KR20120098580A - 인간 파필로마바이러스（ｈｐｖ） 단백질 작제물 및 ｈｐｖ 질환을 예방하기 위한 이의 용도 - Google Patents

인간 파필로마바이러스（ｈｐｖ） 단백질 작제물 및 ｈｐｖ 질환을 예방하기 위한 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20120098580A
KR20120098580A KR1020127001919A KR20127001919A KR20120098580A KR 20120098580 A KR20120098580 A KR 20120098580A KR 1020127001919 A KR1020127001919 A KR 1020127001919A KR 20127001919 A KR20127001919 A KR 20127001919A KR 20120098580 A KR20120098580 A KR 20120098580A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
polypeptide
hpv
gly
peptides
leu
Prior art date
Application number
KR1020127001919A
Other languages
English (en)
Inventor
가이 쟝 마리 페르난드 피에르 바우도욱스
브리지트 데지레 알베르트 콜라우
나주아 덴도우가
산드라 지안니니
니콜라스 피에르 페르난드 리크레니어
Original Assignee
글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. filed Critical 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Publication of KR20120098580A publication Critical patent/KR20120098580A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/01—DNA viruses
    • C07K14/025—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20023—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 신규한 인간 파필로마바이러스(HPV) 단백질 작제물 및 HPV 질환의 예방에 있어서 이들의 용도를 제공한다. 상기 작제물은 L1 단백질에 삽입된 HPV L2 펩티드를 지니는 L1 단백질을 포함하는 키메라 단백질이다. 그러한 키메라 단백질은 면역원성, 예를 들어 백신 조성물로 제형화될 수 있고, 임의로 HPV L1 VLP 기반 백신과 제형화될 수 있다.

Description

인간 파필로마바이러스（ＨＰＶ） 단백질 작제물 및 ＨＰＶ 질환을 예방하기 위한 이의 용도{NOVEL HUMAN PAPILLOMAVIRUS(HPV) PROTEIN CONSTRUCTS AND THEIR USE IN THE PREVENTION OF HPV DISEASE}
본 발명은 인간 백신의 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 인간 파필로마바이러스(HPV) 감염 또는 질환을 예방하거나 치료하기 위한 약제학적 및 면역원성 조성물에 관한 것이다.
파필로마바이러스는 매우 종 특이적인 소형의 DNA 종양 바이러스이다. 인간 파필로마바이러스는 기저 상피 (피부 또는 점막) 세포를 감염시키는 DNA 바이러스이다. 지금까지, 100개 이상의 개별적인 인간 파필로마바이러스(HPV) 유전형이 개시되었다. HPV는 일반적으로 피부 (예컨대, HPV-1 및 -2) 또는 점막 표면 (예컨대, HPV-6 및 -11)의 편평 상피에 대해 특이적이고, 보통 수 개월 또는 수 년 동안 지속되는 양성 종양(사마귀)을 일으킨다.
종양원성(oncogenic) 인간 파필로마바이러스(HPV) 유형에 의한 지속적인 감염은, 전세계적으로 여성에서의 두 번째로 흔한 암 사망의 원인인 자궁경부암의 필연적인 원인이다. 유전형 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 및 66을 포함하는 "고-위험(high-risk)" 유전형이 자궁경부암을 초래할 수 있고 이것이 기타 점막 항문생식기암 및 두경부암과 관련이 있다는 의견이 국제적으로 일치하였다. 세계적으로, HPV-16 및 HPV-18은, 누적하여 모든 침습성 자궁경부암의 70-80% 이상의 원인이 되는 우세한 종양원성 유형이다.
"저-위험(low-risk)"으로 지칭되는 다른 유전형에 의한 감염은 여성의 자궁경부, 질, 음문 및 항문 그리고 남성의 음경, 음낭 또는 항문 상의 종양인, 양성 또는 저-등급의 자궁경부 조직의 변화 및 생식기 사마귀(첨형 콘딜로마)를 야기할 수 있다. 이들은 또한 소아 및 성인의 성대 상에 외과적 개입이 필요한 상피 종양을 야기한다 (소아 호흡기 유두종증 또는 재발성 호흡기 유두종증).
두 개의 예방적 HPV 백신이 많은 국가에서 최근에 허가되었다. 둘 모두는 HPV-16 및 -18 자궁경부 전암성 병변 및 암을 예방하기 위해 개개의 HPV 유형의 재조합 L1 캡시드(capsid) 단백질을 포함하는 바이러스-유사 입자(VLP)를 이용한다. Cervarix™ (GlaxoSmithKline Biologicals)은 바쿨로바이러스 발현 벡터 시스템을 이용하여 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni) 세포 기질에서 생산되고 면역자극제 3-O-데스아실-4'-모노포스포릴 지질 A (MPL) 및 수산화알루미늄 염으로 제형화된 HPV-16 및 -18 VLP를 함유한다. Gardasil™ (Merck)은 효모 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)에서 생산되고 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 설페이트 염으로 제형화된 HPV-16 및 -18 VLP를 함유한다. 또한, Gardasil™은 생식기 사마귀의 75-90%와 관련된 비-종양원성 유형 HPV-6 및 -11로부터의 VLP를 함유한다. 두 개의 백신 모두에서, 종양원성 유형 HPV-16 및 HPV-18에 의한 감염 및 연관된 전암성 병변에 대한 특정 보호는 무작위화 임상 시험에서 입증되었다.
자궁경부암을 일으키는 원인이 되는 종양원성 HPV 유형의 목록은 최소한 자궁경부암에서 발견된 HPV 유형 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 및 73을 포함한다 (Mahdavi et al, 2005; Quint et al., 2006).
현존하는 백신은 이러한 HPV 유형 중 일부에 의한 감염 및/또는 질환에 대한 특정 보호를 다양한 정도로 제공할 수 있다. 그러나, 자궁경부암을 야기하는 모든 HPV 유형에 대한 보호범위를 추가로 개선시키기 위해 그 밖의 HPV 유형으로부터의 항원을 함유하는 백신을 갖는 것이 잠재적으로 유리하거나, 관련 및 비관련 HPV 유형에 대한 광범한 교차 보호를 유도하는 것이 유리할 것이다. HPV 5 또는 HPV 8 또는 HPV 38 또는 이들 중 두 개 이상의 임의의 조합과 같은 피부암을 야기하는 HPV 유형에 대해 추가로 효과적인 백신을 갖는 것이 잠재적으로 유리할 것이다.
현재 승인된 L1 VLP 백신에 추가하여, L2의 펩티드가, 예를 들어 문헌[WO 2003/097673, WO 2004/052395, WO 2006/083984, WO 2009/001867, Kondo et al 2008 J Med Virol 80, 841-846, Kondo et al 2006 Virology 358, 266-272, ScheL1enbacher et al 2009 25th International Palillomavirus Conference 8-14th May, Malmo, Sweden, Coursaget et al, 25th International Palillomavirus Conference 8-14th May, Malmo, Sweden, Slupetzky et al 2007 Vaccine 25, 2001-2010, Xu et al 2006 Arch Virol 151, 2133-2148, Gambhira et al 2007 J Virol 81, 13927-13931, Alphs et al 2008 PNAS 105, 5850-5, Kawana et al 2003 Vaccine 21, 4256-60, Kawana et al 2001 Vaccine 19, 1496-1502]에서 HPV 백신에서의 사용을 위해 제안되었다.
발명의 개요
본 발명은 추가의 암을 야기하는 HPV 유형 및/또는 생식기 사마귀와 관련된 저-위험 HPV 유형에 대한 보호를 제공하는 항원을 함유하는 인간 파필로마바이러스에 대한 개선된 백신에 관한 것이다. 개선된 백신은 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드가 삽입된 키메라 L1 폴리펩티드를 함유한다.
본 발명의 한 구체예에서, 인간 파필로마바이러스(HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 유형 18 폴리펩티드 또는 이의 단편이 제공된다. 한 구체예에서, 폴리펩티드는 L2 폴리펩티드의 두 개 이상의 펩티드를 포함한다.
대안적인 구체예에서, 본 발명은 인간 파필로마바이러스(HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75를 포함하는 펩티드를 포함하는 HPV L1 유형 16 폴리펩티드 또는 이의 단편을 제공한다.
본 발명의 키메라 폴리펩티드는 캡소머(capsomer) 또는 바이러스 유사 입자(VLP)로서 제공될 수 있다. 상기 폴리펩티드, 캡소머 및 VLP는 면역원성 조성물로 제형화될 수 있다. 이들의 제조 방법 및 예를 들어 HPV 감염을 예방하기 위한 약제의 제형에서 이들의 용도가 기술된다.
본 발명은 추가로
(i) 하나 이상의 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 바이러스 유사 입자 (VLP); 및
(ii) L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 하나 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명은 두 개 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP의 조합물을 포함하는 조성물을 추가로 제공하며, 각각의 L1은 L1 서열에 L2 펩티드를 포함한다.
본 발명은 추가로
(i) 하나 이상의 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 바이러스 유사 입자 (VLP); 및
(ii) L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 하나 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP를 포함하는, HPV 감염과 관련된 질병을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명은 L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 두 개 이상의 키메라 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP의 조합물을 포함하는, HPV 감염과 관련된 질병을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 추가로 HPV 감염과 관련된 질병을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조에서의
(i) 하나 이상의 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 바이러스 유사 입자 (VLP); 및
(ii) L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 하나 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 두 개 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP의 조합물의 HPV 감염과 관련된 질병을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조에서의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 L1 서열에 두 개 이상의 L2 펩티드를 포함하는 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하여, 인간에서 HPV에 대한 항체를 유도하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하여, 인간에서 HPV에 대한 중화 항체를 유도하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하여, 인간에서 HPV에 대한 세포 면역을 유도하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하여, 인간에서 HPV에 대한 중화 항체 및 세포 면역을 유도하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 또한 교차 중화 항체를 유도할 수 있다.
본 발명은 추가로 인간에게 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, HPV 감염과 관련된 HPV 감염 또는 HPV 질환을 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로 (i) 하나 이상의 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 바이러스 유사 입자 (VLP)를 (ii) L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 하나 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP, 및 (iii) 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 및 임의로 (iv) 애쥬번트와 조합시켜, 본 명세서에 기재된 면역원성 조성물을 생산하는 것을 포함하는, 면역원성 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 추가로 본 명세서에 기재된 키메라 폴리펩티드를 정제하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 및 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함한다.
본 발명은 추가로 L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 두 개 이상의 키메라 HPV L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP를 조합시키는 것을 포함하는, 면역원성 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 펩티드 에피토프를 포함하는 HPV L1 폴리펩티드 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 조합시키는 것을 포함하여, 조성물을 제조하는 추가로 방법을 제공한다.
도 1은 HPV 16 및 HPV 18에 대해 C 말단 트렁케이션된(truncated) L1 서열을 도시한다. 도 1a 및 1b의 HPV 16 및 HPV 18 서열에 대한 아미노산 넘버링은 각각 HPV 16 및 HPV 18의 L1에 관해 명세서 전반에서 사용된다.
도 2는 HPV 16 및 HPV 18 L1의 노출된 루프 및 L1 서열에 L2 펩티드를 삽입하기 위한 예시적인 위치를 도시한다.
도 3은 노출된 루프 영역과 C 말단 침습 아암 영역에서 HPV 16, 18 및 그 밖의 유형에 대한 L1 서열의 정렬을 도시한다. 상부에 있는 서열이 도 1에 도시된 HPV 16 L1 서열이다.
도 4는 다양한 상이한 HPV 유형으로부터의 L2 펩티드이다.
도 5는 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 정제를 위한 순서도이다.
발명의 상세한 설명
도입
본 발명은 인간 파필로마바이러스 (HPV)에 의한 감염으로 야기된 질환을 예방 및 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 주요 캡시드 단백질 L1 및 L2로 지정된 소 캡시드 단백질의 면역원성 성분을 함유하는 키메라 폴리펩티드에 관한 것이다. 본 명세서에 기재된 키메라 폴리펩티드는 하나 이상의 L2 펩티드가 삽입된 L1 폴리펩티드를 포함한다. L2 펩티드는 L2 폴리펩티드의 하나 이상의 에피토프를 포함하도록 선택된다.
한 구체예에서, L1 폴리펩티드는 HPV 유형 18 L1 폴리펩티드이다. 따라서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드가 삽입된 HPV 유형 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 예를 들어, L2 펩티드는 유형 18 이외의 다른 HPV 유형으로부터 비롯될 수 있다 (즉, 비-HPV 유형 18 L2 펩티드). 유리하게는, L1/L2 폴리펩티드는 펩티드가 선택된 L2 폴리펩티드를 포함하는 천연(native) 단백질에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다. 추가로, L1/L2 폴리펩티드는 하나 이상의 추가의 천연 L2 단백질에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다.
한 구체예에서, L2 펩티드(들)은 HPV L2 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 1-200, 예를 들어 HPV L2 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 1-150으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, L2 펩티드는 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 17-36을 포함하는 펩티드; HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 56-75을 포함하는 펩티드; HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 96-115을 포함하는 펩티드; 및 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 108-120을 포함하는 펩티드의 선택된 군으로부터 선택된다. 다양한 구체예에서, L2 펩티드(들)은 SEQ ID NO: 1-31로 표시된 아미노산 서열을 포함한다. 한 예시적인 구체예에서, L2 펩티드는 HPV 유형 33 L2의 아미노산 17-36으로 이루어진다 (이것은 HPV 유형 11 L2의 아미노산 17-36과 동일하다). 또 다른 예시적인 구체예에서, L2 펩티드는 HPV 유형 58 L2의 아미노산 56-75로 이루어진다 (이것은 HPV 유형 6 L2의 아미노산 56-75와 동일하다). 보다 일반적으로, L2 펩티드는, 두 개 이상의 상이한 HPV 유형의 L2 폴리펩티드와 동일한 적어도 8개의 연속하는 아미노산 (HPV의 두 개 이상의 유형간에 공통 서열이다)을 포함하도록 선택될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75를 포함하는 펩티드가 삽입된 HPV L1 유형 16 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 예를 들어, L2 펩티드는 HPV 유형 58과 같은 종양원성 HPV 유형으로부터의 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75를 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, L1 폴리펩티드에 삽입되어 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 형성하는 L2 펩티드는 천연 L2 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 한 구체예에서, L2 펩티드는 두 개의 시스테인 사이에 있는 이황화 결합을 제거하거나 두 개의 시스테인 사이에 있는 이황화 결합을 형성할 수 있는 아미노산을 제거하는 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 갖는다. 유리하게는, 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 갖는 L2 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 하나 이상의 천연 L2 단백질에 (또는 자연 발생 L2 폴리펩티드) 대해 면역 반응을 유도할 수 있다.
한 구체예에서, HPV L1 단백질은 하나 이상의 아미노산의 C-말단 결실을 갖는다. 특정 구체예에서, L2 펩티드(들)는 L1 폴리펩티드의 노출된 영역으로 삽입된다. 다양한 구체예에서, 노출된 루프는 DE 루프 (예를 들어, 아미노산 132-142 사이); FG 루프 (예를 들어, 아미노산 172-182 사이); HI 루프 (예를 들어, 아미노산 345-359 사이); 및/또는 L1 폴리펩티드의 C 말단 (예를 들어, 아미노산 429-445 사이)일 수 있다. 한 구체예에서, 두 개 이상의 L2 펩티드가 L1 폴리펩티드 내에 삽입된다. 예를 들어, 두 개 이상의 L2 펩티드가 동일한 부위 (예를 들어, 아미노산 또는 연쇄체(concatamer)의 연속한 시리즈로서), 또는 상이한 부위, 예를 들어 DE 루프 및 L1 폴리펩티드의 C 말단에 삽입될 수 있다. 임의로, 동일한 부위에 삽입되는 경우, 두 개 이상의 L2 펩티드는 하나 이상의 추가의 아미노산, 예를 들어 다수의 아미노산을 포함하는 스페이서에 의해 연결될 수 있다. 두 개 이상의 L2 펩티드가 L1 폴리펩티드에 삽입될 때, L2 펩티드는 동일하거나 상이할 수 있다. 전형적으로, L2 펩티드(들)는 천연 L2 폴리펩티드의 적어도 8개의 연속하는 아미노산을 포함한다.
특정 구체예에서, L2 펩티드(들)은 L1 폴리펩티드의 아미노산을 결실시키지 않으며 L1 폴리펩티드 내에 삽입된다. 그 밖의 구체예에서, L2 펩티드(들)는 L1 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산을 결실시키며 L1 폴리펩티드 내로 삽입된다.
일부 구체예에서, 키메라 L1/L2는 키메라 폴리펩티드의 초분자(supramolecular) 어셈블리, 예를 들어 폴리펩티드 입자, 예컨대 무정형 응집물, 또는 더욱 정돈된 구조, 예를 들어 캡소머 또는 바이러스 유사 입자 (VLP) 또는 소형 비-VLP 구조로 존재한다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 개시된 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다. 상기 핵산은 원핵생물 또는 진핵생물 발현 벡터에 존재할 수 있다. 적합한 발현 벡터로는, 예를 들어 재조합 바쿨로바이러스가 있다. 재조합 핵산, 예를 들어 발현 벡터는 숙주 세포로 도입될 수 있다 (예를 들어, 감염, 트랜스펙션 또는 형질전환). 그러한 숙주 세포가 또한 본 발명의 특징이다. 이러한 숙주 세포를 이용하여, 예를 들어 재조합 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건하에 숙주 세포를 복제시킴에 의해 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 생산할 수 있다. 임의로, 폴리펩티드를 그 후 분리하고/거나 정제시킨 후, 예를 들어 면역원성 조성물로 제형화할 수 있다.
본 명세서에 기재된 모든 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 HPV에 의해 야기된 감염 또는 질환의 예방 또는 치료를 위해 약제, 예를 들어 면역원성 조성물 (예를 들어 백신)에 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 인간 피검체에 면역원성 조성물을 투여함에 의해 인간에서 HPV에 대한 항체를 유도하는 방법에 사용하기에 적합하다. 유리하게는, 인간 피검체에 면역원성 조성물을 투여하는 것은 HPV 감염 또는 질환을 예방, 개선 또는 치료하는 항체를 유도한다.
따라서, 본 발명은 또한 HPV 감염 또는 질환의 예방, 개선 또는 치료에 사용하기 위한 면역원성 조성물을 제공한다. 그러한 면역원성 조성물은 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 상기 개시된 키메라 L1/L2 폴리펩티드 (예를 들어, 단백질), 캡소머 또는 VLP를 포함한다. 일부 구체에에서, 면역원성 조성물은 애쥬번트도 포함한다. 적합한 애쥬번트는 수산화알루미늄과 같은 알루미늄 염, 및/또는 3-데아실화된 모노포스포릴 지질 A (3D-MPL)를 포함한다.
한 구체예에서, 조성물은 (i) 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하거나 이로 구성된 하나 이상의 바이러스 유사 입자 (VLP); 및 (ii) L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드가 삽입된 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드를 포함한다. 본 명세서에 기재된 모든 키메라 L1/L2 폴리펩티드 (상기 언급된 초분자 어셈블리, 폴리펩티드 분자, 캡소머 및/또는 VLP 포함)가 키메라 L1/L2 폴리펩티드와 함께 VLP를 함유하는 조성물에 사용하기에 적합하다.
한 구체예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드와 함께 사용되는 VLP는 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편으로 구성된다. 특정 구체예에서, HPV L1 VLP는 HPV 16 및/또는 HPV 18 L1 VLP이다. 유사하게, 키메라 폴리펩티드는 또한 HPV 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편 및/또는 HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 예시적인 구체예의 상기 조성물은 L2 펩티드가 삽입된, HPV 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편, HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 HPV 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편과 HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편 둘 모두로 구성된 상기 (ii)의 하나 이상의 키메라 폴리펩티드를 포함한다. 상기 개시된 대로, 키메라 펩티드는 L1 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산의 C 말단 결실을 지니는 L1 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 특정한 한 구체예에서, 면역원성 조성물은 둘 모두의 HPV 16 L1 VLP 및 HPV 18 L1 VLP, 및 둘 모두의 HPV 16 L1 폴리펩티드 및 HPV 18 L1 폴리펩티드를 지니는 키메라 폴리펩티드를 포함한다. 상기 구체예에서, HPV 16 L1 폴리펩티드를 갖는 키메라 폴리펩티드 및 HPV 18 폴리펩티드를 갖는 키메라 폴리펩티드는 상이한 L2 펩티드를 포함할 수 있다. 예시적인 L1 단편은 C 말단의 34개 아미노산이 결여된 HPV 16 L1 또는 C 말단의 35개 아미노산이 결여된 HPV 18 L1을 포함한다.
유사하게, 또 다른 구체예에서, 면역원성 조성물은 인간 파필로마바이러스(HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 지니는 HPV L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 두 개 이상의 키메라 폴리펩티드의 조합물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 조합물은 동일하거나 상이한 L1 성분을 갖는 키메라 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 유사하게, 조합물 중의 키메라 폴리펩티드는 동일하거나 상이한 L2 성분을 포함할 수 있다. 특정한 한 구체예에서, 키메라 폴리펩티드는 동일한 HPV 유형의 L1 폴리펩티드를 포함하고 L2 펩티드는 상이하다.
예시적인 제형에서, 면역원성 조성물은 인간 용량 당 10 내지 50㎍의 각각의 VLP 및/또는 키메라 폴리펩티드를 포함한다. 한 구체예에서, 각각의 VLP 및/또는 키메라 폴리펩티드는 약 20㎍의 양으로 존재한다.
본 명세서에 기재된 면역원성 조성물은, 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 및 임의로 애쥬번트와 함께, 인간 파필로마바이러스(HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 삽입된 펩티드를 지니는 HPV L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드를 하나 이상의 다른 키메라 폴리펩티드, 또는 하나 이상의 HPV L1 바이러스 유사 입자(VLP)와 조합시킴에 의해 제조될 수 있다.
용어
본 발명의 다양한 구체예의 재검토가 용이하도록, 하기 용어 설명을 제공한다. 추가의 용어 및 설명이 본 발명과 관련하여 제공될 수 있다.
달리 설명하지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 분자 생물학에서의 일반적인 용어 정의는 문헌[Benjamin Lewin, Genes V, published by Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); and Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8)]에서 찾아볼 수 있다.
단수 형태는 문맥에서 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수 대상물을 포함한다. 유사하게, "또는"이라는 표현은 문맥에서 달리 명확하게 지시하지 않는 한 "및"을 포함하고자 한다. 용어 "다수"는 두 개 이상을 지칭한다. 핵산 또는 폴리펩티드에 대해 주어진 모든 염기 크기 또는 아미노산 크기, 및 모든 분자량 또는 분자 질량 값은 대략적인 것이며, 설명을 위해 제공된 것임이 추가로 이해되어야 한다. 또한, 항원과 같은 물질의 농도 또는 수준과 관련하여 주어진 수치적 한계는 대략적인 것이다. 따라서, 농도가 적어도 (예를 들어) 200pg라고 표시된 경우, 그 농도는 적어도 대략 (또는 "약"이나 "~") 200pg인 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 개시된 바와 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 및 시험에 사용될 수 있으나, 적합한 방법 및 물질을 하기에 기술한다. "포함한다"라는 용어는 "포함하는" 것을 의미한다. 따라서, 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 용어 "포함한다" 그리고 "포함하는" 및 "포함한"과 같은 이의 변형은 언급된 화합물 또는 조성물 (예를 들어, 핵산, 폴리펩티드, 항원) 또는 단계, 또는 화합물들 또는 단계들 그룹의 포함을 의미하는 것으로 이해될 것이나. 임의의 다른 화합물, 조성물, 단계, 또는 이들의 그룹을 제외시키는 것은 아니다. 약어 "e.g."는 라틴어 예를 들어(exempli gratia)로부터 유래된 것이며, 비제한적인 예를 나타내기 위해 본 명세서에서 이용된다. 따라서, 약어 "e.g."는 "예를 들어"라는 용어와 동의어이다.
약어 "HPV"로 쓰이는 용어 "인간 파필로마바이러스"는 인간을 감염시킬 수 있는 파필로마바이러스 속의 구성원을 지칭한다. 두 주요 그룹의 HPV가 있으며 (생식기 및 피부 그룹), 각각은 유전적인 유사성에 의해 분류된 다수의 바이러스 "유형" 또는 "균주" (예를 들어, HPV 16, HPV 18, HPV 33, HPV 58 등)를 함유한다. 본 발명에 관해, 용어 "유형"은 HPV, 및/또는 HPV의 특수한 유형으로부터의 폴리펩티드를 지정하기 위해 사용될 수 있다. "비-"라는 용어로 시작하는 경우, 지정된 HPV 또는 폴리펩티드는 언급된 것에 비해 다른 유형 또는 추가 유형의 하나 이상의 HPV이다. 예를 들어, "HPV 유형 18 L1 폴리펩티드"는 HPV 유형 18의 L1 폴리펩티드를 지칭한다. 대조적으로, "비-HPV 유형 18 L1 폴리펩티드"는 HPV 유형 18 이외의 임의의 유형의 L1 폴리펩티드를 지칭한다.
용어 "폴리펩티드"는 모노머가 아미드 결합을 통해 함께 연결된 아미노산 잔기인 폴리머를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 임의의 아미노산 서열을 포함하고자 하며 당단백질과 같은 변형된 서열을 포함한다. 용어 "폴리펩티드"는 구체적으로 자연 발생 단백질뿐만 아니라 재조합에 의해 또는 합성에 의해 생산된 것들을 커버한다. 폴리펩티드에 관해 "단편"이라는 용어는 폴리펩티드의 부분 (즉, 부분(sub)서열)을 지칭한다. 용어 "면역원성 단편"은 전장 참조 단백질 또는 폴리펩티드의 하나 이상의 유세한 면역원성 에피토프를 보유한 폴리펩티드의 모든 단편을 지칭한다. 폴리펩티드 내의 배향은 개별적인 아미노산의 아미노 및 카르복시 부분의 배향에 의해 정의된, N-말단에서 C-말단 방향으로 일반적으로 열거된다. 폴리펩티드는 N 또는 아미노-말단에서 C 또는 카르복시-말단 쪽으로 번역된다.
용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "핵산 서열"은 적어도 10개 염기 길이의 뉴클레오티드의 중합 형태를 지칭한다. 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드, 또는 어느 하나의 뉴클레오티드의 변형된 형태일 수 있다. 상기 용어는 DNA의 단일 및 이중 형태를 포함한다. "단리된 폴리뉴클레오티드"는 이것이 유래된 유기체의 천연 발생 유전체에서 바로 인접한 (5' 말단 상의 하나 및 3' 말단 상의 하나) 코딩 서열 둘 모두와 바로 연속하지 않는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 한 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 폴리펩티드를 엔코딩한다. 핵산의 5' 및 3' 방향은 개별적인 뉴클레오티드 유닛의 연결성을 참조하여 정의되고, 데옥시리보오스 (또는 리보오스) 당 고리의 탄소 위치에 따라 지정된다. 폴리뉴클레오티드 서열의 정보용 (코딩) 내용은 5'에서 3' 방향으로 판독된다.
핵산, 폴리펩티드 또는 또 다른 세포 성분과 관련된 용어 "이종성"은 정상적으로 자연에서 발견되지 않고/거나 상이한 공급원 또는 종에서 기원한 구성 요소가 존재하는 것을 나타낸다.
용어 "천연" 및 "자연 발생"은 자연에서 존재하는 것과 동일한 상태로 존재하는 단백질, 폴리펩티드 또는 핵산과 같은 성분을 지칭한다. 즉, 상기 성분은 인공적으로 변형되지 않았다. 본 발명과 관련하여, 예를 들어 상이한 자연 발생 유형의 HPV로부터 수득된, 다수의 천연/자연 발생 유형의 HPV (및 HPV 단백질 및 폴리펩티드)가 존재함이 이해될 것이다.
핵산 또는 폴리펩티드 (예를 들어, HPV L1 또는 L2 핵산 또는 폴리펩티드)를 언급할 때 "변이체"는 참조 핵산 또는 폴리펩티드와 상이한 핵산 또는 폴리펩티드이다. 일반적으로, 변이체와 참조 핵산 또는 폴리펩티드간의 차이(들)는 참조 대상물에 비해 비례적으로 적은 수의 차이들로 구성된다. 변이체 핵산은 참조 핵산과 비교하여 하나 이상의 뉴클레오티드의 삽입, 결실 또는 치환, 또는 인공적인 뉴클레오티드 유사체의 치환만큼 참조 핵산과 상이할 수 있다. 유사하게, 변이체 폴리펩티드는 참조 폴리펩티드와 비교하여 하나 이상의 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환, 또는 아미노산 유사체의 치환만큼 참조 폴리펩티드와 상이할 수 있다.
"항원"은 동물에 주입, 흡수 또는 달리 도입된 조성물을 포함하는, 동물에서 항체의 생산 및/또는 T 세포 반응을 자극할 수 있는 화합물, 조성물 또는 물질이다. 용어 "항원"은 모든 관련된 항원성 에피토프를 포함한다. 용어 "에피토프" 또는 "항원성 결정인자"는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 지칭한다. "우세한 항원성 에피토프" 또는 "우세한 에피토프"는 기능적으로 현저한 숙주 면역 반응, 예를 들어 항체 반응 또는 T-세포 반응이 일어나는 에피토프이다. 따라서, 우세한 항원성 에피토프는, 병원균에 대한 보호성 면역 반응과 관련하여, 숙주 면역계에 의해 인지될 때 병원균에 의해 야기된 질환으로부터 보호를 초래하는 항원성 부분이다. 용어 "T-세포 에피토프"는 적합한 MHC 분자에 결합할 때 (T 세포 수용체를 통해) T 세포에 의해 특이적으로 결합된 에피토프를 지칭한다. "B-세포 에피토프"는 항체 (또는 B 세포 수용체 분자)에 의해 특이적으로 결합된 에피토프이다.
"면역 반응"은 자극에 대한 면역계의 세포, 예를 들어 B 세포, T 세포, 또는 단핵구의 반응이다. 면역 반응은 B 세포 반응일 수 있고, 이것은 항원 특이적 중화 항체와 같은 특이적 항체를 생산시킨다. 면역 반응은 또한 CD4+ 반응 또는 CD8+ 반응과 같은 T 세포 반응일 수 있다. 몇몇 경우에, 반응은 특정 항원에 특이적이다 (즉, "항원-특이적 반응"). 항원이 병원균으로부터 유래되는 경우, 항원-특이적 반응은 "병원균-특이적 반응"이다. "보호성 면역 반응"은 병원균의 유해한 기능 또는 활성을 억제하거나, 병원균에 의한 감염을 감소시키거나, 병원균에 의한 감염으로부터 초래된 증상 (사망 포함)을 감소시키는 면역 반응이다. 보호성 면역 반응은, 예를 들어 플라크 감소 검정 또는 ELISA-중화 검정에서 바이러스 복제 또는 플라크 형성의 억제, 또는 생체내 병원균 챌린지(challenge)에 대한 내성을 측정함에 의해, 측정될 수 있다.
"애쥬번트"는 비-특이적 수단으로 면역 반응의 생산을 향상시키는 제제이다. 일반적인 애쥬번트는 항원이 흡착된 광물 (alum, 수산화알루미늄, 인산알루미늄)의 현탁액; 유중수형 및 수중유형을 포함하는 에멀젼 (및 이중 에멀젼 및 가역적인 에멀젼을 포함하는 이의 변형), 리포사카라이드, 리포폴리사카라이드, 면역자극성 핵산 (예를 들어, CpG 올리고뉴클레오티드), 리포좀, Toll-유사 수용체 효능제 (특히, TLR2, TLR4, TLR7/8 및 TLR9 효능제), 및 상기 성분들의 다양한 조합물을 포함한다.
"면역원성 조성물"은 예를 들어 인간 파필로마바이러스와 같은 병원균에 대해 특이적 면역 반응을 유도할 수 있는 인간 또는 동물 피검체(예를 들어, 실험적 설정으로)에 투여하기에 적합한 조성물 물질이다. 이와 같이, 면역원성 조성물은 하나 이상의 항원 (예를 들어, 바이러스의 항원성 서브유닛, 예컨대 이의 폴리펩티드) 또는 항원성 에피토프를 포함한다. 면역원성 조성물은 또한 부형제, 담체 및/또는 애쥬번트와 같은 면역 반응을 유도 또는 향상시킬 수 있는 하나 이상의 추가 성분을 포함할 수 있다. 특정 예에서, 면역원성 조성물은 병원균에 의해 유도된 증상 또는 질환에 대해 피검체를 보호하는 면역 반응을 유도하기 위해 투여된다. 일부 경우에, 병원균에 피검체가 노출된 이후에 병원균(예를 들어, 인간 파필로마바이러스)의 복제를 억제시킴에 의해 병원균에 의해 야기된 증상 또는 질환이 예방된다 (또는 치료되거나, 예를 들어 감소 또는 개선된다). 예를 들어, 본 발명과 관련하여, 인간 파필로마바이러스에 대해 보호성 또는 완화성 면역 반응을 유도할 목적으로 피검체 또는 피검체의 집단에 투여되는 면역원성 조성물의 특정 구체예가 백신 조성물 또는 백신이다.
키메라 L1 / L2 폴리펩티드
본 발명은 백신 조성물로 제형화될 수 있고 HPV 감염 및/또는 질환에 대한 보호를 제공하는 안전하고 효과적인 백신 조성물에 대한 요구를 충족하며 현재 시판되는 백신과 상이한 폴리펩티드에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 HPV L2 폴리펩티드의 항원성 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드가 삽입된 HPV L1 폴리펩티드를 포함하는 키메라 폴리펩티드에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 HPV L1 및 L2 폴리펩티드는 특히 고-위험 암을 야기하는 HPV 유형인 HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 또는 73 및 생식기 사마귀를 야기하는 HPV 유형, 예를 들어 HPV 6 또는 11 및 피부 야기성 유형, 예를 들어 유형 HPV 5 및 HPV 8 또는 일반적인 사마귀와 관련된 평범한 유형 2 및 3, 그리고 양성 피부 사마귀와 관련된 HPV 76을 포함하는 HPV의 임의의 유전형으로부터 비롯될 수 있다.
예를 들어, 한 구체예에서, 본 발명은 인간 파필로마바이러스(HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 유형 18 폴리펩티드 또는 이의 단편을 제공한다. L2 폴리펩티드의 에피토프는 적합하게 제시될 때 인간 파필로마바이러스, 예를 들어 자연 발생 인간 파필로마바이러스로부터의 천연 (예를 들어, 전장) L2 폴리펩티드를 인지할 면역 반응을 유도할 수 있는 펩티드이다.
또 다른 구체예에서, 인간 파필로마바이러스(HPV) L2 폴리펩티드로부터의 아미노산 56-75를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 유형 16 폴리펩티드 또는 이의 단편이 제공된다.
L1 폴리펩티드는 전장 L1 폴리펩티드일 수 있다. 특정 구체예에서, L1 폴리펩티드는 N- 또는 C-말단으로부터 하나 이상의 아미노산의 결실에 의해 트렁케이션된 단편과 같은, L1의 단편이다. 따라서, 특정 구체예에서, L1 폴리펩티드는 하나 이상의 아미노산이 천연 단백질(자연에서 발견되는 단백질이다)에 비해 하나 또는 둘 모두의 말단으로부터 제거된 트렁케이트(truncate)이다. 특정 구체예에서, L1 폴리펩티드는 C-말단 결실을 지닌다. 예시적인 L1 HPV 16 서열이 도 1a에서 제공된다. 예시적인 L1 HPV 18 서열이 도 1b에서 제공된다.
트렁케이션된 L1 단백질은 예를 들어 캡소머 또는 VLP로 자가-어셈블링할 수 있다. 바이러스 유사 입자는 전형적으로 전자 현미경하에서 HPV 바이러스와 유사하다. 전형적으로 이들은 72개의 캡소머를 기반으로 하고 캡소머는 또한 오합체 유닛의 5개의 L1 폴리펩티드를 기반으로 한다. 적합하게는 본원에서 사용된 L1 단백질 중의 하나 이상은 트렁케이션된 L1 단백질을 포함하고, 다수의 HPV VLP, 키메라 폴리펩티드 또는 캡소머가 존재하는 경우, 적합하게는 조성물의 모든 L1 단백질이 트렁케이션된 L1 단백질이다. 적합하게는, 트렁케이션은 핵 위치 신호를 제거한다. 적합하게는, 트렁케이션은 C-말단 트렁케이션이다. 적합하게는, C-말단 트렁케이션은 50개 미만, 예를 들어 40개 미만의 아미노산을 제거한다. 특정한 한 구체예에서, C 말단 트렁케이션은 HPV 16으로부터 34개 아미노산 그리고 HPV 18로부터 35개 아미노산을 제거한다.
본원에서 사용된 트렁케이션된 L1 단백질은 적합하게는 기능성 L1 단백질 유도체 또는 변이체이다. 기능성 L1 단백질 유도체 또는 변이체는 면역 반응을 상승시킬 수 있고 (임의로, 적합하게 애쥬번트화될 때), 상기 면역 반응은 L1 단백질이 유래된 HPV 유형 및/또는 전장 L1 단백질을 포함하는 바이러스 (또는 이로 구성된 VLP)를 인지할 수 있다.
본 명세서에 기재된 키메라 HPV L1 폴리펩티드 내에서 L2 펩티드의 위치가 중요하다.
본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, L2 펩티드는 L1 단백질의 노출된 루프들 중의 하나 또는 C 말단 침습 아암에 위치할 수 있다. 루프 및 침습 아암은 L1이 캡소머 또는 바이러스 유사 입자의 형태일 때 발견된다 (Chen et al 2000 Mol Cell 5, 557-567).
본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, L2 펩티드는 L1 서열의 하기 영역으로부터 선택된 위치 (상기 위치는 도 1에 도시된 HPV 16 및 HPV 18 L1 참조 서열과 관련된다) 또는 다른 HPV L1 서열의 동등한 위치에 정위될 수 있다:
(i) BC 루프의 아미노산 50-61
(ii) DE 루프의 아미노산 132-142, 예를 들어 아미노산 132-141, 특히 아미노산 137-138
(iii) EF 루프의 아미노산 172-182, 예를 들어 176-182, 특히 176-179
(iv) FG 루프의 아미노산 271-290, 예를 들어 272-275, 특히 272-273
(v) HI 루프의 아미노산 345-359, 예를 들어 347-350, 특히 349-350
(vi) C 말단 아암의 아미노산 429-445, 예를 들어 423-440, 특히 HPV 16의 경우 423-424, 431-433, 또는 437-438, 및 HPV 18의 경우 424-425, 432-433 또는 439-440.
본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, HPV L2 펩티드는 L1 아미노산을 제거하지 않으며 L1 서열에 삽입될 수 있다. 대안적으로, L2 펩티드는 삽입 위치에서 L1 서열로부터 하나 이상의 아미노산을 제거하며 L1 서열에 삽입될 수 있고, 예를 들어 L2 펩티드가 삽입되는 위치에서 L1 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산이 제거될 수 있다. 따라서, L2 펩티드는 L1 서열에서 하나 이상의 아미노산을 대신할 수 있고, 예를 들어 L2 펩티드는 L2 팹티드 서열과 동등한 길이의 L1 서열을 대신할 수 있다.
두 개 이상의 L2 펩티드가 키메라 L1/L2 폴리펩티드에 존재하는 경우, 이들은 동일한 HPV 유형으로부터의 상이한 L2 펩티드일 수 있거나, 이들이 상이한 HPV 유형의 대응하는 영역으로부터 비롯될 수 있는 경우 이들은 상이한 HPV 유형으로부터의 펩티드일 수 있다.
한 구체예에서, L2 펩티드는 키메라 폴리펩티드의 초분자 어셈블리, 예를 들어 폴리펩티드 입자, 예컨대 캡소머 또는 바이러스 유사 입자 (VLP) 또는 소형 비-VLP 유사 구조의 어셈블리를 허용하는 부위로 삽입된다. 예를 들어, VLP 구조를 유지하기 위해, L2 펩티드는 캡소머-간 상호작용 및 이에 따른 VLP 형태를 유지하는데 필요한 이황화 브릿지의 형성에 수반되는 부위를 간섭하지 않는 부위에서 L1 폴리펩티드 내로 삽입된다. 그러한 초분자 구조는 예를 들어 문헌[Sadeyen et al 2003, Virology 309, 32-40; Slupetzky et al, 2007 Vaccine 25, 2001-2010, Varsani et al 2003, J of Virology 77, 8386-8393, Chen et al 2000, Deschuyteneer M et al 2010, Human Vaccines 6:5, 407-419]에 개시된 바와 같이 전자 현미경에 의해 평가될 수 있다. 전형적으로, 키메라 VLP는 천연 VLP, 즉 L1 단백질이 전장이거나 트렁케이션되었으나 L2 펩티드를 함유하지 않는 VLP와 유사하거나 동일한 크기를 갖는다. 키메라 VLP의 직경은 50nm의 범위일 수 있다. 대안적인 구체예에서, 직경이 20-35nm인 소형 비-VLP 구조가 형성된다.
L2 펩티드가 삽입된 부위는 유지되어야 하는 중화 에피토프에 따라 형태의 존재를 허락할 수 있다. 중화 에피토프는 HPV 16의 경우 V5, H16. E70 및 U4 (Christensen et al 2001, Carter et al 2003, 2006, Day et al., 2007) 및 HPV 16에 대해 J4 (Combita et al 2002)와 같은 모노클로날 항체를 이용함에 의해 검출될 수 있다. 추가의 중화 에피토프가 당 분야에 공지되어 있고 이들의 존재 또는 부재는 모노클로날 항체를 이용하여 유사하게 확인될 수 있다.
그러나, 예를 들어 특히 비-키메라 L1 VLP를 또한 함유하는 본 명세서에 기재된 조성물에서 L1 폴리펩티드 상에 모든 L1 중화 에피토프를 유지하는 것이 불필요할 수 있다. L2 펩티드의 삽입에 적합한 부위, 예를 들어 표 1에 도시된 부위들은 특히 VLP로서 제시될 때 L1 폴리펩티드의 표면에서 L2 펩티드를 노출시킨다.
표 1 & 2는 L2 펩티드에 적합한 삽입 부위를 제공할 수 있는 HPV L1 노출된 영역(Carter et al 2003, Bishop et al 2007, Chen et al 2000), 및 그러한 영역 내에 있는 고가변 영역을 나타낸다. 적합하게는, L2 펩티드가 C 말단 침습 아암, 또는 DE 루프나 FG 루프 또는 HI 루프로 삽입된다. 적합하게는, L2 펩티드가 루프의 고가변 영역 또는 C 말단 아암으로 삽입된다. 표 1에 도시된 영역은 HPV 16에 대한 것이고; 유사한 영역이 그 밖의 HPV 유형의 L1에서 확인될 수 있으며 표 2에서 HPV 18 L2에 대해 정의된다.
표 1: HPV 16에 대해 HPV L1 노출된 루프
Figure pct00001
표 2: HPV 18 L1 노출된 루프
Figure pct00002
본 명세서에 기재된 키메라 L1 폴리펩티드, 캡소머, 또는 VLP에서 V5 모노클로날 항체에 의해 인지된 HPV 16의 에피토프와 같은 면역지배적 에피토프의 영역 내로 또는 영역으로 L2 펩티드를 삽입하는 것이 이로울 수 있다. 이는 그 면역지배성을 상실한 면역지배적 에피토프를 유도할 수 있어서, 또 다른 L1 에피토프가 면역지배적이 되게 할 수 있고, 이것은 또한 보다 양호한 교차 보호를 초래할 수 있다. 예를 들어, V5 항체에 의해 인지된 에피토프의 영역에서 FG 루프로 삽입된 L2 펩티드는 에피토프가 그 면역지배성을 상실하게 하고 서브지배적 에피토프가 면역지배적이 되게 할 수 있다.
두 개 이상의 L2 펩티드가 본 명세서에 기재된 조성물에 분리된 폴리펩티드 (또는 캡소머, 또는 VLP)로 존재하는 경우, L2 펩티드는 상이한 HPV 유형으로부터의 L1 또는 동일한 HPV 유형으로부터의 L1에 존재할 수 있다.
하나의 폴리펩티드 (또는 캡소머 또는 VLP)에 두 개 이상의 L2 펩티드를 포함하는 구체예에서, L2 펩티드는 L1 서열의 동일하거나 상이한 부위에 삽입될 수 있다. L2 펩티드가 동일한 부위에 삽입된 경우, 이것은 동일한 루프에 존재할 수 있거나 동일한 루프의 동일한 고가변 영역에 존재할 수 있다. L2 펩티드들 사이에 짧은 스트레치(stretch)의 아미노산, 예를 들어 L2 펩티드들 사이에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산을 갖는 것이 이로울 수 있다.
L2 펩티드는 하나 이상의 항원성 에피토프를 포함하도록 선택된다. 선택된 에피토프 (L1 폴리펩티드에 혼입된)는 일반적으로 하나 이상의 천연 L2 폴리펩티드, 예를 들어 선택된 에피토프에 존재하는 아미노산을 포함하는 L2 폴리펩티드에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다. 유리하게는, 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 하나 이상의 추가의 천연 L2 단백질에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같이 사용하기 위한 L2 펩티드는 하기 펩티드로부터 선택될 수 있다:
L2의 아미노산 잔기 17-36을 포함하는 펩티드;
L2의 아미노산 잔기 56-75를 포함하는 펩티드;
L2의 아미노산 잔기 96-115를 포함하는 펩티드;
L2의 아미노산 잔기 108-120을 포함하는 펩티드.
예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이 사용하기 위한 L2 펩티드는 하기 펩티드로부터 선택될 수 있다:
L2의 아미노산 잔기 17-36으로 구성된 펩티드;
L2의 아미노산 잔기 56-75로 구성된 펩티드;
L2의 아미노산 잔기 96-115로 구성된 펩티드;
L2의 아미노산 잔기 108-120으로 구성된 펩티드.
도 3은 L2 아미노산 서열의 위치 17 내지 36, 56 내지 75, 96 내지 115 및 108 내지 120으로부터의 HPV 16 L2 펩티드 및 다양한 그 밖의 HPV 유형의 대응하는 영역으로부터의 L2 펩티드에 대한 HPV L2 서열을 도시한다. 다른 공지된 HPV 유형에 대한 문헌에서 이용가능한 서열을 이용하여 참조 서열로서 HPV 16 L2 서열에 따라 추가의 HPV 유형으로부터의 대응하는 L2 펩티드를 고안할 수 있다(SwissProt (Boeckmann et al., 2003) or Genbank (Benson et al., 2008) 참조).
명세서 전반에 걸쳐서, L2 서열이 유래된 영역을 결정하기 위한 참조 서열로서 HPV 16의 L2 서열을 이용한다. 넘버링은 N 말단의 1번 아미노산으로부터 시작하며, 본 명세서에 제시된 임의의 서열의 왼쪽 끝에 N 말단이 있고 오른쪽에 C 말단이 있다. 다른 HPV 유형으로부터의 동등한 특정 펩티드에 대한 실질적인 넘버링이 또한 하기 특수한 펩티드의 목록에 제공된다.
적합하게는, L2 펩티드는 임의로 본 명세서에 기재된 바와 같이 변형된 L2 56-75 펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO: 8-15, 또는 SEQ ID NO: 29를 포함하거나 이로 구성된다. L2 56-75 펩티드는 HPV 유형간에 실질적인 서열 동일성, 즉 상동성을 나타낸다.
본 발명에 따른 L2 펩티드는 SEQ ID NO: 1 내지 31로 표시된 서열들 중의 하나 이상 또는 두 개 이상을 포함하거나, 이들로 구성될 수 있다.
L2 펩티드(들)는 아미노산 17-36 (예를 들어, 20mer) 사이에 있는 아미노산의 세그먼트로부터 선택될 수 있고, 예를 들어 다음과 같다:
Figure pct00003
L2 펩티드(들)는 아미노산 56-75 (예를 들어, 20mer) 사이에 있는 아미노산의 세그먼트로부터 선택될 수 있고, 예를 들어 다음과 같다:
Figure pct00004
L2 펩티드(들)는 또한 20개보다 짧은 아미노산일 수 있고, 예를 들어 L2 펩티드는 8개를 초과하거나 8개와 동등한 임의의 수의 아미노산, 예컨대 9개 아미노산, 10개 아미노산, 11개 아미노산, 12개 아미노산, 15개 아미노산, 20개 아미노산, 또는 30개 이하의 아미노산 (또는 8 내지 30 사이 정수의 아미노산)일 수 있다. 예를 들어, L2 펩티드는 하기 예시적인 8-mer와 같은 아미노산 56-75로부터의 8개 아미노산 세그먼트일 수 있다.
Figure pct00005
L2 펩티드(들)는 또한 아미노산 96-115 (예를 들어, 20mer) 사이에 있는 아미노산의 세그먼트로부터 선택될 수 있고, 예를 들어 다음과 같다:
Figure pct00006
L2 펩티드(들)는 또한 아미노산 108-120 (예를 들어, 20mer) 사이에 있는 아미노산의 세그먼트로부터 선택될 수 있고, 예를 들어 다음과 같다:
Figure pct00007
상기 임의의 펩티드는 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환에 의해, 예를 들어 하나, 둘 또는 여러 개 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환에 의해 변형될 수 있다. 예를 들어, L2 펩티드 17-36에서 두 시스테인 사이에 있는 영역(22-28) 및 시스테인들 중 하나 또는 둘 모두가 결실될 수 있다. 이러한 변형은 HPV 16 펩티드에 대해 제시된다 (SEQ ID NO: 24 및 25). 또 다른 예에서, HPV 유형 51 펩티드 17-36의 C 말단으로부터 네 번째 아미노산에 위치한 (즉, 위치 32) 발린(V)은 상기 도시된 다른 HPV 유형들 모두의 이 위치에서 발견된 아미노산인 이소류신(I)으로 치환될 수 있다.
또 다른 예에서, 56-75로부터의 L2 펩티드는 C 말단에 있는 영역 GGLGI (SEQ ID NO: 32)가 유지되는 경우 크기가 감소될 수 있는데, 상기 영역을 유지하는 이유는 이것이 HPV 유형들간 교차 반응성에 중요한 것으로 나타났기 때문이다 (예를 들어, SEQ ID NO:29에서처럼) (Kondo et al., 2007). 따라서, 본 명세서에 기재된 L2 펩티드는 서열 GGGLGI를 포함할 수 있다.
임의로, 글리신 잔기와 같은 하나 이상의 아미노산의 스페이서가 또한 L2 펩티드의 N 또는 C 말단에 포함될 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 하나 또는 두 개 또는 세 걔의 첨가된 스페이서 아미노산, 예를 들어 아미노 또는 카르복시 말단에 (또는 두 개 이상의 L2 펩티드가 존재하는 결합된 펩티드 사이에) 첨가된 하나 또는 두 개 또는 세 개의 아미노산 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 일반적으로, 스페이서는 L1 서열에 면역원성 펩티드를 연결시키거나, 이들 사이에 약간의 최소 간격 또는 그 밖의 공간적 관계를 유지하는 것 외에 특이적 생물학적 활성을 지니지 않을 것이다. 스페이서는 스페이서의 부재와 비교하여 L1 VLP의 올바른 형태 및/또는 삽입된 L2 펩티드의 효과적이거나 개선된 제시를 유지하는데 필요하거나 도움이 될 수 있다.
상기 임의의 펩티드는 예를 들어 하나 이상의 아미노산의 삽입 (첨가), 결실 또는 치환에 의해 변형될 수 있다. 예를 들어, L2 펩티드는 천연 (즉, 자연 발생) HPV L2 서열의 L2 서열과 상이한 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 천연 서열에 비해 서열 내에 하나 또는 두 개의 아미노산 삽입 또는 치환, 또는 하나 또는 두 개 또는 여러 개 아미노산, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 10개 이하의 아미노산의 결실을 지녀서 예를 들어 두 시스테인간 이황화 결합 및/또는 시스테인 사이에 있는 영역의 발생을 제거할 수 있다. 특수한 예에서, 천연 L2 서열에 관해 본 발명의 L2 펩티드에 존재하는 변형은 하나 또는 두 개의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환, 및/또는 두 시스테인 잔기 사이에 10개 이하의 연속하는 아미노산의 결실로 제한된다.
L2 서열에 대한 변형이 본 명세서에 개시된 펩티드에서 이루어지는 경우, 그러한 변형은, 펩티드내 아미노산의 실질적인 비율 또는 적어도 50% 또는 적어도 70% 또는 적어도 90% 또는 적어도 95%가 천연 L2 서열의 아미노산에 대응하도록 제한될 수 있다.
대안적으로 또는 추가로, 임의의 특정 L2 펩티드는 본 명세서에 개시된 두 개 또는 세 개 이상의 L2 펩티드의 키메라일 수 있다. L2 서열에 대한 이러한 임의의 변형에서, L2 서열의 면역원성 특성은 유지된다. 즉, 요망되는 면역 반응을 유도하는 펩티드내 L2의 에피토프 또는 에피토프들이 유지된다. 상기 변형의 목적은 L2 펩티드의 성질을 개선시키고, 예를 들어 다른 HPV 유형으로부터의 L2와의 교차 반응성을 개선시키기 위한 것일 수 있다.
따라서, L2 펩티드는 하기 펩티드로부터 선택될 수 있다:
(a) 하나 이상의 아미노산 첨가, 결실 및/또는 치환을 포함하는 L2의 아미노산 잔기 17-36에 대응하는 펩티드;
(b) 하나 이상의 아미노산 첨가, 결실 및/또는 치환을 포함하는 L2의 아미노산 잔기 56-75에 대응하는 펩티드;
(c) 하나 이상의 아미노산 첨가, 결실 및/또는 치환을 포함하는 L2의 아미노산 잔기 96-115에 대응하는 펩티드;
(d) 하나 이상의 아미노산 첨가, 결실 및/또는 치환을 포함하는 L2의 아미노산 잔기 108-120에 대응하는 펩티드;
상기에서, 하나 이상의 삽입, 결실 및/또는 치환은 천연 L2 폴리펩티드에 대한 것이다.
하기는 변형된 L2 펩티드의 예이다.
Figure pct00008
(두 개의 시스테인 사이에 가변 영역 (23-28)이 없고 하나의 시스테인을 제거함)
Figure pct00009
(두 개의 시스테인 사이에 가변 영역이 없고, 하나의 시스테인을 제거하며 위치 32에서 Ile를 Val으로 치환함 (I32V))
Figure pct00010
(I32V 함유함)
Figure pct00011
(V33I 함유함)
Figure pct00012
(N34P 함유함)
L2 펩티드는 또한 아미노산의 두 상이한 세그먼트, 예를 들어 아미노산 17-36 및 아미노산 56-75 (20 mer) 예를 들어
Figure pct00013
(I32V을 지님)으로부터 선택된 연쇄체일 수 있다.
SEQ ID NO: 30 및 31에 의해 표시된 두 개의 펩티드는 상기 펩티드들 중 두 개의 키메라이고, 둘 모두의 시스테인이 없고 시스테인간 영역(22-28)이 없는 펩티드 17-36으로부터의 영역을 56-75 펩티드로부터의 영역 56-63 (HPV간에 보존됨)과 함께 함유한다. 유사한 펩티드를 다른 HPV 유형으로부터 작제할 수 있다.
본원에서 논의된 L1 서열 내의 임의의 위치에서 상기 나열된 펩티드 중 임의의 펩티드가 본 명세서에 기재된 HPV L1, 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP에 포함될 수 있음이 명백할 것이다.
다수의 L2 펩티드가 본 발명에 따른 조성물에 존재하는 경우, 이들은 동일 HPV 유형으로부터의 두 개 이상의 상이한 L2 펩티드, 즉 L2의 상이한(중첩 포함) 영역으로부터의 펩티드일 수 있거나, 이들은 상이한 HPV 유형의 동일 영역, 예를 들어, 17-36 영역으로부터의 두 개 이상의 상이한 L2 펩티드일 수 있다. 두 개 이상의 L2 펩티드가 존재하는 경우, 이는 동일한 HPV 유형으로부터의 다수의 펩티드 및 상이한 HPV 유형으로부터의 다수의 펩티드 둘 모두를 포함할 수 있다.
두 개 이상의 상이한 L2 펩티드가 본 발명에 따른 조성물에 존재하는 경우, 각각의 펩티드는 상이한 HPV 유형으로부터의 HPV L1 VLP, 예를 들어, HPV 16 및 HPV 18 L1 VLP로 존재할 수 있거나, 이들은 동일한 HPV 유형으로부터의 HPV L1 VLP, 예를 들어, HPV 16 또는 HPV 18 L1 VLP일 수 있다. 적합하게는, 본 명세서에 기재된 L2 펩티드는 HPV 16 및/또는 HPV 18로부터의 HPV VLP로 존재한다.
적합하게는, 본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, L2 펩티드는 L2 단백질로부터의 8개 이상의 연속하는 아미노산 잔기를 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, HPV L2 펩티드 또는 펩티드들은 30개 이하의 아미노산 잔기 길이일 수 있다.
본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, L2 펩티드는 HPV L2의 N 말단의 아미노산 1-200, 특히 HPV L2의 아미노산 1-150으로부터 선택될 수 있다. 따라서, L2 펩티드는 HPV L2의 영역 1-200 또는 1-150으로부터의 8개 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며, 상기 아미노산 잔기는 영역 1-200 또는 1-150으로부터의 8개 이상의 연속하는 아미노산 잔기일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "L2 펩티드는 8개 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다"는 L2로부터 유래된 임의의 8개 이상의 아미노산의 펩티드를 의미하나, 펩티드는 적합하게는 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20개 이상의 아미노산 길이이다. 한 구체예에서, 본 발명의 L2 펩티드는 100개 미만의 아미노산, 적합하게는 50개 미만의 아미노산, 또는 40개 미만의 아미노산의 짧은 펩티드이다. 예를 들어, 펩티드는 30개 이하의 아미노산 길이, 또는 20 또는 21개 이하의 아미노산 길이일 수 있다. 전장 L2 단백질은 본 명세서에 기재된 키메라 L1/L2 폴리펩티드와 관련하여 L2의 펩티드가 아닌 것으로 간주된다.
본 발명에서 L2 펩티드에 대한 최소의 필요조건은 천연 L2 단백질에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 펩티드이다. 따라서, L2 펩티드는 통상적으로 L2 폴리펩티드의 8개 이상의 연속하는 아미노산을 포함하고, 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 본 발명에 따른 조성물에서 상이한 L2 펩티드 중 하나 이상은 25개 이하의 아미노산 또는 30개 이하 또는 40개 이하의 아미노산 길이일 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명에 따른 조성물에서 사용되는 상이한 L2 펩티드 모두는 25개 이하의 아미노산 또는 30개 이하 또는 40개 이하의 아미노산 길이이다.
본 발명에 따른 L2 펩티드는 적합하게는 동종 HPV 감염, 즉, 서열이 비롯된 HPV 유형에 의한 감염에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다.
적합하게는, L2 펩티드는 두 개 이상의 상이한 HPV 유형에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다. HPV는 핵산 유사성을 기초로 한 유형에 의해 분류된다. 다수의 HPV 유형이 문헌에 기재되어 있다. 따라서, 본 발명과 관련하여, L2 펩티드는 특수한 HPV 유형, 예를 들어, 특별히 참조된 HPV 유형, 예를 들어, HPV 유형 18(또는 임의의 달리 참조된 HPV 유형)에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 또한, 본 명세서에 기재된 키메라 L1/L2 폴리펩티드와 관련하여 제시되는 L2 펩티드는 또한 참조된 HPV 유형이 아닌 HPV 유형에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다. 참조의 용이성을 위해, 참조된 HPV 유형이 아닌 HPV 유형은 "비-HPV 유형"으로 언급된다. 예를 들어, 참조된 HPV 유형이 HPV 18인 경우, HPV 18이 아닌 임의의 다른 유형은 비-HPV 유형 18 펩티드(또는 폴리펩티드 또는 바이러스)로 언급될 수 있다. 유사하게, 임의의 참조된 HPV 유형과 관련하여, 참조된 HPV 유형이 아닌 임의의 다른 유형은 비-HPV 유형으로 언급될 수 있다.
예를 들어, L2 펩티드는 상이한 HPV 유형으로부터의 하나 이상의 추가 L2 단백질에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 본 명세서에 기재된 임의의 구체예에서, HPV L2 펩티드 또는 펩티드들은 또 다른 HPV 유형에 대해 교차 반응, 교차 중화 및/또는 교차 보호 반응을 유도할 수 있다. 적합하게는, 두 개(또는 그 초과)의 유형 사이에서 80%를 초과하는 HPV 유형들간 높은 수준의 서열 동일성("상동성")을 나타내는 L2 펩티드가 선택된다. 일부 경우에, L2 펩티드는 유형 사이에서 85%를 초과하는 서열 동일성, 또는 유형 사이에서 90%를 초과하는 서열 동일성, 또는 유형 사이에서 95%를 초과하는 서열 동일성을 갖는다. 특정 구체예에서, L2 펩티드는 두 개 이상의 HPV 유형 사이에서 100%의 서열 동일성을 갖도록 선택된다. 이러한 L2 펩티드는 L2 "콘센서스" 서열로 본원에서 언급될 수 있다.
예를 들어, 특정 구체예에서, L2 펩티드는 HPV 유형 33과 HPV 유형 11 사이에서 동일(즉, 100%의 서열 동일성을 가짐)한 콘센서스 서열이다. 예를 들어, 특정한 예시적 구체예에서, 콘센서스 서열은 L2의 아미노산 17-36 사이에서 동일하다. 또 다른 구체예에서, L2 펩티드는 HPV 유형 58과 HPV 유형 6 사이에서 동일한 콘센서스 서열이다. 예를 들어, 특정한 예시적 구체예에서, 콘센서스 서열은 HPV 유형 58 및 HPV 유형 6의 아미노산 56-75 사이에서 동일하다.
추가의 HPV 유형에 대해 면역 반응을 유도할 수 있는 교차 반응성 L2 펩티드는 본 발명에 따라 확인될 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 상이한 HPV 유형으로부터의 L2 서열은 HPV 유형 사이에서 높은 유사성을 갖는 영역을 확인하기 위해 정렬될 수 있다(도 3 및 본원에 제시된 다른 서열 참조). 상기 정렬을 수행하고, 서열 상동성이 존재하는지를 확인하기 위해 다수의 서열 프로그램이 이용가능하다. 이는 관심 HPV 유형에서 가장 유사하고, 이에 따라 상기 HPV 유형 중 일부 또는 전부 사이에서 잠재적으로 교차 반응성인 L2 펩티드의 선택을 가능케 할 수 있다.
본 발명의 L2 펩티드는 임의의 적합한 면역원성 L2 펩티드일 수 있다. L2 펩티드는 당 분야에 널리 공지된 표준 기술에 의해 면역원성 및 교차 반응성에 대해 시험될 수 있다. 예를 들어, 펩티드 또는 키메라 L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 펩티드를 함유하는 VLP는 동물 모델 또는 인간 모델에 주사될 수 있고, 항체 및/또는 세포 면역 반응의 측정은, 예를 들어, ELISA 또는 사이토카인 분석/측정 각각에 의해 수행될 수 있다. 항체를 스크리닝하는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있다. ELISA는 항체의 교차 반응성을 평가하는데 사용될 수 있다. 항체는, 예를 들어, 슈도바이러스 중화 검정을 이용하여 중화 및 교차 중화 특성에 대해 시험될 수 있다. 적합한 슈도바이러스 중화 검정은 문헌[Dessy et al 2008 and Pastrana et al 2004]에 기재되어 있다.
또한, 다수의 교차 반응성 L2 펩티드가 이미 확인되었다. 예를 들어, HPV 6 및 16에 대한 공통의 중화 에피토프는 HPV 16 L2의 영역 (aa) 108-120에서 발견되었다(Kawana et al 1998, 1999, 2001). 또 다른 예에서, HPV 16으로부터 (aa) 17-36, 56-75, 96-115 L2 펩티드를 이용한 래빗의 면역화는 교차 중화 항체를 발생시킬 수 있다(Kondo et al 2007, 2008). 또 다른 예에서, HPV 16으로부터의 L2의 (aa) 17-36이, BALB/c 마우스에서의 수동 면역화 및 공격 후에 보호성이고 광범위한 교차-중화 에피토프로서 확인되었다(Gambhira et al 2007). 유사한 보호가 HPV 16으로부터의 L2의 aa 17-36을 함유하는 합성 지질펩티드 백신을 이용한 백신접종 후에 문헌[Alphs et al 2008]에 의해 BALB/C 마우스에서 밝혀졌다.
적합하게는, L2 펩티드 또는 펩티드들은 교차 반응 펩티드이며, 이에 따라 이들은 L2 펩티드가 유래된 HPV 유전형의 L2 뿐만 아니라, 유래된 것이 아닌 HPV 유전형으로부터의 L2 단백질 또는 L2 펩티드를 인지하는 면역 반응을 유도할 수 있다. 적합하게는, 펩티드는 하나 또는 두 개 이상의 다른 유전형, 적합하게는 자궁경부암의 원인과 관련된 유전형, 예를 들어, HPV 유형 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 또는 73, 또는 생식기 사마귀와 관련된 유전형, 예를 들어, HPV 6 또는 11, 또는 피부암과 관련된 유전형, 예를 들어, HPV 5, 8 또는 38과 교차 반응성이다.
한 구체예에서, L2 펩티드 중 하나 이상은 HPV 유형 16 또는 이의 변형된 형태로부터 선택되고, 이는 하나 이상의 다른 암을 야기시키는 HPV 유형, 예를 들어, HPV 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 또는 73으로부터 선택된 유형 및/또는 하나 이상의 생식기 사마귀를 야기시키는 HPV 유형, 예를 들어, HPV 6 또는 11 및/또는 하나 이상의 피부암을 야기시키는 HPV 유형, 예를 들어, HPV 5, 8 또는 38에 대해 교차 반응성이다. 또 다른 구체예에서, L2 펩티드 중 하나 이상은 HPV 유형 18 유형 또는 이의 변형된 형태로부터 선택된다.
적합하게는, 본 발명에 사용되는 L2 펩티드는 L2 펩티드가 유래된 HPV 유형과 상이한 HPV 유형의 HPV를 중화시킬 수 있는 면역 반응인 교차 중화 면역 반응을 발생시킬 수 있다. 교차 중화는 본원의 실시예 3에 기재된 위중화 (pseudoneutralisation) 검정과 같은 당 분야에 공지된 검정에 의해 시험될 수 있다.
적합하게는, L2 펩티드는 교차 보호를 제공할 수 있고, 적합하게는 HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 또는 73으로부터 선택된 자궁경부암과 관련된 HPV 유형 중 하나 이상 및/또는 하나 이상의 생식기 사마귀를 야기시키는 HPV 유형, 예를 들어, HPV 6 또는 11 및/또는 하나 이상의 피부암을 야기시키는 HPV 유형, 예를 들어, HPV 5, 8 또는 38에 대한 교차 중화 에피토프를 포함한다.
교차 보호는 적합하게는 L2 펩티드가 두 개 이상의 HPV 유형에 의해 야기되는 감염/질병에 대한 보호 면역 반응을 발생시킬 수 있는 경우에 발생한다. 예를 들어, 키메라 L1/L2 폴리펩티드와 관련하여 제시된 경우, L2는 L2 펩티드가 수득된 유형, 및 HPV의 하나 이상의 추가 유형에 대해 보호하는 반응을 유도할 수 있다. 상기 논의된 바와 같이, 교차 보호는 또한, 키메라 L1/L2 폴리펩티드와 관련하여 콘센서스 L2 펩티드가 선택되고, 제시되는 경우에 발생할 수 있다. L2 펩티드 또는 L1 VLP가 유래된 것과 상이한 다양한 HPV 유형에 대한 교차 보호는 동물 모델, 예를 들어, 문헌[Alphs et al 2008]에 기재된 마우스 모델을 이용하여 확인될 수 있다.
교차 보호는 백신접종되지 않은 그룹에 비해 제공된 L2 펩티드로 백신접종된 개체에서의 HPV 유형의 그룹에 대한 감염 및/또는 질병(감염은 부수적 또는 지속적 감염임)의 발병률을 비교함으로써 평가될 수 있다. 유형 또는 유형 그룹에 대한 완전한 교차 보호가 본 발명에 따라 요구되지는 않고, 확실히, 임의의 수준의 교차 보호가 이점을 제공한다. 적합하게는, 관찰된 교차 보호의 수준은 동등한 백신접종되지 않은 그룹보다 5% 더 적은 비-백신 HPV 유형 또는 유형들과 관련된 감염 및/또는 질병, 더욱 적합하게는 10% 이하, 15% 이하, 20% 이하, 25% 이하, 30% 이하, 35% 이하, 40% 이하, 45% 이하, 50% 이하, 55% 이하, 60% 이하, 65% 이하, 70% 이하, 80% 이하, 90% 이하 또는 심지어는 100% 이하의 더 적은 감염 및/또는 질병을 가져야 한다.
교차 보호는 백신접종자 및 대조군에서의 다양한 HPV 유형에 특이적인 핵산의 존재를 검출함으로써 평가될 수 있다. 예를 들어, 검출은 WO03/014402호(US2007031828A1) 및 이의 참조문헌에 기재된 기술, 특히 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 WO 99/14377호(US6482588B1), 및 문헌[Kleter et al, (Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517)]에 기재된 LiPA 시스템을 이용한 HPV DNA의 비특이적 증폭 및 이후의 DNA 유형의 검출로 수행될 수 있다. 그러나, 각각의 관심 HPV 유형에 특이적인 프라이머를 이용한 유형 특이적 PCR과 같은 임의의 적합한 방법이 샘플 내의 HPV DNA의 검출에 사용될 수 있다. 적합한 프라이머는 당업자에게 공지되어 있거나, 다양한 HPV 유형의 서열이 공지되어 있는 경우 용이하게 작제될 수 있다.
적합하게는, 교차 보호는 남성 및/또는 여성 집단, 적합하게는 HPV 감염에 대해 혈청음성이거나, HPV 16 및 18에 대해 혈청음성인 여성, 적합하게는 성 활동 전의 청년기 여성에서 관찰된다.
교차 보호(대조군에 비한 백신접종된 그룹에서 관찰된 보호에 의해 평가됨)는 적합하게는 종양원성 유형, 예를 들어, 고위험 암 유형 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 또는 73의 그룹, 또는 집합적으로 고위험 암 유형의 그룹, 예를 들어, 임의의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14개, 또는 확실히 상기 고위험 암 유형 모두 중 어느 하나에 대해 관찰된다. 상기 고위험 암 유형 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 및 14개의 모든 가능한 조합이 특히 고려된다.
L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산
본 발명의 또 다른 특징은 상기 언급된 키메라 L1/L2 폴리펩티드 중 임의의 것을 엔코딩하는 핵산 분자이다.
이러한 핵산은 자연 발생하지 않는 서열을 갖거나, 2개의 달리 분리된 서열의 세그먼트의 인공적 조합에 의해 제조되는 서열을 갖는 "재조합" 핵산일 수 있다. 예를 들어, 재조합 키메라 L1/L2 핵산은 HPV L1 폴리펩티드(또는 이의 단편)를 엔코딩하는 하나 이상(종종, 두 개 이상)의 핵산 세그먼트에 작동가능하게 연결된 HPV L2 펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 이러한 인공적 조합은 화학적 합성, 또는 더욱 일반적으로 핵산의 분리된 세그먼트의 인공적 조작, 예를 들어, 유전 공학 기술에 의해 달성될 수 있다. 일관성을 위해, "재조합" 단백질은 재조합 핵산(숙주 세포, 예를 들어, 박테리아 또는 진핵생물 세포로 도입될 수 있음)에 의해 엔코딩되는 것이다.
특정 구체예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 재조합 핵산은 선택된 원핵생물 또는 진핵생물 숙주 세포에서의 발현에 최적화된 코돈이다.
복제 및 발현을 촉진하기 위해, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산이 벡터, 예를 들어, 원핵생물 또는 진핵생물 발현 벡터로 통합될 수 있다. 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포가 또한 본 발명의 특징이다. 바람직한 숙주 세포는 원핵생물(즉, 박테리아) 숙주 세포, 예를 들어, 이.콜라이(E.coli) 뿐만 아니라 진균(예를 들어, 효모) 세포, 곤충 세포, 및 포유동물 세포(예를 들어, CHO, VERO 및 HEK293 세포)를 포함하는 다수의 진핵생물 숙주 세포를 포함한다.
복제 및 발현을 촉진하기 위해, 핵산은 벡터, 예를 들어, 원핵생물 또는 진핵생물 발현 벡터로 통합될 수 있다. 본 명세서에 기재된 핵산은 다양한 벡터(예를 들어, 박테리아 플라스미드; 파아지 DNA; 바쿨로바이러스; 효모 플라스미드; 플라스미드 및 파아지 DNA의 조합물로부터 유래된 벡터, 바이러스 DNA, 예를 들어, 백시니아, 아데노바이러스, 파울 폭스 바이러스, 위광견병(pseudorabies) 바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 레트로바이러스 및 그외 다수의 바이러스) 중 어느 하나에 포함될 수 있고, 가장 일반적으로 벡터는 폴리펩티드 발현 생성물을 생성시키기에 적합한 발현 벡터일 것이다. 발현 벡터에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산은 통상적으로 직접적인 mRNA 합성을 위한 적절한 전사 조절 서열(프로모터, 및 임의로 하나 이상의 인핸서) 근처에서 상기 전사 조절 서열로의 배향으로 배열된다. 즉, 관심 폴리뉴클레오티드 서열은 적절한 전사 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 이러한 프로모터의 예는 CMV의 즉시 초기 프로모터, LTR 또는 SV40 프로모터, 바쿨로바이러스의 폴리헤드린 프로모터, 이.콜라이(E.coli) lac 또는 trp 프로모터, 파아지 T7 및 람다 PL 프로모터, 및 원핵생물 또는 진핵생물 세포 또는 이의 바이러스에서의 유전자의 발현을 조절하는 것으로 공지된 다른 프로모터를 포함한다. 또한, 발현 벡터는 통상적으로 번역 개시를 위한 리보솜 결합 부위, 및 전사 종료자를 함유한다. 벡터는 임의로 발현을 증폭시키기에 적절한 서열을 포함한다. 또한, 발현 벡터는 임의로 형질전환된 숙주 세포의 선택을 위한 표현형 특성, 예를 들어, 진핵생물 세포 배양을 위한 디히드로폴레이트 환원효소 또는 네오마이신 내성, 또는 이.콜라이(E.coli)에서의 카나마이신, 테트라사이클린 또는 앰피실린 내성을 제공하기 위한 하나 이상의 선택 마커를 포함한다.
발현 벡터는 또한, 예를 들어, 번역의 효능을 개선시키기 위해 추가의 발현 요소를 포함할 수 있다. 이러한 신호는, 예를 들어, ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 예를 들어, 번역 개시 코돈 및 관련 서열 요소가 관심 폴리뉴클레오티드 서열(예를 들어, 천연 개시 코돈)과 동시에 적절한 발현 벡터에 삽입된다. 이러한 경우, 추가 번역 조절 신호는 필요하지 않다. 그러나, 폴리펩티드 코딩 서열 또는 이의 일부만이 삽입되는 경우, ATG 개시 코돈을 포함하는 외인성 번역 조절 서열이 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산의 번역을 위해 제공된다. 개시 코돈은 관심 폴리뉴클레오티드 서열의 번역을 보장하기 위해 올바른 해독틀로 위치된다. 외인성 전사 요소 및 개시 코돈은 천연 및 합성 둘 모두를 포함하는 다양한 기원의 것일 수 있다. 요망시, 발현의 효율은 사용하는 세포 시스템에 적절한 인핸서의 포함에 의해 추가로 증가될 수 있다(Scharf et al. (1994) Results Probl Cell Differ 20: 125-62; Bitter et al. (1987) Methods in Enzymol 153:516-544).
일부 예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산(예를 들어, 벡터)은 숙주 세포로 도입되는 경우 엔코딩되는 폴리펩티드의 발현을 증가시키고/시키거나 최적화시키기 위해 선택되는 하나 이상의 추가 서열 요소를 포함한다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산은 인트론 서열, 예를 들어, 인간 헤르페스바이러스 5 인트론 서열(예를 들어, SEQ ID NO: 13 참조)을 포함한다. 인트론은 재조합 작제물에 적절히 위치되는 경우에 동종 및 이종 핵산의 발현을 향상시키는 것으로 반복적으로 입증되었다.
키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 재조합 핵산의 생성을 통한 당 분야에서 통상적인 기술 중 하나를 안내하는데 충분한 예시적 절차는 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989; Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3d ed., Cold Spring Harbor Press, 2001; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, 1992 (및 보충 문헌 2003); and Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, 4th ed., Wiley & Sons, 1999]에서 발견될 수 있다.
상이한 HPV 유형으로부터의 HPV L1 및 L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 예시적 핵산 서열은 당 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 다수의 예가 문헌에 기재되어 있으며, 유전자은행(GenBank) 데이터베이스에서 공적으로 이용가능하다. 이들은 용어 인간 파필로마바이러스(또는 HPV) 및 특정 단백질(예를 들어, L1 또는 L2) 및 관심 유형을 이용하여 적절한 질의에 의해 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 이러한 L1 및 L2 핵산은 상기 기재된 재조합 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산을 생성시키는데 이용될 수 있다.
예시적 L1 및 L2 폴리펩티드와 서열 동일성을 공유하는 키메라 L1/L2 핵산 변이체를 엔코딩하는 추가 핵산은 당업자에 의해 생성될 수 있다. 통상적으로, 핵산 변이체는 키메라 L1/L2 폴리펩티드(예를 들어, L1 폴리펩티드 부분 내)에 존재하는 아미노산 잔기와 1%, 또는 2%, 또는 5%, 또는 10%, 또는 15%, 또는 20% 이하로 상이한 폴리펩티드를 엔코딩할 것이다. 즉, 엔코딩된 폴리펩티드는 참조 키메라 폴리펩티드와 80%, 또는 85% 이상, 더욱 일반적으로 약 90% 이상, 예를 들어 95%, 또는 심지어 98% 또는 99%의 서열 동일성을 공유한다. 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 자신이 유전 부호의 중복성으로 인해 보다 덜한 서열 동일성을 공유할 수 있음이 당업자에 의해 즉시 이해될 것이다. 일부 예에서, 엔코딩된 L1/L2 폴리펩티드는 유래된 자연 발생 폴리펩티드의 아미노산 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는다. 이러한 차이는 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환을 발생시킬 수 있다. 변이체는 통상적으로 뉴클레오티드 잔기의 약 1%, 또는 2%, 또는 5%, 또는 10%, 또는 15%, 또는 20% 이하로 상이하다. 예를 들어, 변이체 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산은 1개, 또는 2개, 또는 5개 이하, 또는 약 10개 이하, 또는 약 15개 이하, 또는 약 50개 이하, 또는 약 100개 이하의 뉴클레오티드 차이를 포함할 수 있다(예를 들어, L1 부분 내, 및/또는 상기 기재된 변형된 L2 펩티드를 엔코딩하는 부분 내). 따라서, 본 명세서에 기재된 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산과 관련하여 변이체는 통상적으로 자연 발생 L1 및 L2 요소로 구성된 참조 서열과 80% 이상, 또는 85%, 더욱 일반적으로 약 90% 이상, 예를 들어, 95%, 또는 심지어 98% 또는 99%의 서열 동일성을 공유한다.
상기 기재된 변이체 핵산 외에, 자연 발생 L1 및 L2 폴리펩티드에 상응하는 L1 및 L2 서열을 갖는 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 핵산에 하이브리드되는 핵산이 또한 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는데 사용된다. 당업자는 상기 논의된 서열 동일성 % 척도 외에, 2개의 핵산 사이의 서열 유사성의 또 다른 표시가 하이브리드되는 능력임을 인지할 것이다. 2개의 핵산의 서열이 더욱 유사할수록, 이들이 하이브리드되는 조건은 더욱 엄격하다. 하이브리드화 조건의 엄격성은 서열 의존적이고, 이는 다양한 환경 파라미터 하에서 다양하다. 따라서, 특정 정도의 엄격성을 발생시키는 하이브리드화 조건은 선택 하이브리드화 방법 및 하이브리드되는 핵산 서열의 조성 및 길이의 특성에 따라 변할 것이다. 일반적으로, 하이브리드화 온도 및 하이브리드화 완충액의 이온 강도(특히, Na+ 및/또는 Mg++ 농도)가 하이브리드화의 엄격성을 결정할 것이나, 세척 시간도 또한 엄격성에 영향을 미친다. 일반적으로, 엄격한 조건은 소정의 이온 강도 및 pH에서 특정 서열에 대한 열 융점(Tm)보다 약 5℃ 내지 20℃ 낮도록 선택된다. Tm은 표적 서열의 50%가 프로브에 완전히 매치되는 온도(소정의 이온 강도 및 pH 하)이다. 핵산 하이브리드화를 위한 조건 및 엄격성의 계산은, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001; Tijssen, Hybridization With Nucleic Acid Probes, Part I: Theory and Nucleic Acid Preparation, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Elsevier Science Ltd., NY, NY, 1993. and Ausubel et al. Short Protocols in Molecular Biology, 4th ed., John Wiley & Sons, Inc., 1999]에서 발견될 수 있다.
본 발명의 목적 상, "엄격한 조건"은 하이브리드화가 하이브리드화 분자와 표적 서열 사이에서 25% 미만의 미스매치가 존재하는 경우에만 발생하는 조건을 포함한다. "엄격한 조건"은 더욱 정확한 정의를 위해 특정 수준의 엄격성으로 분류될 수 있다. 따라서, 본원에서 사용되는 "약간의 엄격성" 조건은 25% 이상의 서열 미스매치를 갖는 분자가 하이브리드되지 않는 조건이고, "중간의 엄격성" 조건은 15% 이상의 미스매치를 갖는 분자가 하이브리드되지 않는 조건이고, "높은 엄격성" 조건은 10% 이상의 미스매치를 갖는 서열이 하이브리드되지 않는 조건이다. "매우 높은 엄격성" 조건은 6% 이상의 미스매치를 갖는 서열이 하이브리드되지 않는 조건이다. 대조적으로, "낮은 엄격성" 조건하에서 하이브리드되는 핵산은 훨씬 덜한 서열 동일성을 갖거나, 핵산의 단지 짧은 부분서열에 걸쳐 서열 동일성을 갖는 핵산을 포함한다.
L1 / L2 폴리펩티드를 생산하는 방법
본 명세서에 기재된 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 재조합 단백질의 발현 및 정제를 위해 잘 확립된 절차를 이용하여 생산될 수 있다. 당 분야의 기술자를 안내하기에 충분한 절차를 하기 참고문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 200; and Ausubel et al. Short Protocols in Molecular Biology, 4th ed., John Wiley & Sons, Inc., 999]에서 찾아볼 수 있다. 추가의 구체적인 설명이 하기에 제공된다.
키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 재조합 핵산을 벡터 및 숙주 세포의 선택에 따라 임의의 다양한 널리 공지된 절차, 예를 들어 전기천공, 리포좀 매개된 트랜스펙션 {예를 들어, LIPOFECTAMINE™2000 또는 TRANSFECTIN™과 같은 시판되는 리포좀 트랜스펙션 시약 이용), 인산칼슘 침전, 감염, 트랜스펙션 등에 의해 숙주 세포에 도입한다.
따라서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드-엔코딩 핵산을 포함하는 숙주 세포가 또한 본 발명의 특징이다. 유리한 숙주 세포로는 원핵생물(즉, 박테리아) 숙주 세포, 예를 들어 이.콜라이(E. coli)뿐 아니라 진균(예를 들어, 효모, 예컨대 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 및 피치아 파스토리스(Picchia pastoris)) 세포, 곤충 세포, 식물 세포 및 포유동물 세포(예를 들어, CHO 및 HEK293 세포)를 포함하는 다수의 진핵생물 숙주 세포가 있다. 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 재조합 핵산을 예를 들어 벡터, 예를 들어 발현 벡터를 통해 숙주 세포에 도입한다 (예를 들어, 형질도입, 형질전환 또는 트랜스펙션). 상기 기술된 대로, 벡터는 플라스미드, 바이러스 입자, 파아지, 바쿨로바이러스 등일 수 있다. 적합한 발현 숙주의 예로는 박테리아 세포, 예를 들어 이.콜라이(E. coli), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 및 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium); 진균 세포, 예를 들어 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 곤충 세포, 예를 들어 트리코플루시아(Trichoplusia), 드로소필라(Drosophila), 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda); 포유동물 세포, 예를 들어 3T3, COS, CHO, BHK, HEK 293 또는 보우즈(Bowes) 흑색종; 조류 세포를 포함하는 식물 세포 등이 있다.
숙주 세포는 프로모터를 활성화시키거나, 형질전환체(transformant)를 선택하거나, 삽입된 폴리뉴클레오티드 서열을 증폭시키기에 적합하도록 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양될 수 있다. 온도, pH 등과 같은 배양 조건은 전형적으로 발현을 위해 선택된 숙주 세포에 대해 이전에 사용된 조건이고, 당 분야 및 본 명세서에 인용된 참조문헌, 예를 들어 문헌[Freshney (1994) Culture of Animal CeL1s, a Manual of Basic Technique, third edition, Wiley-Liss, New York] 및 본 명세서에 인용된 참조문헌들에서 당업자에게 자명할 것이다. 본 발명의 핵산에 대응하는 발현 생성물은 또한 식물, 효모, 진균, 박테리아 등과 같은 비-동물 세포에서 생산될 수 있다. Sambrook, Berger 및 Ausubel에 추가하여, 세포 배양에 관한 상세한 설명을 문헌[Payne et al. (1992) Plant Cell and Tissue Culture in Liquid Systems John Wiley & Sons, Inc. New York, NY; Gamborg and Phillips (eds) (1995) Plant Cell, Tissue and Organ Culture; Fundamental Methods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin Heidelberg New York) and Atlas and Parks (eds) The Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Raton, FL]에서 찾아볼 수 있다.
박테리아 시스템에서, 발현된 생성물이 의도하는 용도에 따라 수많은 벡터가 선택될 수 있다. 예를 들어, 다량의 폴리펩티드 또는 이의 단편이 항체의 생산에 필요한 경우, 용이하게 정제되는 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 고 수준의 발현을 유도하는 벡터가 유리하게 사용된다. 그러한 벡터로는 다기능성 이.콜라이(E. coli) 클로닝 및 발현 벡터, 예를 들어 BLUESCRIPT (Stratagene) (여기서 관심 코딩 서열, 예를 들어 상기 개시된 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 촉매적으로 활성인 베타 갈락토시다제 융합 단백질을 생산하는 베타-갈락토시다제의 메티오닌 및 후속하는 7개의 잔기를 개시하는 아미노-말단 번역을 위한 서열과 함께 인-프레임(in-frame)으로 벡터에 라이게이션될 수 있다); pIN 벡터 (Van Heeke & Schuster (1989) J Biol Chem 264:5503-5509); pET 벡터 (Novagen, Madison WI) (여기서 아미노-말단 메티오닌은 히스티딘 태그와 함께 인 프레임으로 라이게이션된다) 등이 있으나, 이로 제한되지 않는다.
유사하게, 사카로마이세스 세리비지애(Saccharomyces cerevisiae)와 같은 효모에서, 알파 인자, 알코올 옥시다제 및 PGH와 같은 항시적 또는 유도적 프로모터를 함유하는 다수의 벡터가 요망되는 발현 생성물의 생산을 위해 이용될 수 있다. 검토를 위해, 문헌[Berger, Ausubel, and, e.g., Grant et al. (1987; Methods in Enzymology 153:516-544)]을 참조한다. 포유동물 숙주 세포에서, 플라스미드 또는 바이러스-기반 시스템 둘 모두를 포함하는 다수의 발현 시스템이 이용될 수 있다.
숙주 세포는 삽입된 서열의 발현을 조절하거나 요망되는 방식으로 발현된 단백질을 프로세싱하는 그 능력에 대해 임의로 선택된다. 단백질의 그러한 변형은 글리코실화 (뿐만 아니라, 예를 들어 아세틸화, 카르복실화, 포스포릴화, 지질화 및 아실화)를 포함하나 이로 제한되지 않는다. 3T3, COS, CHO, HeLa, BHK, MDCK, 293, WI38 등과 같은 상이한 숙주 세포는 그러한 번역 후 활성에 대해 특이적 세포 기구 및 특징적인 메커니즘을 지니며 도입된 외래 단백질의 올바른 변형 및 프로세싱을 보장하도록 선택될 수 있다.
특정 예에서, 핵산은 이.콜라이(E. coli) 세포와 같은 원핵생물 세포에서 도입 및 발현에 적합한 벡터를 통해 세포로 도입된다. 발현 벡터는 적합한 박테리아 숙주에 도입된다 (예를 들어, 전기천공에 의해). 수많은 적합한 이.콜라이(E. coli) 균주가 이용가능하고 당업자에 의해 선택될 수 있다 (예를 들어, Rosetta 및 BL21 (DE3) 균주는 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 재조합 벡터의 발현에 유리한 것으로 입증되었다).
보다 전형적으로, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드는 진핵생물 세포(예를 들어, 곤충 또는 포유동물 세포)에서 도입 및 발현에 적합한 발현 벡터로 혼입된다. 유리하게는, 그러한 핵산은 선택된 벡터/숙주 세포에서 발현에 최적화된 코돈이다.
일례에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 바쿨로바이러스 발현 벡터 시스템(BEVS)을 이용하여 곤충 세포에 도입된다. 곤충 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 바쿨로바이러스는 시판되는 벡터, 키트 및/또는 시스템, 예를 들어 BD BioScience로부터의 BD BaculoGold 시스템을 이용하여 생성될 수 있다. 간단히 말해, 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 pAcSG2 전달(transfer) 벡터에 삽입된다. 그 후, 숙주 세포 SF9 (스포톱테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda))를 바쿨로바이러스 오토그래파 캘리포니카 누클리어 폴리헤드로시스 바이러스(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)(AcNPV)의 선형화된 유전체 DNA를 함유하는, pAcSG2-키메라 플라스미드 및 BD BaculoGold에 의해 공-트랜스펙션시킨다. 트랜스펙션 후, 동종 재조합이 pAcSG2 플라스미드와 바쿨로바이러스 유전체 사이에 발생하여 재조합 바이러스를 생성한다. 일례에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드 항원은 폴리헤드린 프로모터(pH)의 조절 제어하에 발현된다. 유사한 전달 벡터가 염기성 (Ba) 및 plO 프로모터와 같은 그 밖의 프로모터를 이용하여 생산될 수 있다. 유사하게, Sf9와 밀접하게 관련된 SF21, 및 양배추 자벌레로부터 유래된 High Five 세포주, 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)와 같은 대안적인 곤충 세포가 이용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 재조합 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 장기간 고수율 생산을 위해, 안정한 발현 시스템이 통상적으로 이용된다. 예를 들어, 바이러스 복제 기점 또는 내인성 발현 성분 및 선택가능한 마커 유전자를 함유하는 발현 벡터를 이용하여 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 안정하게 발현시키는 세포주를 숙주 세포에 도입한다. 벡터의 도입 후, 세포가 영양강화 배지에서 1-2일간 성장하게 한 후 이들을 선택적인 배지로 교환한다. 선택가능한 마커의 용도는 선택에 대한 내성을 부여하는 것이고, 이의 존재는 도입된 서열을 성공적으로 발현시키는 세포가 성장 및 회수되게 한다. 예를 들어, 안정하게 형질전환된 세포의 내성 그룹 또는 콜로니를 세포 유형에 적합한 조직 배양 기술을 이용하여 증식시킬 수 있다. 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산으로 형질전환된 숙주 세포를 엔코딩된 단백질의 발현 및 세포 배양물로부터의 회수에 적합한 조건하에 임의로 배양한다.
적합한 숙주 세포주의 형질도입 및 적합한 세포 밀도로 숙주 세포의 성장 이후에, 선택된 프로모터를 적합한 수단 (예를 들어, 온도 변화 또는 화학적 유도)에 의해 도입하고, 세포를 추가의 기간 동안 배양시킨다.
그 후 분비된 폴리펩티드 생성물을 회수하고/거나 배양 배지로부터 정제시킨다. "정제"라는 용어는 (예를 들어, 키메라 L1/L2 폴리펩티드, 또는 그러한 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산과 관련하여) 조성물로부터 존재가 불필요한 성분을 제거하는 공정을 지칭한다. 정제는 상대적인 용어이며, 바람직하지 않은 모든 미량 성분을 조성물로부터 제거할 필요는 없다. 단백질 생산과 관련하여, 정제는 원심분리, 다이얼리제이션(dialization), 이온-교환 크로마토그래피, 및 크기-배제 크로마토그래피, 친화성-정제 또는 침전과 같은 공정을 포함한다. 용어 "정제된"은 절대적인 순도를 요구한다기보다; 상대적인 용어의 의미이다. 따라서, 예를 들어, 정제된 폴리펩티드 (또는 캡소머, 또는 VLP) 제조물은, 예를 들어 자연적으로 또는 인공적인 환경에서 복제된 세포 또는 세포의 집단 내에서 폴리펩티드가 그 발생적인 환경에서보다 풍부ㅎ진 제조물이다. 실질적으로 순수한 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 제조물은 요망되는 키메라 폴리펩티드가 제조물의 총 단백질 함량의 50% 이상을 나타내도록 정제될 수 있다. 특정 구체예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 제조물의 총 단백질 함량의 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 또는 95% 이상을 나타낼 것이다.
키메라 L1/L2 폴리펩티드의 생산 및 정제에서, 세포는 원심분리에 의해 수확되고, 물리적 또는 화학적 수단에 의해 붕괴될 수 있으며, 생성된 미정제 추출물을 추가의 정제를 위해 유지시켰다. 단백질의 발현에 이용된 진핵생물 또는 미생물 세포는 동결-해동 사이클링, 초음파분해, 기계적 붕괴를 포함하는 임의의 편리한 방법, 또는 세포 용해제나 당업자에게 널리 공지된 다른 방법을 사용하여 붕괴될 수 있다.
그 후 발현된 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 당 분야에 널리 공지된 임의의 많은 방법에 의해 재조합 세포 배양물로부터 회수 및 정제할 수 있는데, 상기 방법은 황산암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 여과, 초미세여과, 원심분리, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로스 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 본 명세서에 기재된 임의의 태깅 시스템 이용), 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 및 렉틴 크로마토그래피를 포함한다. 요망에 따라, 성숙 단백질의 원심분리를 달성하는데 단백질 재폴딩 단계가 이용될 수 있다. 마지막으로, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 최종 정제 단계에 이용할 수 있다. 상기 언급된 참조문헌 외에, 다양한 정제 방법이 당 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Sandana (1997) Bioseparation of Proteins, Academic Press, Inc.; and Bollag et al. (1996) Protein Methods, 2nd Edition Wiley-Liss, NY; Walker (1996) The Protein Protocols Handbook Humana Press, NJ, Harris and Angal (1990) Protein Purification Applications: A Practical Approach IRL Press at Oxford, Oxford, U.K.; Scopes (1993) Protein Purification: Principles and Practice, 3rd Edition Springer Verlag, NY; Janson and Ryden (1998) Protein Purification: Principles, High Resolution Methods and Applications, Second Edition Wiley-VCH, NY; and Walker (1998) Protein Protocols on CD-ROM Humana Press, NJ]에 개시된 것들을 포함한다. WO2010/012780호 (본원에 참조로서 포함됨)는 HPV 16 및 HPV 18 VLP를 정제하는 공정을 기술한다. 유사한 공정이 본 명세서에 기재된 키메라 폴리펩티드의 정제에 이용될 수 있다. 따라서, 키메라 폴리펩티드는 환원성(reducing) β-메르캅토에탄올 (BME) 버터에서 숙주 세포로부터 추출된 후, 음이온 및 히드록시아파타이트 크로마토그래피로 처리된 다음 수득된 새성물이 BME 제거에 의해 성숙될 수 있다. 수득된 생성물은 멸균 여과에 의해 멸균될 수 있다.
면역원성 조성물 및 방법
본 발명의 또 다른 측면은 키메라 L1/L2 폴리펩티드 (또는 키메라 L1/L2 폴리펩티드로 구성된 캡소머 또는 VLP)를 함유하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 상기 면역원성 조성물은 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 단독으로, 또는 예를 들어 추가의 키메라 L1/L2 폴리펩티드 및/또는 VLP (예를 들어, L1 VLP)와 함께 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 상기 개시된 임의의 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 면역원성 조성물의 성분이다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드 (예를 들어, 비-HPV 유형 18 L2 펩티드)가 삽입된 HPV 유형 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 유사하게, 면역원성 조성물은 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드 (예를 들어, 비-HPV 유형 16 L2 펩티드)가 삽입된 HPV 유형 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 특정 예에서, HPV 16 L1 폴리펩티드에 삽입된 L2 폴리펩티드는 L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75 (HPV 16 L2와의 정렬로 지정된)를 포함한다 (예를 들어, 구성된다). 면역원성 조성물에 사용되는 추가의 적합한 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 상기 개시된 임의의 것들을 포함한다.
특정 구체예에서, 키메라 L1/L2 폴리펩티드는 HPV VLP와 함께 면역원성 조성물에 존재한다. 예를 들어, 한 구체예에서, 면역원성 조성물은 하기를 포함한다:
(i) 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 바이러스 유사 입자 (VLP); 및
(ii) 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드.
한 구체예에서, 키메라 폴리펩티드는 본 명세서에 기재된 폴리펩티드이다.
유리한 구체예에서, 하나 이상의 VLP는 HPV 16 VLP L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 VLP는 HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 유리하게는 그러한 조성물에서, 키메라 폴리펩티드는 캡소머 또는 바이러스 유사 입자 또는 소형 비-VLP 유사 구조와 같은 초분자 어셈블리로 어셈블링된다.
한 구체예에서, 조성물은 (i) 하나 이상의 HPV L1 VLP; 및 (ii) 각각이 L1 서열에 L2 펩티드를 포함하는 두 개의 키메라 HPV L1 VLP, 폴리펩티드 또는 캡소머를 포함한다. 유리한 구체예에서, 두 개의 키메라 L1 폴리펩티드 (또는 캡소머 또는 VLP)는 동일한 HPV 유형(예를 들어 HPV 16 또는 HPV 18)으로부터의 L1 폴리펩티드에 상이한 L2 펩티드를 포함할 수 있다. 대안적으로, 두 개의 키메라 L1 폴리펩티드, 캡소머 또는 VLP는 HPV 16 및 HPV 18과 같은 두 개의 상이한 HPV 유형으로부터의 L1 폴리펩티드에 동일한 L2 펩티드를 포함할 수 있다. 또한 추가의 구체예에서, 두 개의 키메라 L1 폴리펩티드 또는 캡소머 또는 VLP는 두 개의 상이한 HPV 유형 (예를 들어 HPV 16 및 HPV 18 및/또는 HPV 33 및 HPV 58)으로부터의 L1 폴리펩티드에 상이한 L2 펩티드를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, L2 펩티드는 HPV 33 또는 HPV 58로부터 비롯될 수 있고, HPV 18 L1에 삽입될 수 있다. 그러한 구체예에서, 상이한 L2 펩티드는 두 개의 상이한 HPV 유형 18 L1 폴리펩티드에 하나씩 삽입될 수 있거나, 동일한 HPV 유형 18 L1 폴리펩티드의 동일하거나 상이한 부위에 삽입될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명에 따른 조성물에 포함된 HPV VLP (특히 HPV L1만의 VLP) 및 키메라 VLP, 폴리펩티드 또는 캡소머는 HPV 6 VLP, HPV 11 VLP, HPV 16 VLP 및 HPV 18 L1 VLP 중의 하나 이상을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이들은 HPV 16과 18, 또는 HPV 6과 11, 또는 네 개 모두의 HPV 유형의 VLP를 포함할 수 있다. 적합하게는, HPV L1 VLP 및 키메라 HPV L1 폴리펩티드는 HPV 16 및/또는 HPV 18에서 비롯된다.
키메라건 또는 키메라가 아니건 간에 본 명세서에 기재된 대로 사용하기 위한 HPV VLP는 또한 L2로부터 어셈블링될 수 있거나, L1만의 VLP일수 있다. 예를 들어, VLP는 L1 및 L2 폴리펩티드의 혼합물(그리고 L2 펩티드가 L1 서열에 삽입된, 본 명세서에 기재된 키메라 L1/L2 VLP와 동일하지 않다)로부터 어셈블링될 수 있다. 대안적으로, VLP는 본 명세서에 기재된 L1/L2 폴리펩티드 이외의 키메라 VLP일 수 있다. 예를 들어, 그러한 비-L1/L2 폴리펩티드는 L1 폴리펩티드와 L1 이외의 HPV 폴리펩티드의 하나 이상의 추가 서열, 예를 들어 E7을 포함할 수 있다.
VLP 또는 본 명세서에 기재된 키메라 폴리펩티드로부터의 HPV L1은 전장 HPV L1 단백질 또는 특정 L1 유도체, 예를 들어 단편으로부터 예를 들어 본원에 참조로서 포함된 WO 03/077942호 (US7416846) 또는 WO99/13056 (US7351533)에 기재된 바와 같은 당 분야의 표준 방법을 이용하여 형성될 수 있다.
본 명세서에 기재된 조성물의 특정 구체예에서, HPV L1 VLP는 HPV 16 및 HPV 18 VLP를 포함하거나 이로 구성되고, 키메라 HPV L1 VLP는 키메라 HPV 16 L1 VLP 또는 키메라 HPV 18 L1 VLP 또는 둘 모두를 포함하거나 이로 구성된다. HPV 16 및 HPV 18 키메라 L1 VLP 둘 모두가 존재하는 경우, 각각에서의 L2 펩티드는 동일하거나 상이할 수 있고 이것은 본 명세서에 기재된 임의의 L2 펩티드일 수 있다.
본 명세서에 기재된 면역원성 조성물은 전형적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 및 임의로 애쥬번트를 포함한다. 면역원성 조성물은 동물 또는 인간에게 투여될 때 면역 반응을 일으키는 조성물이고, 상기 면역 반응은 감염 또는 질병에 대해 반드시 충분히 보호성은 아니나 적어도 감염 또는 질환의 발생을 감소시키는 보호성 면역 반응일 수 있다.
본 명세서에 기재된 대로 사용되는 애쥬번트는 알루미늄 염을 포함할 수 있다. 3 데-O-아실화된 모노포르포릴 지질 A (3D MPL) 또는 QS21과 같은 Th1 타입 반응을 자극하는 애쥬번트가 또한 적합하다. 적합하게는, 애쥬번트는 적합하게 3D MPL과 조합된 알루미늄 염, 예를 들어 수산화알루미늄과 3D MPL이다. 그러한 애쥬번트를 포함하는 본 발명에 따른 조성물은 예를 들어 본원에 참조로서 포함된 WO 00/23105호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
본 명세서에 기재된 대로 사용되는 HPV L1 VLP 및 키메라 HPV L1 VLP는 알루미늄 함유 애쥬번트 상에 흡착될 수 있다. 애쥬번트를 상이한 VLP에 첨가하여 이들을 미리-흡착시킨 후 상이한 VLP들을 혼합시킴으로써 최종 백신 생성물을 형성할 수 있다.
면역원성 조성물은 또한 안정화제로서 알루미늄 또는 알루미늄 화합물을 포함할 수 있고, 본 발명은 또한 VLP가 알루미늄 염 상에 흡착된 안정화된 조성물에 관한 것이다. 적합하게는, VLP는 알루미늄 염 상에 흡착 후 알루미늄이 없는 경우에 비해 경시적으로 더욱 안정하다.
본 명세서에 기재된 면역원성 조성물은 경구, 국소, 피하, 점막 (전형적으로 질내), 정맥내, 근내, 비내, 설하, 진피내와 같은 임의의 다양한 경로에 의해 그리고 좌제를 통해 백신으로서 투여될 수 있다. 근내 및 진피내 전달이 바람직하다.
폴리펩티드, 및/또는 캡소머 및/또는 VLP 및 그 밖의 단백질의 투여량은 개체의 상태, 성별, 연령 및 체중, 투여 경로 및 백신의 HPV에 따라 달라질 수 있다.
본 명세서에 기재된 조성물에 존재하는 폴리펩티드 및/또는 VLP의 투여량은 개체의 상태, 성별, 연령 및 제충, 투여 경로 및 백신의 HPV에 따라 달라질 수 있다. 그 양은 또한 VLP 유형의 수에 따라 달라질 수 있다. 적합하게는, 면역적으로 보호성인 반응을 발생시키기에 적합한 VLP의 양이 전달된다. 적합하게는, 각 백신 용량은 1-100㎍의 각각의 VLP, 적합하게는 5㎍ 이상, 또는 10㎍ 이상, 예를 들어 5-50㎍의 각각의 VLP, 가장 적합하게는 10-50㎍의 각각의 VLP, 예를 들어 5㎍, 6㎍, lO㎍, 15㎍, 20㎍, 40㎍ 또는 50㎍의 각각의 VLP를 포함한다. 특정 구체예에서, 키메라 및 비-키메라 VLP 둘 모두가 존재하는 경우, 즉 L2 펩티드를 지니는 키메라 L1 VLP 및 L2 펩티드를 지니지 않는 L1 VLP가 존재하는 경우, 이러한 양은 각각의 HPV 유형에 대해 존재하는 총 VLP를 반영한다.
예를 들어, 본 발명에 따른 조성물은 단일 용량에 하기를 포함할 수 있다:
30㎍ HPV 16 VLP
30㎍ HPV 18 VLP
lO㎍ L2 펩티드를 지니는 키메라 HPV 16 VLP
10 ㎍ L2 펩티드를 지니는 키메라 HPV 18 VLP, 여기서 키메라 HPV 16 및 HPV 18 VLP 중의 L2 펩티드는 동일하거나 상이하고, 동일하거나 상이한 HPV 유형으로부터의, 상기 개시된 L2 56-75 및 L2 17-36으로부터 선택될 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명에 따른 조성물은 단일 용량에 하기를 포함할 수 있다:
20㎍ HPV 16 VLP
20㎍ HPV 18 VLP
10-20㎍ L2 펩티드를 지니는 키메라 HPV 18 VLP
10-20㎍ L2 펩티드를 지니는 키메라 HPV 16 VLP, 여기서 키메라 HPV 16 및 HPV 18 VLP 중의 L2 펩티드는 동일하거나 상이하고, 동일하거나 상이한 HPV 유형으로부터의, 상기 개시된 L2 56-75 및 L2 17-36으로부터 선택될 수 있다.
적합하게는, 상기 조성물은 애쥬번트를 추가로 포함하는데, 적합하게 3D-MPL과 같은 Th1 애쥬번트와 함께 적합하게는 알루미늄 염, 적합하게는 수산화알루미늄을 추가로 포함한다.
본 명세서에 기재된 조성물은 적합하게는 인간 또는 동물 피검체에서 HPV 5, 6, 8, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 38, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 및 73으로부터 선택된 1, 2 또는 그 초과의 HPV 유전형, 적합하게는 임의의 1, 2 또는 3, 4, 5 또는 그 초과의 유전형에 대해 면역 반응을 일으킨다. 유리하게는, 상기 조성물은 HPV 유형 2, 3 및 73 중의 하나 이상에 대해 면역 반응을 일으킬 수 있다.
본 명세서에 기재된 조성물은 적합하게는 1, 2 또는 그 초과의 HPV 유전형, 적합하게는 HPV 5, 6, 8, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 38, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 및 73으로부터 선택된 임의의 1, 2 또는 그 초과의 유전형으로부터의 감염 및/또는 질환에 대한 보호를 제공한다. 적합하게는, 상기 조성물은 적어도 HPV 16 또는 18에 대한 보호, 및 보다 적합하게는 HPV 16 및 18 둘 모두에 대한 보호를 제공한다.
적합하게는, 본 명세서에 기재된 조성물은 HPV 16 및 18 그리고 암을 야기하는 HPV 유형, 생식기 사마귀를 야기하는 HPV 유형 및 피부암을 야기하는 HPV 유형으로부터 선택된 하나 이상의 그 밖의 HPV 유형에 대한 보호를 제공한다. 적합하게는, 상기 조성물은 HPV 16 및 HPV 18 이외에 하기 HPV 유형들 중 하나 이상에 대한 보호를 제공한다: HPV 5, 6, 8, 11, 31, 33, 35, 38, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 및 73.
본 명세서에 기재된 면역원성 조성물 및 백신은 HPV 감염 및/또는 질환을 치료 또는 예방하기 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, 면역원성 조성물을 치료적으로 이용하여 자궁경부암종 또는 CIN III 후유증을 초래하는 바이러스 로드 및/또는 감염을 감소시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 HPV 감염과 관련된 질환의 치료 및 감염 또는 질환을 예방하는데 있어서 본 명세서에 기재된 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다. 적합하게는, 본 발명의 백신의 용도는 감염 및/또는 질환을 예방하는데 있다. 본 명세서에서 사용된 "감염"이라는 용어는 적합하게는 부수적 감염 및/또는 지속적 감염에 관한 것이다. 감염은 예를 들어 PCR에 의해 평가될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 "질환"이라는 용어는 HPV 감염과 관련된 비정상적 세포학, ASCUS, CINl, CIN2, CIN3 또는 자궁경부암일 수 있다. 질환은 예를 들어 p16과 같은 바이오마커의 조직학적 조사 또는 분석에 의해 평가될 수 있다.
임의로 면역원성 조성물 또는 백신은 초기 항원 또는 비-HPV 항원과 같은 다른 HPV 항원과 제형화되거나 이와 공동-투여될 수도 있다. 적합하게는 이러한 비-HPV 항원은 다른 질환, 가장 적합하게는 성매개질환, 예를 들어 단순포진 바이러스, 클라미디아 및 HIV에 대한 보호를 제공할 수 있다. 특정 구체예에서, 백신은 HSV로부터의 gD 또는 이의 트렁케이트를 포함한다. 이러한 방식으로 백신은 HPV 및 HSV 둘 모두에 대한 보호를 제공한다.
본 명세서에 기재된 모든 백신의 경우, 백신은 10-15세, 적합하게는 10-13세의 청년기 소녀의 백신접종에 적합하게 이용된다. 적합하게는 상기 백신은 0-10세의 소아 집단에게 투여하기에 적합하다. 백신은 또한 비정상적인 파파니콜로 도말검사 이후나 HPV에 의해 야기된 병변의 제거에 이은 수술 이후에 여성에게 투여될 수 있다. 따라서, 백신은 예방적 백신으로서 혈청음성 집단에게 및/또는 치료적 세팅에서 혈청양성 집단 둘 모두에게 적합하게 적용될 수 있다. 백신은 남성에게도 투여될 수 있다.
적합하게는 백신은 2 또는 3회 용량 계획, 예를 들어 각각 0, 1 또는 0, 2 또는 0, 3 또는 0, 4 또는 0, 5 또는 0. 6개월 계획, 또는 0, 1 및 6 또는 0, 2, 6개월 계획으로 전달된다. 적합하게는, 백신접종 계획은 5 내지 10년 후, 적합하게는 10년 후 추가접종 주입을 포함한다. 4회 또는 그 초과의 용량을 이용하는 그 밖의 계획도 이용될 수 있다.
백신은 동결건조되고 투여 전에 재구성될 수 있으나, 적합하게는 액체 백신 제형이다.
실시예
실시예 1: 예시적인 키메라 L1 / L2 폴리펩티드
하기 예시적인 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 분자생물학 절차를 이용하여 생산하였고 하기 표 3에 요약하였다.
표 3:
Figure pct00014
키메라 1: L2 펩티드 GGLGIGTGSGTGGRTGYVPL (HPV 58/HPV 6)가 HPV 18로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 137 및 138 사이에 삽입된, HPV 18 L1 HPV 58 L2 DE 키메라 폴리펩티드.
키메라 2: L2 펩티드 GGLGIGTGSGTGGRTGYVPL (HPV 58/HPV 6)가 HPV 18로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 432 및 433 사이에 삽입된, HPV 18 L1 HPV 58 L2 CT 키메라 폴리펩티드.
키메라 3: L2 펩티드 QLYQTCKATGTCPPDVIPKV (HPV 33/HPV 11)가 HPV 18로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 137 및 138 사이에 삽입되고 L2 펩티드 GGLGIGTGSGTGGRTGYVPL (HPV 58 또는 HPV 6으로부터)가 HPV 18로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 432 및 433 사이에 삽입된, HPV 18 L1 HPV 33 L2 및 HPV 58 L2 키메라 폴리펩티드.
키메라 4: L2 펩티드 GGLGIGTGSGTGGRTGYVPL (HPV 58/HPV 6)가 HPV 16으로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 431 및 432 사이에 삽입된, HPV 16 L1 HPV 58 L2 CT 키메라 폴리펩티드.
키메라 5: L2 펩티드 QLYQTCKATGTCPPDVIPKV (HPV 33/HPV 1l)가 HPV 16으로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 137 및 138 사이에 삽입된, HPV 16 L1 HPV 33 L2 CT 키메라 폴리펩티드.
키메라 6: L2 펩티드 QLYQTCKATGTCPPDVIPKV (HPV 33/HPV 1l)가 HPV 16으로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 272 및 273 사이에 삽입된, HPV 16 L1 HPV 33 L2 P/D 키메라 폴리펩티드.
키메라 7: L2 펩티드 QLYQTCKATGTCPPDVIPKV (HPV 33/HPV 11)가 HPV 16으로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 137 및 138 사이에 삽입되고 L2 펩티드 GGLGIGTGSGTGGRTGYVPL가 HPV 16으로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 431 및 432 사이에 삽입된, HPV 16 L1 HPV 33 L2 및 HPV 58 L2 키메라 폴리펩티드.
키메라 8: L2 펩티드 QLYQTCKATGTCPPDVIPKV (HPV 33/HPV 11)가 HPV 18로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 137 및 138 사이에 삽입된, HPV 18 L1 HPV 33 L2 DE 키메라 폴리펩티드.
키메라 9: L2 펩티드 QLYQTCKATGTCPPDVIPKV (HPV 33/ HPV 11)가 HPV 18로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 432 및 433 사이에 삽입된, HPV 18 L1 HPV 33 CT 키메라 폴리펩티드.
키메라 10: L2 펩티드 GGLGIGTGSGTGGRTGYVPL (HPV 58/HPV 6)가 HPV 16으로부터의 C 말단 트렁케이션된 L1의 위치 431 및 431 사이에 삽입된, HPV 16 L1 HPV 58 L2 키메라 폴리펩티드.
실시예 2: 예시적인 키메라의 합성, 발현, 정제 및 특성규명
재조합 핵산의 생산. 실시예 1에 기재된 예시적인 키메라 L1/L2 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산은 표준 유전자 조작에 의해 바쿨로바이러스 발현 벡터로 이들을 클로닝하기 전에 유전자 합성에 의해 수득되었다. 삽입 부위는 상기 표 3에 요약되어 있다. 각각의 L1 폴리펩티드의 C-말단 트렁케이션은 핵 위치 신호를 제거하는 것이 목적인 동시에, DNA-결합 도메인이 각각의 L1 폴리펩티드의 C-말단에 존재한다 (HPV 16, 18에 대해 각각 34, 35개 아미노산의 C-말단 결실). 본 명세서에 사용된 HPV 16 및 18 L1 트렁케이트의 아미노산 서열이 각각 도 1a 및 1b에 도시된다. HPV 33 및 HVP 58 L2 펩티드의 아미노산 서열은 도 2 (각각 도 2a, 도 2b)에 도시된다. 예시적인 키메라의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 36-45로 제공된다.
세포 회수. 예시적인 키메라 폴리펩티드를 관심 HPV 16 또는 18 L1/L2 키메라 폴리펩티드를 엔코딩하는 재조합 바쿨로바이러스(0.05-0.5의 MOI)로 감염된 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)(High Five™) 세포 (~2 000 000개 세포/ml의 밀도)에서 발현시켰다. 세포를 감염 4일 후에 저속 원심분리에 의해 회수하였다. 생성된 펠렛을 -70℃에 저장하였다.
항원 추출. 예시적인 키메라 폴리펩티드를 High Five™ 세포로부터 추출 및 정화의 2단계 공정으로 추출하였다. 세포의 추출 단계를 환원성 및 저장성 완충제 (트리스 2OmM + 4% β-메르캅토에탄올(BME), pH 8.5)로 수행하였다. 대안적으로, 추출이 낮은 경우, pH는 8.7일 수 있고 세척제 엠피젠(Empigen) 2%를 첨가한다. 배양 부피의 2분의 1과 같거나 배양 부피와 동등한 부피를 이용하여 추출을 수행하였다. 실온에서 최소 30분의 접촉 시간을 이용하였다. 원심분리에 의해 정화를 수행하였다; 상청액이 혼탁한 경우, 임의 여과를 수행하였다; Millistak COHC 필터 (Millipore) 또는 등가물 통과.
정제 및 특성규명. 정제 계획은 키메라 폴리펩티드인 상이한 키메라 L1/L2 폴리펩티드에 대한 것과 매우 유사하며 하기 단계를 포함한다: 음이온 교환 크로마토그래피 (디 또는 트리메틸 아미노 에틸-DMAE 또는 TMAE), 및 히드록시아파타이트 크로마토그래피.
초분자 형성 계획은 NaCl 및 Tween 첨가에 있어서 약간의 차이를 나타내며, 키메라 폴리펩티드들간에 약간 다르고 하기 단계들을 포함한다: 세파덱스(Sephadex) G25 상에서 겔 여과를 통한 완충제 교환 및 BME 제거, 밤새 성숙 및 0.22㎛ 멸균 여과. VLP 성숙화가 밤새 +4℃에서 일어난 것을 제외하고, 정제 공정을 실온에서 수행하였다. VLP 형성을 막기 위해 BME 4% v/v를 최종 완충제를 제외한 모두에 첨가하였다. 사용된 모든 완충제를 0.22㎛ 필터 상에서 여과하였다. 각각의 정제를 진행하기 전에, 겔 매트릭스를 소독하고 샘플 로딩 전에 적절한 완충제와 평형화시켰다.
음이온 교환 크로마토그래피 TMAE 또는 DMAE: 정화된 추출물을 트리스 2OmM NaCl 5OmM 4% β-메르캅토에탄올 BME 완충제, pH 8.0±0.2로 미리 평형화된 음이온 교환 컬럼 (디메틸 아미노 에틸)에 적용시켰다. 결합되지 않은 폴리펩티드를 세척한 후에, 트리스 2OmM NaCl 50-내지-25OmM 4% β-메르캅토에탄올 BME 완충제, pH 8.0±0.2의 선형 구배로 용리시켰다. 항원을 NaCl 구배 내에서 용리시키고, 용리 프로파일을 280nm에서 모니터링하였다. 수집된 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. L1/L2 포지티브 분획을 푸울링하고 다음 컬럼 전에 +4℃에 보관하였다.
히드록시아파타이트 크로마토그래피: 이전 단계의 용리물을 (트리스 2OmM NaCl 18OmM 4% BME) 완충제, pH 8.0±0.2로 미리 평형화된 히드록시아파타이트 타입 I(HA) 컬럼에 적용시켰다.
샘플 적용 후에, 겔을 평형화 완충제로 세척하고 약 10 컬럼 부피의 (Na 포스페이트 10OmM NaCl 3OmM 4% BME) 완충제, pH 6.0±0.2로 용리시켰다. HA 용리물을 즉시 용리 완충제로 40 ml 이하로 희석시키고 밤새 실온에서 저장하였다.
그 후, HA 용리물을 (20 mM Na 포스페이트 50OmM의 NaCl, pH 6.0) 완충제로 평형화된 세파덱스 G25 (M) 겔 여과 컬럼 (145 ml 베드 부피)에 적용시켰다. 특정 예에서, 완충제를 10OmM의 NaCl 함량으로 변형시켰다. 용리 프로파일을 280nm (폴리펩티드에 대해) 및 254nm (BME에 대해)에서 모니터링하였다. 키메라 L1/L2 항원을 허공 용적(void volume)으로 수집한 반면 BME를 나중 단계에서 총 부피(Vt)와 상이한 스펙트럼으로 용리시켰다. 밤새 +4℃에서 저장함에 의해 성숙화를 수행하였다. 성숙화 이후, 키메라 L1/L2 항원을 함유하는 세파덱스 푸울을 0.22㎛ 살균 필터를 통해 여과시키고, -70℃에 저장하였다. 특정 경우에, 0.05% (V/V) Tween 80을 여과에 앞서 첨가하였다. 800ml의 배양물로부터 키메라 L1/L2 항원을 정제하기 위한 방법의 단순 순서도를 도 5a-5e에 도시한다.
키메라 L1 / L2 항원의 전자 현미경 ( EM ) 특성규명. 전자 현미경을 이용하여 대조군으로서 사용된 C-말단 트렁케이션된 HPV-16 및 HPV-18 L1 단백질에 의해 생산된 것들과 유사한 폴리펩티드 입자 및/또는 캡소머 및/또는 VLP와 같은 입자가 정제된 키메라 L1/L2로부터 형성되는 지의 특성을 나타내었다. 키메라 VLP의 크기는 대조군보다 작거나 클 수 있다. 정제된 키메라 L1/L2 폴리펩티드 입자를 그 개별적인 완충제(표 3에 제시됨)에서 50㎍/ml로 희석시켰다. 표준 2단계 네거티브 염색 방법(Hayat M.A.& MiL1er S. E., 1990)에 따른 EM 네거티브 염색 분석을 위해 조영제로서 우라닐 아세테이트(UAc)를 이용하여 샘플을 제조하였다. 간단히 말해, 탄소-코팅된 포름바(formvar) 필름을 지니는 니켈 격자(400 메시)를 샘플의 방울 상에 10분간 실온에서 부유시켜 물질이 흡착되게 하였다. 과량의 용액을 제거하고, 상기 물질이 2분 미만 동안 공기건조되게 하였다. 그 후, 격자를 증류수 방울 상에 잠시 부유시켜 (30초 미만) 염색 침전물을 생산할 수 있는 염을 제거하였다. 격자를 Harris (Harris, J.R., 1994)에 따라 제조된 염색 방울 상에 옮겼다: 1% 트레할로스 (w/v)가 보충된 물 중의 2% UAc (w/v). 격자를 30초 후 완전 건조시켰다(blotted dry). 물질이 완전히 건조되게 하고 (1시간에 걸쳐) LEO Zeiss EM912Ω하에 10OkV에서 조사하였다. 대표적인 필드를 표준 100K 최초 배율에서 이미지화하고 하기 표 4에 요약하였으며 EM 결과는, #5-L1-HPVl6/L2DE17 -36 및 #8-L1-HPV 18/L2DE17-36을 제외하고는 형성된 키메라 L1/L2 폴리펩티드가 야생형 HPV-16 또는 HPV-18 L1 VLP에 의해 생산된 것들과 동일하지 않음을 나타내었다. 형성된 입자는 VLP 스테이지 하에 무정형 구조 또는 소형이었고 비교적 균일한 비-VLP 구조였다.
표 4: EM 결과의 요약: 키메라 L1 / L2 폴리펩티드
Figure pct00015
* 용리 완충제
키메라 L1 / L2 항원의 항체 특성규명. Neil Christensen 박사에 의해 제공된 (Chistensen et al., 1996, 2001) 하이브리도마로부터 정제된 H16.V5 (중화 및 형태 특이적 모노클로날 항체; HPV-16 L1 VLP와 결합하는데 결정적인 aa 266-297 및 339-365), H18.J4 (HPV-18 L1 VLP에 대한 중화 및 형태 특이적 모노클로날 항체 (에피토프 위치는 알려져 있지 않음)) 또는 H16.U4 (HPV-16 L1 VLP에 대한 중화 및 형태 특이적 모노클로날 항체, 에피토프는 알려져 있지 않음)를 코팅제로서 이용한 샌드위치 ELISA에 의해 정제된 L1/L2 키메라 작제물의 L1 성분의 항원성 특성을 규명하였다. 검정을 이용하여 HPV-16 또는 HPV-18 VLP의 천연 제조물에 비해 다양한 키메라 L1/L2 항원 상에 있는 HPV-16 또는 HPV-18 형태 특이적 에피토프의 존재를 입증하였다. 플레이트를 키메라 작제물로 코팅한 후 L2 펩티드 아미노산 17-36 HPV 33/HPV 11 또는 56-75 HPV 58/HPV 6로 유도되는 래빗 폴리클로날로 검출하는 직접 ELISA를 이용하여 정제된 L1/L2 키메라 작제물의 L2 성분의 특성을 규명하였다. 상기 검정은 L2 에피토프가 #9-L1-HPV 18/L2Ct17 -36을 제외하고는 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 표면에 잘 노출되어 있음을 나타내었다.
표 5는 데이터를 요약한다.
Figure pct00016
ND: 측정되지 않음.
실시예 3: 동물 모델에서 키메라 L1 / L2 항원의 면역원성 및 교차 반응성을 시험하는 방법
BALB/c 마우스 (전형적으로, 그룹당 적어도 15마리의 마우스)를 Cervarix와 함께 투여되거나 단독으로 투여되는 2 또는 10㎍의 상기 키메라 L1/L2 폴리펩티드로 근내 (예를 들어 0, 14 및 42일에 3회의 다중용량 계획으로) 면역시킨 후, 2주 및 6주 후에 2회 추가접종하였다. 마지막 면역 후 적합한 기간이 지난 후에 (예를 들어, 14일째에), 백신접종에 의해 유도된 특이적 L1 항체 반응을 펩티드 및/또는 단백질 ELISA에 의해 모니터링하였다. 백신접종에 의해 유도된 특이적 및 교차 반응성 L2 항체 반응을 펩티드 및/또는 단백질-ELISA에 의해 모니터링할 수 있다. ELISA 역가를 SoftMaxPro (네 개 파라메터의 방정식 이용)에 의해 참조로부터 계산하였고 EU/ml로 나타내었다.
대안적으로, Cervarix와 함께 투여되거나 단독으로 투여되는 20 또는 100㎍의 상기 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 근내 투여에 의해 (예를 들어, 0, 14, 28 및 42일에 4회의 다중용량 계획으로) 두 마리의 뉴질랜드 화이트 래빗(NZW, 1.5-2kg)을 면역시켰다. 키메라를, 래빗의 고면역화를 위한 프레운드(Freund) 애쥬번트의 대안으로서 사용된 유중수 에멀젼인, 제조자의 프로토콜에 따라 제조된 Specol (Cedi Diagnostic 사)로 제형화하였다.
항- VLP 혈청학 ( Ig 반응). 코팅 항원으로서 HPV 16 VLP 또는 HPV 18 VLP를 이용하여 항-VLP16 또는 VLP 18 항체를 ELISA에 의해 정량하였다.
표 6 및 7은 마우스 및 래빗의 데이터를 각각 요약한다.
표 6: 마지막 면역화 후 14일째에 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 마우스 항혈청의 HPV -16, 18 L1 VLP 에 대한 결합 ( ELISA )
Figure pct00017
LL= 하한; UL= 상한, CI95= 신뢰 구간
100%의 마우스 혈청이 HPV 16 및 HPV 18 L1 VLP와 반응하였고, 이는 L2 에피토프의 삽입이 HPV-L1 반응에 영향을 미치지 않았음을 나타낸다.
표 7: 마지막 면역화 후 14일째에 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 래빗 항혈청의 HPV -16, 18 L1 VLP 에 대한 결합 ( ELISA )
Figure pct00018
100%의 래빗 혈청이 HPV 16 및 HPV 18 L1 VLP와 반응하였고, 이는 L2 에피토프의 삽입이 HPV-L1 반응에 영향을 미치지 않았음을 나타낸다.
항- L2 펩티드 혈청학 ( Ig 반응). 동종 (L2 펩티드 아미노산 17-36 HPV 33/HPV 11 또는 L2 펩티드 아미노산 56-75 HPV 58/HPV 6) 또는 이종 HPV 유형으로부터의 L2 펩티드 (2 ug/ml)를 이용한 ELISA에 의해 항-L2 항체를 정량함으로써 특이적 및 교차 반응성 반응을 평가하였다. 교차 L2 항체 반응의 경우, 하기 합성 L2 펩티드를 이용하였다: HPV-5, 6, 16, 31, 35, 52 및 56으로부터의 아미노산 17-36 또는 HPV-58, 45, 33, 52, 5, 11, 56 및 35로부터의 아미노산 56-75.
HPV-L2-펩티드 ELISA 측정
L2 펩티드 (Eurogentec에 의해 생산됨)를 PBS에서 2㎍/ml의 최종 농도로 희석하고 밤새 4℃에서 96-웰 미세역가 플레이트의 웰에 흡착시켰다 (Maxisorp Immuno-plate, Nunc, Denmark). 그 후, 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 PBS+0.1% Tween20 + 1% BSA (포화 완충제)와 함께 인큐베이션하였다. 포화 완충제에서 희석된 혈청을 HPV L2 펩티드-코팅된 플레이트에 첨가하고 1시간 30분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS 0.1% Tween20으로 4회 세척하고, 포화 완충제에서 희석된 비오틴-컨쥬게이션된 항-Ig를 각 웰에 첨가하고, 항-마우스 시약(Dako, UK)의 경우 1시간 동안 또는 항-래빗 시약(Amersham, UK)의 경우 1시간 30분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 세척 단계 후, 포화 완충제에서 희석된 스트렙타비딘-호스래디시 퍼옥시다제(Dako, UK)를 추가 30분간 37℃에서 첨가하였다. 플레이트를 상기 지시된 대로 세척하고 0.1% Tween20, 0.05M 시트레이트 완충제 pH 4.5 중의 0.04% o-페닐렌디아민(Sigma) 0.03% H2O2의 용액과 함께 20분간 실온에서 인큐베이션하였다. 2N H2SO4로 반응을 중단하고 492/620nm에서 판독하였다. ELISA 역가를 SoftMaxPro (네 개 파라메터의 방정식 이용)에 의해 참조로부터 계산하고 EU/ml로 나타내었다.
HPV-L1 ELISA 측정
HPV-16/18 L1 VLP를 PBS에서 1㎍/ml의 최종 농도로 희석하고 96-웰 미세역가 플레이트의 웰에 (Maxisorp Immuno-plate, Nunc, Denmark) 4℃에서 밤새 흡착시켰다. 그 후, 플레이트를 PBS+0.1% tween20+1% BSA (포화 완충제)와 함께 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 포화 완충제에서 희석된 혈청을 HPV L1 펩티드-코팅된 플레이트에 첨가하고 1시간 30분간 37℃에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS 0.1% Tween20으로 4회 세척하고, 포화 완충제에서 희석된 비오틴-컨쥬게이션된 항-마우스 Ig (Dako, UK) 또는 항-래빗 Ig (Amersham UK)를 각 웰에 첨가하고, 1시간 30분간 37℃에서 인큐베이션하였다. 세척 단계 후, 포화 완충제에서 희석된 스트렙타비딘-호스래디시 퍼옥시다제(Dako, UK)를 추가 30분간 37℃에서 첨가하였다. 플레이트를 상기 지시된 대로 세척하고 0.1% Tween20, 0.05M 시트레이트 완충제 pH 4.5 중의 0.04% o-페닐렌디아민(Sigma) 0.03% H2O2의 용액과 함께 20분간 실온에서 인큐베이션하였다. 2N H2SO4로 반응을 중단하고 492/620nm에서 판독하였다. ELISA 역가를 SoftMaxPro (네 개 파라메터의 방정식 이용)에 의해 참조로부터 계산하고 EU/ml로 나타내었다.
표 8은 마우스에서의 면역원성 데이터를 요약한다.
모든 키메라 L1/L2 폴리펩티드 항원은 마우스에서 현저한 용량 의존적인 L2 항체 반응을 유도하였다 (역가 범위 1687-18873). 상기 결과는 세 번째 면역화 이후 내지 네 번째 면역화 이후에 개선된 면역원성을 입증하였다 (데이터는 제시되지 않음)
표 8: 마지막 면역화 후 14일째에 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 마우스 항혈청의 동종 L2 펩티드 17-36 HPV 33 또는 L2 펩티드 56-75 펩티드 HPV 58에 대한 결합( ELISA )
L1= 하한; UL= 상한, CI95= 신뢰 구간
표 9 및 10은 래빗에서 각각 펩티드 서열 17-36 및 56-75에 대한 ELISA 데이터를 요약한다.
모든 키메라 L1/L2 폴리펩티드 항원은 래빗에서 현저한 용량 의존적인 특이적 및 교차 반응성 L2 항체 반응을 유도하였다. L2 반응은 특이적이었는데, 그 이유는 L2의 아미노산 17-36을 함유하는 키메라 L1/L2 폴리펩티드로 면역화된 래빗으로부터의 항혈청이 L2의 합성 L2 펩티드 아미노산 56-75와 교차 반응하지 않았고 그 반대로도 동일하였기 때문이다 (데이터는 제시되지 않음).
양호한 교차 반응성은 L2 서열의 아미노산 17-36으로부터의 대부분의 합성 L2 펩티드에서 관찰되었다 (표 9). 반응성은 위치 30에 있는 아미노산에 의존적일 수 있다: 모든 합성 아미노산에서 S 또는 E와 같은 상이한 아미노산 부류로 대체된 Pro (P)는 낮은 교차 반응성을 지니거나 교차 반응성을 지니지 않음 (L2-아미노산 17-36 HPV-31 및 -56). 유사하게, L2의 모든 합성 L2 펩티드 아미노산 56-75에서 비교적 양호한 교차 반응성이 관찰되었다 (표 10). 반응성은 위치 70에 있는 아미노산에 의존적일 수 있다: Ala (A)와 같은 상이한 아미노산으로 대체된 Thr (T)은 교차 반응성이 없었다 (L2-아미노산 56-75 HPV-11, -52 및 -56).
표 9: 마지막 면역화 후 14일째에 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 래빗 항혈청의 L2 펩티드 l7 -36에 대한 결합 ( ELISA )
Figure pct00020
* 17-36 HPV 11/HPV 33은 동종 L2 펩티드를 나타낸다= 유형 특이적.
표 10: 마지막 면역화 후 14일째에 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 래빗 항혈청의 L2 펩티드 56-75에 대한 결합 ( ELISA )
Figure pct00021
* 56-75 HPV 58/HPV 6은 동종 L2 펩티드를 나타낸다= 유형 특이적.
중화 실험. 세 번째 및/또는 네 번째 면역화 2주 후에, 혈청을 중화 검정 완충제로 희석하고 (8개의 4배 연속 희석 - 최초 희석은 래빗 혈청의 경우 1/10 및 마우스의 경우 1/40에서 시작됨) 면역화 동안 사용된 것(들)과 동일하고 상이한 HPV 유형으로부터의 감염성 슈도바이러스(PsV)와 혼합시켰다. 혼합물을 1시간 동안 4℃에서 반응시키고, 적어도 2시간 전에 그러나 4.5시간을 넘지 않는 시간 전에 플레이팅된 293 TT 세포 (웰당 30 000개 세포)에 첨가하였다. 5% CO2와 함께 72시간 동안 배양시킨 후에, 상청액을 회수하고, 분비된 알칼리 포스파타제 (SeAP) 활성을 측정하였다 (상대 광 유닛이 선형 범위 (예를 들어, 75-100 RLU)에 있도록 최적화된, Pastrana et al 2004에 본질적으로 개시된 바와 같은 변형된 중화 검정). 혈청의 부재하에 PsV 감염에 의해 생성된 SeAP 활성 신호를 50%로 감소시키는 혈청 희석의 역수로서 중화 역가를 표시하였다. 40 이하의 중화 역가는 컷-오프(Cut-off) 이하로서 고려된다..
표 11은 마우스에서의 데이터를 요약한다.
표 11: 세 번째 면역화 후 14일째에 마우스에서 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 항혈청에 의한 HPV -6, 11, 16, 18, 33, 58 슈도비리온의 중화
Figure pct00022
Figure pct00023
* HPV 33/11 및 HPV 58/6 PsV는 각각 L2 펩티드 17-36 HPV 33/HPV 11 및 L2 펩티드 56-75 HPV 58/HPV 6에 특이적인 유형을 나타낸다.
키메라 L1/L2 폴리펩티드 항원 #5-L1-HPV 16/L2DE17 -36 및 #8-L1-HPV 18/L2DE17 -36 단독의 면역화는 #2-L1-HPV 18/L2Ct56 -75를 제외하고는 마우스에서 시험했을 때 (표 10) 검출가능한 특이적 중화 항체 (역가 범위 262-696)를 유도하였다. 키메라 L1/L2 폴리펩티드 항원 5-L1-HPV 16/L2DE17 -36 및 #8-L1-HPV 18/L2DE17 -36은 HPV 16/18 L1 VLP와 조합시에 여전히 검출가능한 중화 항체를 유도하였으나 그 정도가 보다 낮았다 (역가 범위 61-633).
표 11b: 세 번째 면역화 후 14일째에 마우스에서 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 항혈청에 의한 HPV -6, 11, 16, 18, 33, 58 슈도비리온의 중화
Figure pct00024
* HPV 33/11 및 HPV 58/6 PsV는 각각 L2 펩티드 17-36 HPV 33/HPV 11 및 L2 펩티드 56-75 HPV 58/HPV 6에 특이적인 유형을 나타낸다.
표 12 및 13은 III 이후 및 IV 이후 14일째에 래빗에서의 중화 데이터를 각각 요약한다.
시험된 대부분의 키메라 L1/L2 폴리펩티드 항원은 L1/L2 키메라#2 (NaCl 10OmM 중)를 제외하고는 래빗에서 (표 12 및 13) 검출가능한 특이적 및 교차 중화 항체를 유도하였다. L2 펩티드 56-75 HPV 58/HPV 11의 제시는 이러한 키메라가 ELISA 역가를 유도하였다는 관찰에도 불구하고 중화 항체를 유도하는데 최적이 아닐 수 있다. 키메라 L1/L2 폴리펩티드에 L2 펩티드의 삽입은 HPV-16 또는 HPV-18 L1에 대해 유도된 고-역가 중화 항체의 유도를 방해하지 않았다 (표 11 및 12). Specol에서 제형화된 키메라 L1/L2 폴리펩티드 #8은 Alum-MPL 제형에 비해 약 2배 더 높은 중화 역가를 유도하였다 (표 13). L1/L2 키메라 단독에 의한 면역화는 HPV 16 또는 HPV-18에 대해 현저하게 높은 중화 항체를 유도하였으며, 이는 담체 단백질 HPV-16 또는 HPV-18 L1 VLP에 대한 항체 반응을 반영한다. 더욱이, 고-위험 HPV-33,58의 양호한 중화는 키메라 L1/L2 폴리펩티드 #5에 대해 관찰되었고 키메라 L1/L2 폴리펩티드 #8에 대해서는 덜한 정도로 관찰되었다. 또한, 저-위험 HPV-6 및 11의 중화가 둘 모두의 래빗 혈청에 대해 검출되었다 (표 13).
표 12: 세 번째 면역화 후 14일째에 래빗에서 키메라 L1 7 L2 폴리펩티드에 의해 유도된 항혈청에 의한 HPV -6, 11, 16, 18, 33, 58 슈도비리온의 중화
Figure pct00025
* HPV 33/11 및 HPV 58/6 PsV는 각각 L2 펩티드 17-36 HPV 33/HPV 11 및 L2 펩티드 56-75 HPV 58/HPV 6에 특이적인 유형을 나타낸다.
표 13: 네 번째 면역화 후 14일째에 래빗에서 키메라 L1 / L2 폴리펩티드에 의해 유도된 항혈청에 의한 HPV -6, 11, 133, 58 슈도비리온의 중화
Figure pct00026
* HPV 33/11 및 HPV 58/6 PsV는 각각 L2 펩티드 17-36 HPV 33/HPV 11 및 L2 펩티드 56-75 HPV 58/HPV 6에 특이적인 유형을 나타낸다.
또 다른 실험에서, 소형 비-VLP로서 정제된 키메라 #2 및 키메라 3을 AS04 애쥬번트 (alum 3D-MPL)로 제형화하여 각기 래빗에게 투여하였고 항펩티드 17-36, 및 항펩티드 56-75 및 항 HPV L1 반응에 대해 ELISA로 시험하였다. 두 번째 면역화 후, 하기 데이터를 수득하였다.
표 14: 래빗에서 L1 / L2 키메라의 면역원성 - 항 L2 17 -36 (두 번째 면역화)
표 15: 래빗에서 L1 / L2 키메라의 면역원성 - 항 L2 56 -75 (두 번째 면역화)
Figure pct00028
표 16: 래빗에서 L1 / L2 키메라의 면역원성 - 항 HPV 18 L1 (두 번째 면역화)
Figure pct00029
부록: 참고문헌 목록
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
예시적인 키메라 L1/L2 폴리펩티드의 아미노산 서열
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
SEQUENCE LISTING <110> GaxoSmithKline Biologicals S.A. Baudoux, Guy Colau, Brigitte Najoua, Dendouga Giannini, Sandra Lecrenier, Nicolas <120> Novel Compositions <130> VB63752 <150> 61220358 <151> 2009-06-25 <150> 61239880 <151> 2009-09-04 <150> 61322102 <151> 2010-04-08 <160> 45 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 16 <400> 1 Gln Leu Tyr Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile 1 5 10 15 Ile Pro Lys Val 20 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 52 <400> 2 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Ala Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Val 20 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 51 <400> 3 Gln Leu Tyr Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Val Asn Lys Val 20 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 6 <400> 4 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Val 20 <210> 5 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 11 <400> 5 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Val 20 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 31 <400> 6 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Ile 20 <210> 7 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 45 <400> 7 Asp Leu Tyr Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Asn Lys Val 20 <210> 8 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 16 <400> 8 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly 1 5 10 15 Tyr Ile Pro Leu 20 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 6 <400> 9 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Leu 20 <210> 10 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 31 <400> 10 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Leu 20 <210> 11 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 33 <400> 11 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Ile 20 <210> 12 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 45 <400> 12 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Leu 20 <210> 13 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 11 <400> 13 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ala Gly Ser Gly Gly Arg Ala Gly 1 5 10 15 Tyr Ile Pro Leu 20 <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 35 <400> 14 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Ser Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Leu 20 <210> 15 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 52 <400> 15 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ala Gly Ser Gly Gly Arg Ala Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Leu 20 <210> 16 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 6 <400> 16 Glu Pro Val Ala Pro Ser Asp Pro Ser Ile Val Ser Leu Ile Glu Glu 1 5 10 15 Ser Ala Ile Ile 20 <210> 17 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 52 <400> 17 Glu Pro Ile Gly Pro Leu Glu Pro Ser Ile Val Ser Met Ile Glu Glu 1 5 10 15 Thr Thr Phe Ile 20 <210> 18 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 31 <400> 18 Asp Pro Val Gly Pro Leu Asp Pro Ser Ile Val Ser Leu Val Glu Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Val 20 <210> 19 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 16 <400> 19 Asp Pro Val Gly Pro Ser Asp Pro Ser Ile Val Ser Leu Val Glu Glu 1 5 10 15 Thr Ser Phe Ile 20 <210> 20 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 58 <400> 20 Asp Thr Val Gly Pro Leu Asp Ser Ser Ile Val Ser Leu Ile Glu Glu 1 5 10 15 Ser Ser Phe Ile 20 <210> 21 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 45 <400> 21 Glu Pro Val Gly Pro Thr Asp Pro Ser Ile Val Thr Leu Val Glu Asp 1 5 10 15 Ser Ser Val Val 20 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 16 <400> 22 Leu Val Glu Glu Thr Ser Phe Ile Asp Ala Gly Ala Pro 1 5 10 <210> 23 <211> 13 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 18 <400> 23 Leu Ile Glu Asp Ser Ser Val Val Thr Ser Gly Ala Pro 1 5 10 <210> 24 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 24 Gln Leu Tyr Lys Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val 1 5 10 <210> 25 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 25 Gln Leu Tyr Lys Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val 1 5 10 <210> 26 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 26 Gln Leu Tyr Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Val 20 <210> 27 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 27 Gln Leu Tyr Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Asn Lys Val 20 <210> 28 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 28 Asp Leu Tyr Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Val 20 <210> 29 <211> 8 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 16 <400> 29 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly 1 5 <210> 30 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 30 Gln Leu Tyr Lys Thr Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Gly Gly Leu 1 5 10 15 Gly Ile Gly Thr Gly 20 <210> 31 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic L2 peptide <400> 31 Gln Leu Tyr Lys Thr Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Gly Gly Leu 1 5 10 15 Gly Ile Gly Thr Gly 20 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 16 <400> 32 Gly Gly Leu Gly Ile 1 5 <210> 33 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 5 <400> 33 His Ile Tyr Gln Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 1 5 10 15 Ile Asn Lys Val 20 <210> 34 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 56 <400> 34 Gln Leu Tyr Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val 1 5 10 15 Val Asn Lys Ile 20 <210> 35 <211> 20 <212> PRT <213> Human papillomavirus type 5 <400> 35 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly 1 5 10 15 Tyr Val Pro Leu 20 <210> 36 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 36 Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro 1 5 10 15 Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser 20 25 30 Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro 35 40 45 Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys 50 55 60 Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Asn Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr 130 135 140 Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Tyr Val Pro Leu Asn Val Ser 145 150 155 160 Glu Asp Val Arg Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu 165 170 175 Cys Ile Leu Gly Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly 180 185 190 Thr Ala Cys Lys Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu 195 200 205 Glu Leu Lys Asn Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly 210 215 220 Tyr Gly Ala Met Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val 225 230 235 240 Pro Leu Asp Ile Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln 245 250 255 Met Ser Ala Asp Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg 260 265 270 Glu Gln Leu Phe Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly 275 280 285 Asp Thr Val Pro Pro Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala 290 295 300 Ser Pro Gly Ser Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr 355 360 365 Gln Ser Pro Val Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr 370 375 380 Ser Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys 385 390 395 400 Thr Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn 405 410 415 Ser Ser Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr 420 425 430 Thr Ser Leu Val Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr 435 440 445 Cys Gln Lys Asp Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp Pro Tyr Asp Lys 450 455 460 Leu Lys Phe Trp Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Leu Asp Leu 465 470 475 480 Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln 485 490 <210> 37 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 37 Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro 1 5 10 15 Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser 20 25 30 Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro 35 40 45 Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys 50 55 60 Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Asn Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Asn Val Ser Glu Asp Val Arg 130 135 140 Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Leu Gly 145 150 155 160 Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly Thr Ala Cys Lys 165 170 175 Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys Asn 180 185 190 Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Met 195 200 205 Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val Pro Leu Asp Ile 210 215 220 Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala Asp 225 230 235 240 Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe 245 250 255 Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly Asp Thr Val Pro 260 265 270 Pro Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala Ser Pro Gly Ser 275 280 285 Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val Thr Ser Asp Ser 290 295 300 Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln Gly His Asn 305 310 315 320 Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr 325 330 335 Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr Gln Ser Pro Val 340 345 350 Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr Ser Arg His Val 355 360 365 Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr Ile Thr Leu 370 375 380 Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Ser Ile Leu 385 390 395 400 Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ser Leu Val 405 410 415 Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr Cys Gln Lys Asp 420 425 430 Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly 435 440 445 Tyr Val Pro Leu Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp Pro Tyr Asp Lys 450 455 460 Leu Lys Phe Trp Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Leu Asp Leu 465 470 475 480 Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln 485 490 <210> 38 <211> 512 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 38 Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro 1 5 10 15 Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser 20 25 30 Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro 35 40 45 Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys 50 55 60 Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Asn Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys 130 135 140 Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Asn Val Ser 145 150 155 160 Glu Asp Val Arg Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu 165 170 175 Cys Ile Leu Gly Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly 180 185 190 Thr Ala Cys Lys Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu 195 200 205 Glu Leu Lys Asn Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly 210 215 220 Tyr Gly Ala Met Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val 225 230 235 240 Pro Leu Asp Ile Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln 245 250 255 Met Ser Ala Asp Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg 260 265 270 Glu Gln Leu Phe Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly 275 280 285 Asp Thr Val Pro Pro Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala 290 295 300 Ser Pro Gly Ser Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr 355 360 365 Gln Ser Pro Val Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr 370 375 380 Ser Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys 385 390 395 400 Thr Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn 405 410 415 Ser Ser Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr 420 425 430 Thr Ser Leu Val Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr 435 440 445 Cys Gln Lys Asp Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly 450 455 460 Gly Arg Thr Gly Tyr Val Pro Leu Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp 465 470 475 480 Pro Tyr Asp Lys Leu Lys Phe Trp Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe 485 490 495 Ser Leu Asp Leu Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln 500 505 510 <210> 39 <211> 491 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 39 Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val 1 5 10 15 Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn 20 25 30 Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro 35 40 45 Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys 50 55 60 Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Asn Ala Gly Val Asp Asn Arg 130 135 140 Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly 145 150 155 160 Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Ser Pro Cys Thr 165 170 175 Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Asn 180 185 190 Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met 195 200 205 Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val Pro Leu Asp Ile 210 215 220 Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys Met Val Ser Glu 225 230 235 240 Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe 245 250 255 Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly Glu Asn Val Pro 260 265 270 Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala Asn Leu Ala Ser 275 280 285 Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ala 290 295 300 Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn 305 310 315 320 Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr 325 330 335 Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile Ser Thr Ser Glu 340 345 350 Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly Glu 355 360 365 Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr 370 375 380 Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Thr Ile Leu Glu 385 390 395 400 Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly Thr Leu Glu Asp 405 410 415 Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys Gln Lys His Gly 420 425 430 Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Tyr 435 440 445 Val Pro Leu Thr Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro Leu Lys Lys Tyr 450 455 460 Thr Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp 465 470 475 480 Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln 485 490 <210> 40 <211> 491 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 40 Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val 1 5 10 15 Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn 20 25 30 Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro 35 40 45 Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys 50 55 60 Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys 130 135 140 Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Asn Ala Gly 145 150 155 160 Val Asp Asn Arg Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu 165 170 175 Cys Leu Ile Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly 180 185 190 Ser Pro Cys Thr Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu 195 200 205 Glu Leu Ile Asn Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly 210 215 220 Phe Gly Ala Met Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val 225 230 235 240 Pro Leu Asp Ile Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys 245 250 255 Met Val Ser Glu Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg 260 265 270 Glu Gln Met Phe Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly 275 280 285 Glu Asn Val Pro Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala 290 295 300 Asn Leu Ala Ser Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ala Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile 355 360 365 Ser Thr Ser Glu Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu 370 375 380 Arg His Gly Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys 385 390 395 400 Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser 405 410 415 Thr Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly 420 425 430 Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys 435 440 445 Gln Lys His Thr Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro Leu Lys Lys Tyr 450 455 460 Thr Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp 465 470 475 480 Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln 485 490 <210> 41 <211> 491 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 41 Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val 1 5 10 15 Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn 20 25 30 Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro 35 40 45 Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys 50 55 60 Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Asn Ala Gly Val Asp Asn Arg 130 135 140 Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly 145 150 155 160 Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Ser Pro Cys Thr 165 170 175 Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Asn 180 185 190 Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met 195 200 205 Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val Pro Leu Asp Ile 210 215 220 Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys Met Val Ser Glu 225 230 235 240 Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe 245 250 255 Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly Glu Asn Val Pro 260 265 270 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 275 280 285 Ile Pro Lys Val Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala 290 295 300 Asn Leu Ala Ser Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ala Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile 355 360 365 Ser Thr Ser Glu Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu 370 375 380 Arg His Gly Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys 385 390 395 400 Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser 405 410 415 Thr Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly 420 425 430 Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys 435 440 445 Gln Lys His Thr Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro Leu Lys Lys Tyr 450 455 460 Thr Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp 465 470 475 480 Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln 485 490 <210> 42 <211> 511 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 42 Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val 1 5 10 15 Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn 20 25 30 Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro 35 40 45 Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys 50 55 60 Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys 130 135 140 Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Asn Ala Gly 145 150 155 160 Val Asp Asn Arg Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu 165 170 175 Cys Leu Ile Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly 180 185 190 Ser Pro Cys Thr Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu 195 200 205 Glu Leu Ile Asn Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly 210 215 220 Phe Gly Ala Met Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val 225 230 235 240 Pro Leu Asp Ile Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys 245 250 255 Met Val Ser Glu Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg 260 265 270 Glu Gln Met Phe Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly 275 280 285 Glu Asn Val Pro Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala 290 295 300 Asn Leu Ala Ser Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ala Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile 355 360 365 Ser Thr Ser Glu Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu 370 375 380 Arg His Gly Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys 385 390 395 400 Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser 405 410 415 Thr Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly 420 425 430 Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys 435 440 445 Gln Lys His Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr Gly Ser Gly Thr Gly Gly 450 455 460 Arg Thr Gly Tyr Val Pro Leu Thr Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro 465 470 475 480 Leu Lys Lys Tyr Thr Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser 485 490 495 Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln 500 505 510 <210> 43 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 43 Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro 1 5 10 15 Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser 20 25 30 Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro 35 40 45 Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys 50 55 60 Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Asn Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys 130 135 140 Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Asn Val Ser 145 150 155 160 Glu Asp Val Arg Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu 165 170 175 Cys Ile Leu Gly Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly 180 185 190 Thr Ala Cys Lys Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu 195 200 205 Glu Leu Lys Asn Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly 210 215 220 Tyr Gly Ala Met Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val 225 230 235 240 Pro Leu Asp Ile Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln 245 250 255 Met Ser Ala Asp Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg 260 265 270 Glu Gln Leu Phe Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly 275 280 285 Asp Thr Val Pro Pro Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala 290 295 300 Ser Pro Gly Ser Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr 355 360 365 Gln Ser Pro Val Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr 370 375 380 Ser Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys 385 390 395 400 Thr Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn 405 410 415 Ser Ser Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr 420 425 430 Thr Ser Leu Val Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr 435 440 445 Cys Gln Lys Asp Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp Pro Tyr Asp Lys 450 455 460 Leu Lys Phe Trp Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Leu Asp Leu 465 470 475 480 Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln 485 490 <210> 44 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 44 Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro 1 5 10 15 Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser 20 25 30 Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro 35 40 45 Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys 50 55 60 Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Asn Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Asn Val Ser Glu Asp Val Arg 130 135 140 Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Leu Gly 145 150 155 160 Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly Thr Ala Cys Lys 165 170 175 Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys Asn 180 185 190 Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Met 195 200 205 Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val Pro Leu Asp Ile 210 215 220 Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala Asp 225 230 235 240 Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe 245 250 255 Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly Asp Thr Val Pro 260 265 270 Pro Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala Ser Pro Gly Ser 275 280 285 Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val Thr Ser Asp Ser 290 295 300 Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln Gly His Asn 305 310 315 320 Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr 325 330 335 Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr Gln Ser Pro Val 340 345 350 Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr Ser Arg His Val 355 360 365 Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr Ile Thr Leu 370 375 380 Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Ser Ile Leu 385 390 395 400 Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ser Leu Val 405 410 415 Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr Cys Gln Lys Asp 420 425 430 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val 435 440 445 Ile Pro Lys Val Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp Pro Tyr Asp Lys 450 455 460 Leu Lys Phe Trp Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Leu Asp Leu 465 470 475 480 Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln 485 490 <210> 45 <211> 491 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric L1/L2 peptide <400> 45 Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val 1 5 10 15 Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn 20 25 30 Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro 35 40 45 Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys 50 55 60 Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro 65 70 75 80 Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln 85 90 95 Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro 100 105 110 Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp 115 120 125 Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Gly Gly Leu Gly Ile Gly Thr 130 135 140 Gly Ser Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Tyr Val Pro Leu Asn Ala Gly 145 150 155 160 Val Asp Asn Arg Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu 165 170 175 Cys Leu Ile Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly 180 185 190 Ser Pro Cys Thr Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu 195 200 205 Glu Leu Ile Asn Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly 210 215 220 Phe Gly Ala Met Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val 225 230 235 240 Pro Leu Asp Ile Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys 245 250 255 Met Val Ser Glu Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg 260 265 270 Glu Gln Met Phe Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly 275 280 285 Glu Asn Val Pro Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala 290 295 300 Asn Leu Ala Ser Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val 305 310 315 320 Thr Ser Asp Ala Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala 325 330 335 Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr 340 345 350 Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile 355 360 365 Ser Thr Ser Glu Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu 370 375 380 Arg His Gly Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys 385 390 395 400 Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser 405 410 415 Thr Ile Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly 420 425 430 Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys 435 440 445 Gln Lys His Thr Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro Leu Lys Lys Tyr 450 455 460 Thr Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp 465 470 475 480 Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln 485 490

Claims (88)

  1. 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV 유형 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 L2 폴리펩티드의 펩티드가 비-HPV 유형 18 펩티드인 폴리펩티드.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 L2 폴리펩티드를 포함하는 천연(native) 단백질에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 폴리펩티드.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 하나 이상의 추가의 천연 L2 단백질에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 폴리펩티드.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 HPV L1 단백질이 하나 이상의 아미노산의 C-말단 결실을 포함하는 폴리펩티드.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L1 폴리펩티드의 노출된 영역 내에 삽입된 폴리펩티드.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L1 단백질의 DE 루프에 삽입된 폴리펩티드.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 아미노산 132-142 사이에 삽입된 폴리펩티드.
  9. 제 1항 내지 제 8항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L1 단백질의 FG 루프에 삽입된 폴리펩티드.
  10. 제 9항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 아미노산 172-182 사이에 삽입된 폴리펩티드.
  11. 제 1항 내지 제 10항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L1 단백질의 HI 루프에 삽입된 폴리펩티드.
  12. 제 11항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 아미노산 345-359 사이에 삽입된 폴리펩티드.
  13. 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L1 폴리펩티드의 C 말단 내에 삽입된 폴리펩티드.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 아미노산 429 내지 445 사이에 삽입된 폴리펩티드.
  15. 제 1항 내지 제 14항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 L1 폴리펩티드 내에 삽입된 두 개 이상의 L2 펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 상이한 부위에 삽입된 폴리펩티드.
  17. 제 16항에 있어서, 첫 번째 L2 펩티드가 DE 루프에 삽입되고, 두 번째 L2 펩티드가 L1 폴리펩티드의 C 말단에 삽입된 폴리펩티드.
  18. 제 15항 내지 제 17항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 상이한 것인 폴리펩티드.
  19. 제 1항 내지 제 18항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드의 8개 이상의 연속하는 아미노산을 포함하는 폴리펩티드.
  20. 제 1항 내지 제 19항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 HPV L2 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 1-200으로부터 선택된 폴리펩티드.
  21. 제 1항 내지 제 20항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 HPV L2 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 1-150으로부터 선택된 폴리펩티드.
  22. 제 1항 내지 제 21항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 하기의 선택된 군으로부터 선택된 폴리펩티드:
    HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 17-36을 포함하는 펩티드;
    HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 56-75를 포함하는 펩티드;
    HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 96-115를 포함하는 펩티드; 및
    HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 잔기 108-120을 포함하는 펩티드.
  23. 제 1항 내지 제 22항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 HPV 유형 33 L2의 아미노산 17-36으로 구성된 폴리펩티드.
  24. 제 1항 내지 제 23항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 HPV 유형 58 L2의 아미노산 56-75로 구성된 폴리펩티드.
  25. 제 1항 내지 제 24항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 SEQ ID NO: 1-31에 의해 표시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  26. 제 1항 내지 제 25항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환을 포함하는 폴리펩티드.
  27. 제 26항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 아미노산의 삽입을 포함하는 폴리펩티드.
  28. 제 26항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 폴리펩티드.
  29. 제 26항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 아미노산의 치환을 포함하는 폴리펩티드.
  30. 제 26항 내지 제 29항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환이 두 개의 시스테인 사이에 있는 이황화 결합을 제거하거나 이황화 결합을 형성할 수 있는 두 시스테인 사이의 아미노산을 제거하는 폴리펩티드.
  31. 제 1항 내지 제 30항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 두 개 이상의 L2 펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
  32. 제 31항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 연속하는 폴리펩티드.
  33. 제 31항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 하나 이상의 추가의 아미노산에 의해 연결된 폴리펩티드.
  34. 제 33항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 다수의 아미노산을 포함하는 스페이서에 의해 연결된 폴리펩티드.
  35. 제 1항 내지 제 34항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 L2 펩티드가 8개 이상의 연속하는 아미노산을 포함하고, 상기 8개 이상의 연속하는 아미노산이 두 개 이상의 HPV 유형의 L2 폴리펩티드와 동일한 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  36. 제 1항 내지 제 35항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L2 폴리펩티드의 아미노산을 결실시키지 않으며 L1 폴리펩티드 내에 삽입된 폴리펩티드.
  37. 제 1항 내지 제 36항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 L2 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산을 결실시키며 L1 폴리펩티드 내에 삽입된 폴리펩티드.
  38. SEQ ID NO: 32-45 중의 어느 하나에 의해 표시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  39. 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75를 포함하는 펩티드를 포함하는 HPV L1 유형 16 폴리펩티드 또는 이의 단편.
  40. 제 39항에 있어서, 상기 HPV L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75를 포함하는 펩티드가 HPV의 종양원성 유형으로부터 선택된 폴리펩티드.
  41. 제 39항 또는 제 40항에 있어서, 상기 HPV 유형 58 L2 폴리펩티드의 아미노산 56-75를 포함하는 펩티드가 HPV L1 폴리펩티드 내에 삽입된 폴리펩티드.
  42. 제 39항 내지 제 41항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실, 또는 치환을 포함하는 폴리펩티드.
  43. 제 42항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드 서열에 비해 하나 이상의 아미노산의 삽입을 포함하는 폴리펩티드.
  44. 제 42항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드 서열에 비해 하나 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 폴리펩티드.
  45. 제 42항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 천연 L2 폴리펩티드 서열에 비해 하나 이상의 아미노산의 치환을 포함하는 폴리펩티드.
  46. 제 42항 내지 제 45항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환이 두 개의 시스테인 사이에 있는 이황화 결합을 제거하거나 이황화 결합을 형성할 수 있는 두 시스테인 사이의 아미노산을 제거하는 폴리펩티드.
  47. 제 39항 내지 제 46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 L2 펩티드가 두 개 이상의 L2 펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
  48. 제 47항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 연속하는 폴리펩티드.
  49. 제 47항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 하나 이상의 추가의 아미노산에 의해 연결된 폴리펩티드.
  50. 제 49항에 있어서, 상기 두 개 이상의 L2 펩티드가 다수의 아미노산을 포함하는 스페이서에 의해 연결된 폴리펩티드.
  51. 제 42항 내지 제 50항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함하는 하나 이상의 L2 펩티드를 포함하는 폴리펩티드가 L2 폴리펩티드를 포함하는 천연 단백질에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 폴리펩티드.
  52. 제 39항 내지 제 51항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 L2 펩티드가 8개 이상의 연속하는 아미노산을 포함하고, 상기 8개 이상의 연속하는 아미노산이 두 개 이상의 HPV 유형의 L2 폴리펩티드와 동일한 서열인 폴리펩티드.
  53. 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항에 정의된 폴리펩티드를 포함하는 캡소머(capsomer).
  54. 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항에 정의된 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 유사 입자(VLP).
  55. 제 1항 내지 제 54항 중의 어느 한 항에 정의된 단백질, 캡소머 또는 VLP 및 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  56. 제 55항에 있어서, 애쥬번트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  57. 제 56항에 있어서, 상기 애쥬번트가 알루미늄 염을 포함하는 면역원성 조성물.
  58. 제 57항에 있어서, 상기 알루미늄 염이 수산화알루미늄인 면역원성 조성물.
  59. 제 57항 또는 제 58항에 있어서, 3D-MPL을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  60. 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항에 정의된 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자.
  61. 제 59항에 정의된 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  62. 제 61항에 있어서, 상기 발현 벡터가 재조합 바쿨로바이러스인 발현 벡터.
  63. 제 59항에 정의된 핵산 또는 제 61항에 정의된 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  64. 약제에 사용되는 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항에 정의된 폴리펩티드.
  65. 제 61항 또는 제 62항의 발현 벡터를 세포에 도입시키고, 상기 세포를 폴리펩티드가 생산되는 조건하에 복제시키는 것을 포함하여, 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항의 폴리펩티드를 생산하는 방법.
  66. (i) 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 바이러스 유사 입자(VLP); 및
    (ii) HPV L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
  67. 제 66항에 있어서, 상기 (i)의 VLP가 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편으로 구성된 것인 조성물.
  68. 제 66항 또는 제 67항에 있어서, 상기 (ii)의 하나 이상의 키메라 폴리펩티드가 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항의 폴리펩티드, 제 53항의 캡소머 또는 제 54항의 VLP인 조성물.
  69. 제 66항 내지 제 68항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 (i)의 HPV VLP가 HPV 16 및/또는 HPV 18 L1 VLP를 포함하는 조성물.
  70. 제 66항 내지 제 69항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 (ii)의 하나 이상의 키메라 폴리펩티드가 HPV 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편 및/또는 HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 조성물.
  71. 제 66항 내지 제 70항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 (ii)의 하나 이상의 키메라 폴리펩티드가 HPV 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편, HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 둘 모두의 HPV 16 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편과 HPV 18 L1 폴리펩티드 또는 이의 단편으로 구성된 조성물.
  72. 제 66항 내지 제 71항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 (ii)의 하나 이상의 키메라 폴리펩티드가 L1 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산의 C 말단 결실을 포함하는 조성물.
  73. 제 66항 내지 제 72항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 (i)의 VLP가 HPV 16 L1 VLP 및 HPV 18 L1 VLP 둘 모두를 포함하고, 상기 (ii)의 키메라 폴리펩티드가 HPV 16 L1 폴리펩티드를 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드 및 HPV 18 L1 폴리펩티드를 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
  74. 제 73항에 있어서, HPV 16 L1 폴리펩티드를 포함하는 키메라 폴리펩티드 및 HPV 18 L1 폴리펩티드를 포함하는 키메라 폴리펩티드가 상이한 L2 펩티드를 포함하는 조성물.
  75. 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 두 개 이상의 키메라 폴리펩티드의 조합물을 포함하는 조성물.
  76. 제 75항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 제 1항 내지 제 52항 중의 어느 한 항에 정의된 바와 같은 조성물.
  77. 제 75항 또는 제 76항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 동일한 HPV 유형의 L1 폴리펩티드를 포함하고, 상기 L2 펩티드가 상이한 것인 조성물.
  78. 제 66항 내지 제 77항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 각각의 VLP 및/또는 키메라 폴리펩티드가 인간 용량당 10 내지 50㎍의 양으로 존재하는 조성물.
  79. 제 78항에 있어서, 상기 각각의 VLP 및/또는 키메라 폴리펩티드가 약 20㎍의 양으로 존재하는 조성물.
  80. 제 66항 내지 제 79항 중의 어느 한 항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  81. 제 80항에 있어서, 애쥬번트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  82. 제 81항에 있어서, 상기 애쥬번트가 알루미늄 염을 포함하는 면역원성 조성물.
  83. 제 82항에 있어서, 상기 알루미늄 염이 수산화알루미늄인 면역원성 조성물.
  84. 제 82항 또는 제 83항에 있어서, 3D-MPL을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  85. (i) 하나 이상의 인간 파필로마바이러스 (HPV) L1 바이러스 유사 입자 (VLP)를,
    (ii) HPV L1 폴리펩티드 내에 삽입된 L2 폴리펩티드의 에피토프를 포함하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 HPV L1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 하나 이상의 키메라 폴리펩티드, 및
    (iii) 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 및 임의로
    (iv) 애쥬번트와 조합시켜, 제 80항 내지 제 84항 중의 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물을 생산하는 것을 포함하여, 면역원성 조성물을 제조하는 방법.
  86. 제 55항 내지 제 59항 또는 제 66항 내지 제 84항 중의 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하여, 인간에서 HPV에 대한 항체를 유도하는 방법.
  87. 제 86항에 있어서, HPV에 대한 항체를 유도하는 것이 HPV 감염 또는 질환을 예방, 개선 또는 치료하는 것인 방법.
  88. 제 55항 내지 제 59항 또는 제 66항 내지 제 84항 중의 어느 한 항에 있어서, HPV 감염 또는 질환의 예방, 개선 또는 치료에 사용되는 면역원성 조성물.
KR1020127001919A 2009-06-25 2010-06-24 인간 파필로마바이러스（ｈｐｖ） 단백질 작제물 및 ｈｐｖ 질환을 예방하기 위한 이의 용도 KR20120098580A (ko)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22035809P 2009-06-25 2009-06-25
US61/220,358 2009-06-25
US23988009P 2009-09-04 2009-09-04
US61/239,880 2009-09-04
US32210210P 2010-04-08 2010-04-08
US61/322,102 2010-04-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20120098580A true KR20120098580A (ko) 2012-09-05

Family

ID=43014491

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127001919A KR20120098580A (ko) 2009-06-25 2010-06-24 인간 파필로마바이러스（ｈｐｖ） 단백질 작제물 및 ｈｐｖ 질환을 예방하기 위한 이의 용도

Country Status (20)

Country Link
US (1) US20120087937A1 (ko)
EP (1) EP2445525A2 (ko)
JP (1) JP2012530505A (ko)
KR (1) KR20120098580A (ko)
CN (1) CN102497880A (ko)
AU (1) AU2010264695A1 (ko)
BR (1) BRPI1014718A2 (ko)
CA (1) CA2768172A1 (ko)
CL (1) CL2011003271A1 (ko)
CO (1) CO6480995A2 (ko)
CR (1) CR20120026A (ko)
DO (1) DOP2011000396A (ko)
EA (1) EA022213B1 (ko)
IL (1) IL217094A0 (ko)
MA (1) MA33440B1 (ko)
MX (1) MX2011013744A (ko)
PE (1) PE20120563A1 (ko)
SG (1) SG177269A1 (ko)
WO (1) WO2010149752A2 (ko)
ZA (1) ZA201109453B (ko)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107080833A (zh) * 2009-04-10 2017-08-22 约翰·霍普金斯大学 作为广谱人类乳头状瘤病毒（hpv）疫苗的乳头状瘤病毒样颗粒（vlp）
BR112014012491A2 (pt) 2011-12-01 2017-06-06 Univ Cape Town partícula tipo vírus, método para produzir uma partícula tipo vírus, método para impedir ou tratar a infecção pelo hpv ou câncer cervical em um indivíduo, uso de uma partícula tipo vírus, e, composição farmacêutica
CN104203270A (zh) 2012-03-18 2014-12-10 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 针对人乳头状瘤病毒的接种方法
CN103864936B (zh) * 2012-12-11 2018-01-23 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 Hpv18型l2ne7e6融合蛋白基因、表达载体、方法、菌株和用途
EP2940133A4 (en) * 2012-12-25 2016-07-06 Chemo Sero Therapeut Res Inst VACCINE AGAINST HPV AND / OR HEPATITIS B INFECTION CONTAINING CHIMERIC HPV / HBS PROTEIN AS AN ACTIVE INGREDIENT
CN111154777B (zh) * 2014-02-18 2023-08-15 上海泽润生物科技有限公司 重组人乳头瘤病毒蛋白表达
CN104531741B (zh) * 2014-08-22 2016-08-24 天津康希诺生物技术有限公司 增强hpv抗原表位肽免疫原性的方法及类病毒颗粒、颗粒制备方法与应用
IL251825B2 (en) * 2014-10-24 2023-09-01 Hpvvax Llc Treatment of cancer and skin damage
US10799574B2 (en) 2014-10-24 2020-10-13 Hpvvax. Llc Method and composition for treating cancer or skin lesion using a vaccine
EP3368068B1 (en) 2015-10-30 2020-11-18 University of Copenhagen Virus like particle with efficient epitope display
CN106831961B (zh) * 2015-12-04 2019-11-05 厦门大学 一种人乳头瘤病毒58型l1蛋白的突变体
CA3015519A1 (en) * 2016-02-27 2017-08-31 Hpvvax, Llc Method and composition for treating cancer or skin lesion using a vaccine
CN107188966B (zh) * 2016-03-15 2020-03-31 中国医学科学院基础医学研究所 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途
CN107188967B (zh) * 2016-03-15 2020-03-31 中国医学科学院基础医学研究所 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途
JP7224332B2 (ja) * 2017-07-14 2023-02-17 シャアメン ユニバーシティ ヒトパピローマウイルス１６型のｌ１タンパク質の変異体
EP3858867A4 (en) * 2018-09-26 2022-06-22 Xiamen University MUTANT OF L1 PROTEIN OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 51
WO2021013077A1 (zh) * 2019-07-19 2021-01-28 神州细胞工程有限公司 嵌合的人乳头瘤病毒58型l1蛋白
CN114127097B (zh) * 2019-07-19 2024-09-17 神州细胞工程有限公司 嵌合的人乳头瘤病毒56型l1蛋白
CN114127099B (zh) * 2019-07-19 2024-04-19 神州细胞工程有限公司 嵌合的人乳头瘤病毒6型l1蛋白
CN111944834A (zh) * 2020-09-04 2020-11-17 吉林医药学院 人乳头瘤病毒16型表位嵌合l1的重组载体、重组蛋白、病毒样颗粒及其制备和应用
CN112300290B (zh) * 2020-09-30 2022-04-01 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗
CN114716561B (zh) * 2021-01-04 2024-03-12 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒31型嵌合蛋白及其用途
CN114716560B (zh) * 2021-01-04 2024-02-02 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒18型嵌合蛋白及其用途
CN114716562B (zh) * 2021-01-04 2023-11-10 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒58型嵌合蛋白及其用途

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL117459A (en) * 1995-03-22 2005-11-20 Merck & Co Inc Dna encoding human papillomavirus type 18
ES2572628T3 (es) 1997-09-05 2016-06-01 Medimmune, Inc. Método in vitro para desmontaje/remontaje de partículas análogas al virus del papiloma humano (VLP)
US7351533B2 (en) 1997-09-05 2008-04-01 Medimmune, Inc. In vitro method for disassmbly/reassembly of papillomavirus virus-like particles (VLPs). Homogeneous VLP and cavsomere compositions produced by said methods: use thereof as vehicle for improved purification, and delivery of active agents
PT1012348E (pt) 1997-09-16 2002-11-29 Innogenetics Nv Deteccao do virus do papiloma humano por pcr e hibridacao reversa tipo-especifica
DE69935606T9 (de) 1998-10-16 2021-03-11 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvanzsysteme und impfstoffe
GB9921146D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
AU2002333351A1 (en) 2001-08-08 2003-02-24 Delft Diagnostic Laboratory Method for identification of type specific polynucleotide sequences
GB0206360D0 (en) * 2002-03-18 2002-05-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Viral antigens
WO2003097673A2 (en) * 2002-05-17 2003-11-27 University Of Cape Town Chimeric human papillomavirus 16 l1 proteins comprising an l2 peptide,virus-like particles prepared therefrom and a method for preparing the particles.
GB0228715D0 (en) 2002-12-09 2003-01-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US8404244B2 (en) 2005-02-01 2013-03-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Papillomavirus L2 N-terminal peptides for the induction of broadly cross-neutralizing antibodies
JP4825958B2 (ja) * 2005-08-10 2011-11-30 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 高リスク群ヒトパピローマウイルスの中和抗体を誘導する抗原
MX2009014246A (es) * 2007-06-26 2010-03-31 Japan Health Science Found Antigeno de vacuna con la capacidad de inducir anticuerpo de neutralizacion y reaccion cruzada contra virus de papiloma humano del tipo de alto riesgo.
CN113559253B (zh) * 2007-11-02 2024-09-17 约翰霍普金斯大学 用于治疗或预防人乳头瘤病毒感染的多型hpv肽的组合物和方法
PT2318042E (pt) 2008-07-31 2014-11-05 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina contra hpv

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI1014718A2 (pt) 2016-04-12
ZA201109453B (en) 2012-08-29
EA022213B1 (ru) 2015-11-30
AU2010264695A1 (en) 2012-01-19
CN102497880A (zh) 2012-06-13
US20120087937A1 (en) 2012-04-12
IL217094A0 (en) 2012-02-29
DOP2011000396A (es) 2012-02-15
MX2011013744A (es) 2012-09-28
WO2010149752A3 (en) 2011-03-31
JP2012530505A (ja) 2012-12-06
EA201190327A1 (ru) 2012-07-30
MA33440B1 (fr) 2012-07-03
CO6480995A2 (es) 2012-07-16
CL2011003271A1 (es) 2012-08-31
PE20120563A1 (es) 2012-05-17
CR20120026A (es) 2012-04-13
WO2010149752A2 (en) 2010-12-29
CA2768172A1 (en) 2010-12-29
SG177269A1 (en) 2012-02-28
EP2445525A2 (en) 2012-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20120098580A (ko) 인간 파필로마바이러스（ｈｐｖ） 단백질 작제물 및 ｈｐｖ 질환을 예방하기 위한 이의 용도
WO2017157173A1 (zh) 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途
WO2017157172A1 (zh) 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途
KR20100029216A (ko) 고리스크군 인간 파필로마 바이러스에 대한 교차성 중화 항체를 유도하는 백신 항원
US8039001B2 (en) Therapeutic and prophylactic vaccine for the treatment and prevention of papillomavirus infection
WO2008145021A1 (en) A truncated l1 protein of human papillomavirus 6
CN114127092A (zh) 人乳头瘤病毒多价免疫原性组合物
KR102116320B1 (ko) 타겟 폴리펩티드를 제시하기 위한 폴리펩티드 캐리어 및 이의 용도
CA2691091C (en) Fusion protein, macromolecule assembled from the fusion protein, and its use in the prevention or treatment of human papillomavirus related diseases
EP0797667A1 (en) Papillomavirus vaccine
WO2012006962A1 (zh) 截短的人乳头瘤病毒58型l1蛋白
KR102567627B1 (ko) 인간 유두종 바이러스 타입 16의 l1 단백질의 변이체
CN114716561B (zh) 一种人乳头瘤病毒31型嵌合蛋白及其用途
JP2024502837A (ja) 高病原性コロナウイルスに対する細胞傷害性ｔ細胞免疫療法
KR20050050115A (ko) 유두종바이러스의 2종 이상의 비구조적 초기 단백질을암호화하는 ｄｎａ 백신
KR20210018312A (ko) 인유두종 바이러스 18 엘1 단백질의 돌연변이체
US10329328B2 (en) HPV-related fusion protein and applications thereof
CZ28899A3 (cs) Polypeptidy použitelné jako imunoterapeutická činidla a způsoby přípravy polypeptidů
KR20220058090A (ko) D614g 변이형 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물
AU4889102A (en) Papillomavirus vaccine
AU5013099A (en) Papillomavirus vaccine

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid