KR20130027080A - 표적화된 약물 개발 방법 및 조성물 - Google Patents

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KR20130027080A
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벤자민 머그라지
이그나티우스 투르키
매튜 실스
제인 옹
존 알로코
팜 와인즈
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에리코, 조셉, 피.
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Abstract

본원에서는 항증식성 효과를 가진 화합물을 제공한다. 언테터링된, 확장된 형태는 활성 상태이고, 테터링된 형태는 불활성 상태인, 이량체화 아암 및 도메인간 테터를 포함하는 다중-도메인 단백질, 예를 들어, EGFR의 활성을 조절함으로써 자가억제형 형상을 이루도록 할 수 있는 것인 화합물 또한 제공한다. 상기 화합물을 확인하기 위한 방법 및 약물작용발생단 또한 제공한다. 다른 측면은 증식성 질환, 장애, 또는 상태, 예를 들어, EGFR과 관련된 것에 대한 치유적 치료 방법을 제공한다.

Description

표적화된 약물 개발 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS OF TARGETED DRUG DEVELOPMENT}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2010년 1월 6일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/292,776을 우선권 주장하고, 그의 전문은 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록 참조 도입
본 개시내용의 일부인 서열 목록은 본 발명의 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열을 포함하는 컴퓨터 판독가능한 형태를 포함한다. 서열 목록의 대상은 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
기술 분야
본 발명은 일반적으로 질환 치료에 사용하기 위한 신규의 화학적 화합물, 상기 화합물 및 그의 중간체의 제조 방법, 및 준합리적 약물 디자인에 사용하기 위한 리드 분자의 확인 방법에 관한 것이다.
합리적 약물 개발은 원하는 활성을 나타내는 하나의 분자를 찾기 위한 맹목적인 바램으로 수천개의 분자를 무작위로 스크리닝함으로써가 아닌, 적절한 방식으로 표적의 활성 부위를 추정하고, 상기 부위와 상호작용하는 화학 물질을 고안함으로써 리드 분자를 개발하는 방법이다.
표피 성장 인자 수용체 (EGFR)는 ErbB (HER) 패밀리 수용체 티로신 키나제 (RTK)의 일원으로서, 이는 세포 성장 및 분화를 조절하고, 많은 인간 암과 관련이 있다. EGFR 활성화 및 이량체화는 예를 들어, 문헌 [Burgess et al. (2003) Moledular Cell 12, 541-552] 및 [Ferguson et al. (2003) Molecular Cell 11, 507-517]에서 논의되고 있다.
EGF는 EGFR의 세포외 영역의 이량체화를 유도함으로써 EGF의 수용체를 활성화시킨다. EGFR의 활성화는 이황화 결합 지도화 결과 뿐만 아니라, X선 결정 구조를 통해 기술된 바 있다. 리간드-결합된 sEGFR의 결정 구조를 통해 이량체화는 수용체를 통해 매개화되며, 2개의 개별 리간드 분자가 이량체로 존재하는 것으로 나타났다. 활성화된 EGFR의 이량체화 경계는 분자내 상호작용에 의해 완전하게 폐쇄되며, 이는 자가억제형 형상이다. 수용체를 활성화시키기 위해서는 상기 폐쇄된 경계를 노출시키는 거대 도메인의 재배열과 함께, EGF가 EGFR 이량체 경계에 기여하지 않는 EGF 결합이 동반되어야 한다. EGFR 메카니즘은, 결합된 리간드가 직접 수용체 이량체 경계에 기여하며, 수용체 티로신 키나제의 세포외 영역의 형태를 크게 변경시키지 않는 대부분의 다른 수용체 티로신 키나제 활성화 메카니즘과는 뚜렷한 대조를 이룬다.
EGFR은 4개의 서브도메인 I, II, III, 및 IV를 함유한다. EGFR의 결정 구조에서 관찰된 거의 모든 수용체/수용체 접촉은 도메인 II에 의해 매개된다. 이량체 경계의 중앙부에는 각 도메인 II의 제2 C1 모듈 (모듈 5)에서부터 시작되어, 그의 이량체화 파트너의 도메인 II와 주로 상호작용하는 경계를 가로질러 도달하는 돌출된 루프 (EGFR의 잔기 242-259)가 존재한다. ErbB 수용체에 특이적인 상기 도메인 II 루프는 "이량체 아암"이다. 도메인 II의 이량체 아암은 도메인 IV와의 분자내 상호작용에 의해 완전하게 폐쇄된다 (즉, 자가억제형 형상). 도메인 II의 제2 및 제6 이황화 결합형 모듈로부터의 측쇄를 포함하는 보다 소형의 상호작용 부위 2개가 이량체 중에 존재한다. 또한 이량체 경계는 도메인 IV로 확장될 수 있다. 두 수용체 분자가 도메인 IV의 C 말단을 향해 서로 매우 가깝게 접근해 있는 반면, 잘 정의된 조밀한 경계는 관찰된 바 없다.
EGF 및 TGF-α가 이량체 경계에 명확하게 걸쳐 있는 것은 아니지만, 각 리간드는 같은 EGFR 분자 중 2개의 별개의 결합 표면과 접촉한다. 결합된 EGF 또는 TGF-α 분자는 도메인 I과 III 사이의 웨지와 유사하다. 도메인 I과 II 사이의 관계는 본질적으로 IGF-1R에서 및 활성화된 sEGFR 이량체에서 관찰되는 것과 동일하며, 이는 리간드 결합이 이들 두 도메인의 상대적인 배향에는 크게 영향을 미치지 않는다는 것을 암시한다. 그러나, 도메인 II와 III 사이의 관계는 활성화된 구조에서 및 불활성화된 구조에서 크게 차이가 난다. 시스테인-풍부 도메인 II와 IV 사이의 직접적인 분자내 상호작용이 불활성화된 형상을 특징으로 하는 도메인 II/III 관계를 제한한다. 이러한 도메인간 "테터"는 불활성 sErbB3 및 sEGFR 중의 두 시스테인-풍부 도메인 (II 및 IV) 사이의 본질적으로 동일한 상호작용에 의해 안정화된다.
분자내 도메인 II/IV 테터는 정확하게 도메인 IV에 대해 도메인 II의 이량체화 아암을 매립하고, 이에 sErbB3 및 sEGFR의 테터링된 형상은 이량체화가 불가능하며, 이로써 자가억제되는 것으로 보여진다. 또한, 도메인 I 및 III 상의 두 리간 결합 표면은 테터링된 형상에서 너무 멀리 떨어져 있기 때문에 단일 리간드가 둘 모두에 동시에 결합하지 못한다. 결과적으로, 테터링된 형상은 오직 한번에 그의 리간드 결합 표면 중 단 하나만을 사용하여 리간드와 저친화성 상호작용을 형성할 수 있다.
sEGFR의 불활성화된 형상과 활성화된 형상 사이의 전환을 위해서는 도메인 I 및 III이 한 평면에서는 강성 도메인 I/II 쌍의 130° 회전을 통해, 및 또 다른 평면에서는 20° 회전을 통해 서로의 방향쪽으로 인출되어야 한다. 오직 sEGFR의 확장된 형상만이 고친화도 리간드 결합 및 효율적인 이량체화가 가능하다.
에너지적인 계산에 기초하여, 현재는 어느 시점에서든 약 95%의 sEGFR 분자가 테터링될 것이며, 나머지 5%는 그렇지 않을 것이라고 사료된다. 리간드의 존재 및 이어서 언테터링된 형태의 도메인 I 및 III에의 결합은 이량체화할 수 있는 확장된 상태로 수용체 분자를 포획시키면서, 언테터링된 형태쪽으로의 평형을 유도할 것이다.
이량체화 아암의 노출은 EGFR 이량체화를 단독으로 유도하는 데에는 충분하지 못하다. 따라서, 도메인 III의 모듈 2 및 6 중의 추가적인 접촉 부위가 필요하다. 이들 두 추가 접촉 부위 및 이량체화 아암이 이량체 경계에서 협동으로 수행한다.
공지된 EGFR 억제 전략법은 필요한 형상 변화의 입체 장애를 일으키는 도메인 III의 항체 결합에 관한 것이다 (예를 들어, 에르비툭스(Erbitux)). 종래의 다른 전략법은 이량체화를 방해하기 위해 도메인 II, 구체적으로 이량체화 아암의 항체 결합에 관한 것이다 (예를 들어, 페르투주맙(pertuzumab)). 종래의 추가의 다른 전략법은 분자내 테터에 참여하는 도메인 IV 잔기의 항체 결합에 관한 것이다 (예를 들어, 트라스투주맙, 헤르셉틴). 그러나, 활성화의 테터링 메카니즘에 관한 기존의 전략법은 존재하지 않는다.
발명의 개요
본원에서는 항증식성 효과를 가진 화합물 및 조성물과 함께, 상기 화합물을 이용하는 치유적 치료 방법을 기술한다. 또한, 상기 화합물을 발견하는 방법을 제공한다. 본원에 기술된 접근법을 통해 언테터링된, 확장된 형태는 활성 상태이고, 테터링된 형태는 불활성 상태인, 이량체화 아암 및 도메인간 테터를 포함하는 다중-도메인 단백질, 예를 들어, EGFR의 활성을 조절함으로써 자가억제형 형상을 이루도록 할 수 있는 조절제를 확인할 수 있다.
본 발명의 한 측면은 하기 화학식 2의 것을 비롯한, 소분자 화합물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 소분자 화합물은 실질적으로 도식 I의 약물작용발생단에 따른다.
또 다른 측면은 본원에 기술된 화합물 및 조성물을 사용하여 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 것을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 1의 화합물 또는 화합물 AD4-1505, 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 증식성 질환, 장애, 또는 상태는 EGFR과 관련된 것이다. 일부 실시양태에서, 증식성 질환, 장애, 또는 상태는 암; 혈관 증식성 장애; 섬유성 장애; 혈관간 세포 증식성 장애; 건선; 광선 각화증; 지루성 각화증; 사마귀; 켈로이드성 반흔; 습진; 및 바이러스 감염에 의해 유발되는 과다증식성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 측면은 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 억제제를 확인하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 도식 I을 포함하는 약물작용발생단을 입력값으로서 3차원 데이터베이스에 제공하는 단계; 후보 화합물의 3차원 구조를 약물작용발생단의 3차원 구조와 비교하는 단계; 6개 이상의 도식 I (ADS-1505-유사)의 관능기와 실질적으로 정렬되는 3차원 구조를 가진 후보 화합물을 선택하는 단계를 포함하며; 여기서, 후보 화합물의 3차원 구조와 약물작용발생단의 3차원 구조가 서로 유사하다면, 이는 실질적으로 EGFR의 테터링된 불활성 형상을 유지시킴으로써, 또는 실질적으로 EGFR의 언테터링된 활성 형상의 안정화를 방지함으로써 EGFR을 억제시킬 수 있는 능력을 후보 화합물이 가지고 있음을 시사하는 것이다.
또 다른 측면은 본원에 기술된 화합물, 예를 들어, 화학식 2의 화합물을 형성하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 본 화합물을 형성하기에 충분한 조건하에서 에탄올 중에 아미노 피리딘 중간체 화합물, 알데히드 중간체 화합물, 및 히드록시퀴놀린 중간체 화합물을 조합하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노 피리딘 중간체 화합물은 R2-CHO (여기서, R2는 화학식 2에 대해 정의된 바와 같다)를 포함하고; 알데히드 중간체 화합물은 R1-NH2 (여기서, R1은 화학식 2에 대해 정의된 바와 같다)를 포함하고; 히드록시퀴놀린 중간체 화합물은 임의로 X (여기서, X는 화학식 2에 대해 정의된 바와 같다)로 치환된 8-히드록시퀴놀린을 포함한다.
또 다른 측면은 아미노피리딘 화합물을 형성하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 반응은 2-아미노-5-클로로피리딘 유도체를 형성하기에 충분한 조건하에서 에틸아세테이트 또는 디메틸포름아미드를 포함하는 용매 중에 치환 또는 비치환된 2-아미노피리딘 및 N-클로로숙신이미드를 조합하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 반응은 빙초산 중 아세트산 무수물 및 3-위치 및 5-위치에서 플루오로, 클로로, 또는 브로모로 치환된 2-아미노피리딘을 조합하여 상응하는 아세트아미드 유도체를 형성하고; 약 -70℃에서 테트라히드로푸란 중 아세트아미드 유도체 및 디이소프로필 아민 및 부틸리튬을 조합하여 아세트아미드 유도체를 탈양성자화시키고; 탈양성자화된 아세트아미드 유도체 및 저급 알킬 할라이드를 조합하여 아세트아미드 유도체의 4-위치를 알킬화시키고; 약 50℃에서 메탄올 용매 중 알킬화된 아세트아미드 유도체 및 진한 염산을 조합하여 아세트아미드 기를 제거하고, 2-아미노-3,5-디할로-4-알킬아미노피리딘을 형성하는 것을 포함한다.
또 다른 측면은 2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘; 및 2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노 피리딘 화합물을 제공한다.
다른 목적 및 특징은 부분적으로 자명해질 것이며, 부분적으로 아래에서 지적될 것이다.
당업자는 하기 기술된 도면은 단지 예시적 목적만을 위한 것이라는 것을 이해할 것이다. 도면은 임의의 방법으로 본 교시의 범주를 제한하고자 하는 것은 아니다.
도 1은 MOE에서 부위 탐지기에 의해 측정된, 불활성 형태의 EGFr (1NQL.pdb)의 도메인 II와 도메인 IV의 경계에서의 결합 부위를 보여주는 것이다. 도메인 II 잔기의 탄소 원자는 적색으로 착색되어 있고, 도메인 IV 잔기의 것은 청색으로 착색되어 있다.
도 2는 히트 AD4-1505에 대해 정렬된 Pharm-1nql-glue-5를 보여주는 것이다.
도 3은 불활성 EGFR과 도킹된 AD4-1505 및 AD4-1505-유사 화합물을 2차원적으로 보여주는 일련의 대표도이다. 예를 들어, 화합물 AD4-1505의 EGFR에의 도킹은 도 3a에 도시되어 있다. 예를 들어, 화합물 AD4-10963 (AD4-1505-유사 화합물)의 EGFR에의 도킹은 도 3b에 도시되어 있다. 예를 들어, 화합물 AD4-10961 (AD4-1505-유사 화합물)의 EGFR에의 도킹은 도 3c에 도시되어 있다. 예를 들어, 화합물 AD4-10945 (AD4-1505-유사 화합물)의 EGFR에의 도킹은 도 3d에 도시되어 있다. 예를 들어, 화합물 AD4-10315 (AD4-1505-유사 화합물)의 EGFR에의 도킹은 도 3e에 도시되어 있다. 예를 들어, 화합물 AD4-10965 (AD4-1505-유사 화합물)의 EGFR에의 도킹은 도 3f에 도시되어 있다.
도 4는 단독의, 또는 AD4-10628과 함께 조합된 타이커브(Tykerb) (도 4a) 또는 이레사(Iressa) (도 1b)의 농도 함수에 따른 EGFR의 억제율(%)을 보여주는 일련의 라인 플롯 및 산포도이다. 용량-반응 곡선에서 좌측으로의 이동은 효능이 더 큰 반응을 나타내는 것이다.
도 5는 용량 감소 지수(DRI) 타이커브 및 DRI AD4-10628에 대한 Fa의 함수로서의 DRI를 보여주는 산포도이다.
도 6은 타이커브와 함께 조합된 일련의 AD4 화합물에 대한 90% 억제 (ED90)에서의 조합 지수(CI) 값을 요약하여 나타낸 히스토그램이다. 화합물 4는 이레사이다. 화합물 5는 타르세바(Tarceva)이다. 화합물들의 밸런스는 본원에 기술된 AD4 화합물이다. 가운데 검은색 선 아래쪽 반응 (즉, CI < 0.9)은 상승 작용을 나타내는 것이다.
도 7은 EGFR의 형태를 도시한 카툰이다. 도 7A는 테터링된 단량체로서의 EGFR을 보여주는 것이다. 도 7B는 언테터링된 단량체로서의 EGFR을 보여주는 것이다. 도 7C는 리간드 안정화된 확장된 형태의 EGFR을 보여주는 것이다. 도 7D는 리간드 유도성 활성화된 이량체로서의 EGFR을 보여주는 것이다.
도 8은 EGFR의 키나제 도메인의 리간드 유도성 이량체화 및 활성화를 도시한 카툰이다.
도 9는 A549 세포에 대한 MTT 세포 증식 검정을 보여주는 일련의 산포도 및 라인 플롯이다. 도 9a는 화합물 (AD4-10628, AD4-13218, AD4-13219, AD4-13220, AD4-13221) 농도에 대한 함수로서의 OD 560 mAbs를 보여주는 것이다. 도 9b는 화합물 (캄프토테신, AD4-10952, 누트린(Nutlin) (-)) 농도에 대한 함수로서의 OD 560 mAbs를 보여주는 것이다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 7에서 제공한다.
도 10은 H1975 세포에 대한 MTT 세포 증식 검정을 보여주는 일련의 산포도 및 라인 플롯이다. 도 10은 화합물 AD4-10460에 대한 LogM (μM)에 대한 함수로서의 Abs 560 nm을 보여주는 것이다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 7에서 제공한다.
도 11은 HT-29 세포에 대한 MTT 세포 증식 검정을 보여주는 일련의 산포도 및 라인 플롯이다. 도 11은 타이커브 및 타르세바의 Log 농도 (M)에 대한 함수로서 평균 억제율 (Ave % 억제)을 나타내는 것으로서, IC50 값은 각각 2.7 μM 및 12 μM으로 계산되었다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 7에서 제공한다.
도 12는 카스파제 3,7 검정에 대한 세포 밀도 비교를 보여주는 산포도 및 라인 플롯이다. RLU는 세포/웰에 대한 함수로서 제시되어 있다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 8에서 제공한다.
도 13은 카스파제 3,7 검정에서 타르세바와 AD4-13192의 상가 효과를 보여주는 막대 그래프이다. 치료는 타르세바 (0.5, 1, 2, 4, 8, 또는 16 μM), AD4-13192 (1, 2, 4, 8, 16, 또는 32 μM), 또는 타르세바 + AD4-13192 (타르세바/AD4-13192)를 포함하였다. 아폽토시스율(%)이 타르세바 또는 AD4-13192 농도에 대한 함수로서 제시되어 있다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 8에서 제공한다.
도 14는 DNA 단편화의 증가에 의해 측정되는 바, 세포를 6 (도 14a), 24 (도 14b) 및 48 (도 14c) 시간째에 웰당 5,000, 10,000 및 15,000개의 세포로 플레이팅하였을 때 측정된, 아폽토시스를 유도할 수 있는 스타우로스포린 (5 μM) 또는 타르세바 (10 μM 또는 1 μM)의 능력을 보여주는 막대 그래프이다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 8에서 제공한다.
도 15는 DNA 단편화 검정에 따라 A549 세포에서 아폽토시스를 유도할 수 있는 화합물의 능력을 보여주는 막대 그래프이다. 각 화합물 및 농도에 대한 400 nm-492 nm에서의 흡광도가 제시되어 있다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 8에서 제공한다.
도 16은 아넥신(Annexin) V 검정을 보여주는 도트 플롯 및 막대 그래프이다. 도 16a는 FITC-A에 대한 함수로서의 7-AAD-A에 대한 유동 세포측정 도트 플롯이며, 여기서, 3사분면 = 좌측 하단 = 살아있는 세포; 4사분면 = 우측 하단 = 초기 아폽토시스; 2사분면 = 우측 상단 = 후기 아폽토시스; 1사분면 = 좌측 상단 = 사멸 세포이다. 도 16b는 총 아폽토시스율(%) (도 16a의 초기 (4사분면) + 후기 (2사분면)) 및 아폽토시스 비율(%) ((실험군-비처리군/양성 대조군)*100)을 보여주는 막대 그래프이다. 방법론에 관한 추가 정보는 실시예 8에서 제공한다.
본원에서는 항증식성 효과를 가진 화합물 및 조성물과 함께, 상기 화합물을 이용하는 치유적 치료 방법 및 상기 화합물을 발견하는 방법을 기술한다. 본원에 기술된 각종의 소분자 화합물은 다중-도메인 단백질을 테터링된, 불활성 상태로 함께 결합시킬 수 있다. 상기 억제제의 구조적 요건을 확인하는 방법, 효과적인 억제제를 스크리닝하는 방법, 확인된 후보 물질의 구조를 최적화시키는 방법, 및 치유적 치료 요법에서 확인된 소분자 화합물을 사용하는 방법 또한 제공한다.
본 발명의 한 측면은 증식성 질환 또는 상태 치료에 효능이 있는 소분자 화합물에 관한 것이다. 본원에 기술된 화합물에 관한 다양한 실시양태는 항증식성 효과를 가진다. 본원에 기술된 화합물에 관한 다양한 실시양태는 도메인 단백질을 테터링된, 불활성 상태로 결합시킬 수 있다. 본원에 기술된 화합물에 관한 다양한 실시양태는 EGFR에 대해 억제성 효과를 가질 수 있다. 본원에 기술된 화합물은 실험상 증식성 질환 및 상태를 치료하는 데 효과적인 것으로 입증되었다.
본 발명의 한 측면은 본원에 기술된 화합물 및 조성물을 사용한, 증식성 질환 및 장애에 대한 치유적 치료에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 하나 이상의 표적화 요법용의 하나 이상의 약물을 개발하기 위한 화합물, 방법, 및 장치에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본원에 기술된 접근법을 통해 언테터링된, 확장된 형태는 활성 상태이고, 테터링된 형태는 불활성 상태인, 이량체화 아암 및 도메인간 테터를 포함하는 다중-도메인 단백질의 활성을 조절함으로써 자가억제형 형상을 이루도록 할 수 있는 조절제를 확인할 수 있다. 본원에 기술된 약물작용발생단적 접근법은 형태-의존성 단백질 수용체 활성화 메카니즘의 기계론적인 이해에 기초하며, 이를 통해 종래의 조합형 화학법 및 고속 대량 스크리닝 기법을 피할 수 있다.
생체분자 표적 선택
바람직한 표적 효소로는 리간드 결합, 활성화, 및/또는 이량체화 메카니즘을 분별하는 데 충분한 결정학상의 데이터를 포함하는 것을 포함한다. 본 발명의 다양한 방법을 사용하여 활성화 상태와 관련이 있는 도메인간 테터를 가진 (리간드와 함께 및/또는 리간드 없이 결정을 형성한) 다양한 다중-도메인 단백질 표적에 관한 약물작용발생단 모델을 생성할 수 있다. 따라서, 확장된 형태의 언테터링 및 안정화를 방지할 수 있는 화합물, 및 상기 화합물을 확인하는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 의해 생성된 리드 분자에 대한 생체분자 표적의 유형으로는 EGFR (즉, ErbB1), HER2/c-neu (ErbB-2), Her 3 (ErbB-3), 및 Her 4 (ErbB-4) 중 하나 이상을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.
EGFR
본원에서는 언테터링된, 확장된 형태의 안정화를 방지하기 위해 EGFR의 도메인의 다양한 부분을 표적화하는 것을 기술한다. 다시 말해, 소분자 억제제를 사용하여 도메인 II 및 IV의 단백질을 테터링된, 불활성 상태로 함께 결합시킬 수 있다. 이러한 전략법을 통해 EGFR 신호전달의 기저 수준을 일부 보유할 수 있고/거나, EGF 반응을 보유할 수 있고/거나, EGF-비의존성 이량체화를 감소시킬 수 있다. 그러한 치료 효과는 (EGFR의 발현 수준이 증가된 경우에는 감수성이 더 큰) 암 세포의 빠른 성장을 저속화시키지만, 건강한 조직의 기능을 위해 필요한 기초 EGFR 활성 중 적어도 일부는 보유할 것이다.
공지된 EGFR 억제 전략법은 요구되는 형상 변화의 입체 장애를 일으키는 도메인 III의 항체 결합에 관한 것이다 (예를 들어, 에르비툭스). 종래의 다른 전략법은 이량체화를 방지하기 위해 도메인 II, 구체적으로 이량체화 아암의 항체 결합에 관한 것이다 (예를 들어, 페르투주맙). 종래의 추가의 다른 전략법은 분자내 테터에 참여하는 도메인 IV 잔기의 항체 결합에 관한 것이다 (예를 들어, 트라스투주맙, 헤르셉틴). 그러나, 본원에 기술된 접근법과는 대조적으로 상기와 같은 종래의 전략법은 확장된 형태의 언테터링 또는 안정화를 방지하지 못한다.
상기 기술된 바와 같이, EGFR은 도메인 II의 이량체화 아암이 도메인 IV의 분자내 상호작용에 의해 완전하게 폐쇄되는 자가억제형 형상을 가진다 (예를 들어, 도 7 참조). EGF는 EGFR의 세포외 영역의 이량체화를 유도함으로써 EGF의 수용체를 활성화시킨다 (예를 들어, 도 7D 참조). EGFR의 결정 구조에서 관찰된 거의 모든 수용체/수용체 접촉은 도메인 II에 의해, 구체적으로는 각 도메인 II의 제2 C1 모듈 (모듈 5) (즉, 이량체화 아암)에서부터 시작되는 돌출된 루프 (EGFR의 잔기 242-259)에 의해 매개된다. 불활성화된 형상은 시스테인-풍부 도메인 II와 IV 사이의 직접적인 분자내 상호작용을 특징으로 하는데, 이는 도메인 II/III 관계를 제한한다 (예를 들어, 도 7A 참조). 이러한 도메인간 "테터"는 불활성 sEGFR 중의 두 시스테인-풍부 도메인 (II 및 IV) 사이의 본질적으로 동일한 상호작용에 의해 안정화된다. sEGFR의 불활성화된 형상과 활성화된 형상 사이의 전환을 위해서는 도메인 I 및 III이 한 평면에서는 강성 도메인 I/II 쌍의 130° 회전을 통해, 및 또 다른 평면에서는 20° 회전을 통해 서로의 방향쪽으로 인출되어야 한다 (예를 들어, 도 7B 참조). 오직 sEGFR의 이러한 확장된 형상만이 고친화도 리간드 결합(예를 들어, 도 7C 참조) 및 효율적인 이량체화(예를 들어, 도 7D 참조)가 가능하다. 활성화되고 이량체화된 형상에서 도메인 II의 이량체화 아암은 그의 이량체화 파트너의 상응하는 도메인 II 아암과 주로 상호작용하는 경계를 가로질러 도달한다 (예를 들어, 도 7D 참조). EGFR 이량체화를 통해서는 또한 도메인 III의 모듈 2 및 6에서 접촉 부위의 상호작용이 필요하다. EGF 리간드의 존재 및 이어서 비-테터링된 형태의 도메인 I 및 III에의 결합은 이량체화할 수 있는 확장된 상태로 수용체 분자를 포획시키면서, 비-테터링된 형태쪽으로의 평형을 유도할 것이다.
본원에 기술된 접근법을 통해 EGFR 신호전달의 기저 수준을 일부 보유할 수 있다. 건강한 개체에서는 성장을 위해 필요한 EGFR로부터의 기준치 신호가 존재하며, 예를 들어, 상처 회복에서는 증진된 EGF 수준이 가속화된 성장을 촉진시킨다. 그러나, 암 세포에서는 더 많은 EGFR이 나타나는 것으로 입증되었고, 이는 언테터링된 형태, 및 이어서 비폐쇄된 도메인 I/III 리간드 결합 부위에의 EGF의 결합의 가능성을 증가시켜 EGFR을 활성화시킨다. EGFR의 다중-도메인 단백질을 테터링된, 불활성 상태로 함께 결합시키는 억제제는 일부 기저 수준의 EGFR 신호전달을 허용할 수 있다.
추가로, EGFR의 언테터링된 상태의 안정화 (예를 들어, 언테터링된 상태를 도시하는 도 14b, 및 안정화된 언테터링된 상태를 도시하는 도 14c 참조)를 방지하는 소분자 억제제는 다른 항-EGFR 치료제와 함께 사용될 수 있다. 본원에 기술된 소분자 억제제를 다른 항-EGFR 치료 방식과 함께 사용하면 투여량을 감소시킬 수 있고/거나, 최대 억제를 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 상기 소분자 억제제는 (EGF를 차단하는 도메인 III에 결합하는) 에르비툭스와 함께 사용될 수 있으며, 이를 통해 에르비툭스의 투여량을 감소시킬 수 있고/거나, 최대 억제를 증가시킬 수 있다.
다양한 실시양태에서, 테터링된 상태로 존재하는 바, 개방화 (즉, 테터링된 형상으로부터 개방 형상으로의 형상 변화, 예를 들어, 테터링된 형태 및 언테터링된 형태를 도시한 도 7A-B 참조)되는 것을 막기 위해서 EGFR의 도메인 II가 표적화된다. 다양한 실시양태에서, 개방화 (즉, 테터링된 형상으로부터 개방 형상으로의 형상 변화)되는 것을 막기 위해서는 도메인 II와 도메인 IV 사이의 틈새부가 표적화된다. 단일 소분자를 사용하여 두 도메인을 확장시킬 수 있다. 별법으로, 상기 두 도메인을 확장시키기 위해 수개의 분획에서 일련의 소분자 (예를 들어, 적어도 2개의 소분자)를 함께 사용할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 언테터링된 상태로 존재하는 바, 언테터링된 상태 (예를 들어, 언테터링된 안정화된 형태를 도시한 도 7B-C 참조)의 안정화를 막기 위해서 EGFR의 도메인 II가 표적화된다. 다양한 실시양태에서, 언테터링된 상태의 안정화를 막기 위해서 EGFR의 도메인 III이 표적화된다 (예를 들어, 도메인 III의 모듈 2 및 6, 이는 EGFR 이량체화에 필요한 상호작용 접촉 부위이다).
약물작용발생단적 접근법
한 측면은 활성화 상태와 관련이 있는 도메인간 테터를 가진 다중-도메인 단백질을 표적하는 약물 개발을 위한 약물작용발생단적 접근법에 관한 것이다. 관심의 대상이 되는 생체분자의 활성화 및 이량체화 메카니즘에 기초하여, 결합 표적을 확인하고, 특징화한다. 메카니즘 및/또는 결합 표적은 예를 들어, 결정학상의 데이터를 통해 특징화될 수 있다. 표적 결합 도메인은 하나 이상의 약물작용발생단 특징으로서 표현될 수 있고/거나, 하나 이상의 약물작용발생단 특징을 포함하는 약물작용발생단 모델로 컴파일링될 수 있다.
상기 작업을 위해 디자인된 소프트웨어에 따라 약물작용발생단을 생성할 수 있다. (예를 들어, 하나 이상의 화학물질 라이브러리로부터의) 후보 분자를 약물작용발생단 모델에 대해 정렬하는 분자로부터 선택할 수 있다. 바람직하게는, 후보 분자를 표적 결합 도메인과의 상호작용에 대해 인 실리코(in silico) 도킹 및 점수화한다. 또한, 도킹 및 점수화는 상기 작업을 위해 디자인된 소프트웨어에 따라 수행될 수 있다. 하나 이상의 약물작용발생단 모델에 대해 정렬하는 분자의 선택한 후, 임의로는 인 실리코 도킹 및 점수화하고, 선택된 분자를 예를 들어, 화학적 합성에 의해 또는 상업적 공급원으로부터 수득할 수 있다. 선택된 분자는 표적 생체분자에 대한 결합 친화도 및/또는 기능에 대한 효과에 대해 측정될 수 있다. 이러한 평가는 생물학적 검정에 따라 수행될 수 있다. 시험된 분자는 바람직한 측정된 파라미터에 따라 추가로 선택될 수 있다. 선택된 분자 및/또는 추가로 선택된 분자는 임의로 추가로 최적화될 수 있다.
구조 공간 위치 측정
표적 생체분자의 활성화 및 이량체화 모델로부터 표적 영역을 확인할 수 있고, 3D 결합 도메인을 정의할 수 있다. 결합 도메인(들)의 정의는 일반적으로 활성화 및 이량체화 메카니즘에서 중요한 역할을 하는 표적 생체분자 일부의 원자의 특이적 공간 위치를 측정하는 것을 포함한다.
결합부의 공간 위치 측정은 다양한 인 실리코 기법을 수단으로 하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 결합 표면의 구조를 모델링하고 적합성의 수준을 평가하기 위해 표적의 활성 표면의 모델에 이를 매칭하는 소프트웨어 패키지가 사용될 수 있다. 이러한 소프트웨어로는 CAMAL을 포함한다.
결합부의 공간 위치 측정은 X선 결정화법을 수단으로 하여 달성될 수 있다. X선 결정화법을 사용하여 활성화 및 이량체화 메카니즘에서 중요한 역할을 하는 것으로 공지된 구조 내의 원자의 구조를 측정할 수 있고, 상기 구조적 정보를 사용함으로써 이어서, 이들 성분들 중 하나 이상에 결합하여 형상 변화 및/또는 안정화를 방지하는 합성 분자를 구축할 수 있다. 구조 측정을 위해 X선 결정화법을 사용하는 기법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Messerschmidt (2007) X-Ray Crystallography of Biomacromolecules: A Practical Guide, John Wiley & Sons, ISBN-10: 3527313966]; [Woolfson (2003) An Introduction to X-ray Crystallography, 2d Ed., Cambridge University Press, ISBN-10: 0521423597] 참조). X선 결정 구조 형성 또한 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,931,325 (월(Wall)) 및 미국 특허 번호 6,916,455 (세겔케(Segelke)) (이들 각 출원은 본원에 참고로 포함된다) 참조)). 본원에 별도로 기재되지 않았다면, 본 발명의 방법은 상기 방법을 통해 수행될 수 있다.
X선 결정화법으로 관찰된 회절 데이터로부터 유도된 파라미터로는 수소 결합제, 비극성 소수성 접촉, 염 가교 상호작용, 도메인의 극성 표면적, 도메인의 비극성 표면적, 항체-표적 복합체에 대한 형상 상보성 점수, 및 명시적으로 배치된 물 분자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 원자 간의 결합에 관한 특징화가 또한 유용하다. 단일 결합된 두 원자 간의 거리 범위는 약 1.45 내지 약 1.55 Å이다. 함께 이중 결합된 원자는 전형적으로 약 1.2 내지 약 1.25 Å 만큼 떨어져 있다. 단일 및 이중 결합 간의 공명 결합은 전형적으로 약 1.30 내지 약 1.35 Å 만큼 분리되어 있다.
약물작용발생단의 구축
약물작용발생단 모델은 원자 위치 정의를 비롯한, 활성화 및 이량체화에서 중요한 역할을 하는 생체분자 성분에 관한 구조적 정보로부터 구축될 수 있다. 표적 생체분자의 성분, 예를 들어, 활성화 및 이량체화에서 중요한 역할을 하는 성분에 대해 상보적인 특징을 가진 소분자는 활성화 및 이량체화에 필요한 형상 변화 및/또는 안정화를 방지할 수 있는 잠재능을 가지며, 이로써 치료상의 유용성을 가진다.
다양한 실시양태에서, 인 실리코 접근법은 접촉 통계학적 방법, 3D 표면 모델, 및 주형으로서 도킹된 리간드를 사용하는 단편 기반 접근법을 사용하여 신생 구조 디자인에 사용될 수 있다. 상기 기술된 공간 위치 정보로부터, 및/또는 다른 파라미터로부터 3D 리간드-수용체 모델 (예를 들어, 상호작용 패턴, 약물작용발생단 도식), 표면 지도 (예를 들어, 단층촬영/형상, 정전기 프로파일, 소수성, 단백질 가요성), 및 도킹 모델 (예를 들어, 리간드 결합에 대한 점수화 체계, 최소 에너지 계산)을 유도할 수 있다.
약물작용발생단 모델 구축 기법은 당업계에 공지되어 있고, 이는 본원에 광범위하게 기술되어 있다 (예를 들어, 실시예 4 참조). 따라서, 본원에 별도로 기재되지 않았다면, 본 발명의 방법은 상기 방법을 따라 수행될 수 있다.
약물작용발생단 모델 또는 도식은 일반적으로 수용체 부위에서 리간드의 인식 및 그의 생물학적 활성과 관련된, 바람직하게는 직접적으로 관련된, 리간드의 구조적 특징으로 구성된 한 세트이다. 약물작용발생단 특징, 특히, 이량체화 및 활성화 메카니즘에 참여하는 도메인 상의 상기와 같은 특징은 상응하는 표적 생체분자의 상응하는 공여체, 수령체, 방향족, 소수성, 및/또는 산성 또는 염기성 모이어티로부터 유도될 수 있다. 단순히 원자의 공간 위치가 아닌, 약물작용발생단 도식에서 사용되는 표적 생체분자 중 원자의 성질에 대한 추가 정보가 신규의 리드 화학물질의 모델링 방법을 지원할 수 있다는 것을 이해하여야 한다. 이러한 특징으로는 원자의 pKa 값, 원자를 제자리에 고정시키는 결합의 회전 강성, 결합 그 자체의 성질 (단일, 이중, 공명 등), 수소 결합 공여체 및 수령체 등의 돌출된 방향성을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
약물작용발생단 도식을 생성하는 데 유용한 전형적인 특징 성분으로는 원자 위치; 원자 반경; 수소 결합 공여체 특징; 수소 결합 수령체 특징; 방향족 특징; 공여체 특징; 수령체 특징; 음이온 특징; 양이온 특징; 수령체 및 음이온 특징; 공여체 및 양이온 특징; 공여체 및 수령체 특징; 산성 및 음이온 특징; 소수성 특징, 수소 결합 방향성, 및 금속 리간드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다 (예를 들어, 실시예 4 참조). 이러한 특징은 예를 들어, 단일 원자에, 원자의 중심에, 또는 공간에 돌출된 방향 위치에 위치할 수 있다.
임의의 주어진 표적 생체분자에 대해 수많은 약물작용발생단 조회(query)가 디자인될 수 있다는 것이 고려된다. 이들 약물작용발생단 조회가 특히 테터링된, 불활성 형태를 유지하는 쪽으로, 이량체화 및 활성화와 관련된 부위의 표적 생체분자와 상호작용하는 소분자를 확인하는 데 유용할 것이라는 것이 추가로 고려된다.
이러한 모델링 및 조회를 달성하기 위한 예시적 공급원으로는 (약물작용발생단 조회 및 시각화를 제공하는) MOE (CGG), (도킹 및 점수화를 제공하는) 글리드(Glide) (슈뢰딘거(Schrodinger)), (화학적 구조 및 화학식을 비롯한 분자 정보를 조직화하는) 어코드 포 엑셀 (Accord for Excel) (악셀리즈 (Accelrys)), 및 (상업적 화합물의 라이브러리를 제공하는) ZINC 데이터베이스 (UCSF)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 면역계 단백질로부터의 약물작용발생단 생성을 위한 디자인 도구 - 표적 생체분자 구조적 결합 특징화는 MOE, 또는 분자 작동 환경(Molecular Operating Environment) (케미컬 컴퓨팅 그룹(Chemical Computing Group))이다. 모델 생성은 면역계 단백질에 상응하는 특징의 3D 위치를 측정하기 위해 기하학적 및 전자적 제약을 사용한다. 이들 실시양태의 모델은 3D 공간에서 구형의 특징으로 구성된다. 구의 직경은 조절될 수 있다 (예를 들어, 약 0.5 내지 약 3.0 Å). 이러한 모델을 통해 특징의 매칭 및/또는 부분적 매칭이 가능하다.
약물작용발생단 구조적 특징은 공간에서의 표지 지점으로 나타낼 수 있다. 각 리간드는 리간드의 약물작용발생단에 기여할 수 있는 구조적 특징의 한 세트인 주석으로 지정될 수 있다 (예를 들어, 실시예 4 참조). 다양한 실시양태에서, 주석이 달린 리간드의 데이터베이스는 약물작용발생단 가설을 나타내는 조회로 조사될 수 있다 (예를 들어, 실시예 5 참조). 이러한 조사의 결과는 조회의 약물작용발생단 특징을 조사된 데이터베이스의 리간드에 존재하는 약물작용발생단 특징에 대해 정렬하는 매칭의 한 세트이다 (예를 들어, 실시예 5, 표 8 참조). 데이터베이스 내의 히트의 수는 적어도 부분적으로는 데이터베이스의 크기 및 약물작용발생단 조회의 한계성 (예를 들어, 부분적 매칭, 특징 수 등)에 의존한다. 조사 데이터베이스 내에 존재하는 분자의 특성 및 파라미터는 조회의 결과에 초점을 맞추는 데 사용된다. 예를 들어, 정의된 범위의 분자량 (MW) 또는 친유성 (logP)을 가진 화합물은 화합물의 라이브러리 데이터베이스의 조사된 섹션에 존재할 수 있다.
후보 분자
본 대상 방법은 다양한 상이한 후보 분자 (예를 들어, 잠재적 치료 후보 분자)의 스크리닝에서의 용도가 발견된다. 상기 기재된 바와 같이, 후보 분자는 약물작용발생단 조회를 사용하여 조사될 수 있다. 후보 분자는 수많은 화학적 부류를 포함하나, 전형적으로 이들은 유기 분자, 바람직하게는 분자량이 50 달톤 초과 내지 약 2,500 달톤 미만인 소형 유기 화합물이다. 후보 분자는 단백질과의 구조적 상호작용, 특히 수소 결합을 위한 관능기를 포함할 수 있고, 적어도 아민, 카르보닐, 히드록실 또는 카르복실 기, 바람직하게는 상기 화학적 관능기 중 적어도 2개를 포함할 수 있다. 후보 분자는 상기 관능기 중 하나 이상에 의해 치환된 시클릭형 탄소 또는 헤테로시클릭 구조 및/또는 방향족 또는 폴리방향족 구조를 포함할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 후보 분자는 화합물의 라이브러리 데이터베이스에 속한 화합물이다. 당업자는 일반적으로 예를 들어, 스크리닝용의 상업적으로 입수가능한 화합물에 대한 수많은 데이터베이스에 대해 잘 알고 있을 것이다 (예를 들어, 분자의 12개의 별개의 하위세트 상의 270 만개의 화합물을 가진 ZINC 데이터베이스, UCSF; 문헌 [Irwin and Shoichet (2005) J Chem Inf Model 45, 177-182] 참조). 당업자는 추가 시험을 위한 상업적 공급원 또는 바람직한 화합물 및 화합물의 부류의 확인을 위한 다양한 검색 엔진에 대해서도 잘 알고 있을 것이다 (예를 들어, ZINC 데이터베이스; eMolecules.com; 및 업체에 의해 제공된 상업적 화합물의 전자적 라이브러리, 예를 들어: 켐브릿지(ChemBridge), 프린스톤 바이오몰레큘라 (Princeton BioMolecular), 암빈터(Ambinter) SARL, 엔아민(Enamine), ASDI, 라이프 케미칼즈(Life Chemicals) 등 참조).
본원에 기술된 방법에 따른 스크리닝을 위한 후보 분자로는 리드-유사 화합물 및 약물-유사 화합물 둘 모두를 포함한다. 리드-유사 화합물은 일반적으로 상대적으로 특징이 더 적으며 (예를 들어, 약 3개 미만의 수소 공여체 및/또는 약 6개 미만의 수소 수령체; 약 -2 내지 약 4의 xlogP 소수성 특징), 상대적으로는 더 소형인 스캐폴드-유사 구조 (예를 들어, 약 150 내지 약 350 D 의 분자량)를 가지는 것으로 이해된다 (예를 들어, 문헌 [Angewante (1999) Chemie Int. ed. Engl. 24, 3943-3948] 참조). 대조적으로, 약물-유사 화합물은 일반적으로 상대적으로 보다 많은 특징 (예를 들어, 약 10개 미만의 수소 수령체 및/또는 약 8개 미만의 회전성 결합; 약 5 미만의 xlogP 소수성 특징)을 가진 상대적으로 더 큰 스캐폴드 (예를 들어, 약 150 내지 약 500 D의 분자량)를 가지는 것으로 이해된다 (예를 들어, 문헌 [Lipinski (2000) J. Pharm. Tox. Methods 44, 235-249] 참조). 바람직하게는, 초기 스크리닝은 리드-유사 화합물로 수행된다.
공간 배향 데이타로부터 리드를 디자인하는 경우, 특정 분자 구조가 "약물-유사"인 것으로 특징화된 것을 이해하는 것이 유용할 수 있다. 이러한 특징화는 약전 내의 공지된 약물의 범위에 걸쳐 유사성을 비교함으로써 유도된 실험상으로 인식된 성질의 세트를 기초로 할 수 있다. 약물이 이러한 특징들 모두를, 또는 심지어는 그 중 임의의 것을 충족시킬 필요는 없지만, 약물 후보가 약물-유사일 경우, 임상적 성공을 충족시킬 가능성은 훨씬 더 크다.
이들 "약물-유사" 특징 중 몇몇은 리핀스키(Lipinski)의 4 법칙으로 요약되어 있다 (이들 중 숫자 5로 보급되어 있는 바, "5의 법칙"이라고 일반적으로 공지되어 있다). 이들 법칙은 일반적으로 경구 흡수에 관한 것이며, 리드 최적화 도중 화합물의 생체이용률을 예측하는 데 사용되며, 이들은 합리적 약물 디자인 노력 중 리드 분자의 구축에 효과적인 가이드라인으로서의 역할을 할 수 있으며, 예를 들어, 본 발명의 방법을 사용함으로써 달성될 수 있다 .
4가지 "5의 법칙"은 후보 약물-유사 화합물이 하기 특징 중 3가지 이상을 가져야 한다고 언급한다: (i) 500 달톤 미만의 중량; (ii) 5 미만의 logP; (iii) 5개 이하의 수소 결합 공여체 (OH 및 NH 기의 합으로 표현된다); 및 (iv) 10개 이하의 수소 결합 수령체 (N 및 O 원자의 합). 또한, 약물-유사 분자는 전형적으로 약 8 Å 내지 약 15 Å의 범위 (폭)를 가진다. 후보 분자, 심지어는 선택되는 분자가 이러한 특징들 모두를, 또는 심지어는 그 중 임의의 것을 충족시키지 못할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 그럼에도 불구하고, 상기 가이드라인은 약물 스크리닝 및 디자인에 도움이 된다.
상기 설명된 바와 같이, 약물작용발생단에 대해 히트로서 확인되는 분자의 개수는 적어도 부분적으로는 데이터베이스의 크기 및 약물작용발생단 조회의 제한성에 따라 달라진다. 약물작용발생단 조회로부터 히트로서 확인되는 분자의 개수는 표적 생체분자의 결합 부위에의 피트를 추가로 모델링함으로써 감소될 수 있다. 이러한 모델링은 하기 기술되는 도킹 및 점수화 방법에 따라 수행될 수 있다.
도킹 및 점수화
(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 약물작용발생단 조회를 통해) 약물작용발생단 모델과 비교하여 표적 생체분자의 특정의 특징에 상보적인 것으로 확인된 후보 분자는 표적 생체분자에 대한 도킹 친화도에 따라 추가로 선택될 수 있다 (예를 들어, 실시예 5 참조). 데이터베이스 조회에 대한 약물작용발생단 모델 생성 이외에도, 화합물 확인 및 디자인을 위한 제2의 순차적 및 상보적 방법이 사용될 수 있다. 약물작용발생단 조회는 화합물을 빠르게 걸러낼 수 있으며, 도킹 및 점수화는 리간드-표적 생체분자 결합을 보다 정확하게 평가할 수 있다. 단백질 또는 효소 표적 생체분자의 경우, 불활성 형태의 상이한 도메인의 아미노산 잔기가 도킹 부위를 정의하는데 사용될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 약물작용발생단 조회로부터 선택된 화합물은 이러한 분석을 위해 디자인된 소프트웨어 (예를 들어, 글리드(슈뢰딘거: 미국 뉴욕))를 사용하여 표적 결합 부위로 도킹된다. 도킹 친화도는 예를 들어, 단백질과 분자의 상호작용시 획득되는 에너지 (예를 들어, "g_점수 ") 및/또는 최저 에너지 형태에 비해 도킹된 형태를 얻는데 필요한 에너지 (예를 들어, "e_모델")를 기초로 수치 (예를 들어, "글리드 점수")로서 계산될 수 있다 (예를 들어, 실시예 5 참조). 이들 특정 예의 경우, 점수가 보다 음의 값이 될수록 도킹은 더 잘 일어난다. 바람직하게는, g_점수는 약 -5 미만이다. 바람직하게는, e_모델 점수는 약 -30 미만이다. 도킹의 바람직한 수치적 정량화는 상이한 표적 생체분자 간에 달라질 수 있는 것이 고려된다.
다양한 실시양태에서, 역치 도킹 점수 (예를 들어, g_점수 및/또는 e_모델 점수)는 획득 및 추가 시험을 위해 분자 개수를 관리하도록 선택될 수 있다. 예를 들어, 일부 도킹 연구에서, -5.0 (또는 음의 방향으로 더 큰 값)인 g_점수가 바람직한 도킹 점수인 것으로 간주되며, 컷 오프는 그에 따라 조절된다. 또 다른 일례로서, 일부 도킹 연구에서, -7.5 (또는 음의 방향으로 더 큰 값)인 g_점수가 바람직한 도킹 점수인 것으로 간주되며, 컷 오프는 그에 따라 조절된다. 따라서, g_점수의 크기는 획득되고 시험될 수 있는 실행가능한 수로 히트의 개수를 조절하는 데 사용될 수 있다. 일례로, 약물작용발생단 조회로부터 확인된 화합물의 총 개수가 약 1,000 내지 약 3,000개인 경우, 도킹 점수는 추가 시험을 위해 약 100 내지 약 200개를 선택하도록 이러한 화합물을 등급화하는데 사용될 수 있다. 추가 시험을 위해 선택되는 화합물의 개수는 이들 추정치보다 낮거나 또는 높을 수 있다는 것이 고려된다. 바람직하게는, g_점수의 크기가 선택 기준으로서 사용되지만, 특히 e_모델 점수가 크기가 낮은 경우, e_모델 점수가 유사하게 사용될 수 있다는 것이 고려된다. 선택 기준은 g_점수 및 e_모델 점수를 기초로 할 수 있고, 바람직하게는 g_점수에 가중화될 수 있다는 것이 추가로 고려된다.
도킹 및 점수화를 통해 다중 형태를 가지는 화합물의 군을 얻을 수 있다. 적합한 모델링 소프트웨어 (예를 들어, MOE)를 사용하여, 3D 구조를 2D로 전환할 수 있으며, 이에 의해 중복을 제거할 수 있다. 바람직한 화학적 구조에 대해 작성된 목록은 예를 들어, 이러한 작업을 위해 디자인된 검색 엔진을 사용하여 상업적 업체에 대한 조사에 사용될 수 있다 (예를 들어, eMolecules.com).
표적 생체분자에 대한 효과
약물작용발생단 조회에 따라 선택되고/거나 도킹 분석에 따라 추가로 선택된 후보 분자는 표적 생체분자에 대한 효과에 대해 시험될 수 있다. 생체분자 기능에 대한 분자의 효과 (예를 들어, 효소 활성의 억제)의 평가는 당업계에 공지된 각종 방법에 의해 평가될 수 있다 (예를 들어, 실시예 1-3 참조). 예를 들어, 표적 효소의 촉매 활성에 대한 후보 분자의 억제 효과는 표적 효소에 특이적인 공지된 활성 검정에 의해 평가될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Reymond, ed. (2006) Enzyme Assays: High-throughput Screening, Genetic Selection and Fingerprinting, John Wiley & Sons, 386 p., ISBN-10: 3527310959]; [Eisenthall and Danson, Ed. (2002) Enzyme Assays, 2d edition, Oxford University Press, 384 p., ISBN-10: 0199638209] 참조). 본원에 기술된 바, 세포내 웨스턴 (ICW) 스크리닝 프로토콜은 후보 화합물을 평가하는 데 사용될 수 있다 (예를 들어, 실시예 1; 문헌 [Chen et al. (2005) Analytical Biochemistry 338, 136-142] 참조). 또한, 본원에 기술된 바, MTT 세포 증식 검정도 후보 화합물을 평가하는 데 사용될 수 있다 (예를 들어, 실시예 2 참조). 또한, 본원에 기술된 바, EGF 억제제 검정도 후보 화합물을 평가하는 데 사용될 수 있다 (예를 들어, 실시예 3; 문헌 [Mukku (1984) J. Biol. Chem. 259, 6543-6546]; [Duh et al. (1990) World J. Surgery 14, 410-418]; [Lokeshwar et al. (1989) J. Biol. Chem. 264(32), 19318-19326] 참조).
추가 정밀화
후보 분자를 추가로 정밀화할 수 있다. 예를 들어, 리드-유사 분자 및/또는 약물-유사 분자를 추가로 정밀화하도록 하기 위해 생물학적 검정으로부터 얻은 데이터를 도킹 모델과 상호관련시킬 수 있다. 각종 소프트웨어 패키지 (예를 들어, MOE)는 새로운 디자인에 의한 변형에 적합한 주형 상에 위치하는 부위를 확인하기 위해 표적 생체분자와 활성 화합물의 상호작용을 시각화에 하는 데 사용될 수 있다. 활성 화합물의 유사체는 유사성 및 서브구조 조사를 사용하여 확인될 수 있다 (예를 들어, 사이파인더(SciFinder); 이모델(eModel) 참조). 이용가능한 유사체는 상기 기술된 도킹 및 점수화 절차에 따라 분석될 수 있다. 바람직한 도킹 점수를 가지는 유사체가 획득될 수 있으며, 상기 기술된 방법에 따라 표적 생체분자에 대한 생물학적 효과에 대해 추가로 시험될 수 있다. 당업자는 본원에 제공된 방법에 의해 확인된 후보 분자의 정밀화 및 추가 개발을 위한 이들 및 다른 방법에 대해 이해할 것이다.
약물작용발생단
본원에서는 실질적으로 EGFR의 비-확장된 테터 불활성 형상을 유지시킬 수 있거나, 실질적으로 EGFR의 확장된 테터 활성 형상의 안정화를 방지할 수 있는 소분자를 확인하는 데 사용될 수 있는 일련의 약물작용발생단을 제공한다. 약물작용발생단은 도식 I 약물작용발생단 (AD4-1505-유사)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
도식 I 약물작용발생단 (AD4-1505-유사)
도식 I 약물작용발생단 (AD4-1505-유사)은 관능기 F(I)1, F(I)2, F(I)3, F(I)4, F(I)5, F(I)6, F(I)7, F(I)8, 및 F(I)9를 포함할 수 있다.
관능기 F(I)1은 서열 1의 수용체 Asp553의 카르복실레이트 측쇄에 H-결합을 공여하거나, 그에 대해 염 가교를 형성하고, 그의 좌표는 r = 56.363, θ (쎄타) = 94.368, 및 φ (파이) = -17.752이고, 구 반경은 약 1.2 Å이다.
관능기 F(I)2는 서열 1의 수용체 Thr570의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 53.290, θ (쎄타) = 101.494, 및 φ (파이) = -23.244이고, 구 반경은 약 1.0 Å이다.
관능기 F(I)3은 서열 1의 수용체 Val568의 측쇄와, 수용체 His566의 이미다졸 측쇄와, 및 수용체 Pro552의 이미다졸리딘 고리과 소수성 접촉을 형성하고, 그의 좌표는 r = 53.726, θ (쎄타) = 97.830, 및 φ (파이) = -18.378이고, 구 반경은 약 1.7 Å이다.
관능기 F(I)4는 서열 1의 수용체 Asp563의 측쇄 카르복실레이트에 H-결합을 공여하거나, 그에 대해 염 가교를 형성하고, 그의 좌표는 r = 56.103, θ (쎄타) = 99.536, 및 φ (파이) = -21.080이고, 구 반경은 약 1.2 Å이다.
관능기 F(I)5는 서열 1의 수용체 Pro572의 이미다졸린 고리 및 Met253의 측쇄와 소수성 접촉을 형성하고, 그의 좌표는 r = 53.647, θ (쎄타) = 103.844, 및 φ (파이) = -20.990이고, 구 반경은 약 1.4 Å이다.
관능기 F(I)6은 서열 1의 수용체 Cys571의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 51.088, θ (쎄타) = 104.241, 및 φ (파이) = -25.552이고, 구 반경은 약 1.2 Å이다.
관능기 F(I)7은 서열 1의 수용체 Cys571의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 52.340, θ (쎄타) = 103.980, 및 φ (파이) = -27.461이고, 구 반경은 약 1.5 Å이다.
관능기 F(I)8은 서열 1의 Ala573의 수용체 골격 NH로부터의 H-결합을 수용하고, 그의 좌표는 r = 51.383, θ (쎄타) = 106.455, 및 φ (파이) = -24.319이고, 구 반경은 약 1.2 Å이다.
관능기 F(I)9는 서열 1의 Ala573의 수용체 골격 NH로부터의 H-결합을 수용하고, 그의 좌표는 r = 52.861, θ (쎄타) = 107.692, 및 φ (파이) = -25.447이고, 구 반경은 약 1.5 Å이다.
선택된 후보 화합물은 실질적으로 관능기 F(I)1, F(I)2, F(I)3, F(I)4, F(I)5, F(I)6, F(I)7, F(I)8, 및 F(I)9 중 적어도 하나와 정렬될 수 있다. 예를 들어, 선택된 후보 화합물은 관능기 F(I)1, F(I)2, F(I)3, F(I)4, F(I)5, F(I)6, F(I)7, F(I)8, 및 F(I)9 중 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상과 실질적으로 정렬될 수 있다. 바람직하게, 선택된 후보 화합물은 실질적으로 관능기 F(I)1, F(I)2, F(I)3, F(I)4, F(I)5, F(I)6, F(I)7, F(I)8, 및 F(I)9 중 6개 이상과 정렬될 수 있다.
한 측면은 도식 I을 포함하는 약물작용발생단을 입력값으로서 3차원 데이터베이스에 제공하는 단계; 후보 화합물의 3차원 구조를 약물작용발생단의 3차원 구조와 비교하는 단계; 6개 이상의 도식 I (ADS-1505-유사)의 관능기와 실질적으로 정렬되는 3차원 구조를 가진 후보 화합물을 선택하는 단계를 포함하며; 여기서, 후보 화합물의 3차원 구조와 약물작용발생단의 3차원 구조가 서로 유사하다면, 이는 실질적으로 EGFR의 테터링된 불활성 형상을 유지시킴으로써, 또는 실질적으로 EGFR의 언테터링된 활성 형상의 안정화를 방지함으로써 EGFR을 억제시킬 수 있는 능력을 후보 화합물이 가지고 있음을 시사하는 것인, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 억제제를 확인하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 방법은 추가로 불활성 형태에서 EGFR의 도메인 II와 도메인 IV의 테터링된 형상을 안정화시키는 것과 관련된 EGFR의 원자의 적어도 한 부분의 정체 및 공간 배향을 결정하는 단계; 및 약물작용발생단 구조적 특징이 불활성 EGFR 형상에 상보적이 되도록 불활성 형태의 EGFR의 도메인 II와 도메인 IV의 테터링된 형상을 안정화시키는 것과 관련된 EGFR의 원자의 적어도 한 부분의 정체 및 공간 배향을 모방하는 복수개의 약물작용발생단 특징을 포함하는 약물작용발생단을 구축하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 불활성 형태의 EGFR의 도메인 II와 도메인 IV의 테터링된 형상을 안정화시키는 것과 관련된 EGFR의 원자의 적어도 한 부분의 정체 및 공간 배향을 결정하는 단계는 불활성, 테터링된 형태에서 EGFR의 결정질 형태로부터 도출된 X선 결정학상의 데이터에 대한 분석을 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 약물작용발생단 특징은 테터링된 불활성 형태의 EGFR의 도메인 II의 원자의 적어도 한 부분의 정체 및 공간 배향을 모방한다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 약물작용발생단 특징은 테터링된 불활성 형태의 EGFR의 도메인 II와 도메인 IV 사이의 틈새부 영역의 원자의 적어도 한 부분의 정체 및 공간 배향을 모방한다.
일부 실시양태에서, 본 방법은 추가로 불활성 형태의 EGFR의 도메인 II와 도메인 IV의 테터링된 형상을 안정화시키는 것과 관련된 EGFR의 원자의 적어도 한 부분에 대한 후보 분자의 도킹 친화도를 결정하는 단계를 추가로 포함하며; 여기서 도킹 친화도는 표적 생체분자와 후보 분자의 상호작용시 획득되는 에너지, 최저 에너지 형태에 비해 도킹된 형태를 얻는데 필요한 에너지, 또는 그의 조합에 의해 정량화된다.
화합물
본 발명의 또 다른 측면은 본원에 기술된 방법에 의해 확인된 소분자 화합물을 포함한다. 본원에 기술된 화합물은 예를 들어, 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 데 유용한 항증식성 효과를 가질 수 있다. 본원에 기술된 화합물은 그의 정체를 밝혀준 표적 생체분자와 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 데 유용할 수 있다. 본원에 기술된 화합물에 관한 다양한 실시양태는 다중 도메인 단백질을 테터링된, 불활성 상태로 유지시킬 수 있다. 예를 들어, 종양학에서는 성장 인자 단백질을 억제시키는 것이 특정 상태를 치료하는 데 유익할 수 있다는 것이 주지되어 있다. 또 다른 일례로서, 하기에서 추가로 논의되는 바와 같이, EGFR을 억제시키는 것이 EGFR과 관련된 특정 상태를 치료하는 데 유익하다. 본원에 기술된 화합물은 예를 들어, EGFR과 관련된 증식성 질환 또는 장애를 치료하는 데 유용한 EGFR 억제성 효과를 가질 수 있다. 본원에 기술된 화합물은 증식성 질환 및 상태를 치료하는 데 있어 실험상 효과가 있는 것으로 입증되었다.
본원에 기술된 약물작용발생단적 접근법 (예를 들어, 실시예 4 참조)을 통해 AD4-1505를 비롯한 다양한 화합물이 EGFR 억제제인 것으로 확인되었다. 그러한 화합물, 및 그의 유도체는 증식성 질환 또는 상태 치료용의 치료제로서의 유용성을 가진다. 예를 들어, 본원에 기술된 화합물은 EGFR-관련 질환, 장애, 또는 상태 치료용의 치료제로서 사용될 수 있다. 상기 화합물의 유사체 및 유도체는 동일하거나 유사한 항증식성 효과 및 유용성을 가지는 것으로 기대된다 (예를 들어, 실시예 5 참조). 확인된 화합물 및 그의 유사체 및 유도체는 하기에서 추가로 논의된다.
근본적 메카니즘을 제공해야 할 어떤 의무도 없으며, 그렇게 함으로써 결코 본 발명을 제한하지 않으면서, 현재 본원에 기술된 화합물의 활성의 적어도 일부는 EGFR 억제에서 발생하는 것으로 여겨진다. 본 기술된 화합물은 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료할 때 그의 효능에 있어 추가의 작용 모드를 가질 수 있는 것이 추가로 고려된다. 근본적 메카니즘과는 상관없이, 본원에 기술된 화합물은 증식성 질환 및 상태를 치료함에 있어 실험상 효과가 있는 것으로 입증되었다.
본 개시내용을 보다 잘 정의하기 위해 하기 정의를 제공한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어는 종래 용법에 따라 관련 분야의 통상의 숙련가가 이해하는 것으로 한다.
달리 구체적으로 제한되지 않는 한, "알킬"이라는 표현은 C1 -12 알킬 기, 적합하게는, C1 -6 알킬 기, 예를 들어, C1 -4 알킬 기를 의미한다. 알킬 기는 직쇄 또는 분지형일 수 있다. 적합한 알킬 기로는 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필 (예를 들어, n-프로필 및 이소프로필), 부틸 (예를 들어, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸 및 tert-부틸), 펜틸 (예를 들어, n-펜틸), 헥실 (예를 들어, n-헥실), 헵틸 (예를 들어, n-헵틸) 및 옥틸 (예를 들어, n-옥틸)을 포함한다. 예를 들어, "알콕시," "할로알킬" 및 "티오알킬"이라는 표현에서 "알크"라는 표현은 "알킬"의 정의에 따라 해석되어야 한다. 예시적인 알콕시 기로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시 (예를 들어, n-프로폭시), 부톡시 (예를 들어, n-부톡시), 펜톡시 (예를 들어, n-펜톡시), 헥속시 (예를 들어, n-헥속시), 헵톡시 (예를 들어, n-헵톡시) 및 옥톡시 (예를 들어, n-옥톡시)를 포함한다.
달리 구체적으로 제한되지 않는 한, "시클로알킬"이라는 표현은 C3-10 시클로알킬 기 (즉, 3 내지 10개의 고리 탄소 원자), 더욱 적합하게, C3-8 시클로알킬 기, 예를 들어, C3 -6 시클로알킬 기를 의미한다. 예시적인 시클로알킬 기로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸을 포함한다. 고리 탄소 원자의 바람직한 개수는 3 내지 6개이다.
달리 구체적으로 제한되지 않는 한, "아릴"이라는 표현은 C6 -12 아릴 기, 적합하게, C6 -10 아릴 기, 더욱 적합하게, C6 -8 아릴 기를 의미한다. 아릴 기는 적어도 하나의 방향족 고리 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 고리)를 함유할 것이다. 방향족 고리 1개를 가진 전형적인 아릴 기의 예로는 페닐이 있다. 방향족 고리 2개를 가진 전형적인 아릴 기의 예로는 나프틸이 있다.
달리 구체적으로 제한되지 않는 한, "헤테로아릴"이라는 표현은 하나 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개, 적합하게 1, 2 또는 3개) 고리 원자가 N, S 및 O로부터 선택된 헤테로원자에 의해 치환된 아릴 잔기, 또는 그렇지 않다면, N, S 및 O로부터 선택된 하나 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개, 적합하게 1, 2 또는 3개) 고리 원자를 함유하는 5원 방향족 고리를 의미한다. 헤테로원자 1개를 포함하는 모노시클릭 헤테로아릴 기의 예로는 5원 고리 (예를 들어, 피롤, 푸란, 티오펜); 및 6원 고리 (예를 들어, 피리딘, 예를 들어, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일 및 피리딘-4-일)을 포함한다. 헤테로원자 2개를 포함하는 모노시클릭 헤테로아릴 기의 예로는 5원 고리 (예를 들어, 피라졸, 옥사졸, 이속사졸, 티아졸, 이소티아졸, 이미다졸, 예를 들어, 이미다졸-1-일, 이미다졸-2-일 이미다졸-4-일); 6원 고리 (예를 들어, 피리다진, 피리미딘, 피라진)을 포함한다. 헤테로원자 3개를 포함하는 모노시클릭 헤테로아릴 기의 예로는 1,2,3-트리아졸 및 1,2,4-트리아졸을 포함한다. 헤테로원자 4개를 포함하는 모노시클릭 헤테로아릴 기의 예로는 테트라졸을 포함한다. 예시적인 비시클릭 헤테로아릴 기로는 인돌 (예를 들어, 인돌-6-일), 벤조푸란, 벤즈티오펜, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 인다졸, 벤즈이미다졸, 벤즈티아졸, 퀴나졸린 및 퓨린을 포함한다.
포화 기란 일반적으로 이중 또는 삼중 결합을 가지지 않는 것으로 이해된다. 예를 들어, 선형 포화 탄화수소에서 각 탄소 원자는 2개의 수소 원자에 부착되어 있으며, 예외적으로, 쇄의 말단에 존재하는 탄소 원자는 3개의 수소 원자를 보유한다. 예를 들어, 불포화 탄화수소는 일반적으로 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 가지는 탄소 구조로서 이해된다.
"할로겐" 또는 "할로"라는 용어는 플루오린 (F), 염소 (Cl), 브로민 (Br), 또는 아이오딘 (I)을 포함한다.
"아미노"라는 용어는 -NH2 기를 의미한다.
청구하는 화합물의 모든 가능한 입체이성질체가 본 개시내용에 포함된다. 본원에 기술된 화합물이 적어도 하나의 키랄 중심을 가지는 경우, 이는 따라서 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 가지는 경우, 이는 추가로 부분입체이성질체로서 존재할 수 있다. 상기와 같은 이성질체 및 그의 혼합물 모두가 본 개시내용의 범주 내에 포함된다는 것을 이해하여야 한다.
유리 화합물과 그의 염 형태의 화합물 사이의 밀접한 관계를 고려하여, 본 문맥에서 화합물이 언급되는 경우에는 언제나, 상응하는 염이 해당 환경하에서 가능한 것이거나, 적절하다면, 이 또한 포함되는 것으로 한다. 제약상 허용되는 염은, 염기성 측쇄가 무기 산 또는 유기 산으로 양성자화된 것인 형태를 취할 수 있다. 대표적인 유기 산 또는 무기 산으로는 염산, 브로민산, 과염소산, 황산, 질산, 인산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 옥살산, 파모산, 2-나프탈렌술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클로헥산술팜산, 살리실산, 사카린산 또는 트리플루오로아세트산을 포함한다. 별법으로, 산성 측쇄가 금속 이온 (예를 들어, 나트륨, 칼륨 이온 등) 또는 다른 양성 이온, 예를 들어, 암모늄과 함께 염을 형성한 것인 형태를 취할 수 있다. 본원에 기술된 화합물의 모든 제약상 허용되는 산 부가염 형태가 본 개시내용의 범주 내에 포함되는 것으로 한다.
화합물의 결정질 형태 중 일부는 1 초과의 다형체 형태로 존재할 수 있고, 그러한 형태들 모두 본 개시내용에 포함되는 것으로 한다. 추가로, 화합물 중 일부는 물 (즉, 수화물), 또는 통상의 유기 용매와 함께 용매화물을 형성할 수 있고, 그러한 용매화물 또한 본 개시내용의 범주 내에 포함되는 것으로 한다. 그의 염을 비롯한 화합물 또한 그의 수화물 형태로 수득될 수 있거나, 또는 그의 결정화를 위해 사용되는 다른 용매를 포함한다.
본 개시내용은 추가로 그의 범주내 본원에 기술된 화합물의 전구약물을 포함한다. 일반적으로, 상기 전구약물은 생체내에서 치료학상의 활성을 띠는 원하는 화합물로 쉽게 전환될 수 있는 상기 화합물의 기능적 유도체가 될 것이다. 따라서, 이러한 경우, 본 발명의 치료 방법에서 "투여하는"이라는 용어는 대상체에게 투여된 후에는 생체내에서 상기 구체적으로 명시된 화합물로 전환되는, 청구된 화합물들 중 하나 이상의 화합물의 전구약물 버전에 의한, 기술된 각종 장애의 치료를 포함하는 것이다.
본원에서 사용되는 바, "조성물"이라는 용어는 치료학적 유효량으로 청구하는 화합물(들)을 포함하는 생성물 뿐만 아니라, 청구하는 화합물(들)의 조합으로부터 직접 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포함하는 것으로 한다.
AD4-1505는 표피 성장 인자의 그의 수용체에의 결합을 억제하는 억제제로서 확인된 것이다 (예를 들어, 실시예 4 참조).
<화학식 1>
Figure pct00001
AD4-1505
본원에 기술된 바, 약물작용발생단 모델을 사용하여 AD4-1505-유사인 소분자를 확인하였다.
A형 AD4 -1505-유사
AD4-1505-유사 약물작용발생단으로부터 유도된 한 구조는 하기와 같다.
<화학식 2>
Figure pct00002
상기 구조에서, 화학식 2의 X1은 하기 수소 원자, 2-메틸, 5-클로로, 5-니트로, 또는 6-히드록실 기로부터의 하나 이상의 관능기를 나타낼 수 있다.
화학식 2의 R1은 하기를 나타낼 수 있다:
하기 화학식 3의 2-피리딜 고리 (여기서, R23은 수소; 플루오로; 클로로; 트리플루오로메틸; 메틸; 에틸; 및 메톡시로 이루어진 군으로부터 선택되고; R3은 수소; 플루오로; 클로로; 메틸; 에틸; 메톡시; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 및 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)로 이루어진 군으로부터 선택되고; R24는 수소; 플루오로; 클로로; 및 트리플루오로메틸로 이루어진 군으로부터 선택되고: R4는 수소; 메틸; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 및 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)로 이루어진 군으로부터 선택된다);
<화학식 3>
Figure pct00003
하기 화학식 4의 3-피리딜 고리 (여기서, R5, R6, 및 R7은 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴, 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다))로 이루어진 군으로부터 선택된다) (예를 들어, AD4-12908, AD4-13051, AD4-13021, AD4-13021, AD4-13063, AD4-013064, AD4-13065, AD4-13066, AD4-13101));
<화학식 4>
Figure pct00004
하기 화학식 5의 4-피리딜 고리 (여기서, R8 및 R9는 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴, 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다))로 이루어진 군으로부터 선택된다);
<화학식 5>
Figure pct00005
비치환된 페닐 고리 또는 바람직하게 하기 기 중 하나 이상으로 치환된 페닐 고리: 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴, 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다)), 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 3,4-메틸렌디옥시, 2,3-메틸렌디옥시, 니트로 또는 할로겐 (F, Cl, Br, I); 또는
1 내지 4개의 N, O, S 원자를 함유하는 비치환된 헤테로아릴 5 또는 6원 고리, 또는 1 내지 4개의 N, O, S 원자를 함유하며, 하기 기 중 하나 이상의 것으로 정의되는 치환기로의 임의의 치환을 하나 이상 포함하는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리: 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴, 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다)).
R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리이고, R24는 클로로이거나, 또는 R23은 메틸인 경우, 생성된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조).
R1이 치환된 할로겐 및 알킬 기의 조합을 가진 화학식 3의 2-피리딜 고리인 경우, 생성된 화합물은 증가된 항증식성 활성을 보일 수 있다는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 예를 들어, R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리인 경우, 하기 치환이 증가된 항증식성 활성을 제공할 수 있다: R4가 수소이고, R24가 플루오로이고, R3이 수소이고, R23이 플루오로이거나; R4가 메틸이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 플루오로이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 에틸이고, R23이 플루오로이거나; R4가 수소이고, R24가 플루오로이고, R3이 메틸이고, R23이 플루오로이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 에틸이거나; R4가 메틸이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 클로로이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 메틸이고, R23이 플루오로이거나; R4가 수소이고, R24가 트리플루오로메틸이고, R3이 수소이고, R23이 수소이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 메틸이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 클로로이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 메틸이고, R23이 수소이거나; R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 클로로이고, R23이 수소이다 (실시예 10 참조).
R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리이고, R24는 클로로이고, 추가로 R3 또는 R23 중 하나 또는 그 둘 모두에 클로로 또는 메틸이 존재하는 경우, 생성된 화합물은 증가된 아폽토시스를 보일 수 있다는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 예를 들어, R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리인 경우, 하기 치환은 증가된 아폽토시스를 제공할 수 있다: R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 메틸이거나; R24가 클로로이고, R3이 메틸이고, R23이 플루오로이거나; R24가 클로로이고, R3이 클로로이고, R23이수소이고; 및 R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 클로로이다.
화학식 2의 R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리인 경우, 아미노피리딘의 R24에 있는 기가 배양된 간세포에서의 대사를 차단할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
바람직한 일례로, 화학식 2의 R1은 비치환된 2-(1,3-티아조일) 고리 (하기 화학식 6 참조) 또는 티아졸 고리의 4- 또는 5-위치에 기를 포함하는 2-(1,3-티아조일) 고리, 예를 들어, 2-(4,5-디메틸-1,3-티아조일 고리 (하기 화학식 7 참조)을 나타낼 수 있다:
<화학식 6>
Figure pct00006
2-(1,3- 티아조일 ) 고리 치환
<화학식 7>
Figure pct00007
2-(4,5-디메틸-1,3- 티아조일 ) 기
화학식 2의 R2는 하기를 나타낼 수 있다:
비치환된 페닐 고리, 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 페닐 고리: 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴, 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다)), 2,3-메틸렌디옥시 또는 3,4-메틸렌디옥시 기, 디알킬아미노 (-NR13R14 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소 원자 또는 앞서 기술된 것과 같은 저급 알킬 기로부터 선택된다); 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 3,4-메틸렌디옥시, 2,3-메틸렌디옥시, 니트로 또는 할로겐 (F, Cl, Br, I);
하기 화학식 8의 2-티오펜 고리 (여기서, R15, R16, 및 R17은 독립적으로 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 알콕시, 디알킬아미노, 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시 또는 상기 기술된 바와 같은 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
<화학식 8>
Figure pct00008
2-티오펜 고리 치환
하기 화학식 9의 3-티오펜 고리 (여기서, R18, R19, 및 R20은 독립적으로 저급 알킬, 시클로알킬, 알콕시, 디알킬아미노, 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시 또는 상기 기술된 바와 같은 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
<화학식 9>
Figure pct00009
3-티오펜 고리 치환
비치환된 2-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 4- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 2-피리딜 고리: 상기 기술된 바와 같은 저급 알킬 기, 상기 기술된 바와 같은 시클로알킬 기;
비치환된 3-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2-, 4-, 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 3-피리딜 고리: 상기 기술된 바와 같은 저급 알킬 기, 상기 기술된 바와 같은 시클로알킬 기; 또는
비치환된 4-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 4-피리딜 고리: 상기 기술된 바와 같은 저급 알킬 기, 상기 기술된 바와 같은 시클로알킬 기.
R2가 2- 및 4-위치에서 치환된 페닐 고리인 경우, 생성된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 예를 들어, R2가 4-트리플루오로메틸페닐; 2-플루오로,4-트리플루오로메틸페닐; 또는 2,4-디클로로페닐인 경우, 생성된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다 (실시예 10 참조).
R2가 할로겐 및 트리플루오로메틸 기의 조합으로 치환된 페닐 고리인 경우, 생성된 화합물은 증가된 항증식성 활성을 보일 수 있다는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 예를 들어, R2가 4-클로로페닐; 2-플루오로,4-트리플루오로메틸페닐; 3-플루오로,4-클로로페닐; 2-플루오로,4-클로로페닐; 2,3-디클로로페닐; 2,3,5-트리클로로페닐; 2,4-디클로로페닐; 3,4-디클로로페닐; 또는 3,5-디클로로페닐인 경우, 생성된 화합물은 증가된 항증식성 활성을 보일 수 있다 (실시예 10 참조).
R2가 4-위치에서 클로로로 치환되고, 추가로 2- 또는 3-위치에서 클로로 또는 플루오로로 치환된 페닐 고리인 경우, 생성된 화합물은 증가된 아폽토시스를 보일 수 있다는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 예를 들어, R2가 2,4-디클로로페닐 또는 2-클로로,4-플루오로페닐인 경우, 생성된 화합물은 증가된 아폽토시스를 보일 수 있다 (실시예 10 참조).
일부 실시양태에서, 화합물(들)은 화학식 2의 거울상이성질체적 이성질체이다.
일부 실시양태에서, 화학식 2의 화합물(들)은 하기 표 1-4에서 제공하는 R1 및 R2에 따른다:
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
일부 실시양태에서, 화학식 2의 화합물은 AD4-1505이다.
<화학식 1>
Figure pct00014
AD4-1505
일부 실시양태에서, 화학식 2의 화합물은 하기 표 5의 화합물로부터 선택된다.
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
일부 실시양태에서, 화학식 2의 화합물(들)은 화합물 AD4-1505, 화학식 1은 제외한다.
일부 실시양태에서, 화학식 2의 화합물(들)은 하기 화합물 중 하나 이상을 제외한다:
Figure pct00036
일부 실시양태에서, 예를 들어, 치유적 치료 방법의 경우, 화학식 2의 화합물(들)은 상기 화합물 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
B형 AD4 -1505-유사
AD4-1505-유사 약물작용발생단으로부터 유도된 또 다른 구조는 하기와 같다.
<화학식 10>
Figure pct00037
상기 구조에서, 화학식 10의 X1 및 R2는 구조 하위부류 A형, 화학식 2에 대하여 상기 정의된 바와 같다.
화학식 10의 R21은 하기를 나타낼 수 있다:
직쇄, 분지형, 또는 임의로 불포화를 함유하는 1 내지 6개의 탄소 (C-1 내지 C-6)를 포함하는 저급 알킬 기, 임의로 불포화를 함유하는 5 또는 6 지방족 고리 (C-1 내지 C-6)으로 정의되는 시클로알킬;
비치환된 페닐 고리, 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 페닐 고리: 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴, 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다)), 2,3-메틸렌디옥시 또는 3,4-메틸렌디옥시 기, 디알킬아미노 (-NR13R14 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소 원자 또는 앞서 기술된 것과 같은 저급 알킬 기로부터 선택된다); 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 3,4-메틸렌디옥시, 2,3-메틸렌디옥시, 니트로 또는 할로겐 (F, Cl, Br, I);
비치환된 2-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 4- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 2-피리딜 고리: 상기 기술된 바와 같은 저급 알킬 기, 상기 기술된 바와 같은 시클로알킬 기;
비치환된 3-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2-, 4-, 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 3-피리딜 고리: 상기 기술된 바와 같은 저급 알킬 기, 상기 기술된 바와 같은 시클로알킬 기;
비치환된 4-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 4-피리딜 고리: 상기 기술된 바와 같은 저급 알킬 기, 상기 기술된 바와 같은 시클로알킬 기; 또는
1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리.
일부 실시양태에서, 화합물(들)은 화학식 10의 거울상이성질체적 이성질체이다.
일부 실시양태에서, 화학식 10의 화합물은 AD4-10950이다.
Figure pct00038
AD4-10950
일부 실시양태에서, 화학식 10의 화합물은 AD4-10960이다.
Figure pct00039
AD4-10960
일부 실시양태에서, 화학식 10의 화합물(들)은 화합물 AD4-1505, 화학식 1은 제외한다.
C형 AD4 -1505-유사
AD4-1505-유사 약물작용발생단으로부터 유도된 또 다른 구조는 하기와 같다.
<화학식 11>
Figure pct00040
상기 구조에서, 화학식 11의 X1 및 R2는 구조 하위부류 A형, 화학식 2에 대하여 상기 정의된 바와 같다.
화학식 11의 R22는 직쇄, 분지형, 또는 임의로 불포화, 또는 C-1 또는 C-2 탄소에서 하기 치환기들 중 하나 이상의 것으로의 치환을 포함하는 1 내지 6개의 탄소 (C-1 내지 C-6)를 포함하는 저급 알킬 기; 비치환된 페닐 고리 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 하기 기 중 하나 이상의 것으로 치환된 페닐 고리를 나타낼 수 있다: 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4로 정의되는 저급 알킬, 임의로 불포화 또는 하나의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6으로 정의되는 시클로알킬, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 헤테로아릴, 히드록실 (-OH), 알콕시 (-OR10 (여기서, R10은 상기 정의된 저급 알킬 기 또는 시클로알킬 기로서 정의된 것이다)), 디알킬아미노 (-NR13R14 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소 원자 또는 앞서 기술된 것과 같은 저급 알킬 기로부터 선택된다)); 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 또는 할로겐 (F, Cl, Br, I).
시클로알킬은 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 5 또는 6 지방족 고리 (C-1 내지 C-6)로 정의된다.
일부 실시양태에서, 화합물(들)은 화학식 11의 거울상이성질체적 이성질체이다.
일부 실시양태에서, 화학식 11의 화합물(들)은 AD4-10535이다.
Figure pct00041
AD4-10535
일부 실시양태에서, 화학식 11의 화합물(들)은 화합물 AD4-1505, 화학식 1을 제외한다.
구조 및 기능
본원에 기술된 조성물은 하나 이상의 원하는 기능, 예를 들어, 하나 이상의 원하는 기능, 예를 들어, 안정성, 항증식성 활성, 및 아폽토시스 활성과 관련된 구조적 특징을 가질 수 있다.
본원에 기술된 화합물의 아미노피리딘의 5-위치에 존재하는 기가 안정성이 증가된 (예를 들어, 간 마이크로솜 인큐베이션에 대해 안정성이 보다 큰) 유사체를 제공하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 아미노피리딘의 5-위치에서 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다. 본원에서 제시한 바와 같이, (둘 모두 아미노피리딘의 5-위치에 염소 원자를 가지는) AD4-13053 및 AD4-13041은 AD4-10628에 비해 증가된 안정성을 나타낸다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 아미노피리딘의 5-위치에서 염소 원자로 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다.
본원에 기술된 화합물의 아미노피리딘 고리 상의 할로겐 및 알킬 기의 조합이 항증식성 활성이 증가된 화합물을 제공하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 하기 아미노피리딘 고리 치환을 포함하는 화합물이 증가된 항증식성 활성을 가진다: 3,5-디F; 3-F,5-CL,6-Me; 3-F,5-Cl,6-Me; 3-F,5-Cl,4-Et; 및 3,5-디F,4-Me. 일부 실시양태에서, 하기 아미노피리딘 고리 치환을 포함하는 화합물이 추가로 증가된 항증식성 활성을 제공한다:3-Et,5-Cl; 3,5-디Cl,6-Me; 3-F,5-Cl,4-Me; 및 5-CF3. 일부 실시양태에서, 하기 아미노피리딘 고리 치환을 포함하는 화합물은 한층더 추가의 증가된 항증식성 활성을 제공한다: 3-Me,5-Cl; 3,5-디Cl; 4-Me,5-Cl; 및 4,5-디Cl.
본원에 기술된 화합물의 아미노피리딘 고리의 5-위치에 존재하는 클로로 기, 및 본원에 기술된 화합물의 아미노피리딘 고리 상의 3- 또는 4-위치에 존재하는 추가의 클로로 또는 메틸 기는 증가된 아폽토시스 활성을 가진 화합물을 제공하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 아미노피리딘 고리 치환을 포함하는 화합물은 증가된 아폽토시스 활성을 제공한다: 3-Me,5-Cl; 3-F,5-Cl,4-Me; 4,5-디Cl; 및 3,5-디Cl.
본원에 기술된 화합물의 벤젠 고리의 2- 및 4-위치에 존재하는 기가 안정성이 증가된 (예를 들어, 간 마이크로솜 인큐베이션에 대해 안정성이 보다 큰) 유사체를 제공하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 화합물의 벤젠 고리의 2- 및 4-위치에서 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다. 본원에서 제시한 바와 같이, AD4-13041, AD4-13042, AD4-13165, 및 AD4-13206은 증가된 안정성을 나타낸다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 아미노피리딘의 벤젠 고리의 2- 또는 4-위치에서 할로겐 원자로 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다. 예를 들어, 아미노피리딘의 벤젠 고리의 2- 또는 4-위치에서 염소 원자로 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다. 또 다른 일례로서, 아미노피리딘의 벤젠 고리의 2- 또는 4-위치에서 플루오린 원자로 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다. 또 다른 일례로서, 아미노피리딘의 벤젠 고리의 4-위치에서 트리플루오로메틸로, 또는 2-위치에서 플루오린 원자 및 4-위치에서 트리플루오로메틸로 치환된 화합물은 증가된 안정성을 보일 수 있다.
본원에 기술된 화합물의 벤젠 고리 상의 할로겐 및 트리플루오로메틸 기의 조합은 항증식성 활성이 증가된 화합물을 제공하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 하기 벤젠 고리 치환을 가진 화합물이 증가된 항증식성 활성을 제공한다: 4-Cl; 2-F,4-CF3; 및 3-F,4-Cl. 일부 실시양태에서, 하기 벤젠 고리 치환을 가진 화합물이 추가로 증가된 항증식성 활성을 제공한다: 2-F,4-Cl; 2,3-디Cl; 및 2,3,5-트리Cl. 일부 실시양태에서, 하기 벤젠 고리 치환을 가진 화합물이 한층 더 증가된 항증식성 활성을 제공한다: 2,4-디Cl; 3,4-디Cl; 및 3,5-디Cl.
본원에 기술된 화합물의 벤젠 고리의 4-위치에 존재하는 클로로 기, 및 본원에 기술된 화합물의 벤젠 고리 상의 2- 또는 3-위치에 존재하는 추가의 클로로 또는 플루오로 기는 증가된 아폽토시스 활성을 가진 화합물을 제공하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, 하기 벤젠 고리 치환을 가진 화합물이 증가된 아폽토시스 활성을 제공한다: 2,4-디Cl (예를 들어, AD4-13130, AD4-13178 참조); 및 2-Cl,4-F (예를 들어, AD4-13185 참조).
합성
한 측면은 본원에 기술된 화합물의 합성 방법을 제공한다.
AD4 -1505-유사 화합물
본원에서 제시하는 바와 같이, AD4-1505-유사 화합물은 아미노 피리딘 중간체 화합물, 알데히드 중간체 화합물 및 히드록시퀴놀린을 반응시킴으로써 합성될 수 있다 (실시예 12 참조). 중간체 화합물의 합성 방법 또한 본원에 기술되어 있다 (실시예 11 참조).
일부 실시양태에서, 반응은 에탄올 (예를 들어, 무수 에탄올) 중에서 아미노 피리딘 중간체 화합물, 알데히드 중간체 화합물 및 히드록시퀴놀린을 혼합하는 것을 포함할 수 있다.
아미노 피리딘 중간체 화합물은 본원에 기술된 AD4-1505-유사 화합물의 아미노피리딘 고리에 상응하는 관능기를 가질 수 있다. 예를 들어, 2-아미노-6-피콜린의 아미노 피리딘 중간체 화합물이 AD4-12902 (여기서, 화학식 2의 R1은 화학식 3의 2-피리딜 고리이고, R4는 메틸이고, R24, R3, 및 R23은 수소이다)의 합성에 사용될 수 있다 (실시예 12 참조). 제공된 실시예 11 및 실시예 12의 지침을 가지고, 당업계의 숙련가는 화학식 2의 AD4-1505-유사 화합물에 대한 아미노 피리딘 중간체 화합물의 구조를 결정할 수 있다. 아미노 피리딘 중간체 화합물의 합성은 실시예 11에 따라 수행될 수 있다.
알데히드 중간체 화합물은 본원에 기술된 AD4-1505-유사 화합물의 벤즈알데히드 유도 고리에 상응하는 관능기를 가질 수 있다. 예를 들어, 알데히드 중간체 화합물 4-트리플루오로메톡시벤즈알데히드는 AD4-12902 (화학식 2의 R2가 위치 1에서 -CHO (즉, 벤즈알데히드)로 치환되고, 위치 4에서 트리플루오로메톡시로 치환된 페닐 고리이다)의 합성에 사용될 수 있다 (실시예 12 참조). 제공된 실시예 11 및 실시예 12의 지침을 가지고, 당업계의 숙련가는 화학식 2의 AD4-1505-유사 화합물에 대한 알데히드 중간체 화합물의 구조를 결정할 수 있다. 알데히드 중간체 화합물의 합성은 실시예 11에 따라 수행될 수 있다.
히드록시퀴놀린 중간체 화합물은 AD4-1505-유사 화합물의 히드록시퀴놀린 부분에 상응하는 관능기를 가질 수 있다. 예를 들어, 히드록시퀴놀린 중간체 화합물 8-히드록시퀴놀린은 AD4-12902 (여기서, 화학식 2의 X는 수소이다)의 합성에 사용될 수 있다 (실시예 12 참조). 예를 들어, 히드록시퀴놀린 중간체 화합물 5-클로로-8-히드록시퀴놀린은 AD4-12910 (여기서, 화학식 2의 X는 5-클로로이다)의 합성에 사용될 수 있다 (실시예 12 참조). 제공된 실시예 11 및 실시예 12의 지침을 가지고, 당업계의 숙련가는 화학식 2의 AD4-1505-유사 화합물에 대한 히드록시퀴놀린 중간체 화합물의 구조를 결정할 수 있다. 히드록시퀴놀린 중간체 화합물은 상업적으로 수득될 수 있거나, 당업계에 공지된 방법에 따라 합성될 수 있다.
반응은 용매 중에서, 예를 들어, 알콜 용매 중에서 발생될 수 있다. 예를 들어, 반응은 에탄올, 이소프로판올, 또는 부탄올 (예를 들어, n-부탄올, tert-부탄올, sec-부탄올, 이소부탄올) 중에서 발생될 수 있다. 용매는 무수이거나, 또는 예를 들어, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 99%의 순도를 가진 일부 순수한 것일 수 있다. 반응은 용매의 부재, 또는 실질적인 부재하에서 발생될 수 있다. 하나 이상의 중간체는 실온에서, 또는 실온보다 높은 온도의 일부 온도에서 액체일 수 있다. 하나 이상의 중간체가 액체로 존재하는 온도보다 높은 온도에서 반응이 발생하는 경우, 반응은 추가의 용매 없이도 발생될 수 있다. 예를 들어, 아미노 피리딘 중간체 화합물, 알데히드 중간체 화합물 및 히드록시퀴놀린 (이 중 적어도 하나는 반응 온도에서 액체이다)을 용매의 부재, 또는 실질적인 부재하에서 혼합할 수 있고, 이에 따라 반응이 진행될 수 있다. 또 다른 일례로, 적어도 하나의 중간체가 50℃ 이상에서 액체일 경우, 반응은 용매의 부재, 또는 실질적인 부재하에 적어도 50℃의 온도에서 발생할 수 있다.
반응은 실온에 가까운 온도에서 발생할 수 있다. 반응은 일정 기간 동안 (예를 들어, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 또는 약 20일 또는 그 초과) 성분을 혼합 (예를 들어, 교반)하는 것을 포함할 수 있다.
반응 생성물(들)의 단리 및 정제는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 수행될 수 있다. 예를 들어, 반응 생성물의 단리 및 정제는 반응 혼합물로부터의 결정화, 용매 분획 (예를 들어, 헥산/에틸 아세테이트; 헥산/아세톤)으로부터의 결정화는 증발 농축, 분별 증류, 여과, 칼럼 크로마토그래피 (예를 들어, 실리카 겔 고정상), 고성능 액체 크로마토그래피, 또는 그의 조합에 따라 수행될 수 있다. 반응 생성물의 단리 및 정제는 실시예 12에 기술된 프로토콜에 따라 수행될 수 있다.
상기 반응은 실시예 12-13에 개시된 임의의 조건, 또는 조건의 조합을 포함할 수 있다.
아미노피리딘 중간체 화합물
또 다른 측면은 아미노피리딘 중간체 화합물 및 그의 제조 방법이다. 아미노피리딘 중간체 화합물은 본원에 기술된 AD4-1505-유사 화합물의 아미노피리딘 고리에 상응하는 관능기를 가질 수 있다.
아미노피리딘 화합물은 예를 들어, 2-아미노-5-클로로피리딘 유도체를 제조하는 데 충분한 조건하에서, 에틸아세테이트 또는 디메틸포름아미드를 포함하는 용매 중에서 치환 또는 비치환된 2-아미노피리딘 및 N-클로로숙신이미드를 혼합함으로써 제조할 수 있다 (예를 들어, 실시예 11 참조). 치환 또는 비치환된 2-아미노피리딘은 본원에 기술된 AD4-1505-유사 화합물 부분의 아미노피리딘 부분에 상응할 수 있다. 예를 들어, 치환 또는 비치환된 2-아미노피리딘은 R1이 화학식 3을 포함하는 것인 화학식 2에 따른 화합물의 아미노피리딘 부분에 상응할 수 있다. 상기 반응의 2-아미노피리딘은 하기 화학식 12의 구조 (여기서, R23, R3, 및 R4는 상기 정의된 바와 같을 수 있고 (화학식 3 참조) R24는 수소일 수 있다)를 가질 수 있다. 상기 반응의 2-아미노-5-클로로피리딘 유도체는 화학식 12의 구조 (여기서, R23, R3, 및 R4는 반응의 2-아미노피리딘에 대한 것과 동일할 수 있고, R24는 클로로일 수 있다)를 가질 수 있다. 상기 반응은 실시예 12-13에 개시된 임의의 조건 또는 조건의 조합을 포함할 수 있다.
<화학식 12>
Figure pct00042
아미노피리딘 화합물은 할로겐화된 2-아미노피리딘 아세트아미드 유도체의 4-위치에서의 알킬화에 이어 아세트아미드를 제거하는 것을 수행함으로써 제조될 수 있다 (예를 들어, 실시예 11 참조). 3-위치 및 5-위치에 플루오로, 클로로, 또는 브로모 기를 가진 2-아미노피리딘은 예를 들어, 빙초산 중 아세트산 무수물로 처리함으로써 상응하는 아세트아미드 유도체로 전환될 수 있다. 아세트아미드 유도체는 적합한 온도, 예를 들어, 약 -70℃에서 테트라히드로푸란 중 예를 들어, 디이소프로필 아민 및 부틸리튬을 사용하는 탈양성자화하고, 이어서, 저급 알킬 할라이드, 저급 알킬 할라이드, 예를 들어, 아이오도메탄 또는 아이오도에탄으로의 처리에 의해 할로겐 사이의 위치에서 알킬화될 수 있다. 적합한 온도, 예를 들어, 약 50℃에서 적합한 용매, 예를 들어, 메탄올 중 진한 산, 예를 들어, 진한 염산으로 처리하여 아세트아미드기를 제거함으로써 2-아미노-3,5-디할로-4-알킬아미노피리딘을 수득할 수 있다. 상기 반응의 치환된 2-아미노피리딘은 화학식 12의 구조 (여기서, R23은 플루오로, 클로로, 또는 브로모일 수 있고; R3은 수소일 수 있고; R4는 제1항에서 정의된 바와 같을 수 있고; R24는 플루오로, 클로로, 또는 브로모일 수 있다)를 가질 수 있다. 상기 반응의 치환된 2-아미노피리딘은 화학식 12의 구조 (여기서, R23은 플루오로, 클로로, 또는 브로모일 수 있고; R3은 수소일 수 있고; R4는 상기에서 정의된 바와 같고 (화학식 3 참조); R24는 플루오로, 클로로, 또는 브로모일 수 있다)를 가질 수 있다. 상기 반응은 실시예 12-13에 개시된 임의의 조건 또는 조건의 조합을 포함할 수 있다.
또한, 그의 생물학적 활성을 위해 유용한 아미노피리딘 중간체 화합물 뿐만 아니라, 본원에 개시된 다른 화합물의 제조를 위한 출발 물질을 제공한다. 아미노피리딘 중간체 화합물은 2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘; 2-아미노-4,5-디클로로피리딘; 2-아미노-5-클로로-6-메틸피리딘; 2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘; 2-아미노-3,5-디클로로-4-메틸피리딘; 2-아미노-3,5-디클로로-4,6-디메틸피리딘; 2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘; 및 2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘, 또는 상기 기술된 방법에 따라 제조된 아미노피리딘 화합물일 수 있다. 예를 들어, 아미노 피리딘 화합물은 2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘; 또는 2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘일 수 있다.
제약 제제
본 발명의 조성물의 실시양태는 본원에 기술된 각종 화합물로 된 제약 제제를 포함한다. 본원에 기술된 화합물은 순수한 형태로, 또는 그러한 형태가 존재하는 경우, 제약상 허용되는 염 형태로, 및 제약상 허용되는 부형제의 존재 또는 부재하에서 사용될 수 있다. 본원에 기술된 화합물은 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 21st edition, ISBN: 0781746736 (2005)]에 기술된 바와 같이 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 부형제를 사용하여 임의의 종래 방식에 의해 제제화될 수 있다. 이러한 제제는 대상체에게 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위해 치료 유효량의 작용제 (바람직하게는 정제된 형태의 것)를 적합한 양의 담체와 함께 함유할 수 있다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다. 본 발명에서 사용하는 작용제는 비경구, 폐, 경구, 국소, 진피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비내, 경막외, 안내, 협측 및 직장을 포함하나, 이에 한정되지 않는 수개의 경로를 사용하여 대상체에게 투여하기 위해 공지된 방법에 의해 제제화될 수 있다. 개별 작용제는 또한 하나 이상의 본 발명의 추가 작용제 및/또는 다른 생물학적으로 활성인 또는 생물학적으로 불활성인 작용제와 함께 조합되어 투여될 수 있다. 이러한 생물학적으로 활성 또는 불활성인 작용제는 유체이거나 또는 작용제(들)와의 기계적 전달이거나, 또는 이온성, 공유결합, 반 데르 발스, 소수성, 친수성 또는 다른 물리적 힘에 의해 작용제(들)에 부착될 수 있다.
제어 방출 (또는 지속 방출) 제제는 작용제의 활성을 연장시키고, 투여 빈도를 감소시키도록 제제화될 수 있다. 제어 방출 제제는 또한 작용 개시 시간 또는 다른 특징, 예를 들어, 작용제의 혈중 농도에 효과를 미치고, 결과적으로 부작용의 발생에 영향을 주기 위해 사용될 수 있다.
키나제 억제제와의 조합
본원에 기술된 화합물은 공지된 치료 화합물과 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화될 수 있다. 병용 요법은 예를 들어, 본원에 기술된 항증식성 화합물 및 제2 작용제를 포함하는 치료 요법으로서 이해된다. 항증식성 화합물 및 제2 작용제는 별개의 투여를 위한 것으로 제제화될 수 있거나, 함께 투여될 수 있는 것으로 제제화될 수 있다.
본원에 기술된 화합물은 어느 작용제든 단독으로 사용되었을 때보다 더 큰 치료 효과를 발휘할 수 있도록 또 다른 항증식성 화합물, 예를 들어, EGFR 키나제 억제제, 타이커브, 이레사, 및 타르세바, 또는 에르비툭스, EGF 수용체에 대한 인간화된 모노클로날 항체와 함께 조합될 수 있다. 본원에서 제시하는 바와 같이, 타이커브, 이레사, 타르세바 또는 에르비툭스와 함께 AD4 화합물을 세포 증식 검정으로 평가하였을 때, 세포 증식을 억제시키는 상기 작용제들의 조합의 효과는 어느 작용제든 단독으로 사용되었을 때의 효과보다는 더 컸다 (예를 들어, 실시예 6 참조). 구체적으로, 고정된 농도비로 타이커브, 이레사, 타르세바 또는 에르비툭스와 함께 본원에 기술된 화합물을 평가하였고, 이는 각 작용제 단독의 용량-반응 곡선 결과로부터 확인되었다.
본원에 기술된 화합물, 예를 들어, EGFR 억제제는 종양의 혈관형성을 억제시키는 제2 작용제와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화되어 사용될 수 있다. 고형 종양의 혈관형성이란 일반적으로는 고형 종양에서 혈관이 형성되는 것을 의미한다. 종양의 혈관형성을 억제시키는 작용제는 혈관 개시, 발생, 또는 유지를 억제시킴으로써, 예를 들어, 종양내 혈관의 수 또는 밀도를 감소시킬 수 있다.
본원에 기술된 화합물은 고형 종양의 투과성을 변형시키는, 예를 들어, 증가시키는 제2 작용제와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화되어 사용될 수 있다. 고형 종양의 투과성이란 일반적으로 치료제에 대한 고형 종양의 투과성을 의미한다. 치료제가 종양 중앙부에 있는 세포에 도달할 수 있다면, 고형 종양은 치료제에 대해 투과성이라고 말할 수 있다.
본원에 기술된 화합물은 화학요법적 제2 작용제와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화되어 사용될 수 있다. 화학요법제는 악성 종양을 치료하는 데 사용되는 분자 또는 조성물을 의미한다. 그러한 작용제는 본원에 기술된 화합물과 함께 조합하여, 또는 본원에 기술된 병용 요법과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 화학요법제로는 본원에 기술된 화합물에 접합될 수 있거나, 비접합 형태로 병용 요법과 함께 조합하여 사용될 수 있는 작용제를 포함한다.
본원에 기술된 화합물은 생물 작용제인 제2 작용제와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화되어 사용될 수 있다. 생물제제로도 명명되는 생물 작용제는 일반적으로는 생물계, 예를 들어, 유기체, 세포, 또는 재조합 시스템의 생성물로서 이해된다. 그러한 생물 작용제의 예로는 핵산 분자(예를 들어, 안티센스 핵산 분자), 인터페론, 인터류킨, 콜로니-자극 인자, 항체(예를 들어, 모노클로날 항체), 및 시토카인을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 기술된 화합물은 EGFR 관련 상태 또는 장애 치료용으로서 승인받은 EGFR 억제제와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 화합물은 타이커브, 이레사, 타르세바, 또는 에르비툭스 중 하나 이상의 것과 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화될 수 있다. 타이커브, 이레사, 및 타르세바는 EGFR 티로신 키나제 활성을 차단하는 키나제 억제제이다. 에르비툭스는 EGFR 상의 세포외 에피토프에 결합하는 인간화된 모노클로날 항체이다. 에르비툭스는 리간드 결합 및 수용체 이량체화, 둘 모두를 방지함으로써 수용체의 활성화를 차단시킨다. 다양한 실시양태에서, 본원에 기술된 화합물은 EGFR을 잠김 상태로 만들어 이량체화가 불가능한 입체형태로 만들 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 화합물 및 공지의 EGFR 억제제, 예를 들어, 상기 기술된 것은 상보적인 또는 상승작용적 방식으로 작용할 수 있다.
본원에 기술된 화합물, 예를 들어, AD4-1505-유사 화합물은 타이커브와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화될 수 있다. 본원에 기술된 화합물, 예를 들어, AD4-1505-유사 화합물은 이레사와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화될 수 있다. 본원에 기술된 화합물, 예를 들어, AD4-1505-유사 화합물은 타르세바와 함께 사용되거나, 그와 함께 제제화될 수 있다.
치료 용도
또 다른 측면은 본원에 기술된 화합물을 사용하여 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법이다. 다양한 실시양태에서, 증식성 질환, 장애, 또는 상태는 활성화 상태와 관련이 있는 도메인간 테터를 가진 표적 생체분자, 예를 들어, EGFR와 관련이 있다. 치료 방법으로는 치료 유효량의 본 발명의 화합물을 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은 항증식성 효과를 가진 본원에 기술된 화합물이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 EGFR 억제 활성을 가진 본원에 기술된 화합물이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 테터 확장을 방지하고, 불활성 형태를 유지시키기 위해 EGFR의 하나 이상의 도메인에 결합하는 작용을 하는 EGFR 억제제이다.
다양한 실시양태에서, 치료 방법은 본원에 기술된 화합물 하나 이상을 투여하는 것을 포함한다.
예를 들어, 치료 방법은 하기 표 5의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 또 다른 일례로서, 치료 방법은 화학식 2, 화학식 10, 또는 화학식 11의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함할 수 있다.
또 다른 일례로서, 치료 방법은 하기: AD4-1505 (화학식 1), 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염으로부터 선택된 하나 이상의 화합물을 투여하는 것을 포함할 수 있다.
또 다른 일례로서, 치료 방법은 하기로부터 하나 이상의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함할 수 있다:
Figure pct00043
본원에 기술된 방법은 일반적으로 그를 필요로 하는 대상체에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 치료 방법을 필요로 하는 대상체는 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 앓는 것으로 진단받았거나, 그의 위험이 있는 대상체일 수 있다. 또 다른 일례로서, 본원에 기술된 치료 방법을 필요로 하는 대상체는 EGFR과 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 앓는 것으로 진단받았거나, 그의 위험이 있는 대상체일 수 있다. 치료를 필요로 하는 것에 관한 결정은 문제가 되는 질환, 장애, 또는 상태과 일치하는 이력 및 신체 검사에 의해 평가될 수 있다. 본원에 기술된 방법에 의해 치료될 수 있는 각종 상태에 관한 진단은 당업계의 기술내 포함되어 있다. 대상체는 동물 대상체, 바람직하게, 포유동물, 더욱 바람직하게, 말, 소, 개, 고양이, 양, 돼지, 마우스, 래트, 원숭이, 기니아 피그, 및 닭, 및 가장 바람직하게는, 인간일 수 있다.
본원에 기술된 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 증식성 질환 또는 상태의 예로는 암; 혈관 증식성 장애; 섬유성 장애; 혈관간 세포 증식성 장애; 건선; 광선 각화증; 지루성 각화증; 사마귀; 켈로이드성 반흔; 습진; 및 바이러스 감염, 예를 들어, 유두종 바이러스 감염에 의해 유발되는 과다증식성 질환을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
근본적 메카니즘을 제공해야 할 어떤 의무도 없으며, 그렇게 함으로써 결코 본 발명을 제한하지 않으면서, 현재 본원에 기술된 화합물의 활성의 적어도 일부는 EGFR 억제에서 발생하는 것으로 여겨진다. 본 기술된 화합물은 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료할 때 그의 효능에 있어 추가의 작용 모드를 가질 수 있다고 추가로 주시되고 있다. 근본적 메카니즘과는 상관없이, 본원에 기술된 화합물은 증식성 질환 및 상태를 치료함에 있어 실험상 효과가 있는 것으로 입증되었다.
본원에 기술된 다양한 화합물은 EGFR을 억제시키는 데 효과적이며, 이로써 EGFR과 관련된 질환 또는 상태, 예를 들어, 증식성 질환을 포함하나, 이에 한정되지 않는 것에 대해 효과적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 화합물에 의해 치료되는 증식성 질환은 수용체 중 EGFR 패밀리의 구성원을 발현하는 암 또는 비-암 세포의 과도한 성장에 의해 유발되는 상태이다. 증식성 질환에 의해 발생된 과도한 세포는 정상 수준으로 EGFR을 발현할 수 있거나, EGFR을 과다발현할 수 있다. EGFR과 관련되는 특히 적합한 질환 또는 상태은 EGFR의 리간드, 또는 상기 리간드의 돌연변이에 자극을 받은 것일 수 있다. EGFR을 자극하는 상기와 같은 리간드의 예로는 EGF, TGF-알파, 헤파린-결합 성장 인자 (HBGF), β-셀룰린, 및 크립토(Cripto)-1을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. EGFR과 관련된 증식성 질환의 예로는 암; 혈관 증식성 장애; 섬유성 장애; 혈관간 세포 증식성 장애; 건선; 광선 각화증; 지루성 각화증; 사마귀; 켈로이드성 반흔; 습진; 및 바이러스 감염, 예를 들어, 유두종 바이러스 감염에 의해 유발되는 과다증식성 질환을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
암, 또는 신생물이란 일반적으로 임의의 악성 신생물 또는 세포의 자발적 성장 또는 증식을 의미한다. 예를 들어, "암"을 앓는 대상체는 백혈병, 림프종, 또는 다른 혈액 세포의 악성 종양을 앓을 수 있다. 특정 실시양태에서, 대상 방법은 고형 종양을 치료하는 데 사용된다. 예시적인 고형 종양으로는 비소세포 폐암 (NSCLC), 고환암, 폐암, 난소암, 자궁암, 자궁경부암, 췌장암, 직장결장암 (CRC), 유방암 뿐만 아니라, 전립선암, 위암(gastric)암, 피부암, 위(stomach)암, 식도암, 및 방광암을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
암 치료 또는 암을 앓는 대상체를 치료하는 것은 암 세포의 복제를 억제시키거나, 암의 확산을 억제시키거나, 종양 크기를 축소시키거나, 대상체 체내에 존재하는 암성 세포 개수를 줄이거나 감소시키거나, 또는 암 증상을 호전 또는 경감시키는 것을 포함할 수 있다. 사망률 또는 이환률이 감소하였다면, 치료법은 치료적인 것으로 간주될 수 있고, 이는 예방학적으로, 또는 치료학적으로 수행될 수 있다.
본원에 기술된 방법은 확립된 종양을 치료하는 데 (예를 들어, 종양의 종양 크기를 축소시키고/거나, 혈관형성을 감소시키고/거나, 투과성을 증가시키는 데) 사용될 수 있다. 확립된 종양은 일반적으로 영양분, 예를 들어, 산소가 삼투압에 의해서 대상체의 혈관구조로부터 종양의 중앙부로 더 이상은 투과하지 못하고, 이로써 종양은 영양분을 받기 위한 그 자신의 혈관 공급원을 필요로 할 정도의 충분한 크기를 가진 고형 종양으로서 이해된다. 본원에 기술된 방법은 휴지기가 아닌, 활동적으로 지수 성장이 진행되고 있는 고형 종양을 치료하는 데 사용될 수 있다.
치료 프로토콜은 고형 종양의 투과성에 따라 변형될 수 있다. 고형 종양의 투과성이란 일반적으로 치료제에 대한 고형 종양의 투과성을 의미한다. 치료제가 종양 중앙부에 있는 세포에 도달할 수 있다면, 고형 종양은 치료제에 대해 투과성이라고 말할 수 있다. 예를 들어, 종양의 투과성을 증가시키는 작용제가 고형 종양의 혈관 구조를 정상화, 예를 들어, 유지시킬 수 있다. 종양 혈관형성 또는 종양 투과성은 당업계에 공지된 다양한 방법, 예를 들어, 생검 표본에 대한 면역조직화학적 검정에 의해, 또는 영상화 기법, 종양 초음파촬영술, 컴퓨터 단층촬영술 (CT) 또는 자기 공명 영상화 (MRI) 스캔에 의해 측정될 수 있다.
상이한 유형의 건선은 예를 들어, 고름같은 수포 (농포성 건선), 심각한 피부 딱지 형성 (홍색피부 건선), 방울과 같은 점 (방울 건선) 및 평활 염증성 병변 (역위 건선)과 같은 특징을 나타낸다. 모든 유형의 건선 (예를 들어, 심상성 건선, 농포성 건선, 건선성 홍피증, 관절병 건선, 유사건선, 손발바닥 농포증) 치료가 본 발명에 의해 주시된다.
혈관 증식성 장애란 일반적으로 혈관의 비정상적인 증식을 유발하는 혈관생성 및 혈관형성 장애를 의미한다. 혈관의 형성 및 확산, 또는 각각 혈관형성 및 혈관신생은 다양한 생리학적 과정에서, 예를 들어, 배 발생, 황체 형성, 상처 치유, 및 기관 재생에서 중요한 역할을 한다. 이는 또한 암 발생에서도 중요한 역할을 한다. 혈관 증식 장애의 다른 예로는 새로 형성된 모세 혈관이 관절에 침입하여 연골을 파괴시키는 것인 관절염, 및 안구 질환, 예를 들어, 망막에서 새로 형성된 모세관이 유리체에 침입하여 출혈을 일으켜 실명시키는 것인 당뇨 망막병증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 혈관의 위축, 수축, 또는 폐쇄와 관련된 장애, 예를 들어, 재협착 또한 관련이 있다.
섬유성 장애는 세포외 기질의 비정상적인 형성을 의미한다. 섬유성 장애의 예로는 간경화 및 혈관간 세포 증식성 장애를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 간경화는 세포외 기질 성분의 증가로 간에 흉터가 생기는 것을 특징으로 한다. 간경화는 예를 들어, 간의 경화증과 같은 질환을 유발할 수 있다. 세포외 기질 성분의 증가로 간에 흉터가 생기게 되면, 이는 또한 바이러스 감염, 예를 들어, 간염을 유발할 수 있다. 지방 세포가 간경화에 있어 중요한 역할을 하는 것으로 보인다. 연루된 다른 섬유성 장애로는 아테롬성동맥경화증을 포함한다.
혈관간 세포 증식성 장애란 혈관간 세포의 비정상적인 증식에 의해 유발된 장애를 의미한다. 혈관간 증식성 장애로는 각종 인간 신장 질환, 예를 들어, 사구체신염, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 혈전성 미세혈관병증 증후군, 이식 거부, 및 사구체병증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
EGFR (문헌 [Tuzi et al., 1991, Br. J. Cancer 63:227-233]; [Torp et al., 1992, APMIS 100:713-719]) HER2/neu (문헌 [Slamon et al., 1989, Science 244:707-712]) 및 PDGF-R (문헌 [Kumabe et al., 1992, Oncogene 7:627-633])은 다수의 종양에서 과다발현되고/거나, 자가분비 루프에 의해 지속적으로 활성화되는 것으로 알려져 있다. 수용체의 과다발현과 자가분비 루프가 대부분의 일반 암 및 중증 암에서 입증되었다 (예를 들어, 문헌 [Akbasak and Suner-Akbasak et al., 1992, J. Neurol. Sci. 111:119-133]; [Dickson et al., 1992, Cancer Treatment Res. 61 :249-273]; [Korc et al., 1992, J. Clin. Invest. 90: 1352-1360]; [Lee and Donoghue, 1992, J. Cell. Biol. 118: 1057-1070] 참조). EGFR의 과다발현은 방광암, 뇌암, 두경부암, 췌장암, 폐암, 유방암, 난소암, 결장암, 전립선암, 및 신장암과 관련이 있는 것으로 알려져 있다 (예를 들어, 문헌 [Atalay et al., 2003, Ann. Oncology 14: 1346-1363]; [Herbst and Shin, 2002, Cancer 94:1593-1611]; [Modjtahedi et al., 1996, Br. J. Cancer 73:228-235] 참조). EGFR의 과다발현은 환자의 불량한 예후와 상관관계가 있거나, 관련이 있을 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Herbst and Shin, 2002, Cancer 94: 1593-1611]; [Modjtahedi et al., 1996, Br. J. Cancer 73:228-235] 참조). HER2는 유방암, 난소암, 위(gastric)암, 폐암, 췌장암, 및 방광암과 관련이 있다.
본원에 기술된 억제제 화합물은 외인성 물질로서, 또는 내인성 물질로서 치료적으로 사용될 수 있다. 외인성 작용제는 체외에서 생산 또는 제조된 것으로서, 신체에 투여되는 것이다. 내인성 작용제는 (생물학적 또는 다른) 장치 유형 몇몇에 의해 체내에서 생산 또는 제조되어 체내에서 또는 체내 다른 기관으로 전달하기 위한 것이다.
본원에 기술된 방법에 따라 투여는 비경구, 폐, 경구, 국소, 진피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비내, 경막외, 안구, 협측, 또는 결장 투여일 수 있다.
본원에 기술된 화합물의 유효량은 일반적으로는 예를 들어, 치료되는 상태를 호전시킬 수 있는 정도로 항증식성 효과를 나타낼 수 있는 것이다. 예를 들어, 본원에 기술된 화합물의 유효량은 예를 들어, 치료되는 상태를 호전시킬 수 있는 정도로 EGFR을 억제시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 유효량은 예를 들어, 시험관내 또는 생체내에서의 종양 크기 축소, 종양 부피 축소, 고형 종양의 혈관형성 감소, 또는 작용제에 대한 고형 종양의 투과성 증가를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 암성 세포 또는 종양에 대한 원하는 결과에 영향을 미치는 데 충분한 요법 (또는 병용 요법)의 양이다. 특정 실시양태에서, 요법 (또는 병용 요법)의 유효량은 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 99%, 또는 약 100% 초과의 % 종양 억제로 종양을 억제시키는 양이다. 특정 실시양태에서, 요법 (또는 병용 요법)의 유효량은 예를 들어, 질환의 호전, 대상체의 안정화, 대상체에서의 암 발생, 또는 암 진행의 예방 또는 지연을 포함하나, 이에 한정되지 않는 원하는 임상적 결과를 달성하는 데 충분한 양이다. 요법 (또는 병용 요법)의 유효량은 1회 투여 또는 반복 투여에 기초하여 측정될 수 있다. 상기의 표지자의 검출 및 측정 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 그러한 방법으로는 종양 부하 감소, 종양 크기 축소, 종양 부피 축소, 속발성 종양 증식 감소, 고형 종양 혈관형성 감소, 종양 조직에서의 유전자 발현, 바이오마커의 존재, 림프절 침범, 조직학적 등급, 및 핵 등급 측정을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시양태에서, 종양 부하를 측정할 수 있다. 종양 로드로도 언급되는 종양 부하란 일반적으로 대상체 신체 전역에 분포되어 있는 종양물의 총량을 지칭한다. 종양 부하는 림프절 및 골수를 비롯한, 신체 전역의 암 세포의 총 개수 또는 종양(들)의 전체 크기를 지칭할 수 있다. 종양 부하는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해, 예를 들어, 대상체로부터 제거되었을 때, 예를 들어, 캘리퍼로 종양(들)의 크기를 측정함으로써, 또는 신체에서 영상 기법, 예를 들어, 초음파, 컴퓨터 단층촬영술 (CT) 또는 자기 공명 영상화 (MRI) 스캔을 사용하면서 측정될 수 있다. 종양 크기는 예를 들어, 종양 중량 또는 종양 부피를 측정함으로써 측정될 수 있다.
본 발명의 방법에서 사용될 때, 치료 유효량의 본원에 기술된 화합물은 제약상 허용되는 부형제와 함께, 또는 그의 부재하에 순수한 형태, 또는 그러한 형태가 존재할 경우에는 제약상 허용되는 염 형태로 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 작용제는 표적 생체분자와 관려된 질환, 장애, 또는 상태의 치료 또는 예방을 위해 화합물이 그에 대해 특이적인 것인 표적 생체분자를 억제시키는 데 충분한 충분량으로 적용될 수 있는 합당한 이익/위험 비로 투여될 수 있다.
상기 화합물, 및 그의 제약 제제의 독성 및 치료 효능은 세포 배양물 및/또는 실험 동물에서 LD50(집단 중 50%에 대한 치사 용량) 및 ED50(집단 중 50%에서 치료상 유효한 용량)을 측정하는 표준 제약 방법에 의해서 측정될 수 있다. 독성 및 치료 효과 사이의 용량비가 치료 지수이며, LD50/ED50 비율로 표시될 수 있으며, 치료 지수가 큰 것이 바람직한 것이다.
제약상 허용되는 담체와 함께 조합되어 단일 투여 형태로 제조되는 본원에 기술된 화합물의 양은 치료받는 숙주 및 특정의 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 필요한 치료 유효량이 다수의 개별 용량 투여에 의해 달성될 수 있는 바, 각 투여 형태의 개별 용량 중에 함유되어 있는 작용제의 단위 함량 그 자체가 치료 유효량을 구성할 필요는 없음을 이해할 것이다.
본원에 기술된 화합물의 투여는 단일 사건으로서, 주기적인 사건으로서, 또는 일정 치료 기간 동안에 걸쳐서 진행될 수 있다. 예를 들어, 조절제는 매일, 매주, 2주마다, 또는 매월 투여될 수 있다. 또 다른 일례로서, 화합물은 다회에 걸친 치료 기간으로 예를 들어, 2주간 진행, 2주간 중단, 및 이어서, 2회 반복; 또는 3주 동안 매 3일마다 투여될 수 있다. 당업계의 숙련가는 이러한 요법은 예시적인 것일 수 있음을 이해할 것이며, 다른 적합한 주기적 요법을 디자인할 수 있다. 급성 상태 치료의 경우, 치료 시간은 보통 적어도 수일이 될 것이다. 특정 상태는 수일에서 수주간에 걸쳐 치료가 장기화될 수 있다. 예를 들어, 치료는 1주, 2주 또는 3주에 걸쳐 연장될 수 있다. 더욱 만성인 상태의 경우, 치료는 수주에서 수개월 또는 심지어 수년간에 걸쳐 장기화될 수 있다.
임의의 특정 대상체에 대한 구체적인 치료 유효량 수준은 치료받는 환자 및 장애의 중증도; 사용되는 특정 화합물의 활성; 사용되는 특정 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별, 및 섭식; 투여 시간; 투여 경로; 사용되는 조성물의 배설 속도; 치료 지속 기간; 사용되는 특정 화합물과 함께 조합되어 사용되거나 동시에 사용되는 약물; 및 의약 분야에 주지되어 있는 기타 유사 인자를 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다 (예를 들어, 문헌 [Koda-Kimble et al. (2004) Applied Therapeutics: The Clinical Use of Drugs, Lippincott Williams & Wilkins, ISBN 0781748453]; [Winter (2003) Basic Clinical Pharmacokinetics, 4th ed., Lippincott Williams & Wilkins, ISBN 0781741475]; [Sharqel (2004) Applied Biopharmaceutics & Pharmacokinetics, McGraw-Hill/Appleton & Lange, ISBN 0071375503] 참조). 예를 들어, 원하는 치료 효과를 달성하는 데 필요한 용량보다 더 낮은 수준에서 조성물의 용량으로 출발하여 원하는 효과를 달성할 때까지 상기 투여량을 점차적으로 증가시킨다는 것은 당업계의 기술내 잘 포함되어 있다. 원하는 경우, 투여 목적으로 1일 유효량은 다회 투여 용량으로 분할될 수 있다. 그 결과, 단일 용량 조성물은 상기와 같은 양 또는 그의 하위다회 투여 용량을 포함함으로써 1일 용량을 형성할 수 있다. 그러나, 본 발명의 화합물 및 조성물의 1일 총 투여량은 정상적 의료 판단의 범주 내에서 주치의에 의해 결정될 것이라는 것을 이해할 것이다.
표적 생체분자를 억제시키는 본 발명의 화합물은 또한 다른 치료 양식과 병용하여 사용될 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 요법 이외에도, 표적 생체분자와 관련된 특정 상태에 대해 유효한 것으로 알려진 다른 요법을 대상체에게 제공할 수 있다. 본원에 기술된 방법에 따른 치료법은 화합물이 그에 대해 특이적인 것인 표적 생체분자와 관련된 질환, 장애, 또는 상태에 대한 종래의 치료 방식 이전에, 그와 동시에, 또는 그 이후에 수행될 수 있다.
키트
키트 또한 제공한다. 그러한 키트는 본 발명의 조성물을 포함할 수 있고, 특정 실시양태에서는 투여를 위한 설명서를 포함할 수 있다. 상기 키트는 본원에 기술된 방법, 예를 들어, 치료 방법 또는 스크리닝 방법에 관한 실시를 촉진시킬 수 있다. 키트로서 공급될 경우, 조성물의 상이한 성분들은 별개의 용기에 패킹되고, 사용 바로 직전에 혼합될 수 있다. 성분들로는 본원에 기술된 화합물 중 하나 이상, 벡터, 진단용 시약, 검정용 시약, 및/또는 그이 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 원하는 경우, 상기 성분들의 패킹은 별개로 조성물을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태를 포함할 수 있는 팩 또는 분배기 장치에 제공될 수 있다. 팩은 예를 들어, 금속 또는 플라스틱 호일, 예를 들어, 블리스턱 팩을 포함할 수 있다. 특정 경우, 상기 성분들의 패킹은 별개로 또한 성분의 활성을 손실시키지 않으면서 장기 보관될 수 있다.
키트는 또한 별개로 패킹된 동결건조된 활성 성분에 첨가되는 예를 들어, 멸균수 또는 멸균 염수와 같은 시약을 별개의 용기에 포함할 수 있다. 예를 들어, 밀봉된 유리 앰플은 동결건조된 성분을 포함할 수 있고, 별개의 앰플에는 멸균수, 또는 멸균 염수를 포함할 수 있는데, 이들 각각은 중성의 비반응 기체, 예를 들어, 질소하에서 패킹된다. 앰플은 임의의 적합한 물질, 예를 들어, 유리, 유기 중합체, 예를 들어, 폴리카르보네이트, 폴리스티렌, 세라믹, 금속 또는 전형적으로 시약을 담는 데 사용되는 임의의 다른 물질로 이루어질 수 있다. 다른 적합한 용기의 예로는 앰플과 유사한 물질로부터 제작될 수 있는 병, 및 예를 들어, 알루미늄 또는 합금과 같은 호일로 선단이 내장된 내부로 구성된 인벨럽을 포함한다. 다른 용기로는 시험 튜브, 바이알, 플라스크, 병, 시린지 등을 포함한다. 용기는 멸균 접근 포트를 가질 수 있으며, 예를 들어, 병은 피하 주사용 바늘로 천공할 수 있는 마개를 가질 수 있다. 다른 용기는 이를 제거하면 성분들이 혼합될 수 있는 것인, 쉽게 제거될 수 있는 막을 통해 분리된 2개의 구획을 가질 수 있다. 제거될 수 있는 막은 유리, 플라스틱, 고무 등일 수 있다.
특정 실시양태에서, 키트는 설명 자료와 함께 공급될 수 있다. 설명서는 종이 또는 다른 기판 상에서 프린트될 수 있고/거나, 전자 판독이 가능한 매체, 예를 들어, 플로피 디스크, 미니-CD-ROM, CD-ROM, DVD-ROM, 집 디스크(Zip disc), 비디오테이프 등으로서 공급될 수 있다. 상세한 설명은 물리적으로 키트와는 관련이 없을 수 있고; 대신 사용자는 키트 제조사 또는 배급처가 명시한 인터넷 웹 사이트에서 안내받을 수 있다.
분자 생물학적 프로토콜을 사용하는 본원에 기술된 조성물 및 방법은 당업계에 공지된 다양한 표준 기법에 따라 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Sambrook and Russel (2006) Condensed Protocols from Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN-10: 0879697717]; [Ausubel et al. (2002) Short Protocols in Molecular Biology, 5th ed., Current Protocols, ISBN-10: 0471250929]; [Sambrook and Russel (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN-10: 0879695773]; [Elhai, J. and Wolk, C. P. 1988. Methods in Enzymology 167, 747-754]; [Studier (2005) Protein Expr Purif. 41(1), 207-234; Gellissen, ed. (2005) Production of Recombinant Proteins: Novel Microbial and Eukaryotic Expression Systems, Wiley-VCH, ISBN-10: 3527310363]; [Baneyx (2004) Protein Expression Technologies, Taylor & Francis, ISBN-10: 0954523253] 참조).
본원에 기술된 정의 및 방법은 본 개시내용을 보다 잘 정의할 수 있도록 및 당업계의 숙련가가 본 개시내용을 실시할 때 가이드하기 위해 제공된 것이다. 달리 언급되지 않는 한, 용어는 관련업계 숙련가의 종래 용법에 따라 이해되어야 한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 특정 실시양태를 기술하고 청구하는 데 사용되는 성분, 특성, 예를 들어, 분자량, 반응 조건 등을 정량적으로 표현한 수치는 일부 경우에는 "약"이라는 용어로 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 일부 실시양태에서, "약"이라는 용어는 값을 측정하는 데 사용된 장치 또는 방법에 대해 그 값이 평균의 표준 편차를 포함한다는 것을 나타내는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 서면으로 된 설명서 및 첨부된 특허청구범위에 기재된 수치적 파라미터는 특정 실시양태에 의해 얻고자 하는 원하는 특성에 따라 달라질 수 있는 근사치이다. 일부 실시양태에서, 수치적 파라미터는 기록된 유효 숫자 자리수 관점에서 통상의 반올림법을 적용시키는 것으로 해석되어야 한다. 본 개시내용의 일부 실시양태의 광범위한 범주를 기술하는 수치 범위 및 파라미터는 근사치임에도 불구하고, 특정 실시예에 기재된 수치값은 실현가능한 한 정확하게 기록된 것이다. 본 개시내용의 일부 실시양태에서 제시된 수치값은 필연적으로 그의 각 시험 측정에서 드러난 표준 편차로부터의 일정의 오차를 포함할 수 있다. 본원에서 값의 범위를 나열하는 것은 단지 그 범위에 포함된 각각의 개별 값을 개별적으로 언급하는 속기의 방법으로서의 역할을 하는 것으로 한다. 본원에서 달리 언급하지 않는 한, 각각의 개별 값은 그가 마치 본원에서 개별적으로 나열된 것처럼 본 명세서에 포함된다.
일부 실시양태에서, 특정 실시양태를 기술하는 것과 관련하여 (특히, 하기 특허청구범위의 특정 항과 관련하여) "하나"("a" 및 "an") 및 "그"("the")라는 용어 및 유사 어구는 달리 구체적으로 명시되지 않는 한, 단수 및 복수, 둘 모두를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 일부 실시양태에서, 특허청구범위를 비롯한, 본원에서 사용되는 바, "또는"이라는 용어는 달리 명확하게 언급되지 않는 한, 오직 대안만을 언급하거나, 또는 대안이 상호 배타적이라는 것을 나타내는 "및/또는"를 의미하는 것으로 사용된다.
"포함하는," "가지는," 및 "포함하다"라는 용어는 말단 개방형 연결 동사이다. 이들 동사 중 하나 이상의 임의의 형태 또는 시제, 예를 들어, "포함하다(comprises)," "포함하는(comprising)," "가지다," "가지는," "포함하다(includes)" 및 "포함하는(including)" 또한 말단 개방형이다. 예를 들어, 하나 이상의 단계를 "포함하는," "가지는," 또는 "포함하는" 임의의 방법은 오직 하나 이상의 단계만을 소유하는 것으로 제한되지 않고, 이는 또한 다른 열거되지 않은 단계도 포함할 수 있다. 유사하게, 하나 이상의 특징을 "포함하는," "가지는," 또는 "포함하는" 임의의 조성물 또는 장치는 오직 하나 이상의 특징만을 소지하는 것으로 제한되지 않고, 이는 또한 다른 열거되지 않은 특징도 포함할 수 있다.
본원에 기술된 모든 방법은 본원에서 달리 명시되지 않는 한, 또는 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원의 특정 실시양태와 관련하여 제공되는 임의의 및 모든 일례, 또는 예시 용어 (예를 들어, "예를 들어,")를 사용하는 것은 단지 본 개시내용을 보다 잘 설명하기 위함이며, 달리 청구되는 본 개시내용의 범주에 대해 제한을 두고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서 어떤 용어도 본 개시내용의 실시에 필수적인 임의의 비-청구 요소를 나타내는 것으로서 해석되지는 않아야 한다.
본원에 개시된 본 개시내용의 대안적 요소 또는 실시양태의 분류가 제한하는 것으로서 해석되서는 안된다. 각 군의 구성원은 개별적으로 본원에서 밝혀진 상기 군의 다른 구성원 또는 다른 요소와 함께 임의의 조합으로 언급되고, 청구될 수 있다. 일군의 하나 이상의 구성원은 용이함 또는 특허성의 이유로 일군에 포함될 수 있거나, 삭제될 수 있다. 상기와 같이 포함 또는 삭제될 경우, 본원에서 명세서는 보정을 통해 첨부된 특허청구범위에서 사용되는 모든 마쿠쉬(Markush) 군에 관한 서면적 설명을 준수하는 군을 포함하는 것으로 간주된다.
본원에서 참조 문헌에 관한 인용은 그가 본 개시내용의 선행 기술임을 인정하는 것으로서 해석되어서는 안된다.
본 개시내용을 상세히 기재하였지만, 첨부된 특허청구범위에서 정의된 본 개시내용의 범주에서 벗어남 없이 변형, 수정, 및 등가의 실시양태가 가능하다는 것이 명백할 것이다. 추가로, 본 개시내용에서 모든 실시예는 비제한적 실시예로서 제공된 것임을 이해하여야 한다.
실시예
본 발명을 추가로 예시하기 위해 하기 비제한적 실시예를 제공한다. 하기 실시예에 개시된 기법은 본 발명자들이 본 발명의 실시에서 잘 작용하는 것으로 밝혀진 접근법을 대표적으로 나타내며, 따라서, 실시예는 그의 실시를 위한 방식의 예를 구성하는 것으로서 간주될 수 있다는 것을 당업자는 이해하여야 한다. 그러나, 당업자는 본 개시내용에 비추어 개시된 구체적인 실시양태에서 많은 변형이 이루어질 수 있고, 본 발명의 정신 및 범주로부터 벗어남 없이 여전히 비슷하거나 유사한 결과를 얻을 수 있다는 것을 이해하여야 한다.
실시예 1: EGFR 억제 검정
하기 실시예는 일반 EGFR 세포내 웨스턴 (ICW) 스크리닝 프로토콜을 기술한다. 방법은 달리 언급되지 않는 한, 문헌 [Chen et al. (2005) Analytical Biochemistry 338, 136-142] (본원에 참고로 포함된다)에 따라 수행되었다.
세포 플레이트: A431 세포 (ATCC # CRL-1555)를 10% 소 태아 혈청, 105 유닛/ml pen/strep (인비트로젠(Invitrogen) #15140155) 및 2.1 mM L-글루타민 (ATCC # 30-2214)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM; ATCC # 30-2002)에서 성장시켰다. 세포를 웰당 30,000개의 세포인 밀도로 96 웰 조직 배양 플레이트 (BD 팔콘(BD Falcon) #353948)에 시딩하고, 37℃ 5% CO2에서 밤새 인큐베이션시켰다. 각 화합물 플레이트에 대해 2개의 세포 플레이트를 제조하였다.
혈청 기아: 화합물을 첨가하기 이전에 세포를 혈청 기아하에 두었다. 흡인에 의해 배지를 제거하고, 세포를 PBS (200 ㎕/웰; 인비트로젠 # 20012-027)로 세척하였다. 흡인에 의해 PBS를 제거하고, 105 유닛/ml pen/strep (인비트로젠 #15140155) 및 2.1 mM l-글루타민 (ATCC # 30-2214)으로 보충된 200 ul의 DMEM (ATCC # 30-2002)으로 대체하였다. 세포 플레이트를 37℃/5% CO2에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다.
화합물 플레이트 제조: 시험 화합물을 25 mM의 농도로 100% DMSO (시그마(Sigma) #472301-2L) 중에 용매화시켰다. 25 mM에서 100% DMSO 중에 완전히 가용성이 아닌 것으로 관찰된 화합물을 100% DMSO를 사용하여 10 mM로 희석시키고, 최종 농도가 0.2%가 될 때까지 TFA (플루카(Fluka) #91699)를 첨가하였다. 40 ㎕의 시험 화합물을 96 웰 플레이트 (팔콘(Falcon) #351190)의 적절한 웰에 첨가하였다. 대조군으로서, 100% DMSO 중 6 μM EGFR 키나제 억제제 PD168393 (EMD/칼바이오켐(Calbiochem) # 513033) 및 DMSO 단독의 것을 다양한 웰에 첨가하였다. 제조된 화합물 플레이트를 사용전 RT에서 보관하고, 장기간 동안 4℃에서 보관하였다.
화합물 희석 플레이트 제조: 1 mg/ml BSA (시그마 A3059-10G)로 보충된 250 ㎕의 DMEM을 96 웰 플레이트의 적절한 웰에 첨가하여 화합물 희석 플레이트를 제조하였다. 다채널 피펫터를 사용하여 1.25 ㎕의 화합물을 화합물 플레이트로부터 화합물 희석 플레이트로 옮겨 놓았다. 이러한 희석 비율을 통해 검정에서 화합물의 농도는 125 μM이 되었다.
화합물 첨가: 흡인에 의해 세포 플레이트로부터 기아 배지를 제거하였다. 다채널 피펫터를 사용하여 3회에 걸쳐 상하로 피펫팅하여 화합물 희석 플레이트를 혼합하였다. 50 ㎕의 혼합된 희석 화합물을 두 세포 플레이트 각각의 2 열/행 각각에 첨가하였다. 화합물을 포함하는 세포 플레이트를 37℃/5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다.
EGF 첨가: 1 mg/ml BSA로 보충된 DMEM 중에서 20 ng/ml EGF (업스테이트(Upstate) #01-107)를 제조하였다. 화합물을 제거하지 않고 적절한 웰에 50 ㎕의 20 또는 0 ng/ml EGF를 첨가하였다. 3회에 걸쳐 상하로 피펫팅하여 화합물 및 EGF를 혼합하였다. 플레이트를 37℃/5% CO2에서 10 min 동안 인큐베이션시켰다. 일부 스크리닝 검정에서, 시뮬레이션에 사용된 EGF의 최종 농도는 10 ng/ml라기 보다는 6.6, 또는 12.5 ng/ml였다.
고정 및 트리톤(Triton) 세척: 흡인에 의해 EGF+화합물을 제거하고, 150 ㎕의 새로 제조된 고정 용액 (1x PBS, 시그마 P3813-10PK, 및 4% 포름알데히드, 피어스(Pierce) #28908)를 즉시 첨가하였다. 진탕시키지 않고 RT에서 20 min 동안 플레이트를 인큐베이션시켰다. 흡인에 의해 고정 용액을 제거하고, 완만히 진탕시키면서 5 min 동안 200 ㎕의 각 트리톤 세척 용액 (1x PBS, 시그마 P3813-10PK, 및 0.1% 트리톤 X-100, T8787-50ML)으로 4회에 걸쳐 플레이트를 세척하였다.
차단 및 프로빙: 트리톤을 사용한 최종의 세척 단계 이후, 진탕시키면서 150 ㎕의 오딧세이 차단 완충제(Odyssey Blocking Buffer) (LI-COR # 927-40000)를 사용하여 RT에서 1.5 h 동안 플레이트를 차단시켰다. 흡인에 의해 차단물을 제거하고, 50 ㎕의 희석된 1차 Ab 믹스를 첨가하였다. 플레이트를 완만히 진탕시키면서 밤새 4℃에서 인큐베이션시켰다. 플레이트를 진탕시키면서 각 5 min 동안 200 ㎕의 PBST (1x PBS, 시그마 P3813-10PK, 및 0.1% 트윈-20, 시그마 P9416-50ML)를 사용하여 5회에 걸쳐 세척하였다. 50 ㎕의 희석된 2차 Ab 믹스를 첨가하고, 플레이트를 진탕시키면서 RT에서 1 h 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 진탕시키면서 각 5 min 동안 200 ㎕의 PBST를 사용하여 5x 세척하였다. 스캐닝하기 전, 진탕시키면서 5 min 동안 200 ㎕의 PBS (시그마 P3813-10PK)를 사용하여 최종적으로 한번 세척하였다.
1차 Ab 믹스는 이하를 함유하였다: 0.1% 트윈(Tween)-20 (시그마 P9416-50ML); 1/500 희석율의 항-총 EGFR (인비트로젠 #AHR5062); 1/800 희석율의 항-포스포 EGFR (Tyr 1173; 셀 시그날링(Cell Signalling) #4407); 및 오딧세이 차단 완충제 (LI-COR # 927-40000). 일부 스크리닝 검정에서는 상기 언급한 항-포스포 EGFR Ab 대신 1/100 희석율의 항-포스포 EGFR (Tyr1045; 셀 시그날링 #2237)을 사용하였다.
2차 Ab 믹스는 이하를 함유하였다: 0.2% 10% 트윈-20 (시그마 P9416-50ML); 1/1,200 희석율의 항-마우스 IR680 접합체 (LI-COR 926-32220); 1/1,200 희석율의 항-토끼 IR800CW 접합체 (LI-COR 926-32211); 및 오딧세이 차단 완충제(LI-COR # 927-40000). 일부 스크리닝 검정에서는 2차 Ab 접합체의 희석율이 1/1,200 대신 1/800이었다.
플레이트 스캐닝: LI-COR 바이오사이언시즈(LI-COR Biosciences)로부터 입수한 오딧세이 적외선 영상 시스템(Odyssey Infrared Imaging System) 상에서 플레이트를 스캐닝하였다. 포커스 오프셋을 3.5 mm로 설정하고, 스캐닝 강도는 700 채널에 대해 3, 및 800 채널에 대한 7로 설정하였다.
데이터 분석: % 최대 및 % 억제 값은 하기와 같이 계산하였다. 700 채널 = (세포수 변동을 제어하는 데 사용된) 총 EGFR에 대한 신호. 800 채널 = 인산화된 EGFR에 대한 신호. 800- EGF = 기저 수준 EGFR 인산화 + 비특이 신호(화합물 부재). 800+ EGF = 800- EGF + EGF 의존성 EGFR 수용체 인산화 (화합물 부재). 700/800com = 화합물 존재하의 700 또는 800 채널 신호. % 최대 = {[(800com/700com) - (800- EGF/700- EGF)]/[(800+ EGF/700+ EGF) - (800- EGF/700- EGF)]} X 100%. % 억제 = 100% - (% 최대).
실시예 2: MTT 검정
하기 실시예는 MTT 세포 증식 검정을 기술한다. MTT 세포 증식 검정은 상기 기술된 1차 세포 기반 ICW 스크리닝 프로토콜로부터의 활성 화합물을 평가하는 2차 스크린으로서의 역할을 하였다. MTT 검정을 사용하여 3일의 화합물 처리 및 인큐베이션 이후, 생존력 및 증식 효과를 통해 독성을 평가하고, 상피 암종 A431 세포주 (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection: ATCC) 카탈로그 번호 CRL-155)와, 건강한 소 신장으로부터 유래된 MDBK 세포주 (ATCC 카탈로그 번호 CCL-22)를 비교하였다.
MTT 세포 증식 검정은 생존 세포의 미토콘드리아에 의해 생산된, 테트라졸륨 염 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드)의 불용성 포르마잔 결정으로의 환원을 측정하는 비색 검정 시스템이다. 세포를 MTT와 함께 인큐베이션시킨 후, 디터전트 또는 DMSO (ACS 시약 등급, 시그마 카탈로그 번호 472301)를 첨가하여 형성된 포르마잔 결정을 가용화시켰다. 이어서, 분광광도계 수단에 의해 색상을 정량화할 수 있었다. 여러 적용법 중, 약물 감수성, 세포독성, 성장 인자에 대한 반응, 및 세포 활성화가 본 방법에 적용되었다. 현재, 테트라졸륨 염의 환원이 방사선 계측 시험에 대한 안전하고 정확한 대안인 것으로 인정받고 있다.
달리 언급되는 것을 제외하고, 그 밖의 방법에 대해서는 MTT 세포 증식 검정에 대한 제조사의 설명서 (ATCC, 카탈로그 번호 30-1010K)에 따라 수행하였다.
각 MTT 검정에서는 5개의 농도, 및 2.5배 희석율로 하여 용량 반응 곡선에서 11개의 화합물과 1개의 표준이 시험되었다. 각 세포주에서는 각 세포 플레이트당 2개의 복제물 및 2개의 복제 플레이트를 통해 각 농도에 대해 4개의 개별 복제물을 얻었다. 농도는 25 mM 스톡으로부터 100% DMSO 중에서 희석하였다. 사용된 초기 농도 및 시험된 최종 농도는 하기와 같았다: 20 mM 내지 100 μM; 8 mM 내지 40 μM; 3.2 mM 내지 16 μM; 1.3 mM 내지 6.4 μM; 및 0.51 mM 내지 2.6 μM.
각 세포주에 대해 12개의 96 웰 플레이트를 플레이팅하였다. 계대 프로토콜에서와 같이 세포를 제거하고, 혈구계 상에서 계수하고, 표준 성장 배지 중에서 재현탁시키고, 다채널 피펫터를 사용하여 플레이팅함으로써 플레이팅을 수행하였다.
표준: AD4-10289를 용량 반응 표준으로서 사용하였고, 시험 화합물보다 낮은 한 농도로 진행시켰다: 40, 16, 6.4, 2.6, 및 1.0 μM 최종 농도. 1개의 시험 화합물 대신 10289를 진행시켰고, 복제물의 개수는 동일하였다. 16 ㎕의 25 mM 스톡 + 34 ㎕ DMSO = 8 mM 출발 농도이고, 동일 플레이트 중의 시험 화합물과 같이 단계 희석시켰다. 각 플레이트에 대해 상기 농도를 사용하여 A431에서는 100% 및 100% 미만의 활성을 얻은 반면, DMBK 세포에서는 50% 미만 및 0 활성을 또한 얻었다. 각 농도의 2개의 복제물을 각 세포 플레이트에서 진행시켰다. 층류형 무균 후드하에서 무균 기법을 이용함으로써 모든 화합물 첨가 및 세포 처리를 수행하였다.
대조군: 처리용 배지 중 0.5% DMSO를 대조군으로서 사용하였다. 본 검정을 통해 성장에 있어 유의적인 차이 없이 최대 1.0% DMSO에 대해서 내성을 띠는 것으로 입증되었다.
MTT 염료 (티아졸릴 블루 테트라졸륨 브로마이드, 시그마 카탈로그 번호 M5655) 스톡을 대량으로 제조하고, 사용을 위해 4℃에서 보관하였다: 5 mgs/ml 멸균 PDS, 차광 처리. 웰당 4 ul의 상기 스톡/100 ul의 처리용 배지를 사용하였다. 12개의 플레이트를 염색시키기 위해 130 ml의 MTT/처리를 새로 제조하였다; 124.8 ml 처리용 배지 + 522 ml의 MTT 스톡.
(95% 융합 플라스크로부터 수거된) 세포를 웰당 7,500개의 세포인 밀도로 플레이팅하였다. 처리하기 전, 플레이트를 밤새 인큐베이션시켰고, 처리 당일을 0일째로 지정하였다. 최종 흡인 후, 실온에서의 세포 건조 시간을 최소화시키기 위해 세포 세척 이전에 화합물 처리군을 제조하였다. 화합물을 96 웰 폴리프로필렌 플레이트 중 100% DMSO에 희석시켰다: 40 ㎕ 25 mM 스톡 + 10 ㎕ DMSO = 20 mM; 20 ㎕의 20 mM + 30 ㎕ DMSO = 8 mM; 20 ㎕의 8 mM + 30 ㎕ DMSO = 3.2 mM; 20 ㎕의 3.2 mM + 30 ㎕ DMSO = 1.3 mM; 20 ㎕의 1.3 mM + 30 ㎕ DMSO = 0.51 mM.
멸균 2.2 ml 딥 웰 플레이트 중 처리용 배지에 5.0 ㎕/ml를 첨가하였다 = 0.5% dmso 최종. 각 농도의 dmso 10 ㎕씩을 2.0 ml의 처리용 배지에 첨가한 후, 1,200 ㎕ 다채널 피펫터를 사용하여 혼합하였다. 딥 웰 플레이트로부터 세포 플레이트를 처리하였다. 처리용 배지는 0.5% FBS 및 표준 첨가물을 함유한 표준 성장 배지였다. 이와 같은 FBS의 농도 감소로 세포의 성장 속도는 저속화되었다. 각 세포주의 플레이트 1에서, 표준 AD4-10289는 래인 3에서 진행시켰다 (속도에 대해 상기 참조).
세포 플레이트로부터 배지를 흡인시키고, 200 ㎕/웰 멸균 PBS로 세척하였다. 흡인 처리된 PBS 세척액, 및 세포 플레이트를 웰당 200 ㎕의 화합물/처리용 배지로 처리하고, 37℃, 5% CO2에서 3일 동안 인큐베이션시켰다.
수거하기 전, 도립 현미경하에 시각적으로 관찰하였다. 성장 배지를 흡인시키고; 다시 MTT 염료/100 ㎕ 처리용 배지를 첨가하고; 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시켜 플레이트를 수거하였다. MTT 염료를 흡인시켰다. 100 ㎕/웰 dmso를 첨가한 후, 4.5로 설정된 벨코(Bellco) 플레이트 진탕기 상에서 5분 동안 진탕시켰다.
테칸 선라이즈(Tecan Sunrize) UV 플레이트 판독기 중에서 플레이트를 560 nm에서 판독하였다. 설정: 판독 모드, 바깥쪽 정규 2 sec; 진탕 정착 시간 3 sec. 데이터는 % 억제로서 기록하였는데, 이는 개별 플레이트에 대해 상기 플레이트로부터의 대조군 값을 사용하여 계산된 것이다.
실시예 3: 약물작용발생단으로부터의 확인된 화합물의 EGFR 억제에 관한 시험
다양한 약물작용발생단 모델을 나타내는, 확인된 화합물을 25 μM에서 EGFR을 억제시킬 수 있는 능력에 대해 시험하였다.
약물작용발생단 모델을 사용하여 AD4-화합물을 확인한 후 (실시예 3 참조), 세툭시맙의 정의된 CDR에 의해 인식되는 EGFR의 결합 부위 (서열 1)와 도킹시켰다. 이어서, AD4-화합물에 의한 표피 성장 인자 결합 억제를 측정하였다 (노바스크린 바이오사이언시즈(NovaScreen Biosciences: 미국 메릴랜드주 하노버)). 25 μM 농도에서 EGF 결합 억제에 관해 측정하였다.
억제제 검정에서, KD (결합 친화도)는 1.04 nM인 반면, B최대 (수용체 개수)는 43.0 fmol/mg 조직 (습식 중량)이었다. 수용체 공급원은 래트 간의 막이었다. 방사성 리간드는 [125I]EGF (150-200 Ci/㎍)였고, 최종 리간드 농도는 0.36 nM이었다. 비특이 결정기를 EGF - [100 nM]로서 사용하였다. 기준 화합물 및 양성 대조군은 EGF였다. 0.1% BSA를 함유하는 10 mM HEPES (pH 7.4) 중 25℃에서 60분 동안 반응을 수행시켰다. 유리 섬유 필터 상에서의 급속 진공 여과에 의해 반응을 종결시켰다. 필터 상에 포획된 방사능을 측정하고, 대조군 값과 비교함으로써 시험 화합물과 EGF 결합 부위의 임의의 상호작용에 대해 확인하였다. EGF 억제제 검정은 예를 들어, 문헌 [Mukku (1984) J. Biol. Chem. 259, 6543-6546]; [Duh et al. (1990) World J. Surgery 14, 410-418]; [Lokeshwar et al. (1989) J. Biol. Chem. 264(32), 19318-19326]에 기술된 방법을 변형시킨 것이었다.
실시예 4: 표적 억제를 위한 불활성 EGFR 결정 구조로부터의 약물작용발생단의 생성
하기 실시예는 표적 단백질 결정 구조 분석과 EGFR 억제를 위한 약물작용발생단의 생성에 대해 기술한다. 본 방법에 의해 밝혀진 리간드는 EGFR의 Dom II 및 Dom IV로부터의 잔기와 상호작용할 것이며, 이를 통해 불활성 형태의 수용체를 얻게 될 것이다.
EGFR의 불활성 형태의 단백질 결정 구조는 문헌 [Ferguson et al. (Ferguson, K.M., Berger, M.B., Mendrola, J.M., Cho, H., Leahy, D.J., Lemmon, M.A. (2003) EGF activates its receptor by removing interactions that auto-inhibit ectodomain dimerization Mol. Cell 11:507-517)]에서 보고된 바 있다. MOE 소프트웨어로 부위 탐지기 모듈을 사용함으로써 결합 부위를 측정하였다. 이는 도메인 II (23개의 잔기, Lys227, Phe228, Lys235, Asp236, Thr237, Cys238, Pro239, Pro240, Leu241, Met242, Tyr244, Tyr249, Gln250, Met251, Gly257, Lys258, Tyr259, Ser260, Cys265, Val275, His278, Gly279 및 Ser280) 및 도메인 IV (16개의 잔기, Arg548, Gly549, Pro550, Asp551, Asn552, Asp561, His564, Val566, Thr568, Cys569, Pro570, Ala571, Gly572, Val573, Met574 및 Leu580) (예를 들어, 도 1 참조)로부터의 잔기의 경계로 이루어졌다.
하기 기술하는 약물작용발생단 정의에서 케미컬 컴퓨팅 그룹 (CCG: 캐나다 퀘벡주 몬트리올)으로부터의 분자 작동 환경 (MOE) 소프트웨어의 약물작용발생단 특징 생성 및 약물작용발생단 가상 스크리닝 모듈을 사용하였다. MOE의 약물작용발생단 적용은 수용체 부위에서의 리간드 인식 및 그의 생물학적 활성과 직접적인 관련이 있는 리간드에서의 일단의 구조적 특징인 약물작용발생단의 일반 개념을 사용하였다.
MOE에서 약물작용발생단의 구조적인 특징은 공간내의 표지된 지점을 통해 제시된다. 각 리간드에 주석을 지정하였는데, 이는 리간드의 약물작용발생단에 기여할 수 있는 일단의 구조적 특징이 된다. 약물작용발생단 가설을 나타내는 조회를 사용하여 주석이 달린 리간드의 데이터베이스를 조사할 수 있다. 그러한 조사 결과는 조회의 약물작용발생단 특징을 조사된 데이타베이스의 리간드에 존재하는 약물작용발생단 특징에 대해 정렬하는 매칭 세트이다. MOE 소프트웨어 스위트는 상호작용성 변형 (위치, 반경 뿐만 아니라, 약물작용발생단 조회의 다른 특징이 상호작용적으로 조절될 수 있음); 체계적 매칭 (리간드 및 조회의 모든 가능한 매칭을 체계적으로 조사); 부분 매칭 (조사 알고리즘은 조회의 일부분만을 매칭하는 리간드를 찾아낼 수 있음); 및 부피 필터링 (조회는 매칭된 리간드의 형상에 대한 제한을 한 세트의 부피 형태에 부가함으로써 주목될 수 있음)을 제공한다.
본 실시예의 약물작용발생단 특징은 MOE에서 약물작용발생단 조회 편집기를 사용하여 작성하였다. 모든 수소 결합 공여체 특징은 반경 1.2 Å의 구이고, 보라색이다. 모든 수소 결합 수령체 특징은 반경 1.2 Å의 구이고, 청록색이다. 모든 방향족 특징은 반경 1.2 Å의 구이고, 녹색이다. 모든 조합된 수령체-음이온 약물작용발생단 특징은 반경 1.2 Å의 구이고, 회색이다. 모든 조합된 공여체-수령체 특징은 반경 1.2 Å의 구이고, 분홍색이다. 모든 조합된 공여체-양이온 특징은 반경 1.2 Å의 구이고, 적색이다. 모든 공여체, 수령체, 방향족, 조합된 산-음이온, 및 조합된 공여체-수령체 방향성 특징은 반경 1.5 Å의 구이고, 공여체에 대해서는 짙은 회색, 수령체에 대해서는 짙은 청록색, 방향족에 대해서는 짙은 녹색, 조합된 산-음이온에 대해서는 짙은 청록색, 조합된 공여체-수령체에 대해서는 짙은 회색이다. 약물작용발생단 조회에 필수적인 것으로 표지된 특징은 리간드가 히트가 되도록 상기 리간드에 함유되어야 한다.
접촉 통계학은 통계학적 방법을 사용하고 수용체의 3D 원자 좌표를 사용하여, 소수성 및 친수성 리간드 원자에 바람직한 위치를 계산하였다. 상기 방법을 사용하여, 소수성-방향족 및 H-결합 특징은 개별 약물작용발생단 정의에 언급된 바와 같이 위치시켰다. 프로그램 MOE에서의 MFSS 및 접촉 통계학으로부터 유도된 구조적 정보를 사용하여 유사 위치에 유사 원자를 가진 소분자를 확인하는 데 사용되는 약물작용발생단 모델을 구축하였다.
다중단편 조사 (MFSS)는 단편의 상대적으로 다수인 카피 (예를 들어, 에탄의 200개의 카피)를 수용체의 활성 부위로 필수적으로 위치시켰다. 단편은 활성 부위 원자 주위에 무작위로 위치시켰으며, 서로 상호작용하지 않는 것으로 가정되었으며, 단편 중첩과는 관련이 없었다. 이어서, 특수 에너지 최소화 프로토콜은 초기 위치를 정제하는 데 사용하였다: 수용체 원자는 단편의 평균 힘을 감지하는 반면, 각 단편은 수용체의 전체 힘을 감지하지만, 다른 단편은 감지하지 못한다. 상기 기법을 사용하여, MOE 약물작용발생단 특징으로서 사용하기 위한 수용체 내에 바람직한 위치에서 소수성, H-결합 공여체, 수령체 및 음이온 및 양이온을 위치시키는 것이 가능하였다.
MOE 소프트웨어에서 제공하는 방법을 사용하여 히트 AD4-1505에 상응하는 약물작용발생단 특징을 위치시켰다. 이는 상기 기술된 접촉 통계학 및 MFSS이다. 접촉 통계학 및 MFSS 알고리즘, 둘 모두를 불활성 형태의 EGFr (1NQL.pdb, 상기 도면 참조)의 도메인 II - 도메인 IV 경계 결합 부위에 적용시켰다
배제된 부피는 상기 기술된 도메인 II와 도메인 IV 경계에 위치하는 결합 부위의 수용체 잔기를 선택하고, MOE에서 약물작용발생단 조회 편집기로부터 "유니온"을 선택함으로써 MOE에서 생성하였다. 배제된 부피는 수용체로의 범핑을 회피하기 위해 리간드 원자가 배제되어야 하는 공간 내의 위치이다.
하기 기재된 개별 약물작용발생단 정의에서, 약어는 하기와 같다: F = 약물작용발생단 특징; 공여체 = Don, 수령체 = Acc, 음이온 = Ani, 양이온 = Cat, 수령체 및 음이온 = Acc&Ani, 공여체 및 양이온 = Don&Cat, 공여체 및 수령체 = Don&Acc, 방향족 = Aro, 소수성 물질 = Hyd.
약물작용발생단 모델 Pharm-1nql-glue-5 (표 6 및 표 7; 도 2 참조)는 히트 AD4-1505를 제공하였다. 이는 부분 매칭 모델이다. 리간드는 6 이상의 약물작용발생단 특징에 매칭되어야 한다.
하기 기재된 개별 약물작용발생단 정의에서, 약어는 하기와 같다: F = 약물작용발생단 특징; 공여체 = Don, 수령체 = Acc, 음이온 = Ani, 양이온 = Cat, 수령체 및 음이온 = Acc&Ani, 공여체 및 양이온 = Don&Cat, 공여체 및 수령체 = Don&Acc, 방향족 = Aro, 소수성 물질 = Hyd.
Figure pct00044
Figure pct00045
실시예 5: 불활성 EGFR 단백질에의 리간드 도킹 및 점수화
표적 단백질에의 도킹을 위해 선택된 화합물인 불활성 폴딩형 형태의 EGFr (PDB 수탁 번호 1NQL)은 MOE 모델링 소프트웨어에서 제조된 약물작용발생단 모델에 대해 정렬되는 것으로 밝혀진 화합물이었다. 이들 화합물은 MOE 데이터베이스 포맷으로 얻었다. 이들 화합물의 3차원 원자 좌표는 수소를 첨가하지 않고 MOE 데이터베이스 창에서 엑스포트 명령을 사용하여 구조 데이터 포맷 (*.sdf) 파일로 작성하였다.
이어서, 도킹을 위한 화합물의 제조를 위해 마에스트로 모델링 소프트웨어(슈뢰딘거 LLC: 미국 뉴욕주 뉴욕)의 리그프렙(LigPrep) 소프트웨어 모듈을 사용하였다. 리그프렙을 사용하여 *.sdf 파일을 마에스트로 포맷으로 전환하였다. 이어서, 수소를 첨가하고, 임의의 대전된 기를 중성화시켰다. 7.0 +/-1.0 pH 단위에서 리간드에 대한 이온화 상태를 만들었다. 이후, 필요하다면 호변이성질체를 제조하고, 대안적 키랄성을 생성하고, 저에너지 고리 이형태체를 제조하였다. 이어서, 마크로모델(Macromodel) 소프트웨어 모듈을 사용함으로써, 생성된 리간드를 최소화하는 에너지 및 임의의 문제가 되는 구조를 제거하였다. 최종적으로, 마에스트로 파일 (*.mae)은 도킹을 위해 이제 준비된 리간드에 대해 작성하였다. 이들 단계 모두 슈뢰딘거, LLC에 의해 공급받은 피톤 스크립트를 통해 자동화되었다.
하기는 단백질 제조를 기재한다. 그의 불활성 상태(1NQL.PBD)인 EGFr의 단백질 결정 구조를 PDB 포맷으로 마에스트로에 임포트하였다. 수소를 첨가하고, 임의의 오차, 예를 들어, 불완전 잔기를 복구하였다. 금속 이온 및 보조인자에 대해 단백질 구조를 체크하였다. 필요할 경우, 하전 및 원자 유형은 금속 이온 및 보조인자에 대해 고정하였다. 필요하다면 리간드 결합 차수 및 형식 전하를 조절하였다. 마에스트로 (글리드)에서 (MOE에 의해 밝혀진 약물작용발생단 히트들 중 하나인) 리간드, ZINC3304802를 선택하여 결합 부위를 결정하였다. 프로그램은 선택된 리간드의 중심을 결정하였으며, 박스의 중심에서 리간드의 중심으로 설정하는 디폴트를 나타내는 20 Å 박스를 도시하였다. 박스는 도킹되는 리간드에 대한 결합 부위였다. 글리드에서 자동화된 단백질 제조 설비는 2개의 구성요소, 즉 제조 및 정밀화로 이루어졌다. 제조 구성요소는 수소를 첨가하고, 결합 부위에 인접하지 않고 염 가교에 참여하지 않는 측쇄를 중화시켰다. 정밀화 구성요소는 측쇄 히드록실 기를 재배향하고 잠재적 입체 충돌을 완화시킨 공결정화된 복합체를 제한적으로 최소화시킨다.
하기는 수용체 그리드 제조를 기술한다. 글리드는 하나 이상의 리간드 분자 및 수용체 분자, 통상적으로 단백질 간의 바람직한 상호작용에 대해 조사하였다. 수용체의 형상 및 특성은 수소 결합, 쿨롱 (즉, 전하-전하) 상호작용, 소수성 상호작용, 및 단백질과 리간드의 입체 충돌을 비롯한, 분야의 여러 상이한 세트에 의해 그리드에 대해 나타내었다. 제1 단계에서, 수용체를 정의해야 한다. 이는 리간드를 선택함으로써 수행하였다. 구조 중 선택되지 못한 부분은 수용체였다. 리간드는 그리드 계산에 포함되지 않았으나, 상기 기재된 바와 같이 결합 부위를 정의하는 데 사용되었다. 수용체의 비극성 원자의 스케일링은 본 도킹 실행에 포함되지 않았다. 그리드 자체는 봉입 박스의 공간 내에서 계산하였다. 이는 상기 기재된 박스이며, 모든 리간드 원자는 상기 박스에 포함되어야 한다. 약물작용발생단 구속을 사용하지 않았는데, 이는 글리드 여분의 정밀도 점수화 함수가 이들 구속 없이 양호하게 수행되기 때문이었다.
글리드를 사용하기 위해, 수용체는 1개 초과의 분자, 예를 들어 단백질 및 보조인자를 포함할 수 있는 반면, 리간드 각각은 단일 분자이어야 한다. 글리드는 강성 또는 가요성 도킹 방식으로 수행할 수 있으며; 후자는 주입 리간드 각각에 대한 형태를 자동적으로 생성시켰다. 수용체에 대한 리간드의 위치 및 배향의 조합은 가요성 도킹에서의 그의 형태와 함께 리간드 포즈로서 지칭된다. 모든 도킹 실행은 가요성 도킹 방식을 사용하여 수행되었다. 글리드가 생성하는 리간드 포즈는 수용체와 리간드의 상호작용을 평가하는 일련의 계층 필터를 통한 통과를 생성하였다. 초기 필터는 정의된 활성 부위로 리간드의 공간 맞춤을 시험하고, 그리드-기반 방법을 사용하여 리간드-수용체 상호작용의 상보성을 조사하였다. 이들 초기 스크리닝을 통과하는 포즈는 알고리즘의 최종 단계로 도입하였으며, 이는 OPLS-AA 비결합된 리간드-수용체 상호작용 에너지에 대한 그리드 근사의 최소화 및 평가를 포함하였다. 이어서, 에너지-최소화된 포즈에 대해 최종 점수화를 수행하였다. 디폴트에 의해, 슈뢰딘거 소유의 글리드스코어(GlideScore) 다중-리간드 점수화 함수는 포즈를 점수화하는 데 사용되었다. 글리드스코어를 점수화 함수로서 선택한 경우, 리간드 각각의 포즈를 등급화하고 사용자에게 보고되는 포즈를 선택하는 데 복합 E모델 점수를 사용하였다. E모델은 글리드스코어, 비결합된 상호작용 에너지, 및 가요성 도킹에 대한 생성된 리간드 형태의 과잉의 내부 에너지를 조합하였다. 형태적 가요성은 광범위한 형태 조사에 의해 글리드에서 조작하였으며, 부적합한 형태, 예를 들어, 긴-범위 내부 수소 결합을 가진 형태를 신속하게 제거하는 발견적 스크리닝에 의해 증가하였다.
본 실시예의 도킹 실행에서 사용되는 설정은 하기와 같았다. 그리드 파일을 판독하였다. 여분의 정밀도 (XP) 점수화 함수를 사용하였다. 형태적 가요성을 사용하여 도킹하였다. 초기 글리드 스크리닝를 위한 리간드당 5,000 포즈를 유지하였다 (디폴트). 초기 포즈를 유지하기 위한 점수화 창은 100.0 (디폴트)이었다. 에너지 최소화를 위한 리간드당 최상의 800 포즈를 유지하였다 (디폴트). 에너지 최소화를 위해, 2.0의 거리 의존성 유전 상수를 사용하였으며, 접합 기울기 단계의 최대치는 100이었다 (디폴트). 이어서, 리간드 파일을 로딩하였다. > 120 원자 및/또는 > 20 회전성 결합을 가진 분자는 도킹하지 않았다 (디폴트). 부분 전하 < 0.15를 가진 리간드 원자의 반 데르 발스 반경은 0.80로 스케일링하였다. 이는 수용체 가요성을 모방하기 위해 수행하였다. 구속 및 유사성은 사용하지 않았다. 쿨롱 + 반 데르 발스 에너지 > 0.0을 가진 포즈는 거절하였다. 분자 각각에 대한 포즈가 형태적으로 구별되도록 하기 위해, RMS 편차 < 0.5 및/또는 1.3 Å의 최대 원자 변위를 가진 포즈는 폐기하였다.
하기는 글리드 점수화를 기술한다. 리간드 각각에 대한 최상의 도킹된 구조의 선택은 에너지 그리드 점수, 글리드스코어에 의해 예측되는 결합 친화도, 및 (가요성 도킹에 대해) 형태-조사 알고리즘의 지정을 위해 사용되는 모델 잠재성에 대한 내부 변형 에너지를 조합하는 모델 에너지 점수 (E모델)를 사용하여 수행하였다. 또한, 글리드는 전하-쌍극자 및 쌍극자-쌍극자 상호작용의 소비로 전하-전하 상호작용이 과도하게 보상되는 것을 막기 위해 체계적으로 구성된, 특별하게 구축된 쿨롱-반 데르 발스 상호작용-에너지 점수 (CvdW)를 계산하였다. 상기 점수는 의도적으로 "비가공" 쿨롱-반 데르 발스 상호작용 에너지보다 상이한 리간드의 결합 친화도 비교에 보다 적합하도록 만들어졌다. 최종 데이터 후처리 작업에서, 계산된 글리드스코어 및 "변형된" 쿨롱-반 데르 발스 점수 값을 조합하여 데이터베이스 스크리닝 적용에서 강화 인자 개선에 도움이 될 수 있는 종합 점수를 제공할 수 있다. 글리드스코어의 수학적 형태는 하기와 같다:
GScore = 0.065*EvdW + 0.130*Coul + Lipo + Hbond + Metal + BuryP + RotB + Site
여기서, EvdW는 반 데르 발스 에너지 (형식 전하를 가진 기, 예를 들어, 금속, 카르복실레이트 및 구아니디늄 상의 감소된 순 이온성 전하로 계산됨)이고; Coul은 쿨롱 에너지 (형식 전하를 가진 기, 예를 들어, 금속, 카르복실레이트 및 구아니디늄 상의 감소된 순 이온성 전하로 계산됨)이고; Lipo는 친유성 접촉 항 (바람직한 소수성 상호작용을 보상)이고; Hbond는 수소-결합 항 (공여체 및 수령체가 중성인지, 또는 하나는 중성이고 다른 하나는 하전되었는지, 또는 둘 모다 하전되었는지에 따라 상이하게 가중화된 성분으로 분리)이고; metal은 금속-결합 항 (음이온성 수령체 원자 간의 상호작용만이 포함됨; 아포 단백질 중 금속 순전하가 양성이면, 음이온성 리간드에 대한 선호도가 포함되고; 순전하가 0이면 선호도는 억제됨)이고; BuryP는 매립형 극성 기에 대한 벌점이고; RotB는 동결 회전성 결합에 대한 벌점이고; Site는 활성 부위에서의 극성 상호작용이다 (소수성 영역에서 극성이나 비-수소-결합성인 원자가 보상됨).
하기는 스크리닝된 가상 화합물 라이브러리의 제조를 기술한다. 상업적으로 입수가능한 화합물의 무료 가상 데이터베이스로부터의 리드-유사 화합물을 ZINC 데이터베이스 (문헌 [Irwin and Shoichet (2005) J. Chem. Inf. Model. 45(1), 177-182])로부터 구조 데이터 포맷 (sdf, 몰레큘라 디자인 리미티드(Molecular Design Limited))으로 다운로딩하였다. 리드-유사 데이터베이스는 33개의 세그먼트로 분할된 대략 890,000개의 화합물로 구성되었다. MOE에 의한 스크리닝을 위한 이형태체의 데이터베이스를 제조하는데 이를 사용하였다. 이어서, 수소를 첨가하였다. 약물작용발생단 조사를 위해, 저에너지 이형태체의 데이터베이스를 제조해야 한다. 형태 임포트 명령어를 상기 sdf 파일에 적용하였다. 이형태체를 제조한 후, 이형태체 데이터베이스의 사전프로세싱을 적용하였다. 특징 주석달기라고 지칭되는 상기 단계는 각 분자/형태 및 그의 기하학적 관계에서 약물작용발생단 특징의 유형을 결정하였다. 이어서, 이를 조회와 비교하고, 주어진 허용 범위 내에서 조회와 매칭되는 상기 분자/형태를 히트로서 저장하였다.
상기 기술된 방법에 따하 단백질 EGFR의 1NQL.PDB 결정 구조로부터 확인된 약물작용발생단에 대한 ZINC 데이터베이스로부터의 화합물 분석을 통해 화합물 AD4-1505를 확인하였다.
<화학식 1>
Figure pct00046
AD4-1505
하기 표 중의 AD4-1505-유사 화합물은 구조 유사성 조사를 통해 확인하였고, 1NQL.PDB 결합 부위에의 도킹을 통해 그의 글리드 및 E모델 점수를 수득하였다.
하기 표 8 중의 화합물은 AD4-1505 구조 유사성 조사를 통해 확인되었고, 1NQL.PDB 결합 부위에의 도킹을 통해 그의 글리드 및 E모델 점수를 수득하였다. 또한 표 8에는 ICW 검정 및 MTT 검정 결과가 제시되어 있다 (실시예 1, 실시예 2, 실시예 5 참조).
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Figure pct00078
AD4-1505 화합물의 도킹된 포즈의 2-차원 표현을 AD4-1505-유사 화합물과 함께 생성하였다. EGFR에 대한 화합물 AD4-1505의 도킹은, 예를 들어 도 3a에 도시되어 있다. EGFR에 대한 화합물 AD4-10963 (AD4-1505-유사 화합물)의 도킹은, 예를 들어 도 3b에 도시되어 있다. EGFR에 대한 화합물 AD4-10961 (AD4-1505-유사 화합물)의 도킹은, 예를 들어 도 3c에 도시되어 있다. EGFR에 대한 화합물 AD4-10945 (AD4-1505-유사 화합물)의 도킹은, 예를 들어 도 3d에 도시되어 있다. EGFR에 대한 화합물 AD4-10315 (AD4-1505-유사 화합물)의 도킹은, 예를 들어 도 3e에 도시되어 있다. EGFR에 대한 화합물 AD4-10965 (AD4-1505-유사 화합물)의 도킹은, 예를 들어 도 3f에 도시되어 있다.
실시예 6: 조합 연구
연구를 개시하여, 세포 증식 검정 (MTT 검정)에서 EGF 수용체의 기능을 억제하는 것으로 공지되어 있는 몇몇 화합물과 상승작용하는 본원에 개시된 다양한 화합물의 능력을 평가하였다. 이들 화합물은 타르세바, 타이커브 (EGFR 및 HER2 티로신 키나제의 비-제한적 억제제), 이레사 (EGFR 키나제의 선택적 억제제) 및 에르비툭스의 마우스 항체 상동체 (클론 225; EGF 수용체에 대한 EGF의 결합을 억제함)를 포함한다. 이 가설에 대한 논리적 근거는 AD4 화합물이 EGFR 항체, 에르비툭스보다 다양한 부위와 상호작용하며 EGFR 키나제 억제제, 타이커브, 이레사 또는 타르세바보다 다양한 작용 메카니즘을 갖는다는 아이디어를 기초로 한다.
달리 나타낸 것을 제외하고는, 방법은 상기 실시예에 따른다.
공지된 EGFR 억제제 타이커브 (AD4-0003), 이레사 (AD4-0004), 타르세바 (AD4-0005) 및 클론 225 (이로부터 에르비툭스가 유래함)를 고정 농도의 AD4 화합물의 존재 또는 부재 하에 적정하였다. EGFR 키나제 억제제 및 AD4 화합물을, 필요에 따라 DMEM+BSA로의 1/200 희석이 2 x 최종 목적 농도가 되도록 100% DMS0 (AD4 10381의 경우 DMSO + 0.2% TFA) 중에서 예비-희석하였다. 예비-희석을 DMSO 보다는 DMEM+BSA 중에서 수행한다는 것을 제외하고는 클론 225를 유사하게 희석하였다. 이어서, EGFR 억제제 및 AD4 화합물 희석물을 96 웰 플레이트에서 1:1로 혼합하였다. 이어서, 믹스 50 ㎕를 세포 플레이트에 첨가하였다.
클론 225 조합 실험을 위해, 클론 225 (랩 비전(Lab Vision)/써모 사이언티픽(Thermo Scientific); #MS-269)를 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 및 0 ㎍/ml의 농도에서 시험하였다. 자극에 사용된 EGF 농도는 10 ng/ml였다. 타르세바 조합 실험을 위해, 타르세바를 156, 63, 25, 10, 4 및 0 nM의 농도에서 시험하였다. 자극에 사용된 EGF 농도는 5 ng/ml였다. 타이커브 조합 실험을 위해, 타이커브를 78, 31.25, 12.5, 5, 2 및 0 nM의 농도에서 시험하였다. 자극에 사용된 EGF 농도는 5 ng/ml였다. 이레사 조합 실험을 위해, 이레사를 156, 63, 25, 10, 4 및 0 nM의 농도에서 시험하였다. 자극에 사용된 EGF 농도는 5 ng/ml였다.
각각의 실험에 사용된 AD4 화합물의 농도를 그래프 및 데이터 표에 제공하였다. 좌향으로의 억제제 곡선의 이동은 AD4-화합물의 유효성의 증가를 나타낸다.
이들 연구에서, MTT 검정에서 세포 증식을 억제하는 능력에 대해 AD4 화합물 및 공지된 화합물 (예를 들어 타이커브)의 능력을 단독으로 또는 고정 정수 비로 조합하여 평가하였다. 이들 연구로부터, 하기 값이 계산되었다: AD4 화합물 단독에 대한, 타이커브 (또는 다른 시험 화합물) 단독에 대한, 그리고 조합된 경우의 각각의 화합물에 대한 IC50 값; 길항작용 또는 상승작용의 정도를 반영하는 조합 지수 (CI) (하기 표 9 참조); 주어진 효과 수준에 있어서 각각의 약물 단독의 용량과 비교한 경우에, 상승작용적 조합에서의 각각의 약물의 용량이 몇 배나 감소할 수 있는지에 대한 척도인 용량 감소 지수 (DRI).
Figure pct00079
결과는 다음을 나타내었다. 세포 증식 검정에서 일련의 AD4-Pharma 화합물은 타이커브, 이레사 및 에르비툭스와 상승작용 효과를 일으켜 그의 효과를 개선시켰다. 이들 상승작용 효과를 용량 감소 지수에서의 유의한 변화, 조합 지수, 용량-반응 곡선의 이동에 의해 입증하였다.
수많은 화합물의 효과는, 화합물의 농도가 증가함에 따라 효과가 증가하였기 때문에 양성 협동성에 관련된 것으로 나타났다. 통상적으로, 가장 높은 정도의 양성 협동성을 나타내는 화합물이 높은 DRI 값을 나타냈다. 또한, 가장 높은 정도의 양성 협동성을 나타내는 화합물 중 일부는 낮은 CI 값에 의해 입증되듯이 상승작용적 거동을 나타낸다. EGFR 키나제의 또 다른 선택적 억제제인 이레사 및 타르세바는 타이커브와 상승작용 효과를 일으키지 않았다. 동일한 표적 (즉, EGFR 키나제)에서 작용하는 화합물은 상승작용적이어서는 안된다.
용량-반응 곡선에서의 이동의 예를 도 4에 나타내었으며, 여기서 AD4-10628은 타이커브 및 이레사 둘 모두에 있어서 용량-반응 곡선에서 좌향 이동 (보다 높은 효능)을 일으켰다. 효과는 보다 높은 농도의 화합물에서 보다 명백하였으며, 이는 양성 협동성 효과가 화합물의 작용에 관련될 수 있음을 나타낸다.
몇몇 더 효능있는 화합물에 대한 결과를 하기 표 10에 요약하였다. AD4-10628, AD4-1505 및 AD4-11511은 타이커브의 용량-반응 곡선에서 좌향 이동 (즉, 보다 큰 효능)을 일으켰으며, 매우 높은 DRI 값을 나타내었다. EGFR 키나제 억제제에 대한 용량-반응 곡선에서 유의한 이동이 일어났을지라도, AD4 화합물의 효과가 보다 높은 농도에서 보다 높은 정도로 관찰되기 때문에 이들 효과는 IC50 값 (50% 억제)에서 유의한 이동으로 해석되지 않는다.
Figure pct00080
타이커브에 대한 시험 화합물의 효과에 대해, 뿐만 아니라 시험 화합물에 대한 타이커브의 효과에 대해 DRI 값을 계산하였다. 일반적으로, 높은 DRI에 의해 입증되듯이 대부분의 화합물은 타이커브의 효과를 개선시킨 반면, 타이커브는 통상적으로 시험 화합물에 대해 최소 효과를 가졌다. 결과적으로, 기록된 DRI는 타이커브에 대한 시험 화합물의 효과에 대한 것이다. 이는 5% 내지 97% 범위의 퍼센트 효과, 또는 Fa의 함수로서의 DRI 플롯팅에 의해 가장 잘 관찰할 수 있다 (예를 들어, 도 5 참조). AD4-10628은 타이커브의 활성에 대해 유의한 효과를 가졌으며, 이는 활성 수준 (또는 용량)이 높아질수록 보다 커졌던 반면에, 타이커브는 AD4-10628에 대해 효과가 거의 없었다 (예를 들어, 도 5 참조). 표 10에 나타낸 바와 같이, AD4-10628, AD4-1505 및 AD4-11511은 모두 타이커브 및 이레사 둘 다에 대해 상당히 높은 DRI를 생성하였다.
화합물의 조합 효과가 세포 증식의 50%, 90%, 95% 및 97% (즉, ED50, ED90, ED95 및 ED97) 억제를 일으키는 경우의 CI 값을 계산하였다. 90% 억제에서의 CI 값을 보여주는 그래프를 도 6에 나타내었다. 적색 선 아래 (즉, CI < 0.9)의 반응은 상승작용을 나타낸다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 수많은 화합물은 상승작용을 나타내었다. 예를 들어, AD4-10628 및 AD4-1505에 대한 CI 값 (표 10 참조)은 타이커브와의 유의한 상승작용을 입증하였다. 대조적으로, 단지 AD4-1505만이 CI 값을 근거로 이레사와의 상승작용을 나타내었다. 이레사 및 타이커브가 유사한 작용 메카니즘을 가지고 있기 때문에, 이들 두 화합물 사이에서 최소 상호작용이 예상될 것이다. 표 10에 나타낸 바와 같이, 상호작용은 이레사에 대한 DRI 및 CI 값을 근거로 거의 관찰되지 않았다.
이들 결과는 AD4 화합물이 EGF 수용체 키나제 또는 EGF 수용체와 다른 부위를 통해 EGF 수용체-매개 세포 증식에 대해 유의한 효과를 일으킨다는 것을 보여준다. 또한, 이들의 상승작용 효과를 기초로, 화합물은 보다 낮은 치료 용량의 시판 화합물, 타이커브, 이레사 또는 에르비툭스를 사용하면서 동일한 또는 개선된 치료 효과를 달성하는 특유의 방법을 제공할 수 있다.
실시예 7: 세포 증식 검정
하기 실시예는 A549, H1975 및 HT-29 세포를 기초로 하는 세포 증식 검정을 나타낸다. 각각의 A549, H1975 및 HT-29 세포 증식 검정은 생존 세포의 수의 측정을 위한 MTT 검정을 이용한다. 세포 증식 검정을 이용하여 화합물이 암 세포 성장에 대한 효과를 갖는지 갖지 않는지의 여부를 결정할 수 있다. 먼저 MTT 검정을 설명하고, 이어서 각각의 A549, H1975 및 HT-29 세포 증식 검정을 기재한다. 각각의 세포 증식 검정의 예비 결과를 본 실시예에 기록하였으며, 후속으로 화합물의 추가 시험을 나타내었다.
MTT 검정.
세포 증식을 MTT 검정을 이용하여 측정하였다. MTT 세포 증식 검정은 생존 세포의 미토콘드리아에 의한 테트라졸륨 성분 (MTT)의 불용성 포르마잔 생성물로의 환원을 측정하는 비색 검정 시스템이다. 세포를 MTT 시약과 함께 인큐베이션한 후, DMSO를 첨가하여 유색 결정을 가용화시키고, 샘플을 560nm의 파장에서 판독하였다. 생성된 색상의 양은 생존 세포의 수에 정비례한다.
3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드 (MTT) 염료 (에이사(Aesar), 카탈로그 번호 L11939)를 PBS 중에서 5mg/ml로 제조하였다. 각 웰에 대해, MTT 용액 20㎕를 기존 배지에 첨가하고, 실온에서 5분 동안 완만하게 진탕시키면서 철저하게 혼합하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 대략 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 2-3 시간 인큐베이션한 후, 배지를 흡출하고, 플레이트를 가볍게 두두려 건조시켰다. 200㎕/웰의 100% DMSO (시그마, 카탈로그 번호 472301)를 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 10분 동안 인큐베이션하고, 실온에서 5분 동안 완만하게 진탕시키면서 철저하게 혼합하였다. 플레이트를 560nm에서 폴라스타(PolarStar) 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 퍼센트 (%) 억제를 100% - (OD560nm 실험-블랭크) X 100% / OD560nm 대조군-블랭크로서 계산하였다. 블랭크 = 웰 + 혈청 무함유 배지 + 0.5% DMSO. 실험 = 웰 + 세포 + 처리 + 0.5% DMSO. 대조군 = 웰 + 세포 + 0.5% DMSO. IC50 값을 비-선형 회귀 곡선 핏팅을 이용하여 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)에서 계산하였다. 모든 통계적 분석은 그래프패드 프리즘 또는 마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel)에서 수행하였다.
A549 세포 증식 검정.
A549 세포 증식 검정은 A549 비소세포 폐암 (NSCLC) 세포주에서 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Tang et al. 2008 Br J Cancer 99, 911-922]; [de La Motte Rouge 2007 Cancer Res 67, 6253-6262]; [Magesh et al. 2009 Phytother Res 23, 1385-1391] 참조). 요컨대, 화합물을 96-웰 플레이트에 플레이팅된 세포에 첨가하였다. 세포를 72시간 동안 성장시킨 후, MTT 처리하였다. 세포 증식에 대한 화합물의 효과를 그래프패드 프리즘을 이용하여 분석하였다.
A549 세포는, 야생형 EGFR 및 p53을 갖지만 이를 종양유전자로 형질전환시키는 KRAS 유전자의 점 돌연변이를 갖는 비소세포 폐암 세포주이다. A549 세포의 성장을 억제하는 화합물은 폐암 환자에 대한 잠재적인 치유적 치료제로서 역할을 할 수 있다. 이러한 신규 화합물을 단독으로 또는 기존 분자와의 조합으로 사용하여 상승작용적 조합물을 생성할 수 있다.
A549 세포 증식 검정을 위해, 제1일에, A549 세포 (ATCC, 카탈로그 번호 CRL-185, 로트 번호 7502546)를 96 웰 조직 배양-처리 플레이트 (BD, 카탈로그 번호 353916)에서 0% 태아 소 혈청 (FBS) (하이클론(Hyclone), 카탈로그 번호 SH30071.03, 로트 번호 ATB31500), 1% Pen Strep (깁코(Gibco), 카탈로그 번호 15140) 및 1% L-글루타민 (깁코, 카탈로그 번호 25030)을 함유하는 배지 200㎕ 중에 8,000개 세포/웰로 시딩하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 85% 습도의 조직 배양 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다. 제2일에, 200x의 화합물의 작업 용액을 제조하였다. 0.5%의 최종 DMSO 농도를 위해 배지 200㎕에 100% DMSO 중에 희석된 200x 화합물 1㎕를 첨가하였다. 플레이트를 72시간 동안 인큐베이션 한 후, 이들을 (상기 기재된 바와 같이) MTT로 분석하였다. 각각의 처리로부터 생성된 IC50 값은 세포의 생존율을 절반만큼 (즉, 최대 생존율의 50%) 감소시키는데 요구되는 약물의 농도를 나타낸다.
MTT 검정을 이용한 A549 세포 증식 검정의 예비 결과는 A549 NSCLC 세포주에서 화합물 억제된 세포 증식을 나타내었다 (예를 들어, 도 9 참조). A549 세포 증식 검정은 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 용이하게 식별한다. 이 실험에서, 최대 및 최소 효능 화합물 사이의 차이는 100배를 초과하였다.
H1975 세포 증식 검정.
A549 세포 증식 검정은 H1975 세포에서 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Naumov et al. 2009 Clin Cancer Res 15, 3484-3494] 참조). 요컨대, 화합물을 96-웰 플레이트에 플레이팅된 세포에 첨가하였다. 세포를 72시간 동안 성장시킨 후, MTT 처리하였다. 세포 증식에 대한 화합물의 효과를 그래프패드 프리즘을 이용하여 분석하였다.
H1975 세포는, EGF 수용체 억제제, 예컨대 타르세바에 대해 내성이 되도록 하는 돌연변이가 발생한 비소세포 폐암 (NSCLC) 세포주이다. H1975 세포의 성장을 억제하는 화합물은 타르세바 또는 다른 EGF 수용체 억제제에 대해 내성이 발생한 폐암 환자를 위한 잠재적인 치유적 치료제로서 역할을 할 수 있다.
H1975 세포 증식 검정을 위해, 제1일에, H1975 세포를 96 웰 조직 배양 처리 플레이트 (BD, 카탈로그 번호 353916)에서 5% 태아 소 혈청 (FBS) (하이클론, 카탈로그 번호 SH30071.03, 로트 번호 ATB31500), 1% Pen Strep (깁코, 카탈로그 번호 15140) 및 1% L-글루타민 (깁코, 카탈로그 번호 25030)을 함유하는 배지 200㎕ 중에 2,000개 세포/웰로 시딩하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 제2일에, 200x의 화합물의 작업 용액을 제조하였다. 0.5%의 최종 DMSO 농도를 위해 배지 200㎕에 100% DMSO 중에 희석된 200x 화합물 1㎕를 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 72시간 동안 인큐베이션한 후, 제5일에 이들을 (상기 기재된 바와 같이) MTT로 분석하였다. 각각의 처리로부터 생성된 IC50 값은 세포의 생존율을 절반만큼 (즉, 최대 생존율의 50%) 감소시키는데 요구되는 약물의 농도를 나타낸다.
H1975 세포 증식 검정의 예비 결과는 화합물 처리 후 72시간 동안 배양한 세포의 생존율에 대한 화합물 AD4-10460의 효과를 나타내었다 (예를 들어, 도 10 참조). H1975 세포 증식 검정에 따르면, AD4-10460에 대한 IC50 값은 0.3 μM (도 10으로부터의 최고 피트 값: 최저 0.3898, 최고 3.692, 로그IC50 -6.517, 힐기울기(HillSlope) -1.931, IC50 3.039e-007, 범위 3.302)이었다.
HT-29 세포 증식 검정.
HT-29 세포 증식 검정은 HT-29 세포에서 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Zhang et al. 2006 Worl J Gastroenterol 12, 3581-3584]; [Tang et al. 2007 Postgrad Med J 83, 338-343] 참조). 요컨대, 화합물을 96-웰 플레이트에 플레이팅된 세포에 첨가하였다. 세포를 72시간 동안 성장시킨 후, MTT 처리하였다. 세포 증식에 대한 화합물의 효과를 그래프패드 프리즘을 이용하여 분석하였다.
HT-29 세포는 결장의 종양에서 세포의 증식을 억제하는 화합물의 능력을 평가하는데 사용되는 결장암 세포주이다.
HT-29 세포 증식 검정을 위해, 제1일에, HT-29 세포를 96 웰 조직 배양 처리 플레이트에서 10% FBS, 1X Pen-Strep 및 1X L-글루타민을 함유하는 배지 100㎕ 중에 3,000개 세포/웰로 시딩하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 85% 습도의 조직 배양 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다. 제2일에, 완전 배지를 2.5% FBS (180 ㎕/웰)를 함유하는 배지로 대체하였다. 화합물의 작업 용액을 제조하였다 (100% DMSO 중 400x). 0.5%의 최종 DMSO 농도를 위해 배지 200㎕에 5x 화합물 (평범한 배지 중에 희석) 20㎕를 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 85% 습도 하에 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 제5일에, 플레이트를 MTT 검정을 이용하여 세포 성장에 대해 분석하였다. 각각의 처리로부터 생성된 IC50 값은 세포의 생존율을 절반만큼 (즉, 최대 생존율의 50%) 감소시키는데 요구되는 약물의 농도를 나타낸다.
HT-29 세포 증식 검정의 예비 결과는 HT-29 세포주에서 세포 밀도 및 퍼센트 태아 소 혈청의 효과를 나타내었다 (예를 들어, 표 11, 표 12 참조). 결과는 일정하게 5%의 FBS 농도를 이용하는 5,000개 세포/웰이 3개의 EGF 수용체 키나제 억제제 - 타이커브, 이레사 및 타르세바에 대해 보다 우수한 결과를 생성한다는 것을 나타내었다 (예를 들어, 표 11 참조).
Figure pct00081
또한, 하기 표 12에 나타낸 바와 같이 HT-29 세포를 48 또는 72시간 동안 인큐베이션한 경우에 타이커브 또는 타르세바의 IC50 값에 있어서 어떠한 차이도 없었다.
Figure pct00082
EGF 수용체 키나제 억제제, 타이커브 및 타르세바에 대한 HT-29 세포 증식 검정을 이용한 용량-반응 곡선을 도 11에 나타내었다. 타이커브 및 타르세바의 IC50 값은 각각 2.7 μM 및 12 μM로 계산되었다.
AD4-1505-유사 시리즈의 화합물은 폐 및 결장암 세포를 비롯한 여러 다양한 기관으로부터의 암 세포 성장을 억제한다. 연구는 상기 화학 시리즈의 화합물이 A549 비소세포 폐암 (NSCLC) 세포, EGF 수용체 키나제 억제제인 타르세바에 대한 내성이 있는 H1975 NSCLC 세포, 및 HT-29 결장암 세포에서 세포 증식을 억제하는 것을 나타내었다. 하기 표 13에 A549 세포 증식 검정에서 IC50 값 < 200 nM을 갖는 화합물의 요약을 제공하였다.
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00085
표 13에 나타낸 바와 같이, 상기 시리즈로부터의 최대 효능 화합물은 IC50 ≤ 100 nM로 A549 또는 H1975 세포의 세포 증식을 억제하였다. 이들 화합물은 AD4-13124, AD4-13130, AD4-13131, AD4-13178, AD4-13202, AD4-13206, AD4-13211 및 AD4-13218을 포함한다.
A549 및 H1975 세포의 세포 증식 검정의 결과를 기초로, 상기 화학 시리즈의 화합물은 비소세포 폐암의 치료를 위한 치료 이점을 가질 것으로 기대된다. 이들 화합물이 또한 EGF 수용체 키나제 억제제, 예컨대 타르세바에 내성이 있는 H1975 세포에서 세포 증식을 억제하는데 효과적이기 때문에, 이들 화합물은 더 이상 타르세바에 반응하지 않는 NSCLC의 치료에서 치료 이점을 가질 것으로 기대된다. 또한, 상기 시리즈로부터의 화합물은 HT-29 세포에서 세포 증식을 억제하는 그의 능력을 기초로 결장암에서 치료 이점을 가질 수 있다.
실시예 8: 아폽토시스 검정
하기 실시예는 카스파제 3,7 검정, DNA 단편화 검정 및 아넥신 V 검정을 비롯한 세포 아폽토시스 검정을 나타낸다. 암 세포의 증식 또는 성장을 억제하는 것 이외에, 또 다른 바람직한 활성은 아폽토시스 또는 세포 사멸을 유도하는 화합물의 능력이다. 아폽토시스를 유도하는 AD4-1505-유사 시리즈의 화합물의 능력을 3가지의 상이한 검정에서 확인하였다: A431 세포에서의 카스파제 3,7 활성의 유도; A549 세포에서의 DNA 단편화의 유도; 및 A549 세포에서의 아넥신 V 발현의 유도. 각각의 세포 아폽토시스 검정의 예비 결과를 본 실시예에 기록하였으며, 후속으로 화합물의 추가 시험을 나타내었다.
카스파제 3,7 검정.
카스파제 3,7 검정은 세포 아폽토시스의 초기 지표인 카스파제 3,7 활성을 유도하는 화합물의 능력을 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Garcio-Calvo et al. 1999 Cell Death Differ. 6, 362-369]; [Nicholson and Thornberry 1997 Trends Biochem. Sci. 22, 299-306]; [Thornberry et al. 1997 J. Biol. Chem. 272, 17907-17911]; [Thornberry and Lazebnik 1998 Science 281, 1312-1316]; [Bayascas et al. 2002 Cell Death Differ. 9, 1078-1089]; [Le et al. 2002 Proc. Natl. Acad. Sci USA 99, 15188-15193]; [Mooney et al. 2002 Br. J. Cancer 87, 909-917]; [Karvinen et al. 2002 J. Biomol. Screening 7, 223-231]; [Gopalakrishnan et al. 2002 , J. Biomol. Screening 7, 317-323]; [Preaudat et al. 2002 J. Biomol. Screening 7, 267-274]; [Zhang et al. 1999 J. Biomol. Screening 4, 67-73]; [Farfan et al. 2004 Cell Notes 10 15-17]; [Larson and Worzella 2005 Cell Notes 12, 13-16]; [Weis et al. 1995 Exp. Cell Res. 219, 699-708]; [Schlegel et al. 1996 J. Biol. Chem. 271,1841-1844] 참조). 하기 기재된 바와 같이, 카스파제 3,7 검정은 프로메가 카스파제-글로 3/7 검정 키트 (카탈로그 번호 G8092)를 이용한다.
카스파제-글로? 3/7 검정은 부착 또는 현탁액 세포의 배양물 또는 정제된 효소 제제에서 카스파제-3 및 -7의 활성을 측정하는 발광 검정이다. 검정은 테트라펩티드 서열, DEVD를 함유하는 발광유발 카스파제-3/7 기질을 제공한다. 이 기질은 절단되어, 광의 생산에 사용되는 루시퍼라제의 기질인 아미노루시페린을 방출한다. 카스파제-글로? 3/7 시약을 카스파제 활성, 루시페라제 활성 및 세포 용해에 대해 최적화시켰다. "첨가-믹스-측정" 포맷으로 단일 카스파제-글로? 3/7 시약을 첨가하여, 세포 용해, 후속으로 기질의 카스파제 절단 및 "백열-유형" 발광 신호의 생성을 일으켰다. 카스파제-글로? 3/7 검정은 멀티웰 플레이트 포맷으로 사용하기 위해 설계되었고, 이는 카스파제 활성 또는 아폽토시스의 자동화된 고-처리량 스크리닝에 대해 상기 검정이 이상적이 되도록 해준다.
요컨대, 세포 적정 연구를 수행하고 (384-웰 코스타(Costar) 플레이트에서 1,000, 3,000, 5,000 및 10,000개 세포/웰로 시딩한 세포) 화합물 노출 시간을 변경하고 (2, 4, 6 및 24시간) 검출 시약 첨가 후 플레이트의 판독 시점을 변경하여 (30, 60, 90, 120 및 180분), 카스파제 3,7 아폽토시스 검정을 유효화시켰다. 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하였다. 이러한 실험으로부터의 결과는, 2,000개 세포/웰의 밀도로 시딩한 세포를 화합물의 존재 하에 2 시간 동안 인큐베이션하고 검출 시약에서 60분 인큐베이션한 후에 플레이트를 판독한 경우에, 최적의 결과가 얻어진다는 것을 나타내었다.
카스파제 3,7 검정의 조직 배양물 일부에 대해, 제1일에, A431 세포 (ATCC, 카탈로그 번호 CRL-1555, 로트 번호 4323817)를 코스타 384-웰 조직 배양 처리 플레이트에서 1% 피루브산나트륨 (시그마, 카탈로그 번호 S8636), 1% Pen-Strep (깁코, 카탈로그 번호 15140), 1% L-글루타민 (깁코, 카탈로그 번호 25030) 및 10% FBS (하이클론, 카탈로그 번호 SH30071.03, 로트 번호 ATB31500)를 함유하는 DMEM (셀그로, 카탈로그 번호 10-017-CV) 중에 2,000개 세포/웰로, 25㎕/웰로 시딩하였다. 플레이트를 37℃, 5%CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 제2일에, 배지를 플레이트로부터 제거하고, FBS를 뺀 DMEM 25 ㎕를 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 제3일에, 배지를 제거하고, FBS를 함유하지 않으며 1 mg/ml의 BSA (시그마, 카탈로그 번호 A3059)를 함유하는 DEM에 희석한 화합물 25 ㎕로 대체하였다. 모든 웰에 대한 최종 DMSO (시그마, 카탈로그 번호 D2650) 농도는 0.5%였다. 세포 배양에 이어서 카스파제 3,7 검정을 수행하였다.
카스파제 3,7 검정을 위해, 세포를 37℃, 5% CO2에서 5.5 시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고, 실온으로 평형화시켰다. 30분 후, 카스파제 3/7 검출 시약 (프로메가 카스파제-글로 3/7 검정 키트, 카탈로그 번호 G8092) 25 ㎕를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 주석 호일로 덮고, 속도 4로 3분 동안 플레이트 진탕기에서 진탕시켰다. 이어서, 플레이트를 실온에 추가로 60분 동안 인큐베이션하였다. 폴라스타 플레이트 판독기를 이용하여 발광을 검출하였다.
10μM 타르세바에 대한 퍼센트 (%) 아폽토시스 자극을 100 x ((실험 RLU 값-세포 단독 RLU 값)/(10μM 타르세바 RLU 값-세포 단독 RLU 값))으로서 계산하였다. 10μM 스타우로스포린에 대한 퍼센트 (%) 아폽토시스 자극 (10μM 스타우로스포린이 100% 아폽토시스를 나타냄)을 100 x ((실험 RLU 값-세포 단독 RLU 값)/(10μM 스타우로스포린 RLU 값-세포 단독 RLU 값))으로서 계산하였다. 모든 통계적 분석은 그래프패드 프리즘을 이용하여 수행하였다.
상기 기재된 바와 같이, 비처리 A431 세포, 및 다양한 세포 밀도로 6 시간 동안 3 μM 스타우로스포린으로 처리한 세포에서 카스파제 3,7 활성을 평가하였다. 이들 결과를 기초로 (예를 들어, 도 12 참조), 2,000개 세포/웰의 세포 밀도를 선택하였다. 시간 경과 실험은 스타우로스포린에 의한 카스파제 3,7 유도에 대한 신호가 4 또는 2 시간에서보다 6 시간에서 더 컸음을 나타내었다 (데이터는 제시하지 않음).
카스파제 3,7 검정을 이용한 타르세바와의 상가 효과.
카스파제 3,7 검정에서 타르세바와의 상가 효과를 일으키는 화합물의 능력을 조사하였다. 2000개 세포/웰로 플레이팅된 A431 세포를 타르세바 단독 (0.5, 1, 2, 4, 8 또는 16 μM), AD4-13192 화합물 단독 (1, 2, 4, 8, 16 또는 32 μM), 또는 타르세바 + AD4 화합물 (타르세바/AD4-13192)의 존재 하에 인큐베이션하였다. 6 시간 후, 검정을 중단하고, 프로메가 카스파제-글로? 3/7 검정을 이용하여 카스파제의 존재를 측정하였다. 결과는 AD4-13192가 타르세바에 대해 상승작용적 (상가 효과를 넘는) 효과를 일으켜 카스파제 3,7 활성을 증가시킨다는 것을 보여주었다 (예를 들어, 도 13 참조).
따라서, 카스파제 3,7 검정은 세포 아폽토시스 활성의 초기 마커인 카스파제 3/7 활성에 대한 주어진 약물의 효과를 보여준다. 또한, 상승작용을 일으키는 화합물의 능력 (예를 들어, 타르세바 및 AD4-13192)이 카스파제 3,7 검정에서 용이하게 검출될 수 있다.
AD4-1505-유사 시리즈의 일부 화합물은 EGF 수용체를 과다발현하는 A431 세포에서 카스파제 3,7 활성을 유도하는 것으로 나타났다. 화합물의 효과를 하기 표 14에 요약하였다.
Figure pct00086
16 및 8 μM 농도 둘 모두에서, 카스파제 3,7 활성의 퍼센트 증가를 0.5 μM 스타우로스포린 (검정에 사용된 기준 화합물)에 의해 생성된 최대 반응의 백분율로 나타내었다 (표 14 참조). 또한, 각각의 화합물은, 카스파제 3,7 활성의 증가에 의해 측정된 바와 같이 타르세바, EGF 수용체 키나제 억제제의 능력을 상가 효과를 넘는 정도로 개선시켜 아폽토시스를 유발하였다 (표 14 참조). 이러한 결과는 AD4-1505-유사 시리즈의 화합물을 사용하여 타르세바의 능력을 개선시킴으로써 특정 유형의 암에서 아폽토시스를 유발할 수 있다는 것을 나타낸다.
DNA 단편화 검정.
DNA 단편화 검정은 세포 아폽토시스의 지표인 DNA 단편화를 유도하는 화합물의 능력을 측정한다. 진핵 세포 사멸의 2가지 별개 형태는 형태학적 기준 및 생화학적 기준에 의해 분류될 수 있다: 괴사 및 아폽토시스 (문헌 [Wyllie et al. 1980 Int. Rev. of Cytol. 68, 251-306]; [Duvall and Wyllie 1986 Immunol. Today 7, 115-119]). 괴사는 원형질 막의 이온 투과성 상승을 수반하고 (세포 종창) 원형질 막은 몇 분 이내에 파열된다 (삼투 용해). 아폽토시스는 막 수포화 (발포작용), 세포질의 축합 및 내인성 엔도뉴클레아제의 활성화를 특징으로 한다. 이 Ca2+ 및 Mg2+ 의존성 뉴클레아제는 최대한 접근가능한 뉴클레오솜간 링커 영역에서 이중 가닥 DNA를 절단하여 모노- 및 올리고뉴클레오솜을 생성한다. 대조적으로, 뉴클레오솜의 DNA는 코어 히스톤 H2A, H2B, H3 및 H4와 단단하게 복합체화되어, 엔도뉴클레아제에 의한 절단으로부터 보호된다 (문헌 [Burgoyne et al. 1974 Biochem. J. 14, 67-72]; [Stach et al. 1979 J Neurochem 33, 257-261]). 수득한 DNA 단편은, 단편화된 DNA의 추출 및 분리 후에 아가로스 겔 상에서 "DNA 래더"로서 검출되는 180 bp 서브유닛의 별개의 다중체이다. 아폽토시스성 세포의 세포질에서 모노- 및 올리고뉴클레오솜의 풍부화는, DNA 분해가 원형질 막 파괴의 수 시간 전에 일어난다는 사실에 기인한다 (문헌 [Duke and Cohen 1986 Lymphokine Res. 5, 289-299]). 아폽토시스는 진핵 세포 사멸의 가장 통상적인 형태이다. 이는, 흉선 성숙 동안 자가반응성 T 세포의 결손과 병행하여, 호중구 다형체의 노쇠에서, 그리고 IL-2와 같은 특정 성장 인자의 제거 또는 종양 괴사 인자 및 글루코코르티코이드와 같은 생리학적 자극소의 첨가 후에 발생한다 (예를 들어, 배아형성 동안) (문헌 [Scanlon et al. 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 182-186]; [Arends et al. 1990 Am. J. Pathol. 136, 593-608]). 아폽토시스는 또한, 세포독성 T 림프구 및 자연 킬러 (NK) 세포에 의해 (문헌 [Sanderson 1981 Biol. Rev. 56, 53-196]; [Wyllie 1987 Int. Rev. Cytol. 17(Suppl.), 755]), 그리고 이온화 방사선 (문헌 [Yamada and Ohyama 1988 Int. J. Radiat. Biol. 53, 65]), 및 항-Fas (문헌 [Yonehara et al. 1989 J. Exp. Med. 169, 1747-1756]) 및 항-APO-1 (문헌 [Trauth et al. 1989 Science 245, 301-305]; [Oehm et al. 1992 J. Biol. Chem. 267, 10709-10715])과 같은 모노클로날 항체에 의해 유도된다.
하기 기재된 DNA 단편화 검정에서 로슈(Roche) 세포 사멸 검출 ELISA 키트 (카탈로그 번호 11920 685 001)를 이용하였다. DNA 단편화 검정은 각각 DNA 및 히스톤에 대해 지정된 마우스 모노클로날 항체를 이용하는 정량적 샌드위치-효소-면역검정-원리를 기초로 한다. DNA 단편화 검정은 하기 단계를 포함한다: 마이크로플레이트 모듈의 벽에 대한 흡착에 의한 항-히스톤 항체의 고정; 인큐베이션 완충제 (= 차단 용액)를 사용한 처리에 의한 벽의 비-특이적 결합 부위의 포화; 샘플에 함유된 뉴클레오솜의 그의 히스톤 성분을 통한 고정된 항-히스톤 항체로의 결합; 뉴클레오솜의 DNA-부분과 반응하는 항-DNA-퍼옥시다제 (POD)의 첨가; 세척 단계에 의한 비결합 퍼옥시다제 접합체의 제거; 기질로서 ABTS (2,2'-아지노-디-[3-에틸벤즈티아졸린 술포네이트 (6)])*과의 면역복합체에서 유지된 퍼옥시다제 양의 결정.
DNA 단편화 검정의 조직 배양 일부를 위해, 제1일에, A549 세포 (ATCC, 카탈로그 번호 CCL-185, 로트 번호 7502546)를 96-웰 조직 배양 처리 플레이트에서 1% 피루브산나트륨, 1% Pen-Strep (깁코, 카탈로그 번호 25030, 로트 번호 568177), 1% L-글루타민 (깁코, 카탈로그 번호 11920685001) 및 10% FBS (하이클론, 카탈로그 번호 SH30071.03, 로트 번호 ATB31500)를 함유하는 RPMI-1640 (깁코, 카탈로그 번호 11875, 로트 번호 ATB31500) 중에 200 ㎕/웰로 10,000개 세포/웰로 시딩하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 제2일에, 배지를 플레이트로부터 제거하고, 5% FBS를 함유하는 배지 160 ㎕를 첨가하였다. 이어서, 0.5%의 최종 DMSO 농도를 위해, 5x 투여 농도로 제조된 100% DMSO 중 시험 화합물을 함유하는 배지 40 ㎕를 기존 배지에 첨가하였다. 이어서, 세포를 37℃, 5% CO2에서 24 시간 동안 화합물의 존재 하에 인큐베이션하였다.
DNA 단편화 검정을 위해, 24 시간 후, 플레이트를 200 x g에서 10분 동안 원심분리하였다. 배지를 완만하게 뒤집어 종이 타월로 받아내어 제거하였다. 플레이트를 가볍게 두드려 잉여 배지를 제거하였다. 용해 완충제 200 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 300 rpm에서 진탕시키고, 이어서 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 200 x g에서 10분 동안 원심분리하고, ELISA 분석을 위해 용해 상청액 20 ㎕를 부드럽게 덜어내었다. 세포 용해 상청액 20 ㎕를 양성 대조군 20 ㎕ 및 인큐베이션 완충제 음성 대조군 20 ㎕와 함께 스트렙타비딘-코팅된 플레이트에 넣었다. 80 ㎕의 면역시약 DNA 단편 검출 (로슈, 카탈로그 번호 11920 685 001)을 각 웰에 첨가하였다. 웰을 호일 접착제로 덮고, 실온에서 2시간 동안 300 rpm에서 진탕시켰다. 용액을 제거하고, 각 웰을 인큐베이션 완충제 300 ㎕로 3회 세척하였다. 100 ㎕의 ABTS 검출 기질 (로슈, 카탈로그 번호 11920 685 001)을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 대략 10-20분 동안 250 rpm의 플레이트 진탕기 상에서 인큐베이션하였다. 100 ㎕의 ABTS 정지 완충제를 첨가하였다. 플레이트를 폴라스타 플레이트 판독기 상에서 400 및 492 nm에서 판독하였다. 세포 기준선에 대한 퍼센트 (%) 아폽토시스 자극을 100 x ((실험 Abs 400-492 nm 값 - 세포 단독 Abs 400-492nm 값)/(세포 단독 400-492 nm 값))으로서 계산하였다. 1μM 스타우로스포린에 대한 퍼센트 (%) 아폽토시스 자극 (1μM 스타우로스포린이 100% 아폽토시스를 나타냄)을 100 x ((실험 Abs 400-492nm 값 - 세포 단독 Abs 400-492 nm 값)/(1μM 스타우로스포린 Abs 400-492 nm 값 - 세포 단독 Abs 400-492nm 값))으로서 계산하였다. 모든 통계적 분석은 그래프패드 프리즘에서 수행하였다.
DNA 단편화 검정을 이용하여, 세포를 웰당 5,000, 10,000 및 15,000개 세포로 플레이팅한 경우에 아폽토시스를 유도하는 화합물의 능력을 측정하였다. 또한 화합물의 효과를 6, 24 및 48시간에서 평가하였다. 기준 화합물, 스타우로스포린 (예를 들어, 도 14a-c 참조)에 의해 생성된 결과를 기초로, 웰 당 10,000개 세포의 세포 밀도 및 24 시간의 처리 시간을 선택하였다 (도 14b 참조).
일련의 시험 화합물로부터 활성을 검출하기 위해 DNA 단편화 검정의 능력을 평가하였다. 10 μM 농도에서 AD4-13165, AD4-13176 및 AD4-13179를 비롯한 여러 화합물은 A549 세포에서 아폽토시스를 유도하는 것으로 나타났다 (예를 들어, 도 15 참조).
AD4-1505-유사 시리즈의 일부 화합물은 A549 세포, 비소세포 폐암 세포주에서 DNA 단편화를 유도하는 것으로 나타났다. 화합물에 대한 데이터를 하기 표 15에 요약하였다.
Figure pct00087
Figure pct00088
결과는 배경과 비교하여, 그리고 0.5 μM 스타우로스포린 (검정에 사용된 기준 화합물)에 의해 생성된 최대 반응과 비교하여 DNA 단편화를 증가시키는 화합물의 효과를 나타낸다 (표 15 참조). 화합물은, 이들이 10 또는 1 μM의 농도에서 스타우로스포린에 비해 각각 50% 또는 20% 만큼 DNA 단편화를 증가시킨 경우에 활성인 것으로 간주하였다 (표 15 참조). 이러한 결과를 기초로, 상기 화학 시리즈의 화합물은 비소세포 폐암의 치료를 위한 치료 이점을 가질 것으로 기대된다.
아넥신 V 검정
아넥신 V 검정은 세포 아폽토시스의 척도인 아넥신 V 활성을 증가시키는 화합물의 능력을 보여준다 (예를 들어, 문헌 [Hotz et al. 1994 Cytometry 15, 237-244]; [Telford et al. 1992 Cytometry 13, 137-143]; [Vermes et al. 1995 J. Immun. Meth. 184, 39-51] 참조). 아폽토시스를 측정하는 검정을 이용하여 화합물이 암 세포에서 프로그램화된 세포 사멸을 유도할 수 있는지 없는지의 여부를 결정하였다. 아넥신 V는 사멸 또는 사멸중인 세포의 막 상에 발현된 포스파티딜세린에 결합함으로써 아폽토시스를 검출하는데 사용되는 단백질이다. FITC로 형광 태그를 부착하여, 이를 7-아미노악티노마이신 D와 함께 사용함으로써, 유동 세포측정법을 통해 아폽토시스를 겪는 세포의 백분율을 결정할 수 있다. 초기 아폽토시스의 세포는, 괴사로 인한 세포 막 투과성과 연관된 원적외선 7-AAD 신호에 의해 결국 대체될 FITC 신호를 방출할 것이다.
요컨대, 아넥신 V 검정을 위해, 화합물을 6-웰 플레이트에 플레이팅된 세포에 첨가하였다. 처리된 세포를 30시간 이하 동안 인큐베이션한 후, 아넥신 V의 존재를 검출하는 형광 세포 마커 프로브를 첨가하였다. 아폽토시스 및 괴사를 겪는 세포의 백분율을 유동 세포측정법에 의해 결정하였다. 시험된 화합물은 양성 대조군, 캄프토테신 또는 스타우로스포린과 동일한, 또는 약간 많은 아폽토시스를 유도하였다.
아넥신 V 검정의 조직 배양 일부를 위해, 제1일에, A549 세포 (ATCC, 카탈로그 번호 CRL-185, 로트 번호 7502546)를 6-웰 조직 배양 처리 플레이트에서 5% FBS (하이클론, 카탈로그 번호 SH30071.03, 로트 번호 ATB31500), 1% Pen-Strep (깁코, 카탈로그 번호 15140, 로트 번호 841383) 및 1% L-글루타민 (깁코, 카탈로그 번호 25030, 로트 번호 568177)을 함유하는 배지 2.0 ml 중에 100,000개 세포/웰로 시딩하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2 및 85% 상대 습도에서 밤새 인큐베이션하였다. 제2일에, 화합물의 작업 용액 (1000x)을 제조하였다. 2.0 ml 배지/웰에, 0.1%의 최종 DMSO 농도를 위해 100% DMSO 중에 희석된 1000x 화합물 2㎕를 첨가하였다. 제3일에, 플레이트를 30 시간 동안 인큐베이션하였다. 30 시간 후, 세포를 PBS로 세척하고, 이어서 세포를 37℃에서 8분 동안 트립신화시켰다 (셀그로(CellGro), 카탈로그 번호 25-0530Cl, 로트 번호 25053253). 세포를 300 x g에서 5분 동안 원심분리하여 수집하였다.
아넥신 V 검정을 위해, 세포 펠릿을 0.15 ㎍/웰의 아넥신 V FITC (바이오비전(BioVision), 카탈로그 번호 1001-200, 로트 번호 50601) 및 0.25 ㎍의 7-AAD (이바이오사이언스(eBioscience), 카탈로그 번호 00-6993-50, 로트 번호 50601)로 보충된 PBS/2.5 mM 염화칼슘 500 ㎕ 중에 재현탁시켰다. 세포를 실온의 암실에서 20분 동안 인큐베이션하고, 이어서 PBS/CaCl2로 1회 세척하고, 500 ㎕의 PBS/CaCl2, 2% v/v 포름알데히드 (써모사이언티픽(ThermoScientific), 카탈로그 번호 28908, 로트 번호 JG1141272), 0.1 % v/v 플루로닉 F-68 (MP, 카탈로그 번호 2750049, 로트 번호 821-4K) 및 10 ㎍/ml 악티노마이신 D (아크로스(Acros), 카탈로그 번호 294940050, 로트 번호 A0257010) 중에 재현탁시켰다. 재현탁 세포를 유동 세포측정법 분석시까지 4℃의 암실에서 보관하였다.
아넥신 V 검정의 유동 세포측정법 분석을 위해, BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences, 캘리포니아주 산호세)에 의해 제조된 BD LSR II에서 샘플을 획득하였다. 아넥신을 50mW 코히런트 사파이어(Coherent Sapphire) 고체-상 CW 청색 레이저 (코히런트 인크.(Coherent Inc.), 캘리포니아주 산타 클라라)에 의해 488nm의 파장에서 여기시키고, 530/30 대역 필터를 사용하여 수집하였다. 7-AAD를 50mW 코히런트 사파이어 고체 상 CW 황색 레이저에 의해 561nm에서 여기시키고, 방출 신호를 630/30 대역 필터를 사용하여 수집하였다. 10,000회 사건을 전방 산란 대 측방 산란 광의 중지 게이트를 기초로 수집하였다. BD FACS DiVa 소프트웨어 버전 6.1.1을 통해 높은 유량 (60 ㎕/분)으로 획득을 수행하였다. 다음과 같이 계산하였다: 3사분면 = 좌측 하단 = 살아있는 세포; 4사분면 = 우측 하단 = 초기 아폽토시스; 2사분면 = 우측 상단 = 후기 아폽토시스; 1사분면 = 좌측 상단 = 사멸 세포. 퍼센트 (%) 총 아폽토시스를 초기 (4사분면) + 후기 (2사분면)로서 계산하였다. 퍼센트 (%) 비율 아폽토시스를 (실험-비처리/양성 대조군)*100으로서 계산하였다. 모든 통계적 분석은 그래프패드 프리즘 또는 마이크로소프트 엑셀을 이용하여 수행하였다.
아넥신 V 검정의 결과는 아넥신 V의 유용성을 보여주었고, 본 발명의 화합물의 아폽토시스 잠재력을 결정하기 위한 유동 세포측정법 접근법을 이끌어 냈다. AD4 화합물은 처리 29시간 후에 기준 화합물, 캄프토테신과 동일한 정도로 또는 그보다 높은 정도로 A549 세포에서 아폽토시스를 유도하는 것으로 나타났다 (예를 들어, 도 16b 참조). 1μM의 농도에서, AD4-13130 및 AD4-13185는 둘 모두 세포 집단의 50% 초과에서 아폽토시스를 유도하였다 (예를 들어, 도 16b 참조). 10μM의 농도에서, 이들 화합물은 또한 세포 집단의 20% 이하에서 후기 아폽토시스를 자극하였다 (예를 들어, 도 16b 참조). AD4-13192도 또한 유사하지만 약간 감소된 반응을 이끌어 냈다 (예를 들어, 도 16b 참조).
AD4-1505-유사 시리즈의 일부 화합물은 A549 세포, 비소세포 폐암 세포주에서 아넥신 V의 발현을 유도하는 것으로 나타났다. 화합물에 대한 데이터를 하기 표 16에 요약하였다.
Figure pct00089
결과는 아넥신 V의 발현에 의해 나타나는 초기- 및 후기-단계의 아폽토시스의 백분율 (즉, 총 아폽토시스), 및 4.0 μM 캄프토테신 또는 1.0 μM 스타우로스포린 (검정에 사용된 기준 화합물)에 의해 생성된 최대 반응과 비교한 백분율로서의 화합물의 효과를 보여준다 (표 16 참조). 화합물은 이들이 > 20%만큼 총 아폽토시스를 유도한 경우에 활성인 것으로 간주하였다 (표 16 참조). 이러한 결과를 기초로, 상기 화학 시리즈의 화합물은 비소세포 폐암의 치료를 위한 치료 이점을 가질 것으로 기대된다.
실시예 9: 약동학
본 실시예에서, AD4-13130 및 AD4-13192의 경구 생체이용률을 각각 수컷 CD-1 마우스에서 1 및 5 mg/kg 정맥내 및 경구 투여 후에 조사하였다. 시험 화합물의 혈장 수준을 LC-MS/MS에 의해 결정하였다. 데이터를 윈논린(WinNonlin)을 이용하여 비 구획 약동학 모델에 의해 분석하였다. 결과를 하기 표 17에 요약하였다.
Figure pct00090
AD4-13130 및 AD4-13192는, 1 mg/kg으로 정맥내 투여한 후에 각각 669 ± 45 및 3550 ± 571 ng/mL의 평균 Cmax에 도달하였다 (표 17 참조). 분포의 평균 청소율 및 부피는 AD4-13130에 대해 각각 1.64 L/hr/kg 및 3.24 L/Kg이었고, AD4-13192에 대해 각각 0.72 L/hr/kg 및 0.56 L/Kg이었다 (표 17 참조). 평균 반감기는 AD4-13192 및 AD4-13130에 있어서 각각 1.47 내지 1.86시간 범위로 유사한 것으로 나타났다 (표 17 참조). AD4-13130 및 AD4-13192는, 5 mg/kg으로 경구 투여한 후에 각각 1 및 0.5시간에서 131 ± 51 및 59 ± 21 ng/ml의 평균 Cmax에 도달하였다 (표 17 참조). 두 시험 화합물은 모두 다음의 경구 생체이용률 (%)을 나타내었다: AD4-13130 (10.1) 및 AD4-13192 (1.7) (표 17 참조).
실시예 10: 1505-유사 화합물의 구조 및 기능
하기 실시예는 아미노피리딘 고리 및 벤즈알데히드 유래 고리에 대한 안정성, 항증식성 활성 및 아폽토시스와 연관된 1505-유사 화합물의 구조를 보여준다.
아미노피리딘 고리의 안정성.
히드록시퀴놀린 유사체의 안정성을 결정하였다 (예를 들어, 표 18 참조). MLM은 30분 동안 마우스 간 마이크로솜과 함께 인큐베이션한 후에 표시한 백분율을 나타내었다. HLM은 30분 동안 인간 간 마이크로솜과 함께 인큐베이션한 후에 표시한 백분율을 나타내었다.
Figure pct00091
결과는 염소 원자를 갖는 아미노피리딘의 5-위치에서의 치환이 안정성을 증가시켰다는 것을 보여주었다. 메틸 기를 갖는 아미노피리딘의 3-위치에서의 추가적 치환이 안정성을 추가로 증가시켰다는 것을 보여주었다.
아미노피리딘 고리의 항증식성 활성.
아미노피리딘 고리 상에 할로겐 및 알킬 기의 다양한 조합을 갖는 화합물에 대한 항증식성 활성 (즉, 시험관내 암 세포의 증식 억제)을 결정하였다.
결과는 하기 치환 패턴이 우수한 항증식성 활성을 가졌다는 것을 보여주었다:
Figure pct00092
결과는 하기 치환 패턴이 매우 우수한 항증식성 활성을 가졌다는 것을 보여주었다:
Figure pct00093
하기 치환 패턴은 시험된 화합물의 가장 우수한 항증식성 활성을 보여주었다:
Figure pct00094
아미노피리딘 고리의 아폽토시스 활성.
아미노피리딘 고리 상에 치환을 갖는 화합물에 대한 아폽토시스 활성 (즉 카스파제, DNA 단편화, 아넥신-V)을 결정하였다.
결과는 아미노피리딘 고리의 5-위치에 클로로 기를 갖고 3- 또는 4-위치에 추가의 클로로 또는 메틸 기를 갖는 유사체가 상승된 아폽토시스를 나타냈음을 보여주었다. 아미노피리딘 고리의 5-위치에 클로로 기를 갖고 3- 또는 4-위치에 추가의 클로로 또는 메틸 기를 갖는 유사체의 예는 다음을 포함한다:
Figure pct00095
벤즈알데히드 유래 고리의 안정성.
벤즈알데히드 유래 고리를 갖는 유사체의 안정성을 결정하였다 (예를 들어, 표 18 참조). MLM은 마우스 간 마이크로솜과 함께 30분 동안 인큐베이션한 후에 표시한 백분율을 나타내었다. HLM은 인간 간 마이크로솜과 함께 30분 동안 인큐베이션한 후에 표시한 백분율을 나타내었다.
결과는 벤젠 고리의 2- 및 4-위치에서의 기가 간 마이크로솜 인큐베이션에 대해 안정한 유사체를 제공하였음을 보여준다.
Figure pct00096
예시적 결과는 다음과 같다:
Figure pct00097
결과는 또한 2,4-디클로로 치환 패턴이 AD4-13165 및 AD4-13206의 하기 실시예에 의해 예시된 바와 같이 또한 우수한 안정성을 제공한다는 것을 보여주었다:
Figure pct00098
벤즈알데히드 유래 고리의 항증식성 활성.
벤젠 고리 상에 할로겐 및 트리플루오로메틸 기의 다양한 조합을 갖는 화합물에 대한 항증식성 활성 (즉, 시험관내 암 세포의 증식 억제)을 결정하였다. 벤젠 고리의 바람직한 치환 패턴의 예를 하기 제공하였다.
결과는 하기 치환 패턴이 우수한 항증식성 활성을 가졌다는 것을 보여주었다:
Figure pct00099
결과는 하기 치환 패턴이 매우 우수한 항증식성 활성을 가졌다는 것을 보여주었다:
Figure pct00100
하기 치환 패턴은 시험된 화합물의 가장 우수한 항증식성 활성을 보여주었다:
Figure pct00101
벤즈알데히드 유래 고리의 아폽토시스 활성.
벤즈알데히드 고리 상에 치환을 갖는 화합물에 대한 아폽토시스 활성 (즉 카스파제, DNA 단편화, 아넥신-V)을 결정하였다.
결과는 벤젠 고리의 4-위치에 클로로 기를 갖고 2- 또는 3-위치에 추가의 클로로 또는 플루오로 기를 갖는 유사체가 상승된 아폽토시스를 나타냈음을 보여주었다. 상승된 아폽토시스 활성을 갖는 유사체의 예는 AD4-1313-, AD4-13185 및 AD4-13178을 포함한다:
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
실시예 11: 중간체 화합물의 합성
하기 실시예는 본원에 기재된 AD4-1505-유사 화합물의 합성에 사용된 중간체 화합물의 합성을 기재한다.
BBM-001-065
2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘 (CAS에서 확인되지 않음)의 제조:
단계 1:
Figure pct00106
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘 (원다 사이언스(Wonda Science), 카탈로그 #01060, CAS[246847-98-3]; 14.6 g, 0.1 mol)을 소량의 FeCl3 (50 mg)을 함유하는 AcOH (10g) 중 Ac2O (15 g)로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였고, 그 동안 백색 고체가 형성되었다. 물 (300 ml)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 고체를 물 (3 x 500 ml)로 세척하였다. 고체를 공기 건조시키고, EtOAc/헥산으로부터 재결정화하여 N-(3-플루오로-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘을 백색 고체 (MP 165-166℃)로서 수득하였다.
단계 2:
Figure pct00107
N-(3-플루오로-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘 (14.6 g, 0.10 mol) 및 디이소프로필아민 (25.3 g, 0.25 mol)을 무수 THF (200 ml) 중에 용해시키고, 교반하고 드라이 아이스-아세톤 조에서 -70℃로 냉각시켰다. n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 100 ml, 0.25 mol)를 2 시간 동안 교반을 계속하면서 -60℃ 미만의 내부 온도를 유지하면서 적가하였다. 이어서, 아이오도메탄 (28.4 g, 0.20 mol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -60 내지 -70℃ 사이에서 추가로 2 시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl 용액을 반응에 -70℃에서 반응물에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 실온으로 가온하였다. 혼합물을 EtOAc (3 x 100 ml)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 물 및 염수로 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 용매를 회전증발기를 사용하여 증발시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 회전증발기로 증발시키고, 잔류물을 헥산으로 연화처리하여 백색 고체를 형성하였다. 고체를 여과하여 N-(3-플루오로-4-메틸-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘을 백색 고체 (MP 124-125℃)로서 수득하였다.
단계 3:
Figure pct00108
N-(3-플루오로-4-메틸-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘 (13.6 g, 0.085 mmol)을 MeOH (30 ml) 중에 용해시키고, 진한 HCl (20 ml)로 처리하였다. 혼합물을 교반하고, 환류 온도로 4 시간 동안 가온하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 회전증발기를 사용하여 제거하였다. 잔류물에 얼음 및 3N NaOH를 첨가하여 pH를 9-10까지 조정하였다. 혼합물을 Et2O로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 용액을 여과하고, 용매를 회전증발기로 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카-겔 칼럼을 사용하여 헥산 중 10% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘을 백색 고체 (MP 136-138℃)로서 수득하였다.
BBM-001-072
2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘 (CAS에서 확인되지 않음)의 제조:
Figure pct00109
2-아미노-3-에틸피리딘 (원다 사이언스, CAS[42753-67-3]; 12.2 g, 0.1 mol)을 DMF 10 ml를 포함하는 에틸 아세테이트 500 ml 중에 교반에 의해 용해시켰다. 온도계를 온도를 모니터링하기 위해 용액에 넣었다. N-클로로숙신이미드 (13.3 g, 0.1 mol)를 용액이 실온에서 유지되도록 여러 번에 나누어 첨가하였다. 용액은 색상이 어두워졌고, 실온에서 밤새 교반하였다. 상청액을 형성된 암색 고체로부터 가만히 따르고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 용액을 포화 수성 중아황산나트륨 500 ml에 이어서 염수 500 ml로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 회전증발기로 농축시켰다. 암갈색 조 생성물을 플래쉬 실리카-겔 500 g 상에서 35% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 적절한 분획을 회전증발기로 농축시켜 밝은 황갈색 오일을 수득하였다. 오일을 헥산 중에 용해시키고, 활성탄을 사용하여 탈색시켰다. 용매를 -20℃로 냉각시키고, 형성된 고체를 여과에 의해 단리시켜 생성물을 박리성 회백색 고체로서 수득하였다. (MP 67-68℃).
BBM-001-011
2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘 (CAS 1242336-53-3)의 제조:
Figure pct00110
3-메톡시-2-아미노피리딘 (원다 사이언스, 카탈로그 #01683; 12.4 g, 0.01 mol)을 에틸 아세테이트 500 ml 중에 교반에 의해 용해시켰다. 온도계를 온도를 모니터링하기 위해 용액에 넣었다. N-클로로숙신이미드 (13.3 g, 0.01 mol)를 용액이 실온에서 유지되도록 여러 번에 나누어 첨가하였다. 용액은 색상이 어두워졌고, 실온에서 밤새 교반하였다. 상청액을 형성된 암색 고체로부터 가만히 따르고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 용액을 포화 수성 중아황산나트륨 500 ml에 이어서 염수 500 ml로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 회전증발기로 농축시켰다. 암갈색 조 생성물을 플래쉬 실리카-겔 500 g 상에서 30% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 적절한 분획을 회전증발기로 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 헥산 중에 현탁시키고, 교반하고, 여과하여 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다. (MP 93-94℃).
BBM-001-049
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (CAS 188577-68-6)의 제조:
Figure pct00111
4-클로로-2-아미노피리딘 (매트릭스 사이언티픽(Matrix Scientific), 카탈로그 #23809; 1.29 g, 0.01 mol)을 에틸 아세테이트 500 ml 중에 교반에 의해 용해시켰다. 온도계를 온도를 모니터링하기 위해 용액에 넣었다. N-클로로숙신이미드 (13.3 g, 0.01 mol)를 용액이 실온에서 유지되도록 여러 번에 나누어 첨가하였다. 용액은 색상이 어두워졌고, 실온에서 밤새 교반하였다. 상청액을 형성된 암색 고체로부터 가만히 따르고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 용액을 포화 수성 중아황산나트륨 500 ml에 이어서 염수 500 ml로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 회전증발기로 농축시켰다. 암갈색 조 생성물을 플래쉬 실리카-겔 500 g 상에서 CH2Cl2로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 적절한 분획을 회전증발기로 농축시켜 밝은 황갈색 고체를 수득하였다. 고체를 EtOAc 중에 용해시키고, 활성탄을 사용하여 탈색시켰다. EtoAc를 회전증발기를 사용하여 제거하고, 생성된 고체를 빙냉 CH2Cl2 중에 현탁시키고, 여과하여 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. (MP 142-143℃).
BBM-001-074
2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘 (CAS에서 확인되지 않음)의 제조:
단계 1:
상기 실시예 BBM-001-065에 기재된 바와 같음.
Figure pct00112
단계 2:
Figure pct00113
실시예 BBM-001-065에 상기 기재된 방식으로, N-(3-플루오로-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘 (14.6 g, 0.10 mol) 및 디이소프로필아민 (25.3 g, 0.25 mol)을 합하고, n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 100 ml, 0.25 mol)에 이어서 아이오도에탄 (31.2 g, 0.2 mol)으로 처리하여 N-(3-플루오로-4-에틸-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘을 백색 고체 (MP 112-113℃)로서 수득하였다.
단계 3:
Figure pct00114
실시예 BBM-001-065에 상기 기재된 방식으로, N-(3-플루오로-4-에틸-5-클로로)-2-아세트아미도피리딘 (16.0 g, 0.092 mmol)을 MeOH (30 ml) 및 진한 HCl (20 ml)로 처리하여 2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘을 백색 고체 (MP 71-72℃)로서 수득하였다.
BBM-001-064
2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘 (CAS에서 확인되지 않음)의 제조:
단계 1:
상기 실시예 BBM-001-065에 기재된 바와 같음.
Figure pct00115
N-(3,5-디플루오로)-2-아세트아미도피리딘을 EtOAc/헥산으로부터 결정화하고, 백색 고체로서 단리하였다 (MP 142-144℃).
단계 2:
Figure pct00116
실시예 BBM-001-065에 상기 기재된 방식으로, N-(3,5-디플루오로)-2-아세트아미도피리딘 (13.0 g, 0.10 mol) 및 디이소프로필아민 (25.3 g, 0.25 mol)을 합하고, n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 100 ml, 0.25 mol)에 이어서 아이오도메탄 (28.4 g, 0.20 mol)으로 처리하여 N-(3,5-디플루오로-4-메틸)-2-아세트아미도피리딘을 백색 고체 (MP 92-93℃)로서 수득하였다.
단계 3:
Figure pct00117
실시예 BBM-001-065에 상기 기재된 방식으로, N-(3,5-디플루오로-4-메틸)-2-아세트아미도피리딘 (13.0 g, 0.09 mol)을 MeOH (30 ml) 및 진한 HCl (20 ml)로 처리하여 2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘을 백색 고체 (MP 92-93℃)로서 수득하였다.
IJT-001-090
2-아미노-5-클로로-6-메틸피리딘 (CAS 36936-23-9)의 제조:
Figure pct00118
실시예 BBM-001-065에 상기 기재된 방식으로, 2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스(Acros Organics) (1.08 g, 0.01 mol)를 N-클로로숙신이미드로 처리하여 2-아미노-5-클로로-6-메틸피리딘을 밝은 황색 고체 (MP 73-74℃)로서 수득하였다.
BBM-001-071
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘 (CAS 1173019-45-8)의 제조:
실시예 BBM-001-065에 상기 기재된 방식으로, 2-아미노-3-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.08 g, 0.01 mol)을 N-클로로숙신이미드로 처리하여 2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘을 백색 고체 (MP 63-64℃)로서 수득하였다.
BBM-001-009
2,3,5,6-테트라플루오로-4-(2'2'2'-트리플루오로에톡시)벤즈알데히드의 제조:
Figure pct00119
펜타플루오로벤즈알데히드 (오크우드 프로덕츠(Oakwood Products), 카탈로그 #002835, 19.6 g, 0.1 mol) 및 테트라부틸암모늄 히드로겐술페이트, Bu4NHSO4 (50 mg, 0.0015 mol)를 CH2Cl2 500 ml 중에 용해시켰다. 2,2,2-트리플루오로에탄올 (10.0 g, 0.01 mol)을 첨가하고, 혼합물을 교반하고, 빙조에서 냉각시켰다. 수산화나트륨 펠릿 (4.0 g, 0.01 mol)을 물 100 ml 중에 용해시키고, 적하 깔때기를 이용하여 혼합물에 천천히 첨가하였다. 혼합물의 온도를 모니터링하였다. 5℃ 미만의 온도가 유지되도록 첨가 속도를 조절하였다. 첨가가 완결된 후, 혼합물을 5℃에서 추가로 2 시간 동안 교반한 다음, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 회전증발기를 사용하여 증발시키고, 잔류 오일을 짧은 경로 장치를 이용하여 분별 증류하였다. 비등 범위 105-108℃의 분획은 목적 화합물을 함유하였다.
IJT-002-059
2-아미노-3,5-디클로로-4-메틸피리딘 (CAS 31430-47-4)의 제조:
Figure pct00120
2-아미노-4-피콜린 (원다 사이언스, 카탈로그 # 1124, 7.13 g, 0.05 mol)을 DMF 25 ml 중에 교반에 의해 용해시켰다. 온도계를 온도를 모니터링하기 위해 용액에 넣었다. N-클로로숙신이미드 (6.68 g, 0.05 mol)를 한꺼번에 첨가하였다. 혼합물을 50℃로 3 시간 동안 가열하였다. 암색 용액을 빙수에 붓고, 고체를 분리하고, 여과에 의해 수집하고, 물 500 ml로 세척하였다. 고체를 밤새 공기 건조시켰다. 고체 생성물을 에테르/헥산 (2:1) 중에 용해시키고, 활성탄으로 처리하였다. 용액을 여과하고, 용매를 회전증발기로 제거하였다. 생성된 밝은 황갈색 고체를 헥산 50 ml 중에서 교반하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켰다. (MP 126-127℃).
2-아미노-3,5-디클로로-4,6-디메틸피리딘 (CAS 31430-47-4)의 제조:
출발 물질로서 2-아미노-4,6-디메틸피리딘을 사용하여 2-아미노-3,5-디클로로-4,6-메틸피리딘에 대해 기재된 바와 같이 2-아미노-3,5-디클로로-4,6-디메틸피리딘을 제조할 수 있다.
실시예 12: AD4-1505-유사 화합물의 합성
하기 실시예는 본원에 기재된 AD4-1505-유사 화합물의 합성을 기재한다. 달리 기재하지 않는 한, 중간체 화합물은 실시예 11에 따른다.
AD4-13021의 제조:
Figure pct00121
2-아미노-4-피콜린 (1.08 g, 0.01 mol) 및 4-클로로-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드 (2.08 g, 0.01 mol)를 100 ml 둥근바닥 플라스크에 칭량하고 무수 EtOH 50 ml와 함께 교반하여 용해시켰다. 8-히드록시퀴날딘 (1.59 g, 0.01 mol)을 첨가하고, 투명한 황색빛 용액이 얻어질 때까지 혼합물을 실온에서 몇 분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 플라스틱 마개로 막고, 실온에서 14 일 동안 교반하였다. tlc (실리카-겔, 2:1 헥산/아세톤)에서 8-히드록시퀴날딘 스폿 약간 아래의 주요 신규 스폿 이외에, 일부 출발 물질이 남아있는 것으로 나타났다. 조 물질을 500 ml의 플래쉬 실리카-겔 상에서 2→25% 아세톤/헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 용리 용매는 다음과 같았다: 1 리터의 2% 아세톤/헥산; 1 리터의 3% 아세톤/헥산; 1 리터의 5% 아세톤/헥산; 1 리터의 7.5% 아세톤/헥산; 1 리터의 10% 아세톤/헥산; 1 리터의 15% 아세톤/헥산; 1 리터의 20% 아세톤/헥산 및 1 리터의 25% 아세톤/헥산. 150 ml의 분획을 수집하였다. 분획 1-3은 미반응 8-히드록시퀴날딘을 함유하였다. 생성물을 함유하는 분획 11-13을 회전증발기로 농축시켜 밝은 녹색 오일을 수득하였다. 오일을 수 ml의 아세톤과 함께 헥산 200 ml 중에 용해시켰다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 정치하였다. 생성물 2.9 g이 회백색 결정질 고체로서 형성되었고, 이를 여과에 의해 단리하였다.
TLC:
2,3-디플루오로-4-메틸벤즈알데히드 Rf = 0.8
8-히드록시퀴날딘 Rf = 0.7
생성물 Rf = 0.55
2-아미노-4-피콜린 Rf = 0.2
8-히드록시퀴날딘 및 생성물은 둘 다 장파장 (366 nM) UV 광 하에 밝은 황색이 되었고, 생성물은 또한 단파장 (254 nM) UV 광 하에 밝은 황색이 되었다. 몇 시간 동안 공기 하에 방치한 후, 8-히드록시퀴날딘 및 생성물 둘 모두로부터의 tlc 스폿은 황색이 되었고, 이어서 임의의 염색 없이 갈색이 되었다.
AD4-13022의 제조:
Figure pct00122
2-아미노-4-피콜린 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3-디플루오로-4-메틸벤즈알데히드 (1.56 g, 0.01 mol)를 100 ml 둥근바닥 플라스크에 칭량한 다음 무수 EtOH 50 ml를 첨가하여 용해시켰다. 8-히드록시퀴날딘 (1.59 g, 0.01 mol)을 첨가하고, 투명한 황색빛 용액이 얻어질 때까지 혼합물을 실온에서 몇 분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 플라스틱 마개로 막고, 실온에서 14 일 동안 교반하였다. 백색 고체가 관찰되면 교반을 멈추고, 플라스크를 실온에서 밤새 정치시켰다. tlc (실리카-겔, 2:1 헥산/아세톤)에서 8-히드록시퀴날딘 스폿 약간 아래의 주요 신규 스폿 이외에 약간의 출발 물질이 남아 있는 것으로 나타났다. 상청액을 가만히 따르고, 백색 고체를 Et2O 100 ml를 사용하여 슬러리로 만들고, 이어서 여과하였다. 백색 고체를 500 ml 3각 플라스크로 옮기고 아세톤 200 ml와 함께 교반하였다. 약 50℃에서 완만하게 가온하자, 밝은 황색 투명한 용액이 생성되었고, 이를 다르코(Darco)-G-60 탈색 목탄 1 g으로 처리하였다. 목탄을 셀라이트를 통한 여과에 의해 제거하고, 후속으로 셀라이트를 추가의 아세톤 50 ml로 세척하였다. 이어서, 아세톤 용액을 동일한 부피의 헥산 (250 ml)과 합하고, 실온에서 4 시간 동안 정치시켰다. 생성물 1.5 g이 백색 결정질 고체로서 형성되었고, 이를 여과에 의해 본질적으로 순수한 형태 (99%)로 단리하였다.
TLC:
2,3-디플루오로-4-메틸벤즈알데히드 Rf = 0.8
8-히드록시퀴날딘 Rf = 0.7
생성물 Rf = 0.45
2-아미노-4-피콜린 Rf = 0.2
8-히드록시퀴날딘 및 생성물은 둘 다 장파장 (366 nM) UV 광 하에 밝은 황색이 되었고, 생성물은 또한 단파장 (254 nM) UV 광 하에 밝은 황색이 되었다. 몇 시간 동안 공기 하에 방치한 후, 8-히드록시퀴날딘 및 생성물 둘 모두로부터의 tlc 스폿은 황색이 되었고, 이어서 임의의 염색 없이 갈색이 되었다.
AD4-12902의 제조:
Figure pct00123
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린 (1.08 g, 0.01 mol) 및 4-트리플루오로메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.90 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티(Betti) 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 130-131℃)로서 수득하였다. 생성물을 여과에 의해 단리시켰다.
AD4-12903의 제조:
Figure pct00124
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 159-160℃)로서 수득하였다. 생성물을 여과에 의해 단리시켰다.
AD4-12904의 제조:
Figure pct00125
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 211-212℃)로서 수득하였다.
AD4-12905의 제조:
Figure pct00126
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 195-196℃)로서 수득하였다.
AD4-12906의 제조:
Figure pct00127
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 176-177℃)로서 수득하였다.
AD4-12907의 제조:
Figure pct00128
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 고체 (MP 176-179℃)로서 수득하였다.
AD4-12908의 제조:
Figure pct00129
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 고체 (MP 119-121℃)로서 수득하였다.
AD4-12909의 제조:
Figure pct00130
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3-히드록시-4-메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.52 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 179-181℃)로서 수득하였다.
AD4-12910의 제조:
Figure pct00131
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 189-191℃)로서 수득하였다.
AD4-12911의 제조:
Figure pct00132
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 194-196℃)로서 수득하였다.
AD4-12912의 제조:
Figure pct00133
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 185-187℃)로서 수득하였다.
AD4-12913의 제조:
Figure pct00134
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 180-182℃)로서 수득하였다.
AD4-12914의 제조:
Figure pct00135
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 141-142℃)로서 수득하였다.
AD4-12915의 제조:
Figure pct00136
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 169-170℃)로서 수득하였다.
AD4-12916의 제조:
Figure pct00137
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 175-176℃)로서 수득하였다.
AD4-12917의 제조:
Figure pct00138
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 161-164℃)로서 수득하였다.
AD4-12918의 제조:
Figure pct00139
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.78 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 171-173℃)로서 수득하였다. 생성물을 여과에 의해 단리시켰다.
AD4-12954의 제조:
Figure pct00140
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 189-191℃)로서 수득하였다.
AD4-12955의 제조:
Figure pct00141
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 173-174℃)로서 수득하였다.
AD4-12958의 제조:
Figure pct00142
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 193-195℃)로서 수득하였다.
AD4-12959의 제조:
Figure pct00143
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 183-184℃)로서 수득하였다.
AD4-13019의 제조:
Figure pct00144
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 172-175℃)로서 수득하였다.
AD4-13020의 제조:
Figure pct00145
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 164-166℃)로서 수득하였다.
AD4-13023의 제조:
Figure pct00146
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 184-186℃)로서 수득하였다.
AD4-13024의 제조:
Figure pct00147
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 182-185℃)로서 수득하였다.
AD4-13025의 제조:
Figure pct00148
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 177-180℃)로서 수득하였다.
AD4-13026의 제조:
Figure pct00149
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 163-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13027의 제조:
Figure pct00150
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 162-166℃)로서 수득하였다.
AD4-13028의 제조:
Figure pct00151
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 4-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 82-94℃)로서 수득하였다.
AD4-13029의 제조:
Figure pct00152
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2,4-디플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.42 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 124-134℃)로서 수득하였다.
AD4-13030의 제조:
Figure pct00153
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 86-87℃)로서 수득하였다.
AD4-13031의 제조:
Figure pct00154
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 126-132℃)로서 수득하였다.
AD4-13032의 제조:
Figure pct00155
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3-(트리플루오로메틸)-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 81-96℃)로서 수득하였다.
AD4-13033의 제조:
Figure pct00156
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 131-143℃)로서 수득하였다.
AD4-13034의 제조:
Figure pct00157
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 110-117℃)로서 수득하였다.
AD4-13035의 제조:
Figure pct00158
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 137-155℃)로서 수득하였다.
AD4-13036의 제조:
Figure pct00159
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2,4-디플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.42 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 136-138℃)로서 수득하였다.
AD4-13037의 제조:
Figure pct00160
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 117-120℃)로서 수득하였다.
AD4-13038의 제조:
Figure pct00161
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 매트릭스 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 126-127℃)로서 수득하였다.
AD4-13039의 제조:
Figure pct00162
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 99-102℃)로서 수득하였다.
AD4-13040의 제조:
Figure pct00163
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 82-85℃)로서 수득하였다.
AD4-13041의 제조:
Figure pct00164
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 4-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 108-110℃)로서 수득하였다.
AD4-13042의 제조:
Figure pct00165
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 매트릭스 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 106-109℃)로서 수득하였다.
AD4-13043의 제조:
Figure pct00166
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 128-131℃)로서 수득하였다.
AD4-13044의 제조:
Figure pct00167
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 4-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 154-155℃)로서 수득하였다.
AD4-13045의 제조:
Figure pct00168
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2,4-디플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.42 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 171-173℃)로서 수득하였다.
AD4-13046의 제조:
Figure pct00169
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 매트릭스 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 164-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13047의 제조:
Figure pct00170
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3-(트리플루오로메틸)-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 136-140℃)로서 수득하였다.
AD4-13048의 제조:
Figure pct00171
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 110-134℃)로서 수득하였다.
AD4-13049의 제조:
Figure pct00172
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 145-159℃)로서 수득하였다.
AD4-13050의 제조:
Figure pct00173
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,4-디플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.42 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 88-93℃)로서 수득하였다.
AD4-13051의 제조:
Figure pct00174
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘, 매트릭스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 갈색 고체 (MP 99-111℃)로서 수득하였다.
AD4-13052의 제조:
Figure pct00175
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 163-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13053의 제조:
Figure pct00176
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 4-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 115-130℃)로서 수득하였다.
AD4-13054의 제조:
Figure pct00177
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 96-125℃)로서 수득하였다.
AD4-13055의 제조:
Figure pct00178
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 133-134℃)로서 수득하였다.
AD4-13056의 제조:
Figure pct00179
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘, 아크로스 오가닉스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13057의 제조:
Figure pct00180
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 3-(트리플루오로메틸)-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 73-88℃)로서 수득하였다.
AD4-13058의 제조:
Figure pct00181
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13059의 제조:
Figure pct00182
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.78 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 왁스상 녹색 고체로서 수득하였다.
AD4-13060의 제조:
Figure pct00183
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 왁스상 녹색 고체로서 수득하였다.
AD4-13061의 제조:
Figure pct00184
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 (1.12 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13062의 제조:
Figure pct00185
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘, 매트릭스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 매트릭스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13063의 제조:
Figure pct00186
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘, 매트릭스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 4-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13064의 제조:
Figure pct00187
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘, 매트릭스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13065의 제조:
Figure pct00188
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘, 매트릭스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 매트릭스 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13066의 제조:
Figure pct00189
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘, 매트릭스 (1.62 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13067의 제조:
Figure pct00190
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3-(트리플루오로메틸)-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13068의 제조:
Figure pct00191
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 2,4-디플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.42 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13069의 제조:
Figure pct00192
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-클로로피리딘, 매트릭스 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 고체 (MP 118-121℃)로서 수득하였다.
AD4-13070의 제조:
Figure pct00193
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.78 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 87-90℃)로서 수득하였다.
AD4-13071의 제조:
Figure pct00194
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 (1.12 g, 0.01 mol) 및 3-(트리플루오로메틸)-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 76-86℃)로서 수득하였다.
AD4-13072의 제조:
Figure pct00195
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 170-173℃)로서 수득하였다.
AD4-13073의 제조:
Figure pct00196
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 165-167℃)로서 수득하였다.
AD4-13074의 제조:
Figure pct00197
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 247-250℃)로서 수득하였다.
AD4-13075의 제조:
Figure pct00198
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 126-129℃)로서 수득하였다.
AD4-13076의 제조:
Figure pct00199
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 230-232℃)로서 수득하였다.
AD4-13077의 제조:
Figure pct00200
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 221-223℃)로서 수득하였다.
AD4-13078의 제조:
Figure pct00201
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 157-159℃)로서 수득하였다.
AD4-13079의 제조:
Figure pct00202
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 217-218℃)로서 수득하였다.
AD4-13080의 제조:
Figure pct00203
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 149-150℃)로서 수득하였다.
AD4-13081의 제조:
Figure pct00204
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 214-216℃)로서 수득하였다.
AD4-13082의 제조:
Figure pct00205
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP155-159℃)로서 수득하였다.
AD4-13083의 제조:
Figure pct00206
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 201-202℃)로서 수득하였다.
AD4-13084의 제조:
Figure pct00207
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP191-197℃)로서 수득하였다.
AD4-13085의 제조:
Figure pct00208
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)벤즈알데히드 (BBM-001-009; 2.76 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 131-133℃)로서 수득하였다.
AD4-13086의 제조:
Figure pct00209
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 155-156℃)로서 수득하였다.
AD4-13087의 제조:
Figure pct00210
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 194-197℃)로서 수득하였다.
AD4-13088의 제조:
Figure pct00211
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 166-169℃)로서 수득하였다.
AD4-13089의 제조:
Figure pct00212
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 181-183℃)로서 수득하였다.
AD4-13090의 제조:
Figure pct00213
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-6-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 159-161℃)로서 수득하였다.
AD4-13091의 제조:
Figure pct00214
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 104-108℃)로서 수득하였다.
AD4-13092의 제조:
Figure pct00215
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)벤즈알데히드 (BBM-001-009; 2.76 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 145-146℃)로서 수득하였다.
AD4-13093의 제조:
Figure pct00216
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)벤즈알데히드 (BBM-001-009; 2.76 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 106-109℃)로서 수득하였다.
AD4-13094의 제조:
Figure pct00217
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 123-126℃)로서 수득하였다.
AD4-13095의 제조:
Figure pct00218
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 197-204℃)로서 수득하였다.
AD4-13096의 제조:
Figure pct00219
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 160-161℃)로서 수득하였다.
AD4-13097의 제조:
Figure pct00220
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 155-156℃)로서 수득하였다.
AD4-13098의 제조:
Figure pct00221
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 140-141℃)로서 수득하였다.
AD4-13099의 제조:
Figure pct00222
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.58 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 126-128℃)로서 수득하였다.
AD4-13101의 제조:
Figure pct00223
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
3-아미노피리딘, 아크로스 오가닉스 (0.94 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)벤즈알데히드 (BBM-001-009; 2.76 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 갈색 고체 (MP 72-76℃)로서 수득하였다.
AD4-13102의 제조:
Figure pct00224
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP #193-195℃)로서 수득하였다.
AD4-13103의 제조:
Figure pct00225
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 148-150℃)로서 수득하였다.
AD4-13104의 제조:
Figure pct00226
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.40 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황색 고체 (MP 144-145℃)로서 수득하였다.
AD4-13105의 제조:
Figure pct00227
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-피콜린, 아크로스 오가닉스 (1.08 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.78 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 오렌지색 고체 (MP 74-76℃)로서 수득하였다.
AD4-13106의 제조:
Figure pct00228
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.92 g, 0.01)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 167-168℃)로서 수득하였다.
AD4-13107의 제조:
Figure pct00229
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 3-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 110-112℃)로서 수득하였다.
AD4-13108의 제조:
Figure pct00230
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 3-트리플루오로메틸-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.08 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 176-177℃)로서 수득하였다.
AD4-13109의 제조:
Figure pct00231
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 202-204℃)로서 수득하였다.
AD4-13110의 제조:
Figure pct00232
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 113-114℃)로서 수득하였다.
AD4-13111의 제조:
Figure pct00233
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 163-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13112의 제조:
Figure pct00234
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.58 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 135-136℃)로서 수득하였다.
AD4-13113의 제조:
Figure pct00235
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 114-116℃)로서 수득하였다.
AD4-13114의 제조:
Figure pct00236
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 132-133℃)로서 수득하였다.
AD4-13115의 제조:
Figure pct00237
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 163-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13116의 제조:
Figure pct00238
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 166-168℃)로서 수득하였다.
AD4-13117의 제조:
Figure pct00239
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 166-168℃)로서 수득하였다.
AD4-13118의 제조:
Figure pct00240
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 209-216℃)로서 수득하였다.
AD4-13119의 제조:
Figure pct00241
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 140-141℃)로서 수득하였다.
AD4-13120의 제조:
Figure pct00242
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 160-161℃)로서 수득하였다.
AD4-13121의 제조:
Figure pct00243
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 155-158℃)로서 수득하였다.
AD4-13122의 제조:
Figure pct00244
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 192-194℃)로서 수득하였다.
AD4-13123의 제조:
Figure pct00245
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 147-150℃)로서 수득하였다.
AD4-13124의 제조:
Figure pct00246
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,4-비스트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.42 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 122-127℃)로서 수득하였다.
AD4-13125의 제조:
Figure pct00247
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 174-175℃)로서 수득하였다.
AD4-13126의 제조:
Figure pct00248
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 164-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13127의 제조:
Figure pct00249
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 141-142℃)로서 수득하였다.
AD4-13128의 제조:
Figure pct00250
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.26 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 87-94℃)로서 수득하였다.
AD4-13129의 제조:
Figure pct00251
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.92 g, 0.01)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 161-162℃)로서 수득하였다.
AD4-13130의 제조:
Figure pct00252
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 158-160℃)로서 수득하였다.
AD4-13131의 제조:
Figure pct00253
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 146-148℃)로서 수득하였다.
AD4-13132의 제조:
Figure pct00254
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.12 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.10 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 96-104℃)로서 수득하였다.
AD4-13133의 제조:
Figure pct00255
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 159-161℃)로서 수득하였다.
AD4-13134의 제조:
Figure pct00256
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 138-139℃)로서 수득하였다.
AD4-13135의 제조:
Figure pct00257
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 181-182℃)로서 수득하였다.
AD4-13136의 제조:
Figure pct00258
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.78 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 180-182℃)로서 수득하였다.
AD4-13137의 제조:
Figure pct00259
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (0.58 g, 0.0033 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 148-150℃)로서 수득하였다.
AD4-13138의 제조:
Figure pct00260
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 174-176℃)로서 수득하였다.
AD4-13139의 제조:
Figure pct00261
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 162-163℃)로서 수득하였다.
AD4-13140의 제조:
Figure pct00262
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-6-플루오로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 183-186℃)로서 수득하였다.
AD4-13141의 제조:
Figure pct00263
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 169-173℃)로서 수득하였다.
AD4-13142의 제조:
Figure pct00264
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘,BBM-001-071 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 221-223℃)로서 수득하였다.
AD4-13143의 제조:
Figure pct00265
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.47 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 127-128℃)로서 수득하였다.
AD4-13144의 제조:
Figure pct00266
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.47 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.92 g, 0.01)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 101-108℃)로서 수득하였다.
AD4-13145의 제조:
Figure pct00267
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.47 g, 0.01 mol) 및 3-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 93-96℃)로서 수득하였다.
AD4-13146의 제조:
Figure pct00268
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 120-124℃)로서 수득하였다.
AD4-13147의 제조:
Figure pct00269
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 88-93℃)로서 수득하였다.
AD4-13148의 제조:
Figure pct00270
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,6-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 191-193℃)로서 수득하였다.
AD4-13149의 제조:
Figure pct00271
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 225-227℃)로서 수득하였다.
AD4-13150의 제조:
Figure pct00272
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.47 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (0.88 g, 0.005 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 90-95℃)로서 수득하였다.
AD4-13151의 제조:
Figure pct00273
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 3-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 148-149℃)로서 수득하였다.
AD4-13152의 제조:
Figure pct00274
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.29 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 144-148℃)로서 수득하였다.
AD4-13153의 제조:
Figure pct00275
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 154-156℃)로서 수득하였다.
AD4-13154의 제조:
Figure pct00276
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘,BBM-001-071 (1.43 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 136-144℃)로서 수득하였다.
AD4-13155의 제조:
Figure pct00277
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (0.44 g, 0.0033 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 130-131℃)로서 수득하였다.
AD4-13156의 제조:
Figure pct00278
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 175-181℃)로서 수득하였다.
AD4-13157의 제조:
Figure pct00279
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 159-163℃)로서 수득하였다.
AD4-13158의 제조:
Figure pct00280
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 195-199℃)로서 수득하였다.
AD4-13159의 제조:
Figure pct00281
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 3-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 138-141℃)로서 수득하였다.
AD4-13160의 제조:
Figure pct00282
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 157-164℃)로서 수득하였다.
AD4-13161의 제조:
Figure pct00283
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-6-메틸피리딘 (IJT-001-090; 1.43 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 143-146℃)로서 수득하였다.
AD4-13162의 제조:
Figure pct00284
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.47 g, 0.01 mol) 및 4-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 106-109℃)로서 수득하였다.
AD4-13163의 제조:
Figure pct00285
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.47 g, 0.01 mol) 및 2,3,5,6-테트라플루오로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.78 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 161-163℃)로서 수득하였다.
AD4-13164의 제조:
Figure pct00286
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-트리플루오로메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.62 g, 0.01 mol) 및 3-트리플루오로메틸벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.74 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 127-128℃)로서 수득하였다.
AD4-13165의 제조:
Figure pct00287
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-5-트리플루오로메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.80 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 회색 고체 (MP 137-139℃)로서 수득하였다.
AD4-13166의 제조:
Figure pct00288
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.42 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 158-160℃)로서 수득하였다.
AD4-13167의 제조:
Figure pct00289
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘,BBM-001-071 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 95-104℃)로서 수득하였다.
AD4-13172의 제조:
Figure pct00290
실시예 10에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.30 g, 0.008 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 180-182℃)로서 수득하였다.
AD4-13173의 제조:
Figure pct00291
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 3-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 고체 (MP 56-60℃)로서 수득하였다.
AD4-13174의 제조:
Figure pct00292
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 고체 (MP 132-138℃)로서 수득하였다.
AD4-13175의 제조:
Figure pct00293
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 88-92℃)로서 수득하였다.
AD4-13176의 제조:
Figure pct00294
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 68-70℃)로서 수득하였다.
AD4-13177의 제조:
Figure pct00295
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.30 g, 0.008 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 145-147℃)로서 수득하였다.
AD4-13178의 제조:
Figure pct00296
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.30 g, 0.008 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 153-155℃)로서 수득하였다.
AD4-13179의 제조:
Figure pct00297
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.30 g, 0.008 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 195-197℃)로서 수득하였다.
AD4-13180의 제조:
Figure pct00298
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.30 g, 0.008 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 192-195℃)로서 수득하였다.
AD4-13181의 제조:
Figure pct00299
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 79-86℃)로서 수득하였다.
AD4-13182의 제조:
Figure pct00300
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 60-68℃)로서 수득하였다.
AD4-13183의 제조:
Figure pct00301
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디플루오로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.30 g, 0.01 mol) 및 2-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 140-141℃)로서 수득하였다.
AD4-13184의 제조:
Figure pct00302
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.30 g, 0.008 mol) 및 3-트리플루오로메틸-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 165-166℃)로서 수득하였다.
AD4-13185의 제조:
Figure pct00303
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 2-클로로-4-플루오로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 157-158℃)로서 수득하였다.
AD4-13186의 제조:
Figure pct00304
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (01.42 g, 0.01 mol) 및 3-히드록시-4-메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.52 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 103-105℃)로서 수득하였다.
AD4-13187의 제조:
Figure pct00305
실시예 AD4-13022에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 140-141℃)로서 수득하였다.
AD4-13188의 제조:
Figure pct00306
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 3-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 116-121℃)로서 수득하였다.
AD4-13189의 제조:
Figure pct00307
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 155-159℃)로서 수득하였다.
AD4-13190의 제조:
Figure pct00308
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 3-히드록시-4-메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.52 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 고체 (MP 88-92℃)로서 수득하였다.
AD4-13191의 제조:
Figure pct00309
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.75 g, 0.01 mol) 및 3-히드록시-4-메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.52 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 104-105℃)로서 수득하였다.
AD4-13192의 제조:
Figure pct00310
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-065; 1.61 g 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 179-180℃)로서 수득하였다.
AD4-13193의 제조:
Figure pct00311
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 3,4-디메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.66 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 48-53℃)로서 수득하였다.
AD4-13194의 제조:
Figure pct00312
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 3,4-디메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.66 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 오일로서 수득하였다.
AD4-13195의 제조:
Figure pct00313
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 3,4-디메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.66 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 오일로서 수득하였다.
AD4-13196의 제조:
Figure pct00314
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4-메틸-5-클로로피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3,4-트리메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.96 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 165-166℃)로서 수득하였다.
AD4-13197의 제조:
Figure pct00315
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 2,3,4-트리메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.96 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 187-190℃)로서 수득하였다.
AD4-13199의 제조:
Figure pct00316
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-065; 1.61 g 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 164-165℃)로서 수득하였다.
AD4-13200의 제조:
Figure pct00317
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴날딘, 아크로스 오가닉스 (1.59 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 215-217℃)로서 수득하였다.
AD4-13202의 제조:
Figure pct00318
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 3,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 159-160℃)로서 수득하였다.
AD4-13203의 제조:
Figure pct00319
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-065; 1.61 g 0.01 mol) 및 3-히드록시-4-메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.52 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 87-90℃)로서 수득하였다.
AD4-13206의 제조:
Figure pct00320
실시예 ##에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 171-175℃)로서 수득하였다.
AD4-13208의 제조:
Figure pct00321
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3,4-트리메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.96 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 178-179℃)로서 수득하였다.
AD4-13209의 제조:
Figure pct00322
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-5-클로로-6-메틸피리딘 (IJT-001-090; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 99-101℃)로서 수득하였다.
AD4-13210의 제조:
Figure pct00323
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 2,3,4-트리메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.96 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 135-142℃)로서 수득하였다.
AD4-13211의 제조:
Figure pct00324
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 211-216℃)로서 수득하였다.
AD4-13212의 제조:
Figure pct00325
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 5-클로로-8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.80 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황갈색 고체 (MP 156-158℃)로서 수득하였다.
AD4-13213의 제조:
Figure pct00326
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 200-202℃)로서 수득하였다.
AD4-13214의 제조:
Figure pct00327
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘 (BBM-001-011; 1.59 g, 0.01 mol) 및 2,3,4-트리메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.96 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 82-86℃)로서 수득하였다.
AD4-13215의 제조:
Figure pct00328
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-072; 1.57 g, 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 160-163℃)로서 수득하였다.
AD4-13216의 제조:
Figure pct00329
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘 (BBM-001-011; 1.59 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 180-183℃)로서 수득하였다.
AD4-13217의 제조:
Figure pct00330
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-072; 1.57 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 녹색 고체 (MP 170-171℃)로서 수득하였다.
AD4-13218의 제조:
Figure pct00331
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-074; 1.75 g 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황색 고체 (MP 62-70℃)로서 수득하였다.
AD4-13219의 제조:
Figure pct00332
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-074; 1.75 g 0.01 mol) 및 2,3,4-트리메톡시벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.96 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 녹색 오일로서 수득하였다.
AD4-13220의 제조:
Figure pct00333
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 58-62℃)로서 수득하였다.
AD4-13221의 제조:
Figure pct00334
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘 (BBM-001-011; 1.59 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황갈색 고체 (MP 250-267℃)로서 수득하였다.
AD4-13222의 제조:
Figure pct00335
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-074; 1.75 g 0.01 mol) 및 2,3-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 황갈색 고체 (MP 73-79℃)로서 수득하였다.
AD4-13223의 제조:
Figure pct00336
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 128-130℃)로서 수득하였다.
AD4-13224의 제조:
Figure pct00337
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-4,5-디클로로피리딘 (BBM-001-049; 1.63 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 회색 고체 (MP 106-110℃)로서 수득하였다.
AD4-13225의 제조:
Figure pct00338
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-072; 1.57 g, 0.01 mol) 및 4-클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.41 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 회색 고체 (MP 108-111℃)로서 수득하였다.
AD4-13226의 제조:
Figure pct00339
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-072; 1.57 g, 0.01 mol) 및 3,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 회백색 고체 (MP 145-147℃)로서 수득하였다.
AD4-13227의 제조:
Figure pct00340
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-072; 1.57 g, 0.01 mol) 및 2,5-디클로로벤즈알데히드, 매트릭스 사이언티픽 (1.75 g, 0.01 mol)을 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 밝은 회색 고체 (MP 65-69℃)로서 수득하였다.
AD4-13228의 제조:
Figure pct00341
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘, (BBM-001-011; 1.59 g, 0.01 mol) 및 2,3,5-트리클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (2.09 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 (MP 187-190℃)로서 수득하였다.
AD4-13229의 제조:
Figure pct00342
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3-메틸-5-클로로피리딘 (BBM-001-071; 1.43 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 황갈색 (MP 79-85℃)로서 수득하였다.
AD4-13230의 제조:
Figure pct00343
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로-6-메틸피리딘, 매트릭스 사이언티픽 (1.77 g, 0.01 mol) 및 3-플루오로-4-클로로벤즈알데히드, 오크우드 프로덕츠 (1.59 g 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 101-108℃)로서 수득하였다.
AD4-13231의 제조:
Figure pct00344
실시예 AD4-13021에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행함.
2-아미노-3,5-디클로로피리딘, 원다 사이언스 (1.63 g, 0.01 mol) 및 2,4-디클로로벤즈알데히드, 아크로스 오가닉스 (1.75 g, 0.01 mol)를 무수 EtOH 50 ml 중에서 8-히드록시퀴놀린, 아크로스 오가닉스 (1.45 g, 0.01 mol)와 합하여 목적 베티 축합 생성물을 백색 고체 (MP 126-127℃)로서 수득하였다.
SEQUENCE LISTING <110> Errico, Joseph P. <120> METHODS AND COMPOSITIONS OF TARGETED DRUG DEVELOPMENT <130> 81200420-0022 <140> Unknown <141> 2010-01-06 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 613 <212> PRT <213> Homo sapiens <223> Epidermal Growth Factor Receptor <400> 1 Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Gly Thr Phe Glu Asp His Phe Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn 20 25 30 Cys Glu Val Val Leu Gly Asn Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn 35 40 45 Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val 50 55 60 Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln 65 70 75 80 Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val 85 90 95 Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met 100 105 110 Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn 115 120 125 Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser 130 135 140 Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly 145 150 155 160 Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly 165 170 175 Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln 180 185 190 Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His 195 200 205 Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu 210 215 220 Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro 225 230 235 240 Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro 245 250 255 Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg 260 265 270 Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala 275 280 285 Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys 290 295 300 Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe 305 310 315 320 Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn 325 330 335 Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg 340 345 350 Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp 355 360 365 Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala 370 375 380 Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile 385 390 395 400 Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val 405 410 415 Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser 420 425 430 Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn 435 440 445 Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys 450 455 460 Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Lys Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val 465 470 475 480 Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg 485 490 495 Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp 500 505 510 Lys Cys Lys Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser 515 520 525 Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile 530 535 540 Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr 545 550 555 560 Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly 565 570 575 Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys 580 585 590 His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu 595 600 605 Arg Gly Cys Pro Thr 610

Claims (20)

  1. 하기 화학식 2의 화학식을 가지는 화합물 (1505-유사 A형), 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염.
    <화학식 2>
    Figure pct00345

    상기식에서,
    X1은 수소, 2-메틸, 5-클로로, 5-니트로, 및 6-히드록실로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R1은
    i) 하기 화학식 3의 2-피리딜 고리
    <화학식 3>
    Figure pct00346

    (여기서,
    R23은 수소; 플루오로; 클로로; 트리플루오로메틸; 메틸; 에틸; 및 메톡시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3은 수소; 플루오로; 클로로; 메틸; 에틸; 메톡시; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 및 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R24는 수소; 플루오로; 클로로; 및 트리플루오로메틸로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R4는 수소; 메틸; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 및 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (ii) 하기 화학식 4의 3-피리딜 고리
    <화학식 4>
    Figure pct00347

    (여기서, R5, R6, 및 R7은 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)으로 이루어진 군으로부터 선택된다); 및
    (iii) 하기 화학식 5의 4-피리딜 고리
    <화학식 5>
    Figure pct00348

    (여기서, R8 및 R9는 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴; 및 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iv) 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴을 포함하는 아릴; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 트리플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 디플루오로메톡시; 3,4-메틸렌디옥시; 2,3-메틸렌디옥시; 니트로; 및 할로겐으로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페닐 고리; 및
    (v) 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 비치환된 헤테로아릴 5 또는 6원 고리;
    (vi) 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 및 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환된, 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 치환된 헤테로아릴 5 또는 6원 고리
    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는
    (i) 비치환된 페닐 고리, 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 2,3-메틸렌디옥시; 3,4-메틸렌디옥시; 식 -NR13R14를 가지는 디알킬아미노 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬로부터 선택된다); 트리플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 디플루오로메톡시; 3,4-메틸렌디옥시; 2,3-메틸렌디옥시; 니트로; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페닐 고리;
    (ii) 하기 화학식 8의 2-티오펜 고리
    <화학식 8>
    Figure pct00349

    (여기서, R15, R16, 및 R17은 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iii) 하기 화학식 9의 3-티오펜 고리
    <화학식 9>
    Figure pct00350

    (여기서, R18, R19, 및 R20은 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iv) 비치환된 2-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 4- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 2-피리딜 고리;
    (v) 비치환된 3-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2-, 4-, 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 3-피리딜 고리;
    (vi) 비치환된 4-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 4-피리딜 고리
    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    화학식 2는 하기 화학식 1의 화합물은 제외한다.
    <화학식 1>
    Figure pct00351
  2. 제1항에 있어서, 화학식 2의 R1이
    (i) 하기 화학식 6의 2-(1,3-티아조일):
    <화학식 6>
    Figure pct00352

    (여기서, R11 및 R12는 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다); 및
    (ii) 하기 화학식 7의 2-(4,5-디메틸-1,3-티아조일):
    <화학식 7>
    Figure pct00353

    로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리이고;
    R24가 클로로이거나; 또는
    R23이 메틸인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리이고;
    R4가 수소이고, R24가 플루오로이고, R3이 수소이고, R23이 플루오로이거나;
    R4가 메틸이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 플루오로이거나;
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 에틸이고, R23이 플루오로이거나;
    R4가 수소이고, R24가 플루오로이고, R3이 메틸이고, R23이 플루오로이거나;
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 에틸이거나;
    R4가 메틸이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 클로로이거나;
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 메틸이고, R23이 플루오로이거나;
    R4가 수소이고, R24가 트리플루오로메틸이고, R3이 수소이고, R23이 수소이거나;
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 메틸이거나;
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 클로로이거나;
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 메틸이고, R23이 수소이거나; 또는
    R4가 수소이고, R24가 클로로이고, R3이 클로로이고, R23이 수소인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R1이 화학식 3의 2-피리딜 고리이고;
    R24가 클로로이고, R3이 클로로 또는 메틸이거나, R23이 클로로 또는 메틸이거나;
    R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 메틸이거나;
    R24가 클로로이고, R3이 메틸이고, R23이 플루오로이거나;
    R24가 클로로이고, R3이 클로로이고, R23이 수소이거나;
    R24가 클로로이고, R3이 수소이고, R23이 클로로인 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R2가
    2- 및 4-위치에서 치환된 페닐 고리;
    4-트리플루오로메틸페닐;
    2-플루오로,4-트리플루오로메틸페닐; 및
    2,4-디클로로페닐
    로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물.
  7. 제1항에 있어서, R2가 4-클로로페닐; 2-플루오로,4-트리플루오로메틸페닐; 3-플루오로,4-클로로페닐; 2-플루오로,4-클로로페닐; 2,3-디클로로페닐; 2,3,5-트리클로로페닐; 2,4-디클로로페닐; 3,4-디클로로페닐; 및 3,5-디클로로페닐로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물.
  8. 제1항에 있어서, R2가
    4-위치에서 클로로로 치환되고, 2- 또는 3-위치에서 클로로 또는 플루오로로 치환된 페닐 고리;
    2,4-디클로로페닐; 및
    2-클로로,4-플루오로페닐
    로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 2가 하기 화합물 중 하나 이상이 아닌 것인 화합물.
    Figure pct00354

    Figure pct00355
  10. 하기 화학식 10의 화학식을 가지는 화합물 (1505-유사 B형), 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염.
    <화학식 10>
    Figure pct00356

    상기 식에서,
    X1은 수소, 2-메틸, 5-클로로, 5-니트로, 및 6-히드록실로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는
    (i) 비치환된 페닐 고리, 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 2,3-메틸렌디옥시; 3,4-메틸렌디옥시; 식 -NR13R14를 가지는 디알킬아미노 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬로부터 선택된다); 트리플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 디플루오로메톡시; 3,4-메틸렌디옥시; 2,3-메틸렌디옥시; 니트로; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페닐 고리;
    (ii) 하기 화학식 8의 2-티오펜 고리
    <화학식 8>
    Figure pct00357

    (여기서, R15, R16, 및 R17은 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iii) 하기 화학식 9의 3-티오펜 고리
    <화학식 9>
    Figure pct00358

    (여기서, R18, R19, 및 R20은 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iv) 비치환된 2-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 4- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 2-피리딜 고리;
    (v) 비치환된 3-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2-, 4-, 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 3-피리딜 고리; 및
    (vi) 비치환된 4-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 4-피리딜 고리
    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R21이
    (i) 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬;
    (ii) 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬;
    (iii) 비치환된 페닐 고리, 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 2,3-메틸렌디옥시; 3,4-메틸렌디옥시; 식 -NR13R14를 가지는 디알킬아미노 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬로부터 선택된다); 트리플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 디플루오로메톡시; 3,4-메틸렌디옥시; 2,3-메틸렌디옥시; 니트로; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페닐 고리;
    (iv) 비치환된 2-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 4- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 2-피리딜 고리;
    (v) 비치환된 3-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2-, 4-, 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 3-피리딜 고리; 및
    (vi) 비치환된 4-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 4-피리딜 고리; 및
    (vii) 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리
    로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  11. 하기 화학식 11의 화학식을 가지는 화합물 (1505-유사 C형), 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염.
    <화학식 11>
    Figure pct00359

    상기 식에서,
    X1은 수소, 2-메틸, 5-클로로, 5-니트로, 및 6-히드록실로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는
    (i) 비치환된 페닐 고리, 또는 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 2,3-메틸렌디옥시; 3,4-메틸렌디옥시; 식 -NR13R14를 가지는 디알킬아미노 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬로부터 선택된다); 트리플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 디플루오로메톡시; 3,4-메틸렌디옥시; 2,3-메틸렌디옥시; 니트로; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페닐 고리;
    (ii) 하기 화학식 8의 2-티오펜 고리
    <화학식 8>
    Figure pct00360

    (여기서, R15, R16, 및 R17은 독립적으로 수소; 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iii) 하기 화학식 9의 3-티오펜 고리
    <화학식 9>
    Figure pct00361

    (여기서, R18, R19, 및 R20은 독립적으로 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); 디알킬아미노; 트리플루오로메틸; 디플루오로메틸; 트리플루오로메톡시; 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된다);
    (iv) 비치환된 2-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 4- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 2-피리딜 고리;
    (v) 비치환된 3-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2-, 4-, 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 3-피리딜 고리; 및
    (vi) 비치환된 4-피리딜 고리, 또는 피리딘 고리의 2- 또는 6-위치에서 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬 및 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 4-피리딜 고리
    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R22는 임의로 C-1 또는 C-2에서
    (i) 비치환된 페닐 고리, 및
    (ii) 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-위치에서 (a) 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬; (b) 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬; (c) 1 내지 4개의 N, O, 또는 S 원자를 함유하는 페닐 또는 헤테로아릴 5 또는 6원 고리를 포함하는 아릴; (d) 알콕시 -OR10 (여기서, R10은 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬이거나 또는 임의로 불포화 또는 1개의 산소 또는 질소 원자를 함유하는 C-1 내지 C-6 시클로알킬이다); (e) 2,3-메틸렌디옥시; (f) 3,4-메틸렌디옥시; (g) 식 -NR13R14를 가지는 디알킬아미노 (여기서, R13 및 R14는 독립적으로 수소 및 임의로 불포화를 함유하는 직쇄 또는 분지형 C-1 내지 C-4 저급 알킬로부터 선택된다); (h) 트리플루오로메틸; (i) 트리플루오로메톡시; (j) 디플루오로메톡시; (k) 3,4-메틸렌디옥시; (l) 2,3-메틸렌디옥시; (m) 니트로; 및 (n) 할로겐으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페닐 고리
    로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 기로 치환된 C-1 내지 C-6 저급 알킬이다.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 활성을 억제하며,
    도식 I 1505-유사 약물작용발생단의 관능기 F(I)1, F(I)2, F(I)3, F(I)4, F(I)5, F(I)6, F(I)7, F(I)8, 및 F(I)9 중 6개 이상을 포함하며;
    여기서,
    관능기 F(I)1은 서열 1의 수용체 Asp553의 카르복실레이트 측쇄에 H-결합을 공여하거나, 그에 대해 염 가교를 형성하고, 그의 좌표는 r = 56.363, θ (쎄타) = 94.368, 및 φ (파이) = -17.752이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)2는 서열 1의 수용체 Thr570의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 53.290, θ (쎄타) = 101.494, 및 φ (파이) = -23.244이고, 구 반경은 약 1.0 Å이고;
    관능기 F(I)3은 서열 1의 수용체 Val568의 측쇄와, 수용체 His566의 이미다졸 측쇄와, 및 수용체 Pro552의 이미다졸리딘 고리과 소수성 접촉을 형성하고, 그의 좌표는 r = 53.726, θ (쎄타) = 97.830, 및 φ (파이) = -18.378이고, 구 반경은 약 1.7 Å이고;
    관능기 F(I)4는 서열 1의 수용체 Asp563의 측쇄 카르복실레이트에 H-결합을 공여하거나, 그에 대해 염 가교를 형성하고, 그의 좌표는 r = 56.103, θ (쎄타) = 99.536, 및 φ (파이) = -21.080이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)5는 서열 1의 수용체 Pro572의 이미다졸린 고리 및 Met253의 측쇄와 소수성 접촉을 형성하고, 그의 좌표는 r = 53.647, θ (쎄타) = 103.844, 및 φ (파이) = -20.990이고, 구 반경은 약 1.4 Å이고;
    관능기 F(I)6은 서열 1의 수용체 Cys571의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 51.088, θ (쎄타) = 104.241, 및 φ (파이) = -25.552이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)7은 서열 1의 수용체 Cys571의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 52.340, θ (쎄타) = 103.980, 및 φ (파이) = -27.461이고, 구 반경은 약 1.5 Å이고;
    관능기 F(I)8은 서열 1의 Ala573의 수용체 골격 NH로부터 H-결합을 수용하고, 그의 좌표는 r = 51.383, θ (쎄타) = 106.455, 및 φ (파이) = -24.319이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)9는 서열 1의 Ala573의 수용체 골격 NH로부터 H-결합을 수용하고, 그의 좌표는 r = 52.861, θ (쎄타) = 107.692, 및 φ (파이) = -25.447이고, 구 반경은 약 1.5 Å이며;
    실질적으로 EGFR의 비-확장된 테터 불활성 형상을 유지시키거나, 또는 실질적으로 EGFR의 확장된 테터 활성 형상의 안정화를 방지하는 화합물.
  13. 증식성 질환, 장애, 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의
    (i) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 화합물;
    (ii) 하기 화학식 1의 화합물
    <화학식 1>
    Figure pct00362
    AD4-1505;
    (iii)
    Figure pct00363

    로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물; 또는
    그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 증식성 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 증식성 질환, 장애, 또는 상태가 EGFR과 관련이 있거나, 또는 암; 혈관 증식성 장애; 섬유성 장애; 혈관간 세포 증식성 장애; 건선; 광선 각화증; 지루성 각화증; 사마귀; 켈로이드성 반흔; 습진; 및 바이러스 감염에 의해 유발되는 과다증식성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  15. 도식 I을 포함하는 약물작용발생단을 입력값으로서 3차원 데이터베이스에 제공하는 단계;
    후보 화합물의 3차원 구조를 약물작용발생단의 3차원 구조와 비교하는 단계;
    6개 이상의 도식 I (ADS-1505-유사)의 관능기와 실질적으로 정렬되는 3차원 구조를 가진 후보 화합물을 선택하는 단계
    를 포함하며;
    여기서,
    후보 화합물의 3차원 구조와 약물작용발생단의 3차원 구조가 서로 유사하다면, 이는 EGFR의 테터링된 불활성 형상을 실질적으로 유지시킴으로써, 또는 EGFR의 언테터링된 활성 형상의 안정화를 실질적으로 방지함으로써 EGFR을 억제시킬 수 있는 능력을 후보 화합물이 가지고 있음을 시사하는 것이며;
    도식 I (ADS-1505-유사)은 관능기 F(I)1, F(I)2, F(I)3, F(I)4, F(I)5, F(I)6, F(I)7, F(I)8, 및 F(I)9를 포함하며,
    여기서,
    관능기 F(I)1은 서열 1의 수용체 Asp553의 카르복실레이트 측쇄에 H-결합을 공여하거나, 그에 대해 염 가교를 형성하고, 그의 좌표는 r = 56.363, θ (쎄타) = 94.368, 및 φ (파이) = -17.752이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)2는 서열 1의 수용체 Thr570의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 53.290, θ (쎄타) = 101.494, 및 φ (파이) = -23.244이고, 구 반경은 약 1.0 Å이고;
    관능기 F(I)3은 서열 1의 수용체 Val568의 측쇄와, 수용체 His566의 이미다졸 측쇄와, 및 수용체 Pro552의 이미다졸리딘 고리과 소수성 접촉을 형성하고, 그의 좌표는 r = 53.726, θ (쎄타) = 97.830, 및 φ (파이) = -18.378이고, 구 반경은 약 1.7 Å이고;
    관능기 F(I)4는 서열 1의 수용체 Asp563의 측쇄 카르복실레이트에 H-결합을 공여하거나, 그에 대해 염 가교를 형성하고, 그의 좌표는 r = 56.103, θ (쎄타) = 99.536, 및 φ (파이) = -21.080이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)5는 서열 1의 수용체 Pro572의 이미다졸린 고리 및 Met253의 측쇄와 소수성 접촉을 형성하고, 그의 좌표는 r = 53.647, θ (쎄타) = 103.844, 및 φ (파이) = -20.990이고, 구 반경은 약 1.4 Å이고;
    관능기 F(I)6은 서열 1의 수용체 Cys571의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 51.088, θ (쎄타) = 104.241, 및 φ (파이) = -25.552이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)7은 서열 1의 수용체 Cys571의 골격 카르보닐에 H-결합을 공여하고, 그의 좌표는 r = 52.340, θ (쎄타) = 103.980, 및 φ (파이) = -27.461이고, 구 반경은 약 1.5 Å이고;
    관능기 F(I)8은 서열 1의 Ala573의 수용체 골격 NH로부터 H-결합을 수용하고, 그의 좌표는 r = 51.383, θ (쎄타) = 106.455, 및 φ (파이) = -24.319이고, 구 반경은 약 1.2 Å이고;
    관능기 F(I)9는 서열 1의 Ala573의 수용체 골격 NH로부터 H-결합을 수용하고, 그의 좌표는 r = 52.861, θ (쎄타) = 107.692, 및 φ (파이) = -25.447이고, 구 반경은 약 1.5 Å인 것인, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 억제제를 확인하는 방법.
  16. 제1항의 화합물을 형성하기에 충분한 조건하에 에탄올 중에 아미노 피리딘 중간체 화합물, 알데히드 중간체 화합물, 및 히드록시퀴놀린 중간체 화합물을 조합하는 것을 포함하며;
    여기서,
    아미노 피리딘 중간체 화합물은 R2-CHO (여기서, R2는 제1항에서 정의된 바와 같다)를 포함하고;
    알데히드 중간체 화합물은 R1-NH2 (여기서, R1은 제1항에서 정의된 바와 같다)를 포함하고;
    히드록시퀴놀린 중간체 화합물은 X로 임의로 치환된 8-히드록시퀴놀린 (여기서, X는 제1항에서 정의된 바와 같다)을 포함하는 것인, 제1항의 화합물을 형성하는 방법.
  17. 제13항에 있어서, 아미노피리딘 중간체 화합물이 2-아미노-3-메톡시-5-클로로피리딘; 2-아미노-4,5-디클로로피리딘; 2-아미노-5-클로로-6-메틸피리딘; 2-아미노-5-클로로-3-메틸피리딘; 2-아미노-3,5-디클로로-4-메틸피리딘; 2-아미노-3,5-디클로로-4,6-디메틸피리딘; 2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘; 2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘; 및 2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘, 또는 제18항에 따라 형성된 아미노피리딘 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  18. (i) 2-아미노-5-클로로피리딘 유도체를 형성하기에 충분한 조건하에 에틸아세테이트 또는 디메틸포름아미드를 포함하는 용매 중에서 치환 또는 비치환된 2-아미노피리딘 및 N-클로로숙신이미드를 조합하거나; 또는
    (ii) 빙초산 중 아세트산 무수물 및 3-위치 및 5-위치에서 플루오로, 클로로, 또는 브로모로 치환된 2-아미노피리딘을 조합하여 상응하는 아세트아미드 유도체를 형성하고; 약 -70℃에서 테트라히드로푸란 중 아세트아미드 유도체 및 디이소프로필 아민 및 부틸리튬을 조합하여 아세트아미드 유도체를 탈양성자화하고; 탈양성자화된 아세트아미드 유도체 및 저급 알킬 할라이드를 조합하여 아세트아미드 유도체의 4-위치를 알킬화하고; 약 50℃에서 메탄올 용매 중 알킬화된 아세트아미드 유도체 및 진한 염산을 조합하여 아세트아미드 기를 제거하고, 2-아미노-3,5-디할로-4-알킬아미노피리딘을 형성하는 것을 포함하는, 아미노피리딘 화합물을 형성하는 방법.
  19. 제18항에 있어서,
    (i) 반응 (i)의 2-아미노피리딘이 하기 화학식 12 (여기서, R23, R3, 및 R4는 제1항에서 정의된 바와 같고, R24는 수소이다)를 포함하고; 2-아미노-5-클로로피리딘 유도체가 화학식 12 (여기서, R23, R3, 및 R4는 2-아미노피리딘에 대한 것과 동일하고, R24는 클로로이다)를 포함하거나;
    (ii) 치환된 2-아미노피리딘이 화학식 12 (여기서, R23은 플루오로, 클로로, 또는 브로모이고; R3은 수소이고; R4는 제1항에서 정의된 바와 같고; R24는 플루오로, 클로로, 또는 브로모이다)를 포함하는 것인 방법.
    <화학식 12>
    Figure pct00364
  20. 2-아미노-3-플루오로-4-메틸-5-클로로피리딘;
    2-아미노-3-에틸-5-클로로피리딘;
    2-아미노-3-플루오로-4-에틸-5-클로로피리딘; 및
    2-아미노-4-메틸-3,5-디플루오로피리딘
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노 피리딘 화합물.
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