KR20110128896A - Ｃｃｒ4 수용체 길항제로서 사용되는 피라졸 유도체 - Google Patents

Ｃｃｒ4 수용체 길항제로서 사용되는 피라졸 유도체 Download PDF

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시몬 틴비 허드슨
얀닉 마우리스 락로익스
데보라 니담
니겔 제임스 파르
파나이오티스 알렉산드로우 프로코피우
티모시 존 리치에
마이클 데이비드 우드로우
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Abstract

본 발명은 인다졸 화합물 (I), 이의 제조 방법, 이의 제조에 사용될 수 있는 중간체, 그러한 화합물을 함유하는 약제 조성물 및 CCR4 수용체 길항제와 관련된 치료에 있어서 이들의 용도에 관한 것이다:

Description

ＣＣＲ4 수용체 길항제로서 사용되는 피라졸 유도체{PYRAZOLE DERIVATIVES USED AS CCR4 RECEPTOR ANTAGONISTS}
본 발명은 인다졸 화합물, 이의 제조 방법, 이의 제조에 사용될 수 있는 중간체, 그러한 화합물을 함유하는 약제 조성물 및 치료에 있어서 이들의 용도에 관한 것이다.
케모킨은 수많은 질병 또는 질환에에서의 면역 및 염증 반응에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다. CC-케모킨 수용체 4 (이하, CCR4)는 원래 호염기 세포주로부터 클로닝되었다 (Power et al, J. Biol. Chem.; 270: 19495: 1995). 소형 분자 CCR4 수용체 길항제가 당 분야에 공지되어 있고, 그 예가 문헌[Andrews et al., Mol. Pharmacol 73: 855, 2008]에 개시되어 있다.
발명의 개요
본 발명의 제 1 측면에서, 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염, 보다 특히 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00001
본 발명의 제 2 측면에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및 부형제를 포함하는 약제 조성물이 제공된다.
본 발명의 제 3 측면에서, 치료, 특히 CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용되는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 제 4 측면에서, 치료적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 피검체에서 CCR 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 제 5 측면에서, CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염에 관한 것이다:
Figure pct00002
상기 식에서, R1은 하기 (1), (2), (3), (4) 및 (5)로 구성된 군으로부터 선택되고:
(1) 하기 화학식 (a)의 기:
Figure pct00003
여기에서, 상기 A는 하기 (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi), (vii) 및 (viii)로 구성된 군으로부터 선택되며:
(i) 수소;
(ii) 하나 이상의 -NRaRb, -ORc, -C(O)NRaRb, -C(O)ORc, 헤테로시클릴, 페닐 또는 헤테로아릴기로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알킬;
(iii) -C(O)ORc 또는 -NRaRb 기로 치환되거나 치환되지 않은 C3 - 7시클로알킬;
(iv) 하나 이상의 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릴;
(v) 하나 이상의 할로겐 또는 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴;
(vi) -NRaRb;
(vii) p가 0, 1, 2 또는 3인 -(CH2)pC(O)OH 기로 치환된 페닐; 또는
(viii) -(CH2)7C(O)OH;
(2) 하기 화학식 (b)의 기:
Figure pct00004
상기 식에서, B는 C1 - 6알킬이다;
(3) -C(O)NRaRb 또는 -CH2C(O)NRaRb;
(4) -S(O)2NRaRb;
(5) NRaRb로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알콕시;
Ra, Rb 및 Rc는 독립적으로 수소 또는 C1 - 6알킬이고;
R2는 할로겐, C1 - 6알킬, CF3, 히드록시 또는 C1 - 6알콕시이고;
R3는 할로겐, CF3, 히드록시, C1 - 6알콕시, CRdReOH 또는 CHF2이고; 이 때, Rd 및 Re는 독립적으로 수소 또는 메틸이며;
R4는 수소, 할로겐, C1 - 6알킬 또는 CF3이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐 또는 C1 - 6알킬이고;
n은 0 또는 1이다.
일 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염에 관한 것이다:
Figure pct00005
상기 식에서, R1은 하기 (1), (2), (3), (4) 및 (5)로 구성된 군으로부터 선택되고:
(1) 하기 화학식 (a)의 기:
Figure pct00006
여기에서, 상기 A는 하기 (i), (ii), (iii), (iv), (v) 및 (vi)으로 구성된 군으로부터 선택되며:
(i) 수소;
(ii) 하나 이상의 -NRaRb, -ORc, -C(O)NRaRb, -C(O)ORc, 헤테로시클릴, 페닐 또는 헤테로아릴기로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알킬;
(iii) -NRaRb 기로 치환되거나 치환되지 않은 C3 - 7시클로알킬;
(iv) 하나 이상의 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릴;
(v) 하나 이상의 할로겐 또는 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴; 또는
(vi) -NRaRb;
(2) 하기 화학식 (b)의 기:
Figure pct00007
상기 식에서, B는 C1 - 6알킬이다;
(3) -C(O)NRaRb;
(4) -S(O)2NRaRb;
(5) NRaRb로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알콕시;
Ra, Rb 및 Rc는 독립적으로 수소 또는 C1 - 6알킬이고;
R2는 할로겐, C1 - 6알킬, CF3, 히드록시 또는 C1 - 6알콕시이고;
R3는 할로겐, CF3, 히드록시, C1 - 6알콕시, CH2OH 또는 CHF2이고;
R4는 수소, 할로겐, C1 - 6알킬 또는 CF3이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐 또는 C1 - 6알킬이고;
n은 0 또는 1이다.
일 구체예에서, 상기 R1 기가 메타 위치 (3번 위치)에서 치환된다.
일 구체예에서, 상기 R1이 화학식 (a)의 기이고, 여기서 A는 C1 - 6알킬, 예를 들어 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 t-부틸이다.
추가의 구체예에서, 상기 R1이 화학식 (a)의 기이고, 여기서 A는 하나 이상의 -NRaRb (예를 들어, NH2, NHMe 또는 NMe2), -ORc (예를 들어, OH 또는 OMe), -C(O)NRaRb (예를 들어, C(O)NH2), -C(O)ORc (예를 들어, C(O)OH 또는 C(O)OMe), 피롤리디닐, 페닐 또는 이미다졸릴로 치환된 C1 - 6알킬이다.
여전히 추가의 구체예에서, 상기 R1이 화학식 (a)의 기이고, 여기서 A는 피롤리디닐, 피페리디닐 및 모르폴리닐로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로시클릴이다.
여전히 추가의 구체예에서, 상기 R1이 화학식 (a)의 기이고, 여기서 A는 푸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴 및 옥사졸릴로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로아릴이다.
일 구체예에서, n이 1이고, R2가 할로겐 (예를 들어, 플루오린 또는 클로린), C1 - 6알킬 (예를 들어, 메틸) 또는 C1 - 6알콕시 (예를 들어, 메톡시)로 구성된 군으로부터 선택된다.
일 구체예에서, 상기 R3가 할로겐 (예를 들어, 플루오린), 히드록시 또는 C1 -4알콕시 (예를 들어, 메톡시)이다. 추가의 구체예에서, 상기 R3가 메톡시이다.
일 구체예에서, 상기 R4가 수소 또는 플루오린이다.
일 구체예에서, 상기 R5 및 R6이 독립적으로 수소, 할로겐 (예를 들어, 클로린) 또는 C1 - 6알킬 (예를 들어, 메틸)이다. 추가의 구체예에서, 상기 R5가 클로린이고, 상기 R6이 수소이다.
일 구체예에서, 상기 Ra, Rb 및 Rc가 독립적으로 수소 또는 메틸이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 염을 제공한다:
Figure pct00008
상기 식에서, R1 및 R3는 상기에서 정의된 바와 같다.
각 변수에 대한 구체예가 각 변수에 대해 따로따로 상기에 일반적으로 열거되었으나, 본 발명은 화학식 (I)의 여러 구체예 또는 각 구체예가 상기 열거된 구체예들 각각으로부터 선택되는 그러한 화합물들을 포함한다. 따라서, 본 발명은 상기 개시된 각 변수에 대한 구체예들의 모든 조합을 그 염을 포함하여 포함시키고자 한다.
본 발명에 따른 구체적인 화합물은 본 명세서에 기재된 실시예 1-166 또는 이의 염을 포함한다.
본 발명에 따른 특정 화합물로는
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드,
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-모르폴린카르복사미드,
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시-2-메틸프로판아미드,
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시프로판아미드,
(2S)-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시프로판아미드 또는 이의 염이 있다.
본 명세서를 통해, 달리 언급되지 않는 한:
· 용어 "할로겐"은 플루오린, 클로린 또는 브로민으로부터 선택된 기를 기술하기 위해 사용된다;
· 용어 "C1 - 6알킬"은 각각 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 선형 또는 분지형 알킬기를 포함하는 기 또는 기의 일부를 기술하기 위해 사용된다. 그러한 기의 적합한 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸 및 헥실이 있다;
· 용어 "C1 - 6알콕시"는 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 선형 또는 분지형 알킬기를 포함하는 기 또는 기의 일부를 기술하기 위해 사용된다. 적합한 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, t-부톡시, 펜톡시 또는 헥소시가 있다;
· 용어 "헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릴 고리"는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 하나 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 포화된 4-7원 모노시클릭 고리를 기술하기 위해 사용된다. 적합한 예로는 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 테트라하이드로푸라닐 및 테트라하이드로피라닐이 있다;
· 용어 "헤테로아릴"은 산소, 질소 및 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 방향족 또는 벤조융합된 방향족 고리를 기술하기 위해 사용된다. 그러한 방향족 고리의 적합한 예로는 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 트리아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사디아졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 티아디아졸릴, 피라졸릴, 피리미딜, 피리다지닐, 피라지닐 및 피리딜이 있다. 그러한 벤조융합된 방향족 고리의 적합한 예로는 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤조푸릴, 벤조티에닐, 벤즈이미다졸릴 및 벤즈옥사졸릴이 있다;
· 용어 "C3 - 7시클로알킬"은 적어도 3개 및 많아야 7개의 탄소 원자를 함유하는 비방향족 카르보시클릭 고리를 기술하기 위해 사용된다. C3 - 7시클로알킬의 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 시클로헵틸이 있다.
본 발명이 유리 염기 및 이의 염으로서, 예를 들어 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서의 화학식 (I)의 화합물을 포괄함을 인지할 것이다.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
약제에서의 이들의 잠재적인 용도로 인해, 화학식 (I)의 화합물의 염은 바람직하게는 약제학적으로 허용된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염은 산 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다. 적합한 염에 대한 검토를 위해, 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)]을 참조한다. 통상적으로, 약제학적으로 허용되는 염은 적합한 경우 요망되는 산 또는 염기를 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 생성된 염을 용액으로부터 침전시키고, 여과에 의해 수집하거나 용매를 증발시킴에 의해 회수할 수 있다.
약제학적으로 허용되는 염기 부가염은 화학식 (I)의 화합물을, 임의로 적합한 용매에서 적합한 무기 또는 유기 염기 (예를 들어, 트리에틸아민, 에탄올아민, 트리에탄올아민, 콜린, 아르기닌, 리신 또는 히스티딘)와 반응시켜, 염기 부가염을 수득하고, 이를 예를 들어 결정화 및 여과에 의해 일반적으로 분리시킴에 의해 형성될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염기 염으로는 암모늄 염, 알칼리금속염, 예를 들어 소듐 염 및 칼륨 염, 알칼리성 토금속염, 예를 들어 칼슘 염 및 마그네슘 염 및 일차, 이차 및 3차 아민의 염, 예를 들어 이소프로필아민, 디에틸아민, 에탄올아민, 트리메틸아민, 디시클로헥실 아민 및 N-메틸-D-글루카민을 포함하는 유기 염기와의 염이 있다.
약제학적으로 허용되는 산 부가염은 화학식 (I)의 화합물을, 임의로 유기 용매와 같은 적합한 용매에서 적합한 무기 또는 유기산 (예를 들어, 브롬화수소산, 염산, 황산, 질산, 인산, 숙신산, 말레산, 아세트산, 프로피온산, 푸마르산, 시트르산, 타르타르산, 락트산, 벤조산, 살리실산, 글루탐산, 아스파르트산, p-톨루엔설폰산, 벤젠설폰산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 나프탈렌설폰산, 예를 들어 2-나프탈렌설폰산 또는 헥산산)과 반응시켜, 염을 수득하고, 이를 예를 들어 결정화 및 여과에 의해 일반적으로 분리시킴에 의해 형성될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 산 부가염은 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 숙시네이트, 말레에이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 푸마레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 글루타메이트, 아스파르테이트, p-톨루엔설포네이트, 벤젠설포네이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 나프탈렌설포네이트 (예를 들어, 2-나프탈렌설포네이트) 또는 헥사노에이트 염을 포함할 수 있거나 이들이 그 예일 수 있다.
포르메이트, 옥살레이트 또는 트리플루오로아세테이트와 같은 다른 약제학적으로 허용되지 않는 염들이, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물을 분리하는데 이용될 수 있고, 본 발명의 범위내에 포함된다.
본 발명은 화학식 (I)의 화합물의 염의 모든 가능한 화학량적 및 비-화학량적 형태를 그 범위내에 포함한다.
다수의 유기 화합물이 이들이 반응하는 용매 또는 이들이 침전되거나 결정화되는 용매와 복합체를 형성할 수 있음을 인지할 것이다. 이러한 복합체는 "용매화물"로서 공지되어 있다. 예를 들어, 물과의 복합체는 "수화물"로서 공지되어 있다. 높은 비등점을 지니고/거나 수소 결합을 형성할 수 있는 용매, 예를 들어 물, 크실렌, N-메틸 피롤리디논, 메탄올 및 에탄올을 이용하여 용매화물을 형성할 수 있다. 용매화물을 동정하는 방법은 비제한적으로 NMR 및 미세분석을 포함한다. 화학식 (I)의 화합물의 용매화물이 본 발명의 범위내에 있다.
본 발명은 화학식 (I)의 화합물의 용매화물의 모든 가능한 화학량적 및 비-화학량적 형태를 그 범위내에 포함한다.
화학식 (I)의 화합물은 결정질 형태 또는 무정형일 수 있다. 더욱이, 화학식 (I)의 화합물의 일부 결정질 형태는 다형태로서 존재할 수 있고, 이것은 본 발명의 범위내에 포함된다. 화학식 (I)의 화합물의 다형태는 비제한적으로 X-선 분말 회절(XRPD) 패턴, 적외선(IR) 스펙트럼, 라만(Raman) 스펙트럼, 분별 스캐닝 열량측정법(DSC), 열중량 분석(TGA) 및 고체 상태 핵자기 공명(SSNMR)을 포함하는 다수의 통상적인 분석적 기술을 이용하여 특성화되고 구별될 수 있다.
본 명세서에 기재된 특정 화합물은 하나 이상의 카이랄 원자를 함유할 수 있어서, 광학 이성질체, 예를 들어 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체가 형성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 다른 이성질체가 실질적으로 없도록 분리된 개개의 이성질체이든 (즉, 순수한) 또는 혼합물이든 간에 (즉, 라세미체 및 라세믹 혼합물) 화학식 (I)의 화합물의 모든 이성질체를 포함한다. 다른 이성질체가 실질적으로 없도록 분리된 개개의 이성질체는 (즉, 순수한) 다른 이성질체가 10% 미만, 특히 약 1% 미만, 예를 들어 약 0.1% 미만으로 존재하도록 분리될 수 있다.
이성질체의 분리는 당업자에게 공지된 통상적인 기술, 예를 들어 분획 결정화, 크로마토그래피 또는 HPLC에 의해 달성될 수 있다.
화학식 (I)의 특정 화합물은 여러 토토머 형태 중 하나로 존재할 수 있다. 본 발명이 개개의 토토머이든 또는 이들의 혼합물이든 간에 화학식 (I)의 화합물의 모든 토토머를 포함하는 것이 이해될 것이다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 염의 용매화물, 수화물, 복합체, 이성질체 및 다형태가 본 발명의 범위내에 포함됨이 상기로부터 인지될 것이다.
본 발명의 화합물은 표준 화학을 포함하는 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 앞서 정의된 임의의 변수는 달리 지시되지 않는 한 앞서 정의된 의미를 그대로 지닐 것이다. 예시적인 개략의 합성 방법이 하기에 개시되어 있고, 그 다음 본 발명의 구체적인 화합물이 실시예에서 제조된다.
본 발명은 하기 (a), (b), (c) 또는 (d)로부터 선택된 공정을 포함하는 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염을 제조하는 방법을 추가로 제공한다:
(a) 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 염을 하기 화학식 (IIIa), (IIIb), (IIIc) 또는 (IIId)의 화합물 또는 이의 보호된 유도체와 반응시키고,
그 후, 수득된 생성물을 임의로 탈보호시키는 공정:
Figure pct00009
Figure pct00010
상기 식에서, R2 내지 R6, n 및 A는 상기에서 정의된 바와 같다;
(b) 하기 화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 보호된 유도체를 하기 화학식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물과 반응시키고,
그 후, 수득된 생성물을 임의로 탈보호시키는 공정:
Figure pct00011
Figure pct00012
상기 식에서, R1 내지 R6 및 n은 상기에서 정의된 바와 같고, Hal은 할로겐이다;
(c) 하기 화학식 (VI)의 화합물을 하기 화학식 (VII)의 화합물과 반응시키는 공정:
Figure pct00013
Figure pct00014
상기 식에서, R1 내지 R6 및 n은 상기에서 정의된 바와 같고, Hal은 할로겐이다;
(d) 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염을 추가의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염으로 전환시키는 공정.
공정 (a)
화학식 (II)의 화합물 및 화학식 (IIIa)의 카르복실산을 당업자에게 익숙한 아미드 형성 조건하에 반응시킨다. 그러한 반응은 적합한 유기 용매(예를 들어, DMF 또는 아세토니트릴)에서 염기 (예를 들어, DIPEA 또는 트리에틸아민)와 함께 적합한 활성화제의 존재하에 (예를 들어, HATU 또는 TBTU) 수행될 수 있다.
화학식 (II)의 화합물 및 화학식 (IIIa)의 카르복실산을 또한 1-클로로 N,N,2-트리메틸-1-프로펜-1-아민과 같은 활성화제의 존재하에 적합한 유기 용매에서 (예를 들어, THF 또는 디클로로메탄) 적합한 염기 (예를 들어, DIPEA 또는 트리에틸아민)와 반응시킬 수 있다. 그러한 방법이 문헌[Schmidt et al (Synthesis, 1988, 475)]에 개시되어 있다.
화학식 (IIIb)의 화합물의 적합한 예는 산 클로라이드 또는 산 안히드라이드이다 (즉, 여기서 이탈기 LG1은 Cl 또는 OC(O)R이다). 화학식 (II) 및 화학식 (IIIb)의 화합물들의 반응은 통상적으로 비활성 유기 용매 (예를 들어, 테트라하이드로푸란, DMF, 클로로포름 또는 디클로로메탄)에서 주위 온도 또는 그보다 낮은 온도로, 임의로 유기 염기 (예를 들어, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민), 알칼리 금속 탄산염 (예를 들어, 탄산칼륨) 또는 알칼리 탄산수소금속 (예를 들어, 탄산수소나트륨)과 같은 적합한 염기의 존재하에 수행된다.
화학식 (IIIc)의 화합물의 적합한 예는 이탈기 LG2가 클로로인 것들이다. 화학식 (II) 및 화학식 (IIIc)의 화합물을 통상적으로 적합한 용매에서 (예를 들어, 테트라하이드로푸란 또는 디클로로메탄) 적합한 염기의 존재하에 (예를 들어, 트리에틸아민 또는 피리딘) 반응시킨다.
화학식 (II) 및 화학식 (IIId)의 화합물을 통상적으로 적합한 유기 용매에서 (예를 들어, 디클로로메탄) 적합한 아민의 존재하에 (예를 들어, 트리에틸아민) 반응시킨다.
화학식 (II)의 화합물 및 화학식 (III)의 화합물의 반응에서, 화학식 (III)의 화합물의 하나 이상의 작용기를 보호하는 것이 이로울 수 있음을 인지할 것이다. 보호기의 예와 이들의 제거 방법은 문헌[T. W. Greene 'Protective Groups in Organic Synthesis' (3rd edition, J. Wiley 및 Sons, 1999)]에서 찾아볼 수 있다. 적합한 아민 보호기로는 아실 (예를 들어, 아세틸), 카르바메이트 (예를 들어, 2',2',2'-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 또는 t-부톡시카르보닐) 및 아릴알킬 (예를 들어, 벤질)이 있고, 이들은 적합하게 가수분해 (예를 들어, 디옥산 중의 염산과 같은 산 또는 디클로로메탄 중의 트리플루오로아세트산을 이용하여) 또는 환원에 의해 제거될 수 있다 (예를 들어, 벤질 또는 벤질옥시카르보닐기의 가수소분해 또는 아세트산 중의 아연을 이용한 2',2',2'-트리클로로에톡시카르보닐기의 환원적 제거). 다른 적합한 아민 보호기로는 염기 촉매화된 가수분해에 의해 제거될 수 있는 트리플루오로아세틸 (-COCF3)이 있다.
화학식 (II)의 화합물은 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예시를 위해, 화학식 (II)의 대표적인 화합물은 하기 반응식 1에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다 (즉, 여기서 n은 0이고, R4 및 R6은 수소이고, R5는 클로로이고, R3는 메톡시이다).
반응식 1
Figure pct00015
시약 및 조건: a) NH2NH2·H2O, 1-부탄올, 환류, 92%; b) KOH, DMSO, 3-시아노벤질 클로라이드, 60%; c) 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드, 피리딘, 85%; d) 에테르 중의 1M LiAIH4 용액, THF, 2M HCl, MeOH, 77%
화학식 (III)(a)-(d)의 화합물은 시판원으로부터 수득될 수 있다.
공정 (b)
화학식 (Va)의 화합물에서, 적합한 Hal 기는 클로린, 브로민, 요오딘이고, 특히 클로린이다. 통상적으로, 화학식 (IV)의 화합물은 이의 보호된 유도체의 형태이다 (예를 들어, 보호기로서 β-(트리메틸실릴)에톡시)메틸 (SEM)과 같은 실릴 에테르를 이용). 화학식 (IV)의 화합물의 보호된 유도체와 화학식 (Va)의 화합물간의 알킬화 반응을 마이크로파 조사하에 비활성 유기 용매 (예를 들어, DMF)에서 주위 온도 또는 상승된 온도로, 임의로 탄산칼륨 또는 탄산세슘과 같은 적합한 염기의 존재하에 수행할 수 있다. 실릴 에테르 보호기를, THF와 같은 적합한 용매에서 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 (TBAF)와 반응시키는 것과 같은 표준 절차에 의해 그렇게 형성된 생성물로부터 제거할 수 있다.
화학식 (IV) 및 (Vb)의 화합물들의 반응을 당업자에게 익숙한 미츠노부(Mitsunobu) 반응의 조건을 이용하여 수행할 수 있다. 화학식 (IV)의 화합물은 통상적으로 이의 보호된 유도체의 형태이다 (예를 들어, 설폰아미드 보호기를 이용하여). 통상적으로, 상기 반응은 아조디카르복실레이트 화합물 (예를 들어, TBAD, DIAD 또는 DEAD)와 함께 트리페닐포스핀을 이용하여 적합한 유기 용매 (예를 들어, THF 또는 DMF)에서 수행된다. 설폰아미드 보호기는 메탄올 중의 수산화나트륨으로 처리함에 의해 형성된 생성물로부터 제거될 수 있다.
화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 보호된 유도체는 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 화학식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물은 시판되거나 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다.
공정 (c)
화학식 (VI) 및 (VII)의 화합물의 반응은 통상적으로 적합한 유기 용매 (예를 들어, 피리딘)에서 수행된다.
화학식 (VI)의 화합물은 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 화학식 (VI)의 대표적인 화합물 (즉, 여기서 n은 0이고, R4는 수소이고, R3은 메톡시이고, R1은 C(O)NH2이다)은 하기 반응식 2에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다.
반응식 2
Figure pct00016
적합한 화학식 (VII)의 화합물, 예를 들어 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드, 5-메틸-2-티오펜설포닐 클로라이드 및 5-브로모-2-티오펜설포닐 클로라이드는 시판된다.
공정 (d)
화학식 (I)의 특정 화합물들을 반응시켜 추가의 화학식 (I)의 화합물을 형성할 수 있음을 인지할 것이다. 예를 들어, R3가 C1 - 6알콕시 (예를 들어, 메톡시)인 화합물을 적합한 유기 용매에서 (예를 들어, DCM) 탈메틸화제 (예를 들어, 보론 트리브로마이드)와 반응시킴에 의해 R3가 히드록시인 상응하는 화합물로 전환시킬 수 있다.
상기 개시된 경로 (a) 내지 (d) 중 임의의 경로에서, 다양한 기 및 부분들이 분자에 도입되는 합성 단계들의 정확한 순서는 다양할 수 있음을 인지할 것이다. 공정의 한 단계에 도입되는 기 또는 부분들이 후속하는 변형 및 반응에 영향을 미치지 않음을 확실히 하고, 합성 단계의 순서를 상응하게 선택하는 것은 당업자의 기술 내에 있을 것이다.
본 발명의 추가의 측면에서, 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 염이 제공된다.
화학식 (IV) 및 (VI)의 특정 화합물이 또한 신규한 것으로 여겨지며, 따라서 본 발명의 추가 측면을 형성한다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 염은 CC 케모킨 수용체 활성, 특히 CCR4 수용체 활성의 억제제인 것으로 여겨지므로, CCR4 화합물이 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 잠재적 유용성을 지닌다.
따라서, 본 발명은 치료에 사용되는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 이용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 이용되는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
또한, CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
또한, 치료적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 피검체에서 CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
적합하게는, 치료가 필요한 피검체가 포유동물, 특히 인간이다.
본원에서 사용된 용어 "유효량"은, 예를 들어 연구원 또는 임상의가 추구하는 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도할 약물 또는 약제학적 제제의 양을 의미한다. 추가로, 용어 "치료적 유효량"은 그러한 양을 투여받지 않은 상응하는 피검체에 비해 질병, 질환 또는 부작용의 개선된 치료, 치유, 예방 또는 경감이나 질병 또는 질환의 진행율의 감소를 초래하는 임의의 양을 의미한다. 상기 용어는 또한 정상적인 생리적 기능을 개선시키기에 효과적인 양을 그 범위내에 포함한다.
CCR 길항제는 면역조절, 염증 및/또는 알레르기 질환과 같은 다양한 질병 또는 질환의 치료에 유용한 것으로 여겨진다. 예로는 천식, 만성 기관지염 및 폐기종을 포함하는 만성폐쇄폐병(COPD), 특발성 폐섬유화증, 아토피 또는 접촉성 피부염, 두드러기, 알레르기 비염 (계절성 또는 통년성), 혈관운동성 비염, 코폴립, 알레르기 결막염, 봄철 결막염, 직업 결막염, 감염 결막염, 호산구 증후군, 호산구 육아종, 건선, 류마티스 관절염, 궤양대장염, 크론병, 혈전증, 심근 및 뇌의 재관류 손상, 만성 사구체신염, 패혈증, 성인 호흡 곤란 증후군, 다발성 경화증, 기억력 장애 (알츠하이머병 포함), 통증 및 암이 있다.
CCR4 길항제는 또한 알레르기 기관지폐 아스페르길루스증, 알레르기 진균 부비동염, 진균에 민감한 심한 천식 및 침습 또는 집락형성을 포함하는 진균에 대한 병원성 역할을 수반하는 질병 (예를 들어, 침습성 아스페르길루스증, 아스페르길루스종 또는 칸디다증)과 같은 질병 또는 질환의 치료에 유용한 것으로 여겨진다.
용어 "CCR4 억제제가 처방되는 질병 또는 질환"은 상기 질병 상태 중 임의의 것 또는 이들 모두를 포함한다.
일 구체예에서, CCR4 억제제가 처방되는 질병 또는 질환은 천식, COPD, 비염, 특발성 폐섬유화증, 건선 및 접촉성 피부염으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, CCR4 억제제가 처방되는 질병 또는 질환은 천식이다.
치료에서의 사용을 위해, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 가공하지 않은 화학제품으로서 투여될 수 있으나, 활성 성분을 약제 조성물로서 제공하는 것이 일반적이다.
따라서, 본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약제 조성물을 제공한다. 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 상기에 기재된 바와 같다. 담체(들), 희석제(들) 또는 부형제(들)는 조성물의 다른 성분들과 양립할 수 있고 이의 수용체에 유독하지 않다는 점에서 조건에 맞아야 한다. 본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합시키는 것을 포함하는 약제 조성물의 제조 방법이 또한 제공된다. 약제 조성물은 본 명세서에 기재된 임의의 질환의 치료에 사용될 수 있다. 추가로, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 CCR4 억제제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제 조성물이 제공된다.
더욱이, 0.05 내지 I OOOmg의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 0.1 내지 2g의 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제 조성물이 제공된다.
화학식 (I)의 화합물을 약제 조성물로 사용하기 위해, 이들이 각각 실질적으로 순수한 형태, 예를 들어 60% 이상 순수하고, 보다 적합하게는 75% 이상 순수하며, 바람직하게는 85% 이상 순수하고,특히 98% 이상 순수한 형태 (중량을 기준으로 한 중량%)로 제공되는 것이 바람직함을 용이하게 이해할 것이다.
약제 조성물은 단위 용량 당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량 형태로 제공될 수 있다. 바람직한 단위 투여량 조성물은 활성 성분의 매일 용량 또는 서브-용량을 함유하는 것들 또는 이의 적합한 분획이다. 그러한 단위 용량은 따라서 하루에 1회를 초과하여 투여될 수 있다. 바람직한 단위 투여량 조성물은 활성 성분의, 상기 본 명세서에 언급된 매일 용량 또는 서브-용량 (하루에 1회를 초과하여 투여되는)을 함유하는 것들 또는 이들의 적합한 분획이다.
약제 조성물은 임의의 적합한 경로에 의한 투여를 위해 구성될 수 있고, 예를 들어 경구 (볼 또는 설하 포함), 직장, 흡입, 비내, 국소 (볼, 설하 또는 경피 포함), 질 또는 비경구 (피하, 근내, 정맥내 또는 진피내 포함) 경로에 의해서이다. 그러한 조성물은 약학 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 활성 성분을 담체(들) 또는 부형제(들)와 어소시에이션(association)시킴에 의해 제조될 수 있다.
일 구체예에서, 약제 조성물은 경구 투여를 위해 구성된다.
경구 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 포움(foam) 또는 휩(whip); 또는 오일-인-워터 액체 에멀젼 또는 워터-인-오일 액체 에멀젼과 같은 별개의 단위로서 제공될 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 활성 약물 성분은 경구 무독성의 약제학적으로 허용되는 비활성 담체, 예를 들어 에탄올, 글리세롤, 물 등과 조합될 수 있다. 정제 또는 캡슐로 혼입하기에 적합한 분말은 화합물을 적합한 미세 크기 (예를 들어, 미크론화에 의해)로 감소시키고, 식용 탄수화물, 예를 들어 전분 또는 만니톨과 같은 유사하게 제조된 약제학적 담체와 혼합시킴에 의해 제조될 수 있다. 풍미제, 보존제, 분산제 및 착색제가 또한 제공될 수 있다.
캡슐은 상기 개시된 대로 분말 혼합물을 제조하고, 형성된 젤라틴 싸개에 채워 넣음에 의해 제조될 수 있다. 콜로이드 실리카, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 고체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 활택제 및 윤활제를 분말 혼합물에 첨가한 다음 채우는 작업을 할 수 있다. 아가-아가, 탄산칼슘 또는 탄산나트륨과 같은 붕해제 또는 용해제를 또한 첨가하여 캡슐을 섭취할 때 약제의 이용가능성을 개선시킬 수 있다.
또한, 요망되거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 활택제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 붕해제 및 착색제를 또한 혼합물에 혼입시킬 수 있다. 적합한 결합제로는 전분, 젤라틴, 천연 당류, 예를 들어 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검, 예를 들어 아카시아, 트라가칸트 또는 소듐 알기네이트, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등이 있다. 이러한 투여 형태에 사용되는 윤활제로는 소듐 올레에이트, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등이 있다. 붕해제로는 제한 없이 전분, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토나이트, 크산탄 검 등이 있다. 정제는, 예를 들어, 분말 혼합물을 제조하고, 과립화 또는 슬러깅(slugging)하고, 윤활제와 붕해제를 첨가하고, 정제로 압착시킴에 의해 제형화된다. 분말 혼합물은, 적합하게 가루로 만든 화합물을 상기 개시된 희석제 또는 기재, 및 임의로 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴 또는 폴리비닐 피롤리돈과 같은 결합제, 파라핀과 같은 용해 지연제, 4차 염과 같은 재흡수 가속화제 및/또는 벤토나이트, 카올린 또는 디칼슘 포스페이트와 같은 흡수제와 혼합시킴에 의해 제조된다. 분말 혼합물은 이것을 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점액 또는 셀룰로직 또는 고분자 물질의 용액으로 습윤시키고, 스크린을 통해 강제시킴에 의해 과립화될 수 있다. 과립화에 대안적으로, 분말 혼합물을 정제 기계를 통해 이동시킬 수 있고, 결과물은 과립으로 부서지는 불완전하게 형성된 슬러그(slug)이다. 스테아르산, 스테아레이트 염, 탈크 또는 광유를 첨가시킴에 의해 과립을 윤활시켜 정제 형성 다이에 들러붙는 것을 막는다. 그 후, 윤활된 혼합물을 정제로 압착시킨다. 본 발명의 화합물을 또한 자유 흐름 비활성 담체와 조합시키고, 과립화 또는 슬러깅 단계를 거치지 않고 바로 정제로 압착시킬 수 있다. 셀랙의 밀봉 코트, 당류 또는 고분자 물질의 코팅 및 왁스의 광택 코팅으로 구성된 투명하거나 불투명한 보호 코팅을 제공할 수 있다. 다른 단위 용량과 구별하기 위해 이러한 코팅제에 색소를 첨가할 수 있다.
용액, 시럽 및 엘릭시르와 같은 경구 유체를 투여 단위 형태로 제조할 수 있어서, 제공된 양이 소정량의 화합물을 함유한다. 시럽은 화합물을 적합하게 맛을 낸 수용액에 용해시킴에 의해 제조될 수 있는 반면, 엘릭시르는 무독성 알코올 비히클을 이용하여 제조된다. 현탁액은 화합물을 무독성 비히클에 분산시킴에 의해 제형화될 수 있다. 용해제 및 에멀젼화제, 예를 들어 에톡실화된 이소스테아릴 알코올 및 폴리옥시 에틸렌 소르비톨 에테르, 보존제, 풍미 첨가제, 예를 들어 페퍼민트 오일 또는 천연 감미제 또는 사카린 또는 다른 인공 감미제 등을 또한 첨가할 수 있다.
적합한 경우, 경구 투여용 투여 단위 조성물은 미세캡슐화될 수 있다. 제형은 또한 방출을 연장하거나 계속하도록 제조될 수 있는데, 예를 들어 미립자 물질을 폴리머, 왁스 등으로 코팅하거나 임베딩(embedding)함에 의해서이다. 본 발명의 화합물은 또한 리포좀 전달 시스템, 예를 들어 소형 단층 소낭, 대형 단층 소낭 및 다층 소낭의 형태로 투여될 수 있다. 리포좀은 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린과 같은 다양한 인지질로부터 형성될 수 있다.
경피 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 수용체의 표피와 연장된 기간 동안 친밀한 접촉을 유지하기 위한 분리된 패치로서 제공될 수 있다.
국소 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 연고, 크림, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일로서 제형화될 수 있다.
눈 또는 기타 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부의 치료를 위해, 조성물은 바람직하게는 국소 연고 또는 크림으로서 적용된다. 연고로 제형화될 때, 활성 성분은 파라핀 또는 수혼화성 연고 기재와 함께 사용될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 오일-인-워터 크림 기재 또는 워터-인-오일 기재와 함께 크림으로 제형화될 수 있다.
눈으로의 국소 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 점안제를 포함하는데, 여기서 활성 성분은 적합한 담체, 특히 수성 용매에 용해되거나 현탁된다.
입의 국소 투여를 위해 구성된 약제 조성물로는 로젠지, 정제(pastill) 및 마우스 워시가 있다.
직장 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 좌제 또는 관장제로서 제공될 수 있다.
코 또는 흡입 투여를 위한 투여 형태는 편리하게는 에어로졸, 용액, 현탁액, 겔 또는 건조 분말로서 제형화될 수 있다.
흡입 투여에 적합하고/거나 이를 위해 구성된 조성물의 경우, 본 발명의 화합물은 입자-크기-감소된 형태인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 크기-감소된 형태가 미크론화에 의해 수득되거나 수득될 수 있다. 크기-감소된 (예를 들어, 미크론화된) 화합물 또는 염의 바람직한 입자 크기는 약 0.5 내지 약 10 미크론의 D50 값으로 정의된다 (예를 들어, 레이저 회절에 의해 측정됨).
예를 들어, 흡입 투여되는 에어로졸 조성물은 약제학적으로 허용되는 수성 또는 비-수성 용매 중에 활성 물질의 용액 또는 미세 현탁액을 포함할 수 있다. 에어로졸 제형은 밀봉된 컨테이너에서 살균된 형태로 단일 또는 다중용량으로 제공될 수 있는데, 상기 컨테이너는 카트리지의 형태일 수 있거나 사용을 위해 분무(atomising) 장치 또는 흡입기로 보충될 수 있다. 대안적으로, 밀봉된 컨테이너는 일단 컨테이너의 내용물이 고갈되면 처분할 목적인, 계측 밸브가 장착된 단일 용량 비내 흡입기 또는 에어로졸 디스펜서 (계량식 흡입기)와 같은 단일의 분배용 장치일 수 있다.
투여 형태가 에어로졸 디스펜서를 포함하는 경우, 이것은 압력하에 가압 공기, 이산화탄소 또는 유기 추진제, 예를 들어 하이드로플루오로카본(HFC)와 같은 적합한 추진제를 함유하는 것이 바람직하다. 적합한 HFC 추진제로는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄이 있다. 에어로졸 투여 형태는 또한 펌프-분무기의 형태일 수 있다. 가압된 에어로졸은 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있다. 이들은 현탁 제형의 분산 특성 및 균질성을 개선시키기 위해 보조-용매 및/또는 계면활성제와 같은 추가의 부형제의 혼입을 필요로 할 수 있다. 용액 제형에는 또한 에탄올과 같은 보조-용매의 첨가가 필요할 수 있다. 예를 들어, 제형의 안정성 및/또는 맛 및/또는 미세 입자 질량 특성 (양 및/또는 프로필)을 개선시키기 위해 다른 부형제 변형제가 또한 혼입될 수 있다.
흡입 투여에 적합하고/거나 이를 위해 구성된 조성물의 경우, 약제 조성물은 흡입가능한 건조 분말 조성물인 것이 바람직하다. 그러한 조성물은 락토오스, 글루코스, 트레할로스, 만니톨 또는 전분과 같은 분말 기재, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염이나 용매화물 (바람직하게는 입자-크기 감소된 형태, 예를 들어 미크론화된 형태), 및 임의로 성능 변형제, 예를 들어 L-류신 또는 또 다른 아미노산 및/또는 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트와 같은 스테아르산의 금속염을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 흡입가능한 건조 분말 조성물은 락토오스 및 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염의 건조 분말 배합물(blend)을 포함한다. 락토오스는 락토오스 수화물, 예를 들어 락토오스 일수화물인 것이 바람직하고/거나 흡입-등급 및/또는 미세-등급 락토오스인 것이 바람직하다. 바람직하게는, 락토오스의 입자 크기는 직경이 1000 미크론 (마이크로미터) 이하인 (예를 들어, 10-1000 미크론, 예를 들어 30-1000 미크론) 90% 이상 (중량% 또는 부피%)의 락토오스 입자, 및/또는 직경이 500 미크론 이하인 (예를 들어, 10-500 미크론) 50% 이상의 락토오스 입자로 정의된다. 보다 바람직하게는, 락토오스의 입자 크기는 직경이 300 미크론 이하인 (예를 들어, 10-300 미크론, 예를 들어 50-300 미크론) 90% 이상의 락토오스 입자, 및/또는 직경이 100 미크론 이하인 50% 이상의 락토오스 입자로 정의된다. 임의로, 락토오스의 입자 크기는 직경이 100-200 미크론 이하인 90% 이상의 락토오스 입자, 및/또는 직경이 40-70 미크론 이하인 50% 이상의 락토오스 입자로 정의된다. 보다 중요하게는, 입자의 약 3 내지 약 30% (예를 들어, 약 10%) (중량% 또는 부피%)가 50 미크론 이하 또는 20 미크론 이하의 직경인 것이 바람직하다. 예를 들어, 비제한적으로, 적합한 흡입-등급 락토오스는 E9334 락토오스 (10% 미세도(fines)) (Borculo Domo Ingredients, Hanzeplein 25, 8017 JD Zwolle, Netherlands)이다.
임의로, 특히 흡입가능한 건조 분말 조성물의 경우, 흡입 투여되는 약제 조성물은 적합한 흡입 장치 안쪽의 스트립 또는 리본에 세로로 탑재된 다수의 밀봉된 용량 컨테이너 (예를 들어, 건조 분말 조성물 포함)로 혼입될 수 있다. 컨테이너는 요구에 따라 떠뜨릴 수 있거나 벗겨낼(peel-openable) 수 있으며, 예를 들어 건조 분말 조성물의 용량을 글락소스미스클라인에 의해 시판되는 DISKUS™ 장치와 같은 장치를 통해 흡입에 의해 투여할 수 있다. DISKUS™ 흡입 장치는 예를 들어 GB 2242134 A에 개시되어 있고, 이러한 장치에서 분말 형태의 약제 조성물에 대한 하나 이상의 컨테이너 (컨테이너 또는 컨테이너들은 스트립 또는 리본에 세로로 탑재된 다수의 밀봉된 용량 컨테이너이다)는 두 부재 중 하나가 또 다른 하나에 대해 벗겨질 수 있게 고착되어 있는 두 부재 사이에 형성된다; 상기 장치는 상기 컨테이너 또는 컨테이너들의 개방 부위를 형성하는 수단; 개방 부위에 있는 부재들이 따로 벗겨져서 컨테이너를 개방하기 위한 부재; 및 개방된 컨테이너와 이어진 출구로서, 이를 통해 사용자가 개방된 컨테이너로부터의 약제 조성물을 분말 형태로 흡입할 수 있게 하는 출구를 포함한다.
본 발명의 화합물은 유체 디스펜서, 예를 들어 분배용 노즐 또는 분배용 오리피스가 구비되고 사용자의 힘이 가해질 때 이를 통해 계측된 양의 유체 제형이 유체 디스펜서의 펌프 메커니즘으로 분배되는 유체 디스펜서로부터 전달되는 유체 제형으로서 제형화될 수 있다. 그러한 유체 디스펜서는 일반적으로 유체 제형의 다수의 계측된 용량의 저장소를 구비하여 제공되며, 상기 용량들은 일련의 펌프 작동시에 분배될 수 있다. 분배용 노즐 또는 오리피스는 유체 제형을 비강으로 분무 분배하기 위해 사용자의 콧구멍에 삽입되도록 형성될 수 있다. 상기 언급된 유형의 유체 디스펜서가 WO-A-2005/044354호에 개시되고 도시되어 있고, 그 전문이 본 명세서에 참조로서 포함된다. 디스펜서는 유체 제형을 함유하기 위해 컨테이너 상에 탑재된 압축 펌프를 지니는 유체 방출 장치를 수용하는 하우징을 지닌다. 상기 하우징은 하나 이상의 손가락-작동가능한 측면 레버를 지니는데, 이것은 하우징에 대해 안쪽으로 움직일 수 있어서 컨테이너를 하우징에서 위로 왕복 운동(cam)시킬 수 있으므로 펌프가 압축되도록 하여 계측된 용량의 제형을 하우징의 코 노즐을 통해 펌프 줄기 밖으로 펌핑시킨다. 특히 바람직한 유체 디스펜서는 WO-A-2005/044354호의 도면 30-40에 도시된 일반적인 유형이다.
질 투여를 위해 구성된 약제학적 조성물은 페서리. 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 포움 또는 스트레이 제형으로서 제공될 수 있다.
비경구 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 항산화제, 완충제, 정균제 및 조성물이 의도하는 수용체의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 살균 주입액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 살균 현탁액을 포함한다. 조성물은 단위-용량 또는 다중-용량 컨테이너, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 무균 액체 담체, 예를 들어 주입용 물의 첨가만이 필요한 동결-건조된 (냉동건조된) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주입 용액 및 현탁액이 무균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물의 치료적 유효량은, 예를 들어 피검체의 연령 및 체중, 치료를 필요로 하는 정확한 질환 및 이의 중증도, 제형의 특성 및 투여 경로를 포함하는 다수의 인자에 의존할 것이고, 궁극적으로 주치의 또는 수의사의 판단에 따를 것이다. 약제 조성물에서, 경구 또는 비경구 투여를 위한 각 투여 단위는 바람직하게는 0.01 내지 3000 mg, 보다 바람직하게는 0.5 내지 1000 mg의 유리 염기로서 산출된 본 발명의 화합물을 함유한다. 비내 또는 흡입 투여를 위한 각 투여 단위는 바람직하게는 0.001 내지 50 mg, 보다 바람직하게는 0.01 내지 5 mg의 유리 염기로서 산출된 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유한다.
약제학적으로 허용되는 본 발명의 화합물은 유리 염기로서 산출된 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 매일 용량 (성인 환자의 경우), 예를 들어 일당 0.01 mg 내지 3000 mg 또는 0.5 내지 1000 mg의 경구 또는 비경구 용량, 또는 일당 0.001 내지 50 mg 또는 0.01 내지 5 mg 의 비내 또는 흡입 용량으로 투여될 수 있다. 상기 양은 총 매일 용량이 동일하도록 일당 단일 용량 또는 보다 일반적으로 일당 다수의 (예를 들어, 2회, 3회, 4회, 5회 또는 6회) 서브-용량으로 제공될 수 있다. 이의 염의 유효량은 화학식 (I)의 화합물 자체의 유효량의 비율로서 결정될 수 있다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 사용될 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 조합 요법은 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하고, 하나 이상의 다른 약제학적으로 활성인 제제를 이용하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 조합 요법은 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 하나 이상의 다른 약제학적으로 활성인 제제를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 화합물(들) 및 다른 약제학적으로 활성인 제제(들)를 단일의 약제 조성물과 함께 또는 별도로 투여할 수 있고, 별도로 투여할 때, 이것은 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 수행될 수 있다. 요망되는 조합된 치료 효과를 달성하기 위해 본 발명의 화합물(들) 및 다른 약제학적으로 활성인 제제(들)의 양과 상대적인 투여 타이밍을 선택할 것이다. 따라서, 추가의 측면에서, 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 약제학적으로 활성인 제제를 포함하는 조합물이 제공된다.
따라서, 일 측면에서, 본 발명에 따른 화합물 및 약제 조성물을 하나 이상의 다른 치료제, 예를 들어 항-염증제 (스테로이드 포함), 항콜린성 제제 (바람직하게는 M1/M2/M3 수용체 길항제), β2-아드레날린수용체 효능제, 항-알레르기제, 항감염제 (예를 들어, 항생제 또는 항바이러스제), 또는 항히스타민제로부터 선택된 치료제와 함께 이용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 예를 들어 코르티코스테로이드 또는 NSAID와 같은 항-염증제, 항콜린성 제제, β2-아드레날린수용체 효능제, 항-알레르기제, 항감염제 (예를 들어, 항생제 또는 항바이러스제) 또는 항히스타민제로부터 선택된 하나 이상의 다른 치료적으로 활성인 제제와 함께 포함하는 조합 약제 생성물을 제공한다.
본 발명의 화합물을 보통 흡입, 정맥내, 경구 또는 비내 경로에 의해 투여되는 다른 치료제와 함께 투여할 때, 생성된 약제 조성물이 동일한 경로에 의해 투여될 수 있음을 인지할 것이다. 대안적으로, 조성물의 개개 성분들은 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구체예는 하나 이상의 다른 치료제를 포함하는 조합물을 포함한다.
적합한 항-염증제로는 코르티코스테로이드가 있다. 항-염증 코르티코스테로이드는 당 분야에 널리 공지되어 있다. 대표적인 예로는 플루티카손 프로피오네이트, 베클로메타손 17-프로피오네이트 에스테르, 베클로메타손 17,21-디프로피오네이트 에스테르, 덱사메타손 또는 이들의 에스테르, 모메타손 또는 이들의 에스테르 (예를 들어, 모메타손 푸로에이트), 시클레소니드, 부데소니드, 플루니솔리드, 메틸 프레드니솔론, 프레드니솔론, 및 덱사메타손이 있다. 항-염증 코르티코스테로이드의 추가의 예가 WO 02/12266 A1 (Glaxo Group Ltd)에 기재되어 있고, 특히 실시예 1 (6α,9α-디플루오로-17α-[(2-푸라닐카르보닐)옥시]-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르) 및 실시예 41 (6α,9α-디플루오로-11β-히드록시-16α-메틸-17α-[(4-메틸-1,3-티아졸-5-카르보닐)옥시]-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.
β2-아드레날린수용체 효능제의 예로는 살메테롤 (예를 들어, 라세미체 또는 R-거울상이성질체와 같은 단일 거울상이성질체), 살부타몰, 포르모테롤, 살메파몰, 페노테롤 또는 테르부탈린 및 이들의 염이 있고, 예를 들어 살메테롤의 시나포에이트 염, 살부타몰의 설페이트 염 또는 유리 염기 또는 포르모테롤의 푸마트레이트 염이 있다. 일 구체예에서, B2-아드레날린수용체 효능제는 장기-작용성 B2-아드레날린수용체 효능제이고, 예를 들어 24시간의 기간에 걸쳐 치료 효과를 지니며, 예를 들어 살메테롤 또는 포르모테롤이다. β2-아드레날린수용체 효능제의 추가의 예는 화합물 4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2,6-디클로로페닐)메티옥시]에톡시}헥실)아미노]-1-히드록시에틸}-2-(히드록시에틸)페놀 트리페닐아세테이트 (빌란테롤 트리페나테이트)이다.
화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용될 수 있는 항콜린성 화합물의 예가 WO 03/011274 A2 및 WO 02/069945 A2/US 2002/0193393 A1 및 US 2002/052312 A1에 개시되어 있다. 예를 들어, 항콜린성 제제로는 무스카린 수용체 길항제, 특히 M1 또는 M3 수용체의 길항제, M1/M3 또는 M2/M3 수용체의 이중 길항제 또는 M1/M2/M3 수용체의 판(pan) 길항제인 화합물, 예를 들어 이프라트로피움 브로마이드, 옥시트로피움 브로마이드 또는 티오트로피움 브로마이드가 있다.
본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있는 항히스타민제는 예를 들어 메타피릴렌 또는 H1 길항제일 수 있다. H1 길항제의 예로는 비제한적으로 아멜레사녹스(amelexanox), 아스테미졸(astemizole), 아자타딘(azatadine), 아젤라스틴(azelastine), 아크리바스틴(acrivastine), 브롬페니라민(brompheniramine), 세티리진(cetirizine), 레보세티리진(levocetirizine), 에플레티리진(efletirizine), 클로르페니라민(chlorpheniramine), 클레마스틴(clemastine), 시클리진(cyclizine), 카레바스틴(carebastine), 시프로헵타딘(cyproheptadine), 카르비녹사민(carbinoxamine), 데스카르보에톡실로라타딘(descarboethoxyloratadine), 독실아민(doxylamine), 디메틴덴(dimethindene), 에바스틴(ebastine), 에피나스틴(epinastine), 에플레티리진(efletirizine), 펙소페나딘(fexofenadine), 히드록시진(hydroxyzine), 케토티펜(ketotifen), 로라타딘(loratadine), 레보카바스틴(levocabastine), 미졸라스틴(mizolastine), 메퀴타진(mequitazine), 미안세린(mianserin), 노베라스틴(noberastine), 메클리진(meclizine), 노라스테미졸(norastemizole), 올로파타딘(olopatadine), 피쿠마스트(picumast), 피릴아민(pyrilamine), 프로메타진(promethazine), 테르페나딘(terfenadine), 트리펠렌아민(tripelennamine), 테멜라스틴(temelastine), 트리메프라진(meprazine) 및 트리프롤리딘(tirprolidine)이 있고, 특히 세티리진, 레보세티리진, 에플레티리진 및 펙소페나딘이다. 추가의 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 H3 길항제 (및/또는 역 효능제)와 함께 포함하는 조합물을 제공한다. H3 길항제의 예로는, 예를 들어 WO2004/035556 및 WO2006/045416에 기재된 화합물들이 있다.
다른 적합한 조합물은, 예를 들어 본 발명의 화합물을 다른 항-염증제, 예를 들어 항-염증 코르티코스테로이드; 또는 비-스테로이드 항-염증 약물 (NSAID), 예를 들어 류코트리엔 길항제 (예를 들어, 몬테루카스트), iNOS 억제제, 트립타제 억제제, IKK2 억제제, p38 억제제, Syk 억제제, 엘라스타제 억제제, 베타-2 인테그린 길항제, 아데노신 a2a 효능제, 케모킨 길항제, 예를 들어 CCR3 길항제, 매개체 방출 억제제, 예를 들어 소듐 크로모글리케이트, 5-리폭시게나제 억제제, DP1 길항제, DP2 길항제, CTTh2 억제제, pI3K 델타 억제제, ITK 억제제, LP (리소포스파티딕) 억제제 및 FLAP (5개 리폭시게나제 활성화 단백질) 억제제와 함께 포함하는 조합물을 포함한다.
다른 적합한 조합물은 본 발명의 화합물을 항-감염제 (예를 들어, 항생제 또는 항바이러스제), 항-고혈압제, 항혈전제, 스타틴 또는 콜린에스테라제 억제제와 함께 포함한다.
상기 언급된 조합물은 약제 조성물의 형태로 사용을 위해 편리하게 제공될 수 있으므로, 상기 정의된 조합물을 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약제 조성물이 본 발명의 추가의 측면을 나타낸다.
일 측면에서, 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 β2-아드레날린수용체 효능제 및 항-염증 코르티코스테로이드와 함께 포함하는 소위 "3중 조합" 요법을 제공한다. 바람직하게는 상기 조합은 천식, COPD 또는 알레르기 비염의 치료 및/또는 예방을 위한 것이다. β2-아드레날린수용체 효능제 및/또는 항-염증 코르티코스테로이드는 상기 및/또는 WO 03/030939 A1에 개시된 바와 같을 수 있다. 그러한 "삼중" 조합의 대표적인 예는 본 발명의 화합물, 살메테롤 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 (예를 들어, 살메테롤 시나포에이트) 및 플루티카손 프로피오네이트를 포함한다. "3중" 조합의 추가의 대표적인 예는 본 발명의 화합물, 4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2,6-디클로로페닐)메톡시]에톡시}헥실)아미노]-1-히드록시에틸}-2-(히드록시에틸)페놀 트리페닐아세테이트 (빌란테롤 트리페나테이트) 및 6α,9α-디플루오로-17α-[(2-푸라닐카르보닐)옥시]-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르 (플루티카손 푸로에이트)를 포함한다.
류마티스 관절염 (RA)은 조합 요법이 고려될 수 있는 추가의 염증 질환이다. 따라서, 추가의 측면에서, 본 발명은 류마티스 관절염을 치료하는데 유용한 추가의 치료제와 함께 본 발명의 화합물을 제공하고, 상기 조합은 류마티스 관절염의 치료에 유용하다.
본 발명에 따른 화합물 및 약제 조성물은 예를 들어 NSAIDS, 코르티코스테로이드, COX-2 억제제, 시토킨 억제제, 항-TNF 제제, 온코스타틴 M의 억제제, 항-말라리아제, 면역억제제 및 세포증식억제제로부터 선택된 하나 이상의 다른 치료제와 함께 이용되거나 이들을 포함할 수 있다.
항-TNF 제제로는 인플릭시맙(infliximab) (Remicade), 에타너셉트(etanercept) (Enbrel) 및 아달리뭄(adalimum) (Humira)이 있다. 다른 "생물학적" 치료제는 아나킨라(anakinra) (Kineret), 리툭시맙(Rituximab), 림포스타트(Lymphostat)-B, BAFF/APRIL 억제제 및 CTLA-4-Ig 또는 이들의 유사체를 포함한다. 다른 시토킨 억제제로는 레플루오노미드(lefluonomide) (Arava)가 있다. 추가로 제2 라인의 약물로는 금 제조물 (오라노핀(Auranofin) (Ridaura tablets) 또는 오로티오말레이트(Aurothiomalate) (Myocrisin injection)), 말라리아에 사용되는 약제: (히드록시클로로퀸 (Plaquenil)), 면역 시스템을 억제하는 약제 (아자티오프린(Azathioprine) (Imuran, Thioprine), 메토트렉세이트 (Methoblastin, Ledertrexate, Emethexate), 시클로스포린 (Sandimmun, Neoral), 시클로포스파미드 (Cycloblastin), 시톡산, 엔독산), D-페니실라민 (D-Penamine), 설파살라진 (Salazopyrin), 비스테로이드 항 염증 약물 (아스피린 및 이브루펜 포함)이 있다.
적합한 경우, 치료 성분의 활성 및/또는 안정성 및/또는 물리적 특성, 예를 들어 용해성을 최적화하기 위해, 다른 치료 성분(들)이 염의 형태, 예를 들어 알칼리 금속 또는 아민 염 또는 산 부가염, 또는 프로드럭, 또는 에스테르, 예를 들어 저급 알킬 에스테르, 또는 용매화물, 예를 들어 수화물의 형태로 사용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 또한, 적합한 경우, 치료 성분이 광학적으로 순수한 형태로 사용될 수 있음이 명백할 것이다.
상기 언급된 조합물은 편리하게는 약제 조성물의 형태로 사용을 위해 제공될 수 있으므로, 상기 정의된 조합물을 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약제 조성물이 본 발명의 추가의 측면을 나타낸다.
그러한 조합물의 개개 화합물들은 분리되거나 조합된 약제 조성물로 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 개개 화합물을 조합된 약제 조성물로 동시에 투여할 것이다. 공지된 치료제의 적합한 용량들이 당업자에게 용이하게 인지될 것이다.
전반적인 실험 세부사항
분석적 LCMS
하기 시스템 A 내지 F 중 하나에서 분석적 LCMS를 수행하였다.
모든 시스템에 대한 UV 검출은 220 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 시그널이었고, 질량 스펙트럼을 교대-스캔 포지티브 및 네거티브 방식 전기분무 이온화를 이용하여 질량 분광계 상에 기록하였다.
본 명세서에 언급된 LCMS 시스템 A-F의 실험적 세부사항은 다음과 같다:
시스템 A
컬럼: 50 mm x 2.1 mm ID, 1.7 ㎛ Acquity 울트라 성능 액체 크로마토그래피 (UPLC) BEH C18
유속: 1 mL/분
온도: 40℃
용매: A: 물 중의 0.1% v/v 포름산
B: 아세토니트릴 중의 0.1 % v/v 포름산
구배: 시간(분) A% B%
0 97 3
1.5 0 100
1.9 0 100
2.0 97 3
시스템 B
컬럼: 30 mm x 4.6 mm ID, 3.5 ㎛ Sunfire C18 컬럼
유속: 3 mL/분
온도: 30℃
용매: A: 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액
B: 아세토니트릴 중의 0.1 % v/v 포름산 용액
구배: 시간(분) A% B%
0 97 3
0.1 97 3
4.2 0 100
4.8 0 100
4.9 97 3
5.0 97 3
시스템 C
컬럼: 50 mm x 4.6 mm ID, 3.5 ㎛ XBridge C18 컬럼
유속: 3 mL/분
온도: 30℃
용매: A: 암모니아 용액을 이용하여 pH10으로 조정된 물 중의 10 mM 암모늄 비카르보네이트
B: 아세토니트릴
구배: 시간(분) A% B%
0 99 1
0.1 99 1
4.0 3 97
5.0 3 97
시스템 D
컬럼: 50 mm x 2.1 mm ID, 1.7 ㎛ Acquity UPLC BEH C18
유속: 1 mL/분
온도: 40℃
용매: A: 물 중의 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
B: 아세토니트릴 중의 0.1 % v/v 트리플루오로아세트산 용액
구배: 시간(분) A% B%
0 97 3
1.5 0 100
1.9 0 100
2.0 97 3
시스템 E
컬럼: 30 mm x 4.6 mm ID, 3.5 ㎛ Sunfire C18 컬럼
유속: 3 mL/분
온도: 30℃
용매: A: 물 중의 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
B: 아세토니트릴 중의 0.1 % v/v 트리플루오로아세트산 용액
구배: 시간(분) A% B%
0 97 3
0.1 97 3
4.2 0 100
4.8 0 100
4.9 97 3 5.
5.0 97 3
시스템 F
컬럼: 50 mm x 2.1 mm ID, 1.7 ㎛ Acquity UPLC BEH C18 컬럼
유속: 1 mL/분
온도: 40℃
용매: A: 암모니아 용액을 이용하여 pH10으로 조정된 물 중의 10 mM 암모늄 비카르보네이트
B: 아세토니트릴
구배: 시간(분) A% B%
0 99 1
1.5 3 97
1.9 3 97
2.0 0 100
질량 유도된 오토 - 분취용 HPLC
미정제 생성물을 하기 방법 A-D 중 하나에 의해 MDAP HPLC에 의해 정제하였다. 달리 언급되지 않는 한 전개 시간은 15분이었다. 모든 방법에 대한 UV 검출은 220 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 시그널이었고, 질량 스펙트럼을 교대-스캔 포지티브 및 네거티브 방식 전기분무 이온화를 이용하여 질량 분광계 상에 기록하였다.
방법 A:
방법 A를 Sunfire C18 컬럼 (통상적으로 150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 주위 온도에서 수행하였다. 하기 용매를 사용하였다:
A = 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액
하기 구배를 이용하였다:
Figure pct00017
방법 B:
방법 B를 Sunfire C18 컬럼 (통상적으로 150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 주위 온도에서 수행하였다. 하기 용매를 사용하였다:
A = 물 중의 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
B = 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
하기 구배를 이용하였다:
Figure pct00018
방법 C:
방법 C를 XBridge C18 컬럼 (통상적으로 150 mm x 19 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 주위 온도에서 수행하였다. 하기 용매를 사용하였다:
A = 암모니아 용액을 이용하여 pH10으로 조정된 10 mM 수성 암모늄 비카르보네이트
B = 아세토니트릴.
하기 구배를 이용하였다:
Figure pct00019
방법 D:
방법 D를 ATLANTIS dC18 컬럼 (통상적으로 100 mm x 19 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 수행하였다. 하기 용매를 사용하였다:
A = 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액
B= 95% 아세토니트릴 및 5% 물 중의 0.05% v/v 포름산 용액.
하기 구배를 이용하였다:
Figure pct00020
방법 E:
방법 E를 Sunfire C18 컬럼 (통상적으로 100 mm x 19 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 수행하였다. 하기 용매를 사용하였다:
A = 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액
B= 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액.
하기 구배를 이용하였다:
Figure pct00021
약어
하기 목록은 본 명세서에서 사용된 특정 약어의 정의를 제공한다. 이러한 목록이 전부는 아니며, 본 명세서에서 하기 정의되지 않은 약어들의 의미가 당업자에게 용이하게 자명할 것이다.
Ac (아세틸)
Bu (부틸)
CV (컬럼 부피)
DCM (디클로로메탄)
DEAD (디에틸 아조디카르복실레이트)
DIAD (디이소프로필 아조디카르복실레이트)
DIBAL-H (디이소부틸알루미늄 히드라이드)
DMF (N,N-디메틸포름아미드)
DMSO (디메틸설폭사이드)
Et (에틸)
EtOAc (에틸 아세테이트)
h (시간/시간)
HATU [O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HCl (염산)
L (리터)
M (몰)
MDAP (질량 유도된 오토-분취용 HPLC)
Me (메틸)
MeOH (메탄올)
NOE (핵 오버하우저 효과, nuclear overhauser effect)
Ph (페닐)
iPr (이소프로필)
Si (실리카)
SEM ({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시)}메틸)
SPE (고형물상 추출)
TBAD (3차-부틸 아조디카르복실레이트)
TBD (1,3,4,6,7,8-헥사하이드로-2H-피리미도[1,2-a]피리미딘)
TBTU [O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트]
TEA (트리에틸아민)
TFA (트리플루오로아세트산)
THF (테트라하이드로푸란)
TLC (박막 크로마토그래피)
TMS (트리메틸실릴)
에테르에 대한 모든 언급은 디에틸 에테르이고, 식염수는 NaCl의 포화 수용액을 지칭한다.
중간체 1
4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00022
n-부탄올 (100 mL) 중의 2-플루오로-6-(메틸옥시)벤조니트릴 (Apollo에서 시판됨) (10 g, 66 mmol) 및 히드라진 수화물 (9.63 mL, 198 mmol)의 혼합물을 질소하에 18시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물이 냉각되게 하고, 물 (300 mL)을 첨가하고, 유기상을 제거하였다. 수성상 중의 고형물을 여과에 의해 수집하고, 진공에서 4O℃에서 건조시켜 백색 고형물 (0.6g)을 수득하였다. 부탄올 상을 진공에서 증발시키고, 잔류물과 수성 모액을 합치고, 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)를 이용하여 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공으로 증발시켰다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 100g 실리카 카트리지에 적용시켰다. 이것을 시클로헥산 (500 ml), 시클로헥산-에틸 아세테이트 (1:1 v/v, 500 mL) 및 에틸 아세테이트 (500 mL)로 용리시켰다. 필요한 분획을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (9.92 g, 92%)을 오프-화이트(off-white) 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.5분, ES+ve m/z 164 (M+H)+.
중간체 2
3-{[3-아미노-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤조니트릴
Figure pct00023
DMSO (300 mL) 중의 분쇄된 수산화칼륨 (6.75 g, 120 mmol)의 용액에 실온에서 질소하에 4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 1)(7.85 g, 48.1 mmol)을 첨가하고, 짙은 적색 용액을 수득하였다. 5분 후에, 3-(클로로메틸)벤조니트릴 (8.84 g, 58.3 mmol)을 한 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반한 다음 물 (500 mL)에 부어, 에멀젼을 형성하였다. 이것을 클로로포름 (3x500mL)을 이용하여 추출하였다. 합친 유기 용액을 물 (400 mL)로 세척하고, 소수성 프릿(frit)을 통해 통과시켰다. 용매를 진공으로 제거하고, 잔류물을 34Og 실리카 카트리지에 적용시키고, 8CV 이상의 시클로헥산 중의 0-100% 에틸 아세테이트 구배를 이용하여 용리시켰다. 오렌지색 고형물을 수득하였고, 이것을 에틸 아세테이트 (10 mL) 및 시클로헥산 (90 mL)으로 처리하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 시클로헥산 (50 mL)으로 세척하였다. 고형물을 진공에서 건조시켜 표제 화합물 (7.89 g, 59%)을 연한 오렌지색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.93분, ES+ve m/z 279 (M+H)+.
중간체 3
5- 클로로 -N-[1-[(3- 시아노페닐 ) 메틸 ]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00024
3-{[3-아미노-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 2) (7.89 g, 28.3 mmol)을 피리딘 (9.17 mL, 113 mmol) 중의 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (Aldrich)(6.15 g, 28.3 mmol)의 용액에 질소하에 실온에서 첨가하였다. 반응은 발열성이었고, 짙은 적색이 되었다. 40분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 2N 염산 (500 mL) 사이에서 분리시켰다. 수성상을 에틸 아세테이트 (400 mL)로 세척하였다. 합친 유기 용액을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공으로 증발시켰다. 짙은 적색 잔류물을 DCM에 용해시키고, 34Og 실리카 카트리지에 적용시켰다. 카트리지를 8CV 이상의 디클로로메탄 중의 0-10% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시켰다. 적합한 분획들의 증발로 표제 화합물 (11.1 g, 85%)을 오프-화이트 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.15분, ES+ve m/z 459/461 (M+H)+.
중간체 4
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2-티 오펜설폰아미 드 하이드로 클로라이드
Figure pct00025
O℃로 냉각된 THF (150 mL) 중의 5-클로로-N-[1-[(3-시아노페닐)메틸]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 3) (11.1 g, 24.2 mmol)의 용액에 10℃ 미만의 온도를 유지하면서 에테르 중의 1.0M 리튬 알루미늄 히드라이드 (60.5 mL, 60.5 mmol) 용액을 적가하였고, 거품이 발생하였으며, 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (7 mL)에 이어 수산화나트륨의 2.0M 용액 (42.5 mL)의 첨가에 의해 켄칭시켰다. 30분간 교반시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 제거하고, THF로 세척하였다. 합친 여액과 세척물을 14Og SCX 실리카로 처리하였다. 이것을 여과하고 메탄올 (1 L)로 세척한 다음, 메탄올 (2 L) 중의 10% 2N 염산으로 세척하였다. 필요한 분획들을 합치고 농축시켰다. 생성된 고형물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하였다. 고형물을 진공에서 건조시켜 표제 화합물 (N7916-76-1) (9.3 g, 77%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.85분, ES+ve m/z 463/465 (M+H)+.
중간체 5
1,1-디메틸에틸 3-아미노-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1- 카르복실레이트
Figure pct00026
DCM (30 mL) 중의 4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (5.56 g, 34 mmol), DMAP (2.08 g, 17 mmol) 및 트리에틸아민 (4.75 mL, 34 mmol)의 용액에 0℃에서 DCM (20 mL) 중의 디-3차-부틸 디카르보네이트 (7.44 g, 34 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 50 mL의 식염수를 첨가하였다. 유기층을 분배시키고, 수성상을 50 mL의 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기 용액을 합치고, 식염수 (100 mL)로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 미정제 고형물을 50 mL의 Et2O로 분말화하고, 여액을 감압하에 농축시키고, 다시 20 mL의 Et2O로 분말화시켰다. 고형물을 합쳐 표제 화합물 (8.97 g, 67%)을 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 이용하였다. LCMS (시스템 B) RT=2.9분, ES+ve m/z 264 (M+H)+.
중간체 6
1,1-디메틸에틸 3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1- 카르복실레이트
Figure pct00027
DCM (30 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 3-아미노-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 5) (6.03 g, 22.9 mmol) 및 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (3.07 mL, 22.9 mmol)의 용액에 DCM 중의 피리딘 (3.7 mL, 46 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 교반하며 2시간에 걸쳐 0℃에서 실온으로 가온되게 한 다음, 주말에 걸쳐 실온에서 교반시켰다. 피리딘 (50 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 추가로 24시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 50 mL의 포화된 NaHCO3 용액으로 켄칭시켰다. 유기층을 분배시키고, 수성층을 50 mL의 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기 용액을 합치고, 물 (50 mL)에 이서 식염수 (50 mL)로 세척한 다음, 소수성 프릿으로 건조시켰다. 미정제 생성물을 Flashmaster에서 두 개의 100g Si 카트리지 상에서 DCM 중의 0 내지 25%의 EtOAc 구배로 용리시키며 크로마토그래피에 의해 60분에 걸쳐 정제시켜 요망되는 생성물을 연한 오렌지색 고형물 (2.21 g, 22%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.35분, ES+ve m/z 444 (M+H)+.
중간체 7
1,1-디메틸에틸 3-[[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]({[2-( 트리메틸실릴 )에틸] 옥시 } 메틸 )아미노]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1- 카르복실레이트
Figure pct00028
DCM (20 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 6) (2.21 g, 4.98 mmol)의 용액에 0℃에서 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 (1.23 mL, 6.97 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 적가식으로 0℃에서 디이소프로필아민 (1.419 mL, 9.96 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응물을 물 (50 mL)로 켄칭시키고, 유기층을 분리하고, 수성층을 30 mL의 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기 용액을 합치고, 소수성 프릿으로 건조시키고, 감압하에 농축시켜 황색 오일을 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 이용하였다 (3.12 g). LCMS (시스템 A) RT = 1.64분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+.
중간체 8
5- 클로로 -N-[4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-N-({[2-( 트리메틸실릴 )에틸] 옥시 } 메틸 )-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00029
DMF (20 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 3-[[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)아미노]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 7) (3.12 g, 5.43 mmol)의 용액에 물 (20 mL) 중의 탄산나트륨 (0.864 g, 8.15 mmol)의 용액을 실온에서 첨가하였다. 백색 현탁액을 수득하였고, 매질의 가온이 인지되었다. 생성된 현탁액을 밤새 80℃에서 교반하였고, 그 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 탄산나트륨 (300 mg)을 더 첨가하였다. 그 후, 생성된 혼합물을 85℃에서 교반하였다. 3시간 동안 교반한 후에, 50 mL의 물과 50 mL의 DCM을 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 분배시키고, 수성층을 30 mL의 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기 용액을 합치고, 소수성 프릿으로 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 미정제 오일을 Flashmaster에서 두 개의 100g Si 카트리지 상에서 시클로헥산 중의 0 내지 25% EtOAc의 구배로 25분에 걸쳐 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 순수한 분획들을 합쳐 표제 생성물을 오렌지색 검 (1.62 g, 63 %)으로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 1.41분, ES+ve m/z 474/476 (M+H)+. 순수하지 않은 분획들을 합쳐 Flashmaster에서 7Og 실리카 카트리지 상에서 시클로헥산 중의 0 내지 25% EtOAc의 구배로 40분에 걸쳐 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 순수한 생성물을 함유하는 분획들을 합쳐 더 많은 요망되는 생성물 (277 mg, 1 1%)을 수득하였다.
중간체 9
1,1-디메틸에틸 3-{비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1- 카르복실레이트
Figure pct00030
DCM (50 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 3-아미노-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 5) (3.24 g, 12.31 mmol) 및 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (8.01 g, 36.9 mmol)의 용액에 피리딘 (9.95 mL, 123 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소하에 3일 동안 45℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 소듐 비카르보네이트 용액 (100 mL)을 이용하여 켄칭시키고, DCM (100 mL)으로 희석하였다. 상들을 분리시키고, 수성상을 DCM (100 mL)을 이용하여 추출하였다. 합친 유기 용액을 식염수로 세척하고, 소수성 프릿으로 여과하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔류물을 DCM (30 mL)에 용해시켰다. 이것을 33Og 실리카 카트리지에 적용시키고, 10CV 이상의 DCM 중의 0-25% 에틸 아세테이트 구배로 용리시켰다. 필요한 분획들을 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (4.17 g, 54%)을 백색 고형물로서 [LCMS (시스템 B) RT=4.12분, ES+ve m/z 624/626/628], 그리고 1,1-디메틸에틸 3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (1.45 g, 26%)를 연한 황색 고형물 [LCMS (시스템 B) RT= 3.72분, ES+ve m/z 444/446 (M+H)+]로서 수득하였다.
중간체 10
5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-N-[4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00031
아이스/워터 배스에서 냉각된 DCM (20 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 9) (4.17 g, 6.68 mmol)의 용액에 TFA (10.29 mL, 134 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)과 물 (50 mL)로 희석하였다. 유기상을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 생성물 (3.78 g)을 백색 고형물로서 수득하였다. 이것을 진공에서 45℃에서 2일 동안 건조시켜 표제 화합물 (3.55 g, 100%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 1.33분, ES+ve m/z 524/526/528 (M+H)+.
중간체 11
2-[4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-1H- 이소인돌 -1,3(2H)- 디온
Figure pct00032
4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 1) (500 mg, 3 mmol) 및 프탈산 안히드라이드 (680 mg, 4.6 mmol) (Aldrich에서 시판됨)를 1,4-디옥산 (5 mL)에 실온에서 용해시켰다. 반응 혼합물을 110℃에서 밤새 교반한 다음, 냉각시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 50 mL의 에테르로 분말화하고 초음파분해하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 진공에서 건조시켜 갈색 고형물 (711 mg, 81%)을 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT= 2.82분, ES+ve m/z 294 (M+H)+.
중간체 12
3-{[3-아미노-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤즈아미드
Figure pct00033
DMF (3 mL) 중의 2-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (제조 참조, 중간체 11) (1 g, 3.4 mmol)의 용액에 주위 온도에서 탄산칼륨 (0.707 g, 5.11 mmol) 및 3-(클로로메틸)벤즈아미드 (Maybridge) (0.752 g, 4.43 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 블로우다운(blowdown) 유닛에서 질소 스트림하에 증발시켰다. 잔류물을 20 mL의 DCM에 용해시키고, 20 mL의 물을 첨가하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 바로 다음 단계에 이용하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.92분, ES+ve m/z 459 (M+H)+. 고형물을 에탄올 (3 mL)에 용해시키고, 주위 온도에서 히드라진 수화물 (0.497 mL, 10.2 mmol)에 적가하였다. 생성된 현탁액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 아세톤 (3 mL)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수집하였으나, LCMS는 반응이 불완전함을 나타내었다. 고형물을 에탄올 (3 mL)에 재현탁시키고, 히드라진 수화물 (0.497 mL, 10.2 mmol)로 처리하고, 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 아세톤 (3 mL)으로 처리하고, 생성된 현탁액을 밤새 교반하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, DCM (10 mL)으로 세척하여 표제 화합물 (785 mg, 78%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS RT=0.81분, ES+ve m/z 297 (M+H)+.
중간체 13
2-[7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-1H- 이소인돌 -1,3(2H)- 디온
Figure pct00034
2,3-디플루오로-6-메톡시벤조니트릴 (600 mg, 3.5 mmol) (JRD Fluorochemicals에서 시판됨)을 건조 N-메틸피롤리디논 (3 mL)에 용해시킨 다음, 히드라진 수화물 (4 equiv., 0.65 mL) (Aldrich에서 시판됨)로 처리하고, 생성된 혼합물을 Biotage 마이크로파 바이알에서 높은 흡수 수준으로 15분간 150℃에서 가열하였다. 아세톤 (3 mL)을 첨가하고, 용액을 15분간 교반하고, 밤새 정치시켰다. 그 후, 용액을 5Og SCX-2 카트리지 상에 로딩하였다. 컬럼을 메탄올, 그 다음 에탄올 중의 2M 암모니아 용액으로 용리시켰다. 염기성 분획들을 합치고, 감압하에 증발시켰다. 수득된 미정제 오일을 프탈산 안히드라이드 (789 mg, 5.3 mmol) (Aldrich에서 시판됨) 및 건조 1,4-디옥산 (10 mL)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 48시간 동안 110℃에서 교반하였다. 디옥산을 감압하에 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄 (50 mL)과 물 (50 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기상을 분리시키고, 수성층을 5OmL의 디클로로메탄으로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 Flashmaster에서 실리카 (100g 카트리지) 상에서 시클로헥산 중의 0-100% 에틸 아세테이트 구배로 80분에 걸쳐 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제 화합물 (510 mg, 47%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.98분, ES+ve m/z 312 (M+H)+.
중간체 14
3-{[3-아미노-7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤즈아미드
Figure pct00035
무수 DMF (2.5 mL) 중의 2-[7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (제조 참조, 중간체 13) (62.0 mg, 0.2 mmol)의 용액을 탄산칼륨 (55.1 mg, 0.4 mmol)에 이어 3-(클로로메틸)벤즈아미드 (40.5 mg, 0.24 mmol)로 처리하고, 80℃에서 17시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 포화된 탄산수소나트륨 수용액 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 식염수-물 (1:1)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 연한 갈색 고형물을 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 다음 단계에 이용하였다. LCMS (시스템 B) RT=2.45분, ES+ve m/z 445 (M+H)+.
고형물을 무수 에탄올 (3 mL)에 현탁시키고, 실온에서 히드라진 일수화물 (0.048 mL, 1 mmol)로 처리하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 아세톤 (3 mL)으로 처리하고, 실온에서 30분간 교반하였다. 혼합물을 진공에서 증발시켜 오렌지색 고형물을 수득하였고, 이것을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 오렌지색 고형물을 수득하였다. 잔류물을 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, Sunfire C18 컬럼 상에서 용매 A/B (A: 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액, B: 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액)로 25분에 걸쳐 용리시키며 MDAP에 의해 정제시켰다. 적합한 분획을 포화된 탄산수소나트륨 수용액 및 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 백색 고형물 (22 mg, 35%)을 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 1.96분, ES+ve m/z 315 (M+H)+.
중간체 15
N-(1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-히드록시-1H- 인다졸 -3-일)-5- 클로로 -2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염
Figure pct00036
무수 DCM (7.5 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (266 mg, 0.533 mmol)의 현탁액을 질소 대기하에 DCM 중의 보론 트리브로마이드 용액 (1 M, 0.533 mL, 0.533 mmol)으로 실온에서 적가 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다 (용액에서의 반응 아님 - 점착성 오렌지색 검이 형성되었다). 보론 트리브로마이드 (1 M, 0.533 mL)의 추가 부분을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다 (반응물은 여전히 용액이 아님). 반응물이 용액이 될 때까지 무수 메탄올을 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온에소 추가로 30분간 교반하였다. 포화된 소듐 비카르보네이트 수용액 (10 mL)을 조심스럽게 적가하여 반응물을 켄칭시키고, 첨가시에 백색 침전물 (수성층에 현탁됨) 및 짙은 녹색의 점착성 검 (플라스크의 측면에 들러붙음) 둘 모두가 형성되었다. 수성 및 유기층을 소수성 프릿에 적용시키고, 유기층을 수집하고 유지하였다. 플라스크에 남아있는 녹색 검을 1:1 메탄올-디클로로메탄에 용해시키고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 유지된 유기물과 합치고, 진공에서 증발시켜 짙은 녹색의 점착성 고형물 (265 mg)을 수득하였다. 이것을 DMSO (3x1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액, B: 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액)로 용리시키며 MDAP Sunfire C18 컬럼에 의해 정제시켰다 (25분간 진행). 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 무색 오일 (86 mg, 33%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 1.63분, ES+ve m/z 449/451 (M+H)+.
중간체 16
메틸 3-{[2-(디메틸아미노)-2- 옥소에틸 ] 옥시 } 벤조에이트
Figure pct00037
DMF (10 mL) 중의 메틸 3-히드록시벤조에이트 (Aldrich) (1.52 g, 10 mmol) 및 K2CO3 (1.38 g, 10 mmol)의 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 2-클로로-N,N-디메틸아세트아미드 (Merck) (1.03 mL, 10 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음 실온에서 6일 동안 정치시켰다. 그 후, 혼합물을 2M HCl로 산화시키고, EtOAc로 추출하였다. 수성층을 EtOAc로 2회 더 추출하고, 합친 유기 용액을 2M HCl (x3), aq. sat NaHCO3, 식염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4) 감압하에 증발시켜 표제 화합물 (2.22 g, 94%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.80분, 91%, ES+ve m/z 238 (M+H)+.
중간체 17
(3-{[2-(디메틸아미노)에틸] 옥시 } 페닐 )메탄올
Figure pct00038
메틸 3-{[2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸]옥시}벤조에이트 (제조 참조, 중간체 16) (2.22 g, 9.36 mmol)를 THF (15 mL)에 용해시키고 얼음에서 냉각시켰다. 그 후, 용액을 LiAlH4 (1 M, 10 mL)의 에테르 용액으로 질소하에 적가 처리하고, 혼합물을 1.5시간 동안 아이스-배스에서 교반하였다. LCMS는 단지 완료만을 나타내었다. 혼합물을 얼음에서 냉각시키고, 포화된 황산나트륨 수용액을 백색 침전물이 형성될 때까지 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 다음, 실온에서 계속 O/W이 되도록 하였다. 그 후, 혼합물을 여과하고, 고형물을 에틸 아세테이트로 세척하고, 여액 및 세척물을 감압하에 농축시켰다. 생성된 무색 오일을 메탄올에 용해시키고, 미리-세척된 SCX-2 카트리지에 적용시켰다. 카트리지를 메탄올로 세척한 다음, 메탄올 중의 10% 수성 암모니아로 용리시켰다. 암모니아성(ammoniacal) 분획들을 합치고, 감압하에 증발시켜 표제 화합물 (1.236 g, 68%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.36분, ES+ve m/z 196 (M+H)+.
중간체 18
5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-N-[1-[(3-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시} 페닐 ) 메틸 ]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00039
THF (15 mL) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 10) (150 mg, 0.28 mmol), (3-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}페닐)메탄올 (73 mg, 0.37 mmol), 트리페닐포스핀 (113 mg, 0.43 mmol) 및 디-3차-부틸 아조디카르복실레이트 (132 mg, 0.57 mmol)의 혼합물을 65℃ O/N으로 가열하였다. 혼합물을 감압하에 증발시키고, 잔류물을 MeOH에 용해시킨 다음, SCX-2 이온-교환 카트리지 (20 g) 상에 로딩시키고, 용매 메탄올, 메탄올 중의 2M 암모니아로 순차적으로 용리시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 이것을 DCM에 용해시키고, Flashmaster에서 실리카 (2Og 카트리지) 상에서 0-15% 메탄올 (1% EtN 함유)-디클로로메탄을 이용하여 20분에 걸쳐 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획을 진공에서 증발시켜 표제 생성물 (140 mg, 70%)을 백색 포움으로서 수득하였다. LCMS (시스템 F) RT=1.27분, ES+ve m/z 701/703 (M+H)+.
중간체 19
메틸 4-{[2-(디메틸아미노)-2- 옥소에틸 ] 옥시 } 벤조에이트
Figure pct00040
DMF (10 mL) 중의 메틸 4-히드록시벤조에이트 (Fluka) (1.52 g, 10 mmol) 및 탄산칼륨 (1.38 g, 10 mmol)을 2-클로로-N,N-디메틸아세트아미드 (Merck) (1.03 ml, 10 mmol)로 처리하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 2M 염산 사이에서 분배시킴에 의해 처리하고, HCl, 식염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4) 증발 건조시켰다. 잔류물을 DMF (5 mL)에 용해시키고, 탄산칼륨 (1.38 g, 10 mmol) 및 2-클로로-N,N-디메틸아세트아미드 (Merck) (1.03 ml, 10 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 주말에 걸쳐 실온에서 교반함으로써 수득하였다. 에틸 아세테이트와 2M HCl 사이에서 분배시키고, 유기 용액을 HCl (X2), 식염수 (X3)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 증발시켜 표제 화합물 (1.62 g, 68%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.73분, ES+ve m/z 238 (M+H)+.
중간체 20
(4-{[2-(디메틸아미노)에틸] 옥시 } 페닐 )메탄올
Figure pct00041
THF (40 mL) 중의 메틸 4-{[2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸]옥시}벤조에이트 (제조 참조, 중간체 19) (1.61 g, 6.79 mmol)를 얼음에서 냉각시킨 다음, 디에틸 에테르 (6.8 ml) 중의 LiAIH4의 1M 용액으로 처리하고, 혼합물을 질소하에 4시간 동안 교반하였다. 수소 방출이 멈출 때까지 반응 혼합물을 포화된 황산나트륨 수용액으로 조심스럽게 처리하였다. 그 후, 혼합물을 질소하에 1시간 동안 교반하고 여과하였다. 고형물을 디에틸 에테르로 세척하고, 합친 여액 및 세척물을 감압하에 증발시켜 표제 화합물 (1.32 g, 100%)을 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT=1.70분, ES+ve m/z 196 (M+H)+.
중간체 21
5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-N-[1-[(4-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시} 페닐 ) 메틸 ]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00042
THF (30 mL) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-1H-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 10) (0.262 g, 0.5 mmol) 및 (4-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}페닐)메탄올 (98 mg, 0.5 mmol), 트리페닐포스핀 (197 mg, 0.75 mmol) 및 디-3차-부틸 아조디카르복실레이트 (230 mg, 1 mmol)의 혼합물을 65℃로 시간 동안 가열하였다. LCMS가 반응의 완료를 나타내었다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올에 이어 메탄올 중의 10% 수성 암모니아에 의해 용리시키며 SCX-2 이온-교환 카트리지 (50 g)에 적용시켰다. 암모니아성 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 미정제 생성물 (400 mg)을 황색 검으로서 수득하였다. 혼합물을 실리카 카트리지 (20 g) 상에 디클로로메탄올 중에 로딩시키고, Flashmaster에서 0-15% 메탄올 (1% Et3N 함유)-디클로로메탄 구배로 40분에 걸쳐 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 불순한 생성물 (167 mg)을 무색 검으로서 수득하였다. 샘플을 1:1 MeOH-DMSO (2 mL)에 용해시키고, 탄산암모늄 변형제와 함께 아세토니트릴 물을 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 MDAP에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (91 mg, 26%)을 수득하였다. LCMS (시스템 C) (5분간 진행) RT=3.76분, ES+ve m/z 701/703 (M+H)+.
중간체 22
메틸 4-{[2-(디메틸아미노)-2- 옥소에틸 ] 옥시 }-3-( 메틸옥시 ) 벤조에이트
Figure pct00043
DMF (10 mL) 중의 메틸 4-히드록시-3-(메틸옥시)벤조에이트 (메틸 바닐레이트, Aldrich) (3.85 g, 21.1 mmol) 및 탄산칼륨 (2.92 g, 21.1 mmol)을 실온에서 2-클로로-N,N-디메틸아세트아미드 (Merck) (2.18 mL, 21.1 mmol)로 처리하고, 혼합물을 주말에 걸쳐 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 2M HCl 사이에서 분배시켰다. 유기상을 2M HCl, 포화된 소듐 비카르보네이트 용액 (연한 색으로 바뀜), 산 (색을 잃음), 식염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 증발시켜 출발 물질 (5.0 g)로 오염된 생성물을 수득하였다. 따라서, 혼합물을 DMF (5 mL)에 재용해시키고, 탄산칼륨 (1.38 g, 10 mmol) 및 2-클로로-N,N-디메틸아세트아미드 (1 mL, 10 mmol)로 다시 하루 동안 처리하였다. 그 후, 혼합물을 에틸 아세테이트와 2M HCl 사이에서 분배시키고, 상기대로 처리하였다. 여액을 증발시켜 고형물 (2.614 g)을 수득하였고, 이것을 클로로포름 중에서 실리카 카트리지 (70 g)에 로딩시키고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 30분간 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (1.4 g, 25%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.69분, ES+ve m/z 268 (M+H)+.
중간체 23
[4-{[2-(디메틸아미노)에틸] 옥시 }-3-( 메틸옥시 ) 페닐 ]메탄올
Figure pct00044
메틸 4-{[2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸]옥시}-3-(메틸옥시)벤조에이트 (제조 참조, 중간체 22) (1.4 g, 5.2 mmol)를 THF (50 ml)에 용해시키고, 아이스-배스에서 질소하에 냉각하였다. 그 후, 혼합물을 리튬 알루미늄 히드라이드의 1M 에테르 용액 (5.5 mL)으로 조심스럽게 처리하고, 혼합물이 밤새 실온으로 가온되게 하면서 혼합물을 5℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 NaHCO3 수용액 (1 mL)에 이어 MgSO4 (2 g)의 신중한 첨가 및 30분간의 교반에 의해 켄칭시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 여액을 증발시켜 표제 화합물 (1.18 g, 100%)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.34분, ES+ve m/z 226 (M+H)+.
중간체 24
3-( 히드록시메틸 ) 벤젠설폰아미드
Figure pct00045
THF (1 mL) 중의 3-(아미노설포닐)벤조산 (Fluorochem) (150 mg, 0.746 mmol)의 용액에 0℃에서 보란-THF 복합체 (3.73 mL, 3.73 mmol)를 적가하였다. 생성된 용액을 10분간 0℃에 이어 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 10 mL의 물로 0℃에서 조심스럽게 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 30 mL의 EtOAc 및 20 ml의 물로 희석하였다. 수성층을 30 mL의 EtOAc로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 식염수 (30 mL)로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 카트리지 (20 g)에 로딩시키고, Flashmaster에서 0-100% 에틸 아세테이트-디클로로메탄을 이용하여 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (86.4 mg, 62%)을 검으로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 0.41분, ES+ve m/z 188 (M+H)+.
중간체 25
1-{[3,4-비스( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00046
분말화된 KOH (0.494 g, 8.80 mmol)를 질소하에 DMSO (20 mL)에 용해시키고, 4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 1) (0.653 g, 4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15분간 교반하여 짙은 적색 용액을 수득하였다. 4-(클로로메틸)-1,2-비스(메틸옥시)벤젠 (0.896 g, 4.80 mmol)을 한 부분으로 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (150 mL)에 첨가하고, 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 건조된 (Na2SO4) 추출물을 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르 (3 x 3 mL)로 분말화하여 표제 화합물 (1.05 g, 84%)을 오렌지색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT=1.42분, ES+ve m/z 314 (M+H)+.
중간체 26
5- 클로로 -N-[4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -2-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00047
1,1-디메틸에틸 3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 6) (155 mg, 0.35 mmol)의 용액을 DCM (0.2 mL)에 용해시키고 TFA (0.4 mL)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분간 정치시키고, 질소 스트림하에 래들리스(Radleys) 블로우다운 유닛에서 배출 건조시켜 표제 화합물 (200 mg)을 수득하였다. LCMS (시스템 D) RT = 1.02분, ES+ve m/z 344 (M+H)+.
중간체 27
2-{[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}-1,1-디메틸-2- 옥소에틸 아세테이트
Figure pct00048
디클로로메탄 (1000 mL) 및 트리에틸아민 (36.4 mL, 262 mmol) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (40.5 g, 87 mmol)의 교반 현탁액을 냉각시킨 다음, 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (12.52 mL, 87 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 질소하에 1시간 20분 동안 교반하였다. 그 후, 2M HCl (300 ml), NaHCO3 용액 (300 ml), 식염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 진공에서 증발시켜 백색 고형물을 수득하였다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 150Og 실리카 컬럼 상에 로딩하고, 8CV 이상의 시클로헥산 중의 40-100% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 필요한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 두 개의 배치에서 (37.87 g, 73%) 및 (3.39 g) 백색 포움으로서 수득하였다. HPLC에 의해 후자가 순수하지 않은 것으로 나타났으므로, 이것을 다시 12Og 실리카 컬럼 상에서 8CV 이상의 시클로헥산 중의 40-75% 에틸 아세테이트 구배를 이용하여 정제시켰다. 필요한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (2.16 g, 4%)을 백색 포움으로서 수득하였다.
LCMS (시스템 A) RT=1.10분, ES+ve m/z 591/593 (M+H)+.
중간체 28
1,1-디메틸에틸 [(4-{[3-{비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 카르바메이트
Figure pct00049
THF (3 mL) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 10)(400 mg, 0.763 mmol), 트리페닐포스핀 (400 mg, 1.52 mmol) 및 1,1-디메틸에틸 {[4-(히드록시메틸)페닐]메틸}카르바메이트 (Maybridge) (362 mg, 1.52 mmol)의 용액을 실온에서 DIAD (0.300 mL, 1.52 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 65℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (3 mL)과 물 (3 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기상을 분리하고, 수성층을 추가로 DCM (3 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 질소 스트림하에 블로우다운 유닛에서 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 (50 g) 카트리지 상에 로딩하고, Flashmaster II 상에서 0-100% 디클로로메탄-시클로헥산 구배를 이용하여 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (498 mg, 88%)을 검으로서 수득하였다.
LCMS (시스템 A) RT=1.48분, ES+ve m/z 760/762 (M+NH4)+.
중간체 29
1,1-디메틸에틸 [(4-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 카르바메이트
Figure pct00050
메탄올 (3 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 [(4-{[3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]카르바메이트 (제조 참조, 중간체 28) (497 mg, 0.67 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (2M, 3.34 mL)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 질소 스트림하에 블로우다운 유닛에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)과 물 (5 mL) 사이에서 분배시키고, 희석된 HCl 용액을 수성층의 pH가 약 1이 될 때까지 첨가하였다. 유기상을 분리시키고, 수성층을 추가로 DCM (5 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 용액을 식염수 (2 mL)로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 질소 스트림하에 블로우다운 유닛에서 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리시키며 질량 유도된 오토프렙 (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)에 의해 정제시켰다. 용매를 질소 스트림하에 래들리스 블로우다운 장치에서 제거하여 표제 화합물 (112 mg, 30%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.26분, ES+ve m/z 563/565 (M+H)+.
중간체 30
N-[1-{[4-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2-티 오펜설폰아미 드 포르메이트 염
Figure pct00051
디클로로메탄 (3 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 [(4-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]카르바메이트 (제조 참조, 중간체 29) (92 mg, 0.16 mmol)의 용액에 염화수소 (0.041 mL, 0.163 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 추가 부분의 염화수소 (0.041 mL, 0.163 mmol)를 적가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 용매를 질소 블로우다운 유닛에서 증발시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리시키며 질량 유도된 오토프렙 (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)에 의해 정제시켰다. 용매를 질소 스트림하에 래들리스 블로우다운 장치에서 건조시켜 표제 화합물 (69 mg, 83%)을 수득하였다. LCMS (시스템 E) RT=2.10분, ES+ve m/z 463/465 (M+H)+.
중간체 31
메틸 3-{[3-[[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]({[2-( 트리메틸실릴 )에틸] 옥시 } 메틸 )아미노]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤조에이트
Figure pct00052
DMF (10 mL) 중의 5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-N-({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 8) (1g, 2.11 mmol)의 용액을 주위 온도에서 탄산칼륨 (0.583 g, 4.22 mmol) 및 메틸 3-(브로모메틸)벤조에이트 (Alfa Aesar) (0.580 g, 2.53 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였고, 그 때 LCMS는 생성물을 주 피크로서 나타내었다. 혼합물을 DCM (20 mL) 및 물 (20 mL)로 희석하였다. 유기상을 분리시키고, 수성층을 추가로 DCM (20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 용액을 식염수 (30 mL)로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 100 g 카트리지에 로딩시키고, A 중의 0-100% 구배 B를 이용하여 (A는 순수한 DCM이고 B는 DCM 용액 중의 5% EtOAc이다) Flashmaster II 상에서 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시킨 다음, 두 번째 카트리지 실리카 7Og 상에서 A 중의 0-100% 구배 B를 이용하여 (A는 순수한 DCM이고 B는 DCM 용액 중의 5% EtOAc이다) 40분에 걸쳐 추가로 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (571 mg, 44%)을 검으로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.60분, ES+ve m/z 639/641 (M+NH4)+.
중간체 32
4-{[3-아미노-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤즈아미드
Figure pct00053
DMSO (50 mL) 중의 4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 1) (0.816 g, 5 mmol)의 용액에 실온에서 질소하에 수산화칼륨 (0.561 g, 10.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 짙은 적색 용액을 25분간 교반한 후에, 4-(클로로메틸)벤즈아미드 (0.848 g, 5.00 mmol)를 한 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 30분간 교반한 다음 물 (250 mL)에 부어 에멀젼을 형성하였다. 반응 혼합물을 클로로포름 (3 x 250 mL)을 이용하여 추출하였다. 합친 유기 용액을 물 (250 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 (100 g) 카트리지에 로딩시키고, 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 + 0-20% 메탄올-에틸 아세테이트로 용리시키며 Flashmaster 상에서 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (1.18 g, 80%)을 수득하였다. LCMS: (시스템 A) RT = 0.69분, ES+ve m/z 297 (M+H)+.
중간체 33
1-{[3,4-비스( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00054
분말화된 KOH (0.494 g, 8.80 mmol)를 질소하에 DMSO (20 mL)에 용해시키고, 4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 1) (0.653 g, 4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15분간 교반시켜 짙은 적색 용액을 수득하였다. 4-(클로로메틸)-1,2-비스(메틸옥시)벤젠 (0.896 g, 4.80 mmol)을 한 부분으로 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (150 mL)에 첨가하고, 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 건조된 (Na2SO4) 추출물을 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 (3 x 3 mL) 분말화시켜 표제 화합물 (1.05 g, 84%)을 오렌지색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT=2.22분, ES+ve m/z 314 (M+H)+.
중간체 34
N-[(3-{[3-아미노-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아세트아미드
Figure pct00055
표제 화합물을 중간체 33에 대해 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.76분, ES+ve m/z 325 (M+H)+.
중간체 35
1,1 -디메틸에틸 (3R)-3-({[(3-{[3-아미노-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}카르보닐)-4- 모르폴린카르복실레이트
Figure pct00056
표제 화합물을 중간체 33에 대해 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.98분, ES+ve m/z 496 (M+H)+.
중간체 36
4- 플루오로 -1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00057
무수 에탄올 (50 mL) 중의 2,6-디플루오로벤조니트릴 (3 g, 21.6 mmol)의 용액에 히드라진 수화물 (4.18 mL, 86 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 질소하에 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세톤 (20 mL)으로 처리하고, 18시간 동안 정치시켰다. 혼합물을 진공에서 증발시켜 오렌지색/갈색 고형물을 수득하였고, 이것을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 갈색 고형물 (4.58 g)을 수득하였고, 이것을 Florisil (60-100 mesh) 상에 흡수시키고, 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II에서 디클로로메탄 중의 0-10% 메탄올 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 정제시켰다. 분획 48-57을 합치고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 갈색 고형물로서 수득하였다 (3.08 g, 94%). LCMS (시스템 B) RT= 1.38분, ES+ve m/z 152 (M+H)+.
중간체 37
3-[(3-아미노-4- 플루오로 -1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 벤조니트릴
Figure pct00058
무수 디메틸 설폭사이드 (15 mL) 중의 분쇄된 수산화칼륨 (0.483 g, 8.60 mmol)의 현탁액에 실온에서 질소하에 무수 디메틸 설폭사이드 (10 mL) 중의 4-플루오로-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 36) (0.52 g, 3.44 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 짙은 적색 용액을 10분 후에 한 부분의 3-시아노벤질 브로마이드 (0.843 g, 4.30 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 30분간 교반한 다음, 물 (100 mL)에 부어 황색 에멀젼을 형성하였다. 이것을 클로로포름 (2 x 100 mL)을 이용하여 추출하였다. 합친 유기 용액을 물-식염수 (1:1) (100 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 적색 오일 (2.263 g)을 수득하였다. 잔류물을 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II 상에서 시클로헥산 중의 0-100% 에틸 아세테이트 구배로 용리시키며 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 분획 159-173을 합치고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물로서 황색 고형물을 수득하였다 (0.77 g, 84%) LCMS (시스템 B) RT = 2.32분, ES+ve m/z 267 (M+H)+.
중간체 38
5- 클로로 -N-{1-[(3- 시아노페닐 ) 메틸 ]-4- 플루오로 -1H- 인다졸 -3-일}-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00059
얼음/워터 배스에서 냉각된 무수 피리딘 (3 mL) 중의 3-[(3-아미노-4-플루오로-1H-인다졸-1-일)메틸]벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 37) (695 mg, 2.61 mmol)의 용액에 1분에 걸쳐 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (567 mg, 2.61 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 얼음/워터 배스에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 2N 염산 (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 어두운 적색 오일 (1.264 g)을 수득하였다. 상기 오일을 최소 부피의 디클로로메탄에 용해시키고, 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II 상에서 시클로헥산 중의 0-50% 에틸 아세테이트 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 분획 66-69를 합치고, 진공에서 증발시켜 백색 포움 (540 mg)을 수득하였고, 이것을 100g 실리카 SPE 카트리지 상에서 Flashmaster II에서 디클로로메탄 중의 0-10% 메탄올 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 분획 23-26을 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 백색 포움 (493 mg, 42%)으로서 수득하였다. LCMS (시스템B) RT = 3.01분, ES+ve m/z 447/449 (M+H)+.
중간체 39
N-(1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4- 플루오로 -1H- 인다졸 -3-일)-5- 클로로 -2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00060
무수 테트라하이드로푸란 (7 mL) 중의 5-클로로-N-{1-[(3-시아노페닐)메틸]-4-플루오로-1H-인다졸-3-일}-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 38) (493 mg, 1.10 mmol)의 아이스/워터 배스 냉각된 용액에 질소 대기하에서 5분에 걸쳐 리튬 알루미늄 히드라이드 (디에틸 에테르 중의 1M 용액) (2.76 mL, 2.76 mmol)를 적가하였다. 반응물을 아이스/워터 배스에서 30분간, 그리고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 추가량의 리튬 알루미늄 히드라이드 (디에틸 에테르 중의 1M 용액)를 1분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 아이스/워터 배스에서 냉각하고, 물 (10 mL) (조심스럽게 적가)로 켄칭하였다. 그 후, 반응물을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 디클로로메탄 중의 20% 메탄올 사이에서 분배시켰다 - 수성층에 현탁된 많은 양의 백색 고형물. 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 백색 고형물 (<20 mg)을 수득하였다. 유기층에 용해되지 않는 생성물 - 대부분의 물질은 수가용성이거나 수성에서 현탁된다. 불투명한 유백색 용액이 형성될 때까지 메탄올을 남은 수성층에 첨가하고 - 메탄올로 사전-컨디셔닝된 두 개의 50 g SCX-2 이온-교환 카트리지에 적용시켰다. 카트리지를 메탄올로 세척한 다음, 메탄올 중의 2M 암모니아를 이용하여 용리시켰다. 각 카트리지로부터 메탄올 분획 중의 2M 암모니아를 합치고, 진공에서 증발시켜 연한 황색 고형물 (480 mg)을 수득하였고, 이것을 Florisil (60-100 mesh) 상에 흡수시키고, 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II 상에서 디클로로메탄 중의 0-25% 메탄올 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 감압하에 증발시켜 표제 화합물 (284 mg, 57%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT=1.67분, ES+ve m/z 451/453 (M+H)+.
중간체 40
4- 클로로 -1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00061
무수 에탄올 (50 mL) 중의 2-클로로-6-플루오로벤조니트릴 (ABCR) (3 g, 19 mmol)의 용액에 히드라진 수화물 (3.74 mL, 77 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 질소하에 3.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세톤 (20 mL)으로 처리하고, 19시간 동안 정치시켰다. 혼합물을 진공에서 증발시켜 오렌지색/갈색 고형물을 수득하였고, 이것을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 갈색 고형물을 수득하였고, 이것을 Florisil (60-100 mesh) 상에 흡수시키고, 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II 상에서 디클로로메탄 중의 0-10% 메탄올 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 분획 24-29를 합치고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 황색 고형물 (2.14 g, 66%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT= 1.58분, ES+ve m/z 168 (M+H)+.
중간체 41
3-[(3-아미노-4- 클로로 -1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 벤조니트릴
Figure pct00062
무수 디메틸 설폭사이드 (5 mL) 중의 분쇄된 수산화칼륨 (421 mg, 7.50 mmol)의 현탁액에 실온에서 질소하에 무수 디메틸 설폭사이드 (15 mL) 중의 4-클로로-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 40) (503 mg, 3.0 mmol)의 용액을 첨가하였다. 30분 후에, 3-시아노벤질 브로마이드 (Aldrich) (735 mg, 3.75 mmol)를 한 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)에 부어 황색/갈색 에멀젼을 형성하였다. 이것을 클로로포름 (2 x 200 mL)을 이용하여 추출하였다. 합친 유기 용액을 물:식염수 (1:1) (200 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 갈색 오일을 수득하였다. 오일을 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II 상에서 시클로헥산 중의 0-100% 에틸 아세테이트 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 분획 32-34를 합치고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 오프 화이트 고형물 (216 mg, 25%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 2.51분, ES+ve m/z 283 (M+H)+.
중간체 42
5- 클로로 -N-{4- 클로로 -1-[(3- 시아노페닐 ) 메틸 ]-1H- 인다졸 -3-일}-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00063
무수 피리딘 (2 mL) 중의 3-[(3-아미노-4-클로로-1H-인다졸-1-일)메틸]벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 41)(201 mg, 0.71 1 mmol)의 용액에 질소하에 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (154 mg, 0.71 1 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 2N 염산 (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 짙은 적색 오일을 수득하였다. 이것을 최소 부피의 디클로로메탄에 용해시키고, 100g 실리카 SPE 카트리지에 적용시키고, Flashmaster II 상에서 시클로헥산 중의 0-50% 에틸 아세테이트 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 분획 149-154을 합치고, 진공에서 증발시켜 백색 고형물 (90 mg)을 수득하였다. 분획 155 및 156을 합치고, 진공에서 증발시켜 황색 고형물 (78 mg)을 수득하였고, 이것을 MeOH:DMSO (1:1) (1 mL)에 용해시켜 질량 유도된 오토-분취용 HPLC (Sunfire C18 컬럼 150mm x 30mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경, 주위 온도)에 의해 용매 A/B (A: 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액, B: 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액)로 용리시키며 25분에 걸쳐 추가로 정제시켰다. 적합한 분획들을 진공에서 증발시켜 백색 고형물 (5 mg)을 수득하였고, 이것을 이전의 백색 고형물과 합쳐 표제 화합물 (95 mg, 29%)을 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 3.01분, ES+ve m/z 463/465 (M+H)+.
중간체 43
7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00064
에탄올 (15 mL) 중의 2-[7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (제조 참조, 중간체 13) (1.36 g, 4.37 mmol)의 현탁액에 0℃에서 (아이스/워터 배스) 히드라진 수화물 (0.638 mL, 13.11 mmol)을 적가하였다. 아이스/워터 배스를 제거하고, 반응 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 추가로 40분간 계속하여 교반하였다. 그 동안, 반응 혼합물을 매우 점성이 되었다. 아세톤 (10 mL)을 반응물에 첨가하고, 생성된 반응 혼합물이 밤새 실온에서 정치되게 하였다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, 아세톤으로 세척하였다 (x 2). 합친 여액을 진공에서 농축시켰다. 고형물을 시클로헥산-에틸 아세테이트 (2:1; ~25 mL)로 분말화한 다음, 여과에 의해 수집하여 표제 화합물 (479 mg, 60%)을 밝은 갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.69분, ES+ve m/z 182 (M+H)+. 여액을 농축시키고, 생성된 오일을 디클로로메탄 (및 최소량의 메탄올) 중에서 실리카 카트리지 70 g에 적용시키고, Flashmaster 상에서 0-50% 에틸 아세테이트-시클로헥산으로 용리시키며 30분에 걸쳐 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 또 다른 배치의 요구되는 생성물 (316 mg, 40%)을 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.62분, ES+ve m/z 182 (M+H)+.
중간체 44
3-{[3-아미노-7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤조니트릴
Figure pct00065
디메틸 설폭사이드 (5 mL) 중의 분쇄된 수산화칼륨 (566 mg, 10.09 mmol)의 미세 현탁액에 실온에서 질소하에 디메틸 설폭사이드 (2 mL) 중의 7-플루오로-4- (메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 43)(727 mg, 4.01 mmol)의 용액을 첨가하였다. 5분 후에, 생성된 어두운 갈색 용액을 3-(클로로메틸)벤조니트릴 (730 mg, 4.82 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 30분간 교반한 다음, 혼합물을 물에 부어 에멀젼을 형성하였다. 이것을 DCM으로 추출하고, 합친 추출물을 물로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합친 유기 용액을 물과 식염수로 세척하고, 건조시킨 다음 (Na2SO4) 초기의 DCM 추출물과 합치고, 진공에서 농축시켜 갈색 오일을 남겼다. 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 100 g 카트리지에 로딩하고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산으로 용리시키며 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 요구되는 생성물 (665 mg, 56%)을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.02분, ES+ve m/z 297 (M+H)+.
중간체 45
5- 클로로 -N-[1-[(3- 시아노페닐 ) 메틸 ]-7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00066
건조 DCM (10 mL) 중의 3-{[3-아미노-7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 44)(665 mg, 2.24 mmol)의 용액에 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (0.300 mL, 2.24 mmol)에 이어 피리딘 (2 mL)을 첨가하였다. 생성된 어두운 황색 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드를 더 첨가하고 (0.100 mL) 반응물을 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 2N 염산 사이에서 분배시켰다. 수성상을 에틸 아세테이트를 추출하였다 (x2). 합친 유기 용액을 물과 식염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4) 진공에서 농축시켜 짙은 적색 오일을 남겼다. 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 100 g 카트리지에 로딩시키고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-디클로로메탄으로 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (323 mg, 30%)을 연한 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.2분, ES+ve m/z 476/478 (M+H)+.
중간체 46
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5-클로로-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00067
5-클로로-N-[1-[(3-시아노페닐)메틸]-7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 45)(600 mg, 1.26 mmol)를 THF (13 mL)에 용해시키고, 아이스 배스에서 교반하였다. 그 후, 용액에 리튬 알루미늄 히드라이드 (디에틸 에테르 중의 1M) (0.881 mL, 0.881 mmol)를 적가 처리하고 질소하에 밤새 교반하였다. 추가로 6부분의 리튬 알루미늄 히드라이드 (디에틸 에테르 중의 1M, 한번에 0.126 mL)를 반응물에 적가하고, 추가로 하루 동안 교반하였다. 반응물을 2M NaOH 용액 (4 mL)으로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하였다. 유기층을 식염수 (100 mL)로 세척한 다음, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올 조건화된 설폰산 카트리지 (SCX-2) 5Og 상에 로딩하였다. 카트리지를 메탄올로 세척하고, 메탄올 중의 2M 암모니아로 용리시켰다. 암모니아성 분획들을 증발시켜 갈색 검 (100 mg)을 수득하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 역추출하였다. 유기층을 식염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 후에, 진공에서 증발시켜 갈색 검 (60 mg)을 수득하였다. 수성층을 클로로포름-이소프로판올 3:1 (100 mL)로 역추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음, 진공에서 추가의 40 mg으로 증발시켰다. 수성층 중의 고형물을 여과에 의해 수집하였다. 고형물을 메탄올에 용해시키고, 여과하여 임의의 불용성 물질을 제거하였다. 여액을 진공에서 추가 배치의 300 mg으로 증발시켰다. 합친 배치들을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 5Og 설폰산 (SCX-2) 카트리지 상에 로딩하였다. 카트리지를 메탄올로 세척한 다음 메탄올 중의 2M 암모니아로 용리시켰다. 암모니아성 분획들을 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 갈색 검 (220 mg)으로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 0.81분, ES+ve m/z 481/483 (M+H)+.
중간체 47
2,4- 디플루오로 -6- 메톡시벤즈알데히드
Figure pct00068
3,5-디플루오로아니솔 (50 g, 0.35 mol)을 온도계, 드로핑 펀넬(dropping funnel) 및 아르곤 버블러(bubbler)가 구비된 3-목 플라스크에 담았다. 디클로로메탄 (200 mL)을 첨가하고, 용액을 아이스-워터로 냉각하였다. 티타늄 (IV) 클로라이드 (61.5 mL, 0.56 mol)를 적가한 후에 (15분), α,α-디클로로메틸 메틸 에테르 (31.5 mL, 0.35 mol)를 적가하여 온도를 <10℃ (약 20분)으로 유지하였다. 반응물을 추가로 140분 동안 아이스-워터에서 교반하고, 아이스-워터 (1 L)에 부은 다음, DCM으로 3회 추출하였다. 유기 용액을 물, 식염수로 세척한 다음 건조시키고 (MgSO4) 증발시켰다. 미정제 생성물을 7개의 분리된 배치에서 Versaflash (80 x 300 mm SiO2 카트리지, DCM에서 5% EtOAc로의 구배)를 이용하여 정제시켜 표제 화합물 (34.5 g, 57%)을 오렌지색 고형물로서 수득하였다.
중간체 48
2,4- 디플루오로 -6- 메톡시벤조니트릴
Figure pct00069
2,4-디플루오로-6-메톡시벤즈알데히드 (제조 참조, 중간체 47)(34.5 g, 0.20 mol) 및 히드록실아민-o-설폰산 (24.95 g, 0.22 mol)을 둥근-바닥 플라스크에 담았다. 물 (500 mL)을 첨가하고, 현탁액을 110℃에서 3시간 동안 가열하였다. TLC가 반응의 완료를 나타낸 후에, 이것을 아이스-워터에서 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 용액을 건조시키고 (MgSO4) 증발시키고, 잔류물을 건조 플래시 크로마토그래피 (DCM 용리액)에 의해 정제시켜 표제 화합물 (32.05 g, 95%)을 연한 핑크색 고형물로서 수득하였다.
중간체 49
6- 플루오로 -4- 메톡시 -1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00070
2,4-디플루오로-6-메톡시벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 48)(29.2 g, 0.17 mol)을 n-부탄올 (250 mL)에 현탁시키고, 히드라진 수화물 (16.6 mL, 0.34 mol)을 첨가하였다. 현탁액을 110℃에서 19시간 동안, 그 다음 115℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물이 냉각되게 하여 밤새 고형물을 형성하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, n-부탄올로 세척하였다. 고형물은 주로 부산물인 아릴 히드라진이었다 (비고리화되거나 위치이성질체). 여액을 농축시키고, 톨루엔과 공비혼합시켜 15.6 g의 미정제 생성물 (LCMS에 의해 84%)을 수득하였다. 미정제 생성물을 ~400 mL의 물, ~5 mL의 AcOH 및 ~350 mL의 에틸 아세테이트에 취하고, 임의의 불용성 물질을 폐기하였다. 유기층을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4) 증발시켰다. 잔류물을 고온 에틸 아세테이트 (75 mL, 55℃)에 취하고, 헵탄을 첨가하였다 (20 mL). 고형물을 여과에 의해 수집하고, 헵탄으로 세척하였다. 이것을 2회 반복하여 표제 화합물 (6.7 g, 21%)을 자줏빛 고형물로서 수득하였다.
중간체 49 - 대안적인 제법
무수 에탄올 (50 mL) 중의 2,4-디플루오로-6-(메틸옥시)벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 50) (5.15 g, 30.4 mmol)의 1:1 혼합물의 용액에 히드라진 수화물 (5.91 mL, 122 mmol)을 적가하였다. 반응물을 80℃에서 질소하에 밤새 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 아세톤 (20 mL)으로 처리하고, 18시간 동안 정치시켰다. 혼합물을 진공에서 건조시키고, 잔류물을 포화된 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL)과 디클로로메탄 (50 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성상을 추가로 DCM (50 mL)으로 추출하였다. 유기층들을 합치고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공에서 증발시켜 갈색 고형물을 수득하였고, 이것을 Florisil 상에 흡수시키고, 실리카 100g 카트리지 상에서 A 중의 0-100% B (A는 순수한 CHCl3이고 B는 CHCl3 중의 10% MeOH이다)로 용리시키며 60분에 걸쳐 정제시켰다. 가장 순수한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 DMSO-MeOH의 1:1 혼합물에 로딩시키고, 33Og 카트리지 상에서 3 CV 이상의 5 내지 35%에서 시작하여, 8 CV 이상의 35 내지 55%, 및 4 CV 이상의 55 내지 85%의 아세토니트릴 (0.1% NH3 함유)-물 (0.1% NH3 함유)의 구배로 용리시키며 역상 (C18) 크로마토그래피에 의해 추가로 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (1.1 g, 20%)을 연한 갈색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.58분 및 0.59분, ES+ve m/z 182 (M+H)+.
중간체 50
2,4- 디플루오로 -6-( 메틸옥시 ) 벤조니트릴 및 2,6- 디플루오로 -4-( 메틸옥시 ) 벤조니트릴
Figure pct00071
메탄올 (30 mL) 중의 2,4,6-트리플루오로벤조니트릴 (10 g, 63.7 mmol)의 용액을 0℃에서 메탄올 (12.13 mL, 63.7 mmol) 중의 30% 소듐 메톡사이드 용액으로 적가 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 증발시키고, 수득된 미정제 고형물을 물 (100 mL)과 EtOAc (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 수성층을 EtOAc (100 mL)로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 물 (100 mL)과 식염수 (100 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 샘플을 시클로헥산 및 디클로로메탄 (1:1) 중에서 750 g 실리카 카트리지에 로딩시키고, Flashmaster II 상에서 0-100% 메틸 3차-부틸 에테르-시클로헥산으로 용리시키며 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 예상되는 생성물 (2,4-디플루오로-6-(메틸옥시)벤조니트릴)과 이의 위치이성질체 (2,6-디플루오로-4-(메틸옥시)벤조니트릴) (1:1)의 혼합물을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.92분, 0.95분, ES+ve m/z 170 (M+H)+.
중간체 51
3-{[3-아미노-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤조니트릴
Figure pct00072
수산화칼륨 (85% 순수함, 0.84 g, 12.7 mmol)을 분말화하고, DMSO (25 mL)에 첨가하고, 혼합물을 5분간 교반하였다. DMSO (5 mL) 중의 6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 및 4-플루오로-6-(메틸옥시) 위치이성질체) (1.085 g, 6 mmol)의 1:1 혼합물의 용액을 첨가하고, 혼합물을 5분간 교반하였다. 반응 혼합물의 색이 어두운 적색으로 변하였다. 고형물 3-(클로로메틸)벤조니트릴 (1.0 g, 7.1 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 2M HCl (3 mL)로 처리하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 용액을 물 (4회)로 세척하고 식염수로 1회 세척하고, 건조시키고 (MgSO4) 증발시켰다. 잔류물을 DCM과 MeOH에 용해시키고, florisil (5 g) 상에 미리 흡수시켰다. 미리 흡수된 화합물을 두 개의 10Og 실리카 카트리지 상에 정위시키고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산을 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들 (RT=48분)을 감압하에 증발시켜 순수하지 않은 표제 화합물을 오렌지색 고형물로서 수득하였다. 이것은 추가 정제를 필요로 하며, 이것을 florisil 상에 미리 흡수시키고, Flashmaster 실리카 10Og 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산을 이용하여 100분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들 (RT=46-70분)을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (362 mg, 20%)을 황색 고형물로서 수득하였다: LCMS (시스템 A) RT= 0.96분, ES+ve m/z 297 (M+H)+,
Figure pct00073
중간체 52 및 53
5- 클로로 -N-[1-[(3- 시아노페닐 ) 메틸 ]-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드 (중간체 52) 및 5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-N-[1-[(3-시아노페닐) 메틸 ]-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드 (중간체 53)
Figure pct00074
클로로포름 (6 mL) 및 피리딘 (2 mL) 중의 3-{[3-아미노-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 51) (362 mg, 1.22 mmol)의 현탁액을 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (398 mg, 1.83 mmol)에 실온에서 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 클로로포름과 2M HCl 용액 사이에서 분배시켰다. 유기상을 HCl로 3회 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 증발시켰다. 잔류하는 검(1 g)을 클로로포름에 용해시키고, 하나의 실리카 10O g 카트리지에 적용시키고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산을 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 중간체 52 (260 mg, 45%)를 오프-화이트 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.17분, ES+ve m/z 477/479 (M+H)+. 덜 극성인 분획들을 합치고, 증발시켜 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[1-[(3-시아노페닐)메틸]-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (중간체 53) (53 mg, 7%)를 첨가하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.42분, ES+ve m/z 657/659 (M+H)+.
중간체 54
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5-클로로-2- 티오펜설폰아미드 포름산 염
Figure pct00075
THF (10 mL) 중의 5-클로로-N-[1-[(3-시아노페닐)메틸]-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 52)(260 mg, 0.54 mmol)의 용액을 아이스-배스에서 냉각시키고, 질소하에 에테르 중의 리튬 알루미늄 히드라이드 용액 (1 M, 0.38 mL)으로 처리하였다. 3시간 후에, 2M NaOH 용액 (1 mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭시키고, 혼합물을 질소하에 0.5시간 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시키고, 유기 용액을 감압하에 증발시켰다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, MeOH에 이어 MeOH 중의 10% 수성 암모니아로 용리시키며 이온-교환 SCX-2 카트리지에 적용시켰다. 암모니아성 용액을 감압하에 증발시켜 순수하지 않은 생성물을 황색 고형물 (100.2 mg)로서 수득하였다. 고형물을 2M HCl로 처리하고 클로로포름을 첨가하였다. 에멀젼이 형성되었고, 이것을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 MeOH-DMSO (1:1) (2 mL)에 용해시키고, Sunfire C18 컬럼 상에서 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켜 RT=6분의 분획을 수집하였다 (방법 A). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (53 mg, 18%)을 포르메이트 염으로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.82분, ES+ve m/z 481/483 (M+H)+.
중간체 55
3,6- 디플루오로 -2- 메톡시 - 벤조니트릴
Figure pct00076
메탄올 (600 mL)을 나트륨 (Alfa, 16.1 g, 0.702 gatoms, 1.05 equiv.)으로 부분씩 처리하였다. 소듐 메톡사이드 용액을 실온으로 냉각시키고, 메탄올 (600ml) 중의 2,3,6-트리플루오로벤조니트릴 (Matrix, 105 g, 0.699 mol)의 용액에 실온에서 적가하였다. 첨가를 완료한 후에, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후 감압하에 메탄올을 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 (500ml)와 물 (500 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 제거하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 이것을 6" vigreux 컬럼 @ 20 mmHg, 오일 배스 160℃, 헤드 온도 120℃를 이용하여 증류에 의해 정제시켜 표제 화합물을 백색 고형물 (108 g, 91%)로서 수득하였다.
중간체 56
5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00077
에탄올 (300 mL) 중의 3,6-디플루오로-2-메틸옥시벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 55) (30 g, 184 mmol)의 혼합물을 히드라진 일수화물 (Alfa, 89 mL, 1.84 mol, 10 equiv.)과 반응시켰다. 생성된 혼합물을 밤새 가열 환류시킨 다음 실온으로 냉각되게 하였다. 실리카를 혼합물에 첨가한 다음 증발 건조시켰다. 그 후, 미리-흡수된 미정제 반응 혼합물을 페트롤에서 EtOAc까지 용리시키며 (10% 단계, 단계 당 500 mL) 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제 화합물 (8.4 g, 25%)을 황색 고형물로서 수득하였다.
중간체 57
3-{[3-아미노-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤조니트릴
Figure pct00078
미세하게 분쇄된 수산화칼륨 (6.59 g, 118 mmol, 2.5 equiv.)을 DMSO (100 mL)로 처리하였다. 여기에 5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 56) (8.5 g, 47 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 50분간 교반하였다. 적색 착색된 혼합물에 3-클로로메틸 벤조니트릴 (8.9 g, 59 mmol, 1.25 equiv.)을 한 번에 첨가하였다. ~5℃의 약한 발열이 관찰되었다. 혼합물이 실온에서 25분간 교반되게 한 다음, 물 (600 mL)에 붓고, 클로로포름 (400 mL)으로 추출하였다. 수성층을 클로로포름 (2 x 400 mL)으로 재-추출하였다. 유기 추출물을 합치고, 물 (3 x 500 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 이것을 실리카 상에 건조 로딩시켜 20% 페트롤 내지 70% EtOAc-페트롤로 용리시키며 크로마토그래피하였다. 상기 물질에서 불순물을 떼어내기 위해 석션 컬럼 상에서 재-크로마토그래피하였다. 불순한 물질을 DCM에 용리시키고 DCM 내지 30% EtOAc-DCM으로 용리시켜 표제 화합물 (8.25 g, 48%)을 오프-화이트 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.96분, ES+ve m/z 297 (M+H)+.
중간체 58
3-{[3-아미노-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤조니트릴
Figure pct00079
건조 DCM (3 mL) 및 피리딘 (1 mL, 12 mmol) 중의 3-{[3-아미노-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 57)(470 mg, 1.59 mmol)의 용액에 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (517 mg, 2.38 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (15 mL)와 2M 염산 (15 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합친 유기 용액을 물과 식염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시킨 다음, 진공에서 농축시켜 어두운 적색 오일을 수득하였다. 이것을 디클로로메탄 중에서 실리카 100 g 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산으로 용리시키며 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (206 mg, 27%)을 연한 갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.17분 ES+ve m/z 477/479 (M+H)+.
중간체 59
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-아미노-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 카르바메이트
Figure pct00080
3-{[3-아미노-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조니트릴 (제조 참조, 중간체 58)(5 g, 16.9 mmol), 니켈 (II) 클로라이드 (4.37 g, 33.7 mmol) 및 디-3차-부틸 디카르보네이트 (5.52 g, 25.3 mmol)를 THF (75 mL)와 메탄올 (113 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 반응물을 -10℃로 냉각시키고, 소듐 보로히드라이드 (4.47 g, 118 mmol)를 반응물에 부분씩 첨가하였다. 반응물이 실온에서 밤새 교반되게 하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있지 않음을 나타내었으므로, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 흑색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (500 mL)에 용해시키고, 물 (500 mL)로 3회 세척하였다. 유기층을 식염수 (500 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음, 진공에서 증발시켜 잔류물 (5.5 g)을 수득하였다. 잔류물의 500 mg 부분을 디클로로메탄에 용해시키고, 2Og 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 30분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켰다. 남아 있는 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 두 개의 100g 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켰다. 세 개의 모든 컬럼으로부터의 생성물을 합쳐 표제 화합물 (4.4 g, 65%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.08분, ES+ve m/z 401 (M+H)+.
중간체 60
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-(메 틸옥 시)-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 카르바메이트
Figure pct00081
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-아미노-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]카르바메이트 (제조 참조, 중간체 59)(3.4 g, 8.49 mmol)를 디클로로메탄 (14 mL) 및 피리딘 (21 mL)의 혼합물에 용해시키고, 반응물이 질소하에 2시간 동안 교반되게 하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있지 않음을 나타내었으므로, 여분의 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (0.461 g, 2.12 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 45분간 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (250 mL)에 용해시키고, 물 (3 x 250 mL)로 세척하였다. 유기층을 식염수 (20OmL)로 한 번 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 100g 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켜 표제 화합물 (2.7 g, 55%)을 오렌지색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.27분, ES+ve m/z 581/583 (M+H)+.
중간체 61
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5-클로로-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00082
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]카르바메이트 (제조 참조, 중간체 60) (2.7 g, 4.65 mmol)를 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산 (5.00 mL)을 반응물에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 자줏빛 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 SCX-2 이온-교환 카트리지 (70 g) 상에 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 HCl, 그 다음 메탄올 및 마지막으로 메탄올 중의 암모니아로 잘 세척하였다. 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 오프 화이트 고형물을 수득하였고, 이것을 DMSO에 용해시키고, 여과하고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 SCX-2 이온-교환 카트리지 (70 g) 상에 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 2M 암모니아로 잘 세척하였다. 암모니아성 분획들로부터 용매를 증발시켜 표제 화합물 (1 g, 45%)을 백색 고형물로서 수득하였다: LCMS (시스템 A) RT=0.84분, ES+ve m/z 481/483 (M+H)+.
중간체 62
3-아미노-1H- 인다졸 -4- 카르보니트릴
Figure pct00083
3-플루오로-1,2-벤젠디카르보니트릴 (APIN) (5 g, 34.2 mmol)을 에탄올 (80 mL)에 용해시키고, 히드라진 일수화물 (4.98 mL, 103 mmol)을 용액에 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (200 mL)와 물 (200 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 물 (100 mL)로 세척하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하였다. 유기층들을 합치고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (4.7 g, 87%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.53분, ES+ve m/z 159 (M+H)+.
중간체 63
1,1-디메틸에틸 3-아미노-4- 시아노 -1H- 인다졸 -1- 카르복실레이트
Figure pct00084
디클로로메탄 (150 mL) 중의 디-3차-부틸 디카르보네이트 (7.13 g, 32.7 mmol)를 아세토니트릴 (150 mL) 중의 3-아미노-1H-인다졸-4-카르보니트릴 (제조 참조, 중간체 62)(4.7 g, 29.7 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.726 g, 5.94 mmol) 및 트리에틸아민 (8.28 mL, 59.4 mmol)의 용액에 첨가하고, 질소하에 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남이 있지 않음을 나타내었으므로, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔류물을 수득하였고, 이것을 DCM (250 mL)과 물 (250 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 물 (250 mL)로 추가 2회 및 식염수 (200 mL)로 1회 세척한 후에 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (4.3 g, 56%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A): RT= 0.94분, ES+ve m/z 259 (M+H)+.
중간체 64
1,1-디메틸에틸 3-{비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4- 시아노 -1H- 인다졸 -1- 카르복실레이트
Figure pct00085
1,1-디메틸에틸 3-아미노-4-시아노-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 63)(4.3 g, 16.65 mmol)를 디클로로메탄 (40 mL) 및 피리딘 (40 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (7.23 g, 33.3 mmol)를 상기 용액에 첨가하고, 45℃에서 질소하에 60시간 동안 교반하였다. LCMS가 약 30%의 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로, 추가량의 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (3.5 g, 16.12 mmol)를 반응물에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. LCMS가 생성물에 변화가 없음을 나타내었으므로, 반응물을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (200 mL)에 용해시키고, 물 (200 mL)로 3회 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물 (10 g)을 DCM에 용해시키고, 750 g 실리카 컬럼 상에 로딩시키고, Companion 시스템 상에서 0-25% 에틸 아세테이트-DCM 구배를 이용하여 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (5.8 g, 56%)을 오렌지색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.45분, ES+ve m/z 636/638 (M+NH4)+.
중간체 65
5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-N-(4- 시아노 -1H- 인다졸 -3-일)-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00086
1,1-디메틸에틸 3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (제조 참조, 중간체 64)(5.6 g, 9.04 mmol)를 디클로로메탄 (44 mL) 및 트리플루오로아세트산 (11 mL)의 혼합물에 용해시키고, 40분간 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로, 반응물을 추가로 30분간 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있지 않음을 나타내었으므로, 혼합물을 진공에서 증발시켜 크림색 고형물 (5.7 g)을 수득하였다. 상기 고형물의 일부 (1 g)를 florisil 상에 흡수시키고, 5Og 실리카 카트리지 상에 로딩시켜 Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트 시클로헥산 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 증발시켜 표제 화합물 (400 mg, 9%)을 수득하였다. 잔류물의 나머지를 THF에 용해시키고, 36Og 사전-컨디셔닝된 C18 카트리지 상에 로딩시키고, 50-99% 아세토니트릴-워터 구배 상에서 탄산암모늄 변형제로 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (1.6 g, 34%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.20분, ES+ve m/z 536/538 (M+NH4)+.
중간체 66
1,1-디메틸에틸 {[3-( 히드록시메틸 ) 페닐 ] 메틸 } 카르바메이트
Figure pct00087
3-(히드록시메틸)벤조니트릴 (1 g, 7.51 mmol), 니켈 (II) 클로라이드 (0.973 g, 7.51 mmol) 및 디-3차-부틸 디카르보네이트 (3.28 g, 15.02 mmol)를 메탄올 (48 mL) 및 THF (32 mL)의 용액에 용해시키고 아이스-배스에서 0℃로 냉각하였다. 소듐 보로히드라이드 (1.989 g, 52.6 mmol)를 부분씩 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었으므로, 반응 혼합물을 진공에서 증발시켜 흑색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL)와 물 (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추가 2회 세척하였다. 합친 유기 용액을 식염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 100 g 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켜 표제 화합물 (1.248 g, 70%)을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.82분.
중간체 67
1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-(비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4- 시아노 -1H-인다졸-1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 ) 카르바메이트
Figure pct00088
5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-(4-시아노-1H-인다졸-3-일)-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 65) (1.1 g, 2.118 mmol), 트리페닐포스핀 (1.111 g, 4.24 mmol) 및 1,1-디메틸에틸 {[3-(히드록시메틸)페닐]메틸}카르바메이트 (제조 참조, 중간체 66) (1.005 g, 4.24 mmol)를 테트라하이드로푸란 (10 mL)에 현탁시키고, DIAD (0.824 mL, 4.24 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물이 균질해졌고, 이것을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있지 않음을 나타내었으므로, 용액을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL)와 물 (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 물 (100 mL)로 추가 2회 및 식염수로 (100 mL) 1회 세척한 다음 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 황색 오일 (4 g)을 수득하였다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 두 개의 100g 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켜 표제 화합물 (1.5 g, 96%)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.48분, ES+ve m/z 755/757 (M+NH4)+.
중간체 68
1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4- 포르밀 -1H-인다졸-1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 ) 카르바메이트
Figure pct00089
1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 67) (1.5 g, 2.031 mmol)를 톨루엔 (5 mL)에 용해시키고 -10℃로 냉각하였다. 온도를 모니터링하고 0℃ 미만으로 유지하면서, DIBAL-H (4.06 mL, 6.09 mmol)를 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 75분 동안 교반시킨 다음 DIBAL-H (1.354 mL, 2.031 mmol)를 더 적가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 일부 남아 있음을 나타내었으므로, 반응물을 -10℃로 냉각하고, DIBAL-H (0.677 mL, 1.015 mmol)를 적가하고, 반응물을 90분 동안 교반하였다. LCMS가 단지 5% 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로, 반응물을 메탄올로 켄칭시키고, 5M HCl로 pH 3까지 산화시키고, 2M NaOH로 중화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하였다. 유기층을 물 (100 mL)로 3회, 식염수 (100 mL)로 1회 세척한 다음, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 황색 포움 (1.4 g)을 수득하였다. 이것의 일부 (200 mg)를 DCM에 용해시키고, 50 g 실리카 카트리지 상에 로딩하고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 샘플을 실리카 상에 디그레이딩하고 (degraded), 나머지 생성물을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
중간체 69
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-{비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 디플루오로메틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 카르바메이트
Figure pct00090
1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-포르밀-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 68) (400 mg, 0.539 mmol)를 디클로로메탄 (6 mL)에 용해시켰다. (디에틸아미노)설퍼 트리플루오라이드 (DAST) (Aldrich) (0.107 mL, 0.809 mmol)를 용액에 첨가하고, 이것을 5시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 DAST (0.071 mL, 0.539 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (2 mL)로 처리하고, 15분간 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (50 mL)으로 희석시키고, 물 (50 mL)로 3회 및 식염수 (50 mL)로 1회 세척한 후에 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물 (200 mg)을 디클로로메탄에 용해시키고, 50 g 실리카 카트리지 상에 로딩하고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켜 표제 화합물 (60 mg, 15%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.48분, ES+ve m/z 780/782/784 (M+NH4)+.
중간체 70
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 디플루오로메틸 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00091
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(디플루오로메틸)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]카르바메이트 (제조 참조, 중간체 69) (60 mg, 0.079 mmol)를 디클로로메탄 (0.5 mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (0.125 mL)을 용액에 첨가하고, 1시간 동안 질소하에 교반하였다. 용액을 질소 스트림하에 농축시키고, 오프-화이트 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 조건화된 설폰산 (SCX-2) 카트리지 (10 g)에 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 2M 암모니아로 세척하였다. 암모니아성 분획으로부터 용매를 증발시켜 표제 화합물 (26 mg, 54%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.11분, ES+ve m/z 663/665 (M+H)+.
중간체 71
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-{비스[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 히드록시메틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 카르바메이트
Figure pct00092
1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-포르밀-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 68)(400 mg, 0.539 mmol)를 메탄올 (3 mL)에 용해시키고, 소듐 보로히드라이드 (30.6 mg, 0.809 mmol)를 상기 용액에 부분씩 첨가하고, 반응 혼합물을 질소하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기층을 물 (50 mL)로 2회 및 식염수 (50 mL)로 1회 세척한 후에 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 5Og 실리카 카트리지에 로딩하고, Flashmaster II 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-시클로헥산 구배를 이용하여 80분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 용매를 증발시켜 표제 화합물 (67 mg, 17%)을 오프-화이트 검으로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.35분, ES+ve m/z 743/745 (M+H)+.
중간체 72
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 히드록시메틸 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -N-[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00093
1,1-디메틸에틸 [(3-{[3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(히드록시메틸)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]카르바메이트 (제조 참조, 중간체 71)(93 mg, 0.125 mmol)를 디클로로메탄 (0.5 mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (0.125 mL)을 상기 용액에 첨가하고, 1시간 동안 질소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림하에 농축시키고, 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 설폰산 (SCX-2) 카트리지 (10 g)에 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 2M 암모니아로 잘 세척하였다. 암모니아성 분획으로부터 용매를 증발시켜 표제 화합물 (53 mg, 66%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.89분, ES+ve m/z 643/645 (M+H)+.
중간체 73
1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4- 시아노 -1H-인다졸-1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 ) 카르바메이트
Figure pct00094
2M 수산화나트륨 (54.8 mL, 40.6 mmol)을 메탄올 (100 mL)과 THF (20 mL)에 용해된 1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 68)(5.4 g, 7.3 mmol)에 첨가하고, 반응물을 45℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시켜, 생성물을 EtOAc로 추출하였다 (300 mL x 2). 합친 유기층을 1M HCl (150 mL), 식염수 (100 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 농축시켜 미정제 표제 화합물을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 1.17분, ES+ve m/z 558/560 (M+H)+.
중간체 74
N-({3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4- 시아노 -1H- 인다졸 -1-일)메틸] 페닐 } 메틸 ) 아세트아미드
Figure pct00095
TFA (1 mL)를 DCM (4 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 73)(630 mg, 1.13 mmol)에 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분간 교반하였다. LCMS가 boc 기가 제거되었음을 나타내었고, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM (7 mL)에 용해시키고, 트리에틸아민 (1.573 mL, 11.29 mmol) 및 아세트산 안히드라이드 (0.128 mL, 1.355 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 30분간 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)로 처리하고, 생성물을 DCM (2 x 30 mL)으로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 황색 오일 (0.57 g)로서 수득하였다. 잔류물을 Flashmaster (실리카 20 g 카트리지)상에서, DCM 중의 25-100% EtOAc 구배에 이어 DCM 중의 0-30% MeOH 구배로 용리시키며 크로마토그래피에 의해 정제시키고, 적합한 분획을 합치고 농축시켜 표제 화합물을 백색 고형물 (44 mg, 7%)로서 수득하였다. 컬럼으로부터의 다른 분획들을 합치고, 농축시켜 황색 오일 (0.25 g)을 수득하였고, 이것을 MeOH (5 mL)에 용해시키고, 탄산칼륨 (300 mg)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. LCMS가 두 아세틸 기 중 하나가 절단되어 요망되는 생성물이 더 많이 생성되었음을 나타내었다. 혼합물을 농축시키고 2N HCl로 산화시켰다. 생성물을 EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 포화된 식염수 (5 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 이용하여 건조시키고, 진공에서 증발시켜 미정제 생성물을 갈색 오일로서 수득하였다. 잔류물을 DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (70 mg, 12%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 0.92분, ES+ve m/z 500/502 (M+H)+.
중간체 75
N-({3-[(4-아세틸-3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-1H- 인다졸 -1-일)메틸] 페닐 } 메틸 ) 아세트아미드
Figure pct00096
메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.176 mL, 0.528 mmol)를 테트라하이드로푸란 (1 mL) 중의 N-({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아세트아미드 (제조 참조, 중간체 74)(44 mg, 0.088 mmol)의 교반 용액에 실온에서 서서히 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 여전히 남아 있음을 나타내었으므로, 메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.176 mL, 0.528 mmol)를 더 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있지 않음을 나타내었다. 반응 혼합물을 O℃로 냉각하고, 0.5M HCl (4 mL)을 첨가하고, 생성물을 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기층을 식염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 1.03분, ES+ve m/z 517/519 (M+H)+.
중간체 76
1,1-디메틸에틸 ({3-[(4-아세틸-3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-1H-인다졸-1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 ) 카르바메이트
Figure pct00097
메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (1.792 mL, 5.38 mmol)를 테트라하이드로푸란 (8 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 ({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 73)(1 g, 1.792 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응물을 실온으로 서서히 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.896 mL, 2.69 mmol)를 더 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 여전히 남아 있음을 나타내었다. 반응 혼합물을 다시 냉각하고, 메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (1.792 mL, 5.38 mmol)를 더 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 및 0.5N HCl (20 mL)을 서서히 첨가하였다. 생성물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하고, 합친 유기층을 식염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물 (1.07g)을 디클로로메탄 중에서 실리카 100g 카트리지에 로딩시키고, 0-25% 에틸 아세테이트-디클로로메탄을 이용하여 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (550 mg, 53%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.27분, ES+ve m/z 575/577 (M+H)+.
중간체 77
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-(1- 히드록시에틸 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00098
소듐 보로히드라이드 (20.52 mg, 0.543 mmol)를 MeOH (5 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 ({3-[(4-아세틸-3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 75)(260 mg, 0.452 mmol)의 교반 용액에 25℃에서 N2 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 메탄올의 약 ~2/3을 진공에서 증발시키고, 잔류물을 1M HCl (5 mL)로 서서히 처리하였다. 생성물을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 디옥산 중의 4N HCl (2 mL, 8.00 mmol)을 잔류물에 25℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 30분간 교반하였다. 미정제 샘플을 바로 미리-세척된 (MeOH) SPE 설폰산 (SCX-2) 카트리지 (20 g)에 로딩시켰다. SCX 카트리지를 2 컬럼 부피의 MeOH로 세척하고, 생성물을 3 컬럼 부피의 MeOH 중의 2N 암모니아로 세척시킴에 의해 수집하였다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (235 mg, 91%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.77분, ES+ve m/z 477/479 (M+H)+.
중간체 78
N-[1-{[3-( 아미노메틸 ) 페닐 ] 메틸 }-4-(1-히드록시-1- 메틸에틸 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00099
메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.730 mL, 2.191 mmol)를 THF (3 mL) 중의 1,1-디메틸에틸 ({3-[(4-아세틸-3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)카르바메이트 (제조 참조, 중간체 76)(210 mg, 0.365 mmol)의 교반 용액에 실온에서 서서히 적가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반한 다음 메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.730 mL, 2.191 mmol)를 더 첨가하고, 밤새 교반하였다. LCMS가 요망되는 알코올에 상응하는 분자 이온 592 [M+1]를 나타내었고 출발 물질이 생성물과 함께 공-용리되었음을 나타내었다. 1N HCl (5 mL)을 첨가하고, 생성물을 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 디옥산 중의 4N HCl (2 mL, 8.00 mmol)에 용해시키고, 반응물을 실온에서 1시간에 걸쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올 및 메탄올 중의 2M 암모니아로 용리되는 SCX-2 이온-교환 2Og 카트리지 상에 로딩시켰다. 적합한 암모니아성 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (168 mg, 76%)을 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.79분, ES+ve m/z 491/493 (M+H)+.
중간체 79
4-{[3-[[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]({[2-( 트리메틸실릴 )에틸] 옥시 } 메틸 )아미노]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 }-N,N- 디메틸벤즈아미드
Figure pct00100
5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-N-({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)-2-티오펜설폰아미드 (중간체 8) (150 mg, 0.32 mmol)의 용액을 4-(클로로메틸)-N,N-디에틸벤즈아미드 (86 mg, 0.38 mmol) 및 수산화칼륨 (21.3 mg, 0.38 mmol)으로 처리하고, 혼합물을 50℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM (3 mL)과 물 (3 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기상을 분리시키고, 수성층을 추가로 2 mL의 DCM으로 추출하였다. 합친 유기 용액을 건조시키고 (소수성 프릿) 질소 스트림하에 블로우다운 유닛에서 농축시켰다. 잔류물을 Flash Master 시스템 (Solo machine)을 이용하여 50 g 실리카 카트리지 상에서, B 중의 0 내지 100% A로 용리시키며 (A는 DCM 중의 20% EtOAC 용액이고, B는 순수한 DCM이다) 60분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획을 증발시켜 표제 화합물 (125 mg, 60%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.52분, ES+ve m/z 680/682(M+NH4)+.
중간체 80
1-{[3- 플루오로 -4-( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-아민
Figure pct00101
4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 1) (490 mg, 3 mmol) 및 수산화칼륨 (185 mg, 3.30 mmol)을 DMSO (30 mL)에 용해시켰다. 반응물을 30분간 교반시킨 후에 4-(브로모메틸)-2-플루오로-1-(메틸옥시)벤젠 (657 mg, 3.00 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 질소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (250 mL)로 희석시키고, 물 (2 x 250 mL)과 염수 (250 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과한 후에 진공에서 증발시켜 갈색 오일을 수득하였다. 잔류물을 디클로로메탄 중에서 실리카 100g 카트리지 상에 로딩시키고, Flashmaster 상에서 0-100% 에틸 아세테이트-디클로로메탄을 이용하여 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 실리카 7Og 상에서 0-50% 에틸 아세테이트-디클로로메탄을 이용하여 40분에 걸쳐 크로마토그래피에 의해 재-정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (432 mg, 48%)을 오프-화이트 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 0.96분, ES+ve m/z 302 (M+H)+.
실시예 1
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아세트아미드
Figure pct00102
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4)(700 mg, 1.40 mmol)에 트리에틸아민 (0.583 mL, 4.20 mmol) 및 DCM (3 mL)을 첨가하여 현탁액을 수득하였다. 아세트산 안히드라이드 (0.146 mL, 1.54 mmol)를 실온에서 적가하고, 얻어진 혼합물을 주위 온도에서 2 시간 동안 교반하였다. LCMS에서는 반응이 완료된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 DCM (20 mL) 및 수중 NaHCO3의 포화 용액 (20 mL)으로 희석시켰다. 유기 용액을 분리하고, 수성층을 DCM (20 mL)으로 추가로 추출하였다. 유기 용액을 합치고, 염수 (20 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO에 로딩하고, 역상 (C18) 실리카 (330 g) 상에서 수중 5% 내지 80% MeCN (+ 0.1%의 NEt3)의 구배 (암모늄 비카르보네이트로의 pH=10)를 이용하여 14 컬럼 길이에 걸쳐 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (570 mg, 81%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.01 분, ES+ve m/z 505/507 (M+H)+.
실시예 2 내지 4를 유사한 방식으로 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 및 적절한 카르복실산 안히드라이드로부터 제조하였다.
실시예 2
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 프로판아미드
Figure pct00103
LCMS (시스템 A) RT=1.07 분, ES+ve m/z 519/521 (M+H)+.
실시예 3
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-메틸프로판아미드
Figure pct00104
LCMS (시스템 A) RT=1.13 분, ES+ve m/z 533/535 (M+H)+.
실시예 4
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2,2- 디메틸프로판아미드
Figure pct00105
LCMS (시스템 A) RT=1.19 분, ES+ve m/z 547/549 (M+H)+.
실시예 5
5- 클로로 -N-[1-({3-[( 포르밀아미노 ) 메틸 ] 페닐 } 메틸 )-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00106
건조 DMF (0.3 ml) 중의 포름산 (5 ㎕, 0.13 mmol)의 용액에 TBTU (34.7 mg, 0.108 mmol)를 첨가한 후에 트리에틸아민 (50.2 ㎕, 0.360 mmol)을 첨가하였다. 이러한 혼합물을 실온에서 약 10분 동안 교반한 후에 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (45 mg, 0.09 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 연한 황색 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS에서는 아주 적은 반응을 나타내었으며, 이에 따라 추가 산(~ 0.25 ml)를 첨가한 후에 TBTU (~30 mg)를 첨가하였다. 이러한 첨가를, LCMS 분석에 의해 SM 보다 생성물이 더 많이 존재할 때까지 20 시간에 걸쳐 3회 이상 반복하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트 (2 mL)와 소듐 비카르보네이트 포화 용액 (2 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (X 2)로 추출하였다. 합친 유기 용액을 물, 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중에 농축시켜 연한색 오일을 수득하고, 이를 정치시에 결정화하였다. 이를 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, MeCN-물 (95:5 + 0.05% 포름산) - 물 (+ 0.1% 포름산)의 구배로 용리하여 supelcosil ABZ+Plus 컬럼 상의 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (15.9 mg, 36%)을 연한 황색 분말로서 수득하였다: LCMS (시스템 A) RT= 1.02 분, ES+ve m/z 491/493 (M+H)+.
실시예 6
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-모르폴린카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00107
아세토니트릴 (10 ml) 중의 3-모르폴린카르복실산 (121 mg, 0.523 mmol)의 용액을 HATU (199 mg, 0.523 mmol)로 처리한 후에 DIPEA (0.248 mL, 1.426 mmol)로 처리하였다. 얻어진 혼합물을 주위 온도에서 15분 동안 교반한 후에 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (220 mg, 0.475 mmol)로 처리하였다. 얻어진 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (20 mL) 및 물 (30 mL)로 희석시켰다. 유기상을 분리하고, 수성층을 DCM (20 mL)으로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 물 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM (10 mL)에 용해시키고, 여기에 염산 (0.6 mL, 2.4 mmol)을 첨가하고, 얻어진 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. LCMS에서는 생성물 및 출발 물질의 혼합물(1:1)인 것으로 나타내었다. 추가 염산 (0.6 ml, 2.4 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 주위 온도에서 3 시간 동안 교반한 후에, LCMS에서는 완전한 반응을 나타내었다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 DCM (20 mL)으로 2회 처리하고 동시-증발시켰다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL) (x 4)에 용해시키고, TFA 변형제를 함유한 아세토니트릴-물을 이용하여 표준 C18 컬럼 상의 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 생성물을 TFA 염(244.5 mg, 75%)으로서 수득하였다. LCMS (시스템 E) RT=2.18 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 7 내지 16을 유사하게 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 및 적절한 카르복실산으로부터 제조한 후에 HCl 탈보호하였다.
실시예 7
(3R)-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-모르폴린카르복사미드 하이드로클로라이드
Figure pct00108
LCMS (시스템 D) RT=0.92 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 8
(3S)-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-모르폴린카르복사미드 하이드로클로라이드
Figure pct00109
LCMS (시스템 D) RT=0.92 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 9
(2R)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다 졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 피페리딘카르복사미드 트리플루오로아세테이트 염
Figure pct00110
LCMS (시스템 E) RT=2.13 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+.
실시예 10
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 - 메틸 -D- 알라닌아미드 하이드로 클로라이드
Figure pct00111
LCMS (시스템 F) RT=0.80 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 11
3-아미노-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2,2- 디메틸프로판아미드 하이드로 클로라이드
Figure pct00112
LCMS (시스템 C) RT=0.81 분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+
실시예 12
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 - 메틸글리신아미드 하이드로 클로라이드
Figure pct00113
LCMS (시스템 C) RT=0.78 분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+.
실시예 13
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 메틸 -D- 프롤린아미드
Figure pct00114
LCMS (시스템 C) RT=2.21 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+.
실시예 14
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 메틸 -2- 피페리딘카르복사미드
Figure pct00115
LCMS (시스템 F) RT=0.87 분, ES+ve m/z 588/590 (M+H)+.
실시예 15
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1-( 메틸아미노 ) 시클로프로판카르복사미드 하이드로 클로라이드
Figure pct00116
LCMS (시스템 D) RT=0.94 분, ES+ve m/z 560/562 (M+H)+.
실시예 16
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 피페라진카르복사미드 하이드로 클로라이드
Figure pct00117
LCMS (시스템 C) RT=0.76 분, ES+ve m/z 575/577 (M+H)+
실시예 17 내지 실시예 28
HATU를 이용한 배열 방식으로 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드의 아실화 및 Boc 보호기의 HCl 제거를 위한 일반적인 방법:
HATU (190 mg, 0.500 mmol)를 DMF (2 ml)에 용해시키고, 분취액을 각 산 모노머 (사전 계량 0.049 mmol)으로 분산시켰다 (0.2 ml, 0.05 mmole). DIPEA (20 ㎕, 3 eq)를 각 산에 첨가하고, 캡핑하고 산 분산액으로 흔들어 주었다. N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (255 mg, 0.551 mmol)를 DMF (2 ml)에 용해시키고, 분취액을 분산시키고(0.2 ml, 0.044 mmol), 각 산 웰에 첨가하였다. 반응 혼합물을 흔들어 주고, 실온에서 72 시간 동안 정치시켰다(편의를 위해 1주일 이상). 디옥산 중 4N HCl (100 ㎕)을 각 웰에 첨가하고, 흔들어 주고, 실온에서 24 시간 동안 정치시켰다. LCMS에서는 불완전한 반응인 것으로 나타났으며, 이에 따라, DMF를 질소 스트림 (래들리스 블로우다운 유닛)으로 거의 건조상태로 제거하고, 디옥산 중 4N HCl 용액 (500 ㎕)을 추가로 첨가하고, 실온에서 추가 18 시간 동안 정치시켰다. 잔류물에 DMSO (0.5 mL)를 첨가하고, 용액을 TFA 변형제를 함유한 아세토니트릴-물을 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상의 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다. 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서의 질소 스트림 하에서 제거하여 소정의 생성물을 수득하였다.
실시예 17
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 - 메틸 -L- 알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00118
LCMS (시스템 A) RT=0.83 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+
실시예 18
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L- 알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00119
LCMS (시스템 A) RT=0.82 분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+.
실시예 19
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-D- 알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00120
LCMS (시스템 A) RT=0.82 분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+.
실시예 20
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 글리신아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00121
LCMS (시스템 A) RT=0.81 분, ES+ve m/z 520/522 (M+H)+.
실시예 21
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 프로판디아미드
Figure pct00122
LCMS (시스템 A) RT=0.93 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 22
N 4 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 1 - 메틸 -L- 아스파르타미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00123
LCMS (시스템 A) RT=0.79 분, ES+ve m/z 591/593 (M+H)+.
실시예 23
메틸 N 4 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아스파라기네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00124
LCMS (시스템 A) RT=0.82 분, ES+ve m/z 592/594 (M+H)+.
실시예 24
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-(2- 피롤리디닐 ) 아세트아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00125
LCMS (시스템 A) RT=0.82 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+.
실시예 25
3-아미노-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 부탄아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00126
LCMS (시스템 A) RT=0.81 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 26
3-아미노-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 메틸프로판아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00127
LCMS (시스템 A) RT=0.81 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 27
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 메틸 -L- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00128
LCMS (시스템 A) RT=0.84 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+.
실시예 28
(4S)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다 졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4- 플루오로 -L- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00129
LCMS (시스템 A) RT=0.82 분, ES+ve m/z 578/580 (M+H)+.
실시예 29
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 3 - 메틸 -β- 알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00130
LCMS (시스템 A) RT=0.81 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 30 내지 43을 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드, HATU 및 상기와 같은 적절한 카르복실산으로부터의 배열 방식으로 제조하였으며, 여기서 탈보호화가 요구되지 않았으며, 이에 따라, 이러한 것들을 정제 전에 HCl로 처리하지 않았다.
실시예 30
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-( 메틸옥시 ) 아세트아미드
Figure pct00131
LCMS (시스템 A) RT=1.05 분, ES+ve m/z 535/537 (M+H)+.
실시예 31
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 , N 2 - 디메틸알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00132
LCMS (시스템 A) RT=0.83 분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
실시예 32
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 히드록시아세트아미드
Figure pct00133
LCMS (시스템 E) RT=2.50 분, ES+ve m/z 521/523 (M+H)+.
실시예 33
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1H- 피라졸 -4- 카르복사미드
Figure pct00134
LCMS (시스템 E) RT=2.53 분, ES+ve m/z 557/559 (M+H)+.
실시예 34
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 , N 2 ,2- 트리메틸알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00135
LCMS (시스템 E) RT=1.83 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 35
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 테트라하이드로 -3- 푸란카르복사미드
Figure pct00136
LCMS (시스템 E) RT=2.69 분, ES+ve m/z 561/563 (M+H)+.
실시예 36
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 - 메틸 - N 2 -[2-( 메틸옥시 )에틸] 글리신아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00137
LCMS (시스템 E) RT=1.87 분, ES+ve m/z 592/594 (M+H)+.
실시예 37
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 히드록시프로판아미드
Figure pct00138
LCMS (시스템 E) RT=2.57 분, ES+ve m/z 535/537 (M+H)+.
실시예 38
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1,3- 옥사졸 -5- 카르복사미드
Figure pct00139
LCMS (시스템 E) RT=2.59 분, ES+ve m/z 558/560 (M+H)+.
실시예 39
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1- 메틸 -L- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00140
LCMS (시스템 D) RT=0.94 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+
실시예 40
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1- 메틸 -D- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00141
LCMS (시스템 D) RT=0.95 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+
실시예 41
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 푸란카르복사미드
Figure pct00142
LCMS (시스템 A) RT=1.13 분, ES+ve m/z 556/558 (M+H)+.
실시예 42
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1- 메틸 -2- 피페리딘카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00143
LCMS (시스템 D) RT=0.96 분, ES+ve m/z 588/590 (M+H)+.
실시예 43
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 테트라하이드로 -2H-피란-4- 카르복사미드
Figure pct00144
LCMS (시스템 B) RT=2.71 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 44 내지 52
HATU를 이용한 배열 방식으로 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드의 아실화 및 Boc 보호기의 TFA 제거를 위한 일반적인 방법:
HATU (456 mg, 1.2 mmol)를 DMF (1.2 mL)에 용해시키고, 분취액을 각 산 모노머 (사전계량됨 0.1 mmol)에 분산시켰다 (0.1 ml, 0.1 mmol). DIPEA (40 ㎕, 2.2 eq)를 각 산에 첨가하고, 캡핑하고, 2분 동안 흔들어서 분산을 촉진시켰다. N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 클로라이드 (599 mg, 1.2 mmol)를 DMF (2.4 mL)에 용해시키고, 분취액(0.2 mL, 0.1 mmol)을 분산시키고, 각 산 웰에 첨가하였다. 반응 혼합물을 흔들고, 실온에서 48 시간 동안 정치시켰다. DMF를 질소 스트림 (래들리스 블로우다운 유닛)으로 절반-부피로 제거하였다. TFA (100 ㎕)를 각 웰에 첨가하고, 흔들어 주고, 실온에서 1 시간 동안 정치시켰다. LCMS에서는 불완전한 반응으로 나타났으며, DMF를 질소 스트림 (래들리스 블로우다운 유닛)으로 거의 건조상태로 제거하였다. 잔류물에 DMSO (0.5 mL)를 첨가하고, 용액을 TFA 변형제를 함유한 아세토니트릴-물을 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다. 용액을 PL-HCO3 SPE(0.2 mg, 6 mL, 사전-컨디셔닝된 MeOH)로 통과시켜 탈염화시켰다. 용매를 Genevac을 이용하여 진공 중에 증발시켜 소정의 생성물을 수득하였다.
실시예 44
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-L-히스티딘아미드
Figure pct00145
LCMS (시스템 B) RT=1.42 분, ES+ve m/z 600/602 (M+H)+.
실시예 45
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-D- 류신아미드
Figure pct00146
LCMS (시스템 B) RT=1.97 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+
실시예 46
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-D- 알로이소류신아미드
Figure pct00147
LCMS (시스템 B) RT=1.95 분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 47
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L- 페닐알라닌아미드
Figure pct00148
LCMS (시스템 B) RT=2.01 분, ES+ve m/z 610/612 (M+H)+.
실시예 48
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-D- 발린아미드
Figure pct00149
LCMS (시스템 B) RT=1.90 분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
실시예 49
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L- 리신아미드
Figure pct00150
LCMS (시스템 B) RT=1.46 분, ES+ve m/z 591/593 (M+H)+.
실시예 50
(2R)-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 아제티딘카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00151
LCMS (시스템 E) RT=1.80 분, ES+ve m/z 546/548 (M+H)+.
실시예 51
(2S)-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 피페리딘카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00152
LCMS (시스템 E) RT=1.85 분, ES+ve m/z 574/576 (M+H)+.
실시예 52
(4R)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다 졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4- 플루오로 -L- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00153
LCMS (시스템 E) RT= 1.82 분, ES+ve m/z 578/580 (M+H)+.
실시예 53
N-[1-{[3,4-비스( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00154
THF (3 ml) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 10) (150 mg, 0.286 mmol), 트리페닐포스핀 (150 mg, 0.572 mmol) 및 [3,4-비스(메틸옥시)페닐]메탄올 (Aldrich) (96 mg, 0.57 mmol)의 용액에 실온에서 디-이소-프로필 아조디카르복실레이트 (0.1 13 ml, 0.572 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 60℃에서 3 시간 동안 교반하였다. DCM (3 ml) 및 물 (3 ml)을 첨가하고, 유기상을 분리하였다. 수성층을 3 ml의 DCM으로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿 위에서 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하에 농축시켰다. 잔류물을 60분에 걸쳐 DCM 중 0-100% EtOAc의 구배를 이용하여 Flashmaster II 상의 실리카 50 g 카트리지 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고, 진공 중에 증발시키고, 잔류물을 메탄올 (5 ml)에 용해시키고, 수산화나트륨 (2M, 1.43 ml, 2.86 mmol)의 용액으로 처리하였다. 얻어진 혼합물을 60℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 증발시키고, 잔류물을 2 ml의 DCM, 3 ml의 물 사이에서 분배시켰다. 묽은 HCl 용액을 수성층의 pH가 대략 1이 될 때까지 첨가하였다. 유기상을 분리하고, 수성층을 2 ml의 DCM으로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿 위에서 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소의 스트림 하에 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 ml)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1 % 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서 질소의 스트림 하에 적절한 분획으로부터 제거하여 표제 화합물 (52.6 mg, 37%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.17 분, ES+ve m/z 494/496 (M+H)+.
실시예 54
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-O-메틸세린아미드 트리플루오로아세테이트
HATU를 이용한 배열 방식으로 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드의 아실화 및 Boc 보호기의 TFA 제거에 의해 상술된 일반적인 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다.
Figure pct00155
LCMS (시스템 E) RT=1.83 분, ES+ve m/z 564/566 (M+H)+.
실시예 55
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4,4- 디플루오로 -D- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00156
DIPEA(0.150 ml, 0.857 mmol) 및 건조 테트라하이드로푸란 (1 ml) 중의 1-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-4,4-디플루오로-L-프롤린 (Alfa Aesar) (215 mg, 0.857 mmol)의 용액을 실온에서 2분 동안 교반한 후에, 1-클로로-N,N,2-트리메틸-1-프로펜-1-아민 (113 ㎕, 0.857 mmol)을 적가하였다. 얻어진 탁한 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 후에, N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (214 mg, 0.428 mmol)를 첨가한 후에 DIPEA (0.224 ml, 1.28 mmol) 및 추가의 THF (5 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물은 용액 중에 존재하지 않으며, 이를 실온에서 3일 동안 정치시켰다. 이후에, 이를 진공 중에 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트와 소듐 비카르보네이트 포화 용액 사이에서 분배시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (x2)로 추출하고, 합친 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 진공 중에 농축시켜 연한 황색 오일을 수득하였다. 이를 3개의 동일한 부분으로 나누고, 포름산 변형제를 함유한 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다. 소정의 분획들을 합치고, 진공 중에 농축시켜 생성물 (35 mg, 12%)을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS에서는 HPLC 폐기물 중에 더욱 많은 생성물이 존재하는 것으로 나타났으며, 이에 따라, 이러한 폐기물을 진공 중에 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카 50 g 카트리지 상에서 디클로로메탄 중에 로딩하고 40분에 걸쳐 0-50% 에틸 아세테이트-디클로로메탄을 이용하여 Flashmaster 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고, 진공 중에 증발시켜 추가 생성물 1,1-디메틸에틸 (2R)-2-({[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아미노}카르보닐-4,4-디플루오로-1-피롤리딘카르복실레이트 (176 mg)를 연한 황색 오일로서 수득하였다. 이러한 물질을 추가 정제 없이 다음 단계를 통해 취하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.22 분, ES+ve m/z 696/698 (M+H)+.
제 2 배치의 생성물 (176 mg)을 건조 DCM (2 mL)에 용해시키고, 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 용액 (3 ml)의 4:1 혼합물로 처리하였다. 얻어진 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. LCMS에서는 소량의 출발 물질이 여전히 존재하는 것으로 나타났으며, 이에 따라 추가의 DCM-TFA (4:1, 1 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 밤새 정치시켰다. 반응 혼합물을 진공 중에 농축시키고, 잔류물을 최소량의 MeOH에 용해시킨 후에, 사전-컨디셔닝된 (MeOH) SCX-2 카트리지 (50 g) 상에 로딩하였다. 카트리지를 MeOH (4 부피)로 세척한 후에, MeOH 중의 10% 수성 NH3 용액으로 용리하였다. 소정의 분획을 진공 중에 농축시켜 표제 화합물의 유리 염기를 수득하였다. 이러한 물질을 소량의 메탄올에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (~0.007 mL)으로 처리하였다. 이를 이후에 진공 중에 농축시켜 표제 화합물 (78 mg, 36%)을 연한 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.89 분, ES+ve m/z 596/598 (M+H)+.
실시예 56
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 ,2- 디메틸알라닌아미드 포르메이트
Figure pct00157
무수 THF (8 mL) 중의 N-Boc-N,2-디메틸알라닌 (174 mg, 0.801 mmol)의 용액에 실온에서 1-클로로-N,N,2-트리메틸프로페닐아민 (0.106 mL, 0.801 mmol)을 적가하고, 얻어진 혼합물을 30분 동안 교반하였다. N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드(제조 참조, 중간체 4) (200 mg, 0.4 mmol)을 첨가한 후에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.209 mL, 1.20 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다 (불균일 반응). 용해도를 개선시키기 위해 추가 8 mL의 무수 테트라하이드로푸란 및 70 ㎕의 N,N-디이소프로필에틸아민을 순서대로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반한 후에, 진공 중에 증발시키고, 포화된 탄산수소나트륨 수용액 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 크림 오일을 수득하였다. 잔류물 (286 mg)을 MeOH:DMSO (1:1) (3x1 mL)에 용해시키고, 25분에 걸쳐 용매 A/B (A: 0.1 % v/v의 수중 포름산 용액, B: 0.1% v/v 아세토니트릴 중 포름산 용액)으로 용리하면서 (Sunfire C18 컬럼 150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경, 주변온도) 상에서 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 투명한 오일로서 수득하였다 (211 mg, 87%). LCMS (시스템 B) RT = 1.75 분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
실시예 57
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시-2-메틸프로판아미드
Figure pct00158
THF (2 ml) 중의 2-히드록시-2-메틸프로판산 (Aldrich) (20.84 mg, 0.200 mmol)의 용액에 실온에서 1-클로로-N,N,2-트리메틸-1-프로펜-1-아민 (0.026 ml, 0.200 mmol)을 적가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 여기에 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (50 mg, 0.100 mmol) 및 DIPEA (0.052 mL, 0.300 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후에, LCMS에서는 생성물이 주피크로서 나타났다. 반응 혼합물을 래들리스 블로우다운 장치에서 질소의 스트림 하에 농축시키고, 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 ml)에 용해시키고, 포름산 변형제를 함유한 아세토니트릴을 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서 질소의 스트림 하에 제거하여 표제 화합물 (48.5 mg, 88%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 1.05 분, ES+ve m/z 549/551 (M+H)+.
실시예 57 대안적인 제조
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-히드록시-2- 메틸프로판아미드
Figure pct00159
메탄올 (2000 ml) 중의 2-{[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아미노}-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (제조 참조, 중간체 27) (37 g, 62.6 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (26.0 g, 188 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 10분 동안 교반한 후에, 반응 혼합물은 결정화하기 시작하였다. 이를 3 시간 동안 교반하였다. 고형물을 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켰다. 잔류물을 2M HCl로 산성화시키고, 이를 에틸 아세테이트 (500 ml)로 추출하였다. 여과된 고형물을 물 (1000 ml)로 처리하고, 얻어진 현탁액을 2M HCl로 산성화시켰다. 이를 이후에, 에틸 아세테이트 (2 x 500 ml)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 1500 g 실리카 컬럼 상에 로딩하였다. 이를 8CV에 걸쳐 시클로헥산 중의 50-100% 에틸 아세테이트로 용리하였다. 소정의 분획들을 합치고 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (30.42 g, 89%)을 백색 고형물로서 수득하였다.
Figure pct00160
실시예 58
5- 클로로 -N-{4-( 메틸옥시 )-1-[(3-{[( 메틸설포닐 )아미노] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1H-인다졸-3-일}-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00161
건조 DCM (3 ml) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 ((제조 참조, 중간체 4) 51 mg, 0.10 mmol)의 현탁액에 메탄설포닐 클로라이드 (8 ㎕, 0.1 mmol)를 첨가한 후에 피리딘 (1 mL)을 첨가하였다. 얻어진 연한 황색 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS에서는 단지 19%의 소정의 생성물을 나타내었다. 트리에틸아민 (14 ㎕, 0.10 mmol)을 첨가한 후에 추가의 메탄설포닐 클로라이드 (8 ㎕, 0.1 mmol)를 첨가하고, 추가 30분 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 이후에 진공 중에 농축시키고, 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (10.7 mg, 19%)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.13 분, ES+ve m/z 541/543 (M+H)+.
실시예 59
N-[1-[(3-{[( 아미노카르보닐 )아미노] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00162
에틸 아세테이트 (0.4 ml) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 ((제조 참조, 중간체 4) 47 mg, 0.094 mmol) 및 트리에틸아민 (0.013 mL, 0.094 mmol)의 현탁액에 아세트산 (1.5 mL)을 첨가하였다. 수 (0.2 ml) 중의 포타슘 시아네이트 (11 mg, 0.14 mmol)의 용액을 일부씩 첨가하였다. 얻어진 투명한 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS에서는 불완전한 반응, 및 SM에 대한 보다 높은 백분율의 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공 중에 농축시키고, 얻어진 오일을 2개의 동일한 부분으로 나누었다. 각각을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제를 함유한 아세토니트릴 워터를 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고, 진공 중에 농축시켜 두 개의 개개 배치를 수득하였고, 이를 세정하지 않아서, 이를 합치고, MDAP로 다시 정제하여 표제 화합물 (2.4 mg, 5%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.95 분, ES+ve m/z 506/508 (M+H)+.
실시예 60
5- 클로로 -N-[1-({3-[({[(1,1-디메틸에틸)아미노]카르보닐}아미노) 메틸 ] 페닐 }메틸)-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00163
건조 DCM (0.5 ml) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (55 mg, 0.11 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (0.015 mL, 0.11 mmol)을 첨가한 후에, 3차-부틸 이소시아네이트 (0.013 mL, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였다. LCMS에서는 주로 6% SM을 갖는 소정의 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 DCM 및 메탄올로 희석시킨 후에 진공 중에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 ml)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (52 mg, 84%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.15 분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
실시예 61
5- 클로로 -N-[1-({3-[({[(1- 메틸에틸 )아미노]카르보닐}아미노) 메틸 ] 페닐 } 메틸 )-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00164
건조 DCM (0.5 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4) (52 mg, 0.10 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (15 ㎕, 0.11 mmol)을 첨가한 후에 이소프로필 이소시아네이트 (11 ㎕, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. LCMS에서는 주로 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 DCM 및 메탄올로 희석시킨 후에 진공 중에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (43 mg, 75%)을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.11 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 62
N-[1-{[4-( 아미노설포닐 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2-티 오펜설폰아미 드
Figure pct00165
5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-N-({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 8) (1.734 g, 3.66 mmol)를 DMF (2.4 ml)에 용해시키고, 분취액 (0.1 mL, 0.15 mmol)을 4-(브로모메틸)벤젠설폰아미드 (APAC Pharm) (0.15 mmol)에 첨가한 후에 탄산칼륨 (0.15 mmol)을 첨가하였다. 튜브를 캡핑하고 흔들어 주었다. 실온에서 18 시간 동안 정치시키고, 추가 탄산칼륨 (과량)을 첨가하고, 튜브를 다시 흔들어 주었다. 올테크 튜브를 통해 여과하여 무기 고형물을 제거하고, 튜브를 MeOH (1 ml)로 세척하고, 래들리스 블로우다운 유닛에서 질소의 스트림 하에 건조상태로 블로잉하였다. DCM (0.5 ml)에 다시 용해시키고, 10 g 실리카 카트리지에 적용하고, 20분에 걸쳐 0-100% DCM-(20 % EtOAc를 함유한 DCM)의 구배를 이용하여 Flashmaster 상에 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고 진공 중에 Genevac에서 증발시켰다. 잔류물을 TBAF (1 M, 0.5 ml)에 용해시키고, 마이크로파 오븐 (50 와트, 10 분, 대략 110℃)에서 가열하였다. 샘플을 포름산 변형제를 함유한 아세토니트릴 워터를 이용하여 Atlantis 컬럼 상에 MDAP로 정제하였다. 용매를 Genevac를 이용하여 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (7.9 mg, 10%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.92 분, ES+ve m/z 513/515 (M+H)+
실시예 63
2-(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 )-N- 메틸아세트아미드
Figure pct00166
건조 N,N-디메틸포름아미드 (50 ml) 중의 5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 26) (900 mg, 1.9 mmol), 페닐메틸 [3-(브로모메틸)페닐]아세테이트 (J. Med. Chem. 1992, 35, 2551-2562, 화합물 13) (1.23 g, 3.84 mmol) 및 탄산칼륨 (525 mg, 3.80 mmol)의 혼합물을 교반하고, 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (50 ml) 및 에틸 아세테이트(50 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 에틸아세테이트 (x2)로 추출하였다. 합친 유기 용액을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 진공 중에 농축시켜 진한 황색 오일을 수득하였다. 샘플을 디클로로메탄 중에 로딩하고, 40분에 걸쳐 0-50% 에틸 아세테이트-시클로헥산의 구배를 이용하여 Flashmaster 상의 실리카 100 g 카트리지 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획들을 합치고 진공 중에 증발시켜 페닐메틸 (3-{[3-[[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)아미노]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)아세테이트 (1.038 g, 77%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS RT=1.63 분, ES+ve m/z 729/731 (M+NH4)+. 이러한 부분 (103 mg, 0.145 mmol)에 메틸아민 THF (2M, 2.1 mL, 4.20 mmol) (마이크로파 용기에 에스테르의 전이를 촉진시키기 위해 과량으로 첨가됨) 및 1,3,4,6,7,8-헥사하이드로-2H-피리미도[1,2-a]피리미딘 (TBD) (6 mg, 0.04 mmol)의 용액을 첨가하였다. 마이크로파 용기를 밀봉하고 Biotage Initiator에서 80℃에서 60분 동안 가열하였다. LCMS에서는 반응이 완료된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 진공 중에 농축시켜 연한 황색 오일을 수득하였다. 이를 2개의 동일한 부분으로 나누고, 각 부분을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 2-(3-{[3-[[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)아미노]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)-N-메틸아세트아미드 (39 mg, 42%)를 무색 오일로서 수득하였다. LCMS RT=1.43 분, ES+ve m/z 635/637 (M+H)+. 이러한 생성물 및 THF 중의 TBAF (1 M, 0.62 mL, 0.62 mmol)의 혼합물을 0.2-2 mL 마이크로파 용기에 밀봉하였다. 테트라하이드로푸란 (0.8 mL)을 혼합물에 첨가하고, Biotage Initiator 마이크로파 오븐에서 100℃로 10분 동안 가열하였다. 이를 2회 이상 반복하였다. 반응 혼합물을 이후에 물과 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 상들을 소수성 프릿을 이용하여 분리하였다. 수성층을 DCM (x2)로 추출하고, 합친 유기 용액을 진공 중에 농축시켜 백색 오일 (46 mg)을 수득하였다. 이를 1:1 MeOH:DMSO (1 ml)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (9 mg, 29%)을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.06 분, ES+ve m/z 505/507 (M+H)+.
실시예 64
3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일]메틸} 벤즈아미드
Figure pct00167
DMF (2 mL) 중의 5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-N-({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 8) (150 mg, 0.316 mmol)의 용액에 주위 온도에서 탄산칼륨 (87 mg, 0.63 mmol) 및 3-(클로로메틸)벤즈아미드 (Maybridge)(64.4 mg, 0.380 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 50℃에서 밤새 교반한 후에, DCM (2 mL) 및 물 (2 mL)로 희석시켰다. 유기 혼합물을 분배시키고, 수성층을 2 mL의 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기 용액을 함께 합치고, 소수성 프릿으로 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하에 증발시켰다. 미정제 생성물은 LCMS에 의해 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하기에 충분히 순수한 것으로 판단되었다. LCMS (시스템 A) RT=1.37 분, ES+ve m/z 607/609 (M+H)+. 2 내지 5 mL Biotage 마이크로파 바이알에 미정제 인다졸 생성물 및 THF 중의 TBAF 용액 (1 M, 3.16 mL, 3.16 mmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, Biotage Initiator에서 110℃에서 10분 동안 가열하였다 (매우 높은 흡수 수준). 미정제 혼합물을 이후에 2 mL의 DCM 및 2 mL의 물로 희석시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 2 mL의 DCM으로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿으로 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하에 증발시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 ml)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서 질소의 스트림 하에 제거하여 표제 화합물 (76 mg, 50%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.97 분, ES+ve m/z 477/479 (M+H)+.
실시예 65
3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일]메틸}-N-[2-(디메틸아미노)에틸] 벤즈아미드
Figure pct00168
DMF (10 ml) 중의 5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-N-({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 8) (1 g, 2.1 mmol)의 용액에 주위 온도에서 K2CO3 (0.583 g, 4.22 mmol) 및 메틸 3-(브로모메틸)벤조에이트 (Alfa Aesar) (0.580 g, 2.53 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였으며, 이러한 시간에 LCMS에서는 주피크로서 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 20 mL의 DCM 및 20 mL의 물로 희석시켰다. 유기상을 분리하고, 수성층을 20 mL의 DCM으로 추가 추출하였다. 합친 유기 용액을 염수로 세척하고, 소수성 프릿으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 실리카 100g 카트리지 상에 로딩하고, 40분에 걸쳐 DCM 중의 0-100% 구배 EtOAc를 이용하여 Flashmaster 상에서 크로마토그래피로 정제하여 메틸 3-{[3-[[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)아미노]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조에이트 (571 mg, 43%)를 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.60 분, ES+ve m/z 622/624. 생성물의 일부 (70 mg, 0.11 mmol)를 0.2 내지 0.5 mL Biotage 마이크로파 바이알에 배치시킨 후에 N,N-디메틸-1,2-에탄디아민 (Aldrich) (246 ㎕, 2.25 mmol), 1,3,4,6,7,8-헥사하이드로-2H-피리미도[1,2-a]피리미딘 (TBD) (7.83 mg, 0.056 mmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 80℃에서 75분 동안, 초기 고속 흡수 수준을 이용하여 Biotage Initiator에서 가열하였다. 반응을 냉각시킨 후에, LCMS에서는 단일 피크로서 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 DCM (2 mL) 및 물 (3 mL)로 희석시켰다. 유기상을 분리하고, 수성층을 2 mL의 DCM으로 추가 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 질소 블로우다운 유닛에서 농축시켰다. LCMS (시스템 A) RT= 1.46 분, ES+ve m/z 678/680 (M+H)+. 미정제 생성물을 0.5 내지 2 mL Biotage 마이크로파 바이알에 배치시키고, THF 중의 TBAF의 용액 (1.125 mL, 1.125 mmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉시키고, Biotage Initiator에서 110℃로 15분 동안 가열하였다 (매우 높은 흡수 수준). 용매를 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하, 35℃에서 밤새 제거하였다. 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, TFA 변형제를 함유한 아세토니트릴-물을 이용하여 표준 C18 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서 질소의 스트림 하에서 제거하고, 잔류물을 SCX-2 이온-교환 카트리지 (MeOH로 사전-컨디셔닝, 화합물을 메탄올에 로딩, 메탄올로 용리 (2 x 컬럼 부피) 상에서 추가 정제한 후에 메탄올 중 2M NH3를 첨가하였다. 암모니아성 분획을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물 (55.3 mg, 90%)을 수득하였다. LCMS (시스템 E) RT=2.15 분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 66
3-[(4-( 메틸옥시 )-3-{[(5- 메틸 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 벤즈아미드
Figure pct00169
3-{[3-아미노-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드 (제조 참조, 중간체 12) 22 mg, 0.07 mmol)를 피리딘 (1.6 mL)에 용해시키고, 5-메틸-2-티오펜설포닐 클로라이드 (20 mg, 0.1 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 흔들어 준 후에, 실온에서 밤새 정치시켰다. DMSO (0.2 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 포름산 변형제를 함유한 아세토니트릴-물을 이용하여 Atlantis 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 용매를 Genevac를 이용하여 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (14.2 mg, 44%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.92 분, ES+ve m/z 457 (M+H)+.
실시예 67
3-{[3-{[(5-브로모-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드
Figure pct00170
3-{[3-아미노-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드 (제조 참조, 중간체 12) (22 mg, 0.07 mmol)를 피리딘 (1.6 ml)에 용해시키고, 5-브로모-2-티오펜설포닐 클로라이드 (27 mg, 0.1 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 흔들어 준 후에, 실온에서 밤새 방치하였다. DMSO (0.2 ml)를 반응 혼합물에 첨가하고, 포름산 변형제를 함유한 아세토니트릴-물을 이용하여 Atlantis 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 용매를 Genevac을 이용하여 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (4.6 mg, 12%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.04 분, ES+ve m/z 521/523 (M+H)+.
실시예 68
3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-7- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 벤즈아미드
Figure pct00171
무수 피리딘 (1 ml) 및 무수 디클로로메탄 (3 ml) 중의 3-{[3-아미노-7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드 (제조 참조, 중간체 14) (22 mg, 0.07 mmol)의 용액 (출발 물질을 용액으로 만들기 위해 가열총(heatgun)으로 수분 동안 혼합물의 온화한 가열이 요구됨)에 무수 디클로로메탄 (0.5 mL) 중의 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (16.71 mg, 0.077 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응을 실온에서 45분 동안 교반한 후에, 45℃에서 30분 동안 교반하였다. 무수 디클로로메탄 (0.2 mL) 중의 5-클로로-2-티오펜설포닐 클로라이드 (16.7 mg)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 45℃에서 25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시킨 후에 물과 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 유기층을 소수성 프릿으로 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 연한 황색 고형물을 수득하였다. 고형물을 MeOH-DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, 용매 A/B (A: 0.1% v/v 수중 포름산의 용액, B: 0.1 % v/v 아세토니트릴 중의 포름산 용액)으로 용리하면서, Sunfire C18 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획을 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 백색 고형물(15.7 mg, 45%)로서 수득하였다. LCMS (5 분 전개) RT = 2.62 분, ES+ve m/z 495/497 (M+H)+.
실시예 69
3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-7- 플루오로 -4-히드록시-1W- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 벤즈아미드
Figure pct00172
질소 대기 하에서 무수 DCM (2 mL) 중의 3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드 (제조 참조, 실시예 68) (15.7 mg, 0.032 mmol)의 현탁액을 실온에서 DCM 중의 보론 트리브로마이드 용액 (1 M, 0.032 mL)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 후에, 소듐 비카르보네이트 포화수용액을 적가하여 반응을 켄칭시켰다. 이후에, 혼합물을 추가 소듐 비카르보네이트 포화수용액과 에틸 아세테이트 중 10% 메탄올 사이에서 분배시켰다(유기층 및 수성층 둘 모두에 불용성인 백색 침전물이 존재함). 유기층을 분리하고, 소수성 프릿으로 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 황색 고형물 (13mg)을 수득하였다. 이를 MeOH:DMSO (1:1) (0.5 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 0.1% v/v 수중 포름산 용액, B: 0.1 % v/v 아세토니트릴 중 포름산 용액)로 용리하면서, Sunfire C18 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획을 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 황색 고형물 (8.5 mg, 56%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 2.41 분, ES+ve m/z 481/483 (M+H)+.
실시예 70
3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-히드록시-1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 벤즈아미드
Figure pct00173
질소 대기 하에서, 무수 DCM (1.5 ml) 중의 3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드 (제조 참조, 실시예 64)의 현탁액을 실온에서 DCM 중의 보론 트리브로마이드 용액 (1 M, 0.105 mL, 0.105 mmol)으로 처리하고, 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 추가 0.2 ml 부분의 보론 트리브로마이드를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 소듐 비카르보네이트 포화수용액을 적가하여 반응을 켄칭시켰다. 이후에, 반응을 추가 소듐 비카르보네이트 포화수용액과 에틸 아세테이트 중 10% 메탄올 사이에서 분배시켰다(유기층과 수성층 둘 모두에 불용성인 오프 화이트 침전물이 존재함). 유기층을 분리하고, 소수성 프릿으로 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 오프 화이트 고형물 (58 mg)을 수득하였고, 이를 MeOH-DMSO (1:1) (1 ml)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 0.1% v/v 수중 포름산 용액, B: 0.1% v/v 아세토니트릴 중 포름산 용액, 25분 전개)로 용리하면서 Sunfire C18 컬럼 상으로 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획을 진공 중에 증발시켜 백색 고형물 (17 mg, 35%)을 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 2.18 분, ES+ve m/z 463/465 (M+H)+.
실시예 71
N 1 -({3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-히드록시-1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 )- N 2 - 메틸 -D- 알라닌아미드 포름산 염
Figure pct00174
무수 DMF (1 mL) 중의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄-헥사플루오로포스페이트 (39.7 mg, 0.064 mmol)의 용액에 실온에서 N-Boc-N-메틸-D-알라닌 (11.91 mg, 0.059 mmol)을 첨가한 후에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.0306 mL, 0.176 mmol)을 첨가하고, 마지막으로 무수 DMF (1 mL) 중의 N-(1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-히드록시-1H-인다졸-3-일)-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염 (제조 참조, 중간체 15) (29 mg, 0.059 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 염수-물(1:1)로 세척하고, 소수성 프릿으로 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 무색 오일을 수득하였다. 소정의 BOC 보호된 생성물에 대한 LCMS (시스템 B) RT = 3.01 분, ES+ve m/z 634/636 (M+H)+. 이러한 생성물을 1,4-디옥산 중의 염산 용액 (4M, 0.5 mL)에 현탁시키고, 메탄올을, 반응이 용액 중에서 일어날 때까지 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 후에, 진공 중에 증발시켜 무색 오일을 수득하였다. 잔류 오일을 MeOH-DMSO (0.5 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 0.1% v/v 수중 포름산 용액, B: 0.1 % v/v 아세토니트릴 중 포름산 용액,) (25분 전개)로 용리하면서 Sunfire C18 컬럼 상의 OA MDAP 상에서 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (15 mg, 44%). LCMS (시스템 B) RT = 1.63 분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+.
실시예 72
N-({3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-히드록시-1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 ) 아세트아미드
Figure pct00175
무수 DMF (1 mL) 중의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄-헥사플루오로포스페이트 (39.7 mg, 0.064 mmol)의 용액에 실온에서 아세트산 (3.36 ㎕, 0.059 mmol)을 첨가한 후에, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.031 mL, 0.18 mmol)을 첨가하고, 마지막으로 무수 DMF (1 mL) 중의 N-(1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-히드록시-1H-인다졸-3-일)-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염 (제조 참조, 중간체 15) (29 mg, 0.059 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고 염수:물(1:1)로 세척하고, 소수성 프릿으로 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 무색 오일 (23 mg)을 수득하였다. 이를 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 0.1% v/v 수중 포름산 용액, B: 0.1% v/v 아세토니트릴 중 포름산 용액,) (25분 전개)로 용리시키면서 MDAP Sunfire C18 컬럼으로 정제하였다. 적절한 분획을 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (20 mg, 69%). LCMS (시스템 B) RT = 2.41 분, ES+ve m/z 491/493 (M+H)+.
실시예 73
N-({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-히드록시-1H-인다졸-1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 )-3- 모르폴린카르복사미드 포르메이트 염
Figure pct00176
무수 DMF (1 mL) 중의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄-헥사플루오로포스페이트 (43.8 mg, 0.071 mmol)의 용액에 실온에서 모르폴린-3,4-디카르복실산 4-3차-부틸 에스테르 (플루오로chem) (14.95 mg, 0.065 mmol)를 첨가한 후에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.034 ml, 0.19 mmol)을 첨가하고, 마지막으로 무수 DMF (1 mL) 중의 N-(1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-히드록시-1H-인다졸-3-일)-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염 (제조 참조, 중간체 15) (32 mg, 0.065 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 염수-물(1:1)로 세척하고, 소수성 프릿으로 통과시키고, 진공 중에 증발시켜 무색 오일을 수득하였다. 1,1- 디메틸에틸 3-{[({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-히드록시-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아미노]카르보닐}-4-모르폴린카르복실레이트에 대한 LCMS (시스템 B) RT = 2.91 분, ES+ve m/z 662/664 (M+H)+. 이를 무수 디클로로메탄 (2 mL)에 현탁시키고, 1,4-디옥사 중의 염산 용액 (4M, 0.162 mL, 0.646 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물은 여전히 현탁액이었으며, 이에 따라 반응물이 용액이 될 때까지 메탄올을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 추가 부분의 염산 용액 (4M, 0.162 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 90분 동안 교반하였다. 또다른 부분의 염산 용액 (4M, 0.162 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에 증발시켜 무색 오일을 수득하였다. 잔류 오일을 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 0.1% v/v 수중 포름산 용액, B: 0.1 % v/v 아세토니트릴 중 포름산 용액) (25분 전개)로 용리시키면서, MDAP Sunfire C18 컬럼으로 정제하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (17 mg, 43%). LCMS (시스템 B) RT = 1.62 분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
실시예 74
5-클로로-N-[1-[(3-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}페닐)메틸]-4-(메틸옥시)-1H- 인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00177
5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[1-[(3-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}페닐)메틸]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 18) (140 mg, 0.2 mmol)를 메탄올 (25 ml)에 현탁시키고, 2M NaOH 수용액 (2 mL)으로 처리하였다. 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 가열한 후에, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 2M HCl (2 ml)과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 수성층을 역추출하고, 유기 용액을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 증발시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1.5 ml)에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제를 함유한 아세토니트릴 워터를 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 적절한 분획을 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (40 mg, 39%)을 수득하였다. LCMS (시스템 C) RT=2.29 분, ES+ve m/z 521/523 (M+H)+.
실시예 75
5-클로로-N-[1-[(4-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}페닐)메틸]-4-(메틸옥시)-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00178
MeOH (5 mL) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[1-[(4-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}페닐)메틸]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 18) (91 mg, 0.13 mmol)의 용액을 2M NaOH 수용액 (1 mL)으로 처리하고, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열한 후에, 실온에서 1주에 걸쳐 정치시켰다. 용매는 이때에 증발되었으며, 백색 고형물 잔류물을 물과 2M HCl 용액 (1 mL)으로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 용액을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 건조 상태로 증발시켰다 (72 mg). 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제를 함유한 아세토니트릴 워터를 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물을 무색 검으로 수득하였다 (43 mg, 64%). LCMS (시스템 C) RT=2.20 분, ES+ve m/z 521/523 (M+H)+.
실시예 76
5- 클로로 -N-[1-{[4-{[2-(디메틸아미노)에틸] 옥시 }-3-( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-4-(메 틸옥 시)-1H- 인다졸 -3-일]-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00179
THF (60 mL) 중의 4-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}-3-(메틸옥시)페닐]메탄올 (제조 참조, 중간체 20) (1.2 g, 5.3 mmol), 트리페닐포스핀 (2.1 g, 8 mmol), 디-3차부틸 아조디카르복실레이트 (1.53 g, 6.7 mmol) 및 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 10) (2.79 g, 5.3 mmol)를 질소 하에 80℃로 20시간 동안 가열하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시킨 후에, MeOH로 용리시킨 후에 10%의 MeOH 중의 수성 암모니아로 용리하면서 두 개의 50 g SCX-2 이온교환 카트리지에 적용하였다. 암모니아성 용액을 이후에 농축시켜 검을 수득하였다. 잔류물을 MeOH (100 mL) 및 THF (25 mL)에 용해시킨 후에, 2M NaOH 수용액 (10 mL)으로 처리하고, 80℃로 2시간 동안 가열하였다. LCMS에서는 두 개의 생성물의 완전한 형성을 나타낸다. RT=O.95 분, 42% 및 0.98 분, 25% ES+ve m/z 551/553 (M+H)+. 혼합물을 2M HCl (10 mL)로 처리하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트와 NaHCO3 용액 사이에서 분배시켰다 (HCl의 첨가 후 용액의 pH는 5-6이었으며, 이에 따라 NaHCO3를 추출하기 전에 pH 8까지 첨가하였다). 유기 용액을 THF (20 ml)로 검으로서 희석하고 이를 용액에서 분리하였다. 유기 용액을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에 증발시켜 검 (1.92 g)을 수득하였다. 이를 클로로포름에 용해시키고, 하나의 카트리지에 대해 40분에 걸쳐 0-15% 메탄올 (1% Et3N 함유)-디클로로메탄, 및 제 2 카트리지에 대해 40분에 걸쳐 0-30% 메탄올 (1% Et3N 함유)-디클로로메탄을 이용하여 Flashmaster상의 두 개의 100 g 실리카 카트리지 상에서 클로마토그래피로 정제하였다. 제 1 카트리지의 앞의 분획 RT = 0.97 분, 95%, ES+ve m/z 551/553 (M+H)+을 제 2 카트리지로부터의 앞의 분획과 합치고, 진공 중에 증발시켜 아직 불순물을 갖는 예상되는 생성물 (788 mg)을 황색 검으로서 수득하였다. LCMS RT=2.15 분, 85%, ES+ve m/z 551/553. 화합물을 60분에 걸쳐 0-15% 메탄올(1% Et3N 함유)-디클로로메탄을 이용하여 실리카 (100 g 카트리지) 상의 Flashmaster 상에서 크로마토그래피로 추가 정제하였다. 적절한 분획 (RT=35-48 분)을 합치고 진공 중에 증발시켜 미정제 생성물 (674 mg)을 백색 포움으로서 수득하였다. LCMS RT=2.15 분, 89%, ES+ve m/z 551/553). 이를 1:1 MeOH-DMSO (7 x 1 mL)에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제를 함유한 아세토니트릴 워터를 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 MDAP로 정제하였다. 용매를 진공 중에 증발시켜 표제 화합물 (374 mg, 13%)을 백색 고형물로서 수득하였다.
Figure pct00180
NOE 효과는 예상되는 생성물에 사용 가능한, 벤질 프로톤의 조사 시에 7-H 인다졸 프로톤에 대한 5.39 ppm (DMSO-d6에서의 스펙트럼)에서 관찰되었다.
실시예 77
N-[1-{[3-( 아미노설포닐 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5- 클로로 -2-티 오펜설폰아미 드
Figure pct00181
THF (3 ml) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 10) (120 mg, 0.229 mmol), 트리페닐포스핀 (120 mg, 0.458 mmol) 및 3-(히드록시메틸)벤젠설폰아미드 (85.8 mg, 0.458 mmol)의 용액에 실온에서 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (DIAD) (0.090 mL, 0.458 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 65℃에서 7시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM (3 ml) 및 물 (3 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기상을 분리하고, 수성층을 3 ml의 DCM로 추가 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카 카트리지 (50 g) 상에서 디클로로메탄 중에 로딩하고, 40분에 걸쳐 DCM 중의 0-100% EtOAc를 이용하여 Flashmaster 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획을 합치고, 진공 중에 증발시키고, 잔류물을 메탄올 (3 ml)에 용해시키고 수산화나트륨 (2M, 1.146 mL, 2.291 mmol)으로 처리하였다. 얻어진 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (2 ml)에 용해시키고, 3 ml의 물을 첨가한 후에, 수성층의 pH가 대략 1이 될 때까지 묽은 HCl 용액을 첨가하였다. 유기상을 분리하고, 수성층을 2 mL의 DCM으로 추가 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하에서 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 ml)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리하면서 MDAP (supelcosil ABZ+Plus 컬럼)로 정제하였다. 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서 질소의 스트림 하에서 제거하여 표제 화합물 (51.6 mg, 22%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.02 분, ES+ve m/z 513/515 (M+H)+.
실시예 78 내지 실시예 85를 실시예 44에 대해 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다.
실시예 78
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-β- 알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00182
LCMS (시스템 A) RT=0.89 분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+.
실시예 79
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L- 글루탐아미드 포르메이트 염
Figure pct00183
LCMS (시스템 B) RT=1.76 분, ES+ve m/z 591/593 (M+H)+.
실시예 80
N 4 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L-아스파라긴 트리플루오로아세테이트
Figure pct00184
LCMS (시스템 D) RT=1.76 분, ES+ve m/z 578/580 (M+H)+.
실시예 81
1,1-디메틸에틸 N 4 -[(3-{[5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L- 아스파라기네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00185
LCMS (시스템 D) RT=0.99 분, ES+ve m/z 578/580 (M+H)+.
실시예 82
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-D- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00186
LCMS (시스템 D) RT=0.91 분, ES+ve m/z 560/562 (M+H)+.
실시예 83
1-아미노-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 시클로부탄카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00187
LCMS (시스템 B) RT=1.83 분, ES+ve m/z 560/562 (M+H)+.
실시예 84
1-아미노-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 시클로프로판카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00188
LCMS (시스템 B) RT=1.81 분, ES+ve m/z 546/548 (M+H)+.
실시예 85
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]- N 2 - 메틸글리신아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00189
LCMS (시스템 A) RT=0.89 분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+
실시예 86 내지 96를 실시예 30에서 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다.
실시예 86
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-N 2 ,N 2 -디메틸글리신아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00190
LCMS (시스템 D) RT=0.90분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 87
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-(메틸옥시)프로판아미드
Figure pct00191
LCMS (시스템 D) RT=1.03분, ES+ve m/z 549/551 (M+H)-.
실시예 88
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1H-피롤-3- 카르복사미드
Figure pct00192
LCMS (시스템 B) RT=2.71분, ES+ve m/z 556/558 (M+H)+.
실시예 89
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]테트라하이드로-2-푸란카르복사미드
Figure pct00193
LCMS (시스템 B) RT=2.81분, ES+ve m/z 561 /563(M+H)+.
실시예 90
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-1,3-옥사졸-4-카르복사미드
Figure pct00194
LCMS (시스템 B) RT=2.80분, ES+ve m/z 558/560(M+H)+.
실시예 91
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-1H-피라졸-3-카르복사미드
Figure pct00195
LCMS (시스템 B) RT=2.66분, ES+ve m/z 557/559 (M+H)+.
실시예 92
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-1H-피롤-2- 카르복사미드
Figure pct00196
LCMS (시스템 B) RT=2.92분, ES+ve m/z 556/558 (M+H)+.
실시예 93
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-1H-이미다졸-2-카르복사미드
Figure pct00197
LCMS (시스템 B) RT=2.51분, ES+ve m/z 557/559 (M+H)+.
실시예 94
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-1H-이미다졸-4-카르복사미드
Figure pct00198
LCMS (시스템 B) RT=2.12분, ES+ve m/z 557/559 (M+H)+.
실시예 95
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-푸란카르복사미드
Figure pct00199
LCMS (시스템 D) RT=1.11분, ES+ve m/z 557/559 (M+H)+.
실시예 96
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4- 메틸 -3- 모르폴린카르복사미드
Figure pct00200
LCMS (시스템 C) RT=0.84분, ES+ve m/z 590/592 (M+H)+.
실시예 97
N-[(4-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드
Figure pct00201
N-[1-{[4-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염(제조 참조, 중간체 30)(15 mg, 0.03 mmol), 아세토니트릴(2 ml) 중의 아세트산 (0.001 mL, 0.03 mmol), 및 DIPEA (0.046 mL, 0.26 mmol)의 용액을 HATU (37.0 mg, 0.097 mmol)로 처리하고, 형성된 혼합물을 2시간 15분 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (2 mL) 및 물 (3 mL)로 희석하였다. 유기 물질을 분리시키고, 수성 층을 DCM (2 mL)로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 + 0.1% 포름산, B: MeCN:물 95:5 + 0.05% 포름산)로 용리되는 (supelcosil ABZ+Plus 컬럼) 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다. 용매를 래들리스 블로다운 장치에서 질소 스트림 하에 제거하여 표제 화합물 (13 mg, 87%)을 검으로서 얻었다. LCMS (시스템 A) RT=1.11분, ES+ve m/z 505/507 (M+H)+.
실시예 98 및 99를, 아세토니트릴(2 mL) 중의 DIPEA (0.046 mL, 0.26 mmol), HATU (37 mg, 0.09 mmol), 및 N-[1-{[4-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염 (15 mg, 0.03 mmol)으로부터 디옥산 중의 염화수소 (4M, 0.074 ml)를 사용하여 BOC 보호기를 분해시킴으로써 상기와 같은 배열 방식으로 제조하였다:
실시예 98
N-[(4-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-모르폴린카르복사미드트리플루오로아세테이트
Figure pct00202
LCMS (시스템 A) RT=0.91분, ES+ve m/z 576/578 (M+H)+.
실시예 99
N 1 -[(4-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-N 2 -메틸-D-알라닌아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00203
LCMS (시스템 A) RT=0.92분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+.
실시예 100
3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}-N-메틸벤즈아미드
Figure pct00204
Biotage 마이크로파 바이알 중의 메틸 3-{[3-[[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)아미노]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조에이트 (제조 참조, 중간체 31)(70 mg, 0.112 mmol)에 1,3,4,6,7,8-헥사하이드로-2H-피리미도[1,2-a]피리미딘(Aldrich) (7.83 mg, 0.056 mmol) 및 THF 중 메틸아민 용액 (2M, 1.125 ml)를 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 75분 동안 80℃로 초기의 매우 높은 흡수 수준을 사용하여 Biotage Initiator 마이크로파에서 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM (2 ml) 및 물 (3 ml)로 희석하였다. 유기 상을 분리시키고, 수성 층을 DCM (2 ml)로 추가로 추출하였다. 합친 유기 용액을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 블로우다운 유닛에서 질소 스트림 하에 농축시켰다. 잔류물을 THF 중 TBAF(1 M, 1.125 ml, 1.125 mmol)로 처리하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 110℃에서 15분 동안(매우 높은 흡수 수준) Biotage Initiator에서 가열하였다. 용매를 블로우다운 유닛 (T=35℃ 밤새)에서 질소 스트림 하에 제거하고, 1:1 MeOH-DMSO (2 ml) 중에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 표준 C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다(방법 B). 용매를 래들리스 블로다운 장치에서 질소 스트림 하에 제거하여 표제 화합물 (41.7mg, 75%)을 얻었다. LCMS (시스템 A) RT=1.03분, ES+ve m/z 491/493 (M+H)+.
실시예 101
3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일]메틸}-N,N-디메틸 벤즈아미드
Figure pct00205
표제 화합물을 실시예 100과 유사하게 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.06분, ES+ve m/z 505/507(M+H)+.
실시예 102
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-L-세린아미드
Figure pct00206
표제 화합물을 실시예 17에서 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.78분, ES+ve m/z 550/552 (M+H)+.
실시예 103 - 105를 실시예 62에 대해 기술된 절차에 따라 제조하였다.
실시예 103
4-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드
Figure pct00207
LCMS (시스템 A) RT=0.95분, ES+ve m/z 477/479 (M+H)+.
실시예 104
5-클로로-N-(4-(메틸옥시)-1-{[4-(메틸옥시)페닐]메틸}-1H-인다졸-3-일)-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00208
LCMS (시스템 B) RT=3.11분, ES+ve m/z 464/466 (M+H)+.
실시예 105
5-클로로-N-(4-(메틸옥시)-1-{[2-(메틸옥시)페닐]메틸}-1H-인다졸-3-일)-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00209
LCMS (시스템 B) RT=3.23분, ES+ve m/z 464/466 (M+H)+.
실시예 106 및 107를 실시예 53에 대해 기술된 절차에 따라 제조하였다.
실시예 106
5-클로로-N-[1-({3-[(메틸아미노)설포닐]페닐}메틸)-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00210
LCMS (시스템 B) RT=2.74분, ES+ve m/z 527/529 (M+H)+.
실시예 107
5-클로로-N-[1-({3-[(디메틸아미노)설포닐]페닐}메틸)-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00211
LCMS (시스템 B) RT=2.94분, ES+ve m/z 541/543 (M+H)+.
실시예 108 및 109를 실시예 66의 절차와 유사한 절차로 중간체 12 및 적합한 설포닐 클로라이드로 설포닐화시킴으로써 제조하였다.
실시예 108
3-({4-(메틸옥시)-3-[(2-티에닐설포닐)아미노]-1H-인다졸-1-일}메틸)벤즈아미드
Figure pct00212
LCMS (시스템 A) RT=0.93분, ES+ve m/z 443 (M+H)+.
실시예 109
3-{[3-{[(4,5-디클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드
Figure pct00213
LCMS (시스템 A) RT=0.99분, ES+ve m/z 511/513 (M+H)+.
실시예 110
5-클로로-N-[1-{[3-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}-4-(메틸옥시)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00214
표제 화합물을 중간체 10 및 [3-{[2-(디메틸아미노)에틸]옥시}-4-(메틸옥시)페닐]메탄올(이는 중간체 23과 유사한 방식으로 제조되었음)을 사용하여 실시예 76에 따라 제조하였다.
LCMS (시스템 A) RT=0.86분, ES+ve m/z 551/553 (M+H)+.
실시예 111
(3R)-N-({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-히드록시-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)-3-모르폴린카르복사미드 포르메이트 염
Figure pct00215
표제 화합물을 실시예 73에서 기술된 절차에 따라 제조하였다. LCMS (시스템 B) RT = 1.61분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
실시예 112
N 1 -({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-히드록시-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)-N 2 -메틸글리신아미드 포르메이트 염
Figure pct00216
표제 화합물을 실시예 73에서 기술된 절차에 따라 제조하였다. LCMS (시스템 B) RT = 1.74분, ES+ve m/z 520/522 (M+H)+.
실시예 113
5-클로로-N-[1-{[3-({[(에틸아미노)카르보닐]아미노}메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00217
표제 화합물을 중간체 4 및 에틸 이소시아네이트를 사용하여 실시예 61에서 기술된 절차에 따라 제조하였다.
LCMS (시스템 A) RT=1.43분, ES+ve m/z 534/536 (M+H)+.
실시예 114
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-L-트립토판아미드
Figure pct00218
표제 화합물을 실시예 44에서 기술된 일반적인 배열 방법에 의해 제조하였다. LCMS (시스템 B) RT=2.06분, ES+ve m/z 649/651 (M+H)+.
실시예 115
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-D-알로트레오닌아미드 포르메이트 염
Figure pct00219
표제 화합물을 실시예 44에서 기술된 일반적인 배열 방법에 따라 제조하였다. LCMS (시스템 B) RT=1.71분, ES+ve m/z 564/566 (M+H)+.
실시예 116
N-{[3-({4-(메틸옥시)-3-[(2-티에닐설포닐)아미노]-1H-인다졸-1-일}메틸)페닐]메틸}아세트아미드
Figure pct00220
THF (1 ml) 중의 N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드(제조 참조, 실시예 1)(30mg, 0.06mmmol)의 냉각된 (아이스/워터 배스) 용액에 THF 중의 2M 리튬 알루미늄 히드라이드(0.074ml, 0.149mmol)를 첨가하고, 현탁액을 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 4방울의 물로 켄칭한 후, 수산화나트륨 수용액(2M, 0.5 ml)으로 켄칭하였다. 30분 동안 교반한 후, 고형물을 제거하고, THF (10 ml)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 ml) 중에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다(방법 B). 적합한 분획으로부터의 용매를 래들리스 블로우다운 장치에서 질소 스트림 하에 증발시켜 표제 화합물 (18 mg, 64%)을 얻었다. LCMS (시스템 A) RT=0.89분, ES+ve m/z 471 (M+H)+.
실시예 117
4-[(4-(메틸옥시)-3-{[(5-메틸-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]벤즈아미드
Figure pct00221
피리딘(3.6 mL) 중의 4-{[3-아미노-4-(메틸옥시)-1-N-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드 (32.4 mg, 0.2 mmol)의 용액을 5-메틸-티오펜설포닐 클로라이드(제조 참조, 중간체 32)(0.30 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 잠시동안 진탕하고, 블로우다운에 의해 농축시키기 전에 3시간 동안 21℃에서 방치되게 하였다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (0.6 mL)에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Xbridge 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다(방법 C). 용매를 Genevac을 사용하여 진공 하에 증발시켜 표제 화합물(12.5 mg, 14%)을 얻었다. LCMS (시스템 A) RT=0.86분, ES+ve m/z 457 (M+H)+.
실시예 118
N-[1-{[3,4-비스(메틸옥시)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-메틸-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00222
표제 화합물을 중간체 33을 사용하여 실시예 117에서 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.08분, ES+ve m/z 474 (M+H)+.
실시예 119
N-({3-[(4-(메틸옥시)-3-{[(5-메틸-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아세트아미드
Figure pct00223
표제 화합물을 중간체 34를 사용하여 실시예 117에서 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.96분, ES+ve m/z 485 (M+H)+.
실시예 120
(3R)-N-({4-[(4-(메틸옥시)-3-{[(5-메틸-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)-3-모르폴린카르복사미드트리플루오로아세테이트
Figure pct00224
표제 화합물을 중간체 35을 사용하고 BOC 보호기를 TFA로 분해하여 실시예 117에서 기술된 절차에 따른 배열 방식으로 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.69분, ES+ve m/z 556 (M+H)+.
실시예 121
N-({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-플루오로-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아세트아미드
Figure pct00225
무수 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중의 HATU (122 mg, 0.198 mmol)의 용액에 실온에서 아세트산 (10.29 mL, 0.180 mmol)을 첨가한 후, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.094 mL, 0.539 mmol)을 첨가하고, 끝으로 무수 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중의 N-(1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-플루오로-1H-인다졸-3-일)-5-클로로-2-티오펜설폰아미드(제조 참조, 중간체 39)(81 mg, 0.18 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 포화된 탄산수소나트륨 수용액 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리시키고, 염수-물 (1:1)로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 증발시켜 무색 오일을 얻었다. 잔류물을 MeOH-DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, 용매 A/B (A: 수중 0.1% v/v 포름산 용액, B: 아세토니트릴 중 0.1 % v/v 포름산 용액)로 용리되는 질량 유도된 오토-분취용 HPLC MDAP (Sunfire C18 컬럼 150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛, 패킹 직경, 주위 온도에서)에 의해 25분에 걸쳐 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 증발시켜 무색 오일 (5.9 mg, 6%). LCMS (시스템 B): RT = 2.53분, ES+ve m/z 493/495 (M+H)+.
실시예 122
N-({3-[(4-클로로-3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아세트아미드
Figure pct00226
무수 테트라하이드로푸란 (4 mL) 중의 5-클로로-N-{4-클로로-1-[(3-cyano페닐)메틸]-1H-인다졸-3-일}-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 42) (95 mg, 0.20 mmol)의 아이스/워터 배스 냉각된 용액에 질소 분위기 하에 1분에 걸쳐 리튬 알루미늄 히드라이드 (디에틸 에테르 중 1M 용액, 0.513 mL, 0.513 mmol)을 적가하였다. 반응물을 10분 동안 아이스/워터 배스에서 교반한 후, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 아이스/워터 배스 중에서 재냉각시키고, 리튬 알루미늄 히드라이드의 추가 부분(디에틸 에테르 중의 1 M 용액, 0.2 ml)을 1분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 실온에서 교반한 후, 냉각시키고(아이스/워터 배스), 더 이상 비등하지 않을 때까지 물(적가)로 조심스럽게 켄칭하였다. 이후, 용해도를 개선시키기 위해 반응 혼합물을 1:1 메탄올-디클로로메탄으로 희석하고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 2Og SCX-2 카트리지에 적용하였다. 카트리지를 메탄올로 세척한 후, 메탄올 중의 2M 암모니아를 사용하여 용리하였다. 메탄올 중 2M 암모니아 분획을 합치고, 진공 하에 증발시켜 N-(1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-클로로-1H-인다졸-3-일)-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (68 mg, 0.15 mmol)를 오프-화이트(off-white) 고형물로서 얻었다. 이 아민을 DMF (2 ml) 중에 용해시키고, 무수 DMF (1 ml) 중의 HATU (99 mg, 0.16 mmol), 아세트산 (8.3 ㎕, 0.14 mmol), [N,N-디이소프로필에틸아민 (0.076 ml, 0.44 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 포화된 탄산수소나트륨 수용액 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리시키고, 염수-물(1:1)로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 증발시켜 황색 오일을 얻었으며, 이를 MeOH-DMSO(1:1)(1ml)중에 용해시키고, 용매 A/B (A: 수중 0.1% v/v 포름산 용액, B: 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액)로 용리되는 질량 유도된 오토-분취용 HPLC (Sunfire C18 컬럼 150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경, 주위 온도에서)에 의해 25분에 걸쳐 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 증발시켜 표제 화합물을 황색 오일 (6.7 mg, %)로서 얻었다. LCMS (시스템 B) RT = 2.66분, ES+ve m/z 509/511 (M+H)+.
실시예 123
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-4-메틸-3-모르폴린카르복사미드
Figure pct00227
아세토니트릴(2 ml) 중의 4-메틸-3-모르폴린카르복실산 하이드로클로라이드 (Chem-lmpex International) (60.0 mg, 0.33 mmol)의 용액을 HATU (126 mg, 0.33 mmol) 및 DIPEA (0.157 ml, 0.901 mmol)로 처리하였다. 형성된 혼합물을 15분 동안 주위 온도에서 교반한 후, N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드(제조 참조, 중간체 4) (150 mg, 0.300 mmol)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (3 ml) 및 물 (3 ml)로 희석하였다. 유기 상을 분리시키고, 수성 층을 3 ml의 DCM로 추가로 희석하였다. 합친 유기 용액을 물 (3 ml)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 질소 블로우-다운 장치에서 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO 2 ml 중에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Xbridge 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙 (Method C)로 정제하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켜 요구되는 생성물(53.1 mg, 30%)을 얻었다. LCMS (시스템 F) RT = 0.85분, ES+ve m/z 590/592 (M+H)+.
실시예 124 및 125
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-4-메틸-3-모르폴린카르복사미드거울상이성질체 1 (실시예 124) 및 거울상이성질체 2 (실시예 125)
상기 라세믹 혼합물 (22 mg) (제조 참조, 실시예 123)을 50% EtOH-헵탄으로 용리되고, 30분 등용매 용리 수행(isocratic run)되며, 유속이 15 mL/min이고, 215 nm에서 검출되는 Chiralpak AD (25 cm) 상에서의 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 하기를 얻었다:
거울상이성질체 1 (7.51 mg, 34%): 분석용 카이랄 HPLC [Chiralpak AD (25 cm), 50% EtOH-헵탄으로 용리, 유속 1mL/min, 215 nm에서 검출] RT = 13.2 분, 100%, [α]D 20 - 34 (클로로포름 중 c = 0.751) 및
거울상이성질체 2 (8.3 mg, 38%): 분석용 카이랄 HPLC RT = 17.7분, 98%, %, [α]D 20 + 22 (클로로포름 중 c = 0.83).
실시예 126
(2S)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 히드록시프로판아미드 ( 실시예 37의 S- 거울상이성질체 )
Figure pct00228
DCM(5 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드 (제조 참조, 중간체 4)(100 mg, 0.2 mmol), 및 트리에틸아민 (0.28 ml, 2 mmol)의 현탁액을 (S)-2-아세톡시프로피오닐 클로라이드(0.065 mL)로 처리하였다. 4시간 후, 용매를 증발시켜 제거하고, 잔류물을 메탄올 (10 mL) 중에 용해시킨 후, 고형 탄산칼륨(277 mg, 2 mmol)으로 처리하고, 혼합물을 실온에서 3일 동안 방치하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 2M HCl 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기 용액을 보다 많은 HCl, 염수로 세척하고, 건조시켰다(MgSO4). 여액을 감압 하에서 증발시켜 백색 고형물(113 mg)을 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH-DMSO 2 mL 중에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙으로 정제하였다(방법 A). 용매를 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (86 mg, 80%)을 얻었다: LCMS (시스템 A) RT=O.97분, 100%, ES+ve m/z 535/537 (M+H)+; NMR δ (CD3OD) 7.27-7.15 (5H, m), 7.05 (1 H, br d, J 7 Hz), 6.97 (1 H, d, J 8 Hz), 6.89 (1 H, d, J 4 Hz), 6.42 (1 H, d, J 8 Hz), 5.47 (2H, s), 4.33 (2H, s), 4.12 (1 H, q, J 7 Hz), 3.76 (3H, s), 1.30 (3H, d, J 7 Hz).
실시예 127
N 1 -[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-메틸알라닌아미드
Figure pct00229
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 하이드로클로라이드(제조 참조, 중간체 4)(529 mg, 1.06 mmol), N-BOC-알파-메틸알라닌(Sigma) (248 mg, 1.22 mmol), HATU (503 mg, 1.32 mmol)의 혼합물을 혼합물이 용해될 때까지 DMF (2 ml) 및 DIPEA (0.75 mL, 4.4 mmol) 중에서 교반한 후, 밤새 실온에서 방치하였다. 이후, 혼합물을 실온에서 TFA (1.5 mL, 19. 5 mmol)로 처리하고, 45분 후에 더 많은 TFA (1.5 mL, 19. 5 mmol)를 첨가하였다. 1.5시간 후, 더 많은 TFA (1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 메탄올 중에 로딩하고, MeOH로 용리된 후, MeOH 중 10% 암모니아 수용액으로 용리되는 이온 교환 카트리지(SCX-2) 상에서 SPE에 의해 정제하였다. 적합한 암모니아성 분획을 합치고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH-DMSO 8 mL 중에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Xbridge 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하여(방법 C) RT-6.0 분에 의한 피크를 수집하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (242 mg, 42%)을 얻었다: LCMS (시스템 C) RT=2.01분, ES+ve m/z 548/550 (M+H)+; NMR δ (CD3OD) 7.26-7.13 (4H, m), 7.10 (1 H, br d, J 7 Hz), 7.05 (1 H, br s), 6.92 (1 H, d, J 8 Hz), 6.86 (1 H, d, J 4 Hz), 6.40 (1 H, d, J 8 Hz), 5.45 (2H, s), 4.31 (2H, s), 3.77 (3H, s), 1.31 (6H, s).
실시예 128
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드
Figure pct00230
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-7-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 46)(70 mg, 0.15 mmol)을 DCM (0.75 ml) 중에 용해시키고, 트리에틸아민 (0.203 ml, 1.45 mmol)을 용액에 첨가하였다. 용액을 5분 동안 교반하고, 아세트산 안히드라이드(0.013 ml, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반한 후, 질소 스트림 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeOH-DMSO (1:1)(1ml) 중에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다(Method B). 용매를 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (26 mg, 34%)을 얻었다: LCMS (시스템 A) RT = 1.04분, ES+ve m/z 523/524 (M+H)+.
실시예 129
N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드
Figure pct00231
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 포르메이트 염 (제조 참조, 중간체 54)(53 mg, 0.1 mmol)을 MeOH 중에 용해시키고, MeOH로 용리된 후 MeOH 중 10% 암모니아 수용액으로 용리되는 SCX-2 카트리지 (5g)에 적용하였다. 암모니아성 분획을 감압 하에서 증발시켜 유리 염기(44 mg, 0.09 mmol)를 백색 결정질 고형물로서 얻었다. 이를 클로로포름 (2 ml) 및 트리에틸아민 (1 ml) 중에 현탁시킨 후, 아세트산 안히드라이드(0.024 ml)로 처리하였다. 혼합물을 균일해질 때까지 잠시 진탕한 후, 실온에서 2시간 동안 방치하였다. 혼합물을 MeOH로 처리하고, 과량의 아세트산 안히드라이드를 소비하도록 방치한 후, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 1 :1 MeOH-DMSO 1 ml 중에 용해시키고, 암모늄 카르보네이트 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Xbridge 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다(방법 C). 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 2M HCl 용액으로 세척하고, 감압 하에서 증발시켜 표제 화합물(25mg, 52%)을 얻었다. LCMS (시스템 A) RT = 1.02분, ES+ve m/z 523/525 (M+H)+.
실시예 130
3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤즈아미드
Figure pct00232
메탄올 (10 ml) 중의 5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-N-[1-[(3-시시아노페닐)메틸]-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 53)(53 mg, 0.08 mmol)의 용액을 2M NaOH 용액(1 ml)으로 처리하고, 질소 하에서 밤새 60℃로 가열하였다. 보다 많은 2M NaOH 용액(0.5 ml)을 첨가하고, 혼합물을 주말에 걸쳐 71℃로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되게 한 후, pH 0이 되도록 2M HCl 용액으로 처리하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 용액을 2M HCl, 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 증발시켜 검 54 mg을 얻었다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO 1 ml 중에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하여(방법 A), 분획(RT=7.77분 19% 및 8.73분, 81 %)을 수거하였다. 용매를 주 분획(RT=8.73분)으로부터 진공 하에 증발시켜 3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}벤조산(26 mg, 65%)을 백색 고형물로서 얻었다: LCMS (시스템 A) 카르복실산 생성물에 대한 RT=1.04분, ES+ve m/z 496/498 (M+H)+. 부 성분(RT=7.77분)을 감압 하에서 증발시켜 표제 화합물 (6.2 mg, 15%)을 백색 고형물로서 얻었다: LCMS (시스템 A) RT=O.97분, ES+ve m/z 495/497 (M+H)+.
실시예 131
(3R)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드
Figure pct00233
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 54)(100 mg, 0.208 mmol)를 디클로로메탄 (1 ml) 중에 현탁시키고, (3R)-4-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-3-모르폴린카르복실산 (52.9 mg, 0.229 mmol) 및 HATU (87 mg, 0.229 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 5분 동안 교반하였다. DIPEA (0.109 ml, 0.624 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 주말 동안에 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (0.25 ml, 3.24 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 3.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 질소 스트림 하에 농축시키자 갈색 잔류물이 잔류하였다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 ml) 중에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 사용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제하였다(Method B). 용매를 진공 하에 증발시켜 요구되는 생성물의 TFA 염을 오프 화이트 잔류물로서 얻었다. 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 고분자 탄산염 (SAX) 카트리지 상에 로딩하였다. 샘플을 메탄올 중 1.25M HCl로 용리시켰다. 분획을 진공 하에 농축시키고, 메탄올 중에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 SCX-2 이온 교환 카트리지 (2g)에 로딩하였다. 카트리지를 메탄올로 잘 세척한 후, 메탄올 중 2M 암모니아로 세척하였다. 암모니아성 분획으로부터 용매를 제거하여 표제 화합물 (30 mg, 24%)을 얻었다: LCMS (시스템 A) RT=0.88분, ES+ve m/z 594/596 (M+H)+.
실시예 132
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-히드록시-2- 메틸프로판아미드
Figure pct00234
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 54)(100 mg, 0.208 mmol) (중간체)를 디클로로메탄 (0.5 mL) 및 피리딘 (0.5 mL)에 용해시킨 다음, 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (0.031 mL, 0.218 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로, 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (0.021 mL, 0.146 mmol)를 반응 혼합물에 더 첨가하고, 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로, 추가 부분의 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (0.015 mL, 0.104 mmol)를 반응물에 첨가하고, 1.25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림하에 농축시켜 황색 잔류물을 수득하였고, 이것을 메탄올 (1 mL)에 용해시키고, 탄산칼륨 (86 mg, 0.624 mmol)을 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃로 1시간 동안 가열한 다음 2M HCl로 중화시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (50 mL)에 용해시키고, 물 (50 mL)로 3회 및 식염수 (50 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음 진공에서 증발시켜 황색 잔류물을 수득하였다. 샘플을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, Sunfire C18 컬럼 상에서 TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 B). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (60 mg, 51 %)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.04분, ES+ve m/z 481/483 (M+H)+.
실시예 133
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-6- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4- 메틸 -3- 모르폴린카르복사미드
Figure pct00235
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 54)(250 mg, 0.520 mmol)를 디클로로메탄 (2.5 mL)에 용해시키고, 4-메틸-3-모르폴린카르복실산 하이드로클로라이드 (104 mg, 0.572 mmol) 및 HATU (217 mg, 0.572 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 5분간 교반하였다. DIPEA (0.272 mL, 1.559 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 주말에 걸쳐 교반하였다. LCMS가 커플링이 완료되었음을 나타내었으므로, 반응물을 질소 스트림하에 블로우다운 유닛에서 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL)에 용해시키고, Sunfire C18 컬럼 상에서 TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 B). 용매를 진공에서 증발시켜 요구되는 생성물의 TFA 염을 오렌지색 오일로서 수득하였다. 화합물을 메탄올에 용해시키고, 고분자 탄산염 (SAX) 카트리지 아래로 통과시키고, 카트리지를 메탄올로 용리시키고, 용매를 진공에서 증발시켜 요구되는 생성물의 유리 염기를 오렌지색 오일 (80 mg)로서 수득하였다. 탄산염 카트리지를 메탄올 중의 1.25M HCl로 추가로 용리시키고, 용액을 진공에서 증발시키고, 잔류물 (150 mg)을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 SCX-2 이온-교환 카트리지 (1 g)로 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 2M 암모니아로 잘 세척하였다. 암모니아성 분획으로부터 용매를 증발시켜 추가 부분의 요구되는 생성물의 유리-염기를 수득하였고, 이것을 이전의 배치와 합쳤다.
그 후, 라세믹 혼합물 (140 mg)을 카이랄 HPLC 분리에 의해 Chiralpak IA 상에서 (20 mm x 250 mm, 10 mm 패킹), 유속 15 mL/분으로, 300 nm에서 검출하며, 25% 에탄올-헵탄 (60분간 등용매에 의해)으로 용리시키며 분리시켜 표제 화합물의 거울상이성질체 1 (67 mg, 20%): LCMS (시스템 A) RT=0.86분, ES+ve m/z 608/610 (M+H)+, 분석적 카이랄 HPLC Chiralcel IA (4.6 mm x 250 mm, 10 ㎛ 패킹), 유속 1 mL/분, 300 nm에서 검출, 35% 에탄올-헵탄으로 용리 (22분간 등용매에 의해) RT=13.5분, >99.5% 및 거울상이성질체 2 (67 mg, 20%) RT=17.0분, >99.5%를 수득하였다.
실시예 134
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아세트아미드
Figure pct00236
건조 DMF (4 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 61)(49 mg, 0.10 mmol)의 용액을 HATU (38.7 mg, 0.10 mmol)로 처리하고, 질소하에 3분 동안 교반시킨 다음 DIPEA (0.018 mL, 0.10 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가 3분간 교반시킨 다음 아세트산 (6.12 mg, 0.10 mmol)을 첨가하고, 추가로 3시간 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 블로우다운 유닛에서 질소에 의해 농축시키고 샘플을 디클로로메탄 중에서 DCM과 미리 평형화된 아미노프로필 이온-교환 카트리지 (1 g) 상에 로딩시켰다. 샘플을 메탄올/디클로로메탄으로 용리시키고, 래들리스 블로우다운 장치에서 질소 스트림하에 건조시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 샘플을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, 탄산암모늄 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 C). 용매를 진공에서 Genevac을 이용하여 증발시켜 표제 화합물 (14.5 mg, 27%)을 수득하였다: LCMS (시스템 A) RT=1.06분, ES+ve m/z 523/525 (M+H)+.
실시예 135
(3S)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드
Figure pct00237
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 61) (100 mg, 0.208 mmol)를 DCM (1 mL)에 현탁시켰다. (3S)-4-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-3-모르폴린카르복실산 (52.9 mg, 0.229 mmol) 및 HATU (87 mg, 0.229 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 5분간 교반하였다. DIPEA (0.109 mL, 0.624 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 주말에 걸쳐 교반하였다. LCMS가 커플링이 완료되었음을 나타내었다. 트리플루오로아세트산 (0.25 mL, 3.24 mmol)을 반응물에 첨가하고, 1시간 50분 동안 교반되게 하였다. LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었으므로, 혼합물을 질소 스트림하에 농축시켰다. 샘플을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 (방법 B) Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다. 용매를 진공에서 증발시켜 요구되는 생성물 (TFA 염으로서)을 수득하였다. 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 SCX-2 이온-교환 카트리지 (10 g)에 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 2M 암모니아로 잘 세척하였다. 암모니아성 분획으로부터 용매를 증발시켜 표제 화합물을 무색 유리질 고형물 (71 mg, 57%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=O.82분, ES+ve m/z 594/596 (M+H)+.
실시예 136
(3R)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드
Figure pct00238
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-6-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 61) (100 mg, 0.208 mmol)를 디클로로메탄 (1 mL)에 현탁시켰다. (3R)-4-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-3-모르폴린카르복실산 (52.9 mg, 0.229 mmol) 및 HATU (87 mg, 0.229 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 5분간 교반하였다. DIPEA (0.109 mL, 0.624 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 이것이 주말에 걸쳐 교반되게 하였다. LCMS가 커플링이 완료되었음을 나타내었다. 트리플루오로아세트산 (0.25 mL, 3.24 mmol)을 반응물에 첨가하고, 1시간 50분간 교반하였다. LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었으므로, 혼합물을 질소 스트림하에 농축시켜 갈색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 B). 용매를 진공에서 증발시켜 요구되는 생성물을 오프 화이트 잔류물 (TFA 염으로서)로서 수득하였다. 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 메탄올로 사전-컨디셔닝된 SCX-2 이온-교환 카트리지 (10 g) 상에 로딩시켰다. 카트리지를 메탄올에 이어 메탄올 중의 2M 암모니아로 잘 세척하였다. 암모니아성 분획으로부터 용매를 증발시켜 표제 화합물 (76 mg, 61% 수율)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.83분, ES+ve m/z 594/596 (M+H)+.
실시예 137
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-히드록시-2- 메틸프로판아미드
Figure pct00239
디클로로메탄 (0.5 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 61)(100 mg, 0.208 mmol), 피리딘 (0.5 mL) 및 수산화칼륨 (11.67 mg, 0.208 mmol)의 현탁액을 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (0.054 mL, 0.37 mmol)로 처리하고, 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 오렌지색 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, TFA 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 B). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (58 mg, 49%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.04분, ES+ve m/z 567/569 (M+H)+.
실시예 138
4-{[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}-4- 옥소부탄산
Figure pct00240
4-(메틸옥시)-4-옥소부탄산 (0.013 g, 0.1 mmol)을 무수 DMF (0.2 ml) 중의 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.076 g, 0.2 mmol)의 용액 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.052 ml, 0.3 mmol)으로 처리하고 용액을 10분간 교반하였다. N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 4) (0.046 g, 0.1 mmol)를 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 genevac에 의해 제거하고, 잔류물을 DMSO (0.5 ml)에 용해시키고, 질량 유도된 오토-분취용 HPLC에 의해 정제시켜 메틸 4-{[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아미노}-4-옥소부타노에이트를 수득하였다. 이것을 메탄올 (0.2 ml)에 용해시키고, 수산화나트륨 (2M, 0.15 ml) 및 물 (0.09 ml)을 첨가하고, 반응 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 중화시키고, 블로우다운 유닛에서 농축시키고, 잔류물을 질량 유도된 오토-분취용 HPLC에 의해 정제시켜 (방법 E) 표제 화합물을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 0.99분, ES+ve m/z 563/565 (M+H)+.
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 및 적합한 카르복실산을 이용하여 실시예 139-145를 실시예 138과 유사하게 제조하였다.
실시예 139
5-{[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}-5- 옥소펜탄산
Figure pct00241
LCMS (시스템 A) RT= 0.97분, ES+ve m/z 577/579 (M+H)+.
실시예 140
6-{[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}-6- 옥소헥산산
Figure pct00242
LCMS (시스템 A) RT= 0.99분, ES+ve m/z 591/593 (M+H)+.
실시예 141
3-({[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}카르보닐)벤조산
Figure pct00243
LCMS (시스템 A) RT= 1.05분, ES+ve m/z 61 1/613 (M+H)+.
실시예 142
4-({[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}카르보닐)벤조산
Figure pct00244
LCMS (시스템 A) RT= 1.04분, ES+ve m/z 61 1/613 (M+H)+.
실시예 143
트랜스-4-({[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}카르보닐) 시클로헥산카르복실산
Figure pct00245
LCMS (시스템 A) RT= 1.01분, ES+ve m/z 617/619 (M+H)+.
실시예 144
8-{[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}-8- 옥소옥탄산
Figure pct00246
LCMS (시스템 A) RT= 1.04분, ES+ve m/z 619/621 (M+H)+.
실시예 145
9-{[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}-9- 옥소노난산
Figure pct00247
LCMS (시스템 A) RT= 1.07분, ES+ve m/z 633/635 (M+H)+.
실시예 146
2-({[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]아미노}카르보닐)벤조산
Figure pct00248
THF (0.5 ml) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 4)(0.046 g, 0.1 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.035 ml, 0.2 mmol)에 이어 프탈산 안히드라이드 (0.014 g, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 블로우다운 유닛에서 농축시키고, 잔류물을 DMSO (0.5 ml)에 용해시키고, 질량 유도된 오토-분취용 HPLC (방법 E)에 의해 정제시켜 표제 화합물 (35 mg, 51%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 1.03분, ES+ve m/z 61 1/613 (M+H)+.
실시예 147
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 디플루오로메틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아세트아미드
Figure pct00249
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(디플루오로메틸)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 70) (26 mg, 0.039 mmol)를 디클로로메탄 (0.5 mL)에 현탁시키고, 트리에틸아민 (0.055 mL, 0.39 mmol) 다음에 아세트산 안히드라이드 (0.004 mL, 0.043 mmol)를 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 질소 스트림하에 농축시켜 N-[(3-{[3-{비스[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(디플루오로메틸)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드를 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 이용하였다. 잔류물을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, NaOH (0.553 mL, 1.105 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었으므로, 혼합물을 진공에서 농축시키고, 5% 시트르산으로 산화시켰다. 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 물 (25 mL)로 2회 및 식염수 (25 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 후에 진공에서 증발시켜 황색 잔류물을 수득하였고, 이것을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (7 mg, 36%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.02분, ES+ve m/z 525/527 (M+H)+.
실시예 148
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 히드록시메틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아세트아미드
Figure pct00250
N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(히드록시메틸)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-N-[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 72)(53 mg, 0.082 mmol)를 디클로로메탄 (0.5 mL) 및 트리에틸아민 (0.1 15 mL, 0.823 mmol)에 현탁시켰다. 아세트산 안히드라이드 (0.008 mL, 0.09 mmol)를 현탁액에 첨가하고, 이것을 1시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로 디클로로메탄 (0.3 mL) 및 아세트산 안히드라이드 (3.88 ㎕, 0.041 mmol)를 용액에 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. LCMS가 단지 소량의 출발 물질이 남아 있음을 나타내었으므로, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 오프 화이트 잔류물을 수득하였고, 이것을 메탄올 (3 mL)에 용해시키고, NaOH (1.546 mL, 3.09 mmol)로 처리하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 진공에서 농축시키고, 5% 시트르산으로 산화시켰다. 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 물 (25 mL)로 2회 및 식염수 (25 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음 진공에서 증발시켰다. 황색 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (17 mg, 43%)을 무색 유리질 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT = 0.91분, ES+ve m/z 505/507 (M+H)+.
실시예 149
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1- 히드록시에틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ] 아세트아미드
Figure pct00251
소듐 보로히드라이드 (3.09 mg, 0.082 mmol)를 MeOH (2 mL) 중의 N-({3-[(4-아세틸-3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아세트아미드 (제조 참조, 중간체 75) (40 mg, 0.068 mmol)의 교반 용액에 25℃에서 질소하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 1N HCl (5 mL)을 서서히 첨가하고, 메탄올을 진공에서 증발시켰다. 생성물을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (18 mg, 48%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT= 0.97분, ES+ve m/z 519/521 (M+H)+.
실시예 150
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1-히드록시-1- 메틸에틸 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]
Figure pct00252
메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.256 mL, 0.768 mmol)를 THF (1 mL) 중의 N-({3-[(3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-시아노-1H-인다졸-1-일)메틸]페닐}메틸)아세트아미드 (제조 참조, 중간체 73)(64 mg, 0.128 mmol)의 교반 용액 실온에서 서서히 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 여전히 남아 있음을 나타내었다. 따라서, 메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.128 mL, 0.384 mmol)를 더 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 0.5N HCl (4 mL)을 첨가하고, 생성물을 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 황색 오일을 THF (1 mL)에 용해시키고, 메틸마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중의 3M 용액) (0.256 mL, 0.768 mmol)를 O℃에서 질소하에 서서히 첨가하였다. 반응물을 실온까지 ~20분에 걸쳐 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. LCMS가 출발 물질이 생성물과 함께 공-용리됨을 나타내었다 - 533 [M+H]에서의 분자 이온은 요망되는 알코올 생성물에 상응한다. 1N HCl (4 mL)을 서서히 첨가하고, 생성물을 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 진공에서 농축시켜 황색 오일을 수득하였고, 이것을 DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 진공으로 증발시켜 표제 화합물 (23.2 mg, 30%)을 황색 고형물로서 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.03분, ES+ve m/z 533/535 (M+H)+.
실시예 151
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1- 히드록시에틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-히드록시-2- 메틸프로판아미드
Figure pct00253
트리에틸아민 (0.021 mL, 0.151 mmol)을 디클로로메탄 (1 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(1-히드록시에틸)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 77)(24 mg, 0.050 mmol)에 첨가하였다. 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (7.92 ㎕, 0.055 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 블로우다운 유닛 상에서 농축시키고, 탄산칼륨 (69.5 mg, 0.503 mmol) 및 메탄올 (2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl로 산화시키고, EtOAc (2 x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 잔류물을 DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 질소 스트림하에 래들리스 블로우다운 장치에서 제거하여 표제 화합물 (10.5 mg, 37%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=0.99분, ES+ve m/z 563/565 (M+H)+.
실시예 152
(3R)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1- 히드록시에틸 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드 포르메이트 염
Figure pct00254
DIPEA (0.059 mL, 0.336 mmol)를 DCM (1 mL) 중의 (3R)-4-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-S-모르폴린카르복실산 (19.41 mg, 0.084 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 그 후, HATU (35.1 mg, 0.092 mmol)에 이어 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(1-히드록시에틸)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 77)(44 mg, 0.084 mmol)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디옥산 중의 4M 염화수소 (0.5 mL, 2 mmol)로 처리하고, 반응물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 SCX-2 카트리지를 통해 통과시키고, 메탄올로 세척한 다음, 메탄올 중의 2M 암모니아를 이용하여 용리시켰다. 적합한 암모니아성 분획들을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 DMSO-메탄올 (1:1) (1 mL)에 용해시키고, MDAP에 의해 정제시켜 (방법 A) 표제 화합물 (31.2 mg, 58%)을 수득하였다. LCMS (시스템 C) RT=2.04분, ES+ve m/z 590/592 (M+H)+.
실시예 153
(3S)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1- 히드록시에틸 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드 포르메이트 염
Figure pct00255
표제 화합물을 실시예 152와 유사하게 제조하였다.
LCMS (시스템 C) RT=2.04분, ES+ve m/z 590/592 (M+H)+.
실시예 154
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1-히드록시-1- 메틸에틸 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2-히드록시-2- 메틸프로판아미드
Figure pct00256
트리에틸아민 (0.034 mL, 0.244 mmol)을 디클로로메탄 (1 mL) 중의 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(1-히드록시-1-메틸에틸)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 78)(40 mg, 0.081 mmol)에 첨가하였다. 2-클로로-1,1-디메틸-2-옥소에틸 아세테이트 (0.013 mL, 0.090 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 블로우다운 유닛 상에서 농축시키고, 탄산칼륨 (113 mg, 0.815 mmol) 및 메탄올 (2 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS가 아세테이트 기가 제거되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축시키고, 2N HCl로 산화시키고, EtOAc로 추출하였다 (2 x 15 mL). 합친 유기층을 소수성 프릿을 통해 통과시킴에 의해 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 황색 오일로서 수득하였다. 잔류물을 DMSO (1 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 질소 스트림하에 래들리스 블로우다운 장치에서 제거하여 표제 화합물 (11.5 mg, 24%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.05분, ES+ve m/z 577/579 (M+H)+.
실시예 155
(3R)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1-히드록시-1- 메틸 에틸)-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드 포르메이트 염
Figure pct00257
DIPEA (0.057 mL, 0.326 mmol)를 DCM (1 mL) 중의 (3R)-4-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-3-모르폴린카르복실산 (18.84 mg, 0.081 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 그 후, HATU (31.0 mg, 0.081 mmol)에 이어 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(1-히드록시-1-메틸에틸)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 78)(40 mg, 0.081 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 디옥산 중의 4N 염화수소 (0.020 mL, 0.081 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 사전-컨디셔닝된 (MeOH) SCX-2 카트리지를 통해 통과시키고, 메탄올로 세척한 다음 메탄올 중의 2M 암모니아를 이용하여 용리시켰다. 적합한 암모니아성 분획들을 농축시키고, 잔류물을 DMSO (0.5 mL)에 용해시키고, 포름산 변형제와 함께 아세토니트릴 워터를 이용하여 Sunfire C18 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 A). 용매를 질소 스트림하에 래들리스 블로우다운 장치에서 제거하여 표제 화합물 (2.7 mg, 5%)을 수득하였다. LCMS (시스템 F) RT=O.84분, ES+ve m/z 604/606 (M+H)+.
실시예 156
(3S)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-(1-히드록시-1- 메틸에틸 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-3- 모르폴린카르복사미드
Figure pct00258
표제 화합물을 실시예 155와 유사하게 제조하였다.
LCMS (시스템 F) RT=0.84분, ES+ve m/z 604/606 (M+H)+.
실시예 157-160을 HATU 및 TFA를 이용한 BOC 보호기의 절단을 이용하여 중간체 4 및 적합한 산으로부터 실시예 44에 따른 배열 방식으로 제조하였다.
실시예 157
N 1 -[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-D- 세린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00259
LCMS (시스템 D) RT=0.80분, ES+ve m/z 550/552 (M+H)+.
실시예 158
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-L- 프롤린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00260
LCMS (시스템 A) RT=0.82분, ES+ve m/z 560/562 (M+H)+.
실시예 159
(2S)-N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다 졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-2- 아제티딘카르복사미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00261
LCMS (시스템 B) RT= 1.82분, ES+ve m/z 546/548 (M+H)+.
실시예 160
(3R)-N-({3-[(4-( 메틸옥시 )-3-{[(5- 메틸 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 )-3-
Figure pct00262
LCMS (시스템 A) RT=0.68분, ES+ve m/z 556 (M+H)+.
실시예 161 및 162를 4-메틸-3-모르폴린카르복실산 하이드로클로라이드와의 HATU 커플링 및 카이랄 HPLC에 의한 생성된 라세믹 혼합물의 분리에 따라서 N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-5-플루오로-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 61)로부터 제조하였다.
실시예 161
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4- 메틸 -3- 모르폴린카르복사미드 거울상이성질체 1
Figure pct00263
LCMS (시스템 A) RT=0.96분, ES+ve m/z 608/610 (M+H)+.
실시예 162
N-[(3-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-5- 플루오로 -4-( 메틸옥시 )-1H-인다졸-1-일] 메틸 } 페닐 ) 메틸 ]-4- 메틸 -3- 모르폴린카르복사미드 거울상이성질체 2
Figure pct00264
LCMS (시스템 A) RT=0.96분, ES+ve m/z 608/610 (M+H)+.
실시예 163
4-{[3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -1-일]메틸}-N,N- 디에틸벤즈아미드
Figure pct00265
디클로로메탄 (DCM) (1 ml) 중의 4-{[3-[[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)아미노]-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}-N,N-디에틸벤즈아미드 (제조 참조, 중간체 79)(125.5 mg, 0.189 mmol)의 용액에 TFA (0.292 ml, 3.78 mmol)를 주위 온도에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 30시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림하에 블로우다운 유닛에서 농축시켰다. 잔류물을 고 pH-MDAP를 이용하여 정제시켰고, MDAP에 의해 추가로 정제시켜 표제 화합물 (3 mg, 3%)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.19분, ES+ve m/z 533/535 (M+H)+.
실시예 164
5- 클로로 -N-(4-( 메틸옥시 )-1-{[3-( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-1H- 인다졸 -3-일)-2-티오펜설폰아미드
Figure pct00266
상기와 같이 5-클로로-N-[4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-N-({[2-(트리메틸실릴)에틸]옥시}메틸)-2-티오펜설폰아미드 (제조 참조, 중간체 8)를 DMF 중의 탄산칼륨 및 3-메톡시벤질 브로마이드로 알킬화시켜 표제 화합물을 제조하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.25분, ES+ve m/z 464/466 (M+H)+.
실시예 165
N-[1-{[3- 플루오로 -4-( 메틸옥시 ) 페닐 ] 메틸 }-4-( 메틸옥시 )-1H- 인다졸 -3-일]-5-메틸-2- 티오펜설폰아미드
Figure pct00267
피리딘 (2 mL) 중의 1-{[3-플루오로-4-(메틸옥시)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-아민 (제조 참조, 중간체 80)(130 mg, 0.8 mmol)의 용액을 5-메틸-2-티오펜설포닐 클로라이드 (0.24 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 짧게 흔들어 주고, 21℃에서 3시간 동안 정치시킨 후에 블로우다운에 의해 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH-DMSO (1 mL)에 용해시키고, 탄산암모늄 변형제와 함꼐 아세토니트릴 워터를 이용하여 Xbridge 컬럼 상에서 질량 유도된 오토프렙에 의해 정제시켰다 (방법 C). 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (76 mg)을 수득하였다. LCMS (시스템 A) RT=1.1 1분, ES+ve m/z 462 (M+H)+.
실시예 166
(3S)-N-({3-[(3-{[(5- 클로로 -2- 티에닐 ) 설포닐 ]아미노}-4-히드록시-1H- 인다졸 -1-일) 메틸 ] 페닐 } 메틸 )-3- 모르폴린카르복사미드 포르메이트 염
Figure pct00268
무수 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄-헥사플루오로포스페이트 (77 mg, 0.124 mmol)의 용액에 실온에서 (S)-4-Boc-모르폴린-3-카르복실산 (26.2 mg, 0.113 mmol)에 이어 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.059 mL, 0.339 mmol)과 마지막으로 무수 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중의 N-(1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-히드록시-1H-인다졸-3-일)-5-클로로-2-티오펜설폰아미드 (포르메이트 염) (제조 참조, 중간체 15)(56 mg, 0.113 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 탄산수소나트륨 수용액과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 식염수:물 (1:1)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 통과시키고, 진공으로 증발시켰다. 이것을 염화수소 (1,4-디옥산 중의 4M 용액) (1 mL)로 처리한 후 반응물이 용액이 될 때까지 메탄올 (~4 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공으로 증발시키고, 잔류물을 MeOH/DMSO (1 mL)에 용해시키고, 용매 A/B (A: 물 중의 0.1% v/v 포름산 용액, B: 아세토니트릴 중의 0.1% v/v 포름산 용액)로 용리시키며 방법 B를 이용해서 (Sunfire C18 컬럼 방법 A) 상에서 질량 유도된 오토-분취용 HPLC (MDAP)에 의해 25분에 걸쳐 정제시켰다. 적합한 분획들을 합치고, 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 무색 오일 (13 mg, 19%)로서 수득하였다. LCMS (시스템 B) RT = 1.63분, ES+ve m/z 562/564 (M+H)+.
생물학적 시험 방법
CCR 길항제 활성에 대한 [35S]- GTPyS SPA 결합 검정
길항제 역가를 방사성리간드 [35S]-GTPyS 경쟁 검정에 의해 측정하였다. 간단히 말해, CHO 막을 발현시키는 CCR4를 23G 바늘을 통해 통과시킴에 의해 균질화시켰다. 그 후, 이러한 막을 검정 완충제 (2OmM HEPES, 1 OmM MgCl2, 10OmM NaCl, 0.05% BSA, 40㎍/ml 사포닌 및 KOH 5M을 이용하여 7.4로 pH 조정됨)에서 WGA-코팅된 리드시커(Leadseeker) SPA 비드에 부착시켜 3㎍/웰의 최종 검정 농도 (FAC) 막 및 250㎍/웰의 FAC 비드, 용액을 생성하였다.
60분간 얼음 위에서 사전-커플링시킨 후, GDP를 첨가하여 4.4μM FAC를 수득하였다. 그 후, 검정 완충제에서 제조된 [35S]-GTPγS를 비드/막 용액에 첨가하여 0.33nM FAC를 수득하였다. 인간 MDC를 비드/막/[35S]-GTPγS 현탁액에 첨가하여 최대 효능제 반응의 80%를 나타내는 (EC80) FAC를 수득하였다. 0.5㎕의 화합물을 함유시켜, 비드/막/[35S]-GTPγS/효능제 현탁액을 화이트 그라이너(white Greiner) 폴리프로필렌 384-웰 플레이트 (45㎕/웰)에 분산시켰다. 그 후, 최종 검정 용액(45.5㎕)을 밀봉하고, 원심분리기를 이용하여 스피닝한 다음, 실온에서 3-6시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 Viewlux 기계 상에서 판독하고, 발광을 표준 길항제의 IC100에 의해 유도된 최대 억제 반응의 백분율로서 플롯팅하였다.
실시예 1-77, 80, 82, 85, 88-90, 95, 100-103, 114-157, 160, 164 및 165를 상기 검정으로 시험하였다.
모든 시험된 화합물은, pIC50가 ≥ 6.4 및 < 7.0인 실시예 101, 116, 120 및 156을 제외하고는, pIC50가 ≥ 7.0 및 < 8.4이다.
실시예 2-4, 6-8, 10, 12, 16-18, 21, 26-28, 33, 35, 37, 43, 44, 48, 51, 52, 55, 57, 70, 71-73, 80, 85, 102, 114, 124, 125, 127, 133, 134, 138-140, 142-144, 148, 149 및 151-153의 pIC50는 ≥ 7.8 및 < 8.4인 것으로 나타났다.
세포의 F- 액틴 함량에서 케모킨 자극된 증가
10일 이내에 아무런 약물을 섭취하지 않은 정상 지원자로부터 채혈하고, 1/9 부피의 3.8% 트리-소듐 시트레이트 용액과 혼합시켰다. CD4+ CCR4+ T 세포의 F-액틴 함량에서의 케모킨-유도된 증가를 필레트 등의 방법을 변형시켜 측정하였다 (Eur. Respir. J; 23: 876-884, 2004). 말초혈 단핵 세포 (PBMC)를 덱스트란 침강에 이어 Percoll 밀도 구배 원심분리에 의해 분리시켰다. PBMC를 FITC-컨주게이션된 항-인간 CD4 및 PE-컨주게이션된 항-CCR4 항체 또는 적합한 이소형 대조군과 함께 15분간 인큐베이션하였다. 그 후, 세포 현탁액을 400 g에서 10분간 원심분리하고, 펠렛을 검정 완충제 (10 mM HEPES 및 0.1% 소 혈청 알부민을 함유하는 페놀 레드-없는 RPMI 1640 배지)에 1O7/mL로 재현탁시켰다. 생성된 세포 현탁액을 길항제 또는 비히클 (0.1% DMSO)과 30분간 37℃에서 인큐베이션한 다음 효능제로 15초간 자극하였다. 3% 포름알데히드를 첨가함에 의해 검정을 종료시켰다. 고정된 세포를 PBS로 2회 세척하고 (1000 g에서 5분간 원심분리하여 세포를 회수함) 실온에서 Alexa fluor-647 팔로이딘 (0.075 U/mL)과 함께 리소-포스파티딜콜린 (93.75 ㎍/ml)의 존재하에 20분간 스타틴 F-액틴에 대해 인큐베이션시켰다. 세포를 PBS로 한번 더 세척하고, 세포의 상대적인 F-액틴 함량을 흐름 세포측정기로 측정하였다. 샘플 당 1000 CD4+ CCR4+ 세포의 평균 형광 세기를 결정하고, 그 샘플에서의 CD4+ CCR4+ 세포의 평균 세기의 분수로서 표시하였다.
실시예 1-81, 83-86, 89, 90, 95, 96, 102, 103, 113, 110-113, 116-122, 124, 125, 128, 129, 157-160, 163, 164 및 166을 상기 검정으로 시험하였다.
모든 시험된 화합물은, 실시예 163을 제외하고, pA2가 ≥ 6.0인 것으로 나타났다. 실시예 1-79, 83-86, 89, 96, 110-113, 118, 124, 125, 129, 158-160 및 166은 pA2가 ≥ 6.9인 것으로 나타났다.
본 명세서에서 인용된 비제한적으로 특허 및 특허 출원을 포함하는 모든 간행물은, 충분히 기재된 대로 각각의 개별적인 간행물이 구체적으로 및 개별적으로 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다고 언급된 바와 같이 본원에 참조로서 포함된다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염:
    Figure pct00269

    상기 식에서, R1은 하기 (1), (2), (3), (4) 및 (5)로 구성된 군으로부터 선택되고:
    (1) 하기 화학식 (a)의 기:
    Figure pct00270

    여기에서, 상기 A는 하기 (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi), (vii) 및 (viii)로 구성된 군으로부터 선택되며:
    (i) 수소;
    (ii) 하나 이상의 -NRaRb, -ORc, -C(O)NRaRb, -C(O)ORc, 헤테로시클릴, 페닐 또는 헤테로아릴기로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알킬;
    (iii) -C(O)ORc 또는 -NRaRb 기로 치환되거나 치환되지 않은 C3 - 7시클로알킬;
    (iv) 하나 이상의 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릴;
    (v) 하나 이상의 할로겐 또는 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴;
    (vi) -NRaRb;
    (vii) p가 0, 1, 2 또는 3인 -(CH2)pC(O)OH 기로 치환된 페닐; 또는
    (viii) -(CH2)7C(O)OH;
    (2) 하기 화학식 (b)의 기:
    Figure pct00271

    상기 식에서, B는 C1 - 6알킬이다;
    (3) -C(O)NRaRb 또는 -CH2C(O)NRaRb;
    (4) -S(O)2NRaRb;
    (5) NRaRb로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알콕시;
    Ra, Rb 및 Rc는 독립적으로 수소 또는 C1 - 6알킬이고;
    R2는 할로겐, C1 - 6알킬, CF3, 히드록시 또는 C1 - 6알콕시이고;
    R3는 할로겐, CF3, 히드록시, C1 - 6알콕시, CRdReOH 또는 CHF2이고; 이 때, Rd 및 Re는 독립적으로 수소 또는 메틸이며;
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 6알킬 또는 CF3이고;
    R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐 또는 C1 - 6알킬이고;
    n은 0 또는 1이다.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 R1이 하기 (1), (2), (3), (4) 및 (5)로 구성된 군으로부터 선택되고:
    (1) 하기 화학식 (a)의 기:
    Figure pct00272

    여기에서, 상기 A는 하기 (i), (ii), (iii), (iv), (v) 및 (vi)으로 구성된 군으로부터 선택되며:
    (i) 수소;
    (ii) 하나 이상의 -NRaRb, -ORc, -C(O)NRaRb, -C(O)ORc, 헤테로시클릴, 페닐 또는 헤테로아릴기로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알킬;
    (iii) -NRaRb 기로 치환되거나 치환되지 않은 C3 - 7시클로알킬;
    (iv) 하나 이상의 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릴;
    (v) 하나 이상의 할로겐 또는 C1 - 6알킬로 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴; 또는
    (vi) -NRaRb;
    (2) 하기 화학식 (b)의 기:
    Figure pct00273

    상기 식에서, B는 C1 - 6알킬이다;
    (3) -C(O)NRaRb;
    (4) -S(O)2NRaRb;
    (5) NRaRb로 치환되거나 치환되지 않은 C1 - 6알콕시;
    Ra, Rb 및 Rc는 독립적으로 수소 또는 C1 - 6알킬이고;
    R2는 할로겐, C1 - 6알킬, CF3, 히드록시 또는 C1 - 6알콕시이고;
    R3는 할로겐, CF3, 히드록실, C1 - 6알콕시, CH2OH 또는 CHF2이고;
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 6알킬 또는 CF3이고;
    R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐 또는 C1 - 6알킬이고;
    n은 0 또는 1인 화합물 또는 이의 염.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 염:
    Figure pct00274

    상기 식에서, R1 및 R3는 제 1항 또는 제 2항에서 정의된 바와 같다.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 R1이 하기 화학식 (a)의 기인 화합물 또는 이의 염:
    Figure pct00275
    .
  5. 제 4항에 있어서, 상기 A가 C1 - 6알킬인 화합물 또는 이의 염.
  6. 제 4항에 있어서, 상기 A가 하나 이상의 -NRaRb, -ORc, -C(O)NRaRb, -C(O)ORc, 피롤리디닐, 페닐 또는 이미다졸릴로 치환된 C1 - 6알킬인 화합물 또는 이의 염.
  7. 제 4항에 있어서, 상기 A가 피롤리디닐, 피페리디닐 및 모르폴리닐로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로시클릴인 화합물 또는 이의 염.
  8. 제 4항에 있어서, 상기 A가 푸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴 및 옥사졸릴로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로아릴인 화합물 또는 이의 염.
  9. 제 1항 내지 제 8항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 R3가 메톡시인 화합물 또는 이의 염.
  10. 실시예 1 내지 166 중의 어느 하나인 화합물 또는 이의 염.
  11. 하기의 화합물 또는 이의 염:
    N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]아세트아미드,
    N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-3-모르폴린카르복사미드,
    N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시-2-메틸프로판아미드,
    N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시프로판아미드,
    (2S)-N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시프로판아미드.
  12. N-[(3-{[3-{[(5-클로로-2-티에닐)설포닐]아미노}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-1-일]메틸}페닐)메틸]-2-히드록시-2-메틸프로판아미드인 하기 화합물:
    Figure pct00276
    .
  13. 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및 부형제를 포함하는 약제 조성물.
  14. 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 다른 치료적으로 활성인 제제와 함께 포함하는 조합 약제 생성물.
  15. 치료에 사용되는 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  16. CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용되는 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  17. CCR4 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  18. 치료적 유효량의 제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여, 치료가 필요한 피검체에서 CCR 수용체 길항제가 처방되는 질병 또는 질환을 치료하는 방법.
  19. 하기 (a), (b), (c) 또는 (d)로부터 선택된 공정을 포함하는 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염을 제조하는 방법:
    (a) 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 염을 하기 화학식 (IIIa), (IIIb), (IIIc) 또는 (IIId)의 화합물 또는 이의 보호된 유도체와 반응시키고,
    그 후, 수득된 생성물을 임의로 탈보호시키는 공정:
    Figure pct00277

    Figure pct00278

    상기 식에서, R2 내지 R6, n 및 A는 제 1항에서 정의된 바와 같다;
    (b) 하기 화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 보호된 유도체를 하기 화학식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물과 반응시키고,
    그 후, 수득된 생성물을 임의로 탈보호시키는 공정:
    Figure pct00279

    Figure pct00280

    상기 식에서, R1 내지 R6 및 n은 제 1항에서 정의된 바와 같고, Hal은 할로겐이다;
    (c) 하기 화학식 (VI)의 화합물을 하기 화학식 (VII)의 화합물과 반응시키는 공정:
    Figure pct00281

    Figure pct00282

    상기 식에서, R1 내지 R6 및 n은 제 1항에서 정의된 바와 같고, Hal은 할로겐이다;
    (d) 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염을 추가의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염으로 전환시키는 공정:
    Figure pct00283

    상기 식에서, R1 내지 R6 및 n은 제 1항에서 정의된 바와 같다.
  20. 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 염:
    Figure pct00284

    상기 식에서, R2 내지 R6 및 n은 제 1항에서 정의된 바와 같다.
  21. 제 20항에 있어서, N-[1-{[3-(아미노메틸)페닐]메틸}-4-(메틸옥시)-1H-인다졸-3-일]-5-클로로-2-티오펜설폰아미드인 화합물 또는 이의 염.
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