KR20110054488A - 헬리코박터 파이로리균에 항균 활성을 가지는 싸리류 추출물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 헬리코박터 파이로리균에 강한 항균 활성을 가지는 천연물 추출물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 천연물 중에서 싸리류(lespedeza)로부터 추출한 추출물을 이용하는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 싸리류 추출물은 헬리코박터 파이로리균에 강한 항균활성을 보이며, 위상피세포에 위해를 주지 않아, 각종 위장 점막 감염으로 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 건강기능식품 및 약제학적 조성물로서 유용하게 이용될 수 있다.
싸리류, 추출물, 헬리코박터 파이로리균, 항균 활성
Description
본 발명은 헬리코박터 파이로리균에 강한 항균 활성을 가지는 천연물 추출물에 관한 것이다.
최근 우리나라 사람에게 발생하는 암 중에서 위암이 차지하는 비율이 20.3%이며 (Korean Central Center Registry, 2003), 우리나라 사람에게 위암발생률이 높은 것은 식생활환경 등 여러 요인에 기인하겠으나, 위염 원인균인 헬리코박터 파이로리 (Helicobacter pylori)에 의한 감염도 그 중요한 요인 중 하나이다. 위염, 위궤양, 소화성 궤양, 위암 등의 발생과 밀접하게 관련된 것으로 알려진 헬리코박터 파이로리의 감염 현황은 만 19세 이상 성인의 57.8%로 미국이나 호주의 감염 현황보다도 훨씬 높은 편이다(Cover & Blaser, ASM News 61: 21-26. 1995).
헬리코박터 파이로리에 감염되면 위점막 세포에서 TNF-α, IL-6, IL-1α, β가 분비되고, 가장 두드러진 현상으로 IL-8 분비가 급증한다. TNF-α, IL-6, IL-1 α, β의 분비는 논란이 많지만 IL-8의 생성을 유도하는 것으로 알려져 있다. 과거부터 위질환 환자에서 항 IL-8 IgA의 분비가 많다는 것이 보고되었으며, 최근 헬리코박터 파이로리에 감염된 사람의 위점막에는 IL-8의 분비가 감염되지 않은 사람에 비하여 많다는 것을 관찰되었고, IL-8은 중성구 침윤과 활성에 관여하는 chemokine이라 점이 밝혀져 헬리코박터 파이로리의 감염에 의한 염증반응을 촉발 유지시키는 결정적인 인자로 확인되었다.
상술한 바와 같이, 헬리코박터 파이로리가 위장질환에서 매우 위험한 미생물이지만 천연소재를 이용한 적절한 항균물질 등 개발이 부족한 실정이다. 현재 헬리코박터 파이로리 치료법으로는 bismuth 제제와 metronidazole과 함께 tetracycline 또는 amoxicillin을 이용하는 일반적인 3중요법과 bismuth제제, omeparazole, tetracycline과 metronidazole을 혼합한 4중요법등이 헬리코박터 파이로리에 우수한 치료효과를 나타낸다고 보고되고 있으나, 항생제 투여에 의한 내성균주 출현 및 위내에서의 약물의 침투성과 치료 후에 다시 성장이 억제되어 있던 균이 재증식하는 문제가 지적되고 있다. 이런 이유로 헬리코박터 파이로리에 특이적인 항균물질을 탐색하려는 수많은 노력이 이루어 졌으며, 최근에는 식물류에 들어 있는 생리활성 성분에 대한 관심이 높아지고 있으며 이들의 생체 조절 기능 및 질병의 회복이나 예방 등에 관한 가능성이 제시되어 왔다. 최근 백리향, 중국차, Cashew apple, 소목과 황련 등 여러 천연물의 헬리코박터 파이로리에 대한 항균활성이 보고되었으나 아직은 연구가 미진한 실정이다. 따라서, 식용민속자원, 그 중 자원이 많고 쉽게 구할 수 있는 식용민속자원으로부터 헬리코박터 파이로리에 대한 항균소재 발굴 은 테트라사이클린 등 항생제를 대체할 중요한 소재이다.
싸리류(lespedeza)는 매우 다양한 종이 존재하다. 우리나라의 싸리속 식물은 산과 들에서 흔히 자라는 식물로. 높이 2∼3m 정도 자란다. 줄기는 곧게 서고 가지가 많이 갈라지며, 잎은 어긋나게 난다. 턱잎은 가늘고 길며 짙은 갈색이고 길이 약 5 mm이다. 작은잎은 달걀 모양이거나 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이다. 겉면은 짙은 녹색이며 뒷면에 눈털이 나고 가장자리가 밋밋하다.
꽃은 7∼8월에 붉은 자줏빛으로 피고 잎겨드랑이에 총상꽃차례로 달린다. 꽃받침은 얕게 4개로 갈라지고 뒤쪽의 1개는 다시 2개로 갈라지며 끝이 뾰족하다. 꼬투리는 넓은 타원형이고 끝이 부리처럼 길며 1개의 종자가 들어 있고 10월에 익는다. 종자는 신장 모양이며 갈색 바탕에 짙은 점이 있다. 번식은 종자나 포기나누기로 한다. 싸리는 겨울에는 땔감으로 쓴다. 잎은 사료, 줄기에서 벗긴 껍질은 섬유자원으로 이용하기도 한다. 새로 자란 줄기는 농촌에서 여러 가지 세공을 하는 데 쓰고 비도 만든다. 한국ㅇ일본ㅇ중국ㅇ우수리강 등지에 분포한다. 그러나, 상기 싸리류 추출물의 헬리코박터 파이로리균에 대한 항균력 및 위상피세포에 대한 항염증효과에 대해서는 알려진 바가 없다.
가장 이상적인 헬리코박터 파이로리균에 대한 항균제는 항균 역할 뿐 아니라 위상피세포에 자극을 주지 않는 것이다. 이에 본 발명의 발명자는 위장을 위해하지 않으면서, 헬리코박터 파이로리균에 항균효과가 우수한 천연항균 소재를 개발하던 중 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명은 헬리코박터 파이로리균에 강한 항균활성을 가지면서, 위상피세포에 위해를 주지 않아, 각종 위장 점막 감염으로 유발되는 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있는 천연물 추출물을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명은 상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 싸리류(lespedeza)로부터 추출한 추출물을 이용하는 것을 특징으로 한다.
상기 싸리류는 산과 들에서 흔히 볼 수 있으며, 줄기는 곧게 서고 가지가 많이 갈라진다. 잎은 어긋나고 3장의 작은잎이 나온 잎이다. 턱잎은 가늘고 길며 짙은 갈색이고 길이 약 5mm이다. 작은잎은 달걀 모양이거나 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이다. 겉면은 짙은 녹색이며 뒷면에 눈털이 나고 가장자리가 밋밋한 것이 특징이다. 상기 싸리류는 그 종류가 매우 다양하며, 본 발명에서는 그 종류가 특별히 제한되는 것은 아니나, 참싸리, 조록싸리, 비수리, 올싸리 및 싸리로 이루어진 군에서 하나를 선택하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명에 따른 싸리류 추출물은 특히 헬리코박터 파이로리균에 대해 강한 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 한다. 상기 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)균는 몇 개의 편모를 가지고 있는 나선형 세균이며, 증식 속도가 느리고 움직임이 빠른 것이 특징이다. 요소분해효소(urease)를 가지고 있는데, 이는 세균이 위장점막에서 살아가는 데 필수적인 구성 성분이다. 헬리코박터 파이로리균은 위장점막에 주로 감염되어 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위선암, 위림프종 등을 유발하는 원인으로 작용한다.
본 발명에 따른 싸리류 추출물은 추출용매로서 추출효율이 가장 높은 에탄올을 사용하는 것이 바람직하나, 이에 특별히 국한되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 추출용매라면 어느 것을 사용하여도 무방하다. 상기 에탄올은 40 내지 60% 에탄올을 사용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 50% 에탄올을 사용할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 상기 싸리류 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 파이로리균의 위장 점막 감염으로 유발되는 질환 예방용 건강기능식품에 관한 것이다. 상기 헬리코박터 파이로리균의 위장 점막 감염으로 유발되는 질환에는 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위선암, 위림프종 등이 있다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 또한, 위장 질환 예방 및 개선 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 25 중량 %로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 5g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 싸리류 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 또 다른 양태는 상기 싸리류 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 파이로리균의 위장 점막 감염으로 유발되는 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다. 상기 헬리코박터 파이로리균의 위장 점막 감염으로 유발되는 질환에는 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위선암, 위림프종 등이 있다.
본 발명의 싸리류 추출물을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물은 싸리류 추출물에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가하여 약제학적 단위 투여형으로 제형화되어 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 약제학적 단위 투여형의 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등 경구 투여용 제형, 멸균 주사용액, 좌제 및 경피 투여용 제제로 제형화하여 사용될 수 있다. 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제형화한다.
한 양태로서, 본 발명의 싸리류 추출물을 함유하는 조성물은 경구 투여용 고상 제제로 제형화 할 수 있다. 경구 투여를 위한 고상 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되는데, 이러한 고상 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
다른 양태로서, 본 발명의 싸리류 추출물을 함유하는 조성물은 경구 투여용 액상 제제로 제형화하여 사용될 수도 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 이러한 액상 제제에는 통상적으로 사용되는 불활성 희석제 (예를 들면, 정제수, 에탄올, 리퀴드 파라핀) 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또 다른 양태로서, 본 발명의 싸리류 추출물을 함유하는 조성물은 비경구, 바람직하게는 복강 내 투여를 위한 제제로 제형화될 수도 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 멸균된 수용액으로는 한스 용액(Hank's solution), 링거 용액(Ringer's solution) 또는 물리적으로 완충된 염수와 같은 적절한 완충용액을 이용할 수 있으며, 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 이용될 수 있다. 필요에 따라 방부제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 이용할 수도 있다. 한편, 좌제의 경우에는 이의 통상적인 기제인 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기와 같은 방법으로 제형화된 조성물은 유효량으로 비경구 또는 경구 (경피, 피하, 정맥, 근육, 복강 등)를 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 상기에서"유효량"이란 환자에게 투여하였을 때, 예방 또는 치료 효과를 나타내는 양을 말한다. 본 발명에 따른 조성물의 투여량은 투여 경로, 투여 대상, 연령, 성별, 체중, 개인차 및 질병 상태에 따라 적절히 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으나, 바람직하게는 0.001~10000㎍/체중kg/day로 투여될 수 있다. 보다 바람직하게는, 0.001 내지 1000mg/kg 의 양으로 투여된다.
본 발명의 싸리류 추출물은 헬리코박터 파이로리균에 강한 항균활성을 보이며, 위상피세포에 위해를 주지 않아, 각종 위장 점막 감염으로 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 건강기능식품 및 약제학적 조성물로서 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 상세히 설명하도록 한다. 하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 일 예에 지나지 않으며, 이에 의하여 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
<실시예>
1. 헬리코박터균에 대한 싸리류 추출물의 항균력 실험
(1) 균주 배양
실험에 사용한 균주는 위, 십이지장 궤양 원인균인 헬리코박터 파이로리 26695 (ATCC 700392)로서 경상대학교 의학대학 미생물실에서 분양을 받아 사용하였다. 균의 배양은 10% 양 혈청(sheep serum) 의 Mueller-Hinton agar (BBL) base plates에 접종하여 37℃의 미세호기 상태 (10% CO2)에서 48시간 동안 배양하였다.
(2) 싸리류(참싸리, 조록싸리, 비수리
,
올싸리
,
싸리)의 추출물 제조
건조된 5종의 싸리류인 참싸리, 조록싸리, 비수리, 올싸리, 싸리를 각각 음건하고 파쇄 하였다. 그런 다음, 상기 파쇄된 5종의 싸리류 각각에 대해 싸리류 50g 과 1L의 50% 에탄올을 같은 용기에 넣고 48시간 동안 추출한 후 중력 여과하여 액상만 남 긴 후 최대 45℃에서 압력 감소 Rotary evaporator로 건조시킨 후 다시 추출용매 DMSO를 이용해 100 mg/ml로 녹였고, 추출 용액(100 mg/ml)을 0.2㎛ 멤브레인 필터(MA 01730, USA)로 멸균하여 무균 상태로 만들어 5종의 싸리류 추출물을 제조하였다.
(3) 디스크확산법(Disc Agar Diffusion)에 의한 항균활성 검정
디스크확산법은 brucella agar 배지 plate에 헬리코박터 파이로리균액 (1×107CFU/mL) 100 uL를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말한 다음, 멸균된 disc paper (Φ 8 mm)를 올리고, 상기 (2)에서 멤브레인 필터 (0.45 um)로 제균한 5종의 싸리류 추출물을 각각 10 uL씩 disc paper에 흡수시키고, 대조구로는 50% ethanol을 흡수 시킨 후 37℃의 CO2 인큐베이터에서 48시간 동안 배양한 다음, 디스크 주위의 억제환 (clear zone) 생성 유무를 확인하였다. 이때 양성 대조군은 항생제인 젠타마이신을 사용하여 37℃의 인큐베이터에서 48 시간 배양 후 항균력을 측정하였다.
그 결과 도 1에 나타난 바와 같이, 상기 5종의 싸리류 추출물은 헬리코박터균에 강한 항균활성을 보였다. 싸리류 추출물은 항균활성 폭이 11.89 mm에서 19,14 mm 정도의 범위를 나타내었으며, 그 중 참싸리 (L. cyrtobotrya) 와 조록싸리(L. maximowiczii)의 추출물이 헬리코박터 파이로리균에 대해 강한 항균활성을 보였다. 그리고 본 발명의 실시예에서는 명시하지 않았지만, 타 식물체에 비해 탁월한 항균활성을 보였다. 대조구로 사용된 항생제 젠타마이신에 비해서는 활성이 약하지만 식물 추출물로서는 매우 강한 활성을 보여 항균제 개발 가능성이 높게 나타났다.
2. 농도별 싸리류 추출물의 최저억제농도 및 항균특성 구명
상기 5종의 싸리류 추출물 중 참싸리, 조록싸리, 싸리 및 비수리 추출물에 대하여 추출물 농도별 항균활성을 검정 하였다. 추출물 추출용매 및 헬리코박터 파 이로리균 항균활성 디스크확산법은 상기 1.과 동일한 방법으로 시행하였다. 추출용매 DMSO로 추출하였으며, 항균활성을 검정하는 디스크확산법은 싸리류 추출물 농도 100, 50, 25, 12.5, 그리고 6.25 mg/ml로 조제하여 6, 12, 24, 그리고 48시간 후에 항균력을 측정하였으며, 그 결과는 도 2에 나타난 바와 같다.
도 2에 의하면, 4종의 싸리류 추출물 모두 농도 의존적으로 헬리코박터균에 강한 항균활성을 보였다. 상기 4종의 싸리류 추출물은 처리 후 6시간 경과 이전까지는 헬리코박터균에 대해 강한 항균력을 보였으며, 그 이후부터는 48시간까지 계속 항균력이 지속되는 것을 확인할 수 있다.
3. 위상피세포에서 IL-8 생성 여부의 검정 실험
(1) IL- 8 (Interleukin-8) 생성 측정
IL- 8의 측정에 사용된 위상피세포는 인체 위상피세포주(ATCC CRL 1739; human gastric adenocarcinoma epithelial cell line)를 사용하였다.
상기 위상피세포주는 10%의 태아 소혈청(fetal bovine serum), 100 U/ml의 페니실린(penicillin) 및 100 g/ml의 스트렙토마이신(streptomycin)이 첨가된 RPMI-1640 (Sigma) 배지에서 37℃, 10% CO2 인큐베이터에서 배양되었다.
IL- 8 (Interleukin-8)의 생성을 측정하기 위해 감염되지 않은 AGS cell, 대 조구로 헬리코박터 파이로리를 접종시킨 것과, 상기 5종의 싸리류 추출물을 각각 100 mg/ml씩 처리하여 배양 상층액에서 IL-8 수치를 double-Ab ELISA kit를 사용하여 측정하였다.
그 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 상기 5종의 싸리류 추출물 중 풀싸리와 조록싸리의 추출물이 다른 종에 비해 IL- 8 (Interleukin-8) 생성이 가장 낮았다. 두 수종은 IL- 8 (Interleukin-8) 생성이 대조구에 비해 98% 낮은 수치를 나타냄을 확인할 수 있다.
4. 싸리류 추출물로부터 활성물질의 분리
활성 획분의 조제를 위해 싸리류 중 참싸리 10kg을 파쇄하여 에탄올/물 (1 : 1 v/v) 혼합용액에서 1 시간 동안 초음파 추출하고, 2일간 상온에서 침적 후 3회 반복 추출한 다음 합한 추출액을 감압농축기를 사용하여 농축하였다. 상기 농축한 농축물을 분액 깔대기에 n-핵산과 에탄올로 층분리하여 상층의 핵산 가용부를 취한 후 버리고, 하층의 에탄올층을 농축하여 이 농축액을 에틸아세테이트와 물로 다시 분획하고 에틸아세테이트로 3회 반복 추출하여 혼합한 후 다시 농축하여 에틸아세테이트 분획을 얻는다. 활성분획을 정제하기 위해 추출물을 플레이트에 점적하고 t-butanol : acetic acid : water = 3:1:1 (v/v/v) 용액을 용매로 하여 분획하였다. 254nm: a354 nm:자외선을 조사하여 밴드를 연필로 표시하고 분취하였다. 실리카 분말은 미세하게 파쇄하고 다시 DMSO로 추출하였으며, 상기 언급한 디스크확산 법으로 항균력을 측정하였다(도 4 참조).
도 4에 의하면, 싸리나무의 활성물질은 에탄올 추출물에서 1,060 g, 에틸 아세테이트(ethyl acetate) 추출물 층에서 105g, 박층크로마토그라피 결과 30 g의 추출물을 얻을 수 있었다.
또한, 상기 언급한 방법으로 분리정제한 결과 싸리류 추출물의 활성물질은 6개의 주물질로 분리되었다 (도 5 참조). 상기 6개의 주 물질은 Rf 값이 0.13에서 0.77에 이르며, 반복 분리 결과 같은 물질임을 확인할 수 있었고, 단일 물질임이 확인되었다. 따라서, 싸리류 추출물의 항균물질은 sephadex 등 레진을 이용한 정제 과정 및 고성능 크로마토그라피 (HPLC) 등 추가 정제 과정 없이 본 발명에 따른 실시예에서의 액체크로마토그라피방법에 의해서도 항균물질을 용이하게 분리할 수 있었다.
5. 분리된 활성물질의 항균력 조사
상기 4.에서 분리된 6종의 물질에 대한 항균력 조사는 상기 1.의 디스크확산법(Disc Agar Diffusion)으로 수행하였으며, 그 결과는 하기 [표 1]에 나타난 바와 같다.
[표 1] 참싸리 추출물로부터 분리된 6종의 물질의 헬리코박터 파이로리에 대한 항균활성
| 분리된 화합물 | 항균활성 (생육억제환 (mm) |
| Ⅰ | -** |
| Ⅱ | - |
| Ⅲ | 11.2 ± 0.4 |
| Ⅳ | - |
| Ⅴ | 12.1 ± 1.1 |
| Ⅵ | 10.0 ± 1.1 |
상기 [표 1]에 의하며, 상기 분리된 6종의 물질 중 항균활성이 있는 물질은 III, V, VI이었으며, 각각의 항균력은 III번 물질에서 11.2 mm, V번 물질에서 12.1 mm, VI번 물질에서 10.0 mm의 억제환을 보였다.
이상에 설명한 바와 같이, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 상기의 상세한 설명보다는 후술할 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
도 1은 싸리류 추출물의 헬리코박터 파이로리균에 대한 항균활성을 나타내는 그래프에 관한 것으로, 사용된 싸리류는 참싸리 (L. cyrtobotrya), 조록싸리 (L. maximowiczii), 비수리 (L.cuneata), 싸리 (L. bicolor), 올싸리 (L. thunbergii)이다.
도 2는 싸리류 추출물의 농도에 따른 헬리코박터 파이로리균에 대한 항균활성을 검정한 결과를 나타내는 그래프에 관한 것으로, 본 검정에 사용된 싸리류는 A:참싸리, B:조록싸리, C:싸리 D: 비수리 (L.cuneata)이다.
도 3은 싸리류 추출물의 항균활성분획물 100 mg/ml 농도에 따른 IL-8의 생성 수치를 나타낸 것으로, 본 실시예에 사용된 싸리류 추출물은 참싸리 (L. cyrtobotrya), 조록싸리 (L. maximowiczii), 비수리 (L.cuneata), 싸리 (L. bicolor), 올싸리 (L. thunbergii)의 5종이다.
도 4는 참싸리 추출물로부터 활성물질을 추출하는 과정을 나타낸 것이다.
도 5는 참싸리 추출물의 박층크로마토그라피에 의해 분리된 항균물질을 나타낸 것이다.
Claims (7)
- 싸리류로부터 추출한 항균활성을 가지는 추출물.
- 제 1항에 있어서,상기 싸리류는 참싸리, 조록싸리, 비수리, 올싸리 및 싸리로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 추출물.
- 제 1항에 있어서,상기 항균활성은 헬리코박터 파이로리균에 대한 항균활성인 것을 특징으로 하는 추출물.
- 제 1항에 있어서,에탄올을 용매로 하여 추출되는 것을 특징으로 하는 추출물.
- 제 4항에 있어서,상기 에탄올은 40 내지 60% 에탄올인 것을 특징으로 하는 추출물.
- 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 파이로리균의 위장 점막 감염으로 유발되는 질환의 예방용 건강기능식품.
- 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 파이로리균의 위장 점막 감염으로 유발되는 질환 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
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