JP2002526099A - Ｎｌｋ１−相互作用タンパク質 - Google Patents

Ｎｌｋ１−相互作用タンパク質

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ヴィンセント ピー． シュルツ，
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キュラジェン コーポレイション
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Abstract

(57)【要約】 ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質と相互作用することが同定されたタンパク質（ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）との複合体を開示する。ＮｌＫ１相互作用タンパク質としては、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ならびにＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４およびＩＰ−５と命名された新規に記載のタンパク質が挙げられる。これらのタンパク質の誘導体、フラグメント、アナログ、およびホモログもまた記載する。種々の疾患および障害（特に、新形成、神経変性疾患、肥大型心筋症、ウイルス感染ならびに代謝疾患および障害）の処置および／または予防における効力について、これらの複合体をスクリーニングする方法もまた、開示する。

Description

【発明の詳細な説明】
（助成金の支援） 本発明は、国立標準技術研究所によって授与された支援番号７０ＮＡＮＢ５Ｈ
１０６６のもとで合衆国政府の支持とともになされた。合衆国政府は、本発明に
特定の権利を有する。
【０００１】 （関連出願） 本出願は、１９９８年１０月６日に出願された、米国特許出願番号第０９／１
６７，２０６号に対する優先権を主張する。この出願のないようは、その全体が
本明細書中に援用される。
【０００２】 （発明の分野） 開示される本発明はポリペプチドおよびこれをコードする核酸に関する。特に
、本発明は、ＮｌＫ１タンパク質と相互作用するポリペプチドおよびＮｌＫ１タ
ンパク質の他のものとのこれらのポリペプチド複合体をコードする核酸に関する
。
【０００３】 （発明の背景） ＮＩＫ１タンパク質は（Ｎｅｋ２タンパク質とも称される）は、糸状真菌Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ有糸分裂モジュレーターであるＮＩＭＡ
キナーゼのヒトホモログである。ＮｌＫ１タンパク質は、４８Ｋｄａｌのセリン
／スレオニン特異的キナーゼであり、そして有糸分裂の開始をもたらす細胞周期
事象において重要な役割を果たすと考えられる。
【０００４】 ＮｌＫ１タンパク質は、細胞周期の特定の段階（ｓｔａｇｅ）の間に発現され
る；有糸分裂（Ｍ）期の間および初期ギャップ期（Ｇ１）における発現レベルは
低く、そして発現は、ＤＮＡ合成（Ｓ）および後期ギャップ期（Ｇ２）の間にピ
ークとなって、後期Ｇ２およびＭ期においてプラトーに達する。局在化研究は、
ＮｌＫ１が中心体（これは、細胞の微小管組織化中心である）のコア成分である
ことを示し、そして機能的アプローチはＧ２／Ｍ移行での中心体分離におけるＮ
ｌＫ１について可能な役割を示唆する。
【０００５】 ＮｌＫ１タンパク質は、ＮＩＭＡキナーゼといくつかの機能を共有する。ＮＩ
ＭＡキナーゼの活性は、細胞の有糸分裂への進行に必須であると報告され、そし
てＮＩＭＡキナーゼの完全な活性化は、サイクリン依存性キナーゼであるＣＤＣ
２に依存すると考えられる。ＮＩＭＡキナーゼおよびＣＤＣ２キナーゼの両方は
、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓにおけるＧ２から有糸分裂までの進行に必要であるこ
とが実証されている。この細胞周期の進行の後、両方キナーゼは、迅速に分解す
る。近年の実験的証拠は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ＮＩＭＡセリン／スレオニ
ンキナーゼが、ＣＤＣ２と共同して、有糸分裂に必要なだけではなく、クロマチ
ン縮合に関与することが実証された。さらに、ＮｌＫ１タンパク質はまた、例え
ば、染色体縮合を含む、減数分裂の他の事象に関与し得る。
【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、一部、ＮｌＫ１タンパク質と相互作用するタンパク質の発見、およ
びこれらのタンパク質を含む複合体の発見に基づく。本明細書中に記載されるＮ
ｌＫ１相互作用タンパク質としては、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α
、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１
、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５が挙げられる。ＩＰ
−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５タンパク質をコードする遺
伝子は、以前には記載されていない。
【０００７】 これらのタンパク質複合体、およびそこに含まれるタンパク質は、様々な病理
学的プロセスのための処置の様式およびアッセイの開発に有用であり、このプロ
セスには、過剰増殖性障害（例えば、腫瘍形成および腫瘍進行）ならびに他の関
連遺伝障害が挙げられるがこれらに限定されない。
【０００８】 本明細書中に開示されるのは、ＮｌＫ１タンパク質から構成されるタンパク質
複合体およびこのＮｌＫ１タンパク質と相互作用する（すなわち、結合する）様
々な他のタンパク質の産生のための、組成物および方法である。ＮｌＫ１との複
合体を形成することが実証されているタンパク質は、本明細書中以後、ＮｌＫ１
タンパク質相互作用タンパク質については、「ＮＩＩＫ１タンパク質−ＩＰ」と
称する；一方ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの複合体は、本
明細書中以後、「ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ」と称する。
【０００９】 より詳細には、本発明は、ＮｌＫ１タンパク質、ならびにその誘導体、フラグ
メント、およびアナログの、以下の細胞性タンパク質との複合体に関する：（ｉ
）ＴｒｋＡ；（ｉｉ）タンパク質ホスファターゼ１α；（ｉｉｉ）１４−３−３
ε；（ｉｖ）α−トロポミオシン；（ｖ）ビメンチン；（ｖｉ）ｐ００７１；（
ｖｉｉ）Ｉｎｉ−１；（ｖｉｉｉ）ＩＰ−１；（ｉｘ）ＩＰ−２；（ｘ）ＩＰ−
３；（ｘｉ）ＩＰ−４および（ｘｉｉ）ＩＰ−５、ならびにそれらの誘導体、ア
ナログ、およびフラグメント。
【００１０】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、ならびにこれらの前
述のタンパク質およびタンパク質複合体の誘導体およびアナログの（例えば、組
換え手段による）産生方法もまた、本明細書中に開示される。ＮｌＫ１タンパク
質：ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐ複合体、ならびにそれらの誘導体、フラグメントおよびアナログに関する様々
な薬学的組成物もまた、本発明によって開示される。
【００１１】 本発明はさらに、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、特
に以下の複合体：ＮｌＫ１タンパク質・ＴｒｋＡ；ＮｌＫ１タンパク質・α−ト
ロポミオシン；ＮｌＫ１タンパク質・ビメンチン；ＮｌＫ１タンパク質・ｐ００
７１；ＮｌＫ１タンパク質・タンパク質ホスファターゼ１α；ＮｌＫ１タンパク
質・１４−３−３ε；ＮｌＫ１タンパク質・Ｉｎｉ−１；ＮｌＫ１タンパク質・
ＩＰ−１；ＮｌＫ１タンパク質・ＩＰ−２；ＮｌＫ１タンパク質・ＩＰ−３；Ｎ
ｌＫ１タンパク質・ＩＰ−４およびＮｌＫ１タンパク質・ＩＰ−５、の活性の調
節（すなわち、阻害または増強）のための方法論を提供する。これらの前述の複
合体のタンパク質成分は、多くの細胞性および生理学的プロセスの多血症に関与
し、これらのプロセスとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：（
ｉ）細胞周期進行の制御；（ｉｉ）細胞分化およびアポトーシス；（ｉｉｉ）転
写の調節；（ｉｖ）細胞内シグナル伝達系の制御ならびに（ｖ）過剰増殖性障害
（例えば、腫瘍形成および腫瘍進行）；神経変性性障害；心臓血管疾患；代謝性
疾患およびウイルス感染を含むがこれらに限定されない病理学的プロセス。
【００１２】 従って、本発明は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、
特にＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−
３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−
１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５、ならびにその誘導体、フラ
グメントおよびアナログとの複合体の、細胞機能、特に、ＮｌＫ１タンパク質お
よび／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰが関与する細胞機能（細胞周期進行の制
御；細胞分化およびアポトーシス；転写の調節；細胞内シグナル伝達系の制御；
ならびに過剰増殖性障害（例えば、腫瘍形成および腫瘍進行）；神経変性性障害
；心臓血管疾患；代謝性疾患およびウイルス感染を含むがこれらに限定されない
病理学的プロセスを含むがこれらに限定されない）を調節または変更する能力に
ついての、スクリーニングのための方法論が提供される。
【００１３】 本発明はさらに、治療的および予防的、ならびに診断的、予後的およびスクリ
ーニングの方法論および薬学的組成物に関し、これらはＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体（およびこの複合体に関与する個々のタンパク質
構成要素をコードする核酸）に基づく。本発明の治療用化合物としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１−
ＩＰ複合体、およびこの複合体の一方または両方のメンバーが、ＮｌＫ１タンパ
ク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメントまたはアナログで
ある複合体；（ｉｉ）前述のものに対する抗体、および前述のものをコードする
核酸；ならびに（ｉｉｉ）様々なタンパク質複合体成分をコードするヌクレオチ
ド配列に対するアンチセンス核酸。診断用、予後用およびスクリーニング用のキ
ットもまた提供される。
【００１４】 ＮｌＫ１タンパク質：ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰおよびＮｌＫ１タンパク質・
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の活性の様々なモジュレーター（すなわち、ア
ゴニスト、アンタゴニストおよびインヒビター）をスクリーニングする動物モデ
ルおよび方法論もまた、本明細書中に開示される。
【００１５】 ＮｌＫ１タンパク質：ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰおよびＮｌＫ１タンパク質・
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の形成／合成を阻害するか、あるいは増加する
分子の同定のための方法論もまた、本発明によって提供される。
【００１６】 表１：改変型酵母ツーハイブリッドアッセイ系スクリーニングに見出される全
てのＮｌＫ１タンパク質相互作用物（ｉｎｔｅｒａｃｔａｎｔ）（ＮｌＫ１タン
パク質−ＩＰ）の概説。縦列１において、ＮｌＫ１タンパク質相互作用物（Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ）およびそのＧｅｎＢａｎｋ登録番号（利用可能であれば
）が列挙される。縦列２において、（推定）機能および示唆される有用性の簡単
な説明が提供される。縦列３において、発現される配列の場合におけるヌクレオ
チドの総数とともに、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が始まり（開始
）として終了（停止）するヌクレオチドが示される。縦列４において、相互作用
ドメインの第１のヌクレオチド（「開始」）が与えられる。縦列５において、ツ
ーハイブリッドスクリーニングにおいてＮｌＫ１タンパク質と相互作用すること
が見出された、対応するフラグメントについて得られる単離体の数が示される。
縦列６は、それぞれのタンパク質のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を
示す。縦列７は、特定の配列番号を参照する；そして最後に、縦列８は、対応す
る配列のアセンブリに利用された、発現された配列を例示する。
【００１７】 （発明の詳細な説明） 本発明は、改善された改変型形態の酵母ツーハイブリッド系を用いて、ＮｌＫ
１タンパク質（本明細書中以後、「ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ」と称する）と相
互作用することが示されたタンパク質の同定に基づく。以下のタンパク質（Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ）は、生理学的条件下で以下のＮｌＫ１タンパク質と複合
体を形成することが見出された：（ｉ）ＴｒｋＡ；（ｉｉ）タンパク質ホスファ
ターゼ１α；（ｉｉｉ）１４−３−３ε；（ｉｖ）α−トロポミオシン；（ｖ）
ビメンチン；（ｖｉ）ｐ００７１；（ｖｉｉ）Ｉｎｉ−１；（ｖｉｉｉ）ＩＰ−
１；（ｉｘ）ＩＰ−２；（ｘ）ＩＰ−３；（ｘｉ）ＩＰ−４および（ｘｉｉ）Ｉ
Ｐ−５。ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとのＮｌＫ１タンパク質の複合体は、本明細
書中以後、「ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ」複合体と称され
る。ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体は、ＮＩＫ１タンパ
ク質とその結合パートナー（ＮＩＫ１タンｓパク質−ＩＰ）の機能的活性の調節
に関与する。このような機能的活性としては、以下が挙げられるが、これらに限
定されない：（ｉ）細胞周期進行（例えば、細胞分化およびアポトーシス）の制
御；（ｉｉ）転写の調節；（ｉｉｉ）細胞内シグナル伝達系の制御ならびに；（
ｉｖ）過剰増殖性障害（例えば、腫瘍形成および腫瘍進行）；神経変性性障害；
心臓血管疾患；代謝性疾患およびウイルス感染を含むがこれらに限定されない病
理学的プロセス。
【００１８】 本発明は、改善された改変型形態の酵母ツーハイブリッド系の利用を通じて、
ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５ヌクレオチド配列によ
ってコードされる新規なタンパク質を同定した。従って、本発明はさらに、ヌク
レオチド配列ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５（好まし
くは、ヒトＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５遺伝子）、
および他の種のホモログ、ならびにその誘導体、フラグメントおよびアナログに
関する。前述の配列の前述のヌクレオチド配列にハイブリダイズし得るか、また
は相補的な核酸（例えば、逆相補体）もまた提供される。より詳細には、本発明
は、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５ヌクレオチド配列
の少なくとも５、１０または２５ヌクレオチド領域を含むか、それにハイブリダ
イズ可能であるか（例えば、逆相補体）、またはそれに相補的な核酸を開示する
。
【００１９】 本発明はまた、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５誘導
体、フラグメントおよびアナログに関し、これらは、機能的に活性である（すな
わち、野生型ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５タンパク
質の１つ以上の既知の機能的活性を提示し得る）。このような機能的活性として
は、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）ＮｌＫ１タンパク質と
結合する能力、またはＮｌＫ１タンパク質との結合に競合する能力；（ｉｉ）抗
原性（それぞれ、抗ＩＰ−１、抗ＩＰ−２、抗ＩＰ−３、抗ＩＰ−４または抗Ｉ
Ｐ−５抗体への結合のためのＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩ
Ｐ−５を結合する能力、あるいはＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４また
はＩＰ−５との結合に競合する能力）；ならびに（ｉｉｉ）免疫原性（それぞれ
、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５を結合する抗体を生
成する能力）。
【００２０】 本発明はさらに、ＮｌＫ１タンパク質と相互作用する（例えば、それに結合す
る）タンパク質をスクリーニングする方法論を開示する。本発明はまた、ＮｌＫ
１タンパク質複合体、特に以下のタンパク質の１つと複合体化されるＮｌＫ１タ
ンパク質に関する：ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε
、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ
−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５。本発明はさらに、ＮｌＫ１タンパ
ク質、またはＮｌＫ１タンパク質の誘導体、アナログおよびフラグメントの、Ｔ
ｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン
、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ
−４もしくはＩＰ−５、またはその誘導体、アナログおよびフラグメントとの複
合体を開示する。好ましい実施態様において、このような複合体は、抗ＮｌＫ１
タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体を結合する。別の特定の実施
態様において、ヒトＮｌＫ１タンパク質のヒトタンパク質との複合体が開示され
る。
【００２１】 本発明はまた、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の産生
および／または単離のための方法論を提供する。特定の実施態様において、本発
明は、組換えＤＮＡ技術を使用してＮｌＫ１タンパク質およびその結合パートナ
ー（ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）の両方、あるいは複合体の一方または両方のメ
ンバーのフラグメント、誘導体もしくはホモログを発現させる方法論を提供する
；ここで、両方の結合パートナーのいずれかが、１つの異種プロモーター（すな
わち、特定の複合体成分をコードするネイティブな遺伝子と天然には結合しない
プロモーター）の制御下にあるか、または各々が別々の異種プロモーターの制御
下にある。
【００２２】 異常なレベルのＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体と関連
する疾患および障害についての診断、予後およびスクリーニングの方法論が開示
される。本発明はまた、異常なレベルのＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰ複合体、あるいはＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの１
つ以上の成分の異常なレベルもしくは活性と関連する疾患または障害の、ＮｌＫ
１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、またはＮｌＫ１タンパク質・
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の形成または活性のモジュレーター（例えば、
ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を結合する抗体）、また
は非複合体化ＮｌＫ１タンパク質、またはその結合パートナー（ＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰ）、あるいはそれらのフラグメントの投与による、処置および予防の
ための方法論を提供する。好ましくは、前述のフラグメントは、以下を含む：（
ｉ）複合体形成に直接関与する、ＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰの部分；（ｉｉ）結合親和性を増加または減少する、ＮｌＫ１タンパク質
またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの変異体；（ｉｉｉ）複合体形成の低分子イン
ヒビター／エンハンサー；（ｉｖ）複合体を安定化させるかまたは中和化するか
のいずれかである抗体、など。
【００２３】 治療剤または診断剤としての生物学的活性について、ＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体をアッセイする方法論、ならびにＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体もしくはそのモジュレーター（すなわち
、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト）をスクリーニングする方法
もまた、本明細書中に開示される。
【００２４】 開示および実施可能要件の明確さのため（そして限定のためでない）に、本発
明の詳細な説明は、以下を部分節に分割される。
【００２５】 （（１）ＮｌＫ１タンパク質、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰおよびＮｌＫ１タン
パク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体） 本発明は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、および特
定の局面において、ＮｌＫ１タンパク質の以下との複合体を開示する：ＴｒｋＡ
、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメ
ンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、
またはＩＰ−５。好ましい実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タ
ンパク質−ＩＰ複合体は、ヒトタンパク質の複合体である。本発明はまた、以下
に関する：；（ｉ）ＮｌＫ１タンパク質の誘導体、フラグメントおよびアナログ
の、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの複合体；（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質の、Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメントおよびアナログとの複合体；な
らびに（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質の誘導体、フラグメントおよびアナログの
、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの複合体。本明細書中で使用される場合、ＮｌＫ
１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体のフラグメント、誘導体または
アナログは、この複合体の１つまたは両方メンバーが、野生型ＮｌＫ１タンパク
質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのフラグメント、誘導体またはアナログであ
る複合体を含む。
【００２６】 好ましくは、本発明において開示されるように、複合体の一方または両方のメ
ンバーが野生型タンパク質のフラグメント、誘導体またはアナログであるＮｌＫ
１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体は、機能的に活性なＮｌＫ１タ
ンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体である。特定の局面において、Ｎｌ
Ｋ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの、ネイティブタンパ
ク質、誘導体またはアナログは、動物（例えば、マウス、ラット、ブタ、ウシ、
イヌ、サル、カエル）；昆虫（例えば、ハエ）；植物、または最も好ましくはヒ
トのものである。本明細書において利用される場合、用語「機能的に活性なＮｌ
Ｋ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体」とは、全長ＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰ（例えば、Ｔｒｋ、プロテインホスファターゼ１α、１４−３−３ε
、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ
−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、およびＩＰ−５）と複合体化した全長ＮｌＫ１タン
パク質の、以下を含むがこれらに限定されない細胞プロセスおよび生理学的プロ
セスの制御を含むがこれらに限定されない１つ以上の公知の機能を示す種をいう
：（ｉ）細胞周期進行（例えば、細胞分化およびアポトーシス）の制御；（ｉｉ
）転写の調節；（ｉｉｉ）細胞内シグナル伝達の制御および（ｖ）過剰増殖障害
（例えば、腫瘍形成および腫瘍進行）；神経変性性疾患；心血管疾患；代謝疾患
およびウイルス感染を含むがこれに限定されない生理学的プロセス。
【００２７】 一致して、本発明は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体
、特にＴｒｋＡ、プロテインホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポ
ミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−
３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５、ならびにその誘導体、フラグメントおよびアナ
ログとのＮｌＫ１タンパク質との複合体を、細胞機能、特に、ＮｌＫ１タンパク
質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰが関連する機能を変更および／また
は調節する能力についてスクリーニングする方法論を提供する。これらの機能と
しては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：細胞周期進行の制御；転写
の調節；細胞内シグナル伝達の制御；および病理学プロセス、ならびに種々の他
の生物学的活性（例えば、抗−ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
複合体抗体への結合など）。所望の免疫原性および／または抗原性を有する誘導
体、フラグメントまたはアナログを、免疫アッセイにおいて、免疫化のために、
ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体活性の阻害のためなどに
利用し得る。例えば、目的の所定の性質（例えば、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ複合体の沈殿）を、保持するか、あるいは欠くか、または阻
害する誘導体、フラグメントまたはアナログを、そのような性質およびその生理
学的な関連物の、それぞれインデューサーまたはインヒビターとして利用され得
る。特定の実施態様において、抗ＮｌＫ１タンパク質抗体および／または抗Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ抗体、あるいはそのようなフラグメントが所定のＮｌＫ１
タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体中に含まれる場合にＮｌＫ１タン
パク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体に特異的な抗体によって結合され得る
、ＮｌＫ１タンパク質のフラグメントおよび／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
のフラグメントとのＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体。Ｎ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の誘導体、フラグメントお
よびアナログが、当該分野において公知の手順によって、所望の活性（単数また
は複数）について分析され得る。
【００２８】 本発明の特定の実施態様は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
複合体の種の１つまたは両方のタンパク質種のフラグメントからなるＮｌＫ１タ
ンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を開示する。好ましい実施態様にお
いて、これら上記のフラグメントは、ＴｒｋＡ、プロテインホスファターゼ１α
、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１
、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５（以前に、改善さ
れ、改変された酵母ツーハイブリッドアッセイにおいてＮｌＫ１タンパク質と相
互作用するとして同定されている）のフラグメントからなり得るが、これらに限
定されない。例えば、ＴｒｋＡタンパク質のアミノ酸残基１〜６４１（図２に示
される；配列番号４）；プロテインホスファターゼ１αのアミノ酸残基１、２、
３、７、２２、２３、および４１−３３０（図３に示される；配列番号６）；１
４−３−３εタンパク質のアミノ酸残基７２、７５および１４３−２６３（図４
に示される；配列番号８）；α−トロポミオシンタンパク質のアミノ酸残基１６
１〜３４７（図５に示される；配列番号１０）；ビメンチンタンパク質のアミノ
酸残基１８０〜４６６（図６に示される；配列番号１２）；ｐ００７１タンパク
質のアミノ酸残基１８９、１９０〜１２０８（図７に示される；配列番号１４）
；Ｉｎｉ−１タンパク質のアミノ酸残基７４〜３８５（図８に示される；配列番
号１６）；ＩＰ−１タンパク質の少なくともアミノ酸残基１〜１２２（図９に示
される；配列番号１８）；ＩＰ−２タンパク質の少なくともアミノ酸残基５８〜
３１１（図１０に示される；配列番号２０）；ＩＰ−３タンパク質の少なくとも
アミノ酸残基１５０〜２９１、ユビキチンヒドロラーゼのホモログ（図１１に示
される；配列番号２２）；ＩＰ−４タンパク質の少なくともアミノ酸残基１〜１
０５（図１２に示される；配列番号２４）およびＩＰ−５タンパク質の少なくと
もアミノ酸残基１〜８２（図１３に示される；配列番号２６）。さらに、複合体
のいずれかのメンバーの上記の領域のいくつかまたは全てを欠き得るフラグメン
ト（またはフラグメントを含むタンパク質）、ならびに上記のタンパク質をコー
ドする核酸もまた本明細書において開示される。
【００２９】 本発明はさらに、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５
タンパク質、ならびにその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログおよびパ
ラログに関連する。好ましい実施態様において、ヒトＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ
−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５遺伝子および／あるいはタンパク質が開示され
る。特定の実施態様において、これらの誘導体、フラグメント、アナログ、ホモ
ログまたはパラログが、以下の特性を有する：（ｉ）機能的に活性（すなわち、
全長、野生型ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５に関連
する１つ以上の機能的活性を示し得る；（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質に結合する
能力を有する；（ｉｉｉ）免疫原性または（ｉｖ）抗原性。
【００３０】 ヒトＮｌＫ１タンパク質、ＴｒｋＡ、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ０
０７１、プロテインホスファターゼ１α、１４−３−３ε、およびＩｎｉ−１を
コードするヌクレオチド配列、ならびに対応するアミノ酸配列が公知である（そ
れぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ１１０５０；Ｘ０３５４１；Ｍ６３９６０；
Ｕ２８９３６；Ｍ１９７１３；Ｘ５６１３４；Ｘ８１８８９およびＵ０４８４７
）が、それぞれ図１〜８において提供され、そしてそれぞれ配列番号１〜１６に
おいて同定される。さらに、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、および
ＩＰ−５のヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列が、図９、１０、１１、１
２、および１３においてそれぞれ提供される（それぞれ、配列番号１７〜２６）
。ＴｒｋＡ、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、プロテインホスフ
ァターゼ１α；１４−３−３εおよびＩｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−
３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５をコードする核酸が、当該分野において公知の任
意の方法（例えば、配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プラ
イマーを使用するＰＣＲ増幅によって、および／または所定の遺伝子配列に特異
的なオリゴヌクレオチド配列を使用する、ｃＤＮＡライブラリーもしくはゲノム
ライブラリーからのクローニングによって）によって得られ得る。
【００３１】 ホモログ（すなわち、ヒト以外の種に由来する、上記のタンパク質をコードす
る核酸）または関連する配列（例えば、パラログ）もまた、核酸ハイブリダイゼ
ーションおよびクローニングについて当該分野において周知の方法を使用して、
特定のヒト配列の全部または一部をプローブとして用いる、低ストリンジェンシ
ーな、中程度のストリンジェンシーな、または高ストリンジェンシーなハイブリ
ダイゼーションによって得られ得る。
【００３２】 ＮｌＫ１タンパク質、ＴｒｋＡ、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７
１、プロテインホスファターゼ１α；１４−３−３εおよびＩｎｉ−１、ＩＰ−
１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５タンパク質が、単独または
複合体内でのいずれかで、タンパク質精製および組換えタンパク質発現について
当該分野において周知の方法によって得られ得る。１つ以上のタンパク質の組換
え発現について、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列の全部または一
部を含む核酸が、適切な発現ベクター（すなわち、挿入されたタンパク質コード
配列の転写および翻訳について必須のエレメントを含むベクター）中に挿入され
得る。好ましい実施態様において、調節エレメントは、異種である（すなわち、
ネイティブな遺伝子プロモーターではない）。あるいは、必要な転写シグナルお
よび翻訳シグナルもまた、ＮｌＫ１または任意のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝
子のネイティブなプロモーター、および／あるいはその隣接領域によって供給さ
れ得る。
【００３３】 種々の宿主ベクター系を利用して、タンパク質コード配列を発現し得る。これ
らには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）ワクシニアウイル
ス、アデノウイルスなどによって感染された哺乳動物細胞系；（ｉｉ）バキュロ
ウイルスなどによって感染された昆虫細胞系；（ｉｉｉ）酵母ベクターを含む酵
母、または（ｖ）バクテリオファージ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ，またはコス
ミドＤＮＡによって形質転換された細菌。利用される宿主ベクター系に依存して
、任意の多数の適切な転写エレメントおよび翻訳エレメントが、使用され得る。
【００３４】 本発明の好ましい実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰ複合体が、全ＮｌＫ１タンパク質コード配列およびＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰコード配列を、同一プロモーターまたは２つの別々のプロモーターの制御
下で、同一細胞内で発現することによって得られる。別の実施態様において、Ｎ
ｌＫ１タンパク質の誘導体、フラグメントまたはホモログ、および／あるいはＮ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメントまたはホモログが、組換え発現
される。好ましくは、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−
ＩＰの誘導体、フラグメントまたはホモログは、結合アッセイ（例えば、改変さ
れた酵母ツーハイブリッドシステムアッセイ）によって同定された結合パートナ
ーと複合体形成し、より好ましくは、抗−ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰ複合体抗体と結合する複合体を形成する。
【００３５】 核酸フラグメントのベクターへの挿入に関する関連する参考文献において公知
の任意の方法論を利用して、適切な転写／翻訳制御シグナルおよびタンパク質コ
ード配列を含むキメラ遺伝子を含む発現ベクターを構築し得る。これらの方法論
は、インビトロ組換えＤＮＡ技術および合成技術、ならびにインビボ組換え技術
（例えば、遺伝子組換え）を含み得るが、これらに限定されない。ＮｌＫ１タン
パク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ、あるいはその誘導体、フラグメント、
アナログまたはホモログをコードする核酸配列の発現が、第２の核酸配列によっ
て調節され得、その結果遺伝子またはそのフラグメントが、目的の組換えＤＮＡ
分子を用いて同時に形質転換された宿主において発現する。特定のタンパク質の
発現が、当該分野において公知の、以下の任意のプロモーター／エンハンサーに
よって制御され得るが、これらに限定されない：（ｉ）ＳＶ４０初期プロモータ
ー（例えば、ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、１９８１、Ｎａｔｕｒｅ
２９０：３０４−３１０を参照のこと）；（ｉｉ）ラウス肉腫ウイルスの３’
末端の長い末端反復内に含まれるプロモーター（ＲＳＶ；例えば、Ｙａｍａｍｏ
ｔｏら、１９８０． Ｃｅｌｌ ２２：７８７〜７９７を参照のこと）；（ｉｉ
ｉ）ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター（例えば、Ｗａｇｎｅｒら
、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１
〜１４４５を参照のこと）；（ｉｖ）メタロチオネイン遺伝子の調節配列（例え
ば、Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、１９８２． Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９〜４２を参
照のこと）；（ｖ）原核生物発現ベクター（例えば、β−ラクタマーゼプロモー
ター）（例えば、Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら、１９７８ Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７〜３７３１を参照のこと）；
（ｖｉ）ｔａｃプロモーター（例えば、ＤｅＢｏｅｒら、１９８３、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１〜２５を参照のこと）。
【００３６】 さらに、植物発現ベクター内の植物プロモーター／エンハンサー配列もまた、
利用され得る。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ
）ノパリンシンセターゼプロモーター（例えば、Ｈｅｒｒａｒ−Ｅｓｔｒｅｌｌ
ａら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３０３：２０９〜２１３を参照のこと）；（ｉ
ｉ）カリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ ＲＮＡプロモーター（例えば、Ｇａ
ｒｄｅｒら、１９８１、Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：２８７１を参照の
こと）および（ｉｉｉ）光合成酵素であるリブロースビスホスフェートカルボキ
シラーゼのプロモーター（例えば、Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３１０：１１５〜１２０を参照のこと）。
【００３７】 酵母および他の真菌由来のプロモーター／エンハンサーエレメント（例えば、
Ｇａｌ４プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、ホスホグリ
セロールキナーゼプロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター）、なら
びに組織特異性を有し、そしてトランスジェニック動物において使用されている
以下の動物転写制御領域が、本発明のタンパク質の産生において利用され得る。
動物由来の転写制御配列としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない
：（ｉ）膵臓の腺房細胞内で活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（例えば、Ｓ
ｗｉｆｔら、１９８４、Ｃｅｌｌ ３８：６３９〜６４６；Ｏｒｎｉｔｚら、１
９８６、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉ
ｏｌ．５０：３９９〜４０９を参照のこと）；（ｉｉ）膵臓β細胞内で活性なイ
ンスリン遺伝子制御領域（例えば、Ｈａｎａｈａｎら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ
３１５：１１５〜１２２を参照のこと）；（ｉｉｉ）リンパ球細胞内で活性な
免疫グロブリン遺伝子制御領域（例えば、Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、１９８４、
Ｃｅｌｌ ３８：６４７〜６５８を参照のこと）；（ｉｖ）精巣、胸部、リンパ
球および肥満細胞において活性なマウス乳腺癌ウイルスの制御領域（例えば、Ｌ
ｅｄｅｒら、１９８６、Ｃｅｌｌ ４５：４８５〜４９５を参照のこと）；（ｖ
）肝臓内で活性なアルブミン遺伝子制御領域（例えば、Ｐｉｎｃｋｅｒｔら、１
９８７、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８〜２７６を参照のこと）
；（ｖｉ）肝臓内で活性なα−フェトプロテイン制御領域（例えば、Ｋｒｕｍｌ
ａｕｆら、１９８５、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９〜１６４８を
参照のこと；（Ｈａｍｍｅｒら、１９８７、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３〜５
８）、（ｖｉｉ）肝臓内で活性なα−１アンチトリプシン遺伝子制御領域（例え
ば、Ｋｅｌｓｅｙら、１９８７、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１
〜１７１を参照のこと）；（ｖｉｉｉ）骨髄性細胞内で活性なβ−グロビン遺伝
子制御領域（例えば、Ｍｏｇｒａｍら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３
８〜３４０を参照のこと）；（ｉｘ）脳の稀突起神経膠細胞内で活性なミエリン
塩基性タンパク質（例えば、Ｒｅａｄｈｅａｄら、１９８７、Ｃｅｌｌ ４８：
７０３〜７１２を参照のこと）；（ｘ）骨格筋内で活性なミオシン軽鎖−２遺伝
子制御領域（例えば、Ｓａｎｉら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３〜
２８６）、および（ｘｉ）視床下部内で活性な性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺
伝子制御領域（例えば、Ｍａｓｏｎら、１９８６、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１
３７２〜１３７８）。
【００３８】 本発明の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ（例えば、ＴｒｋＡ、プロテインホスファターゼ１α、１４
−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ
−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５）、あるいはそのフラグ
メント、誘導体またはホモログをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプ
ロモーター、１つ以上の複製起点、ならびに必要に応じて、１つ以上の選択マー
カー（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を含むベクターが利用される。好ましい実
施態様において、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの両方に
作動可能に連結されたプロモーター、１つ以上の複製起点、ならびに必要に応じ
て１つ以上の選択マーカーから構成されるベクターが利用される。
【００３９】 別の特定の実施態様においては、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰのコード配列（またはその部分）を、ともに、または別々に含む発現ベ
クター。発現ベクターは、上記の遺伝子配列を３つの利用可能なｐＧＥＸベクタ
ー（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ発現ベクター；例えば、Ｓｍｉｔｈお
よびＪｏｈｎｓｏｎ、１９８８、Ｇｅｎｅ ７：３１〜４０を参照のこと）の各
々のＥｃｏＲＩ制限部位中にサブクローニングすることによって生成され、正確
な読み枠における産物の発現を可能にする。目的の配列を含む発現ベクターが、
以下の３つの一般的なアプローチによって同定され得る：（ｉ）核酸ハイブリダ
イゼーション；（ｉｉ）「マーカー」遺伝子機能の存在もしくは不存在、および
／または（ｉｉｉ）挿入された配列の発現。第１のアプローチにおいて、ＮｌＫ
１タンパク質、ＴｒｋＡ、プロテインホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α
−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２
、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５（または他のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
）が、目的の挿入配列と相同および相補的な配列を含むプローブを使用する核酸
ハイブリダイゼーションによって検出され得る。第２のアプローチにおいて、組
換えベクター／宿主系を、ベクター中への目的の配列の挿入によって生じる特定
の「マーカー」機能（例えば、ＮｌＫ１タンパク質、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
、またはＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体に対する特異的
な抗体の結合、抗生物質に対する耐性、バキュロウイルス内の封入体形成など）
の存在または不存在に基づいて同定および選択され得る。第３のアプローチにお
いて、組換え発現ベクターを、組換えベクターによる上記のＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰの発現と同時に、ＮｌＫ１タンパク質の発現をアッセイすることによって
、同定され得る。
【００４０】 一旦、組換えＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ分子が同定
され、そして複合体または個々のタンパク質が単離され、そして適切な宿主系お
よび増殖条件が確立されると、組換え発現ベクターが、多量に増殖および増幅さ
れ得る。以前に考察したように、使用され得る発現ベクターまたはその誘導体と
しては、ヒトまたは動物ウイルス（例えば、ワクシニアウイルスまたはアデノウ
イルス）；昆虫ウイルス（例えば、バキュロウイルス）；酵母ベクター；バクテ
リオファージベクター（例えば、λファージ）；プラスミドベクターおよびコス
ミドベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】 次に、目的の挿入配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式において
発現されたタンパク質を改変／プロセシングする宿主細胞株が、選択され得る。
さらに、特定のプロモーターからの発現が、特定のインデューサーの存在下で増
強され得る；従って、遺伝子操作されたＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰの発現の制御を容易にする。さらに、異なる宿主細胞が、
発現されるタンパク質の、翻訳時および翻訳後のプロセシングおよび改変（例え
ば、グリコシル化、リン酸化など）について特徴的および特異的な機構を有する
。従って、適切な細胞株または宿主系が、外来タンパク質の所望の改変およびプ
ロセシングが達成されることを確実にするために選択され得る。例えば、細菌系
内のタンパク質発現を使用して、グリコシル化されていないコアタンパク質を産
生し得る；一方、哺乳動物細胞内での発現は、異種タンパク質の「ネイティブな
」グリコシル化を確実にする。
【００４２】 他の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タ
ンパク質−ＩＰ（または、そのフラグメント、誘導体およびホモログ）が、異な
るタンパク質の異種タンパク質配列とペプチド結合を介して結合されたタンパク
質を含む、融合タンパク質産物またはキメラタンパク質産物として発現され得る
。そのようなキメラ産物は、適切なコードフレームにおいて、所望のアミノ酸を
コードする適切な核酸配列同士の連結、および当該分野において公知の方法によ
る、その後の適切な宿主内でのキメラ産物の発現によって産生され得る。あるい
は、そのようなキメラ産物は、タンパク質合成技術（例えば、ペプチド合成機の
使用による）によって作製され得る。本発明の特定の実施態様は、ＮｌＫ１タン
パク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのフラグメントを含有するキメ
ラタンパク質を開示する。別の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質お
よびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのドメイン（ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タン
パク質−ＩＰ複合体の直接的な形成を生じる）、ならびに、必要に応じて、上記
の２つのタンパク質の連結すること、およびＮｌＫ１タンパク質結合ドメインと
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ結合ドメインとの相互作用の促進することの両方に作
用するヘテロ官能性（ｈｅｔｅｒｏｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）試薬（例えば、ペプ
チドリンカー）を含む融合タンパク質を提供する。これらの融合タンパク質は、
相互作用の安定性（すなわち、分子内相互作用としての複合体形成に起因する安
定性）が所望される場合（例えば、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−
ＩＰ複合体に特異的な抗体の産生において）、特に有用であり得る。
【００４３】 本発明の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰの少なくとも６個の連続するアミノ酸残基からなる、ＮｌＫ
１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのフラグメントからなるか、また
はこれらを含むタンパク質をコードする核酸が、本明細書において提供される。
別の実施態様において、上記のタンパク質フラグメントは、ＮｌＫ１タンパク質
またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの、少なくとも１０、２０、３０、４０、また
は５０アミノ酸残基（好ましくは、３５、１００または２００アミノ酸残基以下
）からなる。ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体また
はアナログとしては、以下の場合において、少なくとも３０％、４０％、５０％
、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のアミノ酸同一性で、種々の
実施態様におけるＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰに対して
実質的に相同である領域を含む分子が挙げられるが、これらに限定されない：（
ｉ）同一のサイズのアミノ酸と比較した場合；（ｉｉ）整列が当該分野において
公知のコンピュータホモロジープログラムによってなされる、整列された配列と
比較した場合、または（ｉｉｉ）そのコード核酸が、ストリンジェント、中程度
にストリンジェント、またはストリンジェントではない条件下でＮｌＫ１タンパ
ク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードする配列にハイブリダイズし得る
場合。
【００４４】 ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ誘導体は、機能
的に等価な分子を生じる、置換、付加または欠失による、その配列の改変によっ
て産生され得る。本発明の特定の実施態様において、ヌクレオチドコード配列の
縮重性は、ＮｌＫ１タンパク質遺伝子またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子と
実質的に同一のアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列の使用を許容する。別
の特定の実施態様において、目的の配列内の１つ以上のアミノ酸が、類似の極性
および正味電荷の別のアミノ酸に置換され得、従って、サイレントな改変を生じ
る。この配列内のアミノ酸置換は、そのアミノ酸が属するクラスの他のメンバー
から選択され得る。本発明のＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐの誘導体およびアナログが、当該分野において公知の種々の方法論によって産
生され得る。例えば、クローニングされたＮｌＫ１タンパク質遺伝子配列および
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子配列が、当該分野において公知の任意の多数の
方法によって改変され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０、Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２
版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ）を参照のこと。これら
の配列が制限エンドヌクレアーゼ（単数または複数）によって適切な部位で消化
され、次にさらに酵素改変され（そのように所望される場合）、そして生じるフ
ラグメントが単離され、そしてインビトロで連結され得る。さらに、ＮｌＫ１タ
ンパク質をコードする核酸またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードする核酸が
、インビトロまたはインビボにおいて変異誘発され得、（ｉ）コード領域におけ
る変化を作製し、（ｉｉ）翻訳開始配列および／または翻訳終結配列を作製およ
び／または破壊し、ならびに／あるいは（ｉｉｉ）新規の制限エンドヌクレアー
ゼ部位を形成するか、または既存の制限エンドヌクレアーゼ部位を破壊し、その
結果インビトロ改変をさらに促進し得る。当該分野において公知の任意の変異誘
発技術が、利用され得る。この技術には、化学的変異誘発およびインビトロ部位
特異的変異誘発（例えば、Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、１９７８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ ２５３：６５５１〜６５５８を参照のこと）（ＴＡＢＪTMリンカー（
Ｐｈａｒｍａｃｉａ）および類似の方法論の使用による）が挙げられるが、これ
らに限定されない。
【００４５】 一旦ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ、あるいは
そのフラグメントまたは誘導体を発現する組換え細胞が同定されると、個々の遺
伝子産物または複合体が、単離および分析され得る。このことは、タンパク質ま
たは複合体の物理的性質および／または機能的性質に基づくアッセイ（産物の放
射能標識、その後のゲル電気泳動、免疫アッセイ、マーカー標識された産物の架
橋、などによる分析を含むがこれらに限定されない）によって達成される。Ｎｌ
Ｋ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体は、当該分野において公知の
標準的な方法（カラムクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティ
ー、ゲル排除、逆相、高圧、ファースト（ｆａｓｔ）タンパク質液体など）、差
示的遠心分離、差示的溶解度、またはタンパク質の精製において使用される類似
の方法論が挙げられるが、これらに限定されない）によって、単離および精製さ
れ得る（天然の供給源、またはタンパク質／タンパク質複合体を発現する組換え
宿主細胞のいずれかから）。あるいは、一旦ＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１
タンパク質−ＩＰあるいはその誘導体が同定されると、そのタンパク質のアミノ
酸配列が、そのタンパク質がコードされるキメラ遺伝子の核酸配列から推定され
得る。従って、タンパク質またはその誘導体が、当該分野において公知の標準的
な化学的方法論によって合成され得る。例えば、Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、１
９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１０５〜１１１を参照のこと。
【００４６】 本発明の特定の実施態様において、組換えＤＮＡ技術、化学合成方法によって
産生されたか、あるいは天然の供給源から精製されたかにかかわらず、そのよう
なＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体としては、一次配列と
して実質的に図１〜１４［配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、
１８、２０、２２、２４、２６、および２８］に示されるアミノ酸配列の全部ま
たは一部、ならびにそのフラグメント、アナログおよび誘導体（そのタンパク質
ホモログを含む）を含むタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】 ＮｌＫ１タンパク質配列および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ配列の操作
は、タンパク質レベルで行われ得る。翻訳の間または翻訳後に異なって改変され
た（例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド生成、公知の保護基
／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解性切断、抗体分子または他の細胞
性リガンドへの連結などによって）、ＮｌＫ１タンパク質フラグメントまたはＮ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰフラグメントの複合体、誘導体、フラグメントまたはア
ナログが、本発明の範囲内に含まれる。当該分野において公知の任意の多数の化
学修飾方法論が、利用され得る。この方法論としては、ブロモシアン、トリプシ
ン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ4、アセチル化、
ホルミル化、酸化、還元、ツニカマイシン存在下での代謝合成などによる特異的
化学切断が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施態様において、Ｎ
ｌＫ１タンパク質配列および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ配列が、蛍光標
識を含むように改変される。別の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質および
／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰがヘテロ官能性試薬の取り込みによって改変
され、ここでそのようなヘテロ官能性試薬を使用して、複合体のメンバーを架橋
し得る。
【００４８】 さらに、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのアナ
ログまたは誘導体の複合体が、化学的に合成され得る。例えば、所望のドメイン
を含むか、またはインビトロにおいて所望の活性（例えば、ＮｌＫ１タンパク質
・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体形成）を媒介する、ＮｌＫ１タンパク質およ
び／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの部分に対応するペプチドを、ペプチド合
成機の使用によって合成し得る。天然の産物が「変異体」であることが疑われる
か、または新たな種から単離される場合、天然の供給源から単離されたＮｌＫ１
タンパク質、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ、ならびにインビトロで発現されるか、
もしくはインビボまたはインビトロにおいて合成された発現ベクターから発現さ
れる、これらのタンパク質のアミノ酸配列が、ＤＮＡ配列の分析から決定され得
るか、または単離されたタンパク質の直接的な配列決定によって決定され得る。
ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体はまた、タンパク質の疎
水性領域および親水性領域を同定するために使用され得る疎水性分析（例えば、
ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ７８：３８２４〜３８２８を参照のこと）によって分析され、従って
、実験操作（例えば、結合実験、抗体合成など）のための基質の設計を補助する
。二次構造分析を行って、特異的構造モチーフを想定するＮｌＫ１タンパク質お
よび／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの領域を同定し得る。例えば、Ｃｈｏｕ
およびＦａｓｍａｎ、１９７４、Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３：２２２〜２２３を参照
のこと。操作、翻訳、二次構造予測、親水性および疎水性プロフィール、オープ
ンリーディングフレーム予測およびプロッティング、ならびに配列相同性の決定
が、当該分野において入手可能なコンピュータプログラムソフトウェアを使用し
て達成され得る。
【００４９】 構造分析の他の方法としては、Ｘ線結晶解析（例えば、Ｅｎｇｓｔｒｏｍ、１
９７４、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１１：７〜１３を参照のこと）；
質量分析法およびガスクロマトグラフィー（例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９７、Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎ
ｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと）ならびにコンピュータモデリング（
例えば、Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋ ＆ Ｚｏｌｌｅｒ編、１９８６、Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ：Ｃ
ｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）が使用され得る
。
【００５０】 （（２）ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、およびＩＰ−５をコード
する配列） 本発明は、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５をコー
ドする核酸のヌクレオチド配列を開示する。特定の実施態様において、ＩＰ−１
、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、およびＩＰ−５核酸の核酸配列が、それぞれ
、配列番号１７、１９、２１、２３、および２５に示される；ここでこれらの核
酸の関連する推定アミノ酸配列を、それぞれ、配列番号１８、２２、２４、およ
び２６に示す。本発明はまた、上記の配列にハイブリダイズ可能であるか、また
は相補的な核酸に関連する。特定の局面において、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−
３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５遺伝子の少なくとも、１０、２５、５０、１００
、または２００ヌクレオチドあるいは全体コード配列に相補的な配列（具体的に
は、逆相補体）を含む核酸が提供される。
【００５１】 本発明の特定の実施態様において、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４
、またはＩＰ−５核酸（例えば、それぞれ配列番号１７、１９、２１、２３、ま
たは２５に対してアンチセンスである配列を有する）またはその誘導体に、低ス
トリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な核酸
が、本明細書において開示される。例示のために（しかし、限定のためではなく
）、そのような低ストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件を使用する
手順は、以下のとおりである（ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ、１９８１、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：６７８９〜６７９２）
：ＤＮＡを含有するフィルターを３５％ ホルムアミド、５Ｘ ＳＳＣ、５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．５）、５ ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ Ｐ
ＶＰ、０．１％ Ｆｉｃｏｌｌ、１％ ＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌの変性
サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で、６時間、４０℃でプレハイブリダイズした。ハ
イブリダイゼーションを、以下の変更をともない、同一の溶液中で行った：０．
０２％ ＰＶＰ、０．０２％ Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％ ＢＳＡ、１００ μｇ
／ｍｌ サケ精子ＤＮＡ、１０％（重量／容量）硫酸デキストラン、および５〜
２０×１０6ｃｐｍ 32Ｐ標識プローブ。このフィルターを１８〜２０時間４０
℃でハイブリダイゼーション混合液中でインキュベートし、次に、２×ＳＳＣ、
２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．４）、５ ｍＭ ＥＤＴＡ、および
０．１％ ＳＤＳを含む溶液中で、１．５時間、５０℃で洗浄した。洗浄溶液を
新鮮な洗浄溶液と交換し、再度、さらに１．５時間６０℃でインキュベートした
。フィルターを乾燥ブロットおよびオートラジオグラフィーした。必要な場合、
このフィルターを、６５〜６８℃で３回洗浄して、フィルムに再度曝露した。当
該分野において周知の低ストリンジェンシーなハイブリダイゼーションの他の条
件もまた、本発明の実施において利用され得る。
【００５２】 本発明の別の特定の実施態様において、中程度のストリンジェンシーな条件下
でＩＰ−１核酸、ＩＰ−２核酸、ＩＰ−３核酸、ＩＰ−４核酸、またはＩＰ−５
核酸とハイブリダイズし得る核酸が、開示される。例示として、および限定でな
い、中程度のストリンジェンシーなハイブリダイゼーションを利用する手順は、
以下の通りである：ＤＮＡを含むフィルターを、６× ＳＳＣ、５× Ｄｅｎｈ
ａｒｔ’ｓ溶液、０．５％ ＳＤＳおよび１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮ
Ａを含む溶液中で５５℃で６時間プレハイブリダイズした。ハイブリダイゼーシ
ョンを、５〜２０×１０6ｃｐｍの32Ｐ−標識されたプローブを添加した同一の
溶液中で実施した。このフィルターを、ハイブリダイゼーション混合液中で５５
℃で１８〜２０時間インキュベートし、次いで１× ＳＳＣおよび０．１％ Ｓ
ＤＳを含む溶液中で６０℃で３０分間を２度洗浄した。このフィルターをブロッ
ト乾燥し、そしてオートラジオグラフィー化した。当業者に周知の中程度のスト
リンジェンシーな他の条件がまた、本発明の実行において利用され得る。
【００５３】 本発明のさらに他の特定の実施態様において、高ストリンジェンシーな条件下
でＩＰ−１核酸、ＩＰ−２核酸、ＩＰ−３核酸、ＩＰ−４核酸、またはＩＰ−５
核酸とハイブリダイズし得る核酸が、開示される。例示として、そして限定はし
ないが、高ストリンジェンシーな条件を利用する手順は、以下の通りである：Ｄ
ＮＡを含むプレハイブリダイズされたフィルターを、６× ＳＳＣ、５０ｍＭ
トリス塩酸（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０２％ ＰＶＰ、０．０２
％ Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ ＢＳＡおよび５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子
ＤＮＡを含む緩衝液中で６５℃で８〜１６時間の間実施した。このフィルターを
、１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡおよび５〜２０×１０6ｃｐｍの32Ｐ
−標識されたプローブを含むプレハイブリダイゼーション混合液中で６５℃で４
８時間ハイブリダイズした。フィルターの洗浄は、２× ＳＳＣ、０．０１％
ＰＶＰ、０．０１％ Ｆｉｃｏｌｌ、および０．０１％ ＢＳＡを含む溶液中で
３７℃で１時間実施した。次いで、オートラジオグラフィーの前に０．１× Ｓ
ＳＣ中で５０℃で４５分の洗浄が続く。当業者に周知の高ストリンジェンシーな
ハイブリダイゼーションの他の条件はまた、本発明の実行に利用され得る。
【００５４】 ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５タンパク質の誘導
体、フラグメントおよびアナログをコードする核酸ならびにＩＰ−１、ＩＰ−２
、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５アンチセンス核酸を、さらに開示する。
ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５のアミノ酸およびヌ
クレオチド配列を、上述のようにインシリコで決定した。当該分野内の利用可能
な任意の方法論を、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５
をコードする全長（すなわち、コードする領域全体を包囲する）ｃＤＮＡクロー
ンを得るために利用し得る。例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を、ｃＤ
ＮＡライブラリー内の配列を増幅するために利用し得る。同時に、オリゴヌクレ
オチドプライマーは、適切な供給源（例えば、改変酵母２ハイブリッドアッセイ
融合集団のための最初のｃＤＮＡライブラリーからのサンプルが由来する）由来
の核酸サンプル（ＲＮＡまたはＤＮＡ）、好ましくはｃＤＮＡライブラリー、か
らＰＣＲ配列によって増幅されるために利用され得る。
【００５５】 ＰＣＲは、例えば、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ ｔｈｅｒｍａｌ
ｃｙｃｌｅｒおよびＴａｑポリメラーゼの使用によって実施され得る。増幅さ
れたＤＮＡは、好ましくは任意の真核生物種由来のｃＤＮＡである。いくつかの
異なる変性プライマーは、ＰＣＲ反応における使用のために合成され得る。単離
された公知のヌクレオチド配列とその核酸ホモログとの間のヌクレオチド配列の
高程度または低程度な類似性を許容することによって核酸ホモログを増幅するた
めに、ＰＣＲ反応をプライムするために用いるハイブリダイゼーションの条件の
ストリンジェンシーを変化することも可能である。交雑種のハイブリダイゼーシ
ョンのためには、低程度のストリンジェンシー条件が、好まれる；これに対し、
同種ハイブリダイゼーションには中程度のストリンジェンシー条件が好まれる。
【００５６】 任意の真核生物細胞は、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩ
Ｐ−５配列の分子クローニングのための核酸供給源としての機能を潜在的に果た
し得る。ＤＮＡは、化学合成によってクローン化されたＤＮＡ、ｃＤＮＡクロー
ニングによってクローン化されたＤＮＡ、もしくはゲノムＤＮＡのクローニング
によってクローン化されたＤＮＡ（例えば、ＤＮＡ「ライブラリー」）、または
所望の細胞から精製されたそのフラグメントから当該分野において公知の標準的
手段によって入手され得る。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９．Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ ｅｄ
．、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅ
ｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）；Ｇｌｏｖｅｒ、１９８
５．ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ
ＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｔｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｕ．Ｋ．Ｖｏｌ．Ｉ，ＩＩ）を参
照のこと。 ゲノムＤＮＡ由来のクローンは、エクソン（コード化）領域に加え
て調節領域およびイントロンＤＮＡ領域を含み得；これに対しｃＤＮＡ由来のク
ローンはエクソン配列のみを含む。
【００５７】 本発明の好ましい実施態様において、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−
４、またはＩＰ−５核酸は、ｃＤＮＡ供給源由来である。所望の配列を含む特定
のｃＤＮＡの同定は、数多くの方法において達成し得る。ある方法論において、
ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５配列の一部（例えば
、上述のように得たＰＣＲ増幅産物）、または周知のヌクレオチド配列の部分配
列を有するオリゴヌクレオチド、またはその特異的ＲＮＡ、またはそのフラグメ
ントは、精製され得、増幅され得、そして標識され得、そして産生した核酸フラ
グメントは、標識プローブを利用した核酸ハイブリダイゼーションによってスク
リーニングされ得る。ＢｅｎｔｏｎおよびＤａｖｉｓ、１９７７．Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ １９６：１８０を参照のこと。第二の方法論において、適切なフラグメント
は、制限酵素切断およびフラグメントの大きさ（周知の制限酵素地図（もし利用
可能であれば）との比較からまたはＤＮＡ配列分析による比較から期待されるお
よびＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５の公知のヌクレ
オチド配列との比較から期待される）の比較によって同定される。第三の方法論
において、目的の遺伝子は、その発現産物の物理的、化学的または免疫学的性質
に基づいたアッセイを利用して検出され得る。例えば、ｃＤＮＡクローン、また
は適切なｍＲＮＡをハイブリッドで選択するｃＤＮＡクローンは、タンパク質（
例えば、類似のまたは同一性の電気泳動的な移動、（ｉｓｏｌｅｃｔｒｉｃ ｆ
ｏｃｕｓｉｎｇ ｂｅｈａｖｉｏｒ）、タンパク質分解地図、抗原特異性または
ＮｌＫ１タンパク質を結合する能力を有する）の産生の機能として選択され得る
。第四の方法論において、抗ＩＰ−４抗体または抗ＩＰ−５抗体が利用可能であ
るべき場合、目的のタンパク質は、酵素連結免疫吸着性アッセイ（ＥＬＩＳＡ）
において推定のＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５クロ
ーンへの標識抗体の結合によって同定され得る。
【００５８】 本発明の特定の実施態様において、単離および同定に続いて、次いで核酸が、
バクテリオファージ（例えば、λ誘導体）またはバクテリアのプラスミド（例え
ば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ、またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）ベクター
（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ））を含むがそれに限定され
ない適切なクローニングベクター内へ挿入され得る。クローニングベクター内へ
の目的の核酸の挿入は、例えば、ＤＮＡフラグメントを相補的付着終末を有する
ベクターへ連結することによって容易にされ得、またはクローニングベクター内
に相補的付着終末が存在しない場合、ＤＮＡ挿入物またはベクター分子の末端は
、酵素的に修正され得る。あるいは、任意の制限酵素部位は、ＤＮＡ末端上のリ
ンカー配列の連結によって産生され得；これらのリンカー配列は、制限エンドヌ
クレアーゼ認識配列を有する特定の化学的に合成されたオリゴヌクレオチドを含
み得る。さらなる実施態様において、切断されたベクターおよびＩＰ−１、ＩＰ
−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５配列の両方は、相補的な、ホモダイ
マー性のテーリングによって改変され得る。組み換え分子は、形質転換、形質導
入、感染、エレクトロポレーションなどを経て宿主細胞へ導入され得る。さらに
他の実施態様において、所望の遺伝子は、「ショットガン」手法において適切な
クローニングベクター内への挿入の後に同定され得、そして単離され得る。所望
の遺伝子の濃縮（例えば、サイズ分画によって）は、クローニングベクター内へ
の挿入の前に行われ得る。
【００５９】 本発明によって提供されるＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、または
ＩＰ−５配列は、天然のＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ
−５タンパク質中に見出されるような実質的に同一のアミノ酸配列をコードする
これらのヌクレオチド配列、および機能的に等価なアミノ酸を伴うアミノ酸配列
をコードするこれらのヌクレオチド配列、および他のＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ
−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５誘導体、フラグメントまたはアナログをコード
するこれらのヌクレオチド配列を含む。
【００６０】 （３）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体に対する抗体の
産生 本発明によって本明細書中に開示されるように、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ複合体、またはその誘導体、フラグメント、アナログまたは
ホモログは、これらのタンパク質組成成分に免疫特異的に結合する抗体の産生に
おいて抗原として利用され得る。このような抗体は、ポリクローナル、モノクロ
ーナル、キメラ的、単鎖、ＦabフラグメントおよびＦab発現ライブラリーを含む
が限定されない。特定の実施態様において、ヒトＮｌＫ１タンパク質の複合体お
よびヒトＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの複合体に対する抗体が、開示される。他の
実施態様において、複合体は、ＮｌＫ１タンパク質のフラグメントおよびＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰから形成された；これらのフラグメントは、この複合体の他
のメンバーと相互作用し、そして抗体産生のための抗原として用い得るタンパク
質ドメインを含む。当該分野において公知の種々の手順は、ＮｌＫ１タンパク質
・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、またはその誘導体、フラグメント、アナロ
グまたはホモログに対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の産生
のために用いられ得る。
【００６１】 ポリクローナル抗体の産生のために、種々の宿主動物が、天然のＮｌＫ１タン
パク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、または合成バージョン、またはそれ
らの誘導体（例えば、クロスリンクしたＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰ）を伴う注入によって免疫され得る。種々のアジュバント（Ｆｒｅｕｎ
ｄ’ｓ（完全および不完全）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、
表面活性物質（例えば、リゾレシチン、（ｐｌｕｒｏｎｉｃ ｐｏｌｙｏｌｓ）
、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、ジニトロフェノールなど）な
らびにＢａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）およびＣｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのようなヒトアジュバント）が、免
疫学的な反応を上昇させるために使用され得る。
【００６２】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体、またはその誘導体、
フラグメント、アナログまたはホモログに対するモノクローナル抗体の調製のた
めに、継続的な細胞株培養による抗体分子の産生を提供する任意の技術が、利用
され得る。このような技術は、ハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌ
ｓｔｅｉｎ、１９７５．Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜４９７を参照のこと）
；トリオーマ技術；ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒトＢ細胞ハイブ
リドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：
７２を参照のこと）、およびＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８５
．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ
Ｔｈｅｒａｐｙ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７〜９６頁）を参照
のこと）を含むが、それに限定されない。本発明の付加的な実施態様においては
、モノクローナル抗体は、最近開発された技術を利用する無菌動物において産生
され得る。ＰＣＴ出願米国９０／０２５４５を参照のこと。ヒトモノクローナル
抗体は、本発明の実行において利用され得、そしてヒトハイブリドーマの利用に
よって（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ８０：２０２６〜２０３０を参照のこと）、またはインビトロでＥｐｓｔｅ
ｉｎ Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）によって形質転換するヒトＢ細胞によっ
て産生され得る（Ｃｏｌｅら、１９８５．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉ
ｓｓ，Ｉｎｃ．，７７〜９６頁）を参照のこと） 本発明の付加的な実施態様において、技術は、単鎖抗体の産生のために開示さ
れ（米国特許番号４，９４６，７７８を参照のこと）、ＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体特異的単鎖抗体の産生のために適応され得る。さ
らに他の実施態様において、方法論は、Ｆab発現ライブラリーの構築のために、
モノクローナルＦabフラグメント（ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−
ＩＰ複合体、またはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログに対す
る所望の特異性を伴う）の急速かつ効果的な同定を可能にするために開示される
（Ｈｕｓｅら、１９８９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５〜１２８１を参照
のこと）。さらに、本発明は、当該分野において公知の技術による、非ヒト抗体
の「ヒト化」のための方法論を開示する（米国特許番号５，２２５，５３９を参
照のこと）。ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体のイデオタ
イプを含む抗体フラグメントは、以下を含むが、それに限定されない当該分野に
おいて公知の技術によって産生され得る：（ｉ）抗体分子のペプシン分解によっ
て産生されるＦ(ab')2フラグメント；（ｉｉ）Ｆ(ab')2フラグメントのジスルフ
ィド結合橋の現象によって産生され得るＦabフラグメント；（ｉｉｉ）パパイン
および還元薬剤での抗体分子の処理によって産生され得るＦabフラグメント；（
ｉｖ）Ｆvフラグメント。
【００６３】 本発明の一つの実施態様において、所望の特異性を有する抗体をスクリーニン
グするための方法論は、酵素連結免疫吸着性アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および当該
分野において公知の他の免疫学的媒介技術を含むが、それらに限定されない。あ
る特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複
合体の特定のドメインに特異的な抗体の選択は、このようなドメインを有するＮ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体のフラグメントに結合する
ハイブリドーマの産生によって容易にされる。別の特定の実施態様において、Ｎ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体に特異的に結合するが、Ｎ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の個々のタンパク質には特
異的に結合しない抗体の選択のための方法論（個々のＮｌＫ１タンパク質および
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質への結合を同時に欠落するＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体への陽性な結合に基づく抗体の選択によ
る）は、本明細書中に開示される。従って、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タン
パク質−ＩＰ複合体、またはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモロ
グ内のドメインに特異的な抗体はまた、本明細書中に提供される。
【００６４】 上述の抗体は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の局在
化および／または定量化に関係する分野内で公知の方法に使用され得る（例えば
、適切な生理学的サンプル内のタンパク質のレベルを測定するのに使用するため
に、診断の方法に使用するために、タンパク質をイメージングするのに使用する
ために、など）。本発明のさらに別の実施態様において、タンパク質結合ドメイ
ンを有する抗ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体、また
はその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログは、薬理学的に活性な組
成成分として利用される（本明細書中、以降において「治療剤」）。
【００６５】 （４）診断、予後およびスクリーニングにおけるＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ複合体の使用 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体（すなわち、ＴｒｋＡ
、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、αトロポミオシン、ビメン
チン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、ま
たはＩＰ−５と特に複合化するＮｌＫ１タンパク質）は、生理的なプロセスの破
壊を含む特異的な疾患状態の「マーカー」としての機能を果たし得、このプロセ
スは以下を含むが、それに限定されない：（ｉ）細胞周期の進行、細胞性アポト
ーシスおよび／または分化；（ｉｉ）細胞内シグナル伝達；（ｉｉｉ）転写調節
；（ｉｖ）代謝および病理学的プロセス（例えば、過増殖障害、腫瘍形成および
腫瘍進行、神経変性、血管障害、ウイルス感染および種々の遺伝的な障害）。従
って、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体は、診断上の利用
性を有し得る。一致して、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合
体の上昇または欠乏を有する患者の特定の群の分化および分類は、新しい疾患分
類学的な疾患の分類を導き得、従って診断上の能力を顕著に進歩する。
【００６６】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体レベル、もしくはＮｌ
Ｋ１タンパク質と複合体を形成するように考えられている個々のタンパク質のレ
ベルの検出、または、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の
構成物をコードするｍＲＮＡのレベルの検出は、診断、予後、以降の疾患過程、
以降の疾患の状態の投与される治療剤の有効性、以降の薬物療法的な反応、など
において利用され得る。同様に、核酸配列（かつそれに相補的な配列）および抗
ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体およびＮｌＫ１タン
パク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を形成し得る個々の構成物に対する抗
体は、診断学での用途を有する。このような分子は、ＮｌＫ１タンパク質・Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ複合体の異常なレベルによって特徴付けられる種々の状態
、疾患、および障害を検出し、予知し、診断し、もしくはモニターし、またはそ
の処置をモニターする。上述のイムノアッセイは、免疫特異的結合が生じ得るよ
うな条件下で、患者由来のサンプルをＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ複合体抗体に接触させる工程を含む方法論によって実施され得、抗体によ
る任意の免疫特異的結合の量を実質的に検出し、または測定する。特定の実施態
様において、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体に特異的な
抗体は、患者由来の組織サンプルまたは血清サンプルをＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の存在について分析するのに用い得る；そのＮｌ
Ｋ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の異常なレベルは、病的な状
態の指標である。利用され得るイムノアッセイは、ウエスタンブロット、ラジオ
イムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素連結免疫吸着性アッセイ（ＥＬＩＳＡ），「サ
ンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降素
反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定化アッセイ、免疫放射測定ア
ッセイ、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインＡイムノアッセイなどの技術を
用いる競合的なおよび非競合的なアッセイ系を含むが、それに限定されない。
【００６７】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の関連タンパク質組成
成分をコードする本発明の核酸種、および関連ヌクレオチド配列およびサブ配列
もまた、ハイブリダイゼーションアッセイに用いられ得る。ＮｌＫ１タンパク質
およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰヌクレオチド配列、または少なくとも８ヌクレ
オチドを含むそのサブ配列は、ハイブリダイゼーションプローブとして用いられ
得る。ハイブリダイゼーションアッセイは、上述のように、またはＮｌＫ１タン
パク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の組成成分をコードするｍＲＮＡの異
常なレベルに関連する状態、障害、疾患状態の検出、予知、診断、またはモニタ
ーのために用いられ得る。本発明の特的の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク
質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の異常なレベルを含み、ＮｌＫ１タンパク
質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の異常なレベルによって特徴付けられる疾
患および障害、またはこのような障害を発達させる素因は、ＮｌＫ１タンパク質
・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体または非複合化ＮｌＫ１タンパク質および／
またはＮｌＫ１−ＩＰタンパク質または機能的活性に関する核酸の異常なレベル
を検出することによって診断され得る。この上述の機能的活性は、以下を含むが
、それに制限されない：（ｉ）相互作用するパートナー（例えば、ＮｌＫ１タン
パク質、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、αトロポ
ミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−
３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５）に結合する、または（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパク
質、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰまたはＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ複合体の発現または活性を上昇または減少させ得るＮｌＫ１タンパク質お
よび／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ ＲＮＡ、ＮｌＫ１タンパク質および／
またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ ＤＮＡまたはＮｌＫ１タンパク質および／ま
たはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質中の変異（例えば、転座、短縮化、野
生型ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰに関連するヌ
クレオチド配列またはアミノ酸配列中の変化）を検出することによる。
【００６８】 当該分野において周知の方法論（例えば、イムノアッセイ、核酸ハイブリダイ
ゼーションアッセイ、生物学的活性アッセイ、など）は、患者（特定の疾患もし
くは障害に罹患する、またはこのような疾患もしくは障害が発達する素因を有す
る）由来のサンプル中に、このような疾患および障害またはその素因を有さない
被験者由来のサンプル中のレベルと比較して、一つ以上の特定のＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体が上昇したレベルもしくは減少したレベ
ルのどちらかで存在する、または存在しない、かどうかを決定するために用いら
れ得る。さらに、これらのアッセイは、目的の複合体中のＮｌＫ１タンパク質・
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体と非複合化構成成分との比が、患者（特定の疾
患もしくは障害に罹患する、またはこのような疾患もしくは障害が発達する素因
を有する）由来のサンプル中で、このような疾患および障害またはその素因を有
さない被験者由来のサンプル中の比と比較して、上昇するまたは減少するかどう
かを決定するために利用され得る。
【００６９】 従って、本発明の特定の実施態様において、上昇した／減少したレベルの一つ
以上のＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を含む疾患および
障害が、診断され得る。またそれらの推測される存在は、このような疾患および
障害が発達する素因は、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の上昇した／減少したレベルに
ついてスクリーニングされ得、また、それらを量的に確認することにより検出さ
れ得る：（ｉ）一つ以上のＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合
体；（ｉｉ）前述の複合体の両方のタンパク質メンバーをコードするｍＲＮＡ；
（ｉｉｉ）複合体の機能的活性または（ｉｖ）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タ
ンパク質−ＩＰ複合体形成を促進する／阻害するまたは安定化する／不安定化す
る、ＮｌＫ１タンパク質もしくはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰにおける変異（例え
ば、核酸内の転座、遺伝子およびタンパク質の短縮化、野生型ＮｌＫ１タンパク
質もしくはＮｌＫ１−ＩＰに関連するヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の変
化）。
【００７０】 本発明の実行において、検出技術（特にＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰ複合体に対する抗体を含む）の使用は、目的のタンパク質または目的
のタンパク質複合体を発現する特異的な細胞の検出のための方法を提供する。こ
のようなアッセイを用いて、特異的な細胞型は、一つ以上の特的なＮｌＫ１タン
パク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体が発現する細胞において量的に特徴付
けられ得、そしてタンパク質またはタンパク質複合体の存在は、当該分野におい
て周知の技術（例えば、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ））による細胞
の生存度に相関し得る。本明細書中において、また、特定のＮｌＫ１タンパク質
・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体またはその誘導体を発現するインビトロの細
胞培養モデルにおける、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体
を特徴付けるおよび／または単離する目的のためのＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ複合体の検出に対する方法論も具体化される。これらの検出
技術は、以下を含むが、それに限定されない：原核生物の細胞分類（ｃｅｌｌ−
ｓｏｒｔｉｎｇ）ＤａｖｅｙおよびＫｅｌｌ、１９９６．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．
Ｒｅｖ．６０：６４１〜６９６を参照のこと）；ヒトのような哺乳動物種を含む
真核生物由来の初代培養および組織標本（Ｓｔｅｅｌｅら、１９９６．Ｃｌｉｎ
．Ｏｂｓｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．３９：８０１〜８１３を参照のこと）および継
続的な細胞培養（ＯｒｆａｏおよびＲｕｉｚ−Ａｒｇｕｅｌｌｅｓ、１９９６．
Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：５〜９を参照のこと）。
【００７１】 本発明は、抗ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体およ
び、必要に応じて、前述の抗体に対する標識結合パートナーを含む一つ以上の容
器を含む診断的な使用のためのキットをさらに提供する。抗ＮｌＫ１タンパク質
・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体に組み込まれた標識は、化学発光の部分
、酵素学的な部分、蛍光の部分、比色の部分または放射活性の部分を含むが、こ
れに限定されない。別の特定の実施態様において、キットは、一つ以上の容器に
おいて、一対のオリゴヌクレオチドプライマー（例えば、６〜３０ヌクレオチド
の長さの）を含み得、これは、以下のための増幅プライマーとして働き得る：ポ
リメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Ｉｎｎｉｓら、１９９０．ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ
を参照のこと）、リガーゼ連鎖反応；環状プローブ反応、または当該分野におい
て公知の他の方法。必要に応じて、キットは、上述のアッセイにおいて標準また
はコントロールとして用いるために、予定される量の精製されたＮｌＫ１タンパ
ク質、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰまたはＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰ複合体、またはその核酸をさらに含む。
【００７２】 （５）ＮｌＫ１タンパク質、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰおよびＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の治療的使用 本発明は、生物学的に活性で、治療学的な化合物（本明細書中、以降において
「治療剤」）の投与によって、種々の疾患および障害の処置または予防を提供す
る。このような治療剤は、以下を含むが、それに限定されない：（ｉ）種々のＮ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体（例えば、ＴｒｋＡ、タン
パク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、αトロポミオシン、ビメンチン、
ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩ
Ｐ−５と複合化するＮｌＫ１タンパク質）およびその誘導体、フラグメント、ア
ナログおよびホモログ；（ｉｉ）上述のタンパク質およびそのタンパク質複合体
に対する抗体；（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
ならびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログをコードする核酸
；（ｉｖ）ＮｌＫ１タンパク質をコードするアンチセンス核酸そして（ｖ）Ｎｌ
Ｋ１タンパク質ＩＰおよびＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合
体およびその修飾因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニ
スト）。
【００７３】 最近議論されたように、ＮｌＫ１タンパク質および／またはいくつかのその結
合パートナー（すなわち、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）は、ガンおよび腫瘍形成
およびガン進行を含む細胞周期の進行、細胞分化、および転写制御の障害におけ
る重要な役割を演じることを関係してきた。神経変性の障害（例えば、アルツハ
イマー症）はまた、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｅｋタンパク質−ＩＰ
を含み得る。細胞内シグナル伝達によって影響される広範囲の細胞疾患は、タン
パク質（例えば、ＮｌＫ１タンパク質、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１
αおよび１４−３−３ε）を含み得、そしてＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タン
パク質−ＩＰ複合体活性を調節する（すなわち、阻害する、アンタゴナイズする
または促進する）治療剤の投与によって処置され得、または阻止され得る。心血
管系疾患は、αトロポミオシン、ＩＰ−２およびＩＰ−５を含み得る。異常なＤ
ＮＡ修復および転写制御は、色素性乾皮症、コケーン症候群および裂毛症を含む
種々の遺伝的な障害を頻繁に生じ（Ｓｅｒｏｚら、１９９５．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉ
ｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．５：２１７〜２２２を参照のこと）、ＮｌＫ１タンパ
ク質、Ｉｎｉ−１およびＩＰ−１を含み得る。Ｉｎｉ−１はまた、ウイルス（例
えば、ＨＩＶ）感染におそらく含まれる。さらに、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスフ
ァターゼ１α、１４−３−３ε、ビメンチン、ＩＰ−４およびＩＰ−１は、多数
の代謝疾患および障害に特に関係する。
【００７４】 （ｉ）上昇したＮｌＫ１タンパク質レベルおよびＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ複合体レベルを伴う障害 上昇した（前述の疾患および障害に罹患しない被検体に関連して）ＮｌＫ１タ
ンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体レベルまたは生物学的活性によって
特徴付けられる疾患および障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−
ＩＰ複合体の形成および活性をアンタゴナイズする（すなわち、減少するまたは
阻害する）治療剤を用いて処置され得る。ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰ複合体の形成および活性をアンタゴナイズする治療剤は、治療的また
は予防的様式において投与され得る。以下を含むが、それに限定されない治療剤
が利用され得る：ＮｌＫ１タンパク質もしくはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰまたは
そのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）抗ＮｌＫ１タ
ンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体；（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タンパク
質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードする核酸；（ｉｖ）「機能障害性」
（すなわち、ＮｌＫ１タンパク質をコードする配列およびＮｌＫ１タンパク質−
ＩＰをコードする配列中への、非相同の［非ＮｌＫ１タンパク質および／または
非ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ］挿入に起因する）である、ＮｌＫ１タンパク質ア
ンチセンス核酸およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核酸ならびにＮｌ
Ｋ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ核酸の同時投与は、相
同組み換えによって内在性のＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰの機能を「ノックアウト」するために利用される（Ｃａｐｅｃｃｈｉ
、１９８９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８〜１２９２を参照のこと）。本
発明のさらなる実施態様において、第一のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの変異体ま
たは誘導体は、野生型の第一のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰに比べて、ＮｌＫ１タ
ンパク質に対するより良い親和性を有し、ＮｌＫ１タンパク質への結合について
第二のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰと競合するために投与され得、それによって、
ＮｌＫ１タンパク質と第二のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの間の複合体のレベル
が減少する。
【００７５】 上昇したＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体レベルは、タ
ンパク質および／またはＲＮＡを数量化することによって、患者の組織サンプル
（例えば、細胞診からの）を得ることによって、そしてインビトロで発現したＮ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体（またはＮｌＫ１タンパク
質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰｍＲＮＡ）のＲＮＡレベルまたはタンパク質
レベル、構造および／または活性をアッセイすることによって、容易に検出され
得る。当該分野において周知の方法は、以下のアッセイを含むが、それに限定さ
れない：ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を検出するイム
ノアッセイ（例えば、ウエスタンブロット分析、免疫沈降に続くナトリウムドデ
シル硫酸塩（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫組織化学、など）
および／またはＮｌＫ１タンパク質のｍＲＮＡおよびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
のｍＲＮＡの同時発現を検出するハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノ
ーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、など
）。
【００７６】 （（ｉｉ）増加したＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１
タンパク質−ＩＰ複合体レベルを有する障害） 本発明の特定の実施態様は、タンパク質部分を発現するｍＲＮＡを標的化する
ことによるＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体発現（すなわ
ち、複合体の２つのタンパク質成分の発現および／または複合体の形成）の減少
についての方法を開示する。ＲＮＡ治療剤は、現在、以下の３つのクラスに分類
されている：（ｉ）アンチセンス種；（ｉｉ）リボザイムまたは（ｉｉｉ）ＲＮ
Ａアプタマー。例えば、Ｇｏｏｄら、１９９７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４
：４５〜５４を参照のこと。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、最も広範に利
用されており、そして以下で考察される。リボザイム治療は、特定のＲＮＡを切
断、結合または、さもなくば不活化する酵素的能力を有する（従って、特定のタ
ンパク質の発現を減弱または排除する）小ＲＮＡ分子の投与（すなわち、誘導性
発現）を含む。例えば、ＧｒａｓｓｉおよびＭａｒｉｎｉ、１９９６、Ａｎｎ．
Ｍｅｄ．２８：４９９〜５１０を参照のこと。現在、「ヘアピン」および／また
は「ハンマーヘッド」のＲＮＡリボザイムの設計が、特定のｍＲＮＡ（例えば、
ＮｌＫ１タンパク質のｍＲＮＡ）を特異的に標的するために必要である。ＲＮＡ
アプタマーは、その翻訳を特異的に阻害し得るＴａｔおよびＲｅｖ ＲＮＡ（例
えば、Ｇｏｏｄら、１９９７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：４５〜５４を参
照のこと）のようなタンパク質についての特定のＲＮＡリガンドである。
【００７７】 本発明の好ましい実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質の活性またはレベル
は、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードする核酸、
またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰに免疫特異的に結合する抗体（またはその結合
ドメインを保有する抗体の誘導体もしくはフラグメント）の投与により減少され
得る。同様に、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのレベルまたは活性は、ＮｌＫ１タン
パク質、ＮｌＫ１タンパク質をコードする核酸、またはＮｌＫ１タンパク質に免
疫特異的に結合する抗体（またはその結合ドメインを保有する抗体の誘導体もし
くはフラグメント）の投与により減少され得る。本発明の別の実施態様において
、増加したレベルのＮｌＫ１タンパク質、または特にはＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐと関連する疾患または障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐ複合体形成が、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体形成を
介してＮｌＫ１タンパク質または特にＮｌＫ１タンパク質−ＩＰを減少または不
活性化するように作用する場合、この複合体形成を増大する治療剤の投与により
処置または予防され得る。このような疾患または障害は、以下により処置または
予防され得る：（ｉ）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の
他のメンバーに対して親和性が上昇した（複合体形成の増大を生じるために）タ
ンパク質の１つまたは両方の変異体を含む、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タン
パク質−ＩＰ複合体の１つのメンバーの投与、あるいは（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体などを安定化するように作用する抗体ま
たは他の分子の投与。
【００７８】 （（６）治療剤の生物学的効果の決定） 本発明の好ましい実施態様において、適切なインビトロアッセイまたはインビ
ボアッセイが利用され、特定の治療剤の効果、およびその投与が罹患した組織の
処置に指示されるか否かを決定する。
【００７９】 種々の特定の実施態様において、インビトロアッセイを、患者の障害に関与す
る細胞の代表的な型で実行し、所定の治療剤がこのような細胞型に所望の効果を
発揮するか否かを決定し得る。治療における使用のための化合物は、ヒト被験体
における試験の前に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどを含
むがこれに限定されない適切な動物モデル系において試験され得る。同様に、イ
ンビボ試験において、当該分野で公知の任意の動物モデル系がヒト被験体への投
与の前に用いられ得る。
【００８０】 （（ｉ）悪性腫瘍） ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の成分（すなわち、Ｎ
ｌＫ１タンパク質、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε
、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、ＩＰ−１（中間フィラメント
関連タンパク質）、ＩＰ−２（トロポミオシンホモログ）、ＩＰ−３（ユビキチ
ンホモログ特異的ヒドロラーゼ）、ＩＰ−４およびＩＰ−５（ガングリオシド−
誘導性分化関連タンパク質１ホモログ）は、細胞増殖の調節に関与する。従って
、本発明の治療剤は、細胞の過剰増殖および／または細胞増殖の制御の損失と関
連する疾患または障害（例えば、癌、悪性腫瘍および腫瘍）の治療または予防的
処置において有用であり得る。このような過剰増殖性障害の概説としては、例え
ば、Ｆｉｓｈｍａｎら、１９８５、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版（Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐ
ｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）を参照のこと。
【００８１】 本発明の治療剤は、悪性腫瘍および関連障害を処置または予防する際の有効性
について、当該分野で公知の任意の方法によってアッセイされ得る。このような
アッセイとしては、形質転換細胞または患者の腫瘍に由来する細胞を利用するイ
ンビトロアッセイ、および癌または悪性腫瘍の動物モデルを用いるインビボアッ
セイが挙げられるがこれらに限定されない。潜在的に有効な治療剤は、コントロ
ールと比較して、例えば、培養中で腫瘍由来細胞もしくは形質転換細胞の増殖を
阻害するか、または動物モデルにおいて腫瘍の後退を引き起こす。
【００８２】 本発明の実施において、一旦、悪性腫瘍または癌が、ＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体活性を調節すること（すなわち、阻害、アンタゴ
ナイズ、またはアゴナイズすること）により処置され得ることが示されれば、そ
の癌または悪性腫瘍は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体
の形成および機能を調節するように働く治療剤の投与（これは、ＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体およびそのタンパク質複合体の固有の結
合パートナー（すなわち、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰ）を供給する工程を含む）により実質的に処置または予防され得る。
【００８３】 （（ｉｉ）前悪性腫瘍状態） 癌または悪性腫瘍の治療的処置または予防的処置において有効な本発明の治療
剤はまた、前悪性腫瘍状態の処置のためにおよび／または前悪性腫瘍が新生物ま
たは悪性状態に進行することを防ぐために投与され得る。このような予防的使用
または治療的使用は、新生物または癌への進行が既知の状態または疑われる状態
（特に、過形成、化生、または最も具体的には、異形成からなる非新生物の細胞
増殖が生じた状態）において指示される。このような異常な細胞増殖の概説につ
いては、例えば、ＲｏｂｂｉｎｓおよびＡｎｇｅｌｌ、１９７６、Ｂａｓｉｃ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、第２版（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．Ｐｈｉｌａｄ
ｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）を参照のこと。
【００８４】 過形成は、組織または器官における、構造または機能の有意な変化をともなわ
ない、細胞数の増加を含む制御された細胞増殖の形態である。例えば、子宮内膜
過形成はしばしば子宮内膜癌に進行することが実証されている。化生は、制御さ
れた細胞増殖の形態である。化生では、１つの型の成熟細胞または完全に分化し
た細胞が、別の型の成熟細胞と代わる。化生は、上皮組織細胞または結合組織細
胞において生じ得る；一方非定型の化生は、いくらか無秩序な化生上皮を含む。
異形成は一般に、癌の前駆体と考えられており、そして主に上皮に見出される。
異形成は、非新生物性の細胞増殖の最も無秩序な形態であり、そして個体の細胞
の均一性の喪失および細胞構築の配向の喪失を含む。異形成細胞は、しばしば異
常な大きさの、濃く染色された核を有し、そして多型性を示す。形成異常は、慢
性刺激または炎症が存在する場合、特徴的に生じ、そしてしばしば、頸部、気道
、口腔および胆嚢に見出される。
【００８５】 あるいは、過形成、化生または異形成で特徴付けられる異常な細胞増殖の存在
に加えて、患者由来の細胞サンプル内でインビボまたはインビトロのいずれかで
示された形質転換された表現型または悪性腫瘍の表現形の１つ以上の特徴の存在
は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体活性を調節する能力
を保有する本発明の治療剤の予防的／治療的投与が望ましいことの指標である。
形質転換した表現型の特徴としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない
：（ｉ）形態学的変化；（ｉｉ）基層付着の低下；（ｉｉｉ）細胞間接触阻害の
喪失；（ｉｖ）足場依存性の喪失；（ｖ）プロテアーゼ放出；（ｖｉ）糖輸送の
増大；（ｖｉｉ）血清要求の低下；（ｖｉｉｉ）胎児抗原の発現；（ｉｘ）２５
０Ｋｄａｌ細胞表面タンパク質の消失、など。例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓら、１
９８６、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ
Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）を参照のこと。
【００８６】 本発明の特定の実施態様において、白斑病（良性の外観を示す上皮の過形成病
変または異形成病変）またはボーエン病（インサイチュの癌腫）が、あからさま
に悪性腫瘍の表現型への形質転換を予防するための、予防的介入の望ましさの指
標である前新生物性病変である。別の特定の実施態様において、本発明の治療剤
は、嚢胞性過形成、哺乳動物異形成、および特に腺疾患（良性上皮過形成）を含
むが、これらに限定されない繊維嚢胞性の疾患の治療的処置または予防的処置に
おいて有用であり得る。
【００８７】 他の好ましい実施態様において、悪性腫瘍について、以下の１つ以上の素因を
示す患者が、有効量の治療剤の投与によって処置される：（ｉ）悪性腫瘍に関連
する染色体転座（例えば、慢性骨髄性白血病についてのフィラデルフィア染色体
（ｂｃｒ／ａｂｌ）および濾胞性リンパ腫についてのｔ（１４；１８）など）；
（ｉｉ）家族性ポリポーシスまたはガードナー症候群（結腸癌の潜在的前兆）；
（ｉｉｉ）重度未確認の単一クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ；多
発性骨髄腫の潜在的前駆症状）および（ｉｖ）メンデル（遺伝学）遺伝パターン
を示す癌または前癌性疾患（例えば、家族性大腸ポリポーシス、ガードナー症候
群、遺伝性外骨腫症、多発性内分泌腺腫症、アミロイド産生および褐色細胞腫と
もなう甲状腺髄様癌、ポイツ−ジェガーズ症候群、フォン・レックリングハウゼ
ン神経線維腫症、網膜芽細胞腫、頸動脈小体腫瘍、皮膚黒色癌、眼内黒色癌、色
素性乾皮症、毛細血管拡張性運動失調、チェディアック−東症候群、白皮症、フ
ァンコーニ再生不良性貧血およびブルーム症候群）を有する人の一親等。
【００８８】 別の好ましい実施態様においては、本発明の治療剤は、乳癌、結腸癌、肺癌、
膵臓癌、もしくは子宮癌、または黒色腫もしくは肉腫への進行を防ぐためにヒト
患者に投与される。
【００８９】 （（ｉｉｉ）過剰増殖性および増殖異常障害） 本発明の好ましい実施態様では、過剰増殖性障害または良性の増殖障害の治療
的処置または予防的処置において、治療剤が投与される。過剰増殖性疾患または
障害の処置または予防における、本発明の治療剤の有効性は、当該分野で公知の
任意の方法によりアッセイされ得る。このようなアッセイとしては、インビトロ
細胞増殖アッセイ、過剰増殖疾患または障害の動物モデルを用いるインビトロア
ッセイまたはインビボアッセイ、などが挙げられる。可能性として有効な治療剤
は、コントロールと比較して、例えば、培養中で細胞の増殖を促進するか、また
は動物モデルにおいて成長または細胞増殖を生じ得る。
【００９０】 従って、一旦、過剰増殖性障害が、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ複合体活性を調節することにより処置されることが示されれば、その過剰
増殖性疾患または障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合
体の形成を調節する治療剤の投与により処置または予防され得る。この投与は、
ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体およびＮｌＫ１タンパク
質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の個々の結合パートナー（例えば、ＮｌＫ
１タンパク質、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α
−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、
ＩＰ−４またはＩＰ−５）を供給する工程を含む。
【００９１】 本発明の特定の実施態様は、以下の処置または予防に関する：肝硬変（瘢痕が
正常な肝臓の再生プロセスを上回る状態）；瘢痕プロセスが正常な再生を妨害す
る皮膚の傷を生じるケロイド（肥大型瘢痕）形成の処置；乾癬（皮膚の過剰増殖
および適切な細胞運命決定における遅延により特徴付けられるよくある皮膚状態
）；良性腫瘍；繊維嚢胞性状態および組織肥大（例えば、良性前立腺肥大）。
【００９２】 （ｉｖ）神経変性障害 ＮｌＫ１タンパク質の特定の結合パートナー（すなわち、ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ）は、アルツハイマー病のような神経変性疾患に関連しており、そしてＩ
Ｐ−３（ユビキチン特異的ヒドロラーゼホモログ）およびＩＰ−４（コラーゲン
−ホモログ）は、これらの障害において重要な役割を果たすようである。従って
、本発明の治療剤（特に、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
の複合体を調節または供給するもの）は、以下：アルツハイマー病、クロイツフ
ェルトヤコブ病、レーヴィー体病などを含むがこれに限定されない神経変性疾患
の処置または予防における有効性を証明し得る。このような神経変性疾患および
障害を処置または予防するにおける本発明の治療剤の有効性は、有効性について
当該分野で公知の任意の方法によって確認され得る。このようなアッセイとして
は、調節された細胞成熟またはアポトーシスの阻害についてのインビトロアッセ
イ、神経変性疾患または障害の動物モデルを用いるインビボアッセイなどが挙げ
られる。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定するものではないが、コントロ
ールと比べて、調節された細胞成熟を促進し、そして培養中の細胞アポトーシス
を妨げまたは動物モデルにおいて神経変性を減弱する。
【００９３】 一旦、神経変性疾患または障害がＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−
ＩＰ複合体活性の調節により処置されることが示されると、その神経変性疾患ま
たは障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の形成また
は機能を調節する治療剤の投与により処置または予防され得る。
【００９４】 （（ｖ）心血管系疾患） 心筋症は小児および成人における重篤な心筋障害であり、これは病的状態およ
び早発性死を生じる。これらの障害としては、肥大型心筋症、拡張型心筋症およ
び拘束性心筋症が挙げられる。肥大型心筋症は、増加した外部負荷の非存在下に
おける左心室肥大および筋原線維の不整配列により特徴付けられる。全てが筋節
性タンパク質をコードする７つの全遺伝子における変異は、家族性肥大型心筋症
の原因として同定されており、そして細胞骨格タンパク質（例えば、α−トロポ
ミオシン、β−ミオシン重鎖、心臓トロポニン−Ｔ、ミオシン結合タンパク質−
Ｃ、ミオシン必須軽鎖、ミオシン調節性軽鎖、トロポニンＩ、そして好ましくは
トロポミオシンホモログタンパク質、ＩＰ−２およびＩＰ−５）をコードするそ
れらの遺伝子を含む。従って、本発明の治療剤、特にＮｌＫ１タンパク質・Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ複合体活性を調節または供給する治療剤は、心筋症関連疾
患または障害を処置または予防するにおいて有効であり得る。
【００９５】 心血管系障害に関するプロセスについて、膨大な動物およびインビトロ細胞培
養モデルが存在する。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定はしないが、以下
において研究され得る：（ｉ）家族性肥大型心筋症についてのモデルとして変異
体トロポミオシンまたはミオシンを発現するマウス系（例えば、Ｖｉｋｓｔｒｏ
ｍら、１９９６．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２：５５６〜５６７を参照のこと）；（ｉｉ
）天然に存在する肥大型心筋症を有するブタモデル（例えば、Ｌｅｅら、１９９
６．ＦＡＳＥＢ Ｊ．１０：１１９８〜１２０４を参照のこと）、または（ｉｉ
ｉ）肥大型心筋症のネコモデル（例えば、Ｆｏｘら、１９９５．Ｃｉｒｃｕｌａ
ｔｉｏｎ ９２：２６４５〜２６５１を参照のこと）。
【００９６】 従って、一旦、心筋症関連疾患または障害がＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タ
ンパク質−ＩＰ複合体活性の調節により処置されることが示されれば、その疾患
または障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体形成また
は機能を調節する治療剤の投与により処置または予防され得る。
【００９７】 （（ｖｉ）ウイルス感染） ＮｌＫ１タンパク質結合パートナー（すなわち、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）
、Ｉｎｉ−１は、ウイルス感染に関係する。Ｉｎｉ−１は、酵素ＨＩＶ−１イン
テグラーゼと相互作用すること、およびこれを活性化することによるウイルスＨ
ＩＶ−１の宿主ゲノムへの組み込みに関与する。これは、エプスタインバーウイ
ルス（ＥＢＶ）核抗原２と相互作用することがまた示されている。本発明の治療
剤、特にＮｌＫ１タンパク質：Ｉｎｉ−１複合体活性を調節または供給する治療
剤は、ウイルス感染、ならびに関連する疾患および障害（ＨＩＶ感染およびＡＩ
ＤＳを含む）の処置または予防に有効であり得る。本発明の治療剤（特にＮｌＫ
１タンパク質：Ｉｎｉ−１複合体のレベルまたは生物学的活性を調節する治療剤
）は、当該分野で公知の任意の方法により、このようなウイルス感染ならびに関
連する疾患および障害を処置または予防するにおいて有効であるかアッセイされ
得る。このようなアッセイとしては、細胞培養モデルを用いるインビトロアッセ
イ、またはウイルス性疾患もしくは障害の動物モデルを用いるインビボアッセイ
が挙げられる。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定はしないが、コントロー
ルと比べ、動物モデルにおいてウイルス性応答を減弱する。
【００９８】 従って、一旦、ウイルス性疾患または障害がＮｌＫ１タンパク質・Ｉｎｉ−１
複合体活性の調節により処置されることが示されれば、そのウイルス性疾患また
は障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体形成または機
能を調節する治療剤の投与により処置または予防され得る。
【００９９】 （（ｖｉｉ）代謝性疾患および代謝性障害） いくつかのＮｌＫ１タンパク質結合パートナー（すなわち、ＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰ）は、代謝性疾患に関係する。Ｔｒｋ癌遺伝子（ＴｒｋＡ）は、げっ歯
類糖尿病モデルにおいて発現欠損を示す；ＰＰ１−αは、筋肉における解糖のフ
ラックスを制御する；１４−３−３εは、インスリン感受性を調節し、そしてビ
タミンは、副腎ステロイド生成において役割を有する。ＩＰ−１（ＩＦ−関連タ
ンパク質ホモログ）、ＩＰ−３（ユビキチン−ヒドロキシラーゼホモログ）およ
びＩＰ−４（コラーゲン−ホモログ）は全て代謝性疾患において類似の役割また
は追加の役割を有するようである。本発明の治療剤（特にＮｌＫ１タンパク質・
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の形成および／または活性を調節または供給す
る治療剤）は、関連する疾患および障害を処置または予防するにおいて有効であ
り得る。本発明の治療剤は、代謝性疾患および障害を処置または予防するにおけ
る有効性について、当該分野で公知の任意の方法によってアッセイされ得る。こ
のようなアッセイとしては、細胞培養モデルを用いるインビトロアッセイ、また
は代謝性性疾患もしくは障害の動物モデルを用いるインビボアッセイが挙げられ
る。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定はしないが、コントロールと比べ、
動物モデルにおいて代謝性疾患およびその有害な生理学的結果を減弱する。
【０１００】 従って、一旦、代謝性性疾患または障害がＮｌＫ１タンパク質・Ｎｅｋ２タン
パク質−ＩＰ複合体活性の調節により処置されることが示されれば、その代謝性
性疾患または障害は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体形
成または機能を調節する治療剤の投与により処置または予防され得る。
【０１０１】 （（７）遺伝子治療） 本発明の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰ、またはその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は、
遺伝子治療の手段により、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質―ＩＰ複合
体形成を調節するために投与される。より特定の実施態様において、ＮｌＫ１タ
ンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ（例えば、ＴｒｋＡ、タンパク質ホス
ファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ７００
７１、Ｉｎｉ−ｌ、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４、またはＩＰ−５
）の両方またはそれらの機能的誘導体をコードする核酸（単数または複数）は、
遺伝子治療の手段により投与される。遺伝子治療とは、被験体への特定の核酸の
投与により実行される治療をいう。本発明の特定の実施態様において、この核酸
は、そのコードするタンパク質を生成する。次いでこれはＮｌＫ１タンパク質・
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体機能を調節することにより治療効果を発揮する
ように作用する。本発明の実施において、当該分野で利用可能な遺伝子治療に関
する任意の方法論が用いられ得る。例えば、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３．
Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．１２：４８８〜５０５を参照のこと。
【０１０２】 好ましい実施態様において、この治療剤は、適切な宿主内で、前述のタンパク
質の両方、またはそれらのフラグメントもしくはキメラタンパク質を発現する発
現ベクターの部分であるＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ核
酸を含む。特定の実施態様において、このような核酸は、ＮｌＫ１タンパク質お
よびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰコード領域に作動可能に連結するプロモーター、
または好ましさは低いが、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
コード領域に別々に連結される２つの別のプロモーターを有する；ここで該プロ
モーターは、誘導性または構成性であり、そして必要に応じて組織特異性である
。別の特定の実施態様では、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐコード配列（および任意の他の所望の配列）がゲノム内の所望の部位で相同組
換えを促進する領域により隣接され、これによりＮｌＫ１タンパク質およびＮｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ核酸の染色体内発現を提供する核酸分子が用いられる。例
えば、Ｋｏｌｌｅｒ＆Ｓｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２〜８９３５を参照のこと。
【０１０３】 患者への治療剤核酸の送達は、直接的（すなわち、患者が核酸または核酸含有
ベクターに直接暴露される）または間接的（すなわち、細胞がインビトロにおい
て核酸で最初に形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る
。これらの２つのアプローチは、それぞれ、インビボ遺伝子治療、またはエクス
ビボ遺伝子治療として公知である。本発明の特定の実施態様において、この核酸
は、インビボで直接投与され、ここでこれはコードする産物を生成するように発
現される。これは、以下を含むがそれらに限定されない当該分野で公知の任意の
多くの方法により達成され得る：（ｉ）それを適切な核酸発現ベクターの一部と
して構築する工程、およびそれが細胞内になるような様式で投与する工程（例え
ば、欠損性もしくは弱毒化レトロウイルスまたは他のウイルスベクターを用いる
感染による；米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、あるいは（ｉｉ
）裸のＤＮＡの直接注入、または微粒子ボンバードメント（例えば、「Ｇｅｎｅ
Ｇｕｎ（登録商標）」；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用を通じる
、または脂質、細胞表面レセプター／トランスフェクト化因子でそれを被覆する
ことにより、またはリポソーム、微粒子もしくはマイクロカプセル中へのカプセ
ル化を通じて、または核に侵入することが公知であるペプチドに連結してそれを
投与することにより、またはレセプター媒介エンドサイトーシスを受けやすいリ
ガンドに連結してそれを投与することにより（例えば、ＷｕおよびＷｕ、１９８
７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２を参照のこと）（こ
れらは、目的のレセプターなどを特異的に発現する細胞型を「標的化」するため
に用いられ得る）。
【０１０４】 本発明の別の特定の実施態様において、リガンドがエンドソームを分裂するよ
うに設計され、これにより核酸が引き続くリソソーム分解を回避することを可能
にする融合性ウイルスペプチドを含む核酸リガンド複合体が生成され得る。なお
別の特定の実施態様において、核酸は、特異的レセプターを標的化することによ
り、インビボにおいて、細胞特異性エンドサイトーシスおよび発現について標的
化され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１８０；ＷＯ９３／１４１８８
およびＷＯ９３／２０２２１を参照のこと。あるいは、核酸は、相同組換えによ
る発現のために、細胞内に導入され、そして宿主細胞内に組み込まれ得る。例え
ば、Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９．Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８を
参照のこと。
【０１０５】 なお、別の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰの核酸を含むウイルスベクターが利用される。例えば、レ
トロウイルスベクターが利用され得る（例えば、Ｍｉｌｌｅｒら、１９９３．Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１〜５９９を参照のこと）（これは、ウ
イルスゲノムのパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの引き続く組み込みに必
要とされないそれらのレトロウイルス特異的配列を欠失するように改変されてい
る。ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ（好ましくは
両方のタンパク質種）の核酸が、この遺伝子の患者への送達を容易にするベクタ
ーにクローニングされる。例えば、Ｂｏｅｓｅｎら、１９９４．Ｂｉｏｔｈｅｒ
ａｐｙ ６：２９１〜３０２；Ｋｉｅｍら、１９９４．Ｂｌｏｏｄ ８３：１４
６７〜１４７３を参照のこと。さらに、アデノウイルスは、呼吸器上皮への遺伝
子の送達のための特に有効な「ビヒクル」である。アデノウイルスに基づく送達
系のための他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞および筋肉である。アデノ
ウイルスはまた、分裂していない細胞に感染する有利な能力を保有する。概説に
ついては、例えば、ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、１９９３．Ｃｕｒｒ
．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：４９９〜５０３を参照のこと。アデ
ノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用のために提
唱されている。例えば、Ｗａｌｓｈら、１９９３．Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．
Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９〜３００を参照のこと。
【０１０６】 本発明の実施における遺伝子治療へのさらなるアプローチは、エレクトロポレ
ーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションまた
はウイルス感染のような方法による、インビトロ組織培養における細胞への遺伝
子の移入を含む。一般に、移入の方法論は、細胞への選択可能マーカーの移入を
含む。次いで、この細胞は、移入された遺伝子をとり込み、そして発現している
これらの細胞の単離を容易にするように、選択圧力（例えば、抗生剤耐性）下に
置かれる。次いで、これらの細胞は患者に送達され得る。この特定の実施態様に
おいて、核酸は、得られた組換え細胞のインビボ投与の前に、当該分野内で公知
の任意の方法により細胞に導入される。この方法としては、以下が挙げられるが
これらに限定されない：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイ
クロインジェクション、目的の核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリ
オファージベクターを用いる感染、細胞融合、染色体媒介遺伝子移入、マイクロ
セル媒介遺伝子移入、スフェロプラスト融合、および類似の方法論（これは、レ
シピエント細胞の必要な発生機能および生理学的機能が移入により破壊されない
ことを確認する。例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ、１９９３．Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９〜６１８を参照のこと。この技術は、細胞
への核酸の安定なトランスファーを提供するはずであり、それによりこの核酸は
、この細胞によって発現可能であり、そして好ましくはその細胞子孫により遺伝
され得、そして発現され得る。
【０１０７】 本発明の好ましい実施態様において、得られた組換え細胞は、当該分野で公知
の種々の方法により患者に送達され得る。この方法としては、以下が挙げられる
が、これらに限定されない：上皮細胞の注入（例えば、皮下に）；患者への皮膚
移植片としての組換え皮膚細胞の適用および組換え血液細胞（例えば、造血幹細
胞または前駆細胞）の静脈内注入。使用のために想定される細胞の総量は、所望
の効果、患者状態などに依存し、そして当業者により決定され得る。
【０１０８】 遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞としては、任意の所望の利
用可能な細胞型が挙げられ、以下が挙げられるがそれらに限定されない：上皮細
胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞および血液細胞（
例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨
核球、顆粒球および造血幹細胞または前駆細胞（骨髄から得られる）、臍帯血、
末梢血、胎児（ｆｅｔａｌ）肝臓など）。本発明の好ましい実施態様において、
遺伝子治療のために利用される細胞は、患者の自己由来であり得る。
【０１０９】 遺伝子治療において組換え細胞が使用される特定の実施態様において、幹細胞
または前駆細胞（これは、インビトロで単離および維持され得る）が利用され得
る。そのような幹細胞としては、造血幹細胞（ＨＳＣ）、上皮組織の幹細胞（例
えば、皮膚、腸の管壁、胚性（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ）心臓筋細胞、肝臓幹細胞）
、および神経幹細胞（例えば、ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，１９９
２，Ｃｅｌｌ ７１：９７３〜９８５を参照のこと）が挙げられるがこれらに限
定されない。造血幹細胞（ＨＳＣ）に関して、ＨＳＣのインビトロでの単離、増
殖および維持を提供する任意の技術は、本発明のこの特定の実施態様において使
用され得る。以前に議論されるように、遺伝子治療のために利用されるＨＳＣは
、好ましくは患者の自己由来である。従って、非自己ＨＳＣは、好ましくは、将
来の宿主／患者の移植免疫反応を抑制する方法と組み合わせて利用される。例え
ば、Ｋｏｄｏら、１９８４、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７３：１３７７〜１
３８４を参照のこと。本発明の別の好ましい実施態様において、ＨＳＣは、患者
への投与の前に、当該分野において公知の任意の技術によって高度に富化され得
る（または、実質的に純粋な形態で産生され得る）。例えば、Ｗｉｔｌｏｃｋお
よびＷｉｔｔｅ，１９８２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７９：３６０８〜３６１２を参照のこと。
【０１１０】 （８）アンチセンスオリゴヌクレオチドの利用 本発明の特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ複合体の形成および機能は、ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１
タンパク質−ＩＰ（例えば、ＴｒｋＡ、プロテインホスファターゼ１α、１４−
３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−
１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５）についてのアンチセンス核
酸の使用によって阻害され得、そして好ましくはＮｌＫ１タンパク質およびＮｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰの両方から構成される。さらに、本発明は、ＮｌＫ１タン
パク質および／もしくはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ、またはその部分をコードす
るゲノム配列（遺伝子）もしくはｃＤＮＡに対してアンチセンスである核酸（少
なくとも６ヌクレオチド長）の治療的使用または予防的使用を開示する。そのよ
うなアンチセンス核酸は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合
体の形成または活性を阻害する治療剤としての有用性を有し、そして治療的様式
または予防的様式で利用され得る。
【０１１１】 本発明の別の特定の実施態様は、原核生物細胞または真核生物細胞内での、Ｎ
ｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ核酸配列の発現の阻害のため
の方法論を開示し、これは、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐまたはその誘導体のアンチセンス核酸の治療有効量を細胞に提供することから
構成される。
【０１１２】 本発明のアンチセンス核酸は、オリゴヌクレオチドであり得、これは、細胞に
直接投与され得るか、または外因性の導入配列の転写によってインビボで産生さ
れ得るかのいずれかである。さらに、このアンチセンス核酸は、ＮｌＫ１タンパ
ク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのｍＲＮＡのコード（すなわち、エキソン
）領域および／または非コード（すなわち、イントロン）領域に対して相補的で
あり得る。ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核
酸は、少なくとも６ヌクレオチド長であり、そして好ましくは、６〜２００ヌク
レオチド長の範囲に及ぶオリゴヌクレオチドである。特定の実施態様において、
このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なく
とも１５ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチドまたは少なくとも２００
ヌクレオチドである。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲ
ＮＡ（またはそのキメラ混合物、誘導体もしくは改変バージョン）であり得、一
本鎖または二本鎖のいずれかであり得、そして塩基、糖またはリン酸骨格部分で
改変され得る。
【０１１３】 さらに、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、他の関連する官能基（
例えば、ペプチド、細胞膜を横切るオリゴヌクレオチドの輸送を促進する部分、
ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤などを
含み得る。例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３〜６５５６；ＰＣＴ公開番号ＷＯ
８８／０９８１０を参照のこと。特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質
およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンスオリゴヌクレオチドは、触媒性Ｒ
ＮＡまたはリボザイムを含む。例えば、Ｓａｒｖｅｒら、１９９０、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ、２４７：１２２２〜１２２５を参照のこと。
【０１１４】 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下を含むがそれらに限定され
ない当該分野において公知の標準的な方法論によって合成され得る：（ｉ）自動
化ホスホロチオエート媒介オリゴヌクレオチド合成（例えば、Ｓｔｅｉｎら、１
９８８、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９を参照のこと）、または
（ｉｉ）メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御された孔ガラスポリマ
ー支持体の使用によって調製され得る（例えば、Ｓａｒｉｎら、１９８８、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ８５：７４４８〜７４５１
を参照のこと）。
【０１１５】 別の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
アンチセンス核酸は、外因性配列の転写によって細胞内で産生される。例えば、
ベクターが生成され得、これは（細胞によってエキソサイトーシスされる際に）
インビボで転写され、このようにしてアンチセンス核酸（ＲＮＡ）種を産生する
。上述のベクターは、それが転写されて所望のアンチセンスＲＮＡを産生し得る
限り、エピソーム性のままであるか、または染色体に組み込まれるようになるか
のいずれかであり得る。本発明の実施において利用されるベクターは、細菌供給
源、ウイルス供給源、酵母または当該分野において公知の他の供給源から誘導さ
れ得、これは哺乳動物細胞における複製および発現のために利用される。ＮｌＫ
１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンスＲＮＡをコードする
配列の発現は、当該分野において公知の任意のプロモーターによって促進され、
哺乳動物、好ましくはヒトの細胞において機能し得る。そのようなプロモーター
は誘導性または構成性であり得、そして以下を含むがそれらに限定されない：（
ｉ）ＳＶ４０初期プロモーター領域；（ｉｉ）ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の
３’末端長い末端反復中に含まれるプロモーター；（ｉｉｉ）ヘルペスウイルス
チミジンキナーゼプロモーター、および（ｉｖ）メタロチオネイン遺伝子の調節
配列。
【０１１６】 ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核酸は、Ｎ
ｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を発現する（または好まし
くは過剰発現する）細胞型の障害の処置または予防において予防的または治療的
に利用され得る。ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ ＲＮＡ
、またはＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４もしくはＩＰ−５ ＲＮＡを
発現または過剰発現する細胞型は、以下を含むがそれらに限定されない当該分野
において公知の種々の方法によって同定され得る：ＮｌＫ１タンパク質特異的核
酸およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ特異的核酸とのハイブリダイゼーション（例
えば、ノーザンハイブリダイゼーション、ドットブロットハイブリダイゼーショ
ン、インサイチュハイブリダイゼーションによる）、または免疫組織化学によっ
て、特定の細胞型由来のＲＮＡがインビトロでＮｌ１Ｋ１タンパク質およびＮｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰに翻訳される能力を観察することによる。好ましい局面に
おいて、患者からの一次組織は、実際の処置前に、例えば免疫組織化学またはイ
ンサイチュハイブリダイゼーションによって、ＮｌＫ１タンパク質および／また
はＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ発現についてアッセイされ得る。
【０１１７】 本発明の薬学的組成物（薬学的に受容可能なキャリア中に含まれる有効量のＮ
ｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核酸を含む）は
、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体ＲＮＡまたはタンパク
質を発現または過剰発現する型である疾患または障害を有する患者に投与され得
る。特定の障害または状態の処置において有効であるＮｌＫ１タンパク質および
／またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核酸の量は、その障害または状
態の性質に依存し、そして標準的な臨床技術によって決定され得る。可能な場合
、ヒトにおける試験および使用前に、インビトロ、次いで有用な動物モデル系に
おいてアンチセンス細胞傷害性を決定することが望ましい。特定の実施態様にお
いて、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核酸を
含む薬学的組成物は、リポソーム、マイクロパーティクルまたはマイクロカプセ
ルを介して投与され得る。例えば、Ｌｅｏｎｅｔｔｉら、１９９０、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２４４８〜２４５１を参照の
こと。
【０１１８】 （９）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体アッセイ ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体（ならびにその誘導体
、フラグメント、アナログおよびホモログ）の機能活性は、当該分野において公
知の多くの方法によってアッセイされ得る。例えば、ＮｌＫ１タンパク質・Ｎｌ
Ｋ１タンパク質複合体活性の推定モジュレーター（例えば、インヒビター、アゴ
ニストおよびアンタゴニスト）（例えば、抗ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タン
パク質−ＩＰ複合体抗体、ならびにＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰアンチセンス核酸）は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
Ｐ複合体形成および／または活性を調節する能力についてアッセイされ得る。
【０１１９】 （ｉ）イムノアッセイ 本発明の特定の実施態様において、以下についてアッセイするイムノアッセイ
に基づく方法論が開示される：野生型ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ複合体またはＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４もしくはＩＰ−５
に結合するか、それと競合する能力、あるいは（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体抗体に結合する能力。これらのイムノアッセイと
しては、以下のような技術を利用する競合アッセイ系および非競合アッセイ系が
挙げられるがそれらに限定されない：ラジオイムノアッセイ、酵素結合免疫吸着
アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、イムノラジオメ
トリックアッセイ、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチュイムノ
アッセイ（例えば、コロイド金、酵素または放射性同位体標識を使用する）、ウ
ェスタンブロット、ノーザンブロット、沈降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル
凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プ
ロテインＡアッセイおよび免疫電気泳動アッセイなど。本発明の１つの特定の実
施態様において、抗体結合は、一次抗体の標識についてアッセイすることによっ
て検出される。別の特定の実施態様において、一次抗体の結合は、一次抗体に特
異的な二次抗体（または試薬）の結合の検出によって確認される。さらなる実施
態様において、二次抗体は標識される。
【０１２０】 （ｉｉ）遺伝子発現アッセイ ＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子（内因性遺伝子お
よび組換えＤＮＡから発現される遺伝子の両方）の発現は、以下を含むがそれら
に限定されない、当該分野において公知の技術を用いて検出され得る：サザンハ
イブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション、制限エンドヌクレア
ーゼマッピング、ＤＮＡ配列分析およびポリメラーゼ連鎖反応増幅（ＰＣＲ）、
続くサザンハイブリダイゼーションまたはＲＮアーゼプロテクション（例えば、
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ １９９７（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
ＮＹ）を参照のこと）（種々の細胞型中のＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タ
ンパク質−ＩＰ遺伝子に特異的なプローブを用いる）。
【０１２１】 本発明の１つの特定の実施態様において、サザンハイブリダイゼーションを用
いて、生理学的状態または病理学的状態に対するＮｌＫ１タンパク質および／ま
たはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子変異の遺伝連鎖を検出し得る。種々の発生
段階の多くの細胞型は、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの
それらの発現（特に、同じ細胞内のＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク
質−ＩＰの付随する発現）について特徴付けられ得る。ノーザンまたはサザンブ
ロット分析のためのハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーは、使用
される特定のプローブに対して所望の程度の関係を有する核酸の検出を確認する
ために操作され得る。これらの上述の方法の改変、ならびに当該分野において周
知の他の方法は、本発明の実施において利用され得る。
【０１２２】 （ｉｉｉ）結合アッセイ ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ
は、以下を含むがそれらに限定されない、当該分野において公知の任意の方法に
よってＮｌＫ１タンパク質への結合についてアッセイされ得る：（ｉ）改変型酵
母ツーハイブリッドアッセイ系；（ｉｉ）複合体内のＮｌＫ１タンパク質に結合
する抗体を用いる免疫沈降、続く免疫沈降されたタンパク質のサイズ分画による
分析（例えば、変性または非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動による）；（
ｉｉｉ）ウェスタン分析；（ｖ）非変性ゲル電気泳動など。
【０１２３】 （ｉｉｉ）生物学的活性についてのアッセイ 本発明の特定の実施態様は、生物学的活性についての、ＮｌＫ１タンパク質の
誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログのスクリーニングのための方法
論を提供し、これは、ＮｌＫ１タンパク質の誘導体、フラグメント、アナログま
たはホモログを、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの１つ（例えば、ＴｒｋＡ、プロテ
インホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、
ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ
−５）と接触させること、ならびにこのＮｌＫ１タンパク質の誘導体、フラグメ
ント、アナログまたはホモログと、特定のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの間の複
合体の形成を検出することから構成され；ここで、この複合体の形成の検出は、
このＮｌＫ１タンパク質の誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログが、
生物学的（例えば、結合）活性を有することを示す。同様に、さらなる実施態様
は、生物学的活性についての、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメン
ト、アナログまたはホモログのスクリーニングのための方法論を開示し、これは
、このタンパク質の誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログを、ＮｌＫ
１タンパク質と接触させること；ならびにこのＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導
体、フラグメント、アナログまたはホモログとＮｌＫ１タンパク質との間の複合
体の形成を検出することを含み；ここで、この複合体の形成の検出は、このＮｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログが、生
物学的活性を有することを示す。
【０１２４】 （１０）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体活性の調節 本発明は、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体に関与する
能力を有するタンパク質部分（ＴｒｋＡ、プロテインホスファターゼ１α、１４
−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ
−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５のＮｌＫ１タンパク質）の
活性の、そのタンパク質（またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくは
ホモログ）の結合パートナーの投与による調節に関連する方法論を開示する。Ｎ
ｌＫ１タンパク質（ならびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモロ
グ）は、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの活性またはレベルを調節する能力について
アッセイされ得る。これは、ＮｌＫ１タンパク質もしくはＮｌＫ１タンパク質を
コードする核酸もしくはＮｌＫ１タンパク質を免疫特異的に結合する抗体、また
はその結合ドメインを含むその抗体の誘導体、アナログもしくはホモログを、Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子を発現する細胞と接触させるか、またはそれをＮ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子を発現する動物に投与すること、ならびにＮｌＫ
１タンパク質−ＩＰレベルまたは活性における変化を測定することにより；ここ
で、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのレベルまたは活性における変化は、ＮｌＫ１タ
ンパク質が、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのレベルまたは活性を調節する能力を有
することを示す。別の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰは、類似の
様式でＮｌＫ１タンパク質の活性またはレベルを調節する能力についてアッセイ
され得る。
【０１２５】 特定の実施態様において、ＮｌＫ１タンパク質は、細胞周期に初期に関与する
タンパク質のセリン／トレオニン残基をリン酸化するプロテインホスファターゼ
として活性である。従って、本発明のタンパク質およびタンパク質複合体は、重
要な細胞周期タンパク質に対する効果を調節（すなわち、増加または減少）させ
る能力についてスクリーニングされ得る。例えば、ＮｌＫ１タンパク質は、網膜
芽細胞腫タンパク質と相互作用することが示されている。従って、本発明のタン
パク質およびタンパク質複合体は、網膜芽細胞腫タンパク質リン酸化のレベルに
おける変化などについてアッセイすることによってスクリーニングされ得る。例
えば、Ｍｉｌｎｅら、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９２５３〜
９２６０を参照のこと。さらに、ＮｌＫ１タンパク質は、有糸分裂のすべての段
階を含む細胞周期間に、中心体と結合することが示されている。例えば、Ｆｒｙ
ら、１９９８、ＥＭＢＯ Ｊ．１７：４７０〜４８１を参照のこと。従って、本
発明のタンパク質およびタンパク質複合体は、中心体に対する効果を調節（すな
わち、増加または減少）する能力についてスクリーニングされ得る。
【０１２６】 さらに、ＴｒｋＡは、ニュートロフィン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｎ）の神経成長
因子（ＮＧＦ）の生物学的特性を媒介するシグナル伝達レセプターの本質的成分
である。他のＴｒｋＡ物質としては以下が挙げられる：ホスホリパーゼＣ、ＰＩ
−３キナーゼ、ＳＨＰ−２、Ｒａｓ ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質、およびＥ
ＲＫ。ＴｒｋＡは、神経系、結腸癌、甲状腺腫瘍および黒色腫の増殖を含むがこ
れらに限定されない多くの腫瘍の増殖に関係する。従って、本発明のタンパク質
およびタンパク質複合体は、ＴｒｋＡが、その基質の生物学的特性および機能を
もたらす能力を調節（すなわち、増加または減少）する能力についてスクリーニ
ングされ得る。プロテインホスファターゼ１α（ＰＰ１α）は、いくつかのシグ
ナル伝達プロセス（細胞周期進行および神経伝達物質レセプター活性を含む）に
影響を及ぼすプロテインホスファターゼである。特に、ＰＰ１αは、いくつかの
タンパク質（網膜芽細胞腫タンパク質、Ｈｏｘ１１、ＤＡＲＰＰ−３２および毒
素を含む）と相互作用する。従って、本発明のタンパク質およびタンパク質複合
体は、これらのタンパク質に対するＰＰ１αの効果を調節する能力についてスク
リーニングされ得る。
【０１２７】 １４−３−３εタンパク質は、シグナル伝達および／または細胞周期調節およ
び腫瘍形成に関与する一定の範囲の細胞性タンパク質と結合（ａｓｓｏｃｉａｔ
ｅ）する。さらに、１４−３−３εは、アルツハイマー病およびクロイツフェル
ト−ヤーコプ病を有する患者の脳において存在する。従って、本発明の複合体お
よびタンパク質は、細胞周期調節ならびに神経変性性疾患および障害に対する１
４−３−３εの効果を調節する能力についてスクリーニングされ得る。ユビキチ
ン特異的加水分解酵素−ホモログタンパク質ＩＰ−３は、細胞性タンパク質の分
解に関係する。従って、本発明のタンパク質およびタンパク質複合体は、細胞性
タンパク質の分解に影響を及ぼすＩＰ−３の推定の能力を調節する能力について
スクリーニングされ得る。
【０１２８】 α−トロポミオシンは、アクチンおよび／またはトロポニンに結合する筋肉の
構造タンパク質であり、そしてそのホモログタンパク質ＩＰ−２は、類似の特性
を有することが示されている。トロポミオシンは、悪性に形質転換した細胞およ
び他の腫瘍においてダウンレギュレートされることが見出され、そしてα−トロ
ポミオシン（および他の構造細胞骨格タンパク質）についての遺伝子における変
異は、家族性肥大型心筋症の原因として同定された。従って、本発明の複合体お
よびタンパク質は、α−トロポミオシン、ＩＰ−２の発現、ならびにα−トロポ
ミオシン、ＩＰ−２がアクチンおよび／またはトロポニンに結合する能力を調節
する能力についてスクリーニングされ得る。ビメンチンタンパク質は、中間フィ
ラメントにアセンブリする。ビメンチンフィラメントは、多くの腫瘍において示
されており、そしてビメンチンは、移動（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）、浸潤および転
移に関与すると考えられる。従って、本発明のタンパク質およびタンパク質複合
体は、ビメンチンが、中間フィラメントにアセンブリする能力を調節する能力、
ならびに腫瘍の移動、浸潤および転移に対するビメンチンの効果を調節する能力
についてスクリーニングされ得る。さらに、ビメンチンは、種々の癌のマーカー
として利用され得る。
【０１２９】 ＩＰ−１は、中間フィラメント結合タンパク質に対するタンパク質ホモログ、
およびケラチンに対するホモログである。中間フィラメントは、多くの腫瘍にお
いて見出され、そして移動、浸潤および転移に関与すると考えられる。従って、
本発明のタンパク質およびタンパク質複合体は、ＩＰ−１が中間フィラメントと
結合する能力を調節する能力、ならびに腫瘍の移動、浸潤および転移に対するＩ
Ｐ−１の効果を調節する能力についてスクリーニングされ得る。さらに、ＩＰ−
１は、種々の癌のマーカーとして利用され得る。
【０１３０】 ｐ００７１タンパク質（Ａｒｍａｄｉｌｌｏタンパク質）は、細胞間接着接合
部プラーク（デスモソーム）と結合される。従って、本発明のタンパク質および
タンパク質複合体は、デスモソームプラークと結合するｐ００７１の能力を調節
する能力についてスクリーニングされ得る。さらに、ＮｌＫ１タンパク質・Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ複合体および個々のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰは、デスモ
ソームプラークとのｐ００７１結合のレベルにおける変化についてアッセイする
ことによって（例えば、抗ｐ００７１抗体を用いるイムノアッセイによって）ス
クリーニングされ得る。
【０１３１】 インテグラーゼ相互作用因子１（Ｉｎｉ−１）タンパク質は、ＨＩＶ−１イン
テグラーゼと相互作用し、そしてそれを活性化することが実証された。従って、
本発明のタンパク質およびタンパク質複合体は、Ｉｎｉ−１が、ＨＩＶ−１組込
みおよび複製に影響を及ぼす能力を調節する能力についてスクリーニングされ得
る。
【０１３２】 （１１）ＮｌＫ１関連処理アッセイ （ｉ）腫瘍形成 ＮｌＫ１タンパク質、およびＮｌＫ１タンパク質の同定された結合パートナー
（ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）のいくつかは、細胞増殖、従って細胞形質転換お
よび腫瘍形成の制御において役割を有する。従って、本発明は、ＮｌＫ１タンパ
ク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ（なら
びに、それらの誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ）を、細胞増殖
、細胞形質転換および／または腫瘍形成をインビトロおよびインビボで変化させ
る能力についてスクリーニングするための方法論を開示する。例えば、細胞増殖
は、3Ｈ−チミジン取り込みを測定することによって、直接的な細胞カウントに
よって、既知の遺伝子（例えば、癌原遺伝子（例えば、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｍｙｃ
）細胞周期マーカーなど）の転写活性における変化を検出することによってアッ
セイされ得るがこれらに限定されない。
【０１３３】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体およびＮｌＫ１タンパ
ク質−ＩＰ（ならびに、それらの誘導体、フラグメント、アナログおよびホモロ
グ）はまた、インビトロで細胞形質転換（または悪性表現型への進行）を誘導ま
たは阻害することにおける活性についてスクリーニングされ得る。本発明のタン
パク質およびタンパク質複合体は、正常な表現型を有する細胞（細胞形質転換に
ついてのアッセイのため）または形質転換された細胞表現型（細胞形質転換の阻
害についてアッセイするため）のいずれかを、本発明のタンパク質またはタンパ
ク質複合体と接触させること、および以下を含むがそれらに限定されない形質転
換された表現型と関連する特徴（インビボで腫瘍形成能と関連するインビトロで
の特徴のセット）の獲得または損失について細胞を試験することによってスクリ
ーニングされ得る：軟寒天におけるコロニー形成、より丸くなった細胞形態、よ
りゆるい下層付着、接触阻害の損失、固定依存の損失、プロテアーゼ（例えば、
プラスミノーゲンアクチベーター）の放出、増加された糖輸送、低減された血清
要求、胎児性抗原の発現、２５０Ｋｄａｌの細胞表面タンパク質の消失など。例
えば、Ｌｕｒｉａら、１９７８、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第３版（
Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ）を参照のこと
。
【０１３４】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体（ならびに、それらの
誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ）はまた、非ヒト試験動物にお
いてインビボで腫瘍形成を促進または阻害する能力についてスクリーニングされ
得る。過剰増殖性障害（例えば、腫瘍形成および転移の広がり）の非常に多くの
動物モデルが、当該分野において公知である。例えば、Ｌｏｖｅｊｏｙら、１９
９７、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ． １８１：１３０〜１３５を参照のこと。本発明の特
定の実施態様において、タンパク質およびタンパク質複合体は、非ヒト試験動物
（好ましくは、１つの型の腫瘍を発達させる傾向にある試験動物）に投与され得
、そして後に、この非ヒト試験動物は、本発明のタンパク質またはタンパク質複
合体を投与されなかったコントロール動物と比較して増加した発生数の腫瘍形成
について試験される。あるいは、このタンパク質およびタンパク質複合体は、腫
瘍を保有する非ヒト試験動物（例えば、悪性細胞、新生物性細胞もしくは形質転
換された細胞の導入によって、または発癌物質の投与によって腫瘍が誘導されて
いる動物）に投与され得、そして引き続いて、コントロールと比較した腫瘍退行
について試験動物内の腫瘍を試験する。従って、一旦、過剰増殖性疾患または障
害が、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体活性の調節による
処置を受けやすいことが示されると、その疾患または障害は、ＮｌＫ１タンパク
質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体形成を調節する治療剤の投与によって処置
または予防され得る。
【０１３５】 （ｉｉ）神経変性疾患 本発明の実施態様において、本発明の治療剤は、（ｉ）インビトロでの培養細
胞または（ｉｉ）以下を含むがそれらに限定されない試験動物：神経変性疾患の
症状を示すか、または神経変性疾患の症状を発症する傾向にあるアルツハイマー
病のＰＤＡＰＰトランスジェニックマウスモデル（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗ
ｏｏｄら、１９９７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：
１５５０〜１５５５を参照のこと）、に治療剤を投与すること、およびこの治療
剤の投与後にその神経変性疾患のその症状または傾向における変化を測定するこ
とによって、神経変性疾患の処置または予防における活性についてアッセイされ
得る。ここで、その神経変性疾患のその症状の傾向もしくは重篤度における減少
、またはその神経変性疾患のその症状の予防は、その治療剤が、神経変性疾患を
処置または予防することにおいて活性を有することを示す。
【０１３６】 神経変性疾患についてのこのような培養細胞モデルの特定の実施態様としては
、以下が挙げられるがこれに限定されない：罹患したおよび罹患していない個々
のヒト由来の培養ラット内皮細胞（例えば、Ｍａｎｅｉｒｏら、１９９７、Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９：５−１
２を参照のこと）であって、これには以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：罹患したおよび罹患していない個々のヒト由来の培養ラット内皮細胞（例え
ば、Ｍａｎｅｉｒｏら、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９：５−１２を参照のこと）；Ｐ１９マウス胚性癌
腫細胞（例えば、Ｈｕｎｇら、１９９２、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃ
ｉ ＵＳＡ ８９：９４３９−９４４３を参照のこと）、およびマイネルトの基
底核由来のコリン作用性ニューロンの解離細胞培養物（例えば、Ｎａｋａｊｉｍ
ａら、１９８５、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２：６３
２５−６３２９を参照のこと）。
【０１３７】 神経変性疾患のこのような試験動物モデルの特定の実施態様としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：部分的１６トリソミーマウス（例えば、
Ｈｏｌｔｚｍａｎら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９３：１３３３３−１３３３８を参照のこと）、両側性（ｂｉｌａｔｅｒａ
ｌ）基底核大型細胞病変ラット（例えば、Ｐｏｐｏｖｉｃら、１９９６、Ｉｎｔ
．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８６：２８１−２９９を参照のこと）；加齢ラット（
例えば、Ｍｕｉｒ、１９９７、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａ
ｖ．５６：６８７−６９６を参照のこと）；アルツハイマー病のＰＤＡＰＰトラ
ンスジェニックマウスモデル（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、１９９７
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１５５０−１５５５
を参照のこと）、および実験的自己免疫性痴呆（例えば、Ｏｒｏｎら、１９９７
、Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ．Ｔｒａｎｓｍ．４９：７７−８４を参照のこと）。
【０１３８】 従って、一旦、神経変性疾患または神経変性障害がＮｌＫ１タンパク質・Ｎｌ
Ｋ１タンパク質−ＩＰ複合体活性の調節による処置に対して感受性であることが
示されると、この疾患または障害を、ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質
−ＩＰ複合体の形成および／または生物学的機能を調節する治療剤の投与により
処置または予防し得る。
【０１３９】 （（ｉｉｉ）心筋症） 先に考察したように、α−トロポミオシンは、肥大型心筋症および関連障害に
関連付けられる。さらに、α−トロポミオシンに対するその全体的な相同性の程
度に起因して、ＩＰ−２タンパク質もまた、これらの上述の障害に関連付けられ
得る。従って、本発明の１つの実施態様では、心筋症の指標または症状を示す（
ｉ）培養細胞（インビトロにおいて）または（ｉｉ）動物モデルを治療剤と接触
させる工程、および引き続いて、この治療剤と接触した細胞における指標または
試験動物の症状のレベルを、このように接触されなかった細胞におけるこの指標
または試験動物におけるこの症状のレベルと比較する工程であって；ここで、こ
の接触した細胞または試験動物におけるこれらのレベルの減少が、この治療剤が
心筋症および関連障害を処置または予防するにおいて活性を有することを示す工
程により、心筋症（および関連障害）を処置または予防するにおける活性につい
て治療剤をアッセイし得る。
【０１４０】 本発明の実施において利用される培養細胞の例としては、以下が挙げられるが
、これらに限定されない：新生児または成体由来の培養心筋細胞（例えば、Ｗａ
ｌｌら、１９９６、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３０６：１６５−１７４
を参照のこと）および自己免疫性心筋炎における培養自己反応性Ｔ−リンパ球（
例えば、Ｐｅｒｅｚ−Ｌｅｉｒｏｓら、１９９７、Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏ
ｄｕｌａｔｉｏｎ ４：９１−９７を参照のこと）。本発明の別の実施態様では
、治療剤が、心筋症を処置または予防するにおいて活性を有するか否かを決定す
るために利用され得る試験動物の例として、以下が挙げられるが、これらに限定
されない：アリール炭化水素レセプターを欠損した心筋症のマウスモデル（例え
ば、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｓａｌｇｕｅｒｏら、１９９７、Ｖｅｔ．Ｐａｔｈｏ
ｌ．３４：６０５−６１４を参照のこと）；マウスにおける実験的自己免疫性心
筋炎（例えば、Ｐｅｒｅｚ−Ｌｅｉｒｏｓら、１９９７、Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎ
ｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ４：９１−９７を参照のこと）、トロポモジュリン（
ｔｒｏｐｏｍｏｄｕｌｉｎ）を過剰発現するトランスジェニックマウス（例えば
、Ｓｕｓｓｍａｎら、１９９８、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１：５１−
６１を参照のこと）、Ｉ型アデニンヌクレオチド輸送体で免疫したモルモット（
例えば、Ｄｏｒｎｅｒら、１９９７、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７
４：２６１−２６９を参照のこと）、およびＭＬＰ欠損マウス（例えば、Ａｒｂ
ｅｒら、１９９７、Ｃｅｌｌ ８８：３９３−４０３を参照のこと）。
【０１４１】 （（ｉｖ）ウイルス感染） ＮｌＫ１タンパク質反応体（ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）であるＩｎｉ−１は
、ＡＩＤＳウイルスであるＨＩＶ−１についての機構を含むウイルス感染機構と
強力に関連付けられる。極めて多くのヒト疾患が、ビルレントおよび日和見ウイ
ルス感染の結果である。従って、本発明のＮｌＫ１関連タンパク質およびタンパ
ク質複合体、核酸、ならびに抗体を、インビトロアッセイおよびインビボアッセ
イの使用により、ウイルス性疾患を処置または予防するにおける活性について試
験し得る。
【０１４２】 詳細には、本発明の治療剤を、ウイルス感染反応の指標または症状を示す（ｉ
）培養細胞（インビトロにおいて）または（ｉｉ）動物モデルを治療剤と接触さ
せる工程、およびこの治療剤と接触した細胞におけるこの指標または試験動物の
この症状のレベルを、このように接触されなかった細胞におけるこの指標または
試験動物におけるこの症状のレベルと比較する工程であって；ここで、この接触
した細胞または試験動物におけるより低いレベルは、この治療剤がウイルス感染
および／またはウイルス性疾患を処置または予防するにおいて活性を有すること
を示す工程により、ウイルス性疾患および／またはウイルス感染を処置または予
防するにおける活性についてアッセイし得る。
【０１４３】 このようなアッセイに使用され得るインビトロ細胞培養モデルとしては、以下
が挙げられるが、これらに限定されない：Ｔ−リンパ球のウイルス感染（例えば
、Ｓｅｌｉｎら、１９９６、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：２４８９−２４９９
を参照のこと）；脱分化した肝細胞癌細胞のＢ型肝炎感染（例えば、Ｒａｎｅｙ
ら、１９９７、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：１０５８−１０７１を参照のこと）、お
よびＣＤ４+リンパ球性細胞株の同期的（ｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ）ＨＩＶ−１
感染（例えば、Ｗａｉｎｂｅｒｇら、１９９７、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３３：３
６４−３７３を参照のこと）。このようなアッセイに利用され得る本発明の動物
モデルとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：マウスの神経栄
養性（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）ウイルス感染（例えば、Ｂａｒｎａら、１９
９６、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２３：３３１−３４３を参照のこと）；マウスの脳
心筋炎感染（例えば、Ｈｉｒａｓａｗａら、１９９７、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：
４０２４−４０３１を参照のこと）、およびマウスのサイトメガロウイルス（Ｃ
ＭＶ）感染（例えば、ＯｒａｎｇｅおよびＢｉｒｏｎ、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１５６：１１３８−１１４２を参照のこと）。
【０１４４】 （（ｖ）代謝障害） 本発明の特定の実施態様では、ＮｌＫ１関連タンパク質、タンパク質複合体、
核酸、および抗体（ならびに、それらの誘導体、フラグメント、アナログ、およ
びホモログ）を、インビトロアッセイおよびインビボアッセイの使用によって、
糖尿病性ニューロパシー、解糖障害、コレステロール輸送に関連する障害、なら
びに関連の障害および疾患の処置または予防における活性について試験し得る。
【０１４５】 本発明の治療剤を、（ｉ）培養細胞（インビトロにおいて）または（ｉｉ）動
物モデルを治療剤と接触させる工程、およびこの治療剤と接触した細胞における
疾患指標または試験動物の症状のレベルを、このように接触されなかった細胞ま
たは動物におけるこの指標のレベルと比較する工程であって；ここで、この接触
した細胞またはこの試験動物におけるより低いレベルは、この治療剤が糖尿病ま
たはその後遺症を処置または予防するにおいて活性を有することを示す工程によ
って、糖尿病またはその後遺症を処置または予防するにおける活性についてアッ
セイし得る。
【０１４６】 細胞培養モデルの特定の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定され
ない：（ｉ）糖尿病−糖尿病に罹患したおよび罹患していないヒト由来の培養ラ
ット内皮細胞（例えば、Ｂａｚａｎら、１９９７、Ｔｈｅｒａｐｉｅ ５２：４
４７−４５１を参照のこと）、および（ｉｉ）コレステロール輸送−培養チャイ
ニーズハムスター卵巣細胞（例えば、Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄら、１９９８、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：４２６６−４２７４を参照のこと）。動物モデルの
特定の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）糖尿病
−ＩＬ−２発現トランスジェニックマウス（例えば、ＥｌｌｉｏｔおよびＦｌａ
ｖｅｌｌ、１９９４、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：１６２９−１６３７を参照
のこと）、および（ｉｉ）コレステロール輸送−高コレステロール血症の肥満マ
ウスモデル（例えば、Ｈａｓｓｅｌ、１９９８、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉ
ｄｏｌ．９：７−１０を参照のこと）。
【０１４７】 （（１２）タンパク質−タンパク質相互作用アッセイ） 本発明は、ＮｌＫ１タンパク質への結合について、ＮｌＫ１タンパク質相互作
用タンパク質（ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）の誘導体、フラグメント、アナログ
、およびホモログをアッセイおよびスクリーニングするための方法論を開示する
。ＮｌＫ１タンパク質と相互作用するＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラ
グメント、アナログ、およびホモログを、酵母ツーハイブリッドアッセイ系（Ｆ
ｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４０：２４５−２４６
を参照のこと）か、または；好ましくは、その改変および改善（米国特許出願番
号第０８／６６３，８２４号（１９９６年６月１４日出願）および同第０８／８
７４，８２５号（１９９７年６月１３日出願）（これらは共に、Ｎａｎｄａｂａ
ｌａｎらに対してであって、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍ
ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉ
ｏｎｓ ｔｈａｔ Ｏｃｃｕｒ ｉｎ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｉｄ
ｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｔｈｅｓｅ
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」と表題付けられ、そしてこれを、本明細書中でその
全体において参考として援用する）に記載のような）により同定し得る。
【０１４８】 改善された酵母ツーハイブリッド系による、相互作用タンパク質の同定は、レ
ポーター遺伝子（本明細書中以降、「レポーター遺伝子」）の発現の検出に基づ
く。このレポーター遺伝子の転写は、転写調節因子の半分にそれぞれ融合した２
つのタンパク質の相互作用による転写調節因子の再構築に基づく。ベイトＮｌＫ
１タンパク質（または誘導体、フラグメント、アナログ、またはホモログ）およ
びプレイタンパク質（ベイトタンパク質と相互作用する能力について試験される
タンパク質）は、それぞれ、ＤＮＡ結合ドメインに対する融合タンパク質、およ
び転写調節因子ドメインに対する融合タンパク質（またはその逆）として発現さ
れる。本発明の特定の実施態様では、プレイ集団は、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
の変異体（例えば、部位特異的変異誘発またはヌクレオチド配列中において変異
を生成する別の方法により生成される）をコードする１つ以上の核酸であり得る
。好ましくは、プレイ集団は、ＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、また
は合成的に生成されたＤＮＡ）によりコードされるタンパク質である。例えば、
この集団を、哺乳動物ＲＮＡ由来のｃＤＮＡ集団の中の特徴付けられていないサ
ンプルに由来するｃＤＮＡ配列を含むキメラ遺伝子から発現し得る。別の特定の
実施態様では、無作為なペプチドを発現する組換えの生物学的ライブラリーを、
プレイ核酸の供給源として使用し得る。
【０１４９】 本発明は、相互作用タンパク質（ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ）のインヒビター
についてスクリーニングするための方法を開示する。簡潔には、タンパク質−タ
ンパク質相互作用アッセイを、１つ以上の候補分子の存在下で実施されることを
除いて、本明細書中で先に記載した様に実施し得る。１つ以上の候補分子が存在
しない場合に存在したレポーター遺伝子活性と関連して、レポーター遺伝子活性
において結果として生じた増加または減少は、この候補分子が相互作用する対に
対して効果を発揮することを示す。好ましい実施態様では、タンパク質相互作用
の阻害は、例えば、非弱毒化タンパク質相互作用がＵＲＡ３遺伝子の活性化を引
き起こして、化学的５−フルオロオロチン酸を含有する培地において酵母を死滅
させる場合に、酵母細胞を生存させるために必要である。例えば、Ｒｏｔｈｓｔ
ｅｉｎ、１９８３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０１：１６７−１８０を参照
のこと。
【０１５０】 一般的に、ベイトおよびプレイ集団を含むタンパク質を、融合（キメラ）タン
パク質として、好ましくは予め選択された配列に隣接して各タンパク質を含むキ
メラコード配列の組換え発現によって提供する。１つの集団について、予め選択
された配列はＤＮＡ結合ドメインであり、これは、それがプロモーター内のＤＮ
Ａ配列（例えば、転写アクチベーターまたはインヒビター）を特異的に認識する
限り、任意のＤＮＡ結合ドメインであり得る。他の集団について、予め選択され
た配列は、それぞれ、転写アクチベーターまたはインヒビターのアクチベーター
ドメインまたはインヒビタードメインである。調節ドメイン単独（タンパク質配
列への融合物としてでなく）およびＤＮＡ結合ドメイン単独（タンパク質配列へ
の融合物としてでなく）は、好ましくは、アッセイにおいて偽陽性を回避するた
めに検出可能には相互作用しない。このアッセイ系はさらに、転写アクチベータ
ー（または、インヒビター）のＤＮＡ結合ドメインに対する結合部位を含むプロ
モーターに作動可能に連結されたレポーター遺伝子を含む。従って、本発明の実
施において、プレイ融合タンパク質へのＮｌＫ１タンパク質融合タンパク質の結
合は、転写アクチベーター（または、インヒビター）の再構築へと導き、これは
同時に、レポーター遺伝子の発現を活性化（または、阻害）する。
【０１５１】 特定の実施態様では、本発明は、１つ以上のタンパク質−タンパク質相互作用
を検出するための方法論を開示し、これは以下の工程を包含する：（ｉ）第１の
接合型でかつＮｌＫ１タンパク質配列およびＤＮＡ結合ドメインを含む第１の融
合タンパク質を保有する酵母細胞の第１の集団において、ＮｌＫ１タンパク質（
または、その誘導体、フラグメント、アナログ、またはホモログ）を組換え的に
発現させる工程であって；ここで、この第１の酵母細胞の集団は、このＤＮＡ結
合ドメインにより認識される１つ以上のＤＮＡ結合部位によって「駆動」される
プロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列を含み、その結果
、この第１の融合タンパク質の第２の融合タンパク質（転写活性化ドメインを含
む）との相互作用は、この第１のヌクレオチド配列の転写の増加を生じる、工程
；（ｉｉ）この第１の集団において、この第１のヌクレオチド配列のこの転写の
増加が、この第２の融合タンパク質の非存在下で生じるそれらの酵母細胞を排除
するようにネガティブ選択する工程；（ｉｉｉ）この第１の接合型とは異なる第
２の接合型の酵母細胞の第２の集団において、複数のこの第２の融合タンパク質
を組換え的に発現させる工程であって；ここで、この第２の融合タンパク質は、
ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体、フラグメント、アナログ、またはホモログ
の配列、および転写アクチベーターの活性化ドメインからなり、ここで活性化ド
メインは、この第２の融合タンパク質の各々において同じである、工程；（ｉｖ
）この酵母細胞の第１の集団を、この酵母細胞の第２の集団と接合させて、二倍
体の酵母細胞の第３の集団を形成する工程であって、ここでこの二倍体の酵母細
胞の第３の集団は、このＤＮＡ結合ドメインにより認識されるＤＮＡ結合ドメイ
ンによって「駆動」されるプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオ
チド配列を含み、その結果、第１の融合タンパク質の第２の融合タンパク質との
相互作用がこの第２のヌクレオチド配列の転写の増加を生じ、ここでこの第１お
よび第２のヌクレオチド配列は同じかまたは異なり得る、工程；および（ｖ）こ
の第１および／または第２のヌクレオチド配列のこの転写の増加を検出する工程
であって、これにより、第１の融合タンパク質と第２の融合タンパク質との間の
相互作用を検出する、工程。
【０１５２】 好ましい実施態様では、ベイト（ＮｌＫ１タンパク質配列）およびプレイ（キ
メラ遺伝子のライブラリー）を、固形培地上で約６〜８時間の期間、２つの酵母
株を接合させることにより組み合わせる。さほど好ましくはない実施態様では、
接合を、液体培地において実施する。生じる二倍体は、キメラ遺伝子の両方の型
（すなわち、ＤＮＡ結合ドメイン融合物および活性化ドメイン融合物）を含む。
相互作用集団を得た後、別々の反応においてＤＮＡ結合ドメインハイブリッドま
たは活性化ドメインハイブリッドのいずれかを増幅する方法により、相互作用タ
ンパク質の対をコードするＤＮＡ配列を単離する。好ましくは、ＤＮＡ結合ドメ
インハイブリッドまたは活性化ドメインハイブリッドのいずれかに対して特異的
なオリゴヌクレオチドプライマーの対を利用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ
；例えば、Ｉｎｎｉｓら、１９９０、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を参照のこと）に
よって、増幅を実施する。ＰＣＲ増幅反応をまた、相互作用タンパク質対を発現
するプールされた細胞、好ましくは相互作用物のプールされたアレイにおいて実
施し得る。当該分野において公知の他の増幅方法もまた使用され得、これには、
リガーゼ連鎖反応；ＱＢ−レプリカーゼなどが挙げられるが、これらに限定され
ない。例えば、Ｋｒｉｃｋａら、１９９５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｉｎ
ｇ、Ｂｌｏｔｔｉｎｇ，ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ）を参照のこと。
【０１５３】 本発明のさらなる実施態様では、ＤＮＡ結合ドメインハイブリッドおよび活性
化ドメインハイブリッドのタンパク質をコードするプラスミドをまた、当該分野
において周知の任意の方法により単離およびクローン化し得る。例えば、制限の
ためではなく、シャトル（酵母からＥ．ｃｏｌｉへ）ベクターを使用して融合タ
ンパク質を発現させる場合、酵母ＤＮＡをＥ．ｃｏｌｉ内に形質転換する工程お
よびこの細菌からプラスミドを回収する工程により、遺伝子を引き続いて回収し
得る。例えば、Ｈｏｆｆｍａｎら、１９８７、Ｇｅｎｅ ５７：２６７−２７２
を参照のこと。
【０１５４】 （（１３）薬学的組成物） 本発明は、薬学的に有効量の本発明の治療剤を被験体に投与することによって
、処置および予防する方法を開示する。好ましい実施態様では、治療剤は実質的
に精製され、そして被験体は哺乳動物、最も好ましくはヒトである。薬学的組成
物はさらに、医学的状態を処置するための医薬の製造において使用され得る。
【０１５５】 治療剤が核酸を含む場合に使用され得る処方物および投与方法を、上記の第６
（ｉ）節および第６（ｉｉ）節に記載する。種々の送達系が公知であり、そして
本発明の治療剤を投与するために使用され得る。これには、以下が挙げられるが
、これらに限定されない：（ｉ）リポソーム、微粒子、マイクロカプセルでのカ
プセル化；（ｉｉ）治療剤を発現し得る組換え細胞；（ｉｉｉ）レセプター媒介
性エンドサイトーシス（例えば、ＷｕおよびＷｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと）；（ｉｖ）レトロウイルス
または他のベクターの一部分としての治療剤核酸の構築、など。投与の方法とし
ては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：皮内経路、筋内経路、腹腔
内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路、および経口経路。本
発明の治療剤を、都合の良い任意の経路により（例えば、注入またはボーラス注
射により、上皮または粘膜皮膚の内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸管
粘膜など）を通した吸着により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤
と共に投与され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、脳室内
注射および髄腔内注射を含む任意の適切な経路により、中枢神経系内にこの治療
剤を投与することは有利であり得る。脳室内注射は、レザバー（例えば、オマヤ
レザバー）に装着した脳室内カテーテルにより容易にされ得る。肺投与はまた、
吸入器またはネブライザ、およびエアロゾル化薬剤を伴う処方物の使用によって
利用され得る。処置の必要な領域に対して局所的に治療剤を投与することもまた
、所望され得る；これは、例えば、限定のためではなく、外科手術の間の局所的
注入、局所的適用、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプ
ラントにより、達成され得る。特定の実施態様では、投与は、悪性腫瘍または新
生物形成組織もしくは前新生物組織の部位（または前方の部位）での直接注射に
より得る。
【０１５６】 本発明の別の実施態様では、治療剤を小胞（詳細には、リポソーム）中で送達
し得る。例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７
−１５３３を参照のこと。なお別の実施態様では、治療剤を、以下を含むがこれ
らに限定されない制御放出系で送達し得る：送達ポンプ（例えば、Ｓａｕｄｅｋ
ら、１９８９、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照のこと）
および半透性のポリマー物質（例えば、Ｈｏｗａｒｄら、１９８９、Ｊ．Ｎｅｕ
ｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５を参照のこと）。さらに、制御放出系を治療標的（
例えば、脳）の近傍に配置し得、このようにして全身用量の一部分のみを必要と
させる。例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、１９８４（ＣＲＣ Ｐｒｅｓ
ｓ、Ｂｏｃｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬ）を参照のこと。
【０１５７】 治療剤がタンパク質をコードする核酸である場合の本発明の特定の実施態様で
は、治療剤核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築すること、およびこ
れを細胞内になるように投与すること（例えば、レトロウイルスベクターの使用
、直接注射、微粒子ボンバードメント、脂質もしくは細胞表面レセプターまたは
トランスフェクト剤でのコーティング、あるいは核に進入することが公知である
ホメオボックス様ペプチドに連結してそれを投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏ
ｔら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８
６４−１８６８を参照のこと）などによる）によって、治療剤核酸をインビボで
投与して、そのコードするタンパク質の発現を促進し得る。あるいは、核酸治療
剤を細胞内に導入し得、そして相同組換えによって、発現のために宿主細胞ＤＮ
Ａ内に取りこませ得る。
【０１５８】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療的有効量
の治療剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場
合、用語「薬学的に受容可能な」は、連邦政府もしくは州政府の監督官庁により
認可されているか、または動物、より好ましくはヒトにおける使用について、Ｕ
．Ｓ．薬局方もしくは他の一般に認識される薬局方に列挙されていることを意味
する。用語「キャリア」は、治療剤と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦
形剤、またはビヒクルをいい、そしてこれには、水および油のような滅菌液が挙
げられるが、これに限定されない。
【０１５９】 特定の障害または状態の処置に有効な本発明の治療剤の量は、障害または状態
の性質に依存し、そして標準的な臨床技術により、当業者によって決定され得る
。さらに、最適な投薬量範囲を同定するのを促進するために、インビトロアッセ
イを必要に応じて使用し得る。処方物において使用される正確な用量はまた、投
与経路および疾患または障害の全体的な重篤度に依存し、そして医師の判断およ
び各患者の状況に従って決定されるべきである。しかし、本発明の治療剤の静脈
内投与に適切な投薬量範囲は、一般に、体重１キログラム（Ｋｇ）あたり約２０
〜５００マイクログラム（μｇ）の活性化合物である。鼻腔内投与に適切な投薬
量範囲は、一般に、約０．０１ｐｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重である。有
効用量を、インビトロ試験系または動物モデル試験系から導き出される用量応答
曲線から外挿し得る。坐剤は、一般に、０．５％重量〜１０％重量の範囲で活性
成分を含み；経口処方物は、好ましくは、１０％〜９５％の活性成分を含む。
【０１６０】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物および治療剤の１つ以上の成分で満たさ
れた１つ以上の容器を含む、薬学的パックまたは薬学的キットを提供する。必要
に応じて、薬学的製品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する
政府官庁により定められた形態の通知をこのような容器に添付し得る。この通知
は、ヒト投与物についての製造、使用、または販売の官庁による認可を反映する
。
【０１６１】 （（１４）特定の実施例） （（ｉ）ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の同定） 改変して改善した酵母ツーハイブリッド系を使用して、本発明のタンパク質相
互作用を同定した。酵母は真核生物であり、従って、この系の型で検出される任
意の分子間タンパク質相互作用は、生理学的条件下で生じるタンパク質相互作用
を実証する。例えば、Ｃｈｉｅｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：９５７８−９５８１を参照のこと。発現ベクターを、
２つのハイブリッドタンパク質をコードするように構築した。本発明の「逆」ス
クリーニング方法論では、ＮｌＫ１タンパク質の一部をＧａｌ４アクチベーター
ドメインに融合し、そして哺乳動物ｃＤＮＡライブラリーのプレイタンパク質配
列をＤＮＡ結合ドメインに融合した。次いで、生じるベクターの各々を、当該分
野において周知の技術を使用することにより、酵母の補完的な接合型（ａ接合型
およびα接合型）に挿入した。例えば、Ｃｈｉｅｎら、１９９１、前出を参照の
こと。接合を実施して、同一の酵母細胞内に両方のベクター構築物を発現させ、
このようにしてタンパク質−タンパク質相互作用を引き起こした。ベイトドメイ
ンとプレイドメインとの間の相互作用は、Ｇａｌ４についてのｃｉｓ−結合エレ
メントを含むレポーター遺伝子の転写活性化を導いた。指標タンパク質であるβ
−ガラクトシダーゼ、およびウラシルおよびヒスチジンの栄養素要求株について
の代謝マーカーをコードするレポーター遺伝子を、接合において利用される酵母
株の一方または他方において特定の様式で含ませた。この様式において、酵母を
、首尾良い接合、両方の融合構築物の発現、およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの
発現について選択した。相互作用領域を含むことが見出された酵母クローンを、
９６ウェルマイクロタイタープレートの個々のウェルにおいて選択および増殖し
た。次いで、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ配列を含むプラスミドを単離し、そして
特徴付けた。
【０１６２】 プレイｃＤＮＡを、１．５×１０6の独立した単離体の胎児脳ｃＤＮＡライブ
ラリーから得た。このライブラリーを、Ｘｈｏ−１消化し、そしてＴ１５でプラ
イムした胎児脳のｍＲＮＡ（５つの雄／雌の１９〜２２週齢胎児由来）から合成
した。このｍＲＮＡは、トリプトファン生合成において欠損している酵母の選択
のためのＴＲＰ１遺伝子を含む、酵母のＧａｌ４活性化ドメインクローニングベ
クターであるｐＢＤ−ＧＡＬ４（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ、Ｃ
Ａ）中に、方向付けられてクローン化されていた。
【０１６３】 ２つの逆スクリーニングを実施して、それぞれ２０および２２のベイトタンパ
ク質のアレイに対するプレイｃＤＮＡ産物の相互作用を試験した。ベイトは、図
１の［配列番号１］および［配列番号２］にそれぞれ示されるように、ＮｌＫ１
タンパク質のカルボキシル末端領域をコードするヌクレオチド１０８９〜１４７
２からなるＮｌＫ１タンパク質のヌクレオチド配列によりコードされた。ＮｌＫ
１タンパク質を、酵母ツーハイブリッドスクリーニングを使用することにより得
た。ここでは、これを、網膜芽細胞腫（Ｒｂ）−相互作用物として使用した。
【０１６４】 次いで、導入されたベイトをコードする核酸を、酵母株Ｎ１０６ｒ（以下の接
合型：
【０１６５】
【化１】 ）内への酢酸リチウム−ポリエチレングリコール媒介形質転換（例えば、Ｉｔｏ
ら、１９８３、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３−１６８を参照のこと
）によって発現させ；一方、プレイ配列を酵母株ＹＵＬＨ（接合型ａ、ｕｒａ３
、ｈｉｓ３、ｌｙｓ２、Ａｄｅ２、ｔｒｐ１、ｌｅｕ２、ｇａｌ４、ｇａｌ８０
、ＧＡＬ１−ＵＲＡ３、ＧＡＬ１−ｌａｃＺ）内への形質転換により導入した。
次いで、２つの形質転換した酵母集団を、当該分野で標準的な方法を使用して接
合させた。例えば、Ｓｈｅｒｍａｎら、１９９１、Ｇｅｔｔｉｎｇ Ｓｔａｒｔ
ｅｄ ｗｉｔｈ Ｙｅａｓｔ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ、ＮＹ）を参照のこと。簡潔には、適切なプラスミドの存在について選択され
た培地上で、中間期から後期対数期まで酵母を増殖させた。次いで、２つの接合
型（αおよびａ）を、ＹＡＰＤ培地で希釈し、ニトロセルロースメンブレン上で
濾過し、そして３０℃にて６〜８時間インキュベートした。次いで、酵母細胞を
、所望される二倍体（すなわち、β−ガラクトシダーゼ、ウラシル栄養素要求株
およびヒスチジン栄養素要求株について酵母が保有するレポーター遺伝子、なら
びにベイトおよびプレイをコードするベクターの発現）について選択的な培地に
移した。次いで、接合産物を、アデニンおよびリジンを欠く（首尾良い接合物の
選択を容易にするため）、ロイシンおよびトリプトファンを欠く（ベイトおよび
プレイ両方のプラスミドによりコードされる遺伝子の発現についての選択を容易
にするため）、ならびにウラシルおよびヒスチジンを欠く（タンパク質相互作用
についての選択を容易にするため）合成完全（ＳＣ）培地（例えば、Ｋａｉｓｅ
ｒら、１９９４、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照のこと）に、プレーティング
した。この上述の化合物を含む培地を、ＳＣ選択培地（本明細書中以降、「ＳＣ
Ｓ培地」）という。
【０１６６】 選択クローンを、β−ガラクトシダーゼの発現について試験して、ＮｌＫ１タ
ンパク質・ＮｌＫ１−ＩＰ相互作用の形成を確認した。次いで、フィルター−リ
フト（ｆｉｌｔｅｒ−ｌｉｆｔ）β−ガラクトシダーゼアッセイを、Ｂｒｅｅｄ
ｅｎおよびＮａｓｍｙｔｈ（１９８５、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：６４３〜６５０）の改変されたプロトコルによ
って実施した。コロニーを、ＳＣＳプレート上にパッチし、一晩増殖させ、そし
てＷｈａｔｍａｎ番号１フィルター上にレプリカプレートし（ｒｅｐｌｉｃａ−
ｐｌａｔｅｄ）た。続いて、このレプリカフィルターを、β−ガラクトシダーゼ
活性についてアッセイした（すなわち、陽性であったコロニーを、可視的な青に
した）。
【０１６７】 タンパク質相互作用について陽性であったコロニー内の細胞は、ＤＮＡ結合プ
ラスミドおよび活性化ドメインプラスミドの混合物を含み、そしてこれらの細胞
を、個々にプレート化し、そして９６ウェルマイクロタイタープレートの個々の
ウェルにおいて単一の単離物として再増殖した。１０マイクロリットル（μｌ）
の各単離物を溶解し、ｐＡＣＴ２プラスミドおよびｐＢＤ−ＧＡＬ４プラスミド
内に含まれるインサートを、各ベクターの隣接配列に特異的なプライマーを使用
するＰＣＲによって増幅し、そして各インサート配列の約２００アミノ末端ヌク
レオチドを、ＡＢＩ Ｍｏｄｅｌ ３７７シークエンサーを使用して決定した。
既知の配列に対する比較を、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｍａｔｉｏｎを通じて公に利用可能な「ＢＬＡ
ＳＴ」コンピュータプログラムを使用して作製した。
【０１６８】 ヌクレオチド１０８９〜１４７２からなるＮｌＫ１タンパク質のフラグメント
を利用する次のスクリーニング手順の間、５つの固有の単離物を同定し、これが
、ヌクレオチド１７６、１８２、２００、２２４および２３０（図２［配列番号
３］および表１に示される通り）で始まる、既知のＴｒｋオンコジーン（Ｔｒｋ
Ａ）核酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ０３５４１）と同一であることを決定
した。他の同定した配列は、以下を含んだ：（ｉ）ヌクレオチド３０、３３、３
６、４８、９３、９６および１５０（図３［配列番号５］に示される通り）で始
まる、プロテインホスファターゼＩα配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ６３９６
０）に同一な８つの単離物；（ｉｉ）ヌクレオチド２１４（２つの単離物)、２
２３（４つの単離物）および４２７（図４［配列番号７］に示される通り）で始
まる、１４−３−３ε配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ２８９３６）に同一な７
つの単離物；（ｉｉｉ）ヌクレオチド５３５（図５［配列番号９］に示される通
り）で始まる、α−トロポミオシン配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ１９７１３
）に同一な２つの単離物；（ｉｖ）ヌクレオチド５８１（図６［配列番号１１］
に示されると通り）で始まる、ビメンチン配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５６
１３４）に同一な１つの単離物；（ｖ）ヌクレオチド７０８（３つの単離物）お
よび７１１（図７［配列番号１３］に示される通り）で始まる、ｐ００７１配列
（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ８１８８９）に同一な４つの単離物；（ｖｉ）ヌク
レオチド２８９（図８［配列番号１５］に示される通り）で始まる、Ｉｎｉ−１
配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ０４８４７）に同一な１つの単離物；（ｖｉｉ
）ヌクレオチド１（図９［配列番号１７］に示される通り）で始まる、ＥＳＴＳ
ｃｇ３０１５３．１．ｇ５配列（本明細書中でＩＰ−１といわれる）に同一な
１つの単離物；（ｖｉｉｉ）ヌクレオチド３３７（図１０［配列番号１９］に示
される通り）で始まる、本明細書中でＩＰ−２といわれる１つの単離物；（ｉｘ
）ヌクレオチド５１４（図１１［配列番号２１］に示される通り）で始まる、本
明細書中でＩＰ−３といわれる配列に同一な１つの単離物；（ｘ）ヌクレオチド
１（１５の単離物）、４（３つの単離物）、４０（３つの単離物）、４３、５２
および６４（図１２［配列番号２３］に示される通り）で始まる、ｃｇ５０６４
８．ｅ３配列（本明細書中でＩＰ−４といわれる）に同一な２４の単離物、なら
びに（ｘｉ）ヌクレオチド１（図１３［配列番号２５］に示される通り）におい
て、ｃｇ５０４２４．ｂ２配列（本明細書中でＩＰ−５といわれる）に同一な１
つの単離物。本明細書中に先に議論されるように、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−
３、ＩＰ−４またはＩＰ−５のヌクレオチド配列は、先行技術中に決して開示さ
れておらず、そして新規な遺伝子の配列であると考えられる。ＩＰ−１、ＩＰ−
２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５およびそれらの対応する推定アミノ酸配
列の決定された核酸配列は、図２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、
１２および１３にそれぞれ示されている。本明細書中で同定されたＮｌＫ１タン
パク質相互作用物（ｉｎｔｅｒａｃｔａｎｔ）は、表１に示される。
【０１６９】 （（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質相互作用物の特異性の確認） ベイト（ｂａｉｔ）：プレイ（ｐｒｅｙ）相互作用についての特異性の全体の
程度を決定するために、２つの一般的なアッセイを実施した。第１のアッセイに
おいて、Ｎ１０６ｒ酵母細胞を生成し、これは、ＮｌＫ１タンパク質をコードす
る個々のプラスミドを発現した。これらの酵母細胞を、ＳＣＳプレート上に置き
、一晩増殖し、そして増殖について試験した。５つ全てのタンパク質について増
殖は見出されなかった。従って、これらが、「自己活性化」タンパク質ではない
ことを確認した（すなわち、これらのタンパク質は、機能的な活性化複合体のた
めに第２のタンパク質ドメインと相互作用する必要がある）。
【０１７０】 第２のアッセイにおいて、ＴｒｋＡを含むプラスミド、プロテインホスファタ
ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５のインサー
トを、ＹＵＬＨ酵母株（接合型ａ）中に形質転換し、そしてＮｌＫ１タンパク質
以外のタンパク質を発現する酵母株Ｎ１０６（接合型α）と接合した。乱交雑の
バインダー（すなわち、非特異的様式において多くの他のタンパク質と結合し得
るインサート）は、非ＮｌＫ１タンパク質ドメインと非特異的様式で相互作用し
、そして続いて非特異的相互作用物として捨てられる。本発明の相互作用物のい
ずれもが、以下の段落に記載されるタンパク質以外のタンパク質への結合を示さ
なかった。
【０１７１】 上述の検出される相互作用を繰り返すために、そしてさらにそれらの特異性を
実証するために、ＮｌＫ１タンパク質についての単離されたベイトプラスミドを
使用して、酵母Ｎ１０６ｒ（接合型α）を形質転換した。ＴｒｋＡ、プロテイン
ホスファターゼｌα、１４−３−３、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００
７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５由
来の相互作用するドメインを、ＹＵＬＨ株（接合型ａ）中に形質転換した。形質
転換体を再増幅し、そして接合を実施して、同定されたＮｌＫ１タンパク質・Ｎ
ｌＫ１タンパク質−ＩＰ相互作用を繰り返した。図１４に示されるように、Ｎｌ
Ｋ１タンパク質は、上述のＮｌＫ１タンパク質−ＩＰと特定の様式で複合体化す
ることを示した。さらに、ＮｌＫ１タンパク質はまた、ＣＤＫ２タンパク質およ
びベクターコントロールと非特異的に反応しないことを示した。図１４に例示さ
れるように、ＮｌＫ１タンパク質の行（上）と、ＴｒｋＡ、プロテインホスファ
ターゼｌα、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、
Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５の列との
交点は、増殖（すなわち、陽性タンパク質−タンパク質相互作用）を示すが、Ｎ
ｌＫ１タンパク質の行と、ＣＤＫ２およびベクターコントロールについての列と
の交点は、増殖を示さない（すなわち、タンパク質−タンパク質相互作用なし）
。ｐ２７（Ｋｉｐ１）を使用するコントロールもまた、いずれのＮｌＫ１タンパ
ク質相互作用タンパク質との反応も示さない（列ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＴｒ
ｋＡ、プロテインホスファターゼｌα、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、
ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−
４またはＩＰ−５、またはベクターとの交点）。対称的に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
の交点は、ＣＤＫ２を用いて増殖（すなわち、陽性タンパク質−タンパク質相互
作用）を示す。
【０１７２】 （（ｉｉｉ）ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５をコー
ドする配列の分析） ヒトＥＳＴをコードする配列のアセンブリおよび同一性検索についての一般的
手順を、公に利用可能なＥＳＴアセンブリデータベース（例えば、Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔ
ｉｏｎ（Ｎ．Ｃ．Ｂ．Ｉ．）ＢｌａｓｔＮ ２．０プログラム）を使用して実施
した。Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３
〜４１０を参照のこと。
【０１７３】 少なくとも３０ヌクレオチドから構成される末端配列にわたって核酸レベルで
９５％以上の同一性と整列することが実証された配列を、そのアラインメントが
目的のＥＳＴ配列の５’伸長または３’伸長を生じる場合に、利用した。一旦、
この第１のアセンブリ手順を完了すると、伸長した配列を、再度、付加した伸長
に対する新たな可能な相同性を検出するために、ＢｌａｓｔＮ ２．０プログラ
ムを使用して比較に供した。この配列は、アセンブルした配列の伸長を可能にす
る関連配列がもはや検出しなくなるまで両方向で伸長した。
【０１７４】 次いで、アセンブルしたＥＳＴ配列を、データベース類似性検索によるタンパ
ク質コード領域の同定のために、ＢｌａｓｔＮ ２．０プログラムを使用してさ
らなる相同性検索に供した。例えば、ＧｉｓｈおよびＳｔａｔｅｓ，１９９３．
Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３：２６６〜２７２を参照のこと。ＢｌａｓｔＮ ２．０
プログラムは、６つ全てのリーディングフレームにおいてＤＮＡ配列を翻訳し、
そして翻訳されたタンパク質配列とタンパク質データベース内の配列とを比較す
る。統計学的な有意性は、問い合わせ配列中の１つのリーディングフレーム全体
の等価物がタンパク質をコードすること、および有意なアラインメントがコード
リーディングフレームのみを含むことの仮定の下で評価される。高いスコア付け
セグメント対を生成するこれらの配列のみが、ＢｌａｓｔＮ ２．０プログラム
結果において示される。
【０１７５】 さらに、この配列を、独自のソフトウェアを使用してオープンリーディングフ
レーム（ＯＲＦ）について分析した。これは、標準的な遺伝コードを使用して（
アセンブルされた）ＤＮＡ配列の６つ全てのリーディングフレーム中のＤＮＡ配
列を翻訳する。相互作用ＥＳＴを、方向的にクローンしたライブラリーから得、
従って、アセンブルしたＥＳＴの翻訳の方向は、５’から３’配向であることが
知られる。得られた翻訳物中で、フレーム１〜３において見出された全てのＯＲ
Ｆを、分析した。以下から構成されることが見出されたＯＲＦを、可能なタンパ
ク質産物であると決定し、そしてＢｌａｓｔＮ ２．０プログラムを使用してタ
ンパク質データベース中の配列と比較した：（ｉ）開始コドンに続いて５０アミ
ノ酸より大きいアミノ酸配列か、または（ｉｉ）５’末端で開始メチオニンを有
さないＯＲＦ。
【０１７６】 さらなるタンパク質配列分析を、適切なＯＲＦの選択後に実施した。次いで、
タンパク質配列を、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＢＬＯＣＫＳおよびＰＲＯＤＯＭモチーフ
データベース中に存在する、以前に特徴付けられたタンパク質ドメインと比較し
た。例えば、ＮａｋａｉおよびＫａｎｅｈｉｓａ，１９９２．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ
１４：８９７〜８９１；ＷａｌｌａｃｅおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２．
Ｃａｂｉｏｓ ８：２４９〜２５４を参照のこと。ＢＬＩＭＰＳプログラムは、
ＢＬＯＣＫＳ中のエントリーに一致を見出し；ここで、ＢＬＯＣＫＳ分析は、タ
ンパク質中に見出された類似の配列ドメインを整列し、そして対応するタンパク
質ファミリーを表す。ＢｌａｓｔＮ ２．０プログラムは、ＰＲＯＤＯＭデータ
ベース中のエントリーに一致を見出し；ここで、ＰＲＯＤＯＭ分析は、高い同一
性および類似性を有するタンパク質ドメインを構成するアラインメントを提示す
る。Ｐｒｏｓｉｔｅ−Ｓｃａｎプログラムは、ＰＲＯＳＩＴＥデータベース中の
エントリーに一致を見出し；ここで、ＰＲＯＳＩＴＥ分析は、より短い機能的ド
メイン（例えば、ミリスチル化部位もしくはリン酸化部位または標的化シグナル
）を示す。
【０１７７】 （（ａ）ＩＰ−１（ＥＳＴ ｃｇ３０１５３．ｇ５）） ＮｌＫ１タンパク質と相互作用することが見出された、本発明の１つの同定さ
れたプレイ配列は、ＥＳＴ ｃｇ３０１５３．ｇ５（５５２ヌクレオチドのヒト
ｃＤＮＡクローン）と同一であった。ｃｇ３０１５３．ｇ５配列に対して同一で
あったかまたは高度に相同性であったいかなる他の発現配列も、見出されなかっ
た。ＥＳＴ ｃｇ３０１５３．ｇ５は、５’方向または３’方向のいずれへも伸
長し得なかった。
【０１７８】 検索を、ＩＰ−１ヌクレオチド配列を用いて実施し、そして細胞骨格に結合す
るタンパク質に対する有意な相同性を示した。６１％の同一性（ヌクレオチド６
８〜４５３）を、ヒトプレクチン（ｐｌｅｃｔｉｎ）遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登
録番号Ｚ５４３６７［遺伝子］、Ｕ６３６１０［遺伝子、エキソン３〜３２０］
およびＵ５３２０４［ｍＲＮＡ］）で観察した。さらに、ヌクレオチド６６〜３
４４の６４％の同一性を、ラットα−インターネキシン（α−ｉｎｔｅｒｎｅｘ
ｉｎ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５２０１７）に見出した。
【０１７９】 ヌクレオチド１〜３６３由来のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を翻
訳し得、そして得られたタンパク質をＩＰ−１と命名した。この上述の翻訳フレ
ームは、開始メチオニンコドン（ＡＴＧ）も停止コドンも有さなかった。従って
、これは、タンパク質のコア領域を示し得る。ＩＰ−１配列を用いるＢｌａｓｔ
Ｎ ２．０検索を、以下に示した：（ｉ）ヒト高硫黄ケラチン（ＧｅｎＢａｎｋ
登録番号Ｘ６３７５５）に対するアミノ酸残基２０〜７４の４２％同一性および
５０％類似性；（ｉｉ）ＫＡＰ５．４ケラチンタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録
番号Ｘ７３４３４）に対するアミノ酸５１〜９７の５１％類似性、ならびに（ｉ
ｉｉ）メタロチオネイン（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６７３４７）に対する６４
％相同性を示す２５アミノ酸（アミノ酸残基６８〜９２）。ＰＲＯＤＯＭプログ
ラムを使用する検索はまた、高硫黄ケラチンに対する相同性を示した（アミノ酸
残基５１〜９４の３８％相同性およびアミノ酸残基６６〜１０５に対する４５％
相同性）。ＩＰ−１ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、図９に例示される
［それぞれ、配列番号１７および１８］。
【０１８０】 中間フィラメント結合タンパク質（例えば、プレクチン、インターネキシンお
よびケラチン）に対するＩＰ−１の相同性は、非常に見込みがある。これは、ビ
メンチン（中間フィラメントタンパク質）およびｐ００７１（接着接合部のタン
パク質）が、ＮｌＫ１タンパク質の別の相互作用物であると見出されたという事
実に起因する。さらに、ＰＲＯＳＩＴＥ分析は、ＩＰ−１のＯＲＦ内に３つのリ
ン酸化部位および１つのＮ−ミリスチル化部位を示した。
【０１８１】 従って、ＮｌＫ１タンパク質相互作用物であるＩＰ−１は、中間フィラメント
結合タンパク質に対する相同性を有する新規なタンパク質のコア領域を示す。
【０１８２】 （（ｂ）ＩＰ−２（ＥＳＴ ＡＡ１４３４６７）） ＮｌＫ１タンパク質と相互作用することが見出された、本発明の別の同定され
たプレイ配列は、最小の４つのヒトＥＳＴ：ＡＩ９２９３８２（ヌクレオチド１
〜５３３）、ＡＡ１４３４６７（ヌクレオチド３１０〜９０７）、Ｈ８３７６９
（ヌクレオチド６４４〜１０６２）およびＷ１９８９２（ヌクレオチド９９８〜
１６０１）、を使用して１６０１ヌクレオチドまで伸長し得る。ＩＰ−２ヌクレ
オチド配列およびアミノ酸配列は、図１０に例示される［それぞれ、配列番号１
９および２１］。
【０１８３】 公知のタンパク質に対する有意な相同性は、ＢｌａｓｔＮ ２．０プログラム
によるＩＰ−２配列を使用して全く検出されなかった。オープンリーディングフ
レーム（ＯＲＦ）は、ヌクレオチド１２２〜１０５４（３１１アミノ酸残基ＯＲ
Ｆ）から翻訳され得ることが見出され、そして得られたタンパク質を、ＩＰ−２
と命名した。このＩＰ−２ ＯＲＦは、ヌクレオチド４２８まで開始メチオニン
コドン（ＡＴＧ）を有さなかった。従って、これは、ＥＳＴ配列のさらなる５’
伸長の後にタンパク質のカルボキシ末端を示し得る。ＩＰ−２は、収縮性系タン
パク質のアミノ末端領域に対してアミノ酸残基１７〜８９の２８％同一性および
４６％類似性を示した。ＰＲＯＤＯＭデータベースを利用するドメイン検索は、
骨格筋由来のα−トロポミオシン鎖のアミノ末端領域に対する３２％同一性およ
び４７％類似性を示した。この結果は、α−トロポミオシンがＮｌＫ１タンパク
質との相互作用物であることを見出したという事実に起因して見込まれる。
【０１８４】 従って、ＮｌＫ１タンパク質相互作用物であるＩＰ−２は、新規なトロポミオ
シンホモログタンパク質を示し得る。
【０１８５】 （（ｃ）ＩＰ−３） ＮｌＫ１タンパク質と相互作用することが実証された、本発明のさらなる同定
されたプレイ配列は、ＥＳＴ Ｈ６７９８５（ヒト胎児肝臓／脾臓ライブラリー
由来の３７１ヌクレオチド配列）（これは、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロ
ラーゼとして機能し得る）と同一であることが見出された（例えば、Ｈｉｌｌｉ
ｅｒら、１９９５．Ｗａｓｈ Ｕｎｉｖ．−Ｍｅｒｃｋ ＥＳＴ Ｐｒｏｊｅｃ
ｔを参照のこと）。このＥＳＴの５’末端を、ＥＳＴ ＡＡ２５５８６１（ＮＣ
Ｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｔｏｍｙ Ｐｒｏｊｅｃｔ，１９９７
Ｔｕｍｏｒ Ｇｅｎｅ Ｉｎｄｅｘ）を用いて伸長し得、そしてこの３’末端
を、ＥＳＴ ＡＡ２５１５２８（ＮＣＩ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａ
ｔｏｍｙ Ｐｒｏｊｅｃｔ，１９９７ Ｔｕｍｏｒ Ｇｅｎｅ Ｉｎｄｅｘ）用
いて伸長し得、アセンブリされたＥＳＴ ９４１ヌクレオチド長を得た。９４１
ヌクレオチドの完全なアセンブリされたＥＳＴ配列を図１１に示し、ＥＳＴ Ｈ
６７９８５の核酸配列を太字（ヌクレオチド２６９〜７０１）で示し、ＥＳＴ
ＡＡ２５５８６１（アセンブリされたＥＳＴのヌクレオチド１〜４２９）の核酸
配列を、イタリック体で示し、そしてＥＳＴ ＡＡ２５１５２８の核酸配列を、
アセンブリされた発現配列のヌクレオチド５２４で始まる下線によって示した。
【０１８６】 近年、本明細書中に開示される配列が、ＫＩＡＡ１０９７タンパク質、部分的
ｃｄｓ−４２７１ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＢ０２９０２０）についての
Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍＲＮＡの配列と同一であることが見出された。そ
の配列は、ＧｅｎＢａｎｋに、１９９９年８月４日に加えられたので、その機能
的な役割について報告されたものは何もない。
【０１８７】 アセンブルされたＥＳＴのヌクレオチド配列は、ユビキチンカルボキシル末端
ヒドロラーゼホモログＥＳＴに対して高い相同性を示した。詳細には、ＥＳＴ
ＡＡ２３６８２２は、ヌクレオチド９〜９８に対する９４％同一性を示し；ＥＳ
Ｔ ＡＡ０８１７０９は、ヌクレオチド３３６〜６７４に対する９８％同一性を
示し；ＥＳＴ ＡＡ５９２３３７は、ヌクレオチド１〜１８３に対する８７％同
一性を示し；ＥＳＴ ＡＡ４１０２１６は、ヌクレオチド１〜７４に対する９４
％同一性を示し、そしてＥＳＴ Ｒ５２７６５は、ヌクレオチド５９７〜９４１
に対する９９％同一性を示した。それにもかかわらず、アセンブルされたＥＳＴ
のさらなる伸長のために利用され得る配列は、全くなかった。このＩＰ−３ヌク
レオチド配列およびアミノ酸配列は、図１１に示される［それぞれ、配列番号２
１および２２］。
【０１８８】 翻訳されたタンパク質が、ヌクレオチド６７〜９３９由来のオープンリーディ
ングフレーム（ＯＲＦ）（２９１アミノ酸ＯＲＦ）を含むことを見出し、そして
ＩＰ−３と命名した。この翻訳フレームは、開始メチオニンコドン（ＡＴＧ）を
有したが、停止コドンを有さなかった。従って、これは、タンパク質のアミノ末
端領域を示し得る。ＰＲＯＤＯＭプログラムを利用するドメイン検索を実施し、
そしてユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ１、２、３および４に対する同
一性を示した。これらの同一性は、アミノ酸残基１７と１７２との間の領域内に
全て示され、そして３８％同一性および５５％類似性を示した。さらに、ＰＲＯ
ＤＯＭ検索は、ＰＲＯＳＩＴＥ分析を用いる良好な一致にあることを見出した。
これは、いくつかのリン酸化部位およびＮ−ミリスチル化部位に加えて、ユビキ
チンカルボキシル末端ヒドロラーゼファミリー２サインを示した。
【０１８９】 従って、ＮｌＫ１タンパク質相互作用物であるＩＰ−３は、新規なユビキチン
プロセシング酵素ホモログを示す。
【０１９０】 （（ｄ）ＩＰ−４（ＥＳＴ ｃｇ５０６４８ｅ３）） ＮｌＫ１タンパク質と相互作用することが見出された、本発明の別の同定され
たプレイ配列は、ＥＳＴ ｃｇ５０６４８ｅ３（４３９ヌクレオチドのヒトｃＤ
ＮＡクローン）であった。ＥＳＴ ｃｇ５０６４８ｅ３は、ＥＳＴ Ｍ６２０４
２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ６２０４２；例えば、Ａｄａｍｓら、１９９１．
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：１６５１〜１６５６を参照のこと）に対する高い程度
の同一性を示すことが示された。従って、発現配列を、以下のようにアセンブル
した。ｃｇ５０６４８ｅ３のヌクレオチド１〜７０を、ＥＳＴ Ｍ６２０４２ヌ
クレオチド１〜４７２を有する３’末端で伸長し、発現配列５４２ヌクレオチド
長を得た。さらなる相同性検索は、他の公開されたＥＳＴ配列に対する有意な相
同性を生じなかった。従って、伸長された発現配列は、さらに伸長され得なかっ
た。ＩＰ−４ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、図１２に示される［それ
ぞれ、配列番号２３および２４］。
【０１９１】 ５４２ヌクレオチドの伸長された配列は、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅ
ｌｅｇａｎｓコラーゲンコード遺伝子Ｃｏｌ−２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｖ０
０１４８）に対する６５％同一性（ヌクレオチド５５〜２９７）を示した。ヌク
レオチド１５４〜４３５の６２％同一性は、ヒトジンクフィンガー転写調節因子
に見出された（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ９２８４４）。
【０１９２】 ヌクレオチド２〜３１６（１０５アミノ酸ＯＲＦ）由来のオープンリーディン
グフレーム（ＯＲＦ）は、メチオニン開始コドンをプロセスしないことを示した
。従って、これは、本明細書中でＩＰ−４と命名されたタンパク質中のカルボキ
シル末端領域を示し得る。リーディングフレーム＋２中のＯＲＦは、Ｈｏｍｏ
ｓａｐｉｅｎｓＥＳＴ０００９８遺伝子、最後のエキソン−７６６ｂｐ（Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ登録番号Ｙ１７４５０）についてのデータベース中でタンパク質配列を
伸長する。ＥＳＴ０００９８エキソンについてのアミノ酸配列は、たった５７ア
ミノ酸長であるが、本明細書中に開示される配列は、１０５アミノ酸を有する。
タンパク質ＥＳＴ０００９８とＩＰ−４との間の１００％の重複は、ＩＰ−４の
カルボキシ末端領域で見出され；アミノ酸１〜４８は、ＥＳＴ０００９８に対す
る伸長である。いかなる他のタンパク質に対する有意な相同性も見出されなかっ
た。リーディングフレーム＋１および＋３におけるＯＲＦが存在するが、公知の
タンパク質に対する相同性が見出され得なかった。
【０１９３】 従って、ＮｌＫ１タンパク質相互作用物であるＩＰ−４は、新規なタンパク質
を示す。
【０１９４】 （（ｅ）ＩＰ−５（ＥＳＴ ｃｇ５０４２４ｂ２）） ＮｌＫ１タンパク質と相互作用することが実証された、なお別の同定されたプ
レイ配列は、ＥＳＴ ｃｇ５０４２４．ｂ２（４４１ヌクレオチドのヒトｃＤＮ
Ａクローン）と同一であることが見出された。さらなる相同性検索により、公開
された他のＥＳＴ配列に対する有意な同一性を得ず、そしてＥＳＴ ｃｇ５０４
２４．ｂ２は、５’方向または３’方向において伸長し得なかった。ＩＰ−５ヌ
クレオチド配列およびアミノ酸配列は、図１３に示される［それぞれ、配列番号
２５および２６］。
【０１９５】 ヌクレオチド１〜２４６由来のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（８
２アミノ酸ＯＲＦ）は翻訳されることが見出され、そしてＩＰ−５と命名した。
２３６ヌクレオチドにわたるヌクレオチドレベルの９８％同一性（ＩＰ−５中の
４４１ｂｐから、両端で分かれる）を、ヒトガングリオシド誘導分化関連タンパ
ク質１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｙ１７８４９０）−１０８４ｂｐ、３５８ａａ
、に対して見出した。アミノ酸レベルにおいて、７８アミノ酸にわたる９６％同
一性（ＩＰ−５中の８２ａａから、両端で分かれる）。ＩＰ−５は、ヒトガング
リオシド誘導分化関連タンパク質１のスプライス改変体を示し得た。現在、脳に
おいて同定されたヌクレオチド配列および核酸配列を除いて、ヒトガングリオシ
ド誘導分化関連タンパク質１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｙ１７８４９０）につい
て、公的に利用されている情報は存在しない。
【０１９６】 一致して、ＮｌＫ１タンパク質相互作用物であるＩＰ−５は、ヒトガングリオ
シド誘導分化関連タンパク質１に対するホモログまたはスプライス改変体を示す
。
【０１９７】 本発明は、本明細書中に記載される特定の実施態様によって範囲を制限される
べきではない。実際、本明細書に記載の改変に加えて、本発明の種々の改変は、
上述の説明および添付の図面から、当業者に明らかになる。このような改変は、
添付の特許請求の範囲内にあることが意図される。
【０１９８】 種々の刊行物は、本明細書に引用され、そしてその開示は、それらの全体にお
いて、参考として援用される。
【０１９９】
【表１】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、ＮｌＫ１タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ１１０５０）のヌク
レオチド配列（配列番号１）および関連推定アミノ酸配列（配列番号２）である
。ベイト（ｂａｉｔ）フラグメント（ヌクレオチド１０８９〜１４７２（太字で
示される）から構成される）は、第６節（上記）における改変型酵母ツーハイブ
リッドアッセイ系において利用された。
【図２】 図２は、Ｔｒｋ癌遺伝子（ＴｒｋＡ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ０３５４１
）のヌクレオチド配列（配列番号３）および関連推定アミノ酸配列（配列番号４
）である。下線を付したヌクレオチドは、同定されたプレイ（ｐｒｅｙ）配列の
５’末端開始部位を示し、これは、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用
され、これは、ヌクレオチド１７６、１８２、２００、２２４および２３０にて
生じる（アミノ酸残基１〜６４１）。
【図３】 図３は、タンパク質ホスファターゼ−１α（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ６３９
６０）のヌクレオチド配列（配列番号５）および関連推定アミノ酸配列（配列番
号６）である。矢印は、同定されたプレイ配列の５’末端開始部位を示し、これ
は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、これは、ヌクレオチド３
０、３３、３６、４８、９３、９６および１５０にて生じる（アミノ酸残基１、
２、３、７、２２、２３、または４１〜３３０）。さらに、相互作用ドメイン第
１のアミノ酸に下線を付す。
【図４】 図４は、１４−３−３εタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ２８９３６）
のヌクレオチド配列（配列番号７）および関連推定アミノ酸配列（配列番号８）
である。矢印は、同定されたプレイ配列の５’末端開始部位を示し、これは、改
変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、これは、ヌクレオチド２１４、
２２３および４２７にて生じる（アミノ酸残基７２、７５および１４３〜２６３
）。さらに、相互作用ドメイン第１のアミノ酸に下線を付す。
【図５】 図５は、α−トロポミオシン（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ１９７１３）のヌク
レオチド配列（配列番号９）および関連推定アミノ酸配列（配列番号１０）であ
る。プレイ配列は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、ヌクレオ
チド５３５で開始し（アミノ酸残基１６１〜３４７）、矢印によって示される。
さらに、相互作用ドメイン第１のアミノ酸に下線を付す。
【図６】 図６は、ビメンチンタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５６１３４）のヌ
クレオチド配列（配列番号１１）および関連推定アミノ酸配列（配列番号１２）
である。プレイ配列は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、ヌク
レオチド５８１で開始し（アミノ酸残基１８０〜４６６）、矢印によって示され
る。さらに、相互作用ドメイン第１のアミノ酸に下線を付す。
【図７】 図７は、ｐ００７１タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ８１８８９）のヌ
クレオチド配列（配列番号１３）および関連推定アミノ酸配列（配列番号１４）
である。プレイ配列は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、ヌク
レオチド７０８および７１１で開始し（それぞれ、アミノ酸残基１８９および１
９０からアミノ酸残基１２０８まで）、矢印によって示される。さらに、相互作
用ドメイン第１のアミノ酸に下線を付す。
【図８】 図８は、インテグラーゼ相互作用因子１タンパク質（Ｉｎｉ−１）（ＧｅｎＢ
ａｎｋ登録番号Ｕ０４８４７）のヌクレオチド配列（配列番号１５）および関連
推定アミノ酸配列（配列番号１６）である。プレイ配列は、改変型酵母ツーハイ
ブリッド系において利用され、ヌクレオチド２８９で開始し（アミノ酸残基７４
〜３８５）、矢印によって示される。さらに、相互作用ドメイン第１のアミノ酸
に下線を付す。
【図９】 図９は、ＩＰ−１タンパク質（ＥＳＴ ｃｇ３０１５３．ｇ５）のヌクレオチ
ド配列（配列番号１７）および関連推定アミノ酸配列（配列番号１８）である。
プレイ配列は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、ヌクレオチド
１（矢印で示される）で開始する。この配列は、開始コドンを示さず、それゆえ
、アミノ酸１位の残基を、太字によって示し、従って、この配列がアミノ末端の
方向に伸長されテイルはずであることを示す。さらに、この配列は、停止コドン
を有しない。そのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（ヌクレオチド１〜
３６４を含む）は、細胞性細胞骨格と関連するタンパク質に対する相同性を保有
するタンパク質のコア部分をコードする。
【図１０】 図１０は、ＩＰ−２タンパク質のヌクレオチド配列（配列番号１９）および関
連推定アミノ酸配列（配列番号２０）である。プレイ配列は、改変型酵母ツーハ
イブリッド系において利用され、ヌクレオチド３３７で開始し、太字で示される
。ＩＰ−２のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（フレーム＋２）（ヌク
レオチド１２２〜１０５４を含む）は、３１１アミノ酸残基のタンパク質をコー
ドする。メチオニン開始コドンは、４２８位のみに見出される。メチオニン開始
コドンが見出されず、従って５’末端への伸長がありそうであることに留意のこ
と。
【図１１】 図１１は、ＩＰ−３タンパク質のヌクレオチド配列（配列番号２１）（全９４
１ヌクレオチドからなる）および関連推定アミノ酸配列（配列番号２２）である
。プレイは、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、ヌクレオチド５
１４で開始し、矢印によって示される。ＥＳＴ Ｈ６７９８５配列の核酸配列は
太字のつづりで示され（ヌクレオチド２６９〜７０１）、ＥＳＴ ＡＡ２５５８
６１（アセンブルされたＥＳＴのヌクレオチド１〜４２９）は斜字で示され、そ
してＥＳＴ ＡＡ２５１５２８は、下線で示され、これは、アセンブルされ発現
された配列のヌクレオチド５２４で開始する。オープンリーディングフレーム（
ＯＲＦ）は、ヌクレオチド６７から９３９まで翻訳され得、全部で２９１のアミ
ノ酸残基を含む。この配列は停止コドンを有さず、従って、これは、ユビキチン
カルボキシル末端ヒドロラーゼに対する相同性を保有するタンパク質のアミノ末
端領域を示す。
【図１２】 図１２は、ＩＰ−４タンパク質のヌクレオチド配列（配列番号２３）（全部で
５４２ヌクレオチドを含む）および関連推定アミノ酸配列（配列番号２４）であ
る。ｃｇ５０６４９ｅ３のヌクレオチド１〜７０が、その３’末端でＥＳＴ Ｍ
６２０４２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ６２０４２）のヌクレオチド１〜４７２
で伸長された。プレイ配列は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され
、ヌクレオチド１、４、４０、４４、５４および６５で開始し、矢印によって示
される。ＩＰ−４オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（フレーム＋２）（
ヌクレオチド２〜３１６を含む）は、１０５アミノ酸残基のタンパク質をコード
する。この配列は開始コドンを含まず、それゆえアミノ酸残基１のＧｌｙ残基を
太字で示し、そしてこの配列がアミノ末端の方向に伸長されているはずであるこ
とを示す。
【図１３】 図１３は、ＩＰ−５タンパク質のヌクレオチド配列（配列番号２５）（全部で
４４１ヌクレオチドを含む）および関連推定アミノ酸配列（配列番号２６）であ
る。プレイ配列は、改変型酵母ツーハイブリッド系において利用され、ヌクレオ
チド１で開始する。この配列は開始コドンを含まず、それゆえアミノ酸残基１の
Ｔｈｒ残基を太字で示し、そしてこの配列がアミノ末端の方向に伸長されテイル
はずであることを示す。そのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（ヌクレ
オチド１〜２４６）は、ガングリオシド誘導性分化関連タンパク質１ホモログタ
ンパク質に対する相同性を保有するタンパク質のカルボキシ末端領域をコードす
る。
【図１４】 図１４は、改変型酵母ツーハイブリッド系の結果のマトリクスである。ベイト
ＮｌＫ１タンパク質を使用するアッセイの結果は、縦列の上に示される；一方、
ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシ
ン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、Ｉ
Ｐ−４、ＩＰ−５およびＣＤＫ２から構成されるプレイタンパク質は、横列の左
に示される。ベイトタンパク質およびプレイタンパク質についての陽性相互作用
は、ボックス内に「＋」として示され、特定のベイトタンパク質と特定のプレイ
タンパク質との間の相互作用を形成する；一方、「−」は酵母発現ベクターの増
殖を示すが、ＮｌＫ１タンパク質との相互作用は示さない。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｂ０６５ Ａ６１Ｐ 3/00 ４Ｃ０８４ 9/00 ４Ｃ０８５ 25/28 ４Ｃ０８６ 48/00 31/12 ４Ｈ０４５ Ａ６１Ｐ 3/00 35/00 9/00 43/00 １０５ 25/28 Ｃ０７Ｋ 14/47 31/12 16/40 35/00 19/00 43/00 １０５ Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 14/47 1/19 16/40 1/21 19/00 9/12 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｚ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 5/10 33/50 Ｚ 9/12 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 5/00 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ａ６１Ｋ 37/02 33/50 37/12 33/53 37/54 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ヤング メイジャ アメリカ合衆国 コネチカット 06333， イースト リーム， キャットバード レーン ６ Ｆターム(参考） 2G045 AA29 AA40 CB01 CB17 CB21 DA36 DA78 FB01 FB02 FB03 FB07 FB08 FB12 FB13 4B024 AA01 AA11 BA10 BA80 CA04 CA07 CA09 CA20 DA01 DA02 DA05 DA11 DA12 FA02 GA11 HA11 HA12 HA17 4B050 CC01 CC03 CC05 CC08 DD11 EE01 LL01 LL03 4B063 QA05 QA19 QQ21 QQ27 QQ41 QQ53 QQ61 QQ79 QQ89 QR77 QS31 QX02 QX10 4B064 AG01 CA01 CA19 CC01 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA58X AA72X AA87X AA93Y AB01 AC14 BA01 CA24 CA29 CA44 CA46 4C084 AA01 AA02 AA06 AA07 AA13 BA01 BA08 CA53 DA40 DC02 DC22 DC50 MA02 MA38 MA41 MA52 MA55 MA56 MA59 MA66 ZA022 ZA362 ZC022 ZC332 ZC412 4C085 AA13 AA14 AA16 BB41 CC22 CC23 EE01 4C086 AA03 EA16 MA01 MA02 MA04 MA05 MA24 MA38 MA41 MA52 MA55 MA56 MA59 MA66 NA14 ZA02 ZA36 ZC21 ZC41 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA40 BA41 BA50 CA40 DA75 DA89 EA20 EA50 FA50 FA74

Claims (84)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質
    との精製された複合体であって、ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク
    質は、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポ
    ミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−
    ３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択される、精製された複合体。
  2. 【請求項２】 前記タンパク質が、ヒトタンパク質である、請求項１に記載
    の精製された複合体。
  3. 【請求項３】 ＮｌＫ１タンパク質の誘導体とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタ
    ンパク質との複合体、ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体
    との複合体、およびＮｌＫ１タンパク質の誘導体とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの
    誘導体との複合体からなる群より選択される精製複合体であって、ここで、該Ｎ
    ｌＫ１タンパク質の誘導体は、野生型ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質と複
    合体を形成し得、そして、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの誘導体は、野生型Ｎｌ
    Ｋ１タンパク質と複合体を形成し得、ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタン
    パク質は、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−ト
    ロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、Ｉ
    Ｐ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択される、精製された複合体
    。
  4. 【請求項４】 前記ＮｌＫ１タンパク質および／またはＮｌＫ１タンパク質
    −ＩＰタンパク質の誘導体が、放射活性部分、蛍光部分、化学発光部分、比色部
    分または酵素部分からなる群より選択される標識で検出可能に標識される、請求
    項３に記載の精製された複合体。
  5. 【請求項５】 少なくとも６アミノ酸残基からなるＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
    Ｐタンパク質のフラグメントに共有結合を介して結合された少なくとも６アミノ
    酸残基からなるＮｌＫ１タンパク質のフラグメントを含む、キメラタンパク質。
  6. 【請求項６】 前記ＮｌＫ１タンパク質のフラグメントが、ＮｌＫ１タンパ
    ク質−ＩＰタンパク質に結合し得るフラグメントであり、そして前記ＮｌＫ１タ
    ンパク質−ＩＰタンパク質のフラグメントが、ＮｌＫ１タンパク質に結合し得る
    フラグメントである、請求項５に記載のキメラタンパク質。
  7. 【請求項７】 前記ＮｌＫ１タンパク質のフラグメントと前記ＮｌＫ１タン
    パク質−ＩＰタンパク質のフラグメントが、相互作用してＮｌＫ１タンパク質・
    ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体を形成する、請求項６に記載のキメラタンパク
    質。
  8. 【請求項８】 請求項１に記載の複合体に免疫特異的に結合する抗体、ある
    いはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体。
  9. 【請求項９】 ＮｌＫ１タンパク質・ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質
    複合体の一部ではないＮｌＫ１タンパク質またはＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタン
    パク質に免疫特異的に結合しない、請求項８に記載の抗体。
  10. 【請求項１０】 ＮｌＫ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列、およ
    びＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオ
    シン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、
    ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタ
    ンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸または単離され
    た複数の核酸。
  11. 【請求項１１】 核酸ベクターに含まれる、請求項１０に記載の単離された
    核酸または単離された複数の核酸。
  12. 【請求項１２】 前記ＮｌＫ１タンパク質コード配列および前記ＮｌＫ１タ
    ンパク質−ＩＰタンパク質コード配列が、プロモーターに作動可能に連結される
    、請求項１１に記載の単離された核酸または単離された複数の核酸。
  13. 【請求項１３】 請求項７に記載のキメラタンパク質をコードするヌクレオ
    チド配列を含む、単離された核酸。
  14. 【請求項１４】 請求項１０に記載の核酸を含む細胞であって、該核酸が、
    組換え分子である、細胞。
  15. 【請求項１５】 請求項１２に記載の核酸を含む細胞であって、該核酸が、
    組換え分子である、細胞。
  16. 【請求項１６】 請求項１３に記載の核酸を含む組換え細胞であって、該核
    酸が、組換え分子である、組換え細胞。
  17. 【請求項１７】 ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５
    タンパク質からなる群より選択される、精製されたタンパク質。
  18. 【請求項１８】 前記タンパク質が、ヒトタンパク質である、請求項１７に
    記載のタンパク質。
  19. 【請求項１９】 配列番号１８；配列番号２２；配列番号２４および配列番
    号２６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のタン
    パク質。
  20. 【請求項２０】 配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２
    ３または配列番号２５からなる群より選択されるヌクレオチド配列の一部からな
    るヌクレオチド配列を有するＤＮＡの逆相補体にハイブリダイズし得る核酸によ
    ってコードされる、精製されたタンパク質。
  21. 【請求項２１】 ＮｌＫ１タンパク質に結合し得る、請求項１７に記載のタ
    ンパク質の精製された誘導体またはアナログ。
  22. 【請求項２２】 ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５
    タンパク質からなる群より選択されるタンパク質に特異的な抗体によって結合さ
    れ得る、請求項２１に記載の誘導体またはアナログ。
  23. 【請求項２３】 請求項１７に記載のタンパク質の精製されたフラグメント
    であって、ここで、該フラグメントは、該タンパク質の少なくとも６アミノ酸残
    基部分からなる、フラグメント。
  24. 【請求項２４】 請求項１７に記載のタンパク質に対する少なくとも６０％
    の同一性を有するアミノ酸配列を含む、精製されたタンパク質であって、ここで
    、該同一性のパーセンテージは、請求項１７に記載のタンパク質と同一の大きさ
    のアミノ酸配列にわたって決定される、精製されたタンパク質。
  25. 【請求項２５】 請求項１７に記載のタンパク質のフラグメントを含むキメ
    ラタンパク質であって、ここで、該フラグメントは、第２のタンパク質のアミノ
    酸配列に共有結合を介して結合される、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−
    ４またはＩＰ−５の少なくとも６アミノ酸残基からなり、ここで、該第２のタン
    パク質は、請求項１７のタンパク質ではない、キメラタンパク質。
  26. 【請求項２６】 請求項１７に記載のタンパク質に免疫特異的に結合し得る
    抗体、あるいはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体。
  27. 【請求項２７】 請求項１８に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド
    配列を含む、単離された核酸。
  28. 【請求項２８】 配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２
    ３または配列番号２５のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
  29. 【請求項２９】 配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２
    ３または配列番号２５のヌクレオチド配列の一部からなるヌクレオチド配列を有
    する核酸の逆相補体にハイブリダイズし得る、単離された核酸。
  30. 【請求項３０】 少なくとも１０ヌクレオチドからなる、配列番号１７；配
    列番号１９；配列番号２１；配列番号２３または配列番号２５のヌクレオチド配
    列の一部からなるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
  31. 【請求項３１】 請求項２７に記載の核酸を含む細胞であって、該核酸が、
    組換え分子である、細胞。
  32. 【請求項３２】 治療有効量または予防有効量の請求項１の複合体および薬
    学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  33. 【請求項３３】 前記タンパク質が、ヒトタンパク質である、請求項３１に
    記載の薬学的組成物。
  34. 【請求項３４】 治療有効量または予防有効量の請求項３に記載の複合体お
    よび薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  35. 【請求項３５】 治療有効量または予防有効量の請求項５に記載のキメラタ
    ンパク質および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  36. 【請求項３６】 治療有効量または予防有効量の請求項６に記載のキメラタ
    ンパク質および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  37. 【請求項３７】 治療有効量または予防有効量の請求項８に記載の抗体、あ
    るいはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体、および薬学
    的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  38. 【請求項３８】 治療有効量または予防有効量の請求項９に記載の抗体、あ
    るいはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体、および薬学
    的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  39. 【請求項３９】 治療有効量または予防有効量の請求項１０に記載の核酸ま
    たは複数の核酸および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  40. 【請求項４０】 治療有効量または予防有効量の請求項１３に記載の単離さ
    れた核酸および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  41. 【請求項４１】 治療有効量または予防有効量の請求項１４に記載の組換え
    細胞および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  42. 【請求項４２】 治療有効量または予防有効量の請求項１５に記載のタンパ
    ク質および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  43. 【請求項４３】 前記タンパク質が、配列番号１８；配列番号２０；配列番
    号２２；配列番号２４および配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含む、請求
    項４１に記載の薬学的組成物。
  44. 【請求項４４】 治療有効量または予防有効量の請求項２６に記載の抗体、
    あるいはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体、および薬
    学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  45. 【請求項４５】 治療有効量または予防有効量の請求項１７に記載のタンパ
    ク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸；および薬学的に受容可能なキャ
    リアを含む、薬学的組成物。
  46. 【請求項４６】 治療有効量または予防有効量の請求項２７に記載の組換え
    核酸を含む細胞および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  47. 【請求項４７】 ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク
    質との複合体を産生するための方法であって、該方法は、以下：（ｉ）請求項１
    ０に記載の核酸を含む組換え細胞を増殖させる工程であって、その結果、コード
    されたＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質が発現さ
    れ、そして互いに結合する、工程、および（ｉｉ）該ＮｌＫ１タンパク質と該Ｎ
    ｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質との発現された複合体を回収する工程からな
    る、方法。
  48. 【請求項４８】 ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５
    からなる群より選択されるタンパク質を産生するための方法であって、該方法は
    、以下：（ｉ）該タンパク質をコードする組換え核酸を含む細胞を増殖させる工
    程であって、その結果、該コードされたタンパク質が発現される、工程、および
    （ｉｉ）該発現されたタンパク質を回収する工程からなる、方法。
  49. 【請求項４９】 被験体内のＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
    Ｐタンパク質との複合体の異常レベルによって特徴付けられる疾患または障害の
    発症の存在あるいは素因について、診断またはスクリーニングする方法であって
    、ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰは、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファター
    ゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎ
    ｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群よ
    り選択され、該方法は、該被験体由来のサンプル内の、該複合体、ＮｌＫ１タン
    パク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質をコードするＲＮＡまたは該
    複合体の機能活性のレベルを測定する工程からなり；ここで、該サンプル内の、
    該複合体、該ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質を
    コードするＲＮＡまたは該複合体の機能活性のレベルにおける、該疾患または障
    害あるいは該疾患または障害を発症する素因を有さない被験体由来の類似のサン
    プルに見出された該複合体、該ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−
    ＩＰタンパク質をコードするＲＮＡまたは該複合体の機能活性のレベルに対する
    増加あるいは減少が、該疾患または障害あるいは該疾患または障害を発症する素
    因の存在を示す、方法。
  50. 【請求項５０】 被験体内のＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４また
    はＩＰ−５のタンパク質またはＲＮＡからなる群より選択されるタンパク質また
    はＲＮＡの異常レベルによって特徴付けられる疾患または障害の存在あるいは発
    症の素因について、診断またはスクリーニングする方法であって、該方法は、該
    被験体由来のサンプル内の、該タンパク質、該ＲＮＡまたは該タンパク質の機能
    活性のレベルを測定する工程からなり；ここで、該サンプル内の、該タンパク質
    、該ＲＮＡまたは該機能活性のレベルにおける、該疾患または障害あるいは該疾
    患または障害を発症する素因を有さない被験体由来の類似のサンプルに見出され
    た該タンパク質、該ＲＮＡまたは該タンパク質の機能活性のレベルに対する増加
    あるいは減少が、該疾患または障害あるいは該疾患または障害を発症する素因の
    存在を示す、方法。
  51. 【請求項５１】 １以上の容器中に、ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパ
    ク質−ＩＰとの複合体、該複合体に対する抗体、ＮｌＫ１タンパク質をコードす
    るＲＮＡおよびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードするＲＮＡにハイブリダイズ
    し得る核酸プローブ、または少なくともＮｌＫ１タンパク質をコードする遺伝子
    の一部およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードする遺伝子の一部の増幅をプラ
    イムし得る核酸プライマー対からなる群より選択される物質を含有する、キット
    であって、ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰは、ＴｒｋＡ、タンパク質ホス
    ファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７
    １、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５から
    なる群より選択される、キット。
  52. 【請求項５２】 被験体においてＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質
    −ＩＰとの複合体の異常レベルに関する疾患または障害を処置あるいは予防する
    方法であって、ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰは、ＴｒｋＡ、タンパク質
    ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ０
    ０７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５
    からなる群より選択され、該方法は、このような処置または予防が所望される被
    験体に、該複合体の機能を調節し得る治療有効量の分子（単数または複数）を投
    与する工程からなる、方法。
  53. 【請求項５３】 請求項５２に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害が、前記複合体のレベルの減少に関連し、そして前記分子（単数または複
    数）が、ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の機能を促進し
    得、そしてここで、該分子（単数または複数）が、以下：（ｉ）ＮｌＫ１タンパ
    ク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの複合体；（ｉｉ）野生型複合体より安定
    または活性である、ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの複合体の
    誘導体またはアナログ；（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク
    質−ＩＰをコードする核酸、ならびに（ｉｖ）野生型複合体より安定または活性
    である複合体を形成し得る、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
    Ｐの誘導体またはアナログをコードする核酸からなる群より選択される、方法。
  54. 【請求項５４】 請求項５２に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害が、前記複合体のレベルの増加に関連し、そして前記分子（単数または複
    数）が、ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ複合体の機能を阻害し
    得、そしてここで、該分子（単数または複数）が、以下：（ｉ）該複合体に対す
    る抗体、あるいはその結合領域を含む、そのフラグメントまたは誘導体；（ｉｉ
    ）ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのアンチセンス核酸、ならび
    に（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質遺伝子およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子
    の少なくとも一部を含む核酸であって、該遺伝子の一部内に異種ヌクレオチド配
    列が挿入されており、その結果、該異種配列が、該ＮｌＫ１タンパク質遺伝子お
    よびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子の少なくとも一部の生物学的活性を不活性
    化し、そしてここで、該ＮｌＫ１タンパク質遺伝子およびＮｌＫ１タンパク質−
    ＩＰ遺伝子の部分は、ゲノムのＮｌＫ１タンパク質遺伝子およびＮｌＫ１タンパ
    ク質−ＩＰ遺伝子との相同組換えを促進するように、該異種配列に隣接する、核
    酸、からなる群より選択される、方法。
  55. 【請求項５５】 被験体においてＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４
    またはＩＰ−５からなる群より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの異常レベ
    ルに関する疾患または障害を処置あるいは予防する方法であって、該方法は、こ
    のような処置または予防が所望される被験体に、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの
    機能を調節する治療有効量の分子（単数または複数）を投与する工程からなる、
    方法。
  56. 【請求項５６】 請求項５５に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害が、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのレベルの減少に関連し、そして前記分子
    （単数または複数）が、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの機能を促進し、そしてこ
    こで、該分子（単数または複数）が、以下：（ｉ）ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタ
    ンパク質；（ｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質に結合し得る、ＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
    Ｐの誘導体またはアナログ；（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質を
    コードする核酸、ならびに（ｉｖ）ＮｌＫ１タンパク質に結合し得る、ＮｌＫ１
    タンパク質−ＩＰの誘導体またはアナログをコードする核酸からなる群より選択
    される、方法。
  57. 【請求項５７】 請求項５５に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害が、ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰのレベルの増加に関連し、そして前記分子
    （単数または複数）が、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの機能を阻害し；そしてこ
    こで、該分子（単数または複数）が、以下：（ｉ）抗ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
    抗体、あるいはその結合領域を含む、そのフラグメントまたは誘導体；（ｉｉ）
    ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰアンチセンス核酸、ならびに（ｉｉｉ）ＮｌＫ１タン
    パク質−ＩＰ遺伝子の少なくとも一部を含む核酸であって、該遺伝子の一部内に
    異種ヌクレオチド配列が挿入されており、その結果、該異種配列が、該ＮｌＫ１
    タンパク質−ＩＰ遺伝子の少なくとも一部の生物学的活性を不活性化し；そして
    ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子の部分は、ゲノムＮｌＫ１タンパク
    質−ＩＰ遺伝子との相同組換えを促進するように、該異種配列に隣接する、核酸
    、からなる群より選択される、方法。
  58. 【請求項５８】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘
    導体、または該複合体の活性のモジュレーターを、抗腫瘍活性についてスクリー
    ニングする方法であって；ここで、該方法は、悪性障害に由来するか、または悪
    性障害に関連する特徴を提示する細胞株由来の細胞の、生存または増殖を測定す
    る工程からなり；ここで、該細胞は、該複合体、誘導体またはモジュレーターに
    接触され、このように接触されない細胞において測定される該指標のレベルと比
    較され；そしてここで、該接触された細胞におけるより低いレベルは、該複合体
    、誘導体またはモジュレーターが、抗腫瘍活性を有することを示す、方法。
  59. 【請求項５９】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘
    導体、または該複合体の活性のモジュレーターを、抗腫瘍活性についてスクリー
    ニングする方法であって；ここで、該方法は、腫瘍を有するか、または腫瘍を有
    さないが引き続いて腫瘍細胞または腫瘍形成薬剤でチャレンジされる試験動物に
    、該複合体、誘導体またはモジュレーターを投与する工程、および該試験動物中
    の腫瘍の増殖または後退を測定する工程からなり；ここで、該複合体、誘導体ま
    たはモジュレーターを投与された該試験動物内の、そのように投与されない該試
    験動物と比較した、腫瘍増殖の減少、腫瘍後退の増加、または腫瘍増殖の予防は
    、該複合体、誘導体またはモジュレーターが、抗腫瘍活性を有することを示す、
    方法。
  60. 【請求項６０】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘
    導体、または該複合体の活性のモジュレーターを、神経変性疾患の処置または予
    防における活性についてスクリーニングする方法であって；ここで、該方法は、
    神経変性疾患の指標を示す培養細胞に、該複合体、誘導体またはモジュレーター
    をインビトロで接触させる工程、および該複合体、誘導体またはモジュレーター
    を接触させた細胞内の該指標のレベルを、そのように接触させない細胞内の該指
    標の該レベルと比較する工程からなり；ここで、該接触させた細胞内のより低い
    レベルは、該複合体、誘導体またはモジュレーターが、神経変性疾患の処置また
    は予防における活性を有することを示す、方法。
  61. 【請求項６１】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘
    導体、または該複合体の活性のモジュレーターを、神経変性疾患の処置または予
    防における活性についてスクリーニングする方法であって；ここで、該方法は、
    神経変性疾患の症状を示すか、または神経変性疾患の症状の発症に素因化される
    試験動物に、該複合体、誘導体またはモジュレーターを投与する工程、および該
    複合体、誘導体またはモジュレーターの投与後の該神経変性疾患の該症状におけ
    る変化を測定する工程からなり；ここで、該神経変性疾患の症状の重篤度の減少
    、または該神経変性疾患の症状の予防は、該複合体、誘導体またはモジュレータ
    ーが、神経変性疾患の処置または予防における活性を有することを示す、方法。
  62. 【請求項６２】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘
    導体、または該複合体の活性のモジュレーターを、心筋症または心筋症関連疾患
    の処置または予防における活性についてスクリーニングする方法であって；ここ
    で、該方法は、心筋症または心筋症関連疾患の症状を示すか、または心筋症また
    は心筋症関連疾患の症状の発症に素因化される試験動物に、該複合体、誘導体ま
    たはモジュレーターを投与する工程、および該複合体、誘導体またはモジュレー
    ターの投与後の該心筋症または心筋症関連疾患の該症状における変化を測定する
    工程からなり；ここで、該心筋症または心筋症関連疾患の症状の重篤度の減少、
    または該心筋症または心筋症関連疾患の症状の予防は、該複合体、誘導体または
    モジュレーターが、心筋症または心筋症関連疾患の処置または予防における活性
    を有することを示す、方法。
  63. 【請求項６３】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘
    導体、または該複合体の活性のモジュレーターを、ウイルス感染および関連する
    疾患の処置または予防における活性についてスクリーニングする方法であって；
    ここで、該方法は、ウイルス感染の症状を示すか、またはウイルス感染の症状の
    発症に素因化される試験動物に、該複合体、誘導体またはモジュレーターを投与
    する工程、および該複合体、誘導体またはモジュレーターの投与後の該ウイルス
    感染の該症状における変化を測定する工程からなり；ここで、該ウイルス感染の
    症状の重篤度の減少、または該ウイルス感染の症状の予防は、該複合体、誘導体
    またはモジュレーターが、ウイルス感染の処置または予防における活性を有する
    ことを示す、方法。
  64. 【請求項６４】 ＮｌＫ１タンパク質とＴｒｋＡ、タンパク質ホスファター
    ゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎ
    ｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群よ
    り選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの精製された複合体、該複合体の誘導
    体、または該複合体の活性のモジュレーターを、代謝疾患および関連する障害の
    処置または予防における活性についてスクリーニングする方法であって；ここで
    、該方法は、代謝疾患および関連する障害の症状を示すか、または代謝疾患およ
    び関連する障害の症状の発症に素因化される試験動物に、該複合体、誘導体また
    はモジュレーターを投与する工程、および該複合体、誘導体またはモジュレータ
    ーの投与後の該代謝疾患および関連する障害の該症状における変化を測定する工
    程からなり；ここで、該代謝疾患および関連する障害の症状の重篤度の減少、ま
    たは該代謝疾患および関連する障害の症状の予防は、該複合体、誘導体またはモ
    ジュレーターが、代謝疾患および関連する障害の処置または予防における活性を
    有することを示す、方法。
  65. 【請求項６５】 ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの複合
    体の形成を、直接的または間接的に調節する分子（単数または複数）についてス
    クリーニングする方法であって、ここで、該ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰは、Ｔｒ
    ｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、
    ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−
    ４またはＩＰ−５からなる群より選択され；ここで、該方法は、該複合体の形成
    を助長する条件下で、該分子（単数または複数）の存在下でＮｌＫ１タンパク質
    とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰから形成される該複合体のレベルを測定する工程、
    および該複合体のレベルを、該分子（単数または複数）の非存在下で形成される
    該複合体のレベルと比較する工程からなり；ここで、該分子（単数または複数）
    の存在下の該複合体のより低いレベルまたはより高いレベルは、該分子（単数ま
    たは複数）が、該複合体の形成を調節する能力を有することを示す、方法。
  66. 【請求項６６】 組換え非ヒト動物またはその祖先であって、ここで、内因
    性ＮｌＫ１タンパク質遺伝子、およびＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α
    、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１
    、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択
    される内因性ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子の両方は、相同組換えまたは挿入
    性変異誘発によって、欠失または不活性化されている、組換え非ヒト動物または
    その祖先。
  67. 【請求項６７】 組換え非ヒト動物またはその祖先であって、該組換え非ヒ
    ト動物またはその祖先は、ＮｌＫ１タンパク質遺伝子、およびＴｒｋＡ、タンパ
    ク質ホスファターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、
    ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ
    −５からなる群より選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子の両方を含み、
    ここで、該ＮｌＫ１タンパク質遺伝子は、ネイティブＮｌＫ１タンパク質遺伝子
    のプロモーターではないプロモーターの制御下にあり、そして該ＮｌＫ１タンパ
    ク質−ＩＰ遺伝子は、ネイティブＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ遺伝子のプロモータ
    ーではないプロモーターの制御下にある、組換え非ヒト動物またはその祖先。
  68. 【請求項６８】 請求項７に記載のキメラタンパク質をコードする核酸配列
    を含む導入遺伝子を含む、組換え非ヒト動物またはその祖先。
  69. 【請求項６９】 配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２
    ３および配列番号２５のヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含む、組換え非ヒ
    ト動物またはその祖先。
  70. 【請求項７０】 ＮｌＫ１タンパク質の活性またはレベルを調節する方法で
    あって；ここで、該方法は、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−
    ３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−
    １、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択されるタ
    ンパク質、または該タンパク質をコードする核酸、または該タンパク質に免疫特
    異的に結合する抗体、あるいは該抗体の結合ドメインを含む該抗体のフラグメン
    トまたは誘導体を、ＮｌＫ１タンパク質遺伝子を発現する細胞に接触させるか、
    またはＮｌＫ１タンパク質遺伝子を発現する動物に投与する工程からなる、方法
    。
  71. 【請求項７１】 ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３
    ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、Ｉ
    Ｐ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択されるタンパク
    質の活性またはレベルを調節する方法であって；ここで、該方法は、ＮｌＫ１タ
    ンパク質、ＮｌＫ１タンパク質をコードする核酸、またはＮｌＫ１タンパク質に
    免疫特異的に結合する抗体、あるいは該抗体の結合ドメインを含む該抗体のフラ
    グメントまたは誘導体を、該タンパク質をコードする遺伝子を発現する細胞に接
    触させるか、または該タンパク質をコードする遺伝子を発現する動物に投与する
    工程からなる、方法。
  72. 【請求項７２】 ＮｌＫ１タンパク質と、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファタ
    ーゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉ
    ｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群
    より選択されるタンパク質との複合体の活性またはレベルを調節する方法であっ
    て；ここで、該方法は、該複合体の形成を調節する能力を有する分子を、該複合
    体を発現かつ形成する細胞に接触させるか、または該複合体を発現かつ形成する
    動物に投与する工程からなる、方法。
  73. 【請求項７３】 ＮｌＫ１タンパク質、またはＴｒｋＡ、タンパク質ホスフ
    ァターゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１
    、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からな
    る群より選択されるタンパク質、あるいはＮｌＫ１タンパク質と該タンパク質と
    の複合体の活性を調節する能力を有する分子を同定するための方法であって、；
    ここで、該方法は、１以上の候補分子を該タンパク質の存在下でＮｌＫ１タンパ
    ク質に接触させる工程、および該ＮｌＫ１タンパク質と該タンパク質との間で形
    成する複合体の量を測定する工程からなり；そしてここで、該候補分子（単数ま
    たは複数）の非存在下で形成する複合体の量と比較した、形成する複合体の量に
    おける増加または減少は、該分子（単数または複数）が、ＮｌＫ１タンパク質、
    該タンパク質、またはＮｌＫ１タンパク質と該タンパク質との該複合体の活性を
    調節する能力を保持することを示す、方法。
  74. 【請求項７４】 前記接触工程が、前記候補分子（単数または複数）を請求
    項６８に記載の組換え非ヒト動物またはその祖先に投与する工程によって行われ
    る、請求項７３に記載の方法。
  75. 【請求項７５】 前記接触工程が、インビトロで行われ；かつ前記ＮｌＫ１
    タンパク質、前記タンパク質、および前記候補分子（単数または複数）が精製さ
    れている、請求項７３に記載の方法。
  76. 【請求項７６】 ＮｌＫ１タンパク質の誘導体またはアナログを生物学的活
    性についてスクリーニングするための方法であって；ここで、該方法は、該Ｎｌ
    Ｋ１タンパク質の誘導体またはアナログに、ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファター
    ゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎ
    ｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群よ
    り選択されるタンパク質を接触させる工程、および該ＮｌＫ１タンパク質の誘導
    体またはアナログと該タンパク質との間の複合体の形成を検出する工程からなり
    ；そしてここで、該複合体の形成の検出は、該ＮｌＫ１タンパク質の誘導体また
    はアナログが生物学的活性を有することを示す、方法。
  77. 【請求項７７】 ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３
    ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、Ｉ
    Ｐ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択されるタンパク
    質の誘導体またはアナログを生物学的活性についてスクリーニングするための方
    法であって；ここで、該方法は、該タンパク質の誘導体またはアナログに、Ｎｌ
    Ｋ１タンパク質を接触させる工程、および該タンパク質の誘導体またはアナログ
    と該ＮｌＫ１タンパク質との間の複合体の形成を検出する工程からなり；そして
    ここで、該複合体の形成の検出は、該タンパク質の誘導体またはアナログが生物
    学的活性を有することを示す、方法。
  78. 【請求項７８】 ＮｌＫ１タンパク質とＮｌＫ１タンパク質−ＩＰとの複合
    体の異常レベルによって特徴付けられる疾患または障害の処置を投与される被験
    体において、該疾患または障害の該処置の効力をモニターする方法であって；こ
    こで、該方法は、該処置の投与後の該被験体から採取される該被験体由来のサン
    プル内の、該複合体、ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコ
    ードするＲＮＡまたは該複合体の機能活性のレベルを測定する工程、および（ｉ
    ）該処置の投与前の該被験体から採取されたサンプル内の該レベルまたは（ｉｉ
    ）該疾患または障害の前処置段階に関連する標準レベルに対して比較する工程か
    らなり；ここで、該処置の投与後に採取された該サンプル内の、該複合体、該Ｎ
    ｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコードするＲＮＡまたは該
    複合体の機能活性のレベルにおける、該処置の投与前に採取された該サンプル内
    の、該複合体、該ＮｌＫ１タンパク質およびＮｌＫ１タンパク質−ＩＰをコード
    するＲＮＡまたは該複合体の機能活性のレベルに対して、あるいは該標準レベル
    に対して比較した、変化または変化の欠失は、該投与が該疾患または障害の処置
    において効果的であるか否かを示す、方法。
  79. 【請求項７９】 被験体において、癌または過剰増殖性障害を処置または予
    防する方法であって；ここで、該方法は、そのような処置または予防が所望され
    る被験体に、ＮｌＫ１タンパク質とＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、
    １４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、
    ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択さ
    れるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰあるいは１以上の上記ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰ
    の組み合わせとの複合体の機能を調節する能力を有する、治療有効量の分子（単
    数または複数）を投与する工程からなる、方法。
  80. 【請求項８０】 被験体において、神経変性疾患を処置または予防する方法
    であって；ここで、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に
    、ＮｌＫ１タンパク質とＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−
    ３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、
    ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択されるＮｌＫ
    １タンパク質−ＩＰあるいは１以上の上記ＮｌＫ１タンパク質−ＩＰの組み合わ
    せとの複合体の機能を調節する能力を有する、治療有効量の分子（単数または複
    数）を投与する工程からなる、方法。
  81. 【請求項８１】 被験体において、心筋症または関連する疾患を処置または
    予防する方法であって；ここで、該方法は、そのような処置または予防が所望さ
    れる被験体に、ＮｌＫ１タンパク質とＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α
    、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１
    、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選択
    されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰあるいは１以上の上記ＮｌＫ１タンパク質−Ｉ
    Ｐの組み合わせとの複合体の機能を調節する能力を有する、治療有効量の分子（
    単数または複数）を投与する工程からなる、方法。
  82. 【請求項８２】 被験体において、ウイルス感染または関連する疾患を処置
    または予防する方法であって；ここで、該方法は、そのような処置または予防が
    所望される被験体に、ＮｌＫ１タンパク質とＴｒｋＡ、タンパク質ホスファター
    ゼ１α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎ
    ｉ−１、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群よ
    り選択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰあるいは１以上の上記ＮｌＫ１タンパク
    質−ＩＰの組み合わせとの複合体の機能を調節する能力を有する、治療有効量の
    分子（単数または複数）を投与する工程からなる、方法。
  83. 【請求項８３】 被験体において、代謝障害または関連する疾患を処置また
    は予防する方法であって；ここで、該方法は、そのような処置または予防が所望
    される被験体に、ＮｌＫ１タンパク質とＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１
    α、１４−３−３ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−
    １、ＩＰ−１、ＩＰ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４またはＩＰ−５からなる群より選
    択されるＮｌＫ１タンパク質−ＩＰタンパク質あるいは１以上の上記ＮｌＫ１タ
    ンパク質−ＩＰの組み合わせとの複合体の機能を調節する能力を有する、治療有
    効量の分子（単数または複数）を投与する工程からなる、方法。
  84. 【請求項８４】 ＴｒｋＡ、タンパク質ホスファターゼ１α、１４−３−３
    ε、α−トロポミオシン、ビメンチン、ｐ００７１、Ｉｎｉ−１、ＩＰ−１、Ｉ
    Ｐ−２、ＩＰ−３、ＩＰ−４およびＩＰ−５からなる群より選択されるタンパク
    質の精製されたフラグメントであって；ここで、該フラグメントは、ＮｌＫ１タ
    ンパク質を結合する能力を有する、精製されたフラグメント。
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