KR20130009238A

KR20130009238A - 피부 질환 개선제 조성물

Info

Publication number: KR20130009238A
Application number: KR1020110070192A
Authority: KR
Inventors: 고인순
Original assignee: 고인순
Priority date: 2011-07-15
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2013-01-23

Abstract

본 발명은 피부 질환 개선제 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 탈과립 억제 활성, 5α-리덕타제 억제 활성, 무좀과 여드름 원인균에 대한 항균 활성을 가지는 뱀딸기 추출물, 홍삼 추출물 및/또는 개산초나무 잎 추출물을 이용한 피부 질환 개선제 조성물에 관한 것이다.

Description

피부 질환 개선제 조성물{Composition for Improving Skin Diseases}

본 발명은 피부 질환 개선제 조성물에 관한 것이다.

피부 질환으로서는 아토피성 피부염, 무좀, 여드름 등을 들 수 있으나, 대표적인 피부 질환이 아토피성 피부염이다.

아토피 피부염의 원인은 아직까지 명확히 규명되어 있지 않지만, IgE 생성의 증가, CD8+ 억제/세포독성 T 림프구 (CD8+ suppressor/cytotoxic T lymphocytes) 수적 감소와 기능 저하, IFN-γ를 분비하는 Th1(T-cell Helper type 1) 림프구의 수적 감소, 단핵구/대식세포의 침윤, 비만세포, 호산구, 수지상세포(dendritic cells; DCs), 표피의 랑게르한스 세포 및 CD4+ T 림프구의 수적 증가, Th1 세포에 비해 Th2 세포의 수적 증가, 사이토카인(IL-10, IL-4, IL-5, TNF-α 등)의 생성 증가, 케모카인(TSLP, RANTES, CTACK, LARC, MDC, TARC 등)의 생성 증가 등의 면역학적 현상들이 보고되고 있고[J. Invest. Dermatol., 96:523-526, 1991; J. Invest Dermatol., 97:389-394, 1991; Immunol., 11:81-88, 1999; Curr Drug Targets Inflamm Allergy., 2:199-120, 2003; J. Allergy Clin Immunol., 107:871-877, 2001; Adv. Immunol. 78:57, 2001; International Immunology, 14(7):767-773, 2002; Pediatr Allergy Immunol 19: 605-613, 2008], 통상 아토피 피부염을 앓고 있는 사람이 집 먼지, 진드기, 동물의 털, 음식물, 꽃가루, 곰팡이 등과 같이 외부환경의 이물질에 대해 알러지 반응을 나타내는 점과 또 아토피 피부염이 알러지성 비염, 천식, 결막염, 장관염 등을 동반한다는 점에서 면역 체계의 교란에 의하여 발생하는 것으로 추정되고 있다.

현재 사용하고 있는 치료약 중 스테로이드계 약품(부신피질호르몬제)은 소염 작용 및 면역 억제 작용이 우수하지만, 장기간 사용할 경우 피부에 털이 나고 피부가 위축될 수 있으며, 피부 색소가 적어지고 세균의 감염이 생기며, 여드름이 돋고, 피부가 얇아지고 실핏줄이 드러나는 등의 부작용을 갖고 있다.

최근 기존 화학 약품의 부작용을 최소화하기 위하여, 아토피 피부염에 효과가 있는 천연물을 찾고자 하는 노력이 활발해지고 있다. 아토피 피부염 개선 활성이 있다고 보고된 천연물로서는 지부자, 용규, 명아주 등의 혼합추출물(국내 특허 제0589667호), 애기수영 추출물 또는 대황 추출물(국내 특허 제066829호), 뱀딸기 추출물(국내 특허 제066642호) 등을 들 수 있다.

본 발명은 아토피성 피부염 등의 피부 질환 개선 활성을 가지는 뱀딸기 추출물 등을 개시한다.

본 발명의 목적은 피부 질환 개선제 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 양태는 이하에서 제시될 것이다.

본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 뱀딸기 추출물, 홍삼 추출물 및 개산초나무 잎 추출물이 모두 탈과립 억제 활성, 5α-리덕타제 억제 활성을 가지고, 무좀 원인균인 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrun)과 트리코피톤 멘타그로파이트(Trichophyton mentagrophytes)과 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 억제 활성을 가지는 한편, 임상평가에서 아토피성 피부염의 개선 활성을 가짐을 확인함으로써 완성된 것이다.

탈과립 억제 활성을 가지는 물질은 항히스타민제나 아토피성 피부염 개선제로 사용될 수 있으며(Schwartz et al., J. Immunol., 123, 1445-1450), 5α-리덕타제 억제 활성을 가지는 물질은 피지 과분비를 억제함으로써 여드름 개선제로서 사용될 수 있다(미국 특허 제6,174,892호).

전술한 바에 기초할 때, 본 발명은 뱀딸기(Duchesnea chrysantha) 전초 추출물, 홍삼(red ginseng, 수삼을 쪄서 말린 붉은 빛깔의 인삼) 추출물 및 개산초나무(Zanthoxylum planispinum) 잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 개선제 조성물에 관한 것으로 파악할 수 있다.

바람직하게는, 아래의 실험예에서 확인되듯이 뱀딸기 전초 추출물에 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물이 혼합되어 함께 사용될 때, 탈과립 억제 활성, 5α-리덕타제 억제 활성 그리고 무좀 원인균과 여드름 원인균에 대한 항균 활성이 매우 높아질 뿐 아니라 임상평가에 있어서도 아토피성 피부염 개선 활성이 높아진다는 점에서, 상기 본 발명의 피부 질환 개선제 조성물은 유효성분으로 뱀딸기 전초 추출물 이외에 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물을 함께 포함하는 경우이다..

본 명세서에서, "피부 질환"이란 아래의 실험예를 참조할 때 아토피성 피부염, 여드름 및/또는 무좀을 의미한다.

또 본 명세서에서, "개선"이란 병리적 증상의 예방, 치료, 발병 억제, 또는 지연을 의미한다.

또 본 명세서에서, 상기 "유효성분"의 의미는 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서 상기 "추출물"은 추출 방법을 불문하고 상기 각 추출 대상을 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 5의 알콜, 아세톤, 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름, 디클로로메탄, 물 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 추출물과 그 추출물을 상기 열거된 용매로 분획된 추출물을 포함하는 의미로서 이해된다. 추출 방법을 불문하므로, 추출 대상을 추출 용매에 침지시키는 단계를 통하여 추출되는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 그럼에도 상기 "추출물"은 바람직하게는 그 추출 대상을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 것을 의미한다. 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용할 경우 에탄올 함량이 바람직하게는 70% 내지 90%인 경우이다. 여기서 %는 부피 백분율(v/v)을 의미한다. 본 명세서의 "추출물"의 의미에는 여과 등을 통하여 정제된 형태의 추출물, 추출 용매가 제거된 액상의 농축된 추출물 그리고 추출 용매가 제거된 고형상의 추출물이 포함된다.

한편 본 발명의 피부 질환 개선제 조성물은 그 유효성분인 뱀딸기 전초 추출물 등을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 피부 질환 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 사람에게서, 피부 질환의 개선, 치료, 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

다른 측면에 있어서, 본 발명은 항히스타민제 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 항히스타민제 조성물은 뱀딸기 전초 추출물, 홍삼 추출물 및 개산초나무 잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하며, 바람직하게는 뱀딸기 전초 추출물 이외에 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물을 함께 포함하는 경우이다.

비만세포의 과립 중에는 히스타민 외에 베타-헥소사미니다제(β-hexosaminidase)도 같이 저장되어 있어 비만세포가 탈과립을 일으키면 베타-헥소사미니다제가 히스타민과 함께 방출되므로, 베타-헥소사미니다제는 비만세포의 탈과립이나 히스타민의 분비 정도를 평가하기 위한 지표물질로서 알려져 있다(Schwartz et al., J. Immunol., 123, 1445-1450). 따라서 탈과립 억제 활성을 가지는 물질은 항히스타민제로서 사용될 수 있다.

본 발명의 항히스타민제 조성물에 있어서, 추출물의 의미, 유효성분의 의미, 유효량 등과 관련하여서는 상기 본 발명의 피부 질환 개선제 조성물과 관련하여 전술한 바가 그대로 유효하다.

본 발명의 피부 질환 개선제 조성물이나 항히스타민제 조성물은 구체적으로 양태에 있어서 화장료 조성물로서 파악될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물로 파악될 경우, 그 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분을 포함하는 이외에 화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다.

여기서 "화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장료 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다.

그러나 상기 비율은 화장료의 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다.

상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에 알려진 피부 보습 활성 물질, 항아토피 활성 물질, 항여드름 활성 물질, 미백 활성 물질 등 기능성 물질을 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어 피부 세정제 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 피부 세정제 조성물은 고형상 또는 액상으로 제조될 수 있으며, 바디용 비누, 핸드용 비누, 세안제 등으로 제품화될 수 있다.

본 발명의 피부 세정제에는 그 유효성분의 활성 저해하지 않은 한, 당업계에서 세정제의 제조에 사용되는 임의의 성분을 포함할 수 있다.

이러한 임의의 성분으로서는 예컨대, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 황산염 등의 음이온 계면활성제, 아민 옥시드, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 등의 비이온 계면활성제, 유분, 실리콘류, 저급 또는 고급 알코올 등의 알코올류, 라놀린 유도체, 단백 유도체, 아크릴 수지 분산액, 양이온 성 폴리머, 음이온성 폴리머, 비이온 성 폴리머, 비타민 등의 약제, 살균제, 방부제, pH 조정제, 산화 방지제, 금속 봉쇄제, 자외선 흡수제, 동식물 추출물 또는 그 유도체, 색소, 항료, 안료, 무기물 분체, 점토 광물, 나일론, 폴리에틸렌 등의 수불용성 폴리머 분체, 프로필렌 글리콜, 에틸알콜, 글리세린, 물 등을 들 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다 의미이다.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등) 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 경우에 따라서는 국소적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등으로 제조될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.

미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.

또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.

이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.

사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.

또한 향미나 기호성을 향상시키고 다른 기능성을 추가하기 위하여 한약재가 추가될 수 있는데, 추가될 수 있는 한약재로서는 두충 추출물, 속단 추출물, 녹용 추출물, 홍화인 추출물, 토사자 추출물, 숙지황 추출물, 별갑 추출물, 산수유 추출물, 구기자 추출물, 감초 추출물, 당귀 추출물, 갈근 추출물, 강진향 추출물, 합환피 추출물, 산두근 추출물, 괴화 추출물, 고삼 추출물 등이 예시될 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 피부 질환 개선제 조성물을 제공할 수 있다. 또한 본 발명에 따르면 항히스타민제 조성물을 더불어 제공할 수 있다.

본 발명의 피부 질환 개선제 조성물이나 항히스타민제 조성물은 화장료 조성물, 피부 세정제 조성물, 약품 조성물 또는 식품 조성물로 제품화될 수 있다.

< 실시예 > 뱀딸기 추출물, 홍삼 추출물 및 개산초나무 잎 추출물의 제조

< 실시예 1> 뱀딸기 추출물의 제조

<실시예 1> 뱀딸기 추출물의 제조예 1

건조한 뱀딸기 전초 1kg에 물 5ℓ를 넣고 70~90℃의 온도로 약 6시간 동안 열수 추출하여 추출액을 얻고, 그 추출액을 2㎛의 여과지로 여과하여 뱀딸기 추출물을 제조하였다. 이 액상의 추출물을 그대로 실험에 사용하거나, 감압 증류하고 동결건조하여 얻은 고형상의 추출물을 실험에 사용하였다.

<실시예 2> 뱀딸기 추출물의 제조예 2

건조한 뱀딸기 전초 1kg를 70% 에탄올 2ℓ에 상온에서 24시간 동안 침지시켜 추출액을 얻고, 그 추출액을 2㎛의 여과지로 여과하여 뱀딸기 추출물을 제조하였다. 이 액상의 추출물을 그대로 실험에 사용하거나, 감압 증류하고 동결건조하여 얻은 고형상의 추출물을 실험에 사용하였다.

< 실시예 2> 홍삼 추출물의 제조

<실시예 2-1> 홍삼 추출물의 제조예 1

홍삼 세절물 1kg에 물 5ℓ를 넣고 70~90℃의 온도로 약 6시간 동안 열수 추출하여 추출액을 얻고, 그 추출액을 2㎛의 여과지로 여과하여 홍삼 추출물을 제조하였다. 이 액상의 추출물을 그대로 실험에 사용하거나, 감압 증류하고 동결건조하여 얻은 고형상의 추출물을 실험에 사용하였다.

<실시예 2-2> 홍삼 추출물의 제조예 2

홍삼 세절물 1kg를 70% 에탄올 2ℓ에 상온에서 24시간 동안 침지시켜 추출액을 얻고, 그 추출액을 2㎛의 여과지로 여과하여 홍삼 추출물을 제조하였다. 이 액상의 추출물을 그대로 실험에 사용하거나, 감압 증류하고 동결건조하여 얻은 고형상의 추출물을 실험에 사용하였다.

< 실시예 3> 개산초나무 잎 추출물의 제조

<실시예 3-1> 개산초나무 잎 추출물의 제조예 1

개산초나무 잎 세절물 1kg에 물 5ℓ를 넣고 70~90℃의 온도로 약 6시간 동안 열수 추출하여 추출액을 얻고, 그 추출액을 2㎛의 여과지로 여과하여 개산초나무 잎 추출물을 제조하였다. 이 액상의 추출물을 그대로 실험에 사용하거나, 감압 증류하고 동결건조하여 얻은 고형상의 추출물을 실험에 사용하였다.

<실시예 3-2> 개산초나무 잎 추출물의 제조예 2

개산초나무 잎 세절물 1kg를 70% 에탄올 2ℓ에 상온에서 24시간 동안 침지시켜 추출액을 얻고, 그 추출액을 2㎛의 여과지로 여과하여 개산초나무 잎 추출물을 제조하였다. 이 액상의 추출물을 그대로 실험에 사용하거나, 감압 증류하고 동결건조하여 얻은 고형상의 추출물을 실험에 사용하였다.

< 실험예 > 아토피성 피부염 개선 활성 실험, 여드름 개선 활성 실험 및 무좀 개선 활성 실험

<실험예 1> 탈과립 억제 활성 실험 - β- hexosaminidae assay

Rat basophlic leukemia 셀 라인인 RBL-2H3 세포주를 10% FBS(Fetal bovine serum)와 L-글로타님을 포함하는 DMEM(Dulbeccos' modified Eagle's medium) 배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.

RBL-2H3 세포를 24 well plate에 5×10⁵/well로 분주한 후 monoclonal antibody IgE(0.5㎍/㎖)를 넣어 12시간 동안 배양하하고 세포를 시라가니안(siraganian buffer; 119mM NaCl, 5mM KCl, 0.4mM MgCl₂, 25mM PIPES, 40mM NaOH, pH 7.2) 완충액 0.5㎖를 사용하여 헹구어내었다. 그 다음에 0.16㎖의 시라가니안 완충액(5.6mM 포도당, 1mM CaCl₂, 0.1% BSA를 포함)을 넣고 37℃에서 10분간 배양한 후, 상기 각 실시예의 시료 또는 실시예의 혼합 시료를 농도별로 처리하고 20분 동안 배양하였다. 그리고 나서 0.02㎖의 항원(DNP-BSA 1㎍/ml)을 처리하고 37℃에서 10분간 세포들을 활성시킨 다음 10분간 ice bath에 처리하여 반응을 종결시키고 2000rpm에서 10분간 원심분리하였다. 원심분리하여 얻은 상등액을 0.025㎖씩 96 well plate로 옮기고 0.025㎖의 기질액 1mM p-NAG(p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide)를 첨가하여 37℃, 5% CO₂에서 1시간 동안 반응시켰다. 그 후에 0.1M Na₂CO₃/NaHCO₃ 0.2㎖를 가하여 반응을 정지시키고 405 nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다.

결과를 50% 베타-헥소사미니다아제의 유리 억제 활성에 필요한 농도(IC₅₀)로 아래의 [표 1]에 나타내었다.

베타-헥소사미니다아제 유리 억제 활성(IC₅₀, ㎍/㎖)

구분	IC₅₀ (㎍/ml)
<실시예 1-1>의 뱀딸기 추출물	58.31
<실시예 1-2>의 뱀딸기 추출물	62.23
<실시예 2-1>의 홍삼 추출물	66.54
<실시예 2-2>의 홍삼 추출물	61.35
<실시예 3-1>의 개산초나무 잎 추출물	76.27
<실시예 3-2>의 개산초나무 잎 추출물	74.16
<실시예 1-1>의 추출물과 <실시예 2-1>의 추출물의 동량의 혼합물	43.16
<실시예 1-1>의 추출물과 <실시예 3-1>의 추출물의 동량의 혼합물	52.47

상기 [표 1]에서 알 수 있듯이, 뱀딸기 추출물, 홍삼 추출물, 개산초나무 잎 추출물 모두 탈과립 억제 활성을 보이지만, 뱀딸기 추출물의 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물과의 동량의 혼합물의 높은 탈과립 억제 활성이 보였으며, 특히 뱀딸기 추출물의 홍삼 추출물의 혼합물이 탈과립 억제 활성이 높았다.

<실험예 2> 5α- 리덕타아제 억제 활성 실험

상기 각 실시예의 추출물의 5α-리덕타아제의 활성 억제 효과를 다음과 같이 측정하였다.

실험에 사용할 5α-리덕타아제는 8주령의 Sprague-Dawley계 흰쥐의 간에서 얻었으며 Bradford 방법으로 단백질을 정량하여 일정량의 단백질 현탁액으로 준비하였다.

상기 5α-리덕타아제의 현탁액 30㎕을 효소반응용액 60㎕(50mM Na₂HPO₄(pH 6.8), 25mM KCl, 500mM NADPH)에 첨가함과 함께 아래의 [표 2]와 같이 상기 실시예의 시료 또는 실시예의 혼합 시료를 10㎕ 첨가하여 전체 반응용액의 양을 100㎕로 하였다.

이때 5α-리덕타아제의 반응 기질은 방사능 표지 테스토스테론(₃H-Testosterone)을 사용하였다.

상기 반응 용액을 37℃ 항온조에서 20분간 방치하여 반응시킨 후, 반응 용매를 증발시켜 제거하고, 잔류물을 클로로포름 20㎕에 녹여 이것을 TLC 플레이트 상에 스포팅하고 TLC 챔버에서 30분간 전개 용매(톨루엔:아세톤=4:1)로 전개시킨 후, 전개된 플레이트를 하이퍼필름에 3일간 감광시켜 감광된 면적을 덴시토미터(Densitometer)로 정량 분석하였다.

5α-리덕타아제에 대한 활성 억제율은 다음의 식을 사용하여 평가하고 그 결과를 하기 <표 2>에 나타내었다.

5α-리덕타아제에 대한 활성 억제율 = 100(A-B/A)

A : 시료 미첨가시 테스토스테론에서 디하이드로테스토스테론으로의 전환율

B : 시료 첨가시 테스토스테론에서 디하이드로테스토스테론으로의 전환율

5α-리덕타아제에 대한 활성 억제율

구분	억제율(%)
<실시예 1-1>의 뱀딸기 추출물	64.3
<실시예 1-2>의 뱀딸기 추출물	58.7
<실시예 2-1>의 홍삼 추출물	21.3
<실시예 2-2>의 홍삼 추출물	17.5
<실시예 3-1>의 개산초나무 잎 추출물	3.2
<실시예 3-2>의 개산초나무 잎 추출물	5.3
<실시예 1-1> 추출물과 <실시예 2-1>의 추출물의 동량의 혼합물	54.3
<실시예 1-1> 추출물과 <실시예 3-1>의 추출물의 동량의 혼합물	47.1

상기 <표 2>의 결과는 상기 실시예의 뱀딸기 추출물과 홍삼 추출물 그리고 개산초나무 잎 추출물 모두 5α-리덕타아제의 활성을 억제함을 보여준다. 특히 뱀딸기 추출물의 5α-리덕타아제의 억제 활성이 홍삼 추출물이나 개산초나무 잎 추출물의 5α-리덕타아제의 억제 활성에 비하여 확연히 높았다.

그리고 혼합물은 모두 그 5α-리덕타아제의 억제 활성이 뱀딸기 추출물의 5α-리덕타아제의 억제 활성보다는 낮았지만 홍삼 추출물이나 개산초나무 잎 추출물의 5α-리덕타아제의 억제 활성보다 높았다.

<실험예 3> 무좀 원인균 및 여드름 원인균에 대한 항균 활성 실험 - 최소생육억제농도( MIC ) 측정 실험

무좀 원인균인 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrun)과 트리코피톤 멘타그로파이트(Trichophyton mentagrophytes), 그리고 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 한국미생물보존센터로부터 구입하여 사용하였다.

무좀 원인균인 트리코피톤 루브룸과 트리코피톤 멘타그로파이트는 SDB(Sabouraud's Broth) 배지를 사용하여 배양하였고, 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스는 GAM Broth 배지를 사용하여 배양하였다.

MIC의 측정은 상기 세균을 배지에 32℃의 온도로 48시간 동안 전배양한 다음에, 전배양액을 실시예의 시료 또는 실시예의 혼합 시료가 농도별로 처리된 새로운 액체배지에 1%(v/v)로 접종하여 72시간 동안 배양한 후, 배지의 현탁도를 마이크로플레이트 리더기로 600nm에서 측정하였다. 측정값을 대조군(시료 무처리군)의 흡광값과 비교하여 최소생육억제농도를 정하였다.

결과를 아래의 [표 3]에 나타내었다.

최소생육억제농도(MIC, ㎎/㎖)

구분	T. rubrun	T. mentagrophytes	P. acnes
<실시예 1-1>의 뱀딸기 추출물	2.0	1.0	2.0
<실시예 1-2>의 뱀딸기 추출물	2.0	2.0	4.0
<실시예 2-1>의 홍삼 추출물	1.0	2.0	2.0
<실시예 2-2>의 뱀딸기 추출물	3.0	2.0	2.0
<실시예 3-1>의 개산초나무 잎 추출물	2.0	2.0	3.0
<실시예 3-2>의 뱀딸기 추출물	2.0	3.0	-
<실시예 1-1>의 추출물과 <실시예 2-1>의 추출물의 동량의 혼합물	0.5	0.5	1.0
<실시예 1-1>의 추출물과 <실시예 3-1>의 추출물의 동량의 혼합물	0.5	0.5	1.0
* - : 최소억제농도가 측정되지 않았음을 의미함.

상기 [표 3]의 결과에서도, 뱀딸기 추출물 뱀딸기, 홍삼 추출물 그리고 개산초나무 잎 추출물 모두 무좀균과 여드름균에 대해서 항균 활성을 보였으나, 뱀딸기 추출물과 홍삼 추출물의 혼합물 그리고 뱀딸기 추출물과 개산초나무 잎 추출물의 혼합물의 항균 활성이 높았다.

<실험예 4> 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 관능 평가

아토피성 피부염 개선 활성에 대한 관능평가를 아래와 같이 실시하였다.

먼저 아래와 같이, 관능평가에 사용하기 위하여 상기 실시예의 추출물이 포함된 화장료 조성물을 제조하였다.

화장료 조성물의 제조예

성분(중량%)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5
<실시예 1-1>의 추출물	5.0
<실시예 2-1>의 추출물		5.0
<실시예 3-1>의 추출물			5.0
<실시예 1-1>와 <실시예 2-1>의 동량의 혼합물				5.0
<실시예 1-1>와 <실시예 2-1>의 동량의 혼합물					5.0
글리세린	5.0
프로필렌글리콜	5.0
폴리옥시에틸렌알킬에테르	3.0
글리세릴모노스테아린산아스테르	2.0
스쿠알란	4.0
스테아릴 알콜	6.0
정제수	잔량

관능평가는 습진, 가려움 등 아토피성 피부염 증상이 심한 환자 20명을 대상으로 4 그룹으로 나누고 상기 각 제조예의 화장료 조성물을 매일 2회씩(아침과 저녁) 총 4주 동안 가려운 부위에 바르도록 하였다.

아토피성 피부염 개선 정도를 아래의 식으로 계산된 아토피 중증 지수(EASI score) 변화 백분율로 아래의 [표 4]에 나타내었다. 아토피 중증 지수는 그 수치가 높을수록 아토피성 피부염이 심하다는 것을 나타낸다.

아토피중증지수(EASIscore) 변화 백분율

= [(최초아토피중증지수-4주후의아토피중증지수)/최초아토피중증지수]×100

아토피 중증 지수(EASIscore) 변화 백분율

사용한 화장료 조성물	EASI score 변화 백분율(%)
제조예 1	27.3%
제조예 2	14.1%
제조예 3	11.2%
제조예 4	38.4%
제조예 5	35.6%

상기 [표 5]의 결과는 뱀딸기 추출물 뱀딸기, 홍삼 추출물 그리고 개산초나무 잎 추출물 모두 아토피성 피부염 개선 활성을 보였으나, 뱀딸기 추출물과 홍삼 추출물의 혼합물 그리고 뱀딸기 추출물과 개산초나무 잎 추출물의 혼합물의 아토피 피부염 개선 활성이 가장 높음을 보여준다.

Claims

뱀딸기 전초 추출물, 홍삼 추출물 및 개산초나무 잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분으로서 뱀딸기 전초 추출물을 포함함과 함께 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물이 추가로 포함되고,
상기 피부 질환은 아토피성 피부염인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분으로서 뱀딸기 전초 추출물을 포함함과 함께 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물이 추가로 포함되고,
상기 피부 질환은 여드름인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분으로서 뱀딸기 전초 추출물을 포함함과 함께 홍삼 추출물 또는 개산초나무 잎 추출물이 추가로 포함되고,
상기 피부 질환은 무좀인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 세정제 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 질환 개선제 조성물.
전초 추출물, 홍삼 추출물 및 개산초나무 잎 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항히스타민제 조성물.