KR20090064602A

KR20090064602A - 단백질 키나제 억제제로서 유용한 페닐아세트아미드

Info

Publication number: KR20090064602A
Application number: KR1020097009955A
Authority: KR
Inventors: 파스칼 퓌레; 비토 구아그나노
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2006-10-16
Filing date: 2007-10-15
Publication date: 2009-06-19
Also published as: US20100075980A1; US7977338B2; CN101558068A; MX2009003985A; CA2666116A1; JP2010506879A; RU2009118254A; EP2074125A1; AU2007312310A1; WO2008046802A1

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 그의 염; 그의 용도, 그의 사용 방법, 그의 제조 방법, 그를 포함하는 제약 조성물, 제2 약물 물질과 그의 조합물 및 그의 용도 등에 관한 것이다. 화학식 I의 화합물은 단백질 키나제 억제제이고, 단백질 키나제 억제제에 의해 매개되는 질환의 치료를 위해, 예를 들어 다양한 증식성 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.

<화학식 I>

상기 식에서, 잔기 R1, R2, R3, R9, R10 및 Q, 및 X, Y 및 Z는 본 명세서에 정의된 바와 같다.

단백질 키나제 억제제, 페닐아세트아미드 유도체, 단백질 키나제 억제제에 의해 매개되는 질환

Description

단백질 키나제 억제제로서 유용한 페닐아세트아미드 {PHENYLACETAMIDES USEFUL AS PROTEIN KINASE INHIBITORS}

본 발명은 페닐아세틸 아미드 유도체, 단백질 키나제 억제제로서의 그의 용도, 상기 화합물을 포함하는 신규한 제약 제제, 동물, 특히 인간의 진단적 또는 요법적 치료에 사용하기 위한 상기 화합물, 단백질 키나제의 조절에 대해 반응하는 질환의 치료에 있어서 또는 이러한 질환의 치료에 유용한 제약 제제의 제조에 있어서의 그의 용도, 상기 화합물을 포함하는, 예를 들어 단백질 키나제의 조절에 대해 반응하는 질환의 치료에 유용한 제약 제제, 상기 화합물을 온혈동물에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및/또는 상기 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

단백질 키나제 중에서, 티로신 키나제 및 세린/트레오닌 키나제를 비롯하여, 수용체-형 키나제 및 비수용체-형 키나제는 구분될 수 있다. 핵, 세포질 및 막-결합 키나제는, 그의 위치에 따라 구분될 수 있다. 종종 막-결합 티로신 키나제는 동시에 성장 인자의 수용체이기도 하다.

단백질 키나제 (PK)는 세포 단백질에서 특정 세린, 트레오닌 또는 티로신 잔기의 인산화를 촉매하는 효소이다. 기질 단백질의 이러한 번역후 변형은 세포 증식, 활성화 및/또는 분화를 조절하는 단계로서, 분자 스위치로서의 역할을 한다. PK의 비정상적 활성 또는 과다 활성 또는 보다 일반적으로는 부적절한 활성이 양성 및 악성 증식성 장애를 비롯한 다수의 질환 상태에서 관찰되어 왔다. 많은 경우에 있어서, 시험관내 및 수많은 경우에 생체내에서 PK 억제제를 사용함으로써 증식성 장애와 같은 질환을 치료할 수 있었다.

다수의 단백질 키나제 억제제가 있다. 또한, 다수의 증식성 및 다른 PK-관련 질환이 존재한다. 몇몇 경우에는 치료된 질환이 치료제에 대한 내성을 발생시킨다. 또한, 몇몇 환자의 경우에는 매우 특별한 치료가 요구된다. 따라서, 현재 기술의 이용가능한 약물에 추가하기 위한, PK 억제제로서 유용하고 이에 따라 이들 단백질 티로신 키나제 (PTK) 관련 질환의 치료에 유용한 신규한 부류의 화합물의 제공에 대한 끊임없는 요구가 존재한다. 제약학적으로 유리한 PK 억제 화합물의 신규한 부류가 요구된다.

필라델피아 염색체는 만성 골수성 백혈병 (CML)의 특징이며, bcr 유전자의 N-말단 엑손 및 c-abl 유전자의 주요 C-말단 부분 (엑손 2-11)을 함유하는 하이브리드 유전자 (hybrid gene)를 운반한다. 유전자 산물은 210 kD 단백질 (p210 Bcr-Abl)이다. Bcr-Abl 단백질의 Abl-부분은 야생형 c-abl에서는 엄격하게 조절되지만, Bcr-Abl 융합 단백질에서는 구성적으로 활성화되는 abl-티로신 키나제를 함유한다. 이러한 탈조절된 티로신 키나제는 세포의 형질전환 및 탈조절된 증식을 유도하는 다수의 세포 신호전달 경로와 상호작용한다 (문헌 [Lugo et al., Science 247, 1079 [1990]]). Bcr-Abl 단백질의 돌연변이 형태 또한 확인되었다. Bcr-Abl 돌연변이 형태에 대한 상세한 개관이 공개되어 있다 (문헌 [Cowan-Jones et al, Mini Reviews in Medicinal Chemistry, 2004, 4 285-299]). c-abl 및 그의 돌연변이의 억제제에 의한 치료는 백혈병, 예를 들어 AML 및 CML에 대하여 유용하다.

c-Kit는, PDGF 수용체 군에 속하며 그의 리간드 SCF (줄기-세포 인자)의 결합시 활성화되는 티로신 키나제 수용체이다. c-kit의 발현 패턴이, 예를 들어 다양한 원발성 고형 종양의 패널에서 연구되었다. kit의 우세한 발현은 특히 육종, 위장관 기질 종양 (GIST), 정상피종 및 카르시노이드에서 발견될 수 있다 (문헌 [Weber et al., J. Clin. Oncol. 22(14S), 9642 (2004)]). GIST는 다른 통상적인 형태의 장암과 진단학적으로 연관없는 비-상피성 종양이다. 위에서 다수 발생하고, 그보다 적게 소장에서, 그보다 더욱 적게 식도에서 발생한다. 간, 장막 및 복강으로의 파종이 관찰될 수 있다. 대개, GIST는 정상적으로는 장의 자율신경계의 일부를 형성하고 운동성의 조절에 관여하는 카할 간질 세포 (ICC)로부터 유발된다. GIST의 대부분 (50 내지 80 ％)은 c-kit 유전자 돌연변이로 인해 유발된다. 장에서, c-kit/CD117에 대한 양성 염색이 GIST인 것으로 여겨진다. c-kit의 돌연변이는 c-kit 기능을 SCF에 의한 활성화와 무관하게 할 수 있어, 빠른 세포분열 속도를 유도하며 유전자 불안정성도 유도할 가능성이 있다. 또한 비만 세포 종양에서 뿐만 아니라, 비만세포증 및 관련 골수증식성 증후군 및 색소성 두드러기에서 c-kit의 이상이 관찰될 수 있다. c-kit의 발현 및/또는 이상은 또한 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 악성 림프종에서 발견될 수 있다. c-kit 발현은 또한 소세포 기관지 암종, 정상피종, 미분화세포종, 고환 상피내 신생물, 흑색종, 유방 암종, 신경아세포종, 유잉 (Ewing) 육종, 몇몇 연부 육종, 뿐만 아니라 유두/여포상 갑상선 암종 에서 나타날 수 있다 (문헌 [Schuette et al., innovartis 3/2001] 참조).

RET (형질감염 중 재배열된) 원-종양유전자 (proto-oncogene)의 유전성 돌연변이는, 예를 들어 크롬친화성세포종, 수질 갑상선 암종 및 부갑상선 과형성/선종으로 진행될 수 있는 제2형 다발성 내분비 신생물 (MEN 2)을 갖는 환자에서 종양형성성인 것으로 알려져 있다 (문헌 [Huang et al., Cancer Res. 60, 6223-6 (2000)] 참조). MEN 2를 갖는 환자에서, RET의 배선 (germ-line) 돌연변이, 및 때로는 3염색체성 10번에서 돌연변이 RET 대립유전자의 복제 또는 야생형 RET 대립유전자의 상실이 일반적으로 확인되고, 수용체의 리간드-비의존성 이합체화를 활성화시키는 (즉, 일으키는) 것으로 생각된다.

PDGFR-알파 및 -베타와 같은 혈소판 유래 성장 인자 수용체는 또한 막횡단 티로신 키나제 수용체이다. 2개의 A, 2개의 B, 또는 1개의 A와 1개의 B 쇄로 된 이종이합체로부터 형성된 리간드의 결합시 (PDGF-A, PDGF-B 또는 PDGF-AB), 수용체는 이합체화되고 그의 티로신 키나제가 활성화된다. 이는 하류 신호전달을 유도하고, 따라서 종양 성장을 지원할 수 있다. 이 유전자에서의 돌연변이는 수용체 활성화를 리간드 결합과 무관하게 하여 종양형성을 유도하는 힘으로 나타난다 (참조: GIST는 또한 혈소판-유래 성장 인자-수용체-알파 (PDGFR) 유전자에서의 돌연변이 활성화로 특징화될 수 있다). PDGF (PDGFR을 활성화하는 성장 인자)의 발현은 수많은 상이한 종양 세포주에서, 특히 유방, 결장, 난소, 전립선 암종, 육종 및 교모세포종 세포주에서 관찰되었다. 종양 중에서도, 뇌 종양 및 전립선 암종 (선암 및 골 전이를 포함함)이 특히 주목을 받아 왔다. 또한 악성 신경교종 (역형성 성상세 포종/교모세포종)에 관한 흥미로운 데이터가 있다. 또한 유전학적으로 제I형 교원질 α1 (COLIA1)과 PDGF-A의 융합을 특징으로 하는 연부 종양인 융기성 피부섬유육종의 치료에서 흥미로운 전임상 데이터가 얻어졌다.

VEGFR (혈관 내피 성장 인자 수용체)은 맥관형성 (angiogenesis) 발생의 제어에 관여하는 것으로 알려져 있다. 특히 고형 종양이 양호한 혈액 공급에 의존적이기 때문에, VEGFR의 억제 및 그로 인한 맥관형성의 억제는 이러한 종양의 치료에 있어서 임상적으로 연구되고 있으며, 유망한 결과가 나타나고 있다. 또한, VEGF는 백혈병 및 림프종에서 주요한 역할을 하고, 각종 악성 고형 종양에서 고도로 발현되어, 악성 질환의 진행과 높은 상호 관련성을 갖는다. VEGFR-2 (KDR) 발현을 갖는 종양 질환의 예로는 폐 암종, 유방 암종, 비-호지킨 림프종 (non-Hodgkin's lymphoma), 난소 암종, 췌장암, 악성 흉막 중피종 및 흑색종이 있다. VEGFR의 리간드인 VEGF는 그의 맥관형성 활성 이외에도, 종양 세포에서 직접적인 프로-생존 (pro-survival) 효과에 의해 종양 성장을 촉진할 수 있다. 여타 다양한 질환들이, 예를 들어 하기 언급된 바와 같이 탈조절적 맥관형성과 관련되어 있다.

FLT3은 제III형 수용체 티로신 키나제 (RTK) 부류의 일원이다. FLT3 (fms-유사 티로신 키나제)은 또한 FLk-2 (태아 간 키나제 2)로도 알려져 있다. FLT3 유전자의 비정상적 발현은 특히 급성 골수성 백혈병 (AML), 삼직계성 골수이형성증을 동반한 AML (AML/TMDS), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 및 골수이형성 증후군 (MDS) 뿐만 아니라 MLL (혼합 직계성 백혈병)을 비롯한 성인 및 소아 백혈병 모두에서 증명되었다. FLT3 수용체의 돌연변이 활성화는 급성 골수성 백혈병 (AML)에 걸린 환 자의 약 35 ％에서 발견되며, 이는 좋지 않은 예후와 관련있다. 가장 통상적인 돌연변이는 근처막 도메인 내에서의 인-프레임 (in-frame) 복제를 수반하고, 추가로 환자의 5 내지 10 ％에서는 아스파라긴 835에서의 점 돌연변이가 발견됐다. 이들 돌연변이 모두 FLT3의 티로신 키나제 활성이 구성적으로 활성화되어 있는 것과 관련있고, 리간드의 부재시에 증식 및 생존 신호를 초래한다. 수용체의 돌연변이 형태가 발현되는 환자는 치유 가능성이 감소된 것으로 나타났다. 따라서, 인간 백혈병 및 골수이형성 증후군에서 과활성화된 (돌연변이된) FLT3 키나제 활성의 역할에 대한 증거가 축적되고 있다.

안지오포이에틴 (Tie-2의 리간드) 및 Tie-2는 관 안정화 및 혈관 재형성 (remodeling)에 관여한다. Tie-2가 그의 리간드 중 하나인 안지오포이에틴-1 (이는 제2 리간드 안지오포이에틴-2 (ang2)에 의해 상쇄됨)에 의해 활성화된다는 것이 알려져 있다. 맥관형성이 발생된 부위에서, 길항제 ang2는 상향-조절된다.

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 단백질 키나제, 특히 바로 전에 기재한 것들 중 하나 이상의 신규한 억제제를 제공하여, 지금까지의 몇몇 이용가능한 화합물에 신규한 화합물을 추가하는 것이다.

<발명의 포괄적인 설명>

본 발명에 이르러 화학식 I의 화합물이 다수의 단백질 키나제의 억제를 나타낸다는 것이 밝혀졌다. 하기에 보다 상세히 기재된 화학식 I의 화합물은, 특히 하기 단백질 키나제 중 하나 이상의 억제를 나타낸다: tie-2, 바람직하게는 c-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, RET 원-종양유전자, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 (PDGFR), FLT3 수용체 키나제 및 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 예를 들어 특히 VEGFR2. 화학식 I의 화합물은 또한 상기 키나제의 돌연변이도 억제한다. 이러한 활성을 고려할 때, 화학식 I의 화합물은 이러한 유형의 키나제, 특히 언급한 것들의 특히 비정상적 활성 또는 과다 활성과 관련있는 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.

한 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물을 제공한다.

상기 식에서,

(i) R1 및 R2는 각각 수소, 할로 및 C₁-C₇-알킬로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;

R3은, Z가 질소라면 존재하지 않거나, 또는 Z가 C (탄소)라면 수소, 비치환 또는 치환된 아릴, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴이고;

X는 N (질소) 또는 CH (수소-치환된 탄소)이고;

Y는 CH 또는 N이고;

Z는 C 또는 N이고;

Q는 하기 화학식 A의 기이고;

(상기 식에서,

(a) R4는 수소, 할로, 비치환 또는 치환된 아미노, 비치환 또는 치환된 아릴, 질소 이외의 고리 원자를 통해 결합된 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 비치환 또는 치환된 알킬, 비치환 또는 치환된 알케닐, 또는 비치환 또는 치환된 알키닐이고;

R5는 1-메틸-피페리딘-4-일옥시, 1-메틸-피페리딘-4-일, 2-디메틸아미노-에틸 또는 4-에틸-피페라진-1-일이고;

R6은 수소, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 또는 비치환 또는 (바람직하게는) 치환된 알킬이거나; 또는

(b) R4는 1-메틸-피페리딘-4-일메틸, 1-에틸-피페리딘-4-일메틸, 1-메틸-피페리딘-4-일옥시 또는 1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸이고;

R5는 수소, 비치환 또는 치환된 알킬, 비치환 또는 치환된 아미노, 비치환 또는 치환된 아릴, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴이고;

R6은 수소, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 또는 비치환 또는 (바람직하게는) 치환된 알킬이며;

화학식 A에서 별표 *는 결합을 표시하는데, 이 결합을 통해 화학식 I의 아미 드기의 NH에 잔기가 결합됨)

R9 및 R10은 각각 수소, 히드록실 및 C₁-C₇-알킬로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되거나; 또는

R9 및 R10은 함께 옥소를 나타내거나; 또는

R1 및 R9는 함께 -C(O)-CH₂- 또는 -CH₂-CH₂- 기를 형성하고, R2는 수소, 할로 및 C₁-C₇-알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, R10은 수소를 나타내거나; 또는

(ii) 화학식 I의 화합물은

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(4-이소프로필-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드),

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드 및

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드

로 이루어진 군으로부터 선택된다.

화학식 I의 화합물에서, 바람직하게는

- X가 C 또는 NH이고;

- Y가 CH이고;

- Z가 C이고;

- R1이 H이고;

- R2가 수소, 할로 또는 C₁-C₇-알킬, 예컨대 메틸이고,

- R3이 H이고;

- R9가 H이고;

- R10이 H이고;

- Q가

기로 이루어진 군으로부터 선택된다.

화학식 I의 화합물에서, 나타낸 치환기들 중의 기는 각각, 정의된 다른 기들과 독립적으로 바람직한 기일 수 있고; 나타낸 단일 치환기는 각각, 정의된 다른 치환기들과 독립적으로 바람직한 치환기일 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물을 제공한다.

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-2-(4-이미다조[4,5-b]피리 딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

N-[4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드, 2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트 리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트아미드,

N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-2-(4- 이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4- 일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드 및

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드.

본 발명에 의해 제공되는 화합물은 이하 "본 발명의(에 따른) 화합물(들)"로 지칭된다. 본 발명의 화합물에는 임의의 형태의 화합물, 예를 들어 유리 형태, 염 형태, 용매화물 형태, 및 염 및 용매화물 형태의 화합물이 포함된다.

본 발명은 또한 특히 단백질 키나제, 바람직하게는 tie-2 및/또는 보다 특히 PDGFR, VEGFR-2, c-Abl, Flt3, Ret, kit 및 IGF1R로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 단백질 키나제, 및/또는 임의의 하나 이상의 상기 단백질 키나제의 하나 이상의 변형되거나 돌연변이된 형태의 조절, 특히 억제에 대해 반응하는 질환 또는 장애를 앓는 동물, 특히 온혈동물 또는 인간의 진단적 또는 요법적 치료에 있어서의 상기 또는 하기 정의된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 실시양태는 상기 또는 하기 정의된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제, 예컨대 담체 물질을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 실시양태는 단백질 키나제, 특히 단백질 티로신 키나제, 보다 특히 tie-2 및/또는 보다 특히 PDGFR, VEGFR-2, c-Abl, Flt3, Ret 및 kit로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 단백질 키나제, 및/또는 임의의 하나 이상의 상기 단백질 키나제의 하나 이상의 변형되거나 돌연변이된 형태의 (특히 부적절한) 활성에 의존하는 질환 또는 장애 치료용 제약 조성물의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도; 또는 단백질 키나제, 특히 단백질 티로신 키나제, 특히 바로 전에 정의한 단백질 키나제의 (특히 부적절한) 활성에 의존하는 질환의 치료에 있어서의 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 동물, 바람직하게는 온혈동물, 특히 인간에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 키나제 의존성 및/또는 증식성 질환의 치료 방법에 관한 것이다.

정의

본 발명의 화합물 뿐만 아니라, 그의 용도 및 합성, 출발 물질 및 중간체 등을 설명하기 위해 사용된 다양한 용어들의 정의가 하기 열거되어 있다. 이들 정의는 개별적으로 또는 보다 큰 군의 부분으로서 특정 예에 달리 제한되지 않는다면, 본 명세서에 사용된 1개의, 1개 초과의 또는 모든 일반적 표현 또는 기호를 대체하여 본 발명의 바람직한 실시양태를 생성함으로써, 바람직하게는 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어에 대해 적용된다. 환언컨대, 하나 이상의 보다 일반적인 표현이 서로 독립적으로 보다 구체적인 정의로 대체되어, 본 발명의 바람직한 실시양태를 생성할 수 있다.

용어 "저급" 또는 "C₁-C₇-"은 7개 이하, 특히 4개 이하의 탄소 원자를 갖는, 말단 또는 비-말단 탄소를 통해 결합된 분지형 (1회 이상) 또는 직쇄 잔기로 정의된다. 저급 또는 C₁-C₇-알킬은 예를 들어 n-펜틸, n-헥실 또는 n-헵틸, 또는 바람직하게는 C₁-C₄-알킬, 특히 메틸, 에틸, n-프로필, sec-프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸이다.

할로 또는 할로겐은, 달리 정의하지 않는 한, 바람직하게는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 가장 바람직하게는 플루오로, 클로로 또는 브로모이다.

비치환 또는 치환된 아릴에서, 아릴은 바람직하게는 20개 이하의 탄소 원자, 특히 16개 이하의 탄소 원자의 불포화 카르보시클릭계이며, 바람직하게는 모노-, 비- 또는 트리-시클릭이고, 이는 치환되지 않거나 또는 치환된 아릴로서, 바람직하게는 페닐, 나프틸, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬, 예컨대 벤질; 히드록시-저급 알킬, 예컨대 히드록시메틸; 저급-알콕시-저급 알킬, (저급-알콕시)-저급 알콕시-저급 알킬, 저급 알카노일-저급 알킬, 할로-저급 알킬, 예컨대 트리플루오로메틸; 페녹시- 또는 나프틸옥시-저급 알킬, 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시-저급 알킬, 예컨대 벤질옥시-저급 알킬; 저급 알콕시-카르보닐옥시-저급 알킬, 예컨대 tert-부톡시카르보닐옥시-저급 알킬; 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시카르보닐옥시-저급 알킬, 예컨대 벤질옥시카르보닐옥시-저급 알킬; 시아노-저급 알킬, 비치환 또는 치환된 아미노로 치환 또는 비치환된 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 알카노일, 예컨대 아세틸; 히드록시, 저급 알콕시, 저급-알콕시-저급 알콕시, (저급-알콕시)-저급 알콕시-저급 알콕시, 페녹시, 나프틸옥시, 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시, 예컨대 벤질옥시; 아미노-저급 알콕시, 저급-알카노일옥시, 벤조일옥시, 나프토일옥시, 니트로, 할로, 특히 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 아미노, 일치환- 또는 이치환된 아미노 (여기서, 아미노 치환기는 저급 알킬, 저급 알카노일, 페닐, 나프틸, 페닐- 및 나프틸-저급 알킬로부터 독립적으로 선택됨); 시아노, 카르복시, 저급 알콕시 카르보닐, 예를 들어 메톡시 카르보닐, n-프로폭시 카르보닐, 이소-프로폭시 카르보닐 또는 tert-부톡시카르보닐; 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시카르보닐, 예컨대 벤질옥시카르보닐; 저급 알카노일, 벤조일, 나프토일, 카르바모일, N-일치환- 또는 N,N-이치환된 카르바모일, 예컨대 N-일치환- 또는 N,N-이치환된 카르바모일 (여기서, 치환기는 저급 알킬 및 히드록시-저급 알킬로부터 선택됨); 아미디노, 구아니디노, 우레이도, 머캅토, 저급 알킬티오, 페닐- 또는 나프틸티오, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬티오, 저급 알킬-페닐티오, 저급 알킬-나프틸티오, 할로겐-저급 알킬머캅토, 저급 알킬술피닐, 페닐- 또는 나프틸-술피닐, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬술피닐, 저급 알킬-페닐술피닐, 저급 알킬-나프틸술피닐, 술포, 저급 알칸술포닐, 페닐- 또는 나프틸-술포닐, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬술포닐, 알킬페닐술포닐, 할로겐-저급 알킬술포닐, 예컨대 트리플루오로메탄술포닐; 술폰아미도 및 벤조술폰아미도로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 바람직하게는 3개 이하, 예를 들어 1 또는 2개의 치환기로 치환되고; 여기서 치환된 아릴의 치환기로서 또는 치환기의 일부로서 상기 언급된 페닐 또는 나프틸 (또한 페녹시 또는 나프톡시에서)은 각각 그 자체가 치환되지 않거나 또는 할로, 특히 플루 오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 할로-저급 알킬, 예컨대 트리플루오로메틸, 히드록시, 저급 알콕시, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬, 페닐, 나프틸, 페닐-저급 알킬 및/또는 나프틸-저급 알킬)아미노, 니트로, 카르복시, 저급-알콕시카르보닐, 카르바모일, 시아노 및/또는 술파모일로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 예를 들어 3개 이하, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기로 치환된다.

비치환 또는 치환된 헤테로시클릴에서, 헤테로시클릴은 바람직하게는 불포화되거나, 포화되거나 또는 부분 포화되고, 바람직하게는 모노시클릭이거나 또는 본 발명의 보다 광범위한 측면에서는 비시클릭 또는 트리시클릭 고리이며; 3 내지 24개, 보다 바람직하게는 4 내지 16개, 가장 바람직하게는 4 내지 10개의 고리 원자를 갖는 헤테로시클릭 라디칼이고; 여기서 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개, 특히 1 또는 2개의 탄소 고리 원자는 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자로 대체되고, 결합 고리는 바람직하게는 4 내지 12개, 특히 5 내지 7개의 고리 원자를 가지며; 상기 헤테로시클릴은 치환되지 않거나 또는 "치환된 아릴" 하에 상기 정의된 치환기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 특히 1 내지 3개의 치환기로 치환되고; 상기 헤테로시클릴은 특히 옥시라닐, 아지리닐, 아지리디닐, 1,2-옥사티올라닐, 티에닐, 푸릴, 테트라히드로푸릴, 피라닐, 티오피라닐, 티안트레닐, 이소벤조푸라닐, 벤조푸라닐, 크로메닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 벤즈이미다졸릴, 피라졸릴, 피라지닐, 피라졸리디닐, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 디티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 피리다지닐, 모 르폴리닐, 티오모르폴리닐, (S-옥소 또는 S,S-디옥소)-티오모르폴리닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 쿠마릴, 인다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 퓨리닐, 4H-퀴놀리지닐, 이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 테트라히드로퀴놀릴, 테트라히드로이소퀴놀릴, 데카히드로퀴놀릴, 옥타히드로이소퀴놀릴, 벤조푸라닐, 디벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 디벤조티오페닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살릴, 퀴나졸리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 카르바졸릴, 베타-카르볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 페리미디닐, 페난트롤리닐, 푸라자닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 크로메닐, 이소크로마닐 및 크로마닐로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로시클릴 라디칼이고, 이들 라디칼은 각각 치환되지 않거나 또는 저급 알킬, 특히 메틸, 에틸, 이소-프로필 또는 tert-부틸, 저급 알콕시, 특히 메톡시, 및 할로, 특히 브로모 또는 클로로로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 2개의 라디칼로 치환된다. R4의 경우에, 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴은, 바람직하게는 치환된 아미노의 정의와의 중복을 피하기 위해 고리 질소 이외의 고리 원자, 바람직하게는 탄소를 통해 결합된다.

비치환 또는 치환된 시클로알킬에서, 시클로알킬은 바람직하게는 3 내지 16개, 보다 바람직하게는 3 내지 9개의 고리 탄소 원자를 갖는 포화 모노- 또는 비시클릭 탄화수소기, 예를 들어 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 또는 시클로옥틸이며, 이는 치환된 아릴에 대해 기재된 것들로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 또는 (바람직하게는) 치환되지 않는다.

비치환 또는 치환된 아미노는 아미노 (-NH₂), 또는 1 또는 2개의 수소 원자가 비치환 또는 치환된 알킬, 특히 하기 기재된 바와 같은 것들, 비치환 또는 치환된 아릴, 특히 상기 기재된 바와 같은 것들, 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 특히 상기 기재된 바와 같은 것들, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 특히 상기 기재된 바와 같은 것들 및/또는 아실, 특히 하기 기재된 바와 같은 것들 (여기서, 바람직하게는 1개의 수소 원자만이 아실로 대체되고, 나머지 수소 원자는 수소 또는 아실 이외의 바로 전에 언급한 것들로부터의 잔기임)로부터 독립적으로 선택된 치환기로 대체된 아미노, 또는 (바람직하게는 하전되지 않고 결합하는 3차 결합을 포함하는) 고리 질소 원자를 통해 분자의 나머지에 결합되는 1개 이상의 질소 고리 원자를 갖는 (따라서, 치환된 아미노는 아미노 질소와 함께 상응하는 (비치환 또는 추가로 치환된) 헤테로시클릴 고리를 형성하는 치환기 중 하나임) 상기 정의된 바와 같은 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 특히 아지리디닐, 피롤릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 벤즈이미다졸릴, 피라졸릴, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, (S-옥소 또는 S,S-디옥소)-티오모르폴리닐, 이소인돌릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 테트라히드로퀴놀릴, 테트라히드로이소퀴놀릴, 데카히드로퀴놀릴, 옥타히드로이소퀴놀릴로 이루어진 군으로부터 선택된 것들, 바람직하게는 바로 전에 언급한 것들로부터의 1개 이상의 질소 원자를 갖는 모노시클릭 포화 헤테로시클릴 형태의 치환된 아미노이고; 상기 헤테로시클릴은 치환되지 않거나 또는 아릴에 대 한 치환기로서 언급된 것들, 바람직하게는 저급 알킬, 특히 메틸 또는 tert-부틸, 저급 알콕시, 특히 메톡시, 및 할로, 특히 브로모 또는 클로로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 바람직하게는 1 또는 2개의 라디칼로 치환된다. 비치환 또는 치환된 아미노로서 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-[저급 알킬, N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬, 페닐 및/또는 페닐-저급 알킬)-아미노-저급 알킬, (비치환 또는 저급 알킬-치환된)-피페리디닐, 페닐 및/또는 페닐-저급 알킬]-아미노, 예컨대 N,N-디메틸아미노, N,N-디에틸아미노, 3-[N-(N,N-디메틸아미노)-프로필아미노, 2-[N-(N,N-디메틸아미노)-에틸아미노 또는 N-(N,N-디메틸아미노)-메틸아미노, N-[(N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬)-아미노)-C₁-C₇-알킬]-N-(비치환 또는 C₁-C₇-알킬)-아미노, 예컨대 N-3-[N-(N,N-디메틸아미노)-프로필-N-메틸-아미노, N-2-[N-(N,N-디메틸아미노)-에틸-N-메틸-아미노 또는 N-(N,N-디메틸아미노)-메틸-N-메틸-아미노, N-피페리디닐아미노 또는 N-저급 알킬-N-피페리딘-일아미노 (여기서, 피페리디닐은 치환되지 않거나 저급 알킬로 치환됨), 예를 들어 N-저급 알킬-N-(1-저급 알킬-피페리딘-4-일)-아미노, 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 4-저급 알킬-피페라지노, 예컨대 4-(메틸, 에틸 또는 이소프로필)-피페라지노, 모르폴리노 또는 티오모르폴리노가 특히 바람직하다.

비치환 또는 치환된 알킬은 선형이거나 또는 1회 이상 (탄소 원자 개수가 이를 허용한다면) 분지될 수 있고, 치환되지 않거나 또는 상기 기재된 바와 같은 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 상기 기재된 바와 같은 비치환 또는 치환된 시클 로알킬, 상기 정의된 바와 같은 비치환 또는 치환된 아릴, 특히 페닐 또는 나프틸; 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 알카노일, 예컨대 아세틸; 히드록시, 저급 알콕시, 저급-알콕시-저급 알콕시, (저급-알콕시)-저급 알콕시-저급 알콕시, 페녹시, 나프틸옥시, 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시, 예컨대 벤질옥시; 아미노-저급 알콕시, 저급-알카노일옥시, 벤조일옥시, 나프토일옥시, 니트로, 할로, 시아노, 카르복시, 저급 알콕시 카르보닐, 예를 들어 메톡시 카르보닐, n-프로폭시 카르보닐, 이소-프로폭시 카르보닐 또는 tert-부톡시카르보닐; 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시카르보닐, 예컨대 벤질옥시카르보닐; 저급 알카노일, 벤조일, 나프토일, 카르바모일, N-일치환- 또는 N,N-이치환된 카르바모일, 예컨대 치환기가 저급 알킬 및 히드록시-저급 알킬로부터 선택된 N-일치환- 또는 N,N-이치환된 카르바모일; 아미디노, 구아니디노, 우레이도, 머캅토, 저급 알킬티오, 페닐- 또는 나프틸티오, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬티오, 저급 알킬-페닐티오, 저급 알킬-나프틸티오, 할로겐-저급 알킬머캅토, 저급 알킬술피닐, 페닐- 또는 나프틸-술피닐, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬술피닐, 저급 알킬-페닐술피닐, 저급 알킬-나프틸술피닐, 술포, 저급 알칸술포닐, 페닐- 또는 나프틸-술포닐, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬술포닐, 알킬페닐술포닐, 할로겐-저급 알킬술포닐, 예컨대 트리플루오로메탄술포닐; 술폰아미도, 벤조술폰아미도, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-[저급 알킬, 피페리디닐, N-저급 알킬피페리딘-일 (여기서, 피페리디닐은 치환되지 않거나 저급 알킬로 치환됨), N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬, 페닐 및/또는 페닐-저급 알킬)-아미노]-저급 알킬, 페닐 및/또는 페닐-저급 알킬)-아미노, 예컨대 N,N-디메틸아미노, N,N-디에틸아미 노, 3-[N-(N,N-디메틸아미노)-프로필아미노, 2-[N-(N,N-디메틸아미노)-에틸아미노 또는 N-(N,N-디메틸아미노)-메틸아미노, 피롤리디노, 피페리디노, 고리 탄소 원자를 통해 결합된 비치환 또는 N-저급 알킬 치환된 피페리디닐, 예컨대 1-이소프로필-피페리딘-4-일, 피페라지노, 4-저급 알킬피페라지노, 예컨대 4-(메틸, 에틸 또는 이소프로필)-피페라지노, 모르폴리노 또는 티오모르폴리노로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 바람직하게는 3개 이하의 치환기로 치환된, 바람직하게는 C₁- 내지 C₂₀-알킬, 보다 바람직하게는 저급 알킬이고; 여기서 치환된 알킬의 치환기로서 또는 치환기의 일부로서 상기 언급된 페닐 또는 나프틸 (또한 페녹시 또는 나프톡시에서)은 각각 그 자체가 치환되지 않거나 또는 할로, 특히 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 할로-저급 알킬, 예컨대 트리플루오로메틸, 히드록시, 저급 알콕시, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬, 페닐, 나프틸, 페닐-저급 알킬 및/또는 나프틸-저급 알킬)-아미노, 니트로, 카르복시, 저급-알콕시카르보닐, 카르바모일, 시아노 및/또는 술파모일로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 예를 들어 3개 이하, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기로 치환된다. 저급 알킬, 할로-저급 알킬, 예컨대 트리플루오로메틸, 아미노-저급 알킬, 예컨대 3-아미노프로필, 2-아미노에틸 또는 2-아미노메틸, N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬, 피페리디닐, N-저급 알킬피페리디닐, 페닐 및/또는 페닐-저급 알킬)-아미노-저급 알킬, 예컨대 3-(N,N-디메틸아미노)-프로필, 2-(N,N-디메틸아미노)-에틸, N,N-디메틸아미노메틸, N,N-디에틸아미노메틸 또는 N-메틸-N-피페리딘-4-일-아미노-메틸, 피롤리 디노-저급 알킬, 피페리디노-저급 알킬, 1-저급 알킬피페리딘-4-일-저급 알킬, 피페라지노-저급 알킬, 예컨대 피페라지노-메틸, 4-저급 알킬피페라지노-저급 알킬, 예컨대 4-(메틸, 에틸 또는 이소프로필)-피페라지노-메틸, 또는 (모르폴리노 또는 티오모르폴리노)-저급 알킬이 특히 바람직하다.

아실은 카르보닐 (-C(=O)-) 또는 술포닐 (-S(=O)₂-) 기를 통해 분자의 나머지에 결합된 각각 바람직하게는 상기 기재된 바와 같은 비치환 또는 치환된 알킬, 비치환 또는 치환된 아릴, 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 또는 비치환 또는 치환된 시클로알킬로부터 선택된 유기 잔기, 즉 유기 카르복실산 또는 술폰산으로부터 유도된 잔기이다. 알카노일, 특히 저급 알카노일, 예를 들어 아세틸, 벤조일 (= 페닐카르보닐), 나프토일 (= 나프틸카르보닐), 페닐-C₁-C₇-알킬카르보닐, 나프틸-C₁-C₇-알킬카르보닐, 페닐술포닐 또는 저급 알칸술포닐이 바람직하며, 여기서 아실로서 각각의 저급 알카노일 또는 아실의 일부로서 언급된 각각의 페닐 또는 나프틸은 치환되지 않거나 또는 할로, 특히 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 할로-저급 알킬, 예컨대 트리플루오로메틸, 히드록시, 저급 알콕시, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬, 페닐, 나프틸, 페닐-저급 알킬 또는 나프틸-저급 알킬)아미노, 니트로, 카르복시, 저급-알콕시카르보닐, 카르바모일, 시아노 및/또는 술파모일로부터 독립적으로 선택된 1개 이상, 예를 들어 3개 이하, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기로 치환된다. 저급 알카노일, 벤조일, 페닐술포닐 또는 톨릴술포닐이 바람직하다.

비치환 또는 치환된 알케닐에서, 알케닐은 1개 이상의 이중 결합을 갖고, 바람직하게는 2 내지 20개, 보다 바람직하게는 12개 이하의 탄소 원자를 가지며; 이는 선형이거나 1회 이상 (탄소 원자 개수가 이를 허용한다면) 분지될 수 있다. C₂-C₇-알케닐, 특히 C₃ 또는 C₄-알케닐, 예컨대 알릴 또는 크로틸이 바람직하다. 알케닐은 치환되지 않거나 또는 특히 치환된 알킬에 대한 치환기로서 상기 언급된 1개 이상, 보다 특히 3개 이하의 치환기로 치환될 수 있되, 단 활성 수소를 갖는 N, S 또는 O는 바람직하게는 이중 결합이 나타난 탄소 원자에서는 결합되지 않는다 (호변이성질체화가 유도되기 때문임). 또한 충분히 안정하지 않은 다른 치환기도 제외하는 것이 바람직하다. 비치환된 알케닐, 특히 C₂-C₇-알케닐이 바람직하다.

비치환 또는 치환된 알키닐은 바람직하게는 1개 이상의 삼중 결합을 갖고, 바람직하게는 2 내지 20개, 보다 바람직하게는 12개 이하의 탄소 원자를 갖는 잔기이며; 이는 선형이거나 1회 이상 (탄소 원자 개수가 이를 허용한다면) 분지될 수 있다. C₂-C₇-알키닐, 특히 C₃ 또는 C₄-알키닐, 예컨대 에티닐 또는 프로핀-2-일이 바람직하다. 알키닐은 치환되지 않거나 또는 특히 치환된 알킬에 대해 상기 언급된 1개 이상, 보다 특히 3개 이하의 치환기로 치환될 수 있다. 아미노 또는 히드록시와 같은 치환기 (자유롭게 분리될 수 있는 수소를 갖는 것)는 바람직하게는 삼중 결합에 참여하는 탄소 원자에 결합되지 않고, 또한 충분히 안정하지 않은 다른 치환기도 제외하는 것이 바람직하다. 비치환된 알키닐, 특히 C₂-C₇-알키닐, 또는 N,N-디-(저급 알킬, 페닐 및/또는 페닐 저급 알킬)-C₃-C₇-알키닐, 예컨대 3-(N,N-디메틸아미노)-프로프-1-이닐이 바람직하다.

용어 "치료" 또는 "요법" (특히 티로신 단백질 키나제 의존성 질환 또는 장애의 치료 또는 요법)은 상기 질환, 특히 하기 언급된 임의의 1종 이상의 질환의 예방적 (예를 들어, 질환이 발생됨을 나타내거나 질환이 발생될 수 있음을 나타내는 돌연변이 또는 변화가 발견된 환자에서의 예방 포함) 또는 바람직하게는 요법적 (경감, 치유, 증상-완화, 증상-감소, 질환- 또는 증상-억제, 진행-지연, 키나제-조절 및/또는 키나제-억제를 포함하나, 이에 제한되지는 않음) 치료를 지칭한다.

용어 "치유적"은 (특히, 탈조절적인) 수용체 티로신 키나제 활성과 관련된 진행중인 에피소드를 치료하는데 있어서의 유효성을 의미한다.

용어 "예방적"은 탈조절된 수용체 티로신 키나제 활성과 관련된 질환의 발병 또는 재발의 방지를 의미한다.

본원에 사용된 용어 "진행의 지연"은 특히 치료할 질환의 예비 단계 또는 초기 단계인 환자 (예를 들어, 상응하는 질환의 사전-형태로 진단받거나, 예를 들어 의학적 치료 중이거나 우발 증후로 인한 상태여서 상응하는 질환이 진행될 가능성이 높거나, 예를 들어 치료하지 않으면 전이가 예상될 수 있는 상태의 환자)에게 활성 화합물을 투여하는 것을 의미한다.

동물은 바람직하게는 온혈동물 (또는 환자), 보다 바람직하게는 포유동물, 특히 인간이다.

이상 및 이하에서 (화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도와 관련하여) 용어 "용도"가 (동사 또는 명사로서) 언급된 경우, (달리 나타내지 않거나, 문맥상 달리 제안되지 않는 한) 이는 각각 (달리 언급하지 않는 한), 임의의 하나 이상의 하기 본 발명의 실시양태를 포함한다: 달리 언급하지 않는 한, 적절하게 편의상, 단백질 (특히 티로신) 키나제 의존성 질환의 치료에 있어서의 용도, 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물의 제조에 있어서의 용도, 단백질 키나제 의존성 및/또는 증식성 질환의 치료에 있어서의 하나 이상의 본 발명의 화합물의 사용 방법, 상기 단백질 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 하나 이상의 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 제제, 및 상기 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 있어서의 하나 이상의 화학식 I의 화합물. 특히, 치료할 질환 및 이에 따라 화학식 I의 화합물의 "용도"에 바람직한 질환은 하기 언급된 (특히 티로신) 단백질 키나제 의존성 ("의존성"은 또한 질환이 단백질 키나제의 조절, 특히 억제에 대해 반응하는 상황을 비롯한 "전적인 의존성" 뿐만 아니라 또한 "매개성 (supported)"도 의미함) 질환, 특히 하기 언급된 증식성 질환들로부터 선택된다.

단백질 키나제가 언급된 경우, 이는 모든 유형의 단백질 키나제, 특히 세린/트레오닌, 및/또는 바람직하게는 단백질 티로신 키나제, 가장 바람직하게는 tie-2 및/또는 보다 특히 PDGFR, VEGFR-2, c-Abl, Flt3, Ret, kit 및 IGF1-R, 및 이들 중 임의의 1종 이상의 변형 형태, 돌연변이 형태 또는 대립 형태 (예를 들어, 각 원-종양유전자가 종양유전자로 전환되도록 하는 것들, 예를 들어 구성적으로 활성화된 돌연변이체, 예를 들어 Bcr-Abl) 중 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 티로신 키나제에 관한 것이다. 특히, 비정상적으로 고도로 발현된 형태, 구성적으로 활성화된 형태 또는 정상적이지만 환자내 다른 조절 메카니즘의 관점에서 비교적 과민성인 형태, 및/또는 돌연변이 형태가 포함된다.

또다른 측면에서, 본 발명은 염 형태의 본 발명의 화합물을 제공한다.

염은 특히 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염이다. 염은, 예를 들어 수성 환경 하에 4 내지 10의 pH 범위에서 적어도 부분적으로 해리된 형태로 존재할 수 있거나, 또는 특히 고체 형태로 단리될 수 있는 염 형성 기, 예를 들어 염기성 또는 산성 기가 존재하는 경우에 형성될 수 있다.

염에는, 예를 들어 제조/단리/정제 목적을 위한 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되지 않는 염이 포함되며, 제약상 허용되는 염이 바람직하다. 제약적 용도를 위해서는, 본 발명의 화합물의 제약상 허용되지 않는 염은 본 발명에서 제외된다.

염은, 예를 들어 수성 환경 하에 4 내지 10의 pH 범위에서 적어도 부분적으로 해리된 형태로 존재할 수 있거나, 또는 특히 고체 형태로 단리될 수 있는 염 형성 기, 예를 들어 염기성 또는 산성 기가 존재하는 경우에 형성될 수 있다.

상기 염은, 예를 들어 염기성 질소 원자를 갖는 화학식 I의 화합물로부터, 바람직하게는 유기산 또는 무기산에 의해 산 부가염으로서 형성될 수 있고, 이는 특히, 제약상 허용되는 염이다. 적합한 무기산은, 예를 들어 할로겐산, 예컨대 염산, 황산 또는 인산이다. 적합한 유기산은, 예를 들어 카르복실산, 포스폰산, 술 폰산 또는 술팜산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 락트산, 푸마르산, 숙신산, 시트르산, 아미노산, 예컨대 글루탐산 또는 아스파르트산, 말레산, 히드록시말레산, 메틸말레산, 벤조산, 메탄- 또는 에탄-술폰산, 에탄-1,2-디술폰산, 벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 1,5-나프탈렌-디술폰산, N-시클로헥실술팜산, N-메틸-술팜산, N-에틸-술팜산 또는 N-프로필-술팜산, 또는 여타 유기 양성자산, 예컨대 아스코르브산이다.

또한, 염은 음으로 하전된 라디칼, 예를 들어 카르복시 또는 술포의 존재 하에서, 염기 (예를 들어, 금속 염 또는 암모늄 염, 예컨대 알칼리 금속 염 또는 알칼리 토금속 염, 예컨대 나트륨 염, 칼륨 염, 마그네슘 염 또는 칼슘 염, 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민, 예컨대 3급 모노아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 트리(2-히드록시에틸)아민과의 암모늄 염), 또는 헤테로시클릭 염기, 예를 들어 N-에틸-피페리딘 또는 N,N'-디메틸피페라진에 의해 형성될 수 있다.

또한, 염기성 기 및 산성 기가 동일한 분자 중에 존재하는 경우, 화학식 I의 화합물은 내부 염을 형성할 수 있다.

또한, 제조, 단리 또는 정제 목적을 위해, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트가 사용될 수 있다. 치료 용도를 위해, 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만이 (적절한 경우, 제약 제제 중에 포함되어) 사용되고, 따라서 이들이 바람직하다.

유리 형태의 화합물과 그의 염 형태 (중간체로서 사용될 수 있는 염 포함)의 화합물 사이의 밀접한 관계에 비추어 볼 때, 예를 들어 화합물 또는 그의 염의 정 제 또는 동정시, 상기 및 하기의 "화합물" (출발 물질 및 "중간체"도 포함함), 특히 화학식 I의 화합물(들)에 대한 모든 언급은, 1종 이상의 그의 염, 또는 유리 화합물 및 1종 이상의 그의 염의 혼합물도 지칭하는 것으로 이해되어져야 하며, 달리 명백하게 언급되어 있지 않는 한, 적절하게 편의상, 이들 각각은 임의의 용매화물, 대사 전구체, 예를 들어 화학식 I의 화합물의 에스테르 또는 아미드, 또는 이들 중 임의의 하나 이상의 염도 포함하는 의도이다. 여러가지 결정 형태 및 용매화물이 얻어질 수 있고, 따라서 이들도 본 발명에 포함된다.

화합물, 염, 제약 제제, 질환, 장애 등에 복수형이 사용된 경우, 이는 또한 단일의 화합물, 염, 제약 제제, 질환 등도 의미하는 의도이며, 단수형이 사용된 경우에 이는 부정 관사 또는 바람직하게는 "하나"를 의미한다.

유리 형태의 본 발명의 화합물은 염 형태의 상응하는 화합물로 전환될 수 있고, 역으로 전환될 수 있다. 유리 형태 또는 염 형태, 및 용매화물 형태의 본 발명의 화합물은 유리 형태 또는 비-용매화 형태의 염 형태의 상응하는 화합물로 전환될 수 있고, 역으로 전환될 수 있다.

본 발명의 화합물은 이성질체 및 그의 혼합물 형태; 예를 들어, 광학 이성질체, 부분입체이성질체, 시스/트랜스 이형태체 (conformer) 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물은, 예를 들어 비대칭 탄소 원자를 함유할 수 있고, 따라서 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체, 및 그의 혼합물 형태 (예컨대, 라세미체)로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물의 상기 비대칭 탄소 원자에서의 각 치환기에 관해, 본 발명의 화합물은 (R)-, (S)- 또는 (R,S)-배위, 바람직하게는 (R)- 또는 (S)-배위로 존재할 수 있다.

이성질체 혼합물은, 예를 들어 통상적인 방법에 따라, 예를 들어 통상적인 방법과 유사하게, 적절히 분리되어, 순수한 이성질체로 수득될 수 있다. 본 발명에는 임의의 이성질체 형태 및 임의의 이성질체 혼합물인 본 발명의 화합물이 포함된다.

예를 들어, 경우에 따라, 본 발명의 화합물은 치환기 중에 1개 이상의 키랄 중심을 포함하거나, 다른 비대칭을 나타낼 수 있거나 (거울상이성질체가 생성됨), 또는 예를 들어, 2개 이상의 키랄 중심 또는 2개 이상의 다른 비대칭 형태, 또는 Z/E (또는 시스-트랜스) 이성질체 (부분입체이성질체)를 허용하는 고리 또는 이중 결합으로 인해 2종 이상의 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에는 2종 이상의 상기 이성질체의 혼합물, 예를 들어 거울상이성질체의 혼합물 (특히, 라세미체), 및 바람직하게는 순수 이성질체, 특히 순수 거울상이성질체 또는 거울상이성질체 풍부화 혼합물이 포함된다.

호변이성질체가 존재할 수 있는 경우, 본 발명에는 또한 본 발명의 화합물의 호변이성질체가 포함된다.

제조 공정

본원에 기재된 화합물은 각각, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어 통상적인 방법에 따라, 예를 들어 통상적인 방법과 유사하게, 적절히 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물은 다른 화합물들에 대해 당업계에 원칙적으로 공지되어 있는 방법과 유사하게 제조될 수 있으며, 따라서 신규한 화학식 I의 화합물에 대한 공정은 유사 공정으로서 신규하다.

또다른 측면에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 화학식 I의 화합물 (잔기는 상기 정의된 바와 같음)의 제조 공정을 제공한다.

i) 하기 화학식 II의 카르복실산 화합물 또는 그의 반응성 유도체를 하기 화학식 III의 아미노 화합물과 반응시키는 단계, 및

(상기 식에서, R1, R2, R3, R9, R10, X, Y 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같음)

(상기 식에서, Q는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같음)

ii) 반응 혼합물로부터 수득한 화학식 I의 화합물을 단리하고; 예를 들어, 임의로

- 수득가능한 화학식 I의 화합물을 다른 화학식 I의 화합물로 전환시키고/거나,

- 수득가능한 화학식 I의 화합물을 유리 화합물 또는 다른 염으로 전환시키고/거나,

- 수득가능한 유리 화학식 I의 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나

- 수득가능한 화학식 I의 화합물의 이성질체 혼합물을 개별 이성질체로 분리시키고;

- 여기서, 화학식 II의 출발 물질 및/또는 화학식 III의 출발 물질 중 어느 하나 또는 모두에서, 반응에 참여하지 않는 관능기가 보호된 형태로 존재할 수 있고, 보호기를 제거하여 화학식 I의 화합물을 수득하는 단계.

화학식 II의 산 또는 그의 반응성 유도체의 축합은 바람직하게는 통상적인 축합 조건하에 일어나고, 여기서 화학식 II의 산의 가능한 반응성 유도체 중의 반응성 에스테르 (예컨대, 히드록시벤조트리아졸 (HOBT), 펜타플루오로페닐, 4-니트로페닐 또는 N-히드록시숙신이미드 에스테르), 산 할로겐화물 (예컨대, 산 염화물 또는 브롬화물) 또는 반응성 무수물 (예컨대, 저급 알칸산과 혼합된 무수물 또는 대칭 무수물)이 바람직하다. 반응성 탄산 유도체는 또한 바람직하게는 동일계에서 형성될 수 있다. 이어서, 화학식 II의 화합물 및 화학식 III의 화합물을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 상기 용매의 혼합물 중에 용해시킴으로써, 그리고 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIEA) 또는 N-메틸모르폴린, 및 화학식 II의 산의 반응성 유도체가 동일계에서 형성된다면 동일계에서 화학식 III의 탄산의 바람직한 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 디시클로헥실카르보디이미드/1-히드록시벤조트리아졸 (DCC/HOBT); 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀 산 클로라이드 (BOPCl); O-(1,2-디히드로-2-옥소-1-피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU); O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU); (벤조트리아졸-1-일옥시)-트리피롤리디노포스포늄-헥사플루오로포스페이트 (PyBOP), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드/히드록시벤조트리아졸 또는 /1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (EDC/HOBT 또는 EDC/HOAt), 또는 단독의 HOAt 또는 (1-클로로-2-메틸-프로페닐)-디메틸아민과 조합된 HOAt를 첨가함으로써 반응을 수행할 수 있다. 몇몇 다른 가능한 커플링제에 대한 개관은, 예를 들어 문헌 [Klauser; Bodansky, Synthesis 1972, 453-463]을 참조한다. 반응 혼합물을 바람직하게는 약 -20 내지 50 ℃, 특히 -5 ℃ 내지 30 ℃, 예를 들어 0 ℃ 내지 실온의 온도에서 교반한다. 바람직하게는, 비활성 기체 (예컨대, 질소 또는 아르곤) 하에서 반응을 수행할 수 있다. 필요한 경우, 후속으로 보호기를 제거한다. 보호기, 예컨대 tert-부톡시카르보닐, 메톡시메틸, 벤질, 2-(트리메틸실릴)-에톡시카르보닐 또는 tert-부틸디메틸실릴의 후속적 제거는, 필요한 경우, 표준 조건하에서 일어나며, 또한 하기 일반적인 공정 조건 하에 언급된 문헌을 참조한다.

선택적인 반응 및 전환

상기 절차에 따라 수득한 그대로의, 또는 특별히 언급하지 않더라도 전환을 위한 출발 물질로서 후속으로 포함되는 보호기를 새로 도입한 후의 화학식 I의 화합물 또는 그의 보호된 형태는 공지된 절차에 따라 화학식 I의 상이한 화합물로 전환될 수 있고, 필요한 경우 후속으로 보호기가 제거된다.

예를 들어, Q가 요오도 또는 브로모, 및 가능한 1개 이상의 다른 치환기, 예컨대 트리플루오로로 치환된 아릴 (예를 들어, Q가 4-요오도-3-트리플루오로메틸페닐임)인 화학식 I의 화합물에서, 브로모 또는 요오도는, 촉매, 특히 PdCl₂ (dppf) 및 바람직하게는 또한 염기, 예컨대 알칼리 금속 탄산염 (예컨대, 탄산나트륨)의 존재하에, 적절한 용매 또는 용매 혼합물, 예를 들어 톨루엔/물 중에서, 예를 들어 승온에서, 예컨대 30 ℃ 내지 (바람직한) 환류 온도에서 하기 화학식 IV의 상응하는 치환 또는 비치환된 페닐보론산과의 커플링 반응에 의해 치환 또는 비치환된 페닐 (예컨대, 4-시아노페닐)로 대체될 수 있다.

상기 식에서, Phe는 비치환 또는 치환된 아릴이다.

하나 이상의 염-형성기를 갖는 화학식 I의 화합물의 염은 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 산 기를 갖는 화학식 I의 화합물의 염은, 예를 들어 화합물을 금속 화합물, 예컨대 적합한 유기 카르복실산의 알칼리 금속염 (예컨대, 2-에틸헥산산의 나트륨염)으로, 유기 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 화합물, 예컨대 상응하는 수산화물, 탄산염 또는 탄산수소염 (예컨대, 수산화나트륨 또는 수산화칼륨, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨, 또는 탄산수소나트륨 또는 탄산수소칼륨)으로, 상응하는 칼슘 화합물로, 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민으로 처리함으로써 형성될 수 있고, 이때 화학량론적 양 또는 약간만 과량의 염-형성제가 사용되는 것이 바람직하다. 화학식 I의 화합물의 산 부가염은 통상적인 방식으로, 예를 들어 화합물을 산 또는 적합한 이온 교환 시약으로 처리함으로써 수득된다. 산성 및 염기성 염-형성 기, 예를 들어 유리 카르복시기 및 유리 아미노기를 함유하는 화학식 I 화합물의 내부 염은, 예를 들어 염, 예를 들어 산 부가염을, 예를 들어 약염기를 사용하여 등전점으로 중화시키거나, 또는 이온 교환제로 처리함으로써 형성될 수 있다.

화학식 I 화합물의 염은 통상적인 방식으로 유리 화합물로 전환될 수 있고; 금속 및 암모늄 염은, 예를 들어 적합한 산으로 처리함으로써 전환될 수 있으며, 산 부가염은, 예를 들어 적합한 염기성 시약으로 처리함으로써 전환될 수 있다. 두 경우 모두에서, 적합한 이온 교환제가 사용될 수 있다.

입체이성질체 혼합물, 예컨대 부분입체이성질체의 혼합물은 그 자체로 공지된 방식으로 적절한 분리 방법에 의해 그의 상응하는 이성질체로 분리될 수 있다. 예를 들어, 부분입체이성질체 혼합물은 분별 결정화, 크로마토그래피, 용매 분배 및 유사한 절차에 의해 그의 개별 부분입체이성질체들로 분리될 수 있다. 이 분리는 출발 화합물들 중 한 화합물의 수준에서 또는 화학식 I의 화합물 자체에서 일어날 수 있다. 거울상이성질체는 부분입체이성질체 염의 형성을 통해, 예를 들어 거울상이성질체-순수한 키랄 산과의 염 형성에 의해, 또는 크로마토그래피, 예를 들어 키랄 리간드를 갖는 크로마토그래피 기질을 사용하는 HPLC에 의해 분리될 수 있다.

중간체 및 최종 생성물은 표준 방법에 따라, 예컨대 크로마토그래피 방법, 분배 방법, (재)결정화 등을 이용하여 후처리 및/또는 정제될 수 있다.

출발 물질

화학식 I의 화합물을 위한 중간체를 비롯한 출발 물질, 예컨대 화학식 II 및 III의 화합물은, 예를 들어 당업계에 공지된 방법에 따라, 실시예에 기재된 방법 또는 실시예에 기재된 것과 유사한 방법에 따라 제조될 수 있고/거나 이들은 공지되어 있거나 상업적으로 입수가능하다.

출발 물질, 중간체 및 그의 합성에 관한 하기 설명에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X, Y, Z 및 Q는 직접적으로 또는 문맥에 의해 달리 나타되지 않는 한, 각각의 출발 물질 또는 중간체에 대해 상기 또는 실시예에 주어진 의미를 갖는다. 달리 구체적으로 언급하지 않는 한, 관능기의 반응이 상응하는 반응 단계 또는 단계들에 있어서 바람직하지 않은 경우, 보호기는 관능기를 보호하기 위해 적절한 단계에서 도입되고 제거될 수 있으며, 사용되는 보호기, 그의 도입 및 제거 방법은 상기 또는 하기, 예를 들어 "일반적인 공정 조건"에 언급된 참고문헌에 기재된 바와 같다. 당업자는 어떤 보호기가 유용하거나 필요한지를 손쉽게 결정할 수 있을 것이다.

화학식 II의 출발 물질은, 예를 들어 하기 화학식 V의 상응하는 에스테르 (활성 에스테르라면 화학식 I의 화합물의 제조 방법에서 화학식 II의 화합물의 반응성 유도체로서 그대로 사용될 수 있음)로부터, 예를 들어 염기, 예컨대 알칼리 금속 수산화물 (예를 들어, 수산화리튬)의 존재하에, 적합한 용매, 예컨대 에테르 (예를 들어, 테트라히드로푸란) 중에서, 통상적인 온도에서, 예를 들어 20 내지 50 ℃에서, 또는 산, 예컨대 할로겐화수소산 (예를 들어, 염산)의 존재하에, 적합한 용매, 예컨대 물 중에서, 통상적인 온도에서, 예를 들어 50 ℃ 내지 반응 혼합물의 환류 온도에서의 가수분해에 의해 제조될 수 있다.

상기 식에서, R은 알코올의 잔기, 예를 들어 알킬 또는 페닐-저급 알킬, 예컨대 메틸, 에틸 또는 벤질이다.

화학식 V의 화합물은, 예를 들어 하기 화학식 VI의 아미노 화합물을, 바람직하게는 승온에서, 예를 들어 환류 조건하에, 또한 적절한 용매의 존재하에 또는 바람직하게는 부재하에, 적절한 형태의 포름산, 특히 트리-저급 알킬 오르토포르메이트 (예컨대, 트리에틸 오르토포르메이트)와 반응시킴으로써 수득될 수 있다.

상기 식에서,

R은 화학식 V의 화합물에 대해 정의된 바와 같고,

다른 잔기들은 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

화학식 VI의 아미노 화합물은, 예를 들어 바람직하게는 촉매적 수소화에 의해, 예를 들어 적절한 용매, 예컨대 알코올 (예를 들어, 메탄올) 중에서, 통상적인 온도, 예를 들어 0 내지 50 ℃에서, 라니 촉매 (예컨대, 라니 니켈) 존재하에, 수소로의 촉매적 수소화에 의해 하기 화학식 VII의 상응하는 니트로 전구체 화합물을 환원시킴으로써 수득될 수 있다.

상기 식에서,

R은 화학식 V의 화합물에 대해 정의된 바와 같고,

다른 잔기들은 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

화학식 VII의 니트로 화합물은, 예를 들어 하기 화학식 VIII의 할로 화합물을 적절한 조건하에서, 예를 들어 화학식 VIII의 화합물에서 Z가 N이고, Y 및 X가 각각 CH이고 Hal이 클로로 또는 브로모인 경우에는 바람직하게는 승온, 예를 들어 30 ℃ 내지 반응 혼합물의 환류 온도에서, 적절한 용매, 예컨대 알코올 및/또는 에테르 (예를 들어, 메탄올 및/또는 디옥산) 중에서; 화학식 VIII의 화합물에서 X가 N이고, Y가 CH이고, Z가 C인 경우에는 산, 예컨대 염산의 존재 또는 (특히 R2가 할로라면) 부재하에, 적절한 용매, 예컨대 알코올 및/또는 에테르 (예를 들어, 메탄 올 및/또는 디옥산) 중에서, 바람직하게는 승온에서, 예를 들어 30 ℃ 내지 반응 혼합물의 환류 온도에서; 또는 화학식 VIII의 화합물에서 X 및 Y가 CH이고 Z가 C이고 Hal이 F인 경우에는 적절한 용매의 존재 또는 바람직하게는 부재하에, 승온에서, 예를 들어 100 내지 150 ℃의 밀봉된 튜브에서; 또는 이들 반응 조건을 적절하게 변형하여 하기 화학식 IX의 아민과 치환 조건하에 반응시킴으로써 수득될 수 있다. 화학식 VII의 화합물은 또한 특히 이러한 합성과 관련하여 바람직하게는 이 거명에 의해 본원에 포함되는 WO 97/21665에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.

상기 식에서,

Hal은 할로, 특히 플루오로, 클로로 또는 브로모이고,

X, Y, Z 및 R3은 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

상기 식에서,

R은 화학식 V의 화합물에 대해 정의된 바와 같고,

다른 잔기들은 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

화학식 III의 출발 물질은 문헌, 예를 들어 특히 상기 출발 물질의 제조와 관련하여, 바람직하게는 이 거명에 의해 본원에 포함되는 WO 03/099771 또는 WO 00/09495에 기재된 방법에 의해 또는 그와 유사하게 제조될 수 있다.

Q가 화학식 A의 기 (여기서, R'4는 비치환 또는 치환된 아릴, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 비치환 또는 치환된 알킬, 비치환 또는 치환된 알케닐, 또는 비치환 또는 치환된 알키닐임)인 화학식 III의 출발 물질은, 예를 들어 통상의 커플링 조건하에, 예컨대 스즈끼 (Suzuki) 커플링 조건하에 수득될 수 있다. 예를 들어, 하기 화학식 X의 화합물을 적절한 촉매, 예를 들어 Pd(PPh₃)₄ 또는 PdCl₂(dppf)의 존재하에, 염기, 예를 들어 알칼리 금속 탄산염 (예컨대, 탄산나트륨), 알칼리 금속 알코올레이트 (예를 들어, 나트륨 에탄올레이트), 수산화물 (예컨대, TIOH), 3급 아민 (예컨대, 트리에틸아민), 또는 알칼리 금속 인산염 (예컨대, 인산칼륨)의 존재하에, 적절한 용매, 예컨대 톨루엔 및/또는 물 중에서, 바람직하게는 승온에서, 예를 들어 환류 조건하에서 하기 화학식 XI의 화합물과 반응시켜, R'4가 화학식 I의 화합물에 정의된 R4의 의미를 갖는 화학식 III의 화합물인 하기 화학식 XII의 화합물을 수득할 수 있다.

상기 식에서,

R'4는 상기 정의된 바와 같고, 특히 비치환 또는 치환된 아릴이며,

BA₂는 B(OD)₂이고, 여기서 D는 수소 또는 저급 알킬, 9-보라비시클로[3.3.1]노나닐 또는 B(CHCH₃CH(CH₃)₂)₂이다.

상기 식에서,

Hal은 할로, 특히 브로모이고;

다른 잔기들은 화학식 I의 화합물에서 정의된 바와 같다.

상기 식에서,

R'4는 상기 정의된 바와 같다.

Q가 화학식 A의 기 (여기서, R'5는 비치환 또는 치환된 아릴, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴임)인 화학식 III의 화합물은, 예를 들어 통상의 커플링 조건하에, 예컨대 스즈끼 커플링 조건하에서, 예컨대 화학식 X의 화합물과 화학식 XI의 화합물의 반응에 대해 바로 전에 기재된 바와 같은 조건하에서, 예를 들어 하기 화학식 XIII의 화합물을 하기 화학식 XIV의 화합물과 반응시킴으로써 수득될 수 있다.

상기 식에서,

Hal은 할로, 특히 브로모이고,

R4 및 R6은 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같고, 바람직하게는 R4는 수소이다.

상기 식에서,

R'5는 상기 정의된 바와 같고,

BA₂는 화학식 X의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.

Q가 화학식 A의 잔기 (여기서, R4는 비치환 또는 치환된 아미노임)인 화학식 III의 화합물은, 적절한 용매의 존재하에 또는 바람직하게는 부재하에, 바람직하게는 승온에서, 예를 들어 100 내지 150 ℃에서, 예를 들어 밀봉된 튜브 내에서, 예를 들어 하기 화학식 XV의 화합물을 하기 화학식 XVI의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 XVII의 화합물을 수득함으로써 얻어질 수 있다. 화학식 XVII의 화합물에서 니트로기는, 예를 들어 수소 및 수소화 촉매, 예컨대 라니 촉매 (예컨대, 라니-Ni) 또는 귀금속 촉매, 예컨대 바람직하게는 목탄과 같은 담체 상의 팔라듐의 존재하 에, 적절한 용매, 예를 들어 알코올 (예컨대, 메탄올 또는 에탄올) 중에서, 예를 들어 0 내지 50 ℃의 온도에서의, 예를 들어 촉매적 수소화에 의해 아미노로 환원되어 상응하는 화학식 III의 아미노 화합물을 생성할 수 있다.

상기 식에서,

Hal은 할로, 특히 브로모이고,

R5 및 R6은 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

상기 식에서, R₄*은 비치환 또는 (바람직하게는) 치환된 아미노이다.

상기 식에서,

R₄*은 상기 정의된 바와 같고,

R5 및 R6은 화학식 I의 화합물에서 정의된 바와 같다.

Hal이 할로, 특히 요오도인 화학식 XI의 화합물 (이 또한 화학식 III의 화합물에 해당함)은, 예를 들어 하기 화학식 XVIII의 니트로 화합물에서 니트로기를, 예를 들어 화학식 XVII의 화합물의 수소화에 대해 기재된 조건하에서 아미노기로 환원시킴으로써 수득될 수 있다. 화학식 XVIII의 화합물 (예를 들어, R5가 트리플루오로메틸이고, Hal이 요오도이고, R6이 수소임)은, 예를 들어 특히 이의 합성과 관련하여, 바람직하게는 이 거명에 의해 본원에 포함되는 WO 00/09495에 기재된 방법과 같이 또는 그와 유사하게 수득될 수 있다.

상기 식에서, Hal은 할로, 특히 요오도이다.

다른 출발 물질, 예를 들어 화학식 VIII, IX, X, XI, XIII, XIV, XVI 및 XVIII의 출발 물질은 공지되어 있고/거나, 상업적으로 입수가능하고/거나, 통상적인 방법에 따라, 예컨대 그와 유사하게, 예를 들어 공지된 절차 또는 표준 절차에 따라, 예컨대 그와 유사하게, 또는 본원에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다.

일반적인 공정 조건

하기 내용을 상기 및 하기에 언급된 모든 공정에 일반적으로 적용하지만, 상기 또는 하기에 구체적으로 언급된 반응 조건이 바람직하다.

상기 및 하기에 언급한 임의의 반응에서, 보호기는 구체적으로 언급되지 않 더라도 적절하거나 필요한 경우, 주어진 반응에 참여하지 않아야 하는 관능기를 보호하기 위해 사용될 수 있고, 적절하거나 필요한 단계에서 도입 및/또는 제거될 수 있다. 따라서, 보호기의 사용을 포함하는 반응은 가능하다면 본 명세서에서 보호 및/또는 탈보호의 특정 언급이 없는 반응이 기재된 모든 곳에 포함된다.

문맥에서 달리 나타내지 않는 한, 본 명세서의 범주 내에서 화학식 I의 특정한 목적하는 최종 생성물의 구성성분이 아닌 단지 손쉽게 제거가능한 기가 "보호기"로 명시된다. 이러한 보호기에 의한 관능기의 보호, 보호기 그 자체, 및 그의 제거를 위한 적절한 반응은, 예를 들어 표준 참고서, 예컨대 문헌 [J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], [T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], ["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], ["Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], [H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosaeuren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982] 및 [Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기재되어 있다. 보호기의 특징은, 이들이 예를 들어 가용매분해, 환원, 광분해에 의하 여, 또는 별법으로 생리적 조건 하에 (예컨대, 효소적 절단에 의해) 손쉽게 (즉, 원치않는 제2 반응의 발생 없이) 제거될 수 있다는 것이다.

상기-언급한 모든 공정 단계는 그 자체로 공지된 반응 조건하에서, 바람직하게는 구체적으로 언급한 반응 조건하에서, 감온, 정상 온도 또는 승온, 예를 들어 약 -100 ℃ 내지 약 190 ℃, 바람직하게는 약 -80 ℃ 내지 약 150 ℃, 예를 들어 -80 ℃ 내지 -60 ℃, 실온, -20 ℃ 내지 40 ℃ 또는 환류 온도에서, 대기압하에 또는 밀폐된 용기 안에서, 적절하다면, 압력하에 및/또는 비활성 분위기, 예를 들어 아르곤 또는 질소 분위기하에서 반응 및/또는 반응물의 특성에 따라, 용매 또는 희석제, 바람직하게는 사용되는 시약에 대해 비활성이고 이들을 용해시키는 용매 또는 희석제의 부재하에 또는 통상적으로는 존재하에, 촉매, 축합화제 또는 중화제, 예를 들어 이온 교환체, 예컨대 H⁺ 형태의 양이온 교환체의 부재 또는 존재하에 수행될 수 있다.

임의의 특정 반응을 위해 적합한 용매들로부터 선택될 수 있는 용매들에는 구체적으로 언급한 것들, 또는 공정에 대한 설명에 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 물, 에스테르, 예컨대 저급 알킬-저급 알카노에이트, 예를 들어 에틸 아세테이트, 에테르, 예컨대 지방족 에테르, 예를 들어 디에틸 에테르, 또는 시클릭 에테르, 예를 들어 테트라히드로푸란 또는 디옥산, 액체 방향족 탄화수소, 예컨대 벤젠 또는 톨루엔, 알코올, 예컨대 메탄올, 에탄올, 또는 1- 또는 2-프로판올, 니트릴, 예컨대 아세토니트릴, 할로겐화 탄화수소, 예컨대 염화메틸렌 또는 클로로포름, 산 아미드, 예컨대 디메틸포름아미드 또는 디메틸 아세트아미드, 염기, 예컨대 헤테로시클릭 질소 염기, 예를 들어 피리딘 또는 N-메틸피롤리딘-2-온, 카르복실산 무수물, 예컨대 저급 알칸산 무수물, 예를 들어 아세트산 무수물, 시클릭, 선형 또는 분지형 탄화수소, 예컨대 시클로헥산, 헥산 또는 이소펜탄, 또는 이들의 혼합물, 예를 들어 수용액을 포함된다. 이러한 용매 혼합물은 또한 예를 들어 크로마토그래피 또는 분배에 의한 후처리에도 사용될 수 있다.

중간체 및 최종 생성물은 표준 방법에 따라, 예를 들어 크로마토그래피 방법, 분배 방법, (재)결정화, 증류 (상압 또는 갑압하에), 증기 증류 등을 이용하여 후처리 및/또는 정제될 수 있다.

본 발명은 또한 임의의 공정 단계에서 중간체로서 수득가능한 화합물이 출발 물질로서 사용되어 나머지 공정 단계가 수행되거나, 또는 출발 물질이 반응 조건하에서 형성되거나, 또는 유도체의 형태, 예를 들어 보호된 형태 또는 염의 형태로 사용되는 공정의 형태, 또는 본 발명에 따른 공정에 의해 수득가능한 화합물이 공정 조건하에서 제조되어 동일계에서 추가로 가공되는 공정의 형태에 관한 것이다. 본 발명의 공정에서, 바람직한 것으로서 기재된 화학식 I의 화합물을 생성하는 출발 물질을 사용하는 것이 바람직하다. 실시예에서 언급한 것과 동일하거나 유사한 반응 조건이 특히 바람직하다. 본 발명은 또한 염-형성기가 존재하는 신규한 중간체 및 그의 염 뿐만 아니라, 이들의 합성에 관한 것이다.

시험 분석법 및 시험 방법

화학식 I의 화합물은 가치있는 약리학적 특성을 가지며 키나제, 특히 tie-2 및/또는 보다 특히 PDGFR, VEGFR-2, c-Abl, Flt3, Ret 및/또는 kit 의존성 질환의 치료에서 유용하고, 예를 들어 하나 이상의 증식성 질환을 치료하기 위한 약물로서 유용하다.

단백질 키나제의 조절에서, 특히 억제제로서의 본 발명의 화합물의 효능은, 특히 및 전형적으로 상기 바람직한 것으로 언급된 단백질 키나제에 대한 하기 시험 시스템으로 입증될 수 있다.

c-Abl, Bcr-Abl

c-Abl 단백질 티로신 키나제 활성의 억제제로서의 화학식 I의 화합물의 효능은 하기와 같이 입증될 수 있다:

시험관내 효소 분석법을 문헌 [Geissler et al. in Cancer Res. 1992; 52:4492-4498]에 기재된 바와 같은 필터 결합 분석법에 하기와 같은 변형을 가하여 96-웰 플레이트에서 수행하였다. c-Abl의 His-태그가 부착된 키나제 도메인을 클로닝하고, 문헌 [Bhat et al. in J. Biol. Chem. 1997; 272:16170-16175]에 기재된 바와 같이 배큘로바이러스/Sf9 시스템에서 발현시켰다. 37 kD의 단백질 (c-Abl 키나제)을 코발트 금속 킬레이트 컬럼, 이어서 음이온 교환 컬럼 상의 2-단계 절차에 의해 Sf9 세포 1 내지 2 mg/L의 수율로 정제하였다 (상기 인용 문헌 [Bhat et al.] 참조). 쿠마시 블루 (Coomassie blue) 염색 후 SDS-PAGE로 평가시, c-Abl 키나제의 순도는 90 ％를 초과하였다. 분석액 (총 부피 30 ㎕)은 1 ％ DMSO의 존재하에 30 ㎍/㎖의 폴리-Ala, Glu, Lys, Tyr-6:2:5:1 (poly-AEKY, 시그마 (Sigma) P1152) 를 사용하여 c-Abl 키나제 (50 ng), 20 mM 트리스·HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 10 μM Na₃VO₄, 1 mM DTT 및 0.06 μCi/분석액 [γ³³P]-ATP (5 μM ATP)를 함유하였다. 250 mM EDTA 10 ㎕를 첨가하여 반응을 종결시키고, 반응 혼합물 30 ㎕를 임모빌론 (Immobilon)-PVDF 막 (밀리포어 (Millipore), 미국 매사추세츠주 베드포드 소재) (미리 메탄올에 5분 동안 침지시킴)으로 옮기고, 물로 세정한 후, 0.5 ％ H₃PO₄에 5분 동안 침지시키고, 진공 공급원이 분리되어 있는 진공 매니폴드에 탑재하였다. 모든 샘플을 스폿팅한 후, 진공을 연결하고, 각 웰을 0.5 ％ H₃PO₄ 200 ㎕로 세정하였다. 막을 제거하고, 진탕기에서 0.5 ％ H₃PO₄로 (4회) 세척하고, 에탄올로 1회 세척하였다. 이를 상온에서 건조시키고, 팩커드 탑카운트 (Packard TopCount) 96-웰 프레임에 탑재시키고, 마이크로신트 (Microscint) TM (패커드) 10 ㎕/웰을 첨가한 후에 막을 계수하였다. 이 시험 시스템 이용시, 화학식 I의 화합물은 0.002 내지 100 μM, 통상적으로는 0.01 내지 5 μM 범위의 억제 IC₅₀ 값을 나타냈다.

Bcr-Abl 억제는 포획 ELISA에 의하여 하기와 같이 측정할 수 있다. p210 Bcr-Abl 발현 벡터인 pGDp210Bcr/Abl로 형질감염된 뮤린 골수 전구 세포주 32Dcl3 (32D-bcr/abl)를 제이 그리핀 (J Griffin) (문헌 [Bazzoni et al., J. Clin Invest. 98, 521-8 (1996)]; [Zhao et al., Blood 90, 4687-9 (1997)])으로부터 입수하였다. 세포는 구성적으로 활성인 abl 키나제를 갖는 융합 bcr-abl 단백질을 발현하고, 성장 인자-비의존적으로 증식한다. 세포를 RPMI 1640 (아미메드 (AMIMED); 카탈로그 번호 1-41F01), 10 ％ 소 태아 혈청, 및 2 mM 글루타민 (기브코 (Gibco)) ("완전 배지") 중에서 확장시키고, 냉동 배지 (95 ％ 소 태아 혈청, 5 ％ 디메틸술폭시드 (시그마, D-2650)) 중에 바이알 당 2 x 10⁶개의 세포 분취액을 냉동시켜 작업용 스톡을 제조하였다. 해동 후, 세포를 실험의 최대 10 내지 12계대 동안 사용하였다. 항체 항-abl SH3 도메인 (업스테이트 바이오테크놀로지 (Upstate Biotechnology)의 카탈로그 번호 06-466)을 ELISA에 사용하였다. bcr-abl 인산화를 검출하기 위해, 자이메드 (ZYMED)의 알칼리성 포스파타제로 표지된 항-포스포티로신 항체 Ab PY20 (PY10(AP)) (카탈로그 번호 03-7722)을 사용하였다. 비교 및 참조 화합물로서, 메탄 술포네이트 (모노메실레이트) 염 형태의 (N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민 (STI571) (노파르티스 (Novartis)의 글리벡 ((Gleevec, 등록상표) 또는 Glivec (등록상표))으로 시판됨)을 사용하였다. 10 mM의 원액을 DMSO 중에서 제조하고 -20 ℃에 보관하였다. 세포 분석을 위해, 원액을 완전 배지에서 2 단계로 희석하여 (1:100 및 1:10) 10 μM의 출발 농도를 얻은 뒤, 완전 배지에서 연속 3배 희석액을 제조하였다. 이 절차의 사용시 용해도 문제는 발생하지 않았다. 화학식 I의 시험 화합물을 유사하게 처리하였다. 분석을 위해, 200,000개의 32D-bcr/abl 세포를 96 웰 원형 바닥 조직 배양 플레이트에 웰 당 50 ㎕로 시딩하였다. 시험 화합물의 연속 3배 희석액을 웰 당 50 ㎕로 3개 웰씩 세포에 첨가하였다. 시험 화합물의 최종 농도는, 예를 들어 5 μM 내지 0.01 μM 범위였다. 비처리 세포를 대조군 으로서 사용하였다. 화합물을 세포와 함께 37 ℃, 5 ％ CO₂에서 90분간 인큐베이션한 후, 조직 배양 플레이트를 1300 rpm에서 원심분리하고 (베크만 (Beckman) GPR 원심분리기), 펠렛화된 세포가 조금이라도 제거되지 않도록 주의하면서 조심스럽게 흡인하여 상층액을 제거하였다. 150 ㎕의 용해 완충액 (50 mM 트리스/HCl, pH 7.4, 150 mM 염화나트륨, 5 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 ％ NP-40 (비-이온성 세정제, 독일 만하임 소재의 로슈 다이어그노스틱스 게엠베하 (Roche Diagnostics GmbH)), 2 mM 나트륨 오르토-바나데이트, 1 mM 페닐메틸 술포닐플루오라이드, 50 ㎍/㎖ 아프로티닌 및 80 ㎍/㎖ 류펩틴)을 첨가하여 세포 펠렛을 용해시키고, ELISA에 즉시 사용하거나, 또는 사용시까지 -20 ℃에서 냉동 보관하였다. 항-abl SH3 도메인 항체를 4 ℃에서 밤새 블랙 ELISA 플레이트 (팩커드 HTRF-96 블랙 플레이트; 6005207)에서 웰 당 200 ng (50 ㎕의 PBS 중)으로 코팅하였다. 200 ㎕/웰의 0.05 ％ 트윈 20을 함유하는 PBS (PBST) 및 0.5 ％ 탑블록 (TopBlock; 주로 (Juro), 카탈로그 번호 TB 232010)으로 3회 세척한 후, 남은 단백질 결합 부위를 실온에서 4시간 동안 200 ㎕/웰의 PBST, 3 ％ 탑블록으로 블로킹하고, 이어서 비처리 또는 시험 화합물로 처리된 세포의 용해물 50 ㎕ (웰 당 총 단백질 20 ㎍)와 함께 4 ℃에서 3 내지 4시간 동안 인큐베이션하였다. 3회 세척한 후에, 블로킹 완충액 중에서 0.5 ㎍/㎖로 희석된 50 ㎕/웰의 PY20(AP) (자이메드)을 첨가하고, 밤새 (4 ℃) 인큐베이션하였다. 모든 인큐베이션 단계에 대하여, 플레이트는 플레이트 실러 (코스타 (Costar), 카탈로그 번호 3095)로 밀봉하였다. 최종적으로, 플레이트를 세척 완충액으로 3회 더 세척하고, 탈이온수로 1회 세척한 다음, 90 ㎕/웰의 AP 기질 (에메랄드 (Emerald) II를 함유하는 CPDStar RTU)을 첨가하였다. 팩커드 탑 씰 (Packard Top Seal, 상표명)-A 플레이트 실러 (카탈로그 번호 6005185)로 밀봉된 플레이트를 암실에서 45분간 실온에서 인큐베이션하고, 팩커드 탑카운트 마이크로플레이트 섬광 계수기 (탑 카운트 (Top Count))를 이용하여 초 당 카운트 (CPS)를 측정함으로써 발광을 정량하였다. 최종 최적화 버전의 ELISA를 위해, 96웰 조직 배양 플레이트에서 성장, 처리 및 용해된 세포의 용해물 50 ㎕를, 상기 플레이트로부터 50 ng/웰의 토끼 폴리클로날 항-abl-SH3 도메인 AB 06-466 (업스테이트)으로 사전코팅된 ELISA 플레이트에 직접 옮겼다. 항-포스포티로신 AB PY20(AP)의 농도는 0.2 ㎍/㎖로 감소될 수 있다. 세척, 블로킹 및 발광 기질과의 인큐베이션은 상기와 같다. 정량화는 하기와 같이 실시하였다. 비처리된 32D-bcr/abl 세포 용해물에 대하여 수득한 ELISA 판독치 (CPS)와 분석 백그라운드 (세포 용해물을 제외한 모든 성분)에 대한 판독치 간의 차이를 계산하되, 이는 이들 세포에 존재하는 구성적으로 인산화된 bcr-abl 단백질을 100 ％ 반영하는 것으로 간주하였다. bcr-abl 키나제 활성에서 화합물의 활성은 bcr-abl 인산화의 감소율로 나타낸다. IC₅₀ 값은 용량 반응 곡선으로부터 그래프 내삽법 또는 외삽법에 의하여 결정하였다.

RET

RET 키나제 억제는 하기와 같이 측정될 수 있다:

클로닝 및 발현: 배큘로바이러스 공여체 벡터 pFB-GSTX3을 사용하여 RET의 야생형 키나제 도메인 (wtRET)에 상응하는 인간 RET-Men2A, 및 활성화 루프 M918T에서 활성화 돌연변이에 의해 wtRET와 상이한 RET-Men2B의 세포질 키나제 도메인의 아미노산 영역 658-1072 (Swiss prot 번호 Q9BTB0)를 발현하는 재조합 배큘로바이러스를 생산하였다. wtRET의 세포질 도메인에 대한 코딩 서열을 특이적 프라이머를 사용하여 cDNA 라이브러리로부터 PCR에 의해 증폭시켰다. M918T 돌연변이를 발생시키는 위치-지정 돌연변이를 통해 RET-Men2B를 생산하였다. 증폭된 DNA 단편 및 pFB-GSTX3 벡터를 SalI 및 KpnI를 이용한 분해에 의해 라이게이션 (ligation)에 적합하도록 만들었다. 이들 DNA 단편의 라이게이션에 의해 배큘로바이러스 공여체 플라스미드 pFB-GX3-RET-Men2A 및 pFB-GX3-RET-Men2B가 각각 생성되었다.

바이러스의 생성: 키나제 도메인을 함유하는 배큘로바이러스 공여체 플라스미드를 DH10Bac 세포주 (기브코) 내로 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 선택적 한천 플레이트 상에 플레이팅하였다. (박테리아에 의해 운반된) 바이러스 게놈 내에 융합 서열이 삽입되지 않은 콜로니는 청색이었다. 단일의 백색 콜로니를 수집하고, 표준 플라스미드 정제 절차에 의해 박테리아로부터 바이러스 DNA (백미드 (bacmid))를 단리하였다. 이어서, Sf9 세포 또는 Sf21 세포 (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection))를 25 cm² 플라스크 내에서 셀펙틴 (Cellfectin) 시약을 사용하여 바이러스 DNA로 형질감염시켰다.

Sf9 세포에서의 단백질 발현: 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양액으로부터 수집하고, 이를 감염에 사용하여 그의 역가를 증가시켰다. 감염 2회 후 에 수득한 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현에 사용하였다. 대규모 단백질 발현을 위하여, 100 cm² 원형 조직 배양 플레이트에 5 x 10⁷개의 세포/플레이트로 시딩하고, 바이러스-함유 배지 1 ㎖ (약 5 MOI)로 감염시켰다. 3 일 후, 세포를 플레이트에서 긁어내어 500 rpm에서 5분간 원심분리하였다. 10 내지 20개의 100 cm² 플레이트로부터 얻은 세포 펠렛을 빙냉 용해 완충액 (25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 ％ NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF) 50 ㎖에 재현탁시켰다. 세포를 얼음 상에서 15분간 교반하고, 이어서 5,000 rpm에서 20분간 원심분리하였다.

GST-태그가 부착된 단백질의 정제: 원심분리한 세포 용해물을 2 ㎖의 글루타티온-세파로스 컬럼 (파마시아 (Pharmacia)) 상에 로딩하고, 10 ㎖의 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3회 세척하였다. 이어서, GST-태그가 부착된 단백질을 25 mM 트리스-HCl (pH 7.5, 10 mM 환원-글루타티온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10 ％ 글리세롤)을 10회 적용 (각 회당 1 ㎖)함으로써 용출시키고, -70 ℃에 보관하였다.

효소 활성의 측정: 정제된 GST-wtRET 또는 GST-RET-Men2B 단백질을 이용한 티로신 단백질 키나제 분석을 GST-wtRET 또는 GST-RET-Men2B 단백질 15 ng, 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 1 mM MnCl₂, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 ㎍/㎖의 폴리(Glu,Tyr) 4:1, 1 ％ DMSO, 2.0 μM ATP (γ-[³³P]-ATP 0.1 μCi)를 함유하는 최종 부피 30 ㎕로 수행하였다. 억제제의 존재 또는 부재하에 ³³P가 [γ³³P]ATP로부터 폴 리(Glu,Tyr) 4:1에 도입되는 것을 측정함으로써 활성을 분석하였다. 분석을 상온에서 15분 동안 상기 기재된 조건하에 96-웰 플레이트에서 수행하였으며, 125 mM EDTA 20 ㎕를 첨가함으로써 종결시켰다. 이어서, 반응 혼합물 40 ㎕를 임모빌론-PVDF 막 (밀리포어) (미리 메탄올에 5분 동안 침지시킴)으로 옮기고, 물로 세정한 후, 0.5 ％ H₃PO₄에 5분 동안 침지시키고, 진공 공급원이 분리되어 있는 진공 매니폴드에 탑재하였다. 모든 샘플을 스폿팅한 후에, 진공을 연결하고 각 웰을 0.5 ％ H₃PO₄ 200 ㎕로 세정하였다. 막을 제거하고, 진탕기에서 1.0 ％ H₃PO₄로 4회 세척하고, 에탄올로 1회 세척하였다. 이를 상온에서 건조시키고, 팩커드 탑카운트 96-웰 프레임에 탑재시키고, 마이크로신트 (패커드) 10 ㎕/웰을 첨가한 후에 막을 계수하였다. 4가지 농도 (통상적으로 0.01, 0.1, 1 및 10 μM)에서 각 화합물의 억제율에 대한 선형 회귀 분석을 2회씩 수행함으로써 IC₅₀ 값을 계산하였다. 단백질 키나제 활성의 1 단위는 37 ℃에서 1분에 단백질 1 mg 당 [γ³³P] ATP로부터 1 nmol의 ³³P가 기질 단백질로 전달된 것으로 정의한다. 여기서 화학식 I의 화합물은 0.07 내지 20 μM, 특히 0.1 내지 5 μM 범위의 IC₅₀ 값을 나타냈다.

PDGFR

c-Kit 및 PDGFR 티로신 키나제 활성의 억제제로서의 화학식 I의 화합물의 효능은 하기와 같이 입증될 수 있다.

BaF3-Tel-PDGFR베타는 각각 Tel-융합-활성화된 PDGFR-β 야생형 (문헌 [Golub T.R. et al., Cell 77(2): 307-316, 1994]) 또는 D816V-돌연변이-활성화된 c-kit로의 안정한 형질도입에 의해 IL-3-비의존성으로 만든 BaF3 뮤린 proB-세포 림프종 세포 유도체 [BaF3 세포주는 독일 브라운슈바이크 소재의 저먼 콜렉션 오브 마이크로오가니즘즈 앤드 셀 컬쳐즈 (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ))로부터 입수가능함]이다. 세포를 2 ％ L-글루타민 (아니메드 (Animed) # 5-10K50-H) 및 10 ％ 소 태아 혈청 (FCS, 아니메드 # 2-01F16-I)이 보충된 RPMI-1640 (아니메드 # 1-14F01-I)에서 배양하였다. 형질감염되지 않은 야생형 BaF3 세포를 10 U/ml IL-3 (마우스 인터류킨-3, 로슈 # 1380745)을 첨가한 상기 배지에서 유지하였다.

세포를 ㎖당 3 x 10⁵개 세포의 최종 밀도로 신선한 배지에서 희석하고, 분취액 50 ㎕를 96-웰 플레이트 (웰 당 1.5 x 10⁴개의 세포)에 시딩하였다. 2x 화합물 용액 50 ㎕를 첨가하였다. 내부 대조군으로서, 키나제 억제제 PKC412를 통상적의 절차로 사용하였다. DMSO로 처리한 대조군 세포 (최종 농도 0.1 ％)를 참조용 성장 (100 ％ 성장으로 설정함)으로 사용하였다. 또한, 배지 100 ㎕만 함유하고 세포를 함유하지 않는 웰에서 플레이트의 블랭크 값을 통상의 절차로 측정하였다. IC₅₀ 측정은 10 μM에서 시작하여 시험 화합물의 3배 연속 희석액 8개를 기반으로 수행하였다. 세포를 37 ℃ 및 5 ％ CO₂에서 48시간 동안 인큐베이션한 후에, 기본적으로 앞서 기개된 바와 같이 (문헌 [O'Brien J. et al., Eur. J. Biochem. 267: 5421-5426, 2000]) 레사주린 나트륨염 염료 환원 분석법 (상업적으로 알라마르블루 (AlamarBlue) 분석법으로 알려져 있음)으로 세포 생존율에 대한 억제제의 효과를 평가하였다. 웰 당 알라마르블루 10 ㎕를 첨가하고, 플레이트를 37 ℃ 및 5 ％ CO₂에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 하기와 같은 설정으로 게미니 (Gemini) 96-웰 플레이트 판독기 (몰레큘러 디바이시즈 (Molecular Devices))를 이용하여 형광을 측정하였다: 여기 544 nm 및 방출 590 nm. 얻어진 미가공 데이타를 엑셀 파일 형식으로 변환시켰다. 데이터 분석을 위하여, 플레이트 블랭크 값을 모든 데이터 지점에서 차감하였다. 그 후에, 알라마르블루 판독에 의한 화합물의 항-증식성 효과를 100 ％로 설정한 대조군 세포의 값의 백분율로서 계산하였다. IC₅₀ 값은 엑스엘피트 (XLfit) 소프트웨어 프로그램을 사용하여 측정하였다. 화학식 I의 화합물은 PDGFR-β에 대하여 0.001 내지 20 μM, 특히 0.002 내지 0.1 μM 범위의 IC₅₀ 값을 나타냈다.

c-Kit는 BaF3-KitD816V 뮤린 proB 림프종 세포 유도체를 이용하여 유사하게 측정할 수 있다.

FLT3 수용체 키나제

FLT3-표적화된 화합물에 대한 조사를 위해, 2가지 상이한 종류의 분석법을 이용할 수 있다.

Flt3 키나제 활성을 하기와 같이 측정하였다. 배큘로바이러스 공여체 벡터 pFbacG01 (기브코)을 사용하여 인간 Flt3의 세포질 키나제 도메인의 아미노산 563- 993의 아미노산 영역을 발현하는 재조합 배큘로바이러스를 생산하였다. Flt3의 세포질 도메인에 대한 코딩 서열을 인간 c-DNA 라이브러리 (클론테크 (Clontech))로부터 PCR에 의해 증폭시켰다. 증폭된 DNA 단편 및 pFbacG01 벡터를 BamH1 및 HindIII를 이용한 분해에 의해 라이게이션 (ligation)에 적합하도록 만들었다. 이들 DNA 단편의 라이게이션에 의해 배큘로바이러스 공여체 플라스미드 Flt-3 (1.1)이 생성되었다. 바이러스의 생산, Sf9 세포에서의 단백질의 발현 및 GST-융합된 단백질의 정제를 하기와 같이 수행하였다.

바이러스의 생산: Flt3-키나제 도메인을 함유하는 전달 벡터 (pFbacG01-Flt-3)를 DH10Bac 세포주 (기브코) 내로 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 선택적 한천 플레이트 상에 플레이팅하였다. (박테리아에 의해 운반된) 바이러스 게놈 내에 융합 서열이 삽입되지 않은 콜로니는 청색이었다. 단일의 백색 콜로니를 수집하고, 표준 플라스미드 정제 절차에 의해 박테리아로부터 바이러스 DNA (백미드)를 단리하였다. 이어서, Sf9 세포 또는 Sf21 세포 (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션)를 플라스크 내에서 셀펙틴 시약을 사용하여 바이러스 DNA로 형질감염시켰다.

Sf9 세포에서의 소규모 단백질 발현의 측정: 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양액으로부터 수집하고, 이를 감염에 사용하여 그의 역가를 증가시켰다. 감염 2회 후에 수득한 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현에 사용하였다. 대규모 단백질 발현을 위하여, 100 cm² 원형 조직 배양 플레이트에 5 x 10⁷개의 세포/플레이트로 시딩하고, 바이러스-함유 배지 1 ㎖ (약 5 MOI)로 감염시켰다. 3 일 후, 세포를 플레이트에서 긁어내어 500 rpm에서 5분간 원심분리하였다. 10 내지 20개의 100 cm² 플레이트로부터 얻은 세포 펠렛을 빙냉 용해 완충액 (25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 ％ NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF) 50 ㎖에 재현탁시켰다. 세포를 얼음 상에서 15분간 교반하고, 이어서 5,000 rpm에서 20분간 원심분리하였다.

GST-태그가 부착된 단백질의 정제: 원심분리한 세포 용해물을 2 ㎖의 글루타티온-세파로스 컬럼 (파마시아) 상에 로딩하고, 10 ㎖의 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3회 세척하였다. 이어서, GST-태그가 부착된 단백질을 25 mM 트리스-HCl (pH 7.5, 10 mM 환원 글루타티온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10 ％ 글리세롤)을 10회 적용 (각 회당 1 ㎖)함으로써 용출시키고, -70 ℃에 보관하였다.

효소 활성의 측정: 정제된 GST-Flt2를 이용한 티로신 단백질 키나제 분석을 효소 단백질 (비활성 (specific activity)에 따라) 200-1800 ng, 20 mM 트리스-HCl, pH 7.6, 3 mM MnCl₂, 3 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 μM Na₃VO₄, 3 ㎍/㎖의 폴리(Glu,Tyr) 4:1, 1 ％ DMSO, 6.0 μM ATP 및 0.1 μCi [γ³³P]ATP를 함유하는 최종 부피 30 ㎕로 수행하였다. 억제제의 존재 또는 부재하에 ³³P가 [γ³³P]ATP로부터 폴리(Glu,Tyr) 기질에 도입되는 것을 측정하여 활성을 분석하였다. 분석 (웰 당 30 ㎕)을 상온에서 20분 동안 하기 기재된 조건하에 96-웰 플레이트에서 수행하였으 며, 125 mM EDTA 20 ㎕를 첨가함으로써 종결시켰다. 이어서, 각각의 반응 혼합물 40 ㎕를 임모빌론-PVDF 막 (밀리포어, 미국 매사추세츠주 베드포드 소재) (미리 메탄올에 5분 동안 침지시킴)으로 옮기고, 물로 세정한 후, 0.5 ％ H₃PO₄에 5분 동안 침지시키고, 진공 공급원이 분리되어 있는 진공 매니폴드에 탑재하였다. 모든 샘플을 스폿팅한 후에, 진공을 연결하고 각 웰을 0.5 ％ H₃PO₄ 200 ㎕로 세정하였다. 막을 제거하고, 진탕기에서 1.0 ％ H₃PO₄로 4회 세척하고, 에탄올로 1회 세척하였다. 이를 상온에서 건조시키고, 패커드 탑카운트 96-웰 프레임에 탑재시키고, 마이크로신트 TM (패커드) 10 ㎕/웰을 첨가한 후에 막을 각각 계수하였다. 4가지 농도 (통상적으로 0.01, 0.1, 1 및 10 μM)에서 각 화합물의 억제율에 대한 선형 회귀 분석을 2회씩 수행함으로써 IC₅₀ 값을 계산하였다. 단백질 키나제의 1 단위는 37 ℃에서 1분에 단백질 1 mg 당 [γ³³P] ATP로부터 1 nmol의 ³³P ATP가 기질 폴리펩티드로 전달된 것으로 정의한다. 여기서 본 발명의 화합물은 0.03 내지 100 μM, 바람직하게는 0.2 내지 10 μM 범위의 IC₅₀ 값을 나타냈다.

별법으로 또는 이외에도, 세포 기반 분석법을 이용하여 돌연변이 FLT3 티로신 키나제 수용체의 억제제를 확인할 수 있다. 일반적인 기술은 증식에 있어서 돌연변이 FLT3에 의존적인 세포주에 대 증식에 있어서 돌연변이 FLT3에 의존적이지 않은 세포주에 미치는 가능한 억제제의 효과를 비교하는 것을 포함한다. 2개의 상이한 형태의 돌연변이되고 활성화된 FLT3를 발현하는 세포주가 사용되었다:

- 수용체의 근처막 도메인 내에서 "유전자내 직렬 이중복사 (ITD)"가 일어난 FLT3 돌연변이를 발현하는 Ba/F3-FLT3-ITD 세포.

- 835번 위치에서 아스파라긴을 티로신으로 전환시키는 돌연변이가 일어난 FLT3 수용체를 발현하는 Ba/F3-FLT3-D835Y 세포.

본 발명의 시험 화합물은 Ba/F3-FLT3-ITD 및 Ba/F3-D835Y 세포 모두의 증식을 억제하는 것으로 나타날 수 있지만, 한편으로는 통상적으로 500 nM 이하의 농도에서 형질전환되지 않은 Ba/F3 세포의 성장을 억제하지 않고, 본 발명의 화합물의 Ba/F3-FLT3-ITD 세포에 대한 성장 억제 효과가 대안의 생존 신호를 제공하기 위한 고농도의 IL-3의 첨가에 의해 역전될 수 있다. FLT3-의존성 세포주의 증식을 억제하기 위해 필요한 농도에서, 본 발명의 화합물은 돌연변이 FLT3 수용체 (과활성화된 키나제)를 갖지 않는 다수의 인간 백혈병 및 림프종 세포주에 대해 세포독성이 아닌 것으로 나타날 수 있으며, 이는 약물이 세포독성 제제로서 예상밖의 높은 특이성을 갖는다는 것을 시사한다. 결국, 이러한 결과는 본 발명의 화합물이 돌연변이 FLT3 수용체 티로신 키나제 활성의 강력한 억제제일 수 있으며, 돌연변이 FLT3 수용체를 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한 유력한 후보임을 나타낸다. 특히, 본 발명의 시험 화합물은 0.00015 내지 1.0 μM 범위의 농도에서 FLT3 수용체 티로신 키나제 활성을 억제하는 것으로 나타났다.

IGF1R

BaF3-Tel-IGF1R은 인간 Tel (aa1-452, UniProt: P41212; GenBank: U11732), Ser-Arg-연결기 및 인간 IGF1R (aa976-1367, UniProt: P08069; GenBank: X04434) (Dr. J. Griffin, DanaFarber Cancer Institute, Boston, USA, 공개되지 않음)로 이루어진 활성화된 융합-단백질의 안정한 형질도입에 의해 IL-3-비의존성화된 BaF3 뮤린 proB-세포 림프종 세포 유도체이다 [BaF3 세포주는 독일 생물자원 은행 (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ), 독일 브라운슈바이크 소재)으로부터 입수가능함]. 세포를 2 ％ L-글루타민 (아니메드 ＃ 5-10K50-H) 및 10 ％ 소 태아 혈청 (FCS, 아니메드 ＃2-01F16-I)이 보충된 RPMI-1640 (아니메드 ＃1-14F01-I)에서 배양하였다. 형질감염되지 않은 야생형 BaF3 세포를 10 U/mL IL-3 (마우스 인터류킨-3, 로슈 ＃1380745)을 첨가한 상기 배지에서 유지하였다.

세포를 ㎖당 3 x 10⁵개 세포의 최종 밀도로 신선한 배지에서 희석하고, 분취액 50 ㎕를 96-웰 플레이트 (웰 당 1.5 x 10⁴개의 세포)에 시딩하였다. 2x 화합물 용액 50 ㎕를 첨가하였다. 내부 대조군으로서, 키나제 억제제 PKC412를 통상적으로 사용하였다. DMSO로 처리한 대조군 세포 (최종 농도 0.1 ％)를 참조용 성장 (100 ％ 성장으로 설정)으로 사용하였다. 또한, 배지 100 ㎕만 함유하고 세포를 함유하지 않는 웰에서 플레이트의 블랭크 값을 통상의 절차로 측정하였다. IC₅₀ 측정은 10 μM에서 시작하여 시험 화합물의 3배 연속 희석액 8개를 기반으로 수행하였다. 세포를 37 ℃ 및 5 ％ CO₂에서 48시간 동안 인큐베이션한 후에, 기본적으로 앞서 기개된 바와 같이 (문헌 [O'Brien J. et al., Eur. J. Biochem. 267: 5421- 5426, 2000]) 레사주린 나트륨염 염료 환원 분석법 (상업적으로 알라마르블루 분석법으로 알려져 있음)으로 세포 생존율에 대한 억제제의 효과를 평가하였다. 웰 당 알라마르블루 10 ㎕를 첨가하고, 플레이트를 37 ℃ 및 5 ％ CO₂에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 하기와 같은 설정으로 게미니 96-웰 플레이트 판독기 (몰레큘러 디바이시즈)를 이용하여 형광을 측정하였다: 여기 544 nm 및 방출 590 nm.

얻어진 미가공 데이타를 엑셀 파일 형식으로 변환시켰다. 데이터 분석을 위하여, 플레이트 블랭크 값을 모든 데이터 지점에서 차감하였다. 각 화합물 농도에 대한 잔류 세포 생존율은 비히클-처리된 대조군 세포에 대해 측정된 값 (100 ％로 설정)에 대한 백분율로써 나타냈다. 엑스엘피트 커브-피팅 소프트웨어를 이용하여 IC₅₀ 값 (세포 생존율 50 ％ 감소)을 측정하였다.

VEGF-R (KDR) 자가인산화

VEGF-유도 수용체 자가인산화의 억제는 세포, 예컨대 형질감염된 CHO 세포 (인간 VEGF-R2 (KDR)를 영구적으로 발현함)에서의 시험관내 실험으로 확인될 수 있으며, 상기 세포를 6-웰 세포-배양 플레이트에서 완전 배양 배지 (10 ％ 소 태아 혈청 = FCS 함유)에 시딩하고, 37 ℃에서 5 ％ CO₂ 하에 약 80 ％ 전면배양률 (confluency)이 나타날 때까지 인큐베이션하였다. 이어서, 시험 화합물을 배양 배지 (FCS 미함유, 0.1 ％ 소 혈청 알부민 함유) 중에서 희석시키고, 세포에 첨가하였다 (대조군은 시험 화합물이 없는 배지를 포함함). 37 ℃에서 2시간 동안 인큐 베이션한 후에, 재조합 VEGF를 첨가하였고, 최종 VEGF 농도는 20 ng/㎖였다. 37 ℃에서 추가로 5분간 인큐베이션한 후, 세포를 빙냉 PBS (인산염-완충 염수)로 2회 세척하고, 즉시 웰 당 100 ㎕의 용해 완충액 중에 용해시켰다. 이어서, 용해물을 원심분리하여 세포 핵을 제거하고, 상업적 단백질 분석법 (바이오래드; BIORAD)을 이용하여 상층액의 단백질 농도를 측정하였다. 이후, 용해물을 즉시 사용하거나, 또는 필요에 따라 -20 ℃에 보관할 수 있다.

샌드위치 ELISA를 수행하여 VEGF-R2 인산화를 측정하였다. VEGF-R2에 대한 모노클로날 항체 (예를 들어, Mab 1495.12.14; 노파르티스의 H. 토우빈 (Towbin)에 의해 제조된 것 또는 상응하는 모노클로날 항체)를 블랙 ELISA 플레이트 (옵티플레이트 (OptiPlate, 상표명) HTRF-96, 패커드) 상에 고정하였다. 이어서, 플레이트를 세척하고 남은 유리 단백질-결합 부위를 트윈 20 (등록상표) (폴리옥시에틸렌(20)소르비탄 모노라우레이트, ICI/유니퀘마 (Uniquema))을 함유하는 인산염 완충 염수 (PBST) 중의 3 ％ 탑블록 (등록상표) (주로, 카탈로그 번호 TB232010)으로 포화시켰다. 이어서, 세포 용해물 (웰 당 단백질 20 ㎍)을 이들 플레이트에서 알칼리성 포스파타제와 커플링된 항포스포티로신 항체 (PY20:AP, 자이메드)와 함께 4 ℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 후에, (플레이트를 다시 세척하고) 항포스포티로신 항체의 포획된 인산화된 수용체와의 결합을 발광 AP 기질 (CDP-Star, 즉시 사용 가능, 에메랄드 II 함유; 어플라이드 바이오시스템즈 (Applied Biosystems))을 이용하여 입증하였다. 발광을 패커드 탑카운트 마이크로플레이트 섬광 계수기 (Packard Top Count Microplate Scintillation Counter)로 측정하였다. 양성 대조 군 (VEGF로 자극됨)의 신호와 음성 대조군 (VEGF로 자극되지 않음)의 신호 간의 차이는 VEGF-유도 VEGF-F2 인산화에 상응한다 (= 100 ％). 시험 물질의 활성을 VEGF-유도 VEGF-R2 인산화의 억제율로서 계산하였고, 최대 억제의 절반을 유도하는 물질의 농도를 IC₅₀ (50 ％ 억제를 위한 억제 투여량)으로 정의하였다. 여기서, 본 발명의 화합물은 0.01 내지 20 μM, 특히 0.1 내지 1.0 μM 범위의 IC₅₀ 값을 나타냈다.

VEGF-R1

VEGF-R1 억제는 하기와 같이 나타낼 수 있다. Flt-1 VEGF-수용체 티로신 키나제를 사용하여 시험을 수행하였다. 상세한 절차는 다음과 같다. 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 3 mM 이염화망간 (MnCl₂), 3 mM 염화마그네슘 (MgCl₂) 및 3 ㎍/㎖의 폴리(Glu,Tyr) 4:1 (시그마, 스위스 부흐 소재) 중의 키나제 용액 30 ㎕ (Flt-1의 키나제 도메인; 문헌 [Shibuya et al., Oncogene 5, 519-24 (1990)]; 비활성에 따름; 억제제를 함유하지 않는 샘플에서 4000 내지 6000 카운트/분 (cpm)의 활성을 달성하기 위함), 8 μM [³³P]-ATP (0.2 μCi/배치), 1 ％ 디메틸 술폭시드, 및 0 내지 50 μM의 시험 화합물을 함께 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, pH 7인 0.25 M 에틸렌디아민테트라아세테이트 (EDTA) 10 ㎕를 첨가하여 반응을 종결시켰다. 다채널 디스펜서 (랩 시스템즈 (LAB SYSTEMS), 미국 소재)를 이용하여 분취액 20 ㎕를 PVDF (= 폴리비닐 디플루오라이드) 임모빌론 P 막 (밀리포어, 미국 소재)에 가하고, 이를 밀리포어 마이크로타이터 필터 매니폴드에 도입하고, 진공에 연결하였다. 액체를 완전히 제거한 후에, 막을 0.5 ％ 인산 (H₃PO₄)을 함유하는 배스에서 연속적으로 4회 세척하고, 회당 10분간 인큐베이션하면서 진탕시킨 후, 휴렛 팩커드 탑카운트 매니폴드에 탑재하고, 마이크로신트 (등록상표) (β-섬광 계수 액체: 패커드, 미국 소재) 10 ㎕를 첨가한 후에 방사성을 측정하였다. 3개 농도 (원칙적으로 0.01, 0.1 및 1 μM)에서 각 화합물의 억제율의 선형 회귀 분석에 의해 IC₅₀ 값을 측정하였다.

종양 성장 억제제로서의 본 발명의 화합물의 효능은, 예를 들어 하기와 같이 다양한 생체내 모델을 이용하여 입증될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 화합물, 예컨대 하기 주어진 실시예 중 하나에 따른 화합물이 생체내에서 VEGF-매개되는 맥관형성을 억제하는지를 시험하기 위해, 마우스 성장 인자 이식 모델에서 VEGF에 의해 유도되는 맥관형성 반응에 대한 화합물의 효과를 시험하였다. 다공성 테플론 (Teflon) 챔버 (부피 0.5 mL)에 성장 인자 (인간 VEGF 2 ㎍/mL)를 포함하거나 포함하지 않는 헤파린 함유 (20 단위/mL) 한천 (0.8 ％ w/v)을 채우고, C57/C6 마우스의 등쪽 옆구리에 피하이식하였다. 챔버 이식일로부터 출발하여 그후 4일간 상기 마우스를 시험 화합물 (예를 들어, 25, 50 또는 100 mg/kg, 1일 1회 경구 투여) 또는 비히클로 처리하였다. 처리가 완료되면 마우스를 안락사시키고, 챔버를 분리하였다. 챔버 주위에서 성장하는 혈관생성 조직을 조심스럽게 분리하여 칭량하고, 조직의 헤모글로빈 함량을 측정함으로써 혈액 함량을 평가하였다 (드라브킨스 (Drabkins) 방법; 시그마, 독일 디센호펜 소재). 이러한 성장 인자가 챔버 주위에서 성장하는 조직 (조직학적으로 섬유아세포 및 소혈관을 함유하는 것을 특징으로 함)의 중량 및 혈액 함량의 용량-의존적 증가를 유도하고, 이러한 반응이 VEGF를 특이적으로 중화시키는 항체에 의해 차단된다는 점은 이미 밝혀졌다 (문헌 [Wood JM et al., Cancer Res. 60(8), 2178-2189, (2000)]; 및 [Schlaeppi et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 125, 336-342, (1999)] 참조).

이러한 유형의 모델을 이용하여, 시험시 본 발명의 화합물에 의한 종양 성장의 억제를 증명하는 것이 가능하다.

Tie-2 수용체 자가인산화

Tie-2 수용체 자가인산화의 억제는 세포, 예컨대 형질감염된 COS 세포 (ATCC 번호: CRL-1651) (인간 Tie-2 (SwissProt AccNo Q02763)를 영구적으로 발현함에서의 시험관내 실험으로 확인될 수 있으며, 상기 세포를 6-웰 세포-배양 플레이트에서 완전 배양 배지 (10 ％ 소 태아 혈청 = FCS 함유)에 시딩하고, 37 ℃에서 5 ％ CO₂ 하에 약 90 ％ 전면배양률이 나타날 때까지 인큐베이션하였다. 이어서, 시험 화합물을 배양 배지 (FCS 미함유, 0.1 ％ 소 혈청 알부민 함유) 중에서 희석시키고, 세포에 첨가하였다. 대조군은 시험 화합물을 함유하지 않는 배지를 포함하였다. 37 ℃에서 40분간 인큐베이션한 후에, 오르토 바나데이트를 첨가하여 10 mM의 최종 농도를 얻었다. 37 ℃에서 추가로 20분간 인큐베이션한 후, 세포를 빙냉 PBS (인산염-완충 염수)로 2회 세척하고, 즉시 웰 당 100 ㎕의 용해 완충액 중에 용해 시켰다. 이어서, 용해물을 원심분리하여 세포 핵을 제거하고, 상업적 단백질 분석법 (바이오래드)을 이용하여 상층액의 단백질 농도를 측정하였다. 이후, 용해물을 즉시 사용하거나, 또는 필요에 따라 -20 ℃에 보관할 수 있다.

샌드위치 ELISA를 수행하여 Tie-2 인산화를 측정하였다. Tie-2에 대한 모노클로날 항체 (예를 들어, 항-Tie2 클론 AB33 (업스테이트 카탈로그 번호 05-584) 또는 상응하는 모노클로날 항체)를 0.1 ㎖의 2 ㎍/㎖ 용액을 사용하여 블랙 ELISA 플레이트 (옵티플레이트 (상표명) HTRF-96, 패커드) 상에 고정하였다. 이어서, 플레이트를 세척하고 남은 유리 단백질-결합 부위를 트윈 20 (등록상표) (폴리옥시에틸렌(20)소르비탄 모노라우레이트, ICI/유니퀘마)을 함유하는 인산염 완충 염수 (PBST) 중의 3 ％ 탑블록 (등록상표) (주로, 카탈로그 번호 TB232010)으로 포화시켰다. 이어서, 세포 용해물 (웰 당 단백질 100 ㎍)을 이들 플레이트에서 알칼리성 포스파타제와 커플링된 항포스포티로신 항체 (PY20:AP, 자이메드)와 함께 4 ℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 후에, (플레이트를 다시 세척하고) 항포스포티로신 항체의 포획된 인산화된 수용체와의 결합을 발광 AP 기질 (CDP-Star, 즉시 사용 가능, 에메랄드 II 함유; 어플라이드 바이오시스템즈)을 이용하여 입증하였다. 발광을 패커드 탑카운트 마이크로플레이트 섬광 계수기로 측정하였다. 양성 대조군 (바나데이트로 자극됨)의 신호와 음성 대조군 (자극되지 않음)의 신호 간의 차이는 최대 Tie-2 인산화에 상응한다 (= 100 ％). 시험 물질의 활성을 최대 Tie-2 인산화의 억제율로서 계산하였고, 최대 억제의 절반을 유도하는 물질의 농도를 IC₅₀ (50 ％ 억제를 위한 억제 투여량)으로 정의하였다. 본 발명의 화합물의 경우, 바람직하게는 0.05 내지 20 μM, 예를 들어 보다 바람직하게는 0.1 내지 10 μM 범위의 IC₅₀ 값을 나타냈다.

본 발명의 화합물은 본원에 기재된 시험 분석법 및 시험 방법에서 활성을 나타냈고, 따라서, 예를 들어 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료를 위한 약제로서의 용도로 제안된다.

단백질 키나제 조절 (특히, 억제) 특성 및/또는 아마도 아직 알려지지 않은 다른 메카니즘의 측면에서, 하기 언급한 것들을 비롯한 다양한 증식성 질환 및/또는 (특히 부적절한) 단백질 키나제 활성에 의존적인 질환의 치료에 본 발명의 화합물의 사용이 가능하다.

예를 들면, 본 발명의 화합물은 백혈병 (성인 또는 소아 백혈병), 특히 만성 골수성 백혈병 (CML), AML (급성 골수성 백혈병), 삼직계성 골수이형성증을 동반한 AML (AML/TMDS), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 골수이형성 증후군 (MDS), 뿐만 아니라 MLL (혼합-직계성 백혈병); 다양한 (특히 원발성, 또한 유도된) 고형 종양 (양성 또는 특히 악성 유형을 포함함), 예컨대 육종 (예를 들어, 유잉 육종, 카포시 육종 (Kaposi's sarcoma) 또는 연부 육종, 예컨대 융기성 피부섬유육종), 위장관 기질 종양 (GIST), 정상피종, 카르시노이드, 비만 세포 종양, 폐 암종, 예컨대 소세포 또는 대세포 폐 암종, 기관지 암종, 예컨대 소세포 기관지 암종, 정상피종, 미분화세포종, 고환 상피내 신생물, 흑색종, 유방 암종, 신경아세포종, 유두/여포 상 갑상선 암종, 악성 림프종, 비호지킨 림프종, 제2형 다발성 내분비 신생물 (MEN 2), 크롬친화성세포종, 갑상선 암종, 예를 들어 수질 갑상선 암종, 부갑상선 증식증/선종, 유방 암종, 결장암, 결장직장 선종, 난소암, 전립선 암종, 교모세포종, 뇌 종양, 전립선 암종 (또한 선암 및 골 전이를 포함함), 악성 신경교종 (역형성 성상세포종/교모세포종), 췌장암, 악성 흉막 중피종, 혈관아세포종, 혈관종, 신장, 간, 부신, 방광, 위 (특히 위 종양), 직장, 질, 경부, 자궁내막의 암종, 다발성 골수종, 두경부 종양, 예를 들어 두경부 편평세포 암종 (특히, 예를 들어 유방 암종의 경우에 상피성의 신생물형성을 포함함), 악성 신장경화증; 또는

다른 증식증 또는 증식성 질환, 예컨대 비만세포증, 관련 골수증식성 증후군, 색소성 두드러기, 표피성 과증식 (암을 제외한 것), 특히 건선; 전립선 비대증; 염증성 질환, 예컨대 류마티스성 또는 류마티스성 염증성 질환, 특히 관절염, 예컨대 류마티스성 관절염, 다른 만성 염증성 장애, 예컨대 만성 천식, 동맥 또는 이식후 아테롬성 동맥경화증, 탈조절된 맥관형성과 연관된 다른 질환, 예를 들어 섬유증 (특히 폐, 또한 다른 유형의 섬유증, 예컨대 신장 섬유증), 맥관형성, 혈관 평활근 증식, 예컨대 협착증 또는 (예를 들어, 스텐트-유도) 혈관형성술 이후의 재협착; (예를 들어, 허혈성) 망막병증, (예를 들어, 연령 관련) 황반 변성, 다른 안구 질환, 예컨대 당뇨병성 망막병증 및 신생혈관성 녹내장; 신장 질환, 예컨대 사구체신염; 당뇨병성 신병증; 염증성 장 질환, 예컨대 크론 질환 (Crohn's disease), 혈전성 미세혈관병증 증후군; (예를 들어, 만성) 이식 거부반응 및 사구체병증; 섬유성 질환, 예컨대 간경화증; 혈관간세포-증식성 질환 및/또는 신경 조 직 손상의 치료에 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 면역억제제로서, 예를 들어 상흔 없는 상처 치유 보조제로서, 또한 노인성 반점 및 접촉성 피부염 치료용으로 유용할 수 있다.

"배경기술"에서 언급한 메카니즘에도 불구하고, 놀랍게도 tie-2 억제 또한 증식성 질환, 특히 고형 종양에 대해 유용한 것으로 나타날 수 있다.

본원에 사용된 장애에는 질환이 포함된다.

단백질 키나제 활성에 의해 매개되고, 단백질 키나제 활성 매개 물질 (예컨대, 조절제, 예컨대 억제제), 예를 들어 본 발명의 화합물로 성공적으로 치료되기 쉬운 상기 장애에는, 예를 들어 하나 이상의 단백질 키나제 활성이 원인이 되거나 기여하는 역할을 하는 장애, 예를 들어 단백질 키나제가 그의 기질에 결합하는 것을 방해하는 것과 관련된 장애, 예를 들어 본 발명의 화합물에 의해 단백질 키나제의 조절 (특히, 억제)에 대해 반응하는 장애가 포함된다.

바람직하게는, 본 발명의 화합물에 의해 매개되기 쉬운 단백질 키나제 활성은 단백질 키나제, 예를 들어 단백질 티로신 키나제, 예컨대 tie-2 및/또는 PDGFR, VEGFR-2, c-Abl, Flt3, Ret, kit 및 IGF1R, 및/또는 예를 들어 하나 이상의 상기 단백질 키나제의 하나 이상의 변형 형태 또는 돌연변이 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 단백질 키나제로부터의 활성이다.

단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애, 예를 들어 본 발명의 화합물에 의해 매개되는 장애에는, 예를 들어 하기 장애 또는 그와 관련된 장애가 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

- 백혈병, 고형 종양 또는 다른 과형성 또는 증식성 질환,

- 염증성 질환, 만성 염증성 장애,

- 탈조절된 맥관형성과 관련된 질환,

- 안구 질환,

- 신장 질환,

- 염증성 장 질환,

- 혈전성 미세혈관병증 증후군;

- (만성) 이식 거부반응 및 사구체병증,

- 섬유성 질환,

- 혈관간 세포-증식성 질환,

- 신경 조직 손상,

- 호흡관 및 폐,

- 류마티스성 장애,

- 이식,

- 혈전성 미세혈관병증 증후군,

- 혈관간 세포-증식성 질환,

- 신경 조직 손상,

- 면역억제.

바람직하게는, 본 발명의 화합물은 1종 이상의 증식성 장애를 치료하기 위한 약물로서 사용될 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은, 예를 들어 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애를 치료하기 위한,

- 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물,

- 약제로서의 본 발명의 화합물의 용도

를 제공한다.

제약적 용도를 위해, 하나 이상의 본 발명의 화합물, 예를 들어 하나의 본 발명의 화합물, 또는 둘 이상의 본 발명의 화합물의 조합물이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 하나의 본 발명의 화합물이 사용된다.

본 발명의 화합물은 제약 조성물 형태의 약제로서 사용될 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제, 예를 들어 적절한 담체 및/또는 희석제 (예를 들어, 충전제, 결합제, 붕해제, 유동 조절제, 윤활제, 당 또는 감미료, 향료, 보존제, 안정화제, 습윤제 및/또는 유화제, 가용화제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충제 포함)와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은

- 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 제약 조성물,

- 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료를 위한 본 발명의 제약 조성물의 용도,

- 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료에 사용하기 위한 본 발 명의 화합물

을 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애 (예컨대, 상기 기재된 장애 포함)의 치료가 필요한 대상체에게 치료적 유효량의 본 발명의 화합물을 (예를 들어, 제약 조성물의 형태로) 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법을 제공한다.

예를 들어, 본원에 사용된 "상기 치료가 필요한 대상체"에는 환자, 예를 들어 동물, 예컨대 온혈동물, 보다 바람직하게는 포유동물, 특히 인간이 포함된다.

"치료적 유효량"은 바람직하게는 상기 장애(들)에 대해 효과적인 양이다.

- 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물,

- 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도,

예를 들어 제약 조성물을 제공한다.

본원에 사용된 장애 (질환)의 치료에는 예방 (방지)이 포함된다.

상기 치료를 위해 적절한 투여량은, 물론 예를 들어, 사용되는 본 발명의 화합물의 화학적 특성 및 약동학적 데이타, 개별 숙주, 예를 들어 체중, 연령 및 상기 치료가 필요한 대상체의 개별 조건, 투여 방식, 및 치료될 질병의 특성 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 그러나, 일반적으로 보다 큰 포유동물, 예컨대 인간에서의 만족스러운 결과를 위해 제시되는 일일 투여량에는

- 약 0.0001 g 내지 약 1.5 g, 예컨대 0.001 g 내지 1.5 g;

- 체중 1 kg 당 약 0.001 mg 내지 약 20 mg, 예컨대 체중 1 kg 당 0.01 mg 내지 20 mg

의 범위가 포함되며, 이는, 예를 들어 1일 4회 이하의 분할 투여량으로 투여된다.

통상적으로, 아동에게는 성인 용량의 절반이 투여될 수 있다.

제약 조성물은 약 1 ％ 내지 약 96 ％, 바람직하게는 약 20 ％ 내지 약 95 ％의 활성 성분을 포함한다.

본 발명의 화합물은 임의의 통상적 경로, 예를 들어 장관내로 (예를 들어, 비강, 구강, 직장, 경구 투여 포함); 비경구로 (예를 들어, 정맥내, 동맥내, 근육내, 심장내, 피하, 골내 주입, 경피 (손상되지 않은 피부를 통한 확산), 경점막 (점막을 통한 확산), 흡입 투여); 국소적으로 (예를 들어, 피내 (epicutaneous), 비강내, 기관내 투여 포함); 복강내로 (복강내로 주입 또는 주사); 경막외 (경질막외)로 (경막외 공간으로 주사 또는 주입); 척수강 내로 (뇌척수액으로 주사 또는 주입); 유리체 내로 (눈을 통한 투여); 또는 의학적 장치를 통해 (예를 들어, 국부적 전달로 (예를 들어, 스텐트)); 예를 들어 코팅 또는 비코팅 정제, 캡슐, (주사) 용액, 고용체, 현탁액, 분산액, 고형 분산체의 형태로; 예를 들어 앰플, 바이알 형태로, 크림, 겔, 페이스트, 흡입 분말, 포말, 팅크제, 립스틱, 점적제, 스프레이 형태로, 또는 좌제 형태로 투여될 수 있다.

국소적 용도 (예를 들어, 눈으로의 투여 포함)를 위해서는, 0.5 내지 10 ％ 농도, 예컨대 1 내지 3 ％ 농도의 활성 물질을, 일일 수회 (예컨대, 일일 2 내지 5 회) 국소 투여함으로써 만족스러운 결과가 달성될 수 있다.

본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염 형태, 또는 유리 형태; 임의로 용매화물 형태로 투여될 수 있다. 염 형태 및/또는 용매화물 형태의 본 발명의 화합물은 유리 형태의 본 발명의 화합물과 동일한 정도의 활성을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 본원에 기재된 임의의 방법 또는 용도를 위해, 단독으로 또는 1종 이상의 다른 제2 약물 물질과 함께 사용될 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은

- 본 발명의 화합물과 1종 이상의 제2 약물 물질의 조합물;

- 본 발명의 화합물을 1종 이상의 제2 약물 물질과 함께 포함하는 제약 조성물;

- 본 발명의 화합물을 1종 이상의 제2 약물 물질 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제(들)과 함께 포함하는 제약 조성물;

- 본원에 정의된 임의의 방법에 사용하기 위해 1종 이상의 제2 약물 물질과, 예를 들어 제약 조합물 또는 조성물의 형태로 조합된 본 발명의 화합물, 예컨대

- 약제로서의 용도를 위해 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 제2 약물 물질을 포함하는 조합물, 제약 조합물 또는 제약 조성물;

- 1종 이상의 제2 약물 물질과, 예를 들어 제약 조합물 또는 조성물의 형태로 조합된 본 발명의 화합물의 약제로서의 용도;

- 제2 약물 물질과 조합하여 사용하기 위한 의약을 제조하기 위한 본 발명의 화합물의 용도;

- 예를 들어, 제약 조합물 또는 조성물 형태의 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 제2 약물 물질을 동시에 또는 순차적으로 병용-투여하는 것을 포함하는, 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료가 필요한 대상체에서 상기 장애를 치료하는 방법;

- 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애에 사용하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위해, 1종 이상의 제2 약물 물질과, 예를 들어 제약 조합물 또는 조성물의 형태로 조합된 본 발명의 화합물

을 제공한다.

조합물에는 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 제2 약물 물질이 동일한 제제 내에 존재하는 고정 조합물; 별개의 제제 내의 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 제2 약물 물질이, 예를 들어 병용-투여를 위한 지시서와 함께 동일한 패키지 내에 제공되는 키트; 및 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 제2 약물 물질이 별개로 포장되나, 동시 또는 순차적 투여를 위한 지시서가 제공되는 자유 조합물이 포함된다.

또다른 측면에서, 본 발명은

- 본 발명의 화합물인 제1 약물 물질 및 1종 이상의 제2 약물 물질을, 조합 투여를 위한 지시서와 함께 포함하는 제약 패키지;

- 본 발명의 화합물을, 1종 이상의 제2 약물 물질과 조합 투여하기 위한 지시서와 함께 포함하는 제약 패키지;

- 1종 이상의 제2 약물 물질을, 본 발명의 화합물과 조합 투여하기 위한 지시서와 함께 포함하는 제약 패키지;

를 제공한다.

본 발명에 따른 조합물에 의한 치료는 단일 치료에 비해서 개선점을 제공할 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은

- 상승 작용적 치료 효과를 내기에 적절한 양의 본 발명의 화합물 및 상기와 같은 양의 제2 약물 물질을 포함하는 제약 조합물;

- 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 및 제2 약물 물질을, 예를 들어 동시에 또는 순차적으로 병용-투여하는 것을 포함하는, 본 발명의 화합물의 치료적 유용성을 개선시키기 위한 방법;

- 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 및 제2 약물 물질을, 예를 들어 동시에 또는 순차적으로 병용-투여하는 것을 포함하는, 제2 약물 물질의 치료적 유용성을 개선시키기 위한 방법

을 제공한다.

본 발명의 조합물 및 조합 파트너로서의 제2 약물 물질은 임의의 통상적인 경로로, 예를 들어 본 발명의 화합물에 대해 상기 제시된 바와 같이 투여될 수 있다. 제2 약물은 적절한 투여량으로, 예를 들어 단일 치료에 대해 사용된 것과 유사한 투여량 범위로, 또는 예를 들어 상승 작용의 경우에는 심지어 통상적인 투여량 범위 미만으로 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 통상적인 방법에 따라, 예를 들어 그와 유사하게, 예를 들어 혼합, 과립화, 코팅, 용해 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다. 단위 투여 형태에는, 예를 들어 약 0.1 mg 내지 약 1500 mg, 예컨대 1 mg 내지 1000 mg이 함유될 수 있다.

본 발명의 조합물을 포함하는 제약 조성물 및 본원에 기재된 제2 약물을 포함하는 제약 조성물은, 예를 들어 통상적인 방법에 따라, 예를 들어 그와 유사하게, 또는 본 발명의 제약 조성물에 대해 본원에 기재된 바와 같이, 적절하게 제공될 수 있다.

활성 성분의 용액 및 현탁액, 특히 등장성 수용액 또는 현탁액을 사용하는 것이 바람직하고, 예를 들어 활성 성분을 단독으로, 또는 용액 또는 현탁액을 위한 담체, 예를 들어 만니톨과 함께 포함하는 동결건조 조성물의 경우에는 이를 사용 전에 제조하는 것이 가능하다. 제약 조성물은 멸균될 수 있고/거나 부형제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 및/또는 유화제, 가용화제, 삽투압 조절용 염 및/또는 완충제를 포함할 수 있고, 그 자체로 공지된 방식으로, 예를 들어 통상적인 용해 공정 또는 동결건조 공정에 의해 제조된다. 상기 용액 또는 현탁액은 점도-증가 물질, 예를 들어 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈 또는 젤라틴을 포함할 수 있다.

경구 투여용 제약 조성물은 활성 성분을 고형 담체와 배합하고, 원하는 경우에 생성된 혼합물을 과립화하고, 원하거나 필요한 경우에 적절한 부형제를 첨가한 후에 혼합물을 정제, 당의정 코어 또는 캡슐로 가공함으로써 얻어질 수 있다. 또한, 활성 성분이 계량된 양으로 확산되거나 방출될 수 있는 플라스틱 용기 내로 상기 제약 조성물이 혼입될 수 있다.

용어 "제2 약물 물질"은 화학요법적 약물, 특히 본 발명의 화합물을 제외한 임의의 화학요법제를 의미한다.

예를 들어, 본원에 사용된 제2 약물 물질에는 항암 약물이 포함된다.

항암 약물에는, 예를 들어 아로마타제 억제제; 항에스테르겐; 토포이소머라제 I 억제제; 토포이소머라제 II 억제제; 미세소관 활성제; 알킬화제; 히스톤 데아세틸라제 억제제; 세포 분화 과정을 유도하는 화합물; 시클로옥시게나제 억제제; MMP 억제제; mTOR 억제제; 항신생물성 항대사물질; 백금 화합물; 단백질 또는 지질 키나제 활성을 표적으로 하는/감소시키는 화합물 및 추가의 항-맥관형성 화합물; 단백질 또는 지질 포스파타제 활성을 표적으로 하거나, 감소 또는 억제하는 화합물; 고나도렐린(gonadorelin) 효능제; 항-안드로겐; 메티오닌 아미노펩티다제 억제제; 비스포스포네이트; 생물학적 반응 조절제; 항증식성 항체; 헤파라나제 억제제; Ras 종양원성 이소형의 억제제; 텔로머라제 억제제; 프로테아솜 억제제; 혈액 악성종양의 치료에 사용되는 약물; Flt-3의 활성을 표적으로 하거나, 감소 또는 억제하는 화합물; Hsp90 억제제; 및 테모졸로미드 (테모달 (TEMODAL, 등록상표))가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료에 있어서, 화학식 I의 화합물은 표준 백혈병 요법과 조합하여, 특히 AML의 치료를 위해 이용되는 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 특히 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 파네실 트랜스퍼라제 억제제 및/또는 AML의 치료에 유용한 다른 약물, 예컨대 다우노루비신 (Daunorubicin), 아드리아마이신 (Adriamycin), Ara-C, VP-16, 테니포시드 (Teniposide), 미톡산트론 (Mitoxantrone), 이다루비신 (Idarubicin), 카르보플래티늄 (Carboplatinum) 및 PKC412와 조합되어 투여될 수 있다.

코드 번호, 일반명 또는 상품명으로 확인되는 활성 제제의 구조는 표준 개론 "더 머크 인덱스 (The Merck Index)"의 현행판 또는 데이타베이스, 예컨대 패튼츠 인터내셔널 (Patents International) (예컨대, IMS 월드 퍼블리케이션즈 (World Publications))로부터 얻을 수 있다.

본 발명의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 제2 약물 물질은, 예를 들어 통상적으로, 예컨대 상기 인용된 문헌에서와 같이, 적절하게 제조 및 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 공지된 치료 방법, 예를 들어 호르몬 투여 또는 특히 방사선과 조합하여 유리하게 사용될 수 있다.

화학식 I의 화합물은, 특히 방사선요법에 대해 약한 감수성을 나타내는 종양의 치료를 위한 방사선 증감제로서 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물을 다른 약물과 조합하여 투여하는 경우, 병용-투여되는 제2 약물의 투여량은, 물론 본 발명의 화합물의 경우와 마찬가지로, 사용되는 병용-약물, 사용되는 특이적 약물, 치료될 질병에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 제2 약물 공급자에 의해 제공되는 것과 유사한 투여량이 적절할 수 있다.

하기 실시예들은 본 발명의 범위를 제한하지 않고 본 발명을 설명하기 위한 것이다.

온도는 섭씨 온도 ( ℃)로 나타냈다. 달리 나타내지 않는 한, 반응은 실온에서 수행하였다.

TLC 조건: 용리액이 앞쪽으로 이동한 거리에 대한 각 물질이 이동한 거리의 비율을 나타내는 R_f 값을 하기 나타낸 용매 시스템을 이용하는 박층 크로마토그래피에 의해 실리카겔 박층 플레이트 5 x 10 cm TLC 플레이트 (실리카겔 F₂₅₄, 머크 (Merck), 독일 다름스타트 소재) 상에서 측정하였다.

분석용 HPLC 조건:

시스템 1

선형 구배 20 → 100 ％ CH₃CN [5분] + 100 ％ CH₃CN (0.1 ％TFA) [1.5분]; 215 nm에서 검출, 유속 1 mL/분, 30 ℃. 컬럼: 뉴클레오실 (Nucleosil) 100-3 C18 (70 x 4.0 mm)

시스템 2

선형 구배 5 → 95 ％ CH₃CN [2.20분] + 95 ％ CH₃CN (0.1 ％TFA) [0.5분]; 215 nm에서 검출, 유속 2 mL/분, 35 ℃. 컬럼: 선 파이어 (Sun Fire) (워터스 (waters)) 3.5 ㎛ C18 (3.0 x 20 mm)

시스템 3

선형 구배 5 → 100 ％ CH₃CN [8분] + 100 ％ CH₃CN (0.1 ％HCOOH) [1.8분]; 215 nm에서 검출, 유속 2 mL/분, 40 ℃. 컬럼: 엑세라 (XERRA)-MS (워터스) 5 ㎛ C18 (50 x 4.6 mm)

시스템 4

선형 구배 20 → 100 ％ CH₃CN [5분] + 100 ％ CH₃CN (0.1 ％TFA) [1분]; 215 nm에서 검출, 유속 1 mL/분, 30 ℃. 컬럼: 뉴클레오실 100-3 C18 (70 x 4.0 mm)

약어 및 두문자어:

ACN 아세토니트릴 (CH₃CN)

AcOH 아세트산

염수 수중 NaCl의 포화 용액

t-Bu₃P 트리-tert-부틸포스핀

conc. 농축

CuI 요오드화구리(I)

DCM 디클로로메탄 (CH₂Cl₂)

DIEA 디이소프로필에틸아민

DMAP 4-(디메틸아미노)피리딘

DMF N,N-디메틸 포름아미드

DMP 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2-(1H)-피리미디논

DMSO N,N-디메틸술폭시드

equiv 당량

Et₃N 트리에틸아민

Et₂NH 디에틸아민

Et₂O 디에틸에테르

EtOAc 에틸 아세테이트

EtOH 에탄올

h 시간

HPLC 고압 액체 크로마토그래피

L 리터

Me 메틸

MeOH 메탄올

ml 밀리리터

min 분

MPLC 중압 액체 크로마토그래피

MS 질량 스펙트럼

NMR 핵자기공명

NMP 1-메틸-2-피롤리돈

PdCl₂(dppf)₂ [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)

Pd(PhCN)₂Cl₂ 비스(벤조니트릴)팔라듐(II) 클로라이드

Pd(PPh₃)₄ 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)

Ph 페닐

i-Pr₂NH 디이소프로필아민

R_f 선단의 비율 (TLC)

rt 실온

TBTU O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

t_R 체류 시간 (HPLC)

상표명

셀라이트 (Celite) = 셀라이트 (등록상표) (더 셀라이트 코포레이션 (The Celite Corporation)) = 규조토를 기재로 하는 여과 보조제

뉴클레오실 = 뉴클레오실 (등록상표), HPLC 재료로서 독일 듀렌에 소재하는 마케레이 앤드 나겔 (Machery ＆ Nagel)의 상표명

참조 실시예 0: 2-(4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-N-(3-트리플루오로 메틸-페닐]-아세트아미드

DMF 0.5 ml 중 조질의 (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산 55 mg, 3-아미노벤조트리플루오라이드 39 mg 및 TBTU 77 mg의 차가운 (0 ℃) 혼합물에 DIEA 0.15 ml를 적가하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 가온하고, 2시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 포화 NaHCO₃ 수용액, H₂O 및 염수로 세척하였다. 수득한 유기상을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 증발 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 2-(4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-N-(3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드를 고체 형태로 수득하였다.

출발 물질은 하기와 같이 제조하였다.

단계 0.1: (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산

(4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 0.349 g 및 6 N HCl 수용액 3.5 ml의 혼합물을 3시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 염산염 형태의 (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산을 수득하였다.

단계 0.2: (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르

[4-(3-아미노-피리딘-4-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 0.356 g 및 트리에틸 오르토포르메이트 9.2 ml의 혼합물을 2시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르를 고체 형태로 수득하였다.

단계 0.3: [4-(3-아미노-피리딘-4-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

MeOH/디옥산 (1/1 v/v) 10 ml 중 4-클로로-3-니트로-피리딘 (랭커스터 (LANCASTER)) 0.500 g 및 (4-아미노-페닐)-아세트산 (알드리치 (Aldrich)) 0.467 g의 혼합물을 6시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 조질의 [4-(3-니트로-피리딘-4-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 수득하였다.

MeOH 15 ml 중 조질의 [4-(3-니트로-피리딘-4-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 0.569 g의 현탁액 및 라니 Ni 0.140 g을 수소 분위기하에 실온에서 21시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 수득한 여과액을 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 CH₂Cl₂ 중에서 분쇄하였다. [4-(3-아미노-피리딘-4-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 고체 형태로 수득하였다.

참조 실시예 1: N-(3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비펜-4-일)-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드

출발 물질로서 3-아미노벤조트리플루오라이드 대신에 3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비펜-4-일아민을 사용하고, (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산 대신에 (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산을 사용한 것을 제외하고는 참조 실시예 0에 기재된 방법과 유사하게 상기 화합물을 수득하였다.

출발 물질은 하기와 같이 제조하였다.

단계 1.1: (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산

절차 A

출발 물질로서 (4-이미다조[4,5-c]피리딘-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 대신에 (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르를 사용한 것을 제외하고는 단계 0.1에 기재된 방법과 유사하게, (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산을 수득하였다.

절차 B

자일렌 1.5 ml 중 4-요오도페닐아세트산 400 mg, 4-아자벤즈이미다졸 273 mg, 트랜스,트랜스-디벤질리덴아세톤 17.9 mg, 1,10-페난트롤린 303 mg, 구리 (I) 트리플루오로메탄술포네이트 벤젠 착체 19.2 mg 및 Cs₂CO₃ 547 mg의 혼합물을 125 ℃에서 80시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 1N NaOH 수용액에 용해시키고, EtOAc로 추출하였다. 수성층에 1 N 수성 HCl을 첨가하여 산성 pH를 만들고, 수득한 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 수득한 유기상을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 역상 MPLC (CH₃CN/H₂O/TFA) 처리하였다. (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산을 수득하였다.

단계 1.2: (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르

출발 물질로서 [4-(3-아미노-피리딘-4-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 대신에 [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 사용한 것을 제외하고는 단계 0.2에 기재된 방법과 유사하게 표제 화합물을 수득하였다.

단계 1.3: [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

MeOH 40 ml 중 [4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 2 g 및 라니 Ni 0.600 g의 현탁액을 수소 분위기하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 농축시켰다. [4-(3- 아미노-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 고체 형태로 수득하였다.

단계 1.4: [4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

MeOH/디옥산 (1:1, v/v) 100 ml 중 2-클로로-3-니트로-피리딘 5.0 g, (4-아미노-페닐)-아세트산 4.75 g 및 디옥산 7.85 ml 중 4 N HCl 용액의 혼합물을 30시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물에 (4-아미노-페닐)-아세트산 4.75 g을 첨가하고, 수득한 혼합물을 18시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 수득한 혼합물을 포화 NaHCO₃ 수용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 처리하였다. [4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 고체 형태로 수득하였다.

단계 1.5: 3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비페닐-4-아민

톨루엔 14 ml 중 5-아미노-2-브로모벤조트리플루오라이드 (다크우드 프로덕츠, 인크. (Dakwood Products, Inc.)) 500 mg, 6.2 mMol 3-브로모페닐보론산 (알드리치), Pd(PPh₃)₄ 70 mg 및 H₂O 중 2 M Na₂CO₃ 용액 5 ml의 혼합물을 환류 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 수득한 층을 분리하고, 수득한 수성상을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 수득한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 MPLC (CH₃CN/H₂O/TFA) 처리하였다. 3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비페닐-4-아민을 수득하였다.

참조 실시예 2: 2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드

출발 물질로서 (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 대신에 (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산을 사용하고, 3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비펜-4-일아민 대신에 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1에 기재된 방법과 유사하게 상기 화합물을 수득하였다 (WO 03/099771 참조).

출발 물질은 하기와 같이 제조하였다.

단계 2.1: (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산

절차 A

출발 물질로서 4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 대신에 (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르를 사용한 것을 제외하고는 단계 1.1에 기재된 방법과 유사하게 (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산을 수득하였다.

절차 B

THF 2 ml 중 (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 0.535 g 및 1 N LiOH 수용액 2 ml의 혼합물을 45 ℃에서 3시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 0.5 N 수성 HCl을 첨가함으로써 pH 5로 산성화하였다. 침전된 고체를 진공 여과에 의해 수집하였다. (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산을 수득하였다.

절차 C

자일렌 12 ml 중 4-요오도페닐아세트산 4.4 g, 벤조이미다졸 2.98 g, 트랜스,트랜스-디벤질리덴아세톤 197 mg, 1,10-페난트롤린 3.33 g, 구리 (I) 트리플루오로메탄술포네이트 벤젠 착체 211 mg 및 Cs₂CO₃ 6 g의 혼합물을 125 ℃에서 88시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물을 1N NaOH 수용액 중에 용해시키고, 수득한 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 1N HCl 수용액을 첨가함으로써 수득한 수성층의 pH를 산성 pH로 조정하였다. 침전물 (배치 (batch) 1)이 형성되었고, 이를 진공 여과에 의해 수집하였다. 수득한 여과액으로부터의 수성상을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기상을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 수득한 농축 잔류물 (배치 2)을 배치 1과 합하고, Et₂O 중에서 분쇄하였다. (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산 3.58 g을 수득하였다.

단계 2.2: (4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르

출발 물질로서 4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 대신에 [4-(2-아미노-페닐아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 사용한 것을 제외하고는 단계 1.2에 기재된 방법과 유사하게 표제 화합물을 수득하였다.

단계 2.3: [4-(2-아미노-페닐아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

MeOH 20 ml 중 [4-(2-니트로-페닐아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 0.700 g 및 Pd/C (10 ％) 0.240 g의 현탁액을 수소 분위기하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 수득한 여과액을 농축시켰다. [4-(2-아미노-페닐아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 오일 형태로 수득하였다.

단계 2.4: [4-(2-니트로-페닐아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

MeOH 20 ml 중 [4-(2-니트로-페닐아미노)-페닐]-아세트산 1.0 g 및 진한 HCl 0.4 ml의 혼합물을 1시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축물을 CH₂Cl₂로 희식시키고, 수득한 혼합물을 포화 NaHCO₃ 수용액, H₂O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축하였다. 수득한 농축물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 처리하였다. [4-(2-니트로-페닐아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 오일 형태로 수득하였다.

단계 2.5: [4-(2-니트로-페닐아미노)-페닐]-아세트산

2-니트로플루오로벤젠 (알드리치) 1.5 ml, 4-아미노페닐 아세트산 1.44 g 및 KF 0.550 g의 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 16시간 동안 170 ℃에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, CH₂Cl₂/MeOH (95:5) 중에서 분쇄하고, 여과하였다. 수득한 여과액을 농축시키고, 수득한 농축물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. [4-(2-니트로-페닐아미노)-페닐]-아세트산을 고체 형태로 수득하였다.

참조 실시예 3: 2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(4-이소프로필-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드

(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 대신에 (2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산을 사용하고, 3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비펜-4-일아민 대신에 4-(4-이소프로필-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1에 기재된 방법과 유사하게 상기 화합물을 수득하였다 (WO 03/099771 참조).

출발 물질은 하기와 같이 제조하였다.

단계 3.1: (2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산

THF 2 ml 중 (2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 에틸 에스테르 0.325 g 및 0.5 N LiOH 수용액 2 ml의 혼합물을 40 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 0.5 N HCl 수용액을 첨가함으로써 pH를 산성으로 조정하였다. 침전물이 형성되었고, 이를 진공 여과에 의해 수집하였다. (2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산을 고체 형태로 수득하였다.

단계 3.2: (2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 에틸 에 스테르

출발 물질로서 [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 대신에 [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-2-클로로-페닐]-아세트산 에틸 에스테르를 사용한 것을 제외하고는 단계 1.2에 기재된 방법과 유사하게 표제 화합물을 수득하였다.

단계 3.3: [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-2-클로로-페닐]-아세트산 에틸 에스테르

출발 물질로서 [4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 대신에 [2-클로로-4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 에틸 에스테르를 사용하고, 용매로서 MeOH 대신에 EtOH를 사용하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하는 대신에 22시간 동안 교반한 것을 제외하고는 단계 1.3에 기재된 방법과 유사하게 표제 화합물을 수득하였다.

단계 3.4: [2-클로로-4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 에틸 에스테르

EtOH/디옥산 (1:1, v/v) 20 ml 중 2-클로로-3-니트로-피리딘 (알드리치) 0.600 g 및 (4-아미노-2-클로로-페닐)-아세트산 에틸 에스테르 (WO 97/21665 참조) 0.800 g의 혼합물을 72시간 동안 교반하면서 환류하였다. 수득한 혼합물을 실온으 로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축물울 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 처리하였다. 수득한 고체를 Et₂O 중에서 분쇄하였다. [2-클로로-4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 에틸 에스테르를 고체 형태로 수득하였다.

참조 실시예 4: N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트아미드

출발 물질로서 (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트산 대신에 (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트산을 사용하고, 3'-브로모-2-트리플루오로메틸-비펜-4-일아민 대신에 4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민(WO 2005/051366에 개시되어 있음)을 사용한 것을 제외하고는 참조 실시예 1에 기재된 방법과 유사하게 상기 화합물을 수득하였다.

단계 4.1: (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트산

(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 대신에 (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트산 메틸 에스테르를 사용한 것을 제외하 고는 참조 실시예 2의 단계 2.1의 절차 B에 기재된 방법과 유사하게 표제 화합물을 수득하였다.

단계 4.2: (4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트산 메틸 에스테르

[4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-2-메틸-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 1.92 g 및 트리에틸 오르토포르메이트 30 ml의 혼합물을 150 ℃에서 3시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트산 메틸 에스테르를 수득하였다.

단계 4.3: [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-2-메틸-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

[2-메틸-4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르 2.2 g 및 라니 Ni 220 mg의 현탁액을 수소 분위기하에 실온에서 6.5시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 농축시켰다. [4-(3-아미노-피리딘-2-일아미노)-2-메틸-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 수득하였다.

단계 4.4: [2-메틸-4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르

MeOH/디옥산 (1:1, v/v) 30 ml 중 2-클로로-3-니트로-피리딘 1.5 g, (4-아미노-2-메틸-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 3.39 g 및 디옥산 중 4 N HCl 용액 6.9 ml의 혼합물을 100 ℃에서 54시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 수득한 농축물을 EtOAc 중에 용해시키고, 수득한 혼합물을 포화 NaHCO₃ 수용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 수득한 농축물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 처리하였다. [2-메틸-4-(3-니트로-피리딘-2-일아미노)-페닐]-아세트산 메틸 에스테르를 수득하였다.

적절한 출발 물질을 사용하여 참조 실시예에 기재된 방법과 유사하게 하기 화학식 I_EX의 화합물을 수득하였다.

<화학식 I_EX>

상기 식에서, X, R2 및 Q는 하기 표 1에 정의된 바와 같다.

분석 데이타 또한 표 1에 기재되어 있다.

출발 물질

3-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐아민

실시예 5의 화합물을 제조하기 위해 사용된 상기 화합물은 WO 2006/000420에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

4-(4-이소프로필-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 6의 화합물을 제조하기 위해 사용된 상기 화합물은 WO 2005/051366에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 7의 화합물을 제조하기 위해 상기 화합물을 사용하였다.

EtOH 150 ml 중 4-(1-메틸-피페리딘-4-일리덴메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민 6.95 g 및 탄소 상 백금 2.1 g의 혼합물을 수소 분위기하에 실온에서 45시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 수득한 농축물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH/NH₃ ^aq, 91:8:1) 처리하였다. 4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민을 고체 형태로 수득하였다.

4-(1-메틸-피페리딘-4-일리덴메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민

아르곤 분위기하에, 미네랄 오일 중 NaH 2.4 g의 60 ％ 분산액을 THF 250 ml 중 [4-(2,2,2-트리플루오로-아세틸아미노)-2-트리플루오로메틸-벤질]-포스폰산 디에틸 에스테르 11.15 g의 차가운 (5 ℃) 용액에 첨가하고, 수득한 혼합물을 5 ℃에서 교반하였다. 수득한 혼합물에 1-메틸-4-피페리돈 3.7 ml를 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온으로 가온하고, 20시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물에 1-메틸-4-피페리돈 1.0 ml를 첨가하고, 수득한 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물에 미네랄 오일 중 NaH 800 mg의 60 ％ 분산액을 첨가하고, 수득한 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 미네랄 오일 중 NaH 800 mg의 60 ％ 분산액을 추가로 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, H₂O 50 ml를 첨가함으로써 켄칭하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 농축시키고, EtOAc 및 H₂O로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 수득한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 수득한 농축물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH/NH₃ ^aq, 89:10:1) 처리하였다. 오일 형태의 4-(1-메틸-피페리딘-4-일리덴메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민을 수득하였다.

[4-(2,2,2-트리플루오로-아세틸아미노)-2-트리플루오로메틸-벤질]-포스폰산 디에틸 에스테르

트리에틸 포스파이트 6 ml를 톨루엔 60 ml 중 N-(4-브로모메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-2,2,2-트리플루오로-아세트아미드 (WO 2005/051366에 따라 수득가능함) 10 g의 현탁액에 첨가하였다. 수득한 혼합물을 환류 온도에서 18시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 수득한 농축물을 Et₂O 중에서 분쇄하였다. [4-(2,2,2-트리플루오로-아세틸아미노)-2-트리플루오로메틸-벤질]-포스폰산 디에틸 에스테르를 고체 형태로 수득하였다.

4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 8 및 10의 화합물을 제조하기 위해 사용된 상기 화합물은 WO 2005/051366에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 9 및 11의 화합물을 제조하기 위해 사용된 상기 화합물은 WO 2006/034833에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 12, 26 및 29의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 WO 2003/099771에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 13 및 14의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 WO 2005/051366에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 15의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 적절한 출발 물질을 사용하여 4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민에 대해 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 18의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 적절한 출발 물질을 사용하여 4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐아민에 대해 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 23, 24, 27 및 28의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 WO 2004/005281에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

3-(4-메틸-피페라진-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 25의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 WO 2005/051366에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

N-(2-디메틸아미노-에틸)-N-메틸-5-트리플루오로메틸-벤젠-1,3-디아민

실시예 31의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 적절한 출발 물질을 사용하여 3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐아민에 대해 WO 2004/005281에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 35 내지 38의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 WO 2005/051366에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

N-메틸-N-(1-메틸-피페리딘-4-일)-5-트리플루오로메틸-벤젠-1,3-디아민

실시예 39 내지 42의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 적절한 출발 물질을 사용하여 3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐아민에 대해 WO 2004/005281에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐아민

실시예 43 내지 46의 화합물을 제조하기 위한 상기 화합물은 1-메틸-피페리딘-4-올을 사용한 것을 제외하고는 3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐아민에 대해 WO 2004/005281에 기재된 방법과 유사하게 수득할 수 있었다.

실시예 A

캡슐

활성 성분으로서 실시예 1 내지 46 중 어느 한 실시예의 화합물 100 mg을 포함하는 하기 조성의 캡슐을 표준 절차에 따라 제조하였다.

조성

활성 성분 100 mg

아비셀 200 mg

PVPPXL 15 mg

에어로실 2 mg

마그네슘 스테아레이트 1.5 mg

--------------------

318.5 mg

성분을 혼합하고, 이를 경질 젤라틴 캡슐 (사이즈 1) 내로 충진함으로써 제조하였다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물.

<화학식 I>

상기 식에서,

(i) R1 및 R2는 각각 수소, 할로 및 C₁-C₇-알킬로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;

R3은, Z가 질소라면 존재하지 않거나, 또는 Z가 C (탄소)라면 수소, 비치환 또는 치환된 아릴, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴이고;

X는 N (질소) 또는 CH (수소-치환된 탄소)이고;

Y는 CH 또는 N이고;

Z는 C 또는 N이고;

Q는 하기 화학식 A의 기이고;

<화학식 A>

(상기 식에서,

(a) R4는 수소, 할로, 비치환 또는 치환된 아미노, 비치환 또는 치환된 아릴, 질소 이외의 고리 원자를 통해 결합된 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 비치환 또는 치환된 알킬, 비치환 또는 치환된 알케닐, 또는 비치환 또는 치환된 알키닐이고;

R5는 1-메틸-피페리딘-4-일옥시, 1-메틸-피페리딘-4-일, 2-디메틸아미노-에틸 또는 4-에틸-피페라진-1-일이고;

R6은 수소, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 또는 비치환 또는 (바람직하게는) 치환된 알킬이거나; 또는

(b) R4는 1-메틸-피페리딘-4-일메틸, 1-에틸-피페리딘-4-일메틸, 1-메틸-피페리딘-4-일옥시 또는 1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸이고;

R5는 수소, 비치환 또는 치환된 알킬, 비치환 또는 치환된 아미노, 비치환 또는 치환된 아릴, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릴이고;

R6은 수소, 비치환 또는 치환된 시클로알킬, 또는 비치환 또는 (바람직하게는) 치환된 알킬이며;

화학식 A에서 별표 *는 결합을 표시하는데, 이 결합을 통해 화학식 I의 아미드기의 NH에 잔기가 결합됨)

R9 및 R10은 각각 수소, 히드록실 및 C₁-C₇-알킬로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되거나; 또는

R9 및 R10은 함께 옥소를 나타내거나; 또는

R1 및 R9는 함께 -C(O)-CH₂- 또는 -CH₂-CH₂- 기를 형성하고, R2는 수소, 할로 및 C₁-C₇-알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, R10은 수소를 나타내거나; 또는

(ii) 화학식 I의 화합물은

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(4-이소프로필-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드),

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드 및

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드

로 이루어진 군으로부터 선택된다.
제1항에 있어서,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐) -아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(4-이소프로필-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드),

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-(4-디에틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-(3-디에틸아미노메틸-5-트리플루오로메틸-페닐)-아세트아미드,

N-[4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[ 4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-에틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-이소프로필-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(4-메틸-피페라진-1- 일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-메틸-이미다졸-1-일)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(4-에틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-아세트아미드,

N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-{3-[(2-디메틸아미노-에틸)-메틸-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루 오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-3-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-{3-[메틸-(1-메틸-피페리딘-4-일)-아미노]-5-트리플루오로메틸-페닐}-아세트아미드,

2-(2-클로로-4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-2-메틸-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드,

2-(4-이미다조[4,5-b]피리딘-3-일-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)- 5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드 및

2-(4-벤조이미다졸-1-일-페닐)-N-[3-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-아세트아미드

로부터 선택된 화학식 I의 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 염 형태의 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료에 사용하기 위한 화합물.
단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애의 치료가 필요한 대상체에게 치료적 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애를 치료하는 방법.
단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 장애를 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물과 1종 이상의 제2 약물 물질의 조합물.
제9항에 있어서, 제4항, 제6항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 따른 용도를 위한 조합물.