KR20110125664A - 인간화된 항-ｃｄ19 항체 제형 - Google Patents

인간화된 항-ｃｄ19 항체 제형 Download PDF

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Abstract

본 발명은 B 세포 질환 및 장애의 치료를 위해 ADCC, CDC, 및/또는 세포사멸을 조정할 수 있는 항-CD19 마우스 모노클로날 항체의 키메라 및 인간화 버전을 포함하는 안정한 액체 제형을 제공한다.

Description

인간화된 항-ＣＤ19 항체 제형{HUMANIZED ANTI-CD19 ANTIBODY FORMULATIONS}
서열 목록
본원은 EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록을 포함하며, 참조함으로써 이의 전문이 본원에 통합된다. 2010년 3월 5일에 제작된 상기 ASCII 사본은 00058000.txt로 명명되며 크기는 79,932 바이트이다.
1. 우선권 자료
본원은 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합된, 2009년 3월 6일자로 출원된 미국 특허출원 제61/158,153호에 대한 우선권을 청구한다.
2. 개요
본 발명은 인간 CD19 항원에 특이적으로 결합하여 다음 중 하나 이상을 매개할 수 있는, 인간, 인간화된, 또는 키메라 항체의 액체 제형에 관한 것이다: 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC), 항원 의존성 세포 매개된-세포독성(ADCC), 및 프로그램화된 세포 사멸(세포자멸사). 상기 제형은, 장기간의 저장 동안에도, 안정성, 낮은 수준 내지 검출가능하지 않은 수준의 항체 단편화, 낮은 수준 내지 검출가능하지 않은 수준의 응집, 및 매우 낮은 손실 내지 무 손실의 항체의 생물학적 활성을 나타낸다.
본 발명은 또한 인간 CD19 항원에 결합하는 치료학적 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD19 항체를 포함하는 액체 제형을 이용하여, B 세포 악성종양을 포함하는, 인간 피험체에서 B 세포 질환 또는 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 자가면역 질병의 치료 및 예방, 및 또한 이식체-대-숙주병(GVHD)의 치료 및 예방, 체액성 거부, 및 인간 CD19 항원에 결합하는 치료학적 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD19 항체를 포함하는 액체 제형을 이용한 인간 이식 수용체에서 이식-후 림프증식성 질환의 치료 및 예방 방법에 관한 것이다.
3. 배경
B 세포는 이의 분화 및 증식 동안 광범위한 배열의 세포 표면 분자를 발현한다. 예에는 CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD72, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 및 CD86 백혈구 표면 마커를 포함한다. 이들 마커는 일반적으로 B 세포 악성 종양, 자가면역 질병, 및 이식 거부증과 같은 B 세포 질환 또는 질병의 치료를 위한 치료학적 표적으로서 제안되어 왔다. 이들을 특이적으로 결합하는 항체가 개발되었으며, 일부는 질병 및 질환의 치료를 위한 치료학적 제제로서 시험되어 왔다.
예를 들어, 성숙한 B 세포 및 이들의 악성 대응물에 대해 특이적인 CD20 세포 표면 분자에 대해 지시된 키메라 또는 방사표지된 단클론 항체(mAb)-기반의 요법이 비-호지킨 림프종에 대한 생체내 치료에 효과적인 것으로 밝혀졌다[참조: Tedder, et al., Immunol. Today 15:450-454 (1994); Press et al., Hematology:221-240(2001); Kaminski et al., N. Engl. J. Med. 329:459-465(1993); Weiner, Semin. Oncol. 26:43-51(1999); Onrust et al., Drugs 58:79-88(1999); McLaughlin et al., Oncology 12:1763-1769(1998); Reff et al., Blood 83:435-445(1994); Maloney et al., Blood 90:2188-2195(1997); Malone et al., J. Clin. Oncol. 15:3266-3274(1997); Anderson et al., Biochem. Soc. Transac. 25:705-708(1997)]. 항-CD20 단클론 항체 요법은 또한 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 특발성 혈소판 감소성 자반병 및 용혈빈혈, 및 또한 기타 면역 매개된 질환[참조: Silverman et al., Arthritis Rheum. 48: 1484-1492 (2002); Edwards et al., Rheumatology 40: 1-7 (2001); De Vita et al., Arthritis Rheumatism 46:2029-2033 (2002); Leandro et al., Ann. Rheum. Dis. 61 :883-888 (2002); Leandro et al., Arthritis Rheum. 46:2673-2677 (2001)]의 증상을 감쇠시키는 데 부분적으로 효과적인 밝혀져 왔다. 항-CD20 (IgGl) 항체, RITUXAN은 성인 면역 특발성 혈소판 감소성 자반병, 류마티스 관절염, 및 자가면역 용혈빈혈과 같은 특정 질환의 치료에서 성공적으로 사용되어 왔다(참조: Cured et al., WO 00/67796). 이들 요법의 유효성에도 불구하고, B 세포 고갈은, B 세포가 CD20을 발현하지 않거나 낮은 수준에서 CD20을 발현하는 경우(예를 들면, 예비-B 세포 또는 비성숙한 B 세포) 또는 CD20 면역요법 후에 상실된 CD20 발현을 갖는 경우[참조: Smith et al., Oncogene 22:7359-7368 (2003)] 덜 효과적이다.
뮤린 단클론 항-CD 19 항체는 당해 기술분야에 기술되어 있다[참조: 예를 들면, HD37 (IgGl, kappa) (DAKO North America, Inc, Carpinteria, CA), BU12 (Callard et al., J. Immunology, 148(10):2983-7 (1992)), 4G7 (IgGl) (Meeker et al., Hybridoma, 3(4):305-20 (1984 Winter)), J4.119 (Beckman Coulter, Krefeld, Germany), B43 (PharMingen, San Diego, CA), SJ25C1 (BD PharMingen, San Diego, CA), FMC63 (IgG2a) (Zola et al., Immunol.Cell.Biol. 69(PT6): 411-22 (1991); Nicholson et al., Mol. Immunol., 34:1157-1165 (1997); Pietersz et al., Cancer Immunol. Immunotherapy, 41 :53-60 (1995)), 89B(B4) (IgGl) (Beckman Coulter, Miami, FL; Nadler et al., J. Immunol., 131 :244-250 (1983)), and/or HD237 (IgG2b) (Fourth International Workshop on 인간 Leukocyte Differentiation Antigens, Vienna, Austria, 1989; and Pezzutto et al., J. Immunol., 138(9):2793-2799 (1987)]. 항-CD19 항체 또는 이의 접합체는 또한 B 세포 질환 및 질병의 각종 동물 모델에서 치료학적 잠재성을 나타내었다[참조: Falvell et al., Br. J. Hematol. 134(2): 157-70 (2006); Vallera et al., Clin. Cancer Res. 11(21):7920-8 (2005); Yazawa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102(42): 15178-83 (2005)].
특히, 인간화된 CD19 항체의 용도는 림프종, 백혈병, 또는 자가면역 질환과 같은 B-세포 질환의 치료를 위한 것으로 기술되어 왔다[참조: Hansen의 미국 특허공개공보 제US2005/0070693호].
암 요법의 최근의 발전에도 불구하고, 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphomas), 및 만성 림프구 백혈병의 B 세포 아형과 같은 B 세포 악성종양은 암 관련 사망의 주요한 원인이다. 따라서, B 세포 악성종양의 치료를 위한 추가의 개선된 치료학적 요법에 대한 필요성이 크다.
세포성(T 세포 매개된) 및 체액성(항체, B 세포 매개된) 면역 둘 다는 이제 이식 거부증에서 중요한 역할을 담당하는 것으로 공지되어 있다. 이식 거부증에서 T-세포 매개된 면역의 중요성은 잘 정립되어 있지만, 급성 및 만성 거부증에서의 체액성 면역의 중요한 역할은 단지 최근에 명백해지고 있다. 결과적으로, 이식 거부증의 치료 및 예방에서의 대부분의 진전은 T 세포 활성화를 표적화하는 치료학적 제제로부터 개발되어 왔다. 이식 거부증의 치료에 대해 FDA 승인된 첫번째 치료학적 단클론 항체는 T 세포의 CD3 수용체에 대해 지향된 뮤린 단클론 항체 ORTHOCLONE-OKT3TM(muromonab-CD3)이었다. OKT3은 단클론 항-CD52 CAMPATHTM 항체, CAMPATH-IG, CAMPATH-1H (alemtuzumab), 및 CAMPATH-IM), 및 폴리클로날 항-흉선세포 항체 제제("티모글로빈" 또는 "티모글로불린"으로도 불리우는 항-흉선세포 글로불린 또는 "ATG"라고 함)을 포함하는, 다수의 항-림프구 지향된 항체에 의해 결합되어 왔다. 이식 거부증의 예방을 위해 승인된 다른 T 세포 항체는 키메라 단클론 항체 SIMULECTTM(basiliximab) 및 인간화된 단클론 항체 ZENAPAXTM(daclizumab)를 포함하며, 이들 둘 다는 활성화된 T 세포의 고 친화성 IL-2 수용체를 표적화한다.
이식 거부증에서 체액성 면역의 중요성은 처음에는 고급성 거부증으로 생각되었는데, 이는 이식 수용체가 이식수술 전에 항-공여체 HLA 항체를 지녀서 항체 억제의 효과적인 치료학적 요법(regimen)의 존재하에 이식물의 신속한 파괴를 일으킨다. 최근에, 체액성 면역이 또한 급성 및 만성 거부증 둘 다를 매개하는 중요한 인자인 것이 명백해졌다. 예를 들면, 만성 관찰은, I류 또는 II류 항-HLA 동종항체("항-MHC 동종항체"라고도 함)를 개발할 수 있는 환자에서의 이식물 생존률은 이러한 항체를 개발할 수 없었던 환자에서의 이식물 생존률에 비해 감소되었다. 임상적 및 실험적 데이타는 또한, 다른 공여체-특이적인 동종 항체 및 자가 항체가 거부증의 중요한 매개체임을 나타낸다. 동종이식 거부증에서의 공여체-특이적 항체에 대한 역할을 지지하는 증거에 대한 현재의 검토를 위해서는, 문헌 'Rifle et al, Transplantation, 79:S14-S18 (2005)'을 참조하라. 따라서, 급성 및 만성 이식 거부증에서 체액성 면역의 역할의 비교적 최근의 인식으로 인해, 체액성 면역을 표적화하기 위한 현재의 치료학적 제제 및 전략은 세포성 면역을 표적화하기 위한 것들 보다 덜 잘 개발되어 있다. 따라서, 당해 기술분야에는 인간 이식 수용체에서 이식 거부증, 즉 이식 대 숙주 질병(GVHD), 체액성 거부증, 및 이식후 림프구증식성 질환을 치료하고 예방하기 위한 개선된 시약 및 방법에 대한 필요성이 존재한다.
자가면역 질환은 전체적으로 상당한 이환률 및 장애율을 유발한다. 1965년에서 1995년까지 수집된 발생률 데이타를 기준으로 하여, 대략 120만명의 인간이 다음 5년에 걸쳐 새로운 자가면역 병에 걸릴 것이라는 것이 추정되었다. 야콥센 등은 문헌[참조: Jacobsen et al. (Clin Immunol. Immunopathol. 84:223 (1997)]에서, 130개 이상의 공개된 연구자료들을 평가하고, 1996년에 미국에서 850만명(전체 인구의 3.2%)의 인간들이 이들 연구에서 시험된 24개의 자가면역 질환들 중의 하나 이상을 가졌다고 추정하였다. 공중 건강, 효과적이고 안전한 치료에 대한 자가면역 질환들의 주요한 영향을 고려하여, 이들 질환의 부담을 검토하기 위한 효과적이고 안전한 치료법이 필요하다. 따라서, 당해 기술분야에는 자가면역 질환을 치료하기 위한 개선된 시약 및 방법에 대한 필요성이 존재한다.
선행기술의 액체 항체 제제는 짧은 반감기를 가지며 저장 동안에 화학적 및 물리적 불안정성으로부터 수득되는 항체의 생물학적 활성을 잃을 수 있다. 화학적 불안정성은 탈아미드화, 라세미체화, 가수분해, 산화, 베타 제거 또는 이황화물 교환에 의해 유발될 수 있으며, 물리적 불안정성은 항체 변성, 응집, 침전 또는 흡수에 의해 유발될 수 있다. 이들 중에서, 응집, 탈아미드화 및 산화는 항체 분해의 가장 일반적인 원인인 것으로 공지되어 있다[참조: Wang et al., 1988, J. of Parenteral Science & Technology 42(Suppl):S4-S26; Cleland et al., 1993, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4):307-377)]. 따라서, 항체의 안정한 액체 제형, 특히 항-인간 CD 19 항체의 안정한 액체 제형에 대한 필요성이 존재한다.
4. 요약
본 발명은 인간 CD 19 항원에 특이적으로 결합하는 키메라, 인간 또는 인간화된 항체를 포함하는 멸균 안정성 수성 제형을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 항-CD 19 마우스 단클론 항체, HB12A 및 HB12B의 키메라 및 인간화된 버젼을 포함하는 제형을 제공한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허출원 제11/852,106호에 기술된 항-CD 19 항체를 포함하는 제형을 제공하며, 이 특허출원의 기재내용은 모든 목적으로 이의 전문이 본원에서 포함된다. 추가의 구현예에서, 본 발명은 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC), 항원 의존성 세포 매개된-세포독성(ADCC), 및 프로그램화된 세포 사멸(세포자멸사) 중의 하나 이상을 매개할 수 있는 본 발명의 항-CD19 항체를 포함하는 제형을 제공하며, 향상된 효과기 기능을 갖는다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 제형은, 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단에서의 N-아세틸글루코사민에 결합하지 않는 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제형은 서열 104의 중쇄 가변 영역, 서열 111의 경쇄 가변 서열, 및 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단에서의 N-아세틸글루코사민에 결합하지 않는 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 키메라, 인간 또는 인간화된 항-CD 19 항체를 안정화시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 인간 CD 19 항원에 특이적으로 결합하는 본 발명의 키메라, 인간 또는 인간화된 항체를 포함하는 멸균 안정성 수성 제형의 조제방법에 관한 것이다.
본 발명은 인간 CD 19 항체에 결합하는 본 발명의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 포함하는 액체 제형을 이용하는, B 세포 악성종양을 포함하는, 인간 피험체에서 B 세포 질환 또는 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 자가면역 질환의 치료 및 예방 뿐만 아니라 인간 CD 19 항원에 결합하는 본 발명의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 포함하는 액체 제형을 이용하는 인간 이식 수용체에서 이식 대 숙주 질환(GVHD), 체액성 거부증, 및 이식후 림프구증식성 질환의 치료 및 예방을 위한 방법에 관한 것이다.
본 발명은 인간 CD 19 항원에 결합하는 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체 뿐만 아니라 이들 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명은 항-CD 19 단클론 항체, HB12A 및 HB12B의 키메라 및 인간화된 버젼을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-CD 항체는 HB12A(클론 B410F12-2-A6-C2는 2005년 2월 11일자로 American Type Culture Collection ("ATCC")에 ATCC Patent Deposit Designation: PTA- 6580으로 기탁되었다) 또는 HB12B(클론 B43H12-3-B2-B6은 2005년 2월 11일자로 American Type Culture Collection ("ATCC")에 ATCC Patent Deposit Designation: PTA-6581로 기탁되었다)의 CDR들 중의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 모두를 포함한다.
카밧(Kabat)의 문헌[참조: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에 따라 정의된 HB12A의 중쇄 가변 영역의 CDRl, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 6, 서열번호 8, 및 서열번호 10으로 나타낸다. 카밧에 따라 정의된 HB12A의 경쇄 가변 영역의 CDRl, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 12, 서열번호 14 및 서열번호 16으로 나타낸다.
카밧에 따라 정의된 HB12B의 중쇄 가변 영역의 CDRl, CDR2 및 CDR3에 대한 아미노산 서열은 각각 서열번호 22, 서열번호 24 및 서열번호 26으로 나타낸다. 카밧에 따라 정의된 HB12B의 경쇄 가변 영역의 CDRl, CDR2 및 CDR3에 대한 아미노산 서열은 각각 서열번호 28, 서열번호 30 및 서열번호 32로 나타낸다.
일 구현예에서, 본 발명의 항-CD 19 항체는 하기한 표 1에 나열된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR을 포함한다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005

하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 HB12A 또는 HB 12B의 하나 이상의 골격 영역을 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 인간 항체 (예를 들어, 인간 배아 항체 서열, 예컨대 VH3-72, JH4, Vk A10, 또는 Jk4)로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 골격 (FW) 영역을 추가로 포함할 수 있고, 여기서, 상기 인간 골격 영역은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 여기서, 인간 FW 잔기는 모 마우스 (예를 들어, HB12A 또는 HB 12B) 중쇄 또는 경쇄에 존재하는 상응하는 잔기로 교체된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에 열거된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있고, HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34)로 명명된 VH 영역의 하나 이상의 중쇄 골격 (FW) 영역을 추가로 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에 열거된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함하고, HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34)로 명명된 VH 영역의 하나 이상의 중쇄 골격 (FW) 영역을 추가로 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에 열거된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있고, HB12B-(A10-Jk4) (서열번호:52)로 명명된 VK 영역의 하나 이상의 경쇄 골격 (FW) 영역을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에 열거된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함하고, HB12B-(A10-Jk4) (서열번호:52)로 명명된 VK 영역의 하나 이상의 경쇄 골격 (FW) 영역을 추가로 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR, HB12B-(A10-Jk4)로 명명된 VK 영역의 하나 이상의 경쇄 골격 영역, 및 HB12B-(3-72/JH4)로 명명된 VH 영역의 하나 이상의 중쇄 골격 영역을 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR, HB12B-(A10-Jk4)로 명명된 VK 영역의 하나 이상의 경쇄 골격 영역, 및 HB 12B-(3-72/JH4)로 명명된 VH 영역의 하나 이상의 중쇄 골격 영역을 포함한다.
예를 들어, 하나의 구체예에서, 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 이 영역은 4개의 골격 영역, 즉, FW1, FW2, FW3, 및 FW4을 포함하고, 여기서, FW1은 서열번호:36의 아미노산 서열을 포함하고, FW2는 서열번호:38의 아미노산 서열을 포함하고, FW3은 서열번호:40의 아미노산 서열을 포함하고, FW4는 서열번호:42의 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 이 영역은 4개의 골격 영역, 즉, FW1, FW2, FW3, 및 FW4을 포함하고, 여기서, FW1은 서열번호:36의 아미노산 서열을 포함하고, FW2는 서열번호:38의 아미노산 서열을 포함하고, FW3은 서열번호:40의 아미노산 서열을 포함하고, FW4는 서열번호:42의 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 본 발명의 인간화 항-CD19 모노클로날 항체는 4개의 골격 영역, 즉, FW1, FW2, FW3, 및 FW4를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 여기서, FW1은 서열번호:54의 아미노산 서열을 포함하고; FW2는 서열번호:56, 서열번호:64, 및 서열번호:72로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; FW3은 서열번호:58, 및 서열번호:66로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; FW4는 서열번호:60의 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 인간화 항-CD19 모노클로날 항체는 4개의 골격 영역, 즉, FW1, FW2, FW3, 및 FW4을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서, FW1은 서열번호:54의 아미노산 서열을 포함하고; FW2는 서열번호:56, 서열번호:64, 및 서열번호:72로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; FW3은 서열번호:58, 및 서열번호:66로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; FW4는 서열번호:60의 아미노산 서열을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호.:237의 아미노산 서열을 포함하는 VH 또는 서열번호.:238의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 항체는 인간 CD19 항원에 결합한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호.:237의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호.:238의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다: HB12B VK (서열번호:20), HB 12B-(AlO- Jk4) (서열번호:52), HB12B-364987 (서열번호:62), HB12B-3649 (서열번호:68), HB12B-36 (서열번호:70), HB12A VK (서열번호:4), 7E12 VK (서열번호:110), 14H5 VK (서열번호:111), 15D1 VK (서열번호:112), 16C9 VK (서열번호:1 13), 3C3 VK (서열번호:193), 3E5 VK (서열번호:194), 3D4 VK (서열번호:195), 3F1 VK (서열번호:196), 5B5 VK (서열번호:197), 6F7 VK (서열번호:198), 1C11 VK (서열번호:199), 2B11 VK (서열번호:200), 2D10 VK (서열번호:201), 5C11 VK (서열번호:202), 5D4 VK (서열번호:203), 6C11 VK (서열번호:204), 9G7 VK (서열번호:205), 1H4 VK (서열번호:206), 및 5C4 VK (서열번호:207.
특정 구체예에서, 본 발명은 또한, 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD19 항체에 관한 것이다: HB12B VH (서열번호:18), HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34), HB12A VH (서열번호:2), 7E12 VH (서열번호:102), 14H5 VH (서열번호:103), 15D1 VH (서열번호:104), 15D7 VH (서열번호:105), 16C4 VH (서열번호:106), 14H5-YG (서열번호:107), 14H5-DG (서열번호:108), 14H5-LG (서열번호:109), 1A7 VH (서열번호:191), 3C3 VH (서열번호:191), 6C11 VH (서열번호:191), 9G7 (서열번호:191), 3B4 VH (서열번호:236), 및 3F11 VH (서열번호:192).
론은 2006년 10월 26일에 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션("ATCC")에 "3649 Light in TOPO" ATCC 특허 기탁 번호 PTA-7953으로 기탁되었다.
일 구체예에서, 본 발명의 인간화된 항-CD 19 항체는 마우스 단클론 항체 HB12A 및/또는 HB 12B의 것과 비교할만한 친화성, 또는 HB 12B VH (서열 번호: 18) 및 HB12B VK (서열 번호: 20)를 포함하는 chHB 12B 항체의 것과 비교할만한 친화성을 갖는 인간 CD 19에 결합할 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 본 발명은 또한, 인간 CD 19에 특이적으로 결합하는 인간, 인간화된 또는 키메라 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 대하여, 본원에서 정의된 바와 같은 스트린전트(stringent) 또는 저 스트린전시(stringency) 하이브리드화 조건하에 하이브리드화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체예는 본원에 기술된 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터이다.
본 발명은 또한, 본 발명의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터를 포함하는 분리된 세포에 관한 것이다.
본원에 기술된 키메라, 인간 및 인간화된 항-CD 19 단클론 항체는 IgGl, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 인간 동형의 것들을 포함한다. 일 구체예에서, 본원에 기술된 인간화된 항-CD 19 항체는 항체 의존성 세포형 세포독성(ADCC), 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC) 및/또는 세포자멸사를 매개한다.
추가의 구체예에서, 본원에 기술된 인간화된 항-CD 19 항체는 항-IgM/CpG 자극된 B 세포 증식을 억제한다.
본 발명은 또한 키메라, 인간 및 인간화된 항-CD 19 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
여전히 또 다른 면에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 인간에게 키메라, 인간 또는 인간화된 항-CD 19 단클론 항체의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하여, 인간에서 B 세포 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다.
추가의 면에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 인간에게 키메라, 인간 또는 인간화된 항-CD 19 단클론 항체의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하여, 인간에서 자가면역 질환 또는 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 이를 필요로 하는 인간에게 키메라, 인간 또는 인간화된 항-CD 19 단클론 항체의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하여, 인간 이식 환자에서 체액성 거부증을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 하기 수성 제형에 제형의 저장 안정성을 증진시키기에 유효한 양의 표면활성제를 첨가하는 것을 포함하여, 서열번호 104의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 서열번호 111의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및, 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단에서의 N-아세틸글루코사민에 결합하지 않는 착체 N-글리코사이드 결합된 당쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는, 키메라, 인간화된 또는 인간 항-CD 19 항체를 포함하는 수성 제형의 저장 안정성을 증진시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 이러한 면에 따라, 표면활성제는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80일 수 있다. 일 구체예에서, 표면활성제는 폴리소르베이트 80이며 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.04%, 약 0.08% 또는 약 0.1%의 양으로 존재한다. 더구나, 본 발명은 또한, 표면활성제의 첨가 전 및/또는 후에 조성물을 여과함을 포함하여, 저장 안정성을 위해 제형을 추가로 멸균화하는 것에 관한 것이다.
4.1. 정의
본원에서 사용된 것으로서, 용어 "항체" 및 "항체들"(면역글로불린)은 단클론 항체(전장(full-length) 단클론 항체를 포함), 폴리클로날 항체, 적어도 2개의 완전한 항체로부터 형성된 다중특이성 항체(예: 이중특이성 항체), 인간 항체, 인간화된 항체, 카멜화된 항체, 키메라 항체, 일본쇄 Fvs (scFv), 일본쇄 항체, 단일 도메인 항체, 도메인 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편, 이황화물 결합된 Fvs (sdFv), 및 항-개별특이형(항-Id) 항체(예를 들면, 본 발명의 항체에 대한 항-Id 항체를 포함함), 인트라바디(intrabody), 및 Fab, Fab ', F(ab ')2, 및 Fv 단편을 포함하지만 이에 국한되지 않는 상기한 것들 중의 어느 것의 에피토프-결합 단편; 디아바디; 선형 항체; 일본쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다. 특히, 항체는 면역글로불린 분자 및, 면역글로불린 분자, 즉 항원-결합 부위를 포함하는 분자의 면역학적으로 활성인 단편을 포함한다. 면역글로불린 분자는 특정 유형(예: IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예: IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl 및 IgA2) 또는 소부류일 수 있다.
천연 항체는 대개 2개의 동일한 경(L) 쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된, 약 150,000 달톤(dalton)의 헤테로테트라머릭 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 공유결합성 이황화물 결합에 의해 중쇄에 결합되지만, 이황화물 결합의 수는 상이한 면역글로불린 동형의 중쇄들 사이에서 변한다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄내 이황화물 브릿지를 갖는다. 각각의 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH) 및 이어서 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 하나의 말단(VL)에 가변 도메인 및 이의 다른 말단에 불변 도메인을 가지며; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 경쇄는 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기준으로 한 람다 쇄 또는 카파 쇄로서 분류된다. 카파 경쇄의 가변 도메인은 또한 본원에서 VK로서 나타낼 수 있다. 용어 "가변 영역"은 또한 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인을 기술하기 위해 사용될 수 있다. 특별한 아미노산 잔기는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에서 경계를 형성하는 것으로 믿어진다. 이러한 항체는 인간, 원숭이, 돼지, 말, 토끼, 개, 고양이, 쥐 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는 임의의 포유동물로부터 기원할 수 있다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 특별한 항원에 대하여 각각의 특별한 항체의 결합 특이성에 책임이 있고 항체들 중에서 서열내에서 광범위하게 상이하다는 사실을 나타낸다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인을 통해 균일하게 분배되지는 않는다. 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 상보성 결정 영역(CDR)이라고 불리우는 분절(segment)에서 집중된다. 가변 도메인의 보다 더 크게 보존된 부위는 골격 영역(FW)이라고 부른다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각, 루프 연결을 형성하고 일부 경우에 β-쉬트 구조(sheet structure)의 부분을 형성하는, 3개의 CDR에 의해 연결된, β-쉬트 형태를 주로 채택하는 4개의 FW 영역을 포함한다. 각 쇄에서 CDR들은 FW 영역에 의해 함께 근접한 상태로 유지되며, 다른 쇄의 CDR들과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다[참조: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]. 불변 도메인은 일반적으로 항원 결합에 직접 포함되지 않지만, 항원 결합 친화성에 영향을 미칠 수 있으며 ADCC, CDC 및/또는 세포자멸사에서 항체의 참여와 같은 각종 효과기 기능을 나타낼 수 있다.
용어 "고가변 영역"은 본원에서 사용되는 경우, 항원에 대한 이의 결합과 연합되는 항체의 아미노산 잔기를 나타낸다. 고가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"의 아미노산 잔기[예를 들면, 경쇄 가변 도메인의 잔기 24-34 (Ll), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3) 및, 중쇄 가변 도메인의 잔기 31-35 (Hl), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)] 및/또는 "고가변 루프"로부터의 잔기[예를 들면, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (Ll), 50-52 (L2) 및 91- 96 (L3) 및, 중쇄 가변 도메인 내의 26-32 (Hl), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901-917 (1987)]를 포함한다. "골격" 또는 "FW" 잔기는 CDR을 플랭킹(flanking)하는 가변 도메인 잔기이다. FW 잔기는 키메라, 인간화된, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 백시바디(vaccibody), 선형 항체, 및 이중특이성 항체 내에 존재한다.
본원에서 사용된 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 수득된 항체인데, 즉 집단을 포함하는 개개의 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단클론 항체는 단일 항원성 부위에 대하여 지향되는, 고 특이성이다. 더구나, 상이한 결정자(에피토프)에 대하여 지향된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단클론 항체는 항원에서 단일 결정자에 대해 지향된다. 이들의 특이성 외에도, 단클론 항체들은, 이들이 다른 면역글로불린 생산 세포에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 세포에 의해 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 또다른 생산 방법은 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있으며, 예를 들면, 단클론 항체는 이러한 단클론 항체를 암호화하는 중쇄 및 경쇄 유전자로 안정하게 또는 일시적으로 형질감염된 세포에 의해 생산될 수 있다.
개질제 "단클론"은 항체의 실질적으로 균일한 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특별한 방법으로 항체의 가공을 필요로 하는 것으로 간주되어서는 안된다. 용어 "단클론"은 본원에서 특정의 진핵, 원핵 또는 파지 클론을 포함하는 세포의 클론성 집단으로부터 유도되는 항체를 나타내기 위해 사용되며, 항체가 가공된 방법을 나타내기 위한 것이 아니다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체는 문헌[참조: Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 먼저 기술된 하이브리도마 방법으로 조제할 수 있거나 또는, 예를 들면, 문헌[참조: Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에 기술된 기술을 사용하는 파지 항체 라이브러리로부터의 분리를 포함하는, 임의의 재조합체 DNA 방법(참조: 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호)으로 조제할 수 있다. 이들 방법을 사용하여 단클론 포유류, 키메라, 인간화된, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 배시바디, 선형 항체, 및 이중특이성 항체를 생산할 수 있다.
용어 "키메라" 항체는, 중쇄 및/또는 경쇄의 적어도 하나의 부분이 특별한 항체 부류 또는 소부류에 속하거나 특별한 종으로부터 유도된 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 이와 동종인 항체를 포함하며, 쇄의 적어도 하나의 다른 부분은, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종으로부터 유도되거나 다른 항체 부류 또는 소부류에 속하는 항체내의 상응하는 서열 뿐만 아니라 이러한 항체의 단편과 동일하거나 이와 동종이다[미국 특허 제816,567호; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)]. 본원에서 관심있는 키메라 항체는 비인간 영장류로부터 기원한 가변 도메인 항원-결합 서열[예를 들면, Old World Monkey, 예를 들면, 비비, 붉은털 원숭이 또는 시모몰구스 멍키] 및 인간 불변 영역 서열(미국 특허 제5,693,780호)을 포함한다.
인간이 아닌 동물(예: 쥐) 항체의 "인간화된" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 기원한 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 대부분의 부분에서, 인간화된 항체는, 천연 CDR 잔기가 목적하는 특이성, 친화성 및 용량을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종(공여체 항체)의 상응하는 CDR로부터의 잔기에 의해 대체되는 인간 면역글로불린(수용체 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 FW 영역 잔기는 상응하는 비인간 잔기에 의해 대체된다. 더구나, 인간화된 항체는 수용체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 정제하기 위해 이루어진다. 일반적으로, 인간화된 항체 중쇄 또는 경쇄는, CDR의 모두 또는 거의 모두가 비인간 면역글로불린의 것에 상응하고 FW의 모두 또는 거의 모두가 인간 면역글로불린 서열의 것인, 하나 이상의 가변 도메인의 거의 모두를 포함할 것이다. 특정 구체예들에서, 인간화된 항체는 면역 글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 추가의 상세한 사항은 문헌[참조: Jones et al., Nature, 321 :522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992)]을 참조하시오.
"인간 항체"는 인간으로부터 유도된 항체 또는, 항원성 챌린지에 반응하여 특정 인간 항체를 생산하기 위해 "가공"되고 당해 분야에 공지된 임의의 방법으로 생산할 수 있는 유전자삽입 유기체로부터 수득된 항체일 수 있다. 특정 기술에서, 인간 중쇄 및 경쇄 부위의 성분은 내인성 중쇄 및 경쇄 부위의 표적화된 분열을 포함하는 진핵 줄기세포주로부터 기원한 유기체의 균주 내로 도입된다. 유전자 삽입 유기체는 인간 항원에 특이적인 인간 항체를 합성할 수 있으며, 유기체를 사용하여 인간 항체-분비 하이브리도마를 생산할 수 있다. 인간 항체는 또한 항체일 수 있으며, 여기서 중쇄 및 경쇄는 인간 DNA의 하나 이상의 공급원으로부터 유도된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 완전 인간 항체는 또한 염색체 형질감염 방법(chromosomal transfection method) 및 또한 파지 표시 기술, 또는 시험관내 활성화된 B 세포(상기 방법들 모두는 당해 분야에 공지됨)으로 구성할 수 있으며, 상기 방법들 모두는 당해 분야에 공지되어 있다.
"항체 의존성 세포 매개된 세포독성" 및 "ADCC"는, 비-특이적 세포독성 세포(예를 들면, Natural Killer (NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적세포 상의 결합된 항체를 인지하고 후속적으로 표적 세포의 분해를 유발하는 세포 매개된 반응을 나타낸다. 일 구체예에서, 이러한 세포는 인간 세포이다. 특별한 작용 메카니즘으로 국한하려는 것은 아니지만, ADCC를 매개하는 이들 세포독성 세포는 일반적으로 Fc 수용체(FcR)를 발현한다. ADCC, NK 세포를 매개하기 위한 주 세포는 FcγRIII을 발현하지만, 단핵구는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및/또는 FcγRIV를 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌[참조: Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-92 (1991)]에 요약되어 있다. 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위하여, 미국 특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기술된 바와 같은 시험관내 ADCC 검정을 수행할 수 있다. 이러한 검정을 위한 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 천연 킬러(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심있는 분자의 ADCC 활성은 시험관내에서, 예를 들면, 문헌[참조: dynes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 95:652-656 (1998)]에 기술된 바와 같은 동물 모델에서 검정할 수 있다.
"상보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 상보체의 존재하에 상보체 활성화를 개시하고 표적을 분해하는 분자의 능력을 말한다. 상보체 활성화 경로는 상보체 시스템(CIq)의 제1 성분을 유사체 항원과 착체화된 분자(예: 항체)에 결합함으로써 개시된다. 상보체 활성화를 평가하기 위하여, 예를 들면, 문헌[참조: Gazzano-Santaro et al., J. Immunol. Methods, 202: 163 (1996)]에 기술된 바와 같은 CDC 검정을 수행할 수 있다.
"효과기 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고 효과기 기능을 수행하는 백혈구이다. 이 세포는 적어도 FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및/또는 FcγRIV를 발현하고 ADCC 효과기 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 천연 킬러(NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함한다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"를 사용하여 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기술한다. 일 구체예에서, FcR은 천연 서열 FcR이다. 더구나, 특정 구체예들에서, FcR은 IgG 항체(감마 수용체)를 결합하고, 이들 수용체의 대립 변이체 및 대안적으로 분리된 형태를 포함하는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및/또는 FcγRIV 아류의 수용체를 포함하는 것이다. FcγRII 수용체는, 이의 세포혈장 도메인 내에서 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는, FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 이의 세포혈장 도메인내 면역 수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)를 포함한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 이의 세포혈장 도메인내 면역 수용체 티로신계 억제 모티프(ITIM)를 포함한다[참조: Daeron, Annu. Rev. Immunol., 15:203-234 (1997)]. FcR은 문헌[참조: Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods, 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med., 126:330-41 (1995)]에서 검토된다. 미래에 확인될 것들을 포함하는 기타 FcR은 본원에서 용어 "FcR"로 포함된다. 이 용어는 또한 모체 IgG를 태아(fetus)로 이동시키는 역할을 하는, 신생아 수용체 FcRn을 포함한다[참조: Guyer et al., Immunol., 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol., 24:249 (1994)].
"Fv"는 완전한 항원-인지 및 결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 강력한 비공유결합성 또는 공유결합성 연합에서 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 이러한 형태에서 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR은 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면위의 항원 결합 부위를 정의한다. 종합적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 하나의 가변 도메인(또는 항원에 대하여 특이성인 단지 3개의 CDR을 포함하는 Fc의 반)도, 전체 결합 부위 보다 더 낮은 친화성이지만, 항원을 인지하고 결합하는 능력을 갖는다.
본원에 기술된 치료에 사용되는 에피토프에 대한 항체의 "친화성"은 당해 기술분야에서 잘 이해되는 용어이며 에피토프에 대한 항체의 결합 정도 또는 강도를 의미한다. 친화성은 평형 해리 상수(KD 또는 Kd), 외견상의 평형 상수(KD' 또는 Kd'), 및 IC50(경쟁적 검정에서 50% 억제하는데 요구되는 양)를 포함하나, 이에 국한되지 않는, 당해 분야에 공지된 다수의 방법으로 측정하고/하거나 발현시킬 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 친화성이 에피토프에 결합하는 항체의 소정의 집단에 대한 평균 친화성인 것으로 이해된다. mL 당 mg IgG 또는 mg/mL의 측면에서 본원에 보고된 KD의 값은, 비록 혈장이 사용될 수 있다고 해도, 혈청 mL당 mg Ig를 나타낸다. 항체 친화성이 본원에 기술된 치료 방법의 투여에 대한 기준으로서, 또는 본원에 기술된 치료 방법에 대한 선택으로서 사용되는 경우, 항체 친화성은 치료 전 및/또는 동안에 측정될 수 있으며, 수득된 값은, 인간 환자가 치료에 대한 적절한 후보물인지를 평가하는데 있어 임상의에 의해 사용될 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "항원항체결합력"은, 항체가 항원과 결합하는 전체 결합 강도(즉, 항체 암(arm) 둘다)의 척도이다. 항체 항원항체결합력은 문헌[참조: J. Virol. Meth., 44:11-24. (1993)]에 기술된 바와 같은 간접적인 형광성 항체의 변형과 같은, 그러나 이에 국한되지 않는, 당해 분야에 공지된 특정 수단을 사용하여 과량의 항원 속에 결합된 항원-항체의 해리를 측정함으로써 결정할 수 있다.
"에피토프"는 당해 분야에 잘 이해되고 있는 용어이며 항체에 대한 특이적인 결합을 나타내는 특정 화학적 잔기를 의미한다. "항원"은 에피토프를 함유하는 잔기 또는 분자이며, 자체로서, 또한 항체에 특이적으로 결합한다.
본원에 사용된 것으로서 "B 세포 표면 마커"는 이에 결합하는 제제로 표적화될 수 있는 B 세포의 표면에 발현된 항원이다. B 세포 표면 마커는 CD1O, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD37, CD53, CD72, CD73, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85, 및 CD86 백혈구 표면 마커를 포함한다. 특히 흥미있는 B 세포 표면 마커는 포유동물의 다른 비-B 세포 조직과 비교하여 B 세포에서 우선적으로 발현되며 전구체 B 세포 및 성숙한 B-계통 세포 둘다에서 발현될 수 있다. 일 구체예에서, 마커는 상이한 분화 단계에서 B 세포상에 발견되는 CD19이다.
본원에 사용된 것으로서 용어 "항체 반감기"는 이들의 투여 후 항체 분자의 평균 생존 시간의 척도인 항체의 약력학적 특성을 의미한다. 항체 반감기는 예를 들면, 혈청 또는 혈장 속에서 측정한 것으로서, 즉, 순환하는 반감기, 또는 다른 조직에서 측정한 것으로서, 환자의 신체 또는 이의 특정 부분으로부터 공지된 양의 면역글로불린의 50%를 제거하는데 요구되는 시간으로 표현될 수 있다. 반감기는 하나의 면역글로불린 또는 면역글로불린의 부류로부터 다른 것으로 다양할 수 있다. 일반적으로, 항체 반감기에 있어서의 증가는 투여된 항체에 대한 순환시 평균 잔류 시간(MRT)에 있어서의 증가를 초래한다.
용어 "동형"은 항체의 중쇄 또는 경쇄 고정 영역의 분류를 말한다. 항체의 고정 도메인은 항원들 또는 항원에 대한 결합에 관여하지 않지만, 각종 효과기 기능을 나타낸다. 중쇄 고정 영역의 아미노산 서열에 따라서, 소정의 인간 항체 또는 면역글로불린은 면역글로불린의 5개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 중 하나로 지정될 수 있다. 이들 부류 중 일부는 또한 소부류(동형), 예를 들면, IgG1(감마 1), IgG2(감마 T), IgG3(감마 3), 및 IgG4(감마 4), 및 IgA1 및 IgA2로 나누어질 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 고정 영역은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다. 상이한 부류의 면역글로불린의 구조 및 3 차원 형태는 잘 공지되어 있다. 각종의 인간 면역글로불린 부류 중에서, 단지 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 및 IgM이 보체를 활성화시키는 것으로 알려져 있다. 인간 IgGl 및 IgG3은 인간에서 ADCC를 매개하는 것으로 공지되어 있다. 인간 경쇄 고정 영역은 2개의 주요 부류, 카파 및 람다로 분류될 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "면역원성"은, 화합물이 면역 반응을 유발(특이적인 항체의 생산 및/또는 특이적인 T 세포의 증식을 자극)할 수 있음을 의미한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "항원성"은, 화합물이 항체에 의해 인식되거나 또는 항체에 결합될 수 있으며 면역 반응을 유도하는 것을 의미한다.
용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "의 치료"(또는 문법적으로 동등한 용어)는, 피험체의 상태의 중증도가 감소되거나 적어도 부분적으로 개선되거나 완화되고/되거나 적어도 하나의 임상 증상에 있어서 일부 완화, 경감 또는 감소가 달성되고/되거나 상태의 진행에 있어서의 억제 또는 지연 및/또는 질병 또는 병의 발병의 예방 또는 지연이 일어남을 의미한다. 따라서, 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "의 치료"(또는 문법적으로 동등한 용어)는 예방학적 및 치료학적 치료 요법을 말한다.
본원에 사용된 것으로서, "충분한 양" 또는 특정 결과를 달성하기"에 충분한 양"은, 선택적으로 치료학적 효과인(즉, 치료학적 유효량의 투여에 의해), 바람직한 효과를 생산하는데 효과적인 본 발명의 항체 또는 조성물의 양을 말한다. 예를 들어, "충분량" 또는 "에 충분한 양"은 B 세포를 고갈시키는데 효과적인 양일 수 있다.
본원에 사용된 것으로서 "치료학적으로 유효한" 양은 피험체에게 일부 개선 또는 이점을 제공하는 양이다. 다른 방법으로 언급되는 경우, "치료학적으로 유효한" 양은 적어도 하나의 임상 증상에 있어서 일부 완화, 경감 및/또는 감소를 제공하는 양이다. 본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 질환과 관련된 임상 증상은 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다. 또한, 당해 분야의 숙련가들은, 일부 이점이 피험체에게 제공되는 한, 치료학적 효과가 완전하거나 치유성일 필요가 없음을 인식할 것이다.
본원에 사용된 것으로서 용어 "부형제"는 제형에 유리한 물리적 특성, 예를 들면, 증가된 단백질 안정성, 증가된 단백질 가용성 및 감소된 점도를 부여하는 약물용 희석제, 매개체, 방부제, 결합제 또는 안정화제로서 일반적으로 사용되는 불활성 물질을 말한다. 부형제의 예는 단백질(예를 들면, 혈청 알부민을 포함하나, 이에 국한되지 않음), 아미노산(예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 글리신을 포함하나, 이에 국한되지 않음), 표면활성제(예를 들면, SDS, 트윈 20, 트윈 80, 폴리소르베이트 및 비이온성 표면활성제를 포함하나, 이에 국한되지 않음), 사카라이드(예를 들면, 글루코스, 슈크로스, 말토즈 및 트레할로스를 포함하나, 이에 국한되지 않음), 폴리올(예를 들면, 만니톨 및 소르비톨을 포함하나, 이에 국한되지 않음), 지방산 및 인지질(예를 들면, 알킬 설포네이트 및 카프릴레이트를 포함하나, 이에 국한되지 않음)을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 부형제에 관한 추가의 정보를 위해서는 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences (by Joseph P. Remington, 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA)]를 참조한다.
본원에 사용된 것으로서 문구 "약제학적으로 조건에 맞는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나, 미국 약전, 유럽 약전에 나열되어 있거나 또는 동물, 및 보다 특히 인간에서 사용하기 위한 다른 일반적으로 인지된 약전에 명기되어 있음을 의미한다.
목적한 항원(예를 들면, CD19)에 특이적으로 결합하는 항체(이의 항체 단편 포함)를 포함하는 액체 제형의 문맥내에서 본원에 사용된 것으로서 용어 "안정성" 및 "안정한"은 소정의 제작, 조제, 수송 및 저장 조건하에서 응집, 분해 또는 단편화에 대한 제형내 항체(이의 항체 단편을 포함함)의 내성을 말한다. 본 발명의 "안정한" 제형은 소정의 제작, 조제, 수송 및 저장 조건하에서 생물학적 활성을 보유한다. 상기 항체(이의 항체 단편 포함)의 안정성은 HPSEC, 역상 크로마토그래피, 정적 광 산란(SLS), 푸리에 변환 적외선분광광도법(FTIR), 원형 광이색성(CD), 우레아 비폴딩 기술(urea unfolding technique), 고유의 트립토판 형광성, 시차 주사 열량계 및/또는 ANS 결합 기술에 의해 측정된 것으로서, 참조 제형과 비교하여, 응집, 분해 또는 단편화의 정도에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 참조 제형은 75 mM NaCl 및 4% 트레할로스를 함유하는 10mM 히스티딘(pH 6.0) 속에서 10mg/ml의 항체(이의 항체 단편 포함)(예를 들면, 16C4 가변 영역 및, 푸코스가 당 쇄내 환원 말단내에서 N-아세틸글루코스아민에 결합되지 않은 착체 N-글리코시드 결합된 당쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항체, 그러나 이에 국한되지 않는다)로 이루어진 -70℃에서 동결된 참조 표준물일 수 있으며, 이러한 참조 제형은 HPSEC에 의해 단일의 모노머 피크(예를 들면, > 95% 영역)를 규칙적으로 제공한다. 항체(이의 항체 단편 포함)를 포함하는 제형의 전체 안정성은 예를 들면, ELISA 및, 분리된 항원 분자를 사용하는 방사면역검정을 포함하는 각종의 면역학적 검정으로 평가할 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 문구 "낮은 수준 내지 검출가능하지 않는 수준의 응집"은 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC) 또는 정적 광 산란(SLS) 기술에 의해 측정된 것으로서 단백질의 중량당 약 5% 이하, 약 4% 이하, 약 3% 이하, 약 2% 이하, 약 1% 이하 및 약 0.5% 이하의 응집물을 함유하는 시료를 말한다.
본원에 사용된 것으로서 용어 "낮은 수준 내지 검출가능한 수준의 단편화"는 예를 들면, 분해되지 않은 항체 또는 분해되지 않은 이의 단편을 나타내는, HPSEC 또는 역상 크로마토그래피에 의해 측정한 것으로서 단일 피크내, 또는 환원된 모세관 겔 전기영동(rCGE)에 의해 측정된 것으로서 2개의 피크(예를 들면, 중쇄 및 경쇄)(또는 하부단위체가 존재하는 것과 같이 많은 피크)내 전체 단백질의 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 98% 또는 약 99% 또는 이상을 함유하고 각각에서 전체 단백질의 약 5% 이상, 약 4% 이상, 약 3% 이상, 약 2% 이상, 약 1% 이상, 또는 약 0.5% 이상을 갖는 다른 단일 피크를 함유하지 않는 시료를 말한다. 본원에 사용된 것으로서 용어 "환원된 모세관 겔 전기영동"은 항체내 이황화물 결합을 환원시키기에 충분한 환원 조건하에서의 모세관 겔 전기영동을 말한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "관리하다", "관리하는" 및 "관리"는 질병의 치유를 초래하지 않는, 요법(예를 들면, 예방제 또는 치료제)으로부터 피험체가 도출하는 유익한 효과를 말한다. 특정 구체예들에서, 피험체에게는 질병의 진행 또는 악화를 방지하기 위하여 질병을 "유지하기" 위한 하나 이상의 요법(예를 들면, 하나 이상의 예방제 또는 치료제)가 투여된다.
본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "예방하다", "예방하는", 및 "예방"은 질병 또는 질환의 진행 또는 개시의 억제, 또는 치료 요법(예: 예방제 또는 치료제)의 투여로부터 수득되는 피험체에서 질병 또는 질환의 재발, 개시 또는 진행의 예방, 또는 요법들의 병용(예: 예방제 또는 치료제의 병용)의 투여를 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같이, 특별한 결과를 성취하기 위한 "충분량" 또는 "~에 충분한 양"은, 선택적으로 치료학적 효과(즉, 치료학적 유효량을 투여함으로써)인, 목적하는 효과를 수득하기에 효과적인 본 발명의 항체 또는 조성물의 양을 나타낸다. 예를 들면, "충분량" 및 "~에 충분한 양"은 CD 19 발현 B 세포를 고갈시키기에 효과적인 양일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료학적으로 유효한" 양은 피험체에게 일부 개선점 또는 이점을 제공하는 양이다. 다른 방식으로 언급된, "치료학적으로 유효한" 양은 적어도 하나의 임상적 증상에서 일부 경감, 완화 및/또는 감소를 제공하는 양이다. 본 발명의 방법으로 치료할 수 있는 질환들과 관련된 임상적 증상은 당해 기술분야에 익히 공지되어 있다. 또한, 당해 분야의 숙련가들은, 일부 이점이 피험체에게 제공되지 않는 한, 치료학적 효과가 완성적이거나 치료적일 필요는 없다는 것을 인지할 것이다.
본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "피험체"는 임의의 인간 또는 인간이 아닌 동물을 포함한다. 용어 "인간이 아닌 동물"은 인간이 아닌 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등과 같은 포유류 및 비-포유류를 포함하지만 이에 국한되지 않는 모든 척추동물을 포함한다.
농도, 양, 세포 수, 비율 및 기타 수치는 본원에서 범위 형식으로 제공될 수 있다. 또한, 이러한 범위 형식은 단지 편의상 및 간략화를 위해 사용되며 이러한 범위의 제한으로 명백하게 언급되는 수치만을 포함하는 것이 아니라 각각의 수치 및 부-범위가 명시적으로 언급되는 것과 같은 범위 내로 포함된 모든 개개의 수치 또는 부범위도 포함하는 것으로 유연하게 해석되어야 한다.
5. 도면의 간단한 설명
도 1a-b: (A) HB 12B VK (서열 번호: 20), HB12B-(A10-Jk4) (서열 번호: 52), HB12B-364987 (서열 번호: 62), HB12B-3649 (서열 번호: 68), 및 HB12B-36 (서열 번호: 70) 경쇄 가변 영역의 아미노산 정렬. 서열 잔기는 카밧(Kabat)에 따라 명명된다. 카밧에 따라 정의된 CDR 잔기는 박스로 나타낸다. HB12B VK (서열 번호: 20)의 버니어(Vernier), 쇄간(Interchain) 및 표준(Canonical) 잔기는 흐린 회색으로 강조하여 나타낸다. 그래프팅된 항체 HB12B-(A10- Jk4) (서열 번호: 52) 가변 도메인에 대한 HB12B-364987 (서열 번호: 62) (Y40F, K53H, Y91F), HB12B-3649 (서열 번호: 68) (Y40F, K53H), 및 HB12B-36 (서열 번호: 70) (Y40F)의 아미노산 치환은 진한 회색으로 강조하여 나타낸다. (B) HB12B VH (서열 번호: 18), HB12B-(3-72/JH4) (서열 번호: 34), 및 HB12B-9m (서열 번호: 44) 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 정렬. 서열 잔기는 카밧에 따라 명명된다. 카밧에 따라 정의된 CDR 잔기는 박스로 나타낸다. HB12B VH의 버니어, 쇄간 및 표준 잔기는 흐린 회색으로 강조하여 나타낸다. 그래프팅된 항체 HB12B-(3-72/JH4) (서열 번호: 34) 가변 도메인에 대한 HB12B-9m (서열 번호: 44) (L20I, F27Y, T28A, R38I, V49I, F67A, R71A, L80M, 19 IY)의 아미노산 치환은 진한 회색으로 강조하여 나타낸다.
도 2. 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 DSC 프로파일.
도 3. 각종 pH에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 콜로이드성 안정성. 그래프는 350nm에서의 흡수도를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 4. 각종 pH에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 열 안정성. 그래프는 326nm에서 측정한 트립토판 형광성을 온도의 함수로서 나타낸다.
도 5. 각종 온도에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 열 탈안정화 비율. 그래프는 350 nm에서의 흡수성을 시간의 함수로서 나타낸다.
도 6. 각종 부형제를 포함하는 제형에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 열 탈안정화 비율. 그래프는 350 nm에서의 흡수성을 시간의 함수로서 나타낸다.
도 7. 각종 농도의 NaCl을 포함하는 제형에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 열 탈안정화 비율. 그래프는 350 nm에서의 흡수성을 시간의 함수로서 나타낸다.
도 8. 각종 농도의 트레할로스를 포함하는 제형에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 열 탈안정화 비율. 그래프는 350 nm에서의 흡수성을 시간의 함수로서 나타낸다.
도 9. NaCl 및 트레할로스의 각종 조합물을 포함하는 제형에서 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체의 열 탈안정화 비율. 그래프는 350 nm에서의 흡수성을 시간의 함수로서 나타낸다.
도 10. 40 ℃에서 각종 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 모노머 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 11. 40 ℃에서 각종 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 응집물 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 12. 40 ℃에서 각종 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 단편화 속도. 단편 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 13. 40 ℃에서 측정한 각종 항체 농도를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 모노머 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 14. 40 ℃에서 측정한 각종 항체 농도를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 이량체 형성 속도. 모노머 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 15. 40 ℃에서 측정한 각종 항체 농도를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 다량체 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 16. 40 ℃에서 측정한 각종 항체 농도를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 단편화 속도. 단편 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 17. 각종 pH에서 551 항체의 DSC 프로파일.
도 18. 각종 pH에서 551 항체의 DSC 프로파일.
도 19. 5℃에서 10 mg/ml 항체를 포함하는 각종 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 모노머 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 20. 5℃에서 10 mg/ml 항체를 포함하는 각종 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 다량체 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 21. 5℃에서 10 mg/ml 항체를 포함하는 각종 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 총 응집물 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 22. 각종 온도에서 10 mg/ml 항체를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 모노머 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 23. 각종 온도에서 10 mg/ml 항체를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 총 응집물 및 다량체 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 24. 각종 온도에서 10 mg/ml 항체를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 단편화 속도. 단편 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 25. pH 6.0에서 10mM 히스티딘, 75mM NaCl, 및 4% 트레할로스를 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 안성성 프로파일.
도 26. 4시간의 교반에 적용된 각종 농도의 폴리소르베이트 80(PS80)을 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형 내의 응집물 제형. 최종 모노머 농도(총 단백질의 %)를 나타낸다.
도 27. 4시간의 교반에 적용된 각종 농도의 폴리소르베이트 80(PS80)을 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형 내의 응집물 제형. 최종 총 응집물 농도(총 단백질의 %)를 나타낸다.
도 28. 주사기 내에서 24시간의 교반에 적용된 각종 농도의 폴리소르베이트 80(PS80)을 포함하는 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형 내의 응집물 형성. 최종 총 응집물 농도(총 단백질의 %)를 나타낸다.
도 29. 25℃ 및 40℃에서 폴리소르베이트 80(PS80)의 존재 및 부재하에 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 시간의 함수로서 응집물 농도(총 단백질의 %)를 나타낸다.
도 30. 25℃ 및 40℃에서 폴리소르베이트 80(PS80)의 존재 및 부재하에 551 아푸코실화된 인간화된 항-CD 19 항체 제형의 응집 속도. 총 다량체 농도(총 단백질의 %)를 시간의 함수로서 나타낸다.
도 31. AN BL6, H929 및 RPMI8226 다중 골수종 세포주의 CD138/CD19 발현 프로파일.
도 32. 시간에 따른 ANBL6 배양물 변화에서 CD138 또는 CD19를 발현하는 세포의 분획. 시간의 함수로서 CD 19 및 CD 138 발현 세포의 비를 나타낸다.
도 33. ANBL6 배양물로부터 분리된 CD 19-CD 138+ 세포를 제외하고 CD 19+CD 138- 세포는 연질 한천에서 콜로니를 형성할 수 있다.
도 34. 다중 골수종 세포 상의 항-CD 19 mAb의 ADCC 활성. 항-CD19-aFuc는 분류되지 않은 다중 골수종 세포 배양물로부터 CD19+ 세포를 특이적으로 고갈시킨다.
도 35. 551 아푸코실화된 항-CD19 항체는 SCID 마우스에서 골수종 이종이식체 성장을 억제한다. 시간의 함수로서의 종양 용적을 나타내낸다.
도 36. 단지 PVDF 여과 처리한 항-CD 19 샘플 바이알(vial)에 대한 입자 수 대 크기의 이중 로그 플롯.
도 37. PVDF 여과 및 이후의 PS80 첨가 처리한 항-CD 19 샘플 바이알에 대한 입자 수 대 크기의 이중 로그 플롯.
도 38. PVDF 여과 및 이후의 PS80 첨가, 및 다른 회(round)의 PVDF 여과 처리한 항-CD 19 샘플 바이알에 대한 입자 수 대 크기의 이중 로그 플롯.
6. 상세한 설명
본 발명은 인간 CD 19 항원에 특이적으로 결합하는 키메라, 인간 또는 인간화된 항체를 포함하는 멸균성, 안정된 수성 제형을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명은 항-CD 19 마우스 단클론 항체, HB12A 및 HB12B의 키메라 및 인간화된 버젼을 포함하는 제형을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 그 전문이 모든 목적을 위하여 본원에 통합된, 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허출원 제11/852.106호에 기술된 항-CD 19 항체를 포함하는 제형을 제공한다. 추가의 구체예에서, 본 발명은, 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC), 항원 의존성 세포 매개된 세포독성(ADCC),및 프로그램화된 세포 사멸(세포자멸사) 중의 하나 이상을 매개할 수 있고 증진된 효과기 기능을 갖는 본 발명의 항-CD 19 항체를 포함하는 제형을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은, 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단 내의 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 본 발명의 항-CD 19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호 104의 중쇄 가변 영역, 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 및, 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단 내의 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 항-CD 19 항체를 포함하는 안정한 액체 제형은 인간 피험체에게 비경구 투여하는 데 적합하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 안정한 액체 제형은 인간 피험체에게 피하 투여하는 데 적합하다.
6.1. 항체 제형
특정 구체예들에서, 본 발명은 인간 CD 19에 특이적으로 결합하고 증진된 효과기 기능(예: 항체 의존성 세포형 세포독성(ADCC), 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC), 및/또는 항체 의존성 식균작용)을 지니는 항체의 안정한 액체 제형을 포함하며, 여기서 제형은 제작, 조제, 운반 및 장기간 저장 동안에 생물학적 활성의 손실이 거의 없이 낮은 수준 내지 검출할 수 없는 수준의 항체 응집 및/또는 단편화를 나타낸다. 본 발명은 또한 인간 CD 19에 특이적으로 결합하는 항체의 안정한 액체 제형을 포함하고, 증진된 효과기 기능을 가지며 생체내 반감기가 증가되며, 여기서 상기 제형은 낮은 수준 내지 검출할 수 없는 수준의 항체 응집 및/또는 단편화를 나타내며, 제작, 조제, 운반 및 장기간 저장 동안의 항체의 매우 적은 손실 내지 무 손실의 생물학적 활성(예: 항체 의존성 세포형 세포독성(ADCC), 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC) 및/또는 항체 의존성 식균작용)을 나타낸다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 제형은 생체내 ADCC 활성이 증진된 항-인간CD 19 항체를 포함하고, 상기 제형은 낮은 수준 내지 검출할 수 없는 수준의 항체 응집 및/또는 단편화를 나타내고, 제작, 조제, 운반 및 장기간 저장 동안의 항체의 매우 낮은 손실 내지 무 손실의 생물학적 활성을 나타낸다.
일 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 수성 제형이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 수성 제형이며, 여기서 수성 담체는 증류수이다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 멸균성이다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 균질성이다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 등장성이다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 증진된 효과기 기능을 갖는 항-CD 19 항체를 포함하는 안정한 액체 제형을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명의 제형은 2007년 9월 7일자로 출원되고, 그 전문이 모든 목적을 위해 본원에 통합된 미국 특허출원 제11/852,106호에 기술된 항-CD 19 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 서열번호:104의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열번호:111의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-인간 CD19 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
본 발명은 관심 단일 항체 (그의 항체 단편 포함), 예를 들어, CD19 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체를 포함하는 안정한 액체 제형을 포함한다. 본 발명은 또한, 관심 2개 이상의 항체 (그의 항체 단편 포함), 예를 들어, CD19 폴리펩타이드(들)에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체를 포함하는 안정한 액체 제형을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 1 mg/ml, 적어도 약 2 mg/ml, 적어도 약 3 mg/ml, 적어도 약 4 mg/ml, 적어도 약 5 mg/ml, 적어도 약 6 mg/ml, 적어도 약 7 mg/ml, 적어도 약 8 mg/ml, 적어도 약 9 mg/ml, 적어도 약 10 mg/ml, 적어도 약 11 mg/ml, 적어도 약 12 mg/ml, 적어도 약 13 mg/ml, 적어도 약 14 mg/ml, 적어도 약 15 mg/ml, 적어도 약 16 mg/ml, 적어도 약 17 mg/ml, 적어도 약 18 mg/ml, 적어도 약 19 mg/ml, 적어도 약 20 mg/ml, 적어도 약 30 mg/ml, 적어도 약 40 mg/ml, 적어도 약 50 mg/ml, 적어도 약 60 mg/ml, 적어도 약 70 mg/ml, 적어도 약 80 mg/ml, 적어도 약 90 mg/ml, 적어도 약 100 mg/ml, 적어도 약 110 mg/ml, 적어도 약 120 mg/ml, 적어도 약 130 mg/ml, 적어도 약 140 mg/ml, 적어도 약 150 mg/ml, 적어도 약 160 mg/ml, 적어도 약 170 mg/ml, 적어도 약 180 mg/ml, 적어도 약 190 mg/ml, 적어도 약 200 mg/ml, 적어도 약 250 mg/ml, 또는 적어도 약 300 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 5 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 10 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 15 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 20 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 30 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1 mg/ml 내지 약 25 mg/ml, 약 1 mg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 5 mg/ml 내지 약 25 mg/ml, 약 5 mg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 7.5 mg/ml 내지 약 25 mg/ml, 또는 약 7.5 mg/ml 내지 약 30 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1 mg/ml 내지 약 25 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5 mg/ml 내지 약 25 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 약 1 mg/ml, 약 2 mg/ml, 약 3 mg/ml, 약 4 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 6 mg/ml, 약 7 mg/ml, 약 8 mg/ml, 약 9 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 40 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 60 mg/ml, 약 70 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 90 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 160 mg/ml, 약 170 mg/ml, 약 180 mg/ml, 약 190 mg/ml, 약 200 mg/ml, 약 250 mg/ml, 또는 약 300 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 15 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 50 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 1 mg/ml, 적어도 2 mg/ml, 적어도 3 mg/ml, 적어도 4 mg/ml, 적어도 5 mg/ml, 적어도 6 mg/ml, 적어도 7 mg/ml, 적어도 8 mg/ml, 적어도 9 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 11 mg/ml, 적어도 12 mg/ml, 적어도 13 mg/ml, 적어도 14 mg/ml, 적어도 15 mg/ml, 적어도 16 mg/ml, 적어도 17 mg/ml, 적어도 18 mg/ml, 적어도 19 mg/ml, 적어도 20 mg/ml, 적어도 30 mg/ml, 적어도 40 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 60 mg/ml, 적어도 70 mg/ml, 적어도 80 mg/ml, 적어도 90 mg/ml, 적어도 100 mg/ml, 적어도 110 mg/ml, 적어도 120 mg/ml, 적어도 130 mg/ml, 적어도 140 mg/ml, 적어도 150 mg/ml, 적어도 160 mg/ml, 적어도 170 mg/ml, 적어도 180 mg/ml, 적어도 190 mg/ml, 적어도 200 mg/ml, 적어도 250 mg/ml, 또는 적어도 300 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 5 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 10 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 15 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 20 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 30 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 1 mg/ml 내지 25 mg/ml, 1 mg/ml 내지 30 mg/ml, 5 mg/ml 내지 25 mg/ml, 5 mg/ml 내지 30 mg/ml, 7.5 mg/ml 내지 25 mg/ml, 또는 7.5 mg/ml 내지 30 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1 mg/ml 내지 25 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 5 mg/ml 내지 25 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 1 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 11 mg/ml, 12 mg/ml, 13 mg/ml, 14 mg/ml, 15 mg/ml, 16 mg/ml, 17 mg/ml, 18 mg/ml, 19 mg/ml, 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, 80 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml, 110 mg/ml, 120 mg/ml, 130 mg/ml, 140 mg/ml, 150 mg/ml, 160 mg/ml, 170 mg/ml, 180 mg/ml, 190 mg/ml, 200 mg/ml, 250 mg/ml, 또는 300 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 5 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 15 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 25 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 50 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 100 mg/ml의 본 발명의 항-CD19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
임의로, 본 발명의 제형은 일반적인 부형제 및/또는 첨가제, 예컨대 완충제, 당류, 염 및 표면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 본 발명의 제형은 일반적인 부형제 및/또는 첨가제, 예컨대, 비제한적인 가용화제, 희석제, 결합체, 안정제, 염, 친유성 용매, 아미노산, 킬레이트제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
어떤 구체예에서, 완충제는 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 당류 부형제는 트레할로오스, 수크로오스, 만니톨, 말토오스 및 라피노오스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 추가 다른 구체예에서, 표면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 80, 및 Pluronic F68로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 구체예에서, 염은 NaCl, KCl, MgCl2, 및 CaCl2로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
임의로, 본 발명의 제형은 다른 일반적인 보조 성분, 예컨대, 비제한적인 적합한 부형제, 폴리올, 가용화제, 희석제, 결합체, 안정제, 친유성 용매, 킬레이트제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 제형은 완충제 또는 pH 조절제를 포함하여 향상된 pH 제어를 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 약 3.0 내지 약 9.0, 약 4.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 8.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 또는 약 5.5 내지 약 6.5를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 약 5.5, 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 약 6.0, 약 6.1, 약 6.2, 약 6.3, 약 6.4, 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 또는 약 9.0를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다.
본 발명의 제형은 완충제 또는 pH 조절제를 포함하여 향상된 pH 제어를 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 3.0 내지 9.0, 4.0 내지 8.0, 5.0 내지 8.0, 5.0 내지 7.0, 5.0 내지 6.5, 5.5 내지 8.0, 5.5 내지 7.0, 또는 5.5 내지 6.5를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 또는 9.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 6.0을 갖는다.
제형의 pH는 일반적으로, 제형 (예를 들어, 비제한적으로, 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체의 등전점, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다)에 사용될 특정 항체 (그의 항체 단편 포함)의 등전점과 같아서는 안 된다. 약 4.0 내지 약 8.0의 범위일 수 있고, 또는 약 5.5 내지 약 6.5의 범위일 수 있다.
전형적으로, 완충제는 유기 산 또는 무기 산 또는 염기로부터 제조된 염이다. 대표적인 완충제는, 비제한적으로, 유기산 염, 예컨대 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 카본산, 타르타르산, 석신산, 아세트산, 또는 프탈산의 염; 트리스(Tris), 트로메타민 히드로클로라이드, 또는 포스페이트 완충제를 포함한다. 또한, 아미노산 성분은 또한 완충 능력으로 기능할 수 있다. 본 발명의 제형에서 완충제로서 이용될 수 있는 대표적인 아미노산 성분은, 비제한적으로, 글리신 및 히스티딘을 포함한다. 어떤 구체예에서, 완충제는 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 완충제는 히스티딘이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 완충제는 시트레이트이다. 완충제의 순도는 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 적어도 99.5%이어야 한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 히스티딘의 관점에서의 용어 "순도"는 본 기술분야에서 이해된 바와 같이, 예를 들어, 하기에 기재된 바와 같이 히스티딘의 화학 순도를 의미한다: The Merck Index, 13th ed., O'Neil et al. ed. (Merck & Co., 2001).
완충제는 전형적으로, 원하는 이온 세기 및 필요한 완충 능력에 따라 농도 약 1 mM 내지 약 200 mM 또는 이 범위 내의 임의 범위 또는 값으로 사용된다. 비경구 제형에 사용되는 종래 완충제의 통상적인 농도는 하기에서 발견될 수 있다: Pharmaceutical Dosage Form: Parenteral Medications, Volume 1, 2nd Edition, Chapter 5, p. 194, De Luca and Boylan, "Formulation of Small Volume Parenterals", 표 5: Commonly used additives in Parenteral Products. 하나의 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 약 1 mM, 또는 약 5 mM, 또는 약 10 mM, 또는 약 15 mM, 또는 약 20 mM, 또는 약 25 mM, 또는 약 30 mM, 또는 약 35 mM, 또는 약 40 mM, 또는 약 45 mM, 또는 약 50 mM, 또는 약 60 mM, 또는 약 70 mM, 또는 약 80 mM, 또는 약 90 mM, 또는 약 100 mM이다. 하나의 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 1 mM, 또는 5 mM, 또는 10 mM, 또는 15 mM, 또는 20 mM, 또는 25 mM, 또는 30 mM, 또는 35 mM, 또는 40 mM, 또는 45 mM, 또는 50 mM, 또는 60 mM, 또는 70 mM, 또는 80 mM, 또는 90 mM, 또는 100 mM이다. 특정 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 약 5 mM 내지 약 50 mM이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 5 mM 내지 20 mM이다.
완충제는 원하는 이온 세기 및 필요한 완충 능력에 따라 농도 1 mM 내지 200 mM 또는 이 범위 내의 임의 범위 또는 값에서 전형적으로 사용된다. 비경구 제형에 사용된 종래 완충제의 통상적인 농도는 하기에서 발견될 수 있다: Pharmaceutical Dosage Form: Parenteral Medications, Volume 1, 2nd Edition, Chapter 5, p. 194, De Luca and Boylan, "Formulation of Small Volume Parenterals", 표 5: Commonly used additives in Parenteral Products. 하나의 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 1 mM, 또는 5 mM, 또는 10 mM, 또는 15 mM, 또는 20 mM, 또는 25 mM, 또는 30 mM, 또는 35 mM, 또는 40 mM, 또는 45 mM, 또는 50 mM, 또는 60 mM, 또는 70 mM, 또는 80 mM, 또는 90 mM, 또는 100 mM이다. 하나의 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 1 mM, 또는 5 mM, 또는 10 mM, 또는 15 mM, 또는 20 mM, 또는 25 mM, 또는 30 mM, 또는 35 mM, 또는 40 mM, 또는 45 mM, 또는 50 mM, 또는 60 mM, 또는 70 mM, 또는 80 mM, 또는 90 mM, 또는 100 mM이다. 특정 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 5 mM 내지 50 mM. 또 하나의 특정 구체예에서, 완충제는, 그 농도가 5 mM 내지 20 mM이다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 완충제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 상기 완충제는 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘을 완충제로서 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 1 mM, 적어도 약 5 mM, 적어도 약 10 mM, 적어도 약 20 mM, 적어도 약 30 mM, 적어도 약 40 mM, 적어도 약 50 mM, 적어도 약 75 mM, 적어도 약 100 mM, 적어도 약 150 mM, 또는 적어도 약 200 mM 히스티딘을 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1 mM 내지 약 200 mM, 약 1 mM 내지 약 150 mM, 약 1 mM 내지 약 100 mM, 약 1 mM 내지 약 75 mM, 약 10 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 150 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 약 10 mM 내지 약 75 mM, 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 30 mM, 약 20 mM 내지 약 75 mM, 약 20 mM 내지 약 50 mM, 약 20 mM 내지 약 40 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 30 mM 히스티딘을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 60 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 150 mM, 또는 약 200 mM 히스티딘을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mM 히스티딘을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 1 mM, 적어도 5 mM, 적어도 10 mM, 적어도 20 mM, 적어도 30 mM, 적어도 40 mM, 적어도 50 mM, 적어도 75 mM, 적어도 100 mM, 적어도 150 mM, 또는 적어도 200 mM 히스티딘을 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 1 mM 내지 200 mM, 1 mM 내지 150 mM, 1 mM 내지 100 mM, 1 mM 내지 75 mM, 10 mM 내지 200 mM, 10 mM 내지 150 mM, 10 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 75 mM, 10 mM 내지 50 mM, 10 mM 내지 40 mM, 10 mM 내지 30 mM, 20 mM 내지 75 mM, 20 mM 내지 50 mM, 20 mM 내지 40 mM, 또는 20 mM 내지 30 mM 히스티딘을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 1 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM, 100 mM, 150 mM, 또는 200 mM 히스티딘을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mM 히스티딘을 포함한다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 카보히드레이트 부형제를 포함한다. 카보히드레이트 부형제는, 예를 들어, 점도 증강제, 안정제, 벌킹제(bulking agent), 가용화제 등으로서 작용할 수 있다. 카보히드레이트 부형제는 일반적으로 중량 또는 용적에 의해 약 1% 내지 약 99%로 존재한다. 하나의 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 20%로 존재한다. 또 하나의 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 15%로 존재한다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 5%, 또는 약 1% 내지 약 15%, 또는 약 2% 내지 약 10%, 또는 약 2% 내지 약 8%, 또는 약 2% 내지 약 6%로 존재한다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 5%, 또는 1% 내지 15%, 또는 2% 내지 10%, 또는 2% 내지 8%, 또는 2% 내지 6%로 존재한다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 10%로 존재한다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 1% 내지 약 8%로 존재한다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 2% 내지 약 6%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 1%, 또는 약 1.5%, 또는 약 2%, 또는 약 2.5%, 또는 약 3%, 또는 약 4%, 또는 약 5%, 또는 약 10%, 또는 약 15%, 또는 약 20%로 존재한다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 카보히드레이트 부형제를 포함한다. 카보히드레이트 부형제는, 예를 들어, 점도 증강제, 안정제, 벌킹제(bulking agent), 가용화제 등로서 작용할 수 있다. 카보히드레이트 부형제는 일반적으로 중량 또는 용적에 의해 1% 내지 99%로 존재한다. 하나의 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 20%로 존재한다. 또 하나의 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 15%로 존재한다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 5%, 또는 1% 내지 15%, 또는 2% 내지 10%, 또는 2% 내지 8%, 또는 2% 내지 6%로 존재한다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 5%, 또는 1% 내지 15%, 또는 2% 내지 10%, 또는 2% 내지 8%, 또는 2% 내지 6%로 존재한다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 10%로 존재한다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 1% 내지 8%로 존재한다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 2% 내지 6%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 1%, 또는 1.5%, 또는 2%, 또는 2.5%, 또는 3%, 또는 4%, 또는 5%, 또는 10%, 또는 15%, 또는 20%로 존재한다.
본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 카보히드레이트 부형제는 예를 들어 하기를 포함한다: 단당류, 예컨대 프룩토오스, 말토오스, 갈락토오스, 글루코스, D-만노오스, 소르보오스 등; 2당류, 예컨대 락토오스, 수크로오스, 트레할로오스, 셀로비오스 등; 다당류, 예컨대 라피노오스, 멜레지토우즈, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등; 및 알디톨, 예컨대 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨 소르비톨 (글루시톨) 등. 하나의 구체예에서, 본 발명에 사용하기 위한 카보히드레이트 부형제는 수크로오스, 트레할로오스, 락토오스, 만니톨, 및 라피노오스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 트레할로오스이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 만니톨이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 수크로오스이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 라피노오스이다. 카보히드레이트 부형제의 순도는 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 적어도 99.5%이어야 한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 8%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40% 트레할로오스를 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1% 내지 약 30%, 약 1% 내지 약 20%, 약 1% 내지 약 10%, 약 2% 내지 약 30%, 약 2% 내지 약 20%, 약 2% 내지 약 10%, 약 2% 내지 약 8%, 약 2% 내지 약 6%, 또는 약 3% 내지 약 6% 트레할로오스를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 8%, 약 20%, 약 30%, 또는 약 40% 트레할로오스를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 4% 트레할로오스를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 8%, 적어도 20%, 적어도 30%, 또는 적어도 40% 트레할로오스를 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 1% 내지 30%, 1% 내지 20%, 1% 내지 10%, 2% 내지 30%, 2% 내지 20%, 2% 내지 10%, 2% 내지 8%, 2% 내지 6%, 또는 3% 내지 6% 트레할로오스를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 8%, 20%, 30%, 또는 40% 트레할로오스를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 4% 트레할로오스를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 부형제를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 당, 염, 표면활성제, 아미노산, 폴리올, 킬레이트제, 에먼젼화제 및 보존제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 부형제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 염을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 NaCl, KCl, CaCl2, 및 MgCl2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 염을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 NaCl을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 10 mM, 적어도 약 25 mM, 적어도 약 50 mM, 적어도 약 75 mM, 적어도 약 80 mM, 적어도 약 100 mM, 적어도 약 125 mM, 적어도 약 150 mM, 적어도 약 175 mM. 적어도 약 200 mM, 또는 적어도 약 300 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 약 10 mM 내지 약 300 mM, 약 10 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 175 mM, 약 10 mM 내지 약 150 mM, 약 25 mM 내지 약 300 mM, 약 25 mM 내지 약 200 mM, 약 25 mM 내지 약 175 mM, 약 25 mM 내지 약 150 mM, 약 50 mM 내지 약 300 mM, 약 50 mM 내지 약 200 mM, 약 50 mM 내지 약 175 mM, 약 50 mM 내지 약 150 mM, 약 60 mM 내지 약 300 mM, 약 60 mM 내지 약 200 mM, 약 60 mM 내지 약 175 mM, 약 60 mM 내지 약 150 mM, 약 100 mM 내지 약 300 mM, 약 100 mM 내지 약 200 mM, 약 100 mM 내지 약 175 mM, 또는 약 100 mM 내지 약 150 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mM, 약 25 mM, 약 50 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 100 mM, 약 125 mM, 약 150 mM, 약 175 mM, 약 200 mM, 또는 약 300 mM 염화나트륨을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 75 mM 염화나트륨을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 10 mM, 적어도 25 mM, 적어도 50 mM, 적어도 75 mM, 적어도 80 mM, 적어도 100 mM, 적어도 125 mM, 적어도 150 mM, 적어도 175 mM. 적어도 200 mM, 또는 적어도 300 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 10 mM 내지 300 mM, 10 mM 내지 200 mM, 10 mM 내지 175 mM, 10 mM 내지 150 mM, 25 mM 내지 300 mM, 25 mM 내지 200 mM, 25 mM 내지 175 mM, 25 mM 내지 150 mM, 50 mM 내지 300 mM, 50 mM 내지 200 mM, 50 mM 내지 175 mM, 50 mM 내지 150 mM, 60 mM 내지 300 mM, 60 mM 내지 200 mM, 60 mM 내지 175 mM, 60 mM 내지 150 mM, 100 mM 내지 300 mM, 100 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 175 mM, 또는 100 mM 내지 150 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mM. 25 mM, 50 mM, 75 mM, 80 mM, 100 mM, 125 mM, 150 mM, 175 mM, 200 mM, 또는 300 mM 염화나트륨을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 75 mM 염화나트륨을 포함한다.
본 발명의 제형은 표면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "표면활성제"란 양친매성 구조를 갖는 유기 물질을 의미하고; 즉, 가용성 경향을 반대하는 그룹, 전형적으로 오일 용해성 탄화수소 사슬 및 수용성 이온 그룹으로 구성된다. 표면활성제는, 표면활성 부분의 전하에 따라 음이온성, 양이온성, 및 비이온성 표면활성제로 분류될 수 있다. 표면활성제는 생물 소재의 다양한 약제학적 조성물 및 제제를 위한 습윤제, 에멀젼화제, 가용화제, 및 분산제로서 종종 사용된다. 폴리소르베이트 (예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 80); 폴록사머 (예를 들어, 폴록사머 188); 트리톤(Triton); 나트륨 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아라미도프로필-베타인 (예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아라미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일-, 또는 디나트륨 메틸 올레일-타우트레이트; 및 MONAQUATM 시리즈 (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.), 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌 및 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, Pluronics, PF68 등)와 같은 약제학적으로 허용가능한 표면활성제는, 본 발명의 제형에 임의 첨가되어 응집을 감소시킬 수 있다. 표면활성제는, 펌프 또는 플라스틱 용기가 사용되어 제형에 투여된다면, 특히 유용하다. 약제학적으로 허용가능한 표면활성제의 존재는, 단백질이 응집하는 경향을 완화시킨다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 이는, 그 농도가 약 0.001% 내지 약 1%, 또는 약 0.001% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.1%의 범위이다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 이는, 그 농도가 0.001%, 또는 0.002%, 또는 0.003%, 또는 0.004%, 또는 0.005%, 또는 0.006%, 또는 0.007%, 또는 0.008%, 또는 0.009%, 또는 0.01%, 또는 0.015%, 또는 0.02%이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트-80이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 이는, 그 농도가 0.001% 내지 1%, 또는 0.001% 내지 0.1%, 또는 0.01% 내지 0.1%의 범위이다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 이는, 그 농도가 0.001%, 또는 0.002%, 또는 0.003%, 또는 0.004%, 또는 0.005%, 또는 0.006%, 또는 0.007%, 또는 0.008%, 또는 0.009%, 또는 0.01%, 또는 0.015%, 또는 0.02%이다. 또 하나의 특정 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트-80을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 표면활성제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 또는 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트 80을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 0.001%, 적어도 약 0.002%, 적어도 약 0.005%, 적어도 약 0.01%, 적어도 약 0.02%, 적어도 약 0.05%, 적어도 약 0.1%, 적어도 약 0.2%, 또는 적어도 약 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.001% 내지 약 0.5%, 약 0.001% 내지 약 0.2%, 약 0.001% 내지 약 0.1%, 약 0.001% 내지 약 0.05%, 약 0.002% 내지 약 0.5%, 약 0.002% 내지 약 0.2%, 약 0.002% 내지 약 0.1 %, 약 0.002% 내지 약 0.05%, 약 0.005% 내지 약 0.5%, 약 0.005% 내지 약 0.2%, 약 0.005% 내지 약 0.1%, 약 0.005% 내지 약 0.05%, 약 0.01% 내지 약 0.5%, 약 0.01% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.001%, 약 0.002%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.05%, 약 0.1%, 약 0.2%, 및 약 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.04% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 0.001%, 적어도 0.002%, 적어도 0.005%, 적어도 0.01%, 적어도 0.02%, 적어도 0.05%, 적어도 0.1%, 적어도 0.2%, 또는 적어도 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.001% 내지 0.5%, 0.001% 내지 0.2%, 0.001% 내지 0.1%, 0.001% 내지 0.05%, 0.002% 내지 0.5%, 0.002% 내지 0.2%, 0.002% 내지 0.1%, 0.002% 내지 0.05%, 0.005% 내지 0.5%, 0.005% 내지 0.2%, 0.005% 내지 0.1%, 0.005% 내지 0.05%, 0.01% 내지 0.5%, 0.01% 내지 0.2%, 0.01% 내지 0.1%, 또는 0.01% 내지 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.001%, 0.002%, 0.005%, 0.01%, 0.02%, 0.05%, 0.1%, 0.2%, 및 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.04% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다.
선택적으로, 본 발명의 제형은 희석제, 결합제, 안정화제, 친지성 용매, 보존제, 보조제 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는 기타 공통의 부형제 및/또는 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 약제학적으로 조건에 맞는 부형제 및/또는 첨가제가 본 발명의 제형 내에 포함될 수 있다. 공통으로 사용된 부형제/첨가제, 예를 들면, 약제학적으로 조건에 맞는 킬레이트화제(예를 들면, 이에 국한되지는 않지만, EDTA, DTPA 또는 EGTA)를 본 발명의 제형에 선택적으로 가하여 응집을 감소시킬 수 있다. 이들 첨가제는 펌프 또는 플라스틱 펌프를 사용하여 제형을 투여하는 경우 특히 유용하다.
페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 플로로크레졸, 벤질 알콜, 페닐머큐릭 니트라이트, 페녹시에탄올, 포름알데히드, 클로로부탄올, 염화마그네슘(예를 들면, 육수화물이지만 이에 국한되지 않음), 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코니윰 클로라이드, 벤제티오늄 클로라이드, 나트륨 데하이드로아세테이트 및 티메로잘, 또는 이들의 혼합물과 같은 보존제를 약 0.001% 내지 약 5%, 또는 본원의 임의의 범위 또는 값과 같은 임의의 적합한 농도로 본 발명의 제형에 가할 수 있다. 본 발명의 제형 중에 사용된 보존제의 농도는 항-미생물 효과를 수득하기에 충분한 농도이다. 이러한 농도는 선택된 보존제에 좌우되며 당해 분야의 숙련가들에 의해 용이하게 측정된다.
본 발명의 제형내에 이용될 수 있는 기타 고려된 부형제/첨가제는, 예를 들면, 풍미제, 항미생물제, 감미제, 항산화제, 대전방지제, 지질, 예를 들면, 인지질 또는 지방산, 스테로이드, 예를 들면, 콜레스테롤, 단백질 부형제, 예를 들면, 혈청 알부민(인간 혈청 알부민(HSA), 재조합체 인간 알부민((rHA)), 젤라틴, 카제인, 염-형성 역이온, 예를 들면, 나트륨 등을 포함한다. 본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 이들 및 추가의 공지된 약제학적 부형제 및/또는 첨가제는, 예를 들면, 문헌[참조: "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, (2005), and in the "Physician's Desk Reference", 60th ed., Medical Economics, Montvale, NJ. (2005)]에 나타낸 바와 같이, 당해 기술분야에 공지되어 있다. 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 바와 같은 Fc 변이체 단백질의 투여, 용해도 및/또는 안정성의 방식에 적합한 약제학적으로 조건에 맞는 담체는 통상적으로 선택될 수 있다.
당해 분야의 숙련가들은, 본 발명의 제형이 인간 혈액과 등장성일 수 있으며, 즉 본 발명의 제형이 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는다는 것을 이해할 것이다. 이러한 등장성 제형은 일반적으로 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm의 삽투압을 가질 것이다. 등장성은, 예를 들면, 증기압 또는 빙-동결 형 삼투압계를 사용하여 측정할 수 있다. 제형의 강직성은 강직성 조절제를 사용하여 조절한다. "강직성 조절제"는 제형의 등장성을 제공하기 위해 제형에 가할 수 있는 약제학적으로 조건에 맞는 불활성 물질이다. 본 발명에 적합한 강직성 조절제는 다당류, 염 및 아미노산을 포함하지만 이에 국한되지 않는다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 삼투압 약 100 mOSm 내지 약 1200 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 1000 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 800 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 600 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 500 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 400 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm을 갖는다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 삼투압 100 mOSm 내지 1200 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 1000 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 800 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 600 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 500 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 400 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 350 mOSm을 갖는다.
본 발명의 제형의 다양한 성분의 임의 하나 또는 임의 조합의 농도는 조정되어 최종 제형의 원하는 탄력성을 달성한다. 예를 들어, 카보히드레이트 부형제 대 항체의 비는 본 기술분야에 공지된 방법에 따라 조정될 수 있다 (예를 들어, U.S. 특허 No. 6,685,940). 어떤 구체예에서, 카보히드레이트 부형제 대 항체의 몰비는 약 100 몰 내지 약 1000 몰의 카보히드레이트 부형제 대 약 1몰의 항체, 또는 약 200 몰 내지 약 6000 몰의 카보히드레이트 부형제 대 약 1몰의 항체, 또는 약 100 몰 내지 약 510 몰의 카보히드레이트 부형제 대 약 1몰의 항체, 또는 약 100 몰 내지 약 600 몰의 카보히드레이트 부형제 대 약 1몰의 항체일 수 있다.
본 발명의 제형의 다양한 성분의 임의 하나 또는 임의 조합의 농도는 조절되어 최종 제형의 원하는 탄력성을 달성한다. 예를 들어, 카보히드레이트 부형제 대 항체의 비는 본 기술분야에 공지된 방법에 따라 조절될 수 있다 (예를 들어, U.S. 특허 No. 6,685,940). 어떤 구체예에서, 카보히드레이트 부형제 대 항체의 몰비는 카보히드레이트 부형제 대 1몰의 항체의 100 몰 내지 1000 몰의 카보히드레이트 부형제 대 1몰의 항체, 또는 200 몰 내지 6000 몰의 카보히드레이트 부형제 대 1몰의 항체, 또는 100 몰 내지 510 몰의 카보히드레이트 부형제 대 1몰의 항체, 또는 100 몰 내지 600 몰일 수 있다.
최종 제형의 원하는 탄력성은 또한, 제형의 염 농도를 조절하여 달성될 수 있다. 약제학적으로 허용가능하고 탄력성 조절제로서 본 발명에 적합한 염은, 비제한적으로, 염화나트륨, 나트륨 석시네이트, 나트륨 설페이트, 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 마그네슘 설페이트, 및 칼슘 클로라이드를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 NaCl, MgCl2, 및/또는 CaCl2을 포함한다. 하나의 구체예에서, NaCl의 농도는 약 75 mM 내지 약 150 mM이다. 또 하나의 구체예에서, MgCl2의 농도는 약 1 mM 내지 약 100 mM이다. 약제학적으로 허용가능하고 탄력성 조절제로서 본 발명에 적합한 아미노산은, 비제한적으로, 프롤린, 알라닌, L-아르기닌, 아스파라긴, L-아스파르트산, 글리신, 세린, 리신, 및 히스티딘을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘, 염화나트륨, 트레할로오스, 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘, 염화나트륨, 및 트레할로오스를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘, 염화나트륨, 및 트레할로오스를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 300 mM 염화나트륨, 및 약 0.3% 내지 약 10% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 약 5.0 내지 약 7.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5 mM 내지 약 50 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨, 및 약 1% 내지 약 8% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘, 염화나트륨, 트레할로오스 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 300 mM 염화나트륨, 약 0.3% 내지 약 10% 트레할로오스, 및 약 0.005% 내지 약 0.1% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 약 5.0 내지 약 7.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5 mM 내지 약 50 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1% 내지 약 8% 트레할로오스, 및 약 0.01% 내지 약 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘, 염화나트륨, 및 트레할로오스를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 5 mM 내지 100 mM 히스티딘, 10 mM 내지 300 mM 염화나트륨, 및 0.3% 내지 10% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 5.0 내지 7.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 5 mM 내지 50 mM 히스티딘, 50 mM 내지 200 mM 염화나트륨, 및 1% 내지 8% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 5.5 내지 6.5를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 히스티딘, 염화나트륨, 트레할로오스 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 5 mM 내지 100 mM 히스티딘, 10 mM 내지 300 mM 염화나트륨, 0.3% 내지 10% 트레할로오스, 및 0.005% 내지 0.1% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 5.0 내지 7.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 5 mM 내지 50 mM 히스티딘, 50 mM 내지 200 mM 염화나트륨, 1% 내지 8% 트레할로오스, 및 0.01% 내지 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 5.5 내지 6.5를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml 항-CD19 항체, 약 20 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 100 mg/ml 항-CD19 항체, 약 20 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 본 발명의 100 mg/ml 항-CD19 항체, 약 20 mM 히스티딘; 약 75 mM 염화나트륨; 약 4% 트레할로오스; 및 약 0.01%, 약 0.02% 약 0.04% 약 0.08% 또는 약 0.1% 폴리소르베이트 80를 포함하고; 약 6.0의 pH를 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 60 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 10 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 50 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 60 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 10 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 50 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 100 mg/ml 이하의 항-CD19 항체, 약 1OmM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 1 mg/ml 내지 60 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 50 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 1 mg/ml 내지 60 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 50 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 60 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 10 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 50 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 및 약 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 60 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 10 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 약 50 mg/ml 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 약 75 mM 염화나트륨, 약 4% 트레할로오스 및 약 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 1 mg/ml 내지 60 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 50 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10, 25, 50, 또는 100 mg/mL 60 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 25 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 50 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 100 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로오스로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 1 mg/ml 내지 60 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 50 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10, 25, 50, 또는 100 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 10 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 25 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 50 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 100 mg/ml 항-CD19 항체, 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% 트레할로오스 및 0.02% 폴리소르베이트 80으로 이루어지고, 여기서, 상기 제형은 pH 6.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은, 내부독소 및/또는 관련된 발열원성 물질이 실질적으로 없는 발열원 비함유 제형이다. 내부독소는, 미생물이 파괴되거나 사멸하는 경우에만 방출되고 미생물 내부에서 국한되는 독소를 포함한다. 발열원성 물질은 또한 세균 및 기타 미생물의 외부 막으로부터의 열-유도성, 열안정성 물질(당단백질)을 포함한다. 이들 물질 둘 다는 인간에게 투여되는 경우 열, 고혈압 및 쇼크를 유발할 수 있다. 잠재적인 위험한 영향으로 인하여, 소량의 내부독소 조차도 정맥내 투여된 약제학적 약물 용액으로부터 제거되어야 한다. 식품의약품 안전청(("FDA")은 정맥내 약물 적용을 위한 단일의 1시간 간격에서 5 내부독소 단위(EU)/용량/체중 kg의 상한선을 설정한다(참조: The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)). 치료학적 단백질을 체중 kg당 수백 또는 수천 밀리그램의 양으로 투여하는 경우, 항체를 사용하는 경우일 수 있는 바와 같이, 단지 소량의 유해한 및 위험한 내부독소도 제거하여야 한다. 어떤 특정 구체예들에서, 조성물 중의 내부독소 및 발열원 수준은 10 EU/mg 미만, 또는 5 EU/mg 미만, 또는 1 EU/mg 미만, 또는 0.1 EU/mg 미만, 또는 0.01 EU/mg 미만, 또는 0.001 EU/mg 미만이다.
생체내 투여용으로 사용되는 경우, 본 발명의 제형은 멸균되어야 한다. 본 발명의 제형은 멸균 여과, 방사선 등을 포함하는 각종 멸균 방법으로 멸균시킬 수 있다. 일 구체예에서, 항체 제형은 예비 멸균된 0.22-마이크론 필터를 사용하여 필터-멸균한다. 주사용 멸균 조성물은 문헌[참조: "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, (2005)]에 기술된 바와 같은 통상적인 약제학적 실시에 따라 조제할 수 있다. 본원에 기술된 바와 같은 항체를 포함하는 제형은 보통 동결건조된 형태 또는 용액 중에 저장될 것이다. 항체를 포함하는 멸균 조성물은 멸균 접근 포트, 예를 들면, 피하주사용 바늘을 사용하여 천공할 수 있는 스토퍼와 같은, 제형의 복원을 허용하는 어댑터를 갖는 정맥 용액 백 또는 바이알(vial)을 갖는 용기 내로 위치시킨다. 일 구체예에서, 본 발명의 조성물은 사전-충전된 주사기로서 제공된다. 일 구체예에서, 주사기는 고 투명성, 낮은 수증기 및 산소 침투성을 가지며, 텅스텐 잔사를 갖지 않는다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물은 사전-충전된 텅스텐-유리 주사기, 예를 들면, "울트라-100" 주사기로 제공된다. 또 다른 구체예에서, 주사기는 ClearjecTM(Geresheimer, AG, Germany) 또는 InJentleTM(SCHOTT Pharmaceutical Packaging, Germany) 주사기이다.
6.2. 제형의 안정성
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 안정시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 응집을 방지한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 단편화를 방지한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시, 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시, 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 -10℃, 약 -15℃, 약 -25℃, 약 -30℃, 약 -35℃, 약 -35℃, 약 -45℃, 약 -50℃, 약 - 55℃, 약 -60℃, 약 -65℃, 약 -70℃ 약 -75℃, 약 -80℃에서 보관시, 안정하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 이들 온도에서 1회용 주사기 내에 보관시, 안정하다.
본 발명은 본 발명의 항-CD19 항체를 포함하는 안정한 액체 제형을 제공한다. 상기 항체의 안정성은, 참조 항체를 포함하는 참조 제형과 비교하여, HPSEC, 역상 크로마토그래피, 정적 광산란 (SLS), 푸리에 변환 적외선 분광법 (FTIR), 원편광 이색성 (CD), 우레아 풀림 (urea unfolding) 기술, 고유 프립토판 형광, 시차주사열량계, 및/또는 ANS 결합 기술로 측정시, 응집, 분해 또는 단편화에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 참조 제형은 75 mM NaCl 및 4% 트레할로오스를 함유하는 10 mM 히스티딘 (pH 6.0) 중 10 mg/ml의 참조 항체 항체 (그의 항체 단편 포함) (예를 들어, 비제한적으로, 16C4 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다)로 이루어진 -70℃에서 냉동된 참조 표준일 수 있고, 여기서, 참조 제형은 HPSEC에 의해 단일 모노머 피크 (예를 들어, > 95% 면적)를 규칙적으로 제공한다. 어떤 구체예에서, 참조 제형은, 그 안정성이 시험되는 제형과 동일하고; 참조 제형은 최초 조건에서 참조 제형을 보전하기 위한 안성성 시험 동안에 -70℃에서 냉동 보관될 수 있다. 예를 들어, 40℃에서 보관된 제형 중 CD19 항원 결합 활성의 임의 손실을 평가하기 위한 참조 표준은 30일 동안 -70℃에서 보관된 동일한 제형일 수 있다. 항체 (그의 항체 단편 포함)을 포함하는 제형의 전체 안정성은 또한, 예를 들어, 단리된 항원 분자를 사용하는 ELISA 및 방사선면역 검정을 포함하는 다양한 면역학적 검정에 의해 평가될 수있다. 더욱이, 항체를 포함하는 제형의 안정성은 또한, 항체의 기능적 특정을 측정하기 위해 설계된 다양한 검정, 예를 들어, 항원 결합 친화도, 실험실내 ADCC 활성, 생체내 고갈 활성 실험실내 CDC 활성을 측정하기 위해 설계된 검정을 사용하여 평가될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 참조 항체의 CD19 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%인 CD19 결합 활성을 갖는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "많아야" 및 "미만"은 동일한 의미를 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 % 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시, HPSEC로 측정시, 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 또는 10% 미만은 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시, RP-HPLC 또는 SEC로 측정시, 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시, 외관 검사로 측정시, 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호:104의 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD19 항체를 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 보관시, 예를 들어, 장기간 (예를 들어, 비제한적으로 1주, 1개월, 6개월, 1년, 2년, 3년 또는 5년) 동안, 실온 또는 4℃에서 또는 기간 (예컨대, 비제한적으로 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 3개월, 또는 6개월) 동안, 고온, 예컨대 38℃-42℃ 향상된 응집 프로파일을 유지한다. 어떤 구체예에서, 제형은 10% 이하, 또는 20% 이하, 또는 30% 이하, 또는 40% 이하, 또는 50% 이하, 또는 60% 이하, 또는 70% 이하, 또는 80% 이하, 또는 90% 이하, 또는 100% 이하의 상대습도를 비제한적으로 포함하는 다양한 습도 조건에서 밝은 곳에서 노출 또는 어두운 곳에서 보관시, 향상된 응집 프로파일을 유지한다. 용어 "실온 조건"이란, 일반적으로, 밝은 곳에 노출시 10% 내지 60%의 상대습도에서 약 20℃의 온도를 의미하는 것으로 본 기술분야에서 이해될 것이다. 유사하게, 약 10% 미만의 상대습도에서의 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도는 집합적으로, "4℃" 또는 "5℃"를 의미하고, 약 60%의 상대습도에서의 약 23℃ 내지 약 27℃의 온도는 집합적으로 "25℃"를 의미하고, 약 75%의 상대습도에서의 약 38℃ 내지 약 42℃의 온도는 집합적으로 "40℃"를 의미한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기 내에 보관된다.
특정 구체예들에서, 4℃에서 1개월 이상 동안 저장한 후에, 본 발명의 제형은 입자 다중측정기로 측정하여, 약 3.4 E +5 미만의 입자/ml의 직경 2-4㎛, 약 4.0 E +4 미만의 입자/ml의 직경 4-10㎛, 약 4.2 미만의 E +3 입자/ml의 직경 10-20㎛, 약 5.0 미만의 E +2 입자/ml의 직경 20-30㎛, 약 7.5 미만의 E +1 입자/ml의 직경 30-40㎛, 및 약 9.4 입자/ml의 직경 40-60㎛의 입자 프로파일을 포함(또는 응집물 분획으로 이루어짐)한다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 제형은 40㎛ 초과 또는 30㎛ 초과의 검출가능한 입자를 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 사전-충전된 주사기 내에 저장한다.
특정 구체예들에서, 표면활성제를 제형에 가하여 항-CD 19 항체를 포함하는 조성물의 저장 안정성을 증진시킬 수 있다. 이러한 표면활성제를 함유하는 본 발명의 제형은 다양한 저장 조건 하에 있는 동안 장기간에 걸쳐서도 증진된 저장 안정성을 갖는 것으로 확인되었다. 이러한 증진된 안정성은 항-CD 19 항체의 순도를 보유하면서도 저장된 제형 내의 입자 제형의 억제를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 제형은 표면활성제, 폴리소르베이트 80을 함유한다. 또 다른 구체예에서, 폴리소르베이트 80을 조성물을 저장 안정화하기에 충분한 양으로, 예를 들면, 용적당 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.04%, 약 0.08% 또는 약 0.1% 폴리소르베이트 80 중량의 양으로 항-CD 19 항체 제형에 가한다. 본원에서 "저장 안정화하다"는 본 발명의 제형 중의 오염물질 또는 입자의 생산을 시간에 걸쳐서 및 저장 조건하에 약제학적으로 조건에 맞는 수준 내로 억제하면서 조성물의 순도를 유지시키는 것을 의미한다.
응집도, 및/또는 단백질 제형(예: 본 발명의 항체 제형) 내에 존재하는 응집물의 유형 및/또는 크기를 측정하기에 유용한 수많은 방법이 당해 분야에 공지되어 있으며, 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC), 정적 광 산란(SLS), 퓨리에 변환 적외선 분광법(FTIR), 원형 이색성(CD), 우레아-유도된 단백질 언폴딩 기술, 고유한 트립토판 형광성, 시차주사열량계, 및 1-아닐리노-8-나프탈렌설폰산(ANS) 단백질 결합 기술을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 예를 들면, 크기 배제 크로마토그래피(SEC)는, 적합한 수지를 사용하여 팩킹된 컬럼 위로 분자를 통과시킴으로써, 이의 크기를 기준으로 하여 분자를 분리시킬 수 있으며, 큰 분자(예: 응집물)는 작은 분자(예: 모노머) 전에 용리될 것이다. 분자는 일반적으로 280 nm에서 UV 흡수성에 의해 검출되며 추가 특징을 나타내기 위해 수집할 수 있다. 고압 액체 크로마토그래피적 컬럼은 종종 SEC 분석(HP-SEC)을 위해 이용된다. 특정 SEC 방법은 하기한 "실시예" 단락에 상세히 나타낸다. 대안적으로, 분석적 초원심분리(AUC)를 이용할 수 있다. AUC는 액체 샘플에서 거대분자의 침전 계수(Svedberg, S로 기록됨)을 결정하는 직교 기술이다. SEC와 마찬가지로, AUC는 모노머로부터 항체 단편/응집물을 분리하고 검출할 수 있으며 분자 질량에 대한 정보를 추가로 제공할 수 있다. 제형 중의 단백질 응집은 또한 코울터 계수기(coulter counter)를 사용하는 입자 계수기 분석, 또는 탁도계를 사용하는 탁도 측정에 의해 특징을 나타낼 수 있다. 탁도는, 용액 중의 입자가 광을 산란시키고, 이에 따라 단백질 응집의 일반적인 지표로서 사용될 수 있는 양의 척도이다. 또한, 비-환원성 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE) 또는 모세관 겔 전기영동(CGE)을 사용하여 본 발명의 제형 중의 항체 또는 이의 단편의 응집 및/또는 단편화 상태의 특징을 나타낼 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 비경구 투여용이다. 일 구체예에서, 본 발명의 제형은 주사가능한 제형이다. 일 구체예에서, 본 발명의 제형은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여용이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 항-CD 항체를 포함하며, 여기서 이 제형은 피하 주사용이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 사전-충전된 주사기 속에 저장된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호 104의 중쇄 가변 영역, 서열번호 110의 경쇄 가변영역 및, 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단 내 아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 정맥내 투여용이며, 여기서 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml의 항-CD 19 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호 104의 중쇄 가변영역, 서열번호 111의 경쇄 가변영역, 및 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단내 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 피하 투여용이며, 여기서 제형은 본 발명의 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 항-CD 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 사전-충전된 주사기 내에 제공된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호 104의 중쇄 가변영역, 서열번호 111의 경쇄 가변영역, 및 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단내 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 에어로졸 투여용이다.
본 발명은 또한 적합한 용기 속에 항-CD 19 항체 제형을 포함하는, 인간에게 비경구 투여하기에 적합한 약제학적 단위 투여형을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 용량은 정맥내, 피하 또는 근육내 전달된 항-CD 19 항체 제형을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 용량은 에어로졸 전달된 항-CD 19 항체 제형을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 용량은 피하 전달된 항-CD 19 항체 제형을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 용량은 에어로졸 전달된 항-CD 19 항체 제형을 포함한다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 용량은 비강내 전달된 항-CD 19 항체 제형을 포함한다. 일 구체예에서, 적합한 용기는 사전-충전된 주사기이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호 104의 중쇄 가변 영역, 서열번호 111의 경쇄 가변영역, 및 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단내 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다.
일 구체예에서, 본 발명의 제형은 밀봉된 용기 속에 제공된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 사전-충전된 주사기 속에 제공된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 서열번호 104의 중쇄 가변 영역, 서열번호 111의 경쇄 가변영역, 및 푸코스가 당 쇄에서 환원 말단내 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않은 착체 N-글리코사이드 결합된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 항-CD 19 항체를 포함한다.
본 발명은 추가로 본 발명의 항-CD 19 항체 제형을 포함하는 키트(kit)를 제공한다.
본 발명은 또한 B 세포 매개된 질병 및 질환을 치료 및 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 B 세포 매개된 질병 및 질환, 예를 들면, 염증성 질환 또는 질병, 자가면역 질환 또는 질병, 또는 증식성 질환 또는 질병을 예방, 관리, 치료 또는 경감하는 방법을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명의 방법은 이를 필요로 하는 피험체에게 예방학적 또는 치료학적 유효량의 항-CD 19 항체 제형을 투여함을 포함한다.
일 구체예에서, 질환 또는 질병을 예방, 치료, 관리 또는 경감하는 본 발명의 방법은 상기 피험체에게 CD 19에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편 이외의 예방제 또는 치료제의 예방학적 또는 치료학적 유효량을 투여함을 추가로 포함한다.
일 구체예에서, 질환 또는 질병을 예방, 치료, 관리 또는 경감하는 본 발명의 방법은 상기 피험체에게 CD 19에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편 이외의 예방제 또는 치료제의 예방학적 또는 치료학적 유효량을 투여함을 추가로 포함하며, 여기서 상기 예방제 또는 치료제는 소염제, 면역조절제, 혈관형성제, 또는 항암제이다.
6.3. 항-CD-19 항체
본 발명은 인간 CD 19 항원에 결합하는 인간, 인간화된, 또는 키메라 항-CD 19 항체, 및 또한 이러한 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 특정 구체예들에서, 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체는 항원 의존성-세포 매개된-세포독성(ADCC)을 매개할 수 있다. 다른 구체예들에서, 본 발명은 IgG1 및/또는 IgG3 인간 동형의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체, 및 또한 인간 ADCC, CDC 및/또는 세포자멸사를 매개할 수 있는 IgG1 및/또는 IgG3 인간 동형의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 추가의 구체예에서, 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체는 항-IgM/CpG 자극된 B 세포 증식을 억제할 수 있다.
본 발명은 항-CD 19 마우스 단클론 항체 HB12A 및 HB12B의 키메라 및 인간화된 버젼을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명의 인간화된 항-CD 19 항체는 HB12A 또는 HB12B의 결합 친화성과 비교할만하거나 키메라 HB12B 항체의 결합 친화성과 비교할만한 친화성을 갖는 인간 CD 19 항체에 결합할 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 인간화된 항-CD 19 단클론 항체는 VH 및 VK를 포함할 수 있으며, 여기서 VH는 V3-72의 인간 생식계열 VH 세그멘트의 4개의 골격 영역, FWl, FW2, 및 FW3(하기 문헌에 기술된 바와 같음: DP29 in Tomlinson, I. M. et al, (1992) J. Mol Biol., 227, 776-798), 및 인간 생식계열 JH 세그멘트의 FW4(Mattila, P. S. et al, (1995) Eur. J. Immunol, 25, 2578-2582); 및 HB12B 항체의 3개의 VH CDR 서열, CDRl (서열 번호: 22), CDR2 (서열 번호: 24), 및 CDR3 (서열 번호: 26)을 포함하고; VK는 인간 생식계열 V 카파 세그멘트 A10의 4개의 골격 영역, FWl, FW2, FW3(Straubinger, B. I et al, (1988) Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 369, 601-607) 및 인간 생식계열 면역글로불린 카파 J4 세그멘트의 FW4(Hieter, P. A. et al, (1982) J. Biol. Chem., 257, 1516-1522); 및 HB12B 항체의 3개의 VK CDR 서열, CDRl (서열 번호: 28), CDR2 (서열 번호: 30), 및 CDR3 (서열 번호: 32)을 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 및 a VK를 포함할 수 있으며, 여기서 VH는 V3-72의 인간 생식계역 VH 세그멘트의 4개의 골격 영역, FWl, FW2, 및 FW3(참조: DP29 in Tomlinson, I. M. et al, (1992) J. Mol Biol, 227, 776-798), 및 인간 생식계열 JH4 세그멘트의 FW4(Mattila, P. S. et al, (1995) Eur. J. Immunol, 25, 2578-2582); 및 상기 표 1에 나열된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함하며; VK는 인간 생식계열 V 카파 세그멘트 A10의 4개의 골격 영역, FWl, FW2, FW3(Straubinger, B. I et al, (1988) Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 369, 601-607), 및 인간 생식계열 면역글로불린 카파 J4 세그멘트의 FW4(Hieter, P. A. et al, (1982) J. Biol. Chem., 257, 1516-1522); 및 상기 표 1에 나열된 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함한다. 일 구체예에서, 본 항체는 Y40F, K53H 및 Y91F로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 VK 골격 돌연변이를 포함할 수 있다. 일 구체예에서, VK 골격 영역은 점 돌연변이 Y40F, K53H 및 Y91F 중의 각각을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, VK 골격 영역은 단지 Y40F 및 K53H 점 돌연변이를 함유할 수 있다. 또 다른 구체예에서, VK 골격은 단지 Y40F 점 돌연변이를 포함할 수 있다.
6.3.1. 항-CD 19 항체의 CDR 영역
어떤 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:22, 서열번호:24, 및 서열번호:26로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있고; 서열번호:36, 서열번호:38, 서열번호:40, 및 서열번호:42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:22, 서열번호:24, 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있고, 서열번호:36, 서열번호:38, 서열번호:40, 및 서열번호:42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:22, 서열번호:116, 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있고, 서열번호:36, 서열번호:38, 서열번호:40, 및 서열번호:42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:208, 서열번호:116, 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있고, 서열번호:36, 서열번호:38, 서열번호:40, 및 서열번호:42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:208, 서열번호:210, 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있고, 서열번호:36, 서열번호:38, 서열번호:40, 및 서열번호:42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에 열거된 VH CDR1, VH CDR2, 또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있고; 서열번호:36, 서열번호:38, 서열번호:40, 및 서열번호:42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다.
추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:22, 서열번호:24, 및 서열번호:26로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다.
추가 구체예에서, 항-CD19 항체는 서열번호:6, 서열번호:8, 및 서열번호:10으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:22, 서열번호:24 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:22, 서열번호:116 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:208, 서열번호:116 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:208, 서열번호:210 및 서열번호:121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 VH CDR1, VH CDR2, 또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 항체 중 임의 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다. 본 발명의 항-CD19 항체는 경쇄 가변 영역(VL)을 추가로 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 항체 중 임의 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-CD19 항체는 중쇄 가변 영역(VH)을 추가로 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 항체 중 임의 하나의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
어떤 구체예에서, 항-CD19 항체는 HB 12B-(3-72/JH4) (서열번호:34)로 명명된 인간화 VH의 VH 도메인 서열을 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 서열번호s: 103, 106, 191, 및 192로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:28, 서열번호:30, 및 서열번호:32로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있고, 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:28, 서열번호:125, 및 서열번호:32로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있고, 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:211, 서열번호:218, 및 서열번호:222로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있고, 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:28, 서열번호:220, 및 서열번호:229로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있고, 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:215, 서열번호:221, 및 서열번호:222로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있고, 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 VK CDR1, VK CDR2, 또는 VK CDR3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있고; 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 FW 영역을 추가로 포함할 수 있다.
추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:28, 30, 및 32로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다.
추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:12, 14, 및 16로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:28, 서열번호:125, 및 서열번호:32로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:211, 서열번호:218, 및 서열번호:222로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:28, 서열번호:220, 및 서열번호:229로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 서열번호:215, 서열번호:221, 및 서열번호:222로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 VK CDR1, VK CDR2, 또는 VK CDR3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(VK)를 포함할 수 있다.
어떤 구체예에서, 항-CD19 항체는 HB12B-(A10-Jk4) (서열번호:52), HB12B- 364987 (서열번호:62), HB12B-3649 (서열번호:68), HB12B-36 (서열번호:70), 7E12 VK (서열번호:110), 14H5 VK (서열번호:111), 16C9 VK (113), 15D1 VK (서열번호:112), 3C3 VK (서열번호:193), 6C11 VK (서열번호:204), 및 9G7 VK (서열번호:205)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 인간화 VK 도메인 서열을 포함할 수 있다.
본 발명은 인간 CD 19에 결합할 수 있는 본원에 기술된 VH 도메인, VH CDRI, VH CDR2, VH CDR3, VK 도메인, VK CDRI, VK CDR2, 또는 VK CDR3의 유도체를 포함하는, 인간 CD 19에 결합하는 항체를 포함한다(참조: 예를 들면, 상기 표 1에 나열된 변이체). 당해 기술분야에 공지된 숙련가에게 공지된 표준 기술을 사용하여, 예를 들면, 아미노산 치환을 생성하기 위해 일반적으로 사용되는 부위-지향된 돌연변이유발 및 PCR 매개된 돌연변이유발을 포함하는, 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 내에 돌연변이(예: 부가, 결실 및/또는 치환)을 도입할 수 있다. 일 구체예에서, VH 및/또는 VK CDR 유도체는 HB12A 또는 HB12B 항-CD 19 항체의 원래의 VH 및/또는 VK CDR에 대한 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 2개 미만의 아미노산 치환, 또는 1개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, VH 및/또는 VK CDR 유도체는 하나 이상의 예측된 비-본질적인 아미노산 잔기(즉, 인간 CD 19에 특이적으로 결합하는 항체에 중요하지 않은 아미노산 잔기)에서 조제된 보존적 아미노산 치환(예: 상기한 바와 같음)을 가질 수 있다. 돌연변이는 또한, 포화 돌연변이유발에 의한 것과 같이 VH 및/또는 VK CDR 암호화 서열의 전부 또는 일부를 따라 선택적으로 도입될 수 있으며, 수득된 돌연변체는 활성을 보유하는 돌연변이체를 동정하기 위해 생물학적 활성에 대해 스크리닝할 수 있다. 돌연변이유발 다음에, 암호화된 항체가 발현될 수 있으며 항체의 활성을 측정할 수 있다. 일 구체예에서, 본원에 기술된 본 발명의 항체는 US20050070693Al에 기술된 hA19 항체의 VH CDRl 및 VH CDR2를 배제할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 인간 또는 인간화 항-CD19 항체는 상기 표 1에서 열거된 VH CDR의 임의 하나의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서, 상기 변이체 VH CDR는 아미노산 치환을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VH CDR의 변이체를 포함하고, 여기서, 상기 변이체 VH CDR는 하나 이상의 하기 천연 또는 치환된 아미노산 잔기를 포함한다: 카밧(Kabat)에 따라 넘버링된 VH CDR1의 위치 32에서 트레오닌 (T), VH CDR2의 위치 60에서 티로신 (Y), VH CDR2의 위치 60에서 아스파르트산 (D), VH CDR2의 위치 60에서 류신 (L), VH CDR2의 위치 61에서 알라닌 (A), VH CDR2의 위치 61에서 발린 (V), VH CDR3의 위치 100B에서 티로신 (Y), VH CDR3의 위치 100B에서 아르기닌 (R), 및 VH CDR3의 위치 100B에서 아스파라긴 (N) (참고, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 인간 또는 인간화 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VH CDR의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서, 상기 변이체 VH CDR는 하나 이상의 하기 천연 또는 치환된 아미노산 잔기를 포함한다: 카밧에 따라 넘버링된 VH CDR1의 위치 33에서 글루탐산 (E), VH CDR1의 위치 33에서 류신 (L), VH CDR1의 위치 35에서 페닐알라닌 (F), VH CDR1의 위치 35에서 티로신 (Y), VH CDR1의 위치 35에서 아스파르트산 (D), VH CDR1의 위치 35에서 류신 (L), VH CDR2의 위치 57에서 세린 (S), VH CDR2의 위치 57에서 프롤린 (P), VH CDR2의 위치 57에서 아스파라긴 (N), VH CDR3의 위치 100B에서 히스티딘 (H), VH CDR3의 위치 100B에서 페닐알라닌 (F), 및 VH CDR3의 위치 99에서 프롤린 (P) (참고, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 인간 또는 인간화 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VH CDR의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서, 상기 변이체 VH CDR는 하나 이상의 하기 천연 또는 치환된 아미노산 잔기를 포함한다: 카밧에 따라 넘버링된 VH CDR1의 위치 32에서 발린 (V), 및 VH CDR2의 위치 52A에서 류신 (L).
또 하나의 구체예에서, 인간 또는 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VK CDR의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서, 상기 VK CDR는 하나 이상의 하기 천연 또는 치환된 아미노산 잔기를 포함한다: 카밧에 따라 넘버링된 VK CDR1의 위치 27D에서 히스티딘 (H), VK CDR1의 위치 33에서 이소류신 (I), VK CDR2의 위치 50에서 글루탐산 (E), VK CDR3의 위치 91에서 트레오닌 (T), 및 VK CDR3의 위치 96에서 이소류신 (I).
또 하나의 구체예에서, 인간 또는 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VK CDR의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서, 상기 VK CDR는 하나 이상의 하기 천연 또는 치환된 아미노산 잔기를 포함한다: 카밧에 따라 넘버링된 VK CDR1의 위치 27C에서 이소류신 (I), VK CDR1의 위치 30에서 류신 (L), VK CDR1의 위치 33에서 아르기닌 (R), VK CDR1의 위치 33에서 트레오닌 (T), VK CDR2의 위치 50에서 티로신 (Y), VK CDR2의 위치 54에서 트레오닌 (T), VK CDR2의 위치 54에서 프롤린 (P), VK CDR2의 위치 55에서 티로신 (Y), 및 VK CDR3의 위치 96에서 아스파라긴 (N).
또 하나의 구체예에서, 인간 또는 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VK CDR의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서, 상기 VK CDR는 하나 이상의 하기 천연 또는 치환된 아미노산 잔기를 포함한다: 카밧에 따라 넘버링된 VK CDR2의 위치 54에서 아르기닌 (R), VK CDR2의 위치 54에서 트레오닌 (T), VK CDR2의 위치 54에서 알라닌 (A), 및 VK CDR3의 위치 89에서 알라닌 (A).
본 발명은 또한, 인간 CD19에 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체 또는 항체 단편은 하나 이상의 CDR을 포함하고, 여기서, 상기 CDR은 HB12A 또는 HB12B 항-CD19 항체의 하나 이상의 CDR의 아미노산 서열과, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 2개의 아미노산 서열의 동일성 %는, BLAST 단백질 조사를 비제한적으로 포함하는 당업자에 공지된 임의 방법으로 측정될 수 있다.
6.3.2. 항-CD 19 항체의 골격 영역
일 구체예에서, 본 발명의 인간화된 항-CD 19 단클론 항체의 VH는 약 64% 내지 약 100%의 범위 내의 HB12B-(3-72/JH4) VH (서열 번호: 34)의 상응하는 골격 영역(즉, 항체 Y의 FW1과 비교하는 경우 항체 X의 FW1)과 아미노산 서열 동일성을 갖는 골격 영역을 포함할 수 있다. 이러한 구체예의 특정 면에서, 본원에 기술된 항체의 인간 또는 인간화된 VH 골격 영역은 적어도 64%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%인 HB12B-(3-72/JH4) VH (서열 번호: 34)와 아미노산 서열 동일성을 가질 수 있다.
특정 구체예들에서, 본원에 기술된 인간 또는 인간화된 VH 골격 영역은 87개 아미노산 중에서 적어도 56개(56/87)의 HB12B-(3-72/JH4) VH (서열 번호: 34)의 상응하는 골격 영역과 아미노산 서열 동일성을 가질 수 있다. 특정 구체예들에서, VH 골격 아미노산 서열 동일성은 적어도 56/87, 57/87, 58/87, 59/87, 60/87, 61/87, 62/87, 63/87, 64/87, 65/87, 66/87, 67/87, 68/87, 69/87, 70/87, 71, 87, 72/87, 73/87 74/87, 75/87, 76/87, 77.87, 78/87, 79/87, 80/87, 81/87, 82/87, 83/87, 84/87, 85/87, 86/87, 또는 87/87 아미노산일 수 있다. 본원에 기술된 항-CD 항체의 VH 서열은 HB12B-(3-72/JH4)의 베르니어 아미노산 잔가와 높은 서열 동일성을 가질 수 있으며, 예를 들면, 16개중의 적어도 10개(10/16), 적어도 11/16, 적어도 12/16, 적어도 13/16, 적어도 14/16, 또는 적어도 15/16 베르니어 잔기의 베르니어 서열 동일성을 가질 수 있다. 또 다른 구체예에서, 베르니어 아미노산 잔기의 부조화는 보존적 아미노산 치환일 수 있다. 보존적 아미노산 치환인 부조화는, 부조화된 아미노산이 베르니어 아미노산과 유사한 물리적 및 화학적 특성을 갖는 것이며, 예를 들면, 부조화된 잔기는 베르니어 잔기와 유사한 특성의 극성(극성 또는 비극성), 산도(산성 또는 염기성), 측쇄 구조(예: 측쇄 또는 직쇄이거나, 또는 페닐 환, 하이드록실 잔기, 또는 황 잔기를 포함함)을 갖는다.
다른 구체예들에서, 베르니어 아미노산 잔기의 부조화는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있다. 비-보존적 아미노산 치환인 부조화는, 부조화된 아미노산이 베르니어 아미노산과 유사한 물리적 및 화학적 특성을 갖지 않는 것이며, 예를 들면, 부조화된 잔기는 대체되는 베르니어 잔기와 비교하여 상이한 극성, 산도 또는 측쇄 구조(예: 측쇄 또는 직쇄이거나 또는 페닐 환, 하이드록실 잔기 또는 황 잔기를 포함함)를 갖는다.
다른 구체예들에서, 본 발명의 인간 또는 인간화된 항-CD 19 항체는 VH 골격 영역을 가질 수 있으며, 여기서 VH 골격 영역은 다음 잔기들 중의 하나 이상을 포함할 수 있다: 카밧에 따라 명명된, 골격 영역 1의 위치 20에서 류신(L), 골격 영역 1의 위치 27에서 페닐알라닌(F), 골격 영역 1의 위치 28에서 트레오닌(T), 골격 영역 2의 위치 38에서 아르기닌(R), 골격 영역 2의 위치 48에서 발린(V), 골격 영역 3의 위치 67에서 페닐알라닌(F), 골격 영역 3의 위치 71에서 아르기닌(R), 골격 영역 3의 위치 80에서 류신(L), 및 골격 영역 3의 위치 91에서 티로신(Y).
카밧 명명법은 문헌[참조: Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Publication No. 91-3242, the National Institutes of Health, National Technical Information Service에 의해 설정된 3권으로 발행됨(이하, "카밧"이라고 함)]의 세미나 작업(seminal work)을 기본으로 한다. 카밧은 다수의 종 항체 동형으로부터의 면역글로불린 쇄의 다중 서열 정렬을 제공한다. 정렬된 서열은 단일 명명법 체계인, 카밧 명명법 체계에 따라 명명한다. 카밧 서열은 1991년판 이래로 업데이트되어 왔으며, 전자 서열 데이타베이스(최신의 다운로드 가능한 버젼 1997)로서 이용할 수 있다. 어떠한 면역글로불린 서열도 카밧 참조 서열을 사용하여 정렬을 수행함으로써 카밧에 따라 명명할 수 있다. 따라서, 카밧 명명법 체계는 면역글로불린 쇄를 명명하기 위한 균일한 체계를 제공한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 기술되 모든 면역글로불린 아미노산 서열은 카밧 명명법 체계에 따라 명명한다. 유사하게, 본원에서 언급된 모든 단일 아미노산 위치는 카밧 명명법 체계에 따라 명명된다.
추가의 특정 구체예들에서, 본원에 기술된 인간 또는 인간화된 VH 골격 영역은 다음의 베르니어 인터페이스 또는 표준 잔기 위치들 중의 하나 이상에서 동일성 또는 보존적 부조화를 위해 선택된 골격 영역을 가질 수 있다: 20, 22, 24, 26, 27, 28, 29, 30, 36, 37, 39, 45, 47, 48, 49, 67, 69, 71, 73, 78, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 및 103. 부조화된 베르니어, 인터페이스 및 공인된 잔기들 중의 하나 이상은, 예를 들면, 돌연변이 유발시킴으로써 변화시켜 HB12A 또는 HB12B VH 골격 영역의 상응하는 아미노산 잔기을 조화시킬 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 본원에 기술된 항-CD 19 항체의 인간 또는 인간화된 VK 골격 영역은 약 65% 내지 약 100%의 범위 내의 HB12B-(A10-Jk4) VK (서열 번호: 52)의 골격 영역과 아미노산 동일성을 가질 수 있다. 이러한 구체예의 특정 면에서, 본원에 기술된 항체의 인간 또는 인간화된 VK 골격 영역은 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%인 HB12B-(A10-Jk4) 항체 VK와 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
특정 구체예들에서, 본원에 기술된 항체의 인간 또는 인간화된 VK 골격 영역은 80개 아미노산 중의 적어도 52개(52/80)의 상응하는 골격 영역(즉, 항체 Y의 FW1과 비교한 항체 X의 FWl)을 가질 수 있다. 특정 구체예들에서, VH 골격 아미노산 서열 동일성은 적어도 52/80, 53/80, 54/80, 55/80, 56/80, 57/80, 58/80, 59/80, 60/80, 61/80, 62/80, 63/80, 64/80, 65/80, 66/80, 67/80, 68/80, 69/80, 70/80, 71, 80, 72/80, 73/80 74/80, 75/80, 76/80, 77/80, 78/80, 79/80, 또는 80/80 아미노산일 수 있다. 본원에 기술된 항-CD 19 항체의 VK 서열은 HB12B의 베르니어 아미노산 잔기에 대하여 높은 서열 동일성을 가질 수 있으며(참조 도 1), 예를 들면, 14개중 적어도 9개(9/14), 적어도 10/14, 적어도 11/14, 적어도 12/14, 적어도 13/14 베르니어 잔기의 베르니어 서열 동일성을 가질 수 있다. 또 다른 구체예에서, 베르니어 아미노산 잔기의 부조화는 보존적 아미노산 치환일 수 있다. 보존적 아미노산 치환인 부조화는, 부조화된 아미노산이 베르니어 아미노산과 유사한 물리적 및 화학적 특성을 갖는 것이며, 예를 들면, 부조화된 잔기는 베르니어 잔기와 유사한 특성의 극성(극성 또는 비극성), 산도(산성 또는 염기성), 측쇄 구조(예: 측쇄 또는 직쇄이거나, 또는 페닐 환, 하이드록실 잔기, 또는 황 잔기를 포함함)을 갖는다.
다른 구체예들에서, 베르니어 아미노산 잔기의 부조화는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있다. 비-보존적 아미노산 치환인 부조화는, 부조화된 아미노산이 베르니어 아미노산과 유사한 물리적 및 화학적 특성을 갖지 않는 것이며, 예를 들면, 부조화된 잔기는 대체되는 베르니어 잔기와 비교하여 상이한 극성, 산도 또는 측쇄 구조(예: 측쇄 또는 직쇄이거나 또는 페닐 환, 하이드록실 잔기 또는 황 잔기를 포함함)를 갖는다.
다른 구체예들에서, 본원에 기술된 인간 또는 인간화된 VK 골격 영역은 다음 잔기들 중의 하나 이상을 포함할 수 있다: 카밧에 따라 명명된, 골격 영역 2의 위치 36에서 페닐알라닌(F), 골격 영역 2의 위치 49에서 히시티딘(H), 및 골격 영역 3의 위치 87에서 페닐알라닌(F).
추가의 특정 구체예들에서, 본원에 기술된 인간 또는 인간화된 VK 골격 영역은 다음의 베르니어 인터페이스 또는 표준 잔기 위치들 중의 하나 이상에서 동일성 또는 보존적 부조화를 위해 선택된 골격 영역을 가질 수 있다: 2, 3, 4, 23, 35, 36, 38, 44, 56, 47, 48, 49, 64, 66, 68, 69, 71, 87, 88 및 98. 부조화된 베르니어, 인터페이스 및 공인된 잔기들 중의 하나 이상은, 예를 들면, 돌연변이 유발시킴으로써 변화시켜 HB12A 또는 HB12B VH 골격 영역의 상응하는 아미노산 잔기를 조화시킬 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 인간화 VH를 포함하는 중쇄는 본 발명의 인간화 VK를 포함하는 경쇄로 발현되어 인간화 항-CD19 항체를 생성할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34), 7E12 VH (서열번호:102), 14H5 VH (서열번호:103), 15D1 VH (서열번호:104), 15D7 VH (서열번호:105), 16C4 VH (서열번호:106), 14H5-YG (서열번호:107), 14H5-DG (서열번호:108), 14H5-LG (서열번호:109), 1A7 VH (서열번호:191), 3C3 VH (서열번호:191), 6C11 VH (서열번호:191), 9G7 (서열번호:191), 3B4 VH (서열번호:236), 및 3F11 VH (서열번호:192)로 명명된 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 VH 서열을 포함할 수 있고; HB12B-(A10/JK4) (서열번호:52); HB12B-364987 (또는 364987) (서열번호:62); HB12B-3649 (또는 3649) (서열번호:68); HB12B-36 (또는 36) (서열번호:70), 7E12 VK (서열번호:110), 14H5 (서열번호:111), 15D1 (서열번호:112), 16C9 (서열번호:113), 3C3 VK (서열번호:193), 3E5 VK (서열번호:194), 3D4 VK (서열번호:195), 3F1 VK (서열번호:196), 5B5 VK (서열번호:197), 6F7 VK (서열번호:198), 1C11 VK (서열번호:199), 2B11 VK (서열번호:200), 2D10 VK (서열번호:201), 5C11 VK (서열번호:202), 5D4 VK (서열번호:203), 6C11 VK (서열번호:204), 9G7 VK (서열번호:205), 1H4 VK (서열번호:206), 및 5C4 VK (서열번호:207)로 명명된 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 VK 서열을 추가로 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 인간화 항-CD19 항체는 VH 서열 HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34) 및 VK 서열 HB12B-364987 (서열번호:62)을 포함한다. 특정 구체예에서, 인간화 항-CD19 항체는 VH 서열 HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34) 및 VK 서열 HB12B-3649 (서열번호:68)을 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 인간화 항-CD19 항체는 VH 서열 HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34) 및 VK 서열 HB12B-36 (서열번호:70)을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 7E12 VH (서열번호:102) 및 VK 서열 7E12 VK (서열번호:110)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 14H5 VH (서열번호:103) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 14H5-YG VH (서열번호:107) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 14H5-DG VH (서열번호:108) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 14H5-LG VH (서열번호:109) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 14H5 VH (서열번호:103) 및 VK 서열 16C9 VK (서열번호:113)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 15D1 VH (서열번호:104) 및 VK 서열 15D1 VK (서열번호:112)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 15D7 VH (서열번호:105) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 16C4 VH (서열번호:106) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 3C3 VK (서열번호:193)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 3E5 VK (서열번호:194)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 3D4 VK (서열번호:195)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 5B5 VK (서열번호:197)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 6F7 VK (서열번호:198)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 2D10 VK (서열번호:201)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 5C11 VK (서열번호:202)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 9G7 VK (서열번호:205)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 1H4 VK (서열번호:206)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 1A7 VH (서열번호:191) 및 VK 서열 5C4 VK (서열번호:207)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 3B4 VH (서열번호:236) 및 VK 서열 14H5 VK (서열번호:111)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 3F11 VH (서열번호:192) 및 VK 서열 3F11 VK (서열번호:196)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 16C4 VH (서열번호:106) 및 VK 서열 1C11 VK (서열번호:199)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 16C4 VH (서열번호:106) 및 VK 서열 2B11 VK (서열번호:200)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 16C4 VH (서열번호:106) 및 VK 서열 5D4 VK (서열번호:203)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 16C4 VH (서열번호:106) 및 VK 서열 6F7 VK (서열번호:198)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 VH 서열 3F11 VH (서열번호:192) 및 VK 서열 6C11 VK (서열번호:204)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 표 1에 열거된 VH 및 VL의 임의 조합을 포함한다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 인간화 VK를 포함하는 경쇄는 본 발명의 인간화 VH를 포함하는 중쇄로 발현되어 인간화 항-CD19 항체를 생성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 인간화 항-CD19 항체는 HB12B-(A10/JK4) (서열번호:52); HB12B-364987 (또는 364987) (서열번호:62); HB12B-3649 (또는 3649) (서열번호:68); HB12B-36 (또는 36) (서열번호:70), 7E12 VK (서열번호:110), 14H5 (서열번호:111), 15D1 (서열번호:112), 16C9 (서열번호:113), 3C3 (서열번호:193), 3E5 (서열번호:194), 3D4 (서열번호:195), 3F11 (서열번호:196), 5B5 (서열번호:197), 6F7 (서열번호:198), 1C11 (서열번호:199), 2B11 (서열번호:200), 2D10 (서열번호:201), 5C11 (서열번호:202), 5D4 (서열번호:203), 6C11 (서열번호:204), 9G7 (서열번호:205), 1H4 (서열번호:206), 및 5C4 (서열번호:207)로 명명된 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 VK 서열을 포함한다. 상기 VK 서열은 서열번호:36, 38, 40, 및 42로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 골격 영역에서 아미노산 서열을 포함하는 VH 서열과 짝을 이룰 수 있다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 인간화 VH를 포함하는 중쇄는 본 발명의 인간화 VK를 포함하는 경쇄로 발현되어 인간화 항-CD19 항체를 생성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 인간화 항-CD19 항체는 HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34), 7E12 VH (서열번호:102), 14H5 VH (서열번호:103), 15D1 VH (서열번호:104), 15D7 VH (서열번호:105), 16C4 VH (서열번호:106), 14H5-YG (서열번호:107), 14H5-DG (서열번호:108), 14H5-LG (서열번호:109), 1A7 (서열번호:191), 3C3 VH (서열번호:191), 6C11 VH (서열번호:191), 9G7 (서열번호:191), 3B4 VH (서열번호:236), 및 3F11 VH (서열번호:192)로 명명된 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 VH 서열을 포함한다. 상기 VH 서열은 서열번호:54, 서열번호:56, 서열번호:72, 서열번호:82, 서열번호:64, 서열번호:58, 서열번호:66, 및 서열번호:60으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 골격 영역에서 아미노선 사열을 포함하는 VK 서열과 짝을 이룰 수 있다.
어떤 구체예에서, 모 HB12A 또는 HB 12B 하이브리도마로부터 유도된 인간화 VH 또는 VK는 키메라 면역글로불린 경쇄 또는 키메라 면역글로불린 중쇄로서 발현되어 키메라 항-CD19 항체를 생성할 수 있다. 특정 구체예에서, 인간화 VH는 HB12A VK (서열번호:4) 또는 HB 12B VK (서열번호:20)를 포함하는 키메라 항체로서 발현될 수 있다. 또 하나의 특정 구체예에서, 인간화 VK는 HB12A VH (서열번호:2) 또는 HB 12B VH (서열번호:18)을 포함하는 키메라 항체로서 발현될 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 키메라 항-CD19 항체는 HB12A VK (서열번호:4) 또는 HB12B VK (서열번호:20)의 VK 서열을 포함할 수 있고, HB12A VH (서열번호:2) 또는 HB12B VH (서열번호:18)의 VH 서열을 추가로 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 인간화 VH는 MGDNDIHFAFLSTGVHS (서열번호:83)의 선도 서열을 추가로 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 인간화 VK는 인간 VKI-L12 유전자의 선도 펩타이드로부터 선택된 선도 서열 MDMRVP AQLLGLLLL WLPGAKC (서열번호:84)을 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 인간 CD19 (hCD19) 항원에 대한 고결합 친화도를 가질 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 2×105 M-1s-1, 적어도 5×105 M-1s-1, 적어도 106 M-1s-1, 적어도 5×106 M-1s-1, 적어도 107 M-1s-1, 적어도 5×107 M-1s-1, 또는 적어도 108 M-1s-1의 해리 속도 상수, 즉 kon 속도 (항체 (Ab) + 항원 (Ag)kon → Ab-Ag)를 가질 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 5×10-1s-1 미만, 10-1s-1 미만, 5×10-2s-1 미만, 10-2s-1 미만, 5×10-3s-1 미만, 10-3s-1 미만, 5×10-4s-1 미만, 또는 10-4s-1 미만의 koff 속도 ((Ab-Ag)koff → 항체 (Ab) + 항원 (Ag)) 가질 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 5×10-5s-1 미만, 10-5s-1 미만, 5×10-6s-1 미만, 10-6s-1 미만, 5×10-7s-1 미만, 10-7s-1 미만, 5×10-8s-1 미만, 10-8s-1 미만, 5×10-9 s-1 미만, 10-9 s-1 미만, 또는 10-10s-1 미만의 koff를 갖는다.
또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 적어도 102 M-1, 적어도 5×102 M-1, 적어도 103 M-1, 적어도 5×103 M-1, 적어도 104 M-1, 적어도 5×104 M-1, 적어도 105 M-1, 적어도 5×105 M-1, 적어도 106 M-1, 적어도 5×106 M-1, 적어도 107 M-1, 적어도 5×107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 5×108 M-1, 적어도 109 M-1, 적어도 5×109 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 5×1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 5×1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 적어도 5×1012 M-1, 적어도 1013 M-1, 적어도 5×1013 M-1, 적어도 1014 M-1, 적어도 5×1014 M-1, 적어도 1015 M-1, 또는 적어도 5×1015 M-1의 친화도 상수, 즉 Ka (kon/koff)를 가질 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 5×10-2 M 미만, 10-2 M 미만, 5×10-3 M 미만, 10-3 M 미만, 5×10-4 M 미만, 10 M-4 미만, 5×10-5 M 미만, 10-5 M 미만, 5×10-6 M 미만, 10-6 M 미만, 5×10-7 M 미만, 10-7 M 미만, 5×10-8 M 미만, 10-8 M 미만, 5×10-9 M 미만, 10-9 M 미만, 5×10-10 M 미만, 10-10 M 미만, 5×10-11 M 미만, 10-11 M 미만, 5×10-12 M 미만, 10-12 M 미만, 5×10-13 M 미만, 10-13 M 미만, 5×10-14 M 미만, 10-14 M 미만, 5×10-15 M 미만, 또는 10-15 M 미만의 해리 상수, 즉 Kd (koff/kon)를 가질 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용된 본 발명의 항체는 인간 CD19에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 본 명세서에 기재되거나 당업자에 공지된 방법(예를 들어, BIAcore 검정, ELISA) (Biacore International AB, Uppsala, Sweden)을 사용하여 평가되는 바와 같이, 3000 pM 미만, 2500 pM 미만, 2000 pM 미만, 1500 pM 미만, 1000 pM 미만, 750 pM 미만, 500 pM 미만, 250 pM 미만, 200 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 75 pM 미만의 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용된 본 발명의 항체는 인간 CD19 항원에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 본 명세서에 기재되거나 당업자에 공지된 방법 (예를 들어, BIAcore 검정, ELISA)을 사용하여 평가되는 바와 같이, 25 내지 3400 pM, 25 내지 3000 pM, 25 내지 2500 pM, 25 내지 2000 pM, 25 내지 1500 pM, 25 내지 1000 pM, 25 내지 750 pM, 25 내지 500 pM, 25 내지 250 pM, 25 내지 100 pM, 25 내지 75 pM, 25 내지 50 pM의 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용된 본 발명의 항-CD19 항체는 hCD19에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 본 명세서에 기재되거나 당업자에 공지된 방법 (예를 들어, BIAcore 검정, ELISA)을 사용하여 평가되는 바와 같이, 500 pM, 100 pM, 75 pM 또는 50 pM 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 본 발명은 또한 예를 들면, 본원에서 정의된 바와 같이, hCD19에 결합하는 본원에 기술된 인간, 인간화된 또는 키메라 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 대하여, 스트린전트 또는 더 낮은 스트린전시 하이브리드화 조건하에 하이브리드화하는 수득하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
엄격한 부합화 조건은 약 45℃에서 6X 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC) 중의 필터 결합된 DNA에 대한 하이브리드화, 및 이후에 약 50 내지 60℃에서 0.2X SSC/0.1% SDS 중에서의 1회 이상의 세척, 약 45℃에서 6X SSC에서 필터 결합된 DNA에 대한 하이브리드화, 및 이후의 약 60℃에서 0.1X SSC/0.2% SDS 중에서의 1회 이상의 세척과 같은 고 스트린전트 조건, 또는 당해 기술분야에 공지된 임의의 기타 스트린전트 하이브리드화 조건을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다[참조: 예를 들면, Ausubel, F.M. et al., eds. 1989 Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley and Sons, Inc., NY at pages 6.3.1 to 6.3.6 and 2.10.3]. 폴리뉴클레오타이드가 수득될 수 있으며, 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열은 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 측정된다. 예를 들면, 항체의 뉴클레오타이드 서열이 공지된 경우, 항체를 암호화하는 폴리뉴클에오타이드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오타이드(예를 들면, Kutmeier et al., BioTechniques 17:242 (1994)에 기술된 바와 같음)로부터 조립될 수 있으며, 이는 간단히 언급하면, 항체를 암호화하는 서열의 부분을 포함하는 중첩 올리고뉴클레오타이드의 합성, 이러한 올리고뉴클레오타이드의 어닐링 및 결합, 및 PCR에 의한 연결된 올리고뉴클레오타이드의 증폭을 포함한다.
항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 또한 적합한 공급원으로부터의 핵산으로부터 생성될 수 있다. 특정 항체를 암호화하는 핵산을 함유하는 클론이 이용가능하지만, 항체 분자의 서열은 공지되어 있고, 면역글로불린을 암호화하는 핵산은 적합한 공급원(예를 들면, 항체 cDNA 라이브러리, 또는 이로부터 생성된 cDNA 라이브러리, 또는 이로부터 분리된, 폴리A+RNA를 포함하는 핵산, 항체를 발현하는 임의의 조직 또는 세포, 예를 들면, 항체를 발현하기 위해 선택된 하이브리도마 세포)으로부터, 예를 들면, 항체를 암호화하는 cDNA 라이브러리로부터의 cDNA 클론을 확인하기 위한 특정 유전자 서열에 특이적인 올리고뉴클레오타이드 탐침을 사용하는 클로닝에 의해서 또는 서열의 3' 및 5' 말단에 하이브리드화할 수 있는 함성 프라이머를 사용하는 PCR 증폭에 의해 화학적으로 합성하거나 수득할 수 있다. PCR에 의해 발생된 증폭된 아미노산은 이후에 당해 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 복제가능한 클로닝 벡터 내로 클로닝할 수 있다.
본 발명은 또한 포유동물 세포에서 이들의 효과적인 발현을 위한 발현 벡터 뿐만 아니라 본원에 기술된 항체의 VH 및 VK 단편 영역 및 CDR도 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 제공한다.
본 발명은 또한, hCD19 형질전환 마우스 모델 시스템에서 재조합 인간 CD19 분자를 발현시키는 B 세포를 효율적으로 고갈시킬 수 있는 항체를 제공한다 (참고, Yazawa et al, Proc Natl Acad Sci USA. 102(42):15178-83 (2005)). 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD-19 항체는 HB12B 모노클로날 항체에 의해 달성된 고갈의 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%인 B 세포 고갈을 달성할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 HB12B 항체에 의해 달성된 고갈보다 더 완전한 B 세포 고갈을 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 순환 B 세포, 혈액 B 세포, 비장 B 세포, 변연부 B 세포, 여포성 B 세포, 복막 B 세포, 및/또는 골수 B 세포를 고갈시킬 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 전구 B 세포, 조기 pro-B 세포, 만기 pro-B 세포, 큰 pre-B 세포, 작은 pre-B 세포, 미성숙 B 세포, 성숙 B 세포, 항원 자극된 B 세포, 및/또는 형질세포의 고갈을 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 또는 적어도 30일 동안 지속할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 또는 적어도 10주 동안 지속할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월 동안 지속할 수 있다.
본 발명은 또한, 인간 대상체에서 B 세포를 효율적으로 고갈시키는 항체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD-19 항체는 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% B 세포 고갈을 달성할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 인간 대상체에서 B 세포 서브셋(subset)을 고갈시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 순환 B 세포, 혈액 B 세포, 비장 B 세포, 변연부 B 세포, 여포성 B 세포, 복막 B 세포, 및/또는 골수 B 세포를 고갈시킬 수 있다. CD19는 모든 발달 단계에서 B 세포의 표면 상에 존재한다. 따라서, 항-CD19 항체는 모든 발달 단계의 B 세포를 고갈시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 전구 B 세포, 조기 pro-B 세포, 만기 pro-B 세포, 큰 pre-B 세포, 작은 pre-B 세포, 미성숙 B 세포, 성숙 B 세포, 항원 자극된 B 세포, 및/또는 형질세포의 고갈을 달성할 수 있다. B 세포의 고갈은 장기간 유지될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 또는 적어도 30일 동안 지속할 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 또는 적어도 10주 동안 지속할 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월 동안 지속할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 순환 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 혈액 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 비장 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 변연부 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 여포성 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 복막 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 골수 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 전구 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 조기 pro-B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 만기 pro-B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 큰 pre-B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 작은 pre-B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 미성숙 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 성숙 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 항원 자극된 B 세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 형질세포의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%를 고갈시킨다. B 세포의 고갈은 장기간 지속될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 또는 적어도 30일 동안 지속될 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 또는 적어도 10주 동안 지속될 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 B 세포 고갈은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월 동안 지속될 수 있다.
B 세포 악성종양은 특이 B 세포 서브셋의 병적 팽창을 그 특징으로 하고, 예를 들어, 전구 B 세포 급성 림프구성 백혈병은 pro-B 세포/Pre-B 세포 발달 단계에 상응하는 B 세포의 비정상 팽창을 그 특징으로 한다. 악성 B 세포는 정상 B 세포 마커, 예컨대 CD19의 세표 표면 발현을 유지한다. 따라서, 항-CD19 항체는 인간 대상체에서 악성 B 세포를 고갈시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 인간 대상체에서 악성 B 세포의 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100% 고갈을 달성할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 인간화 항-CD19 항체는 항체 의존성 세포 독성작용 (ADCC), 보체 의존성 세포 매개된 세포독성 (CDC), 및/또는 세포사멸을 매개한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 인간화 항-CD19 항체는 항체 의존성 세포 독성작용 (ADCC) 및/또는 세포사멸을 매개한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 향상된 항체 의존성 세포 독성작용 (ADCC)를 갖는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 향상된 항체 의존성 세포 독성작용 (ADCC)을 매개하는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 Asn297에 연결된 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 여기서, 푸코스는 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않고, 여기서, 상기 Fc 영역은 향상된 항체 의존성 세포 독성작용 (ADCC)를 매개한다.
본 발명은 또한, 실험실내 자극된 B 세포 증식을 효율적으로 억제할 수 있는 항-CD19 항체를 제공한다. 단리된 말초 B 세포의 증식은 다양한 자극, 예를 들어, 비제한적으로 항-IgM 항체, CD40 또는 CpG에 의한 자극에 의해 유도될 수 있다. 이들 자극은 단독으로 서로 조합하여 전달될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 실험실내 자극된 B 세포 증식을 억제한다. 또 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 항-IgM/CpG 또는 항-IgM/CD40 자극에 의해 유도된 실험실내 B 세포 증식을 억제한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50% 또는 적어도 약 75%까지 실험실내 자극된 B 세포 증식을 억제한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체 항-CD19 항체는 항-IgM/CpG 또는 항-IgM/CD40 자극에 의해 유도된 실험실내 B 세포 증식을 억제하고, 여기서, 상기 Fc 변이체는 유사한 비-변이체 분자에 관한 하나 이상의 Fc 리간드에 대한 결합 친화도를 변경시켰다. 특정 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체 항-CD19 항체는 항-IgM/CpG 또는 항-IgM/CD40 자극에 의해 유도된 실험실내 B 세포 증식을 억제하고, 여기서, 상기 Fc 변이체는 유사한 비-변이체 Fc 도메인에 관한 Fcγ 수용체 HB에 대한 결합을 향상시켰다. 추가 특정 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체 항-CD19 항체는 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50% 또는 적어도 약 75%까지 실험실내 자극된 B 세포 증식을 억제한다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체 항-CD19 항체는 실험실내 자극된 B 세포 증식을 억제하고, 여기서, 상기 변이체 Fc 도메인은 비교가능 비-변이체 Fc 도메인보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 7배, 또는 적어도 10배, 또는 적어도 20배, 또는 적어도 30배, 또는 적어도 40배, 또는 적어도 50배, 또는 적어도 60배, 또는 적어도 70배, 또는 적어도 80배, 또는 적어도 90배, 또는 적어도 100배, 또는 적어도 200배 더 큰 Fcγ 수용체 HB에 대한 친화도를 갖는다.
본 발명은 또한, B 세포 악성종양의 치료를 필요로 하는 인간에게 순환하는 B 세포를 고갈시키기에 충분한 양의, 인간 항체 의존성 세포형 세포독성(ADCC), 상보체 의존성 세포 매개된 세포독성(CDC) 및/또는 세포자멸사를 매개할 수 있는 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 투여함을 포함하여 인간에서 B 세포 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 특정 면에서, 본 발명은 또한 IgGl 또는 IgG3 인간 동형의 것인, 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체의 치료학적으로 유효한 요법을 투여함을 포함하여, 인간에서 B 세포 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 자가면역 질환 또는 질병의 치료를 필요로 하는 인간에게 순환하는 B 세포를 고갈시키기에 충분한 양의, ADCC, CDC 및/또는 세포자멸사를 매개할 수 있는 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 투여함을 포함하여 인간에서 자가면역 질환 또는 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 IgGl 또는 IgG3 인간 동형의 것인, 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체의 치료학적으로 유효한 요법을 투여함을 포함하여, 인간에서 자가면역 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 인간 이식 수용체에게, 순환하는 B 세포 또는 순환하는 면역글로불린 또는 이들 둘 다를 고갈시킬 수 있는 양의, 본 발명의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 인간 이식 수용체에서 체액성 거부증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 다른 구체예들에서, 본 발명은 이식체로부터 B 세포를 고갈시킬 수 있는 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체의 양과 이식하기 전에 이식체를 접촉시킴을 포함하여, 이를 필요로 하는 사림 이식 수용체에서 이식 거부증 또는 이식체 대 숙주 질환을 예방하는 방법을 제공한다.
6.4. 인간화된 항-CD 19 항체의 생산
본원에 기술된 인간화된 항체는, CDR-그래프팅[참조: 예를 들면, European Patent No. EP 239,400; International Publication No. WO 91/09967; 및 U.S. 특허 Nos. 5,225,539, 5,530,101, 및 5,585,089; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다], 비니어링(veneering) 또는 재표면화(resurfacing)[참조: 예를 들면, European Patent Nos. EP 592,106 and EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489- 498; Studnicka et al, 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814; and Roguska et al, 1994, Proc. Natl. Acad. ScL, 91 :969-973; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다], 쇄 셔플링(chain shuffling)[참조: 예를 들면, U.S. 특허 No. 5,565,332; 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합된다], 및 문헌[참조: 예를 들면, U.S. 특허 No. 6,407,213, U.S. 특허 No. 5,766,886, International Publication No. WO 9317105, Tan et al., J. Immunol, 169: 1119-25 (2002), Caldas et al, Protein Eng, 13(5):353-60 (2000), Morea et al, Methods, 20(3):267-79 (2000), Baca et al, J. Biol. Chem., 272(16): 10678-84 (1997), Roguska et al, Protein Eng, 9(10):895-904 (1996), Couto et al, Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al, Cancer Res., 55(8): 1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene, 150(2):409-10 (1994), and Pedersen et al, J. Mol Biol, 235(3):959-73 (1994); 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다]을 포함하지만 이에 국한되지 않는, 당해 기술분야에서 공지된 각종 기술을 이용하여 생산할 수 있다. 종종, FW 영역 내의 FW 잔기는 항원 결합을 변경, 예를 들면, 개선시키기 위해 CDR 공여체 항체로부터의 상응하는 잔기로 치환될 것이다. 이들 FW 치환은 당해 분야에 공지된 방법으로, 예를 들면, 특정 위치에서 특정 FW 잔기를 확인하기 위해 항원 결합 및 서열 비교를 위해 중요한 FW 잔기를 확인하기 위한 CDR 및 FW 잔기의 상호작용을 모델링함으로서 확인한다[참조: 예를 들면, Queen et al, U.S. 특허 No. 5,585,089; and Riechmann et al, 1988, Nature, 332:323; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다)
인간화된 항-CD 19 항체는 인간이 아닌 동물인 공급원으로부터 내부로 도입되는 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 인간이 아닌 동물 아미노산 잔기는 종종 "중요한" 잔기로 언급되는 데, 이는 전형적으로 "중요한" 가변 도메인으로부터 취해진다. 따라서, 인간화된 항체는 인간으로부터의 골격 및 인간이 아닌 동물 면역글로불린 분자로부터의 하나 이상의 CDR을 포함한다. 항체의 인간화는 당해 기술분야에 익히 공지되어 있으며, 본질적으로 윈터(Winter) 및 그의 공동연구자들의 방법[참조: Jones et al, Nature, 321 :522-525 (1986); Riechmann et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al, Science, 239:1534-1536 (1988))]에 따라, 인간 항체의 상응하는 서열에 대한 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 치환함으로써, 즉 CDR-그래프팅(참조: EP 239,400; PCT 공보 No. WO 91/09967; and U.S. 특허 Nos. 4,816,567; 6,331,415; 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 6,548,640; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다)함으로써 수행할 수 있다. 이러한 인간화된 키메라 항체에서, 실질적으로 더 적은 완전한 인간 가변 도메인이 인간이 아닌 동물 종으로부터의 상응하는 서열에 의해 치환되었다. 실제로, 인간화된 항체는 전형적으로, 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FW 잔기가 설치류 항체내의 유사한 부위로부터의 잔기에 의해 치환되는 인간 항체이다. 항-CD 19 항체의 인간화는 비니어링 또는 재표면화[참조:EP 592,106; EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al, Protein Engineering, 7(6):805-814 (1994); and Roguska et al, Proc. Natl. Acad. ScL, 91 :969-973 (1994)] 또는 쇄 셔플링(참조: U.S. 특허 No. 5,565,332)(참조함으로써 상기 문헌들의 각 전문이 본원에 통합된다)에 의해서도 성취될 수 있다.
인간화된 항체를 조제하는 데 사용되는, 경 및 중 둘 다의 인간 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키기 위한 것이다. 소위 "최적(best-fit)" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열은 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대하여 스크리닝된다. 이후에, 설치류의 것과 가장 밀접하게 관련되는 인간 서열은 의도하는 인간화된 mAb의 항원 결합, 적합한 구조적 형성 및/또는 안정성을 위해 중요하다[참조: Sims et al., J. Immunol, 151 :2296 (1993); Chothia et al., J. Mol Biol, 196:901 (1987); 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다]. 이후에, 목적하는 기준에 맞는 수득되는 FW 서열은 인간화된 항체를 위한 인간 공여체 FW 영역으로서 사용된다.
또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 소그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열(concensus sequence)로부터 유도된 특정 FW를 사용한다. 동일한 FW를 수개의 상이한 인간화된 항-CD 19 항체에 대하여 사용할 수 있다[참조: Carter et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 89:4285 (1992); Presta et al, J. Immunol, 151 :2623 (1993); 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다].
항-CD 19 항체는 CD 19에 대한 고 친화성 및 다른 바람직한 생물학적 특성을 보유하여 인간화될 수 있다. 본 발명의 하나의 면에 따라, 인간화된 항체는 모 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 사용하여 모 서열 및 각종 개념적 인간화된 생성물의 분석 방법으로 조제한다. 3차원 면역글로불린 모델이 공통적으로 이용가능하며 당해 기술분야의 숙련가들에게 익숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 형태적 구조를 설명하고 표시하는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 이들 표시의 검사는 후보 면역글로불린 서열의 작용화에서 잔기들의 유사한 역할의 분석, 즉 CD 19를 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이러한 방식으로, FW 잔기는 수용체로부터 선택되고 조합될 수 있으며 서열을 도입하여 목적하는 항체 특성, 예를 들면, CD 19에 대한 친화성이 성취되도록 한다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미침에 있어서 직접적으로 및 가장 실질적으로 포함된다.
"인간화된" 항체는 원래의 항체와 유사한 항원 특이성, 즉 본 발명에서 인간 CD 19 항원을 결합하는 능력을 보유할 수 있다. 그러나, 특정 인간화 방법을 사용하여, 인간 CD 19 항원에 대한 항체의 결합의 친화성 및/또는 특이성은 문헌[참조: Wu et al, J. Mol Biol, 294 : 151(1999); 참조함으로써 이 문헌의 전문이 본원에 통합된다]에 기술된 바와 같은 "유도된 진화"의 방법을 사용하여 변경시킬 수 있다.
본원에 기술된 인간화된 항-CD 19 항체는 이후 단락에 기술된 바와 같은 HB 12A 또는 HB 12B 상보성 결정 영역, 또는 "CDR"의 그래프팅을 위한 분명한 인간 골격 영역을 선택함으로써 구성할 수 있다. 본 발명은 마우스 HB12A 및 HB12B 항체의 다수의 인간화된 버젼 및 또한 chHB 12A 및 chHB 12B로 나타낸 키메라 버젼을 포함한다.
6.5. 단클론 항-CD19 항체
단클론 항-CD 19 항체는 인간 CD 19 항원에 대한 결합 특이성을 나타내고 인간 ADCC, CDC 및/또는 세포자멸 메카니즘을 매개할 수 있다. 이러한 항체는 하이브리도마, 재조합체, 및 파지 표시 기술, 또는 이들의 조합을 포함하는 당해 기술분야에 공지된 광범위한 기술을 사용하여 생성할 수 있다. 항체는 단일 항원성 부위에 대하여 지향되는 고특이성이다. 가공된 항-CD 19 항체는 다음에 기술된 기술 및 이들 기술에 대한 개선을 포함하지만 이에 국한되지 않는 당해 분야에 공지된 임의의 수단을 이용하여 조제할 수 있다. 대량 고수율 생산은 전형적으로 가공된 항-CD 19 항체를 생산하는 숙주 세포를 배양하고 숙주 세포 배양물로부터 항-CD 19 항체를 회복하는 것을 포함한다.
6.5.1. 하이브리도마 기술
단클론 항체는, 예를 들면, 문헌[참조: Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981](상기 참조문헌들은 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다)에 교시되고 당해 분야에 공지된 것들을 포함하는 하이브리도마 기술을 이용하여 생산할 수 있다. 예를 들면, 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 기타 적절한 숙주 동물, 예를 들면, 햄스터 또는 머카크 원숭이(macaque mankey)를 면역화시켜 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합하게 되는 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 림프구는 또한 시험관내에서 면역화될 수 있다. 이후에, 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다[참조: Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)].
이와 같이 조제된 하이브리도마 세포는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지 속에 씨딩(seeding)하고 성장시킨다. 예를 들면, 모 골수종 세포가 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)를 결여하는 경우, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 전형적으로 하이포크산틴, 아미노프테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 유도할 것인데, 이 물질은 HGPRT-결핍성 세포의 성장을 방지한다.
특정 구체예들는 선택된 항체 생산 세포에 의해 항체의 안전한 고수준 생산을 효율적으로 융합하고 지지하며, HAT 배지와 같은 배지에 민감한 골수종 세포를 사용한다. 이들 골수종 중에서, 세포주는 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재의 살크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)에서 구입할 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양, 및 미국 메릴랜드주 록빌 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션에서 구입할 수 있는 SP-2 또는 X63-Ag8.653 세포로부터 유도된 것들과 같은 뮤린 골수종 주이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는 또한 인간 단클론 항체의 생산을 위해 기술되어 왔다[참조: Kozbor, J. Immunol, 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)].
하이브리도마 세포가 성장하고 있는 배양물 배지는 인간 CD 19 항원에 대하여 지시된 단클론 항체의 생산을 위해 검정한다. 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단클론 항체의 결합 특이성은 면역침전법 또는 시험관내 결합 검정, 예를 들면, 방사면역검정(RIA) 또는 효소 결합된 면역흡수성 검정(ELISA)에 의해 측정할 수 있다.
목적하는 특이성, 친화성 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인된 후에, 클론은 희석 방법들을 제한함으로서 서브클로닝(subcloning)하고 표준 방법으로 성장시킬 수 있다[참조: Goding, 단클론 항체: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]. 이러한 목적으로 적합한 배양물 배지는, 예를 들면, D-MEM 또는 RPMI 1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장할 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 단클론 항체는, 예를 들면, 단백질 A-세파로즈, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 방법으로 배양물 배지, 복수 유체 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
6.5.2. 재조합체 DNA 기술
본원에 기술된 항-CD 19 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 방법(예를 들면, 항-CD 19 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용함으로써)을 사용하여 쉽사리 분리되고 차례로 배열된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 공급원으로서 작용한다. 일단 분리되면, DNA는 발현 벡터 내로 위치할 수 있으며, 이 벡터는 이후에 이. 콜라이 세포, 시미안 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 기타의 경우 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포 내로 형질감염되어 재조합체 숙주 세포 내에 항-CD 19 항체의 합성을 수득한다.
파지 표시 방법에서, 작용성 항체 도메인은 이들을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 운반하는 파지 입자의 표면에 표시된다. 특히, VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA 서열은 cDNA 라이브러리(예: 영향을 받은 조직의 인간 또는 쥐 cDNA 라이브러리)로부터 증폭된다. TVH and VL 도메인을 암호화하는 DNA는 PCR에 의해 scFv 링커와 함께 재조합되며 파지미드 벡터(phagemid vector) 내로 클로닝된다. 벡터는 이. 콜라이 내로 전기천공되고 이. 콜라이는 헬퍼 파지로 감염된다. 이들 방법에 사용된 파지는 전형적으로 fd 및 M13을 포함하는 필라멘트성 파지이고 VH 및 VL 도메인은 일반적으로 재조합적으로 융합되어 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 중의 하나를 수득한다. 특정 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현하는 파지는, 예를 들면, 고체 표면 또는 비드에 결합되거나 포착된 표지화된 항원 또는 항원을 사용하여, 항원으로 선택 또는 동정될 수 있다. 본 발명의 항체를 조제하는 데 사용할 수 있는 파지 표시 방법의 예는 문헌[참조: Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods, 182:41-50; Ames et al, 1995, J. Immunol. Methods, 184: 177-186; Kettleborough et al, 1994, Eur. J. Immunol, 24:952-958; Persic et al, 1997, Gene, 187:9-18; Burton et al, 1994, Advances in Immunology, 57: 191- 280; International Application No. PCT/GB91/O1 134; International Publication Nos. WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982, WO 95/20401, and WO97/13844; and U.S. 특허 Nos. 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743, and 5,969,108; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다]에 기술된 것들을 포함한다.
상기 참조 문헌들에 기술된 바와 같이, 파지 선택 후에, 파지로부터의 영역을 암호화하는 항체는 분리하고 사용하여 인간 항체, 또는 어떠한 다른 목적하는 항원 결합 단편을 포함하는 전항체를 생성시킬 수 있고, 예를 들면, 하기하는 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 세균을 포함하는 어떠한 목적하는 숙주에서 발현시킬 수 있다. Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편들 재조합적으로 생산하는 기술은 또한 문헌[참조: PCT 공보 No. WO 92/22324; Mullinax et al, 1992, BioTechniques, 12(6):864- 869; Sawai et al, 1995, AJRI, 34:26-34; and Better et al, 1988, Science, 240: 1041-1043](참조함으로써 상기 문헌들의 전문이 본원에 통합된다)에 기술된 것들과 같이 당해 분야에 공지된 방법들을 사용할 수 있다.
항체는 문헌[참조: McCafferty et al, Nature, 348:552-554 (1990). Clackson et al, Nature, 352:624-628 (1991)]에 기술된 기술을 사용하여 발생된 항체 파지 라이브러리로부터 분리할 수 있다. 마크스(Marks) 등은 문헌[참조: J. Mol Biol, 222:581-597 (1991)]에서 파지 라이브러리를 사용하여 쥐 및 인간 항체를 각각 분리하는 것을 기술하고 있다. 쇄 셔플링은 고 친화성(nM 범위) 인간 항체(Marks et al, Bio/Technology, 10:779-783 (1992)) 및 또한 조합적 감염의 생성 및 매우 큰 파지 라이브러리를 구성하는 전략으로서의 생체내 재조합에서 사용할 수 있다[참조: Waterhouse et al, Nuc. Acids. Res., 21 :2265-2266 (1993)]. 따라서, 이들 기술은 항-CD 19 항체의 분리를 위한 통상적인 단클론 항체 하이브리도마 기술에 대한 이용가능한 대안이다.
전항체를 발생시키기 위하여, VH 또는 VL 뉴클레오타이드 서열, 제한 부위, 및 제한 부위를 보호하기 위한 플랭킹 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 사용하여 scFv 클론에서 VH 또는 VH 서열을 증폭시킬 수 있다. 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 클로닝 기술을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인을 중쇄 불변 영역, 예를 들면, 인간 감마 4 불변 영역을 발현하는 벡터 내로 클로닝할 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인은 경쇄 불변 도메인, 예를 들면, 인간 카파 또는 감마 불변 도메인을 발현하는 벡터 내로 클로닝할 수 있다. VH 또는 VL 도메인을 발현하기 위한 벡터는 EF-1α 프로모터, 분비 시그널, 가변 도메인에 대한 클로닝 부위, 불변 도메인, 및 네오마이신과 같은 선택 마커를 포함할 수 있다. VH 및 VL 도메인은 또한 필요한 불변 영역을 발현하는 하나의 벡터 내로 클로닝할 수 있다. 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 변환 벡터는 이후에 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기술을 이용하여, 세포주 내로 동시-핵내주입시켜 전장 항체, 예를 들면, IgG를 발현하는 안정한 또는 일시적인 세포주를 발생시킨다.
DNA는 또한, 예를 들면, 동종 쥐 서열 대신의 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 암호화 서열로 치환[참조: U.S. 특허 No. 4,816,567; Morrison et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 81 :6851 (1984))]하거나, 또는 비-면역글로불린 폴리펩타이드에 대한 암호화 서열의 전부 또는 일부를 면역글로불린 암호화 서열에 공유 결합시킴으로써 변형시킬 수 있다.
6.6. 키메라 항체
본원의 항-CD 19 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 항체 부류 또는 아류에 속하거나 특정 종으로부터 유도된 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 이와 동종인 반면, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 쇄(들)의 다른 부분이 다른 항체 부류 또는 아류 및 또한 이러한 항체의 단편에 속하거나 다른 종으로부터 유도된 항체내 상응하는 서열과 동일하거나 이와 동종인 키메라 항체(면역글로불린)을 포함한다[참조: U.S. 특허 No. 4,816,567; Morrison et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 81 :6851-6855 (1984)]. 본원에서 관심있는 키메라 항체는 인간이 아닌 영장류(예를 들면, 비비, 붉은털 원숭이 또는 시노몰구스 원숭이와 같은 Old World Monkey) 및 인간 불변 영역 서열(미국 특허번호 5,693,780호)로부터 유도된 가변 도메인 항원-결합 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
6.7. 변화된/돌연변이체 항체
본원에 기술된 조성물 및 방법의 항-CD19 항체는 돌연변이체 항체일 수 있다. 본원에서 사용된, "항체 돌연변이체" 또는 "변화된 항체"는, 항-CD 19 항체 중의 아미노산 서열들 중의 하나 이상이 변형된 항-CD 19 항체의 아미노산 서열을 나타낸다. 항-CD 19 항체의 아미노산 서열에 대한 변형은, 효과기 기능을 증진시킬 수 있는 항체의 Fc 부분에 대한 변형 및/또는 항원에 대한 이의 항체의 친화성 또는 항원항체결합성을 증진시킬 수 있는 서열에 대한 변형을 포함한다.
본 발명은 따라서 본원에 기술된 인간, 인간화된 및 키메라 항-CD 항체, 및 또한 변화된 인간 CD 19 결합 특성: 예를 들면, 변화된 결합상수 k0N, 해리상수 k0FF, 및/또는 평형상수 또는 결합 친화도 KD를 나타내는 것을 포함하지만 이에 국한되지 않는 변화된/돌연변이 유도체에 관한 것이다. 특정 구체예들에서, 본원에 기술된 항-CD 19 항체의 KD, 또는 인간 CD 19에 대한 이의 변화된/돌연변이 유도체는 약 106M, 10 7M, 10 8M, 또는 109M에 불과할 수 있다. 본 발명의 항체, 또는 이의 변화된/돌연변이 유도체의 이러한 결합 특성을 측정하기 위한 방법 및 시약은 당해 분야에 공지되어 있고/있거나 시판되고 있다[참조: 상기한 것들 및, 예를 들면, U.S. 특허 No. 6,849,425, U.S. 특허 No. 6,632,926, U.S. 특허 No. 6,294,391, 및 U.S. 특허 No. 6,143,574; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다]. 더구나, 이러한 동적 분석물에 대해 설계된 장비 및 소프트웨어는 시판되고 있다[참조: 예를 들면, Biacore® AlOO, and Biacore® 2000 instruments; Biacore International AB, Uppsala, Sweden].
상기 변형으로 본 명세서에 기재된 것과 동일한, 임의 공지된 항-CD19 항체 또는 항-CD19 항체가 만들어 질 수 있다. 그와 같은 변경된 항체는 공지된 항-CD19 항체와 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 반드시 갖는다. 예로써, 변경된 항체는 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열과 약 25% 내지 약 95%의 범위로 동일 또는 유사한 아미노산 서열을 가질 수 있다. 변경된 항체는 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열과, 적어도 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 변경된 항체는 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 또는 CDR3의 아미노산 서열과, 적어도 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 하나의 구체예에서, 변경된 항체는 인간 CD19 결합 능력을 유지할 수 있다. 어떤 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 HB 12B-(3-72/JH4) (서열번호:34), HB12A VH (서열번호:2) HB12B VH (서열번호:18), 7E12 VH (서열번호:102), 14H5 VH (서열번호:103), 15D1 VH (서열번호:104), 15D7 VH (서열번호:105), 16C4 VH (서열번호:106), 14H5-YG (서열번호:107), 14H5-DG (서열번호:108), 14H5-LG (서열번호:109), 1A7 VH, 3C3 VH, 3E5 VH, 3D4 VH, 9G7 VH (서열번호:191), 3B4 VH (서열번호:236), 3F11 VH 또는 6C11 VH (서열번호:192)의 아미노산 서열과, 적어도 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 동일한 VH를 포함할 수 있다. 어떤 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체는 표 1에서 열거된 VH 도메인, VL 도메인, 또는 CDR의 임의의 것의 아미노산 서열과, 적어도 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 동일한 VH를 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 변경된 항체는 HB12B-(3-72/JH4) (서열번호:34), HB12A VH (서열번호:2) HB12B VH (서열번호:18), 7E12 VH (서열번호:102), 14H5 VH (서열번호:103), 15D1 VH (서열번호:104), 15D7 VH (서열번호:105), 16C4 VH (서열번호:106), 14H5-YG (서열번호:107), 14H5-DG (서열번호:108), 14H5-LG (서열번호:109), 1A7 VH, 3C3 VH, 3E5 VH, 3D4 VH, 9G7 VH (서열번호:191), 3B4 VH (서열번호:236), 3F11 VH 또는 6C11 VH (서열번호:192)의 FW1, FW2, FW3, 또는 FW4 영역의 아미노산 서열과, 적어도 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 변경된 항체는 표 1에서 열거된 VH 또는 VL 도메인의 임의의 것의 FW1, FW2, FW3, 또는 FW4 영역의 아미노산 서열과, 적어도 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 변경된 항체는 본 명세서에 기재된 항-CD19 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 또는 CDR3의 아미노산 서열과, 적어도 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 어떤 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체는 HB12A VK (서열번호:4), HB12B VK (서열번호:20), HB12B-(A10-Jk4) (서열번호:52), HB12B-364987 (또는 364987) (서열번호:62), HB12B-3649 (또는 3649) (서열번호:68), HB12B-36 (또는 36) (서열번호:70), 7E12 VK (서열번호:110), 14H5 (서열번호:111), 15D1 (서열번호:112), 16C9 (서열번호:113), 3C3 VK (서열번호:193), 3E5 VK (서열번호:194), 3D4 VK (서열번호:195), 3F1 VK (서열번호:196), 5B5 VK (서열번호:197), 6F7 VK (서열번호:198), 1C11 VK (서열번호:199), 2B11 VK (서열번호:200), 2D10 VK (서열번호:201), 5C11 VK (서열번호:202), 5D4 VK (서열번호:203), 6C11 VK (서열번호:204), 9G7 VK (서열번호:205), 1H4 VK (서열번호:206), 또는 5C4 VK (서열번호:207)의 아미노산 서열과, 적어도 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 동일한 VL을 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예에서, 변경된 항체는 HB12A VK (서열번호:4), HB12B VK (서열번호:20), HB12B-(A10-Jk4) (서열번호:52), HB12B-364987 (또는 364987) (서열번호:62), HB12B-3649 (또는 3649) (서열번호:68), HB12B-36 (또는 36) (서열번호:70), 7E12 VK (서열번호:110), 14H5 (서열번호:111), 15D1 (서열번호:112), 16C9 (서열번호:113), 3C3 VK (서열번호:193), 3E5 VK (서열번호:194), 3D4 VK (서열번호:195), 3F1 VK (서열번호:196), 5B5 VK (서열번호:197), 6F7 VK (서열번호:198), 1C11 VK (서열번호:199), 2B11 VK (서열번호:200), 2D10 VK (서열번호:201), 5C11 VK (서열번호:202), 5D4 VK (서열번호:203), 6C11 VK (서열번호:204), 9G7 VK (서열번호:205), 1H4 VK (서열번호:206), 또는 5C4 VK (서열번호:207)의 FW1, FW2, FW3, 또는 FW4 영역의 아미노산 서열과, 적어도 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
서열에 대한 동일성 또는 유사성은 본원에서, 필요한 경우, 최대 비율의 서열 동일성을 성취하기 위하여, 서열을 정렬시키고 갭을 도입시킨 후에, 항-CD 19 항체 잔기와 동일(즉, 동일한 잔기)하거나 또는 유사한(즉, 공통 측쇄 특성을 기준으로 한 동일한 그룹으로부터의 아미노산 잔기; 하기 참조) 후보 서열에서 아미노산 잔기의 비율로서 정의한다. N-말단, C-말단, 또는 내부 연장, 결실, 또는 가변 도메인의 외부의 항체 서열 내로의 삽입 중의 어느 것도 서열 동일성 또는 유사성에 영향을 미치는 것으로 해석되지 않는다.
당해 분야에 공지된 "% 동일성"은 서열들을 비교함으로써 측정한 바와 같은, 2개의 폴리뉴클레오타이드 또는 2개의 폴리펩타이드 사이의 관계의 척도이다. 일반적으로, 비교되는 2개의 서열은 정렬되어 서열들 사이의 최대 상관관계를 제공한다. 2개의 서열의 정렬을 조사하고 측정된 2개의 서열들 사이의 정확한 아미노산 또는 뉴클레오타이드 일치성을 제공하는 위치들의 수를 정렬의 총 길이로 나누고 100을 곱하여 % 상동성 수치를 제공한다. 이러한 % 상동성 수치는 비교되는 서열의 전장(이는 동일하거나 매우 유사한 길이의 서열에 특히 적합하고 고 상동성이다)에 대하여 또는 더 짧은 정의된 길이(이는 동일하지 않은 길이의 서열에 더 적합하거나 더 낮은 수준의 상동성을 갖는다)에 대하여 측정할 수 있다.
예를 들면, 서열은 ".aln" 확장자를 갖는 파일을 생성하는 유닉스(Unix)하의 소프트웨어 클러스트로(software clustlaw)로 정렬될 수 있으며, 이 파일은 이후에.aln 파일을 여는 바이오에티드 프로그램(Bioedit program)(참조: Hall, T. A. 1999, BioEdit: 윈도우 95/98/NT에 대한 사용자 친화성 생물학적 서열 정렬 편집기 및 분석 프로그램. Nucl. Acids. Symp. Ser. 41 :95-98) 내로 도입시킬 수 있다. 바이오에디트 윈도우에서, 개개의 서열을 선택(한번에 2개)할 수 있고 이를 정렬할 수 있다. 이 방법은 전체 서열의 비교를 허용한다.
2개 이상의 서열의 동일성을 비교하는 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있다. 따라서, 예를 들면, 프로그램들이 위스콘신 서열 분석 패키지 버젼 9.1(Wisconsin Sequence Analysis Package, version 9.1)(참조: Devereux J. et al, Nucleic Acids Res., 12:387-395, 1984; 구입처: Genetics Computer Group, Madison, WI, USA)에서 이용가능하다. 2개의 서열들 사이의 동일성 비율의 측정은 수학적 알고리즘을 이용하여 성취할 수 있다. 예를 들면, 프로그램 BESTFIT 및 GAP를 사용하여 2개의 폴리뉴클레오타이드 사이의 % 동일성 및 2개의 폴리펩타이드 서열 사이의 동일성을 측정할 수 있다. BESTFIT는 Smith 및 Waterman의 "국소 상동성" 알고리즘(Advances in Applied Mathematics, 2:482-489, 1981)을 이용하고 2개의 서열들 사이의 유사성의 최고 단일 영역을 찾는다. BESTFIT는 길이가 유사하지 않은 2개의 폴리뉴클레오타이드 또는 2개의 폴리펩타이드 서열을 비교하는 데 더 적합한데, 이 프로그램은 더 짧은 서열이 더 긴 것의 일부를 나타낸다고 추정한다. 비교시, GAP는 Neddleman 및 Wunsch의 알고리즘(참조: J. Mol. Biol., 48:443-354, 1970)에 따르는 "최대 유사성"을 발견하는 2개의 서열을 정렬한다. GAP는 길이가 대략 동일한 서열들을 비교하는 데 더 적합하며 정렬은 전체 길이에 대하여 기대된다. 예를 들면, 각각의 프로그램에 사용된 파라메터 "갭 중량(Gap Weight)" 및 "길이 중량(Length Weight)"은 각각 폴리뉴클레오타이드에 대해 50 및 3이고 폴리펩타이드에 대하여 12 및 4이다. 본 발명의 일부 면에서, % 동일성 및 유사성은, 비교되는 2개의 서열이 최적으로 정렬되는 경우 측정한다.
서열들 사이의 동일성 및/또는 유사성을 측정하기 위한 기타 프로그램은 또한 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들면, BLAST 계열의 프로그램(참조: 'Karlin & Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 87:2264-2268; Karlin & Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 90:5873-5877'에서와 같이 수정됨; 'National Center for Biotechnology Information (NCB), Bethesda, MD, USA'로부터 이용가능하며, NCBI의 홈페이지 www.ncbi.nlm.nih.gov를 통해 접근가능함)가 있다. 이들 프로그램은 2개의 서열들의 비교를 위해 이용된 수학적 알고리즘의 비제한적인 예이다. 이러한 알고리즘은 문헌[참조: Altschul et al, 1990, J. Mol. Biol, 215:403-410]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램 내로 통합된다. BLAST 뉴클레오타이드 연구는 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 단어길이 = 12로 수행하여 본 발명의 항-CD 19 항체의 전부 또는 일부를 암호화하는 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 연구는 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 단어길이 = 3으로 수행하여 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적으로 갭핑된 정렬을 수득하기 위하여, 갭핑된 BLAST를 문헌[참조: Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402]에 기술된 바와 같이 이용할 수 있다. 또한, PSI-블라스트(Blast)를 사용하여 분자들(Id.) 사이의 분명한 관계를 검출하는 반복된 연구를 수행할 수 있다. BLAST, 갭핑된 BLAST, 및 PSI-블라스트 프로그램을 사용하는 경우, 각각의 프로그램(예: XBLAST 및 NBLAST)의 결함 파라메터를 사용할 수 있다[참조: http://www.ncbi.nlm.nih.gov].
당해 기술분야에 공지된 서열들 사이의 동일성 및/또는 유사성을 측정하기 위한 프로그램의 다른 비제한적인 예는 FASTA (참조: Pearson W.R. and Lipman D. J., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:2444-2448, 1988; Wisconsin Sequence Analysis Package의 일부로서 이용가능함)이다. BLOSUM62 아미노산 치환 매트릭스(참조: Henikoff S. and Henikoff J.G., Proc. Natl. Acad. ScL USA, 89: 10915-10919, 1992)를, 뉴클레오타이드 서열이 비교 전에 아미노산 서열 내로 먼저 해독되는 경우를 포함하여 폴리펩타이드 서열 비교에 사용할 수 있다.
아미노산 서열들 사이의 동일성 및/또는 유사성을 측정하기 위한 당해 분야에 공지된 프로그램의 또 다른 비제한적 예는 프로그램: 블로섬62, 갭 중량 8, 길이 중량 2의 결함 알고리즘 및 파라메터 셋팅으로 이용되는 SeqWeb 소프트웨어(GCG Wisconsin Package: Gap 프로그램에 대한 웹-기반 인터페이스)이다.
2개의 서열들 사이의 동일성 퍼센트는 갭을 허용하거나 허용하지 않고, 상기한 것들과 유사한 기술을 사용하여 측정할 수 있다. 동일성 퍼센트를 계산함에 있어서, 전형적으로 정확한 조화가 계산된다.
프로그램 BESTFIT를 사용하여 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열에 대한 조회(query) 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드의 % 동일성을 측정할 수 있으며, 여기서 조회 및 참조 서열은 최적으로 정렬되며 프로그램의 파라메터는 결함 값에서 설정된다.
변화된 항체를 발생시키기 위하여, 하나 이상의 변화(예: 치환)를 종 의존성 항체의 고가변성 영역들 중의 하나 이상에 도입한다. 골격 영역 잔기 중의 하나 이상의 변화(예: 치환)은 또한 항-CD19 항체 내로 도입될 수 있으며, 여기서 이들은 제2 포유동물 종으로부터의 항원에 대한 항체 돌연변이체의 결합 친화성에 있어서의 개선을 생성한다. 개질시키기 위한 골격 영역 잔사의 예는 항원을 직접 공유결합하는 것들(Amit et al, Science, 233:747-753 (1986)); CDR의 형태와 상호작용/이에 영향을 미치는 것들(Chothia et al, J. Mol. Biol, 196:901-917 (1987)); 및/또는 VL-VH 인터페이스에 관여하는 것들(EP 239 400B 1)을 포함한다. 특정 구체예들에서, 하나 이상의 이러한 골격 영역 잔기의 개질은 제2 포유동물 종으로부터의 항원에 대한 항체의 결합 친화성의 증진을 생성한다. 예를 들면, 약 1 내지 약 4개의 골격 잔기는 본 발명의 이러한 구체예에서 변할 수 있다. 종종, 이는, 고가변성 영역 잔기들 중의 어느 것도 변하지 않은 경우에도, 예비임상시험에 사용하기에 적합한 항체 돌연변이체를 생성하기에 충분할 수 있다. 보통, 그러나, 변화된 항체는 추가의 고가변성 영역 변화를 포함할 것이다.
변화되는 고가변성 영역 잔기는 무작위적으로 변할 수 있으며, 특히 제2 포유동물 종으로부터의 항원에 대한 항-CD 19 항체의 출발 결합 친화성이, 이러한 무작위적으로 생성된 변화된 항체가 용이하게 스크리닝되는 경우 무작위적으로 변할 수 있다.
이러한 변화된 항체를 생성시키기 위한 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"이라고 부른다[참조: Cunningham and Wells, Science, 244: 1081-1085(1989)]. 여기서, 하나 이상의 고가변성 영역 잔기는 알라닌 또는 폴리알라닌 잔기에 의해 대체되어 아미노산과 제2 포유류 종으로부터의 항원과의 상호작용에 영향을 미친다. 치환에 대한 작용성 민감성을 입증하는 이러한 고가변성 영역 잔기는 이후에 치환의 부위에서 또는 이 부위에 대해 추가의 또는 기타 돌연변이를 도입함으로써 정제된다. 따라서, 아미노산 서열 변화를 도입하기 위한 부위는 예정되지만, 돌연변이의 특징 그 자체는 예정될 필요가 없다. 이 방법으로 생산된 Ala-돌연변이체는 본원에 기술된 바와 같이 이의 생물학적 활성에 대해 스크리닝한다.
이러한 변화된 항체를 생성하는 또 다른 방법은 파지 표시를 사용하는 친화성 성숙을 포함한다[참조: Hawkins et al, J. Mol. Biol, 254:889-896 (1992) and Lowman et al, Biochemistry, 30(45): 10832-10837 (1991)]. 간단히 말해서, 수개의 고가변성 영역 부위(예: 6-7개 부위)는 돌연변이되어 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노산 치환을 생성시킨다. 이와 같이 생성된 항체 돌연변이체는 각각의 입자 내에 포장된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합체로서 필라멘트성 파지 입자로부터의 1가 방식으로 표시된다. 이후에, 파지-표시된 돌연변이체는 본원에 기술된 바와 같이 이의 생물학적 활성(예: 결합 친화성)에 대해 스크리닝한다.
항체 서열에서의 돌연변이는, 변화가 작용적으로 균등한 항-CD 19 항체를 생성한다는 점에서, 아미노산 서열에 인접하고/하거나 이의 내부에 있지만 "조용한" 변화를 생성하는 아미노산 잔기의 보존적 치환 또는 융합 단백질을 생성하는 부가를 포함하는, 부가, 내부 결실을 포함하는, 결실, 치환을 포함할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성, 및/또는 포함되는 잔기의 양쪽성 특성에서의 유사성을 기준으로 하여 조제할 수 있다. 예를 들면, 비-극성(소수성) 아미노산은 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 및 메티오닌을 포함하고; 극성 중성 아미노산은 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴, 및 글루타민을 포함하고; 양으로 하전된(염기성) 아미노산은 아르기닌, 라이신 및 히스티딘을 포함하며; 음으로 하전된(산성) 아미노산은 아스파르트산 및 글루타민산을 포함한다. 또한, 글리신 및 프롤린은 쇄 배향에 영향을 줄 수 있는 잔기이다. 비-보존적 치환은 다른 류의 구성원을 위한 이들 부류들 중의 하나의 구성원을 교환하는 것을 동반한다. 더구나, 목적하는 경우, 비-전통적인 아미노산 또는 화학적 아미노산 유사체는 항체 서열 내로의 치환 또는 부가로서 도입될 수 있다. 비-전통적인 아미노산은 D-이성체의 일반적인 아미노산, α-아미노이소부티르산, 4-아미노부티르산, Abu, 2-아미노 부티르산, γ-Abu, ε-Ahx, 6-아미노 헥사노산, Aib, 2-아미노 이소부티르산, 3-아미노 프로피온산, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 하이드록시프롤린, 사르코신, 시트룰린, 시스테산, t-부틸글리신, t-부틸알라닌, 페닐글리신, 사이클로헥실알라닌, β-알라닌, 플루오로-아미노산, 디자이너 아미노산, 예를 들면, β-메틸 아미노산, Cα-메틸 아미노산, Nα-메틸 아미노산, 및 아미노산 유사체를 일반적으로 포함하지만 이에 국한되지 않는다.
또 다른 구체예에서, 변형을 위해 선택된 부위는 파지 표시(상기 참조)를 사용하여 성숙시킨 친화성이다.
당해 기술분야에 공지된 돌연변이유발을 위한 임의의 기술을 사용하여, 항체 서열에서의 아미노산 치환을 조제할 목적으로, 또는 추가의 조작을 촉진시키기 위한 제한 부위를 생성/결실하기 위한, DNA 서열에서의 개개의 뉴클레오타이드를 변형일 수 있다. 이러한 기술은 시험내 부위-지향된 돌연변이유발에서, 화학적 돌연변이유발[참조: Kunkel, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 82:488 (1985); Hutchinson, C. et al, J. Biol. Chem., 253:6551 (1978)], 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발(참조: Smith, Ann. Rev. Genet., 19:423-463 (1985); Hill et al., Methods Enzymol, 155:558-568 (1987)), PCR-계 중첩 연장(Ho et al, Gene, 77:51-59 (1989)), PCR-계 메가프라이머 돌연변이유발(Sarkar et al, Biotechniques, 8:404-407 (1990)) 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 변형은 이중가닥 디데옥시 DNA 시퀀싱으로 확인할 수 있다.
본 발명의 특정 구체예들에서, 항-CD 항체를 변형시켜 융합 단백질, 즉 항체 또는 이의 단편을 생성하고, 이종 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드로 융합시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체의 부분으로 융합된 단백질은 항체-지향된 효소 전구약물 요법(ADEPT)의 효소 성분이다. 항-CD 19 항체와의 융합 단백질로서 가공될 수 있는 기타 단백질 또는 폴리펩타이드의 예는 리신, 아브린, 리보뉴클레아제, DN아제 I, 스타필로코쿠칼 엔테로톡신-A, 포키위드(pokeweed) 항-바이러스 단백질, 겔로닌, 디프테린 톡신, 슈도모나스 엑소톡신, 및 슈도모나스 엔도톡신을 포함하지만 이에 국한되지 않는다[참조: 예를 들면, Pastan et al, Cell, 47:641 (1986), and Goldenberg et al, Cancer Journal for Clinicians, 44:43 (1994)]. 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비-결합성 활성 단편, 외부독소 A 쇄(슈도모나스 에에루기노사), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리가타 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아 억제제, 큐르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다[참조: 예를 들면, 1993년 10월 28일자로 공개된 WO 93/21232].
추가의 융합 단백질은 유전자-셔플링, 모티프-셔플링, 엑손-셔플링, 및/또는 코돈-셔플링(종합해서 "DNA 셔플링"이라고 함)의 기술을 통해 생성할 수 있다. DNA 셔플링을 사용하여 항-CD 19 항체 또는 이의 단편(예를 들면, 고 친화성 및 저 용해율을 갖는 항체 또는 이의 단편)의 활성을 변화시킬 수 있다. 일반적으로, 미국 특허 제5,605,793호; 제5,811,238호; 제5,830,721호; 제5,834,252호; 및 제5,837,458호, 및 문헌 'Patten et al, 1997, Curr. Opinion Biotechnol, 8:724-33 ; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson et al, 1999, J. Mol Biol, 287:265-76; and Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308- 313' (이들 특허 및 공보의 각각은 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합된다)을 참조하라. 항체는 추가로 문헌[참조: 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합된, U.S. Publication 20030118592, U.S. Publication 200330133939, 및 PCT 공보 WO 02/056910]에 기술된 바와 같은 결합-도메인 면역글로불린 융합 단백질일 수 있다.
본 발명의 특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체는 모 항체이다. "모 항체"는 본원에 기술된 바와 같은 변화된/돌연변이체 항체와 비교하여 이의 하나 이상의 고가변성 영역에서 또는 이에 인접한 하나 이상의 아미노산 잔기가 결여될 수 있거나 결핍성일 수 있는 아마노산 서열을 포함하는 항체이다. 따라서, 모 항체는 본원에 기술된 항체 돌연변이체의 상응하는 고가변성 영역 보다 더 짧은 고가변성 영역을 가질 수 있다. 모 폴리펩타이드는 천연 항체 서열(즉, 천연발생 대립형질 변이체를 포함하는 천연발생의 것) 또는 천연발생 서열의 미리 존재하는 아미노산 서열 변형(예: 기타 삽입, 결실 및/또는 치환)을 갖는 항체 서열을 포함할 수 있다. 모 항체는 인간화된 항체 또는 인간 항체일 수 있다.
6.8. 이중특이성 항체
이중특이성 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이성 항체는 B 세포 표면 마커의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이러한 다른 항체는 제1 B 세포 마커를 결합할 수 있고 제2 B 세포 표면 마커를 추가로 결합할 수 있다. 항-B 세포 마커 결합 아암은 또한 T 세포 수용체 분자(예: CD2 또는 CD3), 또는 IgG (FcγR)에 대한 Fc 수용체와 같은 백혈구 상의 트리거링 분자(triggering molecule)에 결합하는 아암과 조합되어 B 세포에 대한 세포 방어 메카니즘에 초점을 맞출 수 있다. 또한, 이중특이성 항체를 사용하여 B 세포에 대한 세포독성제를 국부화할 수 있다. 이들 항체는 B 세포 마커-결합 아암 및 세포독성제(예: 사포린, 항-인터페론-α, 빈카 알칼로이드, 리신 A 쇄, 메톨라-에세이트 또는 방사활성 동형 합텐)를 결합하는 아암을 지닐 수 있다. 이중특이성 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예: F(ab '): 이중특이성 항체)으로서 조제할 수 있다.
이중특이성 항체의 조제방법은 문헌[참조: 예를 들면, Millstein et al, Nature, 305:537-539 (1983); Traunecker et al, EMBOJ., 10:3655-3659 (1991); Suresh et al, Methods in Enzymology, 121 :210 (1986); Kostelny et al, J. Immunol, 148(5): 1547-1553 (1992); Hollinger et al, Proc. Natl Acad. ScL USA, 90:6444-6448 (1993); Gruber et al, J. Immunol, 152:5368 (1994); U.S. 특허 Nos. 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,81; 95,731,168; 4,676,980; and 4,676,980, WO 94/04690; WO 91/00360; WO 92/200373; WO 93/17715; WO 92/08802; and EP 03089.]에 공지되어 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-CD 항체가 이중특이성인 경우, 항-CD 19 항체는 인간 또는 인간화될 수 있으며, 인간 CD 19 및 T 세포 위의 에피토프에 대한 특이성을 가질 수 있거나 또는, 예를 들면, 세포 사멸을 초래하는 단핵세포/대식세포 및/또는 천연 킬러 세포와 같은 인간 효과기 세포에 결합할 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 항체는 제1 및 제2 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이성 항체이며, 여기서 제1 항원은 인간 CD 19이고 제2 항원은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA, 및/또는 FcγRIV로 이루어진 그룹으로부터 선택된 Fc 감마 수용체이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 항-CD 항체는 인간 CD 19 및 FcγRIIB에 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이성 항체이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 항체는 인간 CD 19 및 인간 FcγRIIB에 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이성 항체이다.
6.9. 변이체 Fc 영역
본 발명은 변이체 Fc 영역을 포함하는 단백질의 제형을 제공한다. 즉, 비 천연발생 Fc 영역, 예를 들면, 하나 이상의 비 천연발생 아미노산 잔기를 포함하는 Fc 영역. 또한, 본 발명의 변이체 Fc 영역에 의해 포함되는 것은 아미노산 결실, 부가 및/또는 변형을 포함하는 Fc 영역이다.
본원에 사용된 Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 제외한 항체의 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. 따라서, Fc는 IgA, IgD, 및 IgG의 최종 2개의 불변 영역을 나타내며, IgE 및 IgM의 최종 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 이들 도메인에 대한 가요성 힌지 N-말단을 나타낸다. IgA 및 IgM에 있어서, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG에 있어서, Fc는 면역글로불린 도메인 C감마2 및 C감마3 (Cγ2 및 Cγ3)을 포함하고 C감마1 (Cγ1)과 C감마2 (Cγ2) 사이의 힌지를 포함한다. Fc 영역의 경계는 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 이의 카복시 말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하도록 정의되며, 여기서 명명법은 카밧 등[참조: Kabat et al. (1991, N1H Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, VA]에서와 같은 EU 인덱스에 따른다. "카밧에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스"는 상기한 카밧에 기술된 바와 같은 인간 IgGl EU 항체의 잔기 명명법을 나타낸다. Fc는 분리상태의 이러한 영역, 또는 항체, 항체 단편, 또는 Fc 융합 단백질의 관계에서 이러한 영역을 나타낼 수 있다. Fc 변이체 단백질은, Fc의 비 천연발생 변이체인, 변이체 Fc 영역을 포함하는 단백질을 포함하지만 이에 국한되지 않은 Fc 영역을 포함하는 항체, Fc 융합, 또는 임의의 단백질 또는 단백질 도메인일 수 있다. 주: 다형성은 카밧 270, 272, 312, 315, 356, 및 358을 포함하지만 이에 국한되지 않는, 다수의 Fc 위치에서 관찰되어 왔고, 이에 따라 제공된 서열과 선행기술의 서열 사이에 약간의 차이점이 존재할 수 있다.
본 발명은 비교가능한 분자(예: 야생형 Fc 영역을 갖는 것을 제외하고 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질)에 대한 Fc 리간드(예: Fc 수용체, CIq)에 대한 변화된 결합 특성을 갖는 Fc 변이체 단백질을 포함한다. 결합 특성의 예는 결합 특이성, 평형 해리상수(KD), 해리 및 결합 속도(각각 koff 및 kon), 결합 친화성 및/또는 항원항체결합력을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 일반적으로 저 KD를 갖는 결합 분자(예: 항체와 같은 Fc 변이체 단백질)가 고 KD를 갖는 결합 분자에 바람직할 수 있다는 것이 이해된다. 그러나, 일부 경우 kon 또는 koff의 값은 KD의 값보다 더 관련이 있을 수 있다. 당해 분야의 숙련가들은, 어떠한 동력학 파라메터가 소정의 항체 적용에 가장 중요한지를 결정할 수 있다.
Fc 도메인의 리간드에 대한 Fc 도메인의 친화성 및 결합 특성은 Fc-FcγR 상호작용, 즉 즉 평형 방법(예: 효소 결합된 면역흡수성 검정(ELISA), 또는 방사면역검정(RIA)), 또는 동력학(예: BIACORE® 분석), 결합 검정, 경쟁적 억제 검정, 형광 공명 에너지 변환(FRET), 겔 전기영동 및 크로마토그래피(예: 겔 여과)를 포함하지만 이에 국한되지 않는 FcγR에 대한 Fc 영역의 특이적 결합을 측정하기 위한 당해 분야에 공지된 각종의 시험관내 검정 방법(생화학적 또는 면역학적 기준 검정)에 의해 측정할 수 있다. 이들 및 다른 방법은 시험되는 성분들의 하나 이상 위에 표지를 이용할 수 있고/있거나 발색성, 형광성, 발광성 또는 동위체형 라벨을 포함하지만 이에 국한되지 않은 각종 검출 방법을 사용할 수 있다. 결합 친화성 및 동력학에 대한 상세한 설명은 항체-면역원 상호작용에 초점을 맞추고 있는 문헌[참조: Paul, W.E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)]에서 찾아볼 수 있다.
일 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 하나 이상의 Fc 리간드에 대한 증진된 결합을 갖는다. 또 다른 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자의 것보다 2배 이상, 또는 3배 이상, 또는 5배 이상, 또는 7배 이상, 또는 10배 이상, 또는 20배 이상, 또는 30배 이상, 또는 40배 이상, 또는 50배 이상, 또는 60배 이상, 또는 70배 이상, 또는 80배 이상, 또는 90배 이상, 또는 100배 이상, 또는 200배 이상 큰 Fc 리간드에 대한 친화성을 갖는다. 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체에 대한 증진된 결합을 갖는다. 또 다른 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대한 증진된 결합을 갖는다. 추가의 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcγRIIB에 대한 증진된 결합을 갖는다. 하지만 또 다른 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcRn에 대한 증진된 결합을 갖는다. 하지만 또 다른 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 CIq에 대한 증진된 결합을 갖는다.
일 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 항체는 변이체 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 변이체 Fc 도메인은 비교가능한 비-변이체 Fc 도메인에 대하여 Fc 감마 수용체 HB에 대한 증진된 결합 친화성을 갖는다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 항체는 변이체 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 변이체 Fc 도메인은 비교가능한 비-변이체 Fc 도메인의 것보다 2배 이상, 또는 3배 이상, 또는 5배 이상, 또는 7배 이상, 또는 10배 이상, 또는 20배 이상, 또는 30배 이상, 또는 40배 이상, 또는 50배 이상,또는 60배 이상, 또는 70배 이상, 또는 80배 이상, 또는 90배 이상, 또는 100배 이상, 또는 200배 이상 큰 Fc 감마 수용체 HB에 대한 친화성을 갖는다.
Fc 영역을 포함하는 단백질의 혈청 반감기는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합 친화성을 증가시킴으로써 증가시킬 수 있다. 일 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 증진된 혈청 반감기를 갖는다.
"항체 의존성 세포 매개된 세포독성" 또는 "ADCC"는, 특정 세포독성 세포(예: 천연 킬러(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR) 상으로 결합된 분비된 Ig가 이들 세포독성 효과기 세포를 항원-함유 표적 세포에 특이적으로 결합되도록 하고 후속적으로 표적 세포를 세포독소로 사멸시키도록 할 수 있는 세포독성의 형태를 나타낸다. 표적 세포의 표면으로 향한 특이적 고친화성 IgG 항체는 세포독성 세포를 "아암"하고 이러한 사멸을 위해 절대적으로 필요하다. 표적 세포의 분해는 여분의 세포성이며, 직접적인 세포 대 세포 접촉을 필요로 하며, 상보체를 포함하지 않는다. 항체 외에도, 항원 함유 표적 세포에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 Fc 영역, 특히 Fc 융합 단백질을 포함하는 기타 단백질은 세포 매개된 세포독성에 영향을 미칠 수 있을 것이다. 간단히 하기 위하여, Fc 융합 단백질의 활성으로부터 수득되는 세포 매개된 세포독성은 또한 본원에서 ADCC 활성이라고 한다.
ADCC에 의한 표적 세포의 분해를 매개하기 위한 임의의 특정 Fc 변이체 단백질의 능력을 검정할 수 있다. ADCC 활성을 검정하기 위하여, 관심있는 Fc 변이체 단백질을 면역 효과기 세포와 병용한 표적 세포에 가하는 데, 이는 표적 세포의 세포분해를 일으키는 항원 항체 착체에 의해 활성화될 수 있다. 세포 분해는 일반적으로 분해된 세포로부터 라벨(예: 방사활성 물질, 형광 염료 또는 천연 세포내 단백질)의 방출에 의해 검출된다. 이러한 검정에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 천연 킬러(NK) 세포를 포함한다. 시험관내 ADCC 검정의 구체적인 예는 문헌[참조: Wisecarver et al., 1985 J Immunol Methods 79:277-282; Bruggemann et al., 1987, J Exp Med 166: 1351-1361; Wilkinson et al., 2001, J Immunol Methods 258: 183-191; Patel et al., 1995 J Immunol Methods 184:29-38]에 기재되어 있다. 관심있는 Fc 변이체 단백질의 ADCC 활성은 또한 생체내, 예를 들면, 문헌[참조: Clynes et al., 1998, Proc. Natl. Acad. ScL USA 95:652-656]에 기재된 바와 같은 포유동물 모델에서 평가할 수 있다.
일 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 증진된 ADCC 활성을 갖는다. 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자의 것보다 2배 이상, 3배 이상, 5배 이상, 10배 이상, 50배 이상, 또는 100배 이상 큰 ADCC 활성을 갖는다. 또 다른 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대한 증진된 결합을 가지며 비교가능한 분자에 대하여 증진된 ADCC 활성을 갖는다. 다른 구체예들에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 증진된 ADCC 활성 및 증진된 혈청 반감기 둘 다를 갖는다.
일 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 감소된 ADCC 활성을 갖는다. 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자의 것보다 2배 이상, 3배 이상, 5배 이상, 10배 이상, 50배 이상, 또는 100배 이상 작은 ADCC 활성을 갖는다. 또 다른 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대한 감소된 결합을 가지며 비교가능한 분자에 대하여 감소된 ADCC 활성을 갖는다. 다른 구체예들에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 감소된 ADCC 활성 및 증진된 혈청 반감기 둘 다를 갖는다.
"상보체 의존성 세포독성" 및 "CDC"는 상보체의 존재하의 표적 세포의 분해를 나타낸다. 상보체 활성화 경로는 상보체 시스템의 제1 성분을, 예를 들면, 동계 항원과 착체화된, 항체인 분자에 대한 상보체 시스템(CIq)의 제1 성분의 결합에 의해 개시된다. 상보체 활성화를 평가하기 위하여, 예를 들면, 문헌[참조: Gazzano-Santoro et al., 1996, J. Immunol. Methods, 202: 163]에 기술된 바와 같은 CDC 검정을 수행할 수 있다. 일 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 증진된 CDC 활성을 갖는다. 일 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자의 것보다 2배 이상, 3배 이상, 5배 이상, 10배 이상, 50배 이상, 또는 100배 이상 큰 CDC 활성을 갖는다. 다른 구체예들에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 대하여 증진된 CDC 활성 및 증진된 혈청 반감기 둘 다를 갖는다.
하나의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능 분자에 관해서 하나 이상의 Fc 리간드에 대한 결합을 감소시켰다. 또 하나의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능 분자보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 7배, 또는 적어도 10배, 또는 적어도 20배, 또는 적어도 30배, 또는 적어도 40배, 또는 적어도 50배, 또는 적어도 60배, 또는 적어도 70배, 또는 적어도 80배, 또는 적어도 90배, 또는 적어도 100배, 또는 적어도 200배 더 낮은 Fc 리간드에 대한 친화도를 갖는다. 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체에 대한 결합을 감소시켰다. 또 하나의 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대한 결합을 감소시켰다. 추가 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 Fc 변이체는 비교가능 분자보자 적어도 5배 더 낮은 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대한 친화도를 가지며, 여기서, 상기 Fc 변이체는 비교가능 분자의 친화도의 약 2배 내인 Fc 수용체 FcγRIIB에 대한 친화도를 갖는다. 또 하나의 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcRn에 대한 결합을 감소시켰다. 또 하나의 특정 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능 분자에 관해서 C1q에 대한 결합을 감소시켰다.
하나의 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하고, 여기서, Fc 영역은, 카밧에서 나타나 있는 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같이 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 251, 252, 254, 255, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 279, 280, 284, 292, 296, 297, 298, 299, 305, 313, 316, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 339, 341, 343, 370, 373, 378, 392, 416, 419, 421, 440 및 443으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 당업자에게 공지된 추가 및/또는 대안적인 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (참고, 예를 들어, U.S. 특허 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT 특허 공보 WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 및 WO 06/020114).
하나의 구체예에서, 본 발명은 제형을 제공하고, 여기서, Fc 영역은 카밧에서 나타나 있는 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같이, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 251, 252, 254, 255, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 279, 280, 284, 292, 296, 297, 298, 299, 305, 313, 316, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 339, 341, 343, 370, 373, 378, 392, 416, 419, 421, 440 및 443으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 당업자에게 공지된 추가 및/또는 대안적인 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (참고, 예를 들어, U.S. 특허 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT 특허 공보 WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 및 WO 06/020114).
특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하고, 여기서, Fc 영역은 카밧에서 나타나 있는 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같이, 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241 R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 251F, 252Y, 254T, 255L, 256E, 256M, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H, 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 305I, 313F, 316D, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 331G, 331A, 331L, 331M, 331F, 331W, 331K, 331Q, 331E, 331S, 331V, 331I, 331C, 331Y, 331H, 331R, 331N, 331D, 331T, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, 332A, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 440Y 및 434W로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 비천연 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 당업자에게 공지된 추가 및/또는 대안적인 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (참고, 예를 들어, U.S. 특허 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT 특허 공보 WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752 및 WO 05/040217).
특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하고, 여기서, Fc 영역은 카밧에서 나타나 있는 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같이, 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241R, 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 251F, 252Y, 254T, 255L, 256E, 256M, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H, 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 305I, 313F, 316D, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 331G, 331A, 331L, 331M, 331F, 331W, 331K, 331Q, 331E, 331S, 331V, 331I, 331C, 331Y, 331H, 331R, 331N, 331D, 331T, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, 332A, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 440Y 및 434W로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 비천연 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 당업자에게 공지된 추가 및/또는 대안적인 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (참고, 예를 들어, U.S. 특허 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT 특허 공보 WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752 및 WO 05/040217).
또 다른 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 239, 330 및 332로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 239D, 330L 및 332E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 선택적으로, Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴, 252, 254 및 256으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 추가의 비 천연발생 아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 239D, 330L 및 332E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 비 천연발생 아미노산, 및 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴바와 같은, 252Y, 254T 및 256E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 비 천연발생 아미노산을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234, 235 및 331로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234F, 235F, 235Y 및 331S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 추가의 특정 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 카밧으로 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234F, 235F 및 331S 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 또 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 카밧으로 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234F, 235Y 및 331S 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 선택적으로, Fc 영역은 카밧으로 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 252, 254 및 256으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하고, 여기서 Fc 영역은 카밧으로 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234F, 235F, 235Y, 및 331S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 비 천연발생 아미노산; 및 카밧으로 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 252Y, 254T 및 256E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 비 천연발생 아미노산을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하는데, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 239, 330 및 332로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 239D, 330L, 및 332E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 선택적으로, Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 252, 254 및 256으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 추가의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 숫자로 나타낸, 239D, 330L 및 332E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산, 및 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 252Y, 254T 및 256E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하는데, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234, 235 및 331로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 234F, 235F, 235Y 및 331S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 선택적으로, Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 252, 254 및 256으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 추가의 비 천연발생 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 제형을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카밧에서 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 숫자로 나타낸, 234F, 235F, 235Y 및 331S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산, 및 카밧에서 나타낸 바와 같이 EU 인덱스에 의해 번호를 매긴 바와 같은, 252Y, 254T 및 256E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 적어도 하나의 비 천연발생 아미노산을 포함한다.
일 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 문헌[참조: Ghetie et al., 1997, Nat Biotech. 15:637-40; Duncan et al, 1988, Nature 332:563-564; Lund et al., 1991, J. Immunol 147:2657-2662; Lund et al, 1992, Mol Immunol 29:53-59; Alegre et al, 1994, Transplantation 57: 1537-1543; Hutchins et al., 1995, Proc Natl. Acad Sd USA 92: 11980-11984; Jefferis et al, 1995, Immunol Lett. 44: 111-117; Lund et al., 1995, Faseb J 9: 115-119; Jefferis et al, 1996, Immunol Lett 54: 101-104; Lund et al, 1996, J Immunol 157:4963-4969; Armour et al., 1999, Eur J Immunol 29:2613-2624; Idusogie et al, 2000, J Immunol 164:4178-4184; Reddy et al, 2000, J Immunol 164: 1925-1933; Xu et al., 2000, Cell Immunol 200: 16-26; Idusogie et al, 2001, J Immunol 166:2571-2575; Shields et al., 2001, J Biol Chem 276:6591-6604; Jefferis et al, 2002, Immunol Lett 82:57-65; Presta et al., 2002, Biochem Soc Trans 30:487-490; U.S. 특허 Nos. 5,624,821; 5,885,573; 5,677,425; 6,165,745; 6,277,375; 5,869,046; 6,121,022; 5,624,821; 5,648,260; 6,528,624; 6,194,551; 6,737,056; 6,821,505; 6,277,375; U.S. 특허공보 Nos. 2004/0002587 및 PCT 공개 WO 94/29351; WO 99/58572; WO 00/42072; WO 02/060919; WO 04/029207; WO 04/099249; WO 04/063351]에 기술된 바와 같은 것들을 포함하는 기타 공지된 Fc 변이체와 조합될 수 있다. 본 발명에 의해 역시 포함되는 것은 결실, 추가 및/또는 변형을 포함하는 Fc 영역이다. Fc 도메인의 여전히 다른 변형/치환/추가/결실은 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다.
비 천연발생 Fc 영역을 생성하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 아미노산 치환 및/또는 결실은 부위-지향된 돌연변이유발(Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492 (1985)), PCR 돌연변이유발(Higuchi, in "PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications", Academic Press, San Diego, pp. 177-183 (1990)), 및 카세트 돌연변이유발(Wells et al., Gene 34:315-323 (1985))을 포함하지만 이에 국한되지 않는 돌연변이유발 방법에 의해 생성할 수 있다. 부위-지향된 돌연변이유발은 오버랩-연장 PCR 방법(Higuchi, in "PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification", Stockton Press, New York, pp. 61-70 (1989))으로 수행할 수 있다. 오버랩-연장 PCR(Higuchi, ibid.)은 또한 특정의 목적하는 돌연변이를 표적 서열(출발 DNA) 내로 도입시키는 데 사용할 수 있다. 예를 들면, 오버랩-연장 방법에서 PCR의 제1 라운드는 표적 서열을 외부 프라이머(프라이머 1) 및 내부 돌연변이유발 프라이머(프라이머 3)로 증폭시키고, 제2 외부 프라이머(프라이머 4) 및 내부 프라이머(프라이머 2)로 별도로 증폭시켜 2개의 PCR 단편(단편 A 및 B)을 생성하는 것을 포함한다. 내부 돌연변이유발 프라이머(프라이머 3)는 목적하는 돌연변이를 명시하는 표적 서열에 대한 부조화를 포함하도록 설계된다. PCR의 제2 라운드에서, PCR의 제1 라운드(단편 A 및 B)의 생성물은 2개의 외부 프라이머(프라이머 1 및 4)를 사용하여 PCR로 증폭된다. 수득한 전장 PCR 세그멘트(단편 C)는 제한 효소에 의해 소화되며 수득한 제한 단편은 적합한 벡터 내로 클로닝된다. 돌연변이유발의 제1 단계로서, 출발 DNA(예: Fc 융합 단백질, 항체 또는 단순히 Fc 영역을 암호화함)는 돌연변이유발 벡터 내로 작동적으로 클로닝된다. 시동물질은 목적하는 아미노산 치환을 반영하도록 설계된다. 변이체 Fc 영역의 생성에 유용한 기타 방법은 당해 분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, U.S. 특허 Nos. 5,624,821; 5,885,573; 5,677,425; 6,165,745; 6,277,375; 5,869,046; 6,121,022; 5,624,821; 5,648,260; 6,528,624; 6,194,551; 6,737,056; 6,821,505; 6,277,375; U.S. 특허공보 Nos. 2004/0002587 및 PCT 공개 WO 94/29351; WO 99/58572; WO 00/42072; WO 02/060919; WO 04/029207; WO 04/099249; WO 04/063351].
일부 구체예들에서, Fc 변이체 단백질은 하나 이상의 가공된 당형태, 즉 Fc 영역을 포함하는 분자에 공유결합적으로 부착되는 탄수화물 조성물을 포함한다. 가공된 당형태는 효과기 기능을 증진시키거나 감소시키는 것을 포함하지만 이에 국한되지 않는 다양한 목적에 유용할 수 있다. 가공된 당형태는, 예를 들면, 가공된 또는 변이체 발현 균주의 사용, 하나 이상의 효소, 예를 들면, DI N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIl 1)와의 동시-발현, 각종 유기체로부터의 세포주 또는 각종 유기체 내의 Fc 영역을 포함하는 분자의 발현, 또는 Fc 영역을 포함하는 분자를 발현한 후의 탄수화물의 개질과 같은, 당해 분야에 공지된 임의의 방법으로 생성시킬 수 있다. 가공된 당형태를 생성하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며, 문헌[참조: Umana et al, 1999, Nat. Biotechnol 17: 176-180; Davies et al., 20017 Biotechnol Bioeng 74:288-294; Shields et al, 2002, J Biol Chem 277:26733-26740; Shinkawa et al., 2003, J Biol Chem 278:3466-3473; U.S. Pat. No. 6,602,684; U.S. Ser. No. 10/277,370; U.S. Ser. No. 10/113,929; PCT WO 00/61739Al; PCT WO 01/292246A1; PCT WO 02/311140Al; PCT WO 02/30954A1; PotillegentTM technology (Biowa, Inc. Princeton, NJ.); GlycoMAbTM glycosylation engineering technology (GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)]에 기술된 것과 같은 방법을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 예를 들면, 문헌[참조: WO 00061739; EA01229125; US 20030115614; Okazaki et al., 2004, JMB, 336: 1239-49]을 참조하라.
본원에 기술된 Fc 변이체는 다음의 항체를 포함하나 그에 국한되지 않는, 공지의 기술에 기재된 항체로부터 생성될 수 있거나, 또는 본원에 기술된 변이체 Fc 영역은 다음의 항체를 포함하나 그에 국한되지 않는, 공지의 기술에 기재된 항체로 이입될 수 있다고 생각된다: 항-플루오레세인 단클론 항체, 4-4-20 (Kranz et al., 1982 J. Biol. Chem. 257(12): 6987- 6995), 인간화된 항-TAG72 항체(CC49) (Sha et al., 1994 Cancer Biother. 9(4): 341-9), Eph 수용체를 특이적으로 결합하는 항체(PCT 공보 Nos. WO 04/014292, WO 03/094859 및 U.S. 특허 Application Serial No. 10/863,729에 개시된 것들을 포함하지만 이에 국한되지 않음), 인테그린 αVβ3을 특이적으로 결합하는 항체(LM609 (Scripps)을 포함하지만 이에 국한되지 않음), 쥐 단클론 LM609 (PCT 공보 WO 89/015155 and U.S. 특허 No. 5,753,230); 인간화된 단클론 항체 MEDI-522 (a.k.a. VITAXIN® Medlmmune, Inc., Gaithersburg, MD; Wu et al., 1998, PNAS USA 95(11): 6037-6042; PCT 공개 WO 90/33919 및 WO 00/78815), WO/2005/05059106에 개시된 인터페론 알파에 대한 항체, WO/2006/059106에 개신된 인터페론 수용체 1에 대한 항체, ErbituxTM (IMC-C225로도 알려짐) (ImClone Systems Inc.), EGFR에 대한 키메라화된 단클론 항체; 전이 유방암이 있는 환자의 치료를 위한 인간화된 항-HER2 단클론 항체인 HERCEPTIN®(Trastuzmab) (Genentech, CA); 응괴 형성의 예방을 위한 혈소판의 항-당단백질 Ilb/IIIa 수용체인 REOPRO®(Abciximab) (Centocor); 급성 신장 동종이식 거부에 대한 면역억제성, 인간화된 항-CD25 단클론 항체인 ZENAPAX®(Daclizumab)(Roche Pharmaceuticals, Switzerland). 다른 예로는 인간화된 항-CD 18 F(ab')2 (Genentech); 인간화된 항-CD 18 F(ab')2인 CDP860 (Celltech, UK); CD4와 융합된 항-HIV gpl20 항체인 PRO542(Progenics/Genzyme Transgenics); 항-CD 14 항체인 C 14(ICOS Pharm); 인간화된 항-VEGF IgGl 항체(Genentech); 쥐 항-CA 125 항체인 OVAREXTM(Altarex); 쥐 항-17-IA 세포 표면 항원 IgG2a 항체인 PANOREXTM(Glaxo Wellcome/Centocor); 키메라 항-EGFR IgG 항체인 IMC-C225(ImClone System); 항-αVβ3 인테그린 항체인 VITAXINTM(Applied Molecular Evolution/Medlmmune); 항-CD52 IgGl 항체인 Campath 1H/LDP-03(Leukosite); 인간화된 항-CD33 IgG 항체인 Smart M195(Protein Design Lab/Kanebo); 키메라 항-CD20 IgGI 항체인 RITUXANTM(IDEC Pharm/Genentech, Roche/Zettyaku); 인간화된 항-CD22 IgG 항체인 LYMPHOCIDETM(Immunomedics); 인간화된 항-HLA 항체인 Smart IDlO(Protein Design Lab)이고; ONCOLYMTM(Lym-1)는 방사표지된 쥐 항-HLA DR 항체(Techniclone)이고; 항-CDl Ia는 인간화된 IgGl 항체(Genetech/Xoma)이고; ICM3은 인간화된 항-ICAM3 항체(ICOS Pharm)이고; IDEC-114는 영장류화된 항-CD80 항체(IDEC Pharm/Mitsubishi)이고; ZEVALINTM은 방사표지된 쥐 항-CD20 항체(IDEC/Schering AG)이고; IDEC-131은 인간화된 항-CD40L 항체(IDEC/Eisai)이고; IDEC-151은 영장류화된 항-CD4 항체(IDEC)이고; IDEC-152는 영장류화된 항-CD23 항체(IDEC/Seikagaku)이고; SMART 항-CD3은 인간화된 항-CD3 IgG (Protein Design Lab)이고; 5Gl.1은 인간화된 항-상보체 인자 5 (C5) 항체(Alexion Pharm)이고; IDEC-151은 영장류화된 항-CD4 IgGl 항체(IDEC Pharm/SmithKline Beecham)이고; MDX-CD4는 인간 항-CD4 IgG 항체 (Medarex/Eisai/Genmab)이고; CDP571은 인간화된 항-TNF-IgG4 항체(Celltech)이고; LDP-02는 인간화된 항-α4 β7 항체(LeukoSite/Genentech)이고; OrthoClone 0KT4A는 인간화된 항-CD4 IgG 항체(Ortho Biotech)이고; ANTOV ATM은 인간화된 항-CD40L IgG 항체(Biogen)이고; ANTEGRENTM은 인간화된 항-VLA-4 IgG 항체(Elan)이고; MDX-33은 인간 항-CD64 (FcγR) 항체(Medarex/Centeon)이고; rhuMab-E25는 인간화된 항-IgE IgGl 항체(Genentech/Norvartis/Tanox Biosystems)이고; IDEC-152는 영장류화된 항-CD23 항체(IDEC Pharm)이고; ABX-CBL은 쥐 항 CD-147 IgM 항체(Abgenix)이고; BTI-322는 랫트 항-CD2 IgG 항체(Medimmune/Bio Transplant)이고; 오르토클론/OKT3은 쥐 항-CD3 IgG2a 항체(ortho Biotech)이고; SIMULECTTM은 키메라 항-CD25 IgGl 항체(Novartis Pharm)이고; LDP-Ol은 인간화된 항-β2-인테그린 IgG 항체(LeukoSite)이고; 항-LF A-I는 쥐 항 CD 18 F(ab')2(Pasteur- Merieux/Immunotech)이고; CAT-152는 인간 항-TGF-β2 항체(Cambridge Ab Tech)이며; Corsevin M은 키메라 항-인자 VII 항체(Centocor)등이 있다.
본원에 기술된 Fc 변이체 영역을 포함할 수 있는 추가의 항체는, 예를 들면, 다음과 같은 암 또는 종양 항원을 포함하는 그에 국한되지 않는 암 또는 종양을 특이적으로 결합할 수 있다: KS 1/4 팬-암종 항원(Perez and Walker, 1990, J. Immunol. 142: 3662-3667; Bumal, 1988, Hybridoma 7(4): 407-415), 난소 암종 항원(CA125) (Yu et al., 1991, Cancer Res. 51(2): 468-475), 전립선산 인산염(Tailor et al., 1990, Nucl. Acids Res. 18(16): 4928), 전립선 특이 항원(Henttu and Vihko, 1989, Biochem. Biophys. Res. Comm. 160(2): 903-910; Israeli et al., 1993, Cancer Res. 53: 227-230), 흑색종 결합된 항원 p97 (Estin et al., 1989, J. Natl. Cancer Instit. 81(6): 445-446), 흑색종 항원 gp75 (Vijayasardahl et al., 1990, J. Exp. Med. 171(4): 1375-1380), 고분자량 흑색종 항원(HMW-MAA) (Natali et al., 1987, Cancer 59: 55-63; Mittelman et al., 1990, J. Clin. Invest. 86: 2136-2144), 전립선 특이 세포막 항원, 암배 항원(CEA) (Foon et al., 1994, Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 13: 294), 다형체성 상피 뮤신 항원, 인간 젖 지방 구체 항원, 결장직장 종양-결합 항원, 예를 들면, CEA, TAG-72 (Yokata et al., 1992, Cancer Res. 52: 3402-3408), CO 17-IA (Ragnhammar et al., 1993, Int. J. Cancer 53: 751-758); GICA 19-9 (Herlyn et al., 1982, J. Clin. Immunol. 2: 135), CTA-I 및 LEA, 버킷의 림프종 항원(Burkitt's lymphoma antigen)-38.13, CD19 (Ghetie et al., 1994, Blood 83: 1329-1336), 인간 B-림프종 항원-CD20 (Reff et al., 1994, Blood 83:435-445), CD33 (Sgouros et al., 1993, J. Nucl. Med. 34:422-430), 흑색종 특이 항원, 예를 들면, 강글리오사이드 GD2 (Saleh et al., 1993, J. Immunol., 151, 3390-3398), 강글리오사이드 GD3 (Shitara et al., 1993, Cancer Immunol. Immunother. 36:373-380), 강글리오사이드 GM2 (Livingston et al., 1994, J. Clin. Oncol. 12: 1036-1044), 강글리오사이드 GM3 (Hoon et al., 1993, Cancer Res. 53: 5244- 5250), 종양 특이 이식 유형의 세포-표면 항원(TSTA), 예를 들면, 바이러스로 유도된 종양 항원, 예를 들면, T-항원 DNA 종양 바이러스 및, RNA 종양 바이러스의 엔벨로프 항원, 종구체예아성 항원-알파-태아단백질, 예를 들면, 결장의 CEA, 방광 종양 종구체예아 항원(Hellstrom et al., 1985, Cancer. Res. 45:2210-2188), 분화 항원, 예를 들면, 인간 폐 암종 항원 L6, L20 (Hellstrom et al., 1986, Cancer Res. 46: 3917-3923), 섬유육종의 항원, 인간 백혈병 T 세포 항원-Gp37 (Bhattacharya-Chatterjee et al., 1988, J. of Immun. 141 : 1398-1403), 네오글리코단백질, 스핑고지질, 유방암 항원, 예를 들면, EGFR (표피 성장 인자 수용체), HER2 항원(pl85HER2), 다형체성 상피 뮤신(PEM) (Hilkens et al., 1992, Trends in Bio. Chem. Sci. 17:359), 악성종양 인간 림프구 항원-APO-1(Bernhard et al., 1989, Science 245: 301-304), 분화 항원(Feizi, 1985, Nature 314: 53-57), 예를 들면, 태아 적혈구에서 발견된 I 항원, 성인 적혈구에서 발견된 1차 내배엽 I 항원, 장 아데노암종에서 발견된 예비이식 배, 1(Ma), 가슴 상피에서 발견된 M18, M39, 척수 세포에서 발견된 SSEA-I, VEP8, VEP9, MyI, VIM-D5, 직장결장 암에서 발견된 D156-22, TRA-1-85 (혈액 그룹 H), 결장성 아데노암종에서 발견된 C14, 폐 아데노암종에서 발견된 F3, 위장 암에서 발견된 AH6, Y 합텐, 배 암종 세포에서 발견된 Ley, TL5 (혈액 그룹 A), A431 세포에서 발견된 EGF 수용체, 췌장 암에서 발견된 El 시리즈(혈액 그룹 B), 배 암종 세포에서 발견된 FC 10.2, 장 아데노암종 항원, 아데노암종에서 발견된 CO-514 (혈액 그룹 Lea), 아데노암종에서 발견된 NS-10, CO-43 (혈액 그룹 Leb), A431 세포의 EGF 수용체에서 발견된 G49, 결장 아네노암종에서 발견된 MH2 (혈액 그룹 ALeb/Ley), 결장 암에서 발견된 19.9, 위장 암 뮤신, 척수 세포에서 발견된 T5A7, 흑색종에서 발견된 R24, 배 암종세포에서 발견된 4.2, GD3, D 1.1, OFA-I, GM2, OFA-2, GD2, 및 Ml :22:25:8, 및 4 내지 8개의 세포 단계 배에서 발견된 SSEA-3 및 SSEA-4. 일 구체예에서, 항원은 피부 T 세포 림프종으로부터의 T 세포 수용체 유도된 펩타이드이다(참조: Edelson, 1998, The Cancer Journal 4:62).
본원에 기술된 Fc 변이체는 이로부터 생성될 수 있거나, 또는 본원에 기술된 변이체 Fc 영역은 임의의 항체로 이입될 수 있다. 더구나, 본원에 기술된 변이체 Fc 영역을 이용하여 Fc 융합 단백질을 생성할 수 있다. 따라서, 실질적으로 어떠한 분자도 본원에 기술된 Fc 변이체를 포함하는 항체 및/또는 Fc 융합 단백질에 의해 표적화되고/되거나 이것에 통합될 수 있으며, 상기 Fc 변이체는 다음의 단백질 리스트 뿐만 아니라 다음의 단백질 리스트에 속하는 하부단위체, 도메인, 모티프 및 에피토프도 포함하지만 이에 국한되지는 않는다: 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; 성장 호르몬 방출 방출 인자, 부갑상선 호르몬; 갑상선 자극 호르몬; 지단백질; 알파-1-안티트립신; 인슐린 A-쇄; 인슐린 B-쇄; 프로인슐린; 여포 자극 호르몬; 칼시토닌; 황체형성 호르몬; 글루카곤; 응고 인자, 예를 들면, 인자 VII, 인자 VIIIC, 인자 IX, 조직 인자(TF), 및 폰 빌레브란트 인자(von Willebrand factor); 항-응고 인자, 예를 들면, 단백질 C; 심방 배뇨항진 인자; 폐 표면활성제; 플라스미노겐 활성화제, 예를 들면, 유로키나제 또는 인간 뇨 또는 조직형 플라스미노겐 활성화제(t-PA); 봄베신; 트롬빈; 조혈 성장 인자; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 엔케팔리나제; RANTES (정상적으로 T-세포 발현되고 분비된 활성화에서 조절됨); 인간 매크로파지 염증성 단백질(MIP-I-알파); 혈청 알부민, 예를 들면, 인간 혈청 알부민; Muellerian-억제 물질; 렐락신 A-쇄; 렐락신 B-쇄; 프로렐락신; 마우스 고나도트로핀-연합된 펩타이드; 미생물 단백질, 예를 들면, 베타-락타마제; DNase; IgE; 세포독성 T-림프구 연합된 항원(CTLA), 예를 들면, CTLA-4; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자(VEGF); 호르몬 또는 성장 인자용 수용체, 예를 들면, EGFR, VEGFR; 인터페론, 예를 들면, 알파 인터페론(α-IFN), 베타 인터페론(β-IFN) 및 감마 인터페론(γ-IFN); 인터페론 수용체 성분, 예를 들면, 인터페론 수용체 1; 단백질 A 또는 D; 류마티스 인자; 신경영양 인자, 예를 들면, 골-유도된 신경영양 인자(BDNF), 뉴로트로핀-3,-4,-5, 또는 -6 (NT-3, NT-4, NT-5, 또는 NT-6), 또는 신경 성장 인자; 혈소판-유도된 성장 인자(PDGF); 섬유모세포 성장 인자, 예를 들면, αFGF 및 βFGF; 상피 성장 인자(EGF); 변환 성장 인자(TGF), 예를 들면, TGF-알파 및 TGF-베타, 예를 들면, TGF-1, TGF-2, TGF-3, TGF-4, 또는 TGF-5; 인슐린형 성장 인자-I 및 -II(IGF-I 및 IGF-II); 데스 (l-3)-IGF-I (브레인 IGF-I), 인슐린형 성장 인자 결합 단백질; CD 단백질, 예를 들면 CD2, CD3, CD4, CD 8, CDl Ia, CD 14, CD 18, CD 19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD33, CD34, CD40, CD40L, CD52, CD63, CD64, CD80 및 CD147; 에리트로포이에틴; 골유도성 인자; 면역독소; 골 형태형성 단백질(BMP); 인터페론, 예를 들면, 인터페론-알파, -베타, 및 -감마; 콜로니 자극 인자(CSF), 예를 들면, M-CSF, GM-CSF, 및 G-CSF; 인터류킨(IL), 예를 들면, IL-I 내지 IL-13; TNFα, HMGBl; HMGB2; 슈퍼옥사이드 디뮤타제; T-세포 수용체; 표면 막 단백질; 붕괴 촉진 인자; 바이러스성 항원, 예를 들면, AIDS 엔벨로프의 일부, 예를 들면, gpl20; 운반 단백질; 호밍 수용체(homing receptor); 어드레씬(addressin); 조절 단백질; 세포 부착 분자, 예를 들면, LFA-I, Mac 1, pi 50.95, VLA-4, ICAM-1, ICAM-3 및 VCAM, a4/p7 인테그린, 및 [Xv/p3 인테그린(이것 하나 또는 이의 하부단위체 중의 하나를 포함함)], 인테그린 알파 하부단위체, 예를 들면, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, 알파7, 알파δ 알파9, 알파D, CDl Ia, CDl Ib, CD51, CDl Ic, CD41, 알파llb, 알파lELb; 인테그린 베타 하부단위체, 예를 들면, CD29, CD18, CD61, CD 104, 베타5, betaσ베타7 및 베타δ; 인테그린 하부단위체 조합물, 예를 들면, 이에 국한되지는 않지만 αVβ3, αVβ5 및 αVβ7; 세포자멸사 경로의 구성원; IgE; 혈액 그룹 항원; flk2/flt3 수용체; 비만(OB) 수용체; mpl 수용체; CTLA-4; 단백질 C; 키티나제 또는 키티나제형 분자, 예를 들면, YKL-40 및 AMCase;Eph 수용체, 예를 들면, EphA2, EphA4, EphB2 등; 인간 백혈구 항원(HLA), 예를 들면, HLA-DR; 상보체 단백질, 예를 들면, 상보체 수용체 CRl, ClRq 및 기타 상보체 인자, 예를 들면, C3 및 C5; 당단백질 수용체, 예를 들면, Gplbα, GPIIb/IIIa 및 CD200; 공-자극 분자, 예를 들면, CD28/CTLA-4, ICOS/AILIM, PD-I.
본원에 기술된 바와 같은 변이체 Fc 영역을 포함할 수 있는 추가의 분자들은 다음과 같은 암 항원들을 포함하나 그에 국한되지 않는 암 항원들을 특이적으로 결합하는 분자들이다: ALK 수용체(플레이오트로핀 수용체), 플레이오트로핀, KS 1/4 팬-암종 항원; 난소 암종 항원(CA125); 전립선산 인산염; 전립선 특이 항원(PSA); 흑색종 결합된 항원 p97; 흑색종 항원 gp75; 고분자량 흑색종 항원(HMW-MAA); 전립선 특이 세포막 항원, 암배 항원(CEA); 다형체성 상피 뮤신 항원; 인간 젖 지방 구체 항원; 결장직장 종양 결합된 항원, 예를 들면, CEA, TAG-72, CO 17-IA; GICA 19-9, CTA-I 및 LEA; 버킷의 림프종 항원-38.13; CD19; 인간 B-림프종 항원-CD20; CD33; 흑색종 특이 항원, 예를 들면, 강글리오사이드 GD2, 강글리오사이드 GD3, 강글리오사이드 GM2 및 강글리오사이드 GM3; 종양 특이 이식 유형의 세포-표면 항원(TSTA), 예를 들면, 바이러스로 유도된 종양 항원, 예를 들면, T-항원 DNA 종양 바이러스 및, RNA 종양 바이러스의 엔벨로프 항원, 종구체예아성 항원-알파-태아단백질, 예를 들면, 결장의 CEA, 5T4 종구체예아 영양막 당단백질 및 방광 종양 종구체예아 항원; 분화 항원, 예를 들면, 인간 폐 암종 항원 L6 및 L20; 섬유육종의 항원; 인간 백혈병 T 세포 항원-Gp37; 네오글리코단백질; 스핑고지질; 유방암 항원, 예를 들면, EGFR (표피 성장 인자 수용체); NY-BR-16; NY-BR-16 및 HER2 항원(pl85HER2); 다형체성 상피 뮤신(PEM); 악성종양 인간 림프구 항원-APO-1; 분화 항원, 예를 들면, 태아 적혈구에서 발견된 I 항원; 성인 적혈구에서 발견된 1차 내배엽 I 항원; 장 아데노암종에서 발견된 예비이식 배, I(Ma); 가슴 상피에서 발견된 M1 8, M39; 척수 세포에서 발견된 SSEA-I; 직장결장 암에서 발견된 VEP8; VEP9; MyI; VIM-D5; 직장결장 암에서 발견된 D156-22; TRA-1-85 (혈액 그룹 H); 고환 및 난소암에서 발견된 SCP-I; 결장성 아데노암종에서 발견된 C14; 폐 아데노암종에서 발견된 F3; 위장 암에서 발견된 AH6; Y 합텐; 배 암종 세포에서 발견된 Ley; TL5 (혈액 그룹 A); A431 세포에서 발견된 EGF 수용체; 췌장 암에서 발견된 El 시리즈(혈액 그룹 B); 배 암종 세포에서 발견된 FC 10.2; 장 아데노암종 항원; 아데노암종에서 발견된 CO-514(혈액 그룹 Lea); 아데노암종에서 발견된 NS-IO; CO-43(혈액 그룹 Leb); A431 세포의 EGF 수용체에서 발견된 G49; 결장 아네노암종에서 발견된 MH2 (혈액 그룹 ALeb/Ley); 결장 암에서 발견된 19.9; 위장 암 뮤신; 척수 세포에서 발견된 T5A7; 흑색종에서 발견된 R24; 배 암종세포에서 발견된 4.2, GD3, D1.1, OFA-I, GM2, OFA-2, GD2, 및 Ml :22:25:8; 및 4 내지 8개의 세포 단계 배에서 발견된 SSEA-3 및 SSEA-4; 피부 T 세포 림프종 항원; MART-I 항원; 시알리(Sialy) Tn (STn) 항원; 결장 암 항원 NY-CO-45; 폐암 항원 NY-LU-12 변이체 A; 아데노암종 항원 ARTl; 파라네오플라스틱 결합된 뇌-고환-암 항원(종양신경 항원 MA2; 파라네오플라스틱 신경 항원); 신경종양학적 복부 항원 2 (NOV A2); 헵타세포형 암종 항원 유전자 520; 종양 결합된 항원 CO-029; 종양 결합된 항원 MAGE-Cl (암/고환 항원 CT7), MAGE-Bl (MAGE-XP 항원), MAGE-B2 (DAM6), MAGE-2, MAGE-4a, MAGE-4b 및 MAGE-X2; 암-고환 항원(NY-EOS-I); YKL-40 및 상기 명시된 폴리펩타이드들 중의 어느 것의 단편.
6.10. 항체의 글리코실화
하지만 또 다른 구체예에서, 본 발명에 따라 이용된 항체의 글리코실화는 변형된다. 예를 들면, 아글리코실화된 항체를 조제할 수 있다(즉, 항체는 글리코실화를 결여한다). 글리코실화는, 예를 들면, 표적 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키도록 변화시킬 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들면, 항체 서열 내의 글리코실화의 하나 이상의 부위를 변화시킴으로써 성취할 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 가변 영역 골격 글리코실화 부위을 제거하여 이 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 제5,714,350호 및 제6,350,861호에 추가로 상세히 기술되어 있다. Fc 영역 내에 존재하는 글리코실화 부위를 제거시키는 하나 이상의 아미노산 치환이 또한 이루어질 수 있다[참조: 예를 들면, IgG의 아스파라긴 297]. 더구나, 아글리코실화된 항체는 필요한 글리코실화 기계류가 결핍되는 세균 세포내에서 생산될 수 있다.
또한, 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 하이포푸코실화된 항체 또는 증가된 이등분화 GIcNAc 구조를 갖는 항체와 같은, 변형된 유형의 글리코실화를 갖는 항체를 조제할 수 있다. 이러한 변화된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되어 왔다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들면, 변화된 글리코실화 기계류를 사용하여 숙주 세포 내의 항체를 발현시킴으로써 성취할 수 있다. 변화된 글리코실화 기계류를 사용한 세포는 당해 기술분야에 기술되어 왔으며, 본 발명의 재조합체 항체를 발현하여 변화된 글리코실화을 갖는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 문헌[참조: Shields, R.L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740; Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17: 176-1, as well as, U.S. 특허 No: US 6,946,292; European Patent No: EP 1,176,195; PCT 공개 WO 03/035835; WO 99/54342; 참조함으로써 이들 각각의 전문이 본원에 통합된다]을 참조하라.
6.11. 가공된 효과기 기능
본 발명의 항-CD 19 항체를 효과기 기능에 대하여 변형시켜, 예를 들면, B 세포 악성종양을 치료하는데 있어서 항체의 유효성을 증진시키도록 하는 것이 바람질할 수 있다. 예를 들면, 시스테인 잔기는 Fc 영역 내로 도입되어 이 영역 내에 쇄간 이황화물 결합이 허용되도록 할 수 있다. 이와 같이 발생된 동종이량체성 항체는 내부화 능력을 증진시키고/시키거나 상보체 매개된 세포 사멸 및/또는 항체 의존성 세포형 세포독성(ADCC)을 증가시킬 수 있다[참조: Caron et al, J. Exp Med., 176:1191-1195 (1992) and Shopes, B., J. Immunol, 148:2918-2922 (1992)]. 증진된 항-종양 활성을 갖는 동종이량체성 항체는 또한 문헌[참조: Wolff et al, Cancer Research, 53:2560-2565 (1993)]에 기술된 바와 같은 이종이작용성 가교결합제를 사용하여 조제할 수 있다. 이중 Fc 영역을 갖고 이에 따라 증진된 상보체 분해 및 ADCC 능력을 가질 수 있는 항체를 또한 가공할 수 있다[참조: Stevenson et al, Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230 (1989)].
효과기 기능을 변화시키도록 하기 위해 항체의 Fc 영역을 가공하는 기타 방법은 당해 분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, 둘 다 Koenig 등의 U.S. 특허공보 No. 20040185045 및 PCT 공보 No. WO 2004/016750; 이 문헌은 FCγRIIA에 대한 결합 친화성과 비교하여 FcγRIIB에 대한 결합 친화성을 증진시키기 위한 Fc 영역을 변화시키는 것을 기술함; 또한 PCT 공보 Nos. WO 99/58572(Armour et al) 및 WO 99/51642(Idusogie et al), 및 U.S. 6,395,272(Deo et al); 참조함으로써 이들 문헌의 전문이 본원에서 참고로 포함된다]. FcγRIIB에 대한 결합 친화성을 감소시키기 위해 Fc 영역을 변형시키는 방법은 또한 당해 기술분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, 둘 다 Ravetch 등의 U.S. 특허공보 No. 20010036459 및 PCT 공보 No. WO 01/79299; 이들의 기재내용은 전문이 본원에서 참조로 포함된다]. 야생형 Fc 영역과 비교한 FcγRIIIA 및/또는 FcγRIIA에 대한 증진된 결합 친화성을 갖는 변이체 Fc 영역을 갖는 변형된 항체가 또한 기술되어 왔다[참조: 예를 들면, PCT 공보 Nos. WO 2004/063351 (Stavenhagen et al); 참조함으로써 이의 전문이 본원에 통합된다].
당해 분야에 공지된 시험관내 검정을 사용하여 본 발명의 조성물 및 방법에 사용된 항-CD 19 항체가 본원에 기술된 바와 같은 ADCC를 매개할 수 있는지 여부를 측정할 수 있다.
6.12. 항-CD 19 항체의 조제/생산
일단 목적하는 항-CD 19 항체가 가공되면, 항-CD 19 항체는 항체의 대량 조제를 위한 당해 분야에 공지된 방법들을 사용하여 상업적인 규모로 생산할 수 있다. 예를 들면, 이는 하기한 바와 같지만 이에 국한되지 않는 재조합체 발현 시스템을 사용하여 달성할 수 있다.
6.13. 재조합체 발현 시스템
항체 또는 이의 변이체의 재조합체 발현은 일반적으로 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 발현 벡터의 작제를 필요로 한다. 항체 분자 또는 항체의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 일단 수득되면, 항체 분자를 생산하기 위한 벡터는 당해 기술분야에 공지된 기술을 사용하는 재조합체 DNA 기술로 생산할 수 있다[참조: 예를 들면, 전문이 본원에서 참조로 포함된 미국 특허 제6,331,415호]. 따라서, 뉴클레오타이드 서열을 암호화하는 항체를 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 발현함으로써 단백질을 조제하는 방법이 본원에 기술되어 있다. 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있는 방법을 사용하여 서열 및 적합한 전사적 및 전사적 조절 신호 및 서열을 암호화하는 항체를 포함하는 발현 벡터를 작제할 수 있다. 이들 방법은, 예를 들면, 시험관내 재조합체 DNA 기술, 합성 기술, 및 생체내 유전적 재조합을 포함한다. 본 발명은 따라서, 프로모터에 작동적으로 연결된, 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체 또는 이의 부분의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터를 제공한다. 이러한 벡터는 항체 분자[참조: 예를 들면, 국제공개공보 제WO 86/05807호 및 제WO 89/01036호; 및 미국 특허 제 5,122,464호]의 불변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있으며, 항체의 가변 도메인은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄 둘 다의 발현을 위한 벡터 내로 클로닝할 수 있다.
또 다른 구체예에서, 항-CD 항체는 항-CD 19 항체의 전부 또는 부분을 생성하기 위한 표적화된 동종 재조합을 사용하여 조제할 수 있다[참조: 미국 특허 제6,063,630호, 제6,187,305호 및 제6,692,737호). 특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체는 항-CD19 항체의 전부 또는 부분을 생산하기 위한 임의의 재조합 기술을 사용하여 조제할 수 있다[참조: 예를 들면, 미국 특허 제6,361,972호, 제6,524,818호, 제6,541,221호 및 제6,623,958호]. 항-CD 19 항체는 또한 Cre 매개된 부위-특이적 동종 재조합을 사용하는 변형된 면역그로불린 위치를 포함하는 세포의 게놈성 서열로부터 항체를 발현하는 세포에서 생산될 수 있다[참조: 미국 특허 제6,091,001호]. 숙주 세포주는 마우스 및 차이니즈 햄스터를 포함하지만 이에 국한되지 않는 인간 또는 인간이 아닌 동물 종으로부터 유도될 수 있다. 인간 또는 인간이 아닌 동물 항체 생산이 바람직한 경우, 숙주 세포주는 인간 세포주이어야 한다. 이들 방법은, 항체 분자를 영구적으로 발현하는 안정한 세포주를 가공하는 데 유리하게 사용할 수 있다.
일단 발현 벡터가 통상적인 기술에 의해 숙주 세포로 이동되면, 핵내주입된 세포는 이후에 통상적인 기술에 의해 배양되어 항체를 생성한다. 따라서, 본 발명은 이종 프로모터에 작동적으로 연결된, 본 발명의 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 부분, 또는 본 발명의 단쇄 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포를 포함한다. 이중쇄 항체의 발현에 대한 특정 구체예들에서, 중쇄 및 경쇄 둘다를 암호화하는 벡터는 아래에 상술된 바와 같이, 전체 면역글로불린 분자의 발현에 대한 숙주 세포에서 동시발현될 수 있다.
각종 숙주-발현 벡터 시스템을 이용하여 항-CD 19 항체를 가공하고 생성하는 데 사용할 수 있는 항-CD19 항체 또는 이의 부분을 발현시킬 수 있다[참조: 예를 들면, 미국 특허 제5,807,715호]. 예를 들면, 인간 사이토메갈로바이러스로부터의 주요한 중간체 조기 유전자 프로모터 성분과 같은 벡터와 결합하여, 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO)와 같은 포유동물 세포는 항체를 위한 효과적인 발현 시스템이다[참조: Foecking et al, Gene, 45: 101 (1986); and Cockett et al, Bio/Technology, 8:2 (1990)]. 또한, 삽입된 항체 서열의 발현을 조절하거나, 또는 목적하는 특정 방식으로 항체 유전자 생성물을 변형시키고 가공하는 숙주 세포 균주를 선택할 수 있다. 단백질 생성물의 이러한 변형(예:글리코실화) 및 가공(예: 분해)는 단백질의 기능을 위해 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 생성물의 후-해독, 가공 및 변형을 위한 특성 및 특정 메카니즘을 갖는다. 적합한 세포주 또는 숙주 시스템을 선택하여 발현된 항체 또는 이의 부분의 정확한 변형 및 가공을 보장할 수 있다. 이러한 목적으로, 유전자 생성물의 주요 전사, 글리코실화, 및 포스포릴화의 적절한 가공을 위한 세포형 기계류를 지니는 원핵 숙주 세포를 사용할 수 있다. 이러한 포유동물 숙주 세포는 CHO, VERY, BHK, HeIa, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NSO (특정의 작용적 면역글로불린 쇄를 외인적으로 생산하지 않은 쥐 골수종 세포주), CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함하지만 이에 국한되지 않는다.
일 구체예에서, 인간 림프구를 무한증식시킴으로서 발현된 인간 세포주를 사용하여 단클론 인간 항-CD 항체를 재조합적으로 생산할 수 있다. 일 구체예에서, 인간 세포주 PER.C6(Crucell, Netherlands)을 사용하여 단클론 인간 항-CD 19 항체를 재조합적으로 생산할 수 있다.
세균 시스템에서, 다수의 발현 벡터는 발현되는 항체 분자에 대해 의도된 용도에 좌우되어 유리하게 선택할 수 있다. 예를 들면, 이러한 항체 다량이 생산되는 경우, 항-CD 19 항체을 포함하는 약제학적 조성물을 생성하기 위해, 용이하게 정제되는 고 수준의 융합 단백질 생성물의 발현을 지향하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는 이. 콜라이 발현 벡터 pUR278 (Ruther et al, EMBO, 12:1791 (1983))을 포함하지만, 이에 국한되지 않으며, 여기서 항체 암호화 서열은 lacZ 암호화 영역과 프레임 내의 백터 내로 개별적으로 연결되어 융합 단백질이 생성되도록 할 수 있다; pIN 벡터(Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol Chem., 24:5503-5509 (1989) 등]. pGEX 벡터를 또한 사용하여 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST)와의 융합 단백질로서 외부 폴리펩타이드를 발현할 수 있다. 일반적으로, 이러한 융합 단백질은 가용성이며 흡수 및 글루타티온-아가로즈 친화성 매트릭스에 대한 결합 및 이후의 자유 글루타티온의 존재하의 용리에 의해 분해된 세포로부터 용이하게 정제될 수 있다. pGEX 벡터를 설계하여 아트롬빈 및/또는 인자 Xa 프로테아제 분해 부위를 발현된 폴리펩타이드 내로 도입시키도록 설계하여, 클로닝된 표적 유전자 생성물이 GST 잔기로부터 방출될 수 있도록 한다.
곤충계에서, 오토그라파 칼리포니카 핵 폴리헤드로시스 바이러스(AcNPV)는 외부 유전자를 발현하기 위한 벡터로서 사용된다. 바이러스는 스포도프테라 푸루기페르다 세포에서 성장한다. 항체 암호화 서열은 바이러스의 비-본질적 영역(예를 들면, 폴리헤드린 유전자) 내로 개별적으로 클로닝되며 AcNPV 프로모터(예를 들면, 폴리헤드린 프로모터)의 조절하에 위치한다.
포유동물 숙주 세포에서, 다수의 바이러스계 발현 시스템을 이용할 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우, 관심있는 항체 암호화 서열은 아데노바이러스 전사/해독 조절 착체, 예를 들면, 레이트(late) 프로모터 및 3엽 리더 서열로 결찰될 수 있다. 이러한 키메라 유전자는 이후에 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈 내로 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈(예: 영역 El 또는 E3)의 비-본질적 영역 내로의 삽입은 감염된 숙주 내 항체 분자를 발현할 수 있고 이용가능한 재조합체 바이러스를 생성할 것이다[참조: 예를 들면, Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 81 :355-359 (1984)]. 구체적인 개시 신호는 또한 삽입된 항체 암호화 서열의 효율적인 해독을 위해 필요할 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함한다. 더구나, 개시 코돈은 일반적으로 전체 삽입물의 해독을 보장하기 위해 목적하는 암호화 서열의 판독 프레임을 갖는 프레임 내에 있어야 한다. 이들 외인성 전사 조절 신호 및 개시 코돈은 천연 및 합성 둘 다의 각종의 기원의 것일 수 있다. 발현 효율은 적합한 전사 인핸서 요소, 전사 터미네이터 등을 포함시킴으로써 증진시킬 수 있다[참조: 예를 들면, Bittner et al, Methods in Enzymol, 153:51-544(1987)].
안정된 발현은 재조합체 단백질의 장기간 고수율 생산을 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 항체 분자를 안정하게 발현하는 세포주를 생성할 수 있다. 숙주 세포는 발현 조절 성분(예: 프로모터, 인핸서, 전사 터미네이터, 폴리아데닐화 부위 등)을 포함하는 적절하게 가공된 벡터, 및 선택가능한 마커 유전자로 형질전환시킬 수 있다. 외부 DNA를 도입한 다음에, 세포는 풍부화된 매질 속에서 1 내지 2일 동안 성장시킨 다음, 선택적 매질로 변환시킬 수 있다. 재조합체 플라스미드 내의 선택가능한 마커는 선택에 대한 내성을 부여하며 플라스미드를 이의 발색단 내로 안정하게 통합시킨 세포가 성장하고 병소를 형성하도록 하며 이는 다시 클로닝될 수 있고 세포주 내로 팽창될 수 있다. 항-CD 19 항체를 암호화하는 플라스미드를 사용하여 유전자/cDNA를 배양물 내에서 생산하기에 적합한 특정 세포주 내로 도입시킬 수 있다.
단순 헤르페스 바이러스 티미딘 키나제(Wigler et al., Cell, 11 :223 (1977))를 포함하지만 이에 국한되지 않는 다수의 선택 시스템을 사용할 수 있고, 하이포크산틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Scl USA, 48: 202 (1992)) 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Lowy et al., Cell, 22:8-17 (1980)) 유전자를 각각 tk-, hgprt- 또는 aprT세포에서 사용할 수 있다. 또한, 항대사산물 내성을 다음 유전자를 위한 선택의 기준으로서 사용할 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr(Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA, 77:357 (1980); O'Hare et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 78: 1527 (1981)); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt(Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 78:2072 (1981)); 아미노글리코사이드 G-148에 대한 내성을 부여하는 neo(Wu and Wu, Biotherapy 3:87-95 (1991); Tolstoshev, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596 (1993); Mulligan, Science 260:926-932 (1993); and Morgan and Anderson, Ann. Rev. Biochem. 62: 191-217 (1993); May, TIB TECH l l(5):155-2 15 (1993)); 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro(Santerre et al, Gene, 30: 147 (1984)). 재조합체 DNA 기술 분야에서 일반적으로 공지된 방법을 통상적으로 적용하여 목적하는 재조합체 클론을 선택할 수 있으며, 이러한 방법은, 예를 들면, 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합되는, 문헌[참조: 예를 들면, Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); and in Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol, 150: 1]에 기술되어 있다.
항체 분자의 발현 수준은 벡터 증폭[참조: Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3. Academic Press, New York (1987)]에 의해 증가될 수 있다. 항체를 발현하는 벡터 시스템에서의 마커가 증폭가능한 경우, 숙주 세포의 배양물 속에 존재하는 억제제의 수준의 증가는 마커 유전자의 복제 수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역은 항체 유전자와 결합되기 때문에, 항체의 생산은 또한 증가할 것이다[참조: Crouse et al, Mol. Cell. Biol, 3:257 (1983)]. 항체 발현 수준은, 주변 크로마틴을 재모델링하고 활성 인공 전사 도메인 형태의 유전자변환 발현을 증진시키는 기술들을 포함하는, 재조합체 단백질 생산 분야의 숙련가들에게 공지된 재조합체 기술 및 도구를 사용하여 증폭시킬 수 있다. 숙주 세포는 2개의 발현 벡터, 중쇄 유도된 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 벡터 및 경쇄 유도된 폴리펩타이드를 암호화하는 제2 벡터를 사용하여 동시 핵내주입될 수 있다. 2개의 벡터는 동일하거나 상이한 선택가능한 마커를 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘다를 암호화하고 발현할 수 있는 단일 벡터를 또한 사용할 수 있다. 이러한 상황에서, 경쇄는 과량의 독성 유리 중쇄를 피하기 위해 중쇄에 대해 5'로 위치하여야 한다[참조: Proudfoot, Nature 322:562-65 (1986); 및 Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 77:2197 (1980)]. 중쇄 및 경쇄에 대한 암호화 서열은 cDNA 또는 게놈성 DNA를 포함할 수 있다.
항체 분자가 재조합체 발현에 의해 일단 생성되면, 면역글로불린 분자의 정제를 위한 당해 분야에 공지된 임의의 기술, 예를 들면, 크로마토그래피(예: 이온 교환, 특히 특이적 항원 단백질 A 또는 단백질 G에 대한 친화성에 의한 친화성, 및 크기별 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 기타 표준 기술을 사용하여 정제할 수 있다. 더구나, 본 발명의 항체 또는 이의 단편을 사용하여 본원에 기술된 이종 폴리펩타이드 서열 또는 정제를 촉진시키기 위한 당해 분야에 공지된 기타의 것으로 융합시킬 수 있다.
6.14. 항체 정제 및 분리
재조합체 기술을 사용하는 경우, 항체는 세포내적으로, 세포주강 내로, 또는 매질 내로 직접 분비시켜서 생산할 수 있다. 항체가 세포내적으로 생산되면, 제1 단계로서, 입상 부스러기인, 숙주 세포 또는 분해된 단편은, 예를 들면, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 문헌[참조: Carter et al., Bio/Technology, 10:163-167 (1992)]에는 이. 콜라이의 세포주강 내로 분비되는 항체를 분리하기 위한 방법이 기술되어 있다. 요약하면, 세포 페이스트는 아세트산 나트륨(pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸설포닐플루오라이드(PMSF)의 존재하에 약 30분에 걸쳐서 해동된다. 세포 부스러기는 원심분리에 의해 제거할 수 있다. 항체 돌연변이체가 매질 내로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상등액은 일반적으로 시판되는 단백질 농축 필터, 예를 들면, 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘 항외여과 장치(Millipore Pellicon ultrafiltration unit)를 사용하여 일반적으로 먼저 농축시킨다. PMSF와 같은 프로테아제 억제제는 상기한 단계들 중의 어느 하나에 포함되어 단백질분해를 억제하고 항생제를 포함시켜 우발적인 오염물질의 성장을 방지할 수 있다.
상기 세포로부터 조제된 항체 조성물은, 예를 들면, 하이드록실아파타이드 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온교환 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및/또는 친화성 크로마토그래피의 단독 또는 기타 정제 단계들과 병용하여 정제할 수 있다. 친화성 리간드로서의 단백질 A의 적합성은 항체 돌연변이체 내에 존재하는 특정의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 동형에 좌우된다. 단백질 A는 γ1, γ2 또는 γ4 중쇄(참조: Lindmark et al., J. Immunol. Methods, 62:1-13 (1983))를 기준으로 한 항체를 정제하기 위해 사용할 수 있다. 단백질 G는 인간 γ3 (Guss et al., EMBOJ., 5: 15671575 (1986))에 대해 및 모든 마우스 동형에 대해 추천된다. 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 종종 아가로즈이지만 기타 매트릭스들도 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예를 들면, 조절된 기공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로즈를 사용하여 성취할 수 있는 것보다 더 빠른 유동 속도 및 더 짧은 가공 횟수가 가능하도록 한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, 베이커 본드(Bakerbond) ABX 수지(J.T. Baker, Phillipsburg, NJ)가 정제를 위해 유용하다. 단백질 정제를 위한 기타 기술, 예를 들면, 이온교환 컬럼에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 위에서의 크로마토그래피, 헤파린 위에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환수지에서의 SEPHAROSE 크로마토그래피(예: 폴리아스파르트산 컬럼), 크로마토포커싱(chromatofocusing), SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전이 또한 회복되는 항체에 따라 사용가능하다.
임의의 예비 정제 단계(들) 다음에, 관심있는 항체 및 오염물질을 포함하는 혼합물을 약 2.5 내지 4.5의 pH에서 용리 완충제를 사용하여 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피 처리하고, 저 염 농도(예: 약 0 내지 0.25 M 염)에서 수행할 수 있다.
6.15. 항체 제형의 조제방법
본 발명은 관심있는 항체(예: CD 19 항체)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 유도체, 유사체, 또는 이의 단편의 액체 제형을 조제하는 방법을 제공한다. 본 발명의 액체 제형을 조제하는 방법은 컨디셔닝된 매질[매질의 단일 롯(lot) 또는 풀링된 롯(pooled lot)]로부터 항체(이의 항체 단편 포함)를 정제하고 정제된 항체(이의 항체 단편 포함)의 분획을 약 10 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 40 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 60 mg/ml, 약 70 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 90 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 175 mg/ml, 약 200 mg/ml, 약 250 mg/ml, 또는 약 300 mg/ml의 최종 농도로 농축시키는 것을 포함할 수 있다. 항체(이의 항체 단편을 포함함), 예를 들면, CD 19에 특이적으로 결합하는 항체를 함유하는 컨디셔닝된 매질을 CUNO 여과로 처리하고 여과된 항체를 HS50 양이온 교환 크로마토그래피로 처리한다. HS50 양이온 교환 크로마토그래피로부터의 분획을 이후에 저 pH 처리한 다음, MEP 하이퍼셀 크로마토그래피로 처리한다. MEP 하이퍼셀 크로마토그래피로로부터의 분획을 나노여과로 처리한다. 나노여과 후에 수득한 정제된 항체 또는 이의 단편을 이후에 정용여과 및 한외여과로 처리하여 완충제 교환하고 동일한 막을 사용하는 제형 완충제내로 농축시킨다.
본 발명의 액체 제형은 액체 제형의 부분 표본(aloquot)을 함유하는 바이알(vial)을 일회 용도로 조제함으로써 단위 용량형으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 바이알당 단위 용량은 약 5 mg/ml 내지 약 300 mg/ml의 범위의 CD 19에 특이적으로 결합하는 항체(이의 항체 단편을 포함함)의 상이한 농도의 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 7 ml, 8 ml, 9 ml, 10 ml, 15 ml 또는 20 ml를 포함할 수 있다. 필요한 경우, 이들 제형은 멸균 희석제를 각각의 바이알에 가함으로써 목적하는 농도로 조정할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 및 4% 트레할로스를 포함하는 멸균 액체로서 단일 용량 바이알 내로 조제한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 함유하는 멸균 액체로서 단일 용량 바이알 내로 조제된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 20 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80를 함유하는 멸균 액체로서 1회 용량의 바이알 내로 조제된다. 각각 1.0 mL의 용액은 10 mg의 항체(이의 항체 단편을 포함함)를 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체(이의 항체 단편을 포함함)는 3cc USP 타입 I 보로실리케이트 앰버 바이알 속에서 100mg/ml에서 공급된다(West Pharmaceutical Services-Part No. 6800-0675). 표적 충전 용적은 1.2mL이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체(이의 단편을 포함함)는 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스 중의 3 cc 바이알 속에서 100 mg/ml로 공급한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체(이의 항체 단편을 포함함)는 pH 6.0에서 20 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80에서 3 cc 바이알 속에서 100 mg/ml로 공급한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 함유하는 멸균 액체로서 1회 용량의 바이알 내로 조제화되며, 여기서 이 제형의 용액의 각각 1.0 mL는 25, 50 또는 100 mg의 항체(이의 항체 단편을 포함함)를 함유한다.
본 발명의 액체 제형은 액체 제형의 일정부분을 함유하는 사전-충전된 주사기를 1회 용도로 조제함으로써 단위 용량형으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 사전-충전된 주사기당 단위 용량은 약 5 mg/ml 내지 약 300 mg/ml의 범위의 CD 19에 특이적으로 결합하는 항체(이의 항체 단편을 포함함)의 상이한 농도의 0.1 ml, 0.2 ml, 0.3 ml, 0.4 ml, 0.5 ml, 0.6 ml, 0.7 ml, 0.8 ml, 0.9 ml, 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 7 ml, 8 ml, 9 ml, 10 ml, 15 ml, 또는 20 ml를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘, 75 mM NaCl, 및 4% 트레할로스를 함유하는 멸균 액체로서 단일 용량 사전-충전된 주사기 내로 조제된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 함유하는 멸균 액체로서 1회용 사전-충전된 주사기내로 조제된다. 각각 1.0mL의 용액은 10mg의 항체(이의 항체 단편을 포함함)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 10 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80를 함유하는 멸균 액체로서 1회 용량의 사전-충전된 주사기내로 조제되며, 여기서, 각각 1.0mL의 용액은 25, 50 또는 100mg의 항체(이의 단편을 포함함)를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 20 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80를 함유하는 멸균 액체로서 1회 용량의 사전-충전된 주사기내로 조제된다. 각각 1.0 mL의 용액은 10 mg의 항체(이의 항체 단편을 포함함)를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 액체 제형은 pH 6.0에서 20 mM 히스티딘 완충제, 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80를 함유하는 멸균 액체로서 1회 용량의 사전-충전된 주사기내로 조제되며, 여기서 이 제형의 용액의 각각 1.0 mL는 25, 50 또는 100 mg의 항체(이의 항체 단편을 포함함)를 함유한다. 하지만 또 다른 구체예에서, 액체 제형은, 약 5 mg/ml 내지 약 300 mg/ml의 범위를 포함하는, 임의의 적합한 농도 수준으로 피하 주사를 위한 사전-충전된 주사기 또는 자동-주사기로 조제될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 액체 항체 제형은 100 mg/mL 이하의 농도로 피하 주사용의 사전-충전된 주사기 또는 자동-주사기에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 액체 항체 제형은 사전-충전된 텅스텐-유리 주사기, 예를 들면, "울트라-100" 내에 존재한다. 다른 구체예에서, 주사기는 ClearjectTM(Geresheimer, AG, Germany) 또는 InJentleTM(SCHOTT Pharmaceutical Packaging, Germany) 주사기이다.
본 발명의 액체 제형은 멸균 여과, 방사선 등을 포함하는 각종 멸균 방법으로 멸균시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 이 여과된 항체 제형은 사전 멸균된 0.2 마이크론 필터로 필터-멸균시킨다. 표면활성제가 가해진 특정 구체예들에서, 항체 제형은 표면활성제를 가하기 전 및/또는 표면활성제를 가한 후에 필터-멸균시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 항체 제형은 표면활성제를 가하기 전에 필터-멸균된다. 더구나, 제형은 1회 이상 필터-멸균시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 폴리소르베이트 80을 항체 제형에 가한 다음, 필터-멸균시킬 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항체 제형은 필터-멸균시킨 다음, 폴리소르베이트 80은 제형을 위해 가한다. 또 다른 구체예에서, 항체 제형은 먼저 필터-멸균시키며, 폴리소르베이트 80을 이후에 제형에 가한 다음, 제형은 제2 필터-멸균을 수행한다. 본 발명의 멸균된 액체 제형은 피험체에게 투여하여 B 세포 매개된 질환 또는 질병, 또는 이의 하나 이상의 증상을 예방, 치료 및/또는 관리할 수 있다. 본 발명은 액체 비-동결건조된 제형에 관한 것이지만, 본 발명의 제형이 필요에 따라 동결건조될 수 있는 균등물의 목적에 대하여 주목해야 한다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 제형의 동결건조된 형태를 포함한다.
6.15.1. 면역접합체 및 융합 단백질
본 발명의 특정 면에 따라, 치료학적 제제 또는 독소를 본 발명의 조성물 및 방법을 위해 사용하기 위한 키메라화된, 인간 또는 인간화된 항-CD 항체에 접합시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 이들 접합체는 융합 단백질로서 생성할 수 있다. 치료학적 제제 및 독소의 예는 분자의 에네디인 계열, 예를 들면, 칼리케아미신 및 에스페라미신의 구성원을 포함하지만, 이에 국한되지 않는다. 화학적 독소는 또한 듀오카르마이신[참조: 예를 들면, 미국 특허 제No. 5,703,080호 및 제4,923,990호], 메토트렉세이트, 독소루비신, 멜팔란, 클로람부실, APvA-C, 빈데신, 미토마이신 C, 시스-백금, 에토포사이드, 블레오마이신 및 5-플루오로우라실로 이루어진 그룹으로부터 취할 수 있다. 화학치료제의 예는 또한 아드리아마이신, 독소루비신, 5-플루오로우라실, 사이토신 아라비노사이드 (Ara-C), 사이클로포스파미드, 티오테파, 탁소테레 (도세탁셀), 부설판, 사이톡신, 탁솔, 메토트록세이트, 시스플라틴, 멜팔란, 빈블라스틴, 블레오마이신, 에토포사이드, 이포스파미드, 미토마이신 C, 미토크산트론, 빈크레이스틴, 비노렐빈, 카보플라틴, 테니포사이드, 다우노마이신, 카르미노마이신, 아미노프테린, 닥티노마이신, 미토마이신, 에스페라미신 (참조: 미국 특허 제4,675,187호), 멜팔란, 및 기타 관련된 질소 겨자를 포함한다.
특정 구체예들에서, 항-CD 항체는 세포정지제, 세포독성제 또는 면역억제제에 접합되며, 여기서 세포독성제는 에네디인, 렉시트롭신, 듀오카르마이신, 탁산, 푸로마이신, 돌라스타틴, 마이탄시노이드, 및 빈카 알칼로이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 어떤 더 특정한 구체예들에서, 세포독성제는 파클리탁셀, 도세탁셀, CC-1065, SN-38, 토포테칸, 모르폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 돌라스타딘-10, 에키노마이신, 콤브레스타틴, 칼리체아미신, 마이탄신, DM-I, 아우리스타틴 E, AE, AEVB, AEFP, MMAE(참조: 미국 특허출원 제10/983,340호), 또는 네트롭신으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 항-CD 19 항체-세포독성제 접합체의 세포독성제는 항-투불린제이다. 특정 구체예들에서, 세포독성제는 빈카 알칼로이드, 포도필로톡신, 탁산, 바카틴 유도체, 크립토피신, 마이탄시노이드, 콤브레타스타틴, 및 돌라스타딘으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구체예들에서, 세포독성제는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, VP-16, 캄프토테신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에피틸론 A, 에피틸론 B, 노코다졸, 콜키신, 콜시미드, 에스트라무스틴, 세마도틴, 디스코데르몰리드, 마이탄신, DM-I, AEFP, 아우리스타틴 E, AEB, AEVB, AEFP, MMAE 또는 엘레우테로빈으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체는 링커를 통해서 세포독성제에 융합되며, 여기서 링커는 펩타이드 링커이다. 다른 구체예들에서, 항-CD 19 항체는 링커를 통해서 세포독성제로 접합되며, 여기서 링커는 val-cit 링커, phe-lys 링커, 하이드라존 링커, 또는 디설파이드 링커이다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체-세포독성제 접합체의 항-CD 19 항체는 링커를 통해 세포독성제로 접합되며, 여기서 링커는 5.5 미만의 pH에서 가수분해가능하다. 특정 구체예에서, 링커는 5.5 미만의 pH에서 가수분해가능하다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체-세포독성제의 항-CD 19 항체는 링커를 통해 세포독성제로 접합되며, 여기서 링커는 프로테아제에 의해 분해가능하다. 특정 구체예에서, 프로테아제는 리소좀성 프로테아제이다. 다른 구체예들에서, 프로테아제는 특히 막 결합된 프로테아제, 쇄간 프로테아제, 또는 엔도솜성 프로테아제이다.
본 발명의 면역접합체에 사용할 수 있는 기타 독소는 독성 렉틴, 식물 독소, 예를 들면, 리신, 아브린, 모덱신, 보툴리나, 및 디프테리아 독소를 포함한다. 물론, 각종 독소들의 혼합물도 하나의 항체 분자에 커플링시켜서 가변성 세포독성을 수용할 수 있다. 본 발명의 병용 요법에 적합하게 사용되는 독소의 예는 리신, 아브린, 리보뉴클레아제, DNase I, 스타필로코코칼 엔테로톡신-A, 미국자리공 항-바이러스 단백질, 겔로닌, 디프테린 독소, 슈도모나스 외부독소, 및 슈도모나스 내부독소이다. 예를 들면, 문헌[참조: Pastan et ah, Cell, 47:641 (1986), and Goldenberg et ah, Cancer Journal or Clinicians, 44:43 (1994)]을 참조하라. 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비-결합성 활성 단편, 외부독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사로부터), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아 억제제, 큐르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 예를 들면, 1993년 10월 28일자로 공개된 WO 93/21232를 참조하라.
적합한 독소 및 화학치료제는 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed. (Mack Publishing Co. 1995), and in Goodman And Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7th Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985)]에 기재되어 있다. 기타 적합한 독소 및/또는 화학치료제는 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있다.
본 발명은 진단 목적에 적합한 방사활성제를 포함하거나 이에 접합된 항체(항체 단편 또는 이의 변이체를 포함함)를 추가로 포함한다. 적합한 방사활성 물질의 예는 요오드(121I, 123I, 125I, 131I), 탄소(14C), 황(35S), 트리튬(3H), 인듐(111In, 112In, 113 mIn, 115mIn), 테크네튬(99Tc, 99 mTc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga, 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브데늄(99Mo), 크세논135Xe), 불소18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 및97Ru를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다.
추가로, 본 발명의 항-CD 19 항체(항체 단편 또는 이의 변이체를 포함하거나, 또는 달리 이루어진 scFV 또는 기타 분자를 포함함)는 치료 목적으로 이용된 방사활성 금속 이온에 커플링되거나 접합될 수 있다. 적합한 방사활성 이온의 예는 알파-방출제, 예를 들면, 213Bi, 또는 기타 방사동위원소, 예를 들면, 103Pd, 135 Xe, 131I, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 35S, 90Y, 153Sm, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, 90Y, 117Tm, Re, Re 및 Ho를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, 항체 또는 이의 단편은 폴리펩타이드에 대하여 177Lu, 90Y, 166Ho, 및 153Sm을 포함하지만 이에 국한되지 않는 방사성금속 이온을 킬레이트화하는 매크로사이클릭 킬레이트화제에 부착된다. 특정 구체예들에서, 매크로사이클릭 킬레이트화제는 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N",N'"-테트라아세트산(DOTA)이다. 다른 특정 구체예에서, DOTA는 링커 분자를 통해 본 발명의 항체 또는 이의 단편에 부착된다. 폴리펩타이드에 DOTA를 접합시키기에 유용한 링커 분자의 예는 당해 분야에 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[참조: 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합되는 DeNardo et al., Clin Cancer Res 4(10):2483-90, 1998; Peterson et al., Bioconjug Chem 10(4):553-7, 1999; and Zimmerman et al., Nucl Med Biol 26(8):943-50, 1999]을 참조하라.
본 발명의 항-CD 19 항체는 또한 항체를, 전구약물(예를 들면, 펩티딜 화학치료제; 참조: WO81/01145)을 활성 항암 약물로 전환시키는 전구약물-활성화 효소에 접합시킴으로써 ADEPT에서 사용할 수 있다. 예를 들면, WO 88/07378 및 미국 특허 제4,975,278호를 참조하라. ADEPT에 유용한 면역접합체의 효소 성분은 전구약물을 이의 보다 활성인 세포독성 형태로 전환시키는 방식으로 전구약물에 작용할 수 있는 임의의 효소를 포함한다.
본 발명의 방법에 유용한 효소는, 인산염-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키기에 유용한 알칼리성 포스파타제; 황산염-함유 전구약물을 유리 드럭으로 전환시키기에 유용한 아릴설파타제; 비독성 5-플루오로시토신을 항암 약물, 5-플루오로우라실로 전환시키기에 유용한 시토신 데아미나제; 펩타이드 함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키기에 유용한 프로테아제, 예를 들면, 세라티아 프로테아제, 테르몰리신, 섭틸리신, 카복시펩티다제 및 카텝신(예: 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환체를 함유하는 전구약물을 전환시키기에 유용한 D-알라닐카복시펩티다제; 글리코실화된 전구약물을 유리 약물로 전환시키기에 유용한 β-갈락토시다제 및 뉴로아미디나제와 같은 탄수화물 분해 효소; α-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키기에 유용한 β-락타마제; 및 이의 아민 질소에서 각각 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸 그룹으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키기에 유용한 페니실린 아미다제, 예를 들면, 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 당해 분야에 "아브자임(abzyme)"이라고도 공지된, 효소적 활성을 갖는 항체는 사용될 수 있을 뿐만 아니라 전구약물을 유리 활성 약물로 전환시킬 수 있다[참조: 예를 들면, Massey, Nature 328:457-458 (1987)]. 항체-아브자임 접합체는 B 세포 악성종양에 의해 영향을 받는 인간의 부분에 바람직한 것으로서 아브자임의 전달을 위해 본원에 기술된 바와 같이 조제할 수 있다.
본 발명의 항체는 위에서 고찰한 이종이작용성 가교결합 시약을 사용하는 것과 같이 당해 분야에 공지된 기술을 사용하여 효소에 공유결합될 수 있다. 효소의 적어도 하나의 작용적으로 활성인 부분에 결합된 항-CD 19 항체의 적어도 항원-결합 영역을 포함하는 융합 단백질은 또한 당해 분야에 공지된 재조합체 DNA 기술을 사용하여 작제할 수 있다[참조: 예를 들면, Neuberger et al, Nature, 312:604-608 (1984)].
항-CD 19 항체의 공유결합적 변형은 본 발명의 영역 내에 포함된다. 이는 적용가능한 경우, 항체의 화학적 합성 또는 효소적 또는 화학적 분해에 의해 조제할 수 있다. 항-CD 19 항체의 기타 유형의 공유결합적 변형은 항체의 표적화된 아미노산 잔기를, 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시킴으로써 분자 내로 도입시킨다.
시스테이닐 잔기는 가장 일반적으로 α-할로아세테이트(및 상응하는 아민), 예를 들면, 클로로아세트산 또는 클로로아세트아미드와 반응시켜 카복시메틸 또는 카복시아미도메틸 유도체를 제공한다. 유사하게, 요오도-시약을 사용할 수도 있다. 시스테이닐 잔기는 또한 브로모트리플루오로아세톤, α-브로모-β-(5-이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-니트로-2-피리딜 디설파이드, 메틸 2-피리딜 디설파이드, p-클로로머큐리벤조에이트, 2-클로로머큐리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸과 반응시킴으로서 유도체화된다.
히스티딜 잔기는 pH 5.5 내지 7.0에서 디에틸피로카보네이트와 반응시킴으로써 유도체화되는 데, 그 이유는 이 제제가 히스티딜 측쇄에 대해 비교적 특이적이기 때문이다. 파라-브로모펜아실 브로마이드는 또한 유용하고, 반응은 pH 6.0에서 0.1 M 나트륨 카코딜레이트 중에서 수행할 수 있다.
라이실 및 아미노-말단 잔기는 석신산 또는 기타 카복실산 무수물과 반응한다. 이들 제제를 사용한 유도체화는 라이시닐 잔기의 전하를 역전시키는 효과를 갖는다. α-아미노-함유 잔기 및/또는 ε-아미노-함유 잔기를 유도체화하는 기타 적합한 시약은 이미도에스테르, 예를 들면, 메틸 피콜리니미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로하이드라이드, 트리니트로벤젠설폰산, O-메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온, 및 글리옥실레이트와의 트랜스아미나제-촉매화된 반응을 포함한다.
아르기닐 잔기는 하나 또는 수개의 통상적인 시약, 이들 중에서 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-사이클로헥산디온, 및 닌하이드린과의 반응에 의해 변형된다. 아르기닐 잔기의 유도체화는 일반적으로, 이 반응이 알칼리성 조건에서 수행되는 것을 필요로 하는데, 그 이유는 구나이딘 작용기의 높은 pKa 때문이다. 또한, 이들 시약은 아르기닌 엡실론-아미노기 뿐만 아니라 라이신 ε-아미노기와 반응할 수 있다.
티로실 잔기의 특정 변형은 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과 반응시킴으로써 스펙트럼 라벨을 티로실 잔기로 도입시키는 데 특정 관심을 갖고 조제할 수 있다. 가장 일반적으로, N-아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄을 사용하여 O-아세틸 티로실 종 및 3-니트로 유도체를 각각 형성할 수 있다. 티로실 잔기는 125I 또는 131I를 사용하여 요오드화하여 방사면역측정법에 사용하기 위한 표지화된 단백질을 조제한다.
카복실 측쇄 그룹(아스파르틸 또는 글루타밀)은 카바디가미드(R-N=C=N-R')[여기서, R 및 R'는 상이한 알킬 그룹이다], 예를 들면, 1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리닐-4-에틸)카바디가미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸)카바디가미드와 반응시킴으로써 선택적으로 변형시킨다. 더구나, 아스파르틸 및 글루타밀 잔기는 암모늄 이온과 반응시킴으로써 아스파라기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환된다.
글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기는 종종 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로 각각 탈아미드화된다. 이들 잔기는 중성 또는 염기성 조건하에서 탈아미드화된다. 이들 잔기의 탈아미드화된 형태는 본 발명의 영역 내에 있다.
기타 변형은 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 그룹의 포스포릴화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노기의 메틸화(T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카복실기의 아미드화를 포함한다.
공유결합성 변형의 또 다른 유형은 항체로 화학적으로 또는 효소적으로 커플링되는 것을 포함한다. 이들 방법은, 이들이 N- 또는 O-연결된 글리코실화에 대한 글리코실화 능력을 갖는 숙주 세포에서 항체의 생산을 필요로 하지 않는다는 점에서 유리하다. 사용된 커플링 방식에 따라, 당은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카복실기, (c) 유리 설프하이드릴 그룹, 예를 들면, 시스테인의 그룹, (d) 유리 하이드록실 그룹, 예를 들면, 세린, 트레오닌, 또는 하이드록시프롤린의 것들, (e) 방향족 잔기, 예를 들면, 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토판, 또는 (f) 글루타민의 아미드 그룹에 부착될 수 있다. 이들 방법은 1987년 9월 11일자로 공개된 WO 87/05330, 및 문헌[참조: Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)]에 기술되어 있다.
6.16. 화학요법적 병용
다른 구체예들에서, 항-CD 19 mAb는 하나 이상의 추가의 화학요법제와 병용하여 투여할 수 있다. 예를 들면, "CVB" (1.5 g/m 사이클로포스파미드, 200-400 mg/m2 에토포사이드, 및 150-200 mg/m2 카르무스틴)를 본 발명의 병용 요법에 사용할 수 있다. CVB는 비-호지킨 림프종을 치료하는 데 사용되는 요법이다(Patti et al, Eur. J. Haematol, 51: 18 (1993)). 기타 적합한 병용 화학치료 요법은 당해 분야의 숙련가들에게 익히 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[참조: Freedman et al., "Non-Hodgkin 's Lymphomas," in Cancer Medicine, Volume 2, 3rd Edition, Holland et al (eds.), pp. 2028-2068 (Lea & Febiger 1993)]을 참조하라. 설명으로서, 중간 등급 비-호지킨 림프종을 치료하기 위한 제1 세대 화학치료 요법은 C-MOPP (사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 프로카르바진 및 프레드니손) 및 CHOP (사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니손)을 포함한다. 유용한 2세대 화학치료 요법은 m-BACOD (메토트록세이트, 블레오마이신, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 덱사메타손, 및 류코보린)이지만, 적합한 3세대 요법은 MACOP-B (메토트록세이트, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 프레드니손, 블레오마이신 및 류코보린)이다. 추가의 유용한 약물은 페닐 부티레이트 및 브로스타틴-1을 포함한다.
본 발명에 따라, 암 또는 이의 하나 이상의 증상은 화학요법, 방사선 요법, 호르몬 요법 및/또는 생물학적 요법/면역요법과 같지만 이에 국한되지 않는 하나 이상의 요법의 투여와 병용한 항-CD 19 mAb의 투여에 의해 예방, 치료, 관리 또는 경감될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 방법은 다음과 같지만 이에 국한되지 않는 하나 이상의 혈관형성 길항제의 투여를 포함한다: 안지오스타틴(플라스미노겐 단편); 항형관형성 안티트롬빈 III; 안지오자임; ABT-627; Bay 12-9566; Benefin; Bevacizumab; BMS-275291; 연골-유도된 억제제(CDI); CAI; CD59 상보체 단편; CEP-7055; Col 3; 콤브레타스타틴 A-4; 엔도스타딘(콜라겐 XVIII 단편); 피브로넥틴 단편; 그로-배타; 할로푸기논; 헤파리나세스; 헤파린 헥사삭카라이드 단편; HMV833; 인간 만성 고나도트로핀(hCG); IM-862; 인터페론 알파/베타/감마; 인터페론 유도성 단백질(IP-IO); 인터류킨-12; 크링글 5 (플라스미노겐 단편); 마리마스타트; 메탈로프로테이나제 억제제(TIMPs); 2-메톡시에스트라디올; MMI 270 (CGS 27023A); MoAb IMC-ICl 1; 네오바스타트; NM-3; 판젬(Panzem); PI-88; 플레이센탈 리보뉴클레아제 억제제(Placental ribonuclease inhibitor); 플라스미노겐 활성화제 억제제; 혈소판 인자-4 (PF4); 프리노마스타트(Prinomastat); 프로락틴 16kD 단편; 프롤리페린-관련 단백질(PRP); PTK 787/ZK 222594; 레티노이드; 솔리마스타트; 수쿠알라민; SS 3304; SU 5416; SU6668; SUl 1248; 테트라하이드로코르티졸-S; 테트라티오몰리브데이트; 탈리도미드; 트롬보스폰딘-1 (TSP-I); TNP-470; 변환 성장 인자-베타(TGF-b); 바스쿨로스타딘; 바소스타틴(칼레티쿨린 단편); ZD6126; ZD 6474; 파르네실 트랜스퍼라제 억제제(FTI); 및 비스포스포네이트(알레드로네이트, 클로드로네이트, 에티드로네이트, 이반드로네이트, 파미드로네이트, 리세드로네이트, 틸루드로네이트 및 졸레드로네이트와 같지만 이에 국한되지 않음).
특정 구체예에서, 본 발명의 방법은 화학요법제 및 비-화학요법 면역조절제와 같지만 이에 국한되지 않는 하나 이상의 면역조절제를 투여함을 포함한다. 화학요법제의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 메토트렉세이트, 사이클로포르포린 A, 레플루노미드, 시스플라틴, 이포스파미드, 탁산, (예, 탁솔 및 파클리탁솔), 토포이소머라제 I 억제제(예: CPT-11, 토포테칸, 9-AC, 및 GG-211), 겜시타빈, 비노렐빈, 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실 (5-FU), 류코보린, 비노렐빈, 테모달, 사이토갈라신 B, 그라미시딘 D, 에메틴, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미토크산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀올, 및 푸로마이신 동족체, 및 사이톡산. 비-화학요법적 면역조절제의 예는 다음을 포함하지만 이에 국한되지 않는다: 항-T 세포 수용체 항체(예: 항-CD4 항체(예: cM-T412 (Boeringer), IDEC-CE9.1®(IDEC 및 SKB), mAB 4162W94, 오르토클론 및 OKTcdr4a (Janssen-Cilag)), 항-CD3 항체(예: Nuvion (Product Design Labs), OKT3 (Johnson & Johnson), 또는 Rituxan (IDEC)), 항-CD5 항체(예: 항-CD5 리신-연결된 면역접합체), 항-CD7 항체(예: CHH-380 (Novartis)), 항-CD8 항체, 항-CD40 리간드 단클론 항체(예: IDEC-131 (IDEC)), 항-CD52 항체(예: CAMPATH 1H (Ilex)), 항-CD2 항체(예: MEDI-507 (Medlmmune, Inc., International Publication Nos. WO 02/098370 and WO 02/069904), 항-CDl Ia 항체(예: Xanelim (Genentech)), 및 항-B7 항체(예: IDEC-114) (IDEC)); 항-사이토킨 수용체 항체(예: 항-IFN 수용체 항체, 항-IL-2 수용체 항체(예: Zenapax (Protein Design Labs)), 항-IL-4 수용체 항체, 항-IL-6 수용체 항체, 항-IL-10 수용체 항체, 및 항-IL-12 수용체 항체), 항-사이토킨 항체(예: 항-IFN 항체, 항- TNF-α 항체, 항-IL-1β 항체, 항-IL-6 항체, 항-IL-8 항체(예: ABX-IL-8(Abgenix)), 항-IL-12 항체 및 항-IL-23 항체)); CTLA4-면역글로불린; LFA-3TIP (Biogen, International Publication No. WO 93/08656 및 U.S. 특허 No. 6, 162,432); 가용성 사이토킨 수용체 (예: TNF-α수용체 또는 이의 단편의 세포외 도메인, IL-1β 수용체 또는 이의 단편의 세포외 도메인, 및 IL-6 수용체 또는 이의 단편의 세포외 도메인); 사이토킨 또는 이의 단편(예: 인터류킨(IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-IO, IL-11, IL-12, IL-15, IL-23, TNF-α, TNF-β 인터페론 (IFN)-α, IFN-β, IFN-γ 및 GM-CSF); 및 항-사이토킨 항체(예: 항-IL-2 항체, 항-IL-4 항체, 항-IL-6 항체, 항-IL-10 항체, 항-IL-12 항체, 항-IL-15 항체, 항-TNF-α항체, 및 항-IFN-γ항체), 및 종양 결합된 항원(예:Herceptin®)에 면역특이적으로 결합하는 항체. 특정 구체예들에서, 면역조절제는 화학요법제 이외의 면역조절제이다. 다른 구체예들에서, 면역조절제는 사이토킨 또는 조혈제, 예를 들면, IL-1, IL-2, IL-4, IL-12, IL-15, TNF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, M-CSF, G-CSF, IL-3 또는 에리쓰로포이에틴 이외의 면역조절제이다. 하지만 다른 구체예들에서, 면역조절제는 화학요법제 및 사이토킨 또는 조혈 인자 이외의 제제이다.
특정 구체예에서, 본 발명의 방법은 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 스테로이드성 소염 약물, 베타-길항제, 안티초 린제리 제제(anticho lingerie agent), 및 메틸 크산틴과 같지만 이에 국한되지 않는, 하나 이상의 소염제의 투여를 포함한다. NSAID의 예는 이에 국한되지는 않지만, 아스피린, 이부프로펜, 셀레콕시브(CELEBREXTM), 디클로페낙(VOLTARENTM), 에토돌락(LODINETM), 페노프로펜 (NALFONTM), 인도메타신(INDOCINTM), 케토랄락(TORADOLTM), 옥사프로진(DAYPROTM), 나부멘톤(RELAFENTM), 설린닥(CLINORILTM), 톨멘틴(TOLECTINTM), 로페콕시브(VIOXXTM), 나프록센(ALEVETM, NAPROSYNTM), 케토프로펜(ACTRONTM), 및 나부멘톤(RELAFENTM)을 포함한다. 이러한 NSAID는 사이클로옥시게나제 효소(예: COX-I 및/또는 COX-2)를 억제함으로써 작용한다. 스테로이드성 소염 약물의 예는 글루코코르티코이드, 덱사메타손 (DECADRONTM), 코르티손, 하이드로코르티손, 프레드니손(DELTASONETM), 프레드니솔론, 트리암시놀론, 아줄피딘, 및 에이코사노이드, 예를 들면, 프로스타글란딘, 트롬복산, 및 류코트리엔을 포함하지만, 이에 국한되지 않는다.
또 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 방법은 하나 이상의 항바이러스제(예: 아만타딘, 리바비린, 리만타딘, 아시클로비르, 팜시클로비르, 포스카르넷, 간시클로비르, 트리플루리딘, 비다라빈, 디다노신, 스타부딘, 잘시타빈, 지도부딘, 인터페론), 항생제(예: 닥티노마이신(앞선 명칭: 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 및 안트라마이신(AMC)), 항-구토제(예: 알프라졸람, 데사메타손, 도메리돈, 드로나비놀, 드로페리돌, 그라니세트론, 할로페리돌, 할로페리돌, 이오라제팜, 메틸프레드니솔론, 메토클로프라미드, 나빌론, 온단세트론, 프로클로르페라진), 항-진균제(예: 암포테리신, 클로트리마졸, 에코나졸, 플루코나졸, 플루사이토신, 그리세오풀빈, 이트라코나졸, 케토코나졸, 미코나졸 및 니스타틴), 항-기생충제(예: 데하이드로에메틴, 딜록사니드 플루오레이트, 에메틴, 멜플로퀸, 멜라르조프롤, 메트로니다졸, 니푸르티목스, 파로모마이신, 펜타비딘, 펜타미딘 이세티오네이트, 프리마퀸, 퀴나크린, 퀴니딘) 또는 이의 병용을 포함한다.
약제학적 조성물 및 용량형 및 키트를 포함하는, 본 발명의 각종 구체예들에 사용될 수 있는 항암제의 구체적인 예는 다음을 포함하나 그에 국한하지 않는다: 악시비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아도젤레신; 알데슬레우킨; 알트레타민; 아보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스펄린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스타트; 벤조데파; 비칼루트아미드; 비산트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 비젤레신;블레오마이신 설페이트; 브레키나르 나트륨 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카보플라틴; 카르무스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핀골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 사이타라빈; 다카라빈; 다카르바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소르마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 듀아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로디딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포사이드; 에토포사이드 포스페이트; 에토프린, 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 겜시타빈; 겜시타빈 하이드로클로라이드; 하이드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터류킨 II (재조합체 인터류킨 II, 또는 rIL2를 포함함), 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 앞라-nl ; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-Ia; 인터페론 감마-Ib; 이프프로플라딘; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오타이드 아세테이트; 레트로졸; 류프롤라이드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로무스틴; 로속산트론 하이트로클로라이드; 마소프로콜; 마이탄신; 메클로레타민 하이드로클로라이드; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌제스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트록세이트; 메토트록세이트 나트륨; 에토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카르신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스페르; 미토탄; 미토크산트론 하이드로클로라이드; 미코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파클리탁셀; 페가스파르가제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 펩플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 필카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피르모마이신; 프레드니무스틴; 프로카르바진 하이드로클로라이드; 푸로마이신; 푸로마이신 하이드로클로라이드; 프라조푸린; 리보푸린; 로글레티미드; 사핀골; 사핀골 하이드로클로라이드; 세무스틴; 심트라젠; 스파르포세이트; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 설로페누르; 탈리소마이신; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포사이드; 테로시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸린; 티라파자민; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트리프토렐린; 투불로졸 하이드로클로아이드; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오타이드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈레우로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 조루비신 하이드로클로라이드. 기타 항암 약물은 다음을 포함하나 그에 국한하지 않는다: 20-에피-1,25 디하이드록시비타민 D3; 5-에티닐우라실; 아비라테론; 아클라루비신; 아실풀벤네; 아데시페놀; 아도젤레신; 알데슬레우킨; ALL-TK 길항제; 알트레타민; 암바무스틴; 아미독스; 아미포스틴; 아미노레불린산; 암루비신; 암사크린; 아나그렐라이드; 아나스트로졸; 안드로그라폴리드; 혈관형성 억제제; 길항제 D; 길항제 G; 안타렉릭스; 항-도르살라이징 형태형성 단백질-1; 안티안드로겐, 전립선 암종; 안티에스트로겐; 안티네오플라스톤; 안티센스 올리고뉴클레오타이드; 아피디콜린 글리시네이트; 세포자멸사 유전자 조절제; 세포자멸사 조절제; 아푸린산; 아라-CDP-DL-PTBA; 아르기닌 데아미나제; 아술라크린; 아타메스탄; 아트리무스틴; 악시나스타틴 1; 악시나스타틴 2; 악시나스타틴 3; 아자세트론; 아자톡신; 아자피로신; 박카틴 III 유도체; 발라놀; 바티마스타트; BCR/ABL 길항제; 벤조클로린; 벤조일스타우로스포린; 베타 락탐 유도체; 베타-알레틴; 베타클라미이신 B; 베툴린산; bFGF 억제제; 비칼루타미드; 비산트렌; 비사지리디닐스페르민; 비스나피데; 비스트라텐 A; 비젤레신; 브레플레이트; 브로피리민; 부도티탄; 부티오닌; 설폭시민; 칼시포트리올; 칼포스틴 C; 캄토테신 유도체; 카나리폭스 IL-2; 카페시타빈; 카복사미드-아미노-트리아졸; 카복시아미도트리아졸; CaRest M3; CARN 700; 연골 유도된 억제제; 카르젤레신; 카제인 키나제 억제제(ICOS); 카스타노스페르민; 세크로핀 B; 세트로렉릭스; 클로를른; 클로로퀴녹살린 설폰아미드; 시카프로스트; 시스-포르피린; 클라드리빈; 클로미펜 유사체; 클로트리마졸; 콜리스마이신 A; 콜리스마이신 B; 콤프레타스타틴 A4; 콤프레타스타틴 유사체; 코나게닌; 크람베스시딘 816; 크리스나톨; 크립토피신 8; 크립토피신 A 유도체; 쿠라신 A; 사이클로펜트안트라퀴논; 사이클로플라탐; 사이페마이신; 사이타라빈 옥포스페이트; 사이톨리틱 인자; 사이토스타닌; 다클릭시맙; 데시타빈; 데하이드로디뎀닌 B; 데슬로렐린; 덱사메타손; 덱시포스파미드; 덱스라조산; 데스베라파밀; 디아지퀴온; 디뎀닌 B; 디독스; 디에틸노르스페르민; 디하이드로-5-아자사이티딘; 디하이드로탁솔, 9-; 디옥사마이신; 디페닐 스피로무스틴; 도세탁셀; 도코사놀; 돌라세트론; 독시플루리딘; 드롤록시펜; 드로나비놀; 듀오카르마이신 SA; 엡셀렌; 에코무스틴; 에델포신; 에드레콜로맙; 에플로르니틴; 엘레멘; 에미테푸르; 에피루비신; 에프리스테리드; 에스트라무스틴 유사체; 에스트로겐 작용제; 에스트로겐 길항제; 에타니다졸; 에토포사이드 포스페이트; 엑세메스탄; 파드로졸; 파자라빈; 펜레티니드; 필그라스팀; 피나스테리드; 플라보피리돌; 플레젤라스틴; 플루아스테론; 플루다라빈; 플루오로다우노루니신 하이드로클로라이드; 포르페니멕스; 포르메스탄; 포스트리에신; 포테무스틴; 가돌리늄 텍사피린; 갈륨 니트레이트; 갈로시타빈; 가니렐릭스; 겔라티나제 억제제; 겜시타빈; 글루타티온 억제제; 헵술팜; 헤레굴린; 헥사메틸렌 비스아세트아미드; 하이퍼리신; 이반드론산; 아다루비신; 이독시펜; 이드라만톤; 일모포신; 일로마스타트; 이미다조아크리돈; 이미퀴모드; 면역자극제 펩타이드; 인슐린형 성장 인자-1 수용체 억제제; 인터페론 작용제; 인터페론; 인터류킨; 이오벤구안; 요오도독소루비신; 이포메아놀, 4-; 이로플락트; 이르소글라딘; 이소벤가졸; 이소호모할리콘드린 B; 이타세트론; 자스플라키놀라이드; 카할라이드 F; 라멜라린-N 트리아세테이트; 란레오타이드; 레인아마이신; 레노그라스팀; 렌티난 설페이트; 렙톨스타틴; 레트로졸; 백혈병 억제 인자; 백혈구 알파 인터페론; 류프롤라이드+에스트로겐+프로게스테론; 류프로렐린; 레바미졸; 리아로졸; 류프로렐린; 류프로렐린; 레바미졸; 류프로렐린; 레바미졸; 리아로졸; 선형 폴리아민 유사체; 친지성 이당류 펩타이드; 친지성 백금 화합물; 리소클린아미드 7; 로바플라틴; 롬브리신; 로메트렉솔; 로니다민; 로속산트론; HMG-CoA 리덕타제 억제제(예: 이에 국한되지는 않지만, 로바스타틴, 프라바스타틴, 플루바스타틴, 스타틴, 시바스타틴 및 아트로바스타틴); 록소루빈; 루르토테칸; 루테튬 텍사피린; 리소필린; 세포용해 펩타이드; 마이탄신; 만노스타틴 A; 마리마스타트; 마소프로콜; 마스핀; 마트릴리신 억제제; 매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제; 메노가릴; 메르바론; 메트렐린; 메티오니나제; 메토클로프라미드; MIF 억제제; 미페프리스톤; 밀테포신; 미리모스팀; 부조화된 이중 가닥 RNA; 미토구아존; 미토락톨; 미토마이신 유사체; 미토나피드; 미토톡신 섬유모세포 성장 인자-사포린; 미토크산트론; 모파로텐; 몰그라모스팀; 단클론 항체, 인간 만성 고나도트로핀; 모노포스포릴 지질 A+ 미오박테리움 세포벽 sk; 모피다몰; 다중 약물 내성 유전자 억제제, 다중 종양 억제제 1-기반의 요법; 머수타드 항암제; 마이카퍼옥사이드 B; 미코박테리아 세포벽 추출물; 미리아포론; N-아세틸디날린; N-치환된 벤자미드; 나파렐린; 나그레스팁; 날록손+펜타조신; 나파빈; 나프테르핀; 나르토그라스팀; 네다플라틴; 네모루비신; 네리드론산; 중성 엔도펩티다제; 닐루타미드; 니사마이신; 산화질소 조절인자; 니트록사이드 항산화제; 니트룰린; O6-벤질구아닌; 옥트레오타이드; 오키세논; 올리고뉴클레오타이드; 오나프리스톤; 온다세트론; 오라신; 경구 사이토킨 유도인자; 오르마플라틴; 오사테론; 옥살리플라틴; 옥사우노마이신; 파클리탁셀; 파클리탁셀 유사체; 파클리탁셀 유도체; 팔라우아민; 팔미토일리족신; 파미드론산; 파낙시트리올; 파노미펜; 파라박틴; 파젤립틴; 페가스파르가제; 펠데신; 펜토산 폴리설페이트 나트륨; 펜토스타틴; 펜트로졸; 페르풀루브론; 페르포스파미드; 페릴릴 알코올; 페나지노마이신; 페닐아세테이트; 포스파타제 억제제; 피키바닐; 필로카르핀 하이드로클로라이드; 피라루비신; 피리트렉심; 플라세틴 A; 플라세틴 B; 플라스미노겐 활성인자 억제제; 플라티늄 착물; 플라니튬 화합물; 플라티늄-트리아민 착체; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니손; 프로필 비스-아크리돈; 프로스타글란딘 J2; 프로테아솜 억제제; 단백질 A-계 면역 조절인자; 단백질 키나제 C 억제제; 단백질 키나제 C 억제제, 미세조류; 단백질 타이로신 포스파타제 억제제; 푸린 뉴클레오사이드 포스포릴라제 억제제; 푸르푸린스; 피라졸로아크리딘; 피리독실화된 헤모글로빈 폴리옥시에틸렌 접합체; raf 파르네실 단백질 트랜스퍼라제 억제제; ras 억제제; ras-GAP 억제제; 데메틸화된 레텔리프틴; 레늄 Re 186 에티드로네이트; 리족신; 리보자임; RII 레티나미드; 로그레티미드; 로히투킨; 로무르티드; 로퀴니멕스; 루비기논 B1; 루복실; 사피골; 사인토핀; SarCNU; 사르코피톨 A; 사르그라모스팀; Sdi 1 모사체; 세무스틴; 세네스센스 기원한 억제제 1; 센스 올리고뉴클레오타이드; 시그날 형질유도 억제제; 시그날 형질유도 조절인자; 일본쇄 항원 결합 단백질; 소부족산; 나트륨 부로캅테이트; 나트륨 페닐아세테이트; 솔베롤; 소마토메딘 결합 단백질; 소네르민; 스파포식산; 스피카마이신 D; 스피로무스틴; 스플레노펜틴; 스폰기스타틴 1; 스쿠알라민; 줄기 세포 억제제; 줄기 세포 분열 억제제; 스티피아미드; 스트로멜라이신 억제제; 설프포신; 초활성 혈관활성 장 펩타이드 길항제; 수라디스타; 수라민; 스와인소닌; 합성 글리코사미노글리칸; 탈리무스틴; 타목시펜 메티오다이드; 타우로무스틴; 타자로텐; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔루라피릴륨; 텔로메라제 억제제; 네토포르핀; 테모졸로마이드 테니포사이드; 테트라클로로데카옥사이드; 테트라조민; 탈리블라스틴; 티오코랄린; 트롬보포이에틴; 트롬보포이에틴 모사체; 티말파신; 티모포이에틴 수용체 효능제; 티모트리난; 갑상샘 자극 호르몬; 틴 에틸 에티오푸르푸린; 티라파자민; 티타노켄 비클로라이드; 토프센틴; 토레미펜; 토피포텐트 줄기 세포 인자; 해독 억제제; 트레티노인; 트리아세틸우리딘; 트리시리빈; 트리메트렉세이트; 트리프토렐린; 트로피세트론; 푸로스테라이드; 타이로신 키나제 억제제; 티르포스틴; UBC 억제제; 우베니멕스; 비뇨생식기 굴-기원한 성장 억제 인자; 우로키나제 수용체 길항제; 바프레오타이드; 바리올린 B; 벡터 시스템, 에리트로사이트 유전자 요법; 벨라레솔; 베라민; 베르딘; 베르테포르핀; 비노렐빈; 빈크살틴; Vitaxin®; 보로졸; 자노테론; 제니플라틴; 질라스코르브; 및 지노스타틴 자극인자. 추가의 항암 약물은 5-플루오로우라실 및 류코보린이다. 이들 2개의 제제는 탈리도마이드 및 토포이소머라제 억제제를 사용하는 방법에서 사용하는 경우에 유용할 수 있다. 특정 구체예들에서, 항암제는 화학요법제가 아니다. 더 특정한 구체예들에서, 본 발명은 또한 위에서 기술한 바와 같이 유방, 난소, 흑색종, 전립샘, 결장 및 폐 암의 치료를 위해 표 1에 개시된 것들과 같지만, 이에 국한되지 않는 하나 이상의 요법의 투여와 병용하는 항-CD19 mAb의 투여를 포함한다. 병용 요법에서 사용하는 경우, 표 2에 명시된 투여 용량 및/또는 투여 빈도를 감소시킬 수 있다.
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
본 발명은 또한 암 세포를 파괴하기 위한 x-선, 감마 선 및 기타 공급원의 사용을 포함하는 방사선 요법과 병용한 항-CD 19 mAb의 투여를 포함한다. 특정 구체예들에서, 방사선 치료는 외부 빔 방사선 또는 원격치료법으로서 투여하며, 여기서, 방사선은 원격 공급원으로부터 지향된다. 다른 구체예들에서, 방사선 치료는 내부 요법 또는 근접 치료로서 투여되며, 여기서 방사활성 공급원은 암 세포 또는 종양 덩어리에 근접한 신체 내부에 위치한다.
암 요법 및 이의 용량, 투여 경로 및 추천된 용법은 당해 기술분야에 공지되어 있으며 문헌[참조: Physician 's Desk Reference (56th ed., 2002)]에 기술되어 있다.
6.17. 약제학적 조성물
본 발명은 또한 인간 피험체에서 B 세포 질병 및 질환, 예를 들면, 이에 국한되지는 않지만, B 세포 악성종양을 치료하기 위한 면역요법적 조성물 및 방법, 인간 이식 수용체에서 GVHD, 이식 거부증, 및 이식후 림프구 증식성 질환의 치료 및 예방용 면역요법적 조성물 및 방법, 및 CD 19 항원에 결합되고 인간 ADCC를 매개할 수 있는 요법적 항체를 사용하여, 인간 대상체에서 자가면역 질환 및 질병을 치료하기 위한 면역요법적 조성물 및 방법에 관한 것이다.
본 발명은 IgGl 또는 IgG3 인간 동형의 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 인간 ADCC를 매개할 수 있는 IgG2 또는 IgG4 인간 동형의 인간 또는 인간화된 항-CD 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 또한 당해 분야에 공지된 수단으로 생산할 수 있는 단클론 인간, 인간화된 또는 키메라화된 항-CD 19 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
요법적 제형 및 요법(요법)은 급성, 림프모구 백혈병(ALL), 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, B 세포 만성 림프구 백혈병(CLL), 다중 골수종, 소포 림프종, 외투 세포 림프종, 예비-림프구성 백혈병, 모세포 백혈병, 공동 급성 림프구성 백혈병 및 일부 비-급성 림프모구 백혈병을 포함하지만 이에 국한되지 않는 B 세포 및 이의 전구체로부터 유도되는 B 세포 악성종양으로 진단된 인간 피험체를 치료하기 위해 기술된다.
다른 특정 구체예들에서, 항-CD 19 항체는 ADCC, 상보체 의존성 세포형 세포독성, 또는 세포자멸사를 매개할 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법은 또한 기타 B 세포 지향된 면역요법 이외에 B 세포의 더 큰 집단을 표적화하는 이점을 갖는다. 예를 들면, 본 발명의 항-CD 19 항체는 골수 세포, 순환 B 세포, 및 성숙한 항체-분비 B 세포를 표적화하는 데 효과적일 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법 및 조성물은 순환하는 면역글로불린 뿐만 아니라 순환하는 B 세포를 감소시키거나 고갈시키는 데 유효할 수 있다.
따라서, 하나의 면에서, 본 발명은 GVHD, 이식 거부증, 및 이식후 림프증식성 질환의 치료 및 예방용 조성물 및 방법을 제공하며, 이 질환은 덜 표적화된 요법제 및 요법보다 더 적은 및/또는 덜 심한 합병증과 관련된다. 일 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 본 발명의 방법 및 조성물의 부재의 경우에 가능할 수 있는 더 낮은 용량의 전통적인 요법제와 함께 사용한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 방사선 치료 요법, 고-용량 화학요법 또는 비장절제술과 같은 더 엄중한 형태의 요법에 대한 필요성을 배제한다.
특정 구체예들에서, 항-CD 항체 및 조성물은 GVHD 및 이식 거부증의 치료 또는 예방을 위한 기타 요법제 또는 요법과 병용하여 또는 이들 단독으로, 이식 전 또는 후에 이식 수용체 환자에게 투여할 수 있다. 예를 들면, 항-CD 19 항체 및 조성물을 사용하여 동종 이식체의 이식 전 또는 후에 이식 수용체로부터의 동종항체를 고갈시킬 수 있다. 항-CD 19 항체 및 조성물은 또한 GVHD 및 이식 거부증에 대한 예방법으로서, 공여체에서, 또는 이식 전에, 생체외 이식체로부터의 항체-생산 세포를 고갈시키는 데 사용할 수 있다.
6.18. 약제학적 제형, 투여 및 용량
본 발명의 약제학적 제형은 활성 성분으로서 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD 19 항체를 포함한다. 제형은 인간 환자에게 투여하기에 적합하고 바람직하게는 무균 중량 또는 용적의 단위로 원하는 반응을 생성하기에 효과적인 양으로 나항체(naked antibody), 면역접합체 또는 융합 단백질을 함유한다. 이 반응은, 예를 들면, 순환하는 B 세포 고갈, 조직 B 세포 고갈, B 세포 악성종양의 퇴행, 또는 질병 증상의 감소와 같지만 이에 국한되지 않는, 항-CD 19 항체 조성물의 생리학적 효과를 측정함으로써 측정할 수 있다. 기타 검정은 당해 분야의 숙련가들에게 공지될 것이며 반응의 수준을 측정하기 위해 사용할 수 있다.
6.18.1 약제학적 제형
항-CD 19 항체 조성물은 약제학적으로 조건에 맞는 담체로 조제될 수 있다. 용어 "약제학적으로 조건에 맞는"은 활성 성분들의 생물학적 활성의 유효성을 간섭하지 않는 하나 이상의 비독성 물질을 의미한다. 이러한 제제는 일반적으로 염, 완충제, 방부제, 상용성 담체, 및 선택적으로 기타 치료학적 제제를 함유할 수 있다. 이러한 약제학적 제제는 또한 일반적으로 인간에게 투여하기에 적합한 상용성 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐로 싸는 물질을 함유할 수 있다. 약제에 사용되는 경우, 염은 약제학적으로 조건에 맞아야 하지만, 비-약제학적으로 조건에 맞는 염은 이의 약제학적으로 조건에 맞는 염을 조제하기 위해 사용하는 것이 편리할 수 있으며, 본 발명의 영역으로부터 배제되지 않는다. 이러한 약리학적으로 및 약제학적으로 조건에 맞는 염은 다음 산들로부터 조제된 것들을 포함하지만 이에 국한되지 않는다: 염산, 브롬산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, 시트르산, 붕산, 포름산, 말론산, 석신산 등. 또한, 약제학적으로 조건에 맞는 염은 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염, 예를 들면, 나트륨, 칼륨 또는 칼슘 염으로 조제할 수 있다. 용어 "담체"는 유기 또는 무기 성분, 천연 또는 합성 물질을 나타내며, 담체와 활성 성분은 화합되어 그 적용을 용이하게 한다. 약제학적 조성물의 성분들은 또한 본 발명의 항체와, 그리고 서로, 원하는 약제학적 효능을 실질적으로 손상시키는 상호작용이 없는 방법으로 혼합될 수 있다.
본 발명의 특정 면에 따라, 항-CD 19 항체 조성물은 생리학적으로 조건에 맞는 선택적 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington 's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. (1999))와 원하는 정도의 순도를 갖는 항체 또는 면역접합체를 동결건조된 제형 또는 수용액 형태로 혼합하여 조제하여 저장할 수 있다. 조건에 맞는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에 비독성이며, 완충제 (예, 인산염, 시트르산염 및 기타 유기 산); 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예: 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들면, 메틸 똔는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 잔사 미만) 폴리펩타이드; 단백질 (예, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린); 친수성 중합체 (예, 폴리비닐피롤리돈); 아미노산 (예, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신); 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물 (글루코스, 만노스, 또는 덱스트린 포함); 킬레이트제 (예, EDTA); 당 (예, 슈크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨); 염-형성 역이온 (예, 나트륨); 금속 착체 (예, Zn-단백질 착체); 및/또는 비이온성 표면활성제 (예, TWEEN, PLURONICSTM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG))를 포함한다.
항-CD 19 항체 조성물은 또한 선택적으로 적합한 보존제, 예를 들면, 벤즈알코늄 클로라이드; 클로로부탄올; 파라벤 및 티메로잘을 함유할 수 있다.
항-CD 19 항체 조성물은 편리하게는 단위 용량 형태로 제공될 수 있으며, 약학 분야에 익히 공지된 방법들 중의 어느 하나로 조제할 수 있다. 모든 방법들은 활성제를 하나 이상의 부속 성분들을 구성하는 담체와의 혼합물로 활성제를 결합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 항-CD 19 항체 조성물은 활성 화합물을 액체 담체, 미분된 고체 담체, 또는 이들 둘 다와의 혼합물로 궁극적으로 결합시킨 다음, 필요한 경우, 생성물을 성형시킴으로써 조제한다.
비경구 투여에 적합한 조성물은 편리하게는 항-CD 19 항체의 멸균 수성 또는 비수성 제제를 포함하며, 이는 수용체의 혈액과 등장성일 수 있다. 이 제제는 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 방법에 따라 조제할 수 있다. 멸균 주사성 제제는 또한 예를 들면, 1,3-부탄디올 중의 용액으로서, 비독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사성 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는 조건에 맞는 매개체 및 용매 중에는 물, 링거 용액, 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 무균, 고정 오일은 용액 또는 현탁 매질로서 편리하게 사용된다. 이러한 목적으로, 합성 모노- 또는 디-글리세라이드를 포함하는 임의의 무자극성 지방유를 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산을 주사가능한 물질의 조제에 사용할 수 있다. 경구, 피하, 정맥내, 근육내 등 투여에 적합한 담체 제형은 문헌[참조: Remington 's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA]에서 발견할 수 있다. 특정 구체예들에서, 각종 투여 경로에 적합한 담체 제형은 RITUXANTM에 대해 기술된 것과 동일하거나 유사할 수 있다. 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합되는 문헌[참조: Physicians ' Desk Reference (Medical Economics Company, Inc., Montvale, NJ, 2005), pp. 958-960 and 1354-1357]을 참조하라. 본 발명의 특정 구체예들에서, 항-CD 항체 조성물은 염화나트륨, 시트르산나트륨 이수화물, 폴리소르베이트 80, 및 멸균수로 정맥내 투여용으로 조제하며, 여기서 조성물의 pH는 대략 6.5로 조정한다. 당해 분야의 숙련가들은, 정맥내 주사가 신속하게 분배되는 항체에서 순환의 철저함으로 인하여 유용한 방식의 투여를 제공한다는 것을 알고 있다. 그러나, 정맥내 투여는 맥관구조 및 내피하부 매트릭스의 내피 세포를 포함하는 혈관 장벽에 의해 제한된다. 여전히, 혈관 장벽은 고형 종양에 의한 치료학적 항체의 흡수을 위해 보다 주목할만한 문제이다. 림프종은 효과적인 항체 전달에 기여하는, 비교적 고혈류속도를 갖는다. 림프내 투여경로, 예를 들면, 피하 또는 근육내 주사는, 또는 림프 혈관에 의해, B 세포 림프종을 치료하는 유용한 수단을 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-CD 19 항체는 피하로 자체 투여된다. 이러한 구체예들에서, 조성물은 동결건조된 약물로서 또는 액체 완충제(예: PBS 및/또는 시트레이트) 중에서 약 50 mg/mL로 제형화된다. 본원의 제형은 또한 서로 역효화를 미치지 않는 상보체 활성을 갖는 것들과 같이, 치료되는 특정 징후에 대해 필요한 것과 같은 하나 이상의 활성 화합물을 포함할 수 있다. 예를 들면, 면역억제제를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 분자는 소기의 목적에 효과적인 양으로 결합되어 적합하게 존재한다.
활성 성분들은 또한, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들면, 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마이크로에멀젼 중에서, 예를 들면, 각각 하이드록시메틸셀룰로즈 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐을, 예를 들면, 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합시킴으로써, 조제된 마이크로캡슐 속에 포착될 수 있다. 이러한 기술들은 문헌[참조: Remington 's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기술되어 있다.
생체내 투여를 위해 사용되는 제형은 통상적으로 무균이다. 이는 무균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 성취된다.
서방성 제제를 조제할 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항-CD 19 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들면, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들면, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리아세탈(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 γ-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들면, LUPRON DEPOTTM(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 이루어진 주사성 미세구), 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다. 에틸-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체는 분자를 100일 이상 동안 방출할 수 있도록 하지만, 특정 하이드로겔은 더 짧은 기간 동안에 단백질을 방출한다. 캡슐화된 항체가 장시간 동안 본체 내에 잔류하는 경우, 이는 37℃에서 수분에 노출시킨 결과로서 변성 또는 응집시킬 수 있어서, 생물학적 활성의 손실 및 면역원성의 가능한 변화를 일으킨다. 합리적인 전략은 포함되는 메카니즘에 좌우되어 안정화를 위해 설계할 수 있다. 예를 들면, 응집 메카니즘이 티오-디설파이드 내부변화를 통해 분자간 S-S 결합 형성되는 것으로 발견되면, 안정화는 설프하이드릴 잔기를 수정하고, 산성 용액으로부터 동결건조시키고, 수분 함량을 조절하고, 적합한 첨가제를 사용하며, 특정 중합체 매트릭스 조성물을 개발함으로써 성취할 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물에 사용된 약제학적으로 조건에 맞는 담체는 인간 ADCC 또는 CDC에 영향을 미치지 않는다.
본원에 기술된 항-CD 19 항체 조성물은 또한 면역리포좀으로서 조제될 수 있다. "리포좀"은, 인간에게 약물(예: 본원에 기술된 항-CD 19 항체)의 전달에 유용한 각종 유형의 지질, 인지질 및/또는 표면활성제로 구성된 작은 소낭이다. 리포좀의 성분은 생물학적 막의 지질 배열과 유사한, 이층 형태로 일반적으로 배열된다. 본 발명의 항체를 함유하는 리포좀은 문헌[참조: Epstein et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 82:3688 (1985); Hwang et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 77:4030 (1980); and U.S. 특허 Nos. 4,485,045 and 4,544,545]에 기술된 바와 같은, 당해 분야에 공지된 방법으로 조제한다. 순환시간이 증진된 리포좀은 미국 특허 제5,013,556호에 기술되어 있다. 특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하여 역상 증발법으로 생성할 수 있다. 리포좀은 목적하는 직경을 갖는 리포좀을 생성하는 정의된 기공 크기의 필터를 통해 압출시킨다. 본 발명의 항체는 이황화물 내부변화 반응을 통해 문헌[참조: Martin et al., J. Biol. Chem., 257:286-288 (1982)]에 기술된 바와 같은 리포좀에 접합될 수 있다[참조: Gabizon et al., J. National Cancer Inst., (19)1484 (1989)].
약제학적 제형들의 일부는 다음을 포함하지만, 이에 국한되지 않는다:
(a) 100 mg (10 mL) 또는 500 mg (50 mL) 1회용 바이알의 10 mg/ml의 농도로공급된, 항-CD 19 항체를 정맥내(i.v.) 투여하기 위한 무균, 무보존제 액체 농축물. 그 제품은 염화나트륨, 시트르산나트륨 이수화물, 폴리소르베이트 및 주사용 멸균수로 정맥내 투여 용도로 조제할 수 있다. 예를 들면, 그 제품은 9.0 mg/mL 염화나트륨, 7.35 mg/mL 시트르산나트륨 이수화물, 0.7 mg/mL 폴리소르베이트 80, 및 주사용 멸균수로 조제할 수 있다. pH는 6.5로 조정한다.
(b) 피하(s.c.) 주사용 1회용 유리 바이알의 무균, 동결건조 분말. 그 제품은 슈크로스, L-히스티딘 하이드로클로아이드 일수화물, L-히스티딘 및 폴리소르베이트 20으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 각각의 1회용 바이알은 150 mg 항-CD 19 항체, 123.2 mg 슈크로스, 6.8 mg L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 4.3 mg L-히스티딘, 및 3 mg 폴리소르베이트 20을 포함할 수 있다. 1.3 ml의 주사용 멸균수에 1회용 바이알을 타면 대략 1.5 ml 용액을 수득하여 1.25 ml당 125 mg (100 mg/ml)의 항체를 전달한다.
(c) 정맥내(i.v.) 투여를 위한 무균, 무보존제 동결건조된 분말. 그 제품은 α-트레할로스 이수화물, L-히스티딘 HCl, 히스티딘 및 폴리소르베이트 20 USP으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 각각의 바이알은 440 mg 항-CD 19 항체, 400 mg α,α-트레할로스 이수화물, 9.9 mg L-히스티딘 HCl, 6.4 mg L-히스티딘, 및 1.8 mg 폴리소르베이트 20, USP를 포함할 수 있다. 보존제로서 1.1% 벤질 알콜을 함유하는 20 ml의 주사용 제균작용 수(BWFI), USP는 대략 6의 pH에서 21 mg/ml 항체를 함유하는 다중-용량 용액을 생성한다.
(d) 항-CD 19 항체가 슈크로스, 폴리소르베이트, 일염기성 인산나트륨 일수화물, 및 이염기성 인산나트륨 이수화물로 조제되는, 정맥내 주입용의 무균, 동결건조 분말. 예를 들면, 각각의 1회용 바이알은 100 mg 항체, 500 mg 슈크로스, 0.5 mg 폴리소르베이트 80, 2.2 mg 일염기성 인산나트륨 일수화물, 및 6.1 mg 이염기성 인산나트륨 이수화물을 포함할 수 있다. 보존제는 존재하지 않는다. 10 ml의 주사용 멸균수, USP에 탄 다음에, 수득되는 pH는 대략 7.2이다.
(e) 1회용, 1 ml 사전-충전된 주사기 속에 공급되는, 피하 투여용의 무균, 무보존제 용액. 생성물은 염화나트륨, 일염기성 인산나트륨 이수화물, 이염기성 인산나트륨 이수화물, 시트르산나트륨, 시트르산 일수화물, 만니톨, 폴리소르베이트 80 및 주사용 수, USP로 제형화할 수 있다. 수산화나트륨을 가하여 pH를 약 5.2로 조정할 수 있다.
예를 들면, 각각의 주사기를 제형화하여 0.8 ml (40 mg)의 약물 제품을 전달할 수 있다. 각각의 0.8 ml는 40 mg 항-CD 19 항체, 4.93 mg 염화나트륨, 0.69 mg 일염기성 인산나트륨 이수화물, 1.22 mg 이염기성 인산나트륨 이수화물, 0.24 mg 시트르산나트륨, 1.04 mg 시트르산 일수화물, 9.6 mg 만니톨, 0.8 mg 폴리소르베이트 80 및 주사용 수, USP를 포함한다.
(f) 주사용 멸균수(SWFI), USP에 타고 피하(s.c.) 주사로서 투여되는 1회용 바이알 내에 함유된 무균, 무보존제 동결건조 분말. 그 제품은 슈크로스, 히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, L-히스티딘, 및 폴리소르베이트로 조제될 수 있다. 예를 들면, 75 mg 바이알은 129.6 mg 또는 112.5 mg의 항-CD 19 항체, 93.1 mg 슈크로스, 1.8 mg L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 1.2 mg L-히스티딘, 및 0.3 mg 폴리소르베이트 20을 함유할 수 있으며, 0.9 ml SWFI, USP에 탄 후에 0.6 ml 중의 75 mg의 항체를 전달하도록 설계된다. 150 mg 바이알은 202.5 mg 또는 175 mg 항-CD 19 항체, 145.5 mg 슈크로스, 2.8 mg L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 1.8 mg L-히스티딘, 및 0.5 mg 폴리소르베이트 20을 포함할 수 있으며, 1.4 ml SWFI, USP에 탄 후에 1.2 ml 중의 150 mg의 항체를 전달하도록 설계된다.
(g) 주사용 멸균수에 타는 용도의 무균, 동결건조 제품. 그 제품은 만티톨, 히스티딘 및 글리신을 사용하여 근육내(IM) 주사하기 위한 1회용 바이알로서 조제될 수 있다. 예를 들면, 각각의 1회용 바이알은 100 mg 항-CD 19 항체, 67.5 mg 만니톨, 8.7 mg 히스티딘 및 0.3 mg 글리신을 포함할 수 있으며, 1.0 ml의 주사용 멸균수에 타는 경우 1.0 ml 중의 100 mg 항체를 전달하도록 설계된다. 다른 예로서, 각각의 1회용 바이알은 50 mg 항-CD 19 항체, 40.5 mg 만니톨, 5.2 mg 히스티딘 및 0.2 mg 글리신을 포함할 수 있으며, 0.6 ml 주사용 멸균수에 타는 경우 50 mg의 항체를 전달하도록 설계된다.
(h) 100 mg/ml의 농도로 공급된, 근육내(IM) 주사용의 무균, 무보존제 용액. 그 제품은 히스티딘, 글리신, 및 주사용 멸균수로 1회용 바이알의 형태로 조제될 수 있다. 예를 들면, 각각의 1회용 바이알은 1 ml 중의 100 mg의 항체를 전달하도록 설계된 1.2 ml의 용적 내의 100 mg 항체, 4.7 mg 히스티딘, 및 0.1 mg 글리신으로 조제할 수 있다. 다른 예로서, 각각의 1회용 바이알은 0.5 ml 중의 50 mg의 항체를 전달하도록 설계된 0.7 ml 또는 0.5 ml의 용적 중의 50 mg 항체, 2.7 mg 히스티딘 및 0.08 mg 글리신으로 조제할 수 있다.
(i) 1회용, 1 ml 사전-충전된 주사기, 예를 들면, 텅스텐-유리 초-100 주사기, 또는 자동-주사기 속의 100 mg/mL의 농도로 공급된, 항-CD 19 항체의 피하 투여용 무균, 무보존제 용액. 그 제품은 염화나트륨, 히스티딘, 트레할로스, 폴리소르베이트 및 주사용 멸균수로 조제될 수 있다. 예를 들면, 그 제품은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로스로 조제할 수 있으며, 여기서 제형은 pH가 6.0이다.
(j) 1회용, 1 ml 사전-충전된 주사기, 예를 들면, 텅스텐-유리 초-100 주사기, 또는 자동-주사기 속의 50 mg/mL의 농도로 공급된, 항-CD 19 항체의 피하 투여용 무균, 무보존제 용액. 그 제품은 염화나트륨, 히스티딘, 트레할로스, 폴리소르베이트 및 주사용 멸균수로 조제될 수 있다. 예를 들면, 그 제품은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로스로 조제될 수 있으며, 여기서 제형은 pH가 6.0이다.
(k) 1회용, 1 ml 사전-충전된 주사기, 예를 들면, 텅스텐-유리 초-100 주사기, 또는 자동-주사기 속의 25 mg/mL의 농도로 공급된, 항-CD 19 항체의 피하 투여용 무균, 무보존제 용액. 그 제품은 염화나트륨, 히스티딘, 트레할로스, 폴리소르베이트 및 주사용 멸균수로 조제될 수 있다. 예를 들면, 그 제품은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로스로 조제될 수 있으며, 여기서 제형은 pH가 6.0이다.
(l) 1회용, 1 ml 사전-충전된 주사기, 예를 들면, 텅스텐-유리 초-100 주사기, 또는 자동-주사기 속의 10 mg/mL의 농도로 공급된, 항-CD 19 항체의 피하 투여용 무균, 무보존제 용액. 그 제품은 염화나트륨, 히스티딘, 트레할로스, 폴리소르베이트 및 주사용 멸균 수로 조제될 수 있다. 예를 들면, 그 제품은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로스로 조제되며, 여기서 제형은 pH가 6.0이다.
(m) 100 mg (10 mL) 또는 500 mg (50 mL) 1회용 바이알 내의 10 mg/ml의 농도로 공급된, 항-CD 19 항체의 정맥내(i.v.) 투여용 무균, 무보존제 액체 농축물. 그 제품은 염화나트륨, 히스티딘, 트레할로스, 폴리소르베이트 및 주사용 멸균수로 정맥내 투여용으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 생성물은 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% 트레할로스 중에서 제형화할 수 있으며, 여기서 제형은 pH가 6.0이다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 4℃에서 안정하다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 실온에서 안정하다.
6.18.2. 항체 반감기
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-CD 19 항체의 반감기는 적어도 약 4 내지 7일이다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-CD 19 항체의 평균 반감기는 적어도 약 2 내지 5일, 3 내지 6일, 4 내지 7일, 5 내지 8일, 6 내지 9일, 7 내지 10일, 8 내지 11일, 8 내지 12일, 9 내지 13일, 10 내지 14일, 11 내지 15일, 12 내지 16일, 13 내지 17일, 14 내지 18일, 15 내지 19일, 또는 16 내지 20일이다. 다른 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-CD 19 항체의 평균 반감기는 적어도 약 17 내지 21일, 18 내지 22일, 19 내지 23일, 20 내지 24일, 21 내지 25일, 22 내지 26일, 23 내지 27일, 24 내지 28일, 25 내지 29일, 또는 26 내지 30일이다. 하지만 추가의 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-CD 19 항체의 반감기는 약 50일 이하일 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항체의 반감기는 당해 분야에 공지된 방법으로 연장시킬 수 있다. 이러한 연장은 다시 항체 조성물의 투여량 및/또는 투여 빈도를 줄일 수 있다. 생체내 반감기가 개선된 항체 및 이의 조제방법은 미국 특허 제6,277,375호 및 국제공개공보 제WO 98/23289호 및 제WO 97/3461호에 기재되어 있다.
생체내 항-CD 19 항체의 혈청 순환은 또한 고분자량 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 같은 불활성 중합체 분자를, 라이실 잔기 위에 존재하는 엡실론-아미노기를 통하거나 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 PEG의 부위-특이적 접합을 통해 다작용성 링커를 갖거나 갖지 않는 항체에 부착시킴으로써 연장시킬 수 있다. 생물학적 활성을 최소한으로 손실시키는 직쇄 또는 측쇄 중합체 유도체화가 사용될 것이다. 접합 정도는 SDS-PAGE 및 질량 분광법에 의해 밀접하게 모니터링되어 항체에 대하여 PEG 분자가 적절하게 접합되도록 할 수 있다. 반응되지 않은 PEG는 크기-배제법 또는 이온-교환 크로마토그래피에 의해 항체-PEG 접합체로부터 분리될 수 있다. PEG-유도체화된 항체는, 당해 분야의 숙련가들에게 공지된 방법, 예를 들면, 본원에 기술된 면역검정법을 사용하여 생체내 효율에 대해서 뿐만 아니라 결합 활성에 대해서도 시험할 수 있다.
추가로, 본 발명의 조성물 및 방법의 항체는 알부민에 접합되어 항체가 생체내에서 더 안정하도록 하거나 생체내에서 더 긴 반감기를 갖도록 할 수 있다. 이러한 기술들은, 예를 들면, 국제공개공보 제WO 93/15199호, 제WO 93/15200호 및 제WO 01/77137호; 및 유럽 특허 제EP 413, 622호에 공지되어 있으며, 참조함으로써 이들 전문이 본원에 통합된다.
6.18.3. 투여 및 용량
본 발명의 조성물을 인간 환자에게 투여하는 것은, 정맥내, 피내, 경피, 피하, 근육내, 흡입(예를 들면, 에어로졸을 통해), 볼내(예를 들면, 설하), 국소(즉, 피부 및 기도 표면을 포함하는 점막 표면 둘다), 경막내, 관절내, 흉막내, 대뇌내, 동맥내, 복막내, 경구, 림프관내, 비강내, 직장 또는 질내 투여를 포함하는 특정 경로에 의해, 국소 카테터를 통한 관류에 의해, 또는 직접적인 병변내 주사에 의해 이루어질 수 있다. 일 구체예에서, 본 발명의 조성물은 정의된 기간(예를 들면, 0.5 내지 2시간)에 걸쳐 정맥내 푸쉬(push) 또는 정맥내 주입에 의해 투여된다. 비록 특정의 제공된 경우에서 대부분의 적합한 경로가 당해 분야에 잘 알려진 바와 같이, 피험체의 종, 연령, 성별 및 전체적인 상태, 치료하는 상태의 특징 및 중증도 및/또는 투여되는 특정 조성물의 특징(즉, 용량, 제형)과 같은 인자에 의존할 것이라고 해도, 본 발명의 조성물은 연동운동 수단에 의해 또는 데포트(depot) 형태로 전달될 수 있다. 특정 구체예들에서, 투여 경로는 일정 기간에 걸쳐 대량 주입 또는 연속 주입을 통해 주당 1회 또는 2회이다. 다른 특정 구체예들에서, 투여 경로는 선택적으로 주당 1회 또는 2회의 피하 주사에 의한 것이다. 일 구체예에서, 본 발명의 조성물 및/또는 방법은 외래환자 기준으로 투여된다.
특정 구체예들에서, 항-CD19 항체를 포함하는 조성물의 투여량은 환자 체중 kg당 mg의 단위로 측정된다. 다른 구체예들에서, 항-CD19 항체를 포함하는 조성물의 투여량은 환자의 제지방 체중(lean body weight)(즉, 체지방 함량을 뺀 체중) kg 당 mg의 단위로 측정된다. 하지만 다른 구체예들에서, 항-CD19 항체를 포함하는 조성물의 투여량은 환자 체표면적 m당 mg의 단위로 측정된다. 하지만 다른 구체예들에서, 항-CD19 항체를 포함하는 조성물의 투여량은 환자에게 투여된 투여량당 mg의 단위로 측정한다. 투여량의 어떠한 측정치도 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있으며 용량 단위는 당해 분야의 표준에 의하여 변환될 수 있다.
당해 분야의 숙련가는, 용량이 피험체의 연령, 성별, 종 및 상태(예를 들면, B 세포 악성 종양의 병기), 세포 고갈의 바람직한 정도, 치료될 질병 및/또는 사용되는 특정 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 다수의 인자를 기준으로 선택될 수 있으며 당해 분야의 기술자에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물의 유효량은 시험관 시험 시스템에서 기원한 투여량-반응 곡선으로부터 또는 동물 모델(코튼 토끼 또는 원숭이) 시험 시스템으로부터 외삽할 수 있다. 항체의 효과를 평가하기 위한 모델 및 방법은 당해 분야에 공지되어 있다[참조: 참조함으로써 본원에 그 전문이 통합된 문헌: Wooldridge, et al, Blood, 89(8): 2994-2998 (1997)]. 특정 구체예들에서, 특정 B 세포 악성 종양의 경우, 항체 요법을 위한 당해 분야에서 치료학적 요법 표준은 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있다.
본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 투여량 요법의 예는 매일, 주당 3회(간헐적으로), 매주, 또는 매 14일을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, 투여량 요법은 매달 투여 또는 매 6 내지 8주 투여를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
당해 분야의 숙련가들은, 용량이 일반적으로 유지 요법과 비교하여 초기 치료의 경우보다 더 높고/높거나 더 많은 투여 횟수임을 인식할 것이다.
본 발명의 일부 구체예에서, 항-CD19 항체는 B 세포에 결합하고, 효율적인 (즉, 낮은 복용량) B 세포(본 명세서에 기재)의 고갈로 귀결될 수 있다. 높은 결합도는, 환자의 B 세포의 표면 상의 인간 CD19의 밀도가 높은 경우에, 달성될 수 있다. 어떤 구체예에서, (임의로, 약제학적 조성물의 일부로서 약제학적으로 허용가능한 담체 중) 항체의 복용량은 적어도 약 0.0005, 0.001, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25, 0.375, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 20, 37.5, 또는 50 mg/m2 및/또는 약 500, 475, 450, 425, 400, 375, 350, 325, 300, 275, 250, 225, 200, 175, 150, 125, 100, 75, 60, 50, 37.5, 20, 15, 10, 5, 2.5, 1, 0.5, 0.375, 0.1, 0.075 또는 0.01 mg/m2 미만이다. 어떤 구체예에서, 복용량은 약 0.0005 내지 약 200 mg/m2, 약 0.001 내지 150 mg/m2, 약 0.075 내지 125 mg/m2, 약 0.375 내지 100 mg/m2, 약 2.5 내지 75 mg/m2, 약 10 내지 75 mg/m2, 및 약 20 내지 50 mg/m2이다. 관련 구체예에서, 사용된 항-CD19 항체의 복용량은 적어도 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17, 17.5, 18, 18.5, 19, 19.5, 20, 20.5 mg/환자 체중 kg이다. 어떤 구체예에서, 사용된 노출(naked) 항-CD19 항체의 복용량은 적어도 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 또는 15 내지 25 mg/환자 체중 kg이다. 어떤 구체예에서, 사용된 항-CD19 항체의 복용량은 적어도 약 1 내지 20, 3 내지 15, 또는 5 내지 10 mg/환자 체중 kg이다. 하나의 구체예에서, 사용된 항-CD19 항체의 복용량은 적어도 약 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/환자 체중 kg이다. 어떤 구체예에서, (임의로, 약제학적 조성물의 일부로서 약제학적으로 허용가능한 담체 중) 항체의 단일 복용 단위는 적어도 약 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 또는 250 ㎍/m2일 수 있다. 하나의 구체예에서, 복용량은 1 g 이하/단일 복용 단위이다.
상기의 모든 복용량은 예시적이고, 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용될 수 있지만, 항-CD19 항체가 독소 또는 방사선치료제와 병용하여 사용되는 경우, 상기에 기재된 낮은 복용량이 바람직할 수 있다. 어떤 구체예에서, 환자가 저수준의 CD19 밀도를 갖는 경우에, 상기에 기재된 낮은 복용량이 바람직할 수 있다.
키메라 항-CD19 항체가 사용되는 본 발명의 어떤 구체예에서, 키메라 항체의 복용량 또는 양은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16 mg 초과/환자 체중 kg이다. 키메라 항-CD19 항체가 사용되는 본 발명의 다른 구체예에서, 키메라 항체의 복용량 또는 양은 약 1, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 또는 0.1 mg 미만/환자 체중 kg이다.
본 발명의 방법의 일부 구체예에서, 본 발명의 항체 및/또는 조성물은 약 375 mg/m2 미만의 복용량; 약 37.5 mg/m2 미만의 복용량; 약 0.375 mg/m2 미만의 복용량; 및/또는 약 0.075 mg/m2 내지 약 125 mg/m2의 복용량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 방법의 어떤 구체예에서, 복용 계획은 반복된 간격으로 투여되는 낮은 복용량을 포함한다. 예를 들어, 하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 또는 200일 마다의 간격으로 약 375 mg/m2 미만의 복용량으로 투여될 수 있다.
특정 복용량은 적어도 약 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 120, 150 또는 180일 이상의 기간 동안에 본 발명의 조성물 및 방법을 사용하여 치료될 인간의 B 세포 고갈로 귀결될 수 있다. 어떤 구체예에서, (표면 면역글로불린을 발현시키지 않는) pre-B 세포가 고갈된다. 어떤 구체예에서, (표면 면역글로불린을 발현시키는) 성숙 B 세포가 고갈된다. 하나의 구체예에서, B 세포의 모든 비-악성세포 타입은 고갈을 나타낼 수 있다. 이들 타입의 B 세포의 임의의 것이 사용되어 B 세포 고갈을 측정할 수 있다. B 세포 고갈은 체액, 예컨대 혈액 혈청, 또는 조직, 예컨대 골수에서 측정될 수 있다. 본 발명의 방법의 어떤 구체예에서, B 세포는 본 발명의 조성물 및 방법의 사용 전에 치료될 환자의 B 세포 수준과 비교하여 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%까지 고갈된다. 본 발명의 방법의 다른 구체예에서, B 세포는 인간의 전형적인 표준 B 세포 수준과 비교하여 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%까지 고갈된다. 관련 구체예에서, 인간의 전형적인 표준 B 세포 수준은, 연령, 성별, 체중 및 다른 인자에 대해서 치료될 환자와 비교가능한 환자를 사용하여 측정된다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 약 125 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 또는 200일의 기간 동안 B 세포 고갈로 귀결된다. 또 하나의 대표적인 구체예에서, 약 37.5 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 또는 200일의 기간 동안에 B 세포를 고갈시킨다. 또 다른 구체예에서, 약 0.375 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 45 또는 60일 동안에 B 세포의 고갈로 귀결된다. 또 하나의 구체예에서, 약 0.075 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 또는 200일의 기갈 동안에 B 세포의 고갈로 귀결된다. 또 다른 구체예에서, 약 0.01 mg/m2, 0.005 mg/m2 또는 심지어 0.001 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 3, 5, 7, 10, 14, 21, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 또는 200일 동안에 B 세포의 고갈로 귀결된다. 이들 구체예에 따라, 복용량은 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있지만, 피하 경로 또는 정맥내 경로로 임의 투여된다.
또 하나의 양태에서, 본 발명은, B 세포 고갈 및/또는 B 세포 장애의 치료가 현재 이용가능한 방법에서 사용되는 것보다 더 낮은 낮은 복용량의 항체 또는 항체 단편에서 달성될 수 있다는 발견을 제공한다. 따라서, 또 하나의 구체예에서, 본 발명은 B 세포 고갈 및/또는 B 세포 장애 치료 방법을 제공하고, 이 방법은, 인간에게, CD19에 특이적으로 결합하는 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 약 500, 475, 450, 425, 400, 375, 350, 325, 300, 275, 250, 225, 200, 175, 150, 125, 100, 75, 60, 50, 37.5, 20, 10, 5, 2.5, 1, 0.5, 0.375, 0.25, 0.1, 0.075, 0.05, 0.001, 0.0005 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 3, 5, 7, 10, 14, 21, 30, 45, 60, 75, 90, 120, 150, 180, 또는 200일 이상의 기간 동안에 25%, 35%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 이상의 B 세포 (순환 및/또는 조직 B 세포)의 고갈로 귀결된다. 대표적인 구체예에서, 약 125 mg/m 또는 75 mg/m2 이하의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 60, 75, 90, 120, 150 또는 180일 동안에 적어도 약 50%, 75%, 85% 또는 90%의 B 세포의 고갈로 귀결된다. 하나의 구체예에서, 약 50, 37.5 또는 10 mg/m2의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 60, 75, 90, 120 또는 180일 동안에 적어도 약 50%, 75%, 85% 또는 90%의 B 세포의 고갈로 귀결된다. 또 다른 구체예에서, 약 0.375 또는 0.1 mg/m2의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30, 60, 75 또는 90일 동안에 적어도 약 50%, 75%, 85% 또는 90%의 B 세포의 고갈로 귀결된다. 추가 구체예에서, 약 0.075, 0.01, 0.001, 또는 0.0005 mg/m2의 복용량은 적어도 약 7, 14, 21, 30 또는 60일 동안에 적어도 약 50%, 75%, 85% 또는 90%의 B 세포의 고갈로 귀결된다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 복용량은 혈액 또는 조직, 예컨대, 비제한적인 골수에서 일정 복용량을 유지하기 위해 증가 또는 감소될 수 있다. 관련 구체예에서, 복용량은 본 발명의 조성물 및 방법의 항체의 원하는 수준을 유지하기 위해 약 2%, 5%, 8%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 및 95%까 증가 또는 감소될 수 있다.
특정 구체예들에서, 용량은 조절될 수 있고/있거나 주입 속도는 본 발명의 조성물 및 방법에 대한 환자의 면역원성 반응을 기초로 감소될 수 있다.
본 발명의 방법의 하나의 면에 따라서, 본 발명의 항-CD19 항체 및/또는 조성물의 로딩 투여량을 처음 투여한 후, 치료되는 B 세포 악성 종양이 진행될 때까지 유지 투여량으로 투여되거나 정의된 치료 과정(예를 들면, CAMPATHTM, MYLOTARGTM 또는 RITUXANTM; 후자는, 환자가 추가의 데이타가 생성되면서 증가하는 투여량의 정의된 횟수로 투여되도록 한다)이 후속될 수 있다.
본 발명의 방법의 다른 면에 따라서, 환자는 본 발명의 조성물 및 방법으로 예비처리되어 면역원성 반응을 검출하고, 최소화하거나, 또는 본 발명의 조성물 및 방법의 부작용을 최소화시킬 수 있다.
6.18.4. 독성 시험
본 발명의 조성물 및/또는 치료 요법의 내성, 독성 및/또는 효능은 세포 배양물 또는 실험 동물내에서, 예를 들면, LD50(집단의 50%에 대한 치사 투여량), ED50(집단의 50%에 있어 치료학적으로 효과적인 투여량), 및 IC50(50% 억제를 달성하는데 효과적인 투여량)을 측정하기 위해 표준 약제학적 방법으로 측정될 수 있다. 일 구체예에서, 투여량은 순환하는 B 세포 또는 순환하는 면역글로불린 또는 둘다의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 고갈을 달성하는데 효과적인 투여량이다. 독성 및 치료학적 효과 사이의 투여량 비는 치료학적 지표이며 이는 LD50/ED50의 비로 나타낼 수 있다. 큰 치료학적 지표를 나타내는 요법이 바람직할 수 있다. 독성 부작용을 나타내는 요법이 사용될 수 있지만, CD19 음성 세포에 대해 강력한 손상을 최소화함으로써 부작용을 감소시키기 위해 CD19-발현 세포에 대해 이러한 제제를 표적화하는 전달 시스템을 설계하기 위해서 주의를 해야한다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이타는 인간에서 사용하기 위한 조성물의 용량 범위의 제형화 및/또는 치료 요법을 제형화하는데 사용될 수 있다. 이러한 제제의 용량은, 독성이 거의 없거나 또는 없는 ED50을 포함하는 순환하는 농도의 범위내일 수 있다. 용량은 사용된 용량형 및 이용된 투여 경로에 따라 이러한 범위내에서 변할 수 있다. 본 발명의 방법에 사용된 요법의 경우, 치료학적 유효 투여량은 적절한 동물 모델로 평가할 수 있다. 동물 모델의 종에 따라서, 투여량을, 예를 들면, 문헌(참조: Freireich et al., Quantitative comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, monkey, dog, and 인간, Cancer Chemotherapy Reports, NCI 1966 40:219-244)에 제공된 바와 같이, 당해 분야에서 허용된 제형에 따라 인간용으로 규모를 조절할 수 있다. 세포 배양물 검정으로부터 수득된 데이타는 예측되는 강력한 독성에 유용할 수 있다. 동물 연구를 사용하여 특정 투여량을 제형화함으로써 세포 배양물 속에서 측정한 것으로서 IC50(즉, 증상의 최대 억제의 1/2을 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환하는 혈장 농도를 달성할 수 있다. 이러한 정보를 사용하여 인간에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 측정할 수 있다. 혈장 약물 수준은 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피, ELISA 또는 세포계 검정으로 측정할 수 있다.
6.19. 환자 진단, 병기 분류 및 치료학적 요법 종양학
본 발명의 특정 면에 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용된 치료 요법 및 투여량은 치료되는 B 세포 질병 또는 질환의 병기를 포함하나, 이에 국한되지 않는 다수의 인자를 기준으로 하여 선택된다. 적절한 치료 요법은 환자 또는 환자 집단에서 B 세포 질병 또는 질환의 특정 병기에 대해 당해 분야의 숙련가에 의해 측정될 수 있다. 투여량 반응 곡선은 B 세포 질병 또는 질환의 상이한 병기를 갖는 환자를 치료하기 위한 본 발명의 조성물의 유효량을 측정하기 위하여 당해 분야의 표준 프로토콜을 사용하여 생성할 수 있다. 일반적으로, 보다 진전된 병기의 B 세포 질병 또는 질환을 가진 환자는 조기 병기의 B 세포 질병 또는 질환을 가진 환자와 비교하여 보다 오랜 기간에 걸쳐 투여될 수 있는 보다 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 투여량이 요구될 것이다.
본 발명의 항-CD19 항체, 조성물 및 방법은 B 세포 악성종양을 포함하는 B 세포 질병을 치료하기 위해 실시될 수 있다. 용어 "B 세포 악성종양"은 B 세포 계통의 세포로부터 기원한 어떠한 악성종양도 포함한다. 예시적인 B 세포 악성종양은 다음을 포함하나 그에 국한되지 않는다: 저등급/난포 NHL, 소림프구(SL) NHL, 중간 등급/난포 NHL, 중간 등급 확산 NHL, 고등급 면역모세포 NHL, 고등급 림프모구 NHL, 고등급 소 비-분해된 세포 NHL; 외투세포 림프종, 및 벌키병(bulky disease) NHL을 포함하는 B 세포 아형 비-호지킨 림프종(NHL); 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma); 다발골수종; 전-B 급성 림프모구 백혈병 및 조기 B 세포 전구체로부터 기원한 다른 악성종양; 일반적인 급성 림프구 백혈병(ALL); 면역글로불린-돌연변이된 CLL 및 면역글로불린-돌연변이되지 않은 CLL을 포함하는 만성 림프구 백혈병(CLL); 모발 세포 림프종; 널(Null)-급성 림프모구 림프종; 왈덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia); 배 중심 B 세포-유사(GCB) DLBCL, 활성화된 B 세포-유사(ABC) DLBCL, 및 제3형 DLBCL을 포함하는 확산 거대 B 세포 림프종(DLBCL); 전-림프구 백혈병; 경쇄병; 형질세포종; 골경화성 골수종; 혈장 세포 백혈병; 의미 미결정의 단클론 감마글로불린병증(MGUS); 스몰더링 다발골수종(smoldering multiple myeloma: SMM); 무통성 다발골수종(IMM); 전통적인 및 결절 림프구 전-우세형을 포함하는 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma); 림프형질세포성 림프종(LPL); 및 위점막-관련 림프조직(MALT) 림프종을 포함하는 변연부 림프종(marginal-zone lymphoma).
추가의 구체예에서, 본 발명은 다음을 포함하나 그에 국한되지 않는 성숙한 B 세포 악성종양(즉, 세포 표면상에 Ig를 발현하는 것)을 치료하는데 사용될 수 있다: 소포 림프종, 외투세포 림프종, 버킷 림프종, 다발골수종, 배중심 B 세포-유사(GCB) DLBCL, 활성화된 B 세포-유사(ABC) DLBCL, 및 제3형 DLBCL을 포함하는 확산 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 전통적인 및 결절 림프구 전-우세형을 포함하는 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma); 림프형질세포성 림프종(LPL); 및 위점막-관련 림프조직(MALT) 림프종을 포함하는 변연부 림프종, 및 면역글로불린-돌연변이된 CLL 및 면역글로불린-돌연변이되지 않은 CLL을 포함하는 만성 림프구 백혈병(CLL).
또한, CD19는 예를 들면, CD20보다 B 세포 발달시 더 조기에 발현되므로, 예를 들면, 골수에서 전-B 세포 및 미성숙 B 세포 악성종양(즉, 세포 표면에 Ig를 발현하지 않는 것)을 치료하는데 특히 적합하다. 예시적인 전-B 세포 및 미성숙 B 세포 악성종양은 급성 림프모구백혈병을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
다른 특정 구체예들에서, 본 발명은 림프절외 종양을 치료하기 위해 실시될 수 있다.
6.19.1. B 세포 악성종양의 진단 및 병기 분류
종양을 형성할 수 있는 B 세포 질병 또는 질환(예를 들면, 비-호지킨 림프종, 확산 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종 및 버킷 림프종)과 같은 암의 진행은 통상적으로, 암은 신체 전체로 확산되는 정도에 의해 특징이 나타나며 종종 결과의 예후인 다음의 4개 병기로 구분된다. 병기 I: 암이 특정 조직에 국재화하고 림프절로 확산되지는 않는다. 병기 II: 암이 림프절 근처로 확산, 즉 전이되어 있다. 병기 III: 암이 조직 기원으로부터 멀리 신체의 영역내 림프절에서 발견되며 덩어리 또는 하나에 대해 반대되는 다수의 종양을 포함할 수 있다. 병기 IV: 암이 신체의 먼 부분으로 확산되어 있다. 암의 병기는 임상 관측 및 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지된 시험 방법으로 측정할 수 있다. 위에 기술된 암의 병기는 전통적으로 종양 형성을 특징으로 하는 암의 임상 진단과 함께 사용되며, B 세포 질병 및 질환을 치료하기 위한 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 통상적으로 조기 병기 질병은, 질병이 환자의 신체의 부위에 국재화되어 있거나 전이되지 않은 것을 의미한다.
다발골수종과 같은, 그러나 이에 국한되지 않는 B 세포 질병 및 질환을 형성하는 비-종양에 관하여, 질병의 병기를 판정하기 위한 기준은 상이하다. 두리에-살몬 병기 분류 시스템(Durie-Salmon Staging System)이 광범위하게 사용되고 있다. 이러한 병기 분류 시스템에서, 질병의 임상 병기(병기 I, II, 또는 III)는 M 단백질의 수준, 용해 골 병변의 수, 헤모글로빈 수치, 및 혈청 칼슘 수준을 포함하는 몇가지 측정을 기준으로 한다. 병기들은 콩팥(신장) 기능에 따라 추가로 분류된다. 두리에-살몬 병기 분류 시스템에 따라 병기 I(작은 세포 덩어리)은 다음 모두가 특징이다: 헤모글로빈 수치 >10 g/dL; 혈청 칼슘 수치 정상 또는 < 12 mg/dL; 골 x-선, 정상 골 구조(규모 0) 또는 단지 단일 골 형질세포종; 및 낮은 M-성분 생산율: IgG 수치 <5 g/dL, IgA 수치 <3 g/d, 벤스 존스 단백질(Bence Jones protein) <4 g/24시간. 병기 I 환자는 통상적으로 기관 또는 조직 손상 또는 증상과 관련되지 않는다. 병기 II(중간 세포 덩어리)는 병기 I 또는 병기 III 중 어느 것에도 적합하지 않는 특징이 있다. 병기 III(큰 세포 덩어리)은 다음 중 하나 이상의 특징이 있다: 헤모글로빈 수치 <8.5 g/dL; 혈청 칼슘 수치 >12 mg/dL; 진전된 용해 골 병변(규모 3); 높은 M-성분 생산률: IgG 수치 >7 g/dL, IgA 수치 >5 g/dL, 벤스 존스 단백질 >12 g/24 h 소분류화(A 또는 B 중 어느 것)[여기서, A는 상대적인 정상 신장 기능(혈청 크레아티닌 수치 <2.0 mg/dL)이고 B는 비정상 신장 기능(혈청 크레아티닌 수치 > 2.0 mg/dL)이다].
흑색종에 대한 다른 병기 분류 시스템은 흑색종에 대한 국제 병기 분류 시스템(ISS)이다. 이 시스템은 병기 분류 그룹들을 보다 효과적으로 구별할 수 있으며 베타 2-마이크로글로불린(B2-M) 및 알부민의 용이하게 측정된 혈청 수준을 기초로 한다. 흑색종에 대한 ISS에 따르면, 병기 I은 B2-M <3.5 및 알부민 > 3.5의 특징이 있고, 병기 II는 B2-M <3.5 및 알부민 <3.5 또는 B2-M 3.5 - 5.5의 특징이 있고, 병기 III은 B2-M >5.5의 특징이 있다(다발골수종 연구 재단: 코네티컷주 뉴 카나안(New Canaan) 소재).
환자에서 B 세포 악성종양의 병기는 임상 판정이다. 위에 나타낸 바와 같이, 고형 종양과 관련하여, 종양의 확산, 위치 및 수는 병기의 임상 판정에 있어 일차 인자이다. 비-종양 형성 B 세포 악성종양을 가진 환자의 병기 판정은 위에서 기술한 바와 같이 혈청 수준 측정이 필요하여 더 복잡할 수 있다.
상기 B 세포 질병 및 질환의 병기에 대한 기술은 제한하지 않는다. B 세포 질병 및 질환의 진단을 위한 당해 분야에 공지된 다른 특징들을 B 세포 질병 또는 질환의 병기를 판정하기 위해 환자에 대한 기준으로 사용할 수 있다.
6.19.1.1. 다발골수종
다발골수종은 혈장 세포의 악성종양이다. 신생물성 세포가 골수내에 위치하며, 골용해성 골 병변이 특징이다. 면역글로불린 위치 중 하나 및 각종의 다른 유전자, 예를 들면, 사이클린 Dl, 사이클린 D3, c-MAF, MMSET(다발골수종 SET-도메인 단백질) 또는 섬유모세포 성장 인자 수용체 3 사이의 상호 염색제 전좌는 주요 종양원성 현상으로 여겨진다. 다발골수종은 SHM으로 특징이 나타나며, 기원의 추정 세포는 후-GC B 세포이다. 다발골수종은 통상적으로 재발 감염, 피로, 통증 및 신장 문제와 같은 증상에 의해 처음으로 확인되며 임상 시험으로 확진된다(참조: 예를 들면, Cancer: Principles and Practice of Oncology. 6th edition. DeVita, V.T., Hellman, S. and Rosenberg, S. A. editors. 2001 Lippincott Williams and Wilkins Philadelphia, PA 19106 pp. 2465-2499).
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법으로 치료하기 위한 후보대상인 환자는, CBC에 보고된 세포의 유형이 당해 분야에 잘 공지된 이들의 정상 범위내에 있는지를 측정하기 위한 완전한 혈액 수(CBC) 시험, 알부민, 혈액 우레아 질소(BUN), 칼슘, 크레아티닌 및 락테이트 데하이드로게나제(LDH)와 같은 각종 혈액 성분의 수준이 표준 값으로부터 벗어나는지를 측정하기 위한 혈청 화학 프로파일을 포함하나, 이에 국한되지 않는 다발골수종의 진단 또는 의심을 확인하기 위한 혈액 및/또는 뇨에 대한 추가의 진단 시험을 거칠 수 있다. 베타2-마이크로글로불린(B2-M)의 혈청 수준을 또한 시험하여 흑색종 세포에 대한 성장 인자인, IL-6에 대한 마커를 대신할 수 있다. 전기영동을 사용하여 혈액내 M 단백질(혈청 단백질 전기영동 또는 SPCP라고 불림), 또는 뇨내 M 단백질(뇨 전기영동 또는 UEP라고 불림)을 포함하는 각종 단백질의 수준을 측정할 수 있다. 면역 고정화 전기영동(IFE) 또는 면역전기영동이라고 불리는 추가의 시험을 또한 수행하여 존재하는 비정상 항체 단백질의 유형에 대한 보다 상세한 정보를 제공할 수 있다. 각종 단백질, 특히 M 단백질의 변화 및 비율의 추정을 사용하여 흑색종 질병의 진행 및 치료 요법에 대한 반응을 추적할 수 있다. 다발골수종은 골수종 종양 세포에 의해 분비된 M 단백질에 있어서 큰 증가를 특징으로 한다.
X-선 및 골(골격) 조사(survey), 자기 공명 영상(MRI), 및 컴퓨터 단층촬영술(CT)로서 또한 공지되어 있고 골 구조내 변화를 평가하고 골내 종양의 수 및 크기를 측정할 수 있는 컴퓨터 축 단층 촬영술(CAT)을 포함하나, 이에 국한되지 않는 골에서의 진단 시험을 또한 수행하여 다발골수종의 진단 또는 예측을 확인할 수 있다. 골수 흡인 또는 골수 생검을 사용하여 골수내 혈장 세포의 수에 있어서의 증가를 검출할 수 있다. 흡인은 액체 골수 시료를 필요로 하며, 생검은 고형 골 조직의 시료를 필요로 한다. 시험 둘 다에서, 시료는 골반(엉덩뼈)으로부터 취할 수 있다. 흉골(가슴뼈)를 또한 골수 흡입용으로 사용할 수 있다.
다발골수종 환자는 통상적으로 효과적인 치료 요법을 정의하는데 도움을 주는 다음 3개 그룹으로 분류된다. 불충분한 중요성의 단클론 감마글로불린혈증(MGUS)은 통상적으로 3 g/dL 미만의 혈청 M 단백질 수준, 10% 미만의 골수 클로날 혈장 세포, 다른 B 세포 질환의 증거 없음 및, 고칼슘혈증(증가된 혈청 칼슘 수준), 증가된 혈청 크레아티닌에 의해 주목된 손상된 신장 기능, 빈혈 또는 골 병변과 같은 관련 기관 또는 조직 손상 없음을 특징으로 한다. 무증상 골수종은 통상적으로 병기 I이며 무증상 다발골수종(SMM) 및 무통성 다발골수종(IMM)을 포함한다. SMM은 3g/dL 이상인 혈청 M 단백질을 특징으로 하며 IMM은 골수 세포의 10% 이상의 골수 클로날 혈장 세포를 특징으로 한다. 무증상 골수종은 혈청 및/또는 뇨내 M 단백질을 특징으로 하며 골수 클로날 혈장 세포 또는 형질세포종의 존재를 특징으로 하는 병기 II 다발골수종 및, 관련 기관 또는 조직 손상이 특징인 병기 III 다발골수종을 포함한다.
골경화성 골수종은 드믄 POEMS 증후군(다발신경병증, 오가노메갈리(organomegaly), 내분비병)의 성분이다. 최대 발생(빈도)은 40 내지 50대이다. 전신계 특징은 골격 병변, 골-혈장 세포 < 5%, 정상 CBC, 증가된 혈소판 및 오가노메갈리를 포함한다. CSF는 세포가 존재하지 않는 고 단백질을 갖는다. M-단백질 수준은 낮고(< 3g/dl, 중간값 = 1.1 g/dl); 중쇄 부류 - 일반적으로 α 또는 γ; 경쇄 부류 - 일반적으로 λ; 드믄 뇨 단클론 및 때때로 저온글로불린혈증을 갖는다. 신경병증이 근위 및 원위 둘다의 약한 환자의 50%에서 발생하며, 감각 손실은 소 섬유보다 더 크고; 말이집탈락 및 긴고 먼 잠복반응이 있다.
무증상 다발골수종 환자는 일반적으로 수개월/수년 동안 안정한 질병으로 존재하는데; 빈혈, 골 병변, 신장 부전 또는 고칼슘혈증이 없으며; 골수중 >10% 혈장 세포 및 단클론 혈청 단백질을 갖는다. 스몰더링 다발골수종에 대한 기준은 다발골수종의 진단과 양립성이지만; 진행 과정의 증거가 없다. 이들은 느린 진행을 가지는 경우들이며, 종양 세포 덩어리는 진단시 작고 S 상에서 골수 혈장 세포의 비율은 낮다(<0.5%). 특징적인 임상 특징은 >3 g/dL의 혈청 M 단백질 수준 및/또는 >10%의 골수 혈장 세포; 빈혈, 신부전, 고칼슘혈증, 용해성 골수 병변의 부재를 포함한다.
무통성(또는 무증상) 다발골수종은 일반적으로 실험실 연구를 스크리닝한 후 증상의 부재하에서 변화로 진단된 다발골수종이다. 무통성 다발골수종은 무증상 골수종과 유사하지만, 골 병변이 거의 없고 약한 빈혈이 있다. 무통증 다발골수종의 대부분의 경우는 3년내에 현성 다발골수종으로 발전한다. 진단 기준은 다음을 제외하고는 다발골주종과 동일하다: 골 병변 없거나 하나의 무증상 용해 병변((X-선 조사); IgG에 대한 M 성분 수준 <3 g/dL, IgA에 대해 2 g/dL, 뇨 경쇄 < 4 g/24h; 헤모글로빈 >10 g/dl, 혈청 칼슘 정상, 혈청 크레아티닌 <2 mg/dL, 및 감염 없음.
다발골수종(MM)의 개시 및 유지의 원인이 되는 세포의 정체성은 시험관내 및 생체내 성장하는 MM 세포의 어려움으로 인하여 여전히 명확하지 않다. 많은 제제가 다발경화증에 활성이지만, 환자의 대부분은 재발된다. 이러한 임상 패턴은, 대부분의 암 세포가 제거되지만, 종양 재성장을 매개하는 클론원성 잠재성을 가진 세포가 비교적 화학내성임을 시사한다. 암 줄기 세포 가설은, 인간 MM 세포주가 CD138 발현을 결여한 작은(< 5%) 소집단을 함유하였으며 상응하는 CD138+ 혈장 세포보다 시험관내에서 보다 더 클론원성 잠재력을 지녔다는 발견에 의해 지지된다(참조: Matsui et al. Blood. 2004 Mar 15;103(6):2332-6.). 임상 MM 시료로부터의 CD138- 세포는 시험관내 및 비비만성 당뇨병/심각한 복합 면역결핍성(NOD/SCID) 마우스 둘다에서 유사하게 클론원성인 반면, CD138+ 세포는 그렇지 않았다. 또한, 세포주 및 임상 시료 둘다로부터의 CD 138-세포는 후배(postgerminal) 중심 B 세포와 표현형적으로 유사하였으며, 이들의 클론원성 성장은 항-CD20 단클론 항체 리툭시마브에 의해 억제되었다. 또한, 세포주 및 임상 시료 둘다로부터의 CD 138- 세포는 CD27 및 CD19 B 세포 마커를 발현하였다. 이들 데이타는, MM "줄기 세포"가 복제하여 후속적으로 CD 138+ 혈장 세포로 분화되는 능력을 지닌 CD138- B 세포임을 시사한다. 다발골수종에서 암 줄기 세포 가설을 지지하는 추가의 결과는 문헌[참조: Huff & Matsui (J Clin Oncol. (2008) 26(17):2895-900) and Matsui et al. (Cancer Res. (2008) 68(1): 190-7]에서 고찰되었다.
본 발명은 인간 다발성 골수종 환자에서 CD138 클론형성 B 세포를 효율적으로 고갈시키는 항체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD-19 항체는 인간 다발성 골수종 환자 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%의 CD138 클론형성 B 세포 고갈을 달성할 수 있다. CD138 클론형성 B 세포의 고갈은 장기간 지속될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 CD138 클론형성 B 세포 고갈은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 또는 적어도 30일 동안 지속될 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 CD138 클론형성 B 세포 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 또는 적어도 10주 동안 지속될 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 CD138 클론형성 B 세포 고갈은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월 동안 지속될 수 있다.
본 발명은 인간 다발성 골수종 환자에서 암 줄기세포를 효율적으로 고갈시키는 항체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD-19 항체는 인간 다발성 골수종 환자에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 암 줄기세포 고갈을 달성할 수 있다. 암 줄기세포의 고갈은 장기간 지속될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 암 줄기세포 고갈은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 또는 적어도 30일 동안 지속될 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 암 줄기세포 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 또는 적어도 10주 동안 지속될 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 항체에 의한 암 줄기세포 고갈은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월 동안 지속될 수 있다.
본 발명은 또한, 인간의 다발성 골수종을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 치료가 필요한 인간에게, 인간 항체 의존성 세포 독성작용 (ADCC), 보체 의존성 세포 매개된 세포독성 (CDC), 및/또는 세포사멸을 매개할 수 있는 인간, 인간화 또는 키메라 항-CD19 항체를 순환 B 세포를 고갈시키는데 충분한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 다발성 골수종의 치료 방법은 CD138 클론형성 B 세포의 고갈을 포함한다. 또 하나의 구체예에서, 인간의 다발성 골수종의 치료 방법은 암 줄기세포의 고갈을 포함한다. 특정 구체예에서, 고갈은 CD138 클론형성 B 세포 또는 암 줄기세포에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 고갈은 장기간 지속될 수 있다. 하나의 구체예에서, CD138 클론형성 B 세포 또는 암 줄기세포의 고갈은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 또는 적어도 30일 동안 지속될 수 있다. 또 하나의 구체예에서, 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 또는 적어도 10주 동안 지속될 수 있다. 추가 구체예에서, 고갈은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월 동안 지속될 수 있다.
6.20. 환자 진단 및 치료 요법:
자가면역 질병
본 발명의 특정 면에 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용된 치료 요법 및 투여량을 치료되는 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 병기를 포함하나, 이에 국한되지 않는 다수의 인자를 기초로 선택한다. 환자 또는 환자 집단의 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 특정 병기에 대한 적절한 치료 요법은 당해 분야의 숙련가가 결정할 수 있다. 투여량 반응 곡선은 상이한 병기의 자가면역 질병 또는 자가면역 질환을 가진 환자를 치료하기 위한 본 발명의 화합물 유효량을 결정하기 위하여 당해 분야에서의 표준 프로토콜을 사용하여 생성할 수 있다. 일반적으로, 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 큰 활성을 가진 환자는 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 활성이 거의 없는 환자와 비교하여 더 긴 기간에 걸쳐 투여될 수 있는 보다 높은 투여량 및/또는 보다 흔한 투여량을 필요로 할 것이다.
본원에 기술된 항-CD 19 항체, 조성물 및 방법을 실시하여 자가면역 질병 또는 질환을 치료할 수 있다. 용어 "자가면역 질병 또는 자가면역 질환"은 피험체 자신의 세포, 조직 및/또는 기관에 대한 피험체의 면역학적 반응에 의해 유발된 세포, 조직 및/또는 기관 손상이 특징인 피험체의 상태를 말한다. 용어 "염증병"은 만성 염증을 포함하나, 이에 국한되지 않는, 염증이 특징인 피험체의 상태를 말하기 위해 용어 "염증 질환'과 상호교환적으로 사용된다. 자가면역 질환은 염증과 관련되거나 관련되지 않을 수 있다. 또한, 염증은 자가면역 질환을 유발하거나 유발하지 않을 수 있다. 따라서, 특정 질환은 자가면역 및 염증 질환 둘 모두가 특징이 될 수 있다. 예시적인 자가면역 질병 또는 자가면역 질환은 원형탈모증, 강직척추염, 항인지질 증후군, 자가면역 애디슨병(autoimmune Addison's disease), 부신의 자가면역 질병, 자가면역 용혈빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 난소염 및 고환염, 자가면역 저혈소판증, 베체트병, 수포성 유천포창, 심근병증, 복강 스프루(celiac sprue)-피부염, 만성 피로 면역 기능장애 증후군(CFIDS), 만성 염증 탈말이집 다발신경병증, 처그-스트라우스 증후군(Churg-Strauss syndrome), 반흔성 유천포창, CREST 증후군, 저온응집병, 크론병, 원반모양홍반루푸스, 원발성 혼합 한냉-글로블린증, 당뇨병, 호산구 근막염, 섬유근통-섬유근염, 사구체신염, 그레이브스병(Graves' disease), 길랑-바레(Guillain-Barre), 하시모토 갑상샘염(Hashimoto's thyroiditis), 헤노흐-슈늘라인 자색반증(Henoch-Schδnlein purpura), 특발성 폐 섬유증, 특발성/자가면역 혈소판감소성 자색반증(ITP), IgA 신경변증, 소아 관절염, 편평태선, 전신홍반루푸스, 메니에르병, 복합 연결조직병, 다발경화증, 제1형 또는 면역 매개된 질환(예를 들면, 보통천포창), 악성빈혈, 결절다발동맥염, 다발연골염, 다분비선증후군, 류마티스성 다발성 근육통, 다발근육염 및 피부근염, 원발성 무감마글로불린혈증, 원발쓸개관간경화증, 건선, 건선관절염, 레이놀 현상(Raynauld's phenomenon), 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 류마티스 관절염, 사르코이드증, 소그렌 증후군, 강직증후군, 전신홍반루푸스(SLE), 스윗 증후군(Sweet's syndrome), 스틸병(Still's disease), 전신홍반루푸스, 다카야스 관절염, 일시적인 관절염/거대세포 관절염, 궤양 대장염, 포도막염, 포진 피부염 혈관염과 같은 혈관염, 백반증 및 베게너육아종증을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 염증 질환의 예는 천식, 엔세필리티스(encephilitis), 염증성 창자병, 만성 폐쇄성 폐병(COPD), 알레르기 질환, 패혈성 쇼크, 폐 섬유증, 분화되지 않은 척추관절병증, 분화되지 않은 관절병증, 관절염, 염증성 골용해, 이식체 대 숙주병, 두드러기, 포그트-고야나기-하레다 증후군(Vogt-Koyanagi-Hareda syndrome) 및 만성 바이러스 또는 세균 감염으로부터 초래된 만성 염증을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
항-CD 19 면역요법은 자가면역 질병 또는 질환의 치료를 위한 단일 제제 치료로서 항-CD 19 항체의 투여를 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 면역요법은 시험관내에서 자극된 B 세포 증식을 억제할 수 있는 항-CD 19 항체의 투여를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 면역요법은 Fc 변이체 항-CD 19 항체의 투여를 포함하며, 여기서, 상기 Fc 변이체는 비교가능한 비-변이체 분자에 대해 하나 이상의 Fc 리간드에 대한 변경된 결합 친화성을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 면역요법은 Fc 변이체 항-CD 19 항체의 투여를 포함하며, 여기서, 상기 Fc 변이체는 비교가능한 비-변이체 Fc 도메인에 비해 Fc 감마 수용체 HB에 대한 향상된 결합을 갖는다.
항-CD 19 면역요법은 또한 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 단일 제제 치료제로서 항-CD 19 이특이적인 항체의 투여를 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항-CD 19 면역요법은 제1 및 제2 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항-CD 19 이특이적인 항체의 투여를 포함하며, 여기서, 상기 제1 항원은 인간 CD 19이고 상기 제2 항원은 FcγI, FcγIIA, FcγIIB, FcγIIIA 및/또는 FcγIV로 이루어진 그룹 중에서 선택된 Fc 감마 수용체이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 항-CD19 면역요법은 인간 CD 19 및 FcγIIB에 대해 특이적으로 결합할 수 있는 항-CD 19 이특이적인 항체의 투여를 포함한다.
CD 19는 미성숙한 B 세포에서 발현하기 때문에, 항-CD 19 mAb는 예를 들면, 골수에서 전-B 세포 및 미성숙 B 세포를 고갈시키는데 특히 적합할 수 있다.
6.20.1. 자가면역 질병 또는 자가면역 질환을 진단하기 위한 임상 기준
상이한 자가면역 질병 또는 자가면역 질환에 대한 진단 기준은 당해 분야에 공지되어 있다. 조직학적으로, 진단은 통상적으로 물리적 증상의 조합을 기초로 한다. 보다 최근에, 유전자-발현 프로파일링과 같은 분자 기술이 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 분자적 정의를 개발하기 위해 적용되어 왔다. 특정한 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 임상 진단을 위한 예시적인 방법은 하기 제공된다. 다른 적합한 방법은 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다.
특정 구체예들에서, 낮은 수준의 자가면역 질병 활성을 가진 환자 또는 초기 병기의 자가면역 질병(병기들이 인지되어 있는 질병의 경우)을 가진 환자를 항-CD 19 항체 조성물 및 방법을 사용한 치료에 대해 확인할 수 있다. 자가면역 질병의 조기 진단은 이의 증상의 일반성 및 자가면역변중에서 증상의 겹침으로 인하여 어렵다. 이러한 구체예에서, 초기 병기에서 치료되거나 낮은 수준의 자가면역 질병 활성을 가진 환자는 자가면역 질병 또는 자가면역 질환 중 적어도 하나의 증상을 포함하는 증상들을 가진다. 관련 구체예들에서, 초기 병기에서 치료되거나 낮은 수준의 자가면역 질병을 가진 환자는 자가면역 질병 또는 자가면역 질환의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 증상을 포함하는 증상들을 가진다. 증상들은 특정의 자가면역 질병 및 자가면역 질환일 수 있거나 이의 조합일 수 있다. 자가면역 질병 및 자가면역 질환 증상의 예는 하기 기술되어 있다.
6.20.2. 전신홍반루푸스(SLE)
전신홍반루푸스(SLE)는 신체의 관절, 근육 및 다른 부분에 영향을 미치는 만성(장기-지속성) 류마티스병이다. SLE를 치료할 필요성이 있는 환자 또는 환자 집단은 물리적 증상들 및/또는 실험적 시험 결과를 시험함으로써 확인할 수 있다. 물리적 증상들은 환자들 중에서 광범위하게 변한다. 예를 들어, SLE의 경우, 통상적으로 11개 증상들 중 4개가 SLE로 진단된 환자에서 존재한다: 1) 뺨발진: 볼에 걸친 발진; 2) 원반모양 발진: 적색의 솟은 반점; 3) 광민감성: 피부 발진의 발달 또는 증가를 초래하는, 햇볕에 대한 작용; 4) 구강 궤양: 코 또는 입에서의 궤양, 일반적으로 무통; 5) 관절염: 2개 이상의 말초 관절을 포함하는 비부식성 관절염(관절 주변의 골이 파괴되지 않는 관절염); 6) 장막염 흉막염 또는 심장막염; 폐 또는 심장의 내면의 염증; 7) 신 질환: 뇨내 과도한 단백질(0.5 gm/일 또는 시험 스틱에서 3+ 이상) 및/또는 세포 캐스트(cellular cast)(적혈구 및/또는 백혈구 세포 및/또는 신장 관 세포로부터 기원한 뇨내 비정상 성분); 8) 신경학적 질환: 대발작(경련) 및/또는 이러한 효과를 유발하는 것으로 공지된 약물 또는 대사 장애의 부재하에서의 정신병; 9) 혈액 질환: 용혈빈혈 또는 백혈병(입방밀리미터당 4,000개 세포 이하의 백혈구수) 또는 림프구감소증(입방밀리미터당 1,500개 미만의 림프구) 또는 혈소판감소증(입방밀리미터당 100,000개 미만의 혈소판)(백혈구감소증 또는 림프구감소증은 2개 이상의 경우에서 검출되어야 한다. 저혈소판증은 이를 유도하는 것으로 공지된 약물의 부재하에서 검출되어야 한다); 10) 항핵 항체: 이를 유도하는 것으로 공지된 약물의 부재하에서 항핵 항체(ANA)에 대한 양성 시험; 및/또는 11) 면역학적 질환: 양성 항-이본쇄 항-DNA 시험, 양성 항-sm 시험, 양성 항인지질 항체 예를 들면, 항카디올리핀, 또는 거짓 양성 매독 시험(vdrl).
SLE의 지표일 수 있는 다른 물리적 증상은 빈혈, 피로, 열, 피부 발적, 근육통, 오심, 구토 및 설사, 팽윤된 선, 식욕 부진, 추위에 대한 민감성(레이놀드 현상) 및 체중 감소를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
실험실 시험을 또한 사용하여 치료가 요구되는 환자 또는 환자 집단을 확인할 수 있다. 예를 들면, 혈액 시험을 사용하여 SLE를 가진 대부분의 모든 인간들의 혈액 속에서 발견된 자가항체를 검출할 수 있다. 이러한 시험은 이를 유도하는 것으로 공지된 약물의 부재하에서 항핵 항체(ANA)[참조: Rahman, A. and Hiepe, F. Lupus. (2002). 11(12):770-773], 항-이본쇄 항-DNA[참조: Keren, D.F. Clin. Lab. Med. (2002) 22(2):447-474.], 항-Sm, 항인지질 항체, 예를 들면, 항카디올리핀[참조: Gezer, S. Dis. Mon. 2003. 49(12): 696-741], 또는 거짓 양성 매독 시험(VDRL)에 대해 시험하는 것을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
다른 시험은 혈액내 순환하는 상보체 단백질의 양을 측정하기 위해 사용될 수 있는 상보체 시험(C3, C4, CH50, CHlOO)[참조: Manzi et al. Lupus 2004. 13(5):298-303)을 포함할 수 있으며, 침강률(ESR) 또는 C-반응성 단백질(CRP)을 사용하여 염증 수준을 측정할 수 있고, 뇨 분석을 사용하여 신장 문제를 검출할 수 있으며, 심장 X-선을 취하여 폐 손상을 검출할 수 있고, EKG를 사용하여 심장 문제를 검출할 수 있다.
만성 SLE는 관련 기관, 특히 신장에 대해 축적된 측부 손상과 관련되어 있다. 따라서, 조기 치료학적 개입, 즉, 예를 들면, 신부전 전 개입이 바람직할 수 있다. SLE에 이용가능한 치료는 류마티스 관절염에 이용가능한 것과 유사하다. 이는 진통 또는 비스테로이드성 소염(NSAID) 화합물을 사용한 초기 치료를 포함한다. 질병이 진행하고/하거나 증상이 중증도에 있어 증가하면서, SLE는 덱사메타손 및 프레드니손과 같은, 그러나 이에 국한되지 않는 스테로이드의 투여에 의해 치료될 수 있다.
더 중증의 경우에서, 메토트렉세이트 또는 사이톡신과 같은, 그러나 이에 국한되지 않는 화학치료제를 SLE의 증상을 완화시키기 위해 투여할 수 있다. 그러나, 이러한 시도는, 환자가 가임기 여성인 경우 바람직하지 않다. 이러한 경우에서, 환자의 생식능을 방해하지 않는 치료학적 시도가 바람직하다.
특정 예에서, SLE는 항체 또는 수용체(또는 수용체 유사체)와 같은, 생물제의 투여로 치료될 수 있다. 이러한 치료학적 항체의 예는 리툭신 및 레미케이드이다. SLE를 치료하기 위해 투여될 수 있는 염증성 사이토킨에 대한 가용성 수용체의 설명적인 예는 엔브렐이다.
본 발명의 방법의 특정 구체예들에서, 환자는 SLE의 치료를 위해 사용된 위에서 개시된 요법들 중 어느 것 이전에, 동시에 또는 후속적으로 항-CD 19 항체로 치료될 수 있다. 또한, 본 발명의 항-CD 19 항체는 진통제, NSAID, 스테로이드 또는 위에서 나타낸 화학치료제는 물론 SLE의 치료를 위해 투여된 생물제와도 병용하여 투여될 수 있다.
6.20.3. 전신 경화증(공피증) 및 관련 질환
공피증으로 또한 알려져 있는 전신 경화증은 제한된 피부병, 확산 피부병, 사인(sine) 피부경화증, 분화되지 않는 연결 조직병, 오버랩 증후군(Overlap syndrome), 국재화된 공피증, 국소피부경화증, 선피부경화증, 칼자국약(En coup de saber), 부쉬케의 성인경화부종(Scleredema adultorum of Buschke), 공피점액부종(Scleromyxedema), 만성 이식체 대 숙주병, 호산구성 근막염, 당뇨병에서 디지탈 경화증, 및 다발 근육종과 관련된 원발성 아닐로이도시산드 아닐로이도시스(anylooidosisand anyloidosis)를 포함하나, 이에 국한되지 않는다(참조: Harrison's Principles of Internal Medicine, 16th ed./editors, Dennis L. Kasper, et al. The McGraw-Hill Companies, Inc. 2005 New York, New York).
공피증과 관련된 임상 특징은 레이놀드 현상, 피부 비후, 피하석회, 모세혈관확장증, 관절통/관절염, 근육병증, 식도 운동장애, 폐 섬유증, 분리된 폐 동맥 고혈압, 울혈성 심부전 및 신장 위기를 포함할 수 있다. 환자가 하나 이상의 이들 질병 만연을 나타내는 정도는 진단 및 잠재적인 치료 계획에 영향을 미칠 수 있다.
자가항체는 항-토포이소머라제 1, 항중심절, 항-RNA 폴리머라제 I, II, 및/또는 III, 항-Th RNP, 항-U, RNP (항-피브릴라린), 항-PM/Sci, 항-핵 항체(ANA)를 포함한다.
공피증의 치료가 요구되는 환자 및 환자 집단의 확인은 임상 기록 및 물리적 발견을 기초로 할 수 있다. 공피증에 대한 치료가 요구되는 환자 또는 환자 집단은 환자의 의학 기록, 물리적 증상, 및/또는 시험실적 시험 결과를 시험하여 확인할 수 있다. 진단은 현저한 피부 비후가 없는 환자에서 지연될 수 있다. 실험실적, X-선, 폐 기능 시험 및 피부 또는 콩팥(신장) 생검을 사용하여 내부 기관 관여 정도 및 중증도를 측정할 수 있다.
질병 발생의 초기 개월 또는 년에서, 공피증은 전신홍반루푸스, 다발근육염 및 류마티스 관절염과 같지만 이에 국한되지 않는 많은 다른 연결 조직병과 유사할 수 있다.
전신 경화증(공피증)의 대부분의 전통적인 증상은 수지경화증적이다. 초기 증상은 때때로 네치퍼링(tapering) 및 가재-유사 변형(claw-like deformity)으로 진행하는 팽윤된 손을 포함한다. 공피증을 지닌 누구도 이러한 정도의 피부 경화도로 발전되지 않는다. 다른 증상은 국소피부경화증, 선 수지경화증(경화된 손가락), 레이놀 증후군, 석회증 및 모세혈관확장증을 포함할 수 있다.
항핵 항체(ANA) 시험과 같은 혈액 시험을 국재화된 및 전신계 공피증의 진단에 사용할 수 있다. 예를 들면, 항중심체 항체(ACA) 및 항-Scl-70 항체는 전신 공피증의 치료가 요구되는 환자의 지표이며[참조: Ho et al, 2003, Arthritis Res Ther. 5:80-93]; 항-토포 II 알파 항체는 국소 공피증 치료가 요구되는 환자의 지표이며; 항-토포 I 알파 항체는 전신 공피증의 치료가 요구되는 환자의 지표이다. 소아공피증[참조: Foeldvari, Curr Opin Rheumatol 14:699-703 (2002); Cefle et al, Int J Clin Pract. 58:635-638 (2004)]; 국재화된 공피증; 결절 공피증[참조: Cannick, J Rheumatol. 30:2500-2502 (2003)]; 및 석회증, 레이놀 증후군, 식도Esophagus, 가락피부경화증 및 모세혈관확장증(CREST), 제한된 전신 공피증, 및 확산 전신 공피증을 포함하나, 이에 국한되지 않는 전신 공피증을 포함하나, 이에 국한되지 않는, 몇가지 유형의 공피증 및 이러한 유형을 진단하는 방법은 당해 분야에 인지되어 있으며 잘 공지되어 있다. 전신 공피증은 또한 전신 피부경화증(SSc)으로 공지되어 있다. 이는 또한 진행성 전신 피부경화증(PSSc), 또는 가족성 진행성 전신 피부경화증(FPSSc)으로 언급될 수 있다[참조: Nadashkevich et al, Med Sci Monit. 10:CR615-621 (2004); Frances et al, Rev Prat. 52: 1884-90 (2002)]. 전신 피부경화증은 연결 조직 피부경화증, 소-규모 관절염 및 미세순환에 관한 혈관 비정상 및 자가면역 변화를 특징으로 하는 다중시스템 질환이다.
CREST로서 공지된 전신 경화증의 유형은 특정 피부 긴축이 특징이 아니다. CREST는 일반적으로 손가락에서 석회증(칼슘 침착); 삼키기 어려움을 유발할 수 있는 식도의 근육 조절 상실; 가락피부경화증, 손가락의 뼈의 테이퍼링 변형(tapering deformity); 및 모세혈관확장, 손가락, 얼굴 또는 입안쪽의 피부의 작은 적색 반점이 특징이다. 통상적으로 이들 증상들 중 2개는 CREST를 진단하기에 충분하다. CREST는 단독으로 발생하거나 어떠한 다른 형태의 공피증과 함께 또는 다른 자가면역 질병과 함께 발생할 수 있다.
제한된 공피증은 피팅 디지탈 궤양(pitting digital ulcers)(레이놀 증후군에 대해 2차적인) 및/또는 폐 섬유증과 함께 손가락에 제한된 긴장된 피부가 특징이다. 얼굴 및 목의 피부가 또한 제한된 공피증에 포함될 수 있다.
확산 공피증은, 근접한 긴장된 피부가 존재하는 경우에는 언제나 진단된다. '근접한'은 참조 지점과 가장 가깝게 위치함을 의미한다. 근접한 긴장된 피부는 손목 위 또는 팔꿈치 위의 피부 긴장성일 수 있다. 전형적으로, 이들의 팔꿈치 및 이들의 손목 사이에만 피부 긴장이 있는 환자는 근접한 진단 임상용의 의미에 따라, 확산되거나 제한된 전신 공피증으로 진단될 것이다.
공피증에 대한 현행 요법은 체외순환성 광영동에 이은 6-메톡시프소랄렌, 및 자가 줄기 세포 이식을 포함한다.
공피증에 대한 현행 치료에는 다음 제제, 페니실라민, 콜치신, 인터페론 알파, 인터페론 감마, 클로람부실, 사이클로스포린, 5-플루오로우라실, 사이클로포스파미드, 미노사이클린, 탈리도미드, 에타네르셉트 또는 메토트렉세이트의 투여가 포함된다.
본 발명의 방법의 특정 구체예들에서, 환자는 자가면역 당뇨병의 치료를 위해 사용된 위에 개시된 요법들 중 어느 요법 이전에, 동시에 또는 후속적으로 항-CD 19 항체로 치료될 수 있다. 또한 본 발명의 항-CD 19 항체는 위에서 나타낸 제제들 중 어느 것과 병용하여 투여될 수 있다.
6.21. 면역치료학적 프로토콜
본원에서 "항-CD 19 면역요법"으로서 언급된 치료 요법/프로토콜에서 사용된 항-CD 19 항체 조성물은 나항체, 면역접합체 및/또는 융합 단백질일 수 있다. 본 발명의 조성물은 단일제제 요법으로서 또는 다른 치료제 또는 요법과 병용하여 사용될 수 있다. 항-CD 19 항체 또는 면역접합체는 하나 이상의 치료제의 투여 전에, 동시에 또는 이후에 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물을 사용한 병용 요법에서 사용될 수 있는 치료제는 세포의 기능을 억제하거나 예방하고/하거나 세포의 파괴를 유발하는 특정 물질을 포함한다. 예로서 방사활성 동위원소, 화학치료제, 및 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이의 단편과 같은 독소를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
본원에 기술된 치료 요법, 또는 특정의 바람직한 치료 요법은 천연의 CD19 항원 대신에 인간 CD19 항원을 발현하는 형질도입 동물 모델을 사용하여 효능에 대해 시험할 수 있다. 따라서, 항-CD 19 항체 치료 요법이 인간에 대한 투여 전 효능을 측정하기 위해 동물 모델에서 시험될 수 있다.
항-CD 19 항체, 조성물 및 방법을 실시하여 B 세포 질병, 예를 들면, B 세포 악성종양을 치료할 수 있다. 용어 "B 세포 악성종양"은 B 세포 계통의 세포로부터 기원한 특정의 악성종양을 포함한다. 예시적인 B 세포 악성종양은 다음을 포함하나 그에 국한되지 않는다: 저 등급/난포 NHL, 소 림프구(SL) NHL, 중간 등급/난포 NHL, 중간 등급 확산 NHL, 고 등급 면역모세포 NHL, 고 등급 림프모구 NHL, 고 등급 소 비-분해된 세포 NHL; 외투세포 림프종, 및 벌키병 NHL을 포함하는 B 세포 아형 비-호지킨 림프종(NHL); 버킷 림프종; 다발골수종; 전-B 급성 림프모구 백혈병, 및 조기 B 세포 전구체로부터 기원하는 다른 악성종양; 일반적인 급성 림프구 백혈병(ALL); 면역글로불린-돌연변이된 CLL 및 면역글로불린-돌연변이되지 않은 CLL을 포함하는 만성 림프구 백혈병(CLL); 모발 세포 림프종; 널(Null)-급성 림프모구 림프종; 왈덴스트롬 마크로글로불린혈증; 배 중심 B 세포(GCB) DLBCL, 활성화된 B 세포-유사(ABC) DLBCL, 및 제3형 DLBCL을 포함하는 확산 거대 B 세포 림프종(DLBCL); 전-림프구 백혈병; 경쇄병; 형질세포종; 골경화성 골수종; 혈장 세포 백혈병; 의미 미결정의 단클론 감마글로불린병증(MGUS); 스몰더링 다발골수종(SMM); 무통성 다발골수종(IMM); 전통적인 및 결절 림프구 전-우세형을 포함하는 호지킨 림프종; 림프형질세포성 림프종(LPL); 및 위점막-관련 림프조직(MALT) 림프종을 포함하는 변연부림프종.
추가의 구체예에서, 본 발명은 소포 림프종, 외투세포 림프종, 버킨 림프종, 다발골수종, 배중심 B 세포-유사(GCB) DLBCL, 활성화된 B 세포-유사(ABC) DLBCL, 및 제3형 DLBCL을 포함하는 확산 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 전통적인 및 결절 림프구 전-우세형을 포함하는 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma); 림프형질세포성 림프종(LPL); 및 위점막-관련 림프조직(MALT) 림프종을 포함하는 변연부림프종, 및 면역글로불린-돌연변이된 CLL 및 면역글로불린-돌연변이되지 않은 CLL을 포함하는 만성 림프구 백혈병(CLL)을 포함하나 이에 국한되지 않는 성숙한 B 세포 악성종양(즉, 세포 표면상에 Ig를 발현하는 것)을 치료하는데 사용될 수 있다.
또한, CD19는 예를 들면, CD20보다 B 세포 발달시 더 조기에 발현되므로 예를 들면, 골수에서 전-B 세포 및 미성숙 B 세포 악성종양(즉, 세포 표면상에 Ig를 발현하지 않는것)을 치료하는데 특히 적합하다. 예시적인 전-B 세포 및 미성숙 B 세포 악성종양은 급성 림프모구백혈병을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
다른 특정 구체예들에서, 본 발명은 림프절외 종양을 치료하기 위해 실시될 수 있다.
6.22. 항-CD 19 면역요법
본 발명에 따라서, "항-CD 19 면역요법"은 본원에 기술된 특정의 치료 요법에 따라 본 발명의 특정의 항-CD 19 항체의 투여를 포함한다. 항-CD 19 항체는 나항체, 또는 면역접합체 또는 융합 단백질로서 투여될 수 있다.
항-CD 19 면역요법은 B 세포 악성세포를 치료하기 위한 단일 제제 치료제로서 항-CD 19 항체의 투여를 포함한다. 항-CD 19 면역요법은 B 세포 악성종양으로부터 초래되는 초기 병기의 질병의 치료방법을 포함한다. 항-CD 19 면역요법은 B 세포 악성종양을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서, 항-CD 19 항체는 ADCC를 매개한다. 항-CD 19 면역요법은 B 세포 악성종양을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서, 항-CD 19 항체는, 환자가 악성종양에 대한 특정 치료를 제공받기 전에 투여되며, 이러한 요법은 화학요법, 방사 화학계 요법 또는 외과 요법이든 상관없다.
일 구체예에서, B 세포 악성종양을 가진 인간 대상체는 인간 ADCC를 매개할 수 있는 인간 또는 인간화된 항체를 투여함으로써 치료될 수 있다. 초기 병기의 질병의 경우, 또는 단일 제제 요법의 경우, ADCC를 매개할 수 있는 어떠한 항-CD 19 항체(쥐 및 키메라 항체 포함)도 인간 피험체에서 사용될 수 있으나; 인간 및 인간화된 항체가 바람직할 수 있다.
IgGl 또는 IgG3 인간 동형의 항체가 일부 증례에서 요법에 바람직하다. 그러나, IgG2 또는 IgG4 인간 동형이 또한 사용될 수 있으며, 단, 이들은 관련된 효과기 기능, 예를 들면, 인간 ADCC를 갖는다. 이러한 효과기 기능은 시험관내 또는 생체내에서 효과기 세포에 의한 표적 세포 용해를 매개하는 문제의 항체의 능력을 측정함으로써 평가할 수 있다.
일 구체예에서, 사용된 항체의 투여량은 순환하는 B 세포를 고갈시키기에 충분하여야 한다. 요법의 진행은 혈액 시료를 분석함으로써 환자에서 모니터링할 수 있다. 임상적 개선의 다른 신호를 사용하여 요법을 모니터링할 수 있다.
본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 B 세포의 고갈을 측정하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 다음 구체예들를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 일 구체예에서, 순환하는 B 세포 고갈은 B 세포의 양을 정의하기 위해 B 세포에 결합하는 항-CD 19 항체 이외의 시약을 사용하여 유동 세포분석법으로 측정할 수 있다. 다른 구체예들에서, 혈액중 B 세포 수준은 표준 혈청 분석을 사용하여 모니터링할 수 있다. 이러한 구체예들에서, B 세포 고갈은 B 세포에 의해 생산되는 것으로 공지된 항체에 대한 양을 정의함으로써 간접적으로 측정한다. 이후에, 이러한 항체의 수준을 모니터링하여 B 세포의 고갈 및/또는 기능적 고갈을 측정한다. 또 다른 구체예에서, B 세포 고갈은 B 세포를 확인하기 위한 면역화학적 염색으로 측정할 수 있다. 이러한 구체예들에서, 환자로부터 추출된 B 세포 또는 B 세포를 포함하는 조직 또는 혈청을 현미경 슬라이드 위에 두고, 표지하여 존재 또는 부재에 대해 시험할 수 있다. 관련 구체예들에서, 비교는 요법 전 및 후에 추출된 B 세포들 사이에서 수행하여 B 세포의 존재에 있어서의 차이를 측정한다.
종양 부하(burden)는 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 측정하여 사용할 수 있다. 종양 부하를 측정하기 위한 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 다음 구체예들을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, PET 스캔을 사용하여 대사 활성을 측정하고 종양의 지표인 보다 높은 활성의 부위를 확인할 수 있다. CT 스캔 및 MRI를 또한 사용하여 종양의 존재 및 크기에 대해 연조직을 시험할 수 있다. 다른 구체예들에서, 골 스캔을 사용하여 종양 용적 및 위치를 측정할 수 있다. 하지만 다른 구체예들에서, 종양 부하는 도플러 기술(doppler technology)(예: 초음파)을 사용하여 종양 내부 및 외부로 혈류를 시험함으로써 측정할 수 있다. 이러한 구체예들에서, 시간에 따른 혈류에 있어서의 변화 또는 환자의 적절한 조직내 정상적인 혈류로부터의 편차를 사용하여 종양 부하에 대한 평가를 게산할 수 있다. 종양 부하를 측정하는 이러한 방법은 본 발명의 치료 방법 전 및 후에 사용할 수 있다.
본 발명의 방법의 특정 구체예들에서, B 세포는 고갈되고/되거나 종양 부하는 ADCC 기능이 유지되는 동안 감소된다.
항-CD 19 항체가 단일 제제 요법으로서 투여되는 본 발명의 구체예들에서, 본 발명은 상이한 치료 요법의 사용을 고려한다.
본 발명의 특정 면에 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용된 항-CD 19 항체는 나항체이다. 관련 구체예들에서, 사용된 네이키드 항-CD19 항체의 투여량은 적어도 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17, 17.5, 18, 18.5, 19, 19.5, 20, 또는 20.5 mg/kg 환자 체중이다. 특정 구체예들에서, 사용된 네이키드 항-CD 19 항체의 투여량은 적어도 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 또는 15 내지 25 mg/kg 환자 체중이다. 특정 구체예들에서, 사용된 네이키드 항-CD 19 항체의 투여량은 적어도 약 1 내지 20, 3 내지 15, 또는 5 내지 10 mg/kg 환자 체중이다. 다른 구체예들에서, 사용된 네이키드 항-CD19 항체의 투여량은 적어도 약 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg 환자 체중이다.
특정 구체예들에서, 투여량은 4 내지 8주의 연속된 주 동안 매주 투여된 약 375 mg/m의 항-CD 19 항체를 포함한다. 특정 구체예들에서, 투여량은 4 내지 8주의 연속된 주 동안 매주 투여된 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 mg/kg 환자 체중이다.
상기 기술된 항-CD 19 항체의 예시적인 투여량은 제 6.18.3항에 기술된 바와 같이 투여될 수 있다. 일 구체예에서, 상기 투여량은 단일 투여량 주사이다. 다른 구체예들에서, 투여량은 기간에 걸쳐 투여된다. 다른 구체예들에서, 투여량은 기간에 걸쳐 다수 회로 투여된다. 기간은 수일, 수주 또는 수개월로 결정될 수 있다. 항-CD 19 항체의 다중 투여량은 치료학적 이익을 달성하면서 독성 부작용이 균형을 이루기에 적합한 간격으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 다중 투여량을 사용하는 경우, 항체를 사용한 반복된 치료 전에 환자의 단핵구 수의 회복을 허용하는 시간 간격으로 시간를 조절하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 투여량 요법은, 단핵구 집단이 환자에서 ADCC 기능을 반영하므로, 치료의 효능을 최적화시킬 것이다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 인간 환자에게, 환자가 요법에 대해 반응성인 한 투여된다. 다른 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 인간 환자에게, 환자의 질병이 악화되지 않는 한 투여된다. 관련 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 인간 환자에게, 환자의 질병이 진행되지 않거나 기간 동안 진행되지 않을 때까지 투여된 후, 질병이 재발하거나 다시 진행되기 시작하지 않으면, 본 발명의 조성물을 환자에게 투여하지 않는다. 예를 들어, 환자는, 환자가 질병 진행에 대해 모니터링되는 동안 약 4 내지 8주 동안 상기 투여량 중 어느 것으로도 치료될 수 있다. 질병 진행이 중지하거나 회복되는 경우, 환자가 재발하거나, 즉, 치료되는 질병이 다시 발생하거나 악화될 때까지 본 발명의 조성물이 환자에게 투여되지 않을 것이다. 이러한 재발생 또는 악화시, 환자는 초기 사용된 동일한 투여량 요법 또는 위에서 기술된 다른 투여량을 사용하여 다시 치료될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 부하 투여량에 이어 다수의 보다 적은 투여량(유지 투여량)으로서 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 이러한 구체예들에서, 투여량은 시간이 걸릴 수 있고 효과적인 B 세포 고갈을 유지하기 위해 조절된 양일 수 있다. 특정 구체예들에서, 부하 투여량은 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18 mg/kg 환자 체중이고, 유지 투여량은 적어도 약 5 내지 10 mg/kg 환자 체중이다. 다른 구체예들에서, 유지 투여량은 매 7, 10, 14 또는 21일의 간격으로 투여된다. 유지 투여량은, 독성이 존재할때까지, 혈소판 수가 감소할 때까지, 질병 진행이 없을 때까지, 환자가 면역원성을 나타낼 때까지, 또는 질병이 말기 상태로 진행될 때까지 지속될 수 있다. 하지만 다른 구체예들에서, 본 발명의 조성물은, 질병이 말기로 진행될 때까지 인간 환자에게 투여된다.
환자의 순환하는 단핵구 수준을 치료 요법의 부분으로 모니터링하는 본 발명의 구체예들에서, 투여된 항-CD 19 항체의 투여량은 단핵구 수의 회복이 허용되도록 하는 범위일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 매 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30일의 간격으로 투여될 수 있다.
항-CD 19 항체가 독소에 접합되거나 이와 병용하여 투여되는 본 발명의 구체예들에서, 당해 분야의 숙련가는, 항-CD 19 항체의 투여량이 독소 투여량을 기준으로 조절될 수 있으며, 독소 투여량이 사용되는 독소의 특정 유형에 의존할 것임을 인식할 것이다. 통상적으로, 독소가 사용되는 경우, 항-CD 19 항체의 투여량은 네이키드 항-CD 19 항체와 병용하여 사용된 투여량보다 적을 것이다. 적절한 투여량은 당해 분야에 잘 공지된 기술을 사용하여 특정 독소에 대해 결정될 수 있다. 예를 들어, 투여량 범위 연구를 수행하여 독소와 함께 투여되거나 이와 접합되는 경우, 항-CD 19 항체의 최대 내성 투여량을 결정할 수 있다.
항-CD 19 항체가 접합되거나 방사치료제와 병용하여 투여되는 본 발명의 구체예들에서, 항-CD 19 항체의 투여량은 사용된 방사치료제에 따라 변할 것이다. 특정 구체예들에서, 2 단계 과정이 사용된다. 첫째로, 인간 환자에게 네이키드 항-CD 19 항체를 포함하는 조성물을 투여하고 약 6, 7, 8, 9, 또는 10일 후 소량의 방사치료제를 투여한다. 둘째로, 저 투여량의 요법의 내성, 분포 및 청소가 측정된 후, 환자에게 네이키드 항-CD 19 항체의 투여량을 투여한 후 치료량의 방사치료제를 투여한다. 이러한 치료 요법은 ZEVALINTM(인듐 표지된 항-CD20 mAb)(Biogen Idee) 또는 BEXXARTM(GSK, Coulter Pharmaceutical)을 사용한 비-호지킨 림프종의 치료에 대해 입증된 것과 유사하다.
6.23. 화학치료제와의 병용
항-CD 19 면역요법(나항체, 면역접합체 또는 융합 단백질 사용)을 화학요법, 방사선면역요법(RIT), 화학요법 및 외부 빔 방사선(병용 요법, CMT) 또는 병용 방사선면역요법(CMRIT) 단독 또는 병용 등을 포함하나, 이에 국한되지 않는 다른 요법과 함께 사용될 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 항-CD 19 항체 요법은 비-호지킨 림프종을 치료하기 위한 가장 일반적인 화학요법 요법인, CHOP(사이클로포스파미드-하이드록시독소루비신-온코빈(빈크리스틴)-프레드니솔론)과 병용하여 투여될 수 있다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "와 병용하여 투여된"은, 항-CD 19 면역요법이 사용된 다른 요법 전에, 동안에 또는 후속적으로 투여될 수 있음을 의미한다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 세포독성 방사핵종 또는 방사선요법 동위원소와 병용한다. 예를 들어, 알파-방출 동위원소, 예를 들면, 225Ac, 224Ac, At, Bi, Bi, Pb, Ra, 또는 Ra. 세포독성 방사핵종은 또한 186Re, 188Re, 90Y, 1311, 67Cu, 177Lu, 153Sm, 166Ho, 또는 64Cu와 같은 베타-방출 동위원소일 수 있다. 또한, 세포독성 방사핵종은 오거(Auger) 및 저 에너지 전자를 방출할 수 있으며 동위원소 1251, 123I 또는 77Br을 포함한다. 다른 구체예들에서, 동위원소는 198Au, 32P 등일 수 있다. 특정 구체예들에서, 피험체에게 투여된 방사핵종의 양은 약 0.001 mCi/kg 내지 약 10 mCi/kg이다.
일부 구체예들에서, 피험체에게 투여된 방사핵종의 양은 약 0.1 mCi/kg 내지 약 1.0 mCi/kg이다. 다른 구체예들에서, 피험체에게 투여된 방사핵종의 양은 약 0.005 mCi/kg 내지 0.1 mCi/kg이다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 화학 독소 또는 화학치료제와 병용한다. 화학 독소 또는 화학치료제는 칼리체아미신 및 에스페라미신과 같은 에네다인; 두오카르마이신, 메토트렉세이트, 독소부리신, 멜팔란, 클로람부실, ARA-C, 빈데신, 미토마이신 C, 시스-백금, 에토포시드, 브레오마이신 및 5-플루오로우라실로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.
항-CD19 면역요법과 병용하는 요법에서 사용될 수 있는 적합한 화학 독소 또는 화학치료제는 칼시케아미신 및 에스페라미신과 같은 에네다인 계열의 분자의 구성원을 포함한다. 화학적 독소는 또한 두오카르마이신(참조: 예를 들면미국 특허 제5,703,080호 및 미국 특허 제4,923,990호), 메토트록세이트, 독소루비신, 멜팔란, 클로람부실, ARA-C, 빈데신, 미토마이신 C, 시스-백금, 에토포사이드, 블레오마이신 및 5-플루오로우라실로 이루어진 그룹 중에서 취할 수 있다. 화학치료제의 예는 또한 아드리아마이신, 독소루비신, 5-플루오로우라실, 사이토신 아라비노사이드 ("Ara-C"), 사이클로포스파미드, 티오테파, 탁소테레 (도세탁셀), 부설판, 사이톡신, 탁솔, 메토트록세이트, 시스플라틴, 멜팔란, 빈블라스틴, 블레오마이신, 에토포사이드, 이포스파미드, 미토마이신 C, 미토크산트론, 빈크레이스틴, 비노렐빈, 카보플라틴, 테니포사이드, 다우노마이신, 카르미노마이신, 아미노프테린, 닥티노마이신, 미토마이신, 에스페라미신(참조: 미국 특허 제4,675,187호), 멜팔란 및 다른 관련된 질소 무스타드를 포함한다.
다른 구체예들에서, 예를 들면, "CVB"(1.5 g/m2 사이클로포스파미드, 200-400 mg/m2 에토포사이드, 및 150-200 mg/m2 카르무스틴)을 본 발명의 병용 요법에서 사용할 수 있다. CVB는 비-호지킨 림프종을 치료하는데 사용된 요법이다[참조: Patti et al., Eur. J. Haematol. 51 :18 (1993)]. 다른 적합한 병용 요법은 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다[참조: 예를 들면, Freedman et al., "Non-Hodgkin 's Lymphomas " in CANCER MEDICINE, VOLUME 2, 3rd Edition, Holland et al. (eds.), pp. 2028-2068 (Lea & Febiger 1993)]. 예로서, 중간-등급 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 제1 세대 화학치료제 요법은 C-MOPP (사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 프로카르바진 및 프레드니손) 및 CHOP(사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니손)을 포함한다. 유용한 제2 세대 화학요법은 m-BACOD (메토트록세이트, 블레오마이신, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 덱사메타손 및 류코보린)인 반면, 적합한 제3 세대 요법은 MACOP-B(메토트록세이트, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 프레드니손, 블레오마이신 및 류코보린)이다. 추가의 유용한 약물은 페닐 부티레이트 및 브로스타틴-1을 포함한다. 다모델 요법에서, 화학치료 약물 및 사이토킨 둘다는 본 발명에 따른 항체, 면역접합체 또는 융합 단백질과 함께 동시-투여된다. 사이토킨, 화학치료 약물 및 항체, 면역접합체 또는 융합 단백질은 특정 순서로, 또는 함께 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 다른 독소는 유독성 렉틴, 리신, 아브린, 모덱신, 보툴리나 및 디프테리아 독소와 같은 식물 독소를 포함한다. 물론, 각종 독소의 조합물을 또한 하나의 항체 분자에 커플링함으로써 가변 세포독성을 수용할 수 있다. 본 발명의 병용 요법에서 적합하게 사용되는 독소의 예는 리신, 아브린, 리보뉴클레아제, DNase I, 스타필로코쿠스 장독소-A, 억새풀 항바이러스 단백질, 겔로닌, 디프테린 독소, 슈도모나스 외독소 및 슈도모나스 내독소이다[참조: 예를 들면, Pastan et al., Cell 47:641 (1986), and Goldenberg et al, Cancer Journal for Clinicians 44:43 (1994)]. 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사로부터), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스포르디이 단백질(Aleuritesfordii protein), 디안틴 단백질, 피토락카 아메리카나 단백질(Phytolaca americana proteins)(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다(참조: 예를 들면, 1993년 10월 28일자로 공개된 제WO 93/21232호).
적합한 독소 및 화학치료제는 문헌[참조: REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19th Ed. (Mack Publishing Co. 1995), and in GOODMAN AND GILMAN' S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 7th Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985)]에 기술되어 있다. 다른 적합한 독소 및/또는 화학치료제는 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다.
본 발명의 항-CD 19 면역요법은 또한 전구약물(예를 들면, 펩티딜 화학치료제, 참조: WO81/01145)를 활성 항암 약물(참조: 예를 들면, WO 88/07378 및 미국 특허 4,975,278)로 전환시키는 약물-활성화 효소와 함께 존재할 수 있다. 이러한 병용의 효소 성분은 이를 이의 보다 활성인 세포독성 형으로 전환시키도록 하는 방식으로 전구약물 상에서 작용할 수 있는 특정 효소를 포함한다. 본원에서 사용된 것으로서 용어 "전구약물"은 모 약물과 비교하여 종양 세포에 대해 덜 세포독성이면서 효소적으로 활성화될 수 있거나 보다 활성인 모 형태로 전환될 수 있는 약제학적으로 활성인 물질의 전구체 또는 유도체 형태를 말한다[참조: 예를 들면, Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) and Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al. (ed.), pp. 247 '-267, humana Press (1985)]. 항-CD 19 항체와 함께 사용될 수 있는 전구약물은 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 설페이트-함유 전구약물, 펩타이드-함유 전구약물, D-아미노산-변형된 전구약물, 글리코실화된 전구약물, α-락탐-함유 전구약물, 임의 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물 또는 임의 치환된 페닐락타미드-함유 전구약물 또는 임의 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로사이토신 및, 보다 활성인 세포독성 유리 약물로 전환될 수 있는 다른 5-플루오로우리딘 전구약물. 본 발명에서 사용하기 위한 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는 상기 기술된 화학치료제를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물의 투여 및 방법은 독성 요법을 지연시킬 수 있으며 화학요법과 관련된 필수적이지 않은 부작용 및 합병증 위험을 방지하고 화학요법에 대한 내성의 발달을 지연시키는데 도움을 줄 수 있다. 특정 구체예들에서, 독성 요법 및/또는 독성 요법에 대한 내성은 약 6개월 이하, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년 동안 본 발명의 조성물 및 방법으로 투여된 환자에서 지연된다.
6.24. 치료학적 항체와의 병용
본원에 기술된 항-CD 19 면역요법은 항-CD20 mAb, 항-CD52 mAb, 항-CD22 항체, 및 RITUXANTM(C2B8; RITUXIMABTM; IDEC Pharmaceuticals)과 같은 항-CD20 항체를 포함하나, 이에 국한되지 않는 다른 항체와 병용하여 투여될 수 있다. 본 발명의 항체와 병용하여 사용되거나 본 발명의 조성물에서 사용될 수 있는 치료학적 항체의 다른 예는 다음을 포함하나 그에 국한하지 않는다: HERCEPTINTM(트라스투주마브; Genentech), MYLOTARGTM(겜누주마브 도조가미신; Wyeth Pharmaceuticals), CAMPATHTM(알렘투주마브; Berlex), ZEVALINTM(이프리투모마브 티욱세탄; Biogen Idee), BEXXARTM(토시투모마브; Glaxo SmithKline Corixa), ERBITUXTM(세툭시마브; Imclone), 및 AVASTINTM(베바시주마브; Genentech).
본원에 기술된 항-CD 19 면역요법은 FcγI, FcγIIA, FcγIIB, FcγIII 및/또는 FcγIV로 이루어진 그룹 중에서 선택된 Fc 수용체에 대해 특이적인 항체와 병용하여 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 기술된 항-CD 19 면역요법은 FcγIIB에 대해 특이적인 항체와 병용하여 투여될 수 있다. 이러한 목적에 적합한 항-FcγIIB 항체는 미국 특허출원 공보 제2004185045호, PCT 공보 WO05051999A, WO05018669 및 WO04016750에 기술되어 있다.
어떤 구체예에서, 항-CD19 및 항-CD20 및/또는 항-CD22 mAb 및/또는 항-CD52 mAb는 임의의 적합한 비로, 임의의 동일한 약제학적 조성물로 투여될 수 있다. 설명하기 위해, 항-CD19 및 항-CD20 항체의 비는 약 1000:1, 500:1, 250:1, 100:1, 90:1, 80:1, 70:1, 60;l, 50:1, 40:1, 30:1. 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1,9:1,8:1,7:1,6:1,5:1,4:1,3:1,2:1, 1:1, 1:2, 1:3,1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, 1:60, 1:70, 1:80, 1 :90. 1:100, 1 :250, 1 :500 또는 1:1000 이상의 비일 수 있다. 마찬가지로, 항-CD19 및 항-CD22 항체의 비는 약 1000:1, 500:1, 250:1, 100:1, 90:1, 80:1, 70:1, 60; 1, 50:1, 40:1, 30:1. 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1,9:1,8:1,7:1,6:1,5:1,4:1,3:1,2:1, 1:1, 1:2, 1:3,1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, 1:60, 1:70, 1:80, 1:90. 1:100, 1:250, 1:500 또는 1:1000 이상의 비일 수 있다. 유사하게, 항-CD19 및 항-CD52 항체의 비는 약 1000:1, 500:1, 250:1, 100:1, 90:1, 80:1, 70:1, 60;l, 50:1, 40:1, 30:1. 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1,9:1,8:1,7:1,6:1, 5:1,4:1,3:1,2:1, 1:1, 1:2, 1:3,1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, 1:60, 1:70, 1:80, 1:90. 1:100, 1:250, 1:500 또는 1:1000 이상의 비일 수 있다.
6.25. 단핵구 또는 대식구 기능을 향상시키는 병용 화합물
본 발명의 방법의 특정 구체예들에서, 단핵구 또는 대식구 기능을 향상(예를 들면, 적어도 약 25%, 50%, 75%, 85%, 90%, 95% 이상)시키는 화합물을 항-CD19 면역요법과 병용하여 사용할 수 있다. 이러한 화합물은 당해 분야에 공지되어 있으며, 국한되지 않고, 인터류킨(예: IL-2) 및 인터페론(예: 알파 또는 감마 인터페론)과 같은 사이토킨을 포함한다.
단핵구 또는 대식구 기능을 증진시키는 화합물을 항체, 면역접합체 또는 항원-결합 단편과 동일한 약제학적 조성물 속에 제형화할 수 있다. 별도로 투여하는 경우, 항체/단편 및 화합물은 동시에(각각 서로 수 시간의 기간내에) 투여할 수 있거나, 동일한 요법 과정 동안 투여할 수 있거나, 연속적으로(즉, 환자가 우선 항체/단편 치료의 과정을 받은 후 대식구/단핵구 기능을 향상시키는 화합물의 치료과정을 받음 또는 이와 반대의 순서로 받음) 투여할 수 있다. 이러한 구체예들에서, 단핵구 또는 대식구 기능을 향상시키는 화합물은 사랑 피험체에게 다른 치료학적 요법 및/또는 본 발명의 화합물을 사용한 치료 전, 동시 또는 후속적으로 투여된다. 일 구체예에서, 인간 피험체는 인간에 대해 정상 범위내에 있는 혈액 백혈구, 단핵구, 호중구, 림프구 및/또는 호염구 수를 가진다. 인간 혈액 백혈구에 대한 정상 범위(총)는 약 3.5 내지 약 10.5(109/L)이다. 인간 혈액 호중구에 대한 정상 범위는 약 1.7 내지 약 7.0 (109/L)이고, 단핵구는 약 0.3 내지 약 0.9 (109/L)이며, 림프구는 약 0.9 내지 약 2.9(109/L)이고, 호염구는 약 0 내지 약 0.3 (109/L)이며, 호산구는 약 0.05 내지 약 0.5 (109/L)이다. 다른 구체예들에서, 인간 피험체는 인간에 대해 정상 범위 미만인 혈액 백혈구 수, 예를 들면, 적어도 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 또는 0.8 (109/L)의 백혈구를 갖는다.
본 발명의 이러한 구체예는 본 발명의 항체, 면역접합체 또는 항체 단편을 사용하거나 당해 분야에 공지된 다른 항체를 사용하여 실시할 수 있으며, 항-CD22, 항-CD52 및/또는 항-CD20 항체 요법(예를 들면, C2B8과 같은 존재하는 항체를 사용한 요법)에 대해 내성인 피험체, 현재 화학요법으로 치료중이거나 이미 치료한 피험체, B 세포 질환이 재발된 피험체, 면역절충된 피험체, 또는 또한 대식구 또는 단핵구 기능에 있어 손상된 피험체에 특히 적합하다. 요법에 대해 내성이거나 B 세포 질환에 있어 재발된 피험체의 유병률은 적어도 부분적으로는 대식구 또는 단핵구 기능에 있어 손상에 기여할 수 있다. 따라서, 본 발명은 항-CD19 항체 및 항원-결합 단편을 투여하는 방법과 병용하여 사용될 ADCC 및/또는 대식구 및/또는 단핵구 기능을 향상시키는 방법을 제공한다.
6.26. 면역조절제와의 병용
본 발명의 항-CD 19 면역요법은 또한 면역조절제와 병용하여 사용할 수 있다. 이러한 시도에서, 키메라성, 인간 또는 인간화된 항-CD 19 항체를 사용할 수 있다. 병용 요법에 대해 본원에 사용된 것으로서 용어 "면역조절제"는 숙주의 면역계를 억제하거나, 차폐하거나 향상시키는 작용을 하는 물질을 말한다. 이는 사이토킨 생산을 억제하거나, 자가-항원 발현을 하향조절하고나 억제하거나, MHC 항원을 차폐하는 물질을 포함한다. 이러한 제제의 예는 다음을 포함한다: 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘(참조: 미국 특허 4,665,077), 아자티오프린(또는 사이클로포스파미드, 아자티오프린에 대한 부작용이 존재하는 경우); 브로모크립틴; 글루타르알데하이드(미국 특허 4,120,649에 기술된 바와 같은 MHC 항원을 차폐하는 것); MHC 항원 및 MHC 단편에 대한 항-이디오타입 항체; 사이클로스포린 A; 글루코코르티코스테로이드와 같은 스테로이드, 예, 프레드니손, 메틸프레드니솔론 및 덱사메타손; 사이토킨 또는 항-인터페론-γ, -β, 또는 -α 항체를 포함하는 사이토킨 수용체 길항제; 항-종양 괴사 인자-α 항체; 항-종양 괴사 인자-β 항체; 항-인터루킨-2 항체 및 항-IL-2 수용체 항체; 항-L3T4 항체; 이종 항-림프구 글로불린; 판-T 항체, 예, 항-CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; LFA-3 결합 도메인(1990년 7월 26일 공개된 WO 90/08187); 스트렙토키나제; TGF-β; 스트렙토도르나제; 숙주로부터의 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443; 데옥시스페르구알린; 라파마이신; T-세포 수용체(미국 특허 5,114,721); T-세포 수용체 단편[참조: Offner et al, Science 251 :430-432 (1991); WO 90/11294; 및 WO 91/01133]; 및 T-세포 수용체 항체(EP 340,109), 예, T10B9. 사이토킨의 예는 림포킨, 모노킨, 및 전통적인 폴리펩타이드 호르몬을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 사이토킨에는 다음이 포함되나 그에 국한되지 않는다: 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬과 같은 성장 호르몬; 파라티로이드 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예, 소포 자극 호르몬(FSH), 갑상샘 자극 호르몬(TSH), 및 황체 호르몬(LH); 간 성장 인자; 섬유모세포 성장 인자; 프롤락틴; 태판 락토겐; 종양 괴사 인자-α; 물레리안-억제 물질; 마우스 고나도프로핀-관련 펩타이드; 인히빈; 악티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이오틴(TPO); 신경 성장 인자, 예, NGF-α; 혈소판 성장 인자; 형질전환 성장 인자(TGF), 예, TGF-α및 TGF-α; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(EPO); 골유도 인자; 인터페론; 콜로니 자극 인자(CSF), 예, 대식구-CSF(M-CSF); 과립구-대식구-CgP(GM-CSP); 및 과립구-CSF(G-CSF); 인터루킨(IL), 예, IL-I, IL-Ia, IL-2, 1L-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-I I, IL-12, IL-15; 종양 괴사 인자, 예, TNF-α 또는 TNF-β; 및 다른 폴리펩타이드 인자, 예, LIF 및 키트 리간드(KL). 본원에 사용된 것으로서, 용어 사이토킨은 천연 공급원으로부터 또는 재조합체 세포 배양물로부터 유래된 단백질 및 천연 서열 사이토킨의 생물학적으로 활성인 등량체를 포함한다. 특정 구체예들에서, 이러한 방법은 또한 피험체에게 하나 이상의 면역조절제, 예를 들면, 사이토킨을 투여함을 포함한다. 적합한 사이토킨은 인터루킨-1(IL-I), IL-2, IL-3, IL-12, IL-15, IL-18, G-CSF, GM-CSF, 트롬보포이에틴 및 γ인터페론으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.
이들 면역조절제는 항-CD 19 항체로부터 동시에 또는 별도로 투여된다. 바람직한 면역조절제는 치료되는 질환의 유형, 및 환자의 병력을 포함하는 많은 인자에 의존할 것이나, 제제는 흔히 사이클로스포린 A, 글루코코르티코스테로이드(예를 들면, 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론), OKT-3 단클론 항체, 아자티오프린, 브로모크립틴, 이종 항-림프구 글로불린 또는 이의 혼합물 중에서 선택될 수 있다.
6.27. 다른 치료제와의 병용
종양 신생혈관구조에 작용하는 제제는 항-CD 19 면역요법과 함께 사용될 수 있으며 투불린-결합제, 예를 들면, 콤브레스타틴 A4[참조: Griggs et al., Lancet Oncol. 2:82, (2001)] 및 안지오스타틴 및 엔도스타틴[참조: 참조함으로써 본원에 그 전문이 통합된 문헌: Rosen, Oncologist 5:20 (2000)]을 포함한다. 항-CD 19 항체와 함께 사용하기에 적합한 면역조절제는 α-인터페론, γ-인터페론, 및 종양 괴사 인자(TNFα)를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법을 사용하는 병용 요법에 사용된 치료제는 펩타이드이다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 하나 이상의 칼케아미신 분자와 함께 존재한다. 항생제의 칼리케아미신 계열은 피코몰 이하의 농도에서 이본쇄 DNA 파손(break)을 생산할 수 있다. 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조적 유사체는 γ11, γ21, γ31, N-아세틸-γ11, PSAG 및 011을 포함하나, 이에 국한되지 않는다[참조: Hinman et al, Cancer Research 53:3336-3342 (1993) and Lode et al, Cancer Research 58: 2925-2928 (1998)].
항-CD 19 항체 및 세포독성제를 포함하는 융합 단백질은 예를 들면, 재조합 기술 또는 펩타이드 합성법으로 조제할 수 있다.
하지만 또 다른 구체예에서, 항-CD 19 항체는, 길항제-수용체 접합체가 환자에 투여된 후 정화제(clearing agent)를 사용하여 순환으로부터 결합되지 않은 접합체를 제거한 후 치료제(예를 들면, 방사뉴클레오타이드)에 접합된 "리간드"(예를 들면, 아비딘)을 투여하는 종양 예비표적화시 사용하기 위해 "수용체"(예를 들면, 스트렙토아비딘)에 접합될 수 있다.
특정 구체예들에서, 치료 요법은 항-CD 19 항체 조성물의 세포독성 효과를 완화시키는 화합물을 포함한다. 이러한 화합물은 진통제(예를 들면, 아세트아미노펜), 비스포스포네이트, 항히스타민(예를 들면, 클로르페니라민 말레이트) 및 스테로이드(예를 들면, 덱사메타손, 레티노이드, 델토이드, 베타메타손, 코르티솔, 코르티손, 프레드니손, 데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 에스트로겐, 테스토스테론, 프로게스틴)을 포함한다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법과 함께 사용된 치료제는 소 분자(즉, 분자량이 약 2500 달톤 미만인 무기 또는 유기 화합물)이다. 예를 들면, 소 분자의 라이브러리는 제조업자[Specs and BioSpecs B.V.(Rijswijk, The Netherlands), Chembridge Corporation(San Diego, CA), Comgenex USA Inc.(Princeton, NJ), 및 Maybridge Chemicals Ltd.(Cornwall PL34 OHW, United Kingdom)]로부터 상업적으로 입수할 수 있다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 항-세균제와 병용하여 투여될 수 있다. 항-세균제의 비-제한적 예는 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드, 융합 단백질, 항체, 핵산 분자, 유기 분자, 무기 분자 및, 세균 감염을 억제하고/하거나 감소시키거나, 세균의 복제를 억제하고/하거나 감소시키거나, 또는 다른 세포 또는 피험체에게로 세균의 확산을 억제하고/하거나 감소시키는 소 분자를 포함한다. 항-세균제의 특정 예는 페니실린, 세팔로스포린, 이미페넴, 악스트레오남, 반코마이신, 사이클로세린, 바시크라신, 클로람페니콜, 에리트로마이신, 클린다마이신, 테트라사이클린, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 젠타마이신, 아미카신, 가나마이신, 네오마이신, 스펙티노마이신, 트리메토프림, 노르플록사신, 리팜핀, 폴리믹신, 암포테리신 B, 니스타틴, 케토카나졸, 이노니아지드, 메트로니다졸 및 펜트아미딘과 같은 항셍제를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 항-진균제와 병용하여 투여될 수 있다. 항-진균제의 특정 예는 다음을 포함하나 그에 국한하지 않는다: 아졸 약물[예: 미코나졸, 케토코나졸(NIZORAL), 카스포푼긴 아세테이트(CANCIDAS®), 이미다졸, 트리아졸(예: 플루코나졸(DIFLUCAN®), 및 이타코나졸(SPORANOX®, 폴리엔(예: 나이스타틴, 암포테리신 B(FUNGIZONE®), 암포테리신 B 지질 복합체("ABLC")(ABELCET®), 암포테리신 B 콜로이드성 분산액("ABCD") (AMPHOTEC®), 리포좀성 암포테리신 B(AMBISONE®), 요오드화칼륨(KI), 피리미딘(예: 플루사이토신(ANCOBON®), 및 보리코나졸(VFEND®)]. 항-세균 및 항-진균제의 투여는, 환자의 B 세포가 현저히 고갈되는 본 발명의 방법에서 존재할 수 있는 감염성 질병의 효과 또는 확대를 완화시킬 수 있다.
본 발명의 특정 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 위에서 기술한 제제중 하나 이상과 병용 투여되어 본 발명의 조성물의 투여와 동반될 수 있는 독성 부작용을 완화시킬 수 있다. 다른 구체예들에서, 항-CD 19 면역요법은 항체 투여, 화학요법, 독소 또는 약물의 부작용을 완화시키는데 사용하기 위해 당해 분야에 잘 공지된 하나 이상의 제제와 병용하여 투여될 수 있다.
항-CD 19 면역요법이 다발골수종을 치료하기 위해 투여되는 본 발명의 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 고-투여량의 화학요법[멜팔란, 멜팔란/프레드니손(MP), 빈크리스틴/독소루비신/덱사메타손(VAD), 리포솜 독소루비신/빈크리스틴, 덱사메타손(DVd), 사이클로포스파미드, 에토포사이드/덱사메타손/사이타라빈, 시스플라틴(EDAP)], 줄기 세포 이식체[예: 자가 줄기 세포 이식 또는 동종이계 줄기 세포 이식 및/또는 미니-동종이계(비-골수탈격(non-myeloablative) 줄기 세포 이식], 방사선 요법, 스테로이드(예: 코르티코스테로이드, 덱사메타손, 탈리도미드/덱사메타손, 프레드니손, 멜팔란/프레드니손), 지지성 요법(예: 비스포스포네이트, 성장 인자, 항생제, 정맥내 면역글로불린, 저-투여량 방사선 요법 및/또는 정형외과적 중재), THALOMIDTM(탈리도마이드, Celgene), 및/또는 VELCADETM(보르베조미브, Millennium)과 병용하여 또는 이를 사용한 치료 요법에서 투여될 수 있다.
항-CD 19 면역요법이 다른 항체 또는 항체들 및/또는 제제와 병용하여 투여되는 본 발명의 구체예들에서, 추가의 항체 또는 항체들 및/또는 제제들은 본 발명의 항체의 투여과 관련하여 어떠한 순서로도 투여될 수 있다. 예를 들어, 추가의 항체 또는 항체들은 항-CD 19 항체 또는 면역접합체의 투여 전에, 동시에 및/또는 후속적으로 투여될 수 있다. 추가의 항체 또는 항체들은 본 발명의 항체와 동일한 약제학적 조성물 속에 존재하고/하거나 상이한 약제학적 조성물 속에 존재할 수 있다. 본 발명의 항체의 투여량 및 투여 양식 및 추가의 항체 또는 항체들의 투여량은 본원에서 제공되고 당해 분야에 익히 공지된 투여량 및 투여 양식의 어떠한 교시에 따라 동일하거나 상이할 수 있다.
6.28. 키트(kit)
본 발명은 B 세포 악성종양, 또는 B 세포 악성종양에 의해 강화되거나 강화하는 하나 이상의 증상의 예방, 치료, 조절 또는 완화를 위한 본 발명의 조성물이 충전된 하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 팩(pack) 또는 키트를 제공한다.
일 구체예에서, 본 발명의 액체 제형으로 충전된 용기는 사전-충전된 주사기이다. 당해 분야의 숙련가에게 공지된 특정의 사전-충전된 주사기는 본 발명의 액체 제형과 병용하여 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 사전-충전된 주사기는 예를 들면, PCT 공보 WO05032627, WO08094984, WO9945985 및 WO03077976, 미국 특허 US6792743, US5607400, US5893842, US7081107, US7041087, US5989227, US6807797, US6142976 및 US5899889, 미국 공개특허공보 US20070161961A1, US2005007561 IAl, US20070092487A1, US20040267194A1 및 US20060129108A1에 기술되어 있으나, 이에 국한되지 않는다. 사전-충전된 주사기는 각종 재질로 제조될 수 있다. 일 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 유리 주사기이다. 또 다른 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 플라스틱 주사기이다. 당해 분야의 숙련가는, 주사기를 제조하는데 사용된 재질의 특성 및/또는 품질이 주사기 내에 저장된 단백질 제형의 안정성에 영향을 미칠 수 있음을 이해한다. 예를 들면, 주사기 약실(syringe chamber)의 내부 표면에 침착된 규소계 윤활제는 단백질 제형내 입자 형성에 영향을 미칠 수 있음이 이해된다. 일 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 실리콘계 윤활제를 포함한다. 일 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 베이킹된 실리콘을 포함한다. 또 다른 구체예에에서, 사전-충전된 주사기는 실리콘계 윤활제를 포함하지 않는다. 당해 분야의 숙련가는 또한, 주사기 통, 주사기 팁 캡(tip cap), 플런저(plunger) 또는 스토퍼(stopper)로부터 제형내로 누출되는 소량의 오염물이 제형의 안정성에 영향을 미칠 수 있음을 이해한다. 예를 들어, 제조 과정 중에 유입된 텅스텐은 제형 안정성에 역으로 영향을 미칠 수 있음이 이해된다. 일 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 500 ppb 초과 수준의 텅스텐을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 저 텅스텐 주사기이다. 또 다른 구체예에서, 사전-충전된 주사기는 약 500 ppb 내지 약 10 ppb, 약 400 ppb 내지 약 10 ppb, 약 300 ppb 내지 약 10 ppb, 약 200 ppb 내지 약 10 ppb, 약 100 ppb 내지 약 10 ppb, 약 50 ppb 내지 약 10 ppb, 약 25 ppb 내지 약 10 ppb 수준의 텅스텐을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 주사기는 무텅스텐 주사기일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 주사기는 무텅스텐 "울트라-100" 주사기이다. 또 다른 구체예에서, 주사기는 ClearjectTM(Geresheimer, AG, Germany) 또는 InJentleTM(SCHOTT Pharmaceutical Packaging, Germany) 주사기이다.
본 발명은 상술한 방법에 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 일 구체예에서, 키트는 본 발명의 조성물을 하나 이상의 용기 속에 포함한다. 또 다른 구체예에서, 키트는 하나 이상의 용기 속에 본 발명의 조성물, 및 하나 이상의 다른 용기 속에 B 세포 악성종양, 또는 B 세포 악성종양에 의해 강화되거나 강화하는 이의 하나 이상의 증상의 예방, 조절 또는 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제를 포함한다. 키트는 또한 B 세포 악성종양을 예방하거나, 치료하거나, 조절하거나 완화시키기 위한 지침, 및 투여 방법에 대한 용량 정보 및 부작용을 또한 포함한다. 선택적으로 이러한 용기(들)와 관련된 것은 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 규정한 형태의 고지서일 수 있으며, ㅇ이 고지서는 제조 기관의 승인, 인간 투여용 용도 또는 판매를 반영한다.
7. 실시예
본 발명은 이제 하기 실시예를 참조하여 기술한다. 이들 실시예는 설명의 목적을 위해서만 제공되며 본 발명이 이들 실시예에 국한되어서는 안 되며 오히려 본원에 제공된 교시 내용의 결과로서 입증되는 어느 및 모든 변형을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
7.1. 제형 개발
하기 항은 항-인간 CD 19 항체를 포함하는 제형의 개발을 기술한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 제공된 실험 결과는 서열 104의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 서열 111의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및, 푸코스가 당 쇄내 환원 말단에서 N-아세틸글루토사민에 결합하지 않는 복합체 N-글리코사이드-연결된 당 쇄를 갖는 Fc 영역을 포함하는 16C4 항-인간 CD 19 항체를 사용하여 생성하였다(참조: 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허출원 11/852,106, 참조함으로써 그 기재 내용의 전문이 모든 목적상 본원에 통합된다.)
7.1.1. 인간화된 항-CD19 항체의 작제, 발현 및 결합 특징
인간화된 아푸코실화된 항-CD 19 항체, 예를 들면, 16C4-aFuc(또한 551 항체로 언급됨)의 작제, 발현 및 특징 나타내기는 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허출원 제11/852,106호에 기술되었다.
7.1.2. 실험 방법
정제된 항-인간 CD 19 항체를 본원에 기술된 다음의 표준 산업 등급 프로토콜에 따라 생성할 수 있다. 단백질 농도는 280nm에서 광학 밀도 측정으로부터 평가할 수 있다.
정제된 항-인간 CD 19 항체를 Planova 2ON 필터를 사용하여 나노여과함으로써 입상 물질을 제거한다. 항-인간 CD 19 항체 제형을 접선 유동 여과(Tangential Flow Filtration: TFF)를 사용하여 조제한다. 나노여과된 항-인간 CD 19 항체를 밀리포어 랩스케일 TFF 장치 상에서 대략 25 mg/ml로 농축시킨다. 항-인간 CD 19 항체를 이후에 적절한 완충액(예: 10 mM 히스티딘-HCL (pH 6.0), 75 mM NaCl)내로 5x 여과작용(정용여과)시킨다. 완충액 교환이 완료되면, 항체를 대략 150 mg/ml로 추가로 농축시킬 수 있다. 항체 제제를 적절히 농축된 원액에 첨가함으로써 부형제가 도입된다. 예를 들면, 트레할로스의 4% 최종 농도는 11 ml의 10 mM 히스티딘-HCl, 75 mM NaCl, 40% 트레할로스(pH 6.0)를 매 100ml의 항체 제제에 가하여 달성한다. 다수의 부형제를 연속 단계로 도입할 수 있다. 예를 들면, 0.02% 폴리소르베이트 80의 최종 농도는, 트레할로스의 첨가 후에, 10 mM 히스티딘-HCl (pH 6.0), 75 mM NaCl, 4% 트레할로스, 2% 폴리소르베이트 80 스톡 용액을 항체 제제를 함유하는 트레할로스로 100배 희석시킴으로써 도입시킬 수 있다. 최종 항체 농도는 최종 제형 완충액(예: 10 mM 히스티딘-HCl (pH 6.0), 75 mM NaCl, 4% 트레할로스)을 사용하여 바람직한 수준(예를 들면, 10 mg/ml)으로 조절한다.
다음 항은 액체 항체 제형, 예를 들면, 멸균 수용액 중 10 mM 히스티딘(pH 6.0), 75 mM NaCl, 4% 트레할로스 중 10 mg/ml의 항-CD 19 항체를 함유하는 제형의 특징을 나타내기 위해 사용될 수 있는 방법을 기술한다.
제형 안정성은 연장된 기간 동안 저장된 단일 투여량 분취량의 물리적 특성을 분석함으로써 시험한다. 일부 분취량을 임상 저장(5℃)용으로 추천된 온도하에서 저장한다. 다른 분취량은 승온(25℃ 또는 40℃)하에서 저장하여 매우 장기간 저장의 효과를 시뮬레이션한다. 시험 분취량은 바이알((예: 유리 또는 플라스틱 바이알), 주사기 또는 다른 어떠한 적합한 용기 속에 저장할 수 있다. 시험 분취량은 또한 예를 들면, 진탕, 동결-해동을 포함하나, 이에 국한되지 않는 응력(stress) 조건에 적용시킬 수 있다. 제형의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 추가의 저장 조건은 광 강도, 광 파장, 습도, 바이알 조성물, 및 스토퍼 조성물을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 제형 안정성에 있어서 이들 매개변수의 효과는 또한 본원에 기술된 방법을 사용하여 측정할 수 있다.
역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)를 또한 사용하여 제형내 항체 단편의 양을 측정할 수 있다. RP-HPLC는 아질런트(Agilent) 1100 시리즈 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템을 사용하여 수행한다. 시료를 PLRP-S(8 um, 4000 A, 2.0 x 150 mm) 컬럼(조제원: Michrom Bioresources) 상에서 분석한다. 단백질 용출 프로파일은 280nm에서의 용출물의 광학 밀도에 따라 결정한다. 데이타 분석은 ChemStation(조제원: Agilent) 오토 인티그레이션 매개변수(auto integration parameter)를 사용하여 수행할 수 있다.
7.1.2.1. 크기 배제 크로마토그래피(SEC)
크기 배제 크로마토그래피를 수행하여 항체 응집물 및 단편의 존재에 대한 항체 제형을 분석할 수 있다. 시험 시료를 고 용해 크기 배제 컬럼(예: G3000 SWXL 5μm, 300 A, 7.8 x 300 mm, TosoHaas)상에 주입한다. 이동 상은 0.1M 인산이나트륨, 0.1 M 황산나트륨 및 0.05 % 나트륨 아지드(pH 6.7)이고 0.25 - 1.0 mL/분의 유동 속도에서 동용매적으로 이동시킨다. 용출된 단백질은 280 nm에서 UV 흡수에 의해 검출하고 추가 특징을 나타내기 위해 수집할 수 있다. 검출된 특정 단백질 종의 상대량은 초기 제외된 용적 피크를 제외하고 모든 다른 검출된 피크의 총 면역에 대해 비교한 것으로서 생성물 피크의 면적 퍼센트로서 기록한다. 항체 모노머 피크보다 먼저 용출되는 피크는 응집물 퍼센트로 기록하는 반면, 항체 모노머 피크보다 후에 용출되지만 완충제 피크보다 먼저 용출되는 피크는 단편 퍼센트로 기록한다. 유체역학적 반경 및 개개 피크의 분자량은 커플링된 다각 광 산란 검출기를 사용하여 수득할 수 있다.
SEC를 사용하여 항체 응집물 형성 및, 연장된 기간 동안 저장된 제형내 항체 단편화를 모니터링할 수 있다(예: 9개월에 걸쳐 수행된 다중 측정). 제형을 상이한 온도 범위(예: 2-8℃, 20-24℃ 및 38-42℃)에서 저장할 수 있다. 제안된 임상 저장 온도(2-8℃)를 초과하는 온도 범위를 사용하여 9개월을 초과하는 저장의 효과를 시뮬레이션하는 목표로 제형에 응력을 가한다. 단편 및 응집물의 비는 시간에 걸쳐 증가하는 것으로 예측되며; 이러한 증가는 승온에서 가속되는 것으로 여겨진다. 단편화 및 응집 속도가 각각의 온도 범위내에서 일정하다는 발견은, 보다 높은 저장 온도가 가속화된 시간 규모를 정확하게 시뮬레이션함을 나타낼 수 있다.
단편화/응집의 추정된 속도의 대수(log(속도))를 또한 측정할 수 있다. log(속도)가 저장 온도의 역수에 정비례(1/T (K-1)함을 나타내는 발견은, 시험자가 특정 온도에서 제형의 응집/단편화의 속도, 또는 보다 중요하게는, 제공된 온도에서의 특정 시점에 제형 특성을 예측하도록 할 수 있다.
응집물 및 단편에 상응하는 크로마토그래피 피크가 각각 서로 또는 모노머 피크(예: 응집물/단편의 낮은 상대적 수준)로부터 충분히 명백하지 않은 상황에서, SEC는 단편화/응집화의 정확한 척도로서 제공하지 않을 수 있다.
대안적으로, SEC를 아질런트 1100 시리즈 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템을 사용하여 다음과 같이 수행할 수 있다. 시료를 10 mg/ml로 희석시킨다. 250㎍ 단백질을 함유하는 25μl의 희석된 시료를 TSK-GeI 3000 컬럼(크기 7.8 mm x 30.0cm.; Tosoh Biosciences Corporation) 상에 주입한다. 단백질 용출 프로파일을 280nm에서 용출물의 광학 밀도에 따라 측정한다. 데이타 분석은 ChemStation(Agilent) 오토 인티그레이션 매개변수를 사용하여 수행할 수 있다.
7.1.2.2. 분석적 한외원심분리
분석학적 한외원심분리(AUC)를 또한 사용하여 항체 응집물 및 단편의 존재에 대해 항체 제형의 특징을 나타낼 수 있다. AUC는 액체 시료내 거대분자의 침강 계수(Svedberg가 보고함, S)를 측정하는 직교 기술이다. SEC와 유사하게, AUC는 모노머로부터 항체 단편/응집물을 분리하고 검출할 수 있으며 또한 분자 질량에 대한서 정보를 제공할 수 있다. SEC와 비교하여, AUC는 고체상-상호작용으로 인하여 응집물 손실 가능성을 제거하며 제공된 거대분자의 차별화 종을 보다 잘 분석할 수 있다.
침강 속도 실험은 분석적 한외원심분리, 예를 들면, Beckman Optima XL-A를 사용하여 수행할 수 있다. 시험 시료를 참조 완충액(예: 20 mM 시트르산, 100 mM NaCl, 1.5% 만니톨, 50μM 디에틸렌트리아민-펜타아세트산, 0.02% 폴리소르베이트 80, pH 6.0)를 사용하여 0.5 mg/ml의 항체 농도로 희석한다. 415 μl의 희석된 항체 시료 및 412μl의 참조 완충액을 각각 시료 및 참조 채널 속에서 12 mm 원심분리 셀내로 각각에서 로딩한다. 로딩된 세포를 AN-50Ti 분석 로터(analytical rotor)에 두고 25℃로 평형화시킨다. 시료를 280nm에서 42000 rpm의 회전 속도를 사용하여 완전한 진공에서 스캐닝한다. 각각의 셀에 대해 총 80개 스캔을 분석을 위해 수집한다. 각각의 시료에 대한 제1 스캔을 다운스트림 데이타 프로세싱으로부터 배제시켜 메니스커스(meniscus)에 의해 유발된 가공물을 피한다.
데이타를 Peter Shuck이 개발한 c(s) 방법을 사용하여 N.I.H. 및 SEDFIT(버젼 8.8) 프로그램에서 시행된 c(s)로 분석한다. c(s) 방법을 사용하여, 미처리 데이타 스캔(raw data scan)을 직접 S의 람 함수(Lamm function)에 피팅(fitting)시켜 침강 계수의 분포를 구한다. 피팅 방법에 사용된 매개변수는 분석(resolution), 400; 신뢰 구간, 0.75; 격자 크기, 1000; 부분 특이적인 용적, 0.7245; 완충액 밀도, 1.000; 및 완충액 속도, 0.1002이다. 마찰 비, 메니스커스 및 하단 위치를 피팅된 매개변수로서 설정한다. 시간 의존적인 노이즈를 또한 핏팅한다. 검출된 피크를 통합하여 다음과 같이 분류한다: 0 내지 6 S, 단편; 6 내지 9 S, 모노머; 및 9 내지 20 S, 응집물.
AUC를 사용하여 낮은 상대적인 수준의 응집 및 단편화를 사용하여 항체 제형을 특징을 기술할 수 있다. AUC는 SEC 피크의 분석능을 초과하는 상황하에서 모노머 종으로부터 항체 단편 및 응집물을 보다 잘 분석할 수 있다. 응집물 피크의 분자량의 AUC 추정치를 또한 이의 조성물의 지시자(예: 이량체 대 고 다중체)로 사용할 수 있다.
SEC와 비교하여, AUC는 또한 제공된 거대분자의 상이한 종을 보다 잘 분석할 수 있다. 그러나, AUC의 노이즈/시그날 비는 시료내 항체 농도에 의존하므로, 우선 적절한 시료 희석률을 확증하는 것이 필수적이다.
7.1.2.3. 혼탁도 측정
항체 제형내 단백질 응집의 특징을 또한 혹탁도 측정으로 기술할 수 있다. 혼탁도는 용액내 입자가 광을 산란하는 양의 척도이므로, 단백질 응집 또는 변성의 일반적인 지시자로서 사용될 수 있다. 상승된 혼탁도는 보다 높은 수준의 응집 또는 증가된 수/증가된 크기의 입자를 나타낼 수 있다.
혼탁도 측정은 탁도계(예: 2100AN 또는 2100N, Hatch)를 사용하여 제조업자의 지시에 따라 수행할 수 있다. 대략 3 내지 4 ml의 제형 시료를 유리 시험관내로 옮기고 2분 동안 인-라인 진공 시스템을 사용하여 탈기시킨다. 탈기된 시료를 이어서 탁도계(예: 2100AN 또는 2100N, Hatch) 시료 구획 내로 실온에서 분석을 위해 위치시킨다. 탁도계를 STABLCAL® 안정화된 포르마진 혼탁도 표준(Hatch)을 사용하여 40, 200, 1000 및 4000 NTU(혼탁분석 혼탁도 단위)에서 계산하고 3, 6, 18, 30 및 60 NTU에서 포르마진의 대조군 현탁액을 분석함으로써 입증한다.
7.1.2.4. 입자 수
특정 제형내 입자의 수 및 크기를 입자 계수기(예: Beckman Coulter Multisizer 3)를 사용하여 제조업자 지시에 따라 측정할 수 있다.
7.1.2.5. 점도 프로파일
항체 제형의 점도를 점도계(예: ViscoLab Piston(0.3055", 1-20 cP)이 장착된 Cambridge Applied Systems으로부터 입수한 ViscoLab 4000 점도계 시스템)을 사용하여 측정할 수 있다. 점도계는 적절한 표준물(예: Koehler Instrument Company, Inc.로부터 입수한 S6S 참조 표준물)을 사용하기 전에 교정한다. 점도계를 수욕(water bath)에 연결하여 시스템을 20℃로 평형화한다. 피스톤을 S6S 점도 참조 표준물(20.00℃에서 8.530 cP)을 사용하여 체크한다. 피스톤을 또한 RODI H2O(20.0℃에서 1.00 cP)를 사용하여 체크한다. 피스톤을 세척하고 비누 및 물로 각각의 상이한 용액 유형의 측정 사이에 완벽하게 세정한다. 후속적으로, 시스템을 2℃ 미만으로 냉각시킨다. 시스템 온도가 2℃ 이하로 되면, 시료를 약실내로 장전하고 피스톤을 시료 내로 낮춘다. 시료를 약실의 온도로 평형화한 후, 측정을 개시한다. 온도를 매 7 내지 10분마다 1℃ 증분으로 25℃ 초과의 최종 온도로 증가시킨다. 점도 결과를 온도를 증가시키기 직전에 기록한다. 피스톤은 측정 동안 운동상태로 두어 재-평형화에 대한 요구를 최소화한다. 류량계(Rheometer)를 사용하여 제형의 점도를 측정할 수 있다.
7.1.2.6. 시차 주사 열량계
시차 주사 열량계(DSC)를 사용하여 특정 제형내 항체의 열 안정성에 있어서 시간에 걸친 변화를 확인할 수 있다. 열 용융 온도(Tm)는 시차 주사 열량계(예: MicroCal, LLC로부터 입수한 VP-DSC)를 사용하여 제조업자의 지시에 따라 측정한다. 하나의 예에서, VP-DSC를 1.0℃/분의 주사 속도 및 25 내지 120℃의 온도 범위에서 사용한다. 8초의 여과 주기를 5분 사전-주사 온도조절과 함께 사용한다. 시료를 투석에 의해 20 mM 히스티딘-HCl, pH 6내로 피어스 투석 컵(Pierce dialysis cup)(3.5 kD)을 사용하여 조제한다. 평균 Mab 농도는 A2so-로 측정한 것으로서 500㎍/mL이다. 용융 온도는 시스템과 함께 제공된 소프트웨어를 사용하여 제조업자의 지시에 따라 측정한다.
7.1.2.7. 액체 크로마토그래피 질량 분광계 (LC-MS)
액체 크로마토그래피 질량 분광계(LC-MS)를 사용하여 항체 제형내 SEC 또는 AUC에 의해 검출된 분해 단편의 특징을 나타낼 수 있다.
분해 단편을 함유하는 피크 SEC 컬럼 분획을 수집하고 PNGase F로서 또한 공지된 N-글리코시다제 F를 사용하여 37℃에서 밤새 분해하였다. PNGase F는 단백질 시료를 탈글리코실화하는데 사용된 아미다제이다. 효소는 N-연결된 당단백질상의 고 만노스, 하이브리드 및 착체 올리고사카라이드의 가장 안쪽의 GIcNAc와 아르기닌 잔기 사이를 분해한다. 탈글리코실화된 시료를 환원 완충액(예: 2.5 mg/mL DTT, 6.0 M 구아니딘 HCl, pH 8.2)과 혼합하고 56℃로 수 욕 속에서 60분 동안 유지시킨다. 이후에, 순수한 4-비닐피리딘(예: Aldrich Chem. Co., WI)을 시료에 가하고 반응 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 유지한다. 탈글리코실화되고, 환원되고 알킬화된 시료를 즉시 역상 컬럼상에 로딩하여 반응물로부터 변형된 시료를 분리한다.
탈글리코실화되고, 환원되며, 알킬화된 시료를 역상 컬럼(예: Jupiter 5μm C4, 300 A, 250 x 2.00 mm, Phenomenex)을 사용하여 이원 구배 HPLC 시스템(Agilent 1100)으로 분획화한다. 이동상 A는 수중 30% 아세토니트릴과 0.1% 트리플루오로아세트산으로 이루어지고 이동상 B는 수중 50% 아세토니트릴과 0.1% 트리플루오로아세트산으로 이루어진다. 시료를 수중 30 내지 50% 아세토니트릴의 선형 구배를 사용하여 16분에 걸쳐서 대략 200μL/분의 유동 속도로 분리한다. 컬럼 유출물을 UV 검출기로 지시하고 1:1로 나누어, 1/2을 이온 트랩 질량 분광계(Ion Trap mass spectrometer)(예: LTQ, ThermoElectro, San Jose, CA) 상에서 스위칭 밸브를 통과시키고 나머지 반은 버린다.
이온 트랩 질량 분광계를 카페인, L-메티오닐-아르기닐-페닐알라닐-알라닌(서열: 239) 아세테이트 H2O, 및 Ultramark 162의 혼합물을 사용하여 실험적 수행 전에 계산한다. 전자분무 이온화 질량 분광법(ESI-MS) 데이타를 양성 ESI 완전한 주사 양식으로 획득한다. 바이오 워크 디콘볼루션 프로그램(Bio Work deconvolution program)(ThermoFinnigan)을 사용하여 질량 스펙트럼을 재구성하고 이들의 원래의 질량 스펙트럼으로부터 펩타이드/단백질의 분자량을 수득할 수 있다. 질량 데이타를 후속적으로 사용하여 분해 단편의 동일성을 측정한다.
7.1.2.8. 결합 친화성 특징 나타내기
장기간 저장(예: 40℃에서 1개월 또는 5℃에서 6개월) 후 제형으로부터 회수된 단클론 항체의 결합 친화성은, 예를 들면, ELISA 검정, 유동 세포분석 검정을 포함하지만, 이에 국한되지 않은 당해 분야에 공지된 특정의 검정으로 측정할 수 있다. 항체의 기능적 특성을 또한 시험관내 및 생체내 검정(예: ADCC 검정, 생체내 고갈 검정)을 사용하여 분석할 수 있다. 항-CD 19 항체의 기능적 특징의 나타내기에 적합한 검정은 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허출원 제11/852,106호에 나와있다.
7.1.3. 제형 개발
551 항체의 물리화학적 특성은 다음과 같이 특징을 나타내었다. 551 항체의 DSC 프로파일을 위에서 기술한 바와 같이 결정하였다. DSC 측정은 20 mM 히스티딘(pH 6.0) 완충액 속에서 0.25 mg/ml 항체 농도에서 수행하였다. 551 항체의 DSC 프로파일은 도 2에 나타내었다.
551 항체의 안정성에 있어서 pH의 효과는 각종 pH에서 온도의 함수로서 콜로이드성 안정성(도 3) 및 트립토판 형광성(도 4)을 측정함으로써 확인하였다. 콜로이드성 안정성 데이타는, 551이 pH 4-5에서 가장 안정할 수 있음을 시사하였다. 551은 시험한 범위내에서 pH 7에서 콜로이드적으로 가장 불안정하였다.
각종 온도에서 551의 콜로이드성 탈안정화율을 평가하여 고 처리 부형제 스크리닝에 대한 최적 온도를 선택하였다. 콜로이드성 탈안정화율은 시간의 함수로서 각종 온도에서 551 제형의 혼탁도(A350 nm)를 측정함으로써 평가하였다. 실험 결과의 대표적인 시료를 도 5에 나타내었다. 이들 결과를 기초로 하여, 68℃를 고 처리 부형제 스크리닝용 온도로서 선택하였다.
고속 대용량 처리 스크린을 사용하여 551 항체를 안정화시키는 잠재력을 가진 부형제를 확인하였다. 대사가능한 대조군 완충액(pH 7.0에서 20 mM 히스티딘)을 551 항체의 pH 민감성을 기초로 하여 스크린에 대해 선택하였다. 부형제는 대조군 완충액 속에서 551의 콜로이드성 안정성을 추가 부형제를 단독으로 또는 함께 포함하는 완충액중 551의 콜로이드성 안정성과 비교함으로써 스크리닝하였다. 콜로이드성 안정성에 있어서의 변화는 각종 시험 제형의 콜로이드성 탈안정화율을 평가함으로써 수반하였다. 안정화 부형제는 탈안정화율을 감소시지는 한편, 탈안정화 부형제는 이를 증가시킨다. 대표적인 결과를 도 6에 나타내었다. 탈안정화율은 염 또는 아미노산의 부재하에서 혼탁도 곡선을 제형의 혼탁도 곡선의 우측으로 이동시킴에 의해 나타낸 바와 같이 NaCl, 라이신, 아르기닌 또는 글리신을 첨가시킴으로써 감소시켰다. 고 처리 부형제 스크린으로부터의 추가의 시료는 도 7 내지 9에 나타내었다. 고 처리 스크린은 551 항체에 대한 안정화 부형제로서 글리신, 아르기닌, 라이신, NaCl, 및 트레할로스를 확인하였다. 스크린은 또한 최적의 안정화가, 이온강도가 1150 mM NaCl의 것과 동일한 제형을 사용하여 달성될 수 있음을 확인하였다. 추가의 실험을 수행하여 551 안정성에 있어서 이들 부형제의 배합의 효과를 추정하였다(도 9). 시험한 병용 외에, 가장 현저한 안정화 효과가 4% 또는 8% 트레할로스와 병용한 150 mM NaCl로 관찰되었다.
부형제 스크린을 기초로 하여, 6개 제형을 40℃에서 실시간 가속화된 안정성에 대해 선택하였다:
A: 20 mM 히스티딘, pH 6
B: 20 mM 히스티딘, 150 mM 글리신, pH 6.0
C: 20 mM 히스티딘, 4% 트레할로스, pH 6.0
D: 20 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, pH 6.0
E: 20 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0
F: 20 mM 히스티딘, 150 mM ArgHCl, pH 6.0
각각의 제형은 15 mg/ml 551 항체를 포함하였다. 항체 응집 및 단편화를 SEC를 사용하여 평가하였다. 실험 결과의 시료는 도 10 내지 12에 나타내었다. 시간에 걸친 보다 높은 차수의 응집물의 작은 증가가 시험한 모든 제형에서 나타났다.
추가의 실시간 안정성 연구를 수행하여 항체 응집에 있어서 항체 농도의 효과를 확인하였다. 10 mg/ml, 20 mg/ml, 40 mg/ml 또는 60 mg/ml 551 및 1OmM 히스티딘 pH 6.0을 포함하는 제형을 5℃ 또는 40℃에서 저장하였다. 연장된 저장 후 항체 응집을 SEC로 측정하였다. 시험 결과의 시료는 도 13 내지 16에 나타내었다. 모노머 농도의 변화는 5℃에서 저장 30일 동안에 관측되지 않았다. 40℃에서 모노머 손실률은 항체 농도 증가와 함께 증가한다. 이량체 형성은 5℃ 보다 40℃에서 더 높았고, 이는 또한 증가된 항체 농도와 함께 증가하였다. 다중체 농도는 5℃에서 30일에 걸쳐 변하지 않았다. 다중체 형성률은 40℃에서 더 높은 항체 농도와 함께 증가하였다. 항체 단편화는 5℃에서 보다는 40℃에서 더 높았으며, 단편화는 또한 항체 농도의 증가와 함께 증가하였다.
추가의 단기 연구를 수행하여 551 제형의 안정성에 있어서 pH 효과를 연구하였다. 상이한 pH에서 측정한 DSC 프로파일(도 17 및 18)은 pH 7.5의 예외를 제외하고는 Tm에 있어서 pH 의존적인 변화가 없다. DSC 프로파일을 20mM 히스티딘 완충액 속에서 0.25 mg/ml 단백질 농도로 측정하였다. 각종 pH(pH 4.0-7.5)를 사용한 제형을 포함하는 응집 연구는, pH 6.5를 제외한 모든 pH에서 다중체 제형을 나타내었다. pH 6.5 제형에 있어서 다중체 형성을 5℃ 및 40℃ 둘다에서 억제하였다. 다른 연구에서, pH 6.0은 또한 응집 및 다중체 형성과 관련하여 pH 6.5에서 유사한 효과를 나타내었다. 최대 다중체 형성률은 pH 4 및 7.5에서 관측되었다. 항체 응집의 pH 의존성을 20 mM 히스티딘중 2.4 mg/ml 551을 포함하는 제형을 사용하여 연구하였다. 따라서, 이를 기초로 하여, 다음의 일련의 연구를 위하여 pH 6.0 및 pH 6.5를 후속 평가에 고려하였다.
1Omg/mL 551 항체를 포함하는 7개의 제형을 5℃, 25℃ 및 40℃에서의 안정성 연구 대상으로 삼았다:
제형 1. 1OmM His, 14OmM NaCl, pH 6.0
제형 2. 1OmM His, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0
제형 3. 1OmM His, 10OmM NaCl, 2% 트레할로스, pH 6.0
제형 4. 1OmM His, 9% 트레할로스, pH 6.0
제형 5. 1OmM His, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.5
제형 6. 1OmM His, 14OmM NaCl, 9% 트레할로스, pH 6.0
제형 7. 1OmM His, 15OmM LysHCl, 4% 트레할로스, pH 6.0
모노머, 다중체 및 총 응집물 농도는 SEC를 사용하여 경시적으로 추적하였다. 결과의 예들은 도 19 내지 21에 나타내었다. 모든 제형은 유사한 안정성을 나타내었다. 2개의 최대 모노머 손실률이 제형 4 및 5에서 관측되었다.
1OmM 히스티딘, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0 및 10 mg/ml 또는 50 mg/ml 551 항체를 포함하는 제형을 5℃, 25℃ 및 40℃에서의 안정성 연구 대상으로 삼았다. 응집 및 단편화를 SEC를 사용하여 추적하였다. 결과는 도 22 내지 24에 나타내었다. 제형내 응집 및 단편화를 요약하는 표는 도 25에 나타내었다.
1OmM 히스티딘, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0 및 10 mg/ml 551 항체를 포함하는 제형을 전단 응력(sheer stress)에 동결-해동의 다수 주기를 사용하여 적용시켰다. 1.7ml의 제형으로 충전된 Nunc 2.0 mL Cryo 바이알을 응력 연구에 사용하였다. 시료를 5회의 동결-해동 주기(-80℃ 내지 25℃, 각각의 주기는 2시간의 동결에 이은 2시간의 실온을 포함한다)에 적용시켰다. 시료를 가시적 검사, SEC 및, 280nm 및 340 nm에서의 흡광도 측정으로 분석하였다. 출발 물질은 일부 다중체를 함유하였으며; 다중체 농도는 연구 과정 동안 모니터링하였다. 가시적 외형 또는 다중체 수준에 있어서 변화는 동결-해동 연구 동안 관측되지 않았다. 결과는 표 3에 요약되었다.
Figure pct00009
1OmM 히스티딘, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0 및 10 mg/ml 551 항체를 포함하는 제형을 기계적 응력에 진탕시킴으로써 적용시켰다. 연구는 또한 0.002%, 0.01%, 및 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형을 포함하였다. 1 ml 제형을 함유하는 4432/50 혈청 스토퍼(Serum Stopper)가 장착된 3ml의 바이알을 기계적 응력 연구에 사용하였다. 시료는 이들을 4시간 동안 볼텍스(VWR Mini Vortexer #945300)에 1로 설정된 속도에서 진탕시킴으로써 기계적 응력에 적용시켰다. 시료를 가시적 검사, SEC 및 280 nm 및, 340 nm에서 흡광도 측정으로 분석하였다. 출발 물질은 일부 다중체를 함유하였으며; 다중체 농도는 연구 동안 모니터링하였다. 결과는 도 26 및 27에 나타내었다. 가시적 외형, 이량체 수준, 다중체 수준 또는 회수에 있어서의 변화는 연구 과정 동안 관측되지 않았다. 551은 폴리소르베이트 80의 존재 또는 부재와 관계없이 바이알내 응집을 유도한 진탕에 민감하지 않다.
1OmM 히스티딘, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0 및 10 mg/ml 551 항체를 포함하는 제형을 10ml의 테루모(terumo) 주사기 속에서 진탕시킴으로써 기계적 응력에 적용시켰다. 연구는 또한 0.002%, 0.01%, 및 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형을 포함하였다. 10 ml의 테루모 주사기를 0.7 ml의 제형으로 7ml의 공기 갭을 남겨두고 7ml의 총 플런저 연장에서 충전시켰다. 시료를 누테이터(nutator)에서 24시간 동안 온화하게 진탕시켰다. 시료를 15분 및 6시간째에 단백광 또는 입자화에 있어서 특정 변화에 대해 가시적으로 검사하였다. 24시간 진탕시킨 후 시료를 가시적 검사, SEC 및 280 nm에서의 흡광도 측정으로 분석하였다. 제형을 주사기내에서 및 바이알내로의 이전 후 둘다에서 가시적 검사에 적용시켰다. 결과는 도 28에 나타내었다. 폴리소르베이트 80을 포함하지 않는 제형은 6시간째에 가시적으로 변화하지 않았으나 24시간의 말기에 단백광이 되었다. 다중체 %에서의 증가가 0.01% 미만의 폴리소르베이트 80을 포함하는 시료에서 관측되었다. 다중체 %에 있어서의 변화는 0.01% 이상의 폴리소르베이트 80을 포함하는 시료에서 나타나지 않않았다.
10 mg/ml 551 항체, 1OmM 히스티딘, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0 및 0% 또는 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형을 25℃ 및 40℃에서 안정성 연구에 투입하였다. 응집 및 다중체 제형을 SEC를 사용하여 조사하였다. 결과는 도 29 및 30에 나타내었다.
6.1.4 제형 안정화 개발
제형은 제형 완충액(FB)[10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 4% (w/v) 트레할로스 디하이드레이트, pH 6.0, 및 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80 (PS-80)의 존재 또는 부재] 속에 변화된 농도의 항-CD 19 항체, 551 (10, 25, 50 및 100 mg/mL)를 갖도록 조제하였다. 제형을 상기 기술된 방법에 따라 조제하여, 추천된 저장 온도에서 저장하고, 가시적 검사로 분석하였다. 표 4에 나타낸 바와 같이, 입자는 PS-80을 포함하고, 더 높은 농도의 항-CD 19 항체를 지니는 것들을 포함하는 제형들 중의 어느 것에서도 관찰되지 않았다. 그러나, 입자는 PS-80을 포함하지 않은 제형으로 관찰되었다.
Figure pct00010
FlowCAM 기기장치 및 HIAC 액체 입자 계수기를 사용하여 입자의 수 및 크기를 추가로 분석하여 입자의 특성을 판정하였다. 입자 크기에 있어서 유동 CAM 데이타 및 HIAC 데이타의 결과를 표 5 및 6에 각각 나타내었다.
Figure pct00011
Figure pct00012
10 mg/ml 551 항체, 1OmM 히스티딘, 75mM NaCl, 4% 트레할로스, pH 6.0 및 0% 또는 0.02% 폴리소르베이트 80의 제형을 분석에 추가로 적용하였다. 동결-해동 주기에 적용된 시료는 5X F/T 후의 순도에 있어서 변화를 나타내지 않았음이 밝혀졌다. 또한, 입자화는 VI시 관찰되지 않았다. 시료를 바이알내 응집을 유도한 진탕에 적용시켰으며, 이는, 551이 PS-80의 존재 또는 분재와 상관없이 응집을 유도한 진탕에 민감하지 않음을 나타내었다. 테루모 주사기내 진탕은 AUC에 있어 변화가 없음을 나타낸 반면, PS-80을 함유하지 않는 대조군 시료는 24시간 말기에서 단백광으로 되었다. 다중체의 비율에 있어서의 증가가 PS-80의 부재 및 PS-80 < 0.01%에서의 시료내에서 관찰되었으나, PS-80 > 0.01%을 사용한 시료에서 변화는 관찰되지 않았다.
6.1.5 여과 연구
여과 연구를 수행하여, 여과가 다른 품질 기여에 영향을 미치지 않고 부-가시적 입자 수(sub-visible particle count)를 증가시키는지를 평가하였다. pH 6.0에서 10 mM 히스티딘, 75 mM 염화나트륨, 및 4% (w/v) 트레할로스 디하이드레이트 중의 10 mg/mL 항-CD 19 항체, 551의 제형내 입자를 나타내는 로트(lot)로부터의 시료 바이알을 본 연구에 사용하였다. PS-80(2% 스톡)을 이들 바이알내로 스파이킹하여 0.02%의 최종 농도를 수득하였다. 이후에, 시료를 PS-80의 첨가 전 또는 후에 0.22μm 주사기 PVDF 또는 PEF 필터를 사용하여 여과하였다. 초기 A280 단백질 농도, 고성능 크기-배제 크로마토그래피(HPSEC), VI 및 HIAC 시험을 포함하는 검정을 (여과 전 및 후에) 수행하였다.
제한된 입자 크기 범위 이상으로, 입자화된 현탁액은 종종 멱-법칙 크기 분포(power-law size distribution)(Kavanaugh et ah, 1980)를 나타내며, 여기서, 더 큰 입자의 수(N)는 입자 크기(L)의 멱(β) 함수로서 감소된다.
dN / dL = A x (L)β
이러한 시스템에 대한 입자 수 대 크기의 이중 대수 플롯은 함수의 지수와 동등한 음성 기울기 β와의 선형 관계를 나타내었다(통상적으로, 액체 현탁액의 경우 1.6 - 4.6, 에어로졸의 경우 3.2 - 4.0).
제형의 바이알은 여과 전 -2.5의 멱지수로 멱-법칙 함수에 의해 잘 기술된 입자 크기 분포를 나타내었다(표 7 및 도 36). PVDF 막을 통한 여과는, 1μm 입자에 대한 거의 2차수 크기까지 입자 수를 감소시켰다. 더 작은 입자의 우선 제거는 멱 법칙 분포의 멱지수를 -1.6로 감소시켰다.
PS-80 첨가에 이은 여과의 2-단계 처리는 여과만으로 달성된 것에 비하여 2 내지 3배로 추가 입자 제거를 초래하였다(도 37 및 표 7). 처리 말기에서 (여과만에 의한 -1.6과 비교하여) -2.5 내지 -1.2의 이중-대수적 플롯에 있어서의 기울기의 추가의 감소는, 표면활성제, PS80의 첨가가 보다 작은 크기의 응집물로 입자를 분해할 수 있음을 시사하였다.
다양한 처리 단계의 효과를 더 잘 분해하기 위하여, 후속 여과 및 표면활성제 첨가 단계를 조건으로 하는 제형 시료의 입자 크기 분포의 특징을 나타내었다(도 38 및 표 7). 제1 여과 단계는 앞서 나타낸 바와 같이(도 36), 입자 수(1μm에서)의 -30배 감소 및 -2.5 내지 -1.5의 기울기의 감소를 초래하였다. PS-80을 사용한 추가 처리는, 도 37에서 기술된 것과 유사하게, 멱 법칙 분포의 추가 편평으로, 1μm 입자 수의 4배 감소를 나타내었다. 최종 여과 단계는 더 작은 입자의 수에 유의하게 영향을 미치지 않았으나 더 큰 미립자의 수를 어느 정도 감소시켰고; 총 입자 수에 대한 효과는 이러한 크기 범위의 시료에 있는 낮은 수의 입자 수를 고려하면, 미미할 것이다.
Figure pct00013
초기 A280 및 순도 결과는 예측된 범위내에 있음이 밝혀졌다. 또한, HIAC에 의한 미립자 수에 대한 바이알 대 바이알 가변성이 관측되었고, 이의 결과는 표 7에 반영되었다. PVDF 필터는 1 회의 여과로 PES 필터보다 더 우수한 성능을 발휘하는 것이 밝혀졌지만(데이타는 나타내지 않음), 미립자 수를 감소시키기 위한 2회의 여과는 두개의 필터에 대해 대등하였다. 도 36(PVDF 여과만), 도 37(PVDF 여과에 이은 PS80 첨가), 및 도 38(PVDF 여과 + PS80 첨가 + PVDF 여과)에 나타난 바와 같이, 시료 바이알내 입자는 멱지수적 관계(선형의 이중-대수적 플롯)를 따랐다. 0.22μm PVDF 막을 통한 여과는 1μm 입자 수를 약 100배 이상까지 감소시켰다. 또한, 더 작은 입자가 특히 0.02% PS-80의 첨가로 더 쉽사리 제거되었다. 제1 PVDF 여과 단계는 1μm 입자 수의 약 30배 감소를 나타내는 것으로 밝혀진 반면, PS-80 첨가는 별도로 약 4배까지 입자 제거를 명백히 증가시켰다. 또한, 최종 PVDF 여과 단계는 더 큰 미립자 및 가시성 입자의 수를 오직 감소시키는 것으로 나타났다. 0.22μm PVDF 필터를 사용한 여과가 미립자의 수를 감소시켰다고 결론을 내렸다.
7.2. 다발골수종 치료에서 항-CD19 항체의 사용
다발골수종은 혈장 세포의 악성종양이다. 이는 일반적으로 다발골수종 세포 CD19-CD138+로 이해된다. 그러나, 다수의 골수종 세포의 소 분획은 CD19+CD138- 표현형을 가지고 있다고 인지되어 왔다. CD19+CD138- 세포는 암 줄기 세포로 기능하며 이의 후대가 CD 19-CD 138+ 세포로 성숙한다고 생각되었다.
각종 다발골수종 세포의 CD 19 및 CD 138 발현 프로파일은 표준 프로토콜을 사용하여 유동 세포분석법으로 분석하였다. 그 결과의 대표적인 시료는 표 31에 나타내었다. H929 및 RPMI8226 세포주는 CD 19+CD 138- 및 CD19-CD138+ 세포 각각의 대부분의 동종 집단을 포함한다. 한편, ANBL6 세포주는 2개의 명백한 세포 집단을 포함하며, 이중 하나는 CD 19+CD 138-인 반면, 다른 것은 CD 19- CD138+이다. 2개 집단의 비는 경시적으로 변한다. 도 32에 나타낸 바와 같이, CD 19+CD 138-의 비는 CD 19-CD 138+ 세포의 이용시 경시적으로 증가하였다.
CD 19+CD 138- 및 CD 19-CD 138+ 세포를 ANBL6 배양물로부터 정제하였다. 분리된 세포의 표현형 및 순도를 입증하는 유동 세포분석법 데이타는 도 33에 나타내었다. 정제된 세포를 배지를 함유하는 0.4% 한천에 플레이팅하고, 배양물을 적절한 조건하에서 4 내지 5주 동안 배양하였다. 도 33에 나타낸 바와 같이, 단지 CD19+CD138- 세포만이 이러한 검정에서 콜로니를 형성할 수 있었다.
항-CD 19-aFuc 항체는 분류되지 않는 다발골수종 세포 배양물로부터 CD 19+ 세포를 특이적으로 고갈시킨다. ANBL6, KAS 및 MDA8226 세포의 분류되지 않은 집단을 시험관내 항-CD 19 항체 매개된 ADCC 검정에서 표적으로 사용하였다. ADCC 검정을 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허원 제11/852,106호에 기술된 바와 같이 실질적으로 수행하였다. 분류되지 않은 집단내 CD 19+CD 138- 및 CD 19-CD 138+ 세포의 비는 도 34의 하단에서 표에 나타내었다. 16C4-aFuc 항-CD 19 항체 매개된 ADCC는 집단으로부터 CD 19+ 세포를 특이적으로 제거하였다. 항체 농도의 함수로서 CD 19+ 세포에 있어서의 감소 %는 도 34에 나타내었다. CD 138+ 세포의 총 수는 검정 과정 동안 감소되지 않았다.
다발골수종 세포 증식을 조절하는 551 항체의 능력을 scid 마우스에서 생체내 피하 이종이식 모델에서 확인하였다. 종양 함유 마우스(10의 코호트(cohort))를 5회 투여량의 551, 항-CD20 또는 대조군 항체로 3 mg/kg에서 처리하였다. 항체 처리를 주당 2회 투여하였다. 종양 성장을 표준 측정으로 조사하였다. ANBL-6 세포주를 사용하여 수득된 결과를 도 35에 나타내었다. 551 처리된 동물에 있어서 종양 성장은 대조군 동물의 어느 것에서보다 현저히 낮았다. 551 처리는 ANBL-6 세포에 의한 종양 형성에 있어 80% 감소를 초래하였다. 유사한 결과를 RPMI8226 및 H929 세포를 사용하여 수득하였다. RPMI8226 및 H929 세포에 의한 종양 형성은 551 처리된 동물에서 각각 75% 및 67% 까지 감소하였다. 종양 형성은 또한 항-CD20 항체 처리된 동물에서 감소하였고; 종양 크기에 있어서 44%, 20% 및 83% 감소가 각각 RPMI8226, ANBL-6 및 H929 세포를 지닌 마우스에서 감소되었다.
당해 분야의 숙련가들은 단지 통상의 실험을 사용하여 본원에 기술된 발명의 특정 구체예들들과 동등한 많은 것들을 인지할 것이고, 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 동등한 것들은 하기 특허청구범위에 포함되는 것으로 간주된다.
각종 공보가 본원에 인용되어 있으며, 참조함으로써 이의 기재내용의 전문이 모든 목적을 위해 본원에 통합된다. 또한, 2007년 9월 7일자로 출원된 미국 특허출원 제11/852,106호는 참조함으로써 그 전문이 본원에 통합된다.
서열
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
ATCC PTA-6580 20050211 ATCC PTA-6581 20050211 ATCC PTA-7952 20061026 ATCC PTA-7953 20061026
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Synthetic polypeptide <400> 68 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 69 <400> 69 000 3 <210> 70 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 70 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Lys Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg 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Synthetic polypeptide <400> 108 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asp Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 109 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 109 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 111 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Glu Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 112 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 112 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp His Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Glu Ala Ser Asn Gln Gly Ser 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Synthetic peptide <400> 114 Ser Thr Trp Met Asn 1 5 <210> 115 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 115 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 116 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 116 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Val Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 117 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 117 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 118 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 118 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asp Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 119 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 119 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Leu Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 120 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 120 Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Tyr Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 121 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 121 Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Arg Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 122 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 122 Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val His Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 123 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 123 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe Gly Ile Ser Phe Ile Asn 1 5 10 15 <210> 124 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 124 Arg Ala Ser 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Synthetic polypeptide <400> 192 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Leu Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Val Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 193 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 193 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp His Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Ile Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Glu Ala Ser Asn Pro Tyr Ser 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Synthetic polypeptide <400> 195 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Glu Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Ser Lys 85 90 95 Arg Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 196 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 196 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ile Thr Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Glu Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 222 Ala Gln Ser Lys Glu Val Pro Ile Thr 1 5 <210> 223 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 223 Ala Gln Ser Lys Glu Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 224 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 224 Ala Gln Ser Lys Arg Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 225 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 225 Ala Gln Thr Lys Arg Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 226 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 226 Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Ile Thr 1 5 <210> 227 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 227 Ala Gln Thr Lys Glu Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 228 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 228 Ala Gln Thr Lys Glu Val Pro Asn Thr 1 5 <210> 229 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 229 Gln Gln Thr Lys Arg Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 230 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, Thr or Val <400> 230 Ser Xaa Trp Met Asn 1 5 <210> 231 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Pro or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Asn, Tyr, Asp or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> Gly, Ala or Val <400> 231 Arg Ile Tyr Xaa Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Xaa Xaa Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 232 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Leu, Arg, Tyr or His <400> 232 Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Xaa Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 233 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Asp or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Thr or His <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Ile or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(14) <223> Met, Ile or Arg <400> 233 Arg Ala Ser Glu Ser Val Xaa Xaa Phe Gly Xaa Ser Phe Xaa Asn 1 5 10 15 <210> 234 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Ala or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Gln, Pro or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Gly or Tyr <400> 234 Xaa Ala Ser Asn Xaa Xaa Ser 1 5 <210> 235 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Gln or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Ser or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Glu or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Phe, Ile or Asn <400> 235 Xaa Gln Xaa Lys Xaa Val Pro Xaa Thr 1 5 <210> 236 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 236 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Thr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Val Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 237 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 237 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 238 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 238 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 239 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 239 Met Arg Phe Ala 1

Claims (246)

  1. 키메라, 인간화 또는 인간 항-CD19 항체를 포함하는 멸균의 안정한 수성 제형.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 동결건조가 수행되지 않은 제형.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항체는 IgA, IgE, IgM, IgD, IgY 및 IgG로 이루어진 그룹으로부터 선택된 면역글로불린 타입으로부터 유래하는 제형.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 인간 아이소타입인 제형.
  5. 제1항에 있어서, 상기 항체는 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 여기서, 푸코스(fucose)는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는 제형.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:104의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제형.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:111의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제형.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:104의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:111의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제형.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:104의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 여기서, 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는 제형.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 5 mg/ml, 적어도 약 10 mg/ml, 적어도 약 15 mg/ml, 적어도 약 20 mg/ml, 적어도 약 50 mg/ml, 적어도 약 100 mg/ml, 적어도 약 120 mg/ml, 적어도 약 150 mg/ml, 적어도 약 160 mg/ml, 적어도 약 180 mg/ml, 적어도 약 200 mg/ml, 적어도 약 250 mg/ml, 또는 적어도 약 300 mg/ml인 제형.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 5 mg/ml인 제형.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 10 mg/ml인 제형.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 15 mg/ml인 제형.
  14. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 50 mg/ml인 제형.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 100 mg/ml인 제형
  16. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 5 mg/ml 내지 약 100 mg/ml인 제형.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 5 mg/ml 내지 약 25 mg/ml인 제형.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 하나의 완충 성분을 추가로 포함하는 제형.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 하나의 부형제를 추가로 포함하는 제형.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 완충 성분은 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제형.
  21. 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 완충 성분은 히스티딘인 제형.
  22. 제21항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 1 nM 내지 약 200 nM의 농도인 제형.
  23. 제21항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 1 nM 내지 약 50 nM의 농도인 제형.
  24. 제21항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 5 nM 내지 약 20 nM의 농도인 제형.
  25. 제21항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 10 nM, 약 15 nM 또는 약 20 nM의 농도인 제형.
  26. 제19항에 있어서, 상기 부형제는 당류인 제형.
  27. 제26항에 있어서, 상기 당류는 2당류인 제형.
  28. 제27항에 있어서, 상기 2당류는 트레할로오스 또는 수크로오스인 제형.
  29. 제27항에 있어서, 상기 2당류는 트레할로오스인 제형.
  30. 제29항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 1% 내지 약 40%의 농도인 제형.
  31. 제29항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 2% 내지 약 20%의 농도인 제형.
  32. 제29항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 2% 내지 약 10%의 농도인 제형.
  33. 제29항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 2%, 약 4% 또는 약 8%의 농도인 제형.
  34. 제19항에 있어서, 상기 부형제는 염인 제형.
  35. 제34항에 있어서, 상기 염은 염화나트륨인 제형.
  36. 제35항에 있어서, 상기 염화나트륨은 약 50 mM 내지 약 200 mM의 농도인 제형.
  37. 제35항에 있어서, 상기 염화나트륨은 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 100 mM, 약 120 mM, 또는 약 150 mM의 농도인 제형.
  38. 제19항에 있어서, 상기 부형제는 표면활성제인 제형.
  39. 제38항에 있어서, 상기 표면활성제는 폴리소르베이트인 제형.
  40. 제39항에 있어서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80인 제형.
  41. 제39항에 있어서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80인 제형.
  42. 제41항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.001% 내지 약 2%의 농도인 제형.
  43. 제41항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.04% 또는 약 0.08%의 농도인 제형.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖는 제형.
  45. 제1항 내지 제43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 약 6.0의 pH를 갖는 제형.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 등장인 제형.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 안정한 제형.
  48. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 안정한 제형.
  49. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 안정한 제형.
  50. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  51. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  52. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  53. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  54. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  55. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  56. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  57. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  58. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  59. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 응집, 또는 단편화에 취약한 제형.
  60. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  61. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  62. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  63. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  64. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  65. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 주사가능 제형인 제형.
  67. 제66항에 있어서, 상기 제형은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합한 제형.
  68. 제67항에 있어서, 상기 제형은 정맥내 투여에 적합하고, 항체 또는 항체 단편 농도는 약 5 mg/ml 내지 약 60 mg/ml인 제형.
  69. 제67항에 있어서, 상기 제형은 피하 투여에 적합하고, 항체 또는 항체 단편 농도는 약 5 mg/ml 내지 약 250 mg/ml인 제형.
  70. 제1항 내지 제65항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 에어로졸 투여에 적합한 제형.
  71. 적합한 용기 내에 제1항 내지 제65항 중 어느 하나의 항의 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태.
  72. 제71항에 있어서, 상기 항체 제형은 정맥내로, 피하로, 또는 근육내로 투여되는 약제학적 단위 복용 형태.
  73. 적합한 용기 내에 제1항 내지 제65항 중 어느 하나의 항의 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 에어로졸 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태.
  74. 제73항에 있어서, 상기 항체 제형은 비강내로 투여되는 약제학적 단위 복용 형태.
  75. 제1항 내지 제74항 중 어느 하나의 항의 제형을 함유하는 밀폐 용기.
  76. 제1항 내지 제74항 중 어느 하나의 항의 제형을 포함하는 키트.
  77. 치료가 필요한 인간에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제74항 중 어느 하나의 항의 제형을 투여하는 것을 포함하는, 인간의 B 세포 질환 또는 장애의 치료 방법.
  78. 제77항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 B 세포 악성종양, 자가면역 질환, 자가면역 장애, 인간 이식 환자의 체액성 거부반응, 인간 이식 수령자의 이식편대숙주 질환 (GVHD) 및 이식후 림프세포증식성 장애로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  79. 제77항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 B 세포 악성종양인 방법.
  80. 제77항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 경피증인 방법.
  81. 치료가 필요한 인간에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제74항 중 어느 하나의 항의 제형을 투여하는 것을 포함하는, 인간 환자의 CD19 발현 B 세포를 고갈시키는 방법.
  82. 제81항에 있어서, 상기 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 및 적어도 12개월로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 기간 동안 지속되는 방법.
  83. 제81항에 있어서, 상기 고갈은 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%까지 B 세포 수준을 감소시키는 방법.
  84. 제81항에 있어서, 상기 CD19 발현 B 세포는 순환 B 세포, 혈액 B 세포, 비장 B 세포, 변연부 B 세포, 여포성 B 세포, 복막 B 세포, 골수 B 세포 또는 암 줄기세포인 방법.
  85. 키메라, 인간화 또는 인간 항-CD19 항체을 포함하고 히스티딘, 염화나트륨, 및 트레할로오스를 추가로 포함하는 멸균의 안정한 수성 제형으로서, 상기 항체는 서열번호:104의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는 멸균의 안정한 수성 제형.
  86. 제85항에 있어서, 상기 제형은 약 5 mg/ml 내지 약 50 mg/ml의 항-CD19 항체, 약 1 mM 내지 약 50 mM 히스티딘, 및 약 1% 내지 약 10% 트레할로오스를 포함하고, 상기 제형의 pH는 약 5 내지 약 7인 제형.
  87. 제85항에 있어서, 상기 제형은 약 5 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 항-CD19 항체, 약 5 mM 내지 약 20 mM 히스티딘, 및 약 2% 내지 약 8% 트레할로오스를 포함하고, 상기 제형의 pH는 약 5.5 내지 약 6.5인 제형.
  88. 제85항에 있어서, 상기 제형은 약 10 mg/ml의 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 및 약 4% 트레할로오스를 포함하고, 상기 제형의 pH는 약 6인 제형.
  89. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 등장인 제형.
  90. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시 안정한 제형.
  91. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시 안정한 제형.
  92. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시 안정한 제형.
  93. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  94. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  95. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  96. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  97. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  98. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  99. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  100. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  101. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  102. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 응집 또는 단편화에 취약한 제형.
  103. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  104. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  105. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  106. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  107. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  108. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  109. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 외관 검사로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 맑고 무색인 제형.
  110. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 외관 검사로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 맑고 무색인 제형.
  111. 제85항 내지 제110항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 주사가능 제형인 제형.
  112. 제111항에 있어서, 상기 제형은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합한 제형.
  113. 제112항에 있어서, 상기 제형은 정맥내 투여에 적합한 제형.
  114. 제112항에 있어서, 상기 제형은 피하 투여에 적합한 제형.
  115. 제85항 내지 제110항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 에어로졸 투여에 적합한 제형.
  116. 제85항 내지 제110항 중 어느 하나의 항에 따른 제형의 제조 방법으로서,
    항-인간 CD19 항체 용액을 약 5 mg/ml 내지 약 50 mg/ml로 농축하는 단계; 및
    상기 농축 항체를 히스티딘 포함 용액으로 다이아필터링(diafiltering)하는 단계를 포함하는 방법.
  117. 제116항에 있어서, 상기 농축 항체 용액을 적어도 약 하나의 부형제 포함 적어도 약 하나의 용액과 혼합시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
  118. 적합한 용기 내에 제85항 내지 제115항 중 어느 하나의 항의 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태.
  119. 제118항에 있어서, 상기 항체 제형은 정맥내로, 피하로, 또는 근육내로 투여되는 약제학적 단위 복용 형태.
  120. 적합한 용기 내에 제85항 내지 제115항 중 어느 하나의 항의 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 에어로졸 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태.
  121. 제85항 내지 제115항 중 어느 하나의 항의 제형을 함유하는 밀폐 용기.
  122. 제85항 내지 제115항 중 어느 하나의 항의 제형을 포함하는 키트.
  123. 치료가 필요한 인간에게 치료적 유효량의 제85항 내지 제115항 중 어느 하나의 항의 제형을 투여하는 것을 포함하는, 인간의 B 세포 질환 또는 장애의 치료 방법.
  124. 제123항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 B 세포 악성종양, 자가면역 질환, 자가면역 장애, 인간 이식 환자의 체액성 거부반응, 인간 이식 수령자의 이식편대숙주 질환 (GVHD) 및 이식후 림프세포증식성 장애로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  125. 제123항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 B 세포 악성종양인 방법.
  126. 제123항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 경피증인 방법.
  127. 인간 환자에서 CD19 발현 B 세포를 고갈시키는 방법으로서, 치료가 필요한 인간에게 치료적 유효량의 제85항 내지 제115항 중 어느 하나의 항의 제형을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  128. 제127항에 있어서, 상기 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 및 적어도 12개월로 이루어진 그룹으로부터 선택된 기간 동안 지속되는 방법.
  129. 제127항에 있어서, 상기 고갈은 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%까지 B 세포 수준을 감소시키는 방법.
  130. 제127항에 있어서, 상기 CD19 발현 B 세포는 순환 B 세포, 혈액 B 세포, 비장 B 세포, 변연부 B 세포, 여포성 B 세포, 복막 B 세포, 골수 B 세포 또는 암 줄기세포인 방법.
  131. 10mg/ml 인간화 항-CD19 항체, 약 10 mM 히스티딘, 및 약 4% 트레할로오스을 포함하는 멸균의 안정한 수성 제형으로서, 상기 제형의 pH는 약 6이고, 상기인간화 항-CD19 항체는 서열번호:104의 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 서열번호:111의 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않는 제형.
  132. 제131항에 있어서, 상기 제형은 등장인 제형.
  133. 제131항 또는 제132항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 안정한 제형.
  134. 제131항 내지 제133항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 안정한 제형.
  135. 제131항 내지 제134항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 안정한 제형.
  136. 제131항 내지 제135항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  137. 제131항 내지 제136항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  138. 제131항 내지 제137항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 20%를 잃는 제형.
  139. 제131항 내지 제138항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  140. 제131항 내지 제139항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  141. 제131항 내지 제140항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 10%를 잃는 제형.
  142. 제131항 내지 제141항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  143. 제131항 내지 제142항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  144. 제131항 내지 제143항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에, 그의 CD19 결합 활성의 많아야 5%를 잃는 제형.
  145. 제131항 내지 제144항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체는 응집 또는 단편화에 취약한 제형.
  146. 제131항 내지 제145항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  147. 제131항 내지 제146항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  148. 제131항 내지 제147항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 응집물을 형성하는 제형.
  149. 제131항 내지 제148항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  150. 제131항 내지 제149항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  151. 제131항 내지 제150항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 단편화되는 제형.
  152. 제131항 내지 제151항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 외관 검사로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시, 맑고 무색인 제형.
  153. 제131항 내지 제152항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 외관 검사로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시, 맑고 무색인 제형.
  154. 제131항 내지 제153항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 주사가능 제형인 제형.
  155. 제154항에 있어서, 상기 제형은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합한 제형.
  156. 제154항에 있어서, 상기 제형은 정맥내 투여에 적합한 제형.
  157. 제155항에 있어서, 상기 제형은 피하 투여에 적합한 제형.
  158. 제131항에 있어서, 상기 제형은 에어로졸 투여에 적합한 제형.
  159. 적합한 용기 내에 제131항의 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태.
  160. 제159항에 있어서, 상기 항체 제형은 정맥내로, 피하로, 또는 근육내로 투여되는 약제학적 단위 복용 형태.
  161. 적합한 용기 내에 제131항의 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 에어로졸 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태.
  162. 제131항의 제형을 함유하는 밀폐 용기.
  163. 제131항의 제형을 포함하는 키트.
  164. 치료가 필요한 인간에게 치료적 유효량의 제131항의 제형을 투여하는 것을 포함하는, 인간의 B 세포 질환 또는 장애의 치료 방법.
  165. 제164항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 B 세포 악성종양, 자가면역 질환, 자가면역 장애, 인간 이식 환자의 체액성 거부반응, 인간 이식 수령자의 이식편대숙주 질환 (GVHD) 및 이식후 림프세포증식성 장애로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  166. 제165항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 B 세포 악성종양인 방법.
  167. 제164항에 있어서, 상기 B 세포 질환 또는 장애는 경피증인 방법.
  168. 치료가 필요한 인간에게 치료적 유효량의 제131항의 제형을 투여하는 것을 포함하는, 인간 환자에서 CD19 발현 B 세포를 고갈시키는 방법.
  169. 제168항에 있어서, 상기 고갈은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월 또는 적어도 12개월로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 기간 동안 지속되는 방법.
  170. 제168항에 있어서, 상기 고갈은 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100%까지 B 세포 수준을 감소시키는 방법.
  171. 제168항에 있어서, 상기 CD19 발현 B 세포는 순환 B 세포, 혈액 B 세포, 비장 B 세포, 변연부 B 세포, 여포성 B 세포, 복막 B 세포, 골수 B 세포 또는 암 줄기세포인 방법.
  172. 제1항 내지 제70항, 제85항 내지 제115항 또는 제131항 내지 제158항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제형은 약제학적으로 허용가능한 제형인 제형.
  173. 키메라, 인간화 또는 인간 항-CD19 항체를 포함하는 멸균의 안정한 수성 제형으로서,
    상기 항체는,
    (a) VH CDRl (서열번호:22), VH CDR2 (서열번호:115), 및 VH CDR3 (서열번호:121)을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    (b) VK CDRl (서열번호:28), VK CDR2 (서열번호:125), 및 VK CDR3 (서열번호:32)을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    (c) 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되는 않음; 및
    (d) 완충제, 염, 카보히드레이트 부형제 및 표면활성제를 포함하는 제형.
  174. 제173항에 있어서, 상기 완충제는 히스티딘인 제형.
  175. 제174항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 1 mM 내지 약 200 mM의 농도로 존재하는 제형.
  176. 제174항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 10 mM 내지 약 50 mM의 농도로 존재하는 제형.
  177. 제174항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 10 mM 내지 약 30 mM의 농도로 존재하는 제형.
  178. 제174항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 10 mM의 농도로 존재하는 제형.
  179. 제174항에 있어서, 상기 히스티딘은 약 20 mM의 농도로 존재하는 제형.
  180. 제174항에 있어서, 상기 히스티딘은 적어도 약 10 mM의 농도로 존재하는 제형.
  181. 제173항에 있어서, 상기 염은 염화나트륨인 제형.
  182. 제181항에 있어서, 상기 염화나트륨은 약 10 mM 내지 약 300 mM의 농도로 존재하는 제형.
  183. 제181항에 있어서, 상기 염화나트륨은 약 60 mM 내지 약 175 mM의 농도로 존재하는 제형.
  184. 제181항에 있어서, 상기 염화나트륨은 약 50 mM의 농도로 존재하는 제형.
  185. 제181항에 있어서, 상기 염화나트륨은 약 75 mM의 농도로 존재하는 제형.
  186. 제181항에 있어서, 상기 염화나트륨은 적어도 50 mM의 농도로 존재하는 제형.
  187. 제173항에 있어서, 상기 카보히드레이트 부형제는 트레할로오스인 제형.
  188. 제187항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 1% 내지 약 10%의 농도로 존재하는 제형.
  189. 제187항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 2% 내지 약 8%의 농도로 존재하는 제형.
  190. 제187항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 3% mM의 농도로 존재하는 제형.
  191. 제187항에 있어서, 상기 트레할로오스는 약 4%의 농도로 존재하는 제형.
  192. 제187항에 있어서, 상기 트레할로오스는 적어도 약 3%의 농도로 존재하는 제형.
  193. 제173항에 있어서, 상기 표면활성제는 폴리소르베이트 80인 제형.
  194. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.001% 내지 약 2%의 농도로 존재하는 제형.
  195. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01 %의 농도로 존재하는 제형.
  196. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.02%의 농도로 존재하는 제형.
  197. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.04%의 농도로 존재하는 제형.
  198. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.05%의 농도로 존재한다.
  199. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.08%의 농도로 존재하는 제형.
  200. 제193항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01% 내지 약 0.2%의 농도로 존재하는 제형.
  201. 제173항에 있어서, 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖는 제형.
  202. 제173항에 있어서, 약 6.0의 pH를 갖는 제형.
  203. 제173항에 있어서, 상기 제형은 무텅스텐 주사기 내에 존재하는 제형.
  204. 제173항에 있어서, 상기 제형은 여과되는 제형.
  205. 제173항에 있어서, 상기 제형은 22 ㎛ 필터에 의해 여과되는 제형.
  206. 제205항에 있어서, 상기 제형은 표면활성제의 추가 전 및 후에 여과되는 제형.
  207. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 10 mg/ml인 제형.
  208. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 15 mg/ml인 제형.
  209. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 50 mg/ml인 제형.
  210. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 100 mg/ml인 제형.
  211. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 120 mg/ml인 제형.
  212. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 150 mg/ml인 제형.
  213. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 5 mg/ml인 제형.
  214. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 10 mg/ml인 제형.
  215. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 20 mg/ml인 제형.
  216. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 25 mg/ml인 제형.
  217. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 30 mg/ml인 제형.
  218. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 40 mg/ml인 제형.
  219. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 50 mg/ml인 제형.
  220. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 60 mg/ml인 제형.
  221. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 70 mg/ml인 제형.
  222. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 80 mg/ml인 제형.
  223. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 90 mg/ml인 제형.
  224. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 110 mg/ml인 제형.
  225. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 120 mg/ml인 제형.
  226. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 130 mg/ml인 제형.
  227. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 적어도 약 140 mg/ml인 제형.
  228. 제173항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 5 mg/ml 내지 약 100 mg/ml인 제형.
  229. 제173항에 있어서, 상기 제형은 -20℃에서 보관되는 제형.
  230. 제173항에 있어서, 상기 제형은 -40℃에서 보관되는 제형.
  231. 제173항에 있어서, 상기 제형은 -70℃에서 보관되는 제형.
  232. 제173항에 있어서, 상기 제형은 -80℃에서 보관되는 제형.
  233. 수성 제형의 보관 안정성을 향상시키는 방법으로서,
    상기 제형은,
    a. 서열번호:104의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    b. 서열번호:111의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
    c. 복합 N-글리코사이드 연결된 당 사슬을 갖는 Fc 영역, 여기서 푸코스는 당 사슬 내의 환원 말단에서 N-아세틸클루코사민에 결합되지 않음;
    를 포함하는 키메라, 인간화 또는 인간 항-CD19 항체를 포함하고,
    상기 방법은 표면활성제를 상기 제형에 제형의 보관 안정성을 향상시키데 효과적인 양으로 첨가하는 것을 포함하는 방법.
  234. 제232항에 있어서, 상기 표면활성제는 폴리소르베이트 80인 방법.
  235. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.001% 내지 약 2%의 농도로 존재하는 방법.
  236. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01%의 농도로 존재하는 방법.
  237. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.02%의 농도로 존재하는 방법.
  238. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.04%의 농도로 존재하는 방법.
  239. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.05%의 농도로 존재하는 방법.
  240. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.08%의 농도로 존재하는 방법.
  241. 제233항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01 % 내지 약 0.2%의 농도로 존재하는 방법.
  242. 제233항에 있어서, 표면활성제의 추가 전에 조성물을 여과하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  243. 제233항에 있어서, 표면활성제의 추가 후에 조성물을 여과하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  244. 제233항에 있어서, 표면활성제의 추가 전 및 후에 조성물을 여과하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  245. 제233항에 있어서, 상기 항-CD19 항체는 그의 활성을 유지하는 방법.
  246. 제233항에 있어서, 상기 항-CD19 항체는 그의 순도를 유지하는 방법.
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