить с помощью иммуноанализа секреции ΙΕΝ-у, предпочтительно из антигенспецифических Т-клеток. Предпочтительно, ответ Т-клеток памяти является долговременным и сохраняется в течение по меньшей мере 1, 2, 5, 10, 15, 20, 25 или более лет. Наиболее предпочтительно, защитный иммунный ответ является пожизненным.
Предпочтительно, ген Ад85А экспрессируется в вирусном векторе. Предпочтительно ген Ад85А экспрессируется в нереплицирующемся или дефектном по репликации вирусном векторе.
Термин векторные вакцины хорошо известен в данной области. Вектор, используемый в способе по изобретению, представляет собой нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор. Используемый в данном описании термин нереплицирующийся или дефектный по репликации означает не способный к репликации в значительной степени в большинстве нормальных клеток человека. Вирусы, которые являются нереплицирующимися или дефектными по репликации, могут становиться таковыми естественным путем (например, они могут быть выделены в таком виде из природной среды) или искусственно, например путем селекции ίη νίΙΐΌ или пугем генетической манипуляции, например
- 2 012436 делеции гена, который является критическим для репликации. Обычно существует один или несколько типов клеток, в которых можно выращивать вирусы, такие как клетки СЕЕ для модифицированного вируса Анкара (МУА). В общем, вирусный вектор должен иметь способность стимулировать Т-клеточный ответ.
Примерами вирусных векторов, которые являются полезными в этом контексте, являются векторы на основе вируса осповакцины, такие как МУА или ХТУАС. Предпочтительным вирусным вектором является штамм вируса осповакцины МУА или штамм, происходящий из МУА. Альтернативы векторам на основе вируса осповакцины включают в себя векторы на основе других поксвирусов, включая векторы на основе вирусов оспы птиц, такие как векторы на основе вирусов оспы кур или оспы канареек. Особенно подходящим в качестве вектора на основе вируса оспы птиц является штамм вируса оспы канареек, известный как АЬУАС (имеющийся в продаже под названием Капарох), и штаммы, происходящие из АЬУАС, а также штамм вируса оспы кур, известный как ЕР9. Другими альтернативами являются альфавирусные векторы, аденовирусные векторы, векторы на основе вируса герпеса, флавивирусные векторы, ретровирусные векторы и векторы на основе вирусов гриппа.
Например, вектор может представлять собой вектор на основе аденовируса, не являющегося человеческим. Неожиданно обнаружили, что применение аденовирусного вектора индуцирует очень сильный ответ СБ8 Т-клеток памяти, помимо очень сильного ответа СБ4 Т-клеток памяти. Индукция ответа как СБ8, так и СБ4 Т-клеток памяти одной и той же вакциной, по-видимому, является полезной как в профилактике, так и в лечении микобактериального заболевания. Способ индукции ответа СБ8 и СБ4 Тклеток памяти в отношении антигена с использованием аденовирусного вектора, экспрессирующего антиген или его иммунногенный фрагмент, следовательно, также включен в объем данной заявки. Антиген, экспрессирующийся аденовирусным вектором, предпочтительно представляет собой микобактериальный антиген, как описано выше, наиболее предпочтительно Ад85А, но, в качестве альтернативы, может представлять собой любой другой подходящий антиген.
Объем данного изобретения охватывает также применение аденовирусного вектора, экспрессирующего антиген или его иммуногенный фрагмент, в изготовлении лекарственного средства для индукции ответа СБ8 и СБ4 Т-клеток памяти в отношении данного антигена. Предпочтительно, согласно данному изобретению предложено применение аденовирусного вектора, экспрессирующего микобактериальный антиген или его иммунногенный фрагмент, в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики микобактериального заболевания. Данный антиген предпочтительно представляет собой микобактериальный антиген, как описано выше, наиболее предпочтительно Ад85А, но, в качестве альтернативы, может представлять собой любой другой подходящий антиген Предпочтительно, чтобы вирусный вектор не мог вызывать серьезную инфекцию у пациента-человека.
Репликацию вируса обычно измеряют двумя путями: 1) синтез ДНК и 2) вирусный титр. Более точно, термин нереплицирующийся или дефектный по репликации, как он используется в данном описании и как он используется в отношении поксвирусов, означает вирусы, которые удовлетворяют одному из двух или обоим следующим критериям:
1) демонстрируют 1 1од (10-кратное) снижение синтеза ДНК по сравнению с копенгагенским штаммом вируса осповакцины в клетках МК.С-5 (линия человеческих клеток);
2) демонстрируют 2 1од снижение вирусного титра в клетках НЕБА (линия человеческих клеток) по сравнению с копенгагенским штаммом вируса осповакцины.
Примеры поксвирусов, которые подпадают под это определение, представляют собой МУА, ΝΥУАС и вирусы оспы птиц, тогда как вирус, который не подпадает под это определение, представляет собой аттенуированный штамм вируса осповакцины М7.
Согласно данному изобретению также предложено применение иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А, в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения микобактериального заболевания у пациента-человека. Предпочтительно, иммуногенная композиция представляет собой векторную вакцину. Данная иммуногенная композиция и векторная вакцина действуют путем индукции у пациента Т-клеточного иммунного ответа.
Вакцины по изобретению могут быть либо профилактическими (т.е. для предупреждения инфекции), либо вакцинами для применения после контакта с источником инфекции (т.е. для лечения после инфекции, но до начала заболевания), либо терапевтическими (т.е. для лечения заболевания), но типично будут представлять собой профилактические вакцины или вакцины для применения после контакта с источником инфекции.
Микобактериальные заболевания, которые можно лечить или предупреждать с помощью векторной вакцины по настоящему изобретению, включают в себя туберкулез, лепру, инфекцию МусоЬас1егшт аушш, нетуберкулезную микобактериальную инфекцию, язву Бурули, инфекцию или заболевание, вызванное МусоЬас1егшш Ьоу18, инфекцию, вызванную МусоЬас1егшт рага1иЬегси1о818, или родственное заболевание. Другие заболевания (т.е. немикобактериальные заболевания) включают в себя воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, аутоиммунное заболевание, рак, рак мочевого пузыря, натуральную оспу и обезьянью оспу.
- 3 012436
Можно использовать специализированные конструкции вирусных векторов для облегчения получения и применения векторной вакцины. Все векторные конструкции, раскрытые в данном описании, образуют аспекты данного изобретения. Векторные вакцины, содержащие эти вирусные конструкции, также включены в качестве аспектов данного изобретения.
Например, один или более генов антигена могут быть укорочены по С-концу или Ν-концу данного гена. Это может оказывать влияние на облегчение клонирования и конструирования векторной вакцины и, альтернативно или дополнительно, может приводить к повышенной эффективности. Способы укорочения обычно известны специалисту в данной области. Простейшим способом осуществления укорочений этого типа является применение различных хорошо известных методик генной инженерии для избирательного удаления кодирующей последовательности нуклеиновой кислоты на любом конце гена антигена, а затем вставка желательной кодирующей последовательности в вирусный вектор. Например, укорочения кандидатного белка создают, избирательно используя 3'- и/или 5'-экзонуклеазные стратегии для разрушения, соответственно, 3'- и/или 5'-концов кодирующей нуклеиновой кислоты. Предпочтительно, последовательность гена дикого типа укорачивают таким образом, что экспрессируемый антиген укорачивается на 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более аминокислот относительно родительского антигена. Наиболее предпочтительно, ген антигена представляет собой Лд85Л, который укорочен на 15 аминокислот по С-концу относительно антигена Лд85Л дикого типа (8ЕО ΙΌ N0:3, продукт экспрессии 8Е0 ΙΌ N0:4).
Антигены, подходящие для применения в данном изобретении, также включают фрагменты родительского антигена, при условии, что эти фрагменты имеют антигенную детерминанту или эпитоп, общий с родительским антигеном или иммунологически идентифицируемый с родительским антигеном. Полинуклеотиды, кодирующие эти фрагменты, также подходят для применения в иммуногенных композициях и векторных вакцинах по изобретению.
Используемый в данном описании термин фрагмент относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность, которая является такой же, как часть, но не вся, аминокислотной последовательности родительского антигена, из которого он происходит, или одним из его функциональных эквивалентов. Данные фрагменты должны содержать по меньшей мере η последовательных аминокислот из данной последовательности и, в зависимости от конкретной последовательности, η предпочтительно равно 7 или более (например 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 или более). Маленькие фрагменты могут образовывать антигенную детерминанту.
Гены антигенов по изобретению также могут кодировать варианты или функциональные эквиваленты родительского антигена. Такая молекула нуклеиновой кислоты может представлять собой природный вариант, такой как встречающийся в природе аллельный вариант, или данная молекула может представлять собой вариант, для которого не известно, что он встречается в природе. Такие не встречающиеся в природе варианты молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены с помощью методик мутагенеза, включая методики, используемые в отношении молекул нуклеиновых кислот, клеток или организмов.
Среди вариантов в этом отношении есть варианты, которые отличаются от вышеупомянутых последовательностей гена антигена нуклеотидными заменами, делениями или вставками. Данные замены, делеции или вставки могут включать один или более нуклеотидов. Данные варианты могут быть изменены в кодирующих или в некодирующих участках, или и в тех и других. Изменения в кодирующих участках могут давать консервативные или неконсервативные аминокислотные замены, делеции или вставки.
Альтернативно или в дополнение к использованию генного укорочения, ген, кодирующий антиген, может содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептидную метку, так, чтобы она была ковалентно связана с антигеном при трансляции. Предпочтительно, полипептидная метка выбрана из группы, состоящей из РК метки, ЕЬАО метки, ΜΥ С метки, полигистидиновой метки или любой метки, которую можно определить с помощью моноклонального антитела. Другие примеры будут очевидны квалифицированному специалисту в данной области. В случае использования, РК метка предпочтительно имеет последовательность Рго-А8п-Рго-Ееи-О1у-Ееи-А8р. Метка этого типа может облегчать определение экспрессии антигена и клонов, экспрессирующих данный антиген, и альтернативно или дополнительно может приводить к увеличению эффективности.
Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептидную метку, может быть расположена таким образом, что после трансляции данная метка находится на С-конце или Ν-конце экспрессируемого антигена, или она может быть расположена внутри экспрессируемого антигена. Предпочтительно метка расположена на С-конце экспрессируемого антигена. Нуклеотиды, кодирующие линкерную последовательность, могут быть встроены между нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептидную метку, и нуклеиновой кислотой, кодирующей экспрессируемый антиген. Предпочтительно, линкерная последовательность, когда она экспрессируется, содержит аминокислоты С1у-8ег-11е. Более предпочтительно аминокислоты 01у-8ег-11е встроены между Ν-концевой последовательностью антигена и меткой экспрессируемого антигена. Наиболее предпочтительно экспрессируемый антиген представляет собой Ад85а (Ад85А), и РК метка расположена на С-конце гена Ад85а (Ад85А).
Ген, кодирующий антиген, также может включать лидерную последовательность. Лидерная после
- 4 012436 довательность может влиять на процессинг первичного транскрипта в мРНК, на стабильность мРНК или на эффективность трансляции. Предпочтительно, лидерная последовательность усиливает экспрессию и/или иммуногенность антигена. Повышенная иммуногенность может быть определена, например, с помощью ЕБ18Р0Т анализа в культуре и ех νίνο. Повышенный уровень экспрессии может быть определен, например, с использованием моноклонального антитела для определения количества продуцируемого белка. Предпочтительно, экспрессия и/или иммуногенность увеличиваются в 2, 3 раза или более раз по сравнению с антигеном, экспрессируемым без лидерной последовательности. Примером подходящей лидерной последовательности является ΐ-РА (тканевой активатор плазминогена) (Майи А.8. е! а1. (2000) МктоЬек 1иТес1. 2000 Νον; 2(14): 1677-85).
Предпочтительно, конструкция вирусного вектора включает укороченную по С-концу последовательность Ад85А, слитую с лидерной последовательностью ТРА. В еще одном другом предпочтительном воплощении вирусный вектор по изобретению экспрессирует укороченную по С-концу последовательность Ад85А, слитую с лидерной последовательностью ТРА и с последовательностью РК метки. Предпочтительно, лидерная последовательность слита с Ν-концом антигена, а последовательность метки слита либо внутри, либо с С-концом белка. В особенно предпочтительном воплощении конструкция вирусного вектора содержит полинуклеотид, кодирующий Ад85а (Ад85А), укороченный по С-концу на 15 аминокислот, слитый с последовательностью ТРА и с С-концевой РК меткой последовательности РгоА8п-Рго-Беи-Беи-С1у-Беи-А8р, где аминокислотные остатки С1у-8ег-11е присутствуют между последовательностью Ад85А и РК меткой (8ЕЦ ΙΌ N0:5). Предпочтительно, продукт экспрессии вирусного вектора имеет аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ N0:6.
Было обнаружено, что защитный эффект Т-клеток, отмеченный авторами данного изобретения, является особенно сильным у пациентов-людей, которые ранее подвергались воздействию микобактериального антигена. Стратегии гетерологичной первичной-повторной иммунизации индуцируют более высокие уровни ответов эффекторных Т-клеток у животных и людей, чем гомологичная повторная иммунизация той же самой вакциной (8с1ше1бег. 1. е!. а1. (1998) Να!. Меб. 4, 397-402, Мс8йапе, Н. е! а1 (2001) 1п£ес!. 1шшип. 69, 681-686).
Механизм, лежащий в основе постепенной потери эффективности ВСС (прививаемой новорожденным), когда индивидуум достигает возраста 10-15 лет, плохо понятен. Одним из возможных предположений является то, что иммунитет, формируемый ВСС, исчезает, и индивидуум становится эквивалентным хозяину, не подвергавшемуся вакцинации, который может быть вакцинирован новой кандидатной вакциной, разработанной для индукции первичного иммунитета. Хотя повторная вакцинация ВСС, повидимому, дополнительно не увеличивает защиту против ТВ (ссылка Робпдиех Ь е! а1, Байсе! 2005), включение ВСС в гетерологичный режим первичной-повторной иммунизации сохраняло бы защитные эффекты ВСС. Ранее была подтверждена иммуногенность и защитная эффективность повторной ВСС иммунизации с использованием вирусных векторов, экспрессирующих антиген 85А (Ад85А) в нескольких животных моделях (Соопе!Шеке, Ν.Ρ. е!. а1. (2003) 1. 1ттипо1. 171, 1602-1609; ^1Шаш8 А е!. а1, 1п£ес!юп апб 1ттиш1у (73(6):3814-6), но индукция защитного ответа Т-клеток памяти не была подтверждена.
Поэтому согласно данному изобретению также предложен способ усиления Т-клеточного иммунного ответа у пациента-человека, включающий стадию введения указанному пациенту по меньшей мере одного микобактериального антигена в комбинации с векторной вакциной, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена 85а (Ад85А). Предпочтительно Т-клеточный иммунный ответ представляет собой иммунный ответ Т-клеток памяти.
Согласно данному изобретению также предложено применение: (а) по меньшей мере одного микобактериального антигена; и (б) векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена 85а (Ад85А), в изготовлении лекарственного средства для введения пациенту для индукции Т-клеточного иммунного ответа.
Векторную вакцину, содержащую нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена 85а (Ад85А), и микобактериальный(е) антиген(ы) можно вводить одновременно, последовательно или раздельно. Например, микобактериальный(е) антиген(ы) можно вводить для примирования пациента до или после введения векторной вакцины для усиления иммунного ответа пациента на векторную вакцину.
Кроме того, согласно данному изобретению также предложен способ индукции Т-клеточного иммунного ответа у пациента-человека, включающий стадию введения указанному пациенту-человеку иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А, где данный пациент был подвергнут предварительному воздействию по меньшей мере одного микобактериального антигена. Предпочтительно Т-клеточный иммунный ответ представляет собой иммунный ответ Т-клеток памяти.
Согласно данному изобретению также предложено применение иммуногенной композиции, содержащей векторную вакцину, содержащую нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена 85а (Ад85А), в изготовлении
- 5 012436 лекарственного средства для лечения или предупреждения микобактериального заболевания у пациентачеловека, который был подвергнут предварительному воздействию микобактериального антигена.
Микобактериальный антиген может происходить из М. 1иЬетси1о818 и/или может происходить из одной или более других микобактерий, таких как М. аушт-ш1тасе11и1аге, М. капкакп, М. тапиит и/или из М. и1сегаи8. Когда пациент был предварительно подвергнут воздействию только одного антигена, тогда данный антиген может представлять собой антиген, который дает защитный иммунный ответ против микобактериальной инфекции. В одном из воплощений данного изобретения антиген, воздействию которого был предварительно подвергнут пациент, не является Ад85А.
Альтернативно или дополнительно, пациент возможно был предварительно подвергнут воздействию одной или более самих микобактерий. Например, предварительное воздействие на пациента по меньшей мере одного микобактериального антигена может иметь место до воздействия М. ШЬегси1о5й. Альтернативно или дополнительно, предварительное воздействие на пациента по меньшей мере одного микобактериального антигена может иметь место до воздействия микобактерий из окружающей среды, таких как М. аушт-ш1тасе11и1аге, М. капкакй, М. тапиит и/или из М. и1сегатк. Предпочтительно, пациент является латентно инфицированным микобактериями. Например, данный пациент возможно был предварительно подвергнут воздействию М. 1иЬегси1о818 и может быть латентно инфицирован туберкулезом. Когда лекарственное средство предназначено для лечения пациента, который латентно инфицирован микобактерией, данное лечение предпочтительно уничтожает микобактериальную инфекцию.
Альтернативно или дополнительно, предварительное воздействие может включать неонатальную или предварительную вакцинацию ВСС. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что у добровольцев, которых ранее вакцинировали ВСС и которые затем получили повторную иммунизирующую дозу векторной вакцины по настоящему изобретению, были индуцированы значительно более высокие уровни антигенспецифических Т-клеток, секретирующих интерферон-γ, и через 24 недели после вакцинации эти уровни были в 5-30 раз выше, чем у вакцинированных, которым проводили однократную вакцинацию ВСС.
Соответственно, согласно этому аспекту изобретения предложен способ индукции Т-клеточного иммунного ответа у пациента-человека, включающий стадии воздействия на пациента по меньшей мере одним микобактериальным антигеном и усиления иммунного ответа путем введения композиции для повторной иммунизации, включающей иммуногенную композицию, содержащую нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена 85а (Ад85А).
Этот аспект данного изобретения также относится к способу формирования Т-клеточного иммунного ответа у пациента-человека, включающему стадии:
1) воздействия на пациента по меньшей мере одним микобактериальным антигеном;
2) введения указанному пациенту по меньшей мере одной дозы композиции для повторной иммунизации, включающей векторную вакцину, содержащую нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена 85а (Ад85А).
В одном из воплощений данного изобретения, когда пациент подвергается воздействию только одного микобактериального антигена на стадии 1), данный антиген представляет собой антиген, который дает защитный иммунный ответ, но не Ад85А.
Стадию 1) можно осуществить с пациентом любого возраста, например, в период новорожденности, в раннем детстве, во время пубертатного периода или во взрослом состоянии. Предпочтительно пациента подвергают воздействию по меньшей мере одного микобактериального антигена в период новорожденности.
Введение иммуногенной композиции может происходить по меньшей мере через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более недель, или через 0,25, 0,5, 0,75, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 или 40 или более лет после предварительного воздействия по меньшей мере одного микобактериального антигена. Предпочтительно, когда стадию 1) осуществляют, когда пациент находится в раннем детстве, тогда стадию 2) осуществляют в раннем детстве или пубертатном возрасте.
Когда стадия 2) включает введение пациенту более чем одной дозы композиции для повторной иммунизации, тогда более чем одну дозу можно вводить в течение короткого периода времени или в течение длительного периода времени. Например, дозы композиции для повторной иммунизации можно вводить в течение периода, длящегося часы, сутки, недели, месяцы или годы. Например, вторую дозу повторной иммунизации можно вводить от 0,5 до 24 ч после первой дозы повторной иммунизации, от 1 до 7 суток после первой дозы повторной иммунизации, от 1 недели до 1 месяца после первой дозы повторной иммунизации, от 1 месяца до 6 месяцев после первой дозы повторной иммунизации, от 6 месяцев до 1 года после первой дозы повторной иммунизации, или от 1 до 2, от 2 до 5, от 6 до 10 или более чем через 10 лет после первой дозы повторной иммунизации. Эти временные интервалы с соответствующими изменениями предпочтительно также применяются к периоду между любыми последовательными дозами.
Во втором аспекте данного изобретения помимо иммунного ответа, индуцированного против антигена 85а (Ад85А), вирусный вектор стимулирует векторспецифичный Т-клеточный ответ. Согласно это
- 6 012436 му аспекту изобретения введение векторной вакцины по изобретению стимулирует Т-клеточный иммунный ответ против вируса, из которого происходит вирусный вектор. Например, применение вектора МУА в векторной вакцине по изобретению стимулирует Т-клеточный иммунный ответ против вируса осповакцины. Предпочтительно, этот Т-клеточный ответ является защитным Т-клеточным ответом. Об эффекте этого типа ранее не сообщалось, и он является явно полезным в том, что векторная вакцина играет двойную роль во-первых, в защите против микобактериальных заболеваний и, во-вторых, в защите против заболевания, опосредованного вирусами, родственными данному вектору. В случае вектора МУА таким заболеванием является натуральная оспа.
Заболевания вирусного происхождения, которые можно лечить или предупреждать с помощью векторной вакцины по настоящему изобретению, будут очевидны специалистам в данной области; их примеры включают в себя натуральную оспу, обезьянью оспу и диссеминированную инфекцию осповакциной.
Соответственно, согласно этому аспекту данного изобретения предложен способ индукции Тклеточного иммунного ответа против микобактериального антигена и вируса у пациента-человека, включающий стадию введения иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А, пациенту-человеку. Предпочтительно Т-клеточный иммунный ответ представляет собой ответ Т-клеток памяти.
Согласно этому аспекту данного изобретения также предложено применение иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А, в изготовлении лекарственного средства для индукции у пациента-человека Т-клеточного иммунного ответа против микобактериального антигена и вируса.
Вакцины по изобретению доставляют пациенту иммунологически эффективное количество по меньшей мере одного антигена. Под иммунологически эффективным количеством подразумевают, что введение этого количества индивидууму либо в однократной дозе, либо как часть серии, является эффективным для лечения или предупреждения. Это количество варьирует в зависимости от здоровья и физического состояния индивидуума, которого лечат, возраста, активности иммунной системы индивидуума, степени желательной защиты, препарата вакцины, оценки медицинской ситуации лечащим врачом и других релевантных факторов. Ожидается, что данное количество будет попадать в относительно широкий интервал, который может быть определен обычными исследованиями.
В третьем аспекте данного изобретения вирусный вектор может дополнительно экспрессировать продукт трансляции одного или более дополнительных генов антигена, которые могут быть использованы для индукции антигенспецифического иммунного ответа против таких дополнительных антигенов. Данный иммунный ответ может представлять собой СЭ8+. СЭ4+ и/или антительный ответ. Предпочтительно один или более дополнительных генов антигена происходят из М. 1иЬегси1о8к, Р1а8шобшш §р, вируса гриппа, ВИЧ, вируса гепатита С, цитомегаловируса, вируса папилломы человека, паразитов, вызывающих малярию, лейшманию, или, предпочтительно, из любого вида микобактерий. Предпочтительно, один или более дополнительных генов антигена кодируют антиген, выбранный из группы, состоящей из антигена из семейства антигена 85 из любой микобактерий или любого антигена, экспрессируемого видами микобактерий; более предпочтительно, из одного или более антигенов латентного периода, таких как 16 кДа антиген или гепарин-связывающий гемагглютинин (НВНА), или Е8АТ7, или слитый белок, известный как 72Е.
Также предусматривается, что дополнительный антиген может иметь эндогенное происхождение, чтобы индуцированный иммунный ответ был направлен против опухоли. Антигены эндогенного происхождения, которые подходят для применения в настоящем изобретении, представляют собой: белки теплового шока человека и опухолеассоциированные антигены, такие как СЕА, Р8А, Мис-1, Нег2пеи.
Вирусный вектор может быть сконструирован для экспрессии гена Ад85А и одного или более дополнительных генов антигена в виде последовательности эпитопов. Преимущественно эпитопы в последовательности многочисленных эпитопов связаны друг с другом без промежуточных последовательностей так, что исключается вещество нуклеиновых кислот и/или аминокислот, которое не является необходимым. Создания последовательности эпитопов предпочтительно можно достичь с использованием конструкции рекомбинантной ДНК, которая кодирует аминокислотную последовательность последовательности эпитопов, с ДНК, кодирующей Ад85А в той же рамке считывания, что и ДНК, кодирующая дополнительный(е) антиген(ы). В качестве альтернативы, Ад85А и дополнительный(е) антиген(ы) можно экспрессировать как отдельные полипептиды.
Согласно этому аспекту изобретения также предложено применение векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А и продукт трансляции по меньшей мере одного дополнительного гена антигена или эпитопа в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения как микобактериального заболевания, так и по меньшей мере одного дополнительного заболевания у пациента-человека путем индукции Т-клеточного ответа у данного пациента.
- 7 012436
Согласно этому аспекту изобретения векторную вакцину можно использовать для защиты как против микобактериального заболевания, так и против одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ВИЧ, малярии и натуральной оспы, путем индукции у пациента-человека Т-клеточного иммунного ответа, предпочтительно иммунного ответа Т-клеток памяти.
Хотя векторную вакцину по настоящему изобретению можно использовать отдельно, ее можно также объединять с другими режимами вакцинации или терапевтическими режимами для лечения или предупреждения дополнительного заболевания. Следовательно, также как и предложение векторных вакцин, как описано выше, согласно данному изобретению предложена композиция, содержащая векторную вакцину по изобретению и один или более других антигенов или эпитопов, происходящих из агента, вызывающего заболевание.
Антигены и эпитопы, подходящие для применения в композициях по изобретению, могут иметь бактериальное или вирусное происхождение. Подходящие антигены можно дополнительно классифицировать как белковые антигены, углеводные антигены или гликоконъюгированные антигены. Композиции по изобретению могут включать один или более дополнительных антигенов или эпитопов. Примеры представляют собой другой микобактериальный антиген или эпитоп;
антиген или эпитоп ВИЧ;
антиген или эпитоп плазмодия;
малярийный антиген или эпитоп;
сахаридный антиген из 81тер1ососси5 рпеишошае;
белковый антиген из 8. рпеишошае (например, из ΡΙιΐΛ. ΡΗίΌ, РЫВ, РЫБ, 8р§А, Ьу1В. Ьу1С, Ьу1А, 8р125, 8р101, 8р128, 8р130 и 8р133);
антиген или эпитоп из вируса гепатита А, такого как инактивированный вирус;
антиген или эпитоп из вируса гепатита В, такие как поверхностные и/или коровые антигены; антиген или эпитоп из вируса гепатита С;
сахаридный антиген из НаеторЫ1и§ шПиепхае типа Ь;
полиомиелитные антиген(ы) или эпитопы, такие как в 1РУ (инактивированная полиовакцина); дифтерийная вакцина или составляющие ее эпитопы, или антигены, или токсоид;
столбнячная вакцина или составляющие ее эпитопы, или антигены, или токсоид; антигены или эпитопы из вирусов кори, свинки и/или краснухи;
антиген(ы) или эпитопы из вируса гриппа, такие как поверхностные белки гемагглютинин и/или нейраминидаза. Антиген из вируса гриппа может быть выбран из пандемического штамма, например, из вируса птичьего гриппа, например, штамма Η5Ν1;
антиген или эпитоп из 81арйу1ососси8 аитеик;
раковый антиген или эпитоп.
Когда используют сахаридный антиген, тогда он предпочтительно конъюгирован с носителем для усиления иммуногенности. Антигены токсичных белков могут быть детоксифицированы, при необходимости, например, химическими и/или генетическими способами.
Сахаридные антигены предпочтительно находятся в форме конъюгатов. Предпочтительные белкиносители для конъюгатов представляют собой бактериальные токсины или токсоиды, такие как дифтерийный токсоид или столбнячный токсоид. Особенно предпочтительным носителем является мутант СКМ197 дифтерийного токсина, а также дифтерийный токсоид. Другие подходящие белки-носители включают белок наружной мембраны Ν. шешпдШйщ, синтетические пептиды, белки теплового шока, коклюшные белки, цитокины, лимфокины, гормоны, факторы роста, искусственные белки, содержащие множество эпитопов человеческих 0Ό4+ Т-клеток из разных патогенов-происходящих антигенов, таких как белок N19, белок Ό из Н. 1пГ1иепуае, пневмококковый поверхностный белок РкрА, пневмолизин, белки поглощения железа, токсин А или В из С, ШГПсПе и пр.
Каждый дополнительный антиген в данной композиции обычно будет присутствовать в концентрации по меньшей мере 1 мкг/мл. В общем, концентрация любого данного антигена будет достаточной для индукции иммунного ответа против этого антигена.
В качестве альтернативы использованию дополнительных белковых антигенов в смеси можно использовать нуклеиновую кислоту, кодирующую данный антиген. Белковые компоненты смеси, таким образом, можно заменить нуклеиновой кислотой (предпочтительно ДНК, например, в форме плазмиды), которая кодирует данный белок. Аналогично, композиции по изобретению могут содержать белки, которые имитируют сахаридные антигены, например, мимеотопы или антиидиотипические антитела.
Кроме того, согласно данному изобретению также предложена композиция, содержащая векторную вакцину по изобретению и одно или более чем одно противомикробное соединение. Примерами противомикробных соединений для применения в композициях по изобретению являются противотуберкулезные, химиотерапевтические соединения, такие как рифампицин, изониазид, этамбутол, пиризинамид и т.д.
Соответственно, согласно данному изобретению предложен способ усиления Т-клеточного иммунного ответа у пациента-человека против по меньшей мере одного антигена, включающий стадию введе
- 8 012436 ния указанному пациенту векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад 85А (Ад85А) в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным антигеном и/или противомикробным агентом.
Согласно данному изобретению также предложено применение: (а) векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А (Ад85А); и (б) по меньшей мере один дополнительный антиген и/или микробный агент, в изготовлении лекарственного средства для введения пациенту-человеку для индукции Т-клеточного иммунного ответа.
Векторную вакцину, содержащую нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А (Ад85А), и дополнительный антиген(ы) и/или противомикробный(ые) агент(ы), можно вводить одновременно, последовательно или раздельно. Например, векторную вакцину можно вводить для примирования пациента до введения антигена(ов)/противомикробного(ых) средств(а) или после введения антигена(ов) для усиления иммунного ответа пациента на этот антиген. Векторную вакцину и антиген(ы)/противомикробное(ые) средство(а) предпочтительно вводят в смеси.
Согласно данному изобретению также предложено применение по меньшей мере одного антигена и/или противомикробного средства в изготовлении лекарственного средства для индукции у пациента Тклеточного иммунного ответа, где данное лекарственное средство вводят вместе с векторной вакциной, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А (Ад85А). Аналогично, согласно данному изобретению предложено применение векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А (Ад85А), в изготовлении лекарственного средства для индукции у пациента Т-клеточного иммунного ответа, где данное лекарственное средство вводят по меньшей мере с одним дополнительным антигеном и/или противомикробным средством.
Согласно данному изобретению также предложено применение по меньшей мере одного антигена и/или противомикробного средства в изготовлении лекарственного средства для индукции у пациента Тклеточного иммунного ответа, где указанный пациент был предварительно обработан векторной вакциной, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А. Согласно данному изобретению также предложено применение векторной вакцины, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации вирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции микобактериального гена Ад85А, в изготовлении лекарственного средства для индукции у пациента Т-клеточного иммунного ответа, где указанный пациент был предварительно обработан по меньшей мере одним антигеном и/или противомикробным средством.
Настоящее изобретение можно использовать для индукции или усиления целого ряда иммунных ответов, как описано выше. Конкретно, целью этого изобретения является именно идентификация эффективных способов иммунизации против заболеваний, в которые вовлечены микобактерии. Такие заболевания включают болезнь Гансена, туберкулез, остеомиелит, болезнь Крона, лепру, лимфаденит, болезнь Джона.
Вышеописанные аспекты данного изобретения применимы к целому ряду различных пациентов, включая, например, детей, пациентов, которые имеют ВИЧ, СПИД, имеют ослабленный/подавленный иммунитет, или которые были подвергнуты трансплантациям органов, трансплантациям костного мозга, или которые страдают от генетических иммунонодефицитов. Когда вакцина предназначена для профилактического применил, тогда пациентом может быть ребенок (например младенец или ребенок в возрасте 1-5 лет), ребенок более старшего возраста или подросток; когда вакцина предназначена для терапевтического применения, пациентом предпочтительно является взрослый. Вакцину, предназначенную для детей, также можно вводить и взрослым, например, для оценки безопасности, дозировки, иммуногенности и т. д.
Согласно данному изобретению также предложена фармацевтическая композиция, содержащая (1) иммуногенную композицию по изобретению и (2) фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно данному изобретению предложен способ получения фармацевтического препарата, включающий стадии: (1) получения векторной вакцины по изобретению; (2) смешивания указанной иммуногенной композиции с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем.
Носитель (2) может представлять собой любое вещество, которое само не индуцирует продукцию антител, вредных для пациента, получающего данную композицию, и которое можно вводить без чрезмерной токсичности. Подходящие носители могут представлять собой большие, медленно метаболизирующиеся макромолекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот и неактивные вирусные частицы. Такие носители хорошо известны специалистам в данной области. Фармацевтически приемлемые носители могут включать жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и этанол. В таких носите
- 9 012436 лях также могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, соединения, забуферивающие рН, и тому подобное. Также могут присутствовать стабилизирующие агенты, такие как трегалоза или вещества, которые обеспечивают образование водорастворимой стекловидной сахарной массы при температурах окружающей среды. Последнее включает применение смешанной технологии стабилизации растворимой стекловидной массы в формате микросфер, суспендированных в перфторуглеродных жидкостях. Липосомы также являются подходящими носителями. Детальное обсуждение фармацевтических носителей доступно в Сеппаго (2000) Кеттд1ои: ТНе 8с1еисе аиб Ргаейее о! РНагтасу. 201П еб., Ι8ΒΝ: 0683306472.
Фармацевтические композиции по изобретению также можно использовать профилактически, например, в ситуации, когда ожидается контакт с микробами и когда следует предотвратить инфицирование. Например, данную композицию можно вводить перед хирургическим вмешательством.
Фармацевтическая композиция является предпочтительно стерильной. Она является предпочтительно апирогенной. Она является предпочтительно забуференной, например, от рН 6 до рН 8, обычно около рН 7. Предпочтительно данная композиция является, по существу, изотоничной жидкостям из организма человека.
Композиции по изобретению можно вводить множеством разных путей. Некоторые пути могут быть предпочтительными для определенных композиций, как приводящие к формированию более эффективного ответа, или за счет меньшей вероятности индукции побочных эффектов, или в результате более легкого введения.
Например, композиции, используемые в этом изобретении, можно вводить многими путями, включая, но не ограничиваясь этим, пероральное, внутривенное, внутримышечное, внутриартериальное, интрамедуллярное, интратекальное, интравентрикулярное, трансдермальное или чрескожное применения, подкожный, интраперитонеальный, интраназальный, энтеральный, местный, сублингвальный, интравагинальный или ректальный способы. Композиции могут быть приготовлены для интраназального введения в виде назального спрея, назальных капель, геля или порошка, или в виде инъецируемых препаратов в виде либо жидких растворов, либо суспензий; также могут быть получены твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких носителях перед инъекцией.
Прямая доставка композиций обычно будет осуществляться путем инъекции, подкожно, интраперитонеально, внутривенно или внутримышечно, интраназально, или доставка будет осуществляться в интерстициальное пространство ткани. Дозировка при лечении может представлять собой схему с однократной дозой или со многими дозами.
Различные аспекты и воплощения настоящего изобретения теперь будут описаны более подробно с помощью примера со ссылкой на следующие графические материалы.
Краткое описание графических материалов фиг. 1: Медиана ΙΡΝ-γ ответов, определенных с помощью ЕЬ18РОТ, после вакцинации в каждой группе вакцинации: только ВСС; только МУА85А; первичная иммунизация ВСС - повторная иммунизация МУА85А. (а) временная шкала для вакцинаций (недели) в каждой группе; (б) ответы на очищенное белковое производное туберкулина (РРЭ); (в) ответы на очищенный белок антиген 85 (Ад85А); (г) ответы на суммарные объединенные пептиды; (д) для каждого из трех измеренных антигенов ответы между каждой группой вакцинации в каждый момент времени сравнивали с использованием статистики МаннаУитни. Указаны статистически достоверные сравнения; (е) обнаружение Т-клеточных эпитопов после повторной МУА иммунизации у индивидуумов, вакцинированных ВСС. Все ответы на индивидуальные пептиды были полностью отменены СЭ4+ Т-клеточным истощением;
фиг. 2: Скрининг ответов крови, определенных с помощью ЕЫ8РОТ в культуре, на РРИ М.1Ь; РРИ М.аущт и рекомбинантный антиген 85А (Ад85А); от 4 добровольцев в исследовании только МУА85А, до вакцинации; каждый доброволец идентифицирован кодом ТХХХХХХ, где первые три X соответствуют номеру испытания, а последние три X соответствуют номеру добровольца, например, Т002022 означает, что Т002 представляет собой номер испытания, а 022 представляет собой номер добровольца;
фиг. 3: Ответы ЕЫ8РОТ в культуре (меченая культура) и ех νίνο на пулы пептидов Ад85А (обозначенных прописными буквами) у пяти добровольцев (каждый идентифицирован кодом ТХХХХ, где ХХХХ представляет собой номер из четырех цифр, причем первая цифра соответствует номеру испытания, и вторая, третья и четвертая цифры соответствуют номеру волонтера, например, Т2003 означает, что Т2 представляет собой номер испытания, а 003 представляет собой номер волонтера (Т2 является тем же самым, что и Т002 на фиг. 2, приведенной выше), через три недели после проведения однократной иммунизации МУА85А. Ответы после вакцинации являются очень сильными и более сильными, чем ответы до вакцинации. Добровольцы ранее не были вакцинированы ВСС;
фиг. 4: Последующее наблюдение Т-клеточных ответов на МУА-Ьас-х, который используют в качестве антигена в ЕЫ8РОТ анализе ех νίνο у здоровых добровольцев, иммунизированных МУА-85А, иммунизированных один раз в неделю 1. Добровольцев ранее вакцинировали ВСС;
фиг. 5(а): Медиана ответов в ЕЫ8РОТ на РРЭ. рекомбинантный антиген 85А (Ад85А) и на суммарные пептидные пулы антигена 85А (Ад85А) после однократной вакцинации МУА85А у субъектов, латентно инфицированных М.(Ь;
- 10 012436 фиг. 5(б): Сравнение МУА85А-индуцированных ответов на суммарные объединенные пептиды антигена 85А (Ад85А) у субъектов, примированных ВСО (Т005, т.е. испытание 5; смотри пример 1), и субъектов, латентно инфицированных МбЬ (Т007, т.е. испытание 7);
фиг. 5(в): Сравнение МУА85А-индуцированных ответов на рекомбинантный антиген 85А (Ад85А) у субъектов, примированных ВСО (Т005), и субъектов, латентно инфицированных М.1Ь (Т007);
фиг. 6(а): Постоянство МУА85А-индуцированных иммунных ответов в течение по меньшей мере 1 года после вакцинации в группе субъектов с длительным (более 10 лет) интервалом между первичной (ВСО) и повторной (МУА85А) иммунизациями;
фиг. 6(6): Постоянство МУА85А-индуцированных иммунных ответов в течение по меньшей мере 1 года после вакцинации в группе субъектов с коротким (1 месяц) интервалом между первичной (ВСО) и повторной (МУА85А) иммунизациями;
фиг. 7(а): Отсутствие корелляции между интервалом между ВСО и МУА85А вакцинациями и Тклеточными ответами на суммарные пептидные пулы антигена 85А (Ад85А) через 1 неделю после введения МУА85А;
фиг. 7(б): Отсутствие корелляции между интервалом между ВСО и МУА85А вакцинациями и Тклеточными ответами на суммарные пептидные пулы антигена 85А (Ад85А) через 24 недели после введения МУА85А;
на фиг. 8(а) показаны средние уровни ΙΡΝ-γ после вакцинации;
на фиг. 8(б) показаны средние уровни ΙΡΝ-у после стимула;
на фиг. 9(а) показаны ΙΡΝ-γ ответы, определенные в ЕЬ18РОТ ех-νίνο, на МУА85А у добровольцев из Великобритании, не подвергавшихся воздействию ВСО; и на фиг. 9(б) показаны ΙΡΝ-γ ответы, определенные в ЕЫ8РОТ ех-νίνο, на МУА85А у добровольцев из Гамбии, не подвергавшихся воздействию ВСО.
Примеры
Пример 1. Вакцина МУА85А
Конструкция МУА85А была описана ранее (Мс8йапе, Н. е1 а1. (2002) 1пГес1. 1ттип. 70, 1623-1626). МУА85А клинического качества была получена ИпрГкЮПЗтегке Эеккап-Тотаи в соответствии с хорошим стандартом производственной практики. Свидетельство об освобождении от уплаты налогов для врачей и стоматологов было выдано Регулирующим агентством по медицинским продуктам и продуктам для заботы о здоровье (Мебкшек апб НеаИйсате ргобпс1к К.еди1а1оту Адепсу), Лондон, для применения МУА85А в клинических испытаниях.
Клинические испытания
Добровольцев для исследований иммунизации набирали в соответствии с протоколами, одобренными Комитетом по этике научных исследований Оксфордшира (ОхГотбкЫте Яекеатсй Ебпск СоттШее), и регистрировали только после получения письменного информированного согласия. Возрастной диапазон для включения в испытание составлял 18-55 лет, и все исследованные добровольцы были серонегативными на ВИЧ, НВУ (вирус гепатита В) и НСУ (вирус гепатита С) при скрининге. До вакцинации выполняли обычные лабораторные исследования по гематологии и биохимии, и все значения находились в пределах нормы. Всех добровольцев наблюдали в течение 6 месяцев, причем образцы крови отбирали в определенные моменты времени. Пациенты, которые получали иммунизации МУА85А, заполняли ежедневные карты, фиксирующие местные и системные побочные эффекты и температуру тела в течение 7 суток после вакцинации.
Вакцинации
Первые два испытания были проведены на здоровых добровольцах, не подвергавшихся воздействию ВСО, что было установлено с использованием пробы Гифа (НеаГ 1ек1). Проба Гифа включает помещение очищенного белкового производного туберкулина (РРИ) на кожу и затем использование пистолета для производства множества проколов. Положительным ответом является более чем 4 папулы в местах проколов через 72 ч. Положительная кожная проба указывает на активную туберкулезную инфекцию или предварительную вакцинацию ВСО. Добровольцев с отрицательной (балл 0) пробой Гифа (эквивалентной туберкулиновому кожному тесту 0 мм) вакцинировали либо ВСО (однократная иммунизация штаммом ВСО О1ахо, 100 мкл вводили внутрикожно, п=11), либо МУА85А (5х107 БОЕ (бляшкообразующих единиц), введенных интрадермально, 2 иммунизации проводили с интервалом 3 недели, п=14). В третьем испытании набирали добровольцев, которые ранее были вакцинированы ВСО (п=17). Медиана времени между вакцинацией ВСО и иммунизацией МУА85А составляла 18 лет (интервал от 0,5 до 38 лет). Добровольцев с пробой Гифа, не превышающей уровень ΙΙ (эквивалентный туберкулиновой кожной пробе <15 мм), регистрировали для испытания и иммунизировали однократной дозой 5 х 10 БОЕ МУА85А интрадермально в кожу, находящуюся над дельтовидной мышцей руки, противоположной по отношению к руке, в которую осуществляли вакцинацию ВСО. В целом, 31 здорового добровольца вакцинировали МУА85А. 11 из 14 добровольцев, не подвергавшихся обработке ВСО, получали 2 иммунизации с интервалом 3 недели. Остальные 3 получали однократную иммунизацию. Все 17 добровольцев, примированных ВСО, получали однократную иммунизацию МУА85А. Все добровольцы завершили 6
- 11 012436 месячный период наблюдения, и ни в одном из этих испытаний не было серьезных или тяжелых неблагоприятных событий.
Показатели иммуногенности
Главным иммунологическим показателем, используемым для определения иммуногенности вакцины, был анализ ΙΡΝ-γ с помощью ЕЫ8РОТ ех νίνο. Его осуществляли на крови, взятой в следующие моменты времени: в момент скрининга до туберкулиновой кожной пробы и затем через 1,4, 12 и 24 недели после вакцинации. Эти измерения осуществляли на свежих РВМС, используя РРЭ туберкулина (20 мкг/мл, 88Ι), комплекс очищенного антигена 85 (Ад85А) (10 мкг/мл) и 7 пулов 9-10 15-мерных пептидов, имеющих перекрытие в 10 аминокислот (конечная концентрация каждого пептида в лунке для ЕЬ18РОТ 10 мкг/мл). Вкратце, 300000 РВМС на лунку в 100 мкл К.10 (КРМ1 плюс 10% фетальной телячьей сыворотки) непосредственно высевали на планшет для ЕЫ8РОТ (МА1Р 84510, Мййроге) в присутствии антигена и инкубировали в течение 18 ч. Во всех анализах в качестве положительных контролей использовали стрептокиназу (250 ед./мл)/стрептодорназу (12,5 ед./мл) и фитогемагглютинин (10 мкг/мл). Анализы осуществляли в двойной повторности и результаты усредняли.
Картирование эпитопов
Ответы на индивидуальные пептиды тестировали на первом или последующем образце после вакцинации. Истощение с использованием магнитных шариков (Эупа1) осуществляли на индивидуальных пептидных ответах. Истощения СЭ4+ и СЭ8+ Т-клеток осуществляли посредством 30-минутной инкубации с моноклональными антителами на СЭ4 и СЭ8. коньюгированными с железными шариками, в соотношении 5 шариков на 1 клетку, используя М-450 (Эупа1, О§1о, Νοητήν) в 200 мкл К10 на льду. Клетки, покрытые антителами, удаляли с использованием магнита (Эупа1). Образцы анализировали в отношении групп с неистощенными, истощенными СЭ4+ и истощенными СЭ8+ Т-клетками. Истощения клеток подтверждали с помощью РАС8 сканирования, и они всегда составляли >90% для СЭ8+ Т-клеток и >97% для СЭ4+ Т-клеток (данные не показаны).
Анализ иммуногенности
Данные ЕЬ18РОТ анализировали путем вычитания среднего количества пятен в контрольных лунках, содержащих только среду и клетки, из среднего количества пятен в лунках с антигенами или пептидными пулами и клетками. Количества менее 5 пятен/лунку не учитывали. Лунка считалась положительной, если количество было по меньшей мере в два раза выше, чем в лунках с отрицательным контролем, и по меньшей мере на 5 пятен больше, чем в лунках с отрицательным контролем. Для лунок с пептидными пулами результаты суммировали по всем пептидным пулам для каждого добровольца в каждый момент времени. Например, там, где присутствуют 7 пептидных пулов, каждый из которых содержит 910 пептидов, каждый пул тестируют в двойной повторности. Для получения результата для этого пула рассчитывают среднее этой двойной повторности для каждого пула и вычитают среднее для лунки с отрицательным контролем. Результаты для 7 индивидуальных пулов затем складывают вместе. При этом потенциально будут дважды учитывать Т-клетку, которая отвечает на любой из 10-мерных перекрывающихся участков, которые встречаются в двух пулах со смежными пептидами.
Статистический анализ
Анализ дисперсии повторных измерений с использованием исходного результата при скрининге в качестве ковариации осуществляли на логарифмически преобразованных данных для сравнения групп. Затем для всех сравнений между группами использовали критерий Манна-Уитни, а для попарного сравнения скрининговых и 24-недельных образцов в группе с первичной иммунизацией ВСС -повторной иммунизацией МУА85А использовали критерий Уилкоксона (^Неохоп).
Метод ЕЫ8РОТ в культуре
Для ЕЫ8РОТ в культуре, 1х106 хранившихся при криогенной температуре РВМС стимулировали 20 мкг/мл М.1Ь РРЭ (РРЭ-Т), М.атшш РРЭ (РРЭ-А) или 10 мкг/мл рекомбинантного антигена 85А (Ад85А) в 24-луночном планшете. После 3-суточного периода инкубации при +37°С в атмосфере 5% СО2 удаляли 500 мкл клеточного культурального супернатанта и заменяли 5 МЕ/мл Ьутр1юеи11-Т (Вю1е5Г Пге1е1ей, Сегтапу) в К10. Эту процедуру повторяли на 7-е сутки. На 9-е сутки клетки промывали три раза и оставляли в покое на ночь при +37°С в атмосфере 5% СО2 в К10. На 10-е сутки клетки промывали и ресуспендировали в 2 мл К10, 50 мкл культивируемых клеток (2,5х104 первоначально посеянных клеток) переносили в дублированные лунки на планшете для ЕЬ18РОТ и стимулировали в течение 18 ч с помощью РРЭ-Т 20 мкг/мл, РРЭ-А 20 мкг/мл и Ад85А 10 мкг/мл. Планшет для ЕЫ8РОТ затем проявляли, как описано ранее.
Результаты
Иммунизация МУА85А была безопасной и хорошо переносимой (табл. 1). Сравнивали кинетику и амплитуду антигенспецифического Т-клеточного ответа, индуцированного вакцинацией только ВСС, только МУА85А и первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А. В анализах все три схемы вакцинации индуцируют значительные иммунные ответы с использованием в качестве антигена любого из РРЭ-Т, белка антигена 85 (Ад85А) или перекрывающихся пептидов из антигена 85А (Ад85А) (табл. 2, фиг. 1). Имел место статистически достоверный основной эффект вакцины в группе
- 12 012436
ΡΡΌ-Τ (Ρ = 3,624; Р = 0,037), антигена 85 (Лд85Л) (Ρ = 16,605; Р < 0,001) и суммарных объединенных пептидов антигена 85 А (Ад85А) (Ρ 39,982; Р < 0,001). Иммунизация ВСС индуцировала умеренные уровни антигенспецифических Т-клеток, секретирующих ΙΡΝ-γ, которые имели пик через 4 недели после иммунизации (табл. 2, фиг. 1б-г). Ответы на объединенные пептиды антигена 85А (Ад85А) после вакцинации ВСС были удивительно слабыми (фиг. 1г). Только 4 из 11 добровольцев отвечали на любой из 7 пептидных пулов в анализе ЕЬ1§РОТ ех-νίνο. Все эти ответы на пептидные пулы относились к пептидам 12, 13, 27 и 28 и полностью отменялись истощением СЭ4+ Т-клеток.
Таблица 1. Сопутствующие неблагоприятые события после иммунизации МУА85А
Неблагоприятое событие | Количество субъектов (п ~ 31) | |
Местное | Краснота | 31 |
Зуд | 31 | |
Боль | 30 | |
Уплотнение | 31 | |
Системное3 | Лихорадка** | 5 |
Гриппозное состояние | 11 | |
Артралгия | 10 | |
Головная боль | и | |
Миалгия | 12 | |
Тошнота | 3 | |
Вазовагальный обморок | 1 (предыдущая история вазовагальных приступов) | |
Изменения в гематологии/биохимии |
Не было различий ни в частоте, ни в тяжести описанных нежелательных событий между группами добровольцев, не подвергавшихся воздействию ВСС и подвергавшихся первичной иммунизации ВСС
Все системные симптомы проходили в течение 7 суток
Интервал 37,7-38,1°С; все спонтанно проходило в течение 24 ч
У добровольцев, не подвергавшихся воздействию ВСС, однократная иммунизация МУА85А индуцировала высокие уровни антигенспецифических Т-клеток, секретирующих ΙΡΝ-γ, которые достигали пика через 7 суток после вакцинации у 13/14 добровольцев (табл. 2, фиг. 1б-в). К 4 неделям этот ответ падал до уровня, лишь слегка превышающего исходный. Не наблюдалось усиливающего эффекта второй вакцинации МУА85А, проведенной на 3-ей неделе. У одного добровольца после иммунизации МУА85А не обнаруживались специфические к вставке Т-клетки, однако у этого добровольца обнаруживались специфические Т-клеточные ответы на вектор МУА, несмотря на то, что он не имел предыдущей истории иммунизации вирусом осповакцины (данные не показаны). Затем исследовали ответы на МУАЧае-Ζ у добровольцев, вакцинированных МУА85А, путем проведения анализов ЕЫ8РОТ ех-νίνο с использованием антигена МУАЧае-Ζ. Методология анализа является такой же, как обсуждалось выше в Показателях иммуногенности. Здоровые добровольцы, вакцинированные МУА85А, демонстрировали сильные анти-МУА Т-клеточные ответы, которые длились в течение вплоть до 24 недель после вакцинации.
В отличие от ВСС вакцинации вакцинация МУА85А индуцировала сильные ответы на некоторые пептидные пулы у всех 13/14 отвечающих добровольцев (табл. 2, фиг. 1 г). Были зарегистрированы ответы на широкий спектр пептидов по всей длине антигена 85А (Ад85А). Все эти ответы на индивидуальные пептиды полностью отменялись истощением СЭ4+ Т-клеток (данные не показаны).
У 16/17 добровольцев в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А наблюдали значительное увеличение числа антигенспецифических Т-клеток через 1 неделю после вакцинации (табл. 2, фиг. 1). Максимальный ответ через 1 неделю после иммунизации был значительно выше в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А, чем в любой из групп с иммунизацией только ВСС или только МУА85А (фиг. 1б-д). Эти ответы поддерживались на значительно более высоком уровне, чем после вакцинации только ВСС или только МУА85А, в течение по меньшей мере 24 недель (фиг. 1д). Исходные ответы при скрининге были более сильными у добровольцев, ранее вакцинированных ВСС, чем в группе добровольцев, не подвергавшихся воздействию ВСС, как ожидалось. Тем не менее, ответы через 24 недели после вакцинации МУА85А в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А были значительно более сильными, чем исходные показатели в этой группе для ΡΡΌ (Уилкоксон ζ = -3,010, Р = 0,003), антиген 85 (Ад85А) (Уилкоксон ζ = -3,516, Р < 0,001) и суммарные объединенные пептиды (Уилкоксон ζ = -3,408, Р = 0,001).
Широта пептидных ответов, наблюдаемых в группе, иммунизированной только МУА85А (не пока
- 13 012436 зано), и в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А (фиг. 1е) была очень сходной. Однако амплитуда ответов была значительной выше в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А (фиг. 1д). РВМС от 12 добровольцев в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А анализировали со всеми 66 пептидами из антигена 85А (Ад85А). Некоторые из этих пептидов распознавались более чем у 50% субъектов (фиг. 1е), иллюстрируя различное распознавание этих пептидов разными молекулами НЬА Класса II, как сообщалось ранее (Ьаипо1к, Р. е1 а1. (1994) 1и£ес1. 1ттип. 62, 3679-3687.
Таблица 2. Среднее арифметическое (8Е) и медиана (ΙΟΚ) ответов в ЕЫ8РОТ на РРБ, антиген 85 (Ад85А) и суммарные объединенные пептиды в каждой группе вакцинации в каждый момент времени.
Время после вакцинации (недели)
ΡΡϋ, среднее
Антиген 85,
Суммарные объединенные пептиды арифме-
Группа | арифметическое | среднее арифме- | ____тнческое среднее мсДиана | ||||
вакцинации | Кол-во | (5Е) | медиана <25-75%)тическое (ЗЕ) | медиана (25-75%) | ' (25-75%) | ||
вс© | 11 | 15(6} | 0(0-28) | 6(5) | 0(0-0) | 15(4) | 20 (0-22) |
МУА85А ВСО- | 14 | 18(7) | 0(0-22) | 4(4) | 0(0-0) | 3(3) | 0(0-0) |
ΜΫΜ5Α | 17 | 129(33) | 60 (26-218) | 24(6) | 18(0-37) | 26(11) | 0(0-^50) |
вес | 11 | 173(52) | 132 (42-249) | 79(22) | 82 (23-122) | 38(9) | 2В (20-52) |
МУАВбА всс- | 14 | 460(93) | 434 (175-553) | 419 (98) | 338 (140-540) | 1365 (378) | 1153(531-1432} |
М7А05А | 17 | 917 (148) | 783 (403-1653) | 895 (150) | 707 (438-1653) | 3248(592) | 2455 (1315-5187) |
ВСС | 11 | 233(60) | 182 (104-314) | 64(12) | 67 (37-94) | 31(7} | 35 (13-40) |
ΜνΑ85Α ВСО | 14 | 107 (21) | 81 (53-167) | 117(42) | 65(33-138) | 306(95) | 156 (60-533) |
МУА65А | 17 | 362(86) | 343 <165—421) | 341 (67) | 322(180-405) | 1123(256) | 953 (609-1219) |
вес | 11 | 76(25) | 47 (27-85) | 21(8) | 15(0-33) | 15(9) | 0(0-17) |
МУА85А всс- | 14 | 70(25) | 41 (22-02) | 59(26) | 27(18-52) | 167(58) | 68 ¢21-205) |
МУА85А | 17 | 299(83) | 223 (68-387) | 227(72) | 92 (42-287) | 739 (199) | 390 (212-910) |
все | 11 | 53 «17) | 53(10-95) | 12(6) | 0(0-22} | 23(7) | 20 (0-35) |
МУА85А ВСО | 14 | 62(19) | 38(25-63) | 32(13) | 18(0-45) | 113(27) | 105 (32-152) |
МУА85А | 16 | 328(89) | 249 (150-385) | 240(77) | 119 (82-293) | 669 (177) | 385 (223-1043) |
Амплитуда Т-клеточных ответов, наблюдаемых в группе, иммунизированной только МУА85А, является примерно в 10 раз более сильной, чем амплитуда, которую наблюдали с другими рекомбинантными МУА, используемыми до настоящего времени (МсСопкеу, 8.1. е1 а1., Епйапсей Т-се11 иптиподешсИу о£ р1акт1й ΩΝΛ уассшек ЬооЧей Ьу гесотЬшап! тойШей уассша νίπικ Апкага ίη йитапк. N1. Мей., 9, 729-735 (2003)); М^аи, М. е1 а1., А йитап 1ттипойе1ю1епсу νίπικ 1 (Н1У-1) с1айе А уассше ш с11шса1 ΐήа1к: кПтЫаПоп о£ Н1У-кресШс Т-се11 гекропкек Ьу ^NА апй гесотЬшап! тойШей уассша νίπικ Апкага (МУА) ш йитапк, I. Сеп. У1го1., 85, 911-919 (2004)). Рекомбинантный МУА, экспрессирующий антиген из Р. £а1с1рагит, индуцировал средний суммарный пептидный ответ 908ЕС/106 РВМС через 7 суток после вакцинации (МсСопкеу, 8.1. е1 а1. (2003) Νΐ. Мей. 9, 729-735). В отличие от этого, авторы данного изобретения наблюдают средний ответ на суммарные пептиды 1365 8ЕС/106 РВМС через 7 суток после вакцинации МУА85А (табл. 2). Одним из объяснений этого является то, что эти добровольцы имеют некоторый предсуществующий антимикобактериальный иммунитет, который усиливается иммунизацией МУА85А. Чтобы дополнительно исследовать это, авторы данного изобретения использовали ЕЫ8РОТ анализ в культуре, а не ЕЫ8РОТ анализ ех-У1уо. Ранее было показано, что ЕЫ8РОТ анализ в культуре определяет центральные Т-клетки памяти, а не активированные эффекторные Т-клетки, которые определяются в ЕЫ8РОТ ех-У1уо (РеесеЛУ.Н. е1 а1. (2004) №11. Мей. 10, 406-410, Сойкш, А.1. е1 а1. (2002) I. 1ттипо1. 169, 2210-2214).
Анализ ΙΕΝ-γ с помощью ЕЫ8РОТ в культуре осуществляли на скрининированных РВМС до вакцинации от 4 добровольцев в группе, иммунизированной только МУА85А. Клетки культивировали с РРБ М.!Ь, РРБ М.аушт и рекомбинантным антигеном 85А (Ад85А). Все 4 добровольца отвечали на РРБ М.аушт, 2/4 отвечали на РРБ М.!Ь и 2/4 отвечали на рекомбинантный антиген 85А (Ад85А) (фиг. 2). Ни один из этих добровольцев не имел каких-либо исходных ответов ни на РРБ М.!Ь, ни на очищенный антиген 85 (Ад85А) при скрининге с помощью ЕЫ8РОТ ех-У1уо.
Для дальнейшего исследования индукции ответа Т-клеток памяти после вакцинации МУА85А осуществляли ЕЫ8РОТ анализ ех-У1уо и в культуре на 3-ей неделе после вакцинации РВМС. Клетки культивировали с РРБ М.!Ь, РРБ М.аушт и рекомбинантным антигеном 85А (Ад85А). На 3-ей неделе ответ ех-У1уо является очень слабым или недетектируемым, однако у всех 5 исследованных добровольцев наблюдались сильные ответы в ЕЫ8РОТ в культуре, что указывает на индукцию вакцинацией центральных Т-клеток памяти, специфических в отношении антигена 85А (Ад85А) (фиг. 3).
Пример 2. Данные по безопасности и иммуногенности у субъектов, которые являются латентно инфицированными М.!Ь здоровых взрослых, которые были латентно инфицированы МусоЬас1епит 1иЬегси1ок1к (М.!Ь), вакцинировали МУА85А. Сывороточные маркеры воспаления определяли у каждого субъекта после вакцинации с регулярными интервалами в течение двенадцати месяцев. У каждого субъекта до вакцинации и через 10 недель после вакцинации осуществляли КТ (компьютерная томография) сканирование
- 14 012436 легких высокого разрешения. Эти анализы проводили для того, чтобы определить любые субклинические признаки воспаления легких. Результаты ЕЬ18РОТ ех νίνο от 9 латентно инфицированных добровольцев показаны на фиг. 5а.
Безопасность МУА85А в этой группе идентична безопасности, наблюдавшейся в предыдущих испытаниях, описанных в примере 1. Не обнаружили увеличения ни местных, ни системных побочных эффектов и не обнаружили никаких признаков какого-либо воспаления легких. После вакцинации не было изменений в маркерах воспаления, и после вакцинации не было воспаления легких, регистрируемого КТ сканированием. Для сравнения, 17 здоровых взрослых, которые ранее получали инъекцию ВСС от 0,5 до 37 лет назад, подвергали повторной иммунизации вакциной МУА85А. Результаты описаны в примере 1. Иммунные ответы после вакцининации, наблюдаемые в латентно инфицированной группе (испытание 7, Т007), имеют амплитуду, аналогичную амплитуде ответов, наблюдаемой в группе, получившей первичную иммунизацию ВСС (испытание 5, Т005). Результаты показаны на фиг. 5б и 5в.
Эти данные являются значимыми, так как важно, что любая новая ТВ вакцина является безопасной у латентно инфицированных субъектов, при условии преобладания латентной инфекции во всем развивающемся мире. Кроме того, обнадеживающая иммуногенность поддерживает применение этой вакцины в качестве вакцины для применения после контакта с источником инфекции, вводимой латентно инфицированному человеку с целью уничтожения такой латентной инфекции.
Продолжительность иммунного ответа
Ответы, регистрируемые в ЕЬ18РОТ ех-νίνο у добровольцев, примированных ВСС, после повторной иммунизации МУА85А длятся в течение по меньшей мере 1 года после вакцинации как при коротком (1 месяц), так и при длительном (более 10 лет) интервале между первичной (ВСС) и повторной (МУА85А) иммунизациями.
Данные долгосрочного наблюдения за 12 добровольцами, вакцинированными МУА85А более чем через 10 лет после ВСС, и за 10 добровольцами, вакцинированными МУА85А через 1 месяц после ВСС, показаны на фиг. 6. Данные из обеих групп добровольцев показывают, что постоянство иммунных ответов через 1 год после вакцинации имеет ту же амплитуду, которая наблюдается через 6 месяцев после вакцинации.
Постоянство иммунных ответов, индуцированных вакциной, демонстрирует индукцию вторичного иммунного ответа (тетогу гекропке). Нельзя было бы ожидать наблюдения постоянных ответов, индуцированных вакциной, через 1 год после вакцинации нереплицирующейся вакциной, если бы не был индуцирован вторичный иммунный ответ.
Корреляция между интервалом первичной иммунизации - повторной иммунизации и уровнем иммунного ответа
Данные, представленные на фиг. 3, показывают, что усиление иммунных ответов, индуцированных ВСС, наблюдаемое после повторной вакцинации МУА85А, не зависит от интервала между первичной иммунизацией ВСС и повторной иммунизацией МУА85А. Равное усиление наблюдали при коротком (1 месяц) и длительном (более 10 лет) интервале повторной иммунизации.
Не существует корреляции между интервалом между первичной (ВСС) и повторной (МУА85А) вакцинациями, и пиком (1 неделя), и плато (6 месяцев) иммунных ответов, индуцированных МУА85А (фиг. 7).
Таким образом, одинаково возможным является усиление иммунитета против микобактерий как вскоре после вакцинации ВСС (например в раннем детстве в развивающихся странах), так и в более поздние моменты времени (например в пубертатном возрасте). Как повторная иммунизация в раннем детстве, так и повторная иммунизация в пубертатном возрасте являются возможными вариантами для исследований эффективности и потенциальных показаний для бустерной ТВ вакцины.
Иммуногенность и защитная эффективность первичной иммунизации ВСС -повторной иммунизации МУА85А у макак-резусов
В эксперименте по иммуногенности и контрольному заражению макак-резусов (6/группу) вакцинировали либо 1) только ВСС, 2) ВСС и затем через 9 недель подвергали повторной иммунизации МУА85А, либо 3) физиологическим раствором (контрольная группа). Всех животных подвергали контрольному заражению интратекально через 18 недель после вакцинации ВСС (или вакцинации физиологическим раствором для контрольной группы) и затем наблюдали за ними в течение 16 недель перед тем, как умертвить их. Результаты по иммуногенности показаны на фиг. 8.
На фиг. 8а показаны средние уровни ΙΡΝ-γ после вакцинации (измеренные к 3 суткам теста по стимуляции лимфоцитов) во всех трех группах в пределах этого эксперимента по контрольному заражению. В то время как уровни ΙΡΝ-у в ответ на РРЭ в группе ВСС и в группе с первичной иммунизацией ВСС повторной иммунизацией МУА85А кажутся сравнимыми, ответы на Ад85А являются явно более сильными в группе с первичной иммунизацией ВСС - повторной иммунизацией МУА85А. Таким образом, имеет место значительное увеличение Ад85А-специфической секреции ΙΡΝ-γ после вакцинации МУА85А (группа 2), которое не заметно в группе, иммунизированной только ВСС (группа 1) (фиг. 8а).
На фиг. 8б показаны средние уровни ΙΡΝ-γ после контрольного заражения (измеренные к 3 суткам
- 15 012436 теста по стимуляции лимфоцитов) во всех трех группах в пределах этого эксперимента по контрольному заражению. После контрольного заражения М.1Ь. группа ВСО-МУА85А (группа 2) имела значительно более высокие Ад85А-специфические ответы, чем группа, иммунизированная только ВСО (группа 1). Также и ответы Е8АТ6/СЕР10 (рано секретируемый антигенный белок-мишень/белок 10 из культурального фильтрата), которые являются МТЬ-специфическими иммунными ответами (амплитуда относится к бактериальной нагрузке), являются более слабыми в группах ВСО и ВСС-МУА85А по сравнению с группой, иммунизированной физиологическим раствором. Ответы на ΡΡΌ сравнимы между этими двумя группами. Результаты в отношении Е8АТ6/СРР10 являются важными (самая нижняя панель), поскольку эти антигены являются ТВ-специфическими, и уровни иммунных ответов на эти антигены коррелируют с бактериальной нагрузкой (т.е. чем выше бактериальная нагрузка (группа, иммунизированная физиологическим раствором), тем сильнее иммунный ответ на Е8АТ6 и СРР10). Защитная эффективность вакцины определяется относительно более низким уровнем ответа Е8АТ6/СРР10 в группах ВСО и ВСОМУА85А по сравнению с группой, иммунизированной физиологическим раствором.
При аутопсии, в группе ВСО-МУА85А наблюдалась значительно меньшая патология, чем в группе, иммунизированной только ВСО. Снижение бактериальной нагрузки в этих 2 группах составляло 0,97 для группы ВСО-МУА85А и 0,42 для группы, иммунизированной только ВСО.
Макак-резус является хорошей моделью заболевания человека, и это многообещающее улучшение защитной эффективности, несмотря на небольшое количество животных, говорит о том, что у человека ожидаются похожие результаты в отношении эффективности.
Данные по безопасности и иммуногенности из Фазы II испытаний на взрослых в Южной Африке
Фаза II исследования безопасности и иммуногенности была начата в ХУеЧегп Саре, Южная Африка. Это испытание проводят на взрослых, и его объектом являются 24 субъекта. Субъекты, которые являются латентно инфицированными, исключены из этого испытания. К настоящему моменту было вакцинировано 12 субъектов. Все 12 субъектов имели значительные иммунные ответы, индуцированные МУА85А, в первую неделю после их вакцинации в анализе ЕЫ8Р0Т.
Профиль безопасности к настоящему моменту является таким же, как и профиль безопаслоти, наблюдавшийся в испытаниях в Великобритании и в Гамбии. Результаты испытаний в Великобритании показаны на фиг. 1 и фиг. 9а, а результаты испытания в Гамбии показаны на фиг. 9б.
В целом, в Гамбии были вакцинированы 11 добровольцев, не подвергавшихся воздействию ВСО, и 10 добровольцев, примированных ВСО. Результаты по иммуногенности в группе, не подвергавшейся иммунизации ВСО (фиг. 96), имели сходство с результатами по иммуногенности в группе, примированной ВСО, в Великобритании (фиг. 1б, в, г) в том, что она сохранялась на уровне, превышающем исходный, на протяжении периода последующего наблюдения. Вероятно, это отражает большую степень примирования микобактериями из окружающей среды в исходный момент времени, а также продолжающееся воздействие микробактерий из окружающей среды, которое поддерживает этот ответ.
В Гамбии нет достоверного различия между группой, не подвергавшейся иммунизации ВСО, и группой, примированной ВСО, что, как и выше, объясняется более высоким уровнем примирования из окружающей среды в этой группе. В отличие от этого, в Великобритании результаты по иммуногенности в группе, не подвергавшейся иммунизации ВСО, возвращались к исходному уровню на протяжении последующего наблюдения (фиг. 9а и фиг. 1б, в и г), тогда как иммуногенность в группе, примированной ВСО, оставалась выше исходного уровня на протяжении последующего наблюдения (фиг. 1б, в и г).
В литературе, касающейся ВСО, существует много примеров широкой вариабельности защитной эффективности в разных странах и на разных континентах. Согласующийся профиль безопасности и иммуногенности МУА85А в Великобритании, Западной Африке и Восточной Африке является очень важным.
Иммуногенность аденовируса, экспрессирующего антиген 85А (Ад85А), у мышей
Было показано, что рекомбинантный аденовирус (человеческий штамм 5, с делецией Е1 и Е2), экспрессирующий антиген 85А (Ад85А), индуцирует сильные иммунные ответы у мышей при введении его одного (СЭ4 ответ около 800 пятен/миллион спленоцитов; СЭ8 ответ около 1200 пятен/миллион спленоцитов). При введении мышам, которые ранее получили ВСО, этот аденовирус, экспрессирующий антиген 85А (Ад85А), стимулирует еще более сильный ответ (СЭ4 ответ около 1400 пятен/миллион спленоцитов; СЭ8 ответ около 2500 пятен/миллион спленоцитов). Таким образом, удивительно, что этот аденовирусный вектор, как здесь показано, помимо очень сильного СЭ4 ответа, индуцирует очень сильные СО8Т-клеточные ответы, и их индукция одной и той же вакциной, по-видимому, полезна как в профилактике, так и в лечении микобактериального заболевания. Раньше аденовирусные векторы рассматривали как хорошие средства для индукции СЭ8Т-клеточных ответов, но в данном описании авторы данного изобретения демонстрируют сильную индукцию как СЭ4, так и СЭ8 ответов. Эти данные свидетельствуют о том, что аденовирусные векторы могут быть мощным усилителем Т-клеточных ответов, примированных ВСО.
Данное изобретение было описано выше только с помощью примера. Понятно, что можно осуществить модификацию деталей без отклонения от объема изобретения.
- 16 012436
Специфические последовательности АС85А 8ЕС ΙΌ NО: 1 (Полипептидная последовательность АС85А)
МОЬУПЗУКСАУТОМЗННЬУУеАУеААЬУЗСЬУбАУССТАТАСАГЗКРСЬРУЕУЕОУРЗРЗМС ΚΟΙΚναΗΏ3σβΑΝ5ΡΑ1Υ1ΣΟ(3Ι1ίΙΑαϋΟΓ5σ«ΟΙΝΤΡΑΕ’ΕΚΥΟΟΒ<3ϊ,5ννΜΡν6βζ135ίΎ30 адРАССКАССОТУКИЕТБЪТЗЕЬРСИЪОАМЙНУКРТСЗАУУСЬЗМААЗЗАЬТЬАХУНРаОЕ’ УУАСАМЗСЬЬОР 32АМ6 РТЬ КЗЬАМОТАССУКАЗ ШЙКЗРКЕОРАИОКЯОРЬ1ЖСКЬΙΑΝΝΤ ΗΥΗΥΥ ССЫС КРЗ РЬССИ КЬ РАКРЬЕСЕУКТ 3ΝI КГООЛУИАбССНМС V ГР ГРРЗ ЕТН5ИЕ ΥΜ
ЗАОЬМАМКРОЬОКАЬСАТРЫТСРАРОСА
8ЕС ΙΌ NО: 2 (Нуклеотидная последовательность АС85А) аГдсадсИЕдЕЕдасадддЕйсдЕддсдссдЪсасдддЕаЕдЕсдсдЕсдасСсдЕд дСсддддссдЪсддсдсддсссЪадСдйсддд^с-еддйсддсдссдйсддйддсасд дсдасадсдддддсаЬЪЪСсссддссдддсйЪдссддЪддадСасскдсаддЬдссд ^сдссдйсдаЁдддссдЪдасаксааддйссаайЪссааадЕддЬдд^дссаасЬсд сссдссскдЪассйдсЪсдасддссЪдсдсдсдсаддасдасЪйсадсддсЬдддас айсаасассссддсдйСсдадйддСасдассад^сдддссЪдЬсддйддЪса'Ьдссд дЕдддЕддссадУсаадс'ЬЕсЕас'ЬссдасЕддЕассадассдссЕдсддсааддсс ддЪЬдссадасЪйасаадЪдддадассЪйссЪдассадсдадсЪдссддддЪддсЪд саддссаасаддсасд^саадсссассддаадсдссдЪсд^сддЬсЪ-ЬЪсда-еддс'е дс^ЪсЪЪсддсдсЪдасдсйддсдаЪсйаЪсасссссадсадЪЪсдйсЕасдсддда дсда1:д1сдддсс-едЪ1:ддассссисссаддсдаЪддд-есссасссЪда1:сддссгд дсдаЕдддудасдсСддсддсЕасааддссУссдаса'ЕдЪддддсссдааддаддас ссддсд£ддсадсдсаасдасссдс£дЕ£даасдйсдддаадс±даЬсдссаасаас асссдсдйсЬдддЪдЪасЬдсддсаасддсаадссдСсддаЪсйдддйддсаасаас сйдссддссаадЪЪссЪсдадддсЪксдХдсддассадсаасайсаадЬЪссаадас дссЪасаасдссддЪддсддссасаасддсдСдС^сдасСЪсссддасадсддЪасд сасадсЪдддадСасйддддсдсдсадсйсаасдсЪайдаадсссдассЪдсаасдд дсасйдддйдссасдсссаасассдддсссдсдссссадддсдссЪад
8ЕС ΙΌ NО: 3 (Полипептидная последовательность АС85А, укороченного на 15 аминокислот)
МОЬУОНУКСАУТбМЗВВЪУУбАУСААЬУЗЗЬУСАУССТАТАбАГЗКРСЬРУЕУИЗУРЗРЗМб
ΚϋΙ КУаГйЗССАЫЗ РАЪУЬЬазЬКАОООРЗСИ ΡΙΝΤ РАГЕИУООЗСЬЗУУМРУбСОЗ 5ΓΥ3 О НУОРАССКАбСОТУКИЕТЕЬТЗ Е ЬРСЙЪОАЫКНУКРТСЗАУУбЬЗМААЗЗА1ДТА1ΥΗ РООГ УУАаАМЗСЪЬОР80АМбРТЫа1ЛМ130АССУКА30МИСРКЕ0РАН0НМ0РЬЬЫУ6КЫАЫНТ Κν^νΥθαΝαΚΡ3ΟΕασΝΝΕΡΑΚΕΧΕ6ΡνΚΤ3ΝΙΚΓ<20ΑΥΝΑ66σΗΝ6νΓΟΓΡΡ56ΤΗ5ΗΕΥ«
САОЬМАМКРОЬОР
8ЕС ΙΌ 4 (НУКЛЕОТИДНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ АС85А, УКОРОЧЕННОГО НА 15 АМИНОКИСЛОТ) аЕдсадсЕЬдЕЬдасаддд-СЪсдЕддсдссдЕсасдддгаЕдЕсдсдЕсдас+сдйддгсдд ддссдЕсддсдсддсссЕадЕдЕсдддЕсЕддЕсддсдссдЬсддЕддсасддсдассдсдд дддсаЕСЕЕсссддссдддсЕЕдссддЕддадЕассЕдсаддЕдссдЕсдссдЕсдаЕдддс сд-СдасаЕсааддЕссааЕ’Ьссааад^ддЕддЬдссаасЕсдсссдсссЕдЕасс'Ьдс'Ьсда сддсс£дсдсдсдсаддасдасЪ1:садсддсЕдддасаЕсаасассссддсд1:ЬсдадЕддЕ асдассадЕсдддссЬдЬсддЕддЕсаЪдссддЪдддкддссадЪсаадс'ШсЪасЕссдас •ЬддЕассадсссдссЕдсддсааддссддЕЕдссадасЕЕасаад^дддадассЬЕссЕдас садсдадсЪдссдддд^ддсЕдсаддссаасаддсасдЕсаадсссассддаадсдссдЕсд ЕсддСсЕЕЕсдаЕддсСдсЕЕсЕЕсддсдс'ЬдасдсЕддсдаксЕаЕсасссссадсадЕЪс дЕс^асдсдддадсдаЕдЕсдддссИдГкддассссЪсссаддсдакдддЕсссассс'Ь.да-Ь сддссЕддсда^дддЪдасдсЕддсддсйасааддссЬссдасаЬдЪддддсссдааддадд асссддсдЕддсадсдсаасдасссдсЪдЬЪдаасдЕсдддаадсЪдаЕсдссаасаасасс сдсдЬскдддЕдЕасЕдсддсаасддсаадссдЕсдда^сЕдддЕддсаасаассЕдссддс саадЕЕссЕсдадддсЕЕ.сд'ЬдсддассадсаасаЪсаадЕЕссаадасдссЕасаасдссд дЬддсддссасаасддсд^дЕЕсдасЪЬсссддасадсддйасдсасадсЕдддадЬасЕдд ддсдсдсадсЬсаасдсЬаЪдаадсссдассйдсаасдд
- 17 012436
8Е0 ΙΌ N0: 5. Последовательность вставки из 1176 нуклеотидов является следующей (экспрессируемая последовательность показана прописными буквами, кодирующая последовательность Ад85А подчеркнута): ЪсЪдВасдддсссдВасддЪассдадсВсддаЕсВдсдсдссдссассАТОбАТОСА АТбААСАбАавССТСТбСТСТбТбСТбСТбСТОТбТббАбСАвТСТТССТТТСбССС АбССАбдАААТССАТбСССбАТТСАдААбА66АТСТАТ5САбСТТ6ТТбАСАбббТТ СбТСбССССбТСАСббСТАТбТСбСбТСбАСТСбТббТСббббСССТСбдСдсббСС СТАбТ5ТСС65ТСТССТСдбС5ССбТССбТ65САСССССАСС5ССССбеСАТТТТСС ссдсссессттсссдстсбАбТАСстасАСстдссстсдссбтссАтссзссдтбАС АТСАА6бТССААТТССАААбТббТ6СТ6ССААСТСбСССдСССТ6ТАССТбСТС6АС 66ССТ6С6С6С6СА56АС6АСТТСА6СС6СТСС6АСАТСААСАСССС6СС6ТТС6АС ТббТАСбАССАбТССССССТбТСббТббТСАТбССббТбббТббССАбТСААбСТТС ТАСТССбАСТСОТАССАбССССССТбСббСААСОССОбТТОССАбАСТТАСААбТбб ОАбАСсттсстбАССАдсбАдстдссддддтддстдсАвсссААСАбдсАсдтсААд сссАСссдААбсдссдтсдтссдтстттсбАтдостбсттсттссдсбствАсдстд дсдАтстАтсАССССслдсАаттсдтстАсдсддоАдссАТстсдвдсстоттдсАС ссстсссАсдсдАтсастсссАссстдАтссссстсдсеАтдсдтсАссстддсддс ТАСАДдбССТССбАСАТдТбббСССССААССАббАСССббСбТбССАбСбСААСбАС ССбСТбТТСААСбТСдОбААОСТбАТСбССААСААСАСССбСдТСТбССГбТАСТбС ббСААСббСААбСТбТСдСАТС1бббТдОСААСААССТбСССОССААбТТССТСбАО ббСТТСОТССеСАССАбСААСАТСААСТТССААСАССССТАСААСССССбТббСддС САСААССбСбТвТТСбАСТТСССббАСАбСббТАСбСАСАбСТбСОАбТАСТбСдбС ССбСАбСТСААСеСТАТдААбСССбАССТвСААСбТ СОАТССАТТССАААСССТТТССТСдСАТТССАСЬдасВдсадаВаЕссаксасасЬд
8ЕС) ΙΌ N0:6
МСАМККОЬССУЬЬЬСбАУЕУЗ Р ЗОЕ IНАКЕККС ЗМОЬУОКУВОАУТбМЗ ВНЬУУЗАУ ОААЪУЗбЬУбАУаОТАТАСАГЗНРСЬРУЕГЪОУРЗРЗМОКОХКУОГОЗООАЦЗРАЬУ ЬЬОСЬКАОООГЗСИОХЫТРАГЕМУООЗбЬЗУУМРУбСОЗЗЕГЗОИГОРАСбКАОСОТ УКИЕТЕЬТЗЕЦРбИЬОАКВНУКРТбЗАУУбЬЗМААЗЗАЬТЬАХУНРООЕУУАСАМЗб ЫРРЗОАМбРТЫСГАМбОАОбУКАЗОМИбРКЕОРАНОМОРЬЬНУбКЫАМДТКУНУ УСбЫ6КЬЗОЬССМКЬРАКЕ’ЬЕбГУКТЗЫ1КРООАУ1'1А6ССННбУ?ОЕРОЗбТНЗЙЕУ ИСАОЬМАМКРОЬОКбЗIРМРЬЪбЬО
Claims (26)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ индукции иммунного ответа центральных Т-клеток памяти против по меньшей мере одного антигена у пациента-человека, включающий стадию введения указанному пациенту иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации поксвирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции нуклеотидной последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 4 и дополнительно включающий С-концевую РК метку и лидерную последовательность ТРА.
- 2. Способ по п.1, где иммуногенная композиция представляет собой векторную вакцину.
- 3. Способ по п.1 или 2, где Т-клеточный иммунный ответ представляет собой ССЯ7+ ответ.
- 4. Способ по любому из пп.1-3, где нереплицирующийся поксвирусный вектор представляет собой МУА (модифицированный вирус осповакцины Анкара).
- 5. Способ по любому из пп.1-4, где поксвирусный вектор экспрессирует продукт трансляции 8Е0 ΙΌ N0:5.
- 6. Способ по любому из пп.1-5, где поксвирусный вектор дополнительно экспрессирует продукт трансляции по меньшей мере одного дополнительного гена(ов) антигена из микобактериального вида.
- 7. Способ по любому из пп.1-6, где иммуногенную композицию вводят по меньшей мере с одним дополнительным антигеном и/или противомикробным средством.
- 8. Способ по п.7, где по меньшей мере один дополнительный антиген и/или противомикробное средство вводят одновременно, раздельно или последовательно.
- 9. Способ по любому из пп.1-8, где ответ представляет собой антигенспецифический иммунный ответ.
- 10. Способ по любому из пп.1-9, где ответ является терапевтическим или профилактическим.
- 11. Способ по любому из пп.1-10, где Т-клеточный ответ является защитным против заболевания, выбранного из группы, состоящей из туберкулеза, лепры, инфекции, вызванной МусоЬас1егшш аушш, нетуберкулезной микобактериальной инфекции, язвы Бурули, инфекции или заболевания, вызванных МусоЬас1ег1пш Ьоук, натуральной оспы, обезьяньей оспы, инфекции, вызванной МусоЬас1егшш рага!иЬегси1о818, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, аутоиммунного заболевания, рака и рака мочевого пузыря.
- 12. Способ по любому из пп.1-10, где пациент выбран из группы, состоящей из детей, пациентов, которые имеют ВИЧ-инфекцию или СПИД, имеют ослабленный иммунитет или были подвергнуты пересадке органов.- 18 012436
- 13. Способ по любому из пп.1-10, где пациент ранее подвергался воздействию микобактерий.
- 14. Способ по п.13, где пациент ранее подвергался воздействию М. 1иЬсгси1ох1Х.
- 15. Способ по п.13 или 14, где пациент является латентно инфицированным микобактериями.
- 16. Способ по любому из пп.1-10, где пациента ранее подвергали воздействию ВСС (бацилла Кальметта-Герена).
- 17. Применение иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации поксвирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции нуклеотидной последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 4 и дополнительно включающий С-концевую РК метку и лидерную последовательность ТРА, в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения микобактериального заболевания у пациента путем индукции иммунного ответа центральных Т-клеток памяти у указанного пациента.
- 18. Применение по п.17, где Т-клеточный иммунный ответ представляет собой ССР7+ ответ.
- 19. Применение по п.17 или 18, где поксвирусный вектор дополнительно экспрессирует продукт трансляции по меньшей мере одного дополнительного гена антигена и где указанное лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения как микобактериального заболевания, так и по меньшей мере одного дополнительного заболевания у указанного пациента.
- 20. Применение по любому из пп.17-19, где иммуногенная композиция дополнительно индуцирует Т-клеточный иммунный ответ против вируса, из которого происходит поксвирусный вектор.
- 21. Применение иммуногенной композиции, содержащей нереплицирующийся или дефектный по репликации поксвирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции нуклеотидной последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 4, и дополнительно включающий С-концевую РК метку и лидерную последовательность ТРА, в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения по меньшей мере одного заболевания у пациента путем индукции иммунного ответа центральных Т-клеток памяти, где указанное лекарственное средство вводят по меньшей мере с одним дополнительным антигеном.
- 22. Применение по п.21, где Т-клеточный иммунный ответ представляет собой ССР7+ ответ.
- 23. Векторная вакцина, содержащая нереплицирующийся или дефектный по репликации поксвирусный вектор, экспрессирующий продукт трансляции нуклеотидной последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 4 и дополнительно включающий С-концевую РК метку и лидерную последовательность ТРА.
- 24. Векторная вакцина по п.23, где вирусный вектор экспрессирует продукт трансляции нуклеотидной последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 5.
- 25. Векторная вакцина по п.23 или 24, где нереплицирующийся вирусный вектор представляет собой МУА.
- 26. Векторная вакцина по любому из пп.23-25, где вирусный вектор дополнительно экспрессирует продукт трансляции по меньшей мере одного дополнительного гена(ов) антигена из микобактериального вида.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0500102.9A GB0500102D0 (en) | 2005-01-05 | 2005-01-05 | Method for generating a memory t cell response |
US64980405P | 2005-02-03 | 2005-02-03 | |
PCT/GB2006/000023 WO2006072787A1 (en) | 2005-01-05 | 2006-01-05 | Compositions for immunizing against mycobacterium |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200701440A1 EA200701440A1 (ru) | 2008-02-28 |
EA012436B1 true EA012436B1 (ru) | 2009-10-30 |
Family
ID=36062509
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200701440A EA012436B1 (ru) | 2005-01-05 | 2006-01-05 | Композиции для иммунизации против микобактерий |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1833507B1 (ru) |
JP (2) | JP2008526823A (ru) |
KR (1) | KR20070108518A (ru) |
AP (1) | AP2007004059A0 (ru) |
AU (1) | AU2006204382B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0606165A2 (ru) |
CA (1) | CA2592756A1 (ru) |
CY (1) | CY1111549T1 (ru) |
EA (1) | EA012436B1 (ru) |
HR (1) | HRP20110402T1 (ru) |
IL (2) | IL184414A (ru) |
MA (1) | MA29244B1 (ru) |
MX (1) | MX2007008182A (ru) |
NZ (1) | NZ560468A (ru) |
PL (1) | PL1833507T3 (ru) |
WO (1) | WO2006072787A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2665817C1 (ru) * | 2017-10-25 | 2018-09-04 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Вакцина рекомбинантная противотуберкулезная и адъювант для нее |
RU2695462C2 (ru) * | 2014-01-09 | 2019-07-23 | Трансген Са | Гибридизация гетероолигомерных микобактериальных антигенов |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1817061B1 (en) * | 2004-12-01 | 2011-07-27 | Aeras Global Tuberculosis Vaccine Foundation | Electroporation of mycobacterium and overexpression of antigens in mycobacteria |
US8691502B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-04-08 | Tremrx, Inc. | T-cell vaccination with viral vectors via mechanical epidermal disruption |
WO2010121618A1 (en) * | 2009-04-24 | 2010-10-28 | Statens Serum Institut | A tuberculosis tb vaccine to prevent reactivation |
EP2548019A1 (en) * | 2010-03-19 | 2013-01-23 | Red Flag Diagnostics GmbH | In vitro process for the quick determination of a patient's status relating to infection with mycobacterium tuberculosis |
JP6333814B2 (ja) | 2012-07-10 | 2018-05-30 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニムTransgene S.A. | マイコバクテリア抗原ワクチン |
US20220144893A1 (en) * | 2019-03-14 | 2022-05-12 | Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute | Nanomolar peptides and derivatives to differentially modulate ephrin receptors |
-
2006
- 2006-01-05 PL PL06700223T patent/PL1833507T3/pl unknown
- 2006-01-05 EA EA200701440A patent/EA012436B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-01-05 CA CA002592756A patent/CA2592756A1/en not_active Abandoned
- 2006-01-05 AU AU2006204382A patent/AU2006204382B2/en not_active Ceased
- 2006-01-05 WO PCT/GB2006/000023 patent/WO2006072787A1/en active Application Filing
- 2006-01-05 AP AP2007004059A patent/AP2007004059A0/xx unknown
- 2006-01-05 KR KR1020077018013A patent/KR20070108518A/ko active IP Right Grant
- 2006-01-05 JP JP2007549950A patent/JP2008526823A/ja active Pending
- 2006-01-05 BR BRPI0606165-6A patent/BRPI0606165A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-01-05 MX MX2007008182A patent/MX2007008182A/es not_active Application Discontinuation
- 2006-01-05 NZ NZ560468A patent/NZ560468A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-01-05 EP EP06700223A patent/EP1833507B1/en active Active
-
2007
- 2007-07-04 IL IL184414A patent/IL184414A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-08-03 MA MA30124A patent/MA29244B1/fr unknown
-
2011
- 2011-05-27 HR HR20110402T patent/HRP20110402T1/hr unknown
- 2011-06-10 CY CY20111100558T patent/CY1111549T1/el unknown
- 2011-12-27 IL IL217235A patent/IL217235A0/en unknown
-
2012
- 2012-08-24 JP JP2012184893A patent/JP2013010775A/ja active Pending
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
BALDWIN S. L. ET AL.: "Immunogenicity and protective efficacy of DNA vaccines encoding secreted and non-secreted forms of Mycobacterium tuberculosis Ag85A", TUBERCLE AND LUNG DISEASE, vol. 79, no. 4, 1999, pages 251-259, XP002375254, ISSN: 0962-8479, page 252, left-hand column, last paragraph - right-hand column, paragraph 1, page 253; figures 1,2 * |
DATABASE EMBASE [Online], ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, AMSTERDAM, NL; 15 June 2005 (2005-06-15), SANTOSUOSSO M. ET AL.: "Mechanisms of mucosal and parenteral tuberculosis vaccinations: Adenoviral-based mucosal immunization preferentially elicits sustained accumulation of immune protective CD4 and CD8 T cells within the airway lumen", XP002375258, Database accession no. EMB-2005262001, abstract & JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 15 JUN 2005, UNITED STATES, vol. 174, no. 12, 15 June 2005 (2005-06-15), pages 7986-7994, ISSN: 0022-1767 * |
DATABASE MEDLINE [Online], US NATIONAL LIBRARY OF MEDICINE (NLM), BETHESDA, MD, US; February 2006 (2006-02), VORDERMEIER H. MARTIN ET AL.: "Immune responses induced in cattle by vaccination with a recombinant adenovirus expressing Mycobacterial antigen 85A and Mycobacteriurn bovis BCG", XP002375259, Database accession no. NLM16428796, abstract & INFECTION AND IMMUNITY, FEB 2006, vol. 74, no. 2, February 2006 (2006-02), pages 1416-1418, ISSN: 0019-9567 * |
DUNN C. ET AL.: "Fine mapping of the binding sites of monoclonal antibodies raised against the Pk tag", JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS B.V., AMSTERDAM, NL, vol. 224, no. 1-2, 22 April 1999 (1999-04-22), pages 141-150, XP004165517, ISSN: 0022-1759, page 141, right-hand column, paragraph 1, page 142, left-hand column, paragraph 1 * |
MALIN ADAM S. ET AL.: "Vaccinia expression of Mycobacterium tuberculosis-secreted proteins: Tissue plasminogen activator signal sequence enhances expression and immunogenicity of M. tuberculosis Ag85", MICROBES AND INFECTION, vol. 2, no. 14, November 2000 (2000-11), pages 1677-1685, XP002375253, ISSN: 1286-4579 page 1677, abstract, page 1679, left-hand column, paragraph 1 - right-hand column, paragraph 1, page 1681, right-hand column, paragraph 2, page 1682, right-hand column, paragraph 3, page 1683, left-hand column, paragraph 2 * |
MCSHANE HELEN ET AL.: "Recombinant modified vaccinia virus Ankara expressing antigen 85A boosts BCG-primed and naturally acquired antimycobacterial inmunity in humans", NATURE MEDICINE, vol. 10, no. 11, November 2004 (2004-11), pages 1240-1244, XP002375252, ISSN: 1078-8956, page 1240, abstract, page 1240, right-hand column, paragraph 2, page 1243, left-hand column, paragraph 1, page 1243, left-hand column, paragraph 4 * |
WANG JUN ET AL.: "Single mucosal, but not parenteral, immunization with recombinant adenoviral-based vaccine provides potent protection from pulmonary tuberculosis", JOURNAL OF IMMUNOLOGY, THE WILLIAMS AND WILKINS CO. BALTIMORE, US, vol. 173, no. 10, 15 November 2004 (2004-11-15), pages 6357-6365, XP002329297, ISSN: 0022-1767, page 6358, left-hand column, paragraph 2, page 6361, left-hand column, paragraph 2, page 6362, right-hand column, paragraph 1 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2695462C2 (ru) * | 2014-01-09 | 2019-07-23 | Трансген Са | Гибридизация гетероолигомерных микобактериальных антигенов |
RU2665817C1 (ru) * | 2017-10-25 | 2018-09-04 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Вакцина рекомбинантная противотуберкулезная и адъювант для нее |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2006204382A1 (en) | 2006-07-13 |
MA29244B1 (fr) | 2008-02-01 |
CA2592756A1 (en) | 2006-07-13 |
AP2007004059A0 (en) | 2007-08-31 |
JP2008526823A (ja) | 2008-07-24 |
IL217235A0 (en) | 2012-01-31 |
EP1833507B1 (en) | 2011-03-16 |
WO2006072787A8 (en) | 2006-09-14 |
EA200701440A1 (ru) | 2008-02-28 |
HRP20110402T1 (hr) | 2011-07-31 |
WO2006072787A1 (en) | 2006-07-13 |
EP1833507A1 (en) | 2007-09-19 |
KR20070108518A (ko) | 2007-11-12 |
NZ560468A (en) | 2010-05-28 |
MX2007008182A (es) | 2008-02-19 |
CY1111549T1 (el) | 2015-08-05 |
AU2006204382B2 (en) | 2011-05-12 |
IL184414A (en) | 2012-01-31 |
PL1833507T3 (pl) | 2011-08-31 |
IL184414A0 (en) | 2007-10-31 |
BRPI0606165A2 (pt) | 2009-06-02 |
JP2013010775A (ja) | 2013-01-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Davis et al. | West Nile virus recombinant DNA vaccine protects mouse and horse from virus challenge and expresses in vitro a noninfectious recombinant antigen that can be used in enzyme-linked immunosorbent assays | |
JP5227172B2 (ja) | デングウイルス感染に対するワクチン接種 | |
US20180008691A1 (en) | Compositions and methods for rapid immunization against dengue virus | |
US20120100170A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of hepatitis c | |
EA012436B1 (ru) | Композиции для иммунизации против микобактерий | |
RU2376374C2 (ru) | Вакцина против вируса лихорадки западного нила | |
JP2018090618A (ja) | デングウイルスに対する免疫原性組成物およびワクチンキット | |
Valdés et al. | Immunological evaluation in nonhuman primates of formulations based on the chimeric protein P64k-domain III of dengue 2 and two components of Neisseria meningitidis | |
KR20220157969A (ko) | 코로나바이러스 백신 및 사용 방법 | |
US7850979B2 (en) | Compositions for immunizing against mycobacterium | |
KR20160027019A (ko) | 뎅기 바이러스 백신에 대한 방법 및 조성물 | |
US20170035875A1 (en) | Immune Enhancing Recombinant Dengue Protein | |
EP4210741A1 (en) | Vaccine for viral pathogens | |
Ge et al. | Fusion expression of major antigenic segment of JEV E protein-hsp70 and the identification of domain acting as adjuvant in hsp70 | |
US11911459B2 (en) | Nant COVID vaccine cross reactivity | |
US20240226282A1 (en) | Nant COVID Vaccine Cross Reactivity | |
AU2011211406A1 (en) | Compositions for immunizing against mycobacterium | |
MX2008001978A (en) | Vaccination against dengue virus infection |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |