KR20090034946A

KR20090034946A - 에스신의 용도

Info

Publication number: KR20090034946A
Application number: KR1020097002110A
Authority: KR
Inventors: 안드레아스 그라싸우에르; 에바 프리에쉴
Original assignee: 마리노메드 바이오테크놀로지 게엠베하
Priority date: 2006-08-04
Filing date: 2007-08-03
Publication date: 2009-04-08
Also published as: US20100227830A1; BRPI0715070A2; PT2046345E; IL196606A0; UA94954C2; WO2008015007A2; BRPI0715070B8; EA200900261A1; IL196606A; US20170014465A1; NZ574249A; EA015404B1; AU2007280625B2; CN101500582B; ES2531516T3; EP1884245A1; CN101500582A; DK2046345T3; JP5345933B2; US9993512B2

Abstract

본 발명에서는 활성화된 과립구에 의해 매개되거나 유발되는 질환, 바람직하게는, I형 또는 III형 알레르기 또는 폐혈성 쇼크의 치료를 위한 제약학적 조합제의 제조에서 에스신(escin)의 용도를 제시한다.

에스신(escin)

Description

에스신의 용도{Use of Escin}

본 발명은 면역학(immunology) 분야에 관계한다.

알레르기는 I형과 III형 과민증(hypersensitivity)을 비롯한 여러 종류의 원치 않는 면역 반응(immune reaction)을 지칭할 수 있다. 양쪽 유형 과립구에서, 백혈구(leukocyte)의 부분집합이 이들 질환의 병인(pathogenesis)에 관여한다. 백혈구는 골수(bone marrow) 내에서 줄기 세포(stem cell)로부터 기원하는 상이한 세포형(cell type)으로 구성된다. 이들은 림프구(lymphocyte)(T-세포, B-세포, 자연 킬러 세포(natural killer cell)), 골수성 세포(myeloid cell)(단핵구(monocyte), 대식세포(macrophage)) 및 과립구(granulocyte)(호산구, 호중구와 호염기구)로 더욱 세분된다. 비만 세포는 호염기구에 밀접하게 관련되고, 종종 과립구의 조직 체류형(tissue residing type)으로 간주된다. 이런 이유로, 하기에서 과립구는 호산구(eosinophil), 호중구(neutrophil), 호염기구(basophil)와 비만 세포(mast cell)로 정의된다. 과립구는 세균과 같은 병원체(pathogen)에 대한 특정되지 않은 반응인 선천 면역 반응(innate immune response)의 일부이다. 이는 또한, 과립구의 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide)(LPS, 세균 세포벽의 구성요소) 활성화가 사이토킨(cytokine), 예를 들면, 종양 괴사 인자(tumour necrosis factor) 알파(TNF- 알파)의 현저한 방출을 유발한다는 사실에 의해 반영된다. IgE-(I형 알레르기) 또는 IgG 복합체(III형 알레르기)로 과립구의 활성화는 원래 무해한 작인에 대한 강하고 급속한 반응(화분(pollen), 식품, 또는 예로써, 자가면역 질환에서 자기 구조와 조직에 대한 반응)을 유발한다. 비만 세포와 호염기구는 I형 알레르기(FcεRI를 통한 IgE-매개된 알레르기)에 대한 세포 기초(cellular basis)이고, 호중구는 건선, 관절염, 면역 저혈소판증(immune thrombocytopenia, ITP), 자가면역성 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia, AHA)과 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE)와 같은 자가면역 질환(autoimmune disease)을 비롯한 III형 알레르기(FcγRIII을 통한 면역 복합체 매개된 반응)에 관여하고, 류머티스성 관절염(RA), I형 당뇨병과 다발성 경화증과 같은 다른 자가면역 질환의 원인이 된다. 양쪽 유형의 알레르기는 약하게는 콧물이 흐르는 코(runny nose)에서부터 심하게는 만성 질환 및 심지어, 치명적인 아나필락시스성 쇼크(anaphylactic shock) 또는 폐혈성 쇼크(spetic shock)와 같은 증상을 유발할 수 있다.

I형 알레르기는 일반적으로, 코르티코스테로이드(corticosteroid)(코티손(cortisone)), 항-히스타민제(anti-histamines), 에피네프린(ephinephrine), 테오필린(theophylline) 또는 비만 세포 안정화제(stabilizer)에 의해 치료된다. 이들 화합물은 알레르기 매개인자(allergic mediator)의 작용을 차단하고, 세포의 활성화 및 탈과립 과정(degranulation process)을 예방한다. 이들 약제는 알레르기의 증상을 경감시키는데 도움이 되긴 하지만, 상기 질환의 장기적인 경감에서는 거의 역할을 하지 못한다. 이들 치료제 종류 모두 특히, 장기 복용후 상당한 부작용이 발생한다. 알레르기는 서반구(western hemisphere)에서 발생률이 증가하고 있는데, 전체 인구의 대략 20%가 현재 영향을 받고 있다. 알레르기성 비염의 치료에 대한 개관과 권고가 British National Prescribing Center: MeReC Bulletin Volume 9, Number 3, 1998에 의해 발표되었다. 알레르기의 다른 치료 형태는 단클론(monoclonal) 항-IgE 항체의 정맥내 주사(intravenous injection)를 포함한다. 감감작(hyposensitization)은 환자가 점진적으로 더욱 많은 용량의 문제되는 알레르기원(allergen)에 대하여 점진적으로 예방접종되는 일형의 면역요법(immunotherapy)이다. 이는 심각도(severity)를 감소시키거나, 또는 과민증을 완전히 소멸시킬 수 있다. 이는 I형 과민증 사례에서 관찰되는 과도한 IgE 생산에 대조적으로, IgG 생산의 점진적인 편중(progressive skewing)에 의존한다. III형 알레르기 질환은 일반적으로, 스테로이드(steroid), 비-스테로이드성 소염제(non-steroid anti-inflammatory drug), 메토트렉세이트(methotrexate)와 TNF-알파 차단제(수용체 유사체 또는 항체)에 의해 치료된다.

건선 또는 수포 질환(blistering disease)과 같은 일부 자가면역 질환은 피부의 이차 감염에 의해 까다롭다. 항생제가 통상적으로 적용되는 피부의 급성 손상과 대조적으로, 건선과 같은 만성 질환(chronic disorder)의 결과인 이차 감염은 종종 치료되지 않고 방치된다. 결과로써, 염증 과정(inflammatory process)이 악화되고, 질환이 진전된다. 따라서 양쪽 유형의 과민증에서, 강한 의학적 요구가 여전히 존재하는데, 그 이유는 이들 물질 중에서 다수가 장기적인 적용에 적합하지 않거나, 또는 폭넓게 이용되기에는 치료비가 너무 비싸기 때문이다(생물학적 물질). 건선 또는 류머티스성 관절염은 가장 일반적인 자가면역 질환에 속하는데, 전체 인구의 1-2%가 영향을 받는다.

Sirtori, Pharmacological Research 44 (3) (2001): 183-193에서는 에스신의 소염 효과(anti-inflammatory effect)를 개시하는데, 이러한 효과는 병든 조직 내에서 백혈구의 밀도를 감소시킬 수 있는 혈관 투과성(vascular permeability)의 감소에 의해 달성된다.

Matsuda et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 7 (13) (1997): 1611-1616에서는 마로니에(horse chestnut)로부터 분리된 에스신 화합물의 소염 효과를 기술하는데, 이러한 효과는 쥐에서 카라게닌(carragenin) 유도된 부종에서 항-팽창 효과(anti-swelling effect)를 통하여 조율된 혈관 수축(vascular constriction)에 기초한다.

Dattner, Dermatologic Therapy 16 (2003): 106-113에서는 소염 효과와 혈관보호(vasoprotective) 효과를 갖는 약초학(herbal medicine) 분야에서 마로니에(horse chestnut)를 기술한다. 엘라스타아제-저해 활성(elastase-inhibitory activity)이 에스신에 기인한다.

본 발명의 목적은 과립구의 과다-반응에 기초된 다양한 면역질환에 효과적인 추가의 약제를 제시한다.

본 발명에서는 활성화된 과립구에 의해 매개되거나 유발되는 질환, 바람직하게는, I형 또는 III형 알레르기 또는 폐혈성 쇼크의 치료를 위한 제약학적 조합제(pharmaceutical preparation)(또는 약제)의 제조에서 에스신의 용도를 제시한다. 과립구와 같은 백혈구는 거의 모든 질환에서 신체 방어 체계(body defense system)로서 일정한 역할을 수행한다. 질환의 일부 증상은 과립구의 직접적인 작동체 기능(effector function)에 관련될 수 있다. "과립구에 의해 매개되거나 유발되는 질환"은 질환의 증상뿐만 아니라 발병의 원인의 배경에서 이해되어야 한다. 따라서 본 발명의 제약학적 조합제에 의해 치료되는 질환은 과립구의 비정상적 또는 과도한 기능에 관련된다. 알레르기는 질환의 원인으로 간주될 수 있는 과도한 과립구 반응을 매개하는 알레르기원(외부 또는 내부)에 접촉으로 유발되는데, 그 이유는 이러한 알레르기원 자체는 무해할 것이기 때문이다. 이런 이유로, 본 발명은 발병의 원인이 활성화된 과립구에 의해 매개되거나 유발되는 질환의 치료를 위한 제약학적 조합제의 제조에서 에스신의 용도에 관계한다.

또한, 활성화된 과립구에 의해 매개되거나 유발되는 질환의 치료(또는 예방, 예방적 치료), 또는 발병의 원인이 활성화된 과립구에 의해 매개되거나 유발되는 질환의 치료(또는 예방)를 위한 에스신이 제시된다.

특정 구체예에서, 이는 염증 또는 부종의 치료까지 확대되지 않는다. 예방은 환자에서 연관된 질환이 절대 발생하지 않는다는 의미에서 절대적인 성공이 아닌 예방적 치료에서 발병의 기회 감소로서 해석되어야 한다.

특정 구체예에서, 과립구는 과다활성화된다. 이러한 과도한 활성화는 쇼크 증후군(shock syndrome), 예를 들면, 알레르기성 쇼크(allergic shock)와 같은 심각한 전신 부작용을 유발할 수 있다. 본 명세서에 정의된 바와 같이, 과립구는 바람직하게는, 호산구, 호중구, 호염기구 또는 비만 세포에서 선택된다.

특정 측면에서, 본 발명에서는 에스신을 함유하는 제약학적 조합제로 I형 또는 III형 알레르기, 자가면역 질환 또는 폐혈성 쇼크의 치료를 개시한다.

에스신(aescin 또는 aescin)은 밤나무(chestnut)의 종자로부터 추출된 트리테르펜 사포닌(triterpene saponin) 혼합물이다. 이는 현재 시판되고 있는 여러 약제(오스트리아(Austria)에서: Reparil(Madaus), Opino(Wabosan), Venosin(Astellas) 등)의 한 가지 성분이다. 종종, 이들 제품은 추가의 제약학적 활성 화합물, 예를 들면, 디에틸암모늄살리실산(diethylammoniumsalicylic acid), 부페닌(Buphenin)과 필수 오일(essential oil)을 함유한다. 이의 일차적 처방은 리소좀 단백질(lysosomal protein)에 대한 에스신의 저해 잠재력에 기초된 정맥 기능부전(venous insufficiency) 및 차후에, 모세혈관의 감소된 투과성(permeability)이다. 에스신으로 표준화되는 마로니에 추출물(HCE) 또는 마로니에 종자 추출물(HCSE)의 항-염증(anti-inflammatory), 항-부종(anti-oedematous)과 정맥강화(venotonic) 특성은 CVI의 전임상 모형(preclinical model) 및 이런 질환을 앓는 환자에서 폭넓게 조사되었다. 에스신 및 에스신의 화학 구조에 관하여 현재 알려진 바의 포괄적인 개관이 Sirtori, Pharmacological Research, Vol. 44 (3) 2001:183-193에서 작성되었다; 상기 개관은 상기 약물의 작용 기전과 임상적 특징에 관한 포괄적인 데이터를 담고 있다. 이 문서에 따르면, 베타-에스신이 이러한 혼합물의 활성 성분이고, 현재 가용한 주요 제약학적 제품 내에 존재하는 분자 형태이다. 베타-에스신은 본 발명에서, 에스신의 바람직한 형태이다. 이에 더하여, 에스신을 함유하는 제품은 외상성 손상(traumatic injury), 부종(edema)(뇌의 부종 포함), 혈종(hematoma), 타박상(bruises), 염좌(sprain), 건초염(tendosynovitis)과 척추(spine)의 통증에 대하여 판매가 인가되고 있다. 에스신은 또한, 소염 물질(anti-inflammatory substance)로도 알려져 있긴 하지만, 이는 상당 부분, 부종의 저해에 기인한다. 세포 수준에서 염증 반응(inflammatory response)의 저해는 지금까지 보고된 바가 없다. 에스신과 마로니에 추출물의 이용에 관한 상세한 개관은 Tiffany at al., Journal of Herbal Pharmacotherapy, Vol. 2(1) 2002:71-85에서 찾아볼 수 있다. 또한, β-에스신의 항부종 기전(anti-oedematous mechanism)은 특히, 분자 수준에서 여전히 알려져 있지 않다. 상기 분자의 작용 기전에 관한 일부 추측이 존재하긴 하지만, 명백하게 추가의 연구가 요구된다.

최근에, 쥐에서 외상성 뇌 손상후 핵 인자(nuclear factor)-κB(NF-κB)와 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor)-α(TNF-alpha)의 발현에 대한 β-에스신의 효과가 조사되었다(Xiao et al., J Zhejiang Univ SCI 2005 6B(1):28 28-32). 이들 저자는 쥐에서 외상성 뇌 손상후 조직 내에서 NF-κB 발현 수준의 현저한 감소를 발견하였는데, 이는 에스신이 외상성 뇌 손상 환자에서 유용할 수 있다는 그들의 주장을 뒷받침하였다. 에스신은 친염증성(proinflammatory) TNF-알파의 활성인자(activator)인 NF-κB를 저해할 수 있는 것으로 밝혀졌다.

다른 문헌에 따르면, 에스신은 친염증성 효과(proinflammatory effect)를 나타낸다. 가령, 이는 여러 제약학적 조합제에서 어쥬번트(adjuvant)로서 이용된다(US 7,049,063, US 7,033,827, US 6,943,236, US 6,894,146, US 6,858,204, US 6,800,746, US 6,759,515, US 6,630,305, US 6,509,448, US 6,504,010). 어쥬번트는 본질적으로 임의의 특이적인 항원 효과(antigenic effect)를 나타내지 않지만 면역계(immune system)를 자극하여 백신에 대한 반응을 증가시키는 약품이다. 따라서 에스신은 특정 조건에서 면역촉진 용도로 이용된다. 놀랍게도, 에스신은 알레르기의 증상(즉, 부종 형성 또는 가려움)을 치료하는 대신에, 면역계의 자극에 앞서 수준에서 알레르기를 치료할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 비만 세포에서 IgE/항원 복합체는 TNF-알파 방출을 자극할 것이다. 놀랍게도, 비만 세포 활성화(및 TNF-알파 방출) 역시 비만 세포에서 에스신에 의해 저해되었는데, 이는 NF-κB 경로에 의존하지 않는다. 에스신으로 치료는 상이한 경로의 선택적 항-알레르기 효과(selective anti-allergic effect)를 결과한다.

본 발명에서는 최초로, 에스신이 알레르기 질환의 치료에서, 더욱 넓게는, LPS 유도된 쇼크 반응(shock reaction)으로 예시되는 활성화된 과립구의 저해물질로서 성공적으로 이용될 수 있음이 밝혀졌다. 에스신은 예로써, 시험관내에서 면역글로불린(Immunoglobulin E, IgE)과 상응하는 항원의 복합체의 자극에 수반되는 알레르기 반응을 감소시킬 수 있다. 에스신은 일차 인간 혈액(primary human blood) 내에서 TNF-알파의 LPS-매개된 방출을 용량-의존성으로 저해한다. 더 나아가, 에스신은 생체내 모형 내에서 면역학적 쇼크(immunological shock)의 효과를 극적으로 감소시키고, 색소성 두드러기(uticaria pigmentosa)로 고통받는 환자에서 진행성 알레르기 반응을 치료하는데 효과적으로 이용되었다. 인간 T-세포주 Jurkat로 예시되는 림프구(lymphocyte) 또는 뮤린 단구성(monocytic) 세포주 DC18로 예시되는 골수성 세포는 자극(각각, IL-2 또는 TNF-알파의 방출)후 에스신에 의해 저해되지 않았다. 에스신의 분자 표적(molecular target)의 기존 가정(Xiao et al.,supra)과 대조적으로, 에스신의 항-알레르기 효과는 NF-κB와 무관하였다. 본 발명에서, 에스신은 NF-κB 경로 독립성 비만 세포(CFTL12)에서 여전히 항-알레르기 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 바람직한 구체예에 따라, 본 발명에 이용되는 제약학적 조합제는 단독 과립구-저해 성분, 바람직하게는, 단독 제약학적 활성제로서 에스신을 함유한다. 적절하게는, 알레르기 질환은 만성 질환 또는 과립구의 원치 않는 과다-반응이다. 에스신 포함 산물은 수년전부터 시판되고 있고, 우수한 안정성 프로필(safety profile)을 갖는다. 이런 이유로, 단독으로 또는 다른 약제와 조합으로 에스신의 이용은 만성 환자에 대한 매력적인 옵션이다.

특정 구체예에서, 알레르기 질환은 I형 또는 III 알레르기, 바람직하게는, 골수성 세포 또는 과립구에 의해 매개되는 I형 또는 III 알레르기, 또는 과립구의 원치 않는 반응이다.

다른 구체예에서, 약제는 바람직하게는, 알레르기성 비염, 색소성 두드러기(Urticaria pigmentosa), 아토피성 피부염, 알레르기성 천식, 식품 알레르기, 알레르기성 결막염, 장관 또는 비뇨생식기의 알레르기, 또는 귀의 알레르기에서 선택되는 알레르기 질환을 치료하는데 이용된다. 이에 더하여, 약제는 바람직하게는, 건선, 관절염, 면역 저혈소판증(immune thrombocytopenia, ITP), 자가면역성 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia, AHA), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 류머티스성 관절염(RA), I형 당뇨병, 또는 다발성 경화증과 같은 III형 알레르기 질환 또는 다른 자가면역 질환을 치료하는데 이용된다.

다른 구체예에서, 약제는 바람직하게는, 이차 세균 감염(secondary bacterial infection)에 의해 까다로운 질환을 비롯한, 과립구의 강화된 활성화로 인한 피부 질환을 치료하는데 이용된다.

적절하게는, 제약학적 조합제는 국소용 또는 점막용 조합제 형태, 바람직하게는, 피부 로션, 크림, 분말, 스프레이 또는 가글 용액이다. 에스신 조합제는 염증과 같은 과립구 매개된 질환의 피부 또는 점막 증후군을 치료하기 위한 국소 적용에 특히 적합하다. 하지만 전신(systemic), 예를 들면, 비경구(parenteral) 또는 경구(oral)(또한, 특정 점막 치료의 경우에) 역시 가능하다.

다른 구체예에서, 조합제는 경구 섭취용 형태, 바람직하게는, 방향제, 정제, 검, 마름모꼴 정제, 분말 또는 음용액 형태이다. 에스신의 전신 분배(systemic distribution)는 특히, 아나필락시스 쇼크(anaphylactic shock) 또는 폐혈성 쇼크(septic shock)와 같은 전신 과립구 활성화에 기인한 사례에서 바람직하다.

조합제는 또한, 제약학적 담체, 부형제, 바람직하게는, 중합성 부형제, 또는 보조제를 포함할 수 있다. "담체(carrier)"는 조성물과 함께 투여될 수 있는 희석제(diluent), 예를 들면, 물, 염수, 부형제(excipient), 또는 운반제(vehicle)를 지칭한다. 고형 또는 액상 조성물의 경우에, 제약학적 조성물(pharmaceutical composition) 내에서 담체 또는 보조제는 SiO₂, TiO₂, 접합제(binder), 예를 들면, 미세결정성 셀룰로오스(microcrystalline cellulose), 폴릴비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone)(폴리비돈(polyvidone) 또는 포비돈(povidone)), 검 트래거캔스(gum tragacanth), 젤라틴(gelatine), 전분(starch), 락토오스(lactose) 또는 락토오스 일수화물(lactose monohydrate), 알긴산(alginic acid), 옥수수 전분(maize starch) 등; 윤활제(lubricant) 또는 계면활성제(surfactant), 예를 들면, 스테아린산마그네슘(magnesium stearate), 또는 라우릴 황산나트륨(sodium lauryl sulphate); 활택제(glidant), 예를 들면, 콜로이드성 이산화실리콘(colloidal silicon dioxide); 감미료(sweetening agent), 예를 들면, 수크로오스(sucrose) 또는 사카린(saccharin)을 포함할 수 있다. 적절하게는, 조합제는 예로써, 구연산(citric acid), 아세트산(acetic acid), 푸마르산(fumaric acid), 염화수소산(hydrochloric acid), 말산(malic acid), 질산(nitric acid), 인산(phosphoric acid), 프로피온산(propionic acid), 황산(sulfuric acid), 주석산(tartaric acid), 또는 이들의 조합에서 선택되는 완충제(buffer) 또는 pH 조절제(adjusting agent)를 포함한다. 제약학적으로 허용되는 염(pharmaceutically acceptable salt), 예를 들면, 나트륨 염(sodium salt) 형태의 에스신 역시 이용될 수 있다. 다른 제약학적으로 허용되는 염에는 특히, 칼륨(potassium), 리튬(lithium)과 암모늄(ammonium) 염이 포함된다. 바람직한 부형제는 중합체(polymer), 특히, 셀룰로오스(cellulose)와 셀룰로오스 유도체(cellulose derivative)이다.

적절하게는, 에스신은 0.01 ㎎/환자 ㎏ 내지 500 ㎎/㎏, 바람직하게는, 0.1 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏, 가장 바람직하게는, 1 ㎎/㎏ 내지 40 ㎎/㎏ 용량으로 존재한다. 본 발명에서는 또한, 제약학적 조합제의 용도를 제시한다. 조합제의 투여는 알레르기 반응과 동시에 투여에 국한되지 않고 예로써, 예방적 치료, 다시 말하면, 알레르기 반응의 위력을 감소시키기 위하여 알레르기원에 예상된 노출 이전에 치료를 위하여 이러한 반응 전후에 이용될 수도 있다.

본 발명은 아래의 도면과 실시예에 의해 더욱 예시되지만, 이들에 한정되지 않는다.

도 1: LPS-자극된 인간 혈액 세포의 TNF-알파 생산의 저해. 인간 혈액은 지정된 농도의 에스신과 함께 배양하였다. 세포는 100 ng/㎖ LPS(Sigma)로 자극하고, 18시간 자극후, 상층액 내에서 TNF-알파는 상업적 ELISA 키트(Bender-Med-Systems)로 결정하였다. x-축은 에스신의 농도(㎍/㎖)를 제공하고, y-축은 TNF-알파의 농도(pg/㎖)를 제공한다.

도 2: IgE/항원 자극된 비만 세포로부터 TNF-알파 생산의 저해. CFTL12 비만 세포는 각각, 3.1 μM 내지 0.03 μM 범위 농도의 β-에스신 및 0.3 μM 덱사메타손과 함께 배양하였다. 60분후, 세포는 IgE/항원 복합체로 자극하였다. 세포는 6시간 동안 37℃에서 배양하고, 상층액 내에서 TNF-알파는 상업적 생쥐 TNF-알파 ELISA(Bender-Med-Systems)로 결정하였다. 오차 막대(error bar)는 4개의 독립된 웰 사이에 표준 편차(standard deviation)를 지시한다. 1, 덱사메타손; 2, 자극되지 않음; 3, IgE/항원 자극됨; 4, 3.1 μM 에스신; 5, 1 μM 에스신; 6, 0.31 μM 에스신; 7, 0.1 μM 에스신; 8, 0.031 μM 에스신; 1 및 4-8은 IgE / 항원으로 자극되었다; y-축은 TNF-알파의 농도(pg/㎖)를 제공한다.

도 3: Balb/c 생쥐(n=8)는 15 ㎎/㎏ 리포폴리사카라이드(Sigma)로 처리하였다. 생쥐는 단일 용량의 15 ㎎/㎏ β-에스신으로 동시에 처리하였다. 처리 1시간후, 생쥐는 희생시키고 혈청을 획득하였다. TNF-알파의 수준은 상업적 ELISA 키트(Bender-Med-Systems)를 이용하여 결정하였다. y-축은 생쥐 혈청 내에서 TNF-알파의 양(ng/㎖)을 반영한다. 막대 1은 운반제 처리된 생쥐를 지시하고, 막대 2는 에스신으로 처리된 생쥐의 결과를 도시한다.

도 4: 색소성 두드러기 환자의 증상 스코어: 색소성 두드러기를 앓는 1명의 49세 환자는 1.5% 에스신을 포함하는 젤로 양쪽 다리의 병든 부위를 처리하였다. 각 부위에 대한 증상 스코어를 기록하고 디지털 사진술(digital photography)로 문서화하였다. 왼쪽 다리의 치료는 0 시점에 시작하였다. 다이아몬드는 왼쪽 다리의 스코어를 지시한다. 왼쪽 다리의 놀랍도록 빠른 반응으로 인하여, 오른쪽 다리의 처리는 1시간후 시작하였다(사각형). 피부의 일부 부위는 처리 없이 방치하였다(삼각형). X-축은 치료 시작후 시점(hour)을 제공한다.

실시예 1: 에스신은 LPS 유도된 TNF-알파 방출을 저해한다.

TNF-알파는 감염과 자가면역 질환 동안 관찰되는 바와 같은 염증 과정에서 중심적인 매개인자(mediator)이다. 이는 예로써 감염에 의한 손상의 과정에서 및 알레르기 반응 동안 백혈구 세포(white blood cell), 내피(endothelium)와 여러 다 른 조직에 의해 방출된다. 이의 방출은 여러 다른 매개인자, 예를 들면, 인터루킨(interleukin) 1과 세균 내독소(bacterial endotoxin)에 의해 촉진된다. 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide)로 자극된 인간 일차 혈액 세포를 이용한 세포 기초된 검사에서는 에스신이 TNF-알파 방출을 용량-의존성으로 저해한다는 것을 증명하였다(도 1).

실시예 2: 에스신은 알레르기 자극된 비만 세포로부터 TNF-알파 방출을 예방한다.

IgE 및 상응하는 항원으로 자극된 뮤린 비만 세포는 항-알레르기 물질의 확인을 위한 지시자로서 기능하는 TNF-알파를 비롯한 여러 매개인자의 생산으로 반응한다. 에스신의 적용은 용량 의존성 방식(dose dependent manner)으로 이러한 매개인자의 방출을 감소시킨다. 최소한 50%의 TNF-알파 생산의 저해가 0.31 μM의 농도에서 관찰되었다. 30 nM의 농도에서, 이러한 저해 효과는 유의하였다. 상기 결과는 이러한 저해 효과가 대조 코르티코스테로이드 덱사메타손(corticosteroid Dexamethasone)에서 관찰되는 것만큼 효율적이지는 않지만, 에스신이 강력한 항-알레르기 특성을 나타낸다는 것을 암시한다(도 2).

실시예 3: 에스신은 면역 쇼크(immunological shock)의 효과를 모의하는 생체내 동물 모형에서 활성을 나타낸다.

생쥐에서 리포폴리사카라이드의 투여에 의한 TNF-유도는 급속한 면역 반응 및 폐혈성 쇼크에 대한 널리 확립된 모형이다. 도 3에 도시된 바와 같이, 15 ㎎/㎏의 에스신으로 생쥐의 치료는 TNF-알파 수준을 30%로 감소시킨다.

실시예 4: 알레르기 피부 반응에 기인한 색소성 두드러기 환자의 치료.

비만 세포의 과잉반응으로 유발된 특정되지 않은 알레르기 반응으로 특징되는 질환인 색소성 두드러기로 진단된 1명의 환자는 49세의 여성으로 주로 피부의 알레르기 반응과 일부 사례에서, 항히스타민제(antihistamine)와 코르티코스테로이드(corticosteroid)로 치료된 전신 증상(systemic manifestation)의 병력이 있었다. 치료에 앞서, 강한 알레르기 반응이 양쪽 다리와 손에서 넓은 부위의 피부 상에서 진행되었다. 상기 환자는 가려움(itching)과 피부 통증을 보고하였다. 피부 염증이 분명하게 관찰되었다. 증상의 심각도(severity)를 측정하기 위하여 아래의 스코어가 이용되었다: 5 = 피부의 붉어짐(redness), 가려움과 통증을 비롯한 만발 반응(full blown reaction), 개방성 상처(open wound)가 부분적으로 관찰됨; 4 = 감소된 붉어짐, 가려움 없음, 가벼운 통증, 상처 폐쇄됨, 3 = 붉어짐이 여전히 관찰됨, 통증 없음, 2 = 병들지 않은 부위에 필적하는 피부색, 증상 경미함, 1 = 병든 부위가 건강한 부위와 구별되지 않음, 상처가 치유됨, 0 = 병들지 않은 건강한 피부.

상기 환자의 양쪽 다리는 1.5% 에스신과 일부 제제 부형제를 포함하는 젤로 처리하였다. 각 부위에 대한 증상 스코어를 기록하고 디지털 사진술(digital photography)로 문서화하였다(도 4). 왼쪽 다리의 치료는 0 시점에 시작하였다. 놀랍도록 빠른 반응으로 인하여, 환자가 1시간 후에 두 번째 다리의 치료를 시작하도록 요청하였다. 이번에도, 반응은 매우 유효하였다. 왼쪽 손의 피부에서 병든 부위는 대조로서 기능하였다.

Claims

활성화된 과립구(granulocyte)에 의해 매개되거나 유발되는 질환의 치료를 위한 제약학적 조합제(pharmaceutical preparation)의 제조에서 에스신(escin)의 용도.
청구항 1에 있어서, 에스신은 베타-에스신인 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 또는 2에 있어서, 과립구는 과다활성화되는 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 3중 어느 한 항에 있어서, 질환은 알레르기 또는 알레르기의 이차 질환인 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 4중 어느 한 항에 있어서, 질환은 I형 또는 III형 알레르기, 또는 폐혈성 쇼크, 바람직하게는, I형 알레르기인 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 5중 어느 한 항에 있어서, 질환은 알레르기성 비염, 색소성 두드러기(Urticaria pigmentosa), 아토피성 피부염, 알레르기성 천식, 식품 알레르기, 알레르기성 결막염, 장관의 알레르기, 또는 귀의 알레르기에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 5중 어느 한 항에 있어서, 질환은 건선, 관절염, 면역 저혈소판증(immune thrombocytopenia), 자가면역성 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 류머티스성 관절염, I형 당뇨병, 또는 다발성 경화증에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 7중 어느 한 항에 있어서, 과립구는 호산구(eosinophil), 호중구(neutrophil), 호염기구(basophil), 또는 비만 세포(mast cell)에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 8중 어느 한 항에 있어서, 조합제는 국소용 또는 점막용 조합제 형태, 바람직하게는, 피부 로션, 크림, 분말, 스프레이 또는 가글 용액인 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 9중 어느 한 항에 있어서, 조합제는 경구 섭취용 형태, 바람직하게는, 방향제, 정제, 검, 마름모꼴 정제, 분말 또는 음용액 형태인 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 10중 어느 한 항에 있어서, 조합제는 제약학적 담체, 부형제, 바람직하게는, 중합성 부형제, 또는 보조제를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
청구항 1 내지 11중 어느 한 항에 있어서, 에스신은 0.01 ㎎/㎏ 내지 500 ㎎/㎏, 바람직하게는, 0.1 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏, 가장 바람직하게는, 1 ㎎/㎏ 내지 40 ㎎/㎏ 용량으로 존재하는 것을 특징으로 하는 용도.