KR20120106703A - Collagen production enhancer, and external composition for skin and cosmetic each comprising same - Google Patents

Collagen production enhancer, and external composition for skin and cosmetic each comprising same Download PDF

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KR20120106703A
KR20120106703A KR1020127001655A KR20127001655A KR20120106703A KR 20120106703 A KR20120106703 A KR 20120106703A KR 1020127001655 A KR1020127001655 A KR 1020127001655A KR 20127001655 A KR20127001655 A KR 20127001655A KR 20120106703 A KR20120106703 A KR 20120106703A
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와코토 부카와
타쿠미 와타나베
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콤비 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제는, 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 한다. 본 발명에 따르면, 효율적으로 생산할 수 있으며, 안정성이 높고, 우수한 I형 콜라겐의 생산 촉진제, 및 이를 포함하는 외용제 및 화장료가 제공된다.The collagen production promoter according to the present invention contains an enzyme decomposition product of lead as an active ingredient. According to the present invention, there is provided an agent which can be produced efficiently, has high stability, and has excellent production of collagen type I, and external preparations and cosmetics including the same.

Description

콜라겐 생산 촉진제, 이를 포함하는 피부외용 조성물 및 화장료 {COLLAGEN PRODUCTION ENHANCER, AND EXTERNAL COMPOSITION FOR SKIN AND COSMETIC EACH COMPRISING SAME}Collagen production promoters, external skin compositions and cosmetics including the same {COLLAGEN PRODUCTION ENHANCER, AND EXTERNAL COMPOSITION FOR SKIN AND COSMETIC EACH COMPRISING SAME}

본원은 선행하는 일본 특허 출원인 일본 특허 출원 2009-148754호(출원일: 2009년 6월 23일)에 기초하는 것으로서, 그 우선권의 이익을 주장하는 것으로, 그의 개시 내용 전체는 참조로써 여기에 도입된다. This application is based on the JP Patent application 2009-148754 of an earlier Japanese patent application (application date: June 23, 2009), and claims the benefit of that priority, The whole content of this indication is taken in here as a reference.

본 발명은 연와(燕窩)의 효소 분해물을 유효 성분으로 하는 콜라겐 생산 촉진제에 관한 것이다. 상세하게는 본 발명은 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키는, 콜라겐 생산 촉진제에 관한 것이다. 또한 본 발명은 그의 유효 성분인 연와의 효소 분해물을 포함하는, 피부외용 조성물 및 화장료에 관한 것이다.The present invention relates to a collagen production promoter comprising as an active ingredient an enzyme degradation product of Yeonwa. Specifically, the present invention relates to a collagen production promoter, which promotes type I collagen production in skin dermal fibroblasts. The present invention also relates to a composition for external skin and a cosmetic comprising an enzymatic degradation product of lead as its active ingredient.

피부 거칠음이나 주름, 피부의 처짐, 탄력 저하 등의 피부 트러블은, 특히 여성에게 있어서 중대한 관심사이다. 이들 피부 트러블은, 통상 환경적인 요인이나, 노화와 같은 가령(加齡)에 따른 요인, 또한 스트레스 등의 심리적 요인 등에 의해 야기된다고 생각되고 있다. 특히, 최근 자외선의 증대나, 에어컨의 다용 등에 따른 생활환경의 건조화 등에 의한 피부에 악영향을 미치는 환경적 요인이 증대되고 있다고 할 수 있다.Skin problems such as skin roughness, wrinkles, sagging skin, and decreased elasticity are of particular concern for women. These skin troubles are usually considered to be caused by environmental factors, factors such as aging, and psychological factors such as stress. In particular, it can be said that environmental factors that adversely affect the skin due to the increase of ultraviolet rays, the drying of the living environment due to the multi-use of the air conditioner, and the like are increasing.

피부 조직은 표피, 진피, 피하조직으로 이루어진다. 진피에는, 콜라겐이나 히알루론산이 많이 포함되며, 피부의 보수성이나 탄력성에 크게 관여하고 있다. 콜라겐이나 히알루론산은, 진피 중에 존재하는 진피 섬유아세포를 생산하는 것이 알려져 있다.Skin tissue consists of the epidermis, dermis and subcutaneous tissue. The dermis contains a lot of collagen and hyaluronic acid, and is largely involved in skin's water retention and elasticity. Collagen and hyaluronic acid are known to produce dermal fibroblasts present in the dermis.

콜라겐은 인간의 생체 내에 존재하는 단백질 중 약 30 %를 차지하며, 그의 70 %가 진피에 존재한다고 알려져 있다. 진피에 존재하는 콜라겐으로는, I형 콜라겐이나 III형 콜라겐이 포함되지만, 주요한 것은 I형 콜라겐이다.Collagen accounts for about 30% of the proteins present in human living bodies, 70% of which is known to be present in the dermis. Collagen present in the dermis includes type I collagen and type III collagen, but the main one is type I collagen.

종래, 피부의 탄력이나 윤기의 향상, 주름 예방 개선을 목적으로, 콜라겐을 배합한 화장료를 외용으로 사용하여, 피부에 콜라겐을 직접 보충하는 방법이 다용되어 왔다. 그러나, 외용으로 콜라겐을 보충한 경우, 피부 진피에서의 콜라겐량을 증가시키는 것은 곤란하기 때문에, 피부의 탄력이나 윤기의 향상, 주름 예방 개선을 위해서는, 반드시 충분하다고는 할 수 없었다.Background Art Conventionally, for the purpose of improving skin elasticity and gloss, and preventing wrinkles, cosmetics containing collagen have been used for external use, and a method of directly supplementing collagen with skin has been widely used. However, when collagen is supplemented externally, it is difficult to increase the amount of collagen in the dermis of the skin. Therefore, it is not always sufficient to improve skin elasticity, glossiness, and wrinkle prevention.

피부가 자외선을 포함하는 광에 노출되면, 진피의 세포밖 매트릭스의 대부분을 차지하는 콜라겐이 현저히 감소하여, 그의 섬유 다발의 혼란이 발생하는 것이 알려져 있다. 이 때문에, 진피의 콜라겐량을 증가시키는 것은, 주름의 개선이나 방지 등에 유용하다고 되어 있다(문헌 1("기능성 화장품 소재의 개발을 위한 실험법"(이모까와 겐지 감수), 2007년 발행, CMC 출판, 제45 내지 47페이지)). 또한 여기에는, 중파 자외선(UVB)의 조사에 의해서, 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성이 크게 저하되는 것이 나타나 있다. 여기에는, I형 콜라겐 합성 촉진제의 예로서, 비타민 C 유도체, 유장(milk serum) 성분 등이 예시되어 있다.When the skin is exposed to light including ultraviolet rays, it is known that collagen, which occupies most of the extracellular matrix of the dermis, is markedly reduced, causing disruption of its fiber bundles. For this reason, increasing the amount of collagen in the dermis is said to be useful for improving or preventing wrinkles (Document 1 ("Experimental Method for the Development of Functional Cosmetic Materials" (supervised by Genji Amokawa), published in 2007, published by CMC) , Pages 45-47). In addition, it is shown that collagen synthesis of dermal fibroblasts is greatly reduced by irradiation with medium-wave ultraviolet (UVB). Here, as an example of the type I collagen synthesis promoter, a vitamin C derivative, a milk serum component, etc. are illustrated.

한편, 문헌 2[Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No.346 (Vol.37, No.4), pp.103-]에는, 콜라겐 생산능의 저하를 억제하는 것은 QOL의 향상 개선에 유용하며, 피부에서의 콜라겐량의 저하는 주름이나 처짐 등의 원인이 된다는 것이 나타나 있다.On the other hand, in Document 2 [Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No.346 (Vol.37, No.4), pp.103-], suppressing the decrease in collagen production ability It is useful for improving QOL, and it has been shown that a decrease in the amount of collagen in the skin causes wrinkles and sagging.

I형 콜라겐의 생산 촉진제로는, 지금까지 특정한 식물 유래 성분에 주목하여 이를 이용한 것이 많이 보고되어 있다(예를 들면, 일본 특허 공개 제2008-105984호 공보나, WO 2004/085429).As a production accelerator of type I collagen, many reports have been made so far by paying attention to a specific plant-derived component (for example, Japanese Patent Laid-Open No. 2008-105984 or WO 2004/085429).

연와는, 금사연(金絲燕)이 자신의 타액을 실의 형태로 하여 만드는 둥지로, 그의 성분으로는, 당단백질을 많이 포함하며, 지질은 거의 포함되지 않는 것으로 알려져 있다. 연와는 종래 중화요리에서의 식용 소재나, 한방약의 원료 등에 사용되고 있다. 최근에는, 연와를 원료로 이용한 건강 식품 등도 개발되고 있지만, 외용제나 화장료와 같은 외용 용도에의 적용예는 아직 미미하게 알려져 있다.Lotus is a nest that Geumsayeon makes its saliva in the form of a thread, and it is known that it contains many glycoproteins and contains little lipid. Yeonwa is conventionally used for edible materials in Chinese cuisine, raw materials for herbal medicine, and the like. In recent years, health foods using lead as raw materials have also been developed, but application examples for external use such as external preparations and cosmetics are still insignificant.

일본 특허 공개 제2003-95961호 공보에는, 연와의 효소 분해물을 이용한 경구용 피부 미용 촉진제가 개시되어 있다. 그러나, 여기에는 경구 용도만이 개시되어 있는 것에 불과하고, 외용 용도에의 이용 가능성에 대해서는 아무런 기재도 시사도 되어 있지 않다. 또한 여기서의 효과는, 피부의 촉촉함의 향상이나, 결이 섬세한 피부를 얻는 것이며, 피부의 탄력이나 윤기의 향상이나, 주름 개선을 수반하는 I형 콜라겐의 생산 촉진능에 대해서는, 하등 기재되어 있지 않다.Japanese Unexamined Patent Publication No. 2003-95961 discloses an oral skin care accelerator using an enzymatic degradation product of a pontoon. However, only oral use is disclosed here, and neither description nor suggestion is available about the use for external use. In addition, the effect here is to improve the skin's moisture, to obtain a fine grained skin, and to describe the production promoting ability of type I collagen accompanied with the improvement of the elasticity and the luster of the skin and the improvement of the wrinkles.

WO 99/022709에는, 연와의 함수 용제 추출물, 특히 열수 추출물을 포함하는 화장료가 개시되어 있다. 이 화장료는 스킨케어 용도로 사용할 수 있어, 외용 용도로 사용하는 것이다. 또한 여기에는 연와의 함수 추출물이, 피부 세포에서의 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타내는 것도 개시되어 있다. 그러나, 여기서 사용되는 추출물은, 연와를 열수 추출하여 고형분을 제거한 것으로, 연와 전체를 효소 처리하여 그대로 사용하는 연와 효소 분해물과는 명백히 다른 것이다. 또한 효과에 대해서도, 본 발명자들이 생각하는 한, 개선의 여지가 있다고 생각되었다.WO 99/022709 discloses a cosmetic comprising a water-containing solvent extract, especially a hot water extract of a lotus fruit. This cosmetic can be used for skin care and is used for external use. Moreover, it also discloses that a hydrate extract of yeonwa exhibits the collagen synthesis promoting effect in skin cells. However, the extract used here removes solids by hot water extraction of lead and is obviously different from lead and enzyme decomposition products which are used as they are by enzymatically treating the whole lead. In addition, it was thought that there was room for improvement as far as the inventors think about the effects.

본 발명자들은 금번, 연와의 효소 분해물이 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐의 우수한 생산 촉진 효과를 갖는 것을 발견하였다. 이 효과는, 연와의 열수 추출물에서 나타난 효과보다도 현저한 것이며, 효소 분해를 보다 진행시킨 효소 분해물에서, 그의 효과는 보다 현저하였다. 본 발명은 이들 지견에 기초하는 것이다.The present inventors have found that the enzyme digestion of yeonwa has an excellent production promoting effect of type I collagen in skin dermal fibroblasts. This effect was more remarkable than the effect shown in the hot water extract of the yeonwa, and the effect was more remarkable in the enzyme digested product which advanced the enzyme decomposition further. This invention is based on these knowledge.

따라서 본 발명은 효율적으로 생산할 수 있으며, 안정성이 높고, 우수한 I형 콜라겐의 생산 촉진제, 및 이를 포함하는 외용제 및 화장료의 제공을 그의 목적으로 한다.Accordingly, an object of the present invention is to provide an accelerator for the production of collagen type I, which is highly stable and has excellent stability, and an external preparation and a cosmetic containing the same.

본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제는, 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 한다.The collagen production promoter according to the present invention contains an enzyme decomposition product of lead as an active ingredient.

본 발명의 하나의 바람직한 양태에 따르면, 상기 효소 분해물은 프로테아제에 의한 분해물이다.According to one preferred embodiment of the invention, the enzymatic digest is a digest by protease.

본 발명의 하나의 보다 바람직한 양태에 따르면, 상기 효소 분해물의 분자량은 70 내지 200,000이다.According to one more preferred aspect of the present invention, the molecular weight of the enzymatic digest is 70 to 200,000.

본 발명의 하나의 더욱 바람직한 양태에 따르면, 상기 효소 분해물의 평균 분자량은 300 내지 15,000이다.According to one more preferred aspect of the present invention, the average molecular weight of the enzyme digest is 300 to 15,000.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제는, 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키기 위한 것이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the collagen production promoter according to the present invention is for promoting type I collagen production in dermal dermal fibroblasts.

본 발명의 별도의 양태에 따르면, 본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제를 포함하여 이루어지는 피부외용 조성물이 제공된다. 바람직하게는 이 조성물은, 스킨케어에 이용되며, 보다 바람직하게는 피부의 탄력과 윤기의 향상, 및 주름 방지 또는 개선에 이용된다.According to another aspect of the present invention, there is provided an external skin composition comprising a collagen production promoter according to the present invention. Preferably, this composition is used for skin care, and more preferably used to improve skin elasticity and gloss, and to prevent or improve wrinkles.

본 발명의 별도의 보다 바람직한 양태에 따르면, 본 발명에 의한 피부외용 조성물은 화장료이다.According to another more preferred aspect of the present invention, the external composition for skin according to the present invention is a cosmetic.

본 발명의 별도의 양태에 따르면, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 있어서의 콜라겐 생산 촉진제를 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다. 본 발명의 별도의 하나의 양태에 따르면, 스킨케어용 피부외용 조성물을 제조하기 위한 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다.According to another aspect of the present invention, there is provided the use of an enzymatic degradation product of a kite for producing a collagen production promoter in the skin of a mammal, including a human. According to another aspect of the present invention, there is provided the use of an enzymatic digest with a kite for preparing a skin care composition for skin care.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 유효 성분인 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진 방법이 제공된다. 본 발명의 또 다른 하나의 양태에 따르면, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는 스킨케어 방법이 제공된다. 마찬가지로, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 피부의 탄력과 윤기를 향상시키고, 주름을 방지 또는 개선하는 방법도 제공된다.According to still another aspect of the present invention, there is provided a method for promoting production of collagen in the skin, comprising applying an effective amount of an enzyme digest which is an active ingredient of the present invention to the skin of a mammal, including a human. According to yet another aspect of the present invention, there is provided a skincare method comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to the skin of a mammal, including a human. Similarly, there is also provided a method of improving the elasticity and glossiness of the skin and preventing or improving wrinkles, comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to the skin of a mammal, including a human.

본 발명에 따르면, 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로서 사용함으로써, 인간 피부 진피 섬유아세포의 콜라겐의 생산을, 종래에 비하여 현저히 촉진시킬 수 있다. 또한 이 진피 섬유아세포의 콜라겐의 생산 촉진능에 기초하여, 효소 분해물을 피부외용 용도 또는 화장료 용도에 사용함으로써, 피부의 탄력(탄력성)을 향상시키고, 피부의 윤기를 향상시키며, 주름을 예방 또는 감소시킬 수 있다. 또한 햇볕에 그을린 후의 피부에서 콜라겐 합성이 저하된 듯한 상태의 피부에서 콜라겐 생산을 촉진시켜, 피부의 탄력이나 윤기의 향상이나, 주름 개선을 행할 수 있다. 이와 같이 하여 본 발명에 따르면, 소비자의 QOL의 향상을 도모할 수 있다. 또한, 사용되는 효소 분해물은, 식용 소재로서도 주지인 연와를 사용하기 때문에, 안전성이 높고, 소비자에게도 받아들여지기 쉬운 것이다. 또한 효소 분해물은, 연와를 그대로 효소 처리하여 얻을 수 있기 때문에, 효율적으로 제조할 수 있으며, 제조 비용도 낮게 억제할 수 있다.According to the present invention, the production of collagen in human dermal dermal fibroblasts can be significantly promoted compared to the conventional one by using the enzyme degradant of lead as an active ingredient. In addition, based on the ability of the dermal fibroblasts to promote collagen production, enzyme degradants can be used for external skin applications or cosmetics to enhance skin elasticity, improve skin luster, and prevent or reduce wrinkles. Can be. In addition, it is possible to promote collagen production in the skin in which the collagen synthesis is deteriorated in the skin after sunburn, thereby improving skin elasticity, glossiness, and wrinkle improvement. In this manner, according to the present invention, it is possible to improve the consumer QOL. In addition, since the enzyme decomposed | degraded product used uses lead which is well-known also as an edible material, safety is high and it is easy to be accepted by a consumer. In addition, since the enzyme decomposed product can be obtained by enzymatically treating the lead as it is, it can be produced efficiently, and the production cost can be suppressed low.

[도 1] 연와 샘플 중 시알산량의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 2] 연와 샘플 중 단백질량의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 3] GPC-HPLC에 의한 연와 효소 분해물 1의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 4] GPC-HPLC에 의한 연와 효소 분해물 2의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 5] 콜라겐의 생산 촉진능의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
1 is a graph showing a measurement result of amount of sialic acid in a lead and a sample.
2 is a graph showing the results of measurement of the amount of protein in lead and samples.
3 is a graph showing the results of measurement of lead and enzyme digest 1 by GPC-HPLC.
4 is a graph showing the results of measurement of lead and enzyme digest 2 by GPC-HPLC.
5 is a graph showing the measurement results of collagen production promoting ability.

유효 성분Active ingredient

본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제는, 상기한 바와 같이 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 한다.As described above, the collagen production promoter according to the present invention contains an enzyme decomposition product of lead as an active ingredient.

효소 분해물의 원료인 연와는, 금사연이 자신의 타액을 실의 형상으로 만든 둥지로, 그의 성분으로는 당단백질을 많이 포함하며, 지질은 거의 포함되어 있지 않다. 여기서 금사연이란, 칼새과(Apodidae)의 금사연속(Collocalia)에 속하는 제비류를 말하며, 예를 들면 아포디대 콜로칼리아 프란시카(Apodidae Collocalia francica), 아포디대 콜로칼리아 살란가나(Apodidae Collocalia salangana), 아포디대 콜로칼리아 푸시파가(Apodidae Collocalia fuciphaga), 아포디대 콜로칼리아 이넥스펙타타(Apodidae Collocalia inexpectata), 아포디대 콜로칼리아 베스티타(Apodidae Collocalia vestita), 아포디대 콜로칼리아 에스큘렌타(Apodidae Collocalia esculenta), 아포디대 콜로칼리아 맥시무스(Apodidae Collocalia maximus) 등을 들 수 있다.Yeonwa, which is the raw material of the enzyme decomposition product, is a nest in which Geumsayeon has his saliva in the form of a thread, and contains a large amount of glycoprotein as its component, and contains little lipid. Geumsayeon refers to the larvae belonging to the Collocalia of Apodidae, for example, Apodidae Collocalia francica, Apodidae Collocalia salangana, Apodidae Collocalia francang, Apodidae Collocalia fuciphaga, Apodidae Collocalia inexpectata, Apodidae Collocalia vestita, Apodidae Collocalia vestita, Apodidae Collocalia fuciphaga Apodidae Collocalia esculenta, Apodidae Collocalia maximus, and the like.

본 발명에서 연와는 시판품을 사용할 수 있다. 일반적으로 시판되고 있는 연와에는, 털이나 똥 등의 오염을 제거하고 세정한 것부터, 연와의 찌꺼기를 모아 표백과 세정을 반복하여 성형한 것까지 다양한 종류가 있지만, 본 발명에서 이용하는 연와는, 전처리에 있어서 과도한 세정이나 표백 등이 행해지지 않은 연와를 이용하는 것이 바람직하다.In this invention, a commercial item can be used for a lead. In general, there are various types of lead commercially available, from decontamination and washing of hairs and dung, to remnants of bleaching and washing by collecting remnants of kite, but the kites used in the present invention are used for pretreatment. Therefore, it is preferable to use lead that is not subjected to excessive washing or bleaching.

연와의 효소 분해물이란, 연와를 효소 반응을 적용하여 분해해서 얻어진 것을 의미하며, 연와 또는 그의 처리물을, 프로테아제나 프로테아제를 포함하는 복합 효소 등을 이용하여 분해시킴으로써 얻을 수 있다. 여기서 분해 처리에 사용하는 효소로는, 바람직하게는 프로테아제이고, 보다 바람직하게는 판크레아틴이다.The enzymatic digestion of the confectionary means that it is obtained by decomposing the confectionary by applying an enzymatic reaction, and can be obtained by decomposing the confectionery or its processed product using a protease, a complex enzyme containing a protease, or the like. As an enzyme used for a decomposition process here, Preferably it is a protease, More preferably, it is pancreatin.

연와의 효소 분해물은, 통상 우선 가열 살균 처리를 실시한 후, 수중에서 효소 처리에 가함으로써 행할 수 있다. 살균 처리의 조건은, 관용의 가열 살균 조건을 적절하게 참고하여 설정할 수 있으며, 효소 처리의 조건도 사용하는 효소의 종류나, 연와의 상태에 따라 적절하게 설정할 수 있다.The enzyme decomposed product of the edible can usually be subjected to heat sterilization treatment first and then subjected to enzyme treatment in water. The conditions of the sterilization treatment can be appropriately set with reference to the usual heat sterilization conditions, and the conditions of the enzyme treatment can also be appropriately set according to the type of enzyme to be used and the state of the smoke.

보다 구체적인 예를 들면, 연와의 효소 분해물은, 이하와 같이 하여 제조할 수 있다.More specifically, for example, the enzyme decomposed product of the lead can be produced as follows.

예를 들면, 분쇄한 연와에, 그 질량의 10 내지 50배의 물을 가하여 팽윤시킨 후, 60 내지 130 ℃에서 5 초 내지 30 분간 가열 살균 처리한다. 그 후, 적량의 효소를 그대로 첨가하여, 효소의 최적 pH, 최적 온도에서 0.5 내지 48 시간 동안 효소 반응을 행한다. 효소 반응 종료 후, 가열 처리 등에 의해 효소를 실활시키고, 반응액을 여과하여 불용물을 제거함으로써, 연와의 효소 분해물을 얻을 수 있다. 또한, 이 효소 분해물은, 필요에 따라 건조하여 분말화할 수도 있다. 또한, 상기한 각 공정에서는, 적절하게 pH 조정, 탈색, 탈취 등의 조작을 행할 수도 있다. For example, 10 to 50 times the mass of water is added to the pulverized lead, followed by swelling, followed by heat sterilization at 60 to 130 ° C. for 5 seconds to 30 minutes. Thereafter, an appropriate amount of enzyme is added as it is, and the enzyme reaction is carried out for 0.5 to 48 hours at the optimum pH and the optimum temperature of the enzyme. After the end of the enzyme reaction, the enzyme is deactivated by heat treatment or the like, and the reaction solution is filtered to remove the insolubles, whereby the enzymatic degradation product of the lead can be obtained. In addition, this enzyme decomposition product can be dried and powdered as needed. In addition, at each said process, operation, such as pH adjustment, decolorization, deodorization, can also be performed suitably.

별도의 예로서, 연와의 처리물을 효소 분해하는 경우에는, 입경 2 mm 이하, 바람직하게는 150 ㎛ 이하로 분쇄한 연와에, 그 질량의 10 내지 100배의 물을 가하여, 1 내지 60 ℃, 0.5 내지 48 시간 동안 정치 또는 교반하여 팽윤시킨 후, 60 내지 130 ℃, 5 초 내지 30 분간 가열 살균 처리하고, 필요에 따라 여과하여, 얻어진 용액을 상기와 마찬가지로 하여 효소 처리에 가함으로써, 연와의 효소 분해물을 얻을 수 있다.As another example, in the case of enzymatically decomposing the treated product of lead, 10 to 100 times the mass of water is added to the mill ground to a particle diameter of 2 mm or less, preferably 150 μm or less, and 1 to 60 ° C, After standing for 0.5 to 48 hours or swelling with stirring, heat sterilization treatment was performed at 60 to 130 ° C. for 5 seconds to 30 minutes, and filtration as necessary, and the obtained solution was added to the enzyme treatment in the same manner as described above to produce an enzyme with lead. Decomposition can be obtained.

효소 분해물의 제조법에 있어서, 효소 반응의 시간이 길수록, 단백질의 분해가 진행되어, 보다 저분자의 단백질을 포함하는 효소 분해물이 얻어지게 된다. 본 발명에서는 효소 반응 시간을 0.5 내지 48 시간, 바람직하게는 3 내지 36 시간, 보다 바람직하게는 약 24 시간 정도로 하여, 효소 반응을 보다 진행시킨 효소 분해물이 바람직하다.In the method for producing an enzymatic digestion product, the longer the reaction time, the more the protein is degraded, so that an enzymatic digestion product containing a lower molecular protein is obtained. In the present invention, the enzymatic digestion product in which the enzymatic reaction is further advanced is preferably set at an enzyme reaction time of 0.5 to 48 hours, preferably 3 to 36 hours, more preferably about 24 hours.

이와 같이 하여 얻어지는 연와의 효소 분해물의 분자량은 70 내지 200,000이 바람직하고, 70 내지 180,000이 보다 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 분자량은 70 내지 150,000이고, 더욱더 바람직하게는 70 내지 120,000이다.In this way, 70-200,000 are preferable and, as for the molecular weight of the enzyme degradation product of the lead, 70-180,000 are more preferable. More preferably, the molecular weight is 70 to 150,000, even more preferably 70 to 120,000.

또한 연와의 효소 분해물의 평균 분자량(중량 평균 분자량)은 300 내지 100,000이 바람직하고, 300 내지 70,000이 바람직하다. 보다 바람직하게는, 평균 분자량은 300 내지 50,000이고, 더욱 바람직하게는 300 내지 30,000이며, 더욱더 바람직하게는 300 내지 20,000이고, 특히 바람직하게는 300 내지 15,000이다.Moreover, 300-100,000 are preferable and, as for the average molecular weight (weight average molecular weight) of the enzyme decomposition | strain of lead, 300-70,000 are preferable. More preferably, the average molecular weight is 300 to 50,000, still more preferably 300 to 30,000, still more preferably 300 to 20,000, particularly preferably 300 to 15,000.

피부외용External skin 조성물 Composition

본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제는, 단독으로 그대로도 사용할 수 있지만, 화장료, 의약품, 의약 부외품 등의 다양한 피부외용 조성물에 첨가제로서 함유시킬 수 있어, 콜라겐 생산 촉진 효과를 갖는 조성물을 얻을 수 있다. 얻어진 조성물은 스킨케어, 바람직하게는 피부의 탄력과 윤기의 향상, 및 주름 방지 또는 개선에 유효하게 사용할 수 있다.The collagen production promoter according to the present invention can be used alone as it is, but can be contained as an additive in various external skin compositions such as cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, and the like, and a composition having a collagen production promoting effect can be obtained. The obtained composition can be effectively used for skin care, preferably for improving skin elasticity and shine, and for preventing or improving wrinkles.

본 발명에 의한 유효 성분인 연와의 효소 분해물은, 인간 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐의 생산 촉진 활성을 갖는다(후술하는 실시예의 시험 결과).The enzyme digested product of Yeonwa, which is an active ingredient according to the present invention, has a production promoting activity of type I collagen in human dermal dermal fibroblasts (test results of Examples described later).

따라서, 본 발명에서 콜라겐의 생산 촉진 활성이란, 인간 피부 진피의 섬유아세포의 I형 콜라겐의 생산능을 촉진 또는 개선하는 작용을 의미하며, 이에 따라, 인간 피부 진피에서 콜라겐량이 증대할 수 있음을 의미한다. 진피의 콜라겐량을 증가시킴으로써, 주름 개선이나 방지 효과가 얻어져, 피부의 탄력(탄력성)을 향상시키고, 또한 피부의 윤기를 향상시킬 수 있는 것은, 당업자에게 있어서 주지된 것이다(예를 들면, 상술한 문헌["기능성 화장품 소재의 개발을 위한 실험법"(이모까와 겐지 감수), 2007년 발행, CMC 출판, 제45 내지 47페이지(비특허문헌 1)]이나, 문헌[Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No.346 (Vol.37, No.4), pp.103-(비특허문헌 2)] 등에 이 점이 명확히 나타나 있음). 따라서, 본 발명에 의한 유효 성분이, 진피에서의 콜라겐 생산 촉진 활성을 갖는 것이 확인되어 있기 때문에, 본 발명에 의한 유효 성분이 스킨케어, 바람직하게는 피부의 탄력과 윤기의 향상, 및 주름 방지 또는 개선에 유효하다는 것은 분명하다.Therefore, in the present invention, the production promoting activity of collagen means an action of promoting or improving the production capacity of type I collagen of fibroblasts of human skin dermis, which means that the amount of collagen in human skin dermis can be increased. do. It is well known to those skilled in the art that by increasing the amount of collagen in the dermis, wrinkle improvement and prevention effects can be obtained, and the elasticity (elasticity) of the skin can be improved and the skin gloss can be improved (for example, the above-mentioned) A document ["Experimental methods for the development of functional cosmetic materials" (supervised by Genji Amokawa), published in 2007, published by CMC, pages 45-47 (Non-Patent Document 1)], or by Akiko Kojima-Yuasa, et. al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol. 37, No. 4), pp. 103- (Non-Patent Document 2)]. Therefore, since it has been confirmed that the active ingredient according to the present invention has collagen production promoting activity in the dermis, the active ingredient according to the present invention is skincare, preferably improves the elasticity and luster of the skin, and prevents wrinkles or It is clear that it is effective for improvement.

또한, 본 명세서에서 피부의 탄력이나 윤기, 주름 등의 피부 또는 피부 상태의 "예방 또는 개선"이란, 상기 상태의 조절, 진행의 지연, 완화, 발병 예방, 재발 예방, 억제 등을 포함하는 의미로 사용된다.In addition, in the present specification, the "prevention or improvement" of the skin or skin condition such as elasticity, shine, wrinkles, etc. of the skin is meant to include control of the condition, delay of progression, alleviation, prevention of onset, prevention of recurrence, inhibition, and the like. Used.

따라서 상기한 바와 같이, 본 발명의 별도의 양태에 따르면, 본 발명에 의한 콜라겐 생산 촉진제를 포함하여 이루어지는 피부외용 조성물이 제공된다. 바람직하게는, 피부외용 조성물은 의약품, 의약 부외품, 또는 화장료로서 제공되며, 보다 바람직하게는 화장료로서 제공된다.Therefore, as described above, according to another aspect of the present invention, there is provided an external skin composition comprising a collagen production promoter according to the present invention. Preferably, the external skin composition is provided as a medicine, quasi-drug, or cosmetic, and more preferably as a cosmetic.

본 발명에 의한 피부외용 조성물(특히 화장료)에 있어서, 유효 성분인 연와 효소 분해물의 함유량(건물 환산)은 특별히 제한은 없으며, 조성물의 형태에 따라 다르지만, 일반적으로는 고형분으로서 0.001 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.005 내지 5 중량%의 범위이고, 조성물의 형태에 따라 적절하게 변경할 수 있다.In the composition for external application for skin (particularly cosmetics) according to the present invention, the content (in terms of buildings) of lead and enzyme decomposition products which are active ingredients is not particularly limited, and varies depending on the form of the composition, but is generally 0.001 to 20% by weight, Preferably it is 0.005 to 5 weight% of range, and it can change suitably according to the form of a composition.

또는, 본 발명에 의한 피부외용 조성물에서의 연와 효소 분해물의 함유량(건물 환산)은, 1일당 0.01 mg 이상, 보다 바람직하게는 0.01 mg 내지 2 mg, 1 평방cm당 피부에 적용할 수 있도록 포함하는 것이 바람직하다.Alternatively, the content (in terms of buildings) of lead and enzyme decomposition products in the external skin composition according to the present invention is 0.01 mg or more per day, more preferably 0.01 mg to 2 mg, so as to be applicable to the skin per square cm. It is preferable.

본 발명에 의한 피부외용 조성물은 유효 성분을 포함하며, 콜라겐의 생산 촉진 효과를 손상시키지 않는 한, 본 발명에 의한 촉진제는, 다른 임의 성분을 더 포함하여 이루어질 수 있다. 이러한 임의 성분으로는, 예를 들면 피부 외용제나 화장료에 관용되고 있는 각종 성분, 예를 들면 보습제, 저급 알코올, 다가 알코올, 당류, 계면활성제, 완충제, 유화제, 안정화제, 증점제, 산화 방지제, 방부 방균제, 킬레이트제, pH 조정제, 향료, 색소, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 비타민류, 아미노산류, 항염증제, 물, 펩티드, 당알코올류, 효소류, 식물 엑기스류, 항산화 물질류, 탈크, 클레이, 꽃가루, 진주 등을 들 수 있다.The external composition for skin according to the present invention contains the active ingredient, and the accelerator according to the present invention may further comprise other optional ingredients, so long as the production promoting effect of collagen is not impaired. As such optional components, for example, various components commonly used in skin external preparations and cosmetics, for example, moisturizers, lower alcohols, polyhydric alcohols, sugars, surfactants, buffers, emulsifiers, stabilizers, thickeners, antioxidants, antiseptics Fungicides, chelating agents, pH adjusters, fragrances, pigments, ultraviolet absorbers, ultraviolet scatterers, vitamins, amino acids, anti-inflammatory agents, water, peptides, sugar alcohols, enzymes, plant extracts, antioxidants, talc, clay, Pollen, pearls, and the like.

여기서 보습제로는, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 글리세린, 프로필렌글리콜, 소르비톨, 히알루론산이나 콘드로이틴황산 등의 산성 무코다당류, 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등을 들 수 있다.Examples of the moisturizing agent include polyethylene glycol, polypropylene glycol, glycerin, propylene glycol, sorbitol, acidic mucopolysaccharides such as hyaluronic acid and chondroitin sulfate, amino acids, collagen, elastin, and the like.

저급 알코올로는, 예를 들면 에탄올, 프로판올, 이소프로판올 등을 들 수 있다.As lower alcohol, ethanol, propanol, isopropanol, etc. are mentioned, for example.

다가 알코올로는, 예를 들면 글리세린, 펜타에리트리톨, 디펜타에리트리톨, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등을 들 수 있다.As a polyhydric alcohol, glycerin, pentaerythritol, dipentaerythritol, ethylene glycol, propylene glycol, polypropylene glycol, 1, 3- butylene glycol, etc. are mentioned, for example.

당류로는, 예를 들면 글루코오스, 말토오스, 락토오스, D-글루쿠론산, 수크로오스, D-소르비트, 소르비탄, 셀룰로오스, 전분 등의 당류, 올리고당류, 다당류 및 이들의 유도체 등을 들 수 있다.Examples of the sugars include glucose, maltose, lactose, D-glucuronic acid, sucrose, D-sorbet, sorbitan, saccharides such as cellulose, starch, oligosaccharides, polysaccharides and derivatives thereof.

본 발명에 의한 피부외용 조성물은, 연와 효소 분해물을 포함하는 콜라겐 생산 촉진제 및 이들의 임의 성분을, 공지된 방법에 따라 적절하게 배합하여 조정함으로써, 로션, 유액, 크림, 보습액, 팩제, 화장수, 세안료, 보디로션, 보디크림 등의 다양한 화장료에서 관용의 제품 형태로 할 수 있다. 본 발명에 의한 피부외용 조성물은, 추가로 파운데이션류, 립스틱, 아이섀도우, 볼터치 등의 메이크업 화장품이나, 자외선 차단용 제품이나 방취 화장품 등의 약용 화장품, 샴푸나 헤어린스, 이발료 등의 두발용 화장품, 피부 세정제나 욕제의 목욕용 화장품 등으로서 이용할 수도 있다.The external composition for skin according to the present invention is formulated by appropriately mixing and adjusting a collagen production promoter including lead and an enzyme decomposition product according to a known method, such as a lotion, an emulsion, a cream, a moisturizing solution, a pack, a lotion, and a bath. It can be made into the usual product form in various cosmetics, such as a pigment, a body lotion, and a body cream. The external composition for skin according to the present invention is further used for makeup cosmetics such as foundations, lipsticks, eye shadows, ball touches, medicinal cosmetics such as UV-protecting products and deodorizing cosmetics, and for hair for shampoos, hair rinses, and barbers. It can also be used as cosmetics, skin cleaners, bath cosmetics for baths and the like.

본 발명의 별도의 양태에 따르면, 상기한 바와 같이, 인간을 포함한 포유동물의 피부에서의 콜라겐 생산 촉진제를 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다. 여기서, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진은, 바람직하게는 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키는 것이다.According to another aspect of the present invention, as described above, there is provided the use of an enzymatic degradation product of a kite to prepare a collagen production promoter in the skin of a mammal, including a human. Here, the promotion of collagen production in the skin is preferably to promote the production of type I collagen in dermal dermal fibroblasts.

본 발명의 별도의 하나의 양태에 따르면, 상기한 바와 같이, 스킨케어용 피부외용 조성물을 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다. 여기서 피부외용 조성물은, 바람직하게는 피부의 탄력과 윤기의 향상, 및 주름 예방 또는 개선에 이용되는 것이다. 또한, 피부외용 조성물은, 바람직하게는 화장료이다. According to another aspect of the present invention, as described above, there is provided the use of an enzymatic degradation product of a kite for producing a skin care composition for skin care. The composition for external skin is preferably used for the improvement of elasticity and luster of the skin, and the prevention or improvement of wrinkles. In addition, the composition for external skin is preferably a cosmetic.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 상기한 바와 같이, 본 발명의 유효 성분인 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진 방법이 제공된다. 또한 여기서 "유효량"이란, 적용에 의해서, 체내에 있어서의 원하는 영역에서, 콜라겐의 생산 촉진 활성을 발휘할 수 있을 수 있는 데에 충분한 양이다. 또한, 여기서 말하는 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진은, 바람직하게는 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키는 것이다.According to still another aspect of the present invention, as described above, the method for promoting the production of collagen in the skin, comprising applying an effective amount of an enzyme digest which is an active ingredient of the present invention to the skin of a mammal including a human, Is provided. In addition, an "effective amount" is an amount sufficient for being able to exhibit the production | stimulation activity of collagen in a desired area | region in a body by application here. In addition, the production | stimulation of collagen production in the skin said here is what promotes production of type I collagen in dermal dermal fibroblasts.

또한 본 발명의 또 다른 하나의 양태에 따르면, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 스킨케어 방법이 제공된다. 마찬가지로, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 피부의 탄력과 윤기를 향상시키고, 주름을 방지 또는 개선하는 방법도 제공된다. 또한 여기서 "유효량"이란, 원하는 효과가 얻어지는 데에 충분한 양이다.According to yet another aspect of the present invention, there is provided a skincare method comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to the skin of a mammal, including a human. Similarly, there is also provided a method of improving the elasticity and glossiness of the skin and preventing or improving wrinkles, comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to the skin of a mammal, including a human. In addition, an "effective amount" is an amount sufficient for obtaining a desired effect here.

또한 본 명세서에 있어서, "약" 및 "정도"를 이용한 값의 표현은, 그 값을 설정하는 것에 의한 목적을 달성함에 있어서, 당업자이면 허용할 수 있는 값의 변동을 포함하는 의미이다. 예를 들면, 소정의 값 또는 범위의 20 % 이내, 바람직하게는 10 % 이내, 보다 바람직하게는 5 % 이내의 변동을 허용할 수 있는 것을 의미한다. In addition, in this specification, expression of the value using "about" and "degree" is the meaning including the change of the value which a person skilled in the art can accept in achieving the objective by setting the value. For example, it means that the variation within 20%, preferably within 10%, and more preferably within 5% of a predetermined value or range can be tolerated.

[실시예] [Example]

이하의 예에 기초하여 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명이 이들 예로 한정되는 것은 아니다.Although this invention is demonstrated concretely based on the following examples, this invention is not limited to these examples.

(1) (One) 연와Yeonwa 샘플의 제조 Manufacture of samples

(1-1) (1-1) 연와Yeonwa 효소  enzyme 분해물resolvent 1 One

시판되고 있는 무표백의 연와를 분쇄기로 분쇄하여, 100 메쉬 패스(입경 150 ㎛ 이하)의 연와 분말을 얻고, 이 연와 분말에 약 50배량(질량)의 물을 가하여 5 ℃에서 20 시간 동안 팽윤시킨 후, 121 ℃, 15 분간 가열 살균 처리하였다.Commercially available unbleached lead was pulverized with a pulverizer to obtain 100 mesh passes (150 µm or less in diameter) of lead and powder, and about 50 times (mass) of water was added to the lead and powder for swelling at 5 ° C. for 20 hours. After that, heat sterilization was performed at 121 ° C. for 15 minutes.

얻어진 처리액을 냉각한 후, pH를 조정하고, 연와 분말에 대하여 2 질량%의 양의 프로테아제 함유 효소(상품명 "판크레아틴 F", 아마노 세이야꾸 가부시끼가이샤 제조)를 첨가하여, 45 ℃에서 3 시간 동안 반응시켰다.After cooling the obtained process liquid, pH was adjusted, and the protease containing enzyme (brand name "pancreatin F", Amano Seiyaku Co., Ltd. make) of 2 mass% with respect to lead and powder was added, and it was made into 3 at 45 degreeC. The reaction was carried out for a time.

이 효소 반응액을 pH 7.0으로 조정한 후, 90 ℃에서 5 분간 가열하여 효소를 실활시켜 여과하고, 여과액을 회수하였다. 이 여과액을 농축한 후, 동결 건조하여 "연와 효소 분해물 1"을 얻었다.After adjusting this enzyme reaction liquid to pH 7.0, it heated at 90 degreeC for 5 minutes, inactivated the enzyme, and filtered, and collect | recovered the filtrate. The filtrate was concentrated and freeze-dried to obtain "lead and enzyme digest 1".

(1-2) (1-2) 연와Yeonwa 효소  enzyme 분해물resolvent 2 2

효소 반응의 시간을 24 시간으로 한 것 이외에는, 상기 (1-1)항의 효소 분해물 1과 마찬가지로 행하여 "연와 효소 분해물 2"를 얻었다. Except having made the time of the enzyme reaction into 24 hours, it carried out similarly to the enzyme digest 1 of the said (1-1) section, and obtained the "lead and enzyme digest 2".

(1-3) (1-3) 연와Yeonwa 열수Heat number 추출물( extract( 비교예Comparative example ))

시판되고 있는 무표백의 연와(건조물) 40 g을 분쇄기로 분쇄하고, 이 분쇄물을 1000 ml의 증류수에 가하여, 가열 환류하에서 2 시간 동안 추출 처리를 행하였다. 가열 환류 후, 정치한 후, 상청을 분취하여 여과하고, 여과액을 회수하였다. 잔사에 대해서는 추가로, 상기와 마찬가지로 1000 ml의 증류수에 가하여, 가열 환류하에서 재추출 처리를 행한 후, 고형물 잔사를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 회수하였다. 얻어진 여과액(추출액)을 합하여 감압하에서 농축하고, 얻어진 농축물을 동결 건조하여, 황백색의 "연와 열수 추출물"(비교예)을 얻었다.40 g of commercially available unbleached lead (dried) was ground by a mill, and the milled product was added to 1000 ml of distilled water, followed by extraction for 2 hours under reflux. After heating to reflux, after standing still, the supernatant was aliquoted and filtered to recover the filtrate. The residue was further added to 1000 ml of distilled water in the same manner as above, and after re-extracting under heating and reflux, the solid residue was removed by filtration to recover the filtrate. The obtained filtrate (extract) was combined and concentrated under reduced pressure, and the obtained concentrate was freeze-dried to obtain an off-white "Yellow and hot water extract" (Comparative Example).

(2) (2) 연와Yeonwa 샘플의 분석 Analysis of samples

얻어진 각 연와 샘플(연와 효소 분해물 1, 연와 효소 분해물 2 및 연와 열수 추출물) 중 시알산량과 단백질량을 하기와 같이 하여 측정하였다.The amount of sialic acid and the amount of protein in each of the obtained lead samples (lead and enzyme digest 1, lead and enzyme digest 2 and lead and hydrothermal extract) were measured as follows.

시알산의 양은, 각 시료를 산 가수분해 후에 고속 액체 크로마토그래피로 유리 N-아세틸뉴라민산으로서 측정하였다.The amount of sialic acid was measured as free N-acetylneuraminic acid by high performance liquid chromatography after each hydrolysis of each sample.

단백질의 양은, 브래드 포드(Brad ford)법에 기초하는 바이오 래드(Bio Rad)사의 프로틴 어세이 키트를 사용하여 측정하였다.The amount of protein was measured using a protein assay kit from Bio Rad, based on the Brad ford method.

결과는, 도 1 및 도 2에 도시하는 바와 같았다.The result was as showing to FIG. 1 and FIG.

다음으로, 연와 효소 분해물 1 및 연와 효소 분해물 2에 포함되는 단백질의 분자량 및 그의 분포를 측정하기 위해, 하기와 같은 조건으로 GPC에 의한 분석을 하였다.Next, in order to measure the molecular weight and distribution of the protein contained in the lead and enzyme digest 1 and the lead and enzyme digest 2, analysis by GPC was carried out under the following conditions.

[HPLC의 측정 조건][Measurement condition of HPLC]

?칼럼: 쇼덱스 아사히팩(Shodex Asahipak) GS320HQ(φ7.6×300 mm)Column: Shodex Asahipak GS320HQ (φ7.6 × 300 mm)

?칼럼 온도: 35 ℃Column temperature: 35 ℃

?이동상: 50 mM CH3COONH3 pH 6.7Mobile phase: 50 mM CH 3 COONH 3 pH 6.7

?유속: 0.4 ml/분Flow rate: 0.4 ml / min

?시료 주입량: 10 μlSample injection volume: 10 μl

?검출기: 자외 분광 검출기(UV 220 nm에서 측정)Detector: ultraviolet spectrometer (measured at UV 220 nm)

[사용한 분자량 마커][Molecular Weight Markers Used]

?BSA MW 66,000? BSA MW 66,000

?Gly-gly MW 132.1? Gly-gly MW 132.1

?Gly-gly-gly MW 189.17? Gly-gly-gly MW 189.17

?L-아스파라긴산 MW 133.1L-aspartic acid MW 133.1

?DL-아스파라긴산 MW 150.1DL-aspartic acid MW 150.1

?N-아세틸뉴라민산 MW 309.3N-acetylneuraminic acid MW 309.3

측정 결과는, 도 3 및 도 4에 도시하는 바와 같았다.The measurement result was as showing to FIG. 3 and FIG.

또한, 연와 효소 분해물에 포함되는 단백질의 분자량에 대해서, 웨스턴 블로팅법을 사용하여 평가하였다. 구체적으로는, 우선 상기한 측정법에 따라 연와 효소 분해물 중 단백질의 양을 확인하였다. 연와 효소 분해물 유래의 단백질(100 μg)을, SDS-PAGE를 이용하여 10 내지 15 %의 폴리아크릴아미드에 의해 분리하였다. 겔에 전개한 단백질을 면역 분석(Immuno-blot) PVDF막(폴리비닐리덴 디플루오라이드(Polyvinylidene difluoride), 바이오-래드 랩(Bio-Lad Lab)사로부터 입수)에 전사하였다. PVDF막을 3 % 탈지유와 0.1 % 트윈(Tween)-20을 포함하는 PBS 중에서 1 시간 동안 블록킹하고, 시각적으로 판정하였다.In addition, the molecular weight of the protein contained in the lead and the enzymatic digest was evaluated using Western blotting. Specifically, first, the amount of protein in the lead and the enzyme digested product was confirmed according to the above-described measuring method. Proteins (100 μg) derived from lead and enzyme digests were separated by 10-15% polyacrylamide using SDS-PAGE. Proteins developed on the gel were transferred to an immunoassay (Immuno-blot) PVDF membrane (Polyvinylidene difluoride, available from Bio-Lad Lab). The PVDF membrane was blocked for 1 hour in PBS containing 3% skim milk and 0.1% Tween-20 and visually determined.

또한, 단백질의 분자량의 평가에 있어서는, 공지 문헌[Guo, C. T., Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp.140-146(2006)]에 개시되어 있는 데이터도 참고로 하였다.In addition, in evaluation of the molecular weight of a protein, Guo, C. T., Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp. 140-146 (2006).

이들 결과로부터, 연와 효소 분해물 중에 포함되는 단백질 분자량은, 약 70 내지 120,000 정도(또한 평가 조건에 의해서는, 상한값은 200,000 정도가 되는 경우가 있음)의 범위에서 존재하는 것을 알 수 있었다.From these results, it turned out that the protein molecular weight contained in lead and an enzyme degradation product exists in the range of about 70-120,000 (In addition, an upper limit may be about 200,000 depending on evaluation conditions).

또한, 얻어진 결과로부터, 연와 효소 분해물 1에 있어서의 단백질의 평균 분자량은, 약 55,000인 것을 알 수 있었다. 또한, 연와 효소 분해물 2에 있어서의 단백질의 평균 분자량은, 약 33,000인 것을 알 수 있었다.From the obtained results, it was found that the average molecular weight of the protein in lead and enzyme digest 1 was about 55,000. In addition, it turned out that the average molecular weight of the protein in lead and the enzyme degradation product 2 is about 33,000.

(3) 콜라겐의 생산 (3) production of collagen 촉진능의Facilitating 측정 Measure

정상 인간 피부 진피 섬유아세포(KF-4109, 클라보사로부터 입수)를, 0.5 % 송아지 혈청(FBS) 함유 DMEM 배지(시그마(SIGMA)로부터 입수)를 이용하여 96구멍 플레이트에 2×104 셀의 세포 밀도로 파종하였다. 파종 24 시간 후, 소정 농도의 각 연와 샘플을 함유한 0.5 % FBS 함유 DMEM 배지와 교환하고, 추가로 24 시간 동안 배양하였다.Normal human dermal dermal fibroblasts (KF-4109, available from Clavosa), 2 × 10 4 cells in a 96-hole plate using DMEM medium containing 0.5% calf serum (FBS) (obtained from SIGMA) Sowing was carried out with density. After 24 hours of sowing, the cells were exchanged with DMEM medium containing 0.5% FBS containing each kite and sample at a predetermined concentration and incubated for an additional 24 hours.

또한 포지티브 컨트롤(P.C.)로서, 아스코르브산인산마그네슘(VC-PMg)을 사용하였다.As positive control (P.C.), magnesium ascorbic acid phosphate (VC-PMg) was used.

배양 후 배지 상청을 회수하고, 상청 중 I형 콜라겐량을 ELISA법에 의해 측정하였다. 또한, ELISA법으로는, 일차 항체에 항-인간 콜라겐 I형(Anti-Human Collagen Type I) 항체(Rabit)를 이용하고, 이차 항체에 히스토파인 PO(Rabit)를 이용하고, 추가로 발색제에는 2,2'-아지노비스(3-에틸벤조티아졸린-6-술폰산)(ABTS)을 이용하고, 마이크로플레이트리더로 405 nm의 흡광도를 측정하였다.The culture medium supernatant was recovered after the culture, and the amount of type I collagen in the supernatant was measured by ELISA. In the ELISA method, an anti-human collagen type I antibody (Rabit) is used as a primary antibody, and histopine PO (Rabit) is used as a secondary antibody, and a coloring agent is further used. Absorbance of 405 nm was measured with a microplate reader using 2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS).

배지 중 I형 콜라겐량은, 전체 세포의 단백질량에서 배지 중 I형 콜라겐량을 나눔으로써 단위 단백질량당 I형 콜라겐 생산량으로서 산출하였다.The amount of type I collagen in the medium was calculated as the amount of type I collagen produced per unit protein by dividing the amount of type I collagen in the medium by the amount of protein in the whole cells.

결과는 도 5에 도시한 바와 같았다.The result was as shown in FIG.

결과로부터, 연와의 효소 분해물이 인간 피부 진피 섬유아세포의 I형 콜라겐 생산을 유의하게 증가시키는 것이 인정되었다.From the results, it was recognized that enzymatic digestion of yeonwa significantly increased type I collagen production in human dermal dermal fibroblasts.

Claims (22)

연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 하는 콜라겐 생산 촉진제. Collagen production promoter which uses enzyme degradation product of lead as active ingredient. 제1항에 있어서, 효소 분해물이 프로테아제에 의한 분해물인 콜라겐 생산 촉진제. The collagen production promoter according to claim 1, wherein the enzymatic digest is a digest by protease. 제1항 또는 제2항에 있어서, 효소 분해물의 분자량이 70 내지 200,000인 콜라겐 생산 촉진제. The collagen production promoter according to claim 1 or 2, wherein the molecular weight of the enzyme digest is 70 to 200,000. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물의 평균 분자량이 300 내지 15,000인 콜라겐 생산 촉진제. The collagen production promoter according to any one of claims 1 to 3, wherein the average molecular weight of the enzyme digest is 300 to 15,000. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키기 위한 콜라겐 생산 촉진제. The collagen production promoter according to any one of claims 1 to 4, for promoting type I collagen production in dermal dermal fibroblasts. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 콜라겐 생산 촉진제를 포함하여 이루어지는 피부외용 조성물. The external composition for skin containing the collagen production promoter in any one of Claims 1-5. 제6항에 있어서, 스킨케어에 이용되는 피부외용 조성물. The skin external composition according to claim 6, which is used for skin care. 제6항 또는 제7항에 있어서, 피부의 탄력과 윤기의 향상, 및 주름 예방 또는 개선에 이용되는 피부외용 조성물. The composition for external application of skin according to claim 6 or 7, which is used to improve skin elasticity and gloss, and to prevent or improve wrinkles. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화장료인 피부외용 조성물. The skin external composition according to any one of claims 6 to 8, which is a cosmetic. 인간을 포함한 포유동물의 피부에서의 콜라겐 생산 촉진제를 제조하기 위한 연와의 효소 분해물의 사용. Use of Enzyme Degradants of Edible To Prepare Collagen Production Promoters in the Skin of Mammals, Including Humans. 제10항에 있어서, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진이 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키는 연와의 효소 분해물의 사용. Use according to claim 10, wherein the enzymatic digestion of edibles in which production of collagen in the skin promotes production of type I collagen in dermal dermal fibroblasts. 스킨케어용 피부외용 조성물을 제조하기 위한 연와의 효소 분해물의 사용. Use of Enzyme Degradants of Smokeweed for Preparation of Skin Care Compositions for Skin Care. 제12항에 있어서, 피부외용 조성물이 피부의 탄력과 윤기의 향상, 및 주름 예방 또는 개선에 이용되는 것인 연와의 효소 분해물의 사용. 13. The use of an enzyme degradant with lead according to claim 12, wherein the external skin composition is used to improve skin elasticity and shine and to prevent or improve wrinkles. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물이 프로테아제에 의한 분해물인 연와의 효소 분해물의 사용. Use according to any one of claims 10 to 13, wherein the enzymatic digest is an enzymatic digest with a protease. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물의 분자량이 70 내지 200,000인 연와의 효소 분해물의 사용. The use of the enzyme degradant according to any one of claims 10 to 14, wherein the molecular weight of the enzyme degradant is 70 to 200,000. 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물의 평균 분자량이 300 내지 15,000인 연와의 효소 분해물의 사용. The use of lead enzyme degradants according to any one of claims 10 to 15, wherein the average molecular weight of the enzyme digest is 300 to 15,000. 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 피부외용 조성물이 화장료인 연와의 효소 분해물의 사용. The use of the enzyme decomposed product of the edible fruit according to any one of claims 10 to 16, wherein the external skin composition is a cosmetic. 연와의 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진 방법. A method for promoting the production of collagen in the skin, comprising applying an effective amount of the enzyme decomposed product to the skin of a mammal including a human. 제18항에 있어서, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진이 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산을 촉진시키는, 피부에서의 콜라겐의 생산 촉진 방법. The method of claim 18, wherein the promoting production of collagen in the skin promotes the production of type I collagen in dermal dermal fibroblasts. 연와의 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는 스킨케어 방법. A skin care method comprising applying an effective amount of an enzyme decomposed product to a skin of a mammal including a human. 연와의 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 피부의 탄력과 윤기를 향상시키고, 주름을 방지 또는 개선하는 방법. A method for improving elasticity and luster of skin, preventing or improving wrinkles, comprising applying an effective amount of an enzyme decomposed product of a kite to skin of a mammal including a human. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물이 프로테아제에 의한 분해물인 방법. 22. The method of any one of claims 18 to 21, wherein the enzymatic digest is a digest by protease.
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