KR20100080769A - 과민성 반응의 조절자 - Google Patents

과민성 반응의 조절자 Download PDF

Info

Publication number
KR20100080769A
KR20100080769A KR1020107006255A KR20107006255A KR20100080769A KR 20100080769 A KR20100080769 A KR 20100080769A KR 1020107006255 A KR1020107006255 A KR 1020107006255A KR 20107006255 A KR20107006255 A KR 20107006255A KR 20100080769 A KR20100080769 A KR 20100080769A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
glu
ala
domain
gly
Prior art date
Application number
KR1020107006255A
Other languages
English (en)
Inventor
디에고 실바
데이비드 리나레스 반딘
피터 제이 밀번
Original Assignee
마일렉사 피티와이 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2007904591A external-priority patent/AU2007904591A0/en
Application filed by 마일렉사 피티와이 리미티드 filed Critical 마일렉사 피티와이 리미티드
Publication of KR20100080769A publication Critical patent/KR20100080769A/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/14—Decongestants or antiallergics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

본 발명은 Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는, 면역 반응을 조절하기 위한 펩티드에 관한 것이다.

Description

과민성 반응의 조절자{MODULATORS OF HYPERSENSITIVITY REACTIONS}
본 발명은 비만 세포 활성화의 조절자와, 특히 과민성 질환 및 장애의 치료 및 예방에서의 이들의 용도에 관한 것이다. 더욱 자세하게는, 본 발명은 비만 세포 활성화를 억제 및/또는 예방할 수 있는 단백질 및 펩티드에 관한 것이다.
과민성 관련 장애의 발병은 산업화된 세계에서 지난 수십 년간 급격히 증가하였다. 특히, 과민성 관련 장애의 가장 일반적인 유형인 IgE 매개의 과민증은 이미 개발도상국 인구 중 25%가 넘는 인구에 영향을 미쳤다.
과민성 반응은 부적절하게 작용하는 면역 반응의 결과이며 많은 항원에 의해 일어날 수 있다. 이들은 몇몇 세포 유형에 의해 방출되는 염증 매개체 배합으로 생성된다. 과민증의 한 형태는 IgE 반응이 꽃가루나 먼지 진드기와 같은 무해한 환경 항원에 대하여 지시되는 경우 발생한다. IgE-감작화된 비만 세포에 의하여 생성된 약리학적 매개체의 방출은 천식이나 비염과 같은 징후를 지닌 급성 염증 반응을 생성시킨다. 기도 염증은 천식의 발병기전에 중추적이며, 폐 조직 및 기관지폐포 공간으로의 비만 세포, 호산구, 중성구 및 림프구의 동원 및 활성화를 수반한다.
비만 세포는 과민성 반응의 주요 효과자 중 하나로 여겨진다. 이들 세포는 혈관, 신경, 점막 표면 및 피부에 아주 근접하여 신체에 분포되어 있다. 이들 부위에서, 일부 염증 매개체를 방출하는 이들의 능력에 의해 이들은 알레르기항원을 감지하고, 알레르기 반응의 가장 초기 단계를 개시하도록 위치되어 있다. 비만 세포는 알레르기 반응과 천식의 발생을 초래하는 면역글로불린인 IgE에 특이적인 수용체를 발현하기 위한 신체의 유일한 세포이다.
비만 세포는 다양한 자극에 의해 활성화될 수 있으나, 가장 특이적인 것은 세포 표면 상의 그의 고 친화성 수용체 (FcεRI)에 결합된 IgE와 항원의 상호 작용을 통한 것이다. FcεRIα-결합 IgE에 의한 항원 검출은 수용체 교차 결합과 이후에 동일한 수용체의 β 및 γ 서브유닛의 ITAM 모티브에서 티로신 잔기의 인산화를 유발한다. 결과적으로, FcεRI 수용체의 응집은 수많은 단백질 상호작용을 수반하는 복잡한 세포 내 경로의 활성화를 유도하고 결국 예비 형성된 과립의 방출 및 아이코사노이드, 사이토카인 및 케모카인의 분비를 유발한다. 비만 세포 활성화는 전형적으로 알레르기 및 아나필락시스 반응에서 관찰되는 전신 및/또는 국소 효과를 유발하는 일련의 생화학적 사건을 유발한다.
과민성 관련 장애의 치료에 사용되는 현재의 프로토콜은 주로 글루코코르티코이드와 다른 징후 경감 약제의 배합물을 포함한다. 직접적으로 비만 세포를 표적으로 하는 것보다는, 이들 치료는 다운스트림 염증 매개체의 효과를 간섭하는 데 목적을 둔다. 코르티코이드와 같은 항 염증 약물은 비 선택적인 방식으로 다양한 세포 작용에 영향을 미친다. 그러므로, 장기간의 스테로이드 치료법으로부터 발생하는 합병증은 이의 임상적 이용에 제한을 가한다.
과민성 관련 질환 및 장애의 치료를 위한 신규한 치료적 접근이 필요하다. 특히, 알레르기 반응과 관련된 염증 매개체의 방출을 조절하기 위하여 비만 세포를 표적으로 하는 새로운 치료적 접근법이 필요하다.
발명의 요약
본 명세서에 기술된 것은 비만 세포 활성화 및 과민성 반응의 발병에 수반되는 것으로 이전에 알려진 적이 없는 유전자이다. 이들 유전자에 의해 코딩된 단백질은 플렉스트린 호몰로지 (pleckstrin homology, PH), Src 호몰로지 2 (SH2), 또는 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인 중 적어도 하나를 포함한다. 이들 도메인은 비만 세포 표면에 존재하는 수용체와의 특이적인 상호작용을 통하여 비만 세포 활성화를 조절하는 것으로 여겨진다. 따라서, 본 발명의 특정 면 및 구체예는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 투여에 의한 비만 세포 활성화의 조절에 관한 것이다. 또한, 본 명세서에 기술된 것은 비만 세포 활성화를 조절할 수 있는 SH3 및/또는 PH 도메인 서열에 상응하는 펩티드이다. 본 명세서에 기술된 펩티드는 과민성 질환 및 장애를 치료 및 예방하는 수단을 제공한다.
첫 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 비만 세포 활성화 조절용 펩티드를 제공한다.
첫 번째 면의 일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 7의 아미노산을 포함한다.
첫 번째 면의 또 다른 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 8 또는 서열 번호 14-273 중 임의의 것의 아미노산을 포함한다.
첫 번째 면의 또 다른 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산을 포함한다.
첫 번째 면의 일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 10 또는 서열 번호 274-488 중 임의의 것의 아미노산을 포함한다.
첫 번째 면의 또 다른 구체예에서, 조절하는 것은 비만 세포 활성화를 억제한다.
두 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상의 비만 세포 활성화의 억제 또는 예방 방법을 제공한다.
두 번째 면의 일 구체예에서, 비만 세포 활성화는 IgE-매개이다.
두 번째 면의 또 다른 구체예에서, 비만 세포 활성화는 비 IgE-매개이다.
세 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
세 번째 면의 일 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 비만 세포 활성화를 포함한다.
세 번째 면의 또 다른 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 염증성 반응을 포함한다.
세 번째 면의 또 다른 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 장애일 수 있다. 호흡기 질환 또는 장애는 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)일 수 있다.
네 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 면역 반응의 조절 방법을 제공한다.
네 번째 면의 일 구체예에서, 단백질은 NEDD9이다.
네 번째 면의 일 구체예에서, 단백질은 PHLDA1이다.
다섯 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 비만 세포 활성화의 억제 또는 예방 방법을 제공한다.
여섯 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
여섯 번째 면의 일 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 비만 세포 활성화를 포함한다.
여섯 번째 면의 또 다른 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 염증성 반응을 포함한다.
여섯 번째 면의 추가의 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 장애를 포함하는 군으로부터 선택된다. 호흡기 질환 또는 장애는 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)일 수 있다.
일곱 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 면역 반응의 조절 방법을 제공한다.
다섯 번째, 여섯 번째 및 일곱 번째 면의 일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 7의 아미노산 서열 또는 변이체를 포함한다.
다섯 번째, 여섯 번째 및 일곱 번째 면의 추가의 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 8의 아미노산 서열 또는 변이체를 포함한다.
다섯 번째, 여섯 번째 및 일곱 번째 면의 추가의 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
다섯 번째, 여섯 번째 및 일곱 번째 면의 또 다른 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 12의 아미노산 서열 또는 변이체를 포함한다.
여덟 번째 면에서, 본 발명은 비만 세포 수용체에 대한
(i) NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인
(ii) PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 어느 하나의 결합을 억제하는 것을 포함하는 비만 세포 활성화의 억제 방법을 제공한다.
아홉 번째 면에서, 본 발명은 비만 세포 수용체에 대한
(i) NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인
(ii) PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 어느 하나의 결합을 억제하는 것을 포함하는 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
여덟 번째 및 아홉 번째 면의 일 구체예에서, 억제하는 것은 NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인 또는 PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 투여를 포함한다. 펩티드는 서열 번호 7 또는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 펩티드는 서열 번호 10, 서열 번호 11 및 서열 번호 12로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산을 포함할 수 있다.
열 번째 면에서, 본 발명은 과민성 질환 또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 용도를 제공한다.
열 번째 면의 일 구체예에서, 단백질은 NEDD9이다.
열 번째 면의 또 다른 구체예에서, 단백질은 PHLDA1이다.
열한 번째 면에서, 본 발명은 과민성 질환 또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 용도를 제공한다.
열한 번째 면의 일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 11 및 서열 번호 12로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
열 번째 및 열한 번째 면의 일 구체예에서, 과민성 질환 또는 장애는 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 장애로 구성된 군으로부터 선택된다. 호흡기 질환 또는 장애는 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)일 수 있다.
열두 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 과민성 질환 또는 장애의 치료용 단백질을 제공한다.
열세 번째 면에서, 본 발명은
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 과민성 질환 또는 장애의 치료용 펩티드를 제공한다.
열네 번째 면에서, 본 발명은
(a) 후보 제제와 단백질의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 후보 제제를 단백질과 접촉시키고,
(b) 단백질의 활성을 분석하는 것을 포함하는,
Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 활성을 조절하는 제제를 식별하는 방법을 제공한다.
열다섯 번째 면에서, 본 발명은
(a) 후보 제제와 단백질의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 다수의 후보 제제를 단백질과 접촉시키고,
(b) 단백질의 활성을 분석하는 것을 포함하는,
Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 활성을 조절하는 제제를 식별하기 위하여 다수의 후보 제제를 스크리닝하는 방법을 제공한다.
열네 번째 및 열다섯 번째 면의 일 구체예에서, 단백질은 NEDD9 또는 PHLDA1이다.
열네 번째 및 열다섯 번째 면의 또 다른 구체예에서, 단백질의 활성을 분석하는 것은 비만 세포 활성화의 수준을 측정하는 것을 포함한다.
열네 번째 및 열다섯 번째 면의 추가의 구체예에서, 후보 제제는 단백질의 작용제이다.
열네 번째 및 열다섯 번째 면의 다른 구체예에서, 후보 제제는 단백질의 작용제이다.
약어
BMMC 골수 유래 비만 세포
DEAE 덱스트란 디에틸아미노에틸 덱스트란
DNA 데옥시 리보 핵산
DNP-IgE 항-디니트로페놀 면역글로불린 E
dsRNA 이중-가닥 RNA
Fc 불변 단편
FcεRI Fc 엡실론 수용체 I, 고 친화성 IgE 수용체
FcεRIα 고 친화성 IgE 수용체의 α-서브유닛
FcγR Fc 감마 수용체
Fyn 티로신-단백질 키나아제 Fyn
IgE 면역글로불린 E
IgG 면역글로불린 G
IL-1O 인터루킨 10
ITAM 면역수용체 티로신-기초의 활성화 모티브
kg 킬로그램
LAMP-1 리소좀-관련 막 단백질-1
LAMP-2 리소좀-관련 막 단백질-1
Lck 림프구-특이적 단백질 티로신 키나아제
Lyn 티로신-단백질 키나아제 Lyn
m 미터
mg 밀리그램
mRNA 메신저 리보 핵산
NEDD9 신경 전구 세포-발현된 발달상 하향조절된 유전자 9
PH 플렉스트린 호몰로지
PHLDA1 플렉스트린 호몰로지-유사 도메인 패밀리 A 구성원 1
PHRIP 프롤린 및 히스티딘 풍부 단백질
RBL-2H3 세포 랫트 호염기성 백혈병 2H3 세포
RNA 리보 핵산
SDS-PAGE 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동
SH2 Src 호몰로지 2 도메인
SH3 Src 호몰로지 3 도메인
siRNA 작은 억제 RNA
TDAG51 T-세포사 관련 유전자 51
정의
다음은 본 발명의 설명을 이해하는 데 도움이 될 수 있는 몇 가지 정의이다. 이들은 일반적 정의로 의도되며, 본 발명의 범위를 이들 용어만으로 제한하는 것은 아니나, 다음 설명의 더 나은 이해를 위하여 기재하였다.
문맥상 달리 요구하거나 특별히 반대로 기술되지 않는 한, 본 명세서에 단수의 정수, 단계 또는 요소로 기재된 정수, 단계 또는 요소는 명확하게 기술된 정수, 단계 또는 요소의 단수 또는 복수의 형태를 포함한다.
본 상세한 설명에서, 문맥상 달리 요구하지 않는 한, 용어 "포함한다" 또는 포함" 또는 "포함하는"과 같은 변형체는 기재된 단계 또는 요소 또는 정수, 또는 단계 또는 요소 또는 정수의 그룹의 포함을 암시하나, 임의의 다른 단계 또는 요소 또는 정수, 또는 요소 또는 정수의 그룹을 배제하는 것이 아닌 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 본 상세한 설명의 문맥에서, 용어 "포함한다"는 "주로 포함하나 꼭 단독인 것은 아님"을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 "제제"는 임의의 천연 또는 제조된 요소 또는 화합물을 그 범위에 포함한다. 따라서, 용어는 임의의 화학 원소 및 화학 화합물, 핵산, 아미노산, 폴리펩티드, 단백질, 항체 및 항체의 단편 및 본 발명의 문맥에서 적절할 수 있는 다른 물질을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "조절하는", "조절" 및 이의 변형체는 조절 분자 또는 제제의 부재 하에서 이의 활성, 생성, 분비 또는 다른 작용의 수준에 비하여 본 발명의 특정 조절 분자 또는 제제의 존재 하에서 분자의 활성, 생성, 분비 또는 작용의 수준을 증가 또는 감소시키는 것을 말한다. 이들 용어는 증가 또는 감소의 정량화를 암시하는 것은 아니다. 조절은 원하는 결과를 생성하기에 충분한 임의의 세기일 수 있으며 직접적 또는 간접적일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역조절자"는 하나 이상의 세포 유형에 의해 분비되는 분자 매개체를 말하며, 이는 면역 반응의 활성화, 유지, 성숙, 억제, 저해 또는 증대에서 역할을 수행하는 분자를 말한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질"은
(a) 적어도 하나의 Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(b) 적어도 하나의 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(c) 적어도 하나의 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 하나 이상을 포함하는 단백질을 말한다.
따라서, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 하나 이상의 SH2 도메인만을 지니거나, 하나 이상의 SH3 도메인만을 지니거나, 하나 이상의 PH 도메인만을 지니거나, 하나 이상의 SH2 도메인 및 하나 이상의 SH3 도메인을 지니거나, 하나 이상의 SH3 도메인 및 하나 이상의 PH 도메인을 지니거나, 또는 하나 이상의 SH2 및 하나 이상의 SH3 도메인 및 하나 이상의 PH 도메인을 지닌 단백질을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "지방 세포 활성화 경로"는 그 범위 내에 이의 활성화를 유발하는 비만 세포의 표면 내 또는 표면 위에서 발생하는 생물학적 과정의 모든 성분 및 단계를 포함한다. 일반적으로, 비만 세포의 활성화는 지방 세포의 활성화를 유발하는 일련의 세포 단백질, 예를 들어, 포스파타아제, 키나아제 및 어댑터/조절 인자를 수반하는 세포내 신호 전달 캐스케이드를 유발하는 외부 자극에 의해 개시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "투여하는", 것과 "투여한다" 및 "투여"를 포함하는 이 용어의 변형체는 본 발명의 화합물 또는 조성물을 적절한 수단으로 유기체에 접촉, 적용, 전달 또는 제공하는 것을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체(들)"는 IgG (IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 포함), IgA (IgA1 및 IgA2 포함), IgD, IgE, 또는 IgM, 및 IgY, 단쇄 전체 항체를 포함하는 전체 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 항원 결합 항체 단편은 Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, 단쇄 Fvs (scFv), 단쇄 항체, 이황화 결합 Fvs (sdFv) 및 VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 항체는 임의의 동물 기원일 수 있다. 단쇄 항체를 포함하는 항원 결합 항체 단편은 단독의, 또는 힌지 영역, CH1, CH2 및 CH3 도메인 중 전체 또는 부분과 배합된 가변 영역(들)을 포함할 수 있다. 또한, 포함되는 것은 가변 영역(들) 및 힌지 영역, CH1, CH2 및 CH3 도메인의 임의의 배합물이다. 항체는 생물학적 분자와 특이적으로 결합하는 모노클로널, 폴리클로널, 키메라, 다중특이적, 인간화 및 인간 모노클로널 및 폴리클로널 항체일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "핵산"은 단일 또는 이중-가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 폴리머를 말하며, 달리 제한하지 않는 한, 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 핵산에 혼성화하는 천연 뉴클레오티드의 알려진 유사체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "폴리펩티드" 또는 "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 함께 결합된 아미노산으로 만들어진 폴리머를 의미한다. 용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 본 발명의 목적을 위하여 "폴리펩티드"가 전장 단백질의 일부분을 구성할 수 있을지라도 본 명세서에서 상호호환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드 염기 또는 공지의 유사체 또는 천연 뉴클레오티드 또는 이의 혼합물의 단일- 또는 이중-가닥 폴리머를 말한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "돌연변이"는 동일한 핵산 영역 또는 대립 유전자의 야생형 변이체 또는 샘플 상에 존재하는 더 일반적인 핵산 분자와 비교하여 표적 핵산 분자의 돌연변이 및 다형증을 포함하는 기능 및/또는 비-기능적 핵산 변화의 임의의 및 모든 유형을 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 변화는 하나 이상의 뉴클레오티드의 결실, 삽입, 전위, 역위 및 염기 치환을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "다형증"은 집단 중에서 게놈 내의 유전자 서열의 변이, 이를 테면 대립 유전자 변이 및 발생하거나 관찰되는 다른 변이를 말한다. 유전적 다형증은 뉴클레오티드 염기 쌍 차이, 선택적 mRNA 스플라이싱 또는 번역-후 변형, 예를 들어 글리코실화의 결과로 발생할 수 있는 유전자 서열의 변이체 형태를 말한다. 따라서, 다형증은 집단 내에서 둘 이상의 유전적으로 결정된 선택적인 서열 또는 대립 유전자의 발생을 말한다. 이들 차이는 게놈의 코딩 및 비-코딩 부분에서 발생할 수 있으며, 핵산 서열, 유전자 발현, 예를 들어 전사, 가공(processing), 번역, 수송, 단백질 가공, 트래피킹(trafficking), DNA 합성, 발현된 단백질, 다른 유전자 산물 또는 생화학적 경로의 산물 또는 번역 후 변형에서의 차이 및 나타나는 임의의 다른 차이로 나타나거나 검출될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료"는 어떠한 방식으로든 질환 상태 또는 징후를 치료하거나, 다르게는 질환 또는 다른 원치않는 징후의 진행을 예방, 저지, 지연 또는 역전시키는 임의의 및 모든 용도를 말한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상"은 인간 및 양, 소, 말, 돼지, 고양이, 개, 영장류 및 설치류 종류의 구성원을 포함하나 이에 한정되지 않는 사회, 경제 또는 연구적으로 중요한 임의의 포유류 종 개체를 포함한다. 일 구체예에서, 포유류는 인간이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "유효량" 및 "치료적 유효량"은 이들의 의미 내에 비-독성이나 원하는 치료 효과를 제공하기에 충분한 제제 또는 화합물의 양을 포함한다. 필요한 정확한 양은 치료되는 종, 대상의 연령 및 일반적 조건, 치료되는 증상의 중증도, 투여되는 특정 제제 및 투여 방식 등과 같은 인자들에 따라 대상마다 달라질 것이다. 따라서, 정확한 "유효량"을 특정하는 것은 가능하지 않다. 그러나 임의의 주어진 경우를 위해, 적절한 "유효량"은 통상적인 실험만을 사용하여 해당 분야의 숙련자에 의해 결정될 수 있다.
해당 분야의 숙련자는 본 명세서에 기술된 본 발명이 특별히 기술된 것 외에 변이 및 변형이 가능하다는 것을 이해할 것이다. 본 발명이 모든 변이 및 변형을 포함한다는 것이 이해되어야 한다. 본 발명은 또한 개별적으로 또는 집합적으로 본 상세한 설명에 언급되거나 기술된 단계, 특성, 조성물 및 화합물 모두와 임의의 및 모든 조합 또는 임의의 둘 이상의 단계 또는 특성을 포함한다.
본 상세한 설명에 포함된 문헌, 활동, 물질, 장치, 제품 등의 임의의 기술은 오직 본 발명을 위한 문맥을 제공하려는 것일 뿐이다. 본 출원의 우선권 날짜 전에 임의의 또는 모든 이들 물질이 종래 기술 기초의 부분을 형성하거나, 본 발명과 관련된 분야에 일반적인 지식이라는 승인으로 취해져서는 안된다. 설명의 목적을 위하여 본 명세서에 언급된 모든 문헌을 참고로 인용하였다.
도 1A는 IgE 자극에 대한 반응으로 인간 비만 세포에서 NEDD9의 상대적인 유전자 발현의 시간별 그래프를 나타낸 것이다.
도 1B는 IgE 자극에 대한 반응으로 인간 비만 세포에서 PHLDA1의 상대적인 유전자 발현의 시간별 그래프를 나타낸 것이다.
도 1C는 IgE 자극에 대한 반응으로 마우스 비만 세포에서 NEDD9의 상대적인 유전자 발현의 시간별 그래프를 나타낸 것이다.
도 1D는 IgE 자극에 대한 반응으로 마우스 비만 세포에서 PHLDA1의 상대적인 유전자 발현의 시간별 그래프를 나타낸 것이다.
도 2A는 IgE 자극에 대한 반응으로 RBL-2H3 세포에서의 상대적인 NEDD9 mRNA 발현을 나타내는 그래프를 나타낸 것이다. 결과를 미처리 샘플의 값에 대하여 상대 배수 변화로 표현하였다.
도 2B는 아이오노마이신(ionomycin) 자극에 대한 반응으로 RBL-2H3 세포에서의 상대적인 NEDD9 mRNA 발현을 나타내는 그래프를 나타낸 것이다. 결과를 미처리 샘플의 값에 대한 상대 배수 변화로 표현하였다.
도 2C는 IgE 자극에 대한 반응으로 RBL-2H3 세포에서의 상대적인 PHLDA1 mRNA 발현을 나타내는 그래프를 나타낸 것이다. 결과를 미처리 샘플의 값에 대한 상대 배수 변화로 표현하였다.
도 2D는 아이오노마이신 자극에 대한 반응으로 RBL-2H3 세포에서의 상대적인 PHLDA1 mRNA 발현을 나타내는 그래프를 나타낸 것이다. 결과를 미처리 샘플의 값에 대한 상대 배수 변화로 표현하였다.
도 3은 NEDD9 유전자 발현을 표적으로 하는 3가지 상이한 siRNA의 존재 하에서 30분 동안 IgE와 함께 인큐베이션시킨 RBL-2H3 세포에서 비만 세포 탈과립 퍼센트를 나타내는 그래프를 나타낸 것이다. 임의의 유전자에 대해 표적화되지 않은 추가의 siRNA를 대조군으로 사용하였다.
도 4A는 음성 siRNA/DNP-IgE 대조군에 비하여, NEDD9에 대한 siRNA와 DNP-IgE와의 배합물의 투여 후에 루이스(Lewis) 랫트에서 에반즈 블루(Evan's blue) 회수로 측정한 비만 세포 탈과립의 정도를 나타내는 그래프를 나타낸 것이다.
도 4B는 음성 siRNA/DNP-IgE 대조군에 비하여, PHLDA1에 대한 siRNA와 DNP-IgE와의 배합물의 투여 후에 루이스(Lewis) 랫트에서 에반즈 블루(Evan's blue) 회수로 측정한 비만 세포 탈과립의 정도를 나타내는 그래프를 나타낸 것이다.
도 5는 호모 사피엔스(homo sapiens(HS)), 무스 무스쿨루스(mus musculus(MM), 래터스 노르베기쿠스(rattus norvegicus(RN)), 팬 트로글로디테스(pan troglodytes(PT)), 보스 타운츠(bos taunts(BT)), 캐니스 패밀리아리스(canis familiaris(CF)) 및 갈루스 갈루스(gallus gallus(GG))에서 NEDD9 SH3 도메인의 아미노산 서열 정렬을 나타낸 것이다. 강조한 잔기는 추정되는 활성 부위를 나타낸다 (HS, MM, RN, PT 및 BT에서 아미노산 9-28; CF에서 아미노산 잔기 41-60; GG에서 아미노산 잔기 41-59).
도 6은 스트렙트아비딘-APC로의 세포내 염색 후에 FACS로 검출된 살아있는 RBL-2H3 세포에서의 비오티닐화 MDD1 흡수를 나타내는 막대 그래프이다. 비오티닐화 MDD1을 O.OO1mM MDD1 (2), 0.01mM MDD1 (3) 또는 0.1mM MDD1 (4)의 농도로 세포에 투여하였다. 대조군 세포는 PBS를 단독으로 투여하였다 (1).
도 7은 IgE 수용체 교차 결합 후에 RBL-2H3 세포 탈과립에서 MDD1 펩티드의 효과를 나타내는 그래프이다. (1) 오직 IgE 코팅만 (2) IgE 코팅 + IgE 수용체 교차 결합 (3) MDD1 펩티드 (0.01mM) 전-처리 + IgE 코팅 + IgE 수용체 교차 결합 (4) SCR 펩티드 0.01mM 전-처리 + IgE 코팅 + IgE 수용체 교차 결합.
도 8은 난백 알부민(ovalbumin) 항원 (OVA)로 감작화된 마우스의 폐 기능에서 MDD1 펩티드의 효과를 나타내는 그래프를 제공한 것이다. 천식을 유도하기 위하여 OVA를 비강 내로 접종한 마우스에 (A) 정맥 내로 8mg/kg 또는 (B) 분무에 의하여 비강 내로 1mg/ml의 MDD1 펩티드를 공동-투여하였다. 혈량측정으로 폐 저항성을 측정하였다. RL: 폐 저항성.
도 9는 천식의 유도에 따라 OVA-감작화 마우스에서 염증 반응의 수준을 나타내는 그래프를 제공하는 것이다. 천식을 염수, SCR 대조군 펩티드 또는 MDD1 펩티드로 예비 처리된 OVA-감작화된 마우스에서 β-메타콜린으로의 접종에 의해 유도하였다. (A) 혈중의 호산구 % (B) 기관지폐포 세척 중의 총 세포 (C) 염증 자리에서 TNF 발현 및 (D) 혈청 중의 항원 특이적 IgE의 수준.
도 10은 MDD1 펩티드의 국소 투여가 IgE 수용체 교차 결합 후에 IgE 감작화된 마우스의 귀 생검으로부터 유래된 피부 비만 세포를 안정화시킴을 나타내는 그래프이다. 마우스의 왼쪽 (L) 귀에 DMSO를 단독으로 처리하였다. 오른쪽 (R) 귀를 MDD1 펩티드/DMSO 또는 덱사메타손/DMSO의 혼합물로 처리하였다.
도 11은 IgE 수용체 교차 결합 후에 RBL-2H3 세포 탈과립화에서 MPX741 및 MPX742 펩티드의 효과를 나타내는 그래프이다. (1) 오직 IgE 코팅만 (2) IgE 코팅 + IgE 수용체 교차 결합 (3) MPX741 펩티드 (0.01M) 전-처리 + IgE 코팅 + IgE 수용체 교차 결합 (4) MPX742 펩티드 O.O1mM 전-처리 + IgE 코팅 + IgE 수용체 교차 결합.
[발명의 상세한 설명]
세포내 신호 전달은 세포 활성화를 유발하는 사건의 조직된 캐스케이드(cascade)이다. 대부분의 진핵 세포에서, 이는 주로 포스파타아제, 키나아제 및 어댑터/조절 인자로 구성된 복잡한 단백질 네트워크에 의해 촉진된다. 어댑터 분자는 주요 신호 전달 분자의 상호작용을 촉진하여 세포내 신호 경로에서 필요 불가결한 역할을 수행한다. 어댑터 분자 내의 특정 도메인은 단백질 상호작용의 촉진을 초래한다. 이들은 Src 호몰로지 (SH) 도메인 (예를 들어 Src 호몰로지 2 (SH2) 및 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인) 및 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인을 포함한다. 세포내 신호 전달 사건 중에, Src 호몰로지 도메인은 포스포티로신-함유 단백질에 결합하여, 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 함유 단백질의 동원을 유발하는 일련의 사건을 기폭시킨다. PH 도메인 함유 단백질의 동원은 그 다음, 신호 전달 캐스케이드의 지속을 조장하는 2차 메신저의 생성을 촉진시킨다.
본 명세서에 기술되는 바와 같이, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 몇몇의 상이한 유전자의 발현은 비만 세포 활성화 도중에 변경된다. 비만 세포 활성화 도중 발현이 변경된 것으로 결정된 유전자 중에는 NEDD9 및 PHLDA1이 있으며, 이는 각각 휴지 세포에 비하여 활성화된 골수 유래 인간 비만 세포에서 상향 조절된다.
CasL (Crk-관련 물질 림프구 타입) 및 HEF1 (필라멘테이션의 인간 인핸서 1)으로도 알려진 인간 NEDD9 유전자 (신경 전구 세포-발현되는 발달상 하향 조절된 유전자 9) (GenBank ID: NM_006403.2 및 NM_182966.2, Ensembl ID: ENSG00000111859, Entrez Gene ID 4739 및 Uniprot ID Q14511)는 834개 아미노산의 미가공 전구체 단백질의 발현을 코딩한다. NEDD9는 세포내 신호를 전파시키는 데 관여하는 다기능성 도킹(docking) 단백질이며, 핵, 세포질 및 골지 및 라멜리포디아와 같은 구조 중의 매우 다양한 조직에서 발현된다. NEDD9는 SH3 도메인 및 SH2-결합 부위에 풍부한 도메인을 함유한다. 이들 도메인은 T 세포, B 세포 및 Fc 수용체를 포함하는 표면 수용체의 다운스트림에 위치한 3가지 중요한 세포내 작용체인 Lck, Lyn 및 Fyn뿐 아니라 다른 세포내 파트너들과의 높은 선택성 상호작용을 촉진시킨다.
PHLA1, TDAG51 (T-세포사 관련 유전자 51) 및 PHRIP (프롤린 및 히스티딘 풍부 단백질)로도 알려진 PHLDA1 (플렉스트린 호몰로지-유사 도메인, 패밀리 A, 구성원 1) (GenBank ID: NM 007350, Ensembl 유전자 ID: ENSGOOOOO139289, Entrez Gene ID: 22822)는 단백질 PHLDA1 (Uniprot ID: Q8WV24)을 코딩한다. PHLDA1은 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인을 함유한다. PH 도메인은 세포막에 고립되는 포스포이노시티드(포스파티딜이노시톨의 인산화된 유도체)에 높은 친화도로 결합한다. 포스포이노시티드에 대한 결합에 의하여, PH 도메인 함유 단백질은 일반적으로 세포막에 동원되며, 이에 따라 이들은 세포 신호 전달에 이들의 기능을 보유할 수 있다.
특정 면 및 구체예에서, 본 발명은 비만 세포의 활성화를 조절할 수 있는 펩티드를 제공한다. 펩티드는 SH3 도메인 서열 및/또는 PH 도메인 서열의 적어도 한 부분에 상응하는 서열을 포함한다. 바람직하게, SH3 도메인은 NEDD9 SH3 도메인이다. 바람직하게, PH 도메인은 PHLDA1 PH 도메인이다. 본 발명의 다른 면 및 구체예에서, 또한 비만 세포 활성화를 조절할 수 있는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질도 제공된다.
특정 메카니즘에 제한 없이, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 (이를 테면 NEDD9 및 PHLDA1)은 비만 세포 내부에서 이들의 SH2 도메인, SH3 도메인, 및/또는 PH 도메인과, 상응하는 결합 도메인을 지닌 특정 표적 단백질의 결합을 통하여 비만 세포 활성을 조절하는 것으로 여겨진다. 따라서, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드는 SH2 도메인, SH3 도메인, 또는 PH 도메인과 Lck, Lyn 및 Fyn과 같은 비만 세포 표면 수용체의 다운스트림에 위치하는 중요한 세포내 작용체의 상호작용을 감소, 증진, 방지 또는 달리 변형시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩티드 및 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 비만 세포 활성화를 조절하기 위하여 투여될 수 있으며, 과민성 질환 및 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 수단을 제공한다.
SH2 / SH3 / PH 도메인 함유 단백질 및 경쟁자 펩티드
본원에 기술된 것은 비만 세포 활성화를 조절할 수 있는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질이다. 본 발명의 면 및 구체예에 따라 비만 세포 활성화를 조절할 수 있는 단백질은 SH2, SH3 또는 PH 도메인 중 적어도 하나를 포함한다. 적합한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 예는 NEDD9 및 PHLDA1을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 상세한 설명의 문맥에서, NEDD9 단백질이 SH3 도메인을 포함하는 단백질의 모든 변이체 및 아형을 포함하는 것을 이해하여야 한다. NEDD9 단백질의 아형은 예를 들어 아형 1 (Q 14511) (REFSEQ 수탁 번호 NM 006403.2), 아형 2 (UniProt: Q5XKI0), 아형 CRA_a (UniProt 식별자 Q5T9R4), 및 아형 CRA_c (REFSEQ: EAW55302.1)를 포함한다. 다른 NEDD9 단백질 변이체는 예를 들어 단백질(UniProt: Q5TI59)을 포함하는 UniProt 데이터베이스에 열거되어 있다. 아형 1 단백질 p115, p1O5, p65 및 p55과 같은 번역 후 변형으로부터 발생하는 NEDD9 단백질도 또한 고려된다.
유사하게, 본 자세한 설명의 문맥 내에서, PHLDA1 단백질이 PH 도메인을 포함하는 단백질의 모든 변이체 및 아형을 포함하는 것으로 이해하여야 한다. 따라서, PHLDA1 단백질은 Entrez Gene ID 22822 (플렉스트린 호몰로지-유사 도메인 패밀리 A 구성원 1)에 의해 기술된 바와 같이 PHLDAl 유전자에 의해 코딩될 수 있으며, 이의 발현으로 5913개 뉴클레오티드의 전사체가 되고 (참고 NCBI REFSEQ 수탁번호 NM_007350), 예를 들어 REFSEQ: NP_031376, REFSEQ: EAW97312.1 또는 UniProt 식별자 Q8WV24에 의해 기재된 단백질로 번역될 수 있다. Entrez 데이터베이스에서 변이체 PHLDA1 CRA_a (예를 들어, REFSEQ: AAH18929.3, AAI10821.1 및 AI26426.2)d에 의해 코딩된 PHLDA1 단백질도 또한 고려된다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타낸 폴리펩티드 서열을 가질 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1 또는 서열 번호 3에 나타낸 바와 같을 수 있거나, 서열 번호 1 또는 서열 번호 3에 나타낸 서열과 혼성화하기에 충분한 서열 동일성을 나타낸다. 대안적인 구체예에서, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 서열은 서열 번호 1에 나타낸 서열 및/또는 서열 번호 3에 나타낸 서열과 적어도 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 공유할 수 있다.
다른 면 및 구체예에 따라, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 서열 번호 6에 나타낸 폴리펩티드 서열을 가질 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열 번호 5에 나타낸 바와 같을 수 있거나, 서열 번호 5의 서열에 혼성화하기에 충분한 서열 동일성을 나타낸다. 대안적인 구체예에서, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 5에 나타낸 서열과 적어도 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 공유할 수 있다.
본 명세서에 기술되는 것은 SH3 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 서열을 포함하는 펩티드이다. 바람직하게, SH3 도메인은 NEDD9 SH3 도메인이다. 또한 본 명세서에 기술되는 것은 PHLDA1 단백질 PH 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 서열을 포함하는 펩티드이다. 본 발명의 펩티드는 이들의 서열이 NEDD9 SH3 도메인 중 일부 또는 모두, 또는 PHLDA1 PH 도메인 중 일부 또는 모두에 적어도 부분적으로 상응한다는 점에서 "경쟁자 펩티드"로 여겨질 수 있다. 특정 면 및 구체예에 따라, 본 발명의 펩티드는 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12 및 서열 번호 13에 나타낸 서열을 가질 수 있다.
다른 면 및 구체예에 따라, 본 발명의 펩티드는 서열 번호 14-273 중 임의의 것에 나타낸 서열을 가질 수 있다.
다른 면 및 구체예에 따라, 본 발명의 펩티드는 서열 번호 274-488 중 임의의 것에 나타낸 서열을 가질 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 단백질은 분리 또는 정제된 형태의 것이다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 범위 내에 그의 변이체 및 단편이 포함되는 것이 이해되어야 한다. 본 명세서에 사용되는 용어 "변이체"는 실질적으로 유사한 서열을 말한다. 일반적으로 두 서열이 특정 영역에 대하여 또는 특정하지 않는 경우 전체 서열에 대하여 동일한 ("서열 동일성"의 퍼센트) 특정된 퍼센트의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 갖는다면 두 서열은 "실질적으로 유사하다". 따라서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열의 "변이체"는 기준 서열과 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 83%, 85%, 88%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 공유할 수 있다.
일반적으로, 서열 변이체는 공통의 질적인 생물학적 활성을 보유한다. 폴리뉴클레오티드 서열 변이체는 일반적으로 공통의 질적인 생물학적 활성을 보유하는 폴리펩티드를 코딩한다. 또한, 용어 "변이체"의 의미 내에 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 경쟁자 펩티드의 상동체가 포함된다. 상동체는 전형적으로, 본 명세서에 개시된 상응하는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 경쟁자 펩티드와 실질적으로 동일한 생물학적 기능 또는 활성을 공유하는 상이한 과, 속 또는 종으로부터의 것이다. 예를 들어, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 경쟁자 펩티드 상동체는 다른 상이한 종의 포유류로부터 유래된 것 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 용어 "변이체"는 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 유사체도 포함한다. 폴리펩티드 "유사체"는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 유도체 또는 본 발명의 펩티드의 유도체인 폴리펩티드이며, 이 유도체는 단백질/펩티드가 실질적으로 같은 기능을 보유하도록 하는 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실, 치환을 포함한다. 용어 "보존적 아미노산 치환"은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드의 폴리펩티드 사슬 내에서 하나의 아미노산을 동일한 특성을 갖는 다른 아미노산으로 치환 또는 교환하는 것을 말한다.
예를 들어, 하전된 아미노산 글루탐산 (Glu)의 유사하게 하전된 아미노산 아스파르트산 (Asp)으로의 치환은 보존적 아미노산 치환일 것이다. 폴리히스티딘 태그, 말토스 결합 단백질 융합, 글루타티온 S 트랜스퍼라제 융합, 녹색 형광 단백질 융합, 또는 FLAG 또는 c-myc와 같은 에피토프 태그의 첨가와 같이 아미노산 첨가는 본 발명의 폴리펩티드와 제2 폴리펩티드 또는 펩티드의 융합으로부터 발생할 수 있다.
일반적으로, 본 명세서에 기술된 단백질 및 펩티드의 특성 및 특징은 특정 치료 적용을 위하여 적합성을 개선시키기 위한 시도로 변형시킬 수 있다. 개선될 수 있는 특성 및 특징의 비제한적인 예는 용해도, 화학 및 생화학적 안정성, 세포 흡수, 독성, 면역원성 및 분해 산물의 배출을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 명세서에 기술된 펩티드의 특징 및 특성을 개선시킬 수 있는 방법 및 접근법은 해당 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 한 접근법은 특정 특성에 대하여 부정적 또는 긍정적 결정자인 특정 아미노산 잔기를 찾고 식별하는 것이다. 이는 예를 들어 아미노산이 동시에 펩티드의 서열에 따라 원형 잔기, L-알라닌에 의해 치환된 것인 측사슬 절단의 기술을 사용함으로써 달성될 수 있다. 주요 결정자 유전자 자리를 확인하는 것은 동정되는 유전자 자리에서 자연 발생 및 비자연적 아미노산 치환을 갖는 변이체를 생성하고 시험하는 기초를 제공한다. 바람직한 특성을 보유하는 리드 펩티드는 개선된 안정성 프로필 및 약동학적 특성을 갖는 펩티도미메틱(peptidomimetic) 분자의 설계를 위한 주형으로 사용될 수 있다. 이 접근법은 합리적인 설계 및 분자 모델링에 의해 가이드되는 구조적 변형을 사용한다. 이들은 형상적으로 제한된 빌딩 블록 및 펩티드 결합 등입체성계(isostere)를 포함하나 이에 한정되지 않는다 (참고예: Vagner et al, 2008, "Peptidomimetics, a synthetic tool of drug discover", Current Opinion in Chemical Biology, 12: 292-296).
두 서열들 사이의 서열 동일성 퍼센트는 비교 윈도우(comparison window)에 대하여 두 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정될 수 있다. 비교 윈도우에 있는 서열의 부분은 두 서열을 최적으로 정렬하기 위하여 결실 또는 첨가를 포함하지 않는 기준 서열(예를 들어, 본 명세서에 개시된 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열)에 비해 예를 들어 결실 또는 첨가 (예를 들어, 갭)을 포함할 수 있다. 그 다음, 서열 동일성의 퍼센트는 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 두 서열들에서 발생하는 위치의 수를 결정하여 매치된 부분의 수를 산출하고, 비교 윈도우에서 매치된 위치의 수를 위치의 총 수로 나누고, 결과를 100으로 곱하여, 서열 동일성 퍼센트를 결정함으로써 계산할 수 있다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 문맥에서, 서열 동일성 퍼센트는 다음의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하거나 또는 통상의 정렬 및 시각적 조사에 의하여 측정되는 바, 비교 윈도우에서 최대의 일치를 위해 비교 및 정렬했을 때 특정 영역 (또는 특정되지 않는다면 전체 서열), 또는 지정된 영역에 대하여 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 특정된 퍼센트를 말한다.
서열 비교를 위하여, 전형적으로 한 서열은 시험 서열이 비교되는 기준 서열로 작동한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 및 기준 서열이 컴퓨터에 입력되고, 서열 조정이 지정되며, 필요에 따라 서열 알고리즘 프로그램 변수가 지정된다. 디폴트 프로그램 변수가 사용될 수 있거나, 또는 대안적인 변수가 지정될 수 있다. 그 다음, 서열 비교 알고리즘은 프로그램 변수에 기초하여 기준 서열과 비교하여 시험 서열에 대한 서열 동일성 퍼센트를 계산한다. 비교를 위한 서열 정렬 방법은 해당 분야에 잘 알려져 있다. 비교를 위한 최적의 서열 정렬은 통상적으로 다음을 포함하나 이에 한정되지 않는 공지의 컴퓨터 프로그램을 사용함으로써 결정될 수 있다: PC/Gene 프로그램에서 CLUSTAL (Intelligenetics, Mountain View, California에서 입수가능); ALIGN 프로그램 (Version 2.0) 및 GCG Wisconsin Genetics Software Package, Version 10에서 GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA 및 TFASTA (Accelrys Inc., 9685 Scranton Road, San Diego, California, USA에서 입수가능). BESTFIT 프로그램 (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, Wis. 53711). BESTFIT는 두 서열들 사이에서 최적의 상동성 부분을 찾기 위하여 Smith 및 Waterman의 국소 상동성 알고리즘을 사용한다 (참고: Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)). 서열 사이의 상동성 정도를 결정하기 위하여 BESTFIT이나 임의의 다른 서열 정렬 프로그램을 사용하는 경우, 변수는 동일성 퍼센트가 기준 서열의 전장에 대하여 계산되고, 기준 서열에서 총 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 수의 최대 5%의 상동성에서의 갭이 허용되도록 설정될 수 있다.
GAP은 매치의 수를 최대화시키고 갭의 수를 최소화시키는 두 완전한 서열의 정렬을 찾기 위하여 문헌[Needleman and Wunsch (1970) J. MoI. Biol. 48:443-453]에 기술된 알고리즘을 사용한다. GAP은 모든 가능한 정렬 및 갭 위치를 고려하며, 매치된 염기의 가장 큰 수 및 가장 적은 갭을 갖는 정렬을 생성시킨다. 이는 매치된 염기의 단위로 갭 생성 페널티 및 갭 연장 페널티의 공급을 허용한다. GAP은 최적의 정렬의 패밀리 중 하나의 구성원을 나타낸다.
전체 서열 정렬로도 언급되는 의문의 서열 및 대상 서열 사이의 전체 최적의 매치를 결정하기 위한 또 다른 방법은 Brutlag 등의 알고르즘에 기초한 FASTDB 컴퓨터 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다 (참고: Comp. App. Biosci. 6:237-245 (1990)). 서열 정렬에서 의문 및 대상 서열은 둘 다 DNA 서열이다. RNA 서열은 U를 T로 전환시켜 비교될 수 있다. 상기 전체 서열 정렬의 결과는 동일성 퍼센트이다.
BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘은 서열 동일성 및 서열 유사성 퍼센트를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 이들은 문헌[Altschul et al. (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402 및 Altschul et al (1990) J. MoI. Biol. 215:403-410]에 각각 기술되어 있다. BLAST 분석을 수행하는 소프트웨어는 생명공학 정보를 위한 국립 센터를 통해 공개적으로 이용가능하다. 이 알고리즘은 우선, 데이터베이스 서열 중의 동일한 길이의 단어와 정렬시킬 때 약간의 양의 값을 갖는 역치 스코어 T와 매치되거나 만족하는, 의문 서열 중의 길이 W의 짧은 단어를 확인하여 스코어가 높은 서열 쌍 (HSP)을 식별하는 것을 포함한다. T는 인접한 단어의 스코어 역치를 말한다 [참고: Altschul (1990) supra]. 이러한 초기 인접 단어의 적중은 그들을 함유하는 더 긴 HSP를 찾아내는 검색을 개시하는 데 근간으로 작용한다. 단어 적중은 누적 정렬 스코어가 증가할 수 있는 한 각 서열을 따라 두 방향으로 확장한다. 누적 스코어는 뉴클레오티드 서열의 경우, 변수 M(매치 잔기한 쌍에 대한 보상 스코어; 항상 > 0임) 및 N(미스매치 잔기에 대한 페널티 스코어; 항상 < 0임)을 사용하여 계산한다. 아미노산 서열의 경우, 스코어링 매트릭스를 사용하여 누적 스코어를 계산한다. 각 방향으로의 단어 적중의 확장은 누적 정렬 스코어가 그 최대 달성치로부터 정량 X만큼 저하되었을 때; 하나 이상의 음의 스코어의 잔기 정렬이 누적됨으로 인해 누적 스코어가 0 또는 그 이하가 되었을 때; 또는 어느 서열의 끝에 이르렀을 때 중지된다. BLAST 알고리즘 변수 W, T 및 X는 정렬의 감도 및 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열의 경우)은 단어 길이(W) 11, 기대값 (E) 10, M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 디폴트로서 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 단어 길이 3, 및 기대값 (E) 10을, BLOSUM62 스코어링 매트릭스(참조: Henikoff amp; Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915)는 정렬치 (B) 50, 기대값 (E) 10, M=5, N=-4, 및 두 가닥의 비교를 디폴트로 사용한다.
BLAST 알고리즘은 또한 두 서열 간의 유사성의 통계적 분석을 수행한다 [참고예: Karlin amp; Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873)]. BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 척도 중 하나는 5 최소 확률 총합(P(N))인데, 이것은 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 매치가 우연히 일어날 확률을 나타내는 것이다. 예를 들면, 시험 핵산을 기준 핵산과 비교했을 때의 최소 확률 총합이 약 0.2 미만, 더 바람직하게 약 0.01 미만 및 가장 바람직하게 약 0.001 미만이면, 핵산은 기준 서열과 유사한 것으로 간주된다.
본 발명은 또한 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 단편을 고려한다. "단편"은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및/또는 펩티드 또는 이의 변이체의 구성물이거나 구성물을 코딩하는 폴리펩티드 분자이다. 전형적으로, 단편은 이의 구성물인 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및/또는 펩티드와 공통의 질적인 생물학적 활성을 보유한다. 펩티드 단편은 약 3 내지 약 2000개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 1750개, 약 3 내지 약 1500개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 1250개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 1000개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 950개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 900개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 850개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 800개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 750개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 700개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 650개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 600개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 550개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 500개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 450개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 400개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 350개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 300개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 250개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 200개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 150개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 125개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 100개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 75개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 50개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 40개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 35개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 30개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 25개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 20개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 15개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 10개 아미노산 길이, 약 3 내지 약 7개 아미노산 길이, 약 5 내지 약 10개 아미노산 길이, 약 5 내지 약 15개 아미노산 길이, 약 5 내지 약 20개 아미노산 길이, 약 5 내지 약 25개 아미노산 길이, 약 5 내지 약 30개 아미노산 길이, 약 5 내지 약 35개 아미노산 길이, 약 8 내지 약 12개 아미노산 길이, 약 8 내지 약 15개 아미노산 길이, 약 8 내지 약 20개 아미노산 길이, 약 8 내지 약 25개 아미노산 길이, 약 8 내지 약 30개 아미노산 길이일 수 있다.
또한, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드의 단편도 고려된다. 폴리뉴클레오티드 "단편"은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 변이체의 구성체이거나 구성체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 분자이다. 폴리뉴클레오티드의 단편은 생물학적 활성을 보유하는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드를 코딩하거나 코딩하지 않을 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드의 생물학적으로 활성인 단편은 전형적으로 상응하는 전장 단백질의 면역조절 활성의 적어도 약 50%, 더 전형적으로 활성의 적어도 약 60%, 더 전형적으로 활성의 적어도 약 70%, 더 전형적으로 활성의 적어도 약 80%, 더 전형적으로 활성의 적어도 약 90% 및 더욱 전형적으로 활성의 적어도 약 95%를 보유할 수 있다. 단편은 예를 들어, 혼성화 프로브 또는 PCR 프라미어로 유용할 수 있다. 단편은 본 발명의 폴리뉴클레오티드로부터 유래하거나, 또는 몇몇의 다른 수단, 예를 들어 화학적 합성에 의하여 합성될 수 있다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 변이체는 돌연변이생성에 의해 형성될 수 있다. 돌연변이생성은 해당 분야의 숙련자에게 잘 알려진 방법을 사용하여, 이를 테면 무작위 돌연변이생성 또는 위치 지정 돌연변이생성에 의하여, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드 또는 코딩 핵산에서 지시될 수 있다. 이 방법은 예를 들어 개시물이 본 명세서에 참고로 인용되는 문헌[Molecular Biology (Chapter 9), Ausubel et al, 1994, John Wiley & Sons, Inc., New York]에 기술되어 있다. 본 명세서에 기술된 변이체 및 유사체는 또한 다른 화학적 부분과 복합체화된 폴리펩티드, 융합 단백질 또는 전이-후 변형된 것을 포함한다. 또한, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 펩티드 및 이의 단편 또는 변이체는 예를 들어 아세틸화, 아미드화, 카바모일화, 환원성 알킬화 및 해당 분야의 숙련자에게 공지인 다른 변형과 같은 측사슬 변형을 포함하는 다른 번역 후 변형을 포함할 수 있다. SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 펩티드 및 이의 변이체 또는 단편은 해당 분야에 공지인 임의의 적합한 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 펩티드 및 이의 변이체 또는 단편은 표준 재조합 핵산 기술을 사용하여 수득되거나, 또는 예를 들어 통상의 액체 또는 고체 상 합성 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드는 예를 들어 엔도Lys-C, 엔도Arg-C, 엔도Glu-C 및 스타필로코커스 V8-프로테아제와 같은 하나 이상의 단백질 분해효소(proteinase)로의 폴리펩티드의 분해에 의해 생성될 수 있다. 분해된 펩티드 단편은 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 기술에 의해 정제될 수 있다. 재조합 단백질 생산 기술은 적합한 미생물에서 적절한 과발현을 위하여, 전형적으로 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 유전자 또는 본 명세서에 기술된 펩티드를 코딩하는 서열의 플라스미드로의 클로닝을 포함할 것이다.
발현 벡터 또는 플라스미드의 작제에 적합한 방법은 예를 들어 문헌[ambrook et al, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, 1989 및 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, copyright 2007]와 같은 표준 원문에 자세하게 기술되어 있다. 본 발명의 재조합 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 폴리펩티드를 생산하는 방법은 예를 들어 문헌[Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, (Chapter 5), John Wiley and Sons, Inc., copyright 2007, and Pharmacia Biotech., The Recombinant Protein Handbook 1994, Pharmacia Biotech]과 같은 표준 원문에 자세하게 기술되어 있다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 생산을 위해 사용될 수 있는 통상적으로 사용되는 발현 시스템은 예를 들어, 박테리아 (예를 들어, 이.콜라이(E. coli)), 이스트 (예를 들어, 사카로마이스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 아스페르길루스(Aspergillus), 피키아 파스토리시스(Pichia pastorisis)), 바이러스 (예를 들어, 배큘로바이러스 및 백시니아), 세포 (예를 들어, 포유류 및 곤충) 및 무세포(Cell-free) 시스템을 포함한다. 예를 들어 문헌[Madin et al., Proc. Natl. Acad. ScL U.S.A. 97:559-564 (2000), Pelham and Jackson, Ewr. J. Biochem., 67: 247-256 (1976), Roberts and Paterson, Proc. Natl. Acad. Sci., 70: 2330-2334 (1973), Zubay, Ann. Rev. Genet., 7: 267 (1973), Gold and Schweiger, Meth. EnzymoL, 20: 537 (1971), Lesley et al, J. Biol. Chem., 266(4): 2632-2638 (1991), Baranov et al, Gene, 84: 463-466 (1989) and Kudlicki et al, Analyt. Biochem., 206: 389-393 (1992)]에 기술된 방법을 사용하는 진핵 래빗 망상적혈구, 밀 배아 추출물 시스템 및 원핵 이. 콜라이 무세포 시스템을 포함하는 무세포 시스템도 사용될 수 있다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 경쟁자 펩티드(각각의 단편 및 변이체와 함께)는 해당 분야에 잘 알려진 액체 및 고체 상 화학의 표준 방법을 사용하여 합성될 수 있다 [참고예: Hackeng et al, Proc Natl Acad Sci USA. 96(18): 10068-73 (1999), and Steward and Young, Solid Phase Peptide Synthesis (2nd Εdn.), Pierce Chemical Co., Illinois, USA (1984)]. 일반적으로, 이 합성 방법은 증대하는 펩티드 사슬에 하나 이상의 아미노산 또는 적합하게 보호된 아미노산의 순차적 첨가를 포함한다. 전형적으로 제1 아미노산의 아미노 또는 카복실 그룹은 적합한 보호기에 의해 보호된다. 그 다음, 보호된 아미노산은 비활성 고체 지지체에 부착되거나 또는 아미드 결합을 형성하기에 적합한 조건 하 및 적합하게 보호된 상보적 (아미노 또는 카복실) 그룹을 갖는 서열로 다음 아미노산을 첨가함으로써 용액에서 이용된다. 그 다음, 보호기는 이 새로 첨가된 아미노산 잔기로부터 제거되며, 다음 (보호된) 아미노산이 첨가되는 등이다. 모든 원하는 아미노산이 연결된 후에, 임의의 남아있는 보호기 및 필요에 따라 임의의 고체 지지체는 순차적으로 또는 동시에 제거되어 최종 폴리펩티드를 생성한다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 아미노산 서열에 대한 변화는 해당 분야의 표준 기술에 의해 영향을 받을 수 있다. 예를 들어, 아미노산 변화는 적절한 리딩 프레임이 유지되는 조건 하에서, 뉴클레오티드의 첨가, 결실 또는 치환 (보존적 및/또는 비보존적)을 포함하는 뉴클레오티드 교환 기술에 의해 영향을 받을 수 있다. 예시적인 기술은 무작위 돌연변이생성, 위치 지정 돌연변이생성, 올리고뉴클레오티드 매개 또는 폴리뉴클레오티드 매개 돌연변이생성, 존재하는 또는 공학 설계된 제한 효소 부위의 사용을 통한 선택된 영역(들)의 결실 및 중합효소 사슬 반응을 포함한다. 본 발명의 목적을 위한 면역조절 활성의 시험은 해당 분야의 숙련자에게 알려진 몇몇의 기술 중 임의의 것을 통한 것일 수 있다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드 (각각의 단편 및 변이체와 함께)의 정제는 문헌[Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, (Chapter 6), John Wiley and Sons, Inc., copyright 2007]에 기술된 것과 같은 해당 분야의 표준 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 단백질 또는 펩티드가 가용성 상태에 있다면, 이는 컬럼 크로마토그래피와 같은 표준 방법을 사용하여 분리될 수 있다. 본 명세서에 기술된 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드는 정제를 돕는 다양한 친화성 태그 또는 캐리어 단백질을 함유하도록 유전 공학 설계될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및/또는 펩티드를 함유하는 발현 벡터로 공학 설계되는 히스티딘 및 단백질 태그의 사용은 예를 들어, 고유의 또는 변성 조건 하에서 금속-킬레이트 크로마토그래피 (MCAC)에 의해 정제를 용이하게 할 수 있다. 정제는 대량 생산 목적으로 대량화(scaled-up)될 수 있다.
숙련자는 본 발명이 사용되는 생산 또는 정제 방법에 의해 한정되지 않으며 상기 기술된 방법 및 기술은 단지 예시의 목적으로만 제공되는 것임을 이해할 것이다.
면역 반응 조절 및 비만 세포 활성화의 억제
본 명세서에 기술되는 것은 대상에서 면역 반응을 조절하는 방법이다. 이 방법은 다음 중 적어도 하나를 포함하는 치료적 유효량의 단백질을 대상에 투여하는 것을 포함한다:
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 본 발명의 펩티드.
일 구체예에서, 단백질은 NEDD9 또는 이의 단편 또는 변이체이다. 또 다른 구체예에서, 단백질은 PHLDA1 또는 이의 단편 또는 변이체이다.
면역 반응은 본 발명의 방법에 의해 증진되거나 억제될 수 있다. 예를 들어, 비만 세포 활성화 경로를 음성적으로 조절하는 본 명세서에 기술된 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드의 유효량의 투여는 비만 세포 활성화의 억제를 유발할 수 있다. 결과적으로, 대상 내의 과민성 반응은 투여에 따라 감소되거나 예방될 수 있다.
대안적으로, 비만 세포 활성화를 양성적으로 조절하는 본 명세서에 기술된 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드의 유효량의 투여는 비만 세포 활성화의 증진을 유발할 수 있다. 결과적으로, 대상 내의 과민성 반응은 투여에 따라 증가될 수 있다.
또한, 본 명세서에 제공되는 것은 비만 세포 활성화를 억제하거나 예방하는 방법이다. 본 발명의 특정 면에서, 비만 세포 활성화를 억제하거나 예방하는 방법은 다음 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 투여를 포함한다:
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 본 발명의 펩티드.
바람직하게, 단백질은 NEDD9 또는 PHLDA1이다.
본 발명의 다른 면에서, 비만 세포 활성화를 억제하거나 예방하는 방법은 다음 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량의 투여를 포함한다:
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인.
바람직하게, 펩티드의 서열은 NEDD9 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인에 적어도 부분적으로 상응한다. 바람직하게, 펩티드의 서열은 PHLDA1 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인에 적어도 부분적으로 상응한다.
본 발명의 특정 구체예에서, NEDD9 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인에 적어도 부분적으로 상응하는 펩티드는 서열 번호 7 또는 서열 번호 8에 나타낸 아미노산 서열을 가질 수 있다. 본 발명의 다른 구체예에서, NEDD9 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인에 적어도 부분적으로 상응하는 펩티드는 서열 번호 14-273의 임의의 것에 나타낸 아미노산 서열을 가질 수 있다.
본 발명의 특정 구체예에서, PHLDAl 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인에 적어도 부분적으로 상응하는 펩티드는 서열 번호 10, 서열 번호 11 또는 서열 번호 12에 나타낸 아미노산 서열을 가질 수 있다. 본 발명의 다른 구체예에서, PHLDA1 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인에 적어도 부분적으로 상응하는 펩티드는 서열 번호 13 또는 서열 번호 274-488 중 임의의 것에 나타낸 아미노산 서열을 가질 수 있다.
비만 세포 활성화는 비만 세포 표면에 IgE 교차 결합에 의한 것과 같은 IgE 의존적 메카니즘을 통해 발생할 수 있다. 부가적으로 또는 대안적으로 비만 세포 활성화는 IgE-독립적 메카니즘으로부터 발생할 수 있다.
본 발명에 기술되는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드가 투여되거나 또는 투여되지 않은 비만 세포에서 활성화 수준의 측정 및 비교는 해당 분야에 알려진 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 비만 세포 활성화의 수준은 활성화된 비만 세포의 탈과립화에 따라 방출되는 인자를 검출하는 표준 분석법에 의해 측정될 수 있다. 이들 인자는 예를 들어, 히스타민, 트립타아제, 세린 프로테아제 트립타아제, β-헥소사미니다제, 헤파린, 콘드로이틴 설페이트 E, 프로스타글란딘 D2, 류코트리엔 B4 및 C4, 혈소판 활성화 인자, 또는 IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-1O, IL-13, GM-CSF, TNF, CCL2, CCL3 및 CCL5를 포함하는 사이토카인 방출을 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 비만 세포 활성화의 정도는 비만 세포 활성화의 특정 마커의 발현 변화에 의해, 예를 들어 유세포 측정 또는 면역세포화학에 의해 측정될 수 있다. 비만 세포는 CD9, CD29, CD33, CD43, CD44, CD45, CD46, CD51, CD54, CD55, CD58, CD59, CD61, 및 CDl17, CD47, CD48, CD49d, CD53, CD60, CD63, CD81, CD82, CD84, CD87, CD92, CD97, CD98, 및 CD99, CD147, CD149, CD151, 및 CD157을 포함하나 이에 한정되지 않는 비만 세포에 의해 발현되는 해당 분야에 공지인 다양한 표면 수용체의 발현에 의해 이 기술을 사용하여 확인될 수 있다. 이렇게 확인된 비만 세포 활성화의 수준은 예를 들어 비만 세포 활성화 마커, 예를 들어, CD107A (LAMP-1), CD107B (LAMP-2), 트립타아제 및 PGD2의 발현에 의해 측정될 수 있다.
하기의 실시예에서 본 명세서에 기술된 바와 같이, 서열이 NEDD9 SH3 또는 PHLDA1 PH 도메인 내의 특정 영역에 상응하는 "경쟁자 펩티드"의 투여는 비만 세포의 탈감작 효과와 IgE 교차 결합에 따른 이의 활성화의 억제 효과를 가지는 것으로 결정되었다. 특정 메카니즘으로 한정하려는 기대 없이, NEDD9 SH3에 상응하는 펩티드가 NEDD9 SH3 도메인과 비만 세포 내부의 표적 단백질의 SH3 결합 도메인의 정상적인 결합을 방해함으로써 비만 세포 활성화에 이러한 효과를 보유하는 것으로 관찰되었다. 이들 비만 세포 표면 수용체의 다운스트림에 위치한 Lck, Lyn 및 Fyn의 3개의 중요한 세포내 작동체와의 높은 선택성 상호작용을 변경시켜, 이에 의해 활성화 경로가 붕괴되는 것으로 생각된다. 유사하게, PHLDA1 PH 도메인에 상응하는 펩티드가 PHLDA1 PH 도메인과 비만 세포 내의 표적 단백질에 존재하는 PH 결합 도메인의 정상적 결합을 방해하여 비만 세포 활성화를 억제하는 것으로 관찰되었다.
본 발명자들은 NEDD9 SH3 도메인 및/또는 PHLDA1 PH 도메인과, 비만 세포에서의 표적 단백질의 결합을 간섭하는 것이 비만 세포 활성화를 조절하는 수단을 제공한다고 기술하였다. 예시된 펩티드 외에, NEDD9 SH3 도메인 또는 PHLDA1 PH 도메인 서열에 기초한 많은 수의 펩티드가 이용되게 설계될 수 있으며, 이들은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명은 또한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 발현을 변경시킴으로써 대상의 면역 반응에 이들의 조절 효과를 보유할 수 있는 제제를 고려한다. 이 경우에, 이 제제는 후보 제제의 존재 하에서 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 발현을 후보 제제의 부재 하에서 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 발현 수준과 비교함으로써 동정할 수 있다. SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 유전자의 발현은 예를 들어, 유전자의 조절 서열을 접촉시키고 이에 의해 그 전사를 증가시킴으로써, 제제에 의해 증가될 수 있다. 대안적으로, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 유전자의 발현은 예를 들어 유전자의 전사 기구에 포함되는 단백질의 접근이 방해되거나 작용하는 것을 방지하는 방법 또는 방식으로 유전자에 결합함으로써 제제에 의해 감소되거나 억제될 수 있다.
또한, 면역 반응 및 비만 세포 활성화에서의 조절 효과는 상동성 안티센스 핵산의 투여에 의하여 NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 생산을 감소시키거나 억제함으로써 달성될 수 있다. SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 (이를 테면 NEDD9 또는 PHLDA1)을 코딩하는 상보성 DNA (cDNA)의 유전자에 대하여 안티센스인 적어도 5개의 뉴클레오티드, 일반적으로 최대 약 200개의 뉴클레오티드의 치료 또는 예방적 이용도 또한 본 명세서에 제공된다. 이 안티센스 핵산은 일반적으로 매우 엄격한(stringency) 조건 하에서 몇몇 서열 상보성의 효력에 의해 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 RNA 전구체 (일반적으로 mRNA)의 한 부분에 혼성화할 수 있다. 안티센스 핵산은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 RNA 전구체의 코딩 및/또는 비코딩 영역에 상보적일 수 있다. 전체 RNA 전구체에 대한 완전한 상보성은 필요하지 않다. 이 형태에서 안티센스 핵산은 비만 세포 활성화를 감소시키거나 억제하는 치료제로 유용성을 가지며, 본 명세서에 기술된 질환 상태의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 RNA 전구체에 상보적인 안티센스 핵산은 적어도 5개의 뉴클레오티드일 수 있으며, 일반적으로 5 내지 약 200개 뉴클레오티드 길이 범위의 올리고뉴클레오티드이다. 예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 적어도 10개 뉴클레오티드, 적어도 15개 뉴클레오티드, 적어도 100개 뉴클레오티드, 적어도 125개 뉴클레오티드, 적어도 150개 뉴클레오티드, 또는 적어도 175개 뉴클레오티드이다. 올리고뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA 또는 키메라 혼합물 또는 이의 유도체 또는 변형된 버전, 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다.
RNA 전구체에 상보적인 안티센스 핵산은 해당 분야에 일반적으로 알려진 치환체를 사용하여 그 구조상의 임의의 위치에서 변형될 수 있다. 안티센스 핵산은 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-클로로우라실, 5-요오도우라실, 하이포잔틴, 잔틴, 4-아세틸사이토신, 5-(카복시하이드록실메틸)우라실, 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘, 5-카복시메틸아미노메틸우라실, 디하이드로우라실, 베타-D-갈락토실퀘오신(β-D-galactosylqueosine), 이노신, 2,2-디메틸구아닌, 2-메틸-아데닌, 2-메틸구아닌, 3-메틸사이토신, 5-메틸사이토신, N6-아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메틸아미노메틸우라실, 5-메톡시아미노메틸-2-티오우라실, 베타-D-만노실퀘오신, 5'-메톡시카복시메틸우라실, 슈도우라실, 2-티오사이토신, 5-메틸-2-티오우라실, 2-티오우라실, 4-티오우라실, 5-메틸우라실, 우라실-5-옥시아세트산 메틸에스테르, 우라실-5-옥시아세트산 (v), 퀘오신, 와이부톡소신, 5-메틸-2-티오우라실, 3-(3-아미노-3-N-2-카복시프로필)우라실 및 2,6-디아미노퓨린을 포함하나 이에 한정되지 않는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 변형된 염기 부분을 포함할 수 있다.
RNA 전구체에 상보적인 안티센스 핵산은 적어도 하나의 변형된 당 부분, 이를 테면 아라비노스, 2-플루오로아라비노스, 크실룰로스 및 헥소오스를 포함할 수 있다. 안티센스 핵산은 또한 포스포오티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포르아미도티오에이트, 포스포르아미데이트, 포스포르디아미데이트, 메틸포스포네이트, 알킬 포스포트리에스테르 및 이의 포름아세탈(formacetal) 또는 유사체로부터 선택된 적어도 하나의 변형된 포스페이트 뼈대를 포함할 수 있다. 안티센스 핵산은 펩티드, 혼성화 기폭 교차 결합제, 운반 제제(transport agent) 또는 혼성화 기폭 절단 제제와 같은 또 다른 분자에 컨쥬게이트(conjugate)될 수 있다.
SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 (이를 테면 NEDD9 또는 PHLDA1)의 RNA 전구체에 상보적인 안티센스 핵산을 코딩하는 서열의 발현은 인간을 포함하는 포유류 세포에서 작동하는 것으로 해당 분야에 알려진 임의의 프로모터에 의해서일 수 있으며, 이는 유도성 또는 구성성 프로모터를 포함할 수 있다.
RNA 간섭 (RNAi) (참고예: Chuang et al, Proc Natl Acad Sd USA 97: 4985-4990 (2000))은 NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 유전자의 발현을 억제하기 위하여 사용될 수 있다. 단백질의 손실을 유발하기 위하여 간섭 RNA (RNAi) 단편, 특히 이중 가닥 RNAi가 사용될 수 있다. 유기체 내에서 유전자를 침묵시키기 위한 RNAi의 사용과 관련한 방법은 예를 들어, 그 개시물이 본 명세서에 참고로 인용되는 문헌[Fire et al, Nature 391 : 806-811 (1998); Hammond et al, Nature Rev, Genet. 2: 110-1119 (2001); Hammond et al, Nature 404: 293-296 (2000); Bernstein et al, Nature 409: 363-366 (2001); Elbashir et al, Nature 411 : 494-498 (2001); 국제 PCT 출원 제WO 01/29058호; 및 국제 PCT 출원 제WO 99/32619호]에 알려져 있다.
구성체를 발현하는 이중 가닥 RNA는 에피솜(episomal)으로 남아있거나 게놈에 통합되는 복제가능한 벡터를 사용하여 숙주에 도입된다. 적절한 서열을 선택함으로써, dsRNA의 발현은 IL-10 동족체를 코딩하는 내재 mRNA의 축적을 간섭할 수 있다.
과민증의 치료 및/또는 예방
일 면에서, 본 발명은 과민성 질환 또는 장애를 억제하거나 예방하는 방법에 관한 것이다. 방법은 다음 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다:
(i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
(ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
(iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
(iv) 본 발명의 펩티드.
바람직하게, 단백질은 NEDD9 또는 이의 단편 또는 변이체이다. 바람직하게, 단백질은 PHLDA1 또는 이의 단편 또는 변이체이다.
또한, 본 명세서에 기술되는 것은 다음 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법이다:
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인.
바람직하게, 단백질은 NEDD9 또는 이의 단편 또는 변이체이다. 바람직하게, 단백질은 PHLDA1 또는 이의 단편 또는 변이체이다.
바람직하게, 펩티드는 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12 및 이의 변이체 및 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 14-273에 나타낸 아미노산을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 274-488 중 임의의 것에 나타낸 아미노산을 포함한다.
또한, 본 명세서에 제공되는 것은 비만 세포 수용체에 대한 다음 둘 중 어느 것의 결합을 억제하는 것을 포함하는 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법이다:
(i) NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인
(ii) PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인.
결합의 억제는 NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인 또는 PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 투여를 포함할 수 있다.
바람직하게, 펩티드는 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12 및 이의 변이체 및 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 14-273에 나타낸 아미노산을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 274-488중 임의의 것에 나타낸 아미노산을 포함한다.
과민성 질환 또는 장애는 전체적으로 또는 부분적으로 비만 세포 활성화로부터 발생할 수 있다. 비만 세포 활성화는 IgE 의존적 또는 IgE 독립적 메카니즘을 통해 발생할 수 있다. 과민성 질환 또는 장애는 염증성 반응을 포함할 수 있다.
본 명세서에 기술된 방법에 따라 예방되거나 치료될 수 있는 과민성 질환 또는 장애의 예는 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)과 같은 장애를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법은 또한 적어도 하나의 추가 제제의 투여를 포함할 수 있다. 추가 제제는 본 발명의 문맥 내에서 하나 이상의 세포 유형에 의해 분비되는 분자 매개체이며, 면역 반응의 활성화, 유지, 성숙, 억제, 저해 또는 확대를 초래하는 면역조절자일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 면역조절자는 타입 I 인터페론일 수 있다.
본 발명의 면 및 구체예에 따라, 치료를 필요로 하는 대상에 NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 또는 펩티드 (예를 들어, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12)의 치료적 유효량이 투여될 수 있다. 해당 분야의 숙련자는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질이 단백질이 치료되는 종으로부터 유래될 수 있는 종 특이적 방식으로 투여될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
본 발명의 단백질 및 펩티드는 조성물의 형태로 대상에 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 방법에 따라 사용하기에 적합한 조성물은 해당 분야의 숙련자에게 공지인 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 어쥬번트를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드를 단독으로 포함하여 제조될 수 있으며, 상이한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 혼합물, 펩티드의 혼합물 및 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 배합물도 또한 고려된다. 이 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 어쥬번트 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물에 포함될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 또한 면역억제제를 포함할 수 있다.
본 발명의 구체예는 또한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 (이를 테면 NEDD9 또는 PHLDA1) 및/또는 SH3 또는 PH 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 투여를 고려한다. 이 상황에서, 폴리뉴클레오티드는 전형적으로 대상에 폴리뉴클레오티드의 투여 후에 적절한 폴리펩티드 서열이 생성되도록 프로모터에 기능적으로 결합된다. 폴리뉴클레오티드는 벡터 중에서 대상으로 투여될 수 있다. 벡터는 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터, 또는 외부 서열의 삽입, 이들의 진핵 세포로의 도입 및 도입된 유전자의 발현을 위해 개조된 임의의 다른 적합한 비히클일 수 있다. 투여되는 핵산 작제물은 네이키드(naked) DNA를 포함하거나 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 조성물의 형태일 수 있다.
전형적으로, 벡터는 진핵 발현 벡터이며, 프로모터, 인핸서, 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 신호 및 전사 종결 서열과 같은 발현 조절 및 가공 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자의 발현은 해당 분야에 공지인 다양한 유전자 전달 방법을 사용하여 대상의 비만 세포에서 증대될 수 있다. 예를 들어, 유도성 프로모터와 같은 발현 조절 서열에 기능적으로 연결된 비만 세포 활성화 경로의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 조절자를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터는 비만 세포에서 이 단백질의 생산을 증대시키기 위하여 대상에 투여될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및/또는 펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터 (예를 들어, 레트로바이러스 및 아데노바이러스 벡터)는 이 단백질의 생산을 도출해내기 위하여 대상에 투여될 수 있다. 본 명세서에 기술되는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자의 전달은 또한 대상으로부터 세포를 추출하고, 대상 유전자를 함유하는 벡터를 투여한 다음, 세포를 대상에 재도입함으로써 달성될 수 있다. 유전자 전달 기술에 의한 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자의 발현은 대상의 비만 세포의 활성화를 조절하기 위한 수단으로 사용될 수 있다. 따라서, 이 방법은 또한 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 및 예방에 적합할 수 있다.
조절자에 대한 스크리닝
본 발명은 또한 대상의 면역 반응을 조절하기 위한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 작용제 및 길항제의 사용을 고려하며, 이 작용제 및 길항제를 식별하는 방법을 제공한다. 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 작용제 및 길항제는 특별히 설계되거나 비만 세포 활성화에 대한 그들의 효과에 따라 스크리닝될 수 있다.
일 면에서, 본 발명은 Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 활성을 조절하는 제제를 식별하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 후보 제제와 단백질의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 후보 제제를 단백질과 접촉시키고, 단백질의 활성을 분석하는 것을 포함한다.
또 다른 면에서, 본 발명은 Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 활성을 조절하는 제제를 식별하기 위하여 다수의 후보 제제를 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 후보 제제와 단백질의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 다수의 후보 제제를 단백질과 접촉시키고, 단백질의 활성을 분석하는 것을 포함한다.
추가의 면에서, 본 발명은 비만 세포 활성화 경로의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 조절자의 활성을 조절하는 제제를 식별하기 위하여 다수의 후보 제제를 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 후보 제제와 비만 세포 활성화 경로의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 조절자의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 다수의 후보 제제를 비만 세포 활성화 경로의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 조절자와 접촉시키는 단계 및 비만 세포 활성화 경로의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 조절자의 활성을 분석하는 단계를 포함한다.
바람직하게, 상기 기술된 방법에서 언급된 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 NEDD9 또는 PHLDA1이다.
후보 제제 또는 다수의 후보 제제가 NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질과 상호작용하거나 결합하는지를 결정하기 위하여 다양한 적합한 방법이 사용될 수 있다. 비제한적인 방법은 투-하이브리드 방법(two-hybrid method), 공동-면역침전법, 친화성 정제, 질량 분광학, 탠덤(tandem) 친화성 정제, 파지 디스플레이, 라벨 전달(label transfer), DNA 마이크로어레이/유전자 공동발현 및 단백질 마이크로어레이를 포함한다.
예를 들어, 투-하이드리브 분석법은 후보 제제 또는 다수의 후보 제제가 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질과 상호작용하거나 결합하는지를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 이스트 투-하이브리드 분석 시스템은 전형적으로 단백질-단백질 상호작용을 검출하는 데 사용되는 이스트-기초의 유전 분석법이다 (참고: Fields and Song., Nature 340: 245-246 (1989)). 분석법은 전사 활성화제의 다중-도메인 성질을 사용한다. 예를 들어, 공지의 전사 활성화제의 DNA-결합 도메인은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질에 융합될 수 있고, 전사 활성화제의 활성화 도메인은 후보 제제에 융합된다. 후보 제제와 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 간의 상호작용은 전사 활성화제의 DNA-결합 및 활성화 도메인을 아주 인접하게 할 것이다. 이후의 전사 활성화제에 의해 활성화되는 특정 리포터 유전자의 전사는 상호작용의 검출을 허용한다.
상기 기술의 변형에서, 융합 단백질은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 검출가능한 태그, 예를 들어 알칼리 포스파타아제와 융합시키고, Flanagan 및 Leder (참고: Flanagan and Leder, Cell 63:185-194 (1990))에 의해 기술된 변형된 형태의 면역침전법을 사용하여 작제될 수 있다.
대안적으로, 공동-면역침전법은 하나의 후보 제제 또는 다수의 후보 제제가 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질과 상호작용하거나 결합하는지를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 이 기술을 사용하여, 활성화된 비만 세포는 단백질-단백질 상호작용의 보존에 적합한 비변성 조건 하에서 용해될 수 있다. 그 다음, 생성된 용액은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질에 특이적인 항체와 함께 인큐베이션하고, 예를 들어 고체 지지체에 부착된 항체-결합 단백질을 포획함으로써 벌크 용액으로부터 면역침전된다. 본 방법에 의한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 면역침전법은 단백질과 관련된 제제의 공동-면역침전을 촉진시킨다. 관련 제제의 식별은 SDS-PAGE, 웨스턴 블롯팅 및 질량 분광학을 포함하나 이에 한정되지 않는 해당 분야에 공지인 몇몇의 방법을 사용하여 확립될 수 있다.
대안적으로, 파지 디스플레이 방법은 하나의 후보 제제 또는 다수의 후보 제제가 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질과 상호작용하거나 결합하는지를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 파지 디스플레이는 유전자 은행으로부터의 다수의 유전자를 파지에 도입함으로써 단백질 상호작용을 스크리닝하는 시험법이다. 이 방법 하에서, 재조합 DNA 기술은 각 유전자의 펩티드 또는 단백질 산물이 바이러스 입자의 표면에 나타나도록, 박테리오파지의 코트 단백질과의 융합으로 수많은 유전자를 발현시키기 위하여 사용된다. 파지 디스플레이된 대상 펩티드 또는 단백질 산물의 전체 라이브러리가 이 방법으로 생성될 수 있다. 그 다음, 생성된 파지 디스플레이된 펩티드 또는 단백질 산물은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질에 결합하는 능력에 대하여 스크리닝될 수 있다. 상호작용하는 파지로부터 추출한 DNA는 상호작용하는 단백질의 서열을 함유한다.
대안적으로, 친화성 크로마토그래피는 하나의 후보 제제 또는 다수의 후보 제제가 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질과 상호작용하거나 결합하는지를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 예를 들어, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 지지체(이를 테면 세파로스) 상에 고정될 수 있으며, 세포 용해물은 컬럼을 통과한다. 그 다음, 고정된 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질에 대한 단백질 결합은 컬럼으로부터 용리되고, 예를 들어 N-말단 아미노산 시퀀싱에 의해 식별될 수 있다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질에 대한 후보 제제의 상호작용 또는 결합이 이 단백질의 활성을 조절하는지를 결정하는 방법은 자극 후에 비만 세포 활성화의 정도를 측정함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 후보 제제가 투여되는 비만 세포에서 활성화의 수준이 측정될 수 있으며, 후보 제제가 투여되지 않은 비만 세포에서의 활성화 수준과 비교될 수 있다.
비만 세포로의 후보 제제의 흡수는 자연적 확산에 의해 발생하거나, 또는 미세주입, 전기천공법, 단백질과 하나 이상의 바이러스 단백질 형질도입 도메인 (PTD)의 융합 및 양이온 지질 전달을 포함하나 이에 한정되지 않는 해당 분야에 공지인 다양한 방법에 의하여 유도될 수 있다. 대안적으로, 후보 제제의 생산은 예를 들어 후보 제제를 코딩하는 유전자를 함유하는 플라스미드 발현 벡터 또는 바이러스를 비만 세포에 도입함으로써 비만 세포 내에서 유도될 수 있다. 세포에 플라스미드를 트랜스펙션(transfecting)하는 방법은 해당 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 인산 칼슘 공동침전, DEAE 덱스트란 촉진 트랜스펙션, 전기천공법, 미세주입 및 양이온 리포솜을 포함한다.
그 다음, 비만 세포 활성화는 다양한 방법, 예를 들어 IgE와의 인큐베이션 이후 DNP/알부민과의 교차 결합에 의해 유도될 수 있다. 비만 세포 활성화의 다양한 다른 IgE 독립적 트리거(trigger)도 또한 사용될 수 있으며, 예를 들어 활성화는 FcγR, 톨-유사 수용체 (TLR)를 통하여, 또는 아이오노마이신의 투여에 의하여 유도될 수 있다.
후보 제제가 투여되거나 또는 투여되지 않은 비만 세포에서의 활성화 수준의 측정 및 비교는 해당 분야에 공지인 방법에 의해 달성될 수 있다. 비만 세포 활성화의 수준은 활성화된 비만 세포의 탈과립화에 따라 방출되는 인자, 예를 들어 히스타민, 트립타제, 세린 프로테아제 트립타제, β-헥소사미니다제, 헤파린, 콘드로이틴 설페이트 E, 프로스타글란딘 D2, 류코트리엔 B4 및 C4, 혈소판 활성화 인자, 또는 IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-1O, IL-13, GM-CSF, TNF, CCL2, CCL3 및 CCL5를 포함하는 사이토카인을 검출하는 표준 분석법에 의해 측정될 수 있다. 대안적으로, 비만 세포 활성화의 정도는 예를 들어 유세포 분석법 또는 면역세포화학에 의하여 비만 세포 활성화의 특이적인 마커의 발현의 변화에 의해 측정될 수 있다. 비만 세포는 CD9, CD29, CD33, CD43, CD44, CD45, CD46, CD51, CD54, CD55, CD58, CD59, CD61, 및 CDl17, CD47, CD48, CD49d, CD53, CD60, CD63, CD81, CD82, CD84, CD87, CD92, CD97, CD98, 및 CD99, CD147, CD149, CD151, 및 CD157을 포함하나 이에 한정되지 않는 비만 세포에 의해 발현되는 해당 분야에 공지인 다양한 표면 수용체의 발현에 의해 이 기술을 사용하여 식별될 수 있다. 이렇게 식별된 비만 세포 활성화의 수준은 예를 들어 비만 세포 활성화 마커, 예를 들어, CD107A (LAMP-1), CD107B (LAMP-2), 트립타아제 및 PGD2의 발현에 의해 측정될 수 있다.
상기 기술된 방법은 단순히 본 명세서에 기술된 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 (이를 테면 NEDD9 및 PHLDA1)의 활성과 상호작용하거나 이를 조절할 수 있는 제제를 식별하기 위하여 사용될 수 있는 방법의 유형의 예일 뿐이라는 것이 인식될 것이다. 다른 적합한 방법이 해당 분야의 숙련자에게 공지일 것이며, 본 발명의 범위 내에 있는 것이다.
상기 기술된 방법을 사용하여, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인의 작용제인 제제가 식별될 수 있다. 작용제 제제는 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 하나 이상의 생물학적 활성을 증진시킨다. 대안적으로 상기 기술된 방법은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 길항제인 제제를 식별할 수 있다. 길항제 제제는 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인의 하나 이상의 생물학적 활성을 지연시킨다.
SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 이를 테면 NEDD9 또는 PHLDA1의 활성의 가능한 조절자는 해당 분야의 숙련자에게 알려진 몇몇 기술에 의해 상기 방법으로 스크리닝하기 위하여 생성될 수 있다. 예를 들어, X-선 결정학 및 핵 자기 공명 분광학과 같은 방법은 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 구조를 모델링하여, 컴퓨터-기반의 모델링을 사용하여 가능한 조절 제제의 설계를 용이하게 하기 위하여 사용될 수 있다. 조합 화학의 다양한 형태도 또한 추정 조절자를 생성하는 데 사용될 수 있다.
항체는 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 작용제 또는 길항제로 작동할 수 있다. 바람직하게, 적합한 항체는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 폴리펩티드의 불연속 영역 또는 단편으로부터 제조된다. 항원성 SH2/SH3/PH 도메인 함유 폴리펩티드는 적어도 약 5개 및 바람직하게는 적어도 약 10개의 아미노산을 함유한다.
적합한 항체의 생성 방법은 해당 분야의 숙련자에 의해 쉽게 이해될 것이다. 예를 들어, 전형적으로 Fab 부분을 함유하는 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드에 특이적인 모노클로널 항체는 문헌[Antibodies-A Laboratory Manual, Harlow and Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1988)]에 기술된 하이브리도마(hybridoma) 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
본질적으로, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드에 대해 지시된 모노클로널 항체의 제조에서, 배양 중인 무한증식 세포주에 의한 항체 분자의 생성을 제공하는 임의의 기술이 사용될 수 있다. 이들은 Kohler 등(Nature, 256:495-497 (1975)에 의해 처음 개발된 하이브리도마 기술 및 트리오마(trioma) 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술 (참고: Kozbor et al, Immunology Today, 4:72 (1983)) 및 인간 모노클로널 항체를 생성하기 위한 EBV-하이브리도마 기술 (참고: Cole et al, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp. 77- 96, Alan R. Liss, Inc., (1985))을 포함한다. 불멸의 항체 생성 세포주는 B 림프구의 종양 DNA로의 직접적 트랜스포메이션(transformation) 또는 엡스테인 바 바이러스(Epstein-Barr virus)로의 트랜스펙션과 같은 융합을 제외한 기술에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[M. Schreier et al, "Hybridoma Techniques" Cold Spring Harbor Laboratory, (1980); Hammerling et al, "Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas" Elsevier/North-Holland Biochemical Press, Amsterdam (1981); Kennett et al, "Monoclonal Antibodies'", Plenum Press (1980)]을 참고한다.
요약하여, 모노클로널 항체가 생성되는 하이브리도마를 생성하는 수단에서 골수종 또는 다른 자기-불멸 세포주는 이의 인식 인자-결합 부분 또는 인식 인자 또는 이의 기원-특이적 DNA-결합 부분으로 과면역화된 포유류의 비장으로부터 수득된 림프구와 융합된다. 본 발명을 실시하는 데 유용한 모노클로널 항체를 생성하는 하이브리도마는 본 인식 인자와 면역반응하는 이들의 능력 및 표적 세포에서 특정 전사 활성을 억제하는 이들의 능력에 의해 식별된다.
본 발명을 실시하는 데 유용한 모노클로널 항체는 적절한 항원 특이성의 항체 분자를 분비하는 하이브리도마를 함유하는 영양 배지를 포함하는 모노클로널 하이브리도마 배양을 개시함으로써 생성될 수 있다. 이 배양은 하이브리도마가 배지로 항체 분자를 분비하는 데 충분한 조건 및 기간 동안 유지된다. 그 다음, 항체-함유 배지가 수집된다. 그 다음, 항체 분자는 잘 알려진 기술에 의해 추가로 분리될 수 있다.
유사하게, 폴리클로널 항체의 생성에 사용될 수 있는 해당 분야에 알려진 다양한 방법이 있다. 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 이를 테면 NEDD9 또는 PHLDA1, 또는 본 발명의 펩티드에 대한 폴리클로널 항체의 생성을 위하여, 래빗, 닭, 마우스, 랫트, 양, 염소 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 숙주 포유류가 단백질의 주사에 의해 면역화될 수 있다. 또한, 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 유사체는 면역원성 캐리어, 예를 들어 소 혈청 알부민 (BSA) 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (keyhole limpet hemocyanin, KLH)에 컨쥬게이션될 수 있다. 또한, 면역 반응을 증가시키기 위하여 프로인트 (완전 및 불완전), 미네랄 겔, 이를 테면 수산화 알루미늄, 표면 활성 물질, 이를 테면 라이소레시틴(rysolecithin), 플루로닉 폴리올, 다중 음이온, 펩티드, 오일 유제, 키홀 림펫 헤모시아닌, 디니트로페놀 및 잠재적으로 유용한 인간 어쥬번트, 이를 테면 BCG (칼메트-게랑 간균) 및 코리네박테리움 파붐(Corynebacterium parvum)을 포함하나 이에 한정되지 않는 어쥬번트가 사용될 수 있다.
원하는 항체의 스크리닝은 또한 해당 분야에 알려진 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 항체의 면역특이적 결합에 대한 분석법은 방사선면역측정법, ELISA (효소결합 면역흡착검사), 샌드위치 면역분석법, 면역방사측정법, 겔 확산 침전 반응, 면역확산 분석법, 인 시츄(in situ) 면역분석법, 웨스턴 블롯, 침전 반응, 응집 반응, 보체 결합 분석법, 면역형광 분석법, 단백질 A 분석법 및 면역전기영동 분석법 등 (참고예: Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York (1994))을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 항체 결합은 1차 항체 상의 검출가능한 표지의 효력으로 검출될 수 있다. 대안적으로, 항체는 적절하게 표지된 2차 항체 또는 시약과 그의 결합의 효력으로 검출될 수 있다. 면역분석법에서 결합을 검출하는 다양한 방법은 해당 분야에 공지이며, 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 또는 펩티드에 대하여 생성된 항체 (또는 이의 단편)는 그 단백질에 대한 결합 친화도를 갖는다. 바람직하게, 항체 (또는 이의 단편)는 약 105 M-1 초과, 더욱 바람직하게는 약 106 M-1 초과, 더더욱 바람직하게는 약 107 M-1 초과 및 가장 바람직하게는 약 108 M-1 초과의 결합 친화도 또는 결합성을 갖는다.
본 발명에 따른 항체의 적량을 수득하는 용어에서, 혈청이 없는 배지와 함께 뱃취 배양(batch fermentation)을 사용하여 항체(들)를 제조할 수 있다. 배양 후에 크로마토그래피 및 바이러스 불활성화/제거 단계를 통합하는 다단계 과정을 통해 항체가 정제될 수 있다. 예를 들어, 항체는 먼저 단백질 A 친화성 크로마토그래피로 분리한 다음, 용매/세제로 처리하여 임의의 지질 외피 바이러스(lipid enveloped virus)를 불활성화시킬 수 있다. 전형적으로 음이온 및 양이온 교환 크로마토그래피에 의한 추가의 정제는 잔여 단백질, 용매/세제 및 핵산을 제거하기 위하여 사용될 수 있다. 정제된 항체는 겔 여과 컬럼을 사용하여 추가로 정제될 수 있으며 0.9% 염수로 제제화될 수 있다. 그 다음, 제제화된 벌크 제제는 살균되고, 바이러스를 여과시키고 분배될 수 있다.
과민성에 대한 성향 진단
추가의 면에서, 본 발명은 대상의 과민성 관련 질환 또는 장애를 발생시키는 성향을 진단하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 대상으로부터 핵산 샘플을 수득하고, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 핵산에서 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재에 대하여 핵산 샘플을 분석하는 단계를 포함한다. 바람직하게, SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질은 NEDD9 또는 PHLDA1이다.
본 발명의 방법으로 진단될 수 있는 과민성 관련 질환 또는 장애는 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 기도 염증과 관련된 호흡기 질환을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
기도 염증과 관련된 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
진단용 핵산은 혈액, 소변, 타액, 조직 생검 및 부검 물질을 포함하나 이에 한정되지 않는 대상의 다양한 소스로부터 유래한 세포로부터 얻을 수 있다. 핵산에서 서열 변이를 확인하는데 다양한 기술이 사용되었다. 예를 들어, Hi-Res Melting, 동종의 돌연변이 스캐닝 및 유전자형 분석(genotyping)을 위한 PCR-이후 기술(Hi-Res LightScanner), 뉴클레오티드 서열의 돌연변이 또는 변경에 의해 생성된 제한 부위를 검출하는 제한 단편 길이 다형성 (RFLP) (참고: Kan et al, Lancet 2(8096):910, (1978)), 전기영동 겔의 밴드 이동의 변경을 통해 뉴클레오티드 서열 차이를 확인하는 변성 구배 겔 전기영동(denaturing gradient gel electrophoresis) 및 단일 가닥 DNA 전기영동의 이동 연구 (참고: Myers et al, Nature 313:495, (1985); Orita et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA 86:2766, (1989)), 헤테로듀플렉스 DNA의 미스매치 부위를 확인하는 화학 절단 분석법 (참고: Cotton, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4397, (1988)), 및 RNA-DNA 또는 RNA-RNA 헤테로듀플렉스의 미스매치 부위를 확인하는 RNase 절단 분석법 (참고: Myers et al, Science 230:1242, (1985); Maniatis et al, 미국 특허 제 4,946,773호).
돌연변이는 해당 분야에 공지인 다양한 기술을 사용하여 DNA 수준에서 검출될 수 있다. 게놈 DNA는 검출을 위해 직접 사용되거나, 분석 전에 중합효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 효소로 증폭될 수 있다 (참고: Saiki et al, Nature 324:163- 166 (1986)). RNA 또는 cDNA가 또한 이 목적으로 사용될 수 있다. 예로서, 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 핵산에 상보적인 PCR 프라이머는 돌연변이를 확인하고 분석하기 위하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 결실 및 삽입은 야생형 유전형의 것과 비교한 증폭된 산물의 크기 차이로 검출될 수 있다. 점 돌연변이는 증폭된 DNA를 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 코딩하는 방사선 표지된 RNA 또는 선택적으로 방사선 표지된 안티센스 DNA 서열과 혼성화시킴으로써 확인될 수 있다. 완벽하게 매치된 서열은 RNase A 절단 또는 용융(melting) 온도의 차이에 의해 미스매치 듀플렉스와 구별될 수 있다.
돌연변이는 또한 변성제와 함께 또는 변성제 없이 겔에서 핵산 단편 또는 단백질의 전기영동 이동의 변경에 의해 검출될 수도 있다. 작은 서열 결실 및 삽입은 고 해상 겔 전기영동에 의해 가시화될 수 있다. 상이한 서열의 핵산 단편은 상이한 단편의 이동이 특정 용융 또는 부분적 용융 온도에 따라 겔의 상이한 위치로 지연되는 변성 포름아미드 구배 겔에서 구별될 수 있다 (참고예: Myers et al, Science 230:1242 (1985)).
특정 위치에서의 서열 변화는 또한 RNase 및 S1 보호와 같은 뉴클레아제 보호 분석법 또는 화학적 절단 방법에 의해서도 나타낼 수 있다 (참고예: Cotton et al, Proc. Natl. Acad. ScL (USA) 85:4397-4401 (1985)).
따라서, 특정 DNA 서열의 검출은 혼성화, RNase 보호, 화학적 절단, 직접 DNA 시퀀싱 또는 제한 효소의 이용 (예를 들어, 제한 단편 길이 다형성 (RFLP)) 및 게놈 DNA의 서던 블롯팅과 같은 방법에 의해 달성될 수 있다. 더 통상적인 겔-전기영동 및 DNA 시퀀싱 외에, 돌연변이는 또한 인 시츄(in situ) 분석법에 의해 검출될 수도 있다.
본 발명에 따라, 대상으로부터 핵산 샘플을 얻는 수단 및 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 활성을 조절하는 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재에 대하여 핵산 샘플을 분석하는 수단을 포함하는 키트가 제조될 수 있다.
이러한 키트는 예를 들어 대상에서 알레르기 질환 또는 증상을 발생시키는 경향의 진단을 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 키트는 대상의 세포로부터 핵산 샘플을 얻기 위한 하나 이상의 수단을 포함한다. 세포는 혈액, 소변, 타액, 조직 생검 및 부검 물질을 포함하나 이에 한정되지 않는 대상의 다양한 소스로부터 유래될 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 본 발명의 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 이를 테면 NEDD9 또는 PHLDA1의 활성을 조절하는 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재에 대하여 핵산 샘플을 분석하는 수단을 포함한다. 이러한 돌연변이의 예는 하나 이상의 뉴클레오티드의 결실, 삽입, 전위, 역위 및 염기 치환을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 키트는 또한 본 발명의 방법을 수행하는 데 필요한 다른 성분, 이를 테면 완충액 및/또는 희석제도 포함할 수 있다. 키트는 전형적으로 다양한 성분을 수용하기 위한 컨테이너 및 본 발명의 방법에서 키트 성분을 사용하기 위한 설명서를 포함한다.
조성물 및 투여 경로
본 발명은 NEDD9 또는 PHLDA1과 같은 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질, 본 발명의 펩티드, 상이한 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질의 혼합물, 펩티드의 혼합물 및 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질 및 펩티드의 배합물을 포함하는 조성물의 이용을 고려한다. 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 어쥬번트 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물 내에 포함될 수 있다. 추가적으로 또는 선택적으로, 본 발명의 조성물은 면역억제제, 예를 들어 항염증 화합물 또는 기관지 확장 화합물을 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, 면역억제제는 사이클로스포린, 타크로리무스, 시롤리무스, 마이코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 크로모글리칼레이트, 테오필린, 류코트리엔 길항제 및 항히스타민 또는 이들의 배합물일 수 있다.
면역억제제는 또한 면역 억제 약물 또는 B 또는 T 림프구 또는 이들의 활성화를 매개하는 표면 수용체에 대한 특정 항체일 수도 있다. 예를 들어, 면역 억제 약물은 사이클로스포린, 타크로리무스, 시롤리무스, 마이코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 크로모글리칼레이트, 테오필린, 류코트리엔 길항제 및 항히스타민 또는 이들의 배합물일 수 있다.
또한, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 코르티코스테로이드와 같은 스테로이드를 추가로 포함한다.
또다른 구체예에서, 조성물은 스테로이드를 추가로 포함한다.
본 발명은 또한 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 대상의 과민성 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 구체예는 과민성 질환 또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한 Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 용도를 제공한다. 바람직하게, 단백질은 NEDD9 또는 이의 단편 또는 변이체이다. 바람직하게, 단백질은 PHLDA1 또는 이의 단편 또는 변이체이다.
또한, 본 발명에 기술되는 것은 과민성 질환 또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한
(i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
(ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 용도이다. 바람직하게, 펩티드는 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12 및 이의 변이체 및 단편으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 14-273에 나타낸 아미노산을 포함한다.
또다른 구체예에서, 펩티드는 서열 번호 274-488 중 어느 하나에 나타낸 아미노산을 포함한다.
조성물은 표준 경로에 의해 투여될 수 있다. 일반적으로, 조성물은 비경구 (예를 들어, 정맥내, 척추내, 피하, 또는 근육내)로 투여될 수 있다. 더욱 바람직하게, 조성물은 국소, 경구, 또는 코 내로 투여될 수 있다. 투여는 전신, 부위 또는 국소일 수 있다. 임의의 주어진 시간에 사용되는 특정 투여 경로는 치료되는 증상의 성질, 증상의 중증도 및 범위, 전달되는 특정 조성물의 필요한 용량 및 조성물의 가능한 부작용을 포함하는 많은 인자에 따라 달라질 것이다.
담체, 희석제 및 어쥬번트는 조성물의 다른 성분과 호환되는 용어에서 "허용가능"해야 하며, 이의 부형제에 유해하지 않아야 한다. 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 예는 미네랄 제거수 또는 증류수; 식염수; 야채 기제 오일, 이를 테면 땅콩 기름, 홍화씨 유, 올리브 오일, 면실유, 옥수수 유, 참기름, 이를 테면 땅콩 기름, 홍화씨 유, 올리브 오일, 면실유, 옥수수 유, 참기름, 낙화생유, 또는 코코넛 오일; 폴리실록산, 이를 테면 메틸 폴리실록산, 페닐 폴리실록산 및 메틸페닐 폴리솔폭산을 포함하는 실리콘 오일; 휘발성 실리콘; 광유, 이를 테면 유동 파라핀(liquid paraffin), 연질 파라핀, 또는 스쿠알렌; 셀룰로오스 유도체, 이를 테면 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 소듐 카복시메틸셀룰로오스 또는 하이드록시프로필메틸셀룰로오스; 저급 알칸올, 예를 들어 에탄올 또는 이소-프로판올; 저급 아르알칸올; 저급 폴리알킬렌 글리콜 또는 저급 알킬렌 글리콜, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜 또는 글리세린; 지방산 에스테르, 이를 테면 이소프로필 팔미테이트, 이소프로필 미리스테이트 또는 에틸 올레에이트; 폴리비닐피롤리돈; 아가; 트라거캔쓰 검 또는 아카시아 검 및 페트로리움 젤리(petroleum jelly)이다. 전형적으로, 담체(들)는 조성물의 10% 내지 99.9 중량%를 이룰 것이다.
본 발명의 조성물은 주사에 의한 투여에 적합한 형태, 경구 섭취에 적합한 제제 형태 (이를 테면, 캡슐, 정제, 캐플릿, 엘릭시르), 국소 투여에 적합한 연고, 크림 또는 로션의 형태, 점안제로 전달하기에 적합한 형태, 비강내 흡입 또는 경구 흡입에 의한 것과 같은 흡입에 의한 에어로졸 형태, 피하내, 근육내 또는 정맥내 주사인 비경구 투여에 적합한 형태일 수 있다.
주사가능한 용액 또는 현탁액으로 투여하기 위하여, 비독성 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 담체에는 링거액, 등장성 식염수, 인산염 완충 식염수, 에탄올 및 1,2 프로필렌 글리콜이 포함될 수 있다.
경구 이용에 적당한 담체, 희석제, 부형제 및 어쥬번트의 몇몇 예에는 땅콩 기름, 유동 파라핀, 소듐 카복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 소듐 알기네이트, 아카시아 검, 트라거캔쓰 검, 덱스트로오스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 젤라틴 및 레시틴이 포함된다. 이들 외에, 경구 제제에는 적당한 향미제 및 착색제가 포함될 수 있다. 캡슐에 사용되는 경우, 캡슐은 붕괴를 지연시키는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 스테아레이트와 같은 화합물로 코팅될 수 있다.
어쥬번트에는 전형적으로 연화제, 유화제, 농후제(thickening agent), 보존제, 살균제 및 완충제가 포함된다.
경구 투여용 고체 형태에는 인간 및 수의적 약제학적 실행에 허용가능한 바인더, 감미료, 붕괴제, 희석제, 향미제, 코팅제, 보존제, 윤활제 및/또는 시간 지연제가 함유될 수 있다. 적당한 바인더에는 아카시아 검, 젤라틴, 옥수수 전분, 트래거캔쓰 검, 소듐 알기네이트, 카복시메틸셀룰로오스 또는 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다. 적당한 감미료에는 수크로스, 락토오스, 글루코오스, 아스파르탐 또는 사카린이 포함된다. 적당한 붕괴제에는 옥수수 전분, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 구아검, 잔탄검, 벤토나이트, 알긴산 또는 아가가 포함된다. 적당한 희석제에는 락토오스, 소르비톨, 만니톨, 덱스트로스, 카올린, 셀룰로오스, 탄산 칼슘, 칼슘 실리케이트 또는 디칼슘 포스페이트가 포함된다. 적당한 향미제에는 박하유, 노루발풀, 체리, 오렌지 또는 라스베리 향미유가 포함된다. 적당한 코팅제에는 폴리머 또는 아크릴산 및/또는 메타크릴산의 코폴리머 및/또는 이들의 에스테르, 왁스, 지방산 알코올, 제인(zein), 쉘락(shellac) 또는 글루텐이 포함된다. 적당한 보존제에는 소듐 벤조에이트, 비타민 E, 알파-토코페롤, 아스코르브산, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤 또는 소듐 비설피트가 포함된다. 적당한 윤활제에는 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산, 소듐 올레에이트, 염화 나트륨 또는 탈크가 포함된다. 적당한 시간 지연제에는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 포함된다.
경구 투여를 위한 액체 형태는 상기 제제 외에 액체 담체를 포함할 수 있다. 적당한 액체 제제에는 물, 오일, 이를 테면 올리브 오일, 땅콩 기름, 참기름, 해바라기 오일, 홍화씨 유, 낙화생유, 코코넛 오일, 유동 파라핀, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 글리세롤, 지방산 알코올, 트리글리세리드 또는 이의 혼합물이 포함될 수 있다.
경구 투여를 위한 현탁액에는 분산제 및/또는 현탁화제가 추가로 포함될 수 있다. 적당한 현탁화제에는 소듐 카복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오스, 폴리-비닐-피롤리돈, 소듐알기네이트 또는 아세틸 알코올이 포함된다. 적당한 분산제에는 레시틴, 스테아르산과 같은 지방산의 폴리옥시에틸렌 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노- 또는 디-올레에이트, -스테아레이트 또는 -라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노- 또는 디-올레에이트, -스테아레이트 또는 -라우레이트 등이 포함된다.
경구 투여를 위한 유제에는 하나 이상의 유화제가 추가로 포함될 수 있다. 적당한 유화제에는 상기 예시된 분산제 또는 천연 검, 이를 테면 구아 검, 아카시아 검 또는 트래거캔쓰 검이 추가로 포함될 수 있다.
비경구 투여가능한 조성물을 제조하는 방법은 해당 분야의 숙련자에게 명백하며, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 인용된 문헌[Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa.]에 더 자세히 기술되어 있다.
본 발명의 국소 제제에는 하나 이상의 허용가능한 담체 및 임의의 다른 치료 성분과 함께 활성 성분이 포함된다. 국소 투여에 적합한 제제에는 피부를 통하여 치료가 필요한 부위로 침투되기에 적합한 액체 또는 반-액체 제제, 이를 테면 찰제(liniment), 로션, 크림, 연고 또는 페이스트 및 눈, 귀 또는 코에 투여하기에 적합한 점적제가 포함된다.
본 발명에 따른 점적제에는 멸균 수성 또는 유성 용액 또는 현탁제가 포함될 수 있다. 이들은 활성 성분을 살균제 및/또는 살진균제 및/또는 임의로 표면 활성제를 포함하는 임의의 다른 적합한 보존제의 수용액 중에 용해시켜 제조될 수 있다. 그 다음, 생성된 용액은 여과로 정화되고, 적당한 컨테이너에 옮기고 살균될 수 있다. 살균은 30분 동안 90-100 ℃에서 오토클레이브하거나(autoclaving) 또는 유지시키거나, 여과 후 무균 기술에 의해 컨테이너로 옮김으로써 달성될 수 있다. 점적제에 포함되기에 적합한 항균제 및 항진균제의 예는 페닐머큐릭 니트레이트 또는 아세테이트 (0.002%), 벤즈알코늄 클로라이드 (0.01%) 및 클로르헥시딘 아세테이트 (0.01%)가 있다. 유성 용액을 제조하기에 적당한 용매에는 글리세롤, 희석 알코올 및 프로필렌 글리콜이 포함된다.
본 발명에 따른 로션에는 피부 또는 눈에 적용하기에 적당한 것이 포함된다. 눈 로션에는 임의로 살균제를 함유하는 멸균 수용액이 포함될 수 있으며, 점적제의 제조와 관련하여 상기 기술된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 피부에 적용하기 위한 로션 또는 찰제에는 또한 빠르게 건조시키고, 피부를 차게 하는 제제, 이를 테면 알코올 또는 아세톤 및/또는 모이스처라이저, 이를 테면 글리세롤, 또는 피마자유 또는 낙화생유가 포함된다.
본 발명에 따른 크림, 연고 또는 페이스트는 외부 적용을 위한 활성 성분의 반-고체 제제이다. 이들은 미분 또는 분말 형태 단독 또는 수성 또는 비수성 유체 중의 현탁액 또는 용액 중의 활성 성분을 지성 또는 비-지성 기제와 혼합하여 제조될 수 있다. 이 기제는 탄화수소, 이를 테면 경질, 연질 또는 유동 파라핀, 글리세롤, 밀랍, 금속 비누; 점액; 천연 기원의 오일, 이를 테면 아몬드, 옥수수, 낙화생유, 피마자유 또는 올리브 오일, 양모유 또는 이의 유도체 또는 프로필렌 글리콜 또는 마크로골과 같은 알코올과 함께 지방산, 이를 테면 스테아르산 또는 올레산을 포함할 수 있다.
조성물은 임의의 적당한 계면활성제, 이를 테면 음이온, 양이온 또는 비-이온성 계면활성제, 이를 테면 소르비탄 에스테르 또는 이의 폴리옥시에틸렌 유도체를 통합할 수 있다. 현탁화제, 이를 테면 천연 검, 셀룰로오스 유도체 또는 무기 물질, 이를 테면 실리카성(silicaceous) 실리카 및 라놀린과 같은 다른 성분도 또한 포함될 수 있다.
조성물은 또한 리포좀의 형태로 투여될 수도 있다. 리포좀은 일반적으로 인지질 또는 다른 지질 물질로부터 유래하며, 수성 매질 중에 분산된 모노- 또는 멀티-층의 수화 액정에 의해 형성된다. 리포좀을 형성할 수 있는, 임의의 비독성의 생리학적으로 허용가능하며 대사 가능한 지질이 사용될 수 있다. 리포좀 형태의 조성물은 안정화제, 보존제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 바람직한 지질은 천연 및 합성의 인지질 및 포스파티딜 콜린 (레시틴)이다. 리포좀을 형성하는 방법은 해당 분야에 공지이며, 이에 관하여, 그 내용이 본 명세서에 참고로 인용되는 문헌[Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p.33 et seq.]을 특히 참고하였다.
용량
본 발명의 방법에 따라 사용하기에 적절한 조성물은 치료적 또는 예방적으로 조성물로 투여될 수 있다. 치료적 적용에서, 조성물은 질환 또는 증상으로 이미 고통받고 있는 환자에게 질환 또는 증상 및 이의 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 저지시키는 데 충분한 양으로 투여된다. 조성물은 환자를 효율적으로 치료하기에 충분한 제제의 양을 제공해야 한다.
임의의 특정 환자에 대하여 치료적으로 유효한 용량 수준은 다음을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다: 치료되는 장애 및 장애의 중증도; 사용되는 화합물 또는 제제의 활성; 사용되는 조성물; 환자의 나이, 체중, 일반적 건강, 성별 및 식이; 투여 시간; 투여 경로; 제제 또는 화합물의 제거 속도; 치료 기간; 약제에서 잘 알려진 다른 관련 인자와 함께, 치료에 동시에 또는 배합되어 사용되는 약물.
해당 분야의 숙련자는 통상의 실험에 의하여 적용가능한 질환을 치료하기 위해 필요한 제제 또는 화합물의 유효한, 비독성 양을 결정하는 것이 가능할 것이다.
일반적으로, 유효 용량은 24 시간당 체중 kg당 약 0.0001mg 내지 약 1000mg; 전형적으로 24 시간당 체중 kg당 약 0.001mg 내지 약 750mg; 24 시간당 체중 kg당 약 0.01mg 내지 약 500mg; 24 시간당 체중 kg당 약 0.1mg 내지 약 500mg; 24 시간당 체중 kg당 약 0.1mg 내지 약 250mg; 24 시간당 체중 kg당 약 1.0mg 내지 약 250mg 범위인 것으로 예상된다. 더욱 전형적으로, 유효 용량 범위는 24 시간당 체중 kg당 약 1.0mg 내지 약 200mg; 24 시간당 체중 kg당 약 1.0mg 내지 약 100mg; 24 시간당 체중 kg당 약 1.0mg 내지 약 50mg; 24 시간당 체중 kg당 약 1.0mg 내지 약 25mg; 24 시간당 체중 kg당 약 5.0mg 내지 약 50mg; 24 시간당 체중 kg당 약 5.0mg 내지 약 20mg; 24 시간당 체중 kg당 약 5.0mg 내지 약 15mg 범위인 것으로 예상된다.
선택적으로, 유효 용량은 최대 약 500 mg/㎡일 수 있다. 일반적으로, 유효 용량은 약 25 내지 약 500mg/㎡, 바람직하게 약 25 내지 약 350mg/㎡, 더욱 바람직하게 약 25 내지 약 300mg/㎡, 더더욱 바람직하게 약 25 내지 약 250mg/㎡, 보다 바람직하게 약 50 내지 약 250mg/㎡ 및 더욱 바람직하게 약 75 내지 약 150mg/㎡의 범위인 것으로 예상된다.
전형적으로 치료 적용에서, 치료는 질환 상태 또는 증상의 기간을 위한 것일 것이다. 또한, 개별 투여량의 최적의 양 및 간격이 치료되는 질환 상태 또는 증상의 성질 및 범위, 투여의 형태, 경로 및 부위 및 치료되는 특정 개인의 성질에 의해 결정될 것이라는 것은 해당 분야의 숙련자에게 명백할 것이다. 또한 이러한 최적의 조건은 통상의 기술에 의해 결정될 수 있다.
최적의 치료 코스, 이를 테면 정의된 일수에 대하여 하루에 제공되는 조성물의 투여 횟수가 치료 결정 시험의 통상의 코스를 사용하여 해당 분야의 숙련자에 의해 확인될 수 있음이 또한 해당 분야의 숙련자에게 명백할 것이다.
본 발명은 이제 특정 실시예를 참고로 기술할 것이며, 이는 본 발명의 범위를 한정하는 임의의 수단으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1 : 비만 세포 활성화에 관여하는 추정 SH2 / SH3 / PH 도메인 함유 단백질의 식별
세포내 신호 전달 산물을 코딩하는 활성화된 비만 세포에서 신규 유전자를 동정하는 데 컴퓨터 기반의 접근을 사용하였다. 이는 휴지 및 활성화 골수 유래 인간 비만 세포로부터 얻은 유전자 발현 데이터를 SH2 및/또는 SH3 및/또는 PH 도메인을 코딩하는 유전자에 대하여 스크리닝하여 달성된다.
골수 유래 비만 세포 (BMMC)를 Liu 등(J Allergy Clin Immunol 118:496-503, (2006))에 기술된 바와 같이 생성하고, mRNA를 휴지 및 IgE 교차 결합 자극된 BMMC로부터 분리하고, Lui 등에서 설명된 Affymetrix 표준 프로토콜에 따라 유전자 발현 분석을 수행하였다 (J Allergy Clin Immunol 118:496- 503, (2006)).
BMMC에 의해 발현되는 SH2/SH3/PH 도메인 함유 단백질을 식별하기 위하여 유전자 서열 스캐닝을 위한 LINUX 기반 플랫폼을 사용하여 도메인 서열 검색을 수행하였다. Affymetrix 프로브는 거의 15000개가 비만 세포에서 발현되는 것으로 관찰되었고, 207개의 유전자가 SH2, SH3 및/또는 PH 도메인을 가지는 단백질을 코딩하며, 이들 중 23개 (11%)가 FcεR1 교차 결합에 따라 상향 조절되거나 하향 조절되는 것으로 관찰되었다.
비만 세포 IgE 신호 전달 경로의 구성원으로 이전에 확인된 적이 없는 분자를 코딩하는 몇몇의 유전자는 이들의 기록된 유전자 서열 특성 및 다른 세포 유형에서의 생물학적 작용에 기초하여, 비만 세포 활성화 과정의 가능한 작용체로 여겨진다. 이들 중에, NEDD9 (신경 전구 세포-발현된 발달상 하향조절된 유전자 9) 및 PHLDA1은 이들의 구조 특성 및 생물학적 활성에 기초한 추가의 연구를 위하여 선택하였다.
실시예 2: 비만 세포 활성화에서 NEDD9 및 PHLDA1 의 역할
(i) NEDD9 신호 전달에 관여하는 고도의 선택적 도킹( docking ) 단백질
CasL (Crk-관련 물질 림프구 유형) 및 HEF1 (필라멘테이션의 인간 인핸서 1)로도 알려진 인간 NEDD9 유전자 (신경 전구 세포-발현된 발달상 하향조절된 유전자 9) (GenBank, IDs: NM_006403.2 및 NM_182966.2, Ensembl ID: ENSG00000111859, Entrez gene ID 4739 및 Uniprot ID Q14511)는 834개 아미노산의 미가공 전구체 단백질의 발현을 코딩한다. NEDD9은 SH3 도메인 및 SH2-결합 부위에 풍부한 도메인을 함유한다.
NEDD9 아형 1은 UniProt 식별자 Q 14511이며 아형 CRA_b (UniProt 식별자 Q5T9R4)와 동일하다. NEDD9 아형 1은 위치 10-64에 SH3 도메인, 위치 633-656에 CC 모티브, 위치 92, 166, 177 및 189에 3개의 인산화 부위 및 위치 363에 절단 부위를 가진다.
아형 CRA_a (UniProt 식별자 Q5T9R4)는 또한 서열 위치 2, 3 및 4에서 아형 1과 상이한 834개 아미노산 단백질이다. 이는 Cas 패밀리에 속하며, 모든 패밀리 구성원과 같이, 아형 1(Q 14511)인 REFSEQ 수탁 번호 NM_006403.2로 정의된 서열에서 잔기 7 내지 66에 상응하는 60개의 아미노산을 포함하는 N-말단 SH3 도메인을 특징으로 한다. 이는 또한 다수의 유력한 SH2-결합 부위를 도입하는 중심 도메인 및 분기하는 헬릭스-루프-헬릭스 (HLH) 모티브를 가지는 C-말단 도메인을 함유한다. SH2-결합 부위는 추정적으로 CRK, NCK 및 ABL SH2 도메인과 결합한다. HLH 모티브는 HLH 단백질 ID2, E12 및 E47와의 특정 상호작용을 부여한다. 세포 주기-조절된 가공으로부터 발생한 번역-후 변형으로 아형 1로부터 4개의 단백질, p115, p105, p65 및 p55가 생성된다. 단백질 아형 1 p115는 아형 1 p105 인산화로부터 발생하며, 세포 주기에서 나중에 나타난다. 아형 1 p55는 캐스파제(caspase) 절단-관련 부위에서 절단의 결과로 아형 1 p105로부터 발생하며, 이는 유사 분열시에 특이적으로 나타난다.
인간 NEDD9 유전자 전사체의 스플라이스 변이로 단백질 아형 2 (UniProt: Q5XKI0), 아형 CRA_c (REFSEQ: EAW55302.1) 및 아형 CRA_d (REFSEQ: EAW55303.1)가 될 수 있다. HEF1 단백질 아형 CRA_c는 800개의 아미노산을 포함하며, 아형 1 및 CRA_a와 유사하고, 중심 SH2-모티브 풍부 도메인에서 적은 수의 잠재적 리간드 모티브의 손실이 다르다. CRA_d에 대한 전사체는 N-말단 SH3 도메인이 결여된 688개 아미노산의 단백질을 코딩한다. 반면 아형 2는 오직 HEF1 아형 1의 N-말단 잔기 1 내지 154와 동일한 174개 아미노산 단백질이며, 본질적으로 오직 SH3 도메인 및 상당히 감소된 SH2-리간드 도메인이다. 잔기 Pro-148 후에 절단된 단백질 (UniProt: Q5TI59)을 포함하는 추가의 인간 NEDD9-코딩 단백질 변이체는 UniProt 데이터베이스에 열거하였고, 이는 본질적으로 아형 2의 약간 더 작은 버전이다.
CRA_d 아형을 제외하고, N-말단 SH3 도메인은 상기 언급된 각각의 NEDD9 아형 각각에 존재한다.
NEDD9는 세포내 신호를 전파하는 데 관여하는 다기능성 도킹 단백질이며, 핵, 세포질 및 골지체 및 라멜리포디아와 같은 구조에서 매우 다양한 조직에서 발현된다. NEDD9의 SH3 도메인 (aa 2-64) 및 코일드-코일(coiled-coil) 도메인 (aa 633-656)은 세포 표면 수용체의 다운스트림 3개의 신호 전달 분자, Lck, Lyn 및 Fyn와 높은 선택성으로 상호작용하는 가능성을 부여한다. 다른 단백질 상호작용 모티브는 세린 풍부 도메인 (aa 400-558) 및 헬릭스-루프-헬릭스 (HLH) 모티브를 함유하는 보존된 C-말단 도메인(aa 710-760)이다. NEDD9의 SH3 폴딩(folding)은 서로 오른쪽 각에 위치한 두 개의 역-평행 베타 시트로 구성된다. 폴딩 내에, RT 및 n-Src 루프로 언급되는 두 개의 가변 루프가 있다. SH3가 그 리간드에 결합할 때, 프롤린 풍부 리간드는 헬릭스의 턴(turn)에 결합하는 SH3 도메인의 표면에서 한 쌍의 그루브(groove)에 의해 인지되는 PPII 헬릭스 구조와 함께 poly-L-프롤린 유형 II 헬릭스 구조를 사용한다. SH3 그루브는 일련의 거의 평행의 잘 보존된 방향족 잔기에 의해 형성된다.
NEDD 9는 세포 신호 전달에 관여하는 몇몇 세포내 단백질과 상호작용하는 것으로 확인되었다. 표 1은 상호작용하는 단백질, 상호작용 유형 및 확인에 사용되는 실험 방법을 기술한 것이다.
상호작용자의 명칭 실험 유형 유형
ABL 생체 내; 시험관 내 직접
유방암 항 에스트로겐 내성 3 생체 내 직접
CRK 생체 내; 시험관 내 직접
CRK 관련 물질 생체 내; 이스트 2 하이브리드 직접
CRKL 생체 내; 시험관 내 직접
카드헤린 1 시험관 내 직접
CasL 상호작용 분자 생체 내; 시험관 내 직접
콜린 아세틸트랜스퍼라아제 생체 내 직접
FAK 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
DNA 결합의 억제제 2 생체 내; 이스트 2 하이브리드 직접
이치(itchy) 호몰로그 E3 유비퀴틴 단백질 리가아제 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
Lck 시험관 내 직접
Lyn 생체 내 직접
NCK1 생체 내; 시험관 내 직접
PTK2B 단백질 티로신 키나아제 2 베타 생체 내 직접
팍실린 생체 내 직접
단백질 티로신 포스파타아제 비수용체 유형 12 시험관 내 직접
SH2D3C 생체 내; 시험관 내 직접
SHP2 생체 내; 시험관 내 직접
SMAD, DPP 호몰로그 2에 대한 어미(드로소필라) 생체 내 직접
SMAD3 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
Sma 및 Mad 관련 단백질 1 생체 내; 이스트 2 하이브리드 직접
갑상선 호르몬 수용체 상호작용자 6 이스트 2 하이브리드 직접
전사 인자 3 이스트 2 하이브리드 직접
Zyxin 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
필라멘테이션 의 인핸서 1 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
부고환 정자 결합 단백질 1 이스트 2 하이브리드 직접
HSA9761 이스트 2 하이브리드 직접
Fyn 생체 내; 시험관 내 직접
구아닌 뉴클레오티드 방출 인자 2 생체 내; 시험관 내 직접
( ii ) PHLDA1 수용체 결합 다운스트림 세포내 신호 전달에 관여하는 분자
TDAG51 (T 세포사 관련 유전자 51)로도 알려진 인간 PHLDA1 유전자 (Entrez Gene ID 22822; 플렉스트린 호몰로지-유사 도메인 패밀리 A 구성원 1)는 5913개 뉴클레오티드 전사체, NCBI REFSEQ 수탁 번호 NM_007350의 발현을 코딩하며, cDNA 서열은 401 (REFSEQ: NP_031376) 또는 400 (REFSEQ: EAW97312.1)개 아미노산의 단백질로 번역될 수 있는 것으로 기록되었다. PHLDA1 유전자에 의해 코딩되는 단백질에 대한 바람직한 명칭은 플렉스트린 호몰로지-유사 도메인 패밀리 A 구성원 1 (PHLDA1)이고, UniProt 식별자 Q8WV24를 가진다. PHLDA1은 세포질, 세포질 소포막, 핵 및 핵소체에서 매우 다양한 조직에서 발현되며, N-말단 플렉스트린 호몰로지 또는 PH, REFSEQ 수탁 번호 NP_031376에 의해 정의된 서열에서 잔기 9 내지 141에 상응하는 133개 아미노산을 포함하는 도메인을 특징으로 한다. PHLDA1은 또한, C-말단을 향해 15개 (프롤릴글루타미닐-) 반복 서열 바로 다음에 14개 (프롤릴히스티딜-) 반복 서열을 도입한다. PH 도메인 그 자체는 15개 (NP_031376) 또는 14개 (EAW97312.1) 잔기 폴리(글루타민) 요소를 포함한다.
UniProt 지식베이스에 열거된 단백질에는 번역-후 변형이 없다. UniProt 지식베이스는 Entrez 데이터베이스에서 변이체, PHLDA1 CRA_a (예를 들어, REFSEQ: AAH18929.3, AAI10821.1 및 AI26426.2)로 한계가 정해진 오직 259개의 아미노산 단백질 (Q8WV24)만을 기술하였다. 이 단백질은 예상된 더 긴 형태의 N-말단으로부터 141개 잔기 서열이 결여되어 있으며, 이 형태에서 14개 잔기 길이인 PH 도메인에서 폴리(글루타민) 반복 서열의 시작에 단일의 글루타민 잔기 결실을 가지는 것에 의해 NP_031376와 다르다. 단백질 명칭 PHLDA1은 통상적으로 이 259개 잔기의 더 짧은 형태로 언급된다. cDNA 서열 (REFSEQ: AAI30428)은 잔기 62 내지 194에 포함되는 PH 도메인을 갖는 312개의 잔기를 단백질을 코딩하는 것으로 예상된다.
PH 도메인은 상기 기수된 모든 아형에 존재하며, 전형적으로 약 100개 아미노산을 포함한다. PH 도메인은 2개의 수직의 역-평행 베타 시트 다음에 C-말단 양친매성 헬릭스로 구성된 공통의 구조를 갖는다. 베타-가닥을 연결하는 루프는 길이가 매우 달라, PH 도메인이 상대적으로 검출되기 어렵게 한다. 플렉스트린 호몰로지-유사 도메인 패밀리 A의 3개의 구성원, PHLDA1 내지 PHLDA 3이 있으며, 각각은 구성하는 PH 도메인의 아미노산 서열이 상당히 다르다. PHLDA1은 이것이 폴리(글루타민) 요소를 포함하는 루프에 추가의 43개 아미노산 삽입을 도입한다는 점에서 다른 A 패밀리 구성원과 다르다.
하기의 표 2는 PHLDA1 유전자 산물 PHLDA1과 상호작용하는 것으로 알려진 몇 개의 분자, 상호작용 유형 및 확인에 사용된 실험 방법을 열거한 것이다.
상호작용자 명칭 실험 유형 유형
EIF3S7 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
케라틴 관련 단백질 4-12 이스트 2 하이브리드 직접
MyoD 패밀리 억제제 이스트 2 하이브리드 직접
인지질 스크램블라제(scramblase) 1 이스트 2 하이브리드 직접
폴리(A) 결합 단백질 4 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
리보좀 단백질 L14 생체 내; 시험관 내; 이스트 2 하이브리드 직접
실시예 3: 인간 및 마우스 비만 세포에서 IgE 자극 후에 NEDD9 의 발현 역학
(인간 또는 마우스 골수 줄기 세포로부터 유래된) 인간 및 마우스 비만 세포의 IgE 자극 후에 NEDD9의 발현 역학을 평가하였다. 2 시간 동안 항 DNP/IgE mab (10-500ng/ml)와 함께 세포를 인큐베이션하고, 특정 시간 (0 내지 4 시간) 동안 DNP/알부민 용액 (1OOng/ml)과의 교차 결합에 의해 FcεRI을 활성화시켰다. 두 종을 위하여 NEDD9 특이적 프라이머를 사용하는 정량 실시간(real-time) PCR에 의해 유전자 발현을 측정하고, 상대적 정량 비교 Ct 방법을 사용하여 분석을 수행하였다 (참고: Livak and Schmittgen, Methods 25:402-408, (2001)). NEDD9는 인간 비만 세포 IgE 교차 결합 직후에 상향조절되며, 2.5시간에 정점에 도달하고, 5시간 후에 기준선 발현 바로 위에 안정된 발현에 도달하도록 감소한다 (도 1A). NEDD9는 인간 비만 세포 IgE 교차 결합 직후에 상향조절되며, 2.5시간에 정점에 도달하고, 5시간 후에 기준선 발현 바로 위에 안정된 발현에 도달하도록 감소한다 (도 1A). PHLDA1의 발현 수준은 또한 인간 비만 세포에서 IgE 교차 결합에 대한 반응으로 상향조절되는 것으로 관찰되었으며, IgE 자극 5 시간 후에 정점에 도달하였다 (도 1B). 유사하게, NEDD9 및 PHLDA1 발현의 초기 상향 조절은 마우스 비만 세포의 IgE 자극 직후에 관찰되었으며, IgE 자극 후 NEDD9에 대해서는 1시간에, PHLDA1에 대해서는 30분에 정점에 도달하였으며, 두 경우 모두는 6시간까지 기준점으로 감소되었다 (도 1C 및 1D).
실시예 4: Fc ε RI 교차 결합 및 아이오노마이신 자극에 대한 반응으로 RBL -2H3 세포에서 NEDD9 및 PHLDA1 발현 역학
NEDD9 및 PHLDA1의 발현 역학을 FcεRI을 발현하는 랫트 비만 세포주인 RBL-2H3 세포에서 평가하였다. 유전자 발현을 각 유전자에 대한 특이적 프라이머를 사용하여 SYBR-그린-기초의 정량 실시간 PCR에 의해 측정하였다. 각 실험 샘플을 내부 표준으로 사용되는 β-액틴 특이적 프라이머를 포함하는 각 프라이머에 대하여 3중으로 분석하였다. 특이성을 평가하기 위하여 cDNA 주형이 결여된 음성 대조군을 매 분석과 함께 수행하였다. 프라이머 익스프레스 소프트웨어(Primer Express software, Applied Biosystems)를 프라이머 설계를 위해 사용하였다. 역치 사이클 (Ct)을 각 샘플에 대하여 결정하였다. 마지막에 비특이적 산물을 나타내는 PCR 분석은 추가의 데이터 분석으로부터 배제하였다. 결과를 분석하기 위하여 비교 Ct 방법을 사용하는 상대적 정량을 사용하였다 (참고: Livak and Schmittgen, Methods 25:402-408, (2001)). NEDD9 및 PHLDA1의 발현은 FcεRI 교차 결합을 통하여 세포 활성화에 대한 반응으로 상당히 상향조절되었다(도 2A 및 2C). 간단하게, 5x106 RBL-2H3 세포를 5% 우태아혈청, L-글루타민, 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 F15 조직 배양 배지 중에서 항 DNP/IgE mab (1OOng/ml)와 함께 2 시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음, FcεRI을 특정 시간 동안 DNP/알부민 용액 (100ng/ml)과 교차 결합시켰다. FcεRI 교차 결합 이후의 발현 역학의 분석으로, 두 유전자가 자극 직후에 활동하는 것으로 나타났으며, 이는 비만 세포 활성화를 유발하는 사건의 캐스케이드를 조절하는 데에 이들이 관여함을 제안한다.
대부분의 특정 비만 세포 활성화 경로가 세포 표면 상의 FcεRI 결합 IgE의 응집을 수반하지만, 비만 세포는 또한, FcγR, 톨-유사 수용체 (TLRs) 및 다른 IgE 독립적 트리거(trigger)를 포함하는 다양한 수단에 의해 활성화될 수 있다. 따라서, NEDD9 및 PHLDA1이 FcεRI 교차 결합에서 유래된 것과 구별되는 다른 세포내 신호 전달 캐스케이드에 수반되는지 평가된다. 아이오노마이신은 세포 외에서의 칼슘을 세포 내 공간으로 이동시키는 이온 투과 담체이며, 세포 내 유리 칼슘의 증가를 유발하며 이에 따라 예비 형성된 과립에서 내용물의 방출을 포함하는 비만 세포 효과자 작용의 자극을 유발한다. 비만 세포를 1μM 아이오노마이신과 함께 인큐베이션시키고, 다른 시간에서 QRT-PCR로 NEDD9 및 PHLDA1의 발현 수준을 분석하였다. 두 경우에, 유전자 발현 수준은 모든 분석 시간(30, 60 및 120 분)에서 아이오노마이신에 대한 반응으로 상향 조절되는 것으로 관찰되었다 (도 2B 및 2D). FcεRI 교차 결합을 통한 활성화와 유사하게, 아이오노마이신에 대하여 반응하는 발현 역학의 분석으로, NEDD9 및 PHLDA1이 자극 직후에 다시 활동하는 것으로 보이며, 이는 비만 세포 활성화를 유발하는 사건의 캐스케이드를 조절하는 데 이들이 관여함을 뒷받침한다.
실시예 5: 시험관 내 및 생체 내에서 NEDD9 발현의 침묵 후에 증가된 비만 세포 탈과립
NEDD9 발현이 시험관 내에서 비만 세포의 효과자 작용에 영향을 미치는지를 평가하기 위하여, 비만 세포 탈과립 분석을 사용하였다. RBL-2H3 랫트 비만 세포를 NEDD9 발현을 특이적으로 간섭하도록 설계된, NEDD9 유전자 발현을 표적으로 하는 3개의 상이한 siRNA의 존재 하에서 30분 동안 DNP-IgE와 함께 인큐베이션시켰다. siRNA를 AMBION Silencer Validated siRNA로부터 구입하고, 추천된 프로토콜(www.ambion.com)을 사용하여 트랜스펙션을 수행하였다. 어떤 유전자도 표적으로 하지 않는 추가의 siRNA를 대조군으로 사용하였다. IgE/DNP와 함께 밤새 인큐베이션시킨 후에, FcεRI은 DNP/알부민 컨쥬게이트와의 교차 결합을 통하여 활성화되었다. 그 다음, 비만 세포 탈과립을 β-헥소사미니다아제 방출에 의해 계산하고, FcεRI 교차 결합에 대한 반응의 비만 세포 효과자 작용의 지시자로 사용하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, siRNA에 의한 NEDD9 단백질 발현의 억제는 siRNA 음성 대조군에 비해 비만 세포 탈과립 퍼센트의 증가를 유발하였다.
그 다음, 감소하는 NEDD9 및 PHLDA1 발현의 효과를 수동 피부 아나필락시스 (PCA) 반응을 사용하여 생체 내에서 평가하였다. 루이스(Lewis) 랫트에 NEDD9 siRNA 또는 PHLDA1 siRNA (AMBION으로부터의 silencer validated siRNA) 및 IgE-DNP의 배합물을 귀 기초로 피하내 주사하였다. 대조군 siRNA/DNP-IgE를 왼쪽 귀에 주사하였다. 24 시간 후에 DNP/알부민으로의 정맥내 접종으로 FcεRI 교차 결합을 유도하였다. 귀 비만 세포 탈과립을 30분 후에 에반스 블루 회수로 측정하였다. 오른쪽 귀에 대한 NEDD9 또는 PHLDA1 siRNA의 국소 투여는 siRNA 대조군으로 처리된 왼쪽 귀에 비하여 탈과립 증가를 유발하였다 (도 4A 및 4B).
실시예 6: NEDD9 의 SH3 도메인을 표적으로 하는 펩티드는 시험관 내 및 생체 내에서 비만 세포 활성화를 중화시킨다.
재료 및 방법
(i) 펩티드 설계
SH3 도메인은 세포내 신호 전달 복합체의 어셈블링 및 신호 전달 및 세포 활성화의 조절 과정에 관여하는 프롤린 풍부 선형 모티브를 인지한다. NEDD9의 SH3 도메인은 인간에서 파리까지 종간에 보존되며(Homologene NCBI 및 도 5), 이는 신호 전달 활성에 그 중요성을 제안한다. N-말단 SH3 도메인의 서열은 REFSEQ 수탁 번호 NM_006403.2 (HEF1 아형 1 UniProt: Q14511)에 의해 정의된 서열 중 잔기 7 내지 66에 상응한다.
인간 NEDD9 (Entrez Gene ID 4739)에 의해 코딩된 N-말단 SH3 도메인, HEF1 아형 1 (UniProt: Q14511.1)의 잔기 7-66
Figure pct00001
NEDD9 경쟁자 펩티드를 NEDD9 SH3 도메인과 표적 리간드의 결합을 특별히 방해하도록 작제하였다. 펩티드는 오스트레일리아 국립 대학 오스트레일리아 암 연구 재단 생체분자 자원 기관(Australian Cancer Research Foundation Biomolecular Resource Facility)에서 화학적으로 합성하였다. 표준 Fmoc (9-플루오레닐메틸옥시카보닐) 프로토콜을 사용하여 심포니 펩티드 합성기(Symphony Peptide Synthesiser)(Rainin Instrument Company Oakland CA)로 Rink 수지, 4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-아미노에틸)-페녹시 폴리스티렌 상에서 고체상 합성을 수행하고, 역상 HPLC로 정제하였다. 정제 산물의 동일함을 질량 분광계로 확인하였다.
도 5에 도시된 NEDD9 SH3 도메인의 인간 서열 (HS)의 잔기 3-22에 상응하는 20-mer 펩티드 (MDD1)를 작제하였다. SH3 도메인의 RT(가변) 루프에서 음성 하전된 잔기의 무리를 포함하기 때문에, 펩티드 MDD1을 먼저 활성 시험을 위해 선택하였다. MDD1 펩티드는 모든 종에 대한 펩티드 블라스트(blast)에 의해 확인된 바와 같이 NEDD9에 대해 특이적이었다. MDD1의 서열은 호모 사피엔스(homo sapiens), 무스 무스쿨루스(mus musculus), 래터스 노르베기쿠스(rattus norvegicus), 팬 트로글로디테스(pan troglodytes), 보스 타운츠(bos taunts), 캐니스 패밀리아리스(canis familiaris) 및 갈루스 갈루스(gallus gallus)를 포함하는 포유류에서 보존되어 있었다 (도 5 - 강조된 서열 참고).
본래 서열을 보존할 필요를 결정하기 위하여 스크램블(scrambled) 서열 (MDD1scram)에서 같은 아미노산을 함유하는 펩티드도 또한 합성하였다. 이들은 말단 이온화(ionisation) 및 엑소펩티다아제에 의한 분해를 저해하기 위하여 N-아세틸 α-카복사미드의 형태로 합성하였다. 비오티닐화 형태도 또한 생성하였다. 펩티드 서열은 하기에 상세히 나타내었다:
Figure pct00002
위치 10에 시스테인 잔기가 결여된 2개의 추가의 유사체, MDD1S1O 및 MDD1A1O도 또한 합성하였다:
( ii ) RBL -2 H3 에 의한 MDD1 흡수
RBL-2H3 세포를 10%의 우태아혈청 (FCS) 및 항생제가 보충된 F15 배지에서 배양하였다. 세포를 세포 스크래퍼를 사용하여 배양 플라스크로부터 조심스럽게 떼어내고, 96 웰 미량역가판에 5x105 세포/웰의 농도로 플레이팅하였다. 세포를 다양한 농도(0.1, 0.01 및 0.001 mM)의 비오티닐화 MDD1과 함께 밤새 인큐베이션하였다. 살아있는 세포에 의한 비오티닐화 MDD1 흡수를 이전에 결합된 사이토픽스/사이토펌(cytofix/cytoperm) 고정으로 처리한 단일 세포 현탁액 중의 스트렙트아비딘-APC 및 제조자의 지시에 따라 침투성 용액 키트 (Becton Dickinson, BD)를 사용하여 검출하였다. 그 다음 세포를 BD FACscan 유세포 분석기를 사용하여 분석하였다.
( iii ) RBL -2 H3 탈과립 분석
비만 세포 탈과립을 β-헥소사미니다아제 방출 방법을 사용하여 측정하였다. RBL-2H3 세포를 10%의 우태아혈청 (FCS) 및 항생제가 보충된 F15 배지에서 배양하였다. 세포를 세포 스크래퍼를 사용하여 배양 플라스크로부터 조심스럽게 떼어내고, 96 웰 미량역가판에 5x105 세포/웰의 농도로 플레이팅하고, MDD1 또는 SCR 펩티드의 존재 하에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음, RBL-2H3 세포를 500ng/ml 항-DNP IgE mb (SIGMA)과 함께 37 ℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 세포를 1OOng/ml DNP/알부민으로 30분 동안 자극시켰다. 비 IgE 특이적 자극을 위해, 오직 1nM 아이오노마이신만을 30분 동안 배양에 가하였다. 그 다음, 상층액을 수집하고, 0.1% 트리톤 X-100을 사용하여 세포 용해물을 제조하였다. 용해물 및 상층액 샘플 (10 ㎕)을 96-웰 플레이트로 옮기고, 50 mM 시트레이트 완충액 중의 50 ㎕의 1mM p-니트로페닐-N-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 각 웰에 가하고, 37 ℃에서 어두운 데에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 각 웰에 100 ㎕의 0.1 M NaHCO3/0.1M Na2CO3를 가함으로써 반응을 종결시키고, 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 탈과립 퍼센트를 다음 식으로 계산하였다: OD 상층액 / (OD 상층액 + OD 용해물) x 100.
( iii ) OVA -유도 천식 모델
C57BL/6 마우스를 염수 중의 10 ㎍ 난백 알부민 항원 (OVA)을 사용하여 복강내로 다른 날에 제공하여 7회 감작하였다. 첫번째 감작 투여 이후 40일에, 마우스에 비강내 OVA를 접종하였다 (각 콧구멍에 염수 중의 5mg/ml의 OVA 용액의 20 ㎕). 마우스에 비강내 OVA의 2회의 추가 접종을 OVA의 첫번째 접종 이후 3일 및 6일에 투여하였다. 대조군 마우스를 OVA로 감작시켰으나, 비강내로 염수를 접종하였다. 각 OVA 접종 6시간 전에, 비경구 MDD1 처리를 한 마우스의 그룹에 8mg/Kg의 MDD1을 3회 정맥내 주사하였다. 케이지 당 5마리의 마우스에 8 ml의 1mg/ml MDD1 또는 대조군 펩티드를 분무시킴으로써, 분무된 MDD1 또는 MDDscram (SCR) 펩티드를 각 OVA 접종 6시간 전에 제공하였다.
최종 OVA 접종 하루 후에 기능적 폐 연구 및 기관 수집을 수행하였다. 마취시킨 마우스에서 β-메타콜린의 용량을 증가시킨 후에 폐 저항성을 측정하였다. 기도를 외과적으로 노출시키고, 캐뉼러를 삽입하고, 설치류 인공호흡기 (flexivent; Scireq)에 연결하였다. 마우스가 안정되도록 하고, 염수 에어로졸 이후에 증가하는 농도의 메타콜린을 접종하였다. 폐 저항성을 Buxco에 의해 제공된 장치 및 소프트웨어를 사용하여 체적변동기록에 의해 측정하였다. 폐 저항성 값을 각 메타콜린 용량에 대한 마우스의 각 그룹의 평균으로 표현하였다. 각 마우스에 대하여, 개별 값을 각 메타콜린 용량에 대하여 수집 데이터(5분 동안 매 5초)를 평균을 냄으로써 계산하였다.
면역염색, 사이토카인 발현
혈액 도말을 준비하고, 호중구 퍼센트를 May-Gruenwald Giemsa 염색 후에 형태 기준으로 계산하였다. 흉곽을 부드럽게 마사지하면서 기관지 캐뉼라를 통하여 1ml HANKS 용액으로 기도를 2회 세척함으로써, 기관지 폐포 세척 (BAL)을 회수하였다. 폐의 좌하엽을 수집하고 균질화시켰다. 세포를 세포 스트레이너(strainer)를 통해 여과하고, 세포 현탁액을 염색 배지(1% FCS가 있는 PBS) 중에 제조하였다. CellQuest 소프트웨어가 장착된 FACScan을 사용하여 유세포 분석을 하기 위하여 BAL 및 폐 샘플을 항-CD11b, 항-CCR3, 항-CD4 및 항B220 mab 마커와 함께 인큐베이션하였다.
폐 우하엽을 수집하고, 얼음 상에서 균질화시켰다. Trizol (GIBCO, Invitrogen)를 사용하여 총 RNA를 제조하였다. RNA의 순도를 A260/A280에 의해 결정하였다. 각 샘플에 대한 5 ㎍의 RNA를 Omniscript RT 키트 (Qiagen)를 사용하여 cDNA로 역 전사시켰다. 사이토카인 특이적인 미리 설계된 TaqMan 유전자 발현 분석 (Applied Biosystems)을 제조자의 지시(Applied Biosystems)에 따라 사이토카인 상대적인 유전자 발현을 측정하는 데 사용하였다. 각 실험 샘플을 3중으로 분석하였다. β-액틴 특이적 프라이머를 내부 표준으로 사용하였다. 특이성을 평가하기 위하여 블랭크(blank) cDNA 주형을 사용하는 음성 대조군을 매 분석과 함께 진행시켰다. 사이클 조건은 다음과 같았다: 95 ℃에서 10분 동안 1 사이클 다음, 각각 95 ℃에서 15초 및 60 ℃에서 45초로 구성되는 PCR 증폭 40 사이클. 결과의 분석을 위하여 서열 검출 소프트웨어 (SDS v 1.2.2, Applied Biosystems)를 사용하였다. 각 샘플에 대한 역치 사이클 (Ct)를 결정하였다. 마지막에 비특이적 산물을 나타내는 PCR 분석은 추가의 데이터 분석으로부터 배제하였다. 결과를 분석하기 위하여 비교 Ct 방법을 사용하는 상대적 정량을 사용하였다. 결과를 비알레르기 마우스의 값에 대한 상대 배수 변화로 나타내었다.
혈청 Ig 수준
OVA-특이적 IgE 검출: 96-웰 Maxisorp 플레이트를 밤새 4 ℃에서 항-마우스 IgE로 코팅하였다. 비특이적인 결합 봉쇄를 위하여 2% 탈지유를 사용하였다. 미리 희석시킨 혈청 샘플을 밤새 인큐베이션하고, 1.5 시간 동안 플레이트에 OVA-비오틴을 로딩하고, 제조자의 지시에 따라 ABTS를 사용하여 비색(colometric) 반응을 발생시켰다. OVA-특이적 IgG를 위하여, 96-웰 Maxisorp 미량역가판에 0.2% 글루타르알데히드를 예비 처리하고, 10 mM 카보네이트 완충액(pH 9.6) 중의 10 ㎍/ml의 OVA로 37 ℃에서 3 시간 동안 코팅하였다. 웰을 10 mM 카보네이트 완충액(pH 9.6) 중의 2% BSA를 사용하여 습윤 챔버 내에서 4 ℃에서 밤새 블로킹하였다. 혈청 샘플을 37 ℃에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 과산화효소-컨쥬게이트 항-랫트 IgG 이후 ABTS를 사용하여 비색 반응을 발생시켰다. 405 nm 필터를 사용하여 미량역가판 판독기에서 광학 밀도를 판독하였다. IgE 및 IgG의 수준을 OD 단위로 나타내었다.
마우스에서 수동피부아나필락시스 분석 ( PCA )
왼쪽 귀를 DMSO로 처리하고, 오른쪽 귀를 DMSO 중의 0.2% MDD1 또는 0.1% 덱사메타손으로 4일 동안 매일 2회 처리하였다. 그 다음, 마우스를 인슐린 주사기를 사용한 진피내 주사에 의해 귀에 투여된 항 DNP-20㎕ IgE 항체로 감작시켰다. 국소 비만 세포 활성화를 주사 24 시간 후에 FcεRI 교차 결합에 대한 반응으로 염료 회수에 의하여 측정하였다: PBS 중의 1OO ㎍ DNP-알부민/1% 에반스 블루(Evans blue)를 정맥 내로 주사하고, 30분 후에 취한 귀 생검을 1 ml 포름아미드 중에서 80 ℃에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 상층액 흡광도를 620 nm에서 측정하였다.
결과
(i) MDD1 펩티드는 시험관 내에서 생물학적으로 활성이다.
MDD1 펩티드는 세포막을 침투하는 것으로 관찰되었다. MDD1 펩티드를 비오틴에 직접 컨쥬게이션시키고, RBL-2H3 비만 세포에 투여하였다. MDD1 펩티드 흡수를 형광 색소로서 스트렙트아비딘 APC를 사용하는 세포내 FACS 염색에 의해 검출하였다. 모든 세포는 MDD1 펩티드에 대하여 양성이었으며, 그 수준은 펩티드 농도와 함께 증가하는 것으로 관찰되었다 (도 6).
( ii ) MDD1 펩티드는 RBL -2 H3 세포에서 탈과립을 저해하고, 이후 IgE 수용체 교차 결합을 저해한다.
MDD1 펩티드 (서열 번호 8)는 IgE 수용체 교차 결합 이후, 그리고 비특이적 자극(데이터는 나타내지 않음) 이후에 비만 세포 활성화를 저해하는 것으로 관찰되었다. MDD1 펩티드로 예비 처리하지 않은 RBL-2H3 세포는 IgE 수용체 교차 결합 후에 탈과립되었다 (도 7). 그러나, MDD1 펩티드로의 RBL-2H3 세포의 예비 처리가 IgE 수용체 교차 결합에 따른 탈과립을 저해하는 것으로 관찰되었다 (도 7). 스크램블 펩티드 MDD1scram (서열 번호 9)으로의 RBL-2H3 세포의 예비 처리는 IgE 수용체 교차 결합 이후의 탈과립에 적은 저해 효과만을 보유하였다 (도 7).
( iii ) MDD1 펩티드는 β- 메타콜린으로의 접종 후에 OVA - 감작된 마우스에서 폐 기능을 개선시켰다.
천식 반응을 조절하는 데에서 MDD1 펩티드의 효능을 비만 세포 활성화에 의해 유도된 천식 마우스 모델에서 시험하였다. 비만 세포가 결여된 마우스에 질환이 발생하지 않기 때문에, 이 모델에서 폐 염증 및 천식 반응은 비만 세포 활성화에 의존적이다.
항원 노출 시에 MDD1으로 처리된 OVA-감작화된 마우스는 β-메타콜린으로의 접종 후에 대조군 펩티드로 처리된 마우스에 비하여 폐 기능이 개선되었다 (도 8). MDD1 펩티드 또는 대조군 (SRC) 펩티드로 처리된 OVA 감작화된 마우스에서의 폐 저항성을 β-메타콜린의 용량을 증가시킨 후에 측정하였다. 대조군 펩티드로 처리한 마우스에 비해 MDD1 펩티드로 처리한 마우스에서 폐 저항성 (RL)이 감소되었다. 이 효과는 펩티드를 정맥 내로 (도 8A), 또는 분무 비강내 경로를 사용하여 폐에 국소적으로(도 8B) 투여하였을 때 관찰되었다.
( iv ) MDD1 펩티드는 β- 메타콜린으로의 접종 후에 OVA - 탈감작된 마우스의 천식 반응 중의 염증성 반응을 감소시킨다.
MDD1 펩티드는 혈중에 감소된 호산구증가증(도 9A), 기관지 폐포 세척 중의 세포충실성 (도 9B), 염증 부위에서 사이토카인 생산 (도 9C) 및 대조군 처리 마우스와 비교한 알레르기 마우스의 혈청 중에 항원 특이적 IgE의 수준 (도 9D)에 의해 나타난 바와 같이 천식 반응에서 전체 염증성 반응을 감소시킨다. MDD1 펩티드는 시험된 일부 변수에서 덱사메타손 처리 (2mg/kg i.p.)를 능가하였다.
(v) MDD1 펩티드의 국소 투여는 알레르기 반응을 감소시킨다.
아토피성 피부염 및 다른 알레르기 피부 증상은 비만 세포 반응으로 구동되는 것으로 판단된다. MDD1 펩티드의 국소 투여는 피부 비만 세포를 안정화시키는 것으로 증명되었다. 항 DNP IgE 항체로 IgE 국소 감작화시키기 전에 0.2% MDD1 펩티드/DMSO 제제를 각 마우스의 한쪽 귀에 국소 적용하였다. MDD1 펩티드/DMSO로 처리한 귀로부터의 생검에서 비만 세포는 오직 DMSO만으로 처리한 반대편 귀와 비교하여 염료 유출로 결정한 바, IgE 수용체 교차 결합 후에 활성화 수준을 감소시키는 것으로 관찰되었다 (도 10). MDD1 펩티드는 최소의 전신 효과와 함께 국소적으로 작용하는 한편, 국소 덱사메타손 처리는 전신 면역억제를 유발한다.
실시예 7: PHLDA1 유전자 산물의 PH 도메인의 펩티드 경쟁자는 비만 세포 활성화를 중화시킨다
재료 및 방법
(i) 펩티드 설계
PHLDA1의 PH 도메인은 133개 아미노산을 포함하며, REFSEQ 수탁 번호 NM_006403.2로 정의된 서열에서 아미노산 잔기 9 내지 141 범위이다. 이 서열은 포유류에서 고도로 보존되어 있다. PHLDA1 PH 도메인은 하기 나타난 바와 같은 큰 루프 삽입을 포함한다 (진한 이탤릭체 서열: 잔기 37 내지 79 참고)
인간 PHLDA1 (Entrez Gene ID 22822)에 의해 코딩된 PH 도메인, PHLDA1의 잔기 9-141 (UniProt: Q8WV24.1)
Figure pct00003
두 인간 아형 및 포유류 종 사이의 서열 변이는 폴리(글루타민) 요소의 측면에 있으며, 호모폴리머 서열의 길이도 또한 가변적이다.
특별히 PHLDA1의 PH 도메인의 활성을 간섭하기 위하여, 두 경쟁자 펩티드 서열을 설계하고 합성하였다 (MPX741, MPX742 및 MPX743). 경쟁자 펩티드의 설계는 폴리(글루타민) 반복 요소에 대한 업스트림(예를 들어, N-말단) 및 다운스트림(예를 들어, C-말단) 서열을 기초로 하였다. MPX741은 폴리(글루타민) 요소에 대한 서열 N-말단에 상응하며(포스파티딜이노시톨 지질을 위한 예측된 결합 부위) MPX742는 PHLDA1 PH 도메인의 대략 중심의 서열에 상응하나, MPX743은 폴리(글루타민) 효소에 대한 C-말단 서열에 상응한다. 펩티드는 말단 이온화 및 엑소펩티다아제에 의한 탈과립을 저해하기 위하여 N-아세틸 α-카복사미드 형태로 합성하였다. 펩티드를 하기에 상세히 나타내었다.
Figure pct00004
MPX741은 서열 번호 11에 나타낸 PH 도메인의 잔기 9 내지 36에 상응하며, 다른 PHLDA 패밀리 구성원의 PH 도메인과 15개의 그의 구성 아미노산이 다르다. MPX742는 서열 번호 12에 나타낸 PH 도메인의 잔기 73 내지 91에 상응하며, 다른 PHLDA 패밀리 구성원의 PH 도메인과 오직 4개의 이의 구성 아미노산만을 공유한다. MPX742의 N-말단 5개의 아미노산은 독특한 PHLDA1 루프 삽입 (이는 PHLDA1의 PH 도메인에 대하여 독특하다)의 C-말단에 상응한다. MPX743은 서열 번호 13에 나타낸 PH 도메인의 잔기 117 내지 130에 상응하며, 다른 PHLDA 패밀리 구성원의 PH 도메인과 11개의 그의 구성 아미노산이 다르다.
펩티드는 오스트레일리아 국립 대학, 오스트레일리아 암 연구 재단 생체분자 자원 기관(Australian Cancer Research Foundation Biomolecular Resource Facility)에서 화학적으로 합성하였다. 표준 Fmoc (9-플루오레닐메틸옥시카보닐) 프로토콜을 사용하여 심포니 펩티드 합성기(Symphony Peptide Synthesiser)(Rainin Instrument Company Oakland CA)로 Rink 수지, 4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-아미노에틸)-페녹시 폴리스티렌 상에서 고체상 합성을 수행하고, 역상 HPLC로 정제하였다. 정제 산물의 동일함을 질량 분광계로 확인하였다.
( ii ) RBL -2 H3 탈과립 분석
비만 세포 탈과립을 β-헥소사미니다아제 방출 방법을 사용하여 측정하였다. RBL-2H3 세포를 10%의 우태아혈청 (FCS) 및 항생제가 보충된 F15 배지에서 배양하였다. 세포를 세포 스크래퍼를 사용하여 배양 플라스크로부터 조심스럽게 떼어내고, 96 웰 미량역가판에 5x105 세포/웰의 농도로 플레이팅하고, MPX741 펩티드 또는 MPX742 펩티드의 존재 하에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음, RBL-2H3 세포를 500ng/ml 항-DNP IgE mb (SIGMA)과 함께 37 ℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 세포를 lOOng/ml DNP/알부민으로 30분 동안 자극시켰다. 비 IgE 특이적 자극을 위해, 1nM 아이오노마이신 만을 30분 동안 배양에 가하였다. 그 다음, 상층액을 수집하고, 0.1% 트리톤 X-100을 사용하여 세포 용해물을 제조하였다. 용해물 및 상층액 샘플 (10 ㎕)을 96-웰 플레이트로 옮기고, 50 mM 시트레이트 완충액 중의 50 ㎕의 1mM p-니트로페닐-N-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 각 웰에 가하고, 37 ℃에서 어두운 데에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 각 웰에 100 ㎕의 0.1 M NaHCO3/0.1M Na2CO3를 가함으로써 반응을 종결시키고, 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 탈과립 퍼센트를 다음 식으로 계산하였다: OD 상층액 / (OD 상층액 + OD 용해물) x 100.
결과
(i) MPX741 및 MPX742 는 비만 세포 활성화를 중화시킨다.
MPX743 (서열 번호 13)은 난용성(poorly soluble)이며, 이에 따라 추가의 시험 전에 변형을 필요로 하는 것으로 관찰되었다. MPX741 (서열 번호 11) 및 MPX742 (서열 번호 12)는 IgE 수용체 교차 결합 후에 탈과립화가 상당히 감소되는 것으로 나타났다 (도 11). 따라서, MPX741 또는 MPX742를 사용한 RBL-2H3 세포의 치료는 비만 세포 활성화를 상당히 억제시켰다.
실시예 8: 추가의 NEDD 9 SH3 도메인 경쟁자 펩티드
펩티드 MDD1은 본 명세서에 비만 세포 활성화의 억제제로 기술되었으며, 이에 따라 펩티드의 투여는 과민성 반응의 치료 및/또는 예방 수단을 제공한다. 상기 실시예 6에 기술된 바와 같이, MDD1은 NEDD9 SH3 도메인의 인간 서열의 잔기 3-22에 상응하는 경쟁자 펩티드이다 (도 5에 나타낸 바와 같이).
MDD1 펩티드에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 변형에 의해 생성된 변이체는 많은 경우에 예를 들어 비만 세포를 탈감작시키는 능력, 용해도, 화학 및 생화학적 안정성, 세포 흡수, 독성, 면역원성 및 분해 산물의 배출과 같은 펩티드의 하나 이상의 특성을 모방하거나 개선시킬 것이다. 유사하거나 개선된 특성을 갖는 MDD1 펩티드 변이체는 특정한 관심있는 특성(들)을 위한 음성 또는 양성 결정자일 수 있는 MDD1 펩티드 서열에서의 특정 아미노산 잔기(들)를 확인함으로써 디자인된다. 이러한 MDD1 펩티드 변이체의 기능적 활성은 상기 실시예 6에 기술된 것과 유사한 방법 및 해당 분야에 일반적으로 알려져 있는 방법을 사용하여 시험될 것이다.
예를 들어, 측쇄 절단은 MDD1 펩티드의 서열에 따라 아미노산을 차례로 알라닌으로 치환하기 위하여 사용될 것이다 (예를 들어, Gautam et al. 1995, "Binding of an invariant-chain peptide, CLIP, to I-A major histocompatibility complex class II molecules" Proc Natl Acad Sci USA, 92: 335-9에 기술된 바와 같이). 이 방법으로 시험되는 MDD1 펩티드 변이체는 서열 번호 33-49에 나타낸 것을 포함한다. 또한 알라닌은 MDD1 펩티드에 따라 다수의 잔기에서 특히 음성-하전 잔기가 존재하는 위치에서 치환될 것이다 (서열 번호 24-26 참고).
MDD1 펩티드의 길이를 증가시키거나 또는 감소시키는 것이 많은 경우에 펩티드의 하나 이상의 특성을 모방하거나 개선시키는 것으로 판단된다. 따라서, 길이가 감소된 MDD1 변이체는 본 명세서에 기술되는 방법 및/또는 해당 분야에 일반적으로 알려진 다른 방법을 사용하여 비만 세포 활성화 및 과민성에 대한 이들의 효과에 대하여 시험될 것이다. 이러한 MDD1 펩티드 변이체의 예시적인 서열을 서열 번호 18-19 및 122-144에 나타내었다.
추가의 MDD1 펩티드 변이체를 설계하였고, 시험할 것이며, 이들은 MDD1 펩티드 서열의 위치 10의 시스테인 잔기가 세린으로 (서열 번호 16) 또는 알라닌으로 (서열 번호 17) 치환된다. 잔기 10에서 세린 또는 알라닌 치환을 포함하는 MDD1 펩티드의 길이 변이체(예를 들어, 서열 번호 16 및 서열 번호 17의 길이 변이체)를 서열 번호 20-23 및 145-184에 나타낸 서열을 사용하여 시험할 것이다. 또한, 서열 번호 90-121에 나타낸 서열에 따른 사슬에 따라 다른 잔기(들)에서 단일/다수의 알라닌 치환으로 치환된(서열 번호 16 또는 서열 번호 17에서와 같이), 위치 10에서 시스테인 잔기를 갖는 추가의 MDD1 변이체 펩티드의 시리즈를 시험할 것이다.
또한 전체 NEDD9 SH3 도메인 (서열 번호 7) 및 NEDD9 SH3 도메인의 다른 특정 영역에 상응하는 경쟁자 펩티드가 비만 세포 활성화를 조절할 수 있고, 이에 따라 과민성 반응에 영향을 미칠 것이라고 판단된다. 일련의 오버랩핑(overlapping) 20-mer 펩티드 (서열 번호 14, 15 및 185-225) 및 12-mer 펩티드 (서열 번호 226-273)가 상기 실시예 6에 기술된 것과 유사한 방법 및/또는 해당 분야에 일반적으로 알려진 다른 추가의 방법을 사용하여 시험될 것이다. 서열 번호 50-89에 나타낸 서열을 갖는 변이체를 포함하여 사슬을 따라 단일/다수의 알라닌 치환을 갖는 이들 펩티드의 변이체도 또한 시험하였다.
합성하고 비만 세포 활성화/과민성에 대한 이들의 효과를 시험할 NEDD9 SH3 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 예시적인 펩티드 (및 이의 변이체) 서열을 서열 번호 14-273에 나타내었다.
실시예 9: NEDD 9 SH3 도메인에서 유래된 추가의 경쟁자 펩티드
펩티드 MPX741 및 MPX742는 본 명세서에서 비만 세포 활성화의 억제제로 기술되었으며, 이에 따라 이들 단백질의 투여는 과민성 반응의 치료 및/또는 예방 수단을 제공한다. 상기 실시예 7에 기술된 바와 같이, MPX741 및 MPX742는 PHLDA1 PH 도메인의 PH 도메인 인간 서열의 잔기 9-36 및 잔기 73-91 각각에 상응하는 경쟁자 펩티드이다.
MPX741 및 MPX742 중 어느 것에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 변형에 의해 생성된 변이체는 많은 경우에 예를 들어 비만 세포를 탈감작시키는 능력, 용해도, 화학 및 생화학적 안정성, 세포 흡수, 독성, 면역원성 및 분해 산물의 배출과 같은 펩티드의 하나 이상의 특성을 모방하거나 개선시킬 것이다. 유사하거나 개선된 특성을 갖는 MPX741 및 MPX742의 변이체는 특정한 관심있는 특성(들)을 위한 음성 또는 양성 결정자일 수 있는 이들의 서열에서 특정 아미노산 잔기(들)를 확인함으로써 설계된다. 이러한 MPX741 및 MPX742 펩티드 변이체의 기능적 활성은 상기 실시예 6에 기술된 것과 유사한 방법 및 해당 분야에 일반적으로 알려져 있는 방법을 사용하여 시험될 것이다.
예를 들어, 측쇄 절단은 MPX741 및 MPX742 펩티드의 서열에 따라 아미노산을 차례로 알라닌으로 치환하기 위하여 사용될 것이다 (예를 들어, Gautam et al. 1995, "Binding of an invariant-chain peptide, CLIP, to I-A major histocompatibility complex class II molecules" Proc Natl Acad Sci USA, 92: 335-9에 기술된 바와 같이). 이 방법으로 시험되는 MPX741 및 MPX742 펩티드 변이체는 서열 번호 274-320에 나타낸 것을 포함한다. 또한 알라닌은 MPX741 및 MPX742 펩티드에 따라 다수의 잔기에서 특히 음성-하전 잔기가 존재하는 위치에서 치환될 것이다.
MPX741 및 MPX742 펩티드의 길이를 증가시키거나 또는 감소시키는 것이 많은 경우에 펩티드의 하나 이상의 특성을 모방하거나 개선시키는 것으로 판단된다. 따라서, 길이가 감소된 MPX741 및 MPX742 변이체는 본 명세서에 기술되는 방법 및/또는 해당 분야에 일반적으로 알려진 다른 방법을 사용하여 비만 세포 활성화 및 과민성에 대한 이들의 효과에 대하여 시험될 것이다. 이러한 MDD1 펩티드 변이체의 예시적인 서열을 서열 번호 321-374에 나타내었다.
또한 전체 PHLDA1 PH 도메인 (서열 번호 10) 및 PHLDA1 PH 도메인의 다른 특정 영역에 상응하는 경쟁자 펩티드가 비만 세포 활성화를 조절할 수 있고, 이에 따라 과민성 반응에 영향을 미칠 것이라고 판단된다. 일련의 오버랩핑(overlapping) 20-mer 펩티드 (서열 번호 14, 15 및 185-225) 및 12-mer 펩티드 (서열 번호 375-488)가 상기 실시예 6에 기술된 것과 유사한 방법 및/또는 해당 분야에 일반적으로 알려진 다른 추가의 방법을 사용하여 시험될 것이다. 사슬을 따라 단일/다수의 알라닌 치환을 갖는 이들 펩티드의 변이체도 또한 시험하였다.
합성하고 비만 세포 활성화/과민성에 대하여 이들의 효과를 시험할 PHLDAl PH 도메인에 상응하는 예시적인 펩티드 서열 (및 이의 변이체)을 서열 번호 274-488에 나타내었다.
실시예 10: 조성물
(i) 주사가능한 비경구 조성물
주사에 의한 투여에 적절한 형태의 본 발명의 약제학적 조성물은 10 부피%의 프로필렌 글리콜 중의 0.005mg 내지 5g의 본 발명의 하나 이상의 적절한 제제 또는 화합물과 물을 혼합하여 제조될 수 있다.
( ii ) 경구 투여용 조성물
캡슐 형태의 본 발명의 하나 이상의 적절한 제제 또는 화합물의 조성물은 표준 투-피스(two-piece) 경질 젤라틴 캡슐을 0.005mg 내지 5g의 분말 형태의 제제 또는 화합물, 100 mg의 락토오스, 35 mg의 탈크 및 10 mg의 마그네슘 스테아레이트로 채움으로써 제조될 수 있다.
( iii ) 흡입 투여용 조성물
20-30 mL 용량의 에어로졸 컨테이너를 위하여: 0.005mg 내지 5g의 본 발명의 하나 이상의 적절한 제제 또는 화합물, 0.5-0.8 중량%의 윤활제, 이를 테면 폴리소르베이트 85 또는 올레산의 혼합물을 프레온과 같은 추진제 중에 분산시키고, 비강내 또는 경구 흡입 투여를 위하여 적절한 에어로졸 컨테이너에 넣는다.
SEQUENCE LISTING <110> The Australian National University <120> MODULATORS OF HYPERSENSITIVITY REACTIONS <130> 818010C <160> 488 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 4532 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 agtgacttga gggaggcgct gcgactgaca agcggctctg cccgggacct tctcgctttc 60 atctagcgct gcactcaatg gaggggcggg caccgcagtg cttaatgctg tcttaactag 120 tgtaggaaaa cggctcaacc caccgctgcc gaaatgaagt ataagaatct tatggcaagg 180 gccttatatg acaatgtccc agagtgtgcc gaggaactgg cctttcgcaa gggagacatc 240 ctgaccgtca tagagcagaa cacaggggga ctggaaggat ggtggctgtg ctcgttacac 300 ggtcggcaag gcattgtccc aggcaaccgg gtgaagcttc tgattggtcc catgcaggag 360 actgcctcca gtcacgagca gcctgcctct ggactgatgc agcagacctt tggccaacag 420 aagctctatc aagtgccaaa cccacaggct gctccccgag acaccatcta ccaagtgcca 480 ccttcctacc aaaatcaggg aatttaccaa gtccccactg gccacggcac ccaagaacaa 540 gaggtatatc aggtgccacc atcagtgcag agaagcattg ggggaaccag tgggccccac 600 gtgggtaaaa aggtgataac ccccgtgagg acaggccatg gctacgtata cgagtaccca 660 tccagatacc aaaaggacgt ctatgatatc cctccttctc ataccactca aggggtatac 720 gacatccctc cctcatcagc aaaaggccct gtgttttcag ttccagtggg agagataaaa 780 cctcaagggg tgtatgacat cccgcctaca aaaggggtat atgccattcc gccctctgct 840 tgccgggatg aagcagggct tagggaaaaa gactatgact tcccccctcc catgagacaa 900 gctggaaggc cggacctcag accggagggg gtttatgaca ttcctccaac ctgcaccaag 960 ccagcaggga aggaccttca tgtaaaatac aactgtgaca ttccaggagc tgcagaaccg 1020 gtggctcgaa ggcaccagag cctgtccccg aatcacccac ccccgcaact cggacagtca 1080 gtgggctctc agaacgacgc atatgatgtc ccccgaggcg ttcagtttct tgagccacca 1140 gcagaaacca gtgagaaagc aaacccccag gaaagggatg gtgtttatga tgtccctctg 1200 cataacccgc cagatgctaa aggctctcgg gacttggtgg atgggatcaa ccgattgtct 1260 ttctccagta caggcagcac ccggagtaac atgtccacgt cttccacctc ctccaaggag 1320 tcctcactgt cagcctcccc agctcaggac aaaaggctct tcctggatcc agacacagct 1380 attgagagac ttcagcggct ccagcaggcc cttgagatgg gtgtctccag cctaatggca 1440 ctggtcacta ccgactggcg gtgttacgga tatatggaaa gacacatcaa tgaaatacgc 1500 acagcagtgg acaaggtgga gctgttcctg aaggagtacc tccactttgt caagggagct 1560 gttgcaaatg ctgcctgcct cccggaactc atcctccaca acaagatgaa gcgggagctg 1620 caacgagttg aagactccca ccagatcctg agtcaaacca gccatgactt aaatgagtgc 1680 agctggtccc tgaatatctt ggccatcaac aagccccaga acaagtgtga cgatctggac 1740 cggtttgtga tggtggcaaa gacggtgccc gatgacgcca agcagctcac cacaaccatc 1800 aacaccaacg cagaggccct cttcagaccc ggccctggca gcttgcatct gaagaatggg 1860 ccggagagca tcatgaactc aacggagtac ccacacggtg gctcccaggg acagctgctg 1920 catcctggtg accacaaggc ccaggcccac aacaaggcac tgcccccagg cctgagcaag 1980 gagcaggccc ctgactgtag cagcagtgat ggttctgaga ggagctggat ggatgactac 2040 gattacgtcc acctacaggg taaggaggag tttgagaggc aacagaaaga gctattggaa 2100 aaagagaata tcatgaaaca gaacaagatg cagctggaac atcatcagct gagccagttc 2160 cagctgttgg aacaagagat tacaaagccc gtggagaatg acatctcgaa gtggaagccc 2220 tctcagagcc tacccaccac aaacagtggc gtgagtgctc aggatcggca gttgctgtgc 2280 ttctactatg accaatgtga gacccatttc atttcccttc tcaacgccat tgacgcactc 2340 ttcagttgtg tcagctcagc ccagcccccg cgaatcttcg tggcacacag caagtttgtc 2400 atcctcagtg cacacaaact ggtgttcatt ggagacacgc tgacacggca ggtgactgcc 2460 caggacattc gcaacaaagt catgaactcc agcaaccagc tctgcgagca gctcaagacc 2520 atagtcatgg caaccaagat ggccgccctc cattacccca gcaccacggc cctgcaggaa 2580 atggtgcacc aagtgacaga cctttctaga aatgcccagc tgttcaagcg ctctttgctg 2640 gagatggcaa cgttctgaga agaaaaaaaa gaggaagggg actgcgttaa cggttactaa 2700 ggaaaactgg aaatactgtc tggtttttgt aaatgttatc tatttttgta gatattttat 2760 ataaaaatga aatattttaa cattttatgg gtcagtcaac tttcagaaat tcagggagct 2820 ggagagggaa atcttttttt ttccccctga gtggttctta tgtacataga ggtatctgag 2880 acataaactg tacagaaaac ttgtccacgt gcttttgtat gcccatgtat tcatgtttgt 2940 ttgtagatgt ttgtctgatg catttcatta aaaaaaaaac catgaattac gaagcacctt 3000 agtaagcacc tcctaatgct gcattttttt tgttgttgtt aaaaacatac cagctggtta 3060 taatattgtt ctccacgtcc ttgtgatgat tctgagcctg gcactcccaa atctgggaag 3120 catagtttat ttgcaagtgt tcaccttcca aatcatgagg catagcatga cttattcttg 3180 tttggaaaac tcttttcaaa actgaccatc ttaaacacat gatggccaag tgcccaaaag 3240 ccctcttgcg gagcaaattt cagaatatat atgtggatcc aagctctgat agttcaggtg 3300 ctggagggaa gagagacctg tgtgtttaga ggccaggacc acagttagga ttgggttgtt 3360 tcaatactga gagacagcta caataaaagg agagcaattg cctccctggg gctgttcaat 3420 cttctgcatt tgtgagtggt tcagtcatga ggttttccaa aagatgtttt tagagttgta 3480 aaaaccatat ttgcagcaaa gatttacaaa ggcgtatcag actatgattg ttcaccaaaa 3540 taggggaatg gtttgatccg ccagttgcaa gtagaggcct ttctgactct taatattcac 3600 tttggtgcta ctacccccat tacctgaggg aaactggcca ggtccttgat catggaacta 3660 tagagctacc aggacatatc ctgctctcta agggaattta ttgctatctt gcaccttctt 3720 taaaactcac atatgcagac ctgacactca agagtggcta gctacacaga gtccatctaa 3780 tttttgcaac ttcctgtggc cagtgtgtat aaccccttcc actatctcac agatagtcac 3840 agcgtccatt ccatagtctg tctcctcaca tctgttagta ttgacacagc acagacacca 3900 caagccatca ggttcttcat ggggcaggtg aaatacttct accccatggg taaatgtatt 3960 cacatattac caagagaaga agcacattat ctatgatctt ttggcccagt tcttatttag 4020 catttttatt ccagcctact tggaaacatg tttttatttg caatatatgc ctgactgaat 4080 taagcttgct tgttttaaac aaccaaatca ttggaacaga aaaggattta aaaaacaaga 4140 atgcatgatc tcagagtgat taaaaaaaaa tcagtggaaa taaatgatca tagaaggtgc 4200 ttttcaaaac aactgctatt ataattctca aagtcctact ctgccaaaag aagattaaaa 4260 gtcatacatt acattacaag gaaatgttca tgtgggaaga gggttgctga aaatcaacaa 4320 cgcttgaagt taaaaagtgt gtctttgtag atttcattgt ataatgtgta tttcttagga 4380 gatggctgac ttgattgatc tacgctaagt ggagacattt cacattttta aaaccaaatg 4440 ttcaatctgt attactcttt gccgtcttgt atgtagaggc tatttttaaa tcattaaatt 4500 tttagatctc tgttttcaaa aaaaaaaaaa aa 4532 <210> 2 <211> 834 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Lys Tyr Lys Asn Leu Met Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro 1 5 10 15 Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val 20 25 30 Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu 35 40 45 His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu Ile 50 55 60 Gly Pro Met Gln Glu Thr Ala Ser Ser His Glu Gln Pro Ala Ser Gly 65 70 75 80 Leu Met Gln Gln Thr Phe Gly Gln Gln Lys Leu Tyr Gln Val Pro Asn 85 90 95 Pro Gln Ala Ala Pro Arg Asp Thr Ile Tyr Gln Val Pro Pro Ser Tyr 100 105 110 Gln Asn Gln Gly Ile Tyr Gln Val Pro Thr Gly His Gly Thr Gln Glu 115 120 125 Gln Glu Val Tyr Gln Val Pro Pro Ser Val Gln Arg Ser Ile Gly Gly 130 135 140 Thr Ser Gly Pro His Val Gly Lys Lys Val Ile Thr Pro Val Arg Thr 145 150 155 160 Gly His Gly Tyr Val Tyr Glu Tyr Pro Ser Arg Tyr Gln Lys Asp Val 165 170 175 Tyr Asp Ile Pro Pro Ser His Thr Thr Gln Gly Val Tyr Asp Ile Pro 180 185 190 Pro Ser Ser Ala Lys Gly Pro Val Phe Ser Val Pro Val Gly Glu Ile 195 200 205 Lys Pro Gln Gly Val Tyr Asp Ile Pro Pro Thr Lys Gly Val Tyr Ala 210 215 220 Ile Pro Pro Ser Ala Cys Arg Asp Glu Ala Gly Leu Arg Glu Lys Asp 225 230 235 240 Tyr Asp Phe Pro Pro Pro Met Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asp Leu Arg 245 250 255 Pro Glu Gly Val Tyr Asp Ile Pro Pro Thr Cys Thr Lys Pro Ala Gly 260 265 270 Lys Asp Leu His Val Lys Tyr Asn Cys Asp Ile Pro Gly Ala Ala Glu 275 280 285 Pro Val Ala Arg Arg His Gln Ser Leu Ser Pro Asn His Pro Pro Pro 290 295 300 Gln Leu Gly Gln Ser Val Gly Ser Gln Asn Asp Ala Tyr Asp Val Pro 305 310 315 320 Arg Gly Val Gln Phe Leu Glu Pro Pro Ala Glu Thr Ser Glu Lys Ala 325 330 335 Asn Pro Gln Glu Arg Asp Gly Val Tyr Asp Val Pro Leu His Asn Pro 340 345 350 Pro Asp Ala Lys Gly Ser Arg Asp Leu Val Asp Gly Ile Asn Arg Leu 355 360 365 Ser Phe Ser Ser Thr Gly Ser Thr Arg Ser Asn Met Ser Thr Ser Ser 370 375 380 Thr Ser Ser Lys Glu Ser Ser Leu Ser Ala Ser Pro Ala Gln Asp Lys 385 390 395 400 Arg Leu Phe Leu Asp Pro Asp Thr Ala Ile Glu Arg Leu Gln Arg Leu 405 410 415 Gln Gln Ala Leu Glu Met Gly Val Ser Ser Leu Met Ala Leu Val Thr 420 425 430 Thr Asp Trp Arg Cys Tyr Gly Tyr Met Glu Arg His Ile Asn Glu Ile 435 440 445 Arg Thr Ala Val Asp Lys Val Glu Leu Phe Leu Lys Glu Tyr Leu His 450 455 460 Phe Val Lys Gly Ala Val Ala Asn Ala Ala Cys Leu Pro Glu Leu Ile 465 470 475 480 Leu His Asn Lys Met Lys Arg Glu Leu Gln Arg Val Glu Asp Ser His 485 490 495 Gln Ile Leu Ser Gln Thr Ser His Asp Leu Asn Glu Cys Ser Trp Ser 500 505 510 Leu Asn Ile Leu Ala Ile Asn Lys Pro Gln Asn Lys Cys Asp Asp Leu 515 520 525 Asp Arg Phe Val Met Val Ala Lys Thr Val Pro Asp Asp Ala Lys Gln 530 535 540 Leu Thr Thr Thr Ile Asn Thr Asn Ala Glu Ala Leu Phe Arg Pro Gly 545 550 555 560 Pro Gly Ser Leu His Leu Lys Asn Gly Pro Glu Ser Ile Met Asn Ser 565 570 575 Thr Glu Tyr Pro His Gly Gly Ser Gln Gly Gln Leu Leu His Pro Gly 580 585 590 Asp His Lys Ala Gln Ala His Asn Lys Ala Leu Pro Pro Gly Leu Ser 595 600 605 Lys Glu Gln Ala Pro Asp Cys Ser Ser Ser Asp Gly Ser Glu Arg Ser 610 615 620 Trp Met Asp Asp Tyr Asp Tyr Val His Leu Gln Gly Lys Glu Glu Phe 625 630 635 640 Glu Arg Gln Gln Lys Glu Leu Leu Glu Lys Glu Asn Ile Met Lys Gln 645 650 655 Asn Lys Met Gln Leu Glu His His Gln Leu Ser Gln Phe Gln Leu Leu 660 665 670 Glu Gln Glu Ile Thr Lys Pro Val Glu Asn Asp Ile Ser Lys Trp Lys 675 680 685 Pro Ser Gln Ser Leu Pro Thr Thr Asn Ser Gly Val Ser Ala Gln Asp 690 695 700 Arg Gln Leu Leu Cys Phe Tyr Tyr Asp Gln Cys Glu Thr His Phe Ile 705 710 715 720 Ser Leu Leu Asn Ala Ile Asp Ala Leu Phe Ser Cys Val Ser Ser Ala 725 730 735 Gln Pro Pro Arg Ile Phe Val Ala His Ser Lys Phe Val Ile Leu Ser 740 745 750 Ala His Lys Leu Val Phe Ile Gly Asp Thr Leu Thr Arg Gln Val Thr 755 760 765 Ala Gln Asp Ile Arg Asn Lys Val Met Asn Ser Ser Asn Gln Leu Cys 770 775 780 Glu Gln Leu Lys Thr Ile Val Met Ala Thr Lys Met Ala Ala Leu His 785 790 795 800 Tyr Pro Ser Thr Thr Ala Leu Gln Glu Met Val His Gln Val Thr Asp 805 810 815 Leu Ser Arg Asn Ala Gln Leu Phe Lys Arg Ser Leu Leu Glu Met Ala 820 825 830 Thr Phe <210> 3 <211> 1300 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 gcgctgcgac tgacaagcgg ctctgcccgg gaccttctcg ctttcatcta gcgctgcact 60 caatggaggg gcgggcaccg cagtgcttaa tgctgtctta actagtgtag gaaaacggct 120 caacccaccg ctgccgaaat gaagtataag aatcttatgg caagggcctt atatgacaat 180 gtcccagagt gtgccgagga actggccttt cgcaagggag acatcctgac cgtcatagag 240 cagaacacag ggggactgga aggatggtgg ctgtgctcgt tacacggtcg gcaaggcatt 300 gtcccaggca accgggtgaa gcttctgatt ggtcccatgc aggagactgc ctccagtcac 360 gagcagcctg cctctggact gatgcagcag acctttggcc aacagaagct ctatcaagtg 420 ccaaacccac aggctgctcc ccgagacacc atctaccaag tgccaccttc ctaccaaaat 480 cagggaattt accaagtccc cactggccac ggcacccaag aacaagaggt atatcaggtg 540 ccaccatcag tgcagagaag cattggggga accagtgggc cccacgtggg taaaaaggtg 600 ttccagagag atgggcaagt gtcctatttc ttagtgagag cctctaaaca aaccagcttg 660 tgaacctcca ctgaaaagat ctcatctgat gagcatttta ataaagtgtc ctgagtttgg 720 aggcttgccg tctttctctt ggataaatat cttcatctcc tagacttgga aaaacacatt 780 ttctcctggg gtttcccatt ggcgtgtctt gagctgctct ggtgataacc gtaataatgc 840 caatactgat acgaacagca gaaaacagta accccaagaa ctctacagat gatcatcaag 900 gaccactgtc tcttaccatt tgctgctttg gtttgaaatt ctcactgcct cgtagatctc 960 attttgagca ctatacattc ctaaagattg atttctttct atctgactta aatttaggaa 1020 tgattaaatc ttcatttctc ccatgatttg atcctaaaac attttgaaag gaaacagcct 1080 tgagatctgt gattactaag acatacataa cattcttatc acattagaaa gcaagaattg 1140 actgttgctt gtcttgttcc tgttgtcttg tcccctgaat tcctgtttat ctttgattgt 1200 atgtgggaca ttgtattttc agtacatttg tagaaataat gtgaagccta taaagatgtt 1260 ctctgcctcc aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1300 <210> 4 <211> 174 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Lys Tyr Lys Asn Leu Met Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro 1 5 10 15 Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val 20 25 30 Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu 35 40 45 His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu Ile 50 55 60 Gly Pro Met Gln Glu Thr Ala Ser Ser His Glu Gln Pro Ala Ser Gly 65 70 75 80 Leu Met Gln Gln Thr Phe Gly Gln Gln Lys Leu Tyr Gln Val Pro Asn 85 90 95 Pro Gln Ala Ala Pro Arg Asp Thr Ile Tyr Gln Val Pro Pro Ser Tyr 100 105 110 Gln Asn Gln Gly Ile Tyr Gln Val Pro Thr Gly His Gly Thr Gln Glu 115 120 125 Gln Glu Val Tyr Gln Val Pro Pro Ser Val Gln Arg Ser Ile Gly Gly 130 135 140 Thr Ser Gly Pro His Val Gly Lys Lys Val Phe Gln Arg Asp Gly Gln 145 150 155 160 Val Ser Tyr Phe Leu Val Arg Ala Ser Lys Gln Thr Ser Leu 165 170 <210> 5 <211> 5913 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 gtggacgcag cgggctttgg aaaggcccca agttaatgag gcgtgcgccg gctgccgagc 60 gcctcttgga gctgggcttt cccccgcggt gcgggcgcca ggagccgcct tttccgctgg 120 gtgtcactcg ggggtgggga agatggccca ttcaaaagcg ccgcgagggg gcccggccag 180 tgcccttcag tgagcgctcg caagaggacg gcagaggccc ggcagctcgg agctccggga 240 ccttgtggcg catcaggacg cggctgtccc tctgccggga cccagagccg ccgccgccgc 300 tctgcctcct gcgtgttagc ctcctctgcg cgctccgggc aggcggccgt gggagccgct 360 ggggcgagga cggcgcgagg ctgctgctgc tgcccccggc ccgcgcggct ggaaacggag 420 aggccgagcc aagcggcggc ccctcttatg ctgggaggat gctggagagt agcggctgca 480 aagcgctgaa ggagggcgtg ctggagaagc gcagcgacgg gttgttgcag ctctggaaga 540 aaaagtgttg catcctcacc gaggaagggc tgctgcttat cccgcccaag cagctgcaac 600 accagcagca gcagcagcaa cagcagcagc agcagcagca acaacagccc gggcaggggc 660 cggccgagcc gtcccaaccc agtggccccg ctgtcgccag cctcgagccg ccggtcaagc 720 tcaaggaact gcacttctcc aacatgaaga ccgtggactg tgtggagcgc aagggcaagt 780 acatgtactt cactgtggtg atggcagagg gcaaggagat cgactttcgg tgcccgcaag 840 accagggctg gaacgccgag atcacgctgc agatggtgca gtacaagaat cgtcaggcca 900 tcctggcggt caaatccacg cggcagaagc agcagcacct ggtccagcag cagcccccct 960 cgcagccgca gccgcagccg cagctccagc cccaacccca gcctcagcct cagccgcaac 1020 cccagcccca atcacaaccc cagcctcagc cccaacccaa gcctcagccc cagcagctcc 1080 acccgtatcc gcatccacat ccacatccac actctcatcc tcactcgcac ccacaccctc 1140 acccgcaccc gcatccgcac caaataccgc acccacaccc acagccgcac tcgcagccgc 1200 acgggcaccg gcttctccgc agcacctcca actctgcctg aaaggggcag ctcccgggca 1260 agacaaggtt ttgaggactt gaggaagtgg gacgagcaca tttctattgt cttcacttgg 1320 atcaaaagca aaacagtctc tccgccccgc accagatcaa gtagtttgga catcacccta 1380 ctgaaaactt gcgattcttc ttagttttct gcatactttt catcacgatg caggaaacga 1440 tttcgagtca agaagacttt tatttatgaa cctttgaaag gatcgtcttg tatggtgaat 1500 tttctaggag cgatgatgta ctgtaatttt attttaatgt attttgattt atgattattt 1560 attagttttt ttttaaatgc ttgttctaag acatttctga atgtagacca ttttccaaaa 1620 aggaaacttt attttcaaaa acctaatccg tagtaattcc taatcttgga gaataaaaaa 1680 gggcggtgga ggggaaaaca ttaagaattt attcattatt tctcgagtac tttcagaaag 1740 tctgacactt tcattgttgt gccagctggt tgaaattaaa actctgatat tacttttttt 1800 gaggattttt atttttgttt ttgcttaaac atatagtttg tctagaagtt taaaaagcta 1860 aaagttaaaa atggtgtaat tatgaaaatc taacactcaa gatagtttct aaaaggaaat 1920 cagtagttaa ggatacctga tttcaaaata tttaaagcat aacctaactg atggtaggat 1980 gattgtatct tgaatatgtg gtagggccac atctattgta ggaaaacctt gcttttatca 2040 tctgtgtgta aagggcttaa taaggagaag aggccttttg actgatttgt gagtataaat 2100 gcatttgctg tttcatttca aaaatgttgt ggaggaaaag agtacattta acttgtataa 2160 gagaatattt gtactcctgt ccaggctgca ggacctttct tcgagagctt tgcacacttg 2220 acttgaacca cattttctga tccctttact ttgttttaga agcacactga aaaatctcgt 2280 tgtttaaagt acaatttgta aatatttcaa aggtctagga gtcataactt ttgttttcat 2340 actgaaaatg atgttgatca gagaaaccaa ctgttttgct tttcattgct ctgtgagaaa 2400 tttgaggatt ctgttttgct gttaggtaag ctaaactcag aaattgaaaa ggaaaagact 2460 ggataaacac aggattttca gtaagaaaac aaccccagtc ttgtcttaga agccacttgt 2520 tgaggagtct gttgggggaa aaaagaggat atgcttttaa aggtagaaca aaccttcttc 2580 tgtgttaaat caaaaggatg ttcaaaatcc accaggacag atgctacttg ggtttaaatg 2640 gagccataga tgatacaaag tcctcttggg gctgaaaatc acttcctatt tgcatggctt 2700 tactaactgg tttctgtttt ccattatctt tttcacagaa agtcttggtc agtatttttc 2760 cagcatttaa attgaaacgg tcagtattag accactgcta ggttatgtag tcaagaaata 2820 aaaatagaat tacatgctac agatgtcttt attctccttc catctagaaa ggagttccaa 2880 ggtcaaatta ctttttagtg caatagttaa atgacatttt gagatcataa ctcatatcca 2940 aaaagttgca gggaaaatta aaatagcttt cccctattaa gctaatggca aacaaaactt 3000 aagtggaccc ccacttccag tggttgttta ggttgcagtt gtgaaaatat gctgccaaca 3060 tttaaaaact tgtttcatat gtatatatgt atacacatat atgaatatgt atgtatatat 3120 acatatatga gaacatgtgt gtacacatat atgaatatgt atatatgtgt atgtatgtat 3180 atatgtatat gaaatgagag ccacatctaa agatttctta aatcaagttt ggttcagctt 3240 ccttagaact gtggctgtac tttttgagga gtacctcata gtactatatt tttaatgcat 3300 gcaaatcata atagctccaa atgaaccaca gttttttccc aatggaggat ttttttttaa 3360 ttcttgtact aaaaaaaaaa aatccatacc aaatattttt acaaattaag attgatgtag 3420 gttttaaaaa aggcatttgt atgttgttag cttacatatg gggctaggta atttcattgc 3480 ttaaaaagat gcgcctaggc tccctcttgg tggctggatt tctttttctt cgcccgtggt 3540 ggccatggtt cttaataggg ccaccggaat catggtttct tttttttttt ttttttttga 3600 gatggagtct cgccctgtga cccaggctgg agtgcagtgg cacgatctcg gctcactgca 3660 acctctgcct cctgggttca cgccattctc ctgtctcagc ctcctgagta gctgggacta 3720 caggtgaatg ccaccacgcc cggctgattt ttgtattttt agtagagatg gggtttcacc 3780 atagtggtca ggctgttctc gaactcctga cctcaggtga tccacctgcc ttggcctccc 3840 aaagtgctag gattacaggt gtgagccacc acacccggcc ccagaataat ggtttcttga 3900 ctttctgtag cccttgttcc ttagtctgct gtgatattta tgttgacctt tatcattttc 3960 tattctgaac ccctcttagc atttaatgtg aaatctaaga aattagaagt agaatggctt 4020 ttattgtttt gacacctttg aaattattat taataatttt tccagagcaa aaaagcaaac 4080 acgctcaata agactaaaca aaacaaaata taaatgtaca tcatttaatg tcccagtggc 4140 tctattctac ctgtaagaaa atgatacaaa accacctaag atattttgaa gcctgacaaa 4200 tcagcttcat ggaaaaaggt aaaaaatgca tttttcaacc gaaagggcag atccaataga 4260 agacccgctc cttaaataaa cataaaatgt aaaaagttgg aaaattaaga gtaatgttcc 4320 atctggaaac tgaacttttg tccttgaact tgtgttggca ccaagcctca tacacagtga 4380 gctcaataac tgttgggaca aaggaaggaa ggacaaaatg tgtaacttcc cagcatctgg 4440 gagatgctgt ctcttgcctc actgagtgtt ccttttcttt gctctcatgt cattccctga 4500 gaacaatgaa ttctgggaca ggctaaacat catgatgaag tttcttaaac agactttctt 4560 agtggaaatc catttagatc tgggtgtgct ctatggggag tgctgacgtc aaagagcaaa 4620 tgtctataag gggccctttt aaaatgaaca ttttcctcat tgagcaagct gggattctct 4680 aatgtagaaa tcaagccatc tttataattt cacttcagat gtttatgttt ttgttttttt 4740 tgtctccaat gatggtaaaa ataaaaacta cgcattactt aaaggagttt ccctcacatg 4800 taaacactgt taggaagtct ggattaagtt gaaagtcctg ttttaacttt ttttctctca 4860 tataccaaac actctgtatt tctcttaaag aagcccttta agagaaagcc ctaattttat 4920 atctgacagt aaagtttgct gcaagtgtat gagttcaaac acatcccttg ttttctgtcc 4980 ctaggggaaa agtcatgtag ttttagcttg gctccagtgt taatattata ttcagtagca 5040 gccttagaag agtggtctaa gacttgaacc tggagcaatt ttatagcaca gaatcctacg 5100 aagataggac tgtgaacatt tgttttcttt ttcgtgtgtg tcaaactaac tggtttttgc 5160 tttaccaata aaatgtcctc ggcagagtaa attttaaacg tgaaaattat agatcttgat 5220 attgaatcca tcagtgattc aagagataca cctatttgcc taaaacaacc taagatgtat 5280 tggttatgga atcatgtgtt ggataggttc ttaagacctg tttcctcaaa tcttgacaca 5340 gttttcaagg gtggcttatt gacttgcacg gttgggcaga taatccagat ttacctaaga 5400 ttgggtaaaa aagtcatctg tgactttgct ggcagggcat ttgctaagtg gagtacagga 5460 tctaaaaggg ttttcttaga aagggcaata ttgtccaatg aagtaagcag aaggactctg 5520 ggttagaagc atctgcacaa aaactggtga gacctactct ccactgctct gcagctggat 5580 ggctgatggc aggctgagca gtggggaagc aggttttaac aacagggagt ccttccaggt 5640 cactgtatat tgagaagaaa cataaaacta ttgtctgtta cattccgagg tcagccttct 5700 tcttaacgtt ttataatatg caaatgccag cttctggaaa gcaagtatca tcatgtacca 5760 aatgctttat acaccatcac attcatgaat tttttagcat ggtcagaact tgtgtaaata 5820 tgtctcttag atgattttgg ggagatgtga tttatttttc atattttcaa aatgcatttc 5880 atttcaaata aagttatcta ttgagacaac cga 5913 <210> 6 <211> 401 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Arg Arg Ala Pro Ala Ala Glu Arg Leu Leu Glu Leu Gly Phe Pro 1 5 10 15 Pro Arg Cys Gly Arg Gln Glu Pro Pro Phe Pro Leu Gly Val Thr Arg 20 25 30 Gly Trp Gly Arg Trp Pro Ile Gln Lys Arg Arg Glu Gly Ala Arg Pro 35 40 45 Val Pro Phe Ser Glu Arg Ser Gln Glu Asp Gly Arg Gly Pro Ala Ala 50 55 60 Arg Ser Ser Gly Thr Leu Trp Arg Ile Arg Thr Arg Leu Ser Leu Cys 65 70 75 80 Arg Asp Pro Glu Pro Pro Pro Pro Leu Cys Leu Leu Arg Val Ser Leu 85 90 95 Leu Cys Ala Leu Arg Ala Gly Gly Arg Gly Ser Arg Trp Gly Glu Asp 100 105 110 Gly Ala Arg Leu Leu Leu Leu Pro Pro Ala Arg Ala Ala Gly Asn Gly 115 120 125 Glu Ala Glu Pro Ser Gly Gly Pro Ser Tyr Ala Gly Arg Met Leu Glu 130 135 140 Ser Ser Gly Cys Lys Ala Leu Lys Glu Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser 145 150 155 160 Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu 165 170 175 Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln 180 185 190 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly 195 200 205 Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu 210 215 220 Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val 225 230 235 240 Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met 245 250 255 Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp 260 265 270 Asn Ala Glu Ile Thr Leu Gln Met Val Gln Tyr Lys Asn Arg Gln Ala 275 280 285 Ile Leu Ala Val Lys Ser Thr Arg Gln Lys Gln Gln His Leu Val Gln 290 295 300 Gln Gln Pro Pro Ser Gln Pro Gln Pro Gln Pro Gln Leu Gln Pro Gln 305 310 315 320 Pro Gln Pro Gln Pro Gln Pro Gln Pro Gln Pro Gln Ser Gln Pro Gln 325 330 335 Pro Gln Pro Gln Pro Lys Pro Gln Pro Gln Gln Leu His Pro Tyr Pro 340 345 350 His Pro His Pro His Pro His Ser His Pro His Ser His Pro His Pro 355 360 365 His Pro His Pro His Pro His Gln Ile Pro His Pro His Pro Gln Pro 370 375 380 His Ser Gln Pro His Gly His Arg Leu Leu Arg Ser Thr Ser Asn Ser 385 390 395 400 Ala <210> 7 <211> 60 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu 1 5 10 15 Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly 20 25 30 Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile 35 40 45 Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu Ile Gly Pro 50 55 60 <210> 8 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Glu Ala Leu Pro Gly Glu Asp Cys Ala Phe Arg Lys Asp Ala Asn Arg 1 5 10 15 Leu Val Glu Tyr 20 <210> 10 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Ala Leu Lys Glu Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln 1 5 10 15 Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu 20 25 30 Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 35 40 45 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln 50 55 60 Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys 65 70 75 80 Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys 85 90 95 Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile 100 105 110 Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu Ile Thr Leu 115 120 125 Gln Met Val Gln Tyr 130 <210> 11 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 12 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu Ile Thr Leu Gln Met Val Gln 1 5 10 15 Tyr <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 15 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 16 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 17 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Ala Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 20 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Ala Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 24 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 25 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Cys Ala Ala Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 26 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Cys Ala Ala Ala Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 27 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 28 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Ser Ala Ala Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 29 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Ser Ala Ala Ala Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 30 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 31 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 32 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 33 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Ala Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 34 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Arg Ala Ala Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 35 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Arg Ala Leu Ala Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 36 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 37 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Arg Ala Leu Tyr Asp Ala Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 38 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Ala Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 39 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Ala Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 40 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Ala Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 41 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 42 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Ala Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 43 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Ala Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 44 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Ala Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 45 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Ala 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 46 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Ala Lys Gly Asp 20 <210> 47 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Ala Gly Asp 20 <210> 48 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Ala Asp 20 <210> 49 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Ala 20 <210> 50 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Ala Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 51 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Arg Ala Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 52 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Arg Lys Ala Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 53 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Arg Lys Gly Ala Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 54 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Arg Lys Gly Asp Ala Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 55 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Arg Lys Gly Asp Ile Ala Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 56 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Ala Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly 1 5 10 15 Leu Glu Gly Trp Trp 20 <210> 57 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Ala Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 58 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ala Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 59 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Ala Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 60 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Ala Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 61 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Ala Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Ala Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Ala Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Ala Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Ala 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Ala Gly Trp Trp 20 <210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Ala Trp Trp 20 <210> 68 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Ala Trp 20 <210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Ala 20 <210> 70 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Ala Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 71 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Ser Ala His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 72 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Ser Leu Ala Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 73 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Ser Leu His Ala Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 74 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Ser Leu His Gly Ala Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 75 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Ser Leu His Gly Arg Ala Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 76 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Ser Leu His Gly Arg Gln Ala Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 77 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ala Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 78 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Ala Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 79 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Ala Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 80 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Ala Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 81 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Ala Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 82 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Ala Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 83 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Ala Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 84 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Ala Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 85 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Ala 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 86 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Ala Ile Gly Pro 20 <210> 87 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ala Gly Pro 20 <210> 88 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Ala Pro 20 <210> 89 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Ala 20 <210> 90 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Ala Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 91 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Arg Ala Ala Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 92 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Arg Ala Leu Ala Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 93 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 94 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Arg Ala Leu Tyr Asp Ala Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 95 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Ala Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 96 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Ala Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 97 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Ala Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 98 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Ala Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 99 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Ala Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 100 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Ala Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 101 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Ala 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 102 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Ala Lys Gly Asp 20 <210> 103 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Ala Gly Asp 20 <210> 104 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Ala Asp 20 <210> 105 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Ala 20 <210> 106 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Ala Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 107 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Arg Ala Ala Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 108 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Arg Ala Leu Ala Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 109 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Arg Ala Leu Tyr Ala Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 110 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Arg Ala Leu Tyr Asp Ala Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 111 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Ala Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 112 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Ala Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 113 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Ala Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 114 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Ala Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 115 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Ala Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 116 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Ala Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 117 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Ala 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 118 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Ala Lys Gly Asp 20 <210> 119 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Ala Gly Asp 20 <210> 120 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 120 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Ala Asp 20 <210> 121 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 121 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Ala 20 <210> 122 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly <210> 123 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys <210> 124 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg <210> 125 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 <210> 126 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu 1 5 10 <210> 127 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu 1 5 10 <210> 128 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 128 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu 1 5 10 <210> 129 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala 1 5 10 <210> 130 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys 1 5 10 <210> 131 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu 1 5 <210> 132 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro 1 5 <210> 133 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 133 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 134 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 134 Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg 1 5 10 15 Lys Gly Asp <210> 135 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135 Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys 1 5 10 15 Gly Asp <210> 136 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 136 Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly 1 5 10 15 Asp <210> 137 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 137 Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 138 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 138 Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 139 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 139 Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 140 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 140 Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 141 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 141 Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 142 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 142 Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 143 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143 Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 <210> 144 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 144 Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 <210> 145 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly <210> 146 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 146 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys <210> 147 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg <210> 148 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 148 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 <210> 149 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 149 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 150 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 150 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu 1 5 10 <210> 151 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 151 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu 1 5 10 <210> 152 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 152 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu 1 5 10 <210> 153 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 153 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala 1 5 10 <210> 154 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 154 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser 1 5 10 <210> 155 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 155 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 156 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 156 Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg 1 5 10 15 Lys Gly Asp <210> 157 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 157 Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys 1 5 10 15 Gly Asp <210> 158 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 158 Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly 1 5 10 15 Asp <210> 159 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 159 Asp Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 160 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 160 Asn Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 161 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 161 Val Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 162 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 162 Pro Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 163 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 163 Glu Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 164 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 164 Ser Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 165 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 165 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly <210> 166 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 166 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys <210> 167 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 167 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg <210> 168 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 168 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 <210> 169 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 169 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 170 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 170 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu 1 5 10 <210> 171 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 171 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu 1 5 10 <210> 172 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 172 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu 1 5 10 <210> 173 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 173 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala 1 5 10 <210> 174 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 174 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala 1 5 10 <210> 175 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 175 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 176 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 176 Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg 1 5 10 15 Lys Gly Asp <210> 177 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 177 Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys 1 5 10 15 Gly Asp <210> 178 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 178 Tyr Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly 1 5 10 15 Asp <210> 179 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 179 Asp Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 180 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 180 Asn Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 <210> 181 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 181 Val Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 182 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 182 Pro Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 183 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 183 Glu Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 184 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 184 Ala Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 185 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 185 Met Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu 1 5 10 15 Ala Phe Arg Lys 20 <210> 186 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 186 Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 Phe Arg Lys Gly 20 <210> 187 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 187 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Arg Lys Gly Asp 20 <210> 188 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 188 Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg 1 5 10 15 Lys Gly Asp Ile 20 <210> 189 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 189 Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys 1 5 10 15 Gly Asp Ile Leu 20 <210> 190 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 190 Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly 1 5 10 15 Asp Ile Leu Thr 20 <210> 191 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 191 Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 15 Ile Leu Thr Val 20 <210> 192 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 192 Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile 1 5 10 15 Leu Thr Val Ile 20 <210> 193 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 193 Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu 1 5 10 15 Thr Val Ile Glu 20 <210> 194 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 194 Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr 1 5 10 15 Val Ile Glu Gln 20 <210> 195 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 195 Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val 1 5 10 15 Ile Glu Gln Asn 20 <210> 196 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 196 Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile 1 5 10 15 Glu Gln Asn Thr 20 <210> 197 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 197 Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu 1 5 10 15 Gln Asn Thr Gly 20 <210> 198 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 198 Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln 1 5 10 15 Asn Thr Gly Gly 20 <210> 199 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 199 Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn 1 5 10 15 Thr Gly Gly Leu 20 <210> 200 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 200 Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr 1 5 10 15 Gly Gly Leu Glu 20 <210> 201 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 201 Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly 1 5 10 15 Gly Leu Glu Gly 20 <210> 202 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 202 Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly 1 5 10 15 Leu Glu Gly Trp 20 <210> 203 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 203 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 15 Glu Gly Trp Trp 20 <210> 204 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 204 Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu 1 5 10 15 Gly Trp Trp Leu 20 <210> 205 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 205 Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly 1 5 10 15 Trp Trp Leu Cys 20 <210> 206 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 206 Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp 1 5 10 15 Trp Leu Cys Ser 20 <210> 207 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 207 Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp 1 5 10 15 Leu Cys Ser Leu 20 <210> 208 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 208 Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu 1 5 10 15 Cys Ser Leu His 20 <210> 209 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 209 Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys 1 5 10 15 Ser Leu His Gly 20 <210> 210 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 210 Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser 1 5 10 15 Leu His Gly Arg 20 <210> 211 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 211 Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu 1 5 10 15 His Gly Arg Gln 20 <210> 212 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 212 Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His 1 5 10 15 Gly Arg Gln Gly 20 <210> 213 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 213 Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly 1 5 10 15 Arg Gln Gly Ile 20 <210> 214 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 214 Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg 1 5 10 15 Gln Gly Ile Val 20 <210> 215 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 215 Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln 1 5 10 15 Gly Ile Val Pro 20 <210> 216 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 216 Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly 1 5 10 15 Ile Val Pro Gly 20 <210> 217 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 217 Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile 1 5 10 15 Val Pro Gly Asn 20 <210> 218 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 218 Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val 1 5 10 15 Pro Gly Asn Arg 20 <210> 219 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 219 Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro 1 5 10 15 Gly Asn Arg Val 20 <210> 220 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 220 Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly 1 5 10 15 Asn Arg Val Lys 20 <210> 221 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 221 Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn 1 5 10 15 Arg Val Lys Leu 20 <210> 222 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 222 Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg 1 5 10 15 Val Lys Leu Leu 20 <210> 223 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 223 Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val 1 5 10 15 Lys Leu Leu Ile 20 <210> 224 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 224 Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Ile Gly 20 <210> 225 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 225 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Gly Pro 20 <210> 226 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 226 Met Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys 1 5 10 <210> 227 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 227 Ala Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala 1 5 10 <210> 228 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 228 Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu 1 5 10 <210> 229 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 229 Ala Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu 1 5 10 <210> 230 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 230 Leu Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu 1 5 10 <210> 231 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 231 Tyr Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala 1 5 10 <210> 232 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 232 Asp Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe 1 5 10 <210> 233 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 233 Asn Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg 1 5 10 <210> 234 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 234 Val Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys 1 5 10 <210> 235 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 235 Pro Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly 1 5 10 <210> 236 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 236 Glu Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp 1 5 10 <210> 237 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 237 Cys Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile 1 5 10 <210> 238 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 238 Ala Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu 1 5 10 <210> 239 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 239 Glu Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr 1 5 10 <210> 240 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 240 Glu Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val 1 5 10 <210> 241 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 241 Leu Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile 1 5 10 <210> 242 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 242 Ala Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu 1 5 10 <210> 243 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 243 Phe Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln 1 5 10 <210> 244 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 244 Arg Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn 1 5 10 <210> 245 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 245 Lys Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr 1 5 10 <210> 246 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 246 Gly Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly 1 5 10 <210> 247 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 247 Asp Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu 1 5 10 <210> 248 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 248 Ile Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu 1 5 10 <210> 249 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 249 Leu Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly 1 5 10 <210> 250 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 250 Thr Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp 1 5 10 <210> 251 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 251 Val Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp 1 5 10 <210> 252 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 252 Ile Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu 1 5 10 <210> 253 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 253 Glu Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys 1 5 10 <210> 254 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 254 Gln Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser 1 5 10 <210> 255 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 255 Asn Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu 1 5 10 <210> 256 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 256 Thr Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His 1 5 10 <210> 257 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 257 Gly Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly 1 5 10 <210> 258 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 258 Gly Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg 1 5 10 <210> 259 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 259 Leu Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln 1 5 10 <210> 260 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 260 Glu Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly 1 5 10 <210> 261 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 261 Gly Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile 1 5 10 <210> 262 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 262 Trp Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val 1 5 10 <210> 263 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 263 Trp Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro 1 5 10 <210> 264 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 264 Leu Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly 1 5 10 <210> 265 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 265 Cys Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn 1 5 10 <210> 266 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 266 Ser Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg 1 5 10 <210> 267 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 267 Leu His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val 1 5 10 <210> 268 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 268 His Gly Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys 1 5 10 <210> 269 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 269 Arg Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu 1 5 10 <210> 270 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 270 Gln Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu 1 5 10 <210> 271 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 271 Gly Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu Ile 1 5 10 <210> 272 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 272 Ile Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu Ile Gly 1 5 10 <210> 273 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 273 Val Pro Gly Asn Arg Val Lys Leu Leu Ile Gly Pro 1 5 10 <210> 274 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 274 Ala Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 275 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 275 Lys Ala Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 276 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 276 Lys Arg Ala Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 277 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 277 Lys Arg Ser Ala Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 278 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 278 Lys Arg Ser Asp Ala Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 279 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 279 Lys Arg Ser Asp Gly Ala Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 280 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 280 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Ala Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 281 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 281 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Ala Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 282 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 282 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Ala Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 283 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 283 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Ala Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 284 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 284 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Ala Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 285 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 285 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Ala Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 286 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 286 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Ala Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 287 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 287 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Ala Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 288 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 288 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Ala Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 289 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 289 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ala 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 290 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 290 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Ala Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 291 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 291 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Ala Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 292 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 292 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Ala Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 293 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 293 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Ala Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 294 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 294 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Ala Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 295 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 295 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Ala Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 296 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 296 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Ala Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 297 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 297 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Ala Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 298 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 298 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ala Pro Pro Lys 20 25 <210> 299 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 299 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Ala Pro Lys 20 25 <210> 300 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 300 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Ala Lys 20 25 <210> 301 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 301 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Ala 20 25 <210> 302 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 302 Ala Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 303 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 303 Leu Ala Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 304 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 304 Leu Glu Ala Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 305 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 305 Leu Glu Pro Ala Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 306 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 306 Leu Glu Pro Pro Ala Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 307 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 307 Leu Glu Pro Pro Val Ala Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 308 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 308 Leu Glu Pro Pro Val Lys Ala Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 309 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 309 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Ala Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 310 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 310 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Ala Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 311 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 311 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Ala His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 312 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 312 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu Ala Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 313 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 313 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Ala Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 314 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 314 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ala Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 315 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 315 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Ala Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 316 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 316 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Ala Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 317 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 317 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Ala 1 5 10 15 Thr Val Asp <210> 318 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 318 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Ala Val Asp <210> 319 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 319 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Ala Asp <210> 320 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 320 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Ala <210> 321 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 321 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro 20 25 <210> 322 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 322 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro 20 25 <210> 323 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 323 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile 20 25 <210> 324 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 324 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu 20 <210> 325 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 325 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu 20 <210> 326 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 326 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly Leu 20 <210> 327 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 327 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu Gly 20 <210> 328 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 328 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu 20 <210> 329 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 329 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu <210> 330 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 330 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr <210> 331 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 331 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu <210> 332 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 332 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 <210> 333 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 333 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys 1 5 10 15 <210> 334 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 334 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 335 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 335 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys 1 5 10 <210> 336 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 336 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys 1 5 10 <210> 337 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 337 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys 1 5 10 <210> 338 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 338 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp 1 5 10 <210> 339 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 339 Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu 1 5 10 15 Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 340 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 340 Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr 1 5 10 15 Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 341 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 341 Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu 1 5 10 15 Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 25 <210> 342 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 342 Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 <210> 343 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 343 Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly 1 5 10 15 Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 <210> 344 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 344 Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu 1 5 10 15 Leu Leu Ile Pro Pro Lys 20 <210> 345 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 345 Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu 1 5 10 15 Leu Ile Pro Pro Lys 20 <210> 346 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 346 Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ile Pro Pro Lys 20 <210> 347 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 347 Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile 1 5 10 15 Pro Pro Lys <210> 348 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 348 Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro 1 5 10 15 Pro Lys <210> 349 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 349 Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro 1 5 10 15 Lys <210> 350 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 350 Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 15 <210> 351 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 351 Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 15 <210> 352 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 352 Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 353 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 353 Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 354 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 354 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 355 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 355 Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 356 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 356 Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 357 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 357 Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr 1 5 10 15 Val Asp <210> 358 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 358 Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val 1 5 10 15 Asp <210> 359 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 359 Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 15 <210> 360 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 360 Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 15 <210> 361 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 361 Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 <210> 362 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 362 Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 <210> 363 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 363 Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 <210> 364 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 364 Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 <210> 365 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 365 Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 <210> 366 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 366 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val <210> 367 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 367 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr <210> 368 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 368 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 <210> 369 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 369 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met 1 5 10 15 <210> 370 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 370 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn 1 5 10 <210> 371 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 371 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser 1 5 10 <210> 372 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 372 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe 1 5 10 <210> 373 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 373 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His 1 5 10 <210> 374 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 374 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu 1 5 10 <210> 375 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 375 Ala Leu Lys Glu Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln 1 5 10 15 Leu Trp Lys Lys 20 <210> 376 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 376 Leu Lys Glu Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu 1 5 10 15 Trp Lys Lys Lys 20 <210> 377 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 377 Lys Glu Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp 1 5 10 15 Lys Lys Lys Cys 20 <210> 378 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 378 Glu Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys 1 5 10 15 Lys Lys Cys Cys 20 <210> 379 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 379 Gly Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys 1 5 10 15 Lys Cys Cys Ile 20 <210> 380 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 380 Val Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys 1 5 10 15 Cys Cys Ile Leu 20 <210> 381 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 381 Leu Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys 1 5 10 15 Cys Ile Leu Thr 20 <210> 382 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 382 Glu Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys 1 5 10 15 Ile Leu Thr Glu 20 <210> 383 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 383 Lys Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile 1 5 10 15 Leu Thr Glu Glu 20 <210> 384 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 384 Arg Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu 1 5 10 15 Thr Glu Glu Gly 20 <210> 385 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 385 Ser Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr 1 5 10 15 Glu Glu Gly Leu 20 <210> 386 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 386 Asp Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu 1 5 10 15 Glu Gly Leu Leu 20 <210> 387 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 387 Gly Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu 20 <210> 388 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 388 Leu Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly 1 5 10 15 Leu Leu Leu Ile 20 <210> 389 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 389 Leu Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu 1 5 10 15 Leu Leu Ile Pro 20 <210> 390 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 390 Gln Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu 1 5 10 15 Leu Ile Pro Pro 20 <210> 391 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 391 Leu Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ile Pro Pro Lys 20 <210> 392 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 392 Trp Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile 1 5 10 15 Pro Pro Lys Gln 20 <210> 393 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 393 Lys Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro 1 5 10 15 Pro Lys Gln Leu 20 <210> 394 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 394 Lys Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro 1 5 10 15 Lys Gln Leu Gln 20 <210> 395 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 395 Lys Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys 1 5 10 15 Gln Leu Gln His 20 <210> 396 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 396 Cys Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln 1 5 10 15 Leu Gln His Gln 20 <210> 397 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 397 Cys Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu 1 5 10 15 Gln His Gln Gln 20 <210> 398 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 398 Ile Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln 1 5 10 15 His Gln Gln Gln 20 <210> 399 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 399 Leu Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 400 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 400 Thr Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 401 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 401 Glu Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 402 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 402 Glu Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 403 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 403 Gly Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 404 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 404 Leu Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 405 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 405 Leu Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 406 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 406 Leu Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 407 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 407 Ile Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 408 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 408 Pro Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 409 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 409 Pro Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Gln 20 <210> 410 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 410 Lys Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Gln Pro 20 <210> 411 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 411 Gln Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Gln Pro Gly 20 <210> 412 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 412 Leu Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Gln Pro Gly Gln 20 <210> 413 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 413 Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1 5 10 15 Pro Gly Gln Gly 20 <210> 414 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 414 His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro 1 5 10 15 Gly Gln Gly Pro 20 <210> 415 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 415 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gln Gly Pro Ala 20 <210> 416 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 416 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln 1 5 10 15 Gly Pro Ala Glu 20 <210> 417 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 417 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly 1 5 10 15 Pro Ala Glu Pro 20 <210> 418 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 418 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro 1 5 10 15 Ala Glu Pro Ser 20 <210> 419 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 419 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala 1 5 10 15 Glu Pro Ser Gln 20 <210> 420 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 420 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu 1 5 10 15 Pro Ser Gln Pro 20 <210> 421 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 421 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro 1 5 10 15 Ser Gln Pro Ser 20 <210> 422 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 422 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser 1 5 10 15 Gln Pro Ser Gly 20 <210> 423 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 423 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln 1 5 10 15 Pro Ser Gly Pro 20 <210> 424 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 424 Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro 1 5 10 15 Ser Gly Pro Ala 20 <210> 425 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 425 Gln Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser 1 5 10 15 Gly Pro Ala Val 20 <210> 426 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 426 Gln Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly 1 5 10 15 Pro Ala Val Ala 20 <210> 427 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 427 Gln Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro 1 5 10 15 Ala Val Ala Ser 20 <210> 428 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 428 Gln Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala 1 5 10 15 Val Ala Ser Leu 20 <210> 429 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 429 Pro Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val 1 5 10 15 Ala Ser Leu Glu 20 <210> 430 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 430 Gly Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala 1 5 10 15 Ser Leu Glu Pro 20 <210> 431 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 431 Gln Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser 1 5 10 15 Leu Glu Pro Pro 20 <210> 432 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 432 Gly Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu 1 5 10 15 Glu Pro Pro Val 20 <210> 433 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 433 Pro Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu 1 5 10 15 Pro Pro Val Lys 20 <210> 434 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 434 Ala Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro 1 5 10 15 Pro Val Lys Leu 20 <210> 435 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 435 Glu Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro 1 5 10 15 Val Lys Leu Lys 20 <210> 436 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 436 Pro Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val 1 5 10 15 Lys Leu Lys Glu 20 <210> 437 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 437 Ser Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys 1 5 10 15 Leu Lys Glu Leu 20 <210> 438 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 438 Gln Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu 1 5 10 15 Lys Glu Leu His 20 <210> 439 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 439 Pro Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys 1 5 10 15 Glu Leu His Phe 20 <210> 440 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 440 Ser Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu 1 5 10 15 Leu His Phe Ser 20 <210> 441 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 441 Gly Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu 1 5 10 15 His Phe Ser Asn 20 <210> 442 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 442 Pro Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His 1 5 10 15 Phe Ser Asn Met 20 <210> 443 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 443 Ala Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe 1 5 10 15 Ser Asn Met Lys 20 <210> 444 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 444 Val Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser 1 5 10 15 Asn Met Lys Thr 20 <210> 445 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 445 Ala Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn 1 5 10 15 Met Lys Thr Val 20 <210> 446 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 446 Ser Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met 1 5 10 15 Lys Thr Val Asp 20 <210> 447 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 447 Leu Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys 1 5 10 15 Thr Val Asp Cys 20 <210> 448 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 448 Glu Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr 1 5 10 15 Val Asp Cys Val 20 <210> 449 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 449 Pro Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val 1 5 10 15 Asp Cys Val Glu 20 <210> 450 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 450 Pro Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp 1 5 10 15 Cys Val Glu Arg 20 <210> 451 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 451 Val Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys 1 5 10 15 Val Glu Arg Lys 20 <210> 452 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 452 Lys Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val 1 5 10 15 Glu Arg Lys Gly 20 <210> 453 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 453 Leu Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu 1 5 10 15 Arg Lys Gly Lys 20 <210> 454 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 454 Lys Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg 1 5 10 15 Lys Gly Lys Tyr 20 <210> 455 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 455 Glu Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys 1 5 10 15 Gly Lys Tyr Met 20 <210> 456 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 456 Leu His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly 1 5 10 15 Lys Tyr Met Tyr 20 <210> 457 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 457 His Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys 1 5 10 15 Tyr Met Tyr Phe 20 <210> 458 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 458 Phe Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr 1 5 10 15 Met Tyr Phe Thr 20 <210> 459 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 459 Ser Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met 1 5 10 15 Tyr Phe Thr Val 20 <210> 460 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 460 Asn Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr 1 5 10 15 Phe Thr Val Val 20 <210> 461 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 461 Met Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe 1 5 10 15 Thr Val Val Met 20 <210> 462 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 462 Lys Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr 1 5 10 15 Val Val Met Ala 20 <210> 463 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 463 Thr Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val 1 5 10 15 Val Met Ala Glu 20 <210> 464 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 464 Val Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val 1 5 10 15 Met Ala Glu Gly 20 <210> 465 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 465 Asp Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met 1 5 10 15 Ala Glu Gly Lys 20 <210> 466 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 466 Cys Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala 1 5 10 15 Glu Gly Lys Glu 20 <210> 467 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 467 Val Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu 1 5 10 15 Gly Lys Glu Ile 20 <210> 468 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 468 Glu Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly 1 5 10 15 Lys Glu Ile Asp 20 <210> 469 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 469 Arg Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys 1 5 10 15 Glu Ile Asp Phe 20 <210> 470 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 470 Lys Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu 1 5 10 15 Ile Asp Phe Arg 20 <210> 471 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 471 Gly Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile 1 5 10 15 Asp Phe Arg Cys 20 <210> 472 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 472 Lys Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp 1 5 10 15 Phe Arg Cys Pro 20 <210> 473 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 473 Tyr Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe 1 5 10 15 Arg Cys Pro Gln 20 <210> 474 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 474 Met Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg 1 5 10 15 Cys Pro Gln Asp 20 <210> 475 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 475 Tyr Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys 1 5 10 15 Pro Gln Asp Gln 20 <210> 476 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 476 Phe Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro 1 5 10 15 Gln Asp Gln Gly 20 <210> 477 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 477 Thr Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln 1 5 10 15 Asp Gln Gly Trp 20 <210> 478 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 478 Val Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp 1 5 10 15 Gln Gly Trp Asn 20 <210> 479 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 479 Val Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln 1 5 10 15 Gly Trp Asn Ala 20 <210> 480 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 480 Met Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly 1 5 10 15 Trp Asn Ala Glu 20 <210> 481 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 481 Ala Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp 1 5 10 15 Asn Ala Glu Ile 20 <210> 482 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 482 Glu Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn 1 5 10 15 Ala Glu Ile Thr 20 <210> 483 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 483 Gly Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala 1 5 10 15 Glu Ile Thr Leu 20 <210> 484 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 484 Lys Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu 1 5 10 15 Ile Thr Leu Gln 20 <210> 485 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 485 Glu Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu Ile 1 5 10 15 Thr Leu Gln Met 20 <210> 486 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 486 Ile Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu Ile Thr 1 5 10 15 Leu Gln Met Val 20 <210> 487 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 487 Asp Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu Ile Thr Leu 1 5 10 15 Gln Met Val Gln 20 <210> 488 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 488 Phe Arg Cys Pro Gln Asp Gln Gly Trp Asn Ala Glu Ile Thr Leu Gln 1 5 10 15 Met Val Gln Tyr 20

Claims (45)

  1. (i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
    (ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는, 비만 세포 활성화를 조절하는 펩티드.
  2. 제 1항에 있어서, 서열 번호 7에 나타낸 아미노산을 포함하는 펩티드.
  3. 제 1항에 있어서, 서열 번호 8 또는 서열 번호 14-273 중 어느 하나에 나타낸 아미노산을 포함하는 펩티드.
  4. 제 1항에 있어서, 서열 번호 11 또는 서열 번호 12에 나타낸 아미노산을 포함하는 펩티드.
  5. 제 1항에 있어서, 서열 번호 10 또는 서열 번호 274-488 중 어느 하나에 나타낸 아미노산을 포함하는 펩티드.
  6. (i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
    (ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
    (iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
    (iv) 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 비만 세포 활성화의 억제 또는 예방 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 비만 세포 활성화가 IgE-매개인 방법.
  8. 제 6항에 있어서, 비만 세포 활성화가 비 IgE-매개인 방법.
  9. (i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
    (ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
    (iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
    (iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법.
  10. 제 9항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 비만 세포 활성화를 포함하는 방법.
  11. 제 9항 또는 제 10항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 염증성 반응을 포함하는 방법.
  12. 제 9항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 호흡기 질환 또는 장애가 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)로 이루이진 군으로부터 선택되는 방법.
  14. (i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
    (ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
    (iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
    (iv) 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 면역 반응 조절 방법.
  15. 제 6항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 NEDD9인 방법.
  16. 제 6항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 PHLDA1인 방법.
  17. (i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
    (ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 비만 세포 활성화의 억제 또는 예방 방법.
  18. (i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
    (ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법.
  19. 제 18항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 비만 세포 활성화를 포함하는 방법.
  20. 제 18항 또는 제 19항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 염증성 반응을 포함하는 방법.
  21. 제 18항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 장애로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  22. 제 21항에 있어서, 호흡기 질환 또는 장애가 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  23. (i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
    (ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상의 면역 반응의 조절 방법.
  24. 제 17항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  25. 제 17항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  26. 제 17항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  27. 제 17항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  28. 비만 세포 수용체에 대한
    (i) NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인
    (ii) PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 어느 하나의 결합을 억제하는 것을 포함하는 비만 세포 활성화의 억제 방법.
  29. 비만 세포 수용체에 대한
    (i) NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인
    (ii) PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 어느 하나의 결합을 억제하는 것을 포함하는 대상의 과민성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 방법.
  30. 제 28항 또는 제 29항에 있어서, 억제가 NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인 또는 PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  31. 제 30항에 있어서, NEDD9 단백질 Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 펩티드가 서열 번호 7 또는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  32. 제 30항에 있어서, PHLDA1 단백질 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인의 적어도 한 부분에 상응하는 펩티드가 서열 번호 10, 서열 번호 11 및 서열 번호 12로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  33. 과민성 질환 또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한,
    (i) Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인,
    (ii) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인,
    (iii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인,
    (iv) 청구 범위 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 용도.
  34. 제 33항에 있어서, 단백질이 NEDD9인 용도.
  35. 제 33항에 있어서, 단백질이 PHLDA1인 용도.
  36. 과민성 질환 또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한
    (i) Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는
    (ii) 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 한 부분에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 용도.
  37. 펩티드가 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 11 및 서열 번호 12로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 용도.
  38. 제 33항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 과민성 질환 또는 장애가 아나필락시스, 약물 반응, 피부 알레르기, 습진, 알레르기성 비염, 두드러기, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉 알레르기, 음식 알레르기, 알레르기성 결막염, 곤충 독 알레르기 및 호흡기 질환 및 장애로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
  39. 제 38항에 있어서, 호흡기 질환 또는 장애가 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 직업성 천식, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 및 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
  40. (a) 후보 제제와 단백질의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 후보 제제를 단백질과 접촉시키고,
    (b) 단백질의 활성을 분석하는 것을 포함하는,
    Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 활성을 조절하는 제제를 식별하는 방법.
  41. (a) 후보 제제와 단백질의 상호작용을 허용하기에 적합한 조건 하에서 다수의 후보 제제를 단백질과 접촉시키고,
    (b) 단백질의 활성을 분석하는 것을 포함하는,
    Src 호몰로지 2 (SH2) 도메인, Src 호몰로지 3 (SH3) 도메인, 또는 플렉스트린 호몰로지 (PH) 도메인 중 적어도 하나를 포함하는 단백질의 활성을 조절하는 제제를 식별하기 위하여 다수의 후보 제제를 스크리닝하는 방법.
  42. 제 40항 또는 제 41항에 있어서, 단백질이 NEDD9 또는 PHLDA1인 방법.
  43. 제 40항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질의 활성을 분석하는 것은 비만 세포 활성화의 수준을 측정하는 것을 포함하는 방법.
  44. 제 40항 내지 제 43항 중 어느 한 항에 있어서, 후보 제제가 단백질 작용제인 방법.
  45. 제 40항 내지 제 43항 중 어느 한 항에 있어서, 후보 제제가 단백질 작용제인 방법.
KR1020107006255A 2007-08-24 2008-08-25 과민성 반응의 조절자 KR20100080769A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2007904591A AU2007904591A0 (en) 2007-08-24 Treatment and prevention of hypersensitivity reactions
AU2007904591 2007-08-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20100080769A true KR20100080769A (ko) 2010-07-12

Family

ID=40386555

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020107006255A KR20100080769A (ko) 2007-08-24 2008-08-25 과민성 반응의 조절자

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20100233199A1 (ko)
EP (1) EP2195332A4 (ko)
JP (1) JP2010537952A (ko)
KR (1) KR20100080769A (ko)
CN (1) CN101835799A (ko)
AU (1) AU2008291682B2 (ko)
CA (1) CA2697413A1 (ko)
NZ (1) NZ583429A (ko)
WO (1) WO2009026622A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9353165B2 (en) * 2012-07-25 2016-05-31 Grifols, S.A. Purification of cell culture derived alpha1 protease inhibitor
EP3118216A1 (en) 2015-07-16 2017-01-18 Nuritas Limited Cellular growth and proliferation promoting peptides, and uses thereof
BR112018000660A2 (pt) * 2015-07-16 2019-05-14 Nuritas Limited peptídeos anti-inflamatórios e seu uso
CN105907760A (zh) * 2016-05-31 2016-08-31 东北师范大学 靶向沉默TKS4的shRNA

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4946773A (en) * 1985-12-23 1990-08-07 President And Fellows Of Harvard College Detection of base pair mismatches using RNAase A
AU2159895A (en) * 1994-03-11 1995-09-25 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Methods and materials for identifying inhibitors of molecular interactions mediated by sh3 domains
WO2003068808A1 (en) * 2002-02-13 2003-08-21 Garvan Institute Of Medical Research Novel protein complexes and uses therefor
US20070248588A1 (en) * 2002-09-11 2007-10-25 Genetech, Inc. Novel Compositions and Methods for the Treatment of Immune-Related Diseases
AU2003291625B2 (en) * 2002-09-16 2009-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
EP1578367A4 (en) * 2002-11-01 2012-05-02 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF IMMUNE DISEASES
JP2005139164A (ja) * 2003-11-10 2005-06-02 Toudai Tlo Ltd 神経障害及び神経変性疾患を治療するための薬学的組成物
US20070110760A1 (en) * 2005-01-14 2007-05-17 Monroe John G Methods and compositions targeting viral and cellular ITAM motifs, and use of same in identifying compounds with therapeutic activity
US20070212700A1 (en) * 2005-09-07 2007-09-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods of using and analyzing biological sequence data

Also Published As

Publication number Publication date
NZ583429A (en) 2012-08-31
US20100233199A1 (en) 2010-09-16
CA2697413A1 (en) 2009-03-05
JP2010537952A (ja) 2010-12-09
WO2009026622A1 (en) 2009-03-05
EP2195332A1 (en) 2010-06-16
EP2195332A4 (en) 2013-03-06
AU2008291682B2 (en) 2012-09-13
AU2008291682A1 (en) 2009-03-05
CN101835799A (zh) 2010-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1817337B1 (en) Therapeutic peptides comprising sequences derived from cdr2 or cdr3 of trem-1 and uses thereof to inhibit sepsis
KR101224659B1 (ko) 면역 관련 질환의 치료를 위한 신규 조성물 및 방법
US7629453B2 (en) NF-κB activating gene
KR20040018370A (ko) Ｈｍｇ 단편의 항염증제로서의 용도
US20220193193A1 (en) Methods for identification, assessment, prevention, and treatment of metabolic disorders using slit2
KR20170031668A (ko) 면역 조절을 위한 방법 및 조성물
AU2014296288A1 (en) Compositions and methods for modulating thermogenesis using PTH-related and EGF-related molecules
Mu et al. IL-2 signaling couples the MAPK and mTORC1 axes to promote T cell proliferation and differentiation in teleosts
KR20100080769A (ko) 과민성 반응의 조절자
US20040167066A1 (en) Cleavage and polyadenylation complex of precursor mrna
EP3094726B1 (en) Biological materials and therapeutic uses thereof
JP2002526099A (ja) Ｎｌｋ１−相互作用タンパク質
JP2008538501A (ja) ベシキュリン
AU2005211556A1 (en) Method Of Modulation
JP2009523412A (ja) カテコールアミン調節性タンパク質
NZ552065A (en) Peptides derived from the TREM-1 protein that act as antagonists of the TREM-1 protein and have applications in the treatment of sepsis and septic shock
US20150274794A1 (en) Chaperonin 10 variants
US20060264610A1 (en) Protein complexes of the tip60 transcriptional activator protein
KR101572314B1 (ko) March5 발현 억제제를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학 조성물 및 이의 스크리닝 방법
AU2010305328B8 (en) Chaperonin 10 variants
WO2008012932A1 (fr) Réducteur de la résistance à l&#39;insuline

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid