KR20160111126A

KR20160111126A - 감 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물

Info

Publication number: KR20160111126A
Application number: KR1020150035872A
Authority: KR
Inventors: 조순애; 김두경
Original assignee: 농업회사법인주식회사갈중이
Priority date: 2015-03-16
Filing date: 2015-03-16
Publication date: 2016-09-26
Also published as: KR101999374B1

Abstract

본 발명은 감 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물을 개시한다. 구체적으로 본 발명은 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris), 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 및 사카로마이세스 세레비시애(Saccaromyces cerevisiae)로 발효시켜 얻어진 감 발효물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 개선용 조성물을 개시한다.

Description

감 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물{Composition for Improving Atopic Dermatitis Using Fermented Products of Fruit of Diospyros kaki}

본 발명은 감(Diospyros kaki) 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 감을 유용미생물인 젖산균, 광합성세균 및 효모로 발효시켜 얻은 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물에 관한 것이다.

아토피는 '괴상한' 또는 "부적절한"의 의미를 가지는 라틴어 'atopia'에서 유래한 말인데, 아토피(atopy)성 피부염은 심한 가려움증, 만성 피부 발진이 특징인 질환으로, 영유아기 습진의 가장 흔한 형태이다.

아토피성 피부염의 원인은 아직까지 명확히 규명되어 있지 않지만, IgE 생성의 증가, CD8+ 억제/세포독성 T 림프구 (CD8+ suppressor/cytotoxic T lymphocytes) 수적 감소와 기능 저하, 단핵구/대식세포의 침윤, 비만세포, 호산구, 수지상세포(dendritic cells; DCs), 표피의 랑게르한스 세포 및 CD4+ T 림프구의 수적 증가, 케모카인(TSLP, RANTES, CTACK, LARC, MDC, TARC 등)의 생성 증가 등의 면역학적 현상들이 보고되어 있다(J. Invest. Dermatol., 96:523-526, 1991; J. Invest Dermatol., 97:389-394, 1991; Immunol., 11:81-88, 1999; Curr Drug Targets Inflamm Allergy., 2:199-120, 2003; J. Allergy Clin Immunol., 107:871-877, 2001; Adv. Immunol. 78:57, 2001; International Immunology, 14(7):767-773, 2002; Pediatr Allergy Immunol 19: 605-613, 2008).

특히 아토피성 피부염 환자에서 케모카인인 MDC(macrophage-derived chemokine)와 TARC(thymusand activation-regulated chemokine)의 혈청 농도가 현저히 증가한다는 보고가 있고(Hijnen et. al., J. Allergy Clin. Immunol. 113(2) 334-340), 아토피성 피부염의 치료 물질로 사용되는 사이크로스포린 A나 코르티코스테로이드를 아토피성 피부염 환자에게 투여하였을 때는 MDC 및 TARC의 혈청 농도가 감소한다는 보고가 있으며(Y. Shimada et al., J. Dermatol. Sci., 34, 201-208, 2004), 또 시험관내 실험에서 HaCaT 세포에 INF-γ나 TNF-α를 처리하였을 때 MDC 및 TARC가 다량 발현되는데 이러한 발현을 억제할 수 있는 물질은 아토피성 피부염 치료제로 사용될 수 있음이 제시된 바 있다(Horikawa et. al., Int. Immunol., 14(7) 767-773, 2002).

따라서 MDC나 TARC의 발현을 억제하는 물질 등은 아토피성 피부염 개선제로 활용될 수 있다.

본 발명은 INF-γ와 TNF-α로 자극된 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC의 발현을 억제하며, 실제 임상 평가에서도 아토피성 피부염 개선 활성을 가지는 감의 유용미생물에 의한 발효물을 개시한다.

본 발명의 목적은 감의 유용미생물 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명자들은 감(과실)을 유용미생물인 젖산균, 광합성세균 및 효모로 발효시켜 얻은 발효물의 아토피성 피부염 개선 활성을 hIFN-γ, TNF-α로 처리된 HaCaT 세포에 처리하여 MDC 및 TARC 생성 억제 활성을 통하여 확인한 결과, 감의 70% 에탄올 추출물과 유용미생물 자체 발효물에 비해 뚜렷하게 높은 활성을 보임을 확인하였으며, 이러한 세포실험 결과에 기초하여 감 70% 에탄올 추출물, 감의 유용미생물 발효물 그리고 유용미생물 자체의 발효물이 각각 함유된 3종의 영양로션을 이용하여 8주간의 임상시험을 실시하였을 때도, 세포실험에서 활성이 높은 것으로 확인된 감의 유용미생물 발효물이 감 70% 에탄올 추출물이나 유용미생물 자체의 발효물에 비해서 뚜렷하게 높은 아토피성 피부염 개선 활성을 보임을 확인하였다.

본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 아토피성 피부염 개선용 조성물은 감 과실의 젖산균, 광합성세균 및 효모 발효물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, 상기 "유효성분"의 의미는 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "아토피성 피부염"은 그 발생의 직·간접적인 원인을 불문하고 당업계에서 아토피성 피부염으로 분류되는 모든 질환을 포함하는 것으로 정의된다. 통상 아토피성 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발명 대상에 따라 유아형 아토피성 피부염, 소아형 아토피성 피부염, 성인형 아토피성 피부염 그리고 임산부 아토피성 피부염으로 분류되는데, 본 명세서에서 아토피성 피부염은 이러한 모든 유형의 아토피성 피부염을 포함한다.

또 본 명세서에서 "발효물"은 그 발효 대상인 감 과실에 탄소원을 첨가하고 젖산균, 광합성세균 및 효모 접종·배양하여 얻어진 배양물을 의미한다. 이 배양물은 그대로 이용되거나, 감압농축 및/또는 동결건조시켜 액상 또는 분말상으로 이용되거나, 메탄올, 에탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 물, 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 이용될 수 있다. 또한 메탄올, 에탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 물, 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 이용할 수도 있다. 이러한 추출물은 추출 용매가 일부 또는 전부 제거된 액상 또는 분말상일 수 있다.

상기에서 접종되는 미생물의 탄소원은 당업계에 잘 알려져 있고, 따라서 당업계에 알려진 임의의 것을 사용할 수 있는데, 통상은 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕, 당밀, 덱스트로스, 이들의 혼합물 등이 사용될 것이다. 이러한 탄소원은 의도한 발효 시간, 발효 정도 등을 고려하여 임의의 범위로 첨가될 수 있다. 통상 발효 대상인 감 100 중량부 기준 1 중량부 내지 70 중량부의 범위로 첨가될 것이다.

또 상기에서 미생물의 접종 후의 배양은 5℃~45℃의 온도 조건 특히 25℃~40℃의 온도 조건에서 이루어질 수 있다. 배양 온도가 상기 범위보다 낮을 경우 발효 속도가 느려질 수 있고 또한 원하지 않는 발효 산물이 생겨날 수 있으며, 배양 온도가 상기 범위보다 높을 경우도 발효 미생물의 사멸에 따라 마찬가지로 발효 속도가 느려지거나 원하지 발효 산물이 생겨날 수 있다. 배양 시간의 경우는 접종된 미생물의 생장이 최대에 이를 때까지 지속되는 것이 바람직하다. 접종된 미생물이 생장이 최대에 이르는 시점은 배양 온도, 발효 원료의 양, 접종되는 미생물의 양 등에 따라 결정될 것이다.

본 발명의 아토피성 피부염 개선용 조성물은 그 유효성분인 감 발효물을 아토피성 피부염 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.900 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 아토피성 피부염의 예방, 개선, 치료, 또는 그 증상의 발현 지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 아토피성 피부염 개선용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 조성물이 식품 조성물로 파악될 경우, 식품의 형태는 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 산제, 정제, 캡슐제 등의 건강식품 제제류 등이 될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.

미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.

또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.

이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.

사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.

본 발명의 아토피성 피부염 개선용 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 국소형 제형 예컨대 크림, 로션, 연고(반고형의 외용약), 마이크로로에멀젼, 젤, 페이스트, 경피제제(TTS)(예컨대 패치제, 붕대 등) 등으로 제조될 수 있다.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산 등을 들 수 있으며 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 적합한 담체와 제제에 대해서는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)]을 참조할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 안정화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 추가로 포함할 수 있다.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.

본 발명의 아토피성 피부염 개선용 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 아토피성 피부염 개선 활성을 나타내는 유효성분인 감 발효물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 아토피성 피부염 개선 활성을 나타내는 감 발효물을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 감 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 조성물은 화장품, 약품, 식품 등으로 제품화되어 이용될 수 있다.

도 1 및 2는 감 발효물의 TARC와 MDC 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 3은 감 발효물의 세포독성 실험 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 재래감의 유용미생물에 의한 발효물의 제조

제주에서 재배되는 재래감(Diospyros kaki, 과실)을 구입하여 수세하고 분쇄하여 얻은 분쇄물 100 중량부, 그 분쇄물 100 중량부 기준 당밀 50 중량부 및 그 분쇄물 100 중량부 기준 물 300 중량부를 혼합하고, 이 혼합물에 LB 배지에서 준비한 광합성세균 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris) 배양액 2%(v/v), MRS 액체 배지에서 준비한 젖산균 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 2%(v/v) 및 PDB 배지에서 준비한 효모 사카로마이세스 세레비시애(Saccaromyces cerevisiae) 배양액 2%(v/v)를 접종하고 30~40℃의 온도 범위에서 배양하여 감 발효물을 얻었다. 발효물은 자외선을 조사하여 살균한 후 감압농축하고 동결건조하여 실험에 사용하였다.

< 비교예 > 감 추출물 및 유용미생물 자체 발효물의 제조

<비교예 1> 감 추출물의 제조

제주에서 재배되는 감(과실)을 구입하여 수세하고 분쇄하여 얻은 분쇄물 100 중량부에 5배 중량의 70% 에탄올을 가하고 24시간 동안 상온에서 추출한 후 여과하고 그 여과액을 감압농축하고 동결건조하여 감 추출물을 제조하였다.

<비교예 2> 유용미생물 자체 발효물 제조

상기 실시예와 동일하게 유용미생물 발효물을 제조하되, 감 분쇄물을 제외하고 당밀 100 중량부 및 물 600 중량부를 혼합하고 여기에 광합성세균, 젖산균 및 효모를 접종 배양하여 유용미생물 자체의 발효물을 제조하였다. 그 발효물은 자외선을 조사하여 살균한 후 감압농축하고 동결건조하여 실험에 사용하였다.

< 실험예 > 항아토피 활성 실험

<실험예 1> 아토피성 피부염 유발 인자인 TARC 와 MDC 생성 억제 활성 평가

HaCaT 세포(3.0×10⁵cells/mL)를 DMEM 배지를 이용하여 세포수를 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 5% CO₂ 항온기에서 18시간 전 배양 하였다. 이후 배지를 제거하고 HaCaT 세포는 시료 50 ㎕와 450 ㎕의 TNF-α(10 ng/mL)+IFN-γ(10 ng/mL)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하였고 전배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24 시간 후 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 분)하여 얻어진 상층액의 아토피 유발 인자 생성 함량을 측정하였다. TARC와 MDC의 정량은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard에 대한 표준곡선의 r²값은 0.99 이상이었다.

결과를 [도 1] 및 [도 2]에 나타내었다. [도 1] 및 [도 2]를 참조하여 보면, 감 추출물(Sample 1, 100, 200 및 400 ㎍/㎖ 처리)이나 유용미생물 자체 발효물(Sample 3, 100, 200 및 400 ㎍/㎖ 처리)는 특별한 MDC 및 TARC 생성 억제 활성을 보이지 않았으나 감의 유용미생물 발효물(Sample 2, 100, 200 및 400 ㎍/㎖ 처리)은 뚜렷하게 MDC 및 TARC 생성 억제 활성을 보였다.

<실험예 2> 세포독성 평가 ( LDH assay )

RAW 264.7 세포 (1.5×10⁵cells/㎖)를 DMEM 배지에 실시예의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양 한 후 배양 배지를 얻어 3,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. LDH (lactate dehydrogenase) assay는 non-radioactive cytotoxicity assay kit (Promega)를 이용하여 측정했으며, 96 well plate에 원심 분리하여 얻은 배양 배지 50 ㎕와 reconstituted substrate mix를 50 ㎕를 넣고, 실온에서 30분 반응시킨 후 50 ㎕의 stop solution을 넣은 후 microplate reader (Bio-TEK Instruments Inc., Vermont, WI, USA)를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군 (LDH control, 1:5000)의 흡광도 값과 비교하여 세포독성을 평가하였다.

결과를 [도 3]에 나타내었다. [도 3]을 참조하여 보면 감의 유용미생물 발효물이 400 ㎍/㎖ 농도에서 약간의 세포독성을 나타내었을 뿐 모든 시료가 특별한 세포독성을 보이지 않았다. 이는 상기 감의 유용미생물 발효물의 MDC 및 TARC 생성 억제 활성이 세포독성에 의한 결과가 아님을 뒷받침한다.

<실험예 3> 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 임상시험

아토피성 피부염 개선에 대한 임상실험을 위하여 아래의 [표 1]의 성분 및 함량으로 영양 로션을 제조하였다.

영양 로션의 성분 및 ?t량

성분	함량 (중량%)
실시예 또는 비교예의 시료	2.0
스테아린산	2.0
세틸알콜	2.0
글리세릴모노스테아레이트	2.0
폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0
왁스	1.0
유동파라핀	4.0
스쿠알란	4.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
카르복시비닐폴리머	0.3
부틸렌글리콜	5.0
글리세린	3.0
트리에탄올아민	0.5
정제수	잔량

아토피성 피부염 개선 활성은 5세 이상 아토피성 피부염 증상을 갖고 있는 남녀 60명을 대상으로 3 그룹으로 나눈 다음, 각 그룹에 상기 실시예 또는 비교예의 추출물이 함유된 각 영양로션을 하루 2~3회 8주간 도포하게 하였다.

시험 시작 전 및 8주가 지난 후에 SCORAD 지수(The European Task Force on Atopic Dermatitis가 개발한 아토피 중증도 평가 지수로 아토피 증상이 심할수록 높은 수치로 나타남)을 측정하였다.

결과를 평균 ± 표준편차로로 아래의 [표 2]에 나타내었다.

SCORAD 지수

구분	0 주차	8주차
실시예의 감의 유용미생물 발효물 함유 영양로션	36.4±6.8	22.6±6.2*
비교예 1의 감 70% 에탄올 추출물 함유 영양로션	34.8±7.2	32.5±5.7
비교예2의 유용미생물 자체 발효물 함유 영양 로션	37.5±8.3	35.6±6.2
* p<0.05

임상시험에 있어서도 감의 유용미생물 발효물 함유 영양로션의 경우 SCORAD 지수를 뚜렷하게 감소시켰으나 다른 영양로션의 경우는 특별한 효과를 나타내지 못하였다.

Claims

감 과실 발효물을 유효성분으로 포함하되,
상기 감 과실 발효물은 감 과실을 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris), 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 및 사카로마이세스 세레비시애(Saccaromyces cerevisiae)로 혼합 발효시켜 얻어진 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 아토피성 피부염 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 아토피성 피부염 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 아토피성 피부염 개선용 조성물.