JP5815202B2 - Collagen production promoter, skin external composition containing the same, and cosmetics - Google Patents

Collagen production promoter, skin external composition containing the same, and cosmetics Download PDF

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Description

本発明は、燕窩の酵素分解物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤に関する。詳しくは本発明は、皮膚真皮繊維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生を促進する、コラーゲン産生促進剤に関する。さらに本発明は、その有効成分である燕窩の酵素分解物を含む、皮膚外用組成物および化粧料に関する。   The present invention relates to a collagen production promoter comprising an axillary enzyme degradation product as an active ingredient. Specifically, the present invention relates to a collagen production promoter that promotes type I collagen production in dermal fibroblasts. Furthermore, the present invention relates to a composition for external use on skin and a cosmetic comprising an axillary enzyme degradation product as its active ingredient.

肌荒れやしわ、肌のたるみ、張りの低下等の肌のトラブルは、特に女性にとって重大な関心事である。これらの肌のトラブルは、通常、環境的な要因や、老化といった加齢に伴う要因、さらにはストレスなどの心理的要因などにより引き起こされると考えられている。特に、近年の紫外線の増大や、エアコンの多用などに伴う生活環境の乾燥化などによる肌に悪影響を及ぼす環境的要因は増大しつつあると言える。   Skin troubles such as rough skin and wrinkles, sagging skin, and reduced tension are particularly important concerns for women. These skin problems are usually considered to be caused by environmental factors, factors associated with aging such as aging, and psychological factors such as stress. In particular, it can be said that environmental factors adversely affecting the skin due to the recent increase in ultraviolet rays and the drying of the living environment accompanying the frequent use of air conditioners are increasing.

皮膚組織は、表皮、真皮、皮下組織からなる。真皮には、コラーゲンやヒアルロン酸が多く含まれ、皮膚の保水性や弾力性に大きく関与している。コラーゲンやヒアルロン酸は、真皮中に存在する真皮繊維芽細胞が産生することが知られている。   Skin tissue consists of epidermis, dermis, and subcutaneous tissue. The dermis contains a large amount of collagen and hyaluronic acid, and is greatly involved in the water retention and elasticity of the skin. Collagen and hyaluronic acid are known to be produced by dermal fibroblasts present in the dermis.

コラーゲンはヒトの生体内に存在するタンパク質のうち約３０％を占め、その７０％が真皮に存在すると言われている。真皮に存在するコラーゲンとしては、Ｉ型コラーゲンやIII型コラーゲンが含まれるが、主要なものはＩ型コラーゲンである。   Collagen accounts for about 30% of the protein present in the human body, 70% of which is said to exist in the dermis. Collagen present in the dermis includes type I collagen and type III collagen, but the main one is type I collagen.

従来、肌の張りやツヤの向上、シワの予防改善を目的として、コラーゲンを配合した化粧料を外用で使用し、皮膚にコラーゲンを直接補う方法が多用されてきた。しかしながら、外用でコラーゲンを補った場合、皮膚真皮におけるコラーゲン量を増加させることは困難であったため、肌の張りやツヤの向上、シワの予防改善のためには、必ずしも十分とは言えなかった。   Conventionally, for the purpose of improving skin tension and gloss and preventing wrinkles, a method of using cosmetics containing collagen externally and directly supplementing the skin with collagen has been frequently used. However, when supplementing collagen for external use, it was difficult to increase the amount of collagen in the dermis of the skin, so it was not necessarily sufficient for improving skin tension and gloss and preventing wrinkles.

皮膚が紫外線を含む光に曝されると、真皮の細胞外マトリックスの大半を占めるコラーゲンが顕著に減少し、その線維束の乱れが生じることが知られている。このため、真皮のコラーゲン量を増加させることは、シワの改善や防止などに有用であるとされている（非特許文献１（「機能性化粧品素材の開発のための実験法」（芋皮玄爾 監修）、２００７年発行、シーエムシー出版、第４５〜４７頁））。またここには、中波紫外線（ＵＶＢ）の照射によって、真皮繊維芽細胞のコラーゲン合成が大きく低下することが示されている。ここには、Ｉ型コラーゲン合成促進剤の例として、ビタミンＣ誘導体、乳清成分などが例示されている。   It is known that when the skin is exposed to light containing ultraviolet rays, the collagen that occupies most of the extracellular matrix of the dermis is significantly reduced and the fiber bundles are disturbed. For this reason, increasing the amount of collagen in the dermis is said to be useful for improving and preventing wrinkles (Non-patent Document 1 (“Experimental Method for Development of Functional Cosmetic Materials” (Skin Gen) Supervised by Tsuji), published in 2007, CMC Publishing, pages 45-47)). It is also shown here that collagen synthesis in dermal fibroblasts is significantly reduced by irradiation with medium wave ultraviolet light (UVB). Here, vitamin C derivatives, whey components and the like are exemplified as examples of the type I collagen synthesis promoter.

一方、文献（非特許文献２（Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol.37, No. 4), pp.103-））には、コラーゲン産生能の低下を抑制することは、ＱＯＬの向上改善に有用であり、皮膚におけるコラーゲン量の低下は、シワやたるみなどの原因となることが示されている。   On the other hand, in the literature (Non-patent document 2 (Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol.37, No. 4), pp.103-)) It has been shown that suppressing the decrease in the amount is useful for improving and improving QOL, and the decrease in the amount of collagen in the skin causes wrinkles and sagging.

Ｉ型コラーゲンの産生促進剤としては、これまでに、特定の植物由来成分に着目してそれを利用したものが多く報告されている（例えば、特開２００８−１０５９８４号公報（特許文献１）や、ＷＯ２００４／０８５４２９（特許文献２））。   As type I collagen production promoters, many have been reported so far, focusing on specific plant-derived components (for example, JP 2008-105984 A (Patent Document 1)). WO2004 / 085429 (Patent Document 2)).

燕窩は、アナツバメが自らの唾液を糸状にして作る巣であり、その成分としては、糖タンパク質を多く含み、脂質は殆ど含まれないことが知られている。燕窩は、従来、中華料理における食用素材や、漢方薬の原料などに使用されている。近年では、燕窩を原料に用いた健康食品なども開発されているが、外用剤や化粧料のような外用用途への適用例はまだ僅かしか知られていない。   The axilla is a nest that swallows make their saliva thread-like, and it is known that the axilla contains many glycoproteins and almost no lipid. Axilla is conventionally used as an edible material in Chinese cuisine, a raw material for Chinese medicine, and the like. In recent years, health foods using axilla as a raw material have been developed. However, only a few examples of application to external uses such as external preparations and cosmetics are known.

特開２００３−９５９６１号公報（特許文献３）には、燕窩の酵素分解物を用いた経口用の美肌促進剤が開示されている。しかしながら、ここには、経口用途のみが示されているに過ぎず、外用用途への利用可能性については何ら記載も示唆もされていない。またここでの効果は、肌のしっとり感の向上や、キメの細かな肌を得ることであって、肌の張りやツヤの向上や、シワの改善を伴う、Ｉ型コラーゲンの産生促進能については、何ら記載されていない。   Japanese Patent Laid-Open No. 2003-95961 (Patent Document 3) discloses an oral skin-beautifying agent using an axillary enzyme degradation product. However, only oral use is shown here, and there is no description or suggestion about the possibility of use for external use. The effect here is to improve the moist feeling of the skin and to obtain a finely textured skin. The ability to promote the production of type I collagen with improved skin tension and gloss and wrinkles Is not described at all.

ＷＯ９９／０２２７０９（特許文献４）には、燕窩の含水溶剤抽出物、特に熱水抽出物を含む化粧料が開示されている。この化粧料は、スキンケア用途に使用でき、外用用途で使用するものである。またここには、燕窩の含水抽出物が、皮膚細胞におけるコラーゲン合成促進効果を示すことも開示されている。しかしながら、ここで使用される抽出物は、燕窩を熱水抽出して、固形分を除去したものであり、燕窩全体を酵素処理してそのまま使用する燕窩酵素分解物とは、明らかに異なるものである。また効果に関しても、本発明者等の考える限り、改善の余地があると考えられた。   WO99 / 022709 (Patent Document 4) discloses a cosmetic containing an axillary hydrous solvent extract, particularly a hot water extract. This cosmetic can be used for skin care and is used for external use. It is also disclosed here that the axillary water-containing extract exhibits an effect of promoting collagen synthesis in skin cells. However, the extract used here is obtained by hot water extraction of the axilla to remove the solid content, which is clearly different from the axillary enzyme degradation product that is used as it is after the entire axilla is enzymatically treated. is there. As for the effect, as far as the present inventors considered, there was a room for improvement.

特開２００８−１０５９８４号公報JP 2008-105984 A 国際公開ＷＯ２００４／０８５４２９International Publication WO2004 / 085429 特開２００３−９５９６１号公報JP 2003-95961 A 国際公開ＷＯ９９／０２２７０９International Publication WO99 / 022709

「機能性化粧品素材の開発のための実験法」（芋皮玄爾 監修）、２００７年発行、シーエムシー出版、第４５〜４７頁“Experimental method for the development of functional cosmetic materials” (supervised by Genshi Hoshi), 2007, CMC Publishing, pages 45-47 Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol.37, No. 4), pp.103-Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol.37, No. 4), pp.103-

本発明者等は今般、燕窩の酵素分解物が、皮膚真皮繊維芽細胞におけるＩ型コラーゲンの優れた産生促進効果を有することを見出した。この効果は、燕窩の熱水抽出物に見られた効果よりも顕著なものであり、また、酵素分解をより進めた酵素分解物において、その効果はより顕著であった。本発明はこれら知見に基づくものである。   The present inventors have now found that an enzyme degradation product of axilla has an excellent production promoting effect of type I collagen in dermal fibroblasts. This effect was more prominent than the effect seen in the axillary hot water extract, and the effect was more prominent in the enzymatic degradation product that had been further enzymatically degraded. The present invention is based on these findings.

よって本発明は、効率的に生産でき、かつ安全性の高い、優れたＩ型コラーゲンの産生促進剤、およびそれを含む外用剤および化粧料の提供をその目的とする。   Accordingly, an object of the present invention is to provide an excellent type I collagen production promoter that can be produced efficiently and has high safety, and an external preparation and a cosmetic containing the same.

本発明によるコラーゲン産生促進剤は、燕窩の酵素分解物を有効成分とする。   The collagen production promoter according to the present invention comprises an axillary enzyme degradation product as an active ingredient.

本発明の一つの好ましい態様によれば、前記酵素分解物は、プロテアーゼによる分解物である。   According to one preferable aspect of the present invention, the enzymatic degradation product is a degradation product by protease.

本発明の一つのより好ましい態様によれば、前記酵素分解物の分子量は、７０〜２００，０００である。   According to one more preferable aspect of this invention, the molecular weight of the said enzyme degradation product is 70-200,000.

本発明の一つのさらに好ましい態様によれば、前記酵素分解物の平均分子量は、３００〜１５，０００である。   According to one more preferable aspect of the present invention, the enzyme degradation product has an average molecular weight of 300 to 15,000.

本発明の好ましい態様によれば、本発明によるコラーゲン産生促進剤は、皮膚真皮繊維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生を促進するためのものである。   According to a preferred embodiment of the present invention, the collagen production promoter according to the present invention is for promoting type I collagen production in skin dermal fibroblasts.

本発明の別の態様によれば、本発明によるコラーゲン産生促進剤を含んでなる、皮膚外用組成物が提供される。好ましくはこの組成物は、スキンケアに用いられ、より好ましくは、肌の張りとツヤの向上、およびシワの防止もしくは改善に用いられる。   According to another aspect of the present invention, there is provided an external composition for skin comprising the collagen production promoter according to the present invention. This composition is preferably used for skin care, more preferably for improving skin tension and gloss, and preventing or improving wrinkles.

本発明の別のより好ましい態様によれば、本発明による皮膚外用組成物は、化粧料である。   According to another more preferable aspect of the present invention, the external composition for skin according to the present invention is a cosmetic.

本発明によれば、燕窩の酵素分解物を有効成分として使用することで、ヒト皮膚真皮線維芽細胞のコラーゲンの産生を、従来に比べて顕著に促進させることができる。またこの真皮線維芽細胞のコラーゲンの産生促進能に基づいて、酵素分解物を皮膚外用用途または化粧料用途に使用することで、肌の張り（弾力性）を向上させ、肌のツヤを向上させ、さらには、シワを予防または低減させることができる。さらに日焼け後の肌においてコラーゲン合成が低下したような状態の肌においてコラーゲン産生を促進して、肌の張りやツヤの向上や、シワの改善を行うことができる。このようにして本発明によれば、消費者のＱＯＬの向上を図ることができる。また、使用される酵素分解物は、食用素材としても周知な燕窩を使用するため、安全性が高く、消費者にも受け入れられやすいものである。さらに酵素分解物は、燕窩をそのまま酵素処理して得ることができるため、効率的に製造でき、また製造コストも低く抑えることができる。   According to the present invention, by using an axillary enzyme degradation product as an active ingredient, the production of collagen in human dermal fibroblasts can be significantly promoted as compared with the prior art. In addition, based on the ability of dermal fibroblasts to promote collagen production, the enzyme degradation product is used for external skin use or cosmetic use, thereby improving skin tension (elasticity) and improving skin gloss. Furthermore, wrinkles can be prevented or reduced. Furthermore, collagen production can be promoted in the skin in a state where collagen synthesis is lowered in the skin after sunburn, thereby improving skin tension and gloss and improving wrinkles. Thus, according to the present invention, it is possible to improve the consumer's QOL. Moreover, since the enzyme degradation product used uses an axilla well-known as an edible material, it is highly safe and easily accepted by consumers. Furthermore, since the enzyme degradation product can be obtained by subjecting the axilla directly to the enzyme treatment, it can be efficiently produced, and the production cost can be kept low.

燕窩サンプル中のシアル酸量の測定結果を示すグラフである。It is a graph which shows the measurement result of the amount of sialic acid in an axillary sample. 燕窩サンプル中のタンパク質量の測定結果を示すグラフである。It is a graph which shows the measurement result of the protein amount in an axillary sample. ＧＰＣ−ＨＰＬＣによる燕窩酵素分解物１の測定結果を示すグラフである。It is a graph which shows the measurement result of the axillary enzyme degradation product 1 by GPC-HPLC. ＧＰＣ−ＨＰＬＣによる燕窩酵素分解物２の測定結果を示すグラフである。It is a graph which shows the measurement result of the axillary enzyme degradation product 2 by GPC-HPLC. コラーゲンの産生促進能の測定結果を示すグラフである。It is a graph which shows the measurement result of the production promotion ability of collagen.

発明の具体的説明Detailed description of the invention

有効成分
本発明によるコラーゲン産生促進剤は、前記したように、燕窩の酵素分解物を有効成分とする。 Active Ingredient As described above, the collagen production promoter according to the present invention contains an axillary enzyme degradation product as an active ingredient.

酵素分解物の原料である燕窩は、アナツバメが自らの唾液を糸状にして作る巣であり、その成分としては、糖タンパク質を多く含み、脂質はほとんど含まれていない。ここでアナツバメとは、アマツバメ科（Apodidae）のアナツバメ属（Collocalia）に属するツバメ類のことであり、例えば、Apodidae Collocalia francica、Apodidae Collocalia salangana、Apodidae Collocalia fuciphaga、Apodidae Collocalia inexpectata、Apodidae Collocalia vestita、Apodidae Collocalia esculenta、Apodidae Collocalia maximusなどが挙げられる。 The axilla, which is the raw material of the enzyme degradation product, is a nest that swallows make by making their saliva into a thread, and it contains a lot of glycoprotein and almost no lipid. Here, the swiftlet is that swallows acids belonging to swiftlet genus (Collocalia) of swifts family (Apodidae), for example, Apodidae Collocalia francica, Apodidae Collocalia salangana , Apodidae Collocalia fuciphaga, Apodidae Collocalia inexpectata, Apodidae Collocalia vestita, Apodidae Collocalia Examples include esculenta and Apodidae Collocalia maximus .

本発明において、燕窩は、市販品を使用できる。一般に市販されている燕窩には、毛や糞等の汚れを取り除いて洗浄しただけのものから、燕窩のクズを集めて漂白と洗浄を繰り返して成形したものまで、様々な種類があるが、本発明で用いる燕窩は、前処理において過度の洗浄や漂白等が行われていない燕窩を用いることが好ましい。   In the present invention, a commercially available product can be used for the axilla. There are various types of commercially available axillas, ranging from those that have only been cleaned after removing dirt such as hair and feces, to those that have been collected by repeating bleaching and cleaning after collecting axilla debris. The axilla used in the invention is preferably an axilla that has not been excessively washed or bleached in the pretreatment.

燕窩の酵素分解物とは、燕窩を酵素反応を適用して分解し、得られたものを意味し、燕窩またはその処理物を、プロテアーゼやプロテアーゼを含む複合酵素等を用いて分解することにより得ることができる。ここで分解処理に使用する酵素としては、好ましくはプロテアーゼであり、より好ましくはパンクレアチンである。   An axillary enzyme degradation product means a product obtained by degrading an axilla by applying an enzymatic reaction, and obtained by degrading an axilla or a processed product thereof using a protease, a complex enzyme containing a protease, or the like. be able to. Here, the enzyme used for the decomposition treatment is preferably a protease, more preferably pancreatin.

燕窩の酵素分解物は、通常、まず加熱殺菌処理を施した後、水中にて酵素処理に付すことによって行うことができる。殺菌処理の条件は、慣用の加熱殺菌条件を適宜参考にして設定することができ、酵素処理の条件も、使用する酵素の種類や、燕窩の状態に応じて適宜設定することができる。
より具体的な例を挙げれば、燕窩の酵素分解物は、以下のようにして調製することができる。 Axillary enzyme degradation products can usually be performed by first heat-sterilizing and then subjecting them to enzymatic treatment in water. The conditions for the sterilization treatment can be set with reference to conventional heat sterilization conditions as appropriate, and the conditions for the enzyme treatment can also be set as appropriate according to the type of enzyme used and the state of the axilla.
To give a more specific example, an axillary enzymatic degradation product can be prepared as follows.

例えば、粉砕した燕窩に、その質量の１０〜５０倍の水を加えて膨潤させた後、６０〜１３０℃で、５秒〜３０分間加熱殺菌処理する。その後、適量の酵素をそのまま添加して、酵素の至適ｐＨ、至適温度で０．５〜４８時間酵素反応を行なう。酵素反応終了後、加熱処理等により酵素を失活させ、反応液を濾過して不溶物を除去することにより、燕窩の酵素分解物を得ることができる。また、この酵素分解物は、必要に応じて乾燥して粉末化してもよい。なお、上記の各工程においては、適宜ｐＨ調整、脱色、脱臭等の操作を行なってもよい。   For example, 10-50 times the mass of water is added to the pulverized axilla to swell it, followed by heat sterilization at 60-130 ° C. for 5 seconds to 30 minutes. Thereafter, an appropriate amount of enzyme is added as it is, and the enzyme reaction is carried out at the optimal pH and temperature of the enzyme for 0.5 to 48 hours. After completion of the enzyme reaction, the enzyme is inactivated by heat treatment or the like, and the reaction solution is filtered to remove insolubles, whereby an axillary enzyme degradation product can be obtained. Moreover, this enzyme degradation product may be dried and powdered as necessary. In each of the above steps, operations such as pH adjustment, decolorization, and deodorization may be appropriately performed.

別の例として、燕窩の処理物を酵素分解する場合には、粒径２ｍｍ以下、好ましくは１５０μｍ以下に粉砕した燕窩に、その質量の１０〜１００倍の水を加えて、１〜６０℃、０．５〜４８時間静置または撹拌して膨潤させた後、６０〜１３０℃、５秒〜３０分間加熱殺菌処理し、必要に応じて濾過して、得られた溶液を、上記と同様にして酵素処理に付すことにより、燕窩の酵素分解物を得ることができる。   As another example, when enzymatically decomposing axillary processed material, water of 10 to 100 times its mass is added to an axilla pulverized to a particle size of 2 mm or less, preferably 150 μm or less, to 1 to 60 ° C., After leaving still for 0.5 to 48 hours or stirring to swell, heat sterilize at 60 to 130 ° C. for 5 seconds to 30 minutes, and filter as necessary. By subjecting to enzymatic treatment, an axillary enzymatic degradation product can be obtained.

酵素分解物の調製法において、酵素反応の時間が長いほど、タンパク質の分解が進み、より低分子のタンパク質を含む、酵素分解物が得られることとなる。本発明においては、酵素反応時間を、０．５〜４８時間、好ましくは３〜３６時間、より好ましくは約２４時間程度として、酵素反応をより進行させた酵素分解物が好ましい。   In the method for preparing an enzymatic degradation product, as the enzyme reaction time is longer, the degradation of the protein proceeds, and an enzymatic degradation product containing a lower molecular weight protein is obtained. In the present invention, an enzyme degradation product in which the enzyme reaction is further progressed by setting the enzyme reaction time to 0.5 to 48 hours, preferably 3 to 36 hours, more preferably about 24 hours is preferable.

このようにして得られる燕窩の酵素分解物の分子量は７０〜２００，０００が好ましく、７０〜１８０，０００がより好ましい。さらに好ましくは、分子量は、７０〜１５０，０００であり、さらにより好ましくは、７０〜１２０，０００である。   The molecular weight of the axillary enzymatic degradation product thus obtained is preferably 70 to 200,000, more preferably 70 to 180,000. More preferably, the molecular weight is between 70 and 150,000, and even more preferably between 70 and 120,000.

また燕窩の酵素分解物の平均分子量（重量平均分子量）は、３００〜１００，０００が望ましく、３００〜７０，０００が好ましい。より好ましくは、平均分子量は、３００〜５０，０００であり、さらに好ましくは３００〜３０，０００であり、さらにより好ましくは３００〜２０，０００であり、特に好ましくは３００〜１５，０００である。   The average molecular weight (weight average molecular weight) of the enzyme degradation product of the axilla is preferably 300 to 100,000, and preferably 300 to 70,000. More preferably, the average molecular weight is 300 to 50,000, more preferably 300 to 30,000, even more preferably 300 to 20,000, and particularly preferably 300 to 15,000.

皮膚外用組成物
本発明によるコラーゲン産生促進剤は、単独でそのままでも使用することができるが、化粧料、医薬品、医薬部外品などの種々の皮膚外用組成物に添加剤として含有させることができ、コラーゲン産生促進効果を有する組成物を得ることができる。得られた組成物は、スキンケア、好ましくは、肌の張りとツヤの向上、およびシワの防止もしくは改善に有効に使用することができる。 External composition for skin The collagen production promoter according to the present invention can be used alone as it is, but it can be added as an additive to various external compositions for skin such as cosmetics, pharmaceuticals, and quasi drugs. A composition having an effect of promoting collagen production can be obtained. The obtained composition can be effectively used for skin care, preferably for improving skin tension and gloss and preventing or improving wrinkles.

本発明による有効成分である燕窩の酵素分解物は、ヒト皮膚真皮繊維芽細胞におけるＩ型コラーゲンの産生促進活性を有する（後述する実施例の試験結果）。   The axillary enzyme degradation product, which is an active ingredient according to the present invention, has a type I collagen production promoting activity in human skin dermal fibroblasts (test results of Examples described later).

したがって、本発明において、コラーゲンの産生促進活性とは、ヒト皮膚真皮の繊維芽細胞のＩ型コラーゲンの産生能を促進または改善する作用を意味し、これにより、ヒト皮膚真皮においてコラーゲン量が増大し得ることを意味する。真皮のコラーゲン量を増加させることによって、シワの改善や防止効果が得られ、また、肌の張り（弾力性）を向上させ、また肌のツヤを向上させることができることは、当業者にとり周知のことである（例えば、前述の文献（「機能性化粧品素材の開発のための実験法」（芋皮玄爾 監修）、２００７年発行、シーエムシー出版、第４５〜４７頁（非特許文献１））や、文献（Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol.37, No. 4), pp.103-（非特許文献２））などにこの点が明確に示されている。したがって、本発明による有効成分が、真皮におけるコラーゲン産生促進活性を有することが確認されていることから、本発明による有効成分が、スキンケア、好ましくは、肌の張りとツヤの向上、およびシワの防止もしくは改善に有効であることは明らかである。   Accordingly, in the present invention, the collagen production promoting activity means an action of promoting or improving the ability to produce type I collagen of fibroblasts of human skin dermis, thereby increasing the amount of collagen in human skin dermis. It means getting. It is well known to those skilled in the art that increasing the amount of collagen in the dermis can improve and prevent wrinkles, improve skin tension (elasticity), and improve skin gloss. (For example, the above-mentioned document ("Experimental Method for Development of Functional Cosmetic Material" (supervised by Genshi Hoshi), 2007 issue, CMC Publishing, pages 45 to 47 (Non-patent Document 1)) ) And literature (Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No. 346 (Vol.37, No.4), pp.103- (non-patent document 2))) Therefore, since the active ingredient according to the present invention has been confirmed to have collagen production promoting activity in the dermis, the active ingredient according to the present invention is suitable for skin care, preferably skin tension and gloss. Effective for improving and preventing wrinkles Rukoto is clear.

なお、本明細書において、肌の張りやツヤ、シワなどの肌もしくは皮膚の状態の「予防または改善」とは、該状態の、調節、進行の遅延、緩和、発症予防、再発予防、抑制などを包含する意味で使用される。   In this specification, “prevention or improvement” of skin or skin conditions such as skin tension, gloss, wrinkles, etc., adjustment, delay of progression, mitigation, prevention of onset, prevention of recurrence, suppression, etc. It is used in the meaning including.

よって前記したように、本発明の別の態様によれば、本発明によるコラーゲン産生促進剤を含んでなる、皮膚外用組成物が提供される。好ましくは、皮膚外用組成物は、医薬品、医薬部外品、または化粧料として提供され、より好ましくは、化粧料として提供される。   Therefore, as described above, according to another aspect of the present invention, an external composition for skin comprising the collagen production promoter according to the present invention is provided. Preferably, the composition for external use on the skin is provided as a pharmaceutical, a quasi-drug, or a cosmetic, and more preferably as a cosmetic.

本発明による皮膚外用組成物（特に化粧料）において、有効成分である燕窩酵素分解物の含有量（乾物換算）は、特に制限はなく、組成物の形態により異なるが、一般には固形分として、０．００１〜２０重量％、好ましくは０．００５〜５重量％の範囲であり、組成物の形態に応じて適宜変更することができる。   In the external composition for skin (especially cosmetics) according to the present invention, the content of the axillary enzyme degradation product as an active ingredient (in terms of dry matter) is not particularly limited and varies depending on the form of the composition. It is in the range of 0.001 to 20% by weight, preferably 0.005 to 5% by weight, and can be appropriately changed depending on the form of the composition.

あるいは、本発明による皮膚外用組成物における燕窩酵素分解物の含有量（乾物換算）は、１日当り０．０１ｍｇ以上、より好ましくは０．０１ｍｇ〜２ｍｇ、１平方ｃｍあたりの皮膚に適用できるように含むことが好ましい。   Alternatively, the content of the axillary enzyme degradation product (in terms of dry matter) in the external composition for skin according to the present invention is 0.01 mg or more per day, more preferably 0.01 mg to 2 mg so that it can be applied to the skin per square centimeter. It is preferable to include.

本発明による皮膚外用組成物は、有効成分を含み、かつコラーゲンの産生促進効果を損なわない限りにおいて、本発明による促進剤は、他の任意成分をさらに含んでなることができる。このような任意成分としては、例えば、皮膚外用剤や化粧料に慣用されている各種成分、例えば、保湿剤、低級アルコール、多価アルコール、糖類、界面活性剤、緩衝剤、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酸化防止剤、防腐防菌剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、ビタミン類、アミノ酸類、抗炎症剤、水、ペプチド、糖アルコール類、酵素類、植物エキス類、抗酸化物質類、タルク、クレイ、花粉、パールなどが挙げられる。   As long as the composition for external use of the skin according to the present invention contains an active ingredient and does not impair the effect of promoting collagen production, the promoter according to the present invention may further contain other optional ingredients. Examples of such optional components include various components commonly used in skin external preparations and cosmetics, such as humectants, lower alcohols, polyhydric alcohols, saccharides, surfactants, buffers, emulsifiers, and stabilizers. , Thickeners, antioxidants, antiseptics, antiseptics, chelating agents, pH adjusters, fragrances, dyes, UV absorbers, UV scattering agents, vitamins, amino acids, anti-inflammatory agents, water, peptides, sugar alcohols , Enzymes, plant extracts, antioxidants, talc, clay, pollen, pearl and the like.

ここで保湿剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、ヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸等の酸性ムコ多糖類、アミノ酸、コラーゲン、エラスチンなどが挙げられる。   Examples of the humectant include polyethylene glycol, polypropylene glycol, glycerin, propylene glycol, sorbitol, acidic mucopolysaccharides such as hyaluronic acid and chondroitin sulfate, amino acids, collagen, and elastin.

低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどが挙げられる。   Examples of the lower alcohol include ethanol, propanol, and isopropanol.

多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、ペンタエリストリール、ジペンタエリスリトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、1,3−ブチレングリコールなどが挙げられる。   Examples of the polyhydric alcohol include glycerin, pentaerythritol, dipentaerythritol, ethylene glycol, propylene glycol, polypropylene glycol, and 1,3-butylene glycol.

糖類としては、例えば、グルコース、マルトース、ラクトース、Ｄ−グルクロン酸、サッカロース、Ｄ−ソルビット、ソルビタン、セルロース、デンプンなどの糖類、オリゴ糖類、多糖類およびこれらの誘導体などが挙げられる。   Examples of the saccharide include saccharides such as glucose, maltose, lactose, D-glucuronic acid, saccharose, D-sorbitol, sorbitan, cellulose, and starch, oligosaccharides, polysaccharides, and derivatives thereof.

本発明による皮膚外用組成物は、燕窩酵素分解物を含むコラーゲン産生促進剤およびこれらの任意成分を、公知の方法に従って適宜配合し調整することによって、ローション、乳液、クリーム、保湿液、パック剤、化粧水、洗顔料、ボディローション、ボディクリームなどの種々の化粧料において慣用の製品形態とすることができる。本発明による皮膚外用組成物は、さらに、ファウンデーション類、リップスティック、アイシャドウ、頬紅などのメーキャップ化粧品や、日焼け止め用製品や防臭化粧品などの薬用化粧品、シャンプーやヘアリンス、整髪料などの頭髪用化粧品、皮膚洗浄剤や浴剤の浴用化粧品などとして用いてもよい。   The composition for external use of the skin according to the present invention comprises a collagen production promoter containing an axillary enzyme degradation product and these optional components appropriately blended and adjusted in accordance with a known method, whereby a lotion, milky lotion, cream, moisturizing liquid, pack agent, It can be in the form of products commonly used in various cosmetics such as lotion, face wash, body lotion, body cream. The external composition for skin according to the present invention further comprises makeup cosmetics such as foundations, lipsticks, eye shadows and blushers, medicinal cosmetics such as sunscreen products and deodorant cosmetics, and cosmetics for hair such as shampoos, hair rinses and hair conditioners. Further, it may be used as a skin cleanser or a bath cosmetic for a bath.

本発明のさらに別の態様によれば、本発明の有効成分である酵素分解物の有効量を、ヒトを含む哺乳動物の皮膚に適用することを含んでなる、皮膚におけるコラーゲンの産生促進方法が提供される。なおここで「有効量」とは、適用によって、体内における所望の領域において、コラーゲンの産生促進活性を発揮しうるのに十分な量である。   According to still another aspect of the present invention, there is provided a method for promoting collagen production in skin, which comprises applying an effective amount of an enzyme degradation product as an active ingredient of the present invention to the skin of mammals including humans. Provided. Here, the “effective amount” is an amount sufficient to exert collagen production promoting activity in a desired region in the body by application.

さらに本発明のさらに別の一つの態様によれば、本発明の有効成分の有効量を、ヒトを含む哺乳動物の皮膚に適用することを含んでなる、スキンケア方法が提供される。同様に、本発明の有効成分の有効量を、ヒトを含む哺乳動物の皮膚に適用することを含んでなる、肌の張りとツヤを向上させ、シワを防止もしくは改善する方法も提供される。なおここで「有効量」とは、所望の効果が得られるのに十分な量である。   According to yet another aspect of the present invention, there is provided a skin care method comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to the skin of mammals including humans. Similarly, there is also provided a method of improving skin tension and gloss and preventing or improving wrinkles, comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to the skin of mammals including humans. Here, the “effective amount” is an amount sufficient to obtain a desired effect.

なお本明細書において、「約」および「程度」を用いた値の表現は、その値を設定することによる目的を達成する上で、当業者であれば許容することができる値の変動を含む意味である。例えば、所定の値または範囲の２０％以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内の変動を許容し得ることを意味する。   In this specification, the expression of a value using “about” and “degree” includes a variation in a value that can be allowed by those skilled in the art to achieve the purpose by setting the value. Meaning. For example, it means that a variation within 20%, preferably within 10%, more preferably within 5% of a predetermined value or range can be tolerated.

以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。   The present invention will be specifically described based on the following examples, but the present invention is not limited to these examples.

（１） 燕窩サンプルの調製
(1-1) 燕窩酵素分解物１
市販の無漂白の燕窩を粉砕機で粉砕して、１００メッシュパス（粒径１５０μｍ以下）の燕窩粉末を得、この燕窩粉末に、約５０倍量（質量）の水を加えて５℃で２０時間膨潤させた後、１２１℃、１５分間加熱殺菌処理した。 (1) Axillary sample preparation
(1-1) Axillary enzyme degradation product 1
A commercially available unbleached axilla is pulverized with a pulverizer to obtain an axillary powder with a 100 mesh pass (particle size of 150 μm or less). After swelling for a period of time, it was heat sterilized at 121 ° C. for 15 minutes.

得られた処理液を冷却した後、ｐＨを調整し、燕窩粉末に対して２質量％の量のプロテアーゼ含有酵素（商品名「パンクレアチンＦ」、天野製薬株式会社製）を添加して、４５℃で３時間反応させた。   After cooling the obtained treatment liquid, the pH was adjusted, and a protease-containing enzyme (trade name “Pancreatine F”, manufactured by Amano Pharmaceutical Co., Ltd.) in an amount of 2% by mass with respect to the axillary powder was added. The reaction was carried out at 3 ° C for 3 hours.

この酵素反応液をｐＨ７．０に調整した後、９０℃で５分間加熱して酵素を失活させて、濾過し、濾液を回収した。この濾液を濃縮後、凍結乾燥して、「燕窩酵素分解物１」を得た。   After adjusting this enzyme reaction liquid to pH 7.0, it heated at 90 degreeC for 5 minute (s), the enzyme was deactivated, it filtered, and the filtrate was collect | recovered. The filtrate was concentrated and lyophilized to obtain “Axillary Enzyme Degradation Product 1”.

(1-2) 燕窩酵素分解物２
酵素反応の時間を２４時間とした以外は、前記(1-1)項の酵素分解物１と同様に行い、「燕窩酵素分解物２」を得た。 (1-2) Axillary enzyme degradation product 2
Except for setting the time of the enzyme reaction to 24 hours, the same procedure as in the enzyme degradation product 1 described in (1-1) above was performed to obtain “Axillary enzyme degradation product 2”.

(1-3) 燕窩熱水抽出物（比較例）
市販の無漂白の燕窩（乾燥物）４０ｇを粉砕機で粉砕し、この粉砕物を、１０００ｍｌの蒸留水に加えて、加熱還流下にて２時間抽出処理を行った。加熱還流後、静置した後、上清を分取して濾過し、濾液を回収した。残渣についてはさらに、上記と同様に１０００ｍｌの蒸留水に加えて、加熱還流下にて再抽出処理を行った後、固形物残渣を濾過により除去し、濾液を回収した。得られている濾液（抽出液）を併せ、減圧下にて濃縮し、得られた濃縮物を凍結乾燥して、黄白色の「燕窩熱水抽出物」（比較例）を得た。 (1-3) Axillary hot water extract (comparative example)
40 g of commercially available unbleached axilla (dried product) was pulverized with a pulverizer, and the pulverized product was added to 1000 ml of distilled water and subjected to extraction treatment under heating and reflux for 2 hours. After heating to reflux and allowing to stand, the supernatant was collected and filtered, and the filtrate was recovered. The residue was further added to 1000 ml of distilled water in the same manner as described above and subjected to a re-extraction treatment with heating under reflux, and then the solid residue was removed by filtration, and the filtrate was recovered. The obtained filtrate (extract) was combined and concentrated under reduced pressure, and the resulting concentrate was lyophilized to obtain a yellowish white “axillary hot water extract” (comparative example).

（２） 燕窩サンプルの分析
得られた各燕窩サンプル（燕窩酵素分解物１、燕窩酵素分解物２および燕窩熱水抽出物）中のシアル酸量とタンパク質量とを下記のようにして測定した。
シアル酸の量は、各試料を酸加水分解後に高速液体クロマトグラフィーにて遊離Ｎ−アセチルノイラミン酸として測定した。
タンパク質の量は、Ｂｒａｄ ｆｏｒｄ法に基づくBio Rad社のプロテインアッセイキットを使用して測定した。 (2) Analysis of Axillary Sample The amount of sialic acid and the amount of protein in each of the obtained axillary samples (axillary enzyme degradation product 1, axillary enzyme degradation product 2 and axillary hydrothermal extract) were measured as follows.
The amount of sialic acid was measured as free N-acetylneuraminic acid by high performance liquid chromatography after acid hydrolysis of each sample.
The amount of protein was measured using a Bio Rad protein assay kit based on the Brad ford method.

結果は、図１および図２に示される通りであった。   The results were as shown in FIG. 1 and FIG.

次に、燕窩酵素分解物１および燕窩酵素分解物２に含まれるタンパク質の分子量およびその分布を測定するため、下記のような条件にて、ＧＰＣによる分析を行った。   Next, in order to measure the molecular weight and distribution of proteins contained in the axillary enzyme degradation product 1 and the axillary enzyme degradation product 2, analysis by GPC was performed under the following conditions.

［ＨＰＬＣの測定条件］
・カラム： Shodex Asahipak GS320HQ （φ7.6×300mm）
・カラム温度： ３５℃
・移動相： 50mM ＣＨ３ＣＯＯＮＨ３ ｐＨ６．７
・流速： ０．４ml/min
・試料注入量： １０μｌ
・検出器： 紫外分光検出器（ＵＶ２２０ｎｍにて測定）
［使用した分子量マーカー］
・ＢＳＡ MW 66,000
・Gly-gly MW 132.1
・Gly-gly-gly MW 189.17
・L-Asparaginic acid MW133.1
・DL-Asparaginic acid MW 150.1
・N-Acetylneuraminic acid MW 309.3 [HPLC measurement conditions]
・ Column: Shodex Asahipak GS320HQ (φ7.6 × 300mm)
-Column temperature: 35 ° C
Mobile phase: 50 mM CH 3 COONH 3 pH 6.7
・ Flow rate: 0.4ml / min
Sample injection volume: 10 μl
・ Detector: Ultraviolet spectroscopic detector (measured at UV220nm)
[Molecular weight markers used]
・ BSA MW 66,000
・ Gly-gly MW 132.1
・ Gly-gly-gly MW 189.17
・ L-Asparaginic acid MW133.1
・ DL-Asparaginic acid MW 150.1
・ N-Acetylneuraminic acid MW 309.3

測定結果は、図３および図４に示される通りであった。   The measurement results were as shown in FIG. 3 and FIG.

さらに、燕窩酵素分解物に含まれるタンパク質の分子量について、ウエスタンブロッド法を使用して評価した。具体的には、まず、前記した測定法に従い、燕窩酵素分解物中のタンパク質の量を確認した。燕窩酵素分解物由来のタンパク質（１００μｇ）を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、１０〜１５％のポリアクリルアミドにより分離した。ゲルに展開したタンパク質をImmuno-blot ＰＶＤＦ膜（Polyvinylidene difluoride、Bio-Lad Lab社より入手）に転写した。ＰＶＤＦ膜を３％スキムミルクと０．１％ Tween-20を含むＰＢＳ中にて、１時間ブロッキングし、視覚的に判定した。
なお、タンパク質の分子量の評価にあたっては、公知文献（Guo, C. T., Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp.140-146 (2006) に示されているデータも参考にした。 Furthermore, the molecular weight of the protein contained in the axillary enzyme degradation product was evaluated using the Western blot method. Specifically, first, according to the measurement method described above, the amount of protein in the axillary enzyme degradation product was confirmed. Axillary enzyme digest derived protein (100 μg) was separated by 10-15% polyacrylamide using SDS-PAGE. The protein developed on the gel was transferred to an Immuno-blot PVDF membrane (Polyvinylidene difluoride, obtained from Bio-Lad Lab). The PVDF membrane was blocked for 1 hour in PBS containing 3% skim milk and 0.1% Tween-20, and visually judged.
In addition, in the evaluation of the molecular weight of the protein, data shown in known literature (Guo, CT, Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp. 140-146 (2006) was also referred to.

これらの結果から、燕窩酵素分解物中に含まれるタンパク質分子量は、約７０〜１２０，０００程度（なお評価条件によっては、上限値は２００，０００程度となる場合がある）の範囲で存在することがわかった。   From these results, the protein molecular weight contained in the axillary enzyme degradation product should be in the range of about 70 to 120,000 (the upper limit may be about 200,000 depending on the evaluation conditions). I understood.

さらに、得られた結果から、燕窩酵素分解物１におけるタンパク質の平均分子量は、約５５，０００であるとわかった。また、燕窩酵素分解物２におけるタンパク質の平均分子量は、約３３，０００であるとわかった。   Furthermore, from the obtained results, it was found that the average molecular weight of the protein in the axillary enzyme degradation product 1 was about 55,000. In addition, the average molecular weight of the protein in the axillary enzyme degradation product 2 was found to be about 33,000.

（３） コラーゲンの産生促進能の測定
正常ヒト皮膚真皮線維芽細胞（ＫＦ−４１０９、クラボウ社より入手）を、０．５％仔牛血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培地（SIGMAより入手）を用いて、９６穴プレートに２×１０４cellsの細胞密度にて播種した。播種２４時間後、所定の濃度の各燕窩サンプルを含有した０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地と交換し、さらに２４時間培養した。
なおポジティブコントロール（Ｐ．Ｃ．）として、アスコルビン酸リン酸マグネシウム（ＶＣ−ＰＭｇ）を使用した。 (3) Measurement of collagen production promoting ability Normal human dermal fibroblasts (KF-4109, obtained from Kurabo), using 0.5% calf serum (FBS) -containing DMEM medium (obtained from SIGMA), A 96-well plate was seeded at a cell density of 2 × 10 4 cells. 24 hours after sowing, the medium was replaced with 0.5% FBS-containing DMEM medium containing each axillary sample at a predetermined concentration, and further cultured for 24 hours.
As positive control (PC), magnesium ascorbate phosphate (VC-PMg) was used.

培養後、培地上清を回収し、上清中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、ＥＬＩＳＡ法では、一次抗体に、Anti-Human Collagen Type I 抗体（Rabit）を用い、二次抗体にヒストファインＰＯ（Rabit）を用い、さらに発色剤には、2,2'-アジノビス（3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸）（ＡＢＴＳ）を用い、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。
培地中のＩ型コラーゲン量は、全細胞のタンパク質量で培地中のＩ型コラーゲン量を除することによって単位タンパク質量当たりのＩ型コラーゲン産生量として算出した。 After the culture, the culture supernatant was recovered, and the amount of type I collagen in the supernatant was measured by ELISA. In the ELISA method, Anti-Human Collagen Type I antibody (Rabit) is used as the primary antibody, Histofine PO (Rabit) is used as the secondary antibody, and 2,2′-azinobis (3 The absorbance at 405 nm was measured with a microplate reader using (ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS).
The amount of type I collagen in the medium was calculated as the amount of type I collagen produced per unit protein by dividing the amount of type I collagen in the medium by the amount of protein in all cells.

結果は図５に示される通りであった。
結果から、燕窩の酵素分解物が、ヒト皮膚真皮線維芽細胞のＩ型コラーゲン産生を有意に増加させることが認められた。 The result was as shown in FIG.
From the results, it was recognized that the enzymatic degradation product of axilla significantly increased type I collagen production in human dermal fibroblasts.

Claims (5)

燕窩のパンクレアチンによる酵素分解物を有効成分とする、コラーゲン産生促進外用剤。   An external preparation for promoting collagen production, comprising an enzyme degradation product of pancreatin in the axilla as an active ingredient. 酵素分解物の分子量が、７０〜２００，０００である、請求項１に記載のコラーゲン産生促進外用剤。   The external preparation for promoting collagen production according to claim 1, wherein the molecular weight of the enzymatic degradation product is 70 to 200,000. 酵素分解物の平均分子量が、３００〜１５，０００である、請求項１または２に記載のコラーゲン産生促進外用剤。   The external preparation for promoting collagen production according to claim 1 or 2, wherein the average molecular weight of the enzymatic degradation product is 300 to 15,000. 皮膚真皮繊維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生を促進するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載のコラーゲン産生促進外用剤。   The collagen production promotion external preparation as described in any one of Claims 1-3 for promoting the production of type I collagen in dermal fibroblasts. 化粧料である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のコラーゲン産生促進外用剤。 The external preparation for promoting collagen production according to any one of claims 1 to 4 , which is a cosmetic.
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