KR20120025938A - 여시니아 엔테로콜리티카 랜덤 지노믹 dna 단편을 이용한 유전자 칩 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)의 랜덤 지노믹 DNA 단편을 이용한 유전자 칩에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 Y. enterocolitica의 지노믹 DNA로부터 유래된 랜덤 지노믹 DNA 프로브를 포함하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩에 관한 것이다.
본 발명은 특정 유전 표지자를 이용해서 제작한 기존의 Y. enterocolitica 검출용 칩과는 다르게, 특정 유전 정보 없이 단 하나의 Y. enterocolitica 균주에서 추출된 지노믹 DNA를 무작위로 절단하여 얻어진 69 개의 DNA 단편을 이용하여 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩을 제작하였다. 상기 DNA 칩은 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(species) 및 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)의 미생물과 차별되면서 단지 Y. enterocolitica만 검출할 수 있다.
본 발명은 특정 유전 표지자를 이용해서 제작한 기존의 Y. enterocolitica 검출용 칩과는 다르게, 특정 유전 정보 없이 단 하나의 Y. enterocolitica 균주에서 추출된 지노믹 DNA를 무작위로 절단하여 얻어진 69 개의 DNA 단편을 이용하여 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩을 제작하였다. 상기 DNA 칩은 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(species) 및 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)의 미생물과 차별되면서 단지 Y. enterocolitica만 검출할 수 있다.
Description
본 발명은 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)의 랜덤 지노믹 DNA 단편을 이용한 유전자 칩에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 Y. enterocolitica의 지노믹 DNA로부터 유래된 랜덤 지노믹 DNA 프로브를 포함하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩에 관한 것이다.
Enterobacteriaceae과(family)에 속하는 통성혐기성, 그람음성간균인 여시니아(Yersinia) 속(Genus)은 11 개의 종(species)으로 분류된다. 11 개의 종(species) 중 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)는 사람과 동물에서 병원성을 나타내는 대표적인 식중독 균이다. 이 균은 주로 사람의 장내 질환, 열과 설사를 동반한 급성 위장염, 급성 충수염을 유발하며, 이밖에 림프절염, 관절염, 결절성 홍반 등을 일으킨다. Y. enterocolitica 감염은 주로 비 가공 유제품이나 덜 익힌 돼지고기와 같은 동물로부터 유래된 식품의 섭취에 의해 발생되지만, 이것 외에도 살균 처리되지 않은 물이나 하수에 의한 감염사례도 빈번하게 보고되고 있다. 또한 이 균은 대부분의 미생물이 증식하기 어려운 저온(약 0 ℃)에 저장된 식품이나 진공포장식품에서도 증식할 수 있는데, 이것이 소비자의 안전을 위해 식품산업에서 이 균에 대해 관심을 갖는 주요 원인 중 하나이다.
식품에 오염된 Y. enterocolitica를 검출하는 다양한 진단방법이 개발되었으며, 가장 일반적으로 사용하고 있는 전통적인 검출방법은 3 주 이상 4 ℃에서 한냉 증균(cold enrichment)과정을 포함하고 있기 때문에 시간이 오래 걸린다는 단점이 있으며, 증균(enrichment)에 의해 증식된 균을 선택 배양하기 위한 selective agar plate인 CIN(cefsulodin-irgasan-novobiocin) agar에서 Aeromonas spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Proteus spp.와 같은 다른 미생물이 성장한 연구 보고가 있고, CIN agar에서 성장한 콜로니(colony)가 Y. enterocolitica 임을 확인하기 위해 사용되는 API kit에서는 다른 여시니아(Yersinia) 종(species)들이 Y. enterocolitica로 잘못 판단되는 오류가 발생하기도 한다.
분자생물학적 진단방법 중에서는 정확한 검출능력을 가진 것으로 PCR machine을 이용하는 방법이 있으며, 이와 관련된 다양한 연구보고가 있다. 그러나, PCR을 이용한 검출 방법은 16S rRNA 또는 병원성 유전자와 같은 유전 표지자의 시퀀스(sequence) 정보가 요구되며, 결과 확인을 위한 겔 전기영동(gel electrophoresis) 역시 노동집약적이며 시간 소모적이다. 뿐만 아니라, 상기 검출방법은 때때로 부 정확한(non-specific band) 결과를 유도하기도 하는데, 특히 다양한 유전 표지자를 동시검출하기위한 multiple PCR(동시다중유전자증폭)의 경우 더 빈번하게 잘못된 결과를 유발한다.
DNA 칩(DNA chip)은 슬라이드 글라스(slide glass), 실리콘(silicon)과 같은 플랫폼(platform) 위에 DNA 프로브(DNA probe)로 알려진 유전자를 고정하여 제작하는 방법으로, 검출하고자 하는 미생물의 특정 유전자와 혼성화 방법을 통해 정확한 검출 결과를 얻을 수 있으며, 수천 개 이상의 DNA 프로브를 플랫폼 위에 고정화시킬 수 있는 장점 때문에, 신속하고 동시적인 미생물 검출을 위해 사용된다. 다양한 종류의 DNA 프로브를 이용하여 칩을 제작할 수 있는데, 그 프로브의 종류로는 PCR machine을 이용해서 기능성 유전자를 증폭하는 방법 또는 올리로뉴클레오티드(oligonucleotide)를 합성해서 제작하는 방법이 있다. 하지만 이 두 가지 방법은 특정 유전 표지자의 유전정보(sequence information)를 알고 있어야 제작이 가능하다. Whole genomic DNA를 사용하거나 랜덤 지노믹(random genomic) DNA를 사용하는 방법은 특정 유전표지자의 정보를 알지 못하더라도 DNA 프로브로 이용할 수 있는 방법이다. 하지만, whole genomic DNA를 사용해서 제작된 칩의 검출능력이 랜덤 지노믹 DNA를 사용해서 제작된 칩에 비해 떨어진다는 연구가 보고되어졌다. 랜덤 지노믹(Random genomic) DNA를 프로브로 사용하여 슬러지(sludge)에 존재하는 환경미생물을 검출했던 칩에 대한 연구 결과가 이미 보고되어 졌지만, 아직 Y. enterocolitica를 검출하기 위해 칩이 제작된 사례는 없었다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, Y. enterocolitica의 랜덤 지노믹 DNA 단편을 이용하여 Y. enterocolitica 진단용 DNA 칩을 개발하였으며, 제작된 칩이 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(species)의 미생물로부터 Y. enterocolitica를 선별적으로 진단할 수 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 Y. enterocolitica만을 검출할 수 있는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩 및 상기 DNA 칩의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 DNA 칩을 이용한 Y. enterocolitica 균의 탐지방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)의 지노믹 DNA로부터 유래된 랜덤 지노믹(random genomic) DNA 프로브를 포함하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩을 제공한다.
본 발명의 DNA 칩에 있어서, 상기 랜덤 지노믹 DNA 프로브는 상기 식중독 원인균인 여시니아 엔테로콜리티카로부터 추출한 지노믹 DNA를 서로 다른 종류의 제한효소 쌍으로 잘라내어 겔 추출법으로 추출한 100 내지 1500 bp의 DNA인 것을 특징으로 한다. 상기와 같은 크기를 갖는 DNA 단편은 종간의 중복 가능성이 매우 적으므로 Y. enterocolitica를 특이적으로 탐지할 수 있다.
상기 게놈 DNA 추출을 위해 사용한 서로 다른 종류의 제한효소 쌍은 상기 균으로부터 DNA를 추출할 수 있는 어떠한 제한효소 쌍도 사용될 수 있으나, 바람직하게는 EcoRⅠ/BamHⅠ, HindⅢ/XhoⅠ및 HindⅢ/SacⅡ인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 랜덤 지노믹 DNA 프로브는 서열번호 1 내지 69의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 DNA 칩은 여시니아(Yersinia) 속(genus) 중에서 Y. enterocolitica 종(species)만을 특이적으로 검출하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 실시예에서 살펴본 바와 같이, 상기 여시니아 엔테로콜리티카로부터 69개의 프로브를 얻어내었으며, 상기 프로브가 Y. enterocolitica만을 검출하는지를 확인하기 위해, 다수의 Y. enterocolitica strain, Yersinia 속(genus)이지만 다른 종(species), 및 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)의 미생물을 상기 69개의 프로브와 함께 하이브리다이제이션(hybridization) 시킨 결과, Y. enterocolitica만을 선택적으로 검출하는 것을 확인하였다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩의 제조방법을 제공한다:
a) Y. enterocolitica로부터 지노믹 DNA를 추출하는 단계;
b) 추출한 지노믹 DNA를 서로 다른 종류의 제한효소 쌍으로 잘라내어 겔 추출법으로 100 ~ 1500 bp를 분리하는 단계;
c) 상기 b) 단계에서 사용한 제한효소 쌍으로 처리된 라이브러리용 플라스미드와 상기 절단된 지노믹 DNA를 연결시켜 콜로니를 획득하는 단계;
d) 획득한 콜로니에서 플라스미드를 추출한 후, T3/T7 프라이머로 PCR을 수행한 후 프로브를 정제하는 단계; 및
e) 정제된 프로브를 슬라이드 글라스에 고정하는 단계.
본 발명을 보다 자세히 설명하면 다음과 같다.
상기 제조방법에 있어서, a) 단계의 지노믹 DNA의 추출은, Y. enterocolitica을 계대 배양시킨 후, 상기 계대 배양을 통해 얻어진 미생물로부터 지노믹 DNA를 DNA 검출 키트를 이용하여 추출한다.
상기 제조방법에 있어서, b) 단계의 각각의 제한효소 쌍으로 잘려진 지노믹 DNA는 아가로스 젤로 전기영동한 후, 겔 추출법으로 100 ~ 1500 bp의 사이즈를 갖는 부분을 분리한다. 이때 사용하는 제한효소는 서로 다른 종류의 제한효소 쌍을 이용하는 것을 기본으로 한다.
이후 랜덤 지노믹 DNA 라이브러리를 제작하기 위해, 동일한 제한효소 쌍으로 처리된 라이브러리용 플라스미드를 준비하여 상기 c) 단계를 수행한다. 상기 제한효소 쌍으로 잘려진 플라스미드와 상기 회수한 게놈 DNA 단편을 연결(ligation)시킨다. 이후 연결된 플라스미드 DNA들은 열 충격방법으로 형질전환시켜 콜로니를 획득한다. 이때, 대략 하나의 제한효소 쌍으로부터 잘라 구성된 랜덤 라이브러리에서는 수백 개의 콜로니가 얻어지며, 이들 중 각각의 플레이트에서 콜로니를 랜덤하게 선별하여 플라스미드를 추출한다.
상기 제조방법에 있어서, 상기 d) 단계로부터 얻어진 PCR 산물은 본래의 순수 배양된 Y. enterocolitica만의 지노믹 DNA 단편들을 포함한다.
상기 e) 단계에서 정제된 프로브를 슬라이드 글라스에 집적시킬 때, 프로브의 수의 개수는 제한되지 않으나 60 ~ 70 개로 한정하여 DNA가 잘 붙는 케미칼로 코팅 처리된 유리 슬라이드 글라스 위에 집적시키는 것이 좋다. 상기 DNA가 잘 붙는 케미칼로는 일반적으로 사용되는 실란(silane), 아민(amine), 알데히드(aldehyde) 또는 폴리-엘-라이신(Poly-L-lysine) 등이 있으며, 본 발명에서는 아민(amine)을 사용하였다.
본 발명의 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩 제조방법에 있어서, 하기의 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다:
a) 고정된 랜덤 지노믹 DNA 프로브를 다른 비교 미생물로부터 랜덤 프라이밍(random priming)된 DNA와 하이브리다이제이션(hybridization)시켜 상호중복 하이브리다이제이션을 제외시키는 단계; 및
b) Y. enterocolitica에만 하이브리다이제이션하는 랜덤 지노믹 DNA 프로브만을 선택하여 슬라이드 글라스에 고정화하는 단계.
상기 a) 단계의 상호중복 프로브의 제외는 Y. enterocolitica와 유전 정보가 비슷한 다른 Yersinia spp.로부터 랜덤 프라이밍된 DNA 프로브와 상기 고정된 랜덤 DNA 프로브를 하이브리다이제이션 시킴으로써 상호중복 하이브리다이제이션 랜덤 DNA 프로브를 제거함으로써 수행되며, 이후 Y. enterocolitica에만 하이브리다이제이션하는 랜덤 지노믹 DNA 프로브를 선별하여 슬라이드 글라스에 고정화시킨다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 Y. enterocolitica로부터 유래된 지노믹 DNA 프로브를 이용하여 DNA 칩을 준비하는 단계; 시료 미생물로부터 지노믹 DNA를 추출하고 랜덤 프라이밍(random priming)을 통해 시료 DNA를 제조하는 단계; 상기 시료 DNA를 상기 DNA 칩 상의 지노믹 DNA 프로브와 하이브리다이제이션(hybridization)시켜 Y. enterocolitica의 존재 유무를 판별하는 단계를 포함하는 Y. enterocolitica 균의 탐지방법을 제공한다.
이상 설명한 바와 같이, 본 발명은 특정 유전 표지자를 이용해서 제작한 기존의 Y. enterocolitica 검출용 칩과는 다르게, 특정 유전 정보 없이 단 하나의 Y. enterocolitica 균주에서 추출된 지노믹 DNA를 무작위로 절단하여 얻어진 69 개의 DNA 단편을 이용하여 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩을 제작하였다. 상기 DNA 칩은 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(species) 및 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)의 미생물과 차별되면서 단지 Y. enterocolitica만 검출할 수 있다.
도 1은 Y. enterocolitica의 랜덤 지노믹 DNA 프로브에 대한 전기영동이미지를 나타낸다.
도 2는 칩에 부탁된 Y. enterocolitica의 랜덤 지노믹 DNA 프로브의 배열과 Y. enterocolitica의 지노믹 DNA와 칩에 부탁된 DNA 프로브의 탐지 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 다수의 Y. enterocolitica, 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(species), 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)에 속하는 미생물의 지노믹 DNA와 칩에 부착된 DNA 프로브와의 탐지 결과를 Mev v4.6으로 표현한 이미지 이다.
도 4는 PCA 분석에 의해 Y. enterocolitica와 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 미생물 종(species)이 차별되는 결과를 보여주는 이미지이다.
도 2는 칩에 부탁된 Y. enterocolitica의 랜덤 지노믹 DNA 프로브의 배열과 Y. enterocolitica의 지노믹 DNA와 칩에 부탁된 DNA 프로브의 탐지 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 다수의 Y. enterocolitica, 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(species), 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)에 속하는 미생물의 지노믹 DNA와 칩에 부착된 DNA 프로브와의 탐지 결과를 Mev v4.6으로 표현한 이미지 이다.
도 4는 PCA 분석에 의해 Y. enterocolitica와 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 미생물 종(species)이 차별되는 결과를 보여주는 이미지이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예
1. 랜덤
지노믹
(
genomic
)
DNA
의 분리
먼저, 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica; strain number ATCC 23715)는 TSB(tryptic soy broth; BBL/Difco, Sparks, MD, USA)에 접종하여 37 ℃에서 24 시간 간격으로 10 μl inoculation loop를 사용하여 3일 동안 계대배양 하였다. 배양 3일째에 Y. enterocolitica 배양액 3 ml을 14,000×g으로 2 분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 남은 펠렛(pellet)을 DNeasy Blood & Tissue Kit(Qiagen instrument AG, Homberchtikon, Switzerland)를 이용하여 지노믹 DNA를 추출하였다.
추출된 상기 Y. enterocolitica의 지노믹 DNA는 서로 다른 제한효소 쌍 즉, EcoRⅠ/BamHⅠ, HindⅢ/XhoⅠ, HindⅢ/SacⅡ을 이용하여 절단하였다. 이는 다양한 크기의 DNA를 얻기 위한 것으로, 세 개의 튜브(tube) 속 지노믹 DNA를 각각의 제한효소 쌍으로 절단하였다. 이후, 각각의 제한효소 쌍으로 절단된 지노믹 DNA를 아가로스 겔(agarose gel)을 이용하여 전기영동 한 후, gel electrophoresis를 사용하여 100 ~ 1500 bp의 사이즈로 겔(gel)을 잘라내고, QIAquick 겔 추출키트(QIAquick gel extraction kit; Qiagen)를 사용하여 DNA를 추출하였으며, phenol-chloroform extraction 기술을 이용하여 추출한 DNA를 정제하였다.
실시예
2. 랜덤
지노믹
(
random
genomic
)
DNA
라이브러리 및
DNA
칩 제조
랜덤 지노믹 DNA 라이브러리를 제작하기 위해, 라이브러리용 pPCR-Script Amp vector(Invitrogen, Carlbad, CA, USA)를 상기와 동일한 제한효소 쌍(EcoRⅠ/BamHⅠ, HindⅢ/XhoⅠ, HindⅢ/SacⅡ)으로 처리하였다. 즉, 상기 실시예 1에서 각각의 제한효소 쌍으로 절단된 지노믹 DNA를 상기 벡터에 삽입하기 위해 동일한 제한효소 쌍으로 벡터를 절단하였다. 이후, 상기 각각의 제한효소 쌍으로 절단된 지노믹 DNA 단편을 3 개의 동일한 제한효소 쌍으로 잘려진 각각의 플라스미드 벡터(plasmid vector)와 서로 연결(ligation) 시키고, 연결된 플라스미드 벡터들을 열 충격(heat shock)방법으로 Escherichia coli DH5α(E. coli DH5α; Real Biotech Corp., Banqiao, Taipei, Taiwan)에 형질전환 시킨 후, LB amp agar에 도말하여 37 ℃에서 16 시간 동안 배양하여 콜로니(colony)를 얻어내었다. 따라서 EcoRⅠ/BamHⅠ, HindⅢ/XhoⅠ, HindⅢ/SacⅡ 제한효소 쌍으로 절단된 100 ~ 1500 bp의 DNA 단편이 연결된 플라스미드가 E. coli DH5α에 삽입되었으며, 각각의 플레이트 위에 수백 개의 콜로니가 형성되었다.
각각의 플레이트에서 랜덤하게 콜로니를 선별하여, 3 ml의 LB-amp broth에서 37 ℃에서 16 시간 동안 배양한 후, 원심분리하여 얻은 펠렛을 miniprep kit(Qiagen)를 이용하여 플라스미드를 추출하였다. 추출된 플라스미드는 DNA 단편의 사이즈와 연결(ligation) 여부를 확인하기 위해, 플라스미드를 제작하기 위해 사용했던 동일한 제한효소 쌍으로 절단하였으며, 아가로스 겔 전기영동을 이용하여 확인하였다. 상기 과정을 반복하여 서로 다른 크기의 DNA를 확보하였으며, 플라스미드의 T3와 T7의 프로모터(promotor)를 인식하는 프라이머(primer)를 이용하여 PCR을 수행함으로써 DNA 단편을 증폭시켰다. PCR의 조건은 94℃에서 5분간 predenature 이후 58℃, 1분간 annealing, 72℃, 1 분간 elongation을 1 사이클 (cycle) 수행하고 94℃, 30초간 denature, 58℃, 30초간 annealing, 72℃, 30초 동안 elongation을 40 사이클 수행한 후 72℃에서 10 분간 post elongation을 수행하였다. 이후 PCR 산물을 아가로스 겔 전기영동을 이용하여 positive DNA(69 개)를 선정하였으며, QIAquick 정제 키트(QIAquick purification kit; Qiagen)를 이용하여 정제하였다. PCR 이후 선정된 프로브에 대한 전기영동이미지를 도 1에 나타내었다. 이후 상기 69개의 여시니아 랜덤 지노믹 DNA는 시컨스(sequence)분석 및 칩 제작에 사용되었다. 시컨스 분석은 바이오닉스사(www.bionicsro.co.kr)에 T7, T3 프라이머를 이용한 양방향 분석을 의뢰하였으며, 이때 Applied Biosystems사의 3730XL DNA Analyzer를 이용하여 분석되었다. T7 프라이머를 이용하여 정방향(5'→3')으로 분석한 결과는 서열번호 1 내지 69에 나타내었다.
칩에 사용되는 양성 대조군(positive control)으로 박테리오파지(bacteriophage) ΦFC1의 MJ1 유전자를 선정하였으며, 프라이머, MJ1 probe F(GGA ACT GGC ATT GTT CCC TT) 및 MJ1 probe R(TTC AGC TCC GCA TTT ACC AC)을 이용하여 PCR로 증폭하였다. 상기 69 개의 게놈 DNA 프로브 및 양성대조군을 아민(amine)으로 코딩된 유리 슬라이드 글라스 위에 집적시켰다.
실시예 3. DNA 칩의 탐지능력 확인
3-1. 랜덤 프라이밍
상기로부터 얻은 Y. enterocolitica의 69 개 프로브가 Y. enterocolitica만을 검출하고, 여시니아(Yersinia)와 같은 속(genus)이지만 다른 종(species) 및 다른 속(genus)에 속하는 미생물과 차별될 수 있는지를 확인하기 위해, 7 개의 Y. enterocolitica의 다른 strain(ATCC 23715; 칩제작에 사용한 균주, ATCC 9610, ATCC 55075, WI001, WIO15, WI021, WI030) 및 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 종(Y. bercovieri ATCC 43970, Y. mollaretii ATCC 43969, Y. rohdei ATCC 43380, Y. frederiksenii ATCC 33641, Y. intermedia ATCC 29909, Y. ruckeri ATCC 29473, Y. aldovae ATCC 35236, Y. kristensenii ATCC 33638, Y. pseudotuberculosis ATCC 6902) 및 여시니아(Yersinia)와 다른 속(genus)의 미생물(L. monocytogenes ATCC19111, L. monocytogenes F8369, L. innocua ATCC 33090, E. sakazakii 3270, E. sakazakii 3437, E. cloacae ATCC 13047, E. cloacae ATCC 11439)이 사용되었다.
상기 각 균주의 지노믹 DNA를 추출하고, 200 ng/μl의 농도로 멸균수를 이용해서 희석한 후, nanodrop spectrophotometer(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)로 측정하였다. 이후, 각 DNA에 형광표지물(Cy5, Cy3)을 라벨링(labeling)하기 위해, 본 발명을 위해 사용되었던 Y. enterocolitica ATCC 23715 strain 으로부터 추출된 지노믹 DNA는 Cy5-dCTP와 함께 랜덤 프라이밍 방법을 이용해서 라벨링 하였고, 7 개의 Y. enterocolitica strain, 9 개의 여시니아와 같은 속(genus)이지만 다른 종(species)의 미생물, 7개의 여시니아 속(genus)과 다른 속(genus)인 미생물으로부터 추출된 각 균주의 지노믹 DNA는 Cy3-dCTP와 함께 랜덤 프라이밍 방법을 이용해서 라벨링 하였다. 랜덤 프라이밍은 로슈사(Roche)의 High prime DNA labeling kit를 사용하였으며, 랜덤 프라이밍 반응 용액에는 랜덤 헥사머, dNTPs, Klenow 단편들 및 버퍼가 포함되어 있으며, 총 20 μl 반응에 25 nM의 Cy5-dCTP 및 Cy3-dCTP를 각각 1 μl씩 포함하였다. 양성 대조군은 본 발명의 Y. enterocolitica DNA와 test DNA를 Cy5-dCTP 및 Cy3-dCTP와 함께 랜덤 프라이밍으로 라벨링 하기 전, 각각의 튜브에 10 ng/μl씩 첨가하였다. 즉, 2 개의 튜브를 준비하고, 1번 튜브에 200 ng/μl의 Y. enterocolitica ATCC 23715, 랜덤 프라이밍 키트의 조성물, 1 μl의 Cy5 및 10 ng 양성 대조군을 첨가하고(총 부피 20 μl), 2번 튜브에는 테스트 하기 위한 7개의 Y. enterocolitica strain, 9 개의 여시니아 속(genus)에 속하는 다른 종(species)인 미생물, 및 7개의 여시니아와 다른 속(genus)에 속하는 미생물의 지노믹 DNA 200 ng/μl를 각각 첨가하고, 1 μl Cy3 및 10 ng 양성 대조군을 첨가하였다(총 부피 20 μl). 이후 Cy5 및 Cy3 dye를 각각의 지노믹 DNA에 라벨링시키기 위해, 2 시간 동안 37 ℃에서, 10 분 동안 65 ℃에서 인큐베이션 시켰다. 이후, Cy5가 라벨링된 Y. enterocolitica DNA와 Cy3가 라벨링된 테스트 DNA 혼합물을 섞은 후, MinElute PCR 정제 키트(Qiagen)를 사용하여 10 μl를 추출하였다.
3-2. 하이브리다이제이션(hybridization)
상기 추출된 DNA 혼합물에 2 μl의 하이브리다이제이션 용액(6×saline-sodium citrate(SSC), 0.2% sodium dodecyl sulfate(SDS), 5×Denhardt's solution, 0.1 mg/ml의 denatured salmon sperm DNA)을 첨가하여 98 ℃에서 2 분 동안 가열하였다. 이는 DNA 칩의 프로브와 함께 하이브리다이제이션을 시키기 위해, 2중 결합을 단일 결합으로 분리하기 위함이다.
이후, 칩에 집적된 Y. enterocolitica 프로브와 상기 얻어낸 DNA 혼합물의 하이브리다이제이션을 수행하기 전, 먼저 칩의 pre-하이브리다이제이션을 수행하였다. 제조한 DNA 칩을 1.75×SSC, 0.1% SDS, 10 mg/ml의 BSA(bovin serum albumin)으로 제조된 용액에 30분간 담근 후, 증류수로 1 분간, 100% 이소프로판 용액으로 30초간 세척하였다. 세척 후 DNA 칩을 50 ml의 튜브에 넣고, 4000 rpm에서 5 분간 원심분리하여 건조하였다. 이후, 상기 건조시킨 칩의 DNA 프로브 부분에 98 ℃에서 2 분 동안 가열시켜 놓은 DNA 혼합물을 주입하고, 커버글라스를 덮었다. 그리고 챔버에 넣어 65 ℃ 항온조(water bath)에서 14 ~ 15 시간 동안 하이브리다이제이션을 진행하였다. 하이브리다이제이션이 완료된 DNA 칩을 준비해 놓은 버퍼 1용액(2×SSC)에 넣어 커버글라스를 제거하고, 65 ℃로 미리 가열시킨 버퍼 2용액(2×SSC, 0.2% SDS)으로 10 분간 세척하고, 버퍼 3용액(0.05×SSC)으로 5 분간 2번 세척하였다. 세척이 완료되면, 4000 rpm으로 5 분간 원심분리하여 DNA 칩을 건조시켰다.
상기 건조된 칩은 GenePix 4000B 레이져 스캐너(Axon, Union, CA, USA)를 이용하여 스캔하였으며, 도 2는 본 발명의 DNA 프로브(Y. enterocolitica ATCC 23715)의 검증을 위해 같은 균주의 지노믹 DNA를 칩과 테스트한 스캔 이미지 결과이다. 스캔이미지를 통해 측정되는 수치는 GenePix Pro 6.0 software(Axon, Union, CA, USA)를 이용해서 분석 하였다. 이 소프트웨어에 의해 분석된 결과 중 69 개의 프로브의 635nm(Cy5)로 측정 후 나타난 median 값과 532nm(Cy3)로 측정 후 나타난 median 값을 선택하여, 532nm로 측정 후 나타난 median 값을 635nm로 측정 후 나타난 median 값으로 나누어 나온 수치를 log2 값으로 환산하였다. 이 환산된 수치를 다시 Mev v4.6 software(http://www.tm4.org/mev/)로 분석하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 그리고, 도 3의 결과를 표로 작성하여 하기 표 1에 나타내었다. 하기 표 1을 상세하게 설명하면, 제조된 칩의 Y. enterocolitica의 전체 프로브의 수(69 개)와 이 프로브에 혼성화 반응이 나타난 프로브의 수를 %로 환산해서 수치로 표기한 것이다. 이 log2 값은 제조된 칩의 Y. enterocolitica 프로브가 Y. enterocolitica 와 여시니아(Yersinia)와 같은 속(genus)이지만 다른 종(species)의 미생물이 차별되는 지를 확인하기 위해 principal components analysis (PCA; SIMCA-P version 12.0, Umetrics, Ume, Sweden)에 사용되었으며, PCA 결과는 도 4에 나타내었다.
[표 1. 혼성화 결과]
먼저, 도 3의 이미지(Mev v4.6 software는 log 2 값이 -3.0~3.0일 때 혼성화 반응된 프로브로 분석하며, 검은색으로 표시된다)를 통해 분석된 표 1의 혼성화 결과를 보면, 칩의 Y. enterocolitica 프로브와 Y. enterocolitica의 7 개의 strain의 지노믹 DNA를 각각 테스트한 결과, 88 ~ 100% 혼성화된 결과를 나타내고 있으며, 다른 여시니아(Yersinia)와 같은 속(genus)이지만 다른 종(species)인 미생물의 지노믹 DNA를 각각 테스트한 결과는 26 ~ 70%의 혼성화 결과를 보였다. 그리고 여시니아(Yersinia) 속(genus)과 다른 속(genus)에 속하는 미생물은 1.4 ~ 10%의 혼성화 결과를 보였다. 상기의 결과는 제조된 칩이 여시니아 속(genus)의 다른 종(species) 및 여시니아 속(genus)과 다른 속(genus)에 속하는 미생물에 비해 다수의 Y. enterocolitica의 strain으로부터 추출된 지노믹 DNA와 높은 혼성화 비율을 보임을 나타낸다.
또한, 도 4에 나타낸 바와 같이 PCA 측정 결과, PC1에 의해서 Y. enterocolitica와 여시니아(Yersinia) 속(genus)의 다른 미생물의 종(species)과 분명하게 차별되어 측정되었다.
<110> Korea University Industrial & Academic Collaboration Foundation
<120> DNA chip using random genomic DNA fragments of Yersinia
enterocolitica
<160> 69
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1199
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 1 of Yersinia enterocolitica
<400> 1
tacttgggga cactcgagca cgataaggcg ctggagaaat aatgagactg ctagccgtat 60
ggggttattt tgcctggcga aaccagctcg ataagttggc ttttagtggg cgcttattcg 120
ctcgcgggca ggccagggta gctatctggc tgttacggcg tagtgattat cgtttcttgc 180
tgatgttcgg tgctttgcac cgggctttcg gtttggcttc gcggcggcag aagaatctgg 240
cgcgagtggc ggcggccaac agccactgtt tgctcaatgg tcaaactagc ccatcagcac 300
agaattttat tggtactgcg cagcgtcgtc aggtgttgga attggcggca acttatggtc 360
aaaaccggca aattttagcc cagttagcag cctgtaccca gcaattagac tgccaggtta 420
gtgcgctgca tgacgccggt tctccggtta ttttggcacc attgcatatg gtgtcagatg 480
tgctggctgg catggtgggt gcgaatgttt atccgggtca ggcgaccgta gtcgtttctg 540
ccagcgctga ggcttatgaa gagcaggcgc ggcaaatggg tggggtaaat atttcctatt 600
gttccattca tgctgatagc cgtgccatcg ccggtaacct gatggatgcc atcatggaag 660
cagccgagca taagcgaaat attatgattt ttccggatat tacgccggac tacaccgtta 720
ataaccagcc agcagaaaca gcaaaaatgg cctgccaact gtttaaccgc ccagccaatt 780
tacacagcgg catcgttcgt cttgccagag cattgtcagc gcaggtggtt ttttattatc 840
tgtattacga caaagaaata aaaatacata tctatcctgc acttagtgcg cgggaagtga 900
aaaataaatt gcctgaattg attgaaacat cccttgacgc agcatccaca agattggctg 960
ttatggcact cacattcgtt attttttata aacgaataat gtcactgacg agatagtaga 1020
aatgaaaaga tatccacgct agtatttcaa gcgaaacaat gaatgtgttt ggctgtatgc 1080
gatgctggca cagacgcaag gcatcaatgc gcgctggaag cttgatatcg aattcctgcg 1140
tcggggatcg ccgcctaagc ggcccacggg ggagccgtta tcttgtgata aaatacaac 1199
<210> 2
<211> 1190
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 2 of Yersinia enterocolitica
<400> 2
ggtaggcggg gttctctcga gctatcctac cccagtgtta ttataattga tgtgatccat 60
ttctaatatt tgctaaaatg ccatcctgac gatggcatta tttttttatt gcttatcgtt 120
acgctttttc atgaggatta cggctatttg tcccgttcag attccgaatc aacaagccat 180
attccacatt aatatcctct gggatcggca aatacatgat atgtccgtta cccggagcga 240
catctgccgg ttggcccttt ttatcttgca tactttcaag gataaactgg atattaccgt 300
tgggggtcat cagctcaaca ctgtcaccga ctgagaattt gtttttgacg atcacttccg 360
ccagtccatc acgacgtata ccggtaaatt cgccgacaaa ttgctgacgt tctgaaaccg 420
aataaccata ttcgtaagtt tgctgttctt catgggcatg acggcgcagg aagccctcgg 480
tgtaaccacg atgagccagc ccttccagag tggtgagcaa agttggatcg aaaggcttac 540
cggccaccgc gtcatcaatt gcacggcgat acacctgtgc agtacgagca caataataga 600
atgatttagt ccggccctca attttcagcg aatgtacccc cattttggtc aggcgctcga 660
catgctgaat cgcgcgcagg tctttggagt tcatgatgta agtgccgtgc tcatcttccg 720
acgctgtcat atattcacct gggcgctggg cttcttctat cataaagact ttatcggtag 780
gggcaccgat acccaatgtc ggctcgacat tcttaacggc aattggctga tgaatatgca 840
caatattgcc aacgtcatct tctttgcctt cctggacgtt atattcccag cgacaggcat 900
tggtgcagtg ccttgattcg ggtcgcgctt gttgatgtag ccgagagcag caacggccgg 960
agtaagccat gcacagtgcg ccgtgacaaa aatttcagtt ccatatccgt acttgcgcgc 1020
ggatctcagc gatttctcag cgatatcacg agatgatcac gcgtgtcagc ccatctgctg 1080
cagatttacg tcgccatcac ggcgtagctt gtaccgacgt ggatgtcatc tgtggtaagc 1140
tggaatcgat ctgcactggg atccccgcta acgccgcacg cgggatcatg 1190
<210> 3
<211> 1188
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 3 of Yersinia enterocolitica
<400> 3
tgtgcgggtc cctcgaggac gatcgaatga agttacggtt tttggcattg gttatgtagg 60
gttagttcag gccgcggtat tggctgaagt tggccatgat gtcctgtgca tagatattga 120
tgagaacaaa gttgctgacc tacagaacgg ccgtatcgct attttcgaac ctggattagc 180
gccattggta aaagaaaatt atgatgaggg cagacttcga ttttctacag atgcggcagc 240
aggcgtggca catgctgcta ttcaatttat tgccgttggc actccgcccg atgaggacgg 300
tgctgcagat ctgcaatatg ttcttgaggt tgccagtacc attgctaaat atatggatac 360
cccgaaagtc attatcgata aatcaaccgt gcctgtaggg actgcggaaa aagtgcaaca 420
aagggtacaa gctcttctac agcaacgtgg gaagcaaata accttcaatg tagtttcaaa 480
tccagaattt ttaaaagagg gtgctgctgt agcagactgt aaacggcctg aacgtattgt 540
tattggtatt gatactaatg ataacagcgt tatcgattta attagtgagc tatacgagcc 600
atttaatcga aatcatgacc ggttggtaat tatggatatt cgtagtgctg agctgactaa 660
atatgcagca aatggcatgt tggcaactaa aatcagtttt atgaatgaga ttgctaatat 720
cgctgaaggc gttggtgctg atatcgaaaa agtgcggcaa ggcattggtt ctgattctcg 780
cattggctac cattttattt attccggttg tggttatggc ggttcttgtt tccccaaaga 840
tattcaggcg ttaattcgta cagcggaagg ttgtggctat cagcctcaac tgttgcaggc 900
tgttgagcaa atcaatcatc agcagaagtt taagttggtc gaatttattc agcagcattt 960
tgactcacaa ctggctggga aaacattggc tcttggggat tagcatttaa acccaacact 1020
gatgatatgc gagagcccca gccgtattta atgagcgttg tgaaggcagg gtactattca 1080
agcttgatat cgaatctgca gcccggggga tccgcccggg ctagacgccg cacgcgtgag 1140
ttcgcttgta tcggtgtaat atataaataa acacaacagc gcgacagc 1188
<210> 4
<211> 1063
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 4 of Yersinia enterocolitica
<400> 4
ggggcggttc cctcgagccc agggagggtt tacggcgtct ttacgatcta cctgttttca 60
ccgctgcggg cacttcggtg gctcacgcta ctacgacccc aacggcacga ttccccttca 120
gttgattttg tcagccgtct gcaaacatct caatgcggct ttggtgttaa ttatcgaatt 180
attcagccgt tttctgccgc tgttgccgcc actgccagcc ccaaagtagc gctattgcca 240
gggcgaatat cacgccgaag ccaaccccca ccgctatcac cggcacgcca agtttcacca 300
ccactgagaa taagcccagc atcagcaaca tcgcggtgtt ttcaccgaga ttttgcaccg 360
caatggcatt accggcaccc acgctattct taccgcgctc ctgcaataaa gcattaagcg 420
gaaccacaaa gaatccgccc aaaatcccga tgataatcag cagcagatag gccatcggca 480
tactgtgttg cagagcaaaa atcgccaccg ccacaccaat tagtaccccc gctggtaagc 540
aacgtttcac ggttttcaat gtgacgaaac gggccgcagc tcccgctccc acaacaatac 600
caattgccac catcgcattt agcagtgtgg gagtggcatt atccgtaatc cctagcgcga 660
tgggcaccca gagcactaac aggaaacgca gagtaacccc cgcgccccaa aatagactgg 720
ttcccgccag tgagaagcga gtttcaccat cgcgccataa aaccaggcaa gcggtaaaga 780
agctgccggt catggcacga ggtcgccatg agctgcctga acgagcagca gctagctttg 840
ggataaacat attagcgacc accgcaatgg catacaccag tgcgcacacc cccaatgcca 900
cgcccaagtg ccagtctgcc aacacgcccc ccgcgaccga accgagtaaa atagcggcta 960
tggttgaagc ttgatatcga attcctgcag cccgggggat ccgcccgggc tagagcggcc 1020
gcccaccgcg tgagctccag ctttgtcgta gtaggagggg gat 1063
<210> 5
<211> 1265
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 5 of Yersinia enterocolitica
<400> 5
tgaggcgggg tcccctcgag gtcgacggta tcgataagct tgatatcgaa ttcttcctgc 60
cgcgcgaaaa tatcggcagg atgtgttatt acaaaataat aaactggttt actctttttt 120
gtctccaacc caaacgacca atactttatc gccctggtgt tggcgactaa aagcatagta 180
atcagcggtt tgttgcgact gctgcacgcc tgcaccaatc gcttggtgac gggcgcggaa 240
ctgactgact ttttgccagt gcgccaacag cgcgcctttt tctccgctca gttcattcca 300
gttcatatcc gagcgggttc cttgtaatgg atctgacccg gtagggccga actctcgtcc 360
actttcatcg ccatagaaga tttgcactgc ccccggagcc agcagcagca gatcacccgc 420
acgttgctgt ttcaccaagg attgttgtgc gtcatcttta aaaaacagcc gtgtatcatg 480
ggatgaaatg tagctcaaca cattgaaacc ttgcagttta tccgccattt gttgataagt 540
gccgtcaatg gacgagaaac aggccagtgc ttgtttggct tgatcctgaa aatcaaaatt 600
aatcatggca tcaaagccgt tttggtaata atcgctcttc atcacgccgt gaccccaggc 660
ttccccggtc atccagaagg gtaagttatc cagcgtctga tccgggtgag ctgctttcca 720
ctcagccaga gccgcagtgc tttgctgctt aagttgttgc caggcaggct tctcgacatg 780
cttggcggta tcaacacgaa aaccgtcgat accataatcg cgaacccatt ggctcagcca 840
ataagtaagg taatcacgcg gtgtggctcc cgcaatttct cgtgctgcgg tatcgggttt 900
atggcgataa acaccggcaa accgctgggt tgggtagatt cggttttgat gtccggcagg 960
aaagccagcg acatggtcag atcgtcatag ccgggggatc atatcaccat atcggtgcgg 1020
atccgcccgg gctagagcgg ccgccaccgc ggtggactca gcttgtctag ttgtgggagt 1080
atatatataa atataagacc cccgccgccg cgctgggagc tttattaagt aggtgttgcc 1140
gagagatact ctgtctcccc ccacatcccg cacatgcagc atccggcatg tagagggtag 1200
cttagggaca aggcgagtgg ctagcctctc ttcagttggg ttcgcgacct ctcgtagtat 1260
gcgta 1265
<210> 6
<211> 1234
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 6 of Yersinia enterocolitica
<400> 6
cgggaggggc cgctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt cacccctaat 60
gactttggaa gatcgggcgg tgctttatcg tgctcgggca gcactaaata gtcttttcgc 120
cggttttgac gacagttccg tactggttca cggcaatttg actttgcgca gtatgctcaa 180
agatccccgc agtgaccaac tgttggcgat gcttaatccc ggcccaatgc tatgggcacc 240
gcgtgagtat gatttattcc gcctcagtga agaggggatg ccaagccagc tattttatcg 300
ctaccttagc aaagcgccgg tttctgaatc ttttgtggcg cgccgctggc tctatactct 360
ttgggaactg gtttcccgtt ttattcatac cggtaatctg gatcgcactt tatttgataa 420
tgccgcccag caacttttac cctggttaga atagctttat tcatcatttt tattgcccgt 480
taacttttgc cacagtagcc ccaatgtttc ataccaggca cgctcggaat ggcctaaata 540
ggcggctgcc ggaatagtgc gctcccagct atgtaatggg gtagtaatgg ctaactgatt 600
ggctggggca ggaataggat gcagcccctt ggcagtgaaa aatttaatcg cacgaggtaa 660
atggctggct gacgtcacca acaaaaaagg tttatcaccc accaatgctg ccactgctgc 720
cgcttcttca acagtatctt tgggctgctc caaggcaata atatctgccg ctggaacccc 780
taaactttcc gctacctgtg ccgccgtttt tgcactgctt tggctgttcg ggccggcgct 840
gccagtaaat accattttgg cgttgggatg ggcgcgagat agccggatcc gcccgggcta 900
gagcggccgc caccgcggtg gagctcagct ttgtctagtg gggggggatt atataaataa 960
aataccagcg gcgtctggat ataagcgacg tcgtaggctg attcacgtgc ggaaattcta 1020
accgtaaacg actgccaaca attaacctat gcgaagctga ggtgtaaggc tggggctacc 1080
tactaagtgt cactcacatc agtaactggc cttgacttca atgggcgcac tctcccaagt 1140
gacacgttat ggcacgctgc atagatgata cgccagctgc agaatagccg ttgccattgt 1200
ccttctcctg tctcgtactt tgccagatcg ttcg 1234
<210> 7
<211> 1236
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 7 of Yersinia enterocolitica
<400> 7
gggggcggtc cgctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt ctaccacctt 60
tgtgacgtga agccgcaagc gtgacttttg atgtggtgtt ttttttcacc ataaaaacgc 120
cccatcgggg gagtgatggg gcgtcgattg cataaaacat ttttagctta aagccggcgg 180
accgttactc ttcgtgctct tcccatgctt gggcgcgggc caccgctttc ttccagcctt 240
tgtaacggaa atcacgctca gtggtttcta ttcctgggcg gaactcacgc tcaatggtgg 300
ctttactttt cacttcgtcc aaatcattcc agaagccggt tgccaaacct gccaggaatg 360
cggcacccag tgctgtgctc tcacgtacct ctgggcgctc aacgcgggtg cccagaatgt 420
cggcctggaa ctgcatcagg aagttgttgg caactgcacc accatcaaca cgtagcgatt 480
tcaggcgttc accagaatct gcttgcatgg catccagtac atcacgagtc tgataagcaa 540
tagattcgag tgttgcacgg ataatatggt tgctgttaac accacgggtc aggccaaaga 600
ttgcaccacg cgcatacggg tcccaataag gagcaccgag gccagtgaag gccggcacca 660
catacacgcc gttgctgtct ttcactttgg tggcgaagta ttcagagtca tcggcatcac 720
tgataagctt cagctcatca cgcaaccatt ggatggatgc accgccgata aacaccgcac 780
cttccagtgc atagttaact tcaccgcgag ggccgcaggc gatggtggtc agcaggccat 840
gattggattg cactgcttct gtgccagtgt tcattagcag gaagcagccg gtaccgtagg 900
tgttttttgc cattcccggt tggacacaaa gctgggccga cagcgcggct tgctggtcac 960
cgggcatccc gggcgatagg aatacgagtc ccgcctttac caccaatgtt ggtctggcgt 1020
aacttctgag atgggcgact tcagtagcat tgagcgcggg atatcagcgc tttcagcata 1080
cgtcatccca ctctttggtg cgatataaaa catcatgtac gtgatgcgtg ggtgtatcgt 1140
actgtacccg gcctgcttct attccaccta gcagggtcaa ggtacaggca attgccgcct 1200
agccggtacg cggcataagt tatcaggatc gccccg 1236
<210> 8
<211> 1247
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 8 of Yersinia enterocolitica
<400> 8
ggtggcgggt ctctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt cagccgaaac 60
gtcccgaatg acactagcga tagcgaggtt gtctgctacg gtgatggggc gtaccagcag 120
gcggataggt gtggctgtgg tcatactctt taaacctaaa ggtaataact tagtaataat 180
ctgtaatacc atctataccc gtcatacttc aagctgtatg tgcgttggct gctctcaata 240
acctgagtca cttactacaa taagttcatc gggactatct cgcttgccgc cttcctgcaa 300
ctcgaattat ttagggtatg gcgctgaatt aatacaatga taaaaaaaca gcggctacct 360
aaatagtccg ctgtttctat tttgctgttg aatctcaggt taattacagt gcggcgatag 420
tcgcttgttg ctcaattaac ttctgtttgg cttcagcgca ggctgccatt ctttcgcgct 480
ctttggcaac cacggcttct ggcgcgcgcg ccacaaaacc ttcattactc aacttgcctt 540
cgatacgctc aatttcagct tccagcttag ccacttcttt tgccagcctt tccagttcgg 600
tggctttatc aatcaggcca gccattggga tcagcacttc cgcaccttca accaatttgg 660
tcaccgatac cgggccttta tcaccttcag gtaacagggt gagagaggac aaccgcgcca 720
gcgactggat gaaactctgg ttttccagca cacggcgttg ggcttcagca ctggcaccac 780
gcagcatcac ttccagcggc ttacccggcg cgatgttcat ttctgcgcgg atattccgca 840
ctgcgatgat ggtctgtttg atccattcca aatcacttag cgctttctca tcaacctgac 900
tggcgtcata ttccgggaaa ggctgcaaca taatggtgtc cgcagtaata ccttttaggg 960
ttttgactcg ctgccagatg gtctctgtga tgtaaggaat gattgggtgt gccaaacgca 1020
gcaggcttcc agatcttcat cagagtatga cgagttccac gcagtcagct cagacgctgt 1080
tcatcaccgg ttggcagtca gatacagtca cagaactggt tccaggtact cataacggat 1140
attagcgcca atcggagcgt tagtgtccac tcgccttccg cgtagcttaa tggctgatga 1200
cattctgcaa ctcggggaat cgctccgcgg cttgaatagg gtggtga 1247
<210> 9
<211> 1276
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 9 of Yersinia enterocolitica
<400> 9
agaccggtcc cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc agattatcga 60
tagccaaaat cgacccatgt tcaagatggg gagtgctcag gtcgagccgt atatgcgcga 120
tattttacgt gctatagcgc caattctgaa tgacattccc aataagatca gtctgtctgg 180
ccataccgat gacttgccgt atgcttccgg tgaacggggt tacagcaact gggaattatc 240
ggcagatcgt gccaatgctt cgcggcgtga gttactggct ggtggtttgg atgaaggcaa 300
agtattacgt gtggtaggca tggcatcgac gatgcgctta aaagagcagg catcagatga 360
cccggttaac cgtcgtatca gtatcttggt tctgaataaa cagactcaac atgatattga 420
gcacgagaat ttagataaca aagcgctcga tatagaaaaa gccgagagct taaaacagat 480
tgattctacg ggaacaacgc cagcggtggc atcacccgct actgttgcga caccgccagc 540
gacgacgagc gcagcgatac ccacagcaca atctggcact agcggatcag tatctgtacc 600
cgtggctgtt tcgacaacat cagcttcgac aacatcagcc tcgacaacaa cagttttgac 660
aacaacagtt tcgtcagcga cggcactgag tctgtgaaag cggtggcacc gcctgcaaca 720
gcaccacaca cacaacaatc gagcacggag aacattactc gagtgaccag tgggccaacg 780
acatcgttgc cagcggcacc tgccagtaat gcaccggtct ctccgacaag ccgcgacgca 840
cagtagaggt gacaccgtga gcatggatat taccgcgttt tatcagactt tctttgatga 900
agcagatgaa ttgctggcag atatggaaca gcacctgtta ttgctggatc cgcccgggct 960
agagcggccg ccaccgcgtt ggactccagc ttgtctagct ggggtttatt atataataat 1020
aaaaaagggc gcgcttcttt cccccgtgta gtggttcttt tttttctagt gagagatatt 1080
gacaacccgc ctcgaactac acacaaaata atgcacctgg aacaattctg ctgattgccc 1140
gtggtgggct atatagcgag aacgcctcgc actaatcggc actctcgcga accgtcctat 1200
tcctgaggaa cgactggcat tgtaaataca aattactgca gcgggtgtga gcacgaaata 1260
ggtaccgtca cggatc 1276
<210> 10
<211> 1243
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 10 of Yersinia enterocolitica
<400> 10
gggggcggta gctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc aagcctattc 60
atgccggtaa aattggcatg tacgtatgcg ggatcaccat ttatgacctg tgtcacattg 120
ggcatgggcg tacttttgtc gctttcgacg tcgttgcgcg ttatttgcgt tatttaggtt 180
actctctgac atatgtccgc aacgtgacag acgttgacga caaaattatc aaacgcgcca 240
ttgaaaacaa tgaaacttgt gagcaattga ccacgcgcat gttggctgaa atgcataaag 300
atttcgatgc attgaacctt caacgcccag atttagagcc acgtgctact catcacatcc 360
ctgaaattat agcattgact gagcgcttga tcgcccgtaa tcacgcctac gtggctgcca 420
atggggatgt tatgttctcc gttgaaagtg atccggatta tggtctgtta tctcgtcaag 480
acttggatca gttgcaggcg ggagcgcgtg ttgaagttgc tgatgttaaa cgcaatccga 540
tggattttgt gctgtggaaa atgtccaaac caggggaacc tagctgggaa tcaccttggg 600
ggccgggccg ccctggttgg cacattgaat gctccgcgat gaacggcaag caactggggg 660
cgcattttga tattcacggt ggtggctctg atttgatgtt cccgcaccat gaaaatgaga 720
ttgcacaatc tacctgtgcg catgatggcc catatgttaa ttactggatg cattccggta 780
tggtgatgat tgacaaagaa aaaatgtcga aatcattgaa taacttcttc actatccgtg 840
atgtgttggc gtattacgat gcggaaactg tgcgctattt cctgatgtct ggccactatc 900
gtagtcagct gaattacagc gaagaaaacc tcaagcaagc gcgtgcttca ttagagcgtt 960
tatatactgc gctgcgcggt actgacgcga atgcaacgcc gcaggtgcgc tgagtttgag 1020
cgcgtttccg tgcgcatgat gatgatttca atacgcagag gcctactcgt gctgttgata 1080
tcgcgcgcga gtgatcgcct aaactgagat taactgcgcc aatgcttacg gcggtgctaa 1140
actggccatg tgctggatta tgaatgatcc cccgctaagg ccccaccggt gatcgatgcg 1200
tctagctgtt aatatattag actggttata tatatgtaag gcg 1243
<210> 11
<211> 1180
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 11 of Yersinia enterocolitica
<400> 11
tgtgttgggc gctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc ctgaactcta 60
gcgtcaaaat cgttaaccca attatggggg tgaagttctg ggacgaaaat gtggtagtga 120
aagcggaaga agtctctgtc cgttttgagc gcggttaccc ggttgcactc aatggggtgg 180
tgtttgacga tagcgttgag ctaatgatgg aagccaatcg tattggtggc cgtcatggtt 240
tgggcatgag cgaccaaatt gaaaaccgta ttattgaagc taaaagccgt ggtatttacg 300
aagccccagg aatggcgttg ctgcacatcg cttatgagcg cctgctgacc ggtattcata 360
acgaagatac cattgagcaa tatcatgcta atggccgtgt gctaggccgt ttgctatatc 420
agggccgttg gttcgatcca caagcgctga tgttacgtga ctcggcgcag cgttgggttg 480
ccagcgaaat taccggtgaa gtcactctgg aacttcgtcg tggtaatgat tattccatcc 540
tgaatactgt ctctgaaaac ctgacttatc agccagagcg cttgacgatg gagaaaggtg 600
attcagtgtt ctcaccagat gaccgtatcg gtcagctaac tatgcgtaat ctcgatatca 660
ccgatacacg taagaagctc tttagttacg ccactactgg gctattgtct gcttcagcag 720
aggtaggttt gccacaggtg gataataata atctcactgc tcgtggctta caggataaga 780
gcaaataatt atccatcctg cagttcaggt gttcaattga cgtacattca ttgaacacct 840
gacaactgtc tggggagaca ttaataccgg gctccccaaa ttaacctttt gtttatatag 900
caataactga cctctttaac taacgcgcgc gagttctgcc tgatcggttt caacgtcata 960
gcccgccgat aacaaatcat agatacggat ccgccgggct agagcggccg ccaccgcggt 1020
ggagctcagc tttctagtga ggtaagtagg acaatagttc taacggtgag taatcagggg 1080
agttgatttg aagtgaattg ctttccggca tgcttcacag agactatcgg cattaggata 1140
gtgaacggga gagccagacg tacccttcca atgtggccat 1180
<210> 12
<211> 1026
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 12 of Yersinia enterocolitica
<400> 12
tgttgcggtc cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttat atgtcgccgg gtggcgtgac 60
tgaaattatt catttctttg ctgctgaata tcatgcggat caaaaagtga ctgatgatgt 120
tggggtggag gatgaggtta ttgaggtaat tgagttacct ttcactgaag ctattgccat 180
gatcgcggat ggtcgaatta aagatggcaa aaccatcatg ctgttgcaat acgcccaaat 240
ccacggctta ttaaaataat attactctga ttggctctct gcttgctgcc gcaatattgc 300
ggcacttcat tttcaattcc cgatggttaa ttgttgataa tatctcctga ttgataagca 360
aattcttctg ttgatataaa aatgttatgc agagtatgcc ctgcttcata gattgtgata 420
attcactcac tatactggtt gcctaccacc tcaaagaata aaagcaaagg gaacctacaa 480
tggatgaaca attgaaacag agcgcgcttg atttccacca atatcctact ccggggaaaa 540
ttcaggtgtc accaaccaaa ccgctggcga cccaacggga tttggcgctg gcttattctc 600
ctggtgttgc tgctccgtgt ttggagattg cggctaatcc actggctgcc tataaatata 660
cggcgcgtgg caacctggtc gcagtgattt caaacggtac tgcggtattg gggctgggta 720
atattggcgc attagcgggt aaaccagtca tggaggggaa aggggttctg tttaagaaat 780
tctccggtat tgatgtattt gatattgaag tagatgaact cgatcccgac aaactgattg 840
acattattgc ttcactggaa ccgacattcg gtggcattaa tctggaggat attaaagcgc 900
ccgagtgttt ttatattgag caaaaattgc gtgaacgcat gaagatcccg gtgttccatg 960
atgaccagca tggcactgcg attatctgca ccgcggtgga gctccagctt ctgtcctagt 1020
ggtagg 1026
<210> 13
<211> 1158
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 13 of Yersinia enterocolitica
<400> 13
ggtaggcggg gtccctcgag gtcgacggta tcgataagct tgctcgtaag cggctttatg 60
gtcgggatcg aagaatacct gaacaatgcc ttcgcggtcg cgcatatcaa taaaaatcag 120
gccaccgaga tcacgacgac ggttaaccca accacaaagt gtcacttctt ggccaacatg 180
ggacagattc aactgcccgc aatactcagt acgcatacaa tatcctttta ctcagccgat 240
gccgcacgcg ttatgcactg cccgtgcggc tattttctga tgagccctaa tttgagcctc 300
agctactact gtctggttta cttttattat ctggtttgct gttactgccc ggcttgaaat 360
ctgtcgcgta ccaaccggtg cctttcaatt gaaagccggc cgcagagata agtttcgata 420
acgcgggctg atgacacgca ggacattgag tcagcggcgc gtcagaaaat ttttgcaatt 480
tctctaatcg atggttgcaa gcgctacaca ccctatttta tccaaaaaca atcatatata 540
ggcataggta ttttggatta aagagtgttg aaaaaagggg gtcattataa aggaaattcg 600
tggcgtagat aagagcgaac gcacagctca ggcacgacaa aacctctttc agtactgttt 660
taacacatca tttaacaaaa ttatctcctc acaaggacgt cccgataaca tatgttggca 720
taaactggtc agcagattaa gtttatcgtc cagaattcct ccaatgatac cgaggcataa 780
caccatgaaa cttgatgcaa aaaccaccgc attggtactg attgatttgc aacaggaatt 840
ttaccctttg ctaaaggccc ttacagtgca gagcagtcgt cgcgactaat gctggcctgg 900
cagaacgctt tcgtaagcta ggtgctcctg tgatttcgtg cgcgtgggtt ggtcagattc 960
atttgctgag cgctgaaaca ccggtcgatc aacccagccc aagtcggcgg tggtttacct 1020
gagtcatgat gactttcccg tcagagctgc agtacgatag cgatatcaaa gtaataaaca 1080
catggggggg cgtttacgta cgattagatt tacactgcct cgcccgtgga ctcgcttgcc 1140
gtggggttag tcgtaaca 1158
<210> 14
<211> 1190
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 14 of Yersinia enterocolitica
<400> 14
taggccggga ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttc agccccaatc ggtcttccag 60
acgacttaca ctctttccca ccgctgattt tgttagcccg agccgttccg cagccgcagt 120
gaaactgccg tgttgagccg ttgtgacaaa agcagtaata ccgccgagat gatctgtttt 180
tctcatattt acactggtct gttcaggttg ttgaaagtat ttttcgaaat gaaatactga 240
ccccatatca tcagaaaata taacgatagc gtgctttggg gtatctgatt gtagaattta 300
tgtctataaa gatgatagta aaaccatatt tatcgcctca atggaatcaa tcatagtatg 360
caccagaatt aatgtttcgc cttggggcga caacactcac tctggatact ggagataacc 420
atgaccgaag ttaaaggctt taaacacgta ggtttgctga caaagaaaaa agatcagagc 480
tttgacgatt ttgtcgaaca ctggaaggag atacacacgg ctatcaccct taaattaccc 540
ggtcttcgtg cttacgtgtt gaatccaatc gaccggcgtg tatatccaga ctcacctatt 600
gatggttttt cagaattatg gttcgactcg cttgaagatg ccgttgctgc gtttgattcc 660
ccgataggaa aagctgcatt tatcgacgta cctaattttg tcgatacagt ggtagtcact 720
tatgtcactg aaattaaaaa gctgtgaagt gattattcat aaataagatg ttgaatggga 780
tggcgtgaaa aaacggccgc ctacatattc tgaataaaac atcagtttct gaataaaata 840
tcagcgacac cttactggcg tcgctgattg tgatttaaga cattataccg agcgggttaa 900
cagtatcaga catcgagttt acgaccgggt tagccattcc accatagcag gtcacggtga 960
gagagacgcg ctggttgccg tatcagagca gtgattgtag catttctcat gctaagctcg 1020
agttcagcac gtgatatttc gcatcgctct ttcgcaacga tttggcagtg agacatgcgc 1080
gctggagatc agcgcagaca ctgtccacgc tttacgtatt gtcgcgattg cagtaatacg 1140
aagttgaacg acggtgtcct cagcaggtca gtcgtgaacg gggatcatgc 1190
<210> 15
<211> 1236
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 15 of Yersinia enterocolitica
<400> 15
gcctgggtcc ctcgaggtcg acggtatcga taagcttgtc cagaagaatt gctctacttg 60
actgggcctc tgaaaataaa atgtggattt ttgaggatga ttacaacagt gaatttagat 120
atacagcaca accgatacaa gcactgcaag gattagataa acaacagcga gttatatacg 180
ctggttcatt ctctaaaatg atgtttccgg gatttcattt aggctttcta gtcatccctg 240
aaaatctagt ggagtctttt aaaattgcca aatattatgc agatacacgt acaccttatt 300
tagaacaaac gatacttgct gcatttattt ctgaagggca ttatgcgcgt cacgtcaggc 360
gggttagaaa agcatgtcat gaacgccaac aggttatgat tgaggccata caattatatc 420
ttccagaaat tattcacgca gaaccttcgg attcaggtat tcatattgtc tgttggttat 480
cggaagaaat tcaggaatct tatatgattg agcaatgtcg taaagcgaat ttgggcgcac 540
aacccctttc acgctacagc caaacagaac caacaagcca agccatcctg ttaggttttg 600
ccgcccattc cccatcagaa atcgttgaag gtatcaagaa actggctcaa atattgaatc 660
aataatatta agtaccccga ttctacctca atggtaaaga gatccgcata ccttctcagt 720
attcctacca gcgaaaccgt atcgcaaaag cggttttttt gtattttaga tccgatgaac 780
acggacctct catgttcctg tcagcgctca tgggttaatg gctaataacg attttcccca 840
catgctggcg ctacaagcag cacaggcagg attaggtatc ctattttgcc caatcagttt 900
gggtcataac atattacggc gcggcgaaca gattcaggta ttacccgaat ggcaaggtgc 960
ctcgcgcgaa atttacgccg tatggtcgca gcagcgctat gttcctgcag agtgcaggca 1020
ttaattgagc atctgcagat ttttgtcagc agatccactg tgatatattt ctatcgcgca 1080
ccatcgcgag cgacaaagca agtcatgtca ggacgtgcga gcgttcagca tggttgcaca 1140
atacggatga cctacctgta tagaccgcgt ggagtcactg gctagctagt agctaataat 1200
aactatacga cgcatctgtc acgaacatta ttatct 1236
<210> 16
<211> 1256
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 16 of Yersinia enterocolitica
<400> 16
agtgatgggt gctcgaggtc gacggtatcg ataagctttg ttaaggagtt ttagcgtgat 60
tagtgttttt gatatgttca agattggcat cggcccatcc agttctcaca ctgttggacc 120
aatgaaagcc ggcaaagagt ttgctgattt gctggtaact caagggttaa tgccatcagt 180
cacgcgggta gccgtggatg tttacggctc actgtcactg accgggaaag gtcaccacac 240
cgatatcgct attatcatgg ggttggctgg caatatgcca gataccgtgg atatcgacag 300
catccccgct tttattcgtg atgtagaatt acgccaaaaa ctgatgttgg ccaatgggtt 360
gcatgaagtg gacttccccc gcgaaggtgg gatggtcttc cgtagtgaca acctgccact 420
gcatgagaat ggtatgcaga tccacgcctt tgccggtgat gagaaagtac ttagcaaaac 480
ctattattcc atcggtggcg gttttatcgt ggatgaagag catttcggca aagctgcggt 540
gaatgccgtt agcgtccctt atccgttcca ttcagcggaa gaaatcctgg ctaactgcga 600
acaaaccggc atgtctatct ccggtatggt gatgcaaaat gagctggcga tgcacagcaa 660
agaagagatt gaatcctact tcaccgcgat ttggcagacg atgcgtgcct gtattgatcg 720
cggtctgaac actgaagggg tcttgcccgg cccactgcgg gtaccacgtc gtgcctcagc 780
attgcgccgt ctattggttt cctcggataa actgtccagc gatcccatga atgtcattga 840
ctgggtaaat atgttcgctc tggcggttaa cgaagagaac gccgcaggtg gtcgcgtggt 900
gacggcaccg acgaacggtg cttgtggcat cgtgccagcg gttctggctt attacgacca 960
ctttatcgag ccggttaccc ctgaaatctt tatccgctac ttcctgtcat ctggggctgt 1020
cggggattct gtatagatga atgcttctat tttctggcgc tgatgggctg tcaaatgaag 1080
tggggtgtgg catgctcatg gcgccgcggt ggagctcagc ttgttagtct ctgattatat 1140
aatggataga gcccgagagc gcatcagcac gtatcgtacg gctgatgtga catcatgctg 1200
gctagtacat gcatggtatc acttctcagt cacctgcact attcaacgca ctcgtc 1256
<210> 17
<211> 1267
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 17 of Yersinia enterocolitica
<400> 17
aggggcgggt cccctcgagg tcgacggtat cgataagctt ttttggtcac gaaacgggtc 60
tgcggcatcg ggccatccat tgcgtcgaca accagcagca cagagtcaac catagacatt 120
acacgctcaa cttcaccgcc gaaatcggcg tgtcctgggg tatccacgat gttgatgcgg 180
tagtctttcc acttaatggc agtgttttta gcgaggatgg ttatcccacg ctctttctcc 240
aaatcgttgg agtccattac acgttcagtt gcttcagcac gttcaccgaa cgtaccagat 300
tgttgtagca acttatcaac cagggtggtt ttcccatggt caacgtgcgc aataatggcg 360
atgttacgca gattctcgat cacagctttt ttgcctcagg catttagaaa tagcgcgcta 420
ttgtacacgt attaggcgag ggactaaaca agatcacaaa attctcttat aaacaaccta 480
acggcggtgt gtttgtgatc cctttcacgg tgcaaaaata gcctctcggc ctcttattgc 540
accaatacag tgcccaatag cgcaaatgaa gcaccaaaat agtgcaatat aactatcctg 600
gtgcatactg actatcagca gacccctatg atatggcata aatggggggt ttggaaagtt 660
ggcatagatt tcgcaataga ttttatgacg cagtttagca tgaataactg aacactatat 720
atacccaaag aaattggtgt tgcaggtagg cagcaaatga atgaatccca atgagcttac 780
ttaggtaagt gatttgggtg agtgaacgca gctaacaacc ctgcaacttc aagttcgaag 840
gggataaaac ggtaatcgtt ccacgacgac tatgacaaat ccaggagata taagtatgtc 900
cgctgaacat gttttgacga tgctgaatga gcacgaagtg aaatttgttg atttgcgctt 960
caccgatact aaagggaaag aacagcacat cactattcct gctcatcagt caacgctgac 1020
ttcttcgaag acgcaaaatg tttgatggct cctcgattgg tggctggaaa ggcattacga 1080
tcgacatgta ctgatgccag acgcagcacg ctgtatggat cgttcttcga agactccaca 1140
ctgattatcc gtgtgacatc ctgagcagta cttgcaagta tgaaccgcga tccgccttta 1200
ttctcttaac cgcgcgaaag aattccttag aaatctttct gtgacaactc cctgtgtata 1260
ctacgcg 1267
<210> 18
<211> 1271
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 18 of Yersinia enterocolitica
<400> 18
cgtctgggac ccctcgagtc gacggtatcg ataagcttat gaatccacac cagagcgggg 60
gactgaacga aaaatcgggg ctttcctggt gcaatgtatc ttccagtgta acgccattac 120
ttgcgccatg ttcctgacct caatggccgg taacccgatg ataggcaagt tggcgggcga 180
gatgggcata accattacct ggactagctg ggcattggct gcaattgtcc ccggtttaat 240
ctctctggcg gtcattccgt tgctgctata ccgcttttat ccaccggaac tgaaaaaaac 300
accggaaatg cgcgcactgg ccctcgtaaa actgaaagaa atggggccga tgagccgcaa 360
tgaatggatc gtgttatcag tattcgttgg gttggtgact ctgtgggtat gcggtgcagc 420
actgaatatc gatgccacta tgactgcctt tattggtctg gctatcctgt tgctgagcgg 480
cgcactaacc tgggatgatg ttatcgccga gaaagaagca tggcacaccg tgatttggtt 540
tgcagtacta ctaacacttg ccagccaact gaataaactg gggttcatta gctggtttgg 600
cgcctcaatt gcggactcgg tacagggcat gaattgggta ccgatgatgg gtatcctgct 660
gctagcgtac tattacagcc actatatgat ggccagcgct attgcccata tcagcgctat 720
gtatgccatt tttgtttcta ttgctatcgc agcgggcgcc ccgccatgct gacagtgctg 780
gtgtttggta tgttcagtaa cttgtacatg gcgaccactc attactccgg cggcccagcg 840
ccaatcctat ttgggtgtaa ctttatcccg ctggcaacct ggtggaaaat cggctttctg 900
atcagtttag tggtcattcc tatttggctg attatcggta gtgcctggtg gaaagtgtta 960
gggttctggt aagcattcag tgtacttaaa gttaaacacc gcgctaacat atcggcgcgt 1020
gtatttatca gcggttgata ttcctccatg acaactgcca gaacacatta aacaactcct 1080
ttgcctttta tcttcttatt tcatttggcg cggtggagct cagcttggct agttaggggg 1140
agagattttt tttttcgcac acccccccaa catcgactaa gtcgttgatg gcagtagaga 1200
agaacatgct gtctgcagta ataattgtat tacccggtac acaactttcc acctattcac 1260
agagtggatt a 1271
<210> 19
<211> 1246
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 19 of Yersinia enterocolitica
<400> 19
tgtgcggaac tctcgagagt agcagtgaca gccctgagtt acatctccct actaccatca 60
ttacagaatc acggcgtctg ttggtggtag aggatgagcc actgctgctg gaagttcaat 120
atgaactgtt tagcagcatg gggtttcagg tcgatgcggt agcaaacacg cagcaggcgt 180
atcagagctg gttacaacac caccatacta ttattgtgac cgactgtcgg cttgatgaga 240
gcgacggctt tgaactggta cgtcacctgc gaaaactgat gcaagatagc ccagaaccgg 300
tgctgattat cggtcaatca gcttcactga aaacagaaga tgcgcagcgc gcccgtgaag 360
tcggtatgga ttacctgcta caaaaaccgg ttgcacgcga acaatggcag caattgatac 420
gtgactattt tgcttctaag gaaaaagaac atgactgatg ccaccttcag cgcacgattt 480
tacgccagta ttcgtgatta tcttggctat attgaagaag tgataaaaga gggtgatctg 540
gttgccgcac agaagctcgg ccataaaatg ctggggttgt gccagatgtt tggcacccct 600
gaacaggtag tcttatgcga ggcactggaa aatgcagaaa gcttgatatc gaattcctgc 660
agcccggggg atccgcccgg gctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc cagcttttgt 720
tcccttaggg gggataatat aaaaaacccc cgggcaaaat cgcggggcat tttcctcctc 780
cgggaaagga aaaaatcccc ggctcaccca cctaaataca atgagcagat ccaattttcg 840
ccaggtgggg tatgactaaa agagtgaact aataatcatt tatttgcatt gctctcacag 900
cttgaatttc gaaagggaca ccgtgccgta ccaactaatt aatggagtcg gcgacggcgg 960
agtaggagac acgtaccgta tcgttgcact ccctatcacg actcttaccg ctgcgtctct 1020
tcgttcggct gacggtagcg gttatcctcg agcagaatgt aggtaatacg cttatctctc 1080
aggatcacgg agtataatgc atgtacggac atggagcaaa agacgtgcga ttagcctgat 1140
gattcagatt ggcgcatgct cggatgtcga tgtctcgcat cgcattcgat cagtactgac 1200
agctggacta agtcgcgaga gttcagaacg gcctatgcca ggaatc 1246
<210> 20
<211> 1250
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 20 of Yersinia enterocolitica
<400> 20
tgggcggacg cctcgagtat acgaccatta ccgtcttcaa atggatgtag cgtgacaaac 60
caaaagtgta caattgctgc ccgtaaaaga gggtcaacag cagtatcagt acgggataaa 120
ttaaaccaat caataaactg ctcaagttca gtaaacagcg cctctcgcgg cggtgcttcg 180
aagtggactg tttccttgcc tatgcgacca gagataactt gcattggctc ttctccccgc 240
agttgacccg ccttaatagg cgtcaacgcc catcggtcat gagggaaaag ccattcatgc 300
cattgataca atcgttcaag agttaaatct gcatcgcatc cattaatggc atcaaacatg 360
agggcagcca aaccatcaga acgatcagat gtcgggtaac tatcttctaa ggtaaccccg 420
agccgttttg ccagagatga gcgcactgat ctgatattga gttgttcatt ttctattttt 480
gatgaggcaa tgatattcgc cagtaatgta ttcagcgttt ttgaggtgtt ttcgtcagcg 540
gtatttccct tactttcacc aagaagttgc ccaagcttga tatcgaattc ctgcagcccg 600
ggggatccgc ccgggctaga gcggccgcca ccgcggtgga gctccagctt ttgttccctt 660
tggggggatt atttttattt aaaaaaccgc ccccaacaaa gcgcggataa acatccttcg 720
ggggtgggaa attgttttcc tttcccaatt caacacacca tccgaaccgc accctatcgt 780
gtctggcctg actagcgaaa aagactgacc taaattagct ttacttgcca tctgcgcact 840
gtgcaagttc gatgcgccaa acctgtcagt ccatcagtat tacgactcgg ccaagggata 900
ggcagagtct gtattgcgaa tttgcccgct tcctattccc gatcctttac tttctgccct 960
tggctgtcgg cagcggtgac ggttttccca tacagtagag gtcagaccgt catcaaggaa 1020
tcaagtgaga agccagaagg actcgaggct aaaaacttgc ataaagcgaa ggatccctga 1080
atggccgcgc tgtctgcaat gattctatgc ctcgctcgac gtgacgagac tcagatcaat 1140
agaacgatgc agtctgagcg gacagaacat gacgtacatt cgaattcgct taattccatg 1200
aaggtccagt tggcgatctg cgtacggtag ccatatacgc agatctgtac 1250
<210> 21
<211> 886
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 21 of Yersinia enterocolitica
<400> 21
acttacggga ccctcgagct gtagaggata tggcgttagt aaaaaactgg caagatttgc 60
atataacaat aaaatagttt tccataaatc cattgttgta ttaaataaat taatagctaa 120
tggtattggt gatgataatt taaagaaatt agtgagaggg aaatttgatt tatctatgct 180
aaatcatgct ccgtctatta cgaatttctt tttggagcaa tataactaca atattagtat 240
tgaaggaagc aaagcaaata atacacttac aggttctttg attatagact ccaatgatgt 300
tctttcaggt aagccccgtg agttacgcaa gaagataatt gaatttatta gcttaaaaaa 360
ggatgatgtg ggttttagtg cagtagagtt aatcaccttg gttaacggcg gtgtatccga 420
tgagttatta tactcggttg ctaaggggga agtgacagcc agcgatgctt atcttattca 480
tgtatttaaa gtgaggagaa atgagataaa aacaatatgc aacaagcttg atatcgaatt 540
cctgcagccc gggggatccg cccgggctag agcggccgcc accgcggtgg agctccagct 600
tttgttccct ttataggggg aaaataaaaa aaaacggggt aactccttct ttatttccac 660
tacaggggtc aggggggaaa aattctgggc ccccccaact tacccgcctt gcaccacctc 720
ccccctttcg cttgcagggg ttgttagtga ataaggccct cacccaatcg cgcttcccaa 780
gggttgctca ccctgactgc ttaagggcac gcaccctgga cccggccatt taagccacta 840
aagctagaag tttgaggaca gagttccctc tgaatctata acgggc 886
<210> 22
<211> 1266
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 22 of Yersinia enterocolitica
<400> 22
ggttggacgg ggtcactcga gagtagcagt gacagccctg agttacatct ccctactacc 60
atcattacag aatcacggcg tctgttggtg gtagaggatg agccactgct gctggaagtt 120
caatatgaac tgtttagcag catggggttt caggtcgatg cggtagcaaa cacgcagcag 180
gcgtatcaga gctggttaca acaccaccat actattattg tgaccgactg tcggcttgat 240
gagagcgacg gctttgaact ggtacgtcac ctgcgaaaac tgatgcaaga tagcccagaa 300
ccggtgctga ttatcggtca atcagcttca ctgaaaacag aagatgcgca gcgcgcccgt 360
gaagtcggta tggattacct gctacaaaaa ccggttgcac gcgaacaatg gcagcaattg 420
atacgtgact attttgcttc taaggaaaaa gaacatgact gatgccacct tcagcgcacg 480
attttacgcc agtattcgtg attatcttgg ctatattgaa gaagtgataa aagagggtga 540
tctggttgcc gcacagaagc tcggccataa aatgctgggg ttgtgccaga tgtttggcac 600
ccctgaacag gtagtcttat gcgaggcact ggaaaatgca gaaagcttga tatcgaattc 660
ctgcagcccg ggggatccgc ccgggctaga gcggccgcca ccgcggtgga gctccagctt 720
ttgttccctt aagaggggaa aaaaattaaa aacccccctg gccaaaaatg ccggcacaaa 780
tagatgccct cggggacaga aaataaaccc ccggcttatc cttcttaact gctttgagca 840
ggatccactt ttcgccgcgg ggggtatacc taatgagcga cctaactatc gttgtttgcg 900
ttgctcgcac agcttgaatg ccaaatggga agcctctcgt acgcactaat taatgagccg 960
ggcgaggcga agaggagaat cggttatcgc tatggttgct cttccctacg cggactcgta 1020
tgccgttgct tccgtccgtt cgcagaggtt agccggtatt ctcctcagtc aggatgtaga 1080
tatacggctt actctcagga ttcacgatat gacgcatgta caggacctgt gaccctaaaa 1140
gactgtgcaa gccgaagaat gacaatgcgg cctttctcgc gatatcgatt atctcggcat 1200
accagacgtt tccagtactg aaagttggat ccataggtgc aagatagccg agatagaagc 1260
taatgc 1266
<210> 23
<211> 1217
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 23 of Yersinia enterocolitica
<400> 23
gggcgatccc tcgagctgta gaggatatgg cgttagtaaa aaactggcaa gatttgcata 60
taacaataaa atagttttcc ataaatccat tgttgtatta aataaattaa tagctaatgg 120
tattggtgat gataatttaa agaaattagt gagagggaaa tttgatttat ctatgctaaa 180
tcatgctccg tctattacga atttcttttt ggagcaatat aactacaata ttagtattga 240
aggaagcaaa gcaaataata cacttacagg ttctttgatt atagactcca atgatgttct 300
ttcaggtaag ccccgtgagt tacgcaagaa gataattgaa tttattagct taaaaaagga 360
tgatgtgggt tttagtgcag tagagttaat caccttggtt aacggcggtg tatccgatga 420
gttattatac tcggttgcta agggggaagt gacagccagc gatgcttatc ttattcatgt 480
atttaaagtg aggagaaatg agataaaaac aatatgcaac aagcttgata tcgaattcct 540
gcagcccggg ggatccgccc gggctagagc ggccgccacc gcggtggagc tccagctttt 600
gttccctttg gaggggaaat ttataaaaaa caccgggtta acggaatgtt cgtatcagaa 660
ccggtgtgga ggggagaaaa attgtgatcc gacccccact tcccccacat tggacgaaac 720
cgcaatttaa agagcagggc ttagattgca aatgaactga cctaactccc atcagttgcg 780
ttgcgcgccc tgaatgcttt acgggacgcg accctgtcgg gccatctaag ttaatgaatc 840
ggcgaggtac gcgcagagtg agttttagaa ttgcagcgct tcagcatcac tctttcggat 900
ttcttgcgtt cgttctgcgg ctgtcgcgag ctttccccga taagtcaaag tcgggttacc 960
gcttataccg atacgtaatc gcagaatgcg aatcgaccac gcgaacaaat tgctgcatga 1020
tagaccgatt cacgtctgat gcctcgccct ttctgccatg ttttcttagc gctctggaca 1080
tcttgaccac atgcataaat cgtgacatca tgtccaggtg gcagacgtag aactaacgaa 1140
ttcatgctgt ttaaccttga agactctcga tcgacgatcg atcgagatcg gatctagacc 1200
ttatgagcat tcgaaat 1217
<210> 24
<211> 1255
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 24 of Yersinia enterocolitica
<400> 24
ctacggtctc tcgagcgctg gataagaatt tttgagttca aaaagtgaag attagagagc 60
ttatcgactt tctttaactc cgccgatata ccggtaagaa catacaggca ccagtgctct 120
aacccctcaa cagcccccgt atccgcttcg gccagcatcg aataatagcg ttcacgatca 180
tgacaaaaaa ccgctgttgg gtttagtacc cgcccactgg ttttcacatt aaaaccgtac 240
tttatcagca aagaataagt cagcagatgc accgttctgc cattgccatt accaaatgga 300
tgaatccagc caaaacggtg atgcgcgaga gccactttca tcagatcata ttttggtgcg 360
tctgcacggt tcataaactc gaccaattcg tgcatataag ccggaacatg gatgaattca 420
ggcggcaaat gagttgattg agcaatactc actccgtgac tgcgataggc tcccggcgtt 480
ttatcccctt cccgttcaat cccatttacc gtcatggcgt gcagttctcg gacaaaatat 540
tccgtgatat cttcaccagc atgtagatgc tcatcaataa aattcatggc atgttcgatg 600
ttgccaatct ctttcaattg atccgtggag tcctcagccc cttcaacttt actttcaacg 660
taatcagcta acgttgtatg gttaccttcg attcttgctg aacccaagct tgatatcgaa 720
ttcctgcagc ccgggggatc cgcccgggct agagcggccg ccaccgcggt ggagctccag 780
cttttgttcc tttagagggg attatatatt taaaacgacc cctttgtttt gtccgggggt 840
taacgcagag tccgaggggg aaattgcctg gcgcttccac atacaacaca acatacgagc 900
cgatcgcctt ttcggcaaat cgcgtaatta ctaaagaagc tagctacata ccttaatttg 960
cactgctgta ctgccggatg gcaaatcgtg aaaaccgtct tgccatactg attaacgagt 1020
ggcgaggaac gaggagagcg tatgccgcac tgtgggctcc ttctatacgt acgcactgac 1080
tcgttgctcc ggttcatctg ctgcgttagc gcattaagcc gattaaagtg tgatacgacg 1140
attccttcag agatccggaa taaagctgta acgaacactg gatcgaaagt ctgaaaggca 1200
gagcgagccg taaagggcgc catttgcgct atgcgtttac tatcgcagta tgcta 1255
<210> 25
<211> 1193
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 25 of Yersinia enterocolitica
<400> 25
gtggcggatc gctcgagtcg acggtatcga taagcttgat atcgaattca aaaacgtctc 60
caaacacttt ggtaaaaccc aagtgctcca cgacatcaat ctgaatatca ccaagggaga 120
agtggtggtt attattggtc cttccggctc gggtaaatct accctgctgc gttgtatcaa 180
taagctggaa gtcattacca gtggtcagct gattgtcgat ggcctggatg tcaatgatcc 240
caaagttgat gaacgcctga ttcgtcagga agcaggtatg gtattccaac agttttatct 300
tttcccgcat ttgactgcgt tggaaaacgt ggcatttggc cccatccgtg tgcgtggagc 360
ttctaaggaa gcggccaaca aactcgctat ggagctattg accaaggtgg gattggaaga 420
gcgtgctcat cattacccgg cagagctgtc cggtggacaa cagcagcgcg tagctattgc 480
ccgtgctctg gcggtcaaac ctaagctaat gctgtttgat gaaccaacct cagcactgga 540
tccgcccggg ctagagcggc cgccaccgcg gtggagctcc agcttttgtt ccctttatag 600
ggttttttaa aataaacacc cgcccaaggg acaaggcatt gtcaaagcac gtgccctgaa 660
gtaaaatgtg tcctccgccc acacttctac gcagagcacg cgatcgctca ttttagcgtg 720
ttctggatga ggagagagtg ggtgaccaac tcacattaat tgcgttgcca tcactgtgcg 780
ctttcggtac gctacacgtg tcgccgcact agatcaatga atcgtgctgg ctgagagaag 840
ggtccttgcg tattggacgc tctaccgctc cggcgctctc ggattcactc gcttcattac 900
tgccgcgacc gaccagcgtc atcagtctag ctcataagca gcgaataccc gtatccgcac 960
agtataaggc atatcacagc atcctagcct ccaagcaagc ggcatccaga gaccattaac 1020
ccttctaatc tgctgcctag ttgcattatt tctctagccc tcggacccct gcgtaacgaa 1080
cactccgtaa tccgttggta atgtgtcaaa gtcgggaaaa ccattagact aagggattcc 1140
cgtccgttca cctcagaagg cactcctccg gattccaccg gttccgactc agg 1193
<210> 26
<211> 1283
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 26 of Yersinia enterocolitica
<400> 26
tgtcggaccc tcgaggtcga cggtatcgat aagcttgata tcgaattcaa ttctgttatt 60
ggctaatttg gttgccatat tgattaggat aatcatgatt atcggctatg gcgaattaac 120
gtcttatatt attaaaagaa gtatttggcg ctagtttctc tcagacaaaa gtggtttatc 180
catctgaacc agaaaattct gtaagaatct taaaaaacat tagtgaagca tgcaaaggtt 240
gtattaatgt tacctgtaat tttattgggt ggtcgcgccc ctaagtatca ggtcctaaga 300
aggaatgcag tgtgtcgaaa ttgcgagtgg gtgtgatttt tggcggtaaa tcggctgaac 360
atgaagtgtc attacagtcg gccaagaaca tcgtagatgc gattgataaa gaaaaatttg 420
atgtaacgct gttaggtatt gataaacaag gtaaatggca tgttaatgat gcatctaatt 480
acttgttaaa tgcagaaaac ccagcattga tttctctgaa ccattcaaat aaaaatgtcg 540
cgctgatccc aggccaagag catcagcagc tgattgctac cgataatgcc tctgcattgg 600
ctcagttgga cgtcattttc ccgattgtcc atgggacatt aggggaggat ggatccgccc 660
gggctagagc ggccgccacc gcggtggagc tccagctttt gttcccttga ggggtttttt 720
atattttaaa accccgcttt tgggggaaaa tgtggtccca ccttggttca ctggtgaaac 780
ttgtcatcac cccacattac cccacatgaa aaaatcccga ttttaaagtg tgagcctgag 840
ggtacaaagc gagtacctta ccctttttaa ttgctgtgca ctcagtgccg gctttccaat 900
cgggcaacct gcggcgcaat ctgctcagcg aatcggcgca cacggcggat agaggccggt 960
tagcctattt ggggtctctt accgcttcgt cgtttcaggg atctcggctg tctttgttcg 1020
ataagggtgg cgtgatttgc tataaagatg actaaaacgg ggatactacc tattaatgct 1080
tctaatctag tgcaatacgc ggcatcgaac tctggaaatc aataaggtca gggagagtgc 1140
atgagaaccg gaaacaggcc cccggtatat agcgattgtt ccactggttc cagcgctgcg 1200
atgtaaagga attctaacat gaacgctctg agttccaacg tggacaacgt caatccggag 1260
tcatatggaa ccattcactc agt 1283
<210> 27
<211> 1125
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 27 of Yersinia enterocolitica
<400> 27
gttggcggtc cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc gtttcaccga 60
cattgcagtc attaatcgta tggttgtgga gcagttatca ttaccagagc cagccagtgt 120
agatgaggta ttggtgattg accgtaaagc ccgtgatgca gccgttcagg caatagcaaa 180
attgaataat taaaagcctc gtaggctgat gtgggaattt gttagggcaa ggctgagatg 240
atatagtctg caccgtcaat ggacagatag actgttgatt agtggcccaa taggtattta 300
aaccgtctat tttggctgtc acttaagaag ccgtgacttg gtacacggct ttttttgtgc 360
gcttgctgcc taatgttcgg gacgaacaac tgatttattg aggaaatgag ttcgcattat 420
gtcgtctgta aatgaagata gggctaactt gtcacccctg actccacgcc atgttgctat 480
catcatggat ggtaatgggc gttgggctaa aaaacagggt aaattaaggg tcttcggtca 540
taaagcggga gtgaaatcag ttcgtcgggc ggtcagtttt gctgccactc atcagttaga 600
tgcactcacg ctttatgctt ttagcagtga aaactggaat cgccctgcac aagaagtcac 660
cgcactgatg gaactttttg ttcgcgcgct ggacagcgaa gtaaaaagtc tgcataaaca 720
taatgttcgt ttatcggtca ttggtgatat cagtcgattt agtgaacgtt tgcagcaacg 780
gatccgcccg ggctagagcg gccgccaccg cggtggagct ccagcttttg ttcctttagg 840
ggaaaataaa aattaaaaaa cacggccgcg ctggaggtaa ttatggtctt tcgggtctgc 900
gaaaagcaca tttgttatcg gccaacattc ctgcacacag cactgaacga atctgggcta 960
agcatgagag cccaggacaa cctacttcgc atcagtgcgt tgcgtacggg cctggatacc 1020
gtctgactgc cattgcgatc ggaggatgtg atggttcagc gcgctgtgaa gcctgtctgc 1080
ctactggtct atcatccgcc atcttcgatt actgactttc gtgtc 1125
<210> 28
<211> 1148
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 28 of Yersinia enterocolitica
<400> 28
taagatggga ccccctcgag gtcgacggta tcgataagct tgatatcgaa ttccatggta 60
taagtcgcgc ggccctgtga catggaacgc aataccgtgg agtaaccaaa catttcggat 120
aacggcactt cggcacggat aatttttccg cccccgacca tctcttccat cccttgcacc 180
aagccacggc gagaggaaag gtcgcccatc acattaccgg catactcttc cggtgtttcc 240
acctcgacac tcatcactgg ctccagaatc accggtgagg cgcgtttggc ggcttctttg 300
aaaccaaaga tagcggccat tttaaatgcc aattctgatg aatcgacttc gtgataggaa 360
ccgaatgtca gagtcacttt cacatccacc accggataac cagctagcac cccggtatta 420
gtggcttcga gcaccccttt ttcgaccgcg ccgataaatt cacgcggcac cacgccacct 480
ttagtcgcat cgacaaaagc aacaccgcta cccggttcct gaggttcgag ggtaaagacc 540
acatgaccat attgcccttt accaccggac tgacggacaa atttaccgtc gacatcggtc 600
acggtcttgc gcactgtttc gcggtaagtg acttgcggtt taccaatatt ggcttccaca 660
ccgaactcac gtttcatgcg gtcgacaatg atctccagat gcaactcccc cataccggag 720
ataatggtct ggcctgattc ctcgtcagtc cgaatgcgga atgagggatc cgcccgggct 780
agagcggccg ccaccgcggt ggagctccag cttttgtcca ttagggggtt atatatataa 840
aaaacagccc ccccgttttc aaactgtggt tatagcggtt cggtggggtg aaacagctcc 900
cggctcaaac accgtcaaac ccattgccca aatcctaagt tgaaagctgg gatggcctaa 960
aagaatgacc taactcatct tatcttgcca ttgctctctc tgcccgcttt tgcaactatg 1020
ggaaagccgg ccttgtctat gactcttatg gatcgggcgc aaggaggggg gtatagcgca 1080
gttggctatt ggaccttgct tcccgcctaa atccgcccat gcaattcgcg gttcttggag 1140
gcgtatct 1148
<210> 29
<211> 1047
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 29 of Yersinia enterocolitica
<400> 29
agtgcggggt tctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc actatgctgg 60
aatggtatcg cccgcattat gatatgtatc gtttgatgga tgaggtggag gatctgctgc 120
aacaaattct ggattgcgat agctcagaaa ggctttctta tcagcaggca ttcttgcgtc 180
atttggatat tgaccctctg tcggcggata aagcgcaatt gcgcgaagcc gcggcaaaac 240
tggatttaag caatattgcc gatacagaag aagatcgcga taccttgctg caattgctgt 300
tcaccgttgg ggttgaaccc catattggcc gtgataaacc ggcttttgtg tatcacttcc 360
cggcgtcgca agcttccctt gcggtgatca gcacagaaga tcaccgcgtg gcagaacgct 420
ttgaggttta ctttaaaggt attgagctgg cgaatggttt ccatgagctg actgacggcg 480
atgagcaact gaaacgtttt gagcaagata atcgcagccg cgaaaaacgg ggtttgccac 540
aacatcccat cgacatgaat ctgattgatg ccctaaagca cggtttgccg gattgttctg 600
gcgtggcatt aggggttgat cgtctggtga tgttagcgtt gggtgcggaa aagctgagtg 660
atgttattgc attcccagta gggcgtgctt aataacccct cgcccttggc gccgcagcgg 720
tgttaaaaga aatgccctga cccttcacag aacagggcat ttttgtgtct tactcactga 780
tttatcttac aaactgcccg gtgtgcggct acgattcgaa gaaaccacac gcccacgtcc 840
cagtgtttct aaacgggcct ggaaaggtgg gaacggcagg gtaataccgt gctcgcggta 900
accgggcaga atcagctggt ggatctcatg gcgcagtgca tacggtggcc catttcagcg 960
gcatagatac gcagctcgaa aatctggatc cgcccgggct agagcggccg ccaccgcggt 1020
ggagctccag ctttgtctag tgggagt 1047
<210> 30
<211> 1139
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 30 of Yersinia enterocolitica
<400> 30
ggtccgggtt ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt ccatgattaa 60
ggctcttggg atcaattgag gcagcaaatt ttgcggctca ttttgtctgg aaggcatgat 120
atcccgtagg agatacaatg ggatttgtta taccacttat cccaattggg ttctagttat 180
tgctatcaca gttatgatgg aaaatgtgcg gtaaaagggg ggagcgggta taaaaaagcc 240
cggtagattt taccgggctg gtgatgtcta caacttcaaa tcatggtgtg gattaattct 300
gtccggctgg tgtttgttgt accggatcga tagccggttc ggctgccggg cggttttgca 360
gtaccgtcca gataaccact actgccaaca cgtcaaacac cgccagtgcg gcaaacagtg 420
ggctgaagcc catagtatct gccaaagcac ctaccaccag agcgaacatg gtactggcag 480
tccaggccgc cattcccgtc aagccgttgg cggtggccac ttcgttgcga ccaaaaacgt 540
cagaagacag tgtgattagt gcgccagaca gtgattggtg agcaaagccc ccaacacaca 600
ataaggcgat agcagcataa gggctggtaa acaggccaat agtccctggc ccaatcatca 660
acaagccgcc cattgttacc actaacttac gtgacacaat caggttaact ttcaggtatt 720
tctggaacag aggtggcagg taaccaccga gaatgcagcc cagatcggca aacagcattg 780
gcatccaggc aaacatggca atttctttca ggttaaagcc ataagcttta aacatgaaca 840
gtgggatccg cccgggctag agcggccgcc accgcggtgg agctccagct tttgtccctt 900
tgagggggtg gttaatataa aaaaaacacc cccccccgcc cagtcggagg tcatacgtgt 960
gatgcagggg agaagcataa acccgccata catcacacta atcctacgag cagaaagcac 1020
aatttgtaaa ggctggggct atcttcacag atggacttaa ctcactgcat tccctgccgc 1080
tgactgacct gttatgcgat agggaacctg gtcgtgacca gctgcaatta atggaatcg 1139
<210> 31
<211> 723
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 31 of Yersinia enterocolitica
<400> 31
gggtgttggt tctctcgagg tcgacggtat cgataagctt gatatcgaat tccagcatag 60
cgaggcggcg cagacctggt ggcatcagcc cgagatacaa ggcgcgctgg cgaaagcgcg 120
tgccagtgaa tgggttgatt atccgcaggt catgcagctc aagttgaccg ctttgcgttt 180
ggctttccca ctttttacgg cgcgcaaaac caaagatgct cgggtacagg cattccaccg 240
ttttgttgaa cagggtggaa gtagcctgca tcaacaggcc gcttttgatg ctttgcatgc 300
tcatttgagt aaaaacgacc ccatgatgtg gggctggcca gtatggccgg aaaaatatcg 360
cgatgggcac agcagtgctg tggctgattt cagtcgtgag catgctgatg aagtgaactt 420
ctacctgtgg ctacagtggt tggcagccag ccagtttgag gactgtttcc gtgccagtca 480
aacacggaaa atgccgttgg ggttgtatcg cgatttggcg gtaggtgtgg cagaaggcgg 540
cgctgaaact tggtgcgatc gtgagttata ttgccttaaa gcttcagtgg gagcgccgcc 600
cgatatttta gggccgctgg gccagaactg ggggttgcca ccaatggatc cgcccgggct 660
agagcggccg ccaccgcggt ggagctccag cttttgttcc ctttagtagg ggggtaatat 720
aaa 723
<210> 32
<211> 779
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 32 of Yersinia enterocolitica
<400> 32
tgtggcgggt ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt ccgtgatagc 60
ggcaagccga tttacgctat tggcgaaagc tatagtcaaa ctcagtacta tttagccagc 120
tttgccaata agatctacct gtcaccgcaa gggacggtcg ctctgcatgg ttttgccagc 180
aataatctgt actacaaatc actattggaa aaacttaaag ttaccaccaa tatcttccgc 240
gtcggcacct ataagtctgc tgttgaaccg atgattcgtg atgatatgtc ccctgccgca 300
cgtgaggcgg atactcgctg gattggtggt ttatggcaga actatttgac tgctgttgcg 360
gctaaccggc aattaacccc agaacaattg ttcccggggg cggcaggtgt tgtccgtgga 420
ttgcaggcgg caggtggctc tcaagcgcaa tatgccctgt cgagcaaact ggtcgatcaa 480
ctcgccacac gcccagagat ggaaaatgag ttggttaaag ccttcggctg ggataagaag 540
aataacgact tcaactatgt cagcatttat gactaccaac ctactccgac tccacagcaa 600
ggcgaacaaa tagcagtact ctttgctaat ggtgccatca tggatggacc acagacgcca 660
gggaatgtcg gtggtgatgc tttagccgcc caaattcgcc aggcgcggtt ggatccgccc 720
gggctagagc ggccgccacc gcggtggagc tccagctttt gttctcttta tgggggagt 779
<210> 33
<211> 837
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 33 of Yersinia enterocolitica
<400> 33
gtgggcggga cccctcgagg tcgacggtat cgataagctt gatatcgaat tcgataccga 60
taccgatacc gataccgata ccgataccga taccgatacc gataccgata ccgataccga 120
taaagtctac attcgccgtg atgaaaatgg aaaagaaagg acatgtcatg ggggcgttgg 180
atcaattgat tgctgctcat gcaatcagcc ttagtgccat tttagtgaaa aacgataaaa 240
cgttttcaat ggttccaacc ctctcaatag aagactggac taaagaaaga caaagttaat 300
atatcaataa caaaatccat cttattaata tggatatatt ctctagcgag ataactcaac 360
cactgctggt gtcaactgca atgggtatta ccaataagtt atagcttatc ccgcatgcat 420
aatttagtga taaaaagccc agttattgca gtgttatata ctggcggtcg gtcagtgtcc 480
caccatcatc ctgcctgtac catcgataag tgcggaaaat gagatccacc ctttataaag 540
agggtggagc catcgcctcg caccgacaat ctatagtaaa attcttgtta aagtcatatc 600
cccaaagaga ttggagcgcc gctaaccccc ctgcagcttc aagttcgaag gggaaacaaa 660
aaatatcggc ttggttcttc tatcgattgt ttctgttatc gaacgctttc gctaactgat 720
gttgaatgtg agaaaaatat gtcaaacaaa ccgttccact atcaggatcc gcccgggcta 780
gagcggccgc caccgcggtg gagctccagc ttttgttccc tttggggggg gttaatt 837
<210> 34
<211> 757
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 34 of Yersinia enterocolitica
<400> 34
acaataaatt aaaattaaga tcgactctcg aggtcgacgg tatcgataag cttgatatcg 60
aattccctgg cggtaggcca acagatacac cgcgatagca gacagcaatc cgccccccag 120
cgcactactg gcaatctcaa aatagttgcc attaaacaga gtaatcgcca ctaacgcgcc 180
agtataagcg ccagcattaa agccgatgat atcggggcta cccaatgggt tacgtaccag 240
agactgaaat atggcaccac tgatccccag tgcggccccg aaaatcaacg ccatcattgc 300
acgcggtaaa cgccattgat tgacgataat attcgccgcc ccactggcat ggccgaataa 360
ggcttcaaat acttgccccg gagtaagcgg taatgtaccg accattaaag ccagcatggc 420
cgccagcaag caggccaata gcagtaaccc gccgaccatc aagctacggg gctggatgcg 480
cagattgatg gggccatcag ggcggccaaa taaccacgac ggagtggcgg gcttcatagt 540
gcggtcatcc ttttattacg gcgaaccagc cagatcaata aaggagcgcc aatgaacgcc 600
gtcacgatgg aaacccgtaa ttcaccggga accagaaagc gccccacaat atctgaaact 660
aatagcaaaa tgggggtcat taccaaggtg aaaggaagga tccgcccggg ctagagcggc 720
cgccaccgcg gtggagctcc agcttttgtc ccttggg 757
<210> 35
<211> 954
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 35 of Yersinia enterocolitica
<400> 35
aatagaaatt caattactcg gcggactctc gaggtcgacg gtatcgataa gcttattctt 60
gaagcatggc gcaaccagct cagggatgaa gtggaccgta ctgtatcgca tatgcaagac 120
gaagctgcta atttcccaga cccggttgac cgcgccgcgc aggaagaaga gtttagtctt 180
gagcttcgta accgcgaccg cgagcgtaaa ctgatcaaaa agatcgagaa gacgctgaaa 240
aaagtcgagg atgacgattt cggtttctgc gagtcttgtg gcgtagaaat cggcattcgc 300
cgtctggaag cacggccaac tgcagattta tgcattgact gtaaaactct ggccgaaatc 360
cgcgaaaagc agatggcagg ctaacacagc aataatatgt atatccaaag aggttggagc 420
tataggtagc taaaatccta cagcttcaaa tacgaaggat gtgacacggt gccagagcca 480
cctccggcac cgcatttatc acgctggatc tctctttccc ttttatgtcc gaaaatatca 540
atactcgaca atcaggctat gtagggcgtt ttgcaccgtc tccctctggt gatttgcatt 600
tcggttcgct gattgcagca ttgggcagct atctgcaagc tcgcgctgaa ggtggacgct 660
ggctggtgcg cattgaagat attgatcccc cccgtgaaat ccctggtgct gcggcccgta 720
ttttagcgtc tcttgaccac tacggcctgc attgggatgg cccgattatc taccaatccc 780
agcgccacga agcctatcgc gccaccttag actggctaga gcaacaaggg ctaagttata 840
actgcacctg tacccgcagc cgaattcagc agatcggcgg cttatacgac ggccattgtc 900
gcgatcgcca tttacccccc gcggtggagc tccagctttg tctagtgggg gaga 954
<210> 36
<211> 567
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 36 of Yersinia enterocolitica
<400> 36
aaaaatttgt tttaagaagc ggacctcgag gtcgacggta tcgataagct tccaggaaaa 60
gcctctaagc atcaggtaac attaaatcgt accccaaacc gacacaggtg gtcaggtaga 120
gaatactcag gcgcttgaga gaactcgggt gaaggaacta ggcaaaatgg tgccgtaact 180
tcgggagaag gcacgctggc attaggtaaa gggacttgct cccggcgccg aagccagtcg 240
cagataccag ctggctgcaa ctgtttaata aaaacacagc actgtgcaaa cacgaaagtg 300
gacgtatacg gtgtgacgcc tgcccggtgc tggaaggtta attgatgggg tcagccttac 360
ggcgaagctc ttgatcgaag ccccagtaaa cggcggccgt aactataacg gtcctaaggt 420
agcgaaattc cttgtcgggt aagttccgac ctgcacgaat ggcgtaatga tggccaggct 480
gtctccaccc gagactcagt gaaattgaac tcgctgtgaa gatgcagtgt acccgcggtg 540
gagctccagc ttttgttccc tttatag 567
<210> 37
<211> 733
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 37 of Yersinia enterocolitica
<400> 37
aaaaaaatta attttaaatt tttcggcgct cgaggtcgac ggtatcgata agcttggtcg 60
gtaggatgga taacattgcg agataaaacg atgatcaaac aaaggacttt aaaacgtatt 120
gttcaggcga ctggcgtcgg tttgcacacc ggtaagaaag tcacactgac aatgcgaccc 180
gcgccggcta acaccggggt catctatcgt cgcactgact tgaatccacc ggttgatttt 240
ccggcagatg caaaatccgt gcgtgatacc atgctctgta cttgcctggt caatgagcat 300
gacgtgcgta tttctactgt tgagcatctc aacgctgctc tggcagggtt agggattgat 360
aacattatta ttgaagttaa cgctcccgaa gtaccgataa tggatggtag tgccagtcca 420
ttcgtgtact tgctgctgga tgcgggtatc gaagagttaa actctgcgaa gaaattcctg 480
cgtctgaaag agactgtgcg ggttgaagac ggtgataaat gggctgaatt gtctccattc 540
aatggattcc gtttagattt taccattgat tttaatcacc cggcgattga ctccagtacg 600
cagcgctacc gtttagattt ctcggccgat tcattcgtcc gtcaaatcag ccgtgcgcgt 660
acttttggtt tcatgcgtga tatcgaatac ttacagtccc gcggtggagc tccagctttt 720
gttcccttta tgg 733
<210> 38
<211> 715
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 38 of Yersinia enterocolitica
<400> 38
tttgcggatc gctcgaggtc gacggtatcg ataagctttc ttcactgaac acaatgcgcc 60
attccctgcg cgctcttgtg tggaagttgc ccgtttgcca aaagatgtaa aaatcgaaat 120
cgaagctatc gcagtacgtc gttaatgctg atgtgattgc gtctacggct ggtgtttacc 180
ggccgttttt tattatccca cccctatttt ctctctgact ttatcaatgc gctattgcag 240
accatcatct gtaagacgga gcaacatcct gctcagtcat aaagcatctt gctcaatcat 300
tgcacccaaa tagtgctgaa atcgcgctaa cttcccttat tttgccagtt ttaccagctg 360
gcacagttta tgcgtgatcc cgaatacagc ctgttctgtt agcgaggtga taatgctgaa 420
catcgacctt tccacaccac aatttttcga tgaaatgtta ctggctgagg ggaaacatcg 480
aggccattac gacgcttact ggcaatggtt gcaacaggca gaccaactga caattgcgcg 540
caaacgcgaa gaggctgcgc tgctgtttca ccgggtgggc attaccttta atgtgtatgg 600
tgacgatgat ggcgcagagc ggctaatccc gtttgacagt gtgccgcgca ttattccggc 660
cagcgaatgg cagatgcttg accgcggtgg agctccagct tttgttccct ttatg 715
<210> 39
<211> 268
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 39 of Yersinia enterocolitica
<400> 39
cgtacgggtc gctcgagctt tggccgcaga tccagaagta ttgctaatgg acgaaccctt 60
tggggcatta gacccagtga ctcgttcggc attgcagttt gaaattaccc gtattcatca 120
attatcgggg cggactattg tgctggttac ccatgatatt gatgaagctt gatatcgaat 180
tcctgcagcc cgggggatcc gcccgggcta gagcggccgc caccgcggtg gagctccagc 240
ttttgttccc tttaggaggg gttaatta 268
<210> 40
<211> 362
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 40 of Yersinia enterocolitica
<400> 40
acacgggact ctcgagaagc cacgcatgat aaaatggtcg taacagccac cactggccat 60
ttacaggata atccaccgag ccaaatcaat attaatagtg cagatgcgga acagttggcg 120
cagtccctca gcgggattgg caggaagaaa gcggaagcaa ttgttaacta tcgtgagcag 180
ttcggctttt ttactgatgc agagcagctg cttgaagtgc cagggattgg accctctttc 240
ttagaaagaa atcgcagcaa gcttgatatc gaattcctgc agcccggggg atccgcccgg 300
gctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc cagcttttgt tccctttagt gggggttaat 360
ta 362
<210> 41
<211> 273
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 41 of Yersinia enterocolitica
<400> 41
agtcgggacc ctcgagcttt ggccgcagat ccagaagtat tggctaatgg gacgtaaccc 60
tttggggcat tagacccagt gactcgttcg gcattgcagt ttgaaattac ccgtattcat 120
caattatcgg ggcggactat tgtgctggtt acccatgata ttgatgaagc ttgatatcga 180
attcctgcag cccgggggat ccgcccgggc tagagcggcc gccaccgcgg tggagctcca 240
gcttttgttc cctttaggag cggttaatta gac 273
<210> 42
<211> 433
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 42 of Yersinia enterocolitica
<400> 42
ggggcgggtc cctcgagtga atccatattt acgcgggtca tttgatcatg taacaagtag 60
tggccaatct tccccagata aaacgttttc cctgctggta gagaagtgac cactcagccc 120
catatccaat aagatactga tggcgtatct acttagcgag caatgatctt caatctcatc 180
caaggttatt ccgttcttac ctgagtcatc taatgcggct agaatccctg attccctcag 240
attaagtgca gcttgaaata gcattggtgc aaaagctatt ttttgagctt cagttattgc 300
cgccaaagca ctgatttgat ccttgtcata tccgtagcgc aagcttgata tcgaattcct 360
gcagcccggg ggatccgccc gggctagagc ggccgccacc gcggtggagc tccagctttt 420
gttcccttat ggg 433
<210> 43
<211> 269
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 43 of Yersinia enterocolitica
<400> 43
tgtgcggatc gctcgagctt tggccgcaga tccagaagta ttgctaatgg acgaaccctt 60
tggggcatta gacccagtga ctcgttcggc attgcagttt gaaattaccc gtattcatca 120
attatcgggg cggactattg tgctggttac ccatgatatt gatgaagctt gatatcgaat 180
tcctgcagcc cgggggatcc gcccgggcta gagcggccgc caccgcggtg gagctccagc 240
ttttgttccc tttatgaggg gttaattca 269
<210> 44
<211> 364
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 44 of Yersinia enterocolitica
<400> 44
agaggcggga ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt cgagttgcgg 60
gaaggcggca attgagtaag tcccgctgag cttacttaag taagtgattc gggtgcacga 120
gagcagccaa cgcacatgca gcttgaagta tgaagggtat aagtatttct gccgcttaaa 180
ataagcctta caggcaaaag aaagacagaa atataaacag aagttaaacg ggaggtaact 240
atatgcctac agatgatagc aaaaatggaa ttatcgacta tgtatccacc gggcatctgc 300
cggatccgcc cgggctagag cggccgccac cgcggtggag ctccagcttt tgttcccttt 360
atag 364
<210> 45
<211> 231
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 45 of Yersinia enterocolitica
<400> 45
ggcggacgct cgaggtcgac ggtatcgata agcttgatat cgaatttctg ccgccgtatc 60
ggtgtgccaa gcaggataac aacgttgaga tgatggcgct ggaatcctgt atccgtgatg 120
atctgaacga aaatgcgcca cgggctatgg ctgttctgga tccgcccggg ctagagcggc 180
cgccaccgcg gtggagctcc agcttttgtt ccctttatga ggggttaata a 231
<210> 46
<211> 293
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 46 of Yersinia enterocolitica
<400> 46
ggaatggaac ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt cttctgatta 60
aaggtgatat tggcaccagc gaaatgctca tttatttggc tccaatctcg tttgtatacg 120
ccataattcc ctttagcacg agcatagtcc aacttacgat caatcaggcg aaatgagaaa 180
ctggcgttaa aacttagatt ctcagaatat tgataatacg cctgtggacg gatccgcccg 240
ggctagagcg gccgccaccg cggtggagct ccagcttttg ttccctttag gag 293
<210> 47
<211> 259
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 47 of Yersinia enterocolitica
<400> 47
gagcgggttc tctcgaggtc gacggtatcg ataagctttc ggcagggcgc tcaacattct 60
gggttgtttc ggtcatcggt ttattatcat tggcagcact ctaccgcaag ttaccttctt 120
ctcaggagga agccccaacc gagttacgta aggagatcgc cgcgctgcgc ggagggggga 180
tctggttatc attgctgatg acggtctttt ttgccgcggt ggagctccag cttttgttcc 240
ctttaggagg gttaattag 259
<210> 48
<211> 255
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 48 of Yersinia enterocolitica
<400> 48
tggacggacc tcgaggtcga cggtatcgat aagctttcgg ctggcgctca acattctggg 60
ttgtttcggt catcggttta ttatcattgg cagcactcta ccgcaagtta ccttcttctc 120
aggaggaagc cccaaccgag ttacgtaagg agatcgccgc gctgcgcgga ggggggatct 180
ggttatcatt gctgatgacg gtcttttttg ccgcggtgga gctccagctt ttgttccctt 240
taggagggtt aatta 255
<210> 49
<211> 238
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 49 of Yersinia enterocolitica
<400> 49
cgtgctggac ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttc aattagcctc tcgccataca 60
aggggagcgt tagcggttcc agccgctggg gagtcattga tgtcatggag ccaatacctt 120
ctgcggtaag gttgcttgca aggctgacgt tgttggatag gtcgtccatc ctttaagcac 180
cgcataccca cccgcggtgg agctccagct tttgttccct ttagggaggg gttaatta 238
<210> 50
<211> 206
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 50 of Yersinia enterocolitica
<400> 50
ggtgcggggt cgctcgaggt cgacggtatc gataagcttc ctgtagttaa gtctaggttt 60
gagacagtag ccaccaactc accgcgcaac atcactaaaa ttcggtcaca taatccgata 120
agctcactcg gcatcactgg aggaaaccaa cacactttta ccgcggtgga gctccagctt 180
ttgttccctt tatgagggtt aattca 206
<210> 51
<211> 807
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 51 of Yersinia enterocolitica
<400> 51
agaggcggga ccctcgagcg ctggataaga atttttgagt tcaaaaagtg aagattagag 60
agcttatcga ctttctttaa ctccgccgat ataccggtaa gaacatacag gcaccagtgc 120
tctaacccct caacagcccc cgtatccgct tcggccagca tcgaataata gcgttcacga 180
tcatgacaaa aaaccgctgt tgggtttagt acccgcccac tggttttcac attaaaaccg 240
tactttatca gcaaagaata agtcagcaga tgcaccgttc tgccattgcc attaccaaat 300
ggatgaatcc agccaaaacg gtgatgcgcg agagccactt tcatcagatc atattttggt 360
gcgtctgcac ggttcataaa ctcgaccaat tcgtgcatat aagccggaac atggatgaat 420
tcaggcggca aatgagttga ttgagcaata ctcactccgt gactgcgata ggctcccggc 480
gttttatccc cttcccgttc aatcccattt accgtcatgg cgtgcagttc tcggacaaaa 540
tattccgtga tatcttcacc agcatgtaga tgctcatcaa taaaattcat ggcatgttcg 600
atgttgccaa tctctttcaa ttgatccgtg gagtcctcag ccccttcaac tttactttca 660
acgtaatcag ctaacgttgt atggttacct tcgattcttg ctgaacccaa gcttgatatc 720
gaattcctgc agcccggggg atccgcccgg gctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc 780
cagcttttgt tcctttagag gggtaat 807
<210> 52
<211> 952
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 52 of Yersinia enterocolitica
<400> 52
ttagcgggga ccctcgaggc agtggtgacc tttgcgacca cgttcggcac ggaatttctg 60
caaatcttcc ggccgtaagg ttagcttacg tttaccgaag tgaagtgtaa ttgaggtttg 120
cggaggtaag acaaataacc ataccaagcg atctttaccc gtcgccgcat ccgccgccgg 180
gatcgagacg attttattac ccttaccttt tgataattca ggtagatctg ccaccgggaa 240
catcaacata cggccagccg cagtgatgga taacaacatg tcatccggcc cataaatctc 300
taatggtggt agcgctttgg cattttccgg caaggtaatc atggtcttgc ctgcacggtt 360
tttggcgacc aaatcattga aagtacatac aaagccataa ccggcatctg aagccatcaa 420
taatttctgg tcatctgcgg ccatgagcac gtgttcaata ttggctcccg gcggcagagt 480
caacttgccg gtcaacggct ccccttgccc acgcgcagat ggcaaggtca gtggatctaa 540
tgcgtagctg cgaccggtgg agtccataaa caccaccggc tggttactct taccgcgagc 600
cgctgcacgg aaactgtcgc cagctttata acttaaccca ctcgggtcaa tatcatggcc 660
tttggcactg cgcacccacc ccatttctga cagcacgatg gtcaccggct cagacggcac 720
aatatcatgc tcactcatgg ctttggcttc ttcacgttca gtcagcggcg aacggcgatc 780
atcgccataa gcggctgcat cagccagaat ttctttctta atcagggtat taagtttgcg 840
ttctgacgcc cataaagctt gatatcgaat tcctgcagcc cgggggatcc gcccgggcta 900
gagcggccgc caccgcggtg gagctccagc ttttgttcct ttcgagaaga ta 952
<210> 53
<211> 438
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 53 of Yersinia enterocolitica
<400> 53
ttttgcgggc cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttta tccgatatcg gtgaagcgct 60
tgatgctcgt tttcggctgg aagatcaact tattcaatgg gctgccgagt catggcaagc 120
cgccaagcca gttattcaag cagggcaggt aaaatagccc actgatcagc acgggcttgt 180
agttttaatt caacctcaat acccaaagta attgagattg caggtaggca gcaagtgaat 240
gaattccgat gagcttacac aggtaagtga ttcgggtgaa tgaacgtagc taacaccgct 300
gcaatttcaa gtaagaaggg tatatactga agattcttgt cggagtgcct agcacctgtt 360
ttcttacgaa agcaaacgca ggctgagacc gttaattcgg gatccgcggt ggagctccag 420
cttttgttcc ctttatag 438
<210> 54
<211> 603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 54 of Yersinia enterocolitica
<400> 54
gaactggatc tcgaggtcga cggtatcgat aagcttcgcc ttgcgcttag cctatgtcgt 60
gacctacaac actaagccac ctgccagcgc accaaaaaat acggatacca caacatcggt 120
aactctggtt tacggcctct aatcattatc tatagcgtgg tgtgatgcca cgctaattcc 180
ctctgatatc ccttctattt atcttctata ccctaaataa ttcgagttgc accaaggcag 240
ctaacgcata tgcaatttga aatatgacga gtataggaat aaaaaagggg ttagcacatg 300
gctaacccct tcataactat taacttttgg atgaagcctg agctgtatct tagttagtat 360
tagtgcggtt aagacgctct ttgatacgag cagacttacc agtacgctca cgcagatagt 420
acagtttcgc ttgacgaacg gcaccacgac gtttcacagt aatgctgtcg attactgggg 480
agtgagtttg gaatacacgc tcaacacctt cgccgttgga aattttacga acggtgaacg 540
cagaatgcag accgcggtgg agctccagct tttgttccct ttataggggt ttttttttaa 600
ccg 603
<210> 55
<211> 752
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 55 of Yersinia enterocolitica
<400> 55
aggcaaggga acctcgaggt cgacggtatc gataagcttc gcgcaattgc tcactgatcg 60
gctgcccatt aatactggaa acgccaaagt cccactgaag taagctgctg aaatagaaac 120
ggtaggcatc aagcagagat gcgccattca agggggcatg aggagtaaaa tagctcaggc 180
taaaactgac caatgacaac ataaataggg ttatcaccaa cagtaataag cgccgtaacg 240
taaagattat catggttttt tcccctcatc ggcaggactt tcgcgaaata caccagcaaa 300
agaagaatta ccaaacgggc ttaacactaa acctttaata tcataacggt atgcttgcaa 360
ccgcaaggat gacgccaggg gtaacagcgg caattgctgt tccagaatgc gttgggcttg 420
ctgataatat tcaatacgtg ccgataattg ctgggaacgt aaggcttttt gcagcaactc 480
atcaaactca gggtcacacc agtgagcata gtttgtttgc gatcgaattg ccgcacagct 540
taacaatggg cggaagaaac tgtcggggtc attactgtcg gttgaccagc cagagagtgt 600
caagtcgtgg ctcatttcca tcaggcgcgc ttcctggaac cggccttcga ccggcacgat 660
actcaccgta atcccgacct gcgctaaatc agcttgtatc aactccgcgg tggagctcca 720
gcttttgttc tctttatgag gggtttttat ta 752
<210> 56
<211> 826
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 56 of Yersinia enterocolitica
<400> 56
atgagcgggc cccctcgagg tcgacggtat cgataagctt cagttgttgg ttgtgtaaag 60
tggctggcat caccttgttc cactacgtgg ccgttttcca tgtaaaccac acggctggcc 120
gttttgcggg ccacttcaac ctcatgggtt acaatcacct gagtgatacc ggttcctgcc 180
aattcacgga taatactaac aatttgtgct gtgatttctg gatcaagcgc tgcagtcggt 240
tcgtcaaaca acaaaacctg cggttccatc atcaatgcgc gggcaatagc cacacgctgt 300
tgctggccac ctgagaggtg caacggaaag cgatcggcaa aatcagtcaa acgcagacgg 360
gtcagtaact tttctgcccg cgccatagcc tcatcttttg acagacccag cacgcggcaa 420
ggggcttcaa tcagattctg tatgacagag aggtgcggcc aaagattgta ttgttggaag 480
accatcccca cattctggcg taattcgcga atagcttttg cgccaggagc ctgggaaaag 540
tcaaagtgat tacctgctat ctgcaaggtt cctgaacgtg gcatttccag caggttaagc 600
acacgcaata acgagctttt accggcacca cttggcccca gtaacactaa ggtttcgccc 660
gcaggacagt ctaaggtaat gtcgaacagc gcttggtgta cgccgtagta acagttaatt 720
ccgttaagtt gaatactcat gcgccaaatc tgaatagcca atgatgccgt gaatggtaac 780
ttccgcggtg gagctccagc ttttgttctc tttatagggg gttaaa 826
<210> 57
<211> 781
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 57 of Yersinia enterocolitica
<400> 57
gttcggaccc tcgaggtcga cggtatcgat aagctttctg gcatgaatgg cgcgctggcc 60
gcactatcgc cacccctcgc ggtgatgtgg tttatctgga cttgcgccac ttgggcgaga 120
aaaaactact tgaacgcctg ccatttattt gtgaattggc caaagcgtat gtcggtgtcg 180
acccggtgaa agagccaatt ccagtgcgcc caaccgcgca ttacaccatg ggcggcattg 240
aaaccaacca acagtgtgaa acccgaatca aagggctgtt cgcggtcggt gaatgttctt 300
ctgttggtct gcacggcgca aaccgtctgg gctccaactc actggcagaa ctggtggtct 360
ttggccgtct tgctggcgaa caagccgctt tgcgcgccat ggaaagcacc cccgccaatg 420
gtagtgcgct ggatgcacag gcccgtgatg tggaaactcg cctgagcaac ctgatgaagc 480
aggaaggcac tgaaaactgg tctaaaatcc gcgatgaaat gggcttatca atggaagaag 540
gttgtggcat ttaccgcaca ccggaactga tgcagaagac cgtggataaa ctggctgagc 600
tgaaagagcg cttcaaacgc gtgaaaatca ccgataactc cagtgttttc aataccgacc 660
tgctctatac cattgagcta ggttatggtt tagatgtggc cgaatgtatg gcccactctg 720
cactgaatcg tagagaatcc cgcggtggag ctccagcttt tgttctctta taggggggta 780
a 781
<210> 58
<211> 730
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 58 of Yersinia enterocolitica
<400> 58
ggaggagggg tcactcgagg tcgacggtat cgataagctt tgaaacgacc agatttacct 60
ccatgacccg aatccatatc ggtatagagc aatagctggt ggtcatcggt tttcatttcc 120
cgcaatttcg cgacccactt tgccggttcc caatattgga cctgtgagtc gtgcaacccg 180
gtagtcacca gcatgtgcgg gtaatcctgg gctttaacct gatcgtatgg gctgtattgc 240
ttgatgtaat cgtaataaac cttatcgttt ggattgcccc actcatcata ctcgccggtc 300
gtcaggggaa tagattcatc cagcatggtg gtgacgacat caacaaatgg tacttgcgcc 360
acaacacctt tgtataattc aggcgcctga ttaatcaccg cccccactag caagccaccc 420
gcactgccgc ccatggcgaa aacacggctc gcatcgccat aacccttggc aactaatgtt 480
ttggttacat caataaaatc attgaatgtg ttcaatttat tgagcaactt gccatcttca 540
taccattgct gccctaactc accgccaccg cgaatatggg ccaaagcgaa aacaaaacca 600
cggtctagca gacttaaacg actgccactg aatgcaggat ccatgctgct accataagag 660
ccatagccat agaccaacag cggattactc ccgcggtgga gctccagctt ttgttctctt 720
tataggggga 730
<210> 59
<211> 722
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 59 of Yersinia enterocolitica
<400> 59
ggcctgcccc ctcgaggtcg acggtatcga taagcttatt tgttgtcggt gcattttgaa 60
gtagcgaaag ataataaccc ataaaatact gatctggaga aaagactatg agtcaaatta 120
ccgttgtgat tggcgaccgt ttaggaaaag gccagaaagt cgggcaaggc gttgaattgg 180
ctggtggccg cgtggtggtt attcccggtg tggccgcaga tatgaaactg ggtgatgtga 240
tgaatagcga aaaagcagat ttcggtattt cattctgtgg tagtggtggt gctggtgcaa 300
tcactgcaca aaataaatat ggctacaaag caaaatacgg catgcgttca gtggaagaag 360
gtgtgacggc aataaatgaa ggctgcaagg tattaggctt cggatttatg gataaagaag 420
agttagggca aaagctagtg gaagcctata tcaagaaata tggtcagccg taatgaaaga 480
gcaatatacc actcaggtgc aagtcaaagg caagggcgat actaaaggta aagccttcgc 540
caatgcactc ggtaatgtcc agaatacggt gttgaagtcg acacaaaata ttttgctgcg 600
gattgaacca caagacgtaa aagtattaaa agctgagtta tcagtcaaaa atgaaaagtt 660
tttattcttt ttcctgccgc ggtggagctc cagcttttgt tctctttagt aggggttgaa 720
aa 722
<210> 60
<211> 615
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 60 of Yersinia enterocolitica
<400> 60
gtgggcggaa cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttgt gggacacctg gttggaaatg 60
caagagccag aaaatcgtcg ctctctgcgc gaatggctgc acgatagcca gatggacttg 120
cacgatgttc atacccagta tgctcatggc atgttggaac tgacgcaacg ggcatgggct 180
gaagaactgt atttgagtat ttgcaacgag atccaaaagc agttggatcc gagcaaccgt 240
gcacaccgac caatcattga tgagctgcaa gaacgtatgg ctgacaagct gtatgtcaat 300
ttctcgttgt tccagtcaat gccggatgcg tggggtatcg atcaactctt cccagtgttg 360
ccattggagg ggttagataa gccgccagag cgccgtgcgg tgttattgga tatcacctgt 420
gattccgacg ggactatcga tcattatatc gatggcgatg gtgtggcaac caccatgcca 480
atgccaccgt atgatgcaga aaacccaccg ctgctgggct tctttatggt cggagcctat 540
caggaaatcc tgggcaatat gcacaacttg ttcggcgata ccgcggtgga gctccagctt 600
ttgttccctt tatgg 615
<210> 61
<211> 435
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 61 of Yersinia enterocolitica
<400> 61
tgaccgggtc cctcgagcgt tttaactgtt tggctatggt gccgtgctac ctgagcgtgt 60
tcgtcaagtt ttgactgatt acgataagca ggccagcgcg aaacgcaacc gtcaggagaa 120
agtgaaactg ctagttcaag cactgatcgg catttggctg gttattgcat tggcgctaca 180
tttggctgaa gtgggcttag tggggttgtc ggtcattatt ctcgccacct ctttttgtgg 240
catcaccaat gaacatgcgc tgggtaaggc atttcaagaa gcgctgcctt tcactgcatt 300
gcttacggtg tttttcgccg tagtcgcagt gattatcgaa caaagcttga tatcgaattc 360
ctgcagcccg ggggatccgc ccgggctaga gcggccgcca ccgcggtgga gctccagctt 420
ttgttccctt tagga 435
<210> 62
<211> 1051
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 62 of Yersinia enterocolitica
<400> 62
tgggcgggac cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc actatgctgg 60
aatggtatcg cccgcattat gatatgtatc gtttgatgga tgaggtggag gatctgctgc 120
aacaaattct ggattgcgat agctcagaaa ggctttctta tcagcaggca ttcttgcgtc 180
atttggatat tgaccctctg tcggcggata aagcgcaatt gcgcgaagcc gcggcaaaac 240
tggatttaag caatattgcc gatacagaag aagatcgcga taccttgctg caattgctgt 300
tcaccgttgg ggttgaaccc catattggcc gtgataaacc ggcttttgtg tatcacttcc 360
cggcgtcgca agcttccctt gcggtgatca gcacagaaga tcaccgcgtg gcagaacgct 420
ttgaggttta ctttaaaggt attgagctgg cgaatggttt ccatgagctg actgacggcg 480
atgagcaact gaaacgtttt gagcaagata atcgcagccg cgaaaaacgg ggtttgccac 540
aacatcccat cgacatgaat ctgattgatg ccctaaagca cggtttgccg gattgttctg 600
gcgtggcatt aggggttgat cgtctggtga tgttagcgtt gggtgcggaa aagctgagtg 660
atgttattgc attcccagta gggcgtgctt aataacccct cgcccttggc gccgcagcgg 720
tgttaaaaga aatgccctga cccttcacag aacagggcat ttttgtgtct tactcactga 780
tttatcttac aaactgcccg gtgtgcggct acgattcgaa gaaaccacac gcccacgtcc 840
cagtgtttct aaacgggcct ggaaaggtgg gaacggcagg gtaataccgt gctcgcggta 900
accggccaga atcagctggt ggatctcatg gcgcagtggc atacggtggc ccatttcagc 960
ggcatagata cgcagctcga aatctggatc gcccgggcta gagcggccgc caccggcggt 1020
gggagctcca gctttcgttc tagtgagagg a 1051
<210> 63
<211> 917
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 63 of Yersinia enterocolitica
<400> 63
cttcatcggg tccctcgagg tcgacggtat cgataagctt gatatcgaat tccatgatta 60
aggctcttgg gatcaattga ggcagcaaat tttgcggctc attttgtctg gaaggcatga 120
tatcccgtag gagatacaat gggatttgtt ataccactta tcccaattgg gttctagtta 180
ttgctatcac agttatgatg gaaaatgtgc ggtaaaaggg gggagcgggt ataaaaaagc 240
ccggtagatt ttaccgggct ggtgatgtct acaacttcaa atcatggtgt ggattaattc 300
tgtccggctg gtgtttgttg taccggatcg atagccggtt cggctgccgg gcggttttgc 360
agtaccgtcc agataaccac tactgccaac acgtcaaaca ccgccagtgc ggcaaacagt 420
gggctgaagc ccatagtatc tgccaaagca cctaccacca gagcgaacat ggttctggca 480
gtccaggccg ccattcccgt caagccgttg gcggtggcca cttcgttgcg accaaaaacg 540
tcagaagaca gtgtgattag tgcgccagac agtgattggt gagcaaagcc cccaacacac 600
aataaggcga tagcagcata agggctggta aacaggccaa tagtccctgg cccaatcatc 660
aacaagccgc ccattgttac cactaactta cgtgacacaa tcaggttaac tttcatgtat 720
ttctggaaca gaggtggcag gtaaccaccg agaatgcagc ccagatcggc aaacagcatt 780
ggcatccagg caaacatggc aatttctttc aggttaaagc cataagcttt aaacatgaac 840
agtgggatcc gcccgggcta gagcggccgc caccgcggtg gagctccagc tcttgttctc 900
tttatgaggg tggagta 917
<210> 64
<211> 722
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 64 of Yersinia enterocolitica
<400> 64
tgttgaagcg acccctcgag gtcgacggta tcgataagct tgatatcgaa ttccagcata 60
gcgaggcggc gcagacctgg tggcatcagc ccgagataca aggcgcgctg gcgaaagcgc 120
gtgccagtga atgggttgat tatccgcagg tcatgcagct caagttgacc gctttgcgtt 180
tggctttccc actttttacg gcgcgcaaaa ccaaagatgc tcgggtacag gcattccacc 240
gttttgttga acagggtgga agtagcctgc atcaacaggc cgcttttgat gctttgcatg 300
ctcatttgag taaaaacgac cccatgatgt ggggctggcc agtatggccg gaaaaatatc 360
gcgatgggca cagcagtgct gtggctgatt tcagtcgtga gcatgctgat gaagtgaact 420
tctacctgtg gctacagtgg ttggcagcca gccagtttga ggactgtttc cgtgccagtc 480
aaacacggaa aatgccgttg gggttgtatc gcgatttggc ggtaggtgtg gcagaaggcg 540
gcgctgaaac ttggtgcgat cgtgagttat attgccttaa agcttcagtg ggagcgccgc 600
ccgatatttt agggccgctg ggccagaact gggggttgcc accaatggat ccgcccgggc 660
tagagcggcc gccaccgcgg tggagctcca gcttttgttc cctttatagg gggggttaat 720
ta 722
<210> 65
<211> 773
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 65 of Yersinia enterocolitica
<400> 65
tgtgcgggtg ctcgaggtcg acggtatcga taagcttgat atcgaattcc gtgatagcgg 60
caagccgatt tacgctattg gcgaaagcta tagtcaaact cagtactatt tagccagctt 120
tgccaataag atctacctgt caccgcaagg gacggtcgct ctgcatggtt ttgccagcaa 180
taatctgtac tacaaatcac tattggaaaa acttaaagtt accaccaata tcttccgcgt 240
cggcacctat aagtctgctg ttgaaccgat gattcgtgat gatatgtccc ctgccgcacg 300
tgaggcggat actcgctgga ttggtggttt atggcagaac tatttgactg ctgttgcggc 360
taaccggcaa ttaaccccag aacaattgtt cccgggggcg gcaggtgttg tccgtggatt 420
gcaggcggca ggtggctctc aagcgcaata tgccctgtcg agcaaactgg tcgatcaact 480
cgccacacgc ccagagatgg aaaatgagtt ggttaaagcc ttcggctggg ataagaagaa 540
taacgacttc aactatgtca gcatttatga ctaccaacct actccgactc cacagcaagg 600
cgaacaaata gcagtactct ttgctaatgg tgccatcatg gatggaccac agacgccagg 660
gaatgtcggt ggtgatgctt tagccgccca aattcgccag gcgcggttgg atccgcccgg 720
gctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc cagcttttgt tcccttatag ggg 773
<210> 66
<211> 838
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 66 of Yersinia enterocolitica
<400> 66
tggggcggac ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttg atatcgaatt cgataccgat 60
accgataccg ataccgatac cgataccgat accgataccg ataccgatac cgataccgat 120
aaagtctaca ttcgccgtga tgaaaatgga aaagaaagga catgtcatgg gggcgttgga 180
tcaattgatt gctgctcatg caatcagcct tagtgccatt ttagtgaaaa acgataaaac 240
gttttcaatg gttccaaccc tctcaataga agactggact aaagaaagac aaagttaata 300
tatcaataac aaaatccatc ttattaatat ggatatattc tctagcgaga taactcaacc 360
actgctggtg tcaactgcaa tgggtattac caataagtta tagcttatcc cgcatgcata 420
atttagtgat aaaaagccca gttattgcag tgttatatac tggcggtcgg tcagtgtccc 480
accatcatcc tgcctgtacc atcgataagt gcggaaaatg agatccaccc tttataaaga 540
gggtggagcc atcgcctcgc accgacaatc tatagtaaaa ttcttgttaa agtcatatcc 600
ccaaagagat tggagcgccg ctaacccccc tgcagcttca agttcgaagg ggaaacaaaa 660
aatatcggct tggttcttct atcgattgtt tctgttatcg aacgctttcg ctaactgatg 720
ttgaatgtga gaaaaatatg tcaaacaaac cgttccacta tcaggatccg cccgggctag 780
agcggccgcc accgcggtgg agctccagct tttgttcttt tatagggggt agtttatt 838
<210> 67
<211> 745
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 67 of Yersinia enterocolitica
<400> 67
ggtgcggacc ctcgaggtcg acggtatcga taagcttgat atcgaattcc ctggcggtag 60
gccaacagat acaccgcgat agcagacagc aatccgcccc ccagcgcact actggcaatc 120
tcaaaatagt tgccattaaa cagagtaatc gccactaacg cgccagtata agcgccagca 180
ttaaagccga tgatatcggg gctacccaat gggttacgta ccagagactg aaatatggca 240
ccactgatcc ccagtgcggc cccgaaaatc aacgccatca ttgcacgcgg taaacgccat 300
tgattgacga taatattcgc cgccccactg gcatggccga ataaggcttc aaatacttgc 360
cccggagtaa gcggtaatgt accgaccatt aaagccagca tggccgccag caagcaggcc 420
aatagcagta acccgccgac catcaagcta cggggctgga tgcgcagatt gatggggcca 480
tcagggcggc caaataacca cgacggagtg gcgggcttca tagtgcggtc atccttttat 540
tacggcgaac cagccagatc aataaaggag cgccaatgaa cgccgtcacg atggaaaccc 600
gtaattcacc gggaaccaga aagcgcccca caatatctga aactaatagc aaaatggggg 660
tcattaccaa ggtgaaagga aggatccgcc cgggctagag cggccgccac cgcggtggag 720
ctccagcttt tgttccctta ggagg 745
<210> 68
<211> 344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 68 of Yersinia enterocolitica
<400> 68
tggggaggga ccctcgaggt cgacggtatc gataagcttt atctcgtggc atctataaca 60
ccttccgtca cgataacctg cgccattcgc aaaatgcggc gttagatatg tataccgaag 120
tgaataccgg aaccaatctt cccggccaaa tcgatatttt tgctacccct ggcgcgcagt 180
atacctttct gtttgtgaat aaagggggcg gttctgcaaa caaagcggct ttataccagg 240
aaacaaaagc tattctggaa cccaaaaagc tcaaggcctt tctaatcgag aaaatgagag 300
ggctgggaac cgcggtggag ctccagcttt tgttcccttt atag 344
<210> 69
<211> 499
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Random genomic DNA sequence 69 of Yersinia enterocolitica
<400> 69
tgtagcggga cccctcgagg tcgacggtat cgataagctt ttaatggtat tagctaaaca 60
gatttcttac gataatatgt aaggaaaata tctgggagta tcgctatgcg ttggcaaggt 120
cgtcgcgaaa gtgacaatgt agaagacaga cggggaaatt catctggcgg tggtggcggt 180
tttcgtcccc ctattggtgg caaagggggg ctggttatcc tgattgtggt gctggtggcg 240
ggctactacg gggttgattt gacgccgctg ttaaacggca gtgatcccat gtctcaaacc 300
cagactcagc cacgttcaca aggctctgtc agcgcccaag atgaccaata tgccaagttt 360
acctcggtgg tgctggccga taccgaagac acctggaaac ccatttttca aaaaatgggg 420
gcaacctaca aagagccgaa gttagtgatg taccgcggtg gagctccagc ttttgttccc 480
tttagtgggg gtaaaatta 499
Claims (8)
- 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)의 지노믹 DNA로부터 유래된 랜덤 지노믹 DNA 프로브를 포함하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩.
- 제 1항에 있어서, 상기 랜덤 지노믹 DNA 프로브는 상기 식중독 원인균으로부터 추출한 지노믹 DNA를 서로 다른 종류의 제한효소 쌍으로 잘라내어 겔 추출법으로 추출한 100 내지 1500 bp의 DNA인 것을 특징으로 하는 DNA 칩.
- 제 2항에 있어서, 상기 서로 다른 종류의 제한효소 쌍은 EcoRⅠ/BamHⅠ, HindⅢ/XhoⅠ 및 HindⅢ/SacⅡ인 것을 특징으로 하는 DNA 칩.
- 제 1항에 있어서, 상기 랜덤 지노믹 DNA 프로브는 서열번호 1 내지 69의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 DNA 칩.
- 제 1항에 있어서, 여시니아(Yersinia) 속(genus) 중에서 Y. enterocolitica 종(species)만을 특이적으로 검출하는 것을 특징으로 하는 DNA 칩.
- 하기의 단계를 포함하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩의 제조방법:
a) Y. enterocolitica로부터 지노믹 DNA를 추출하는 단계;
b) 추출한 지노믹 DNA를 서로 다른 종류의 제한효소 쌍으로 잘라내어 겔 추출법으로 100 ~ 1500 bp를 분리하는 단계;
c) 상기 b) 단계에서 사용한 제한효소 쌍으로 처리된 라이브러리용 플라스미드와 상기 절단된 지노믹 DNA를 연결시켜 콜로니를 획득하는 단계;
d) 획득한 콜로니에서 플라스미드를 추출한 후, T3/T7 프라이머로 PCR을 수행한 후 프로브를 정제하는 단계; 및
e) 정제된 프로브를 슬라이드 글라스에 고정하는 단계.
- 제 6항에 있어서, 하기의 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 Y. enterocolitica 검출용 DNA 칩의 제조방법:
(a) 고정된 랜덤 지노믹 DNA 프로브를 다른 비교 미생물로부터 랜덤 프라이밍(random priming)된 DNA와 하이브리다이제이션(hybridization)시켜 상호중복 하이브리다이제이션을 제외시키는 단계; 및
(b) Y. enterocolitica에만 하이브리다이제이션하는 랜덤 지노믹 DNA 프로브만을 선택하여 슬라이드 글라스에 고정화하는 단계.
- 제 1항의 DNA 칩을 준비하는 단계; 시료 미생물로부터 지노믹 DNA를 추출하고 랜덤 프라이밍(random priming)을 통해 시료 DNA를 제조하는 단계; 상기 시료 DNA를 상기 DNA 칩 상의 지노믹 DNA 프로브와 하이브리다이제이션(hybridization)시켜 Y. enterocolitica의 존재 유무를 판별하는 단계를 포함하는 Y. enterocolitica 균의 탐지방법.
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