KR20090125246A

KR20090125246A - 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제

Info

Publication number: KR20090125246A
Application number: KR1020097018572A
Authority: KR
Inventors: 유이치로 다부노키
Original assignee: 코와 가부시키가이샤
Priority date: 2007-03-09
Filing date: 2008-03-07
Publication date: 2009-12-04
Also published as: JPWO2008111295A1; WO2008111295A1; US20100120732A1; EP2123280A1; CN101631551A

Abstract

본 발명은 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 조합하여 이루어지는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제에 관한 것이다. 본 발명의 의약은, 경구 투여가 가능하고, 부작용이 적어 SLE 에 수반되는 증상에 대하여 우수한 억제 작용을 나타내며, SLE 의 예방 및 치료에 유용하다.

Description

전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제 {AGENT FOR PREVENTION AND/OR TREATMENT OF SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS}

본 발명은 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제에 관한 것이다.

전신성 에리테마토데스 (Systemic Lupus Erythematosus : SLE) 는, DNA - 항 DNA 항체 등의 면역 복합체의 조직 침착에 의해 일어나는 전신성 염증성 병변을 특징으로 하는 자기 면역 질환이다. 증상은 치료에 의해 경쾌해지지만, 관해와 악화를 반복하여 만성의 경과를 취하는 경우가 많다는 특징을 갖고 있다. 일반 집단에서의 SLE 의 발병률은, 10 만명 당 10 ∼ 100 명으로 추정되는데, 1 촌 내에 SLE 환자가 있는 경우의 발병률은 2 ∼ 4％ 로, 일란성 쌍생아에서는 25％ 로 상승된다는 점에서, 유전적 요인이 큰 질환으로 생각된다. 또, 발증률의 남녀비는 1 : 9 인데, 출산 가능한 연령을 제외하면 남녀비는 거의 1 : 1 이 되고, 20 ∼ 40 대의 젊은 여성에게 잘 발생하는 것으로 알려져 있다 (비특허 문헌 1 참조).

한편, 환경적 인자로는 자외선, 바이러스 감염, 외상, 수술, 임신, 출산, 약제 처치 등을 들 수 있다. 그 대부분은 조직 상해를 일으키는 것으로서, 세포가 파괴되어 대량의 핵이나 세포 성분이 혈액 중에 유리되며, 이것이 방아쇠가 되어 자기 항원에 대한 면역 응답이 야기된다고 생각된다 (비특허 문헌 1 참조).

SLE 의 증상은, 그 질환명이 나타내는 바와 같이, 전신에 여러가지 병태를 발증시키는 것이 알려져 있고, 크게 나누면 이하의 10 종류로 분류할 수 있다 (비특허 문헌 2 참조).

(1) 전신 증상 : 전신 권태감, 피로해지기 쉬움, 발열 등이 선행되는 경우가 많다.

(2) 피부·점막 증상 : 나비형 붉은 반점과 디스코이드 발진이 특징적이다. 나비형 붉은 반점은 뺨뿐만 아니라 콧마루에 걸리는 것이 특징이다. 일광 노출로 악화된다. 피부 생검에서는, 진피 표피 결합부 IgG 의 침착이 확인된다 (루푸스 밴드 테스트 양성). 디스코이드 발진은 안면, 귓바퀴, 두부 (頭部), 관절 배면 등에 자주 나타나고, 당초에는 붉은 반점이지만, 이윽고 경결, 각화, 반흔, 위축을 초래한다. 이 외에 동창형 피진, 두발의 탈모, 일광 과민도 본 증상에 특징적이다. 구강, 비인강에 무통성의 궤양이 출현하는 경우도 있다.

(3) 근·관절 증상 : 근육통, 관절통은 급성기에 자주 나타난다. 관절염도 나타나지만, 골파괴를 동반하는 경우는 없는 것이 특징이다.

(4) 신장 증상 : 사구체 신염 (루프스 신염) 은 약 반수의 증례로 출현하고, 방치하면 위독해진다. 급성기에서는, 단백뇨가 나타나고, 요침사 (尿沈渣) 에서는 적혈구, 백혈구, 원주 등이 다수 출현한다.

(5) 신경 증상 : 중추 신경 증상을 나타내는 경우에는 중증이다 (CNS 루푸스). 우울 상태, 실견당식 (失見當識), 망상 등의 정신 증상과 경련, 뇌혈관 장애가 자주 나타난다. 수막염, 뇌염, 뇌신경 장애도 드물기는 하지만 나타나 는 경우가 있다.

(6) 심혈관 증상 : 심장 외막염은 자주 나타난다. 심근염을 일으키면, 빈맥, 부정맥이 출현한다. 판막 병변은 일반적으로 무증상이지만, 경도의 대동맥판 부전이나 승모판 부전을 일으키는 경우가 있다. 또, 반복되는 혈전성 정맥염을 일으키는 경우에는, 항 인지질 항체 증후군의 합병이 의심된다.

(7) 폐 증상 : 흉막염은 급성기에 자주 나타난다. 이 외에, 간질성 폐렴, 세포 출혈, 폐 고혈압증은 예후 불량의 병태로서 주의가 필요하다.

(8) 소화기 증상 : 복통을 수반하는 장간막 혈관염이나 루푸스 복막염을 발병시키는 경우가 있다.

(9) 조혈기 증상 : 용혈성 빈혈이 자주 나타나고, 망형상 적혈구의 증가와 햅토글로빈의 저하 등의 소견으로부터 진단된다. 백혈구 감소나 혈소판 감소도 자주 나타나, 말초에서의 파괴에 의한 것으로 생각된다.

(10) 그 외 : 림프절 종창이 급성기에 자주 나타난다.

상기 서술한 바와 같이, SLE 의 증상은 다방면에 걸쳐 있다는 점에서, 그 치료는 이하의 요소의 조합에 의해 성립된다 (비특허 문헌 3 참조).

(1) SLE 의 자기 면역에 대한 강력한 면역 억제 요법.

(2) SLE 의 전신성의 다장기 병변에 대한 치료.

(3) 만성 질환인 SLE 에 대한, 생명 예후나 장기 예후를 고려한 장기적인 치료 계획.

(4) 젊은 여성에 대한 배려 (특히 임신, 골다공증).

(5) Key Drug 인 부신 피질 스테로이드제의 부작용에 대한 배려.

(6) 환경적 인자에 대한 배려 (환자의 교육·지도).

SLE 의 치료제의 중심은, 현재에도 프레드니졸론을 비롯한 부신 피질 스테로이드제이다. 부신 피질 스테로이드제는, 항염증 작용과 면역 억제 작용을 갖고, 장기 병변을 일으키는 국소의 염증을 진정화함과 함께, 자기 항체 산생의 억제나 자기 반응성 림프구의 진정화를 통하여, 질환에 대한 치료 효과를 보이는 것으로 생각된다. 한편, 부신 피질 스테로이드 저항성의 증례나, 위독한 부작용이 출현하는 증례에 있어서는, 면역 억제제의 투여가 고려된다. 면역 억제제로는, 퓨린 대사 억제제인 아자티오프린이나 DNA 알킬화제인 시클로포스파미드의 경구 투여가 자주 사용된다. 또, 퓨린 생합성 경로의 율속 (律速) 효소인 이노신 1 인산 (IMP) 탈수소 산소의 저해제인 미조리빈의 경구 투여는, 루프스 신염에 대하여 유효한 것으로 보고되어 있다 (비특허 문헌 3 참조). 면역 억제제와 부신 피질 스테로이드제의 병용 효과에 대해서는, 그 유용성이 보고되어 있다 (비특허 문헌 4 참조).

한편, 최근에 와서, CD20 이나 BAFF 등의 B 세포를 타겟으로 한 생물 제제가 개발되고 있고 (비특허 문헌 5 참조), SLE 의 새로운 치료제로서 기대되고 있다. 또한, 인터페론 유도성 유전자와 SLE 의 활동성 사이에 상관이 있는 것으로 보고되어 (비특허 문헌 6 참조), 새로운 치료 타겟으로서 주목받고 있다.

염증성 사이토카인인 인터류킨-1β (IL-1β) 은, 많은 질환, 예를 들어 관절 류머티즘, 변형성 관절증, 골다공증, 염증성 대장염, 면역 부전 증후군, 패혈증, 간염, 신염, 허혈성 질환, 인슐린 의존성 당뇨병, 동맥 경화, 파킨슨병, 알츠하이머병, 백혈병 등에 있어서 그 산생 항진이 확인된다. 특히, 동물에 있어서 관절 내 주사하면 류머티즘양 관절염과 매우 흡사한 관절 파괴를 초래하는 것이 알려져 있다는 점에서, 염증성 질환의 치료제로서 IL-1β 저해제가 연구·개발되고 있고, IL-1 리셉터안타고니스트 (비특허 문헌 7 참조) 등의 생체 성분 유래 물질이나, T-614 (비특허 문헌 8 참조), 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 (특허 문헌 1 참조) 등의 저분자 화합물이 알려져 있다.

SLE 의 병태는, 자기 면역에 의해 유도되는 염증성 질환의 측면도 갖고 있다. 특히 대표적인 증상인 루프스 신염의 발증에는, 매크로파지가 중심적인 역할을 하고 있고, 그 활성화에 관여하는 사이토카인이나, 활성화에 의해 산생되는 사이토카인이 주목받고 있다 (비특허 문헌 9 참조). 그 중에서도 IFN-γ (비특허 문헌 10 참조) 나 TNF-

(비특허 문헌 11 참조) 의 저해, 혹은 IL-1 리셉터안타고니스트인 아나킨라의 투여 (비특허 문헌 12 참조) 가, SLE 의 병태 개선으로 이어지는 것이 시사되어 있다.

그러나, SLE 에 대한 부신 피질 스테로이드제와 IL-1β 저해제의 병용 효과에 대해서는, 아직도 알려져 있지 않다.

[특허 문헌 1] 국제 공개 제99/25697 팜플렛

[비특허 문헌 1] Nippon Rinsho 63, Suppl5, pp247-252, 2005

[비특허 문헌 2] "난치병 정보 센터", [online], 후생 노동성, [2007년 2월 28일 검색], 인터넷 ＜URL:http://www.nanbyou.or.jp/sikkan/063_i.htm＞

[비특허 문헌 3] Nippon Rinsho 63, Suppl5, pp253-259, 2005

[비특허 문헌 4] Pediatr. Int. 44, pp199-204, 2002

[비특허 문헌 5] Expert Opin. Ther. Targets 10, pp803-815, 2006

[비특허 문헌 6] Arthritis＆Rheumatism 50, pp3958-3967, 2004

[비특허 문헌 7] Ann. Rheum. Dis. 59 (suppl I) pp103-108, 2000

[비특허 문헌 8] J. Pharmacobio-Dyn. 15, pp649-655, 1992

[비특허 문헌 9] Lupus 13, pp344-347, 2004

[비특허 문헌 10] J. Exp. Med. 166, pp798-803, 1987

[비특허 문헌 11] Arthritis＆Rheumatism 50, pp3161-3169, 2004

[비특허 문헌 12] Ann. Rheum. Dis. 64, pp630-633, 2005

발명의 개시

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명의 목적은 전신성 에리테마토데스 (Systemic Lupus Erythematosus : SLE) 의 예방 및 치료 효과가 우수한 약제를 제공하는 것에 있다.

과제를 해결하기 위한 수단

본 발명자들은 이러한 실정을 감안하여 예의 연구한 결과, IL-1β 저해제인 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온과 부신 피질 스테로이드제를 병용 투여함으로써, 상승적 (相乘的) 으로 우수한 SLE 의 증상, 특히 신장에서의 SLE 관련 유전자 발현의 억제 효과가 얻어지고, 그 효과는 각각을 단독 투여한 경우의 효과로부터는 예상할 수 없을 정도로 강력한 것을 알아내어, 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명은 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 조합하여 이루어지는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제를 제공하는 것이다.

또, 본 발명은 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물 및 부신 피질 스테로이드제의, 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제 제조를 위한 사용을 제공하는 것이다.

또, 본 발명은 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료를 위한, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제의 조합을 제공하는 것이다.

나아가 또한, 본 발명은 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 조합하여 투여하는 것을 특징으로 하는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

발명의 효과

본 발명의 SLE 의 예방 및/또는 치료제는 경구 투여가 가능하고, 부작용이 적어 SLE 에 수반되는 증상에 대하여 우수한 억제 작용을 나타내며, SLE 의 예방 및 치료에 유용하다.

도 1 은 SLE 모델 마우스의 신장에서의 IFN-γ 의 mRNA 발현량에 미치는 약제의 효과를 나타내는 도면이다.

도 2 는 SLE 모델 마우스의 신장에서의 TNF-

의 mRNA 발현량에 미치는 약제의 효과를 나타내는 도면이다.

도 3 은 SLE 모델 마우스의 신장에서의 IL-1β 의 mRNA 발현량에 미치는 약제의 효과를 나타내는 도면이다.

도 4 는 SLE 모델 마우스의 신장에서의 BAFF 의 mRNA 발현량에 미치는 약제의 효과를 나타내는 도면이다.

도 5 는 SLE 모델 마우스의 신장에서의 IFIT1 의 mRNA 발현량에 미치는 약제의 효과를 나타내는 도면이다.

도 6 은 SLE 모델 마우스의 신장에서의 IP-10 의 mRNA 발현량에 미치는 약제의 효과를 나타내는 도면이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명의 SLE 의 예방 및/또는 치료제에서 사용하는 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온은, 예를 들어 국제 공개 번호 제WO99/25697 에 기재된 방법 또는 유사한 방법으로 제조할 수 있다.

또, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온은 수화물로 대표되는 용매화물의 형태로 존재할 수 있는데, 그들 당해 용매화물도 본 발명에 포함된다.

본 발명의 SLE 의 예방 및/또는 치료제에서 사용하는 부신 피질 스테로이드제는, 그 작용 강도가 프레드니졸론 환산되는 모든 부신 피질 스테로이드제를 포함하는 것이다. 여기서, 부신 피질 스테로이드제로는, 스테로이드 골격을 가지며, 당질 코르티코이드 작용 및/또는 광질 코르티코이드 작용을 갖는 화합물을 들 수 있다. 또, 이들 화합물 및 그 염의 수화물이나 에스테르, 의약품으로서 허용되는 용매와의 용매화물, 나아가 이들 화합물에 부제 탄소 원자가 존재하는 경우 및 불포화 결합을 갖고 그 입체 이성체가 존재하는 경우에는, 그들 모든 이성체를 포함하는 것이다.

본 발명에 있어서의 바람직한 부신 피질 스테로이드제로는, 프레드니졸론, 메틸프레드니졸론, 베타메타손, 덱사메타손·팔미트산 에스테르를 들 수 있고, 특히 프레드니졸론이 바람직하다. 이들 부신 피질 스테로이드제는, 시약 혹은 의약품 등의 시판품으로서 입수할 수 있다. 예를 들어, 프레드니졸론은 SIGMA 사로부터 입수할 수 있다.

후기 실시예에 나타내는 바와 같이, 전신성 에리테마토데스의 동물 모델로서 널리 알려진 NZB/WF1 마우스를 사용한 평가계에 있어서, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물을 단독으로 사용한 경우에는, 신장에서의 SLE 관련 유전자의 유의한 발현 억제 작용은 확인되지 않았는데 반해, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 병용 투여함으로써, 신장에서의 SLE 관련 유전자의 발현을 강력하게 저하시켰다. 따라서, 본 발명에 의하면, 전신성 에리 테마토데스를 예방 및/또는 치료할 수 있다.

본 발명의 SLE 의 예방 및/또는 치료제에서 사용하는 약제의 투여 형태는, 특별히 한정되지 않고 치료 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들어 정제, 캡슐제, 과립제, 필름 코팅제, 산제, 시럽제 등에 의한 경구 투여 또는 주사제, 좌제, 흡입제, 경피 흡수제, 점안제, 점비제 등에 의한 비경구 투여를 들 수 있는데, 특히 경구 투여하는 것이 바람직하다.

이들 투여 형태에 적합한 의약 제제는, 약학적으로 허용되는 담체, 예를 들어 전분류, 락토오스, 자당, 만니톨, 규산 등의 부형제나 증량제 ; 한천, 탄산 칼슘, 감자 혹은 타피오카 전분, 알긴산, 특정한 복합 규산염 등의 붕괴제 ; 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 알긴산염, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 자당, 아라비아 고무 등의 결합제 ; 탤크, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 마그네슘, 고형 폴리에틸렌글리콜류, 라우릴 황산 나트륨, 또는 그 혼합물 등의 활택제 ; 유당, 옥수수 전분 등의 희석제 ; 시트르산, 타르타르산, 락트산 등의 유기산, 인산, 염산 등의 무기산, 수산화 나트륨, 수산화 칼륨 등의 수산화 알칼리, 트리에탄올아민, 디에탄올아민, 디이소프로판올아민 등의 아민류 등의 완충제 ; 파라옥시벤조산 에스테르류, 염화 벤잘코늄 등의 방부제 ; 스테아르산 칼슘, 스테아르산 마그네슘, 라우릴 황산 나트륨 등의 음이온성 계면 활성제, 염화 벤잘코늄, 염화 벤제토늄, 염화 세틸피리디늄 등의 양이온성 계면 활성제, 모노스테아르산 글리세릴, 자당 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 등의 비이온성 계면 활 성제 등의 유화제 ; 아황산 나트륨, 아황산 수소 나트륨, 디부틸하이드록시톨루엔, 부틸하이드록시아니솔, 에데트산 등의 안정화제 이외에, 필요에 따라 추가로 교취제, 분산제, 보존제, 향료 등을 적절히 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 약제의 사용 형태는, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 조합하여 사용하고, 양 약제의 투여에 의한 상승적인 SLE 증상의 억제 효과가 얻어지는 형태이면 특별히 한정되지 않는다. 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제는, 동시에 투여해도 되고, 간격을 두고 따로 따로 투여해도 된다. 즉, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물 및 부신 피질 스테로이드제는, 양 약제를 단일 제제화하거나 또는 양 약제를 따로 따로 제제화하여 세트 (키트) 로서 사용해도 된다.

본 발명에 있어서, 양 약제를 단일 제제로서 투여하는 경우, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제의 배합비는, 질량비로 100 : 1 ∼ 1 : 100, 나아가 10 : 1 ∼ 1 : 10 의 범위인 것이, 특히 우수한 상승 효과가 얻어진다는 점에서 바람직하다.

또, 본 발명에 있어서, 양 약제를 따로 따로 제제화하는 경우, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물을 함유하는 제제는, 부신 피질 스테로이드제와 병용 투여되는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제로서 제공되고, 한편 부신 피질 스테로이드제를 함유하는 제제는, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 병용 투여되는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제로서 제공된다. 양 약제의 제형은 동일해도 되고, 상이해도 된다. 또, 각 성분의 투여 횟수는 상이해도 된다.

본 발명에 있어서, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물의 투여량은, 환자의 체중, 연령, 성별, 증상 등에 따라 적절히 선택되는데, 통상 성인의 경우, 1 일 당 2 ∼ 320 ㎎, 바람직하게는 4 ∼ 160 ㎎ 투여하는 것이 좋다. 또, 부신 피질 스테로이드제의 투여량은, 증상에 따라 증감되지만, 성인의 경우, 프레드니졸론 환산으로 1 일 당 10 ∼ 200 ㎎ 투여하는 것이 좋다. 나아가, 투여는 1 일 1 회, 혹은 2 회 이상으로 나누어 투여해도 된다.

실시예

이하에 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 (이하 약제 A 로 나타낸다) 과 프레드니졸론 (이하 약제 B 로 나타낸다) 의 병용 투여 및 각각의 단독 투여에 의한, 신장에서의 질환 관련 유전자의 발현 억제 작용을, SLE 의 자연 발증 모델로서 잘 알려져 있는 NZB × NZW (NZB/W) F1 마우스를 사용하여 평가하였다.

시험 동물에는, 자성 NZB/WF1 마우스 (닛폰 에스에르시 주식회사) 를 사용하였다.

20 주령 NZB/WF1 마우스의 체중을 측정하고, 이것을 지표로 하여 1 변수에 의한 블록화 할당을 실시함으로써, 각 군이 균질해지도록 군나누기를 실시하였다.

약물 투여는, 군나누기 다음날부터 10 주 후까지 실시하였다. 약제 A 단독 투여군에는, 아침 (9 : 00 - 11 : 00) 및 저녁 (15 : 30 - 17 : 30) 2 회, 30 ㎎/㎏ 을 경구 투여하였다. 또, 약제 B 단독 투여군에는, 낮 (11 : 30 - 13 : 30) 에 1 회, 3 ㎎/㎏ 을 경구 투여하였다. 한편, 약제 A 와 약제 B 의 병용 투여군에는, 아침 (9 : 00 - 11 : 00) 및 저녁 (15 : 30 - 17 : 30) 에 약제 A 30㎎/㎏ 을, 낮 (11 : 30 - 13 : 30) 에 약제 B 3㎎/㎏ 을 각각 경구 투여하였다.

군나누기의 10 주 후 (30 주령시) 에, 각 개체로부터 신장을 적출하고, 수평 방향으로 2 분할한 후, RNAlater (QIAGEN 사 제조) 에 4 ℃ 에서 24 시간 침지시키고, RNase 비활화 처리를 실시하였다. 다음으로 2 분할한 신장을 전단부, 중앙부, 후단부로 3 분할하고, 신장문, 골수질 및 피질을 포함하는 중앙부로부터, RNeasy kit (QIAGEN 사 제조) 및 QiaShredder (QIAGEN 사 제조) 를 사용하여 Total RNA 를 추출하였다. ABI PRISM (R) 7900 Sequence Detection System (Applied Biosystems 사 제조) 과 TaqMan (R) Gene Expression Assays (Applied Biosystems 사 제조) 를 사용하고, Real-Time RT-PCR 법에 의한 SLE 관련 유전자 (IFN-γ (프로브 번호 : Mm00801778＿m1), TNF-

(프로브 번호 : Mm00443258＿m1), IL-1β (프로브 번호 : Mm00434228＿m1), BAFF (프로브 번호 : Mm00446347＿m1), IFIT1 (프로브 번호 : Mm00515153＿m1) 및 IP-10 (프로브 번호 : Mm00445235＿m1)) 의 mRNA 발현량을 정량하였다. 또한, IFN-γ 는 매크로파지 활성화 인자로서, TNF-

및 IL-1β 는 활성화 매크로파지로부터 산생되는 염증성 사이토카인으로서, BAFF 는 B 세포에 관여하는 인자로서, IFIT1 및 IP-10 은 인터페론 유도성 유전자군으로서 평가 대상으로 선택하였다.

표 및 도면에, 컨트롤군, 약제 A 30㎎/㎏ 단독 투여군, 약제 B 3㎎/㎏ 단독 투여군, 및 양 약물 병용 투여군의 신장 중의 IFN-γ (표 1, 도 1), TNF-

(표 2, 도 2), IL-1β (표 3, 도 3), BAFF (표 4, 도 4), IFIT1 (표 5, 도 5), IP-10 (표 6, 도 6) 의 mRNA 의 발현량을, 컨트롤군의 평균값을 100％ 로서 환산한 값으로 각각 나타낸다. mRNA 의 발현량은, 각 군 마우스 10 ∼ 11 마리의 평균값 ± 표준 오차로 나타낸다. 또, Dunnett 다중 비교 검정에 의해 통계 해석을 실시하여 평가하였다 (** : p ＜ 0.01, * : p ＜ 0.05 ; 모두 대조군에 대하여).

주 1) 단독 투여군의 상대 지수의 곱 : 0.857 × 0.360 ＝ 0.309

주 2) mRNA 발현량은 각 군 마우스 10 ∼ 11 마리의 평균값 ± 표준 오차로 나타내고 있다.

주 1) 단독 투여군의 상대 지수의 곱 : 0.634 × 0.522 ＝ 0.331

주 1) 단독 투여군의 상대 지수의 곱 : 1.266 × 0.661 ＝ 0.836

주 1) 단독 투여군의 상대 지수의 곱 : 1.135 × 0.722 ＝ 0.820

주 1) 단독 투여군의 상대 지수의 곱 : 0.721 × 0.786 ＝ 0.566

주 1) 단독 투여군의 상대 지수의 곱 : 0.883 × 0.635 ＝ 0.566

약제 A 는 30 ㎎/㎏ 의 투여량으로 본 모델의 신장에서의 SLE 관련 유전자의 발현에 대하여 작용을 나타내지 않거나, 혹은 약한 발현 억제 경향밖에 확인되지 않았다. 한편, 약제 B 는 3 ㎎/㎏ 의 투여량으로 어느 유전자에 대해서도 발현 억제 경향을 나타내었다. 그러나, 약제 A 및 약제 B 를 병용 투여함으로써, 신장에서의 SLE 관련 유전자의 발현을 강력하게 저하시켰다. 또, SLE 관련 유전자 발현량의 상대 지수는, 각 약제 단독 투여군의 상대 지수의 곱보다 작아, 병용에 의한 명확한 상승 효과가 확인되었다. 이와 같이, 약제 A 와 약제 B 의 병용에 의한 SLE 예방 및 치료 효과는, 각각 단독의 효과의 예상을 훨씬 초과하는 것이었다.

이상의 결과로부터, 2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제의 병용 투여는, 전신성 에리테마토데스에 대하여 각각 단독으로 투여하는 경우에는 예측할 수 없을 정도의 우수한 예방 및 치료 효과가 발휘되므로, 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제로서 유용하다는 것을 알 수 있다.

Claims

2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 조합하여 이루어지는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제.
제 1 항에 있어서,

부신 피질 스테로이드제가 프레드니졸론, 메틸프레드니졸론, 베타메타손 및 덱사메타손·팔미트산에스테르 그리고 그들의 용매화물에서 선택되는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제.
제 1 항에 있어서,

부신 피질 스테로이드제가 프레드니졸론 또는 그 용매화물인 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

제형이 경구 투여 제제인 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료제.
2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물 및 부신 피질 스테로이드제의, 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치 료제 제조를 위한 사용.
제 5 항에 있어서,

부신 피질 스테로이드제가 프레드니졸론, 메틸프레드니졸론, 베타메타손 및 덱사메타손·팔미트산에스테르 그리고 그들의 용매화물에서 선택되는 사용.
제 5 항에 있어서,

부신 피질 스테로이드제가 프레드니졸론 또는 그 용매화물인 사용.
제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

제형이 경구 투여 제제인 사용.
2-벤질-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸티오)페닐]-2H-피리다진-3-온 또는 그 용매화물과 부신 피질 스테로이드제를 조합하여 투여하는 것을 특징으로 하는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료 방법.
제 9 항에 있어서,

부신 피질 스테로이드제가 프레드니졸론, 메틸프레드니졸론, 베타메타손 및 덱사메타손·팔미트산에스테르 그리고 그들의 용매화물에서 선택되는 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료 방법.
제 9 항에 있어서,

부신 피질 스테로이드제가 프레드니졸론 또는 그 용매화물인 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료 방법.
제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,

투여 수단이 경구 투여인 전신성 에리테마토데스의 예방 및/또는 치료 방법.