KR20110111059A

KR20110111059A - 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법

Info

Publication number: KR20110111059A
Application number: KR1020100030443A
Authority: KR
Inventors: 정광회; 장유민; 최행석; 이광형; 고정재
Original assignee: (주)차바이오메드
Priority date: 2010-04-02
Filing date: 2010-04-02
Publication date: 2011-10-10
Also published as: WO2011122844A2; KR101110051B1; WO2011122844A3

Abstract

원심분리를 이용하여 생물체로부터 기인한 피분리 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리용 백은, 합성수지를 이용하여 원심분리 공간을 형성하는 분리백, 원심분리 공간의 상부에서 원심분리 공간으로 피분리 조직 및 피분리 조직과 반응하는 반응물질 중 적어도 어느 하나를 주입하기 위한 적어도 하나의 주입구, 원심분리 공간의 하부에서 원심분리 후 원심분리 공간 내의 목적세포를 배출하기 위한 배출구, 및 원심분리 공간 내측에 개재되어 원심분리 공간을 구획하며, 목적세포를 선택적으로 투과시키는 구획부재를 포함한다.

Description

원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법{BAG FOR CENTRIFUGAL SEPARATION AND METHOD OF CENTRIFUGAL SEPARATION USING BAG FOR CENTRIFUGAL SEPARATION}

본 발명은 원심분리를 이용하여 생물체로부터 기인한 피분리 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법에 관한 것이다.

생물체로부터 추출한 특정한 목적세포는 다양한 용도로 사용될 수 있다. 예를 들면, 지방조직으로부터 분리해낸 지방줄기세포는 인체 내 손상된 각종 조직의 재생에 쓰이기 위한 목적으로 각종 의료기관이나 연구소에서 사용될 수 있으며, 특히 조혈세포, 신경세포, 피부재건, 연골세포, 심근세포, 혈관세포 등으로 분화 가능하기 때문에 다양한 분야에서의 사용이 가능하다.

지방조직으로부터 분리해낸 지방줄기세포의 유용성은 기타 다른 조직에서 유래되는 줄기세포에 비해 실용적 가치가 우수할 수 있다. 구체적으로, 지방줄기세포는 인체 내의 잉여 지방조직으로부터 분리될 수 있으며, 비교적 간단한 처리만으로도 얻을 수 있다. 하지만, 골수, 제대혈, 말초혈액, 배아 등에서 줄기세포를 분리할 경우에는 윤리문제, 채취 대상자의 통증문제, 처리과정 중의 세균이나 바이러스 등의 외부인자에 의한 오염 문제 등을 극복해야 한다.

다만, 지방조직에서 지방줄기세포를 분리하기 위해서, 기존에는 생물체로부터 채취된 지방조직을 별도의 용기에 옮겨 담는 과정이나, 효소나 화학물질과 같은 반응물질을 이용한 지방조직의 처리 과정에서, 각 과정의 피처리물이 외부인자에 노출이 쉽게 일어 날 수 있다. 또한, 지방조직 및 반응물질의 혼합물에서 목적세포 만을 추출하기 위한 원심분리 과정을 다시 별개의 공간에서 진행함으로써, 재차 외부인자에 노출되는 등 전반적인 지방줄기세포의 추출 과정에서, 각 과정의 피처리물이 매번 외부인자에 노출되는 문제점이 있다.

더욱이, 효소나 화학물질과 반응시킨 지방조직 중 지방줄기세포 외의 기타 다른 조직, 예를 들면 고밀도간질혈관부분(Stromal-vascular fraction; SVF)은 젤리(jelly) 또는 콜라겐(collagen)과 같은 유연한 고체 상태의 세포 알갱이(cell pellet)들로 응고될 수 있다. 이때, 지방줄기세포와 기타 다른 조직이 분리된 상태의 물질을 그대로 원심분리 하여 지방줄기세포를 분리할 수도 있겠으나, 고농도로 지방줄기세포를 분리해낼 수 있도록, 원심분리 전에 상술한 고체 상태의 물질을 미세한 메시(mesh)를 가지는 거즈(gauze) 혹은 가제(gaze)를 체(sieve)로써 사용하여 간단하게 걸러내고, 다시 거즈 혹은 가제를 통과시킨 내용물을 원심분리를 위한 용기에 담아 원심분리를 하는 것이 일반적이다.

즉, 종래에는 지방조직으로부터 지방줄기세포를 추출해낼 때, 지방조직과 반응물질을 혼합하는 과정, 지방조직과 반응물질의 혼합물을 거즈나 가제를 이용하여 필터링하는 과정, 상기 혼합물 중 거즈나 가제를 통과한 피처리물을 다시 원심분리하는 과정이 모두 다른 공간에서 이루어지기 때문에 각 과정 마다 피처리물을 매번 다른 공간으로 옮겨 담아야 하는 번거로움이 있으며, 피처리물을 옮겨 담는 과정에서 매번 피처리물이 외부인자에 노출되는 문제점이 있다.

본 발명은 피분리 조직으로부터 목적세포를 얻기 위한 수 차례의 처리 과정을 하나의 공간에서 수행할 수 있는 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법을 제공하며,

특히, 피분리 조직이 지방조직과 반응물질을 반응시켜 획득된 경우, 목적세포인 지방줄기세포 외에도 고밀도간질혈관부분의 세포 알갱이와 같이 젤리 또는 콜라겐과 같은 유연한 상태의 물질이 함께 혼재하게 되고, 상기 젤리나 콜라겐 같은 세포 알갱이를 필터링 해야 하는데, 본 발명의 원심분리용 백은 필터링 및 필터링 이후의 원심분리를 동시에 수행할 수 있어야 할 것이다.

본 발명은 피분리 조직으로부터 목적세포를 추출하는 과정에서 취급되는 물질이나 혼합물의 외부인자에 대한 노출을 최소화할 수 있는 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법을 제공한다.

본 발명은 일회용으로서 제조 비용을 절감할 수 있으며, 별도의 필터링 장비를 사용하지 않아도 순수한 목적세포를 용이하게 추출할 수 있는 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법을 제공한다.

상술한 본 발명의 목적들을 달성하기 위한 본 발명의 예시적인 일 실시예에 따르면, 원심분리를 이용하여 생물체로부터 기인한 피분리 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리용 백은, 합성수지를 이용하여 원심분리 공간을 형성하는 분리백, 원심분리 공간의 상부에서 원심분리 공간으로 피분리 조직 또는 피분리 조직과 반응하는 반응물질을 주입하기 위한 적어도 하나의 주입구, 원심분리 공간의 하부에서 원심분리 후 원심분리 공간 내의 목적세포를 배출하기 위한 배출구, 및 원심분리 공간 내측에 개재되어 원심분리 공간을 구획하며, 목적세포를 선택적으로 투과시키는 구획부재를 포함한다.

본 명세서에서 피분리 조직이라 함은, 생물체로부터 추출된 순수한 세포 조직은 물론 상기 세포 조직과 반응하는 반응물질이 혼합된 혼합물을 두루 포함할 수 있다. 그리고, 반응물질이라 함은, 상술한 피분리 조직으로부터 원하는 목적세포를 분리 또는 추출하기 위한 효소나 화학물질을 포함할 수 있다.

상술한 원심분리용 백을 이용하면, 상술한 피분리 조직으로부터 목적세포를 얻기 위한 수 차례의 처리 과정을 하나의 공간에서 수행할 수 있다. 예를 들면, 피분리 조직이 지방조직 및 반응물질을 반응시킨 혼합물인 경우, 피분리 조직 중 목적세포인 지방줄기세포 외에 다른 물질은 반응물질에 의해서 예를 들면 고밀도간질혈관부분은 젤리 또는 콜라겐과 같은 유연한 고체 상태의 세포 알갱이들로 응고될 수 있다. 종래에는 이러한 고체 상태의 물질을 별도의 거즈나 가제를 이용하여 걸러 내고 다시 거즈 혹은 가제를 통과시킨 물질을 원심분리를 위한 용기에 담아 원심분리를 함으로써 원하는 목적세포를 분리 또는 추출하는 번잡한 과정을 거치고 있다. 특히, 거즈나 가제를 통해서 피분리 조직을 필터링 하는 과정에서, 세균이나 바이러스 등의 외부인자에 피분리 조직이 노출될 위험이 있다. 그러나, 본 발명에 따른 원심분리용 백을 이용하면, 구획부재에 의해서 상기 고체 상태의 물질이 걸러지고, 상기 구획부재를 통과한 내용물을 그대로 동일한 원심분리용 백 내에서 원심분리할 수 있다. 따라서, 고체 상태의 물질을 필터링하는 과정 및 구획부재를 통해서 걸러낸 내용물을 원심분리하는 과정이 하나의 공간에서 이루지기 때문에, 피분리 조직으로부터 목적세포를 추출하는 과정에서 피분리 조직이 외부인자에 노출되는 것을 최소화할 수 있다.

분리백은 내부의 원심분리 공간으로 피분리 조직이 유입되면, 유연하게 그 형태가 변경될 수 있도록 합성수지를 이용하여 형성하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 합성수지는 폴리염화비닐(polyvinyl chloride)이나, 디메틸실록산과 폴리카보네이트의 중합체를 사용할 수 있으며, 특히, 폴리염화비닐(polyvinyl chloride)과 같이 흡수성은 없으나 탄력이 있고 약품에 대한 저항력도 큰 다른 재질을 이용할 수도 있다.

구획부재는 목적세포를 선택적으로 투과시킬 수 있는 재질이면 가능하며, 예를 들면, 천연 또는 합성 직물(fabrics)을 이용한 거즈 혹은 가제와 같이 체(sieve)의 기능을 갖는 재질을 이용하여 제공할 수 있다. 보다 구체적으로 예를 들면, 앞서 설명한 바와 같이, 피분리 조직이 지방조직 및 반응물질을 반응시킨 혼합물인 경우, 유연한 고체 상태로 응고된 물질이 구획부재를 쉽게 통과하지 않도록 수 내지 수백 미크론의 메시(mesh)를 갖는 재료를 이용할 수 있다.

분리백은 상술한 합성수지를 이용하여 형성된 적어도 한 장의 합성수지 필름을 융착하여 형성될 수 있으며, 융착 시에 주입구 및 배출구를 제외한 분리백의 테두리를 융착에 의해서 밀폐시킬 수 있다.

또한, 분리백이 합성수지를 이용하여 형성된 두 장의 합성수지 필름을 융착하여 형성되는 경우, 구획부재는 상기 2장의 합성수지 필름 사이에 접힌 상태로 제공되고, 합성수지 필름의 융착 시에, 구획부재의 가장자리는 합성수지 필름의 내측면을 따라서 접착될 수 있다.

비교적 값이 저렴한 합성수지를 이용하고, 아울러 구획부재 또한 간단하게 분리백 내에 개재하여 고정시키는 것이 가능하기 때문에, 원심분리용 백의 제조 비용의 절감을 가져오고, 이에 원심분리용 백을 일회용으로 사용하는 것이 가능하다. 또한, 원심분리용 백을 일회만 사용하여 보다 순수한 목적세포를 추출하는 것이 가능하다.

참고로, 분리백의 상부에 제공되어 원심분리 공간과 연통된 주입구 및 분리백의 하부에 제공되어 원심분리 공간과 연통된 배출구 각각에는 이를 선택적으로 개폐하는 밸브부재를 포함할 수 있으며, 밸브부재는 집게나 밸브 등을 혹은 마개를 이용할 수 있다.

또한, 본 발명의 예시적인 다른 실시예에 따르면, 원심분리를 이용하여 생물체로부터 기인한 피분리 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리방법은, 합성수지를 이용하여 원심분리 공간을 형성하는 분리백, 원심분리 공간의 상부에서 원심분리 공간으로 피분리 조직 및 피분리 조직과 반응하는 반응물질 중 적어도 어느 하나를 주입하기 위한 적어도 하나의 주입구, 원심분리 공간의 하부에서 원심분리 후 원심분리 공간 내의 목적세포를 배출하기 위한 배출구, 및 원심분리 공간 내측에 개재되어 원심분리 공간을 구획하며, 목적세포를 선택적으로 투과시키는 구획부재를 포함하는 원심분리용 백을 마련하는 단계, 주입구를 통해서 원심분리 공간으로 피분리 조직을 주입하는 단계, 원심분리용 백을 회전시켜 구획부재를 통과한 내용물을 원심분리하는 단계, 및 원심분리된 내용물 중 목적세포를 배출구를 통해서 배출하는 단계를 포함하여, 피분리 조직의 필터링 및 원심분리를 동시에 수행할 수 있다.

여기서, 피분리 조직은 순수한 세포 조직일 수도 있겠으나, 생물체로부터 추출된 세포 조직을 1차적으로 반응물질과 반응시키고, 원심분리되어 제공될 수 있다. 이러한 경우, 세포 조직 및 반응물질의 혼합 과정은 별도의 분리백 혹은 다른 밀폐된 용기에서 이루어질 수 있으며, 이때 사용하는 반응물질은 구획부재를 통과한 내용물을 원심분리하는 단계에서 주입구를 통해 더 주입될 수 있는 반응물질과 동일할 수도 있고 다를 수도 있다.

참고로, 상술한 피분리 조직은 상기 별도의 분리백 혹은 다른 밀폐된 용기의 배출구로부터 호스를 통해서 본 발명에 따른 원심분리용 백의 주입구를 통해서 분리백 내부로 유입되어 외부에 노출을 최소화시킬 수 있다.

본 발명의 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법은 피분리 조직으로부터 원하는 목적세포를 얻기 위한 수 차례의 처리 과정을 하나의 용기에서 수행할 수 있다. 예를 들면, 피분리 조직이 지방조직과 반응물질을 반응시켜 획득된 경우, 목적세포인 지방줄기세포 외의 고밀도간질혈관부분과 같이 젤리 또는 콜라겐과 같은 유연한 고체 상태로 응고된 물질을 구획부재를 통해서 필터링 할 수 있으며, 구획부재를 통과한 지방줄기세포 및 일부 반응물질을 포함하는 내용물을 동일한 분리백 내에서 원심분리를 동시에 진행할 수 있다.

본 발명의 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법은 피분리 조직으로부터 목적세포를 추출하는 과정에서 외부인자에 노출을 최소화할 수 있다. 예를 들면, 피분리 조직이 지방조직과 반응물질을 반응시켜 획득된 경우, 목적세포인 지방줄기세포 외의 젤리 또는 콜라겐과 같은 유연한 고체 상태로 응고된 물질을 구획부재를 통해서 필터링하는 과정 및 구획부재를 통과한 내용물을 원심분리하는 과정이 하나의 분리백 내에서 이루어질 수 있다.

본 발명의 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법에서, 원심분리용 백은 비교적 값이 저렴한 합성수지를 이용하고, 아울러 합성수지 필름의 융착 시에 구획부재 또한 간단하게 분리백 내에 접착하는 것이 가능하기 때문에, 원심분리용 백의 제조 비용이 절감된다.

본 발명의 원심분리용 백 및 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법에서, 앞서 언급한 바와 같이, 원심분리용 백을 일회용으로 사용하는 것이 가능하여, 원심분리용 백을 일회만 사용하여도 경제적으로 부담이 적고, 예를 들면, 지방세포를 사용하여 지방줄기세포와 같은 목적세포를 획득하고자 할 경우에, 반복적인 처리를 위한 분리공간 내부 세척이 지방세포의 경우 잘 세척되지 않아 선 처리된 물질이 잔류하는 문제점이 있을 수 있으나, 본 발명의 원심분리용 분리장치는 1회만 사용할 수 있어 상술한 문제점을 해결할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 원심분리용 백을 도시한 사시도이다.
도 2 및 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 원심분리용 백의 제조 과정을 설명하기 위한 사시도들이다.
도 4 내지 도 7은 본 발명에 따른 원심분리용 백을 이용하여 원심분리하는 과정을 설명하기 위한 도면들이다.

이하 첨부된 도면들을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하게 설명하지만, 본 발명이 실시예에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다. 참고로, 본 설명에서 동일한 번호는 실질적으로 동일한 요소를 지칭하며, 이러한 규칙 하에서 다른 도면에 기재된 내용을 인용하여 설명할 수 있고, 당업자에게 자명하다고 판단되거나 반복되는 내용은 생략될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 원심분리용 백을 도시한 도면이다.

도 1을 참조하면, 원심분리를 이용하여 생물체로부터 추출된 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리용 백(100)은 분리백(110), 구획부재(120), 및 밸브부재(130)를 포함한다.

분리백(110)은 유연한 재질을 이용하여 내측에 원심분리 공간(111)을 형성하며, 분리백(110)의 상부에는 원심분리 공간(111)으로 피분리 조직을 주입하기 위한 주입구(112)가 형성된다. 또한, 분리백(110)의 하부에는 원심분리 후 원심분리 공간(111) 내의 잔류 물질 중 목적세포를 배출하기 위한 배출구(114)가 형성된다. 참고로, 피분리 조직이나 반응물질을 주입할 수 있는 주입구(112)는 본 실시예에서는 2개가 제공되는데, 주입구(112)의 개수는 상황에 따라서 달라질 수 있다. 구체적으로, 최초 피분리 조직이나 반응물질 외에 다른 물질을 분리백(110)에 더 주입해야 하는 경우가 발생할 수 있고, 이때, 추가로 분리백(110) 내로 주입되는 다른 물질이 주입구에 잔류하는 물질과 혼합되면 곤란한 경우, 이미 사용된 주입구(112) 외에 다른 주입구(112)를 통해서 추가 물질을 주입할 수 있다. 이에, 주입구(112)의 개수는 사용하는 반응물질의 종류의 수에 따라 결정될 수 있다.

또한, 주입구(112)와 배출구(114)에는 각각 이를 선택적으로 개폐하는 밸브부재(130)가 배치될 수 있으며, 밸브부재(130)로는 집게나 밸브, 지퍼 등을 이용할 수도 있고, 본 실시예와 같이 주입구(112) 및 배출구(114)에 끼워져 삽입되는 마개 및 체크밸브의 형태로도 제공될 수 있다. 참고로, 이러한 마개 및 체크밸브 형태의 밸브부재(130)는 주입구(112) 및 배출구(114)에 쉽게 삽입 및 제거 가능하게 제공될 수 있겠으나, 코르크(cork) 혹은 합성수지를 이용하여 제공하고, 캐뉼러(cannula), 및 바늘 등과 같이 뾰족하고 얇은 관을 사용하여 원하는 물질을 주입 혹은 배출시키도록 할 수도 있다.

또한, 분리백(110)은 내부의 원심분리 공간(111)으로 피분리 조직이 유입되면, 유연하게 그 형태가 변경될 수 있도록 합성수지를 이용하여 형성하며, 폴리염화비닐(polyvinyl chloride)이나, 디메틸실록산과 폴리카보네이트의 중합체를 사용할 수 있다. 특히, 폴리염화비닐(polyvinyl chloride)은 흡수성은 없으나 탄력이 있고 약품에 대한 저항력이 커서 분리백(110)의 재질로 적합할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 원심분리용 백(100)이 원심분리뿐만 아니라, 조직으로부터 추출해낸 목적세포를 배양할 목적으로 사용할 경우에는 상술한 특성 외에도 특정 기체가 투과할 수 있는 재질이 바람직한데, 디메틸실록산, 및 폴리카보네이트의 중합체는 액체가 투과할 수 없으나, 산소와 같이 특정 기체가 투과하여 원심분리용 백(100)을 배양의 목적으로 사용하는 경우 분리백(110)의 재질로 적합할 수 있다.

구획부재(120)는 목적세포를 선택적으로 투과시킬 수 있는 재질이면 가능하며, 본 실시예에서는 천연 또는 합성 직물(fabrics)을 이용한 메시 또는 체(sieve)의 기능을 갖는 거즈를 이용한다.

이하, 상술한 원심분리용 백의 제조 과정을 도 2 및 도 3을 통해서 상세하게 설명한다.

도 2 및 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 원심분리용 백의 제조 과정을 설명하기 위한 사시도들이며, 도 2와 같이, 합성수지를 이용하여 형성된 두 장의 합성수지 필름(115)을 서로 포개지도록 배치하고, 2장의 합성수지 필름(115) 사이에 구획부재(120)로서 접힌 상태의 거즈를 배치한다.

그 후에, 도 3에 도시된 바와 같이, 2 장의 합성수지 필름(115)이 상호 접합되도록 가압, 가열, 고주파, 또는 화학반응 등을 통해서 융착하여 분리백(110)을 형성할 수 있다. 이때, 구획부재(120)의 가장자리는 합성수지 필름(115)의 내측면을 따라서 접착될 수 있다. 물론, 융착 시에 주입구(112) 및 배출구(114)를 제외한 분리백(110)의 테두리만이 융착되도록 할 수 있다.

이때, 원심분리되어 분리백(110) 하부에 포집된 물질이 배출구(114) 주위로 밀집하여, 배출구(114)를 통한 목적세포의 획득이 용이하도록, 분리백(110)의 저부는 그 폭이 배출구(114) 방향으로 점차 완만하게 경사진 U-자형으로 융착되거나, 조금 더 급하게 경사진 V-자형과 같은 형태로도 융착될 수 있다.

즉, 분리백(110)의 저부가 배출구(114)를 향할수록 폭이 점차 좁아지는 깔때기(funnel) 형상이 되도록 융착하여, 분리백(110)의 저부에 경사를 형성하고, 이에 원심분리 후 배출구(114)로 목적세포가 쉽게 모이도록 할 수 있다.

참고로, 밸브부재(130)는 2 장의 합성수지 필름(115)을 융착시킨 후에, 비 융착된 주입구(112)나 배출구(114)에 끼워져 삽입될 수도 있고, 2 장의 합성수지 필름(115)을 융착시키기 전에, 상기 필름(115) 사이에 먼저 배치하고, 상기 필름(115)을 융착하여, 주입구(112)나 배출구(114)에 배치되도록 할 수도 있다.

본 실시예의 원심분리용 백(100)은 플라스틱과 같은 유연한 재질을 이용하여 융착과 같은 간단한 제조과정을 통해서 제조가 가능하여, 제조 비용의 절감이 가능하고, 이에 원심분리용 분리장치(200)를 부담 없이 일회용으로 사용하는 것이 가능하다. 또한, 재사용을 하지 않아도 되기 때문에, 보다 순수한 목적세포를 추출할 수 있다.

이하, 상술한 원심분리용 백을 이용한 원심분리방법에 대해서 상세하게 설명한다.

도 4는 본 발명에 따른 피분리 조직의 획득 과정을 설명하기 위한 도면이다.

도 4를 참조하면, 먼저 교반용 백(10)에 생물체로부터 떼어낸 지방조직(1) 및 지방조직(1)과 반응하는 반응물질(2)을 서로 다른 주입구(12)를 통해서 각각 주입하고, 지방조직(1)과 반응물질(2)이 상호 잘 섞이도록 교반한다. 참고로, 이때 사용되는 반응물질(2)로는 효소(collagenase type I)를 사용할 수 있으며, 37°C에서 2시간 정도 반응시킬 수 있다.

교반된 지방조직(1)과 반응물질(2)은 교반용 백(10) 내에서 도 5에 도시된 바와 같이, 목적세포인 지방줄기세포 외의 고밀도간질혈관부분과 같은 지방조직(1)의 일부는 젤리 또는 콜라겐과 같은 유연한 고체 상태의 세포 알갱이(3)로 응고된다. 이 상태에서, 지방줄기세포와 유연한 고체 상태가 보다 확실하게 분리되도록 원심분리 작업을 진행한다. 참고로, 300xg로 10분간 원심분리한다.

참고로, 교반용 백(10)은 본 발명에 따른 원심분리용 백(100)에서 구획부재(120)가 부재되어 있는 것으로, 상기 교반용 백(10) 외에도 일반적인 밀폐 용기를 사용할 수 있다.

다만, 상술한 바와 같이, 교반 및 원심분리를 거친 피분리 조직이 외부와 접촉되는 것을 방지하도록 상술한 교반용 백(10)을 이용하여 교반 및 원심분리 작업을 거치고, 교반용 백(10)의 배출구(14)를 통해서 피분리 조직을 본 발명에 따른 원심분리용 백(100)의 주입구(112)를 통해서 원심분리 공간(111)으로 유입시킬 수 있다.

도 6을 참조하면, 교반용 백(10)의 배출구(14)와 본 발명에 따른 원심분리용 백(100)의 주입구(112)가 상호 호스(20)를 매개로 연결되며, 호스(20)를 통해서 교반용 백(10) 내의 물질이 원심분리용 백(100)의 주입구(112)로 유입될 수 있다. 이때, 교반용 백(10) 배출구(14) 주변에 모인 물질을 배출할 수 있는데, 교반용 백(10) 상부에 모여 있는 불필요한 물질은 원심분리용 백(100) 내부로 유입되지 않도록 교반용 백(10) 배출구(14) 주변에 모인 물질을 어느 정도 배출시킨 후에, 배출구(14)에 연결된 연질의 호스(20)를 눌러 막거나, 배출구(14)로부터 분리하여 교반용 백(10) 상부에 모여 있는 불필요한 물질이 원심분리용 백(100) 내부로 유입되지 않도록 할 수 있다. 또한, 경우에 따라서는 도 6에 도시된 바와 같이, 원심분리용 백(100)을 가압할 수 있는 별도의 가압부재(30)를 사용하여, 교반용 백(10) 상부에 모여 있는 불필요한 물질이 원심분리용 백(100) 내부로 유입되지 않도록 할 수 있다. 참고로, 가압부재(30)로는 집게를 이용할 수 있다.

상술한 바와 같이, 원심분리용 백(100)의 주입구(112)를 통해서 유입된 피처리 물질은 다시 구획부재(120)에 의해서 걸러진다. 구체적으로, 피처리 물질 중 용액상태의 반응물질(2) 일부와 지방줄기세포는 그대로 구획부재(120)를 통과하여 원심분리용 백(100)의 저부에 모이고, 피처리 물질 중 고밀도간질혈관부분과 같이 젤리 또는 콜라겐과 같은 유연한 고체 상태의 세포 알갱이(3)들은 구획부재(120)에 의해서 걸러진다.

그 후에, 교반용 백(10)을 제거하고, 원심분리용 백(100)의 주입구(112)를 다시 폐쇄한 후에, 원심분리 하면 도 7에 도시된 바와 같이, 세포 알갱이(3) 상태로 응고된 물질은 구획부재(120)에 남아있고, 액상으로 구획부재(120)를 통과한 반응물질(2) 일부와 지방줄기세포는 다시 300xg로 10분간 원심분리된다. 이때, 목적세포인 지방줄기세포(4)는 다시 반응물질(2)과 분리되어 대부분 배출구(114)주변에서 수득될 수 있다. 원심분리되어 수득된 목적세포는 원심분리용 백(100)의 배출구(114)를 통해서 획득할 수 있다.

참고로, 배출구(114)를 통해서 획득된 지방줄기세포(4)의 순도가 목적한 수치보다 낮은 경우, 다른 원심분리용 백의 주입구를 통해서 다시 주입하고 원심분리하는 과정을 반복하여 보다 높은 순도의 목적세포를 획득할 수도 있으며, 상술한 바와 같이, 본 발명의 원심분리용 백(100)을 복수개 연결하여 사용함으로써, 획득하고자 하는 목적세포의 양을 쉽게 늘릴 수 있다.

참고로, 상술한 바와 같이, 반복적인 원심분리 과정을 통해서 포집된 고순도의 지방줄기세포는 필요에 따라 그대로 원심분리용 백(100) 내부에 보관하고 필요 시에 사용할 수도 있다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술분야의 숙련된 당업자라면 하기의 청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.

10：교반용 백 100：원심분리용 백
111：원심분리 공간 112：주입구
114：배출구 115：합성수지 필름
120：구획부재 130：밸브부재

Claims

원심분리를 이용하여 생물체로부터 기인한 피분리 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리용 백에 있어서,
합성수지를 이용하여 원심분리 공간을 형성하는 분리백;
상기 원심분리 공간의 상부에서 상기 원심분리 공간으로 상기 피분리 조직 및 상기 피분리 조직과 반응하는 반응물질 중 적어도 어느 하나를 주입하기 위한 적어도 하나의 주입구;
상기 원심분리 공간의 하부에서 원심분리 후 상기 원심분리 공간 내의 상기 목적세포를 배출하기 위한 배출구; 및
상기 원심분리 공간 내측에 개재되어 상기 원심분리 공간을 구획하며, 상기 목적세포를 선택적으로 투과시키는 구획부재;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 합성수지는 폴리염화비닐(polyvinyl chloride) 또는 디메틸실록산 및 폴리카보네이트의 중합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 구획부재는 천연 또는 합성 직물(fabrics)을 포함하는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 분리백은 상기 합성수지를 이용하여 형성된 적어도 한 장의 합성수지 필름을 융착하여 형성되며,
상기 주입구 및 상기 배출구를 제외한 상기 분리백의 테두리는 융착에 의해서 밀폐되는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 분리백은 상기 합성수지를 이용하여 형성된 두 장의 합성수지 필름을 융착하여 형성되며, 상기 구획부재는 상기 두 장의 합성수지 필름 사이에 접힌 상태로 제공되고, 상기 합성수지 필름의 융착 시에, 상기 구획부재의 가장자리는 상기 합성수지 필름의 내측면을 따라서 접착되는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 분리백의 저부는 상기 배출구를 향할수록 폭이 점차 좁아지도록 경사지게 형성되는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 피분리 조직은,
상기 생물체로부터 추출된 세포 조직을 1차적으로 반응물질과 반응시키고, 원심분리하여 제공되는 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
제1항에 있어서,
상기 피분리 조직은 지방조직을 포함하며,
상기 목적세포는 지방줄기세포인 것을 특징으로 하는 원심분리용 백.
원심분리를 이용하여 생물체로부터 기인한 피분리 조직으로부터 목적세포를 분리하기 위한 원심분리방법에 있어서,
합성수지를 이용하여 원심분리 공간을 형성하는 분리백, 상기 원심분리 공간의 상부에서 상기 원심분리 공간으로 상기 피분리 조직 및 상기 피분리 조직과 반응하는 반응물질 중 적어도 어느 하나를 주입하기 위한 적어도 하나의 주입구, 상기 원심분리 공간의 하부에서 원심분리 후 상기 원심분리 공간 내의 상기 목적세포를 배출하기 위한 배출구, 및 상기 원심분리 공간 내측에 개재되어 상기 원심분리 공간을 구획하며, 상기 목적세포를 선택적으로 투과시키는 구획부재를 포함하는 원심분리용 백을 마련하는 단계;
상기 주입구를 통해서 상기 원심분리 공간으로 상기 피분리 조직을 주입하는 단계;
상기 원심분리용 백을 회전시켜 상기 구획부재를 통과한 내용물을 원심분리하는 단계; 및
원심분리된 상기 내용물 중 목적세포를 상기 배출구를 통해서 배출하는 단계;
를 포함하여, 필터링 및 원심분리를 동시에 수행할 수 있는 것을 특징으로 하는 원심분리방법.
제9항에 있어서,
상기 피분리 조직은,
상기 생물체로부터 추출된 세포 조직을 1차적으로 반응물질과 반응시키고, 원심분리하여 제공되는 것을 특징으로 하는 원심분리방법.
제9항에 있어서,
상기 피분리 조직은 지방조직을 포함하며,
상기 지방조직과 상기 반응물질이 혼합되어 형성된 유연한 고체 상태의 세포 알갱이는 상기 구획부재에서 걸러지는 것을 특징으로 하는 원심분리방법.