KR101490512B1 - 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물 - Google Patents
감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물을 개시한다. 구체적으로 LPS로 자극된 대식세포에서 NO, PGE2, 염증성 사이토카인 등의 생성 억제 활성을 가지고, hIFN-γ, TNF-α로 처리된 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC 생성 억제 활성을 가지는 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물을 개시한다.
Description
본 발명은 감(Diospyros kaki) 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물에 관한 것이다.
염증은 외부의 물리·화학적 자극, 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 생체의 방어 반응이다.
염증 반응은 선천성 면역 반응의 일부이며, 다른 동물에서처럼 인간의 선천성 면역 반응은 대식세포가 병원체에 특이적으로 존재하는 세포 표면의 패턴을 통해 비자기(non-self)로 인식하고 공격함으로써 시작된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다.
이러한 염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하는데, 특히 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)와 다양한 프로스타글란딘(prostaglandins)의 생합성과 관련되는 사이클로옥시제나제(cyclooxygenase, COX)가 염증 반응의 중요한 매개체로 알려져 있다.
NOS는 세 가지 이성질체가 존재하는데, 칼슘이나 카모듈린 의존성인 eNOS(내피성 NOS)와 nNOS(신경성 NOS), 그리고 LPS(lipopolysaccharide)와 같은 세균의 내독소나 IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-12과 같은 여러 염증성 사이토카인에 의해 유도되는 iNOS(유도성 NOS)가 있으며, L-아르기닌(L-arginine)으로부터 산화질소(NO)를 생성한다.
eNOS나 nNOS에 의해 생성되는 NO는 혈압 조절 작용, 신경 전달 작용, 학습, 기억 등과 관련된 다양한 생리 반응을 수행함으로써 인체의 항상성 유지에 중요한 역할을 하지만, iNOS에 의해 생성되는 NO는 관절염, 패혈증, 조직이식거부반응, 자가면역질환, 신경세포의 사멸 등 다양한 염증성 질환에 관여하는 것으로 알려져 있다(Moncade S. et al, Pharmacol. Rev., 1991, 43, 109; Nature Medicine, 2001, 7, 1138; Mu, M. M., J. Endotoxic Res. 7, p341, 2001).
COX 효소는 COX의 기능과 함께 하이드로퍼옥시다제(hydroperoxidase, HOX) 활성을 가지고 아라키돈산으로부터 중간체인 PGG2와 PGH2를 합성하며, 이들 화합물로 PGE2, PGF2, PGD2, 프로스타시클린 및 트롬복신A2(thromboxane A2, TxA2)를 만든다. COX의 기능 중 PGH 합성효소의 기능은 PGE2의 합성을 통해 통증과 염증 반응에 관여한다.
COX에는 두 가지 아형이 있고 COX-1은 대부분의 조직에 항시 발현되는데 비해, COX-2는 염증성 사이토카인에 의해 신속히 발현이 유도되어 염증 반응에서 중요한 역할을 한다.
따라서 NO, PGE2, 염증성 사이토카인 등의 생성 억제제는 염증질환 치료제로서 활용될 수 있다.
한편 아토피는 라틴어 'atopia'에서 유래한 말로서 '괴상한' 또는 "부적절한"의 의미를 가지고 있다.
아토피성 피부염의 원인은 아직까지 명확히 규명되어 있지 않지만, IgE 생성의 증가, CD8+ 억제/세포독성 T 림프구 (CD8+ suppressor/cytotoxic T lymphocytes) 수적 감소와 기능 저하, IFN-γ를 분비하는 Th1(T-cell Helper type 1) 림프구의 수적 감소, 단핵구/대식세포의 침윤, 비만세포, 호산구, 수지상세포(dendritic cells; DCs), 표피의 랑게르한스 세포 및 CD4+ T 림프구의 수적 증가, Th1 세포에 비해 Th2 세포의 수적 증가, 사이토카인(IL-10, IL-4, IL-5, TNF-α 등)의 생성 증가, 케모카인(TSLP, RANTES, CTACK, LARC, MDC, TARC 등)의 생성 증가 등의 면역학적 현상들이 보고되고 있고[J. Invest. Dermatol., 96:523-526, 1991; J. Invest Dermatol., 97:389-394, 1991; Immunol., 11:81-88, 1999; Curr Drug Targets Inflamm Allergy., 2:199-120, 2003; J. Allergy Clin Immunol., 107:871-877, 2001; Adv. Immunol. 78:57, 2001; International Immunology, 14(7):767-773, 2002; Pediatr Allergy Immunol 19: 605-613, 2008], 통상 아토피성 피부염을 앓고 있는 사람이 집 먼지, 진드기, 동물의 털, 음식물, 꽃가루, 곰팡이 등과 같이 외부환경의 이물질에 대해 알러지 반응을 나타내는 점과 또 아토피성 피부염이 알러지성 비염, 천식, 결막염, 장관염 등을 동반한다는 점에서 면역 체계의 교란에 의하여 발생하는 것으로 추정되고 있다.
아토피성 피부염 활성 물질의 스크리닝을 위하여 비만세포를 이용한 탈과립 억제 활성 실험, 각질형성세포에서의 MDC(macrophage-derived chemokine)와 TARC(thymusand activation-regulated chemokine)의 발현 수준의 측정 실험 등이 이용되고 있는데, 상기 MDC와 TARC는 아토피성 피부염 환자에서 그 혈청 농도가 현저히 증가한다고 보고된 케모카인으로서(Hijnen et. al., J. Allergy Clin. Immunol. 113(2) 334-340), 아토피성 피부염의 치료 물질로 사용되는 사이크로스포린 A나 코르티코스테로이드를 아토피성 피부염 환자에게 투여하였을 때는 MDC 및 TARC의 혈청 농도가 감소한다는 보고가 있으며(Y. Shimada et al., J. Dermatol. Sci., 34, 201-208, 2004), 또 사람 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 hIFN-γ, TNF-α를 처리하였을 때 MDC 및 TARC가 다량 발현되는데 이러한 발현을 억제할 수 있는 물질은 아토피성 피부염 치료제로 사용될 수 있음이 제시된 바 있다(Horikawa et. al., Int. Immunol., 14(7) 767-773, 2002).
본 발명은 LPS로 자극된 대식세포에서 NO, PGE2, 염증성 사이토카인 등의 생성 억제 활성을 가지고, hIFN-γ, TNF-α가 처리된 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC 생성 억제 활성을 가지는 감 미숙과 추출물을 개시한다.
본 발명의 목적은 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물과 아토피성 피부염 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 기타의 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 감 미숙과의 압착 추출액과 그것의 1년, 3년 숙성물을 제조하고 그것의 항염증 활성을 LPS로 자극된 대식세포에서 NO, PGE2, 염증성 사이토카인 등의 생성 억제 활성을 통하여 확인한 결과 감 미숙과의 압착 추출액, 그것의 1년, 3년 숙성물 순으로 항염증 활성이 높아짐을 확인하였다.
본 발명자들은 또한 감 미숙과를 실온, 60℃ 및 100℃ 조건에서 증류수로 추출하는 한편 또 30%와 70% 에탄올로 추출하여 각 추출 조건별 추출물을 제조하고 이들 추출물의 아토피성 피부염 개선 활성을 hIFN-γ, TNF-α로 처리된 HaCaT 세포에 처리하여 MDC 및 TARC 생성 억제 활성을 통하여 확인한 결과 100℃ 추출물과 30% 에탄올 추출물이 특별히 높은 활성을 보임을 확인하였으며, 이러한 세포실험 결과에 기초하여 실온 추출물, 100℃ 추출물 그리고 30% 에탄올 추출물이 각각 함유된 3종의 영양로션을 이용하여 8주간의 임상시험을 실시하였는데, 세포실험에서 활성이 높은 것으로 확인된 100℃ 추출물과 30% 에탄올 추출물이 실온 추출물에 비하여 뚜렷하게 높은 아토피성 피부염 개선 활성을 보임을 확인하였다.
전술한 바의 실험 결과를 고려할 때, 본 발명의 항염증성 조성물은 감 미숙과 추출물, 특히 감 미숙과 압착 추출액(감 미숙과를 물리적 외력으로 압착하여 얻어진 추출액)의 숙성물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물로 파악할 수 있으며, 다른 측면에 있어서는 감 미숙과 100℃의 열수 추출물 또는 감 미숙과의 30% 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 개선용 조성물로 파악할 수 있다. 여기서 "%"는 부피 백분율에 의한 농도(v/v) 표현으로서, 당업계에 알려진 바와 같이 일정 부피의 용액 중에 녹아 있는 일정 부피의 용질을 의미한다. 예컨대 30%(v/v) 에탄올은 물 100㎖에 에탄올 30㎖가 용해되어 있다는 것이 된다.
본 명세서에서, "감 미숙과"란 수확기 이전의 감(과실)을 의미하며, 보다 구체적으로 그 표면이 완전히 녹색인 상태의 감을 의미한다.
또 본 명세서에서, "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "항염증"은 아래에서 정의되는 염증성 질환의 개선, 치료, 그러한 질환의 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.
또 본 명세서에서, "염증성 질환"이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대해 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 염증 반응을 수반하는 질환으로서 정의될 있다. 이러한 염증 반응을 수반하는 질환은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(예컨대 iNOS, COX-2 등) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(예컨대, NO, TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE2의 분비), 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로 상기 염증성 질환에는 천식, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두퐁, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염, 습진, 다발성 경화증 등이 포함될 것이다.
또 본 명세서에서, "아토피성 피부염"은 그 발생의 직·간접적인 원인을 불문하고 당업계에서 아토피성 피부염으로 분류되는 모든 질환을 포함하는 것으로 정의된다. 통상 아토피성 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발명 대상에 따라 유아형 아토피성 피부염, 소아형 아토피성 피부염, 성인형 아토피성 피부염 그리고 임산부 아토피성 피부염으로 분류되는데, 본 명세서에서 아토피성 피부염은 이러한 모든 유형의 아토피성 피부염을 포함한다.
본 발명의 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물(이하 "본 발명의 조성물")은 그 유효성분인 감 미숙과 추출물 등을 항염증 활성, 아토피성 피부염 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.900 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 염증성 질환이나 아토피성 피부염의 예방, 개선, 치료, 또는 그 증상의 발현 지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 화장품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장품 조성물로서 파악될 경우, 그 화장품 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩 또는 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물은 그 유효성분 이외에 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다.
여기서 "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 독성 이상의 독성이 없는 것을 말한다.
상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다.
그러나 상기 비율은 화장품의 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다.
상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어 비누 조성물로서 파악될 수 있다.
본 발명의 조성물이 비누 조성물로서 파악될 경우에, 본 발명의 비누 조성물은 비누 기재에 유효성분을 포함하여 제조될 수 있으며, 첨가제로서 피부 보습제, 유화제, 경수 연화제 등을 포함하여 제조될 수 있다.
상기 비누 기재로서는 야자유, 팜유, 대두유, 파마자유, 올리브유, 팜핵류 등의 식물유지 또는 우지, 돈지, 양지, 어유 등의 동물유지 등이 사용될 수 있고, 상기 피부 보습제로서는 글리세린, 에리트리톨, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 헥실글리콜, 이소프로필미리스테이트, 실리콘 유도체, 알로에베라, 솔비톨 등이 사용될 수 있으며, 상기 유화제로서는 천연오일, 왁스 지방알콜, 탄화수소류, 천연식물 추출물 등이 사용될 수 있고, 상기 경수연화제로서는 테트라소듐 이디티에이 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 비누 조성물은 또한 첨가제로서 항균제, 분산제, 거품억제제, 용매, 물때 방지제, 부식 방지제, 향료, 색소, 금속이온 봉쇄제, 산화방지제, 방부제 등을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 비누 조성물에 있어서, 비누 기재나 첨가제는 당업계에 일반적으로 사용되고 있는 함량으로 포함될 수 있는데, 비누 기재는 일반적으로 비누 조성물의 전체 중량을 기준으로 하였을 때 99.999 중량 % 내지 50 중량 %로 첨가될 수 있으며, 첨가제는 1 중량 % 내지 20 중량 %로 첨가될 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(크림, 로션, 연고(반고형의 외용약), 마이크로로에멀젼, 젤, 페이스트, 경피제제(TTS)(예컨대 패치제, 붕대 등) 등으로 제조될 수 있다.
상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.
부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 바람직하게는 국소적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니된다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 기능성 음료 등의 식품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.
미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.
한편 본 발명은 또 다른 측면에 있어서, 특히 감 미숙과 압착 추출액의 숙성물을 유효성분으로 포함하는 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대한 항미생물용 조성물에 관한 것이다.
아래의 실험예에서 사용된 스타필로코쿠스 아우레우스는 피부 상재균으로서 평상시에는 의학적으로 특별히 문제되지 않으나 면역력이 떨어진 환자들에 대해서는 패혈증, 종기, 여드름 등을 일으키는 것으로 알려져 있는 미생물이다. 본 발명자들은 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물의 스타필로코쿠스 아우레우스에 대한 항미생물 활성을 최소세균사멸농도를 통하여 확인하였는데, 감 미숙과 압착 추출액의 경우는 최소세균사멸농도가 측정되지 않았으나 그 숙성물의 경우는 2mg/mL의 최소세균사멸농도를 나타내었다.
본 발명의 항미생물용 조성물은 그 유효성분인 감 미숙과 추출물을 그것이 항미생물 활성을 나타내는 한 임의의 양으로 본 발명의 항미생물용 조성물에 포함될 수 있는데, 통상은 그 조성물 전체 중량을 기준으로 하였을 때 0.1 ~ 50 중량 % 이상, 바람직하게는 3 ~ 10 중량% 범위로 포함될 것이다.
본 발명의 항미생물용 조성물은 유효성분인 감 미숙과 추출물의 항미생물 활성을 저해하지 않는 한, 그 유효성분인 이외에도 분산제와 담체 등을 포함하여 제조될 수 있다.
그러한 분산제로서 물, 알코올(예: 메틸 알코올, 에틸 알코올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 글리세린 등), 케톤(예: 아세톤, 메틸 에틸 케톤 등), 에테르(예: 디옥산, 테트라하이드로푸란, 셀로솔브, 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 등), 지방족 탄화수소(예: 헥산, 케로센 등), 방향족 탄화수소(예:벤젠, 톨루엔, 크실렌, 나프탈렌, 메틸 나프탈렌 등), 할로겐화 탄화수소(예: 클로로포름, 카본 테트라클로라이드 등), 산 아미드(예: 디메틸 포름아디드 등), 에스테르(예: 메틸 아세테이트 에스테르, 에틸 아세테이트 에스테르, 부틸 아세테이트 에스테르, 지방산 글리세린 에스테르 등), 니트롤(예: 아세토니트릴 등), 계면 활성제(고급 알코올 설페이트 에스테르, 알킬 설폰산, 알킬 알릴 설폰산, 4급 암모늄 염, 옥시 알킬 아민, 지방산 에스테르, 폴리알킬렌 옥시드 화합물, 안하이드로 소르비톨 화합물) 등을 들 수 있는데, 상기 분산제는 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로 본 발명의 항미생물 조성물에 포함되어 제조될 수 있다.
담체의 경우로서는 점토(예: 카올린, 벤토나이트, 산 점토 등), 활석(예: 활석 분말, 납석 분말 등), 실리카(예: 규조토, 규산 무수물, 운모 분말 등), 알루미나, 활성탄 등이 예시될 수 있으며, 이들 담체도 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로서 본 발명의 항미생물용 조성물에 포함되어 제조될 수 있다.
한편 본 발명의 항미생물용 조성물은 액체상, 고체상 및 기체상 중 임의의 상으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 항미생물용 조성물은 경구, 비경구 등 임의의 방식으로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 국소 투여 방식으로 투여될 수 있다. 경구 투여 방식의 제형은 정제, 환제, 분제, 액제, 식품 형태 등을 들 수 있으며, 비경구 방식의 제형은 주사제, 국소 투여제(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치), 좌약, 살포제(식물에 적용하는 경우) 등을 들 수 있다. 특히 국소 투여 방식의 제형은 본 발명의 항미생물용 조성물을 천연 섬유나 합성 섬유로 된 담체에 함침시킨 것, 화장품이나 비누 등에 함유시킨 것 등을 포함한다.
본 발명의 항미생물용 조성물은 화장품, 식품, 약품 등의 제품으로 제조될 수 있으며, 이들 제품의 제조에 첨가되어 사용될 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물과 아토피성 피부염 개선용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 화장품, 약품, 식품 등으로 제품화되어 이용될 수 있다.
도 1은 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물의 NO 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 2 내지 4는 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물의 염증성 사이토카인의 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 5는 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물의 PGE2 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 6은 감 미숙과의 실온, 60℃, 100℃ 물 추출물과 감 미숙과 30%, 70% 에탄올 추출물의 TARC와 MDC 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 7 및 도 8은 각각 감 미숙과 압착 추출액의 1년 및 3년 숙성물의 최소세균사멸농도를 보여주는 배양 사진이다.
도 2 내지 4는 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물의 염증성 사이토카인의 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 5는 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물의 PGE2 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 6은 감 미숙과의 실온, 60℃, 100℃ 물 추출물과 감 미숙과 30%, 70% 에탄올 추출물의 TARC와 MDC 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 7 및 도 8은 각각 감 미숙과 압착 추출액의 1년 및 3년 숙성물의 최소세균사멸농도를 보여주는 배양 사진이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
>
감 미숙과 추출물 또는 그 숙성물의 제조
<실시예 1> 감 미숙과 추출물의 제조
제주에서 재배되는 감 미숙과를 6월경에 구입하여 본 실험의 재료로 사용하였다. 감 미숙과를 동결건조시킨 후 미세말로 갈아서 증류수를 이용하여 실온, 60℃, 100℃에서 2시간 이상 추출하고 또 에탄올을 이용하여 30%와 70% 에탄올로 2시간 이상 추출하였다. 얻어진 각 추출액은 감압 농축기를 이용하여 농축 후 동결건조기를 이용하여 수분을 완전히 제거한 후 아래의 실험에 사용하였다.
<실시예 2> 감 미숙과 압착 추출액과 그 숙성물 제조
감 미숙과 세절물을 압착하여 추출하고 그 추출액을 여과하여 액상의 감 미숙과 압착 추출액을 제조하였다. 숙성물은 그 액상의 미숙과 추출물을 실온에서 각각 12월 및 36개월 동안 숙성하여(그대로 방치하여) 제조하였다.
<
실험예
>
감 추출물 또는 그
숙성물의
항염 활성, 아토피성 피부염 개선 활성 및 항균 활성 실험
<
실험예
1>
항염 활성 실험
<실험예 1-1> NO ( Nitric oxide ) 생성 억제 평가
RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 1.5×105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 실시예의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양은 Griess 시약 [1% (w/v) sulfanilamide, 0.1% (w/v) naphylethylenediamine in 2.5% (v/v) phosphoric acid]을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 세포배양 상등액 100 ㎕와 Griess 시약 100 ㎕를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 생성된 NO의 양은 sodium nitrite (NaNO2)를 standard로 비교하였다.
본 실험에서는 상기 <실시예 2>의 압착 추출액과 그것의 숙성물을 시료로 사용하였으며, 결과를 [도 1]에 나타내었다.
[도 1]를 참조하여 보면, 압착 추출액과 비하여 숙성물 시료가 NO 생성 억제 활성이 높음을 알 수 있으며, 1년 숙성물보다 3년 숙성물의 활성이 더 높음을 알 수 있다.
<실험예 1-2> 염증성 사이토카인( TNF -α, IL -1β 및 IL -6)의 생성 억제 활성 평가
RAW 264.7 세포 (1.5×105 cells/㎖)를 DMEM 배지를 이용하여 24 well plate 에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 18 시간 전 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 실시예의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시에 처리하여 전 배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24 시간 후 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 분)하여 얻어진 상층액의 염증성 사이토카인의 생성 함량을 측정하였다. 염증성 사이토카인은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard 에 대한 표준곡선의 r2 값은 0.99 이상이었다.
본 실험에서도 상기 <실시예 2>의 압착 추출액과 그것의 숙성물을 시료로 사용하였으며, <실시예 2>의 압착 추출액과 그것의 숙성물의 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성 억제 활성을 각각 [도 2] 내지 [도 4]에 나타내었다.
[도 2] 내지 [도 4]를 참조하여 보면, 상기 [도 1]의 NO 생성 억제 활성과 유사한 경향을 보이면서, 압착 추출액, 그것의 1년 숙성물 및 그것의 3년 숙성물 순으로 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성 억제 활성이 높음을 알 수 있다.
<실험예 1-3> PGE 2 생성 억제 활성 평가
RAW 264.7 세포를 DMEM 배지를 이용하여 1.5×105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 18시간 전 배양 하였다. 이후 배지를 제거하고 실시예의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시에 처리하여 전배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24시간 후 PGE2를 측정하기 위해 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 min)하여 상층액을 얻었다. PGE2의 측정은 PGE2 ELISA kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard 에 대한 표준곡선의 r2 값은 0.99 이상이었다.
본 실험에서도 상기 <실시예 2>의 압착 추출액과 그것의 숙성물을 시료로 사용하였으며, 결과를 [도 5]에 나타내었는데, 마찬가지로 압착 추출액, 그것의 1년 숙성물 및 그것의 3년 숙성물 순으로 활성이 높게 나타났다.
<실험예 1-4> 세포독성 평가 ( LDH assay )
RAW 264.7 세포 (1.5×105 cells/㎖)를 DMEM 배지에 실시예의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양 한 후 배양 배지를 얻어 3,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. LDH (lactate dehydrogenase) assay는 non-radioactive cytotoxicity assay kit (Promega)를 이용하여 측정했으며, 96 well plate에 원심 분리하여 얻은 배양 배지 50 ㎕와 reconstituted substrate mix를 50 ㎕를 넣고, 실온에서 30분 반응시킨 후 50 ㎕의 stop solution을 넣은 후 microplate reader (Bio-TEK Instruments Inc., Vermont, WI, USA)를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군 (LDH control, 1:5000)의 흡광도 값과 비교하여 세포독성을 평가하였다.
본 실험에서도 상기 <실시예 2>의 압착 추출액과 그것의 숙성물을 시료로 사용하였으며, 결과를 [도 1]에 함께 나타내었는데, [도 1]를 참조하여 보면 실시예의 시료는 특별한 세포독성을 보이지 않음을 보여주며, 이는 앞서 염증 관련 인자의 생성 억제 활성이 세포독성에 의한 결과가 아님을 알 수 있다.
<
실험예
2>
아토피성 피부염 개선 활성 실험
<실험예 2-1> 아토피성 피부염 유발 인자인 TARC 와 MDC 생성 억제 활성 평가
HaCaT 세포(3.0×105cells/mL)를 DMEM 배지를 이용하여 세포수를 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 18시간 전 배양 하였다. 이후 배지를 제거하고 HaCaT 세포는 실시예의 추출물 시료 50 ㎕와 450 ㎕의 TNF-α+IFN-γ(10 ng/mL)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하였고 전배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24 시간 후 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 분)하여 얻어진 상층액의 아토피 유발 인자 생성 함량을 측정하였다. TARC와 MDC의 정량은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard에 대한 표준곡선의 r2값은 0.99 이상이었다.
본 실험에서는 <실시예 1>의 각 조건별 추출물만을 시료로 사용하였다.
결과를 [도 6]에 나타내었다. [도 6]을 참조하여 보면 감 미숙과 100℃ 추출물 및 30% 에탄올 추출물의 활성이 특별히 높음을 보여준다.
한편 상기 <실시예 1>의 각 조건별 추출물 시료의 세포독성에 대한 실험을 상기 <실험예 1-4>와 동일한 방법으로 수행하고 그 결과를 [도 6]에 함께 나타내었는데, 특별한 세포독성을 보이지 않았다. 이는 아토피성 피부염 유발 인자인 TARC와 MDC 생성 억제 활성이 세포독성에 의한 결과가 아님을 말해준다고 할 수 있다.
<실험예 2-2> 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 임상시험
아토피성 피부염 개선에 대한 임상실험을 위하여 아래의 [표 1]의 성분 및 함량으로 영양 로션을 제조하였다.
| 성분 | 함량 (중량%) |
| <실시예 1>의 상온, 100℃ 추출물 또는 30% 에탄올 추출물 | 2.0 |
| 스테아린산 | 2.0 |
| 세틸알콜 | 2.0 |
| 글리세릴모노스테아레이트 | 2.0 |
| 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트 | 0.5 |
| 솔비탄세스퀴올레이트 | 0.5 |
| 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트 | 1.0 |
| 왁스 | 1.0 |
| 유동파라핀 | 4.0 |
| 스쿠알란 | 4.0 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 4.0 |
| 카르복시비닐폴리머 | 0.3 |
| 부틸렌글리콜 | 5.0 |
| 글리세린 | 3.0 |
| 트리에탄올아민 | 0.5 |
| 정제수 | 잔량 |
아토피성 피부염 개선 활성은 5세 이상 아토피성 피부염 증상을 갖고 있는 남녀 60명을 대상으로 3 그룹으로 나눈 다음, 각 그룹에 상기 실시예의 추출물이 함유된 각 영양로션을 하루 2~3회 8주간 도포하게 하였다.
시험 시작 전 및 8주가 지난 후에 SCORAD 지수(The European Task Force on Atopic Dermatitis가 개발한 아토피 중증도 평가 지수로 아토피 증상이 심할수록 높은 수치로 나타남)을 측정하였다.
결과를 평균 ± 표준편차로로 아래의 [표 2]에 나타내었다.
| 구분 | 0 주차 | 8주차 |
| <실시예 1>의 상온 추출물 함유 영양로션 | 33.5±4.7 | 28.4±5.2 |
| <실시예 1>의 100℃ 추출물 함유 영양로션 | 31.2±6.4 | 20.5±6.2* |
| <실시예 1>의 30% 에탄올 추출물 함유 영양 로션 | 35.6±7.8 | 21.4±4.6* |
| * p<0.05 | ||
상기 [표 2]의 결과는 <실시예 1>의 상온 추출물 함유 영양로션의 경우 유의차를 보이지 않았지만, <실시예 1>의 100℃ 추출물 및 30% 에탄올 추출물의 경우는 유의차를 보였음을 보여주며 또한 SCORAD 지수의 평균값도 뚜렷하게 낮아졌음을 보여준다.
통계 처리
상기 임상실험의 결과 정리 및 분석을 위하여 Excel program과 통계 소프트웨어인 SPSS Window. version 10.1을 사용하였으며, 통계의 유의성을 위하여 유의 수준 0.05를 설정하였고, 분석을 위하여 이용되는 통계적 방법은 독립표본 T-검정, 대응 표본 T-검정 해석방법으로 분석하였다.
<
실시예
3>
항균 활성 실험
-
최소세균사멸농도(
Minimal
bactericidal
concentration,
MBC
)의 측정
본 실험에 사용한 균주는 피부에서 흔히 검출되는 균주인 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus KCTC 1927)를 사용하였고, 배지는 Trypticase soy agar/broth(TSA)(Difco 사, USA)를 사용하였으며, 37℃에서 배양하였다.
최소세균사멸농도의 측정은 농도별로 실시예의 시료가 함유된 고체배지에 해당 균주의 배양액 100㎕씩 직접 도말하였고 그 균주를 배양한 후 plate 상에서 육안으로 관찰되는 colony 수를 직접 계수하였다. 이때 확인되어지는 colony 수가 배양액으로부터 접종한 초기 접종균수의 99.9%를 사멸시키는 효과를 나타내는 것으로 확인 되어진 경우 이때의 처리농도를 최소세균사멸농도(MBC)로 정하였다(Cohen MA, Huband MD, Yoder SL, Gage JW, Roland GE., 1998, Bacterial eradication by clinafloxacin, CI-990, and ciprofloxacin employing MBC test, in-vitro time-kill and in-vivo time-kill studies. J Antimicrob Chemother . 41(6): 605-14).
본 실험에서도 상기 <실시예 2>의 압착 추출액과 그것의 숙성물을 시료로 사용하였으며, 결과를 아래의 [표 3]에 나타내었다.
| 균주 | 압착 추출액 | 1년 숙성 | 3년 숙성 |
| S. aureus | - | 2 | 2 |
상기 [표 3]의 결과는 압착 추출액 시료의 경우는 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해 MBC가 측정되지 않았으나 숙성물 시료의 경우는 모두 2 mg/mL의 최소사멸농도를 나타내었음을 보여준다.
[도 7] 및 [도 8]에 각각 1년 숙성물 및 3년 숙성물의 농도별 미생물 배양 사진을 나타내었다.
Claims (4)
- 감 미숙과의 30% 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 개선용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
Priority Applications (1)
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| KR20140021196A KR101490512B1 (ko) | 2014-02-24 | 2014-02-24 | 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| KR20140021196A KR101490512B1 (ko) | 2014-02-24 | 2014-02-24 | 감 미숙과 추출물을 이용한 항염증용 조성물 및 아토피성 피부염 개선용 조성물 |
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-
2014
- 2014-02-24 KR KR20140021196A patent/KR101490512B1/ko not_active IP Right Cessation
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|---|
| 우상욱. 경북대학교 일반대학원 석사학위논문. "T-bet promoter assay와 아토피 유발 동물 모델을 이용한 감 추출물의 염증질환 억제 효과" (2008년) * |
| 우상욱. 경북대학교 일반대학원 석사학위논문. "T-bet promoter assay와 아토피 유발 동물 모델을 이용한 감 추출물의 염증질환 억제 효과" (2008년)* |
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