KR20100051981A - 고추 탄저병 균주(Colletotrichum acutatum)에 대한 저항성주동유전자 연관 분자표지 개발 및 이의 이용 - Google Patents

고추 탄저병 균주(Colletotrichum acutatum)에 대한 저항성주동유전자 연관 분자표지 개발 및 이의 이용 Download PDF

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윤재복
한정헌
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(주)고추와 육종
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Abstract

본 발명은 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 주동유전자(CaR12.2) 연관 분자 표지 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 고추의 탄저병 저항성 형질과 연관 정도가 매우 높은 서열을 가지는 핵산, 상기 핵산의 일부 염기서열을 포함하는 프라이머 및 이들을 이용하여 탄저병 저항성 식물체를 검출하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 분자표지(CaR12.2M1-CAPS)는 탄저병을 고추 과실에 직접 접종하지 않고서도 신속하고 정확하게 탄저병 저항성 식물체를 검출할 수 있으며, 나아가 탄저병 저항성 고추 주동유전자의 유전형을 결정할 수 있는 장점이 있다.
고추, 탄저병, 저항성, 마커, 분자표지

Description

고추 탄저병 균주(Colletotrichum acutatum)에 대한 저항성 주동유전자 연관 분자표지 개발 및 이의 이용{Molecular marker linked to the major resistant gene to pepper anthracnose (Colletotrichum acutatum) and its use}
본 발명은 상업적인 탄저병 저항성 고추 육종에 이용될 수 있는 기술로써 탄저병원균(Colletotrichum acutatum)을 직접 고추 과실에 접종하여 탄저병 저항성을 검정하는 기존의 방법보다 한 단계 진보된 것으로 탄저병 저항성 주동 유전자와 연관된 분자표지를 이용하여 탄저병 저항성을 검정하는 방법에 관한 것이다.
고추 탄저병은 한국을 비롯하여 태국, 인도, 인도네시아 등에서 크게 문제가 되는 병으로, 특히 고추 과실을 썩게 만들기 때문에 농가에 큰 피해를 주게 된다(문헌1). 고추 탄저병을 일으키는 균은 곰팡이균(fungi)으로 콜레토트리쿰 속(Colletotrichum spp.)에 속하는 4가지 종(C. acutatum, C. capsici, C. gloeosprioides, C. cocodes)이 주요 원인균으로 보고되어 있다(문헌 1). 이 중 한국에서 가장 많이 분포하고 있는 종은 C. acutatum으로 아직 이 병에 대한 저항성 품종이 보급되어 있지 않다(문헌 2). 한국의 고추 재배에 있어 이 병에 대한 화학적 방제 방법에는 많은 제약과 문제점이 있기 때문에 이 병에 대한 저항성 품종 보 급이 시급한 실정이다. 이 병에 대한 저항성 유전자원은 한국에서 주로 재배하는 고추종(Capsicum annuum)에서는 지금까지 발견되지 않았지만, 고추 근연종인 캡시쿰 바카툼(C. baccatum) 및 캡시쿰 치넨스(C. chinense)에서는 발견되고 있다(문헌 3과 문헌 4). 이들의 저항성 유전자를 국내 고추종(C. annuum)에 도입하기 위해서는 종간교잡 및 여교잡을 수행하여야 하는데(문헌 5), 이러한 육종 과정 중에는 저항성 분리집단이 만들어지며, 이 분리집단 내에서 탄저병 저항성이 도입된 개체들을 선발하여야 하는데, 현재는 과실이 맺힐 때까지 고추를 키워 고추과실에 직접 탄저병균을 접종하는 방법을 사용하고 있다(문헌 6).
[문헌 1] Than, P.P., Jeewon, R., Hyde, K.D., Pongsupasamit, S., Mongkolporn, O., and Taylor, P.W.J. 2008. Characterization and pathogenicity of Colletotrichum species associated with anthracnose on chilli (Capsicum spp.) in Thailand. Plant Pathol. 57:562-572.
[문헌 2] Kang, B.K., Min, J.Y., Kim, Y.S., Park, S.W., Bach, N.V., and Kim, H.T. 2005 Semi-selective medium for monitoring Colletotrichum acutatum causing pepper anthracnose in the field. Res. Plant Dis. 11:21-27.
[문헌 3] Yoon, J.B., Yang, D.C., Lee,W.P., Ahn, S.Y., and Park, H.G. 2004. Genetic resources resistant to anthracnose in the genus Capsicum. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 45:318-323.
[문헌 4] AVRDC 2003. Host resistance to pepper anthracnose. In: AVRDC Report 2002. (Shanhua, Taiwan: AVRDC-the World Vegetable Center). pp. 29-30.
[문헌 5] Yoon, J.B., Yang, D.C., Do, J.W., and Park, H.G. 2006. Overcoming two post-fertilization genetic barriers in interspecific hybridization between Capsicum annuum and C. baccatum for introgression of anthracnose resistance. Breed. Sci. 56:31-38.
[문헌 6] Yoon, J.B., and Park, H.G. 2001. Screening method for resistance to pepper fruit anthracnose: pathogen sporulation, inoculation methods related to inoculum concentrations and post-inoculation environments. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 42: 389-393.
현행의 탄저병 저항성 검정 방법은 고추과실을 수확해서 직접 탄저병균을 접종하는 것인데, 이 방법은 고추를 재배하여 과실까지 얻어야하기 때문에 시간이 많이(3-4개월) 걸리고, 탄저병균을 배양해서 접종해야 하는 번거로움이 있을 뿐 아니라, 발병 정도가 환경에 영향을 받기 때문에 발병조건을 잘 유지하지 못하면 제대로 된 선발이 이루어질 수 없는 문제점이 있다.
본 발명은 위의 문제를 해결하기 위해 탄저병 저항성 분리집단(BC1F2) 육성 단계, 탄저병 저항성 분리집단에서 양적형질 유전분석(QTL mapping) 단계, 탄저병 저항성 주동유전자 연관 마커 개발 단계로 이루어진 것에 특징이 있다.
본 발명에서 개발된 탄저병(C. acutatum) 저항성 주동유전자와 연관된 분자표지는 기존의 탄저병 저항성 검정방법에 비해 빠른(1-2주) 시간 안에 선발할 수 있고, 환경에 영향을 받지 않기 때문에 좀 더 정확한 선발이 될 수 있으며, 어린 육묘기에 선발할 수 있어 포장사용 효율을 올릴 수 있을 뿐만 아니라, 같은 포장에 더 많은 저항성 후보 개체들을 심을 수 있기 때문에 육종 효율을 증대시킬 수 있는 효과가 있다.
본 발명은 탄저병(C. acutatum)에 대한 저항성 주동유전자와 연관된 분자표지 개발에 관한 것으로 탄저병 저항성 분리집단(BC1F2) 육성 단계, 탄저병 저항성 분리집단에서 양적형질 유전분석(QTL mapping) 단계, 탄저병 저항성 주동유전자 연관 마커 개발 단계로 나눌 수 있다.
탄저병 저항성 분리집단(BC1F2) 육성 단계는 다음과 같이 수행되었다. 우선 탄저병 저항성친으로 캡시쿰 바카툼 '피비씨81'(C. baccatum 'PBC81')을 사용하였고, 감수성친으로 피비씨81과 교배친화성이 높은 캡시쿰 아눔 '마티카스'(C. annuum 'Matikas')를 사용하였다. '마티카스'를 모친으로 '피비씨81'을 부친으로 사용하였으며, 이의 잡종일(F1)세대에서 탄저병 저항성이 있는 것을 확인하였고 탄저병 저항성이 우성으로 작용한다는 것을 짐작할 수 있었다. 하지만 이 잡종(F1) 식 물체에서 정상적인 화분이 전혀 형성되지 않아 에프투(F2) 분리집단을 만들 수 없었다. 따라서 '마티카스' 화분으로 잡종(F1) 식물체에 여교잡을 수행하였고, 수많은 교배 시도를 통해서 150여 개의 비씨원에프원(BC1F1) 종자를 얻을 수 있었다. 하지만 비씨원에프원(BC1F1) 세대 식물체에서도 불임 개체들이 다수 나타나서 탄저병 저항성 유전분석이 이루어지지 못하였다. 하지만 비씨원에프원(BC1F1) 집단 개체 중 탄저병 저항성이 저항성친 만큼 높고 화분 임성이 정상적인 개체를 선발할 수 있었고 이를 자가수정하여 비씨원에프투(BC1F2) 분리집단(87개체)을 육성할 수 있었다. 각 개체에 탄저병 균주(C. acutatum 'KSCa-1'; 접종량, 2 ul; 농도 5×105 conidia/ml)로 탄저병 접종기(microinjector, Hamilton PB600-1, Repeating Dispenser, Reno, NV, USA)를 이용하여 접종하였고, 탄저병 발병 정도 평가는 Voorrips 등(2004, QTL mapping of anthracnose(Colletotrichum spp.) resistance in a cross between Capsicum annuum and C. chinense. Theor. Appl. Genet. 109, 1275-1282)이 사용한 세 가지 방법(disease incidence, true legion diameter, overall legion diameter)을 사용하였다. 각 개체마다 1반복 당 5개체의 고추과실을 사용하였으며 한 과실에 3군데를 접종하였으며, 총 3반복을 수행하였다. 그 결과 고추에서 탄저병(C. acutatum) 저항성은 양적형질로 생각되며(도 1), 따라서 양적형질 유전분석 방법 중의 하나인 큐티엘 맵핑(QTL mapping)을 수행하였다.
탄저병 저항성 분리집단(BC1F2)에서 양적형질 유전분석(QTL mapping) 단계는 다음과 같이 수행되었다. 우선 분자표지(marker)를 이용하여 연관 지도(linkage map)를 만들었다. 본 발명을 위해 이용한 분자표지는 에스에스알(SSR, simple sequence repeats)과 에이에프엘피(AFLP, amplified fragment length polymorphism)인데, 에스에스알(SSR)은 Lee 등(2004, Characterization and molecular genetic mapping of microsatellite loci in pepper. Theor. Appl. Genet. 108: 619-627)과 Yi 등(2006, Exploitation of pepper EST-SSRs and an SSR-based linkage map. Theor. Appl. Genet. 114:113-130)에서 보고한 것을 논문에 서술한 실험방법으로 사용하였고, 에이에프엘피(AFLP)는 Vos 등(1995, AFLP: A new technique for DNA fingerprinting. Nucleic Acids Res. 23: 4407-4414)이 보고한 방법을 그대로 사용하였으나, DNA를 확인하기 위한 방법으로 방사선동위원소를 사용하지 않고 은염색법(Silverstar Staining Kit, Bioneer, Daejeon, South Korea)을 대신 사용하였다. 그 결과 총 375개의 다형성 마커(AFLP 340개와 SSR 35개)를 찾을 수 있었고, 이 중 102개 마커는 x2-검정(chi-square test, P＜0.001)을 통과하지 못해 제외하였고, 17개는 완전히 중복되는(동일한) 마커였기 때문에 제외하였다. 따라서 남은 256개의 마커를 이용하여 연관지도를 작성하였는데, 총 218개(AFLP 197개와 SSR 21개)의 마커는 연관지도에 올라갔고 나머지 마커는 어느 마커와도 연관되지 못하였다. 총 13개의 연관군을 가진 지도를 얻었고, 총 길이는 325 cM(Kosambi map function unit)였고, 마커당 평균거리는 1.49 cM이었다. 이 연관 지도와 위에서 얻은 탄저병 저항성 자료를 함께 이용하여 Windows QTL Cartographer v. 2.5 (Wang 등, 2007, Windows QTL Cartographer. Bioinformatics Research Center, North Carolina State University, Raleigh, NC.) 프로그램으로 양적형질 분석(QTL analysis)을 하였다. 분석은 컴포지트 인터벌 맵핑(composite interval mapping) 방법을 이용하였다. 그 결과, 도 2에서 보듯이 탄저병(C. acutatum) 저항성 주동유전자(CaR12.2)가 연관군 12번(LG12)의 18.5-24.6 cM 사이에 위치함을 알 수 있었다.
마지막으로 탄저병 저항성 주동유전자 연관 마커 개발 단계는 다음과 같이 수행되었다. 본 발병에서 연관 지도를 작성하기 위해 사용된 마커는 에스에스알(SSR)과 에이에프엘피(AFLP)인데, 이 마커는 모두 아크릴아마이드 젤 전기영동(acrylamide gel electrophoresis) 방법을 사용하는데, 이 방법은 대량의 샘플을 분석하기에 적절하지 않는 시스템으로, 비용이 많이 들고, 분석 시간이 오래 걸릴 뿐만 아니라 많은 노동력을 요구한다. 따라서 이 마커는 아가로스 젤 전기영동(agarose gel) 방법을 사용하는 염기 특이적인 마커(CAPS, cleavage amplified polymorphic sequence; SCAR, sequence characterized amplified region 등)로 전환하여야 한다. 따라서 본 발명에서는 탄저병(C. acutatum) 저항성 주동유전자에 가까이 연관된 8개의 에이에프엘피(AFLP) 마커(EtagMcgg05e, EtgcMcct03, EtagMcgt04, EtgcMcgg10, EaacMcgg01, EacgMcgg02, EtaaMcgc04, EataMcgc01)를 염기 특이적인 마커(CAPS 또는 SCAR)로 전환하려고 하였고, 그 중 1개의 에이에프엘피(AFLP) 마커(EtagMcgt04)는 마커 내부염기서열 결정(internal sequencing) 및 주 변염기서열 결정(flanking region sequencing)을 통해 공우성 마커인 캡스(CAPS) 마커(CaR12.2M1-CAPS로 명명)로 전환할 수 있었다. 그 방법을 자세히 살펴보면, 우선 EtagMcgt04 마커 밴드를 추출하여 직접 염기서열결정(direct PCR product sequencing)을 하였으나 제대로 된 염기서열을 얻을 수 없어 클로닝벡터(pGEM-T Easy Vector, Promega, WI, USA)에 중합효소반응(PCR) 산물 단편을 삽입하여 203 bp의 염기서열을 결정할 수 있었다(서열번호 1). 이 염기서열을 바탕으로 제한효소 이코알원(EcoRI) 인식부위 바깥으로 향하는 프라이머 서열번호 2와 서열번호 3을 제작하였고, 엠에스이원(MseI) 인식부위 바깥으로 향하는 프라이머 서열번호 4와 서열번호 5를 제작하여, 게놈워커 키트(GenomeWalker™ Universal Kit, Clontech, CA, USA)를 사용하여 주변염기서열을 결정하였는데, 이코알원(EcoRI) 인접 부위 염기서열(977 bp)만 알아낼 수 있었다(서열번호 6). 이 서열번호 6을 바탕으로 새로운 프라이머 서열번호 7을 디자인하여, 서열번호 2와 서열번호 7을 프라이머로 탄저병 저항성친인 피비씨81(PBC81)과 감수성친인 마티카스(Matikas)의 DNA로 중합효소반응(PCR)을 수행하여, 이 둘의 염기서열을 비교할 수 있었다[도 3; PBC81(서열번호 8); Matikas(서열번호 9)]. 이 염기서열 차이를 바탕으로 아래 실시예와 같이 실험을 수행하여 탄저병 저항성 주동유전자의 유전자형을 예측할 수 있었다(도 4).
A. DNA 추출
1. 어린 고추 잎 0.1g을 1.5㎖ 튜브에 채취하여 액체질소를 이용하여 잎을 완전히 파쇄하고, 60℃에 보관한 DNA 추출 버퍼(DNA extraction buffer) (50mM 트 리스-염산(Tris-HCl); 20mM 이디티에이(EDTA); 1.4M 염화나트륨(NaCl), 0.5％ 에스디에스(SDS))를 550㎕씩 첨가하고, 0.05g 피브이피(PVP)와 12.5㎕ 베타-머캅토에탄올(β-mercaptoethanol)을 넣어 잘 섞은 다음 65℃ 진동수조에서 2시간 반응시켰다.
2. 반응 후 동량의 클로로포름:아이소아밀알콜(24:1)을 첨가하고 충분히 섞은 후 12,000rpm으로 15분간 원심분리하고, 상등액을 새로운 1.5㎖ 튜브로 옮겼다. 그리고 2배의 에탄올(ethanol)을 넣고 조심스럽게 섞으며 DNA를 침전시켰다.
3. 침전된 DNA를 건져내고 70％ 에탄올로 두 번 씻어낸 후, 65℃ 오븐에 넣어 말리고 멸균된 3차증류수(autoclaved TDW)를 넣어 DNA를 녹인다.
4. 티이 버퍼(TE buffer)에 녹아있는 DNA 튜브에 RNA 분해효소(RNase) 1㎕를 넣고 37℃에 1시간 넣어둔다. 그리고 DNA 농도는 DNA 형광계(fluorometer, Hoefer Co.)를 이용하여 10ng/㎕ 농도로 맞추었다.
B. 캡스(CAPS) 마커 분석
1. 위에서 추출한 DNA를 서열번호 2와 서열번호 7로 중합효소반응(PCR) 증폭[95℃ 3분 전변성(pre-denaturation); 95℃ 40초 변성(denaturation); 66℃ 30초 프라이머접합(annealing); 72℃ 60초 중합반응(extension); 35회 반복 후; 72℃ 5분 추가중합반응(post-extension)]하였다.
2. 증폭산물(PCR product)을 1.2％ 아가로스(agarose) 젤에 고정전압 200V로 1.5시간 동안 전기영동하여 자외선투과조명기(ultraviolet transilluminator) 위에서 디지털 카메라로 이미지를 얻었다(도4).
3. 도 4에서 보듯이 하나의 윗밴드만 나타나는 개체는 유전자형이 rr로 탄저병 감수성 개체이고, 아랫밴드만 나타나는 개체는 유전자형이 RR로 탄저병 저항성 개체이고, 두 개의 밴드가 보이는 개체는 유전자형이 Rr로 이형접합개체이다.
제1도는 고추 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 분리집단(BC1F2)에서 탄저병 저항성의 분포도이다.
A: Disease incidence 방법으로 조사한 결과
B: True lesion diameter 방법으로 조사한 결과
C: Overall lesion diameter 방법으로 조사한 결과
제2도는 고추 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 주동유전자가 존재하는 연관군(LG12) 지도와 주동유전자와 연관된 마커를 타나낸 그림이다.
제3도는 고추 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성친인 피비씨81(PBC81)과 감수성친인 마티카스(Matikas)의 CaR12.2M1-CAPS 마커 염기서열을 비교한 그림이다.
제4도는 고추 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 주동유전자와 연관된 CaR12.2M1-CAPS 마커 분석을 수행한 사진이다.
26: 탄저병 감수성친인 마티카스(Matikas)
81: 탄저병 저항성친인 피비씨81(PBC81)
F1: 마티카스(Matikas) x 피비씨81(PBC81)
99: [마티카스(Matikas) x 피비씨81(PBC81)] x 마티카스(Matikas) 분리집단의 99번개체(BC1F2 분리집단의 자가수정친 임)
A: 탄저병 감수성의 CaR12.2M1-CAPS 마커타입 (rr)
B: 탄저병 저항성의 CaR12.2M1-CAPS 마커타입 (RR)
H: 이형접합체의 CaR12.2M1-CAPS 마커타입 (Rr)
a: 탄저병 감수성의 EtagMcgt04 마커타입 (rr)
c: 탄저병 저항성의 EtagMcgt04 마커타입 (RR 또는 Rr)
<110> Pepper and Breeding Institute <120> Molecular marker linked to the major resistant gene to pepper anthracnose (Colletotrichum acutatum) and its use <160> 9 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 203 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 1 gaattctagc gtaaaaaaac agggtgttac atcactcctc tccttgggtg tactcctgac 60 tcacattcaa gaaattttga tccccatgta tgatgtgcaa actattctga tgttcaggtt 120 cacagtgttg aaggttgtag tgctttgaaa atagaaatag aaaggatgat tcacgaaaaa 180 ttgatcgtag tgcaaaacgt taa 203 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 2 gtttgcacat catacatggg gatca 25 <210> 3 <211> 26 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 3 caggagtaca cccaaggaga ggagtg 26 <210> 4 <211> 26 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 4 cactcctctc cttgggtgta ctcctg 26 <210> 5 <211> 25 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 5 tgatccccat gtatgatgtg caaac 25 <210> 6 <211> 977 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 6 aaattcatgt aatttcacat aaaaatcaac tttaaatcaa atttggggct caaggatgaa 60 agaattatcc ttgttgaaaa accccacata ccttatttga taaattggat gtaaaagctt 120 gatatttgaa tctctaatgg tgttcttgaa gattcttctt gaatttcttg aacccgaaag 180 cttggattat taactttctt ggagaaaatt tggaggagtt cttggttttc ttgaaggggg 240 ctagggtttt actttgagag aaaagatgaa taatcgagtg tacagtgctt ttggatgtga 300 aattaagtgt tatgggcgga tttaggtgag ggaaagtgac caaagtgccc ctagaccctt 360 taaaaactga aatagcgtgt gaaacagttc tgtaacacgt tattcgacgc atcgcgtcac 420 tattgcatcg gcttactgcc tcacagggaa aatgccataa ttttttgctt ggatatcaga 480 tttaggcgaa attggtataa ttggaaagat aattcaatta tatataattt ggtgggtctt 540 tagatgcaaa attctatgta tataaaaagt tatacacatt caaagtagac ccttgtagaa 600 tcgaatgcca aactttggaa gaatcaaaag ctcttagctc aactttgttc taagtgattc 660 ttatgaatat ttttcaccta taaagcacat caaacatgag gataaatatc ttgaaactta 720 tattcatgtg gaaaccgatt gaattagagc ttacacgtgt aggaatgatg gttagaattc 780 tagcgcaaaa atatagggtg ttacatcact cctctccttg ggtgtactcc tgactcacat 840 tcaagaaatt ttgatcccca tgtatgatgt gcaaactatt ctgatgttca ggttcacagt 900 gttgaaggtt gtagtgcttt gaaaatagaa atagaaagga tgattcacga aaaattgatc 960 gtagtgcaaa acgttaa 977 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 7 tcaaatttgg ggctcaagga tgaa 24 <210> 8 <211> 832 <212> DNA <213> Capsicum baccatum <400> 8 tcaaatttgg ggctcaagga tgaatatctt gtgaaaagcc ccacatacct tatttgataa 60 attggatgta aaaacttgat atttgaatct ctaatggtgt tcttgaagat tcttcttgaa 120 tttattgaac ccgaaagctt ggattattaa ctttcctaga gaaaatttgg aggagttctt 180 ggtgttcttg aagggggcta gggttttact ttgagagaaa agatgaataa tcgagtgtat 240 agtgcttttg ggtgtgaaat taagtgtaat gggcggattt aggtgaggga aagtgaccaa 300 gttcccctag accctttaaa aactaaaatg gcatgtgaaa cagtttcgta acacgctggt 360 caacgcgtcg tgtcactatc gcatcggctt actgcctcac acgaaaaatg ccataatttt 420 ttgcttgggt atcagattta ggcaaaattg atataattgg aaagctaatt caattatata 480 caatttggtg ggtctttata tgcaaaattc tatgtatata aaaagttata cacattcaaa 540 gtagaccctt gtagaatcga atgccaaact ttggacgaat caaaagctct tagctcaact 600 ttgttctaag tgattattat gaatattttt cacctataaa gcacatcaaa catgaggata 660 aagatcttga aacttatatt cacgtggaaa cccattgaat tagagcttac acgtgtagga 720 ataatggtta gaattctagc gtaaaaatac agggtgttac atcactcctc tccttgggtg 780 tactcctgac tcacattcaa gaaattttga tccccatgta tgatgtgcaa ac 832 <210> 9 <211> 835 <212> DNA <213> Capsicum annuum <400> 9 tcaaatttgg ggctcaagga tgaagatatc ttgtgaaaaa ccccacatac cttatttgat 60 aaattggatg taaaagcttg atatttgaat ctctaatggt gttcttgaag attcttcttg 120 aatttcttga acccgaaagc ttggattatt aactttcttg gagaaaattt ggaggagttc 180 ttggttttct tgaagggggc tagggtttta ctttgagaga aaagatgaat aatcgagtgt 240 acagtgcttt tggatgtgaa attaagtgtt atgggcggat ttaggtgagg gaaagtgacc 300 aaagtgcccc tagacccttt aaaaactgaa atagcgtgtg aaacagttct gtaacacgtt 360 attcgacgca tcgcgtcact attgcatcgg cttactgcct cacagggaaa atgccataat 420 tttttgcttg gatatcagat ttaggcgaaa ttggtataat tggaaagata attcaattat 480 atataatttg gtgggtcttt agatgcaaaa ttctatgtat ataaaaagtt atacacattc 540 aaagtagacc cttgtagaat cgaatgccaa actttggacg aatcaaaagc tcttagctca 600 actttgttct aagtgattct tatgaatatt tttcacctat aaagcacatc aaacatgagg 660 ataaatatct tgaaacttat attcatgtgg aaaccgattg aattagagct tacacgtgta 720 ggaatgatgg ttagaattct agcgcaaaaa tatagggtgt tacatcactc ctctccttgg 780 gtatactcct gacccacatt caagaaattt tgatccccat gtatgatgtg caaac 835

Claims (7)

  1. 서열번호 6, 서열번호 8 및 서열번호 9의 염기서열로 이루어진 핵산.
  2. 서열번호 6, 서열번호 8 및 서열번호 9의 염기서열 중에서 선택되는 일련의 염기서열을 포함하는 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 고추 검출용 프라이머.
  3. 청구항 2에 있어서, 서열번호 2 및 서열번호 7의 염기서열을 갖는 프라이머.
  4. 청구항 1의 핵산 또는 청구항 2의 프라이머의 존재 하에서 고추 식물체의 게놈 DNA를 분석하는 것을 포함하는 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 고추의 검출 방법.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 분석은 RFLP(restriction fragment length polymerphism), RAPD(randomly amplified polymorphic DNA), DAF(DNA amplification fingerprinting), AP-PCR(arbitrarily primed PCR), STS(sequence tagged site), SCAR(sequence characterized amplified regions), ISSR(inter-simple sequence repeat amplication), AFLP(amplified fragment length polymorphism), CAPS(cleaved amplified polymorphic sequence) 및 PCR- SSCP(single-strand conformation polymorphism)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 방법으로 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 청구항 1의 핵산 또는 청구항 2의 프라이머의 존재 하에서 식물체의 게놈 DNA를 분석하는 것을 포함하는 탄저병(Colletotrichum acutatum) 저항성 고추의 유전자형(genotype)을 결정하는 방법.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 분석은 RFLP(restriction fragment length polymerphism), RAPD(randomly amplified polymorphic DNA), DAF(DNA amplification fingerprinting), AP-PCR(arbitrarily primed PCR), STS(sequence tagged site), SCAR(sequence characterized amplified regions), ISSR(inter-simple sequence repeat amplication), AFLP(amplified fragment length polymorphism), CAPS(cleaved amplified polymorphic sequence) 및 PCR-SSCP(single-strand conformation polymorphism)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 방법으로 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN105907754A (zh) * 2016-06-10 2016-08-31 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 辣椒抗炭疽病分子标记及应用
CN110734922A (zh) * 2019-10-29 2020-01-31 吉林大学 一种茶树炭疽病菌Colletotrichum camelliae的检测方法
KR20210157192A (ko) * 2020-06-19 2021-12-28 대한민국(농촌진흥청장) 탄저병 저항성을 증진시키는 고추 유래 CbNLR09 유전자

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