KR20110088781A

KR20110088781A - 나리 기내배양시 신초의 증식 및 액체 배지 첨가에 의한 자구의 대량생산 방법

Info

Publication number: KR20110088781A
Application number: KR1020100008449A
Authority: KR
Inventors: 김원배; 이혜경; 김영진; 조해룡; 한봉희
Original assignee: 대한민국(농촌진흥청장)
Priority date: 2010-01-29
Filing date: 2010-01-29
Publication date: 2011-08-04
Also published as: KR101229334B1

Abstract

본 발명은 벤질아데닌 0.5~2.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계, 상기 유기된 신초로부터 벤질아데닌 0.5~1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 신초 덩어리를 증식시키는 단계, 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2~3배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 200~300 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계 및 2~3배 MS 배지 염류 및 수크로스 150~200 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함하는 나리 자구의 기내 대량생산 방법과 상기 방법에 의해 생산된 나리 자구에 관한 것이다.

Description

나리 기내배양시 신초의 증식 및 액체 배지 첨가에 의한 자구의 대량생산 방법{Method for mass production of Lilium spp bulblets by the formation of shoot clusters and the addition of liquid medium}

본 발명은 나리의 기내배양시 신초의 유기, 증식 및 액체 배지 첨가에 의한 우량 자구의 대량생산 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 벤질아데닌 0.5~2.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계, 상기 유기된 신초로부터 벤질아데닌 0.5~1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 신초 덩어리를 증식시키는 단계, 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2~3배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 200~300 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계 및 2~3배 MS 배지 염류 및 수크로스 150~200 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함하는 나리 자구의 기내 대량생산 방법과 상기 방법에 의해 생산된 나리 자구에 관한 것이다.

나리 자구의 관행적인 조직배양은 기내에 치상된 인편에서 자구를 생산하고, 생산된 자구의 인편을 분할하여 계대배양하며, 다시 여러 개의 자구를 생산하는 과정(계대배양)을 반복함으로써 구근을 획득하는 방법이다. 이 방법을 이용할 경우 1인이 하루에 800개 정도의 절편체를 배양할 수 있으며, 배양된 절편체에서 불과 2~3개 정도의 자구가 생산되는 등 생산효율이 낮을 뿐만 아니라 배양노력과 시간이 과다하게 투입되어 자구 생산비가 높다. 또한 나리구근 외부의 큰 인편을 배양하면 생산되는 자구의 크기가 크나 내부의 작은 인편을 사용하면 생산되는 자구의 크기가 작아 결국 전체적으로 균일한 자구를 생산하기 어렵다는 단점이 있다.

한편 저반부 배양에 의한 나리 자구의 대량번식 방법은 이상비대된 저반부를 증식시키고, 증식된 저반부 절편을 분할하여 비대 배지에서 배양함으로써 정상적인 자구를 생산하는 것으로서 인편 배양보다는 크고 균일한 자구를 생산할 수 있으나 저반부가 비대된 이상자구를 증식하고, 증식된 이상자구를 절단하여 비대 배지에서 자구를 육성시키기 때문에 자구를 절단하여 비대 배지로 이식하는 과정에 많은 작업노력과 시간이 투입된다. 결국 배양과정이 복잡하며 자구의 생산비가 높아지는 단점이 있다.

따라서 나리의 인편 유래 저반부 조직의 배양시 신초의 유기 증식을 위한 최적 배지를 개발하고, 또한 증식된 신초를 원래의 용기 내에서 연속적으로 배양하기 위한 첨가용 최적 액체 배지를 개발함으로써 총체적으로 나리 자구의 생산성을 높이는 것이 필요하다.

한국공개특허 제2008-0073388호에는 체세포배 세포를 급속 증식하여 나리 자구를 대량생산하는 방법이 개시되어 있다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 나리의 인편 유래 저반부 조직의 기내 배양시 신초의 유기, 증식 및 액체 배지 첨가에 의한 자구 생산 방법을 연구한 결과, 배양 노력과 시간이 절감되고 저비용 및 고효율의 자구 생산 방법을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계; 상기 유기된 신초로부터 신초 덩어리를 증식시키는 단계; 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계; 및 2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함하는 나리 자구의 기내 대량생산 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 생산된 나리 자구를 제공한다.

본 발명에 따르면, 나리의 관행적인 인편 조직배양에서는 1인이 하루 약 800개의 인편을 배양할 수 있고, 각 인편에서 2~3개의 자구가 형성되어 결국 1,600~2,400개의 자구를 생산할 수 있으나, 본 발명으로 신초 덩어리를 배양하면 1인이 하루 800개 신초 덩어리 절편을 배양할 수 있고 각각의 신초 덩어리에서 10~15개 정도의 자구가 형성되어 결국 자구 생산량이 8,000~12,000개(관행 대비 4~5배 이상)로 증가한다.

또한, 본 발명에서 일단 신초 덩어리를 획득한 후에는 이를 분할하여 계속적으로 일정기간 계대증식함으로써 양적으로 원하는 만큼 획득할 수 있으며, 증식 중인 동일용기에 일정량의 액체배지를 바로 첨가(2회)하여 연속 배양하는 것이기 때문에 배양노력과 시간이 절감되고 간편하다.

또한, 본 발명은 나리 우수품종의 대량증식을 통한 조기확대 보급에 효과적으로 활용될 수 있으며, 결과적으로 나리 종구의 자급, 로열티 경감, 수출 증대 등 나리산업 경쟁력 제고에 기여할 것이다.

도 1은 나리의 인편 유래 저반부 조직에서 유기된 신초로부터 신초 덩어리의 증식, 자구의 형성 및 자구의 비대를 나타낸 것이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은

나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계;

상기 유기된 신초로부터 신초 덩어리를 증식시키는 단계;

상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계; 및

2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함하는 나리 자구의 기내 대량생산 방법을 제공한다.

본 발명의 나리 자구의 기내 대량생산 방법은 구체적으로,

(1) 벤질아데닌(BA) 0.5~2.0 mg/L 및 인돌아세트산(IAA) 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계;

(2) 상기 유기된 신초로부터 벤질아데닌 0.5~1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 신초 덩어리를 증식시키는 단계;

(3) 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2~3배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 200~300 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계; 및

(4) 2~3배 MS 배지 염류 및 수크로스 150~200 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 나리 자구의 기내 대량생산 방법은 1 단계로서, 벤질아데닌(BA) 0.5~2.0 mg/L 및 인돌아세트산(IAA) 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계를 포함한다. 상기 1 단계는 더욱 바람직하게는 벤질아데닌 1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 명배양하여 신초를 유기하는 것이다. 벤질아데닌 1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 신초수가 가장 많았다.

본 발명의 나리 자구의 기내 대량생산 방법은 2 단계로서, 상기 유기된 신초로부터 벤질아데닌 0.5~1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 신초 덩어리를 증식시키는 단계를 포함한다. 상기 2 단계는 더욱 바람직하게는 유기된 신초를 벤질아데닌 0.5 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 명배양하여 신초 덩어리를 증식하는 것이다. 벤질아데닌 0.5 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 신초 덩어리가 잘 증식되었다.

본 발명의 나리 자구의 기내 대량생산 방법은 3 단계로서, 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2~3배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 200~300 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계를 포함한다. 상기 3 단계는 더욱 바람직하게는 2배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 250 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 신초 덩어리가 증식된 배양용기에 첨가하여 10~12주 동안 암배양함으로써 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 것이다. 2배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 250 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하는 것이 자구의 형성 및 비대에 효과적이었다.

본 발명의 나리 자구의 기내 대량생산 방법은 4 단계로서, 2~3배 MS 배지 염류 및 수크로스 150~200 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함한다. 상기 4 단계는 더욱 바람직하게는 2배 MS 배지 염류 및 수크로스 180 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 소자구가 형성된 배양용기에 재첨가하여 8~10주 동안 암배양함으로써 소자구의 비대를 촉진시키는 것이다. 2배 MS 배지 염류 및 수크로스 180 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 첨가하여 배양하는 것이 자구의 형성 및 비대에 효과적이었다.

따라서, 본 발명의 나리 자구의 기내 대량생산 방법은 가장 바람직하게는

(1) 벤질아데닌 1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 인편 절편을 명배양하여 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계;

(2) 유기된 신초를 벤질아데닌 0.5 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 명배양하여 신초 덩어리를 증식시키는 단계;

(3) 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 250 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 10~12주 동안 암배양함으로써 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계; 및

(4) 2배 MS 배지 염류 및 수크로스 180 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 소자구가 형성된 배양용기에 재첨가하여 8~10주 동안 암배양함으로써 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함할 수 있다.

상기 방법에 기재된 조건일 때, 나리 자구의 생산 효율이 가장 좋은 것이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 나리( L. longiflorum cv . Georgia )의 인편 절편에서 신초의 유기

고체 배지에서 형성된 자구의 인편(bulb scale) 절편을 MS 기본 배지에 벤질아데닌(Benzyladenine) 0.2~2.0 mg/L 및 인돌아세트산(Indole aetic acid) 0.5 mg/L가 단용 또는 혼용 첨가된 배지에서 배양한 결과, 인편의 기부에서 신초가 유기되었다. 벤질아데닌 단용 첨가보다는 인돌아세트산과의 혼용 첨가에서 신초수가 더 많았으며, 혼용처리에 있어서 벤질아데닌 농도 간에는 0.2~1.0 mg/L에서 신초수가 많았다. 신초의 이상생장 발생은 벤질아데닌 1.0 mg/L + 인돌아세트산 0.5 mg/L 처리에서 가장 적었으며 그 다음으로 벤질아데닌 0.5 mg/L + 인돌아세트산 0.5 mg/L 처리에서 적었다(표 1). 따라서 벤질아데닌 1.0 mg/L와 인돌아세트산 0.5 mg/L가 혼용 첨가된 MS 배지에 인편 절편을 배양하여 신초를 유기하는 것이 효율적인 것으로 판단되었다.

벤질아데닌(BA) 및 인돌아세트산(IAA)이 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 6주 동안 배양 후의 나리의 인편에서 신초의 유기 결과.

처리 (mg/L)	신초의 수 /인편	신초의 길이 (cm)	생중량(fresh wt)/인편 (mg)	저반부(basal plates)의 이상생장^z
대조군	2.0 dc^w	1.8 a	167.9 cd	-
BA 0.2	2.2 bcd	2.0 a	109.3 efg	-
BA 0.2 + IAA 0.5	3.4 a	2.0 a	269.2 a	+
BA 0.5	2.3 bcd	1.5 b	167.5 cd	++
BA 0.5 + IAA 0.5	2.7 abc	1.3 bc	146.3 de	++
BA 1.0	1.7 d	0.7 e	60.3 g	++
BA 1.0 + IAA 0.5	2.8 ab	1.0 cde	125.6 def	+++
BA 2.0	1.8 d	0.8 de	84.4 fg	++
BA 2.0 + IAA 0.5	2.2 bcd	1.0 cde	124.5 def	++

^z -: 없음, +: 좋지않음, ++: 보통, +++: 좋음.

^w던칸의 다중범위검정(P≤0.05).

실시예 2: 형성된 신초에서 신초 덩어리의 증식

고체 배지에서 유기된 신초에서 신초 덩어리를 증식하기 위하여 MS 기본배지에 벤질아데닌 0.5~1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L가 단용 또는 혼용 첨가된 배지에서 배양한 결과 벤질아데닌 0.5mg/L 및 인돌아세트산 0.5mg/L가 혼용 첨가된 배지에서 신초 덩어리가 잘 증식되었다(표 2). 따라서 벤질아데닌 0.5mg/L와 인돌아세트산 0.5 mg/L가 혼용 첨가된 MS 배지에 형성된 신초를 배양하여 신초 덩어리를 증식하는 것이 효율적인 것으로 판단되었다(도 1).

벤질아데닌 및 인돌아세트산이 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 6주 동안 배양 후의 유기된 신초에서 신초 덩어리의 증식 결과.

처리 (mg/L)	신초의 수 /인편	신초의 길이 (cm)	생중량 /인편 (mg)
대조군	7.7 b^y	3.3 abc	102 b
BA 0.5	8.3 b	3.7 a	141 a
BA 0.5 + IAA 0.5	10.5 a	3.6 ab	148 a
BA 1.0	7.6 b	2.7 c	110 b
BA 1.0 + IAA 0.5	9.3 ab	3.1 bc	108 b

^y던칸의 다중범위검정 (P≤0.05).

실시예 3: 액체 배지 첨가에 의한 신초 덩어리의 자구 생산

신초 덩어리에서 정상적인 자구를 생산하기 위하여 신초 덩어리가 증식된 용기에 각각 25 mL의 액체배지를 1차로 첨가하여 12주간 암배양 하였다. 증식된 신초 덩어리에서 자구의 형성 및 비대는 액체 배지에 첨가되는 MS 염류 농도, 활성탄 및 수크로스 등에 따라 영향을 받았다.

증식된 신초 덩어리가 있는 용기에 첨가되는 액체 배지의 MS 염류 농도를 1~4배 달리하여 배양한 결과 MS 염류 농도는 자구 형성과 비대에는 크게 영향을 미치지 않았으나 2~3배 MS 염류가 함유된 액체 배지 처리구에서 양호한 편이었다. 전체적으로 볼 때 2배 MS 염류가 포함된 액체 배지가 경제적인 것으로 생각되었다(표 3).

MS 염류를 함유하는 25 mL의 1차 액체 배지^z를 첨가하여 12주 동안 암배양 후, 나리의 신초 덩어리^y에서 소자구의 형성과 비대에 대한 MS 염류 농도의 영향.

MS 염류 농도	소자구의 수 /신초 덩어리	직경(mm) /소자구	생중량(mg) /신초 덩어리	생중량(mg) /소자구
1x	11.0 a^w	5.3 a	1,867 a	67.1 b
2x	10.7 a	4.2 b	1,596 a	74.7 b
3x	11.8 a	4.5 ab	2,000 a	94.6 a
4x	7.8 b	4.6 ab	1,720 a	102.7 a

^z수크로스 100 g/L 및 활성탄 10 g/L 를 함유하는 배지.

^yBA 0.5 mg/L 및 IAA 0.5 mg/L 가 함유된 MS 배지에서 배양된 신초 덩어리.

^w던칸의 다중범위검정(P≤0.05).

증식된 신초 덩어리가 있는 용기에 활성탄 2.0~10.0 g/L가 함유된 액체 배지를 첨가하여 배양한 결과, 활성탄이 함유되지 않은 대조군에 비하여 활성탄이 함유된 액체 배지 첨가군에서 정상적인 자구 형성과 비대가 이루어졌다. 활성탄 농도 간에는 5~10 g/L가 함유된 액체 배지 첨가군에서 소자구의 수 및 소자구의 무게가 증가하였다(표 4).

활성탄을 함유하는 25 mL의 1차 액체 배지^z를 첨가하여 12주 동안 암배양 후, 나리의 신초 덩어리^y에서 소자구의 형성과 비대에 대한 활성탄의 영향.

활성탄(g/L)	소자구의 수 /신초 덩어리	직경(mm) /소자구	생중량(mg) /신초 덩어리	생중량(mg) /소자구
0.0	11.0 a^w	3.8 b	1,498 a	71.7 ab
2.0	9.9 a	4.4 ab	1,557 a	68.5 b
5.0	10.2 a	4.7 a	1,489 a	80.0 a
10.0	10.3 a	4.5 a	1,737 a	77.7 a

^z수크로스 100 g/L 및 full strength MS 염류를 함유하는 배지.

^yBA 0.5 mg/L 및 IAA 0.5 mg/L 를 함유하는 MS 배지에서 배양한 신초 덩어리.

^w던칸의 다중범위검정 (P≤0.05).

증식된 신초 덩어리가 있는 용기에 액체 배지를 첨가하여 배양한 후 수크로스의 농도별 자구의 형성 및 비대에 미치는 영향을 조사하였다. 소자구의 수, 자구 직경, 자구 무게는 수크로스의 농도가 증가할수록 증가하였으며 수크로스 250 g/L가 함유된 액체 배지를 첨가하는 것이 자구의 형성 및 비대에 효과적이었다(표 5).

수크로스를 함유하는 25 mL의 1차 액체 배지^z를 첨가하여 12주 동안 암배양 후, 나리의 신초 덩어리^y에서 소자구의 형성과 비대에 대한 수크로스 농도의 영향.

수크로스 (g/L)	소자구의 수 /신초 덩어리	직경(mm) /소자구	생중량(mg) /신초 덩어리	생중량(mg) /소자구
100	10.5 b^w	5.0 a	1,836 a	78.5 bc
150	14.1 a	4.9 a	2,532 a	66.5 c
200	14.2 a	4.7 a	1,885 a	83.2 b
250	13.1 a	5.0 a	1,902 a	92.3 a

^zfull strength MS 염류 및 활성탄 10.0 g/L 을 함유하는 배지.

^yBA 0.5 mg/L 및 IAA 0.5 mg/L 를 함유하는 MS 배지에서 배양된 신초 덩어리.

^w던칸의 다중범위검정 (P≤0.05).

1차 액체 배지 첨가로 형성된 자구의 비대를 촉진시키기 위해, 배양 12주 후 동일용기에 2차 액체 배지를 첨가하여 8주간 암배양하였다. 형성된 자구가 있는 용기에 첨가되는 2차 액체 배지의 MS 염류 농도를 1~3배 달리하여 배양한 결과 MS 염류 농도는 자구 형성과 비대에는 크게 영향을 미치지 않았으나 2~3배 MS 염류가 함유된 액체 배지 처리구에서 양호한 편이었다(표 6). 따라서 2배 MS 염류가 포함된 액체 배지가 경제적인 것으로 생각되었다.

MS 염류를 함유하는 25 mL의 2차 액체 배지^z를 첨가하여 8주 동안 암배양 후, 나리의 소자구 덩어리^y에서 소자구의 형성과 비대에 대한 MS 염류 농도의 영향.

MS 염류 농도	소자구의 수 /신초 덩어리	직경(mm) /소자구	생중량(mg) /신초 덩어리	생중량(mg) /소자구
1 x	12.6 a^w	6.4 a	1,939 a	141.0 b
2 x	13.7 a	6.8 a	1,889 a	156.3 a
3 x	14.4 a	6.1 a	2,019 a	154.8 a

^z수크로스 100 g/L를 함유하는 배지.

^y신초 증식을 위한 BA 0.5 mg/L 및 IAA 0.5 mg/L를 함유하는 MS 배지에 1차 액체 배지 25 mL의 첨가에 의해 형성된 소자구 덩어리.

^w던칸의 다중범위검정 (P≤0.05).

형성된 자구가 있는 용기에 2차 액체 배지를 첨가하여 배양한 후 수크로스 농도별 자구의 형성 및 비대에 미치는 영향을 조사한 결과 수크로스의 농도가 증가할수록 자구 무게가 증가하였으며(표 7), 전체적으로 볼 때 수크로스 180 g/L가 함유된 액체 배지를 첨가하여 배양하는 것이 자구의 형성 및 비대에 효과적이었다.

수크로스를 함유하는 25 mL의 2차 액체 배지^z를 첨가하여 8주 동안 암배양 후, 나리의 소자구 덩어리^y에서 소자구의 형성과 생장에 대한 수크로스 농도의 영향.

수크로스 (g/L)	소자구의 수 /신초 덩어리	직경(mm) /소자구	생중량(mg) /신초 덩어리	생중량(mg) /소자구
90	12.2 a^w	6.5 a	1,715 a	140.4 b
120	11.7 a	6.3 a	1,789 a	152.4 b
150	10.3 a	5.7 a	2,142 a	214.5 a
180	11.9 a	6.6 a	2,219 a	187.5 a

^zfull length MS 염류를 함유하는 배지

^y신초 증식을 위한 BA 0.5 mg/L 및 IAA 0.5 mg/L를 함유하는 MS 배지에 1차 액체 배지 25 mL 의 첨가에 의해 형성된 소자구 덩어리.

^w던칸의 다중범위검정 (P≤0.05).

Claims

(1) 벤질아데닌 0.5~2.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계;
(2) 상기 유기된 신초로부터 벤질아데닌 0.5~1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.3~0.7 mg/L 가 단용 또는 혼용 첨가된 MS 배지에서 신초 덩어리를 증식시키는 단계;
(3) 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2~3배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 200~300 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계; 및
(4) 2~3배 MS 배지 염류 및 수크로스 150~200 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 재첨가하여 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함하는 나리 자구의 기내 대량생산 방법.
제1항에 있어서, 상기 (1) 단계는 벤질아데닌 1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 명배양하여 신초를 유기하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 (2) 단계는 유기된 신초를 벤질아데닌 0.5 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 명배양하여 신초 덩어리를 증식하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 (3) 단계는 2배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 250 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 신초 덩어리가 증식된 배양용기에 첨가하여 10~12주 동안 암배양함으로써 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 (4) 단계는 2배 MS 배지 염류 및 수크로스 180 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 소자구가 형성된 배양용기에 재첨가하여 8~10주 동안 암배양함으로써 소자구의 비대를 촉진시키는 것을 특징으로 하는 방법.
(1) 벤질아데닌 1.0 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 인편 절편을 명배양하여 나리의 인편 유래 저반부 조직으로부터 신초를 유기하는 단계;
(2) 유기된 신초를 벤질아데닌 0.5 mg/L 및 인돌아세트산 0.5 mg/L 가 첨가된 MS 배지에서 6~8주 동안 명배양하여 신초 덩어리를 증식시키는 단계;
(3) 상기 증식된 신초 덩어리가 있는 배양용기에 2배 MS 배지 염류, 활성탄 5~10 g/L 및 수크로스 250 g/L를 함유한 1차 액체 배지를 첨가하여 10~12주 동안 암배양함으로써 소자구의 형성 및 비대를 유도하는 단계; 및
(4) 2배 MS 배지 염류 및 수크로스 180 g/L를 함유한 2차 액체 배지를 소자구가 형성된 배양용기에 재첨가하여 8~10주 동안 암배양함으로써 소자구의 비대를 촉진시키는 단계를 포함하는 나리 자구의 기내 대량생산 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 나리 자구.