KR20110137047A - 개민들레 추출물을 이용한 항염증성 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 개민들레 추출물을 이용한 항염증성 조성물을 개시한다. 개민들레 추출물은 NO 생성 억제 활성, PGE2 생성 억제 활성, 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β 및 IL-6)의 생성 억제 활성, iNOX 생성 억제 활성 및/또는 COX-2 생성 억제 활성을 갖는다.
Description
본 발명은 개민들레 추출물을 이용한 항염증성 조성물에 관한 것이다.
염증은 외부의 물리·화학적 자극, 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 생체의 방어 반응이다.
염증 반응은 선천성 면역 반응의 일부이며, 다른 동물에서처럼 인간의 선천성 면역 반응은 대식세포가 병원체에 특이적으로 존재하는 세포 표면의 패턴을 통해 비자기(non-self)로 인식하고 공격함으로써 시작된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다.
이러한 염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하는데, 특히 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)와 다양한 프로스타글란딘(prostaglandins)의 생합성과 관련되는 사이클로옥시제나제(cyclooxygenase, COX)가 염증 반응의 중요한 매개체로 알려져 있다.
NOS는 세 가지 이성질체가 존재하는데, 칼슘이나 카모듈린 의존성인 eNOS(내피성 NOS)와 nNOS(신경성 NOS), 그리고 LPS(lipopolysaccharide)와 같은 세균의 내독소나 IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-12과 같은 여러 염증성 사이토카인에 의해 유도되는 iNOS(유도성 NOS)가 있으며, L-아르기닌(L-arginine)으로부터 산화질소(NO)를 생성한다.
eNOS나 nNOS에 의해 생성되는 NO는 혈압 조절 작용, 신경 전달 작용, 학습, 기억 등과 관련된 다양한 생리 반응을 수행함으로써 인체의 항상성 유지에 중요한 역할을 하지만, iNOS에 의해 생성되는 NO는 관절염, 패혈증, 조직이식거부반응, 자가면역질환, 신경세포의 사멸 등 다양한 염증성 질환에 관여하는 것으로 알려져 있다(Moncade S. et al, Pharmacol. Rev., 1991, 43, 109; Nature Medicine, 2001, 7, 1138; Mu, M. M., J. Endotoxic Res. 7, p341, 2001).
COX 효소는 COX의 기능과 함께 하이드로퍼옥시다제(hydroperoxidase, HOX) 활성을 가지고 아라키돈산으로부터 중간체인 PGG2와 PGH2를 합성하며, 이들 화합물로 PGE2, PGF2, PGD2, 프로스타시클린 및 트롬복신A2(thromboxane A2, TxA2)를 만든다. COX의 기능 중 PGH 합성효소의 기능은 PGE2의 합성을 통해 통증과 염증 반응에 관여한다.
COX에는 두 가지 아형이 있고 COX-1은 대부분의 조직에 항시 발현되는데 비해, COX-2는 염증성 사이토카인에 의해 신속히 발현이 유도되어 염증 반응에서 중요한 역할을 한다.
따라서 NO, PGE2, 염증성 사이토카인 등의 생성 억제제나 iNOS 억제제 그리고 COX-2 억제제는 염증질환 치료제로서 활용될 수 있다.
본 발명은 NO, PGE2, 염증성 사이토카인 등의 생성 억제 활성을 가지고 iNOS 및 COX-2 억제 활성을 가지는 개민들레 추출물을 개시한다.
본 발명의 목적은 개민들레 추출물을 이용한 항염증성 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 개민들레 추출물이 NO 생성을 억제하고, 염증성 사이토카인과 PGE2의 생성을 억제하며, iNOS 및 COX-2 억제 활성을 가짐을 확인함으로써 완성된 것이다.
따라서 본 발명의 항염증성 조성물은 개민들레 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
또 본 명세서에서, "개민들레 추출물"은 추출 방법을 불문하고 추출 대상인 개민들레 개민들레 꽃, 전초(全草), 잎, 줄기, 뿌리, 열매 또는 이들의 혼합물을 메탄올, 증류수, 에탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 포화노말부탄올, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 물, 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 조추출물과 그 조추출물을 상기 열거된 용매로 분획하여 얻어진 추출물을 포함하는 의미로서 이해된다. 추출 방법을 불문하므로, 추출 대상을 추출 용매에 침지시키는 단계를 통하여 추출되는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있다. 그럼에도 상기 "개민들레 추출물"은 바람직하게는 추출 대상을 물, 증류수, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하고 추출 용매를 제거하여 고형상의 추출물을 얻고 그 고형상의 추출물을 물층과 에틸아세테이트층으로 분획한 후 얻어지는 에틸아세테이트층 분획물을 말한다. 이러한 추출물 또는 분획물은 추출 용매 또는 분획 용매가 제거된 액상의 농축물이거나 고형물일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 "유효성분"의 의미는 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "항염증"은 아래에서 정의되는 염증성 질환의 개선, 치료, 그러한 질환의 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.
또 본 명세서에서, 상기 "염증성 질환"이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 어떠한 상태로서 정의될 있다. 이러한 반응은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(예컨대 iNOS, COX-2 등) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(예컨대, NO, TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE2의 분비), 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로 상기 염증성 질환에는 천식, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두퐁, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염(아토피성 피부염 포함), 습진, 다발성 경화증 등이 포함될 것이다.
본 발명은 다른 측면에 있어서, 개민들레 추출물을 유효성분으로 포함하는 iNOS 억제제 조성물에 관한 것이다.
전술하였지만, iNOS의 억제는 NO의 생성을 억제시켜 염증성 질환의 개선을 가져올 수 있다.
본 발명의 아래의 실험예는 개민들레 추출물이 NO의 생성을 억제하고 iNOS의 생성을 억제함으로 보여주고 있으며, iNOS의 발현을 유도하는 것으로 알려진 사이토카인의 생성을 억제함을 보여주고 있다.
본 명세서에서, "iNOS 억제"의 의미는 iNOS 유전자의 발현 억제 및 iNOS 생성 억제를 포함하는 의미이며, 중간 기작이 어떻든 NO의 생성의 억제 및/또는 감소를 포함하는 의미이다.
본 발명은 또 다른 측면에 있어서, 개민들레 추출물을 유효성분으로 포함하는 COX-2 억제제 조성물에 관한 것이다.
전술하였지만, COX-2의 억제는 PGE2의 생성을 억제시켜 염증성 질환의 개선을 가져올 수 있다.
본 발명의 아래의 실험예는 개민들레 추출물이 PGE2의 생성을 억제하고 COX-2의 생성을 억제함으로 보여주고 있으며, COX-2의 발현을 유도하는 것으로 알려진 사이토카인의 생성을 억제함을 보여주고 있다.
본 명세서에서, "COX-2 억제"의 의미는 COX-2 유전자의 발현 억제 및 COX-2 생성 억제를 포함하는 의미이며, 중간 기작이 어떻든 PGE2의 생성의 억제 및/또는 감소를 포함하는 의미이다.
한편 본 발명의 조성물(즉 항염증성 조성물, iNOS 억제제 조성물 및 COX-2 억제제 조성물을 말함; 이하 같음)은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 염증성 질환의 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게서, 염증성 질환의 개선, 치료, 또는 이러한 병리적 증상의 발병 억제/지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물이 적용(처방)될 수 있는 대상은 포유동물 및 사람이며, 특히 사람인 경우가 바람직하다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분을 포함하는 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.
상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다 의미이다.
약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등) 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.
부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 아토피성 피부염 조성물처럼 경우에 따라서는 국소적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등으로 제조될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분이 포함되는 것 이외에, 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 감미제, 사과, 레몬, 감귤 등의 과일이나 녹차잎, 둥굴레, 대잎 등의 차류에서 얻어진 풍미제, 카테킨, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤 등의 생리활성 성분, 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물 등의 미네랄 등이 또한 첨가될 수 있다.
또한 향미나 기호성을 향상시키고 다른 기능성(예컨대 관절염 또는 골다공증 예방)을 추가하기 위하여 한약재가 추가될 수 있는데, 추가될 수 있는 한약재로서는 두충 추출물, 속단 추출물, 녹용 추출물, 홍화인 추출물, 토사자 추출물, 숙지황 추출물, 별갑 추출물, 산수유 추출물, 구기자 추출물, 감초 추출물, 당귀 추출물, 갈근 추출물, 강진향 추출물, 합환피 추출물, 산두근 추출물, 괴화 추출물, 고삼 추출물 등이 예시될 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 항염증성 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 항염증성 조성물은 약품이나 식품으로 제품화될 수 있다.
도 1은 개민들레 추출물이 NO 생성 억제 활성을 가지면서 세포독성은 없음을 보여주는 결과이다.
도 2는 iNOS 및 COX-2의 발현 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 3 내지 도 5는 개민들레 추출물이 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 6은 개민들레 추출물의 PGE2의 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 2는 iNOS 및 COX-2의 발현 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 3 내지 도 5는 개민들레 추출물이 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 6은 개민들레 추출물의 PGE2의 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
>
개민들레
추출물의 제조
개민들레(꽃 부위) 시료 2kg에 80% 에탄올 30 L를 넣은 후 24시간 이상 실온에서 추출하였다. 추출물은 여과, 감압농축과 동결건조하여 80% 에탄올 추출물(160g) 얻었다. 용매 분획물 제조는 80% 에탄올 추출물 5g을 물에 분산 시킨 후 에틸아세테이트(EtOAc)용매로 분획하였고, 각 분획은 감압 농축한 후 건조 분말화하여 에틸아세테이트 분획(0.808g)과 물 분획(3.3239 g)을 얻었다. 에틸아세테이트 분획을 아래의 실험에 사용하였다.
<
실험예
>
개민들레
추출물의 항염증 활성 실험
<실험예 1> Nitric oxide 생성 억제 평가
RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 1.5×105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 실시예의 추출물 시료(25, 50 및 100 ㎍/㎖)와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양은 Griess 시약 [1% (w/v) sulfanilamide, 0.1% (w/v) naphylethylenediamine in 2.5% (v/v) phosphoric acid]을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 세포배양 상등액 100 μL와 Griess 시약 100 μL를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 생성된 NO의 양은 sodium nitrite (NaNO2)를 standard로 비교하였다.
결과를 [도 1]에 나타내었다.
[도 1]를 참조하여 보면, 개민들레 추출물은 농도 의존적으로 NO 생성을 억제함을 보여준다(* P<0.05; ** P<0.01).
[도 1]에서 2-amino-4-methylpyridine(처리농도는 20μM임)과 NS-398(selective COX-2 inhibitor)(처리 농도는 20μM임)은 양성 대조군이다.
<실험예 2> 세포독성 평가 ( LDH assay )
RAW 264.7 세포 (1.5×105 cells/㎖)를 DMEM 배지에 실시예의 추출물 시료(25, 50 및 100 ㎍/㎖)와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양 한 후 배양 배지를 얻어 3,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. LDH (lactate dehydrogenase) assay는 non-radioactive cytotoxicity assay kit (Promega)를 이용하여 측정했으며, 96 well plate에 원심 분리하여 얻은 배양 배지 50 μL와 reconstituted substrate mix를 50 μL를 넣고, 실온에서 30분 반응시킨 후 50 μL의 stop solution을 넣은 후 microplate reader (Bio-TEK Instruments Inc., Vermont, WI, USA)를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군 (LDH control, 1:5000)의 흡광도 값과 비교하여 세포독성을 평가하였다.
결과를 [도 1]에 함께 나타내었다. [도 1]를 참조하여 보면 실시예의 추출물 시료는 모든 처리 농도에서 특별한 세포독성을 나타내지 않음을 알 수 있으며, 이러한 결과는 상기 실시예 추출물의 NO 생성 억제 활성이 세포독성에 의한 결과가 아님을 말해준다고 할 수 있다.
<실험예 3> 웨스턴 블럿을 통한 iNOS 발현 억제 활성 및 COX -2 발현 억제 활성 평가
RAW 264.7세포 (5.0 X 105 cells/㎖)를 18시간 전 배양한 후, 실시예의 추출물 시료(25, 50 및 100 ㎍/㎖)와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양하였다.
배양이 끝난 세포를 수집하여 2~3회 PBS (phosphate buffered saline)로 세척 한 후 1 ㎖의 lysis buffer을 첨가하여 30분간 lysis 시킨 후 12,000 rpm에서 20분간 원심 분리하여 세포막 성분 등을 제거하였다. 단백질 농도는 BSA (bovine serum albumin)를 표준화하여 Bio-Rad Protein Assay Kit를 사용하여 정량 하였다. 20~30μg의 lysate를 8~12% mini gel SDS-PAGE로 변성 분리하여, 이를 PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane (BIO-RAD, Richmond, CA, USA)에 200 mA로 2시간 동안 transfer하였다. 그리고 membrane의 blocking은 5% skim milk가 함유된 TTBS (0.1% Tween 20 + TBS) 용액에서 상온에서 2시간 동안 실시하였다.
iNOS의 발현 양을 검토하기 위한 항체로는 anti-mouse iNOS (1:1000) (Calbiochem, La Jolla, CA, USA)를 COX-2의 발현 양을 검토하기 위한 항체로는 anti-mouse COX-2 (1:1000) (BD Biosciences Pharmingen, San Jose, CA, USA)을 TTBS 용액에서 희석하여 상온에서 2시간 반응시킨 후 TTBS로 3회 세정하였다. 2차 항체로는 HRP (horse radish peroxidase)가 결합된 anti-mouse IgG (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK)를 1:5000으로 희석하여 상온에서 30분 간 반응시킨 후, TTBS로 3회 세정하여 ECL 기질 (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA)과 1~3분 간 반응 후 X-ray 필름에 감광하였다.
결과를 [도 2]에 나타내었다. [도 2]은 개민들레 추출물이 농도 의존적으로 iNOS 및 COX-2의 발현을 억제함을 보여준다.
[도 2]에서 2-amino-4-methylpyridine(처리농도는 10μM임)과 NS-398(selective COX-2 inhibitor)(처리 농도는 10μM임)은 양성 대조군이다.
<실험예 4> 염증성 사이토카인( TNF -α, IL -1β 및 IL -6)의 생성 억제 활성 평가
RAW 264.7 세포 (1.5×105 cells/㎖)를 DMEM 배지를 이용하여 24 well plate 에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 18 시간 전 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 10 배 농도 (1 mg/㎖)로 조제된 실시예의 추출물 시료 50 ㎕와 LPS (1 ㎍/㎖) 450 ㎕를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 전 배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24 시간 후 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 분)하여 얻어진 상층액의 pro-inflammatory cytokines 생성 함량을 측정하였다. 모든 시료는 정량 전까지 -20 ℃ 이하에 보관하였다. pro-inflammatory cytokines 정량은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard 에 대한 표준곡선의 r2 값은 0.99 이상이었다.
결과를 [도 3] 내지 [도 5]에 나타내었다. [도 3] 내지 [도 5]의 결과는 개민들레 추출물이 농도 의존적으로 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성을 억제함을 보여준다(* P<0.05; ** P<0.01).
<실험예 5> PGE 2 생성 억제 활성 평가
RAW 264.7 세포를 DMEM 배지를 이용하여 1.5×105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 18시간 전 배양 하였다. 이후 배지를 제거하고 10배 농도 (1 mg/㎖)로 조제된 실시예의 추출물 시료 50 μL와 450 μL의 LPS (1 ㎍/㎖)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 전배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24시간 후 PGE2를 측정하기 위해 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 min)하여 상층액을 얻었다. PGE2의 측정은 PGE2 ELISA kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard 에 대한 표준곡선의 r2 값은 0.99 이상이었다.
결과를 [도 6]에 나타내었는데, 개민들레 추출물이 농도 의존적으로 PGE2의 생성을 억제함을 알 수 있다(* P<0.05; ** P<0.01).
[도 6]에서 2-amino-4-methylpyridine(처리농도는 20μM임)과 NS-398(selective COX-2 inhibitor)(처리 농도는 20μM임)은 양성 대조군이다.
통계처리
실험결과는 3번 이상의 독립적인 실험의 데이터를 mean ± standard error 값으로 나타내었다. 실험군 사이의 통계적 유의성 검정은 student's t-test 분석방법을 사용하였다(* P<0.05, ** P<0.01).
Claims (7)
- 개민들레 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증성 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 그 추출 대상인 개민들레를 물, 증류수, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하고 추출 용매를 제거하여 고형상의 추출물을 얻고 그 고형상의 추출물을 물층과 에틸아세테이트층으로 분획한 후 얻어지는 에틸아세테이트층 분획물인 것을 특징으로 하는 항염증성 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 항염증은 염증성 질환의 개선, 치료, 발병 억제 또는 발병 지연을 의미하며,
상기 염증성 질환은 천식, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두퐁, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염, 아토피성 피부염, 습진 및 다발성 경화증 중 하나인 것을 특징으로 하는 항염증제 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 항염증제 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 항염증제 조성물.
- 개민들레 추출물을 유효성분으로 iNOS 억제제 약제학적 조성물.
- 개민들레 추출물을 유효성분으로 COX-2 억제제 약제학적 조성물.
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| KR1020100057036A KR20110137047A (ko) | 2010-06-16 | 2010-06-16 | 개민들레 추출물을 이용한 항염증성 조성물 |
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| Publication Number | Publication Date |
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| KR20110137047A true KR20110137047A (ko) | 2011-12-22 |
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ID=45503474
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| KR1020100057036A KR20110137047A (ko) | 2010-06-16 | 2010-06-16 | 개민들레 추출물을 이용한 항염증성 조성물 |
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| KR (1) | KR20110137047A (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102697892A (zh) * | 2012-05-02 | 2012-10-03 | 蒋正霞 | 一种治疗类风湿性关节炎的药物 |
| KR101376202B1 (ko) * | 2012-05-15 | 2014-03-26 | 한국원자력연구원 | 민들레 및 보리 혼합 추출물을 함유하는 피부 질환의 예방, 또는 치료용 약학적 조성물 |
-
2010
- 2010-06-16 KR KR1020100057036A patent/KR20110137047A/ko active Application Filing
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| KR101376202B1 (ko) * | 2012-05-15 | 2014-03-26 | 한국원자력연구원 | 민들레 및 보리 혼합 추출물을 함유하는 피부 질환의 예방, 또는 치료용 약학적 조성물 |
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