KR20090102850A - 항바이러스 화합물 - Google Patents

항바이러스 화합물

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Abstract

본 발명은 뉴라미니다제(NA), 헤마글루티닌(HA) 및 바이러스 보유 구조적 M2 단백질에 대해 억제 효과를 나타내는 신규한 종류의 화합물을 제공한다. 이들 화합물은 또한 간염 바이러스 타입 C(HVC)의 복제 인자의 억제제로서 유용하다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 적합하고 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 병용으로 본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 조성물을 기술한다.

Description

항바이러스 화합물{ANTIVIRAL COMPOUNDS}
본 발명은 뉴라미니다제(NA), 헤마글루티닌(HA), 구조단백질 M2 및 헤마글루티닌 에스터라제 융합(HEF) 당단백질의 억제제로 유용한 신규한 종류의 화학적 화합물: 바이러스 감염의 치료, 예방 또는 완화에 유용한 상기 화합물을 함유하는 약학적 조성물; 및 상기 화합물 및 조성물을 이용하는 방법에 관한 것이다.
전자 현미경 상에서 관찰할 때, 인플루엔자 바이러스는 80 내지 12 nm의 직경을 갖는 구형 형상 및/또는 섬유상 형태를 나타내는 것으로 발견되었다(Yoshinori Fujiyoshi 등, "Fine structure if influenza A virus observed by electron cryo-microscopy", The EMBO Journal 13(2), pages 318-26, 1994). 바이러스 막의 가장 전형적인 특징은 A형 및 B형 바이러스의 경우에는 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미니다제(NA)[(Wilson I.A. 등, "Structure of the haemoagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 Å resolution", Nature, 289, pages 366-73, 1981; Varghese J.N. 등, "Structure of the influenza virus glycoprotein antigen neuraminidase at 2.9 Å resolution", Nature, 303, pages 35-40, 1983; Colman P.M. 등, "Structure of the catalytic and antigenic sites in influenza virus neuraminidase", Nature, 303, pages 41-44, 1983)], 그리고 C형 인플루엔자 바이러스의 경우에는 3종의 생물학적 활성: 수용체에의 결합(H), 수용체 불활성화(E) 및 융합(F)을 담당하는 헤마글루티닌 에스터라제 융합(HEF)으로 명명된 당단백질(Herrier Georg, 등, "A synthetic sialic acid analogue is recognized by influenza C virus as a receptor but is resistant to the receptor-destroying enzyme", J. Biol. Chem., 2567 (8), pages 12501-12505, 1992)에 대응하는 방사상 돌기의 존재이다.
제1 세대 항바이러스 제품(주로 아다만탄 유도체, 유사 아다만틴, 리만다딘 등)은 A형 인플루엔자 바이러스의 M2-단백질 이온-채널을 차단함으로써 작용하는 것으로 생각된다. M2-단백질 채널을 통한 H+ 이온의 유입 차단은 유리 리보핵산단백질의 탈외피 및 세포질 내로의 방출을 억제한다. 이는 B형 균주가 아닌, 이 바이러스의 A형 균주에서만 일어난다.
그 후에, 항바이러스 전략은 제2 세대 항바이러스제, 예컨대 자나미비르(zanamivir) 및 오셀타미비르(oseltamivir)의 개발로 이어졌는데, 이는 A형 및 B형 인플루엔자 바이러스의 표면 상에 버섯-모양 돌기로서 존재하는, 헤마글루티닌(HA) 또는 효소 뉴라미니다제(NA)를 억제한다. 이들 단백질은 시알로당단백질 및 당지질의 시알산 잔기를 절단함으로써 감염되는 표적 세포의 막 표면에 결합한다. 또한, 바이러스 복제 말기에 뉴라미니다제는 바이러스가 방출되도록 수용체로부터 시알산을 절단하는데 필수적이다.
그와 반대로, C형 간염 바이러스(HVC)에 대항하는 현재 전략은 세포내 수준을 감소시킴으로써, 구아노신 일인산염의 합성에 리바비린(일인산염으로서)의 사용을 억제하는 것을 포함한다. 또한 리바비린(삼인산염으로서)은 바이러스 ARNm 및 또한 ARN 중합효소의 합성을 감소시킴으로써 효소 ARNm-구아닐릴 전이효소를 억제한다.
국제 간행물에 약물-내성 인플루엔자 균주 및 특히 A형 바이러스의 지속적인 돌연변이 모두가 점차 많이 보고되고 있으며, 내성 변이체 또는 조합은 전파가능하고 완전히 병원성이다. 이러한 측면에서, 가장 최근 동안에 조류 인플루엔자 A(H5N1) 바이러스가 범유행 발병의 심각한 위험으로서 과학자들에 의해 기술되었다.
유사하게, C형 간염 바이러스 감염은 전 세계에서 매우 일반적이며, 그로써 또한 환자 수의 증가에 영향을 미치는 심각한 병원성 상태를 나타낸다.
상기에 비추어, 바람직하게는 바이러스 복제에 대해 다중-병합된 작용 기작을 나타내는 개선된 항바이러스 화합물의 개발이 시급히 요구되고 있다.
관련 기술의 간략한 설명
문헌[Itzstein, M. von 등, "Nature", 363 (6428), pages 418-423 (1993)]은 인플루엔자 바이러스 복제의 시알리다제-계 억제제의 이론적 고안을 기술한다. 국제특허공개 제WO92/06691호(Colman, P.M. 등, PCT/AU90/00501, 1992.04.30.일자로 공개됨), 유럽특허 제0539204A1호(Itzstein, LM. von 등, 유럽특허출원 제92309684.6호, 1993.04.28.일자로 공개됨), 및 국제특허공개 제WO91/16320호(Itzstein, L. M. von 등, PCT/AU91/00161, 1991.10.31.자로 공개됨)는 뉴라미니다제에 결합하고 생체 내에서 항바이러스 활성을 나타내는 것으로 주장되는 화합물을 기술한다. 미국특허 제5,952,375호(Bischofberger N. W. 등, 미국특허출원 제08/606,624호, 1996.02.26.일자로 출원됨)는 뉴라미니다제 억제제로서 신규 화합물을 기술한다.
문헌[Babu Y.S., Chad P., Bantia S. 등,: "Discovery of a novel, highly potent, orally active, and selective influenza neuraminidase inhibitor through structure-based drug design". J Med Chem, 43(19): 3482 (2000)], 국제특허공개 제WO99/33781호(국제특허출원 제PCT/US98/26871호, 1999.07.08.자로 공개됨)는 뉴라미니다제 억제제로 유용한 신규 치환된 화합물 및 유도체를 기술한다.
또한, 문헌[Martindale 33. rd Ed. (2002) pages 639-43]에 기술된 바와 같이, 만성 HVC 감염을 치료하기 위하여 인간 대상에게서 퓨린 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 리바비린 또는 비라미딘과 사이토카인, 예컨대 인터페론 알파-2b(또는 페길화 인터페론 알파-2b)를 병용하는 것은 통상적인 의학적 진료이다. 실제로, 리바비린 일인산염 및 그러한 유사체는 구아노신 일인산염의 합성 및 세포내 농도를 억제하는 반면, 삼인산염 염은 RNAm-구아닐릴 전이효소를 방해하는 것으로 생각된다.
본 발명은 통상의 당업자가 하기 실시예의 청구 대상을 제조하고 사용하는 것을 허용하도록 충분히 상세하게 기술되어 있다. 하기 실시예의 방법 및 조성물의 특정 변형이 발명의 범위 및 요지 내에서 이루어질 수 있음이 명백하다. 본 발명은 하기 예시적인 실시양태 및 첨부의 도 1-4를 참고로 하여 더욱 상세히 기술될 것이다:
도 1은 출발 중간체 아만타딘(B)와 비교하여, 화합물 1의 FT-IR(적외선 분광광도계, Fourier Transform Infrared Spectroscopy) 스펙트럼(A)이고,
도 2는 출발 중간체 리만타딘(B)와 비교하여, 화합물 4의 FT-IR 스펙트럼(A)이고,
도 3은 출발 중간체 메만틴(B)과 비교하여, 화합물 8의 FT-IR 스펙트럼(A)이다.
발명의 목적
본 발명의 일 목적은 바이러스, 특히 인플루엔자 및 간염 바이러스에 유의미한 억제 효과를 나타내는 신규한 화학적 화합물을 제공하는 것이다. 신규한 화합물은 구조단백질 상에, 예컨대 바이러스 내 M2, 및 해당효소 상에, 예컨대 뉴라미니다제(NA), 및 더욱 구체적으로는 바이러스 뉴라미니다제와의 간섭을 통해 막단백질, 헤마글루티닌(HA)의 이들의 병용된 선택적 억제를 나타낸다. 신규 화합물은 또한 간염 바이러스 타입 C(HVC)에 억제 활성을 나타낸다. 다른 목적은 현재 사용되는 항바이러스제에 어떠한 교차-내성도 유발하지 않으면서, 심각한 바이러스 감염을 유발하는 가장 일반적인 바이러스의 바이러스 복제 및 전파 과정이 개선되고 더 저렴한 억제제를 제공하는 것이다. 또 다른 목적은 본 발명의 신규 화합물 또는 다른 공지된 항바이러스 제제와 이들의 이론적인 병용의 투여를 위한 개선된 방법을 제공하는 것이다. 부가적인 목적은 상기 목적에 유용한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
이들 및 다른 목적은 전체로서 발명의 고려로부터 통상의 당업자에게 쉽게 명백해질 것이다.
발명의 요약
본 발명의 제1 측면에서, 화학식 (I)의 화합물 및 이들의 C1-4 카르복실 단일 또는 폴리 에스테르, 부가염, 용매화물, 분해된 거울상체 및 정제된 부분입체이성질체가 본 명세서에 제공된다:
상기에서:
X는 -CH2-, -O-, -CHF-, -CF2-이고;
단일 또는 이중 결합은 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하고;
R1은 -OH, 할로겐 또는 -B/잔기를 나타내되, 단 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하는 이중 결합이 존재할 때 R1이 부재이고;
R2는 -OH, -0-CH(C2H5)2, -NH2, -NHC(NH)NH2 또는 -NH-OH이고;
R3은 -NH2, -NHCO-CH3 또는 -NH-CO-CH2-OH이고;
R4는 -CHOH-CHOH-CH2-OH, -CHOH-CH2-B/잔기, -CH2-B/잔기 또는 -B/잔기를 나타내고;
상기에서 -B/잔기는:
또는 를 나타내고
상기에서:
R5는 연결 관능기 -NH-, -CH2-NH-, -CH(CH3)-NH-, -NH-CH(CH3)-NH-, -C(CH3)2-CH2-NH-, -NH-CO-CH2-O-CH2-CH2-NH-, 또는
또는 를 나타내고;
R6은 -H, -CH3 또는 -C2H5이고;
R7은 -H, -CH3 또는 -C2H5이고;
R8은 연결 관능기 -NH-, -CO-NH- 또는 -C(NH)-NH-를 나타낸다.
또한 포유동물, 특히 인간에게 투여하기에 적합한 약학적으로 허용가능한 담체 내에 본 발명의 화합물을 단독으로 또는 다른 활성제와 병용하여 포함하는 약학적 조성물이 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 다른 실시양태에서, 뉴라미니다제 및/또는 단백질 M2의 활성은 뉴라미니다제 및/또는 단백질 M2를 함유하는 것으로 의심되는 시료를 본 발명의 화합물 또는 조성물로 처리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 억제될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 화합물의 치료적으로 유효한 용량의 임의의 적합한 투여 경로에 의해 숙주에게 투여하는 것을 포함하는, 숙주에서 바이러스 감염, 예를 들어 인플루엔자 바이러스 또는 간염 바이러스에 의해 야기되는 감염의 치료, 또는 예방을 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 합성을 위한 신규 방법이 또한 제공된다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 하기 형상을 갖는 구조식 (I)의 화합물에 관한 것이다:
상기에서:
X는 -CH2-, -O-, -CHF-, -CF2-이고;
단일 또는 이중 결합은 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하고;
R1은 -OH, 할로겐 또는 -B/잔기를 나타내되, 단 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하는 이중 결합이 존재할 때 R1이 부재이고;
R2는 -OH, -0-CH(C2H5)2, -NH2, -NHC(NH)NH2 또는 -NH-OH이고;
R3은 -NH2, -NHCO-CH3 또는 -NH-CO-CH2-OH이고;
R4는 -CHOH-CHOH-CH2-OH, -CHOH-CH2-B/잔기, -CH2-B/잔기 또는 -B/잔기를 나타내고;
상기에서 -B/잔기는:
또는 를 나타내고
상기에서:
R5는 연결 관능기 -NH-, -CH2-NH-, -CH(CH3)-NH-, -NH-CH(CH3)-NH-, -C(CH3)2-CH2-NH-, -NH-CO-CH2-O-CH2-CH2-NH-, 또는
또는 를 나타내고;
R6은 -H, -CH3 또는 -C2H5이고;
R7은 -H, -CH3 또는 -C2H5이고;
R8은 연결 관능기 -NH-, -CO-NH- 또는 -C(NH)-NH-를 나타낸다.
바람직한 실시양태에서 X는 -0-, 전형적으로 시알산 고리로 표시되는데, C1 내 상기 카르복실산은 바이러스 뉴라미니다제에 대한 공격 지점인 것으로 생각되기 때문에 비치환된 상태로 남아 있다. 다른 더 바람직한 실시양태에서 단일 또는 이중 결합은 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하되, 이중 결합의 존재 하에서 R1은 부재이다. 다른 전형적인 실시양태에서 적어도 R1 또는 R4는 -B/잔기로 단일-치환될 수 있다. 따라서, R1은 바람직하게는 -OH, 할로겐 또는 전형적으로는 -B/잔기를 나타내고, R4는 -CHOH-CHOH-CH2-OH 또는 전형적으로 -CHOH-CH2-B/잔기를 나타내고, 여기서 -B/잔기는 -B1/잔기 또는 -B2/잔기일 수 있다.
전형적인 -B1/잔기가 사용될 때, 바람직하게는 A 및 B 인플루엔자 바이러스 균주의 뉴라미니다제 기작에 대한 특이적 억제가 도출되고 M2-단백질 이온-채널(균주 A에만 존재)의 차단이 또한 허용된다. -B2/잔기가 또한 유사한 억제 효과를 달성하기 위해, 단일-치환된 유도체에 대해 사용될 수 있다. 다른 적합한 조합 R1 및 R4가 동일하게 또는 다르게 이치환될 수 있다. 바람직한 조합에서 R1 및 R4는 모두 B2-잔기로 치환될 수 있고 그 결과 화합물은 HVC 복제를 더욱 선택적으로 억제하는 것으로 생각된다. R1이 B1/잔기 또는 B2/잔기로 치환되고 R4가 B2/잔기 또는 B1/잔기로서 다르게 표시될 때, 그 결과 억제는 A 및 B 인플루엔자 바이러스 균주 및 또한 HVC 모두에 효과를 나타낼 수 있는 것으로 생각된다.
추가적으로 바람직한 실시양태에서 R2는 -OH 및 R3-NHCO-CH3일 수 있다. R1 또는 R4가 동시에 주된 구조 (I)에 연결된 B1/잔기로 치환될 때, 다른 바람직한 실시양태는 연결기 R5가 -NH- 또는 -CH(CH3)-NH-일 수 있는 반면, R6 및 R7은 바람직하게는 -H 또는 -CH3일 수 있다. R1 또는 R4가 주된 구조 (I)에 연결된 B2/잔기로 표시될 때, 상기 연결기 R8은 바람직하게는 -CO-NH-일 수 있다.
본 발명의 화합물의 선형 또는 분지된 C1 -4 카르복실 모노 또는 폴리 에스테르, 부가염, 용매화물, 분해된 거울상체 및 정제된 부분입체이성질체가 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 다른 실시양태에서, 뉴라미니다제 및/또는 M2 이온-채널의 활성은 뉴라미니다제 및/또는 M2 단백질을 함유하는 것으로 의심되는 바이러스 시료를 본 명세서에 기술된 바와 같은 본 발명의 화합물 또는 조성물로 처리함으로써 억제 또는 차단될 수 있다.
다른 측면에서 본 발명은 본 발명에 따른 화합물의 치료적으로 유효한 용량을 임의의 적합한 투여 경로에 의해 숙주에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물 숙주에서 바이러스 감염, 특히 인플루엔자 A 및 B 바이러스 균주 또는 HVC의 감염의 치료 또는 예방을 위한 방법에 관한 것이다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 합성을 위한 신규한 방법이 또한 제공된다.
이들을 포유동물에 투여하기에 적합하게 해주는 약학적으로 허용가능한 담체 내에 본 발명에 따른 화합물을 단독으로 또는, 예를 들어, 본 발명의 다른 화합물 또는 하나 이상의 활성제와 병용하여 포함하는 약학적 조성물 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 다른 측면은 본 발명의 화합물 또는 약학적 조성물 또는 이들의 혼합물을 이용하는 처리와, 또한 이러한 바이러스 감염을 치료할 수 있는 다른 치료적으로 유효한 용량의 활성제와의 동시 또는 교대 처리를 병용하여 상기 바이러스 질환 또는 상태의 치료 또는 예방을 위한 방법을 포함한다.
본 발명의 화합물을 생산하는 방법이 또한 본 발명에 의해 포함된다. 상기 화합물은 통상의 당업자에게 잘 알려져 있는, 유기 합성의 적용가능한 기술 중 어느 하나에 의해 제조될 수 있다.
R1이 시알산 고리의 일반적인 제조를 위해 C2에 직접적으로 연결된(X = -O-) 본 발명의 바람직한 화합물의 일반적인 제조를 위해, Tang 등[Biochem. Biophys. Res. Commun., 132: 474-80 (1985)]에 의해 최초로 기술되고 문헌[Stoll 등, Biochem. J., 256: 661-4 (1988); 및 Scharzmann G. 등, Biochem., 22: 5041-9 (1983)]에 의해 변경된 환원성 아미드화(reductive amidation) 공정이 바람직할 수 있다. 실제로, 상기 방법에 수반하여 시알산 고리의 C2와 -B/잔기의 아미노기 사이에 공유 아민 연결이 성립될 수 있다.
유사하게, R4가 시알산 고리의 C6에 직접적으로 연결되어(X = -O-) 있는 것들과 같은, 본 발명의 다른 바람직한 화합물의 일반적인 제조를 위해 하기 간행물에 기재된 많은 공지된 기술이 수반될 수 있다: 문헌[Compendium of Organic Synthetic Methods (John Wiley & Sons, New York), Vol. 1, Ian T; Harrison and Shuye, Harrison, 1971; Vol.2, Ian T. Harrison and Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus and Leroy Wade, 1977; Vol. 4, Leroy G. Wade, jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr. 1984; and Vol. 6, Michael B. Smith; as well as March, J., 2Advanced Organic Chemistry, Third Edition, (John Wiley & Sons, New York, 1985), Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficacy in modern Organic Chemistry. In 9 Volumes, Barry M. Trost, Editor- in-Chief (Pergamon Press, New York, 1993 printing)].
본 발명의 화합물의 제조를 위한 수많은 예시적인 방법들이 하기에 제공되지만, 이들이 적용가능한 방법의 범위를 제한하는 것으로 의도되지는 않는다.
일반적으로, 온도, 반응 시간, 작업 공정 등과 같은 반응 조건은 수행되는 특정 반응에 대해 당업계에 통상적인 것들일 것이다. 인용된 참고 물질은 그 안에 인용된 물질과 함께 이러한 조건의 상세한 설명을 포함한다. 예시적인 방법으로서, 하기 일반적인 단계가 본 발명의 R4 치환된 화합물의 일반적인 합성에 적용될 수 있다.
그럼에도 불구하고, 통상의 당업자는 다른 표준적인 방법이 동일한 물질을 수득하기 위해 이용가능함을 인식할 것이다.
단계 1-하기 구조의 중간체 1의 제조:
중간체 1
교반하면서 메탄올 중에서 시알산과 도웩스 50(H+)의 처리를 환류 하에서 24-48시간 동안 수행한다. 상기 수지를 여과하여 제거하고 여과물을 건조 상태로 농축하여 소정의 다이메틸 치환체(중간체 1)를 수득한다.
단계 2-하기 구조의 중간체 2의 제조:
중간체 2
단계 1에서 수득된 고형물을 수산화나트륨 수성 용액을 이용하여 회수하고 일반적으로 1-3시간 동안 실온에서 교반한다. 상기 혼합물을 이어서 도웩스 50(H+) 수지를 이용하여 pH 7.0-7.5로 조절한다. 여과 후 여과물의 동결-건조에 의해 대응하는 비-메틸화 에스테르를 수득한다(중간체 2).
단계 3-하기 구조의 중간체 3 및 4의 제조:
중간체 3
중간체 4
단계 2에서 수득된 중간체를 서도 다른 몰비로 소듐 메타페리오데이트의 수성 용액과 1시간 동안 암실에서 반응시켜 중간체 3(더 낮은 비율) 또는 중간체 4(더 높은 비율)를 수득한다. 이어서 바륨 아세테이트를 침전물에 첨가하고 과량의 아이오데이트 및 페리오데이트를 여과에 의해 제거한다. 이어서 여과물을 동결건조시킨다. 노란빛을 띤 고형물이 수득된다(중간체 3 또는 4).
단계 4-하기 구조의 중간체 5 및 6의 제조:
중간체 5
중간체 6
단계 3의 결과로 얻은 중간체 3 또는 4를 교반 하에서 개별적으로 포름산의 수성 용액에 용해시키고 80℃에서 1시간 동안 가열한다. 그 결과 용액을 개별적으로 동결건조시킨다. 중간체 6 및 5가 개별적으로 수득된다.
단계 5-하기 예시적인 반응식에 따른 최종 R4 단일-치환된 화합물의 제조:
반응식 A
중간체 5 -B1/잔기를 형성하는 반응 생성물
화합물 1
본 발명의 R4 단일-치환된(-B1/잔기) 화합물
반응식 B
중간체 6 -B2/잔기를 형성하는 반응 생성물
화합물 2
본 발명의 다른 R4 단일-치환된(-B2/잔기) 화합물
단계 4로부터 얻은 각각의 결과 중간체 5 또는 6을 소정의 -B/잔기(-B1/잔기 또는 -B2/잔기)를 형성하는 선별된 반응 생성물과 함께 증류수를 이용하여 개별적으로 회수하고 반응 혼합물을 4℃에서 밤새 그대로 방치한다. 이어서 수소화붕소나트륨을 첨가하고 그 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 그대로 방치한다. 각각의 시료를 도웩스 50(H+) 칼럼 상에서 탈이온시키고 그 용출물을 개별적으로 동결건조시켜 본 발명의 다른 최종 화합물을 수득한다.
본 발명의 다른 전형적인 R4 단일-치환된(다른 -B/잔기로) 화합물은 예를 들어 하기에 의해 표시되고 이후의 실시예에 기술된다:
화합물 3
화합물 4
화합물 5
화합물 6
화합물 7
화합물 8
화합물 9
화합물 10
다른 바람직한 제조 실시양태는 하기 반응 단계를 이용하는 R1 단일-치환된 화합물의 합성을 포함한다:
단계 1-R1 단일-치환된(-B/잔기) 화합물의 제조
시알산을 서로 다른 비율(9:1 비율이 바람직함)의 메탄올과 물의 혼합물에 용해시키고 -B/잔기를 형성하는 반응 생성물을 약한 교반 하에 첨가한다. 수소화붕소나트륨을 첨가한 후 그 혼합물을 2시간 동안 약한 교반 하에 60℃에서 유지한다. 이어서 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시키기 위해 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 칼럼 상을 통과시킨다. 용출물을 동결 건조시키고, 소량 분취의 메탄올로 회수하고 여과지를 통과시킨다. 잔사를 제거하고 용출물을 건조시킨다. 후반 공정은 필요한 만큼 수차례 반복한다(일반적으로 5회 이상). 그 결과로 얻은 고형물을 최종적으로 소량 분취의 물에 용해시킨 후 동결 건조시켜 본 발명의 소정의 R1 단일-치환된(-B/잔기 함유) 화합물을 수득한다.
다른 전형적인 반응식은 하기와 같이 표시될 수 있다:
반응식 C
시알산(중간체) -B1/잔기를 형성하는 반응 생성물
본 발명의 R1 단일-치환된(-B1/잔기) 화합물(화합물 11).
반응식 D
시알산(중간체) -B2/잔기를 형성하는 반응 생성물
본 발명의 다른 R1 단일-치환된(-B2/잔기) 화합물
다른 추가의 바람직한 제조 실시양태는 하기의 일반 반응식을 채택함으로써 R1 및 R4 이-치환된 화합물의 합성을 포함한다:
단계 1-R1 및 R4 이-치환된(-B/잔기) 화합물의 제조
통상의 당업자는 본원 상기에 기술된 제조 반응식(A, B, C 및 D)를 조합함으로써 본 발명의 이-치환된 화합물을 수득할 수 있다.
본 발명의 전형적인 최종 이-치환된(다르거나 동일한 -B/잔기 치환) 화합물은 하기와 같이 표시된다:
전형적인 R1 및 R4 이-치환된(동일한 -B1/잔기 치환) 화합물
다른 전형적인 R1 및 R4 이-치환된(동일한 -B2/잔기 치환) 화합물
각각이 화학식 (I)에 표시되는 바와 같이 R6, R7 및 R8의 기타 가능한 조합을 나타내는, -B1/잔기 또는 -B2/잔기를 생성하는 동일한 반응 생성물을 이용함으로써, 본 발명의 유사한 이-치환된 화합물을 수득할 수 있음은 통상의 당업자에게 자명할 것이다.
본 발명의 전형적인 R1 및 R4 이-치환된(다른 조합된 -B/잔기 치환) 화합물
본 발명의 다른 전형적인 R1 및 R4 이-치환된(다른 조합된 -B/잔기 치환) 화합물
유사하게, 각각이 화학식 (I)에 표시되는 바와 같이 R6, R7 및 R8의 다른 가능한 조합을 나타내는, -B1/잔기 및 -B2/잔기를 병용하는 다른 반응 생성물을 이용하여, 본 발명의 유사한 다른 이-치환된 화합물을 수득할 수 있다.
전형적인 레조르시놀-HCl 방법(Svennerholm L. "Quantitative estimation of sialic acids. II. A colorimetric resorcinol-hydrochloric acid method." Biochem . Biophys . Acta, 24(3): 604-611, 1957; Miettinen J. 등, "Use of butyl acetate in determination of sialic acid.", Acta Chem . Scand., 13, 856-858, 1959) 및 TBA(2-thiobarbituric acid) 방법(Warren L. "The thiobarbituric acid assay of sialic acids.", J. Biol . Chem ., 234, 1971-5, 1959; Aminoff D. "Methods for the quantitative estimation of N-acetylneuraminic acid and their application to hydrolysates of sialomucoids.", Biochem . J., 81(2), 384-392, 1961)을 이용한 시알산의 검출 및 정량적 측정이 하기 이유로 달라짐은 통상의 당업자에게 또한 자명할 것이다: 레조르시놀-HCl 방법은 유리 상태로 존재할 때 및 다른 당과 접합되어 있을 때, 예를 들어 시알로글리코화합물 내 모두에서 시알산 및 그의 유도체를 검출하고 정량적으로 결정하는 것을 가능케 한다. 반대로, TBA 방법은 위치 2의 탄소 원자(C2)에 연결된, 하이드록실-잔기(R1 = -OH)가 치환되지 않은 경우에만 시알산 및 그의 유도체를 검출하고 정량적으로 결정하는 것을 가능케 한다.
본 발명의 화합물은 또한 임의의 또는 모든 비대칭 탄소에서 강화되거나(enriched) 분해된(resolved) 광학 이성체를 포함한다. 실질적으로 이들의 거울상체 또는 부분입체이성체 파트너 없이, 분리되거나 합성된 개별적인 광학 이성체 뿐만 아니라, 레이세미 및 부분입체이성체 혼합물 모두 본 발명의 범위 내이다. 상기 레이세미 혼합물은 공지된 기술, 예컨대, 예를 들어, 광학적으로 활성인 보조제, 예를 들어 산 또는 염기를 이용하여 형성된 부분입체이성체 염의 분리에 이어 광학적으로 활성인 성분으로 역 전환을 통해 개별적이고, 실질적으로 광학적으로 순수한 이성체로 분리된다. 대부분의 경우에, 소정의 광학 이성체는 소정의 출발 물질의 적당한 입체이성체를 이용하여 개시되는, 입체특이성 반응에 의해 합성된다.
본 발명의 조성물은 임의로 본원 화합물의 염, 특히 예를 들어 무기 또는 바람직하게는 유기산 또는 염기를 포함하는 약학적으로 허용가능한 비-독성 염을 포함한다. 상기 화합물의 수용성 염이 요구될 때 염화(salification)는 바람직한 공정이다.
본 발명의 다른 측면은 뉴라미니다제, 예를 들어 바이러스 뉴라미니다제를 함유하는 것으로 의심되는 시료를 본 발명의 화합물로 처리하는 단계를 포함하는 뉴라미니다제의 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 뉴라미니다제의 억제제로서, 이러한 억제제의 중간체로서 작용하거나 하기에 기술된 바와 같은 다른 유용성을 갖는 것으로 생각된다. 실제로, 상기 억제제는 뉴라미니다제에 특이적인 기하학을 갖는 뉴라미니다제의 표면 위 또는 그의 공동 내 위치에 결합할 것이다. 그러나 뉴라미니다제 결합 화합물은 다른 수준의 가역성을 갖고 결합할 수 있다. 실질적으로 비가역적으로 결합하는 그러한 화합물은 본 발명의 방법에 사용하는데 이상적인 후보물질이다. 뉴라미니다제를 함유하는 유기체에는 세균(비브리오 콜레라, 클로스트리듐 퍼프린젠스, 스트렙토코커스 뉴모니아, 및 아쓰로박터 시알로필러스) 및 바이러스(특히 오르쏘믹소바이러스 또는 파라믹소바이러스, 예컨대 인플루엔자 바이러스 A 및 B, 파라인플루엔자 바이러스, 리노바이러스, 코로나바이러스, 돌연변이 코로나바이러스 및/또는 변형된 코로나바이러스, 멈프스 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스, 조류 흑사병 바이러스, 및 센다이 바이러스)가 포함된다. 이러한 유기체 중의 어느 하나로부터 수득되거나 그에게서 발견되는 뉴라미니다제 활성의 억제는 본 발명의 범위 내이다. 본 발명의 화합물은 또한 동물, 예를 들어, 오리, 설치류, 또는 돼지, 또는 인간에게서 이러한 감염의 치료 또는 예방에 유용하다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 효소 활성을 평가하기 위한 통상적인 기술에 의해 뉴라미니다제에 대한 억제 활성에 대해 스크리닝된다. 발명의 문맥 내에서, 전형적으로 화합물은 생체 외에서 뉴라미니다제의 억제에 대해 먼저 스크리닝된다.
본 발명의 추가의 측면은 M2-단백질 이온 채널을 통한 H+ 이온의 유입을 차단하고, 유리 리보핵산단백의 탈외피 및 세포질 내로의 방출을 억제하고, M2-단백질, 예컨대 균주 A 인플루엔자 바이러스를 함유하는 것으로 의심되는 시료를 본 발명의 화합물로 처리하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 실제로, 본 발명의 화합물은 또한 바이러스 M2-단백질 기능을 차단함으로써 작용하는 것으로 생각된다.
본 발명의 다른 추가의 측면은 의심되는 시료를 본 발명의 화합물로 처리함으로써 HVC의 RNAm 및 RNA 중합효소 합성을 차단하는 것을 포함하는 구아노신 일인산염 및 RNAm-구아닐릴 전이효소의 합성을 억제하는 방법에 관한 것이다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 다르게 이-치환된 화합물은 뉴라미니다제 및 M2-양성자 이온 채널의 억제제로서 동시에 작용하는 것으로 생각된다.
본 발명의 화합물은 통상적인 담체 및 부형제와 함께 제형화될 수 있는데, 이들은 통례에 따라서 선택될 것이다. 정제는 부형제, 활택제, 충진제, 결합제 등을 포함할 것이다. 수성 제형은 멸균 형태로 제조되고, 경구 투여가 아닌 다른 방식으로 전달되고자 할 때는 일반적으로 등장성일 것이다. 모든 제형은 임의로 재공지 간행물["Handbook of Pharmaceutical Excipients" 4th Edition, Rowe R. C. 등, Pharmaceutical Press (2003)]에 개시된 바와 같은 부형제를 포함할 것이다. 부형제는 아스코르브산 및 기타 항산화제, EDTA와 같은 킬레이트제, 덱스트린, 하이드록시알킬셀룰로스, 하이드록시알킬메틸셀룰로스, 스테아르산 등과 같은 탄수화물을 포함한다.
본 발명의 하나 이상의 화합물(이하에서는 활성 성분으로도 언급됨)은 치료되는 상태에 적합한 임의의 경로로 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 국소(볼 및 설하 포함), 질 및 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 진피내, 경막내 및 경막외 포함) 등을 포함한다. 바람직한 경로는 예를 들어 환자의 상태에 따라 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 본 발명 화합물의 장점은 경구로 생체이용가능하고 경구 약학적 형태로 투여될 수 있다는 것으로; 필요하지는 않지만 폐내 또는 비강내 경로에 의해 이들을 투여하는 것이 가능하다.
본 발명의 활성 성분이 단독으로 투여되는 것이 가능할지라도, 이들은 약학적 제형으로서 존재하는 것이 바람직할 수 있다. 수의학 및 인간 용도 모두를 위한 것일 수 있는, 본 발명의 제형은 하나 이상의 허용가능한 담체 및 임의로 기타 치료 성분과 함께, 상기에 정의된 바와 같이, 하나 이상의 활성 성분 또는 본 발명의 화합물을 포함한다. 상기 담체(들)는 제형의 다른 성분들과 양립할 수 있다는 측면에서 "허용가능"이어야 하고 그의 수용자에게 생리적으로 해가 없어야만 한다.
상기 제형은 전술한 투여 경로에 적합한 것들을 포함한다. 상기 제형은 편리하게 단위 투약 형태로 제공될 수 있고 약학 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
기술 및 제형은 일반적으로 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishing Co., Easton, Pa., U.S.A.]에서 확인된다. 이러한 방법은 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 활성 성분을 회합하게 하는 단계를 포함한다. 일반적으로 제형은 활성 성분과 액체 담체 또는 미세하게 분쇄된 고체 담체 또는 이들 모두와 균질하고 조밀하게 회합하고, 이어서, 필요하다면, 요구되는 바대로 생성물의 모양을 형성함으로써 제조될 수 있다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 제형은 각각이 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함하는 캡슐, 사세이 또는 정제; 분말 또는 과립으로; 수성 액체 또는 비수성 액체 내 용액 또는 현탁액으로; 또는 유중수적형 액체 유탁액 또는 수중유적형 액체 유탁액과 같은 고체 단위로 제조될 수 있다. 활성 성분은 또한 볼루스, 연질약(electuary) 또는 연고로 제공될 수 있다. 정제는 임의로 하나 이상의 보조 성분과 함께, 압축 또는 주조에 의해 제조된다. 압축된 정제는 임의로 결합체, 윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 표면 활성제 또는 분산제와 함께, 분말 또는 과립과 같은 자유-유동 형태 내로 활성 성분을 적당한 기계 내에서 압축시킴으로써 제조될 수 있다. 주조된 정제는 적셔진 분말화된 활성 성분과 불활성 액체 희석제의 혼합물을 적당한 기계 내에서 주조함으로써 제조될 수 있다. 정제는 임의로 코팅되거나 선이 그어질 수 있고 임의로 이들로부터 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부의 감염에 대해서, 상기 제형은 예를 들어, 0.075 내지 20 %w/w(0.6 %w/w, 0.7 %w/w 등과 같이 0.1 %w/w의 증가분으로 0.1% 및 20% 사이의 범위로 활성 성분(들)을 포함함), 바람직하게는 0.2 내지 15 %w/w 및 가장 바람직하게는 0.5 내지 10 %w/w의 양으로 활성 성분(들)을 포함하는 국소 연고 또는 크림으로 적용되는 것이 바람직할 수 있다. 연고로 제형화될 때, 활성 성분(들)은 파라핀성 또는 수-친화성 연고 기재와 함께 사용될 수 있다. 별법으로, 활성 성분은 수중유적형 크림 기재와 함께 크림으로 제형화될 수 있다.
바람직하다면, 상기 크림 기재의 수성상은, 예를 들어, 30 %w/w 이상의 다수산기 알코올, 즉 프로필렌글리콜, 부탄, 1,3-디올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌글리콜(PEG 400 포함) 및 이들의 혼합물과 같은 두 개 이상의 수산기를 갖는 알코올을 포함할 수 있다. 상기 국소 제형은 또한 바람직하게는 피부 또는 다른 침범 부위를 통한 활성 성분의 흡수 또는 침투를 증강시키는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 진피 침투 증강제의 예시에는 다이메틸설폭사이드 및 관련 유사체가 포함된다. 본 발명 유탁액의 유상은 공지된 방식으로 공지된 성분들로부터 구성될 수 있다. 상기 유상이 단지 유화제(다르게는 에멀젼트로도 알려짐)를 포함할 수 있다고 하더라도, 이는 바람직하게는 하나 이상의 유화제와 지방 또는 오일 또는 지방 및 오일 모두와의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 소수성 유화제가 안정제로 작용하는 친지질성 유화제와 함께 포함된다. 오일 및 지방을 모두 포함하는 것이 또한 바람직하다. 이와 함께, 안정제(들) 함유 또는 무함유 유화제(들)는 소위 에멀젼 왁스를 구성하고, 상기 왁스는 오일 및 지방과 함께 크림 제형의 유상으로 분산된 상을 형성하는 소위 에멀젼 연고 기재를 구성한다.
본 발명의 제형에 사용하기에 적당한 에멀젼트 및 에멀젼 안정제는 트윈(등록상표) 60, 스팬(Span, 등록상표) 80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 소듐 라우릴 설페이트를 포함한다.
상기 제형에 적당한 오일 또는 지방의 선택은 소정의 미용 특성을 달성하는 것을 근거로 한다. 상기 크림은 바람직하게는 끈적거리지 않고, 염색되지 않으며 튜브 또는 다른 용기로부터 새는 것을 방지하기에 적당한 점조도를 갖는 세척될 수 있는 제품이어야 한다. 직쇄 또는 분지쇄, 단일- 또는 이염기 알킬 에스테르, 예컨대 다이-아이소아디페이트, 아이소세틸 스테아레이트, 코코넛 지방산의 프로필렌글리콜 다이에스테르, 아이소프로필 미리스테이트, 도데실 올레이트, 아이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트 또는 크로다몰(Crodamol) CAP로 공지된 분지쇄/에스테르의 혼합이 사용될 수 있고, 마지막 세 개의 에스테르가 바람직하다. 이들은 단독으로 또는 요구되는 특성에 따라 병용하여 사용될 수 있다. 별법으로, 연질 파라핀과 같은 고 융점 지질이 사용된다.
눈에의 국소 투여에 적당한 제형은 또한 활성 성분이 적당한 담체, 특히 활성 성분에 대한 수성 용매에 용해되거나 분산되어 있는 점안약을 포함한다. 활성 성분은 바람직하게는 이러한 제형 내에 0.5 내지 20%, 유리하게는 0.5 내지 10%, 특히 약 2.0 %w/w의 농도로 존재한다.
구강 내로의 국소 투여에 적당한 제형은 보통 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸스인 향미 기재 내에 활성 성분을 포함하는 로젠지; 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 불활성 기재 내에 활성 성분을 포함하는 향정(pastilles); 및 적당한 액체 담체 내 활성 성분을 포함하는 함수제를 포함한다.
직장 투여용 제형은 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실산염을 포함하는 적당한 기재와 함께 좌약으로 제공될 수 있다.
폐내 또는 비강내 투여에 적당한 제형은 0.1 내지 500 마이크론(0.5, 1, 30 마이크론, 35 마이크론 등과 같은 증가분 마이크론으로 0.1 및 500 마이크론 사이 범위 내 입자 크기를 포함함) 범위 내 입자 크기를 가지는데, 이는 비강 통로를 통한 신속한 흡입에 의해 또는 폐포낭에 도달하도록 구강을 통한 흡입에 의해 투여된다. 적당한 제형은 활성 성분의 수성 또는 유성 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적당한 제형은 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있고 하기에 기술된 바와 같은 인플루엔자 A 또는 B의 치료 또는 예방에 사용되는 이전의 화합물과 같은 다른 치료제와 함께 전달될 수 있다. 질 투여에 적당한 제형은 활성 성분에 더하여 적합한 것으로 당업계에 공지된 것과 같은 그러한 담체를 포함하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 거품 또는 분무 제형으로 제공될 수 있다.
비경구 투여에 적당한 제형은 항산화제, 완충액, 정균제 및 상기 제형이 의도된 수용자의 혈액과 등장이 되게 만드는 용질을 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 주사 용액; 및 현탁화제 및 비후제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 상기 제형은 단위-투약 또는 다중-투약 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알 내에 제공될 수 있고, 사용 바로 직전에 오로지 멸균 액체 담체(용매), 예를 들어 주사용 물의 첨가만을 요구하는 동결-건조(동결건조)된 상태로 보관될 수 있다. 임시 주사 용액 및 현탁액은 미리 처방된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단위 투약 제형은, 본원에서 상기에 인용된 것과 같이, 활성 성분의 일일 허용량 또는 단위 일일 아-허용량, 또는 그의 적당한 분획을 포함하는 것들이다.
상기에 구체적으로 언급된 성분들에 더하여, 본 발명의 제형이 당해의 제형의 유형을 고려하여 당해 분야에 통상적인 기타 제제를 포함할 수 있는 것으로, 예를 들어, 경구 투여에 적합한 것들은 감미제를 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명은 나아가 상기에 정의된 바와 같은 하나 이상의 활성 성분과 그를 위한 수의학적 담체를 포함하는 수의학적 조성물을 제공한다.
수의학적 담체는 상기 조성물을 투여하는 목적에 유용한 물질이고 다르게는 불활성이거나 수의학적 분야에서 허용가능하고 활성 성분과 양립할 수 있는 고체, 액체 또는 가스성 물질일 수 있다. 이러한 수의학적 조성물은 경구, 비경구 또는 다른 소정의 경로로 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 활성 성분으로서 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함하고 상기 활성 성분의 방출이 제어되고 덜 빈번한 복용을 가능케 하거나 제공된 활성 성분의 약물동역학 또는 독성 프로파일을 향상시키도록 조절되는 제어 방출 약학적 제형("제어 방출 제형")을 제공하는데 사용될 수 있다.
활성 성분의 유효량은 치료되는 상태의 특성, 독성, 상기 화합물이 예방적으로(더 낮은 용량) 또는 인플루엔자 감염에 대해 사용되는지 여부, 전달 방법, 및 약학적 제형에 좌우되며, 통상적인 용량 증량 연구를 이용하여 전문의에 의해 결정될 것이다.
1일 약 0.0001 내지 약 100 mg/kg 체중인 것으로 예상될 수 있다. 전형적으로, 1일 약 0.01 내지 약 10 mg/kg 체중이다. 더욱 전형적으로, 1일 약 0.01 내지 약 5 mg/kg 체중이다. 더욱 전형적으로, 1일 약 0.05 내지 약 0.5 mg/kg 체중이다. 예를 들어, 흡입용으로 약 70 kg 체중의 성인 인간을 위한 일일 후보 허용량은 1 mg 내지 1000 mg, 바람직하게는 5 mg 및 >500 mg 사이의 범위일 것이고, 단일 또는 다중 투약 형태를 취할 수 있다. 보다 많은 치료적으로 효과적인 일일 허용량이 또한 대상의 병리학적 상태에 의해 요구될 때 투여될 수 있다.
본 발명의 활성 성분(또는 화합물)은 또한 다른 활성 성분과 조합하여 사용된다. 이러한 조합은 치료되는 상태, 성분들의 교차-반응성 및 상기 조합의 약리특성을 기준으로 선택된다. 예를 들어, 호흡계의 바이러스 감염, 특히 인플루엔자 감염을 치료할 때, 본 발명의 조성물은 항-바이러스제(예컨대 아만티딘, 리만티딘 및 리바비린), 점액용해제, 거담제, 기관지 확장제, 항균제, 해열제, 또는 진통제와 조합된다. 통상적으로, 항균제, 해열제 및 진통제는 본 발명의 화합물과 함께 투여된다.
실시예 1: 중간체 1의 제조
40 ml의 무수 메탄올에 용해된 225 mg의 시알산(0.73 mmol)을 0.5 g의 도웩스 50(H+) 수지와 혼합하였다. 상기 혼합물을 일정한 교반 하에서 48시간 동안 환류시켰다. 레조르시놀 HCl 및 티오바르비투르신(TBA)을 이용한 분석적 측정은 24 및 48시간째에 85% 및 97%의 시알산이 각각 중간체 1로 전환되었음을 나타내었다. 이어서 상기 수지를 통용의 여과지 상에서 여과하여 제거하고 그 용출물을 회전식 증발기를 이용하여 건조 상태로 농축하여 유성의 노란빛을 띠는 액체를 수득하였다. 상기 유성 액체를 에틸에테르:메탄올(3:1 w/w)의 혼합물의 환산 부피를 이용하여 회수하였다. 상기 용액을 4℃에서 24-48시간 동안 그대로 방치한 후 결정성 침전물을 여과로 회수하여 P2O5 상에서 건조시켰다. 145 mg의 고형 중간체 1(M.W. 337.4)을 수득하였다(수율: 60.0%).
그 결과로 얻은 중간체 1은 레조르시놀-HCl 반응(시알산에서와 동일한 강도를 가짐)에는 양성을, TBA 반응에는 음성을 나타내었다.
실시예 2: 중간체 2의 제조
145 mg의 중간체 1(0.43 mmol)을 10.7 ml의 수산화나트륨의 0.06 M 수성 용액에 용해시키고 2-3시간 동안 실온에서 지속적으로 교반하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지를 이용하여 pH 7.0-7.5로 조절하였다. 상기 수지를 여과하여 제거하고 그 용출물을 동결건조시켜 약간 흰색의 고형물을 수득하였다. 132.6 mg의 고형 중간체 2(M.W. 323.3)를 수득하였다(수율: 95.0%). 그 결과로 얻은 중간체 2는 레조르시놀-HCl 반응(시알산에서와 동일한 강도를 가짐)에는 양성을, TBA 반응에는 음성을 나타내었다.
실시예 3: 중간체 3의 제조
132.6 mg(0.41 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 T)을 4.3 ml의 증류수에 용해시켰다. 이어서 0.038 M 소듐 메타페리오데이트(NaIO4)(0.41 mmol)의 10.7 ml의 수성 용액의 분취액을 첨가하고(몰비=1:1) 그 용액을 일정한 교반 하에 실온에서 암흑 중에서 1시간 동안 유지하였다. 0.1 M 바륨 아세테이트의 12.8 ml의 수성 용액을 상기 혼합물에 첨가하여 과량의 아이오데이트 및 페리오데이트를 침전시켰다. 상기 혼합물을 통용의 여과지를 이용하여 여과하였다. 그 용출물을 거품이 나는 이산화탄소로 포화시켜 과량의 바륨 아세테이트를 침전시킨 후 여과지 상에서 여과하여 제거하였다. 그 용출물을 동결건조시켜 약간 노란빛을 띄는 고형물을 수득하였다. 101.9 mg의 고형 중간체 3(M.W. 291.3)을 회수하였다(수율: 85.0%).
그 결과로 얻은 중간체 3은 레조르시놀-HCl 반응(시알산에서와 동일한 강도를 가짐)에는 양성을, TBA 반응에는 음성을 나타내었다.
실시예 4: 중간체 4의 제조
132.6 mg(0.41 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 2)을 4.3 ml의 증류수에 용해시켰다. 0.2 M 소듐 메타페리오데이트(NaIO4)(2.14 mmol)의 10.7 ml의 수성 용액(몰비=1:5.24)을 상기 용액에 첨가하고 이를 일정한 교반 하에 실온에서 암흑 중에서 1시간 동안 유지하였다.
0.1 M 바륨 아세테이트의 12.8 ml의 수성 용액을 상기 혼합물에 첨가하여 과량의 아이오데이트 및 페리오데이트를 침전시켰다.
상기 혼합물을 통용의 여과지를 이용하여 여과하였다. 그 용출물을 거품이 나는 이산화탄소로 포화시켜 과량의 바륨 아세테이트를 침전시킨 후 여과지 상에서 여과하여 제거하였다. 그 용출물을 동결건조시켜 약간 노란빛을 띠는 고형물을 수득하였다. 91.4 mg의 고형 중간체 4(M.W. 261.23)를 회수하였다(수율: 85.0%).
그 결과로 얻은 중간체 4는 레조르시놀-HCl 반응(시알산에서와 동일한 강도를 가짐)에는 양성을, TBA 반응에는 음성을 나타내었다.
실시예 5: 중간체 5의 제조
91.43 mg(0.35 mmol)의 동결건조된 분말 중간체 4를 약 pH 4.0에서 2.3 mM 포름산의 2.0 ml의 수성 용액에 용해시켰다. 상기 용액을 1시간 동안 80℃로 가열하였다. 그 후에 상기 용액을 동결건조시켰다.
72.76 mg의 중간체 5(M.W. 247.20)를 수득하였다(수율: 84.1%). 그 결과로 얻은 중간체 5는 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다.
실시예 6: 중간체 6의 제조
101.96 mg(0.35 mmol)의 동결건조된 고형 중간체 3을 약 pH 4.0에서 2.3 mM 포름산의 2.0 ml의 수성 용액에 용해시켰다. 상기 용액을 1시간 동안 80℃로 가열하였다. 그 후에 상기 용액을 동결건조시켰다.
93.83 mg의 중간체 6(M.W. 277.23)을 수득하였다(수율: 96.7%).
그 결과로 얻은 중간체 6은 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다.
실시예 7: 화합물 1의 제조
84.0 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 5)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 51.442 mg의 아만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조된 고형물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 3차 고형물을 최종적으로 물의 소량의 분취액으로 회수한 후 동결건조시켜 최종 화합물 1을 수득하였다.
110.53 mg의 화합물 1(M.W. 382.45)을 수득하였다(수율: 85.0%).
회수된 화합물 1은 레조르시놀-HCl 반응 및 TBA 반응에 모두 양성이었다. 도 1에 나타난 바와 같이, 출발 중간체 아만타딘(B)과 비교하여, 화합물 1의 FT-IR(Fourier Transform Infrared Spectroscopy) 스펙트럼(A)은 하기 평가를 나타낸다: a) 아미드 I 밴드: 1640 cm-1; b) 아미드 II 밴드: 1550 cm-1; c) 일차 아미노기: 600-800 cm-1, 1590-650 cm-1, 3330-3380 cm-1; 이차 아미노기: 700-800 cm-1; 1615 cm-1; 3300 cm-1.
실시예 8: 화합물 2의 제조
94.26 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 6)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 82.7 mg의 리바비린(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조된 고형물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 건조된 고형물을 최종적으로 물의 소량의 분취액으로 용해시킨 후 동결건조시켜 고형물(화합물 1)을 수득하였다. 94.02 mg의 고형 화합물 2(M.W. 505.4)를 회수하였다(수율: 89.0%). 회수된 화합물 2는 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응에 모두 양성이었다.
실시예 9: 화합물 3의 제조
94.26 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 6)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 51.442 mg의 아만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조된 고형물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 동결건조시켜 최종 화합물 3을 수득하였다. 122.02 mg의 고형 화합물 3(M.W. 412.5)을 회수하였다(수율: 87.0%).
회수된 화합물 3은 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응에 모두 양성이었다.
실시예 10: 화합물 4의 제조
84.0 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 5)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 60.962 mg의 리만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조된 고형물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 분말을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 동결건조시켜 최종 화합물 4를 수득하였다.
125.61 mg의 화합물 4(M.W. 410.5)를 회수하였다(수율:90.0%). 회수된 화합물 4는 레조르시놀-HCl 반응 및 TBA 반응 모두에 양성이었다. 도 2에 나타난 바와 같이, 출발 중간체 리만타딘(B)과 비교하여, 화합물 4의 FT-IR 스펙트럼(A)은 하기 평가를 나타낸다: a) 아미드 I 밴드: 1640 cm-1) b) 아미드 II 밴드: 1550 cm-1; c) 일차 아미노기: 600-800 cm-1, 1590-650 cm-1, 3330-3380 cm-1; 이차 아미노기: 700-800 cm-1; 1615 cm-1; 3300 cm-1.
실시예 11: 화합물 5의 제조
94.26 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 6)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 60.962 mg의 리만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액으로 용해시킨 후 동결건조시켜 최종 화합물 5를 수득하였다. 137.79 mg의 최종 고형 화합물 5(M.W. 440.5)를 회수하였다(수율: 92.0%).
회수된 화합물 5는 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다.
실시예 12: 화합물 6의 제조
84.0 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 5)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 70.5 mg의 소만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 그 여과물을 동결건조시켜 최종 화합물 6을 수득하였다. 125.26 mg의 고형 화합물 6(M.W. 438.6)을 회수하였다(수율: 84.0%).
회수된 화합물 6은 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다.
실시예 13: 화합물 7의 제조
94.26 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 6)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 61.0 mg의 소만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 그 여과물을 동결건조시켜 최종 화합물 7을 수득하였다. 135.43 mg의 고형 화합물 7(M.W. 468.6)을 회수하였다(수율: 85.0%). 회수된 화합물은 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다.
실시예 14: 화합물 8의 제조
84.0 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 5)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 61.0 mg의 메만틴(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 그 여과물을 동결건조시켜 최종 화합물 8을 수득하였다. 129.80 mg의 고형 화합물 8(M.W. 410.5)을 회수하였다(수율: 93.0%).
회수된 화합물은 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다. 도 3에 나타난 바와 같이, 출발 중간체 메만틴(B)과 비교하여, 화합물 8의 FT-IR 스펙트럼(A)은 하기 평가를 나타낸다: a) 아미드 I 밴드: 1640 cm-1; b) 아미드 II 밴드: 1550 cm-1; c) 일차 아미노기: 600-800 cm-1, 1590-650 cm-1, 3330-3380 cm-1; 이차 아미노기: 700-800 cm-1; 1615 cm-1; 3300 cm-1.
실시예 15: 화합물 9의 제조
94.26 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 6)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 61.0 mg의 메만틴(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 그 여과물을 동결건조시켜 최종 화합물 9를 수득하였다. 134.79 mg의 화합물 9(M.W. 440.5)를 회수하였다(수율: 90.0%).
회수된 화합물 9는 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다.
실시예 16: 화합물 10의 제조
84.0 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 고형물(중간체 5)을 5.0 ml의 증류수에 용해시켰다. 그 이후에 82.7 mg의 리바비린(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 40.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 3회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 그 여과물을 동결건조시켜 최종 화합물 10을 수득하였다. 140.62 mg의 화합물 10(M.W. 475.4)을 회수하였다(수율: 87.0%). 회수된 화합물은 레조르시놀-HCl 및 TBA 반응 모두에 양성이었다. 도 4에 나타난 바와 같이, 출발 중간체 리바비린(B)과 비교하여, 화합물 10의 FT-IR 스펙트럼(A)은 하기 평가를 나타낸다: a) 아미드 I 밴드: 1640 cm-1; b) 아미드 II 밴드: 1550 cm-1; c) 일차 아미노기: 600-800 cm-1, 1590-650 cm-1, 3330-3380 cm-1; 이차 아미노기: 700-800 cm-1; 1615 cm-1; 3300 cm-1.
실시예 17: 화합물 11의 제조
102.5 mg(0.34 mmol)의 동결건조된 중간체 시알산을 50.0 ml의 메탄올:증류수(9:1, v/v)의 혼합물에 용해시켰다. 그 이후에 51.442 mg의 아만타딘(0.34 mmol)을 느린 교반 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 느린 교반 하에서 밤새 유지하였다. 100.0 mg의 수소화붕소나트륨의 첨가 후, 반응 혼합물을 60℃에서 교반 하에 1시간 동안 유지하였다. 이어서 상기 혼합물을 도웩스 50(H+) 수지로 충진된 칼럼 상을 통과시켜 과량의 수소화붕소나트륨을 붕산으로 전환시켰다. 그 용출물을 동결건조시켰다. 이어서 동결건조물을 메탄올의 소량의 분취액으로 회수하고 여과물을 건조 상태로 만들었다. 이러한 과정을 5회 이상 반복하였다. 이어서 건조된 고형물을 물의 소량의 분취액에 용해시킨 후 동결건조시켜 최종 화합물 11을 수득하였다. 총 133.90 mg 고형 화합물 11(M.W. 442.5)을 회수하였다(수율: 89.0%). 회수된 화합물은 레조르시놀-HCl 반응에는 양성, TBA 반응에는 음성이었다.
실시예 18
인플루엔자 바이러스 타입 A 및 B 균주에 대한 본 발명 화합물의 항바이러스 활성 평가.
대상 및 연구 계획
구체적으로, 인정된 항바이러스 활성을 갖는 2종 화합물인, 아만타딘 및 메만틴과 비교하여 화합물 1 및 화합물 8의 인플루엔자 바이러스 유형 A 및 B에 대한 생체 외 항바이러스 활성을 평가하였다. 연구를 위하여, 2종의 분리된 인플루엔자 바이러스 유형 A 및 분리된 바이러스 타입 B를 사용하였다.
물질 및 방법
1 - 인플루엔자 바이러스의 증식 및 역가측정
인플루엔자 바이러스 A/H3N2(A/파나마/2007/99), A/H1N1(A/뉴칼레도니아/20/99) 및 B(B/산둥성/7/97)의 균주를 배아 닭-충란에 증식시켰다. 간략히 설명하면, 상기 인플루엔자 바이러스 균주를 수정되고 11일째 닭 충란에 요막 경로로 접종하였다. 그 결과 충란을 3일간 37℃에서 인큐베이션한 후, 요막액을 회수하고 이어서 역가를 측정하였다.
상기 분석의 결정은 플라크 형성 검사(플라크 분석, PA)에 의해 수행되었다. 구체적으로, 각각의 분리된 바이러스의 연속 희석액(10-1-10-11)을 12-웰 플레이트의 MDCK(Madin-Darby Canine Kidney) 세포의 융합성 단층 상에 접종하였다. 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 후, 상기 바이러스 접종액을 제거하고 감염 배지(10 μg/ml 트립신 함유 MEM(최소 필수 배지), 2% 한천)를 첨가하였다. 37℃, 5% CO2에서 3일간의 인큐베이션 후, 세포의 단층을 5% 글루타르알데하이드 용액으로 고정시키고, 한천 제거 후, 5% 카르볼-푹신(carbol-fuchsin) 용액으로 착색하였다.
상기 플라크를 시각적으로 세었고 분리된 분석은 1 ml 당 플라크 형성 단위(PFU)의 개수(PFU/ml)로 나타내었다.
2 - 아만타딘 및 메만틴에 대한 화합물 1 및 화합물 8의 항바이러스 활성 평가
2.1. 분석하고자 하는 화합물의 제조
72시간 동안 건조시킨 후, 화합물 1 및 8과 비교대상 화합물 아만타딘 및 메만틴을 1000 μM의 농도로 멸균 증류수에 적절히 재구성하였다. 10 단위로 연속 희석 후에, 각 화합물에 대해 0.01 μM 내지 100 μM 범위에서 검사를 수행하였다.
2.2. 플라그 환원 분석(PRA)
12-웰 플레이트에서 성장한 MDCK 세포의 융합성 단층(1×105 세포/ml)을 각각의 분리된 바이러스(A/파나마/2007/99-H3N2, A/뉴칼레도니아/20/99-H1N1 및 B/산둥성/7/97)에 약 50 PFU/ml로 감염시켰다. 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션 후, 바이러스 흡착을 유도하기 위해, 바이러스 접종액을 제거하고 세포 단층을 MEM 배양 배지로 2회 세척하였다. 중첩-배지(MEM 내 10 μg/ml 트립신, 2% 한천)를 분석 중인 화합물의 연속 희석액(0.01 μM 내지 100 μM)을 포함하는 각 웰에 첨가하였다. 상기 검사를 2회 반복하였고 동시에 항바이러스 화합물을 함유하지 않는 반응 대조군을 첨가하였다. 세포 배양액을 3일간 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 이어서, 상기 세포 단층을 5% 글루타르알데하이드 용액으로 고정시킨 후 한천 내로의 침투를 촉진하기 위하여, 실온에서 3시간 이상 인큐베이션하였다. 한천 제거 후, 세포 단층을 5% 카르볼-푹신 용액으로 착색하였다. 상기 플라크를 시각적으로 세었고 플라크 억제 수준을 검사 중인 화합물을 포함하지 않는 대조군과 비교하여 계산하였다. 그로부터 화합물 무함유 대조군에 대해 50% 플라크 개수를 감소시키는데 필요한 상기 화합물의 농도를 계산하였다.
결과
화합물 1 및 화합물 8과 대조군 화합물 아만타딘 및 메만틴의 항바이러스 활성을 MDCK 세포를 이용하는 플라크 환원 분석(PRA)에 의해 평가하였다. 그 결과를 표 1에 나타내었다.
화합물 1은 바이러스 유형 A H3N2에 대해 아만타딘과 유사한 활성을 나타내었으나, 바이러스 유형 A H1N1에 대해서는 10배 낮은 활성을 보였다. 인플루엔자 바이러스 유형 B에 대한 화합물 1의 항바이러스 활성은 아만타딘(>100 μM)보다 높은 (>10배) 활성을 나타내었다(표 1).
화합물 8은 분석된 인플루엔자 바이러스 유형 A(A/H3N2 및 A/H1N1)에 대해 메만틴보다 10배 높은 항바이러스 활성을 나타내었다. 화합물 8의 임의의 항바이러스 활성은 검사된 농도 범위에서 인플루엔자 바이러스 유형 B에 대해 명백하였다(표 1).
<표 1>
바이러스 화합물(μM)
화합물 1 아만타딘 화합물 8 메만틴
A/파나마/2007/99-H3N2 10 10 10 100
A/뉴칼레도니아/20/99-H1N1 1 0.1 10 100
B/산둥성/7/97 10 >100 >100 100
결론:
따라서 상기 결과는 아만타딘과 비교하여 인플루엔자 바이러스 유형 B에 대한 화합물 1의 증강된 항바이러스 활성의 증거를 제공한다. 이는 인플루엔자 바이러스 유형 B가 아닌, 유형 A에만 존재하는 이온 채널의 M2 단백질을 차단함으로써 작동하고, 따라서 추가적인 연구 대상이 될 새로운 작용 기작일 수 있음을 명심해야만 한다. 화합물 8은 인플루엔자 바이러스 유형 A에 대해 메만틴보다 10배 높은 항바이러스 활성을 나타내었다.

Claims (23)

  1. 구조식 (I)의 화합물:
    상기에서:
    X는 -CH2 -, -O-, -CHF-, -CF2-를 나타내고;
    단일 또는 이중 결합은 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하고;
    R1은 -OH, 할로겐 또는 -B/잔기를 나타내되, 단 상기 고리의 C2 내지 C3을 연결하는 이중 결합이 존재할 때 R1이 부재이고;
    R2는 -OH, -0-CH(C2H5)2, -NH2, -NHC(NH)NH2 또는 -NH-OH이고;
    R3은 -NH2, -NHCO-CH3 또는 -NH-CO-CH2-OH이고;
    R4는 -CHOH-CHOH-CH2-OH, -CHOH-CH2-B/잔기, -CH2-B/잔기 또는 -B/잔기를 나타내고;
    상기에서 -B/잔기는:
    또는 를 나타내고
    상기에서:
    R5는 연결 관능기 -NH-, -CH2-NH-, -CH(CH3)-NH-, -NH-CH(CH3)-NH-, -C(CH3)2-CH2-NH-, -NH-CO-CH2-O-CH2-CH2-NH-를 나타내고, 또는
    또는 ; 및
    R6은 -H, -CH3 또는 -C2H5이고;
    R7은 -H, -CH3 또는 -C2H5이고;
    R8은 연결 관능기 -NH-, -CO-NH- 또는 -C(NH)-NH-를 나타냄.
  2. 제1항에 있어서, 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 C7 또는 C8 단일-B/잔기-치환된 화합물인 화합물:
    화합물 1
    화합물 2
    화합물 3
    화합물 4
    화합물 5
    화합물 6
    화합물 7
    화합물 8
    화합물 9
    화합물 10
  3. 제1항에 있어서, 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 C2 단일-B/잔기-치환된 화합물인 화합물:
  4. 제1항에 있어서, C2 및 C8 이(bi)-B1/잔기-치환된 화합물인 화합물:
  5. 제1항에 있어서, C2 및 C8 이-B2/잔기-치환된 화합물인 화합물:
  6. 제1항에 있어서, 하기로부터 선택되는 다른-B1/잔기 또는 -B2/잔기-이치환된 화합물을 갖는 C2 및 C8인 화합물:
  7. 약학적으로 허용가능한 담체 내에 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 화합물 또는 그의 혼합물을 함유하는 약학적 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 따른 화합물의 치료적으로 유효한 양을 이러한 치료를 필요로 하는 숙주에게 임의의 적합한 투여 경로에 의해 투여하는 것을 포함하는 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA) 및/또는 M2 단백질 함유 바이러스에 의해 야기되는 바이러스 감염을 치료하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 감염이 인플루엔자 바이러스 유형 A 및 B 또는 그의 돌연변이에 의한 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 따른 ARNm 구아닐트랜스퍼라제-억제 화합물의 치료적으로 유효한 양을 이러한 치료를 필요로 하는 숙주에게 임의의 적합한 투여 경로에 의해 투여하는 것을 포함하는 ARNm 및 ARN 중합효소에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 ARNm, ARN 중합효소 및 효소 ARNm-구아닐트랜스퍼라제 매개 감염이 간염 바이러스 유형 C(HVC) 감염인 방법.
  12. 제9항에 있어서, 인플루엔자 바이러스 유형 A 및 B 또는 그의 돌연변이에 대해 활성인 다른 화합물의 치료적으로 유효한 양과 병용하여 상기 화합물을 투여하는 것을 추가로 제공하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 인플루엔자 바이러스 유형 A 및 B 또는 그의 돌연변이에 대해 활성인 상기 화합물이 자나미비르 및/또는 오셀타미비르인 방법.
  14. 제11항에 있어서, 간염 바이러스 유형 C(HVC) 또는 그의 돌연변이에 대해 활성인 다른 화합물의 치료적으로 유효한 양과 병용하여 상기 화합물을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, HVC에 대해 활성인 상기 화합물이, 단독으로 또는 리바비린과 병용하여, 인터페론-알파 또는 페길화 인터페론-알파인 방법.
  16. 요법 내 사용을 위한 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 따른 화합물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 요법이 포유동물에서 HA 또는 NA 또는 M2 단백질 매개 바이러스 감염의 치료인 화합물.
  18. 제16항에 있어서, 상기 요법이 포유동물에서 ARNm, ARN 중합효소 및 효소 ARNm-구아닐트랜스퍼라제 매개 HVC의 치료인 화합물.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 바이러스 감염이 인플루엔자 타입 A 바이러스 또는 인플루엔자 타입 B 바이러스에 의해 또는 이들의 아형 및 다른 균주 및 돌연변이에 의해 야기되는 화합물.
  20. 포유동물에서 HA 또는 NA 또는 M2 단백질 매개 바이러스 감염의 치료를 위한 약물의 제조에 있어서 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 화합물의 용도.
  21. 포유동물에서 ARNm, ARN 중합효소 및 효소 ARNm-구아닐트랜스퍼라제 매개 바이러스 감염의 치료를 위한 약물의 제조에 있어서 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 화합물의 용도.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 바이러스 감염이 인플루엔자 타입 A 바이러스 또는 인플루엔자 타입 B 바이러스에 의해서 또는 이들의 아형 및 다른 균주 및 돌연변이에 의해 야기되는 것인 용도.
  23. 제22항에 있어서, 상기 바이러스 감염이 인플루엔자 A 또는 B 또는 간염 C 바이러스에 의해서 또는 이들의 아형 및 다른 균주 및 돌연변이에 의해 야기되는 것인 용도.
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