KR20080114007A - 항균과 생균 활성을 가지는 신규한락토바실러스 코르니포미스 ｈｄ-０２ 균주 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항균과 생균 활성(probiotic activity)을 가지는 신규한 락토바실러스 코르니포미스 (Lactobacillus coryniformis)HD-02 균주 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 돼지 분변으로부터 항균 및 생균 활성(probiotic activity)이 우수하면서 신규한 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주를 분리하고, 상기 분리한 균주를 사용하여 유해 미생물의 오염을 방지하는 용도에 관한 것이다.
본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 젖산균으로서 생균 활성이 뛰어나며 사료의 가공 저장중에 일어날 수 있는 곰팡이의 오염을 효과적으로 방지하여 2차적인 부패 및 독성 등을 억제함으로써, 가축 생균제, 젖산균 발효유 스타터, 항균성 화장지, 기능성 사료 첨가제, 식물 병원균 방제제 등으로 널리 사용될 수 있다.
돼지 분변, 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주, 가축 생균제, 젖산균 발효유 스타터, 항균성 화장지, 사료 첨가제, 식물 병원균 방제제
Description
도 1은 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스(Lactobacillus coryniformis ) 균주의 MRS 액상배지를 이용한 성장 곡선을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 아밀라아제, 프로테아제, 셀룰라아제, 자일라나아제 및 파이타아제 활성을 MRS 고체배지 상에서 조사하여 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 내산성을 pH 2.0 ~ 5.0 범위에서 조사하여 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 내열성을 30~80℃ 범위에서 조사하여 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 내담즙산성을 다양한 염 농도에서 조사하여 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 MRS 액상배지를 이용한 대장균 생육 억제 정도를 조사하여 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 PDA 고체배지를 이용한 곰팡이 생육 억제 정도를 조사하여 나타낸 것이다.
본 발명은 항균과 생균 활성(probiotic activity)을 가지는 신규한 락토바실러스 코르니포미스 (Lactobacillus coryniformis)HD-02 균주 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 돼지 분변으로부터 항균 및 생균 활성(probiotic activity)이 우수하면서 신규한 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주를 분리하고, 상기 분리한 균주를 사용하여 유해 미생물의 오염을 방지하는 용도에 관한 것이다.
최근에 축산물 생산에 있어서, 집약적 사육 방식으로 인한 각종 병원균의 감염과 바이러스성 질병 발생을 억제하기 위하여 항생제를 과다 사용하여 항생제 내성균 발생과 잔류로 인하여 축산물의 안전성 등이 큰 문제가 되고 있다. 상기의 문제점을 해결하고 고품질 안전 축산물을 생산하기 위한 일환으로 가축에 직접 급여하는 미생물제, 즉 생균제의 사용이 증가하고 있다.
생균제를 의미하는 프로바이오틱스(probiotic)란 용어는 1965년에 릴리(Lilly)와 스틸웰(Stilwell)에 의해 제창되었으며 1975년 이후에 일반화되어 세계적으로 사용되어 오고 있다. 최근에는 인체용과 구분하여 가축에 사용하는 생균제를 DFM(Direct Fed Microbials)로 불리어지고 있다.
생균제로 이용되고 있는 균주로는 젖산균이라 불리우는 유산간균, 유산구균, 장구균, 비피더스균 등과 바실러스, 진균, 효모 등이 사용되고 있다. 특히 이들 생균제용 균주중 가축의 장내에서 서식하며 유기산을 생성하는 젖산균으로는 락토바실러스속, 류코노스톡속, 페디오코커스속, 엔테로코커스속 및 비피도박테리움속 등이 있다. 젖산균의 알려진 효과는 가축의 증체율 향상, 질병발생억제, 항생제 일부대체 효과 등이 있다. 젖산균의 경우 이와 같은 유용한 점이 있음에도 불구하고 효과에 대한 정확한 평가가 이루어지지 않는 경우가 많으며 타 젖산균을 복제하여 사용하는 것을 막을 수 있는 제도적 장치도 없는 문제점도 있다. 생균제는 가축의 소화관내에서 유용하게 작용하는 미생물제제를 의미하고, 광의의 개념으로 TMR(Total Mixed Ration, 완전배합사료) 첨가제 및 사일리지용 첨가제, 동물용 발효유 스타터로 가축에 급여 전에 사용되는 미생물도 포함된다. 또 TMR 및 사일리지는 자체적으로 수분을 35~70% 정도로 포함하고 있어 특히 여름철에 곰팡이의 발생이 유통과정상 가장 문제가 되고 있다. 종래 항곰팡이 활성을 가진 젖산균은 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) 및 락토바실러스 플랜타륨(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 델브루액키 (Lactobacillus delbruekii) 이외에는 거의 알려지지 않았다.
이에, 본 발명자들은 상기와 같은 점을 감안하여 유기산을 효과적으로 생산하는 신규한 락토바실러스속 균주를 돼지 분변으로부터 분리 및 동정하고, 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주로 명명하여 내산성, 내담즙산성, 내열성, 효소분비능, 유해세균 억제능을 평가하여 생균제로의 조건을 충족하고 TMR사료의 곰팡이 균과 곰팡이독소의 발생을 효과적으로 억제시킬 수 있는지를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 유기산의 생성능이 높으며 내산성, 내담즙산성, 내열성, 효소분비능, 유해세균 및 곰팡이의 생육 억제능이 우수한 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주를 돼지 분변으로부터 분리 및 동정하여 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 락토바실러스 코르니포미스 HD-02(Lactobacillus coryniformis HD-02)균주 또는 이 균주의 배양 여액을 사용하여 가축 생균제, 항균성 화장지, 젖산균 발효유 스타터, 사료 첨가제, 식물 병원균 방제제 등으로 사용하는 용도를 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항균과 생균 활성을 가지는 락토바실러스 코르니포미스 (Lactobacillus coryniformis)HD-02 균주(기탁번호: KCCM-10751P)를 제공한다.
또한, 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주 또는 이 균주의 배양 여액을 유효성분으로 함유하는 가축 생균제를 제공한다.
또한, 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주를 함유하는 젖산균 발효유 스타터를 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 배양 여액을 함유한 항균성 화장지를 제공한다.
더 나아가, 본 발명은 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주 또는 이 균주의 배양 여액을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제제를 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다.
이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가진다.
또한, 종래와 동일한 기술적 구성 및 작용에 대한 반복되는 설명은 생략하기로 한다.
본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 균주는 Lactobacillus coryniformis HD-02 라고 명명하고, 국제기탁기관인 한국 미생물 보존 센터(Korean Culture Center of Microorganisms)에 동균주(Lactobacillus coryniformis HD-02)를 2006년 05월 01일로 수탁하여 기탁번호 KCCM-10751P를 부여받았다.
또한, 본 발명은 돼지분변으로부터 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 균주를 분리하는 방법을 제공한다.
본 발명의 락토바실러스 코르니포미스(Lactobacillus coryniformis HD-02) 균주는 유해 미생물의 오염을 방지하는 용도를 제공한다. 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 대장균(Escherichia coli)을 포함하는 미생물의 2차적 오염을 효과적으로 방지한다. 이때, 유해 미생물로는 대장균 이외에도 병원성을 가지는 모든 미생물을 포함할 수 있다.
본 발명은 상기 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주 또는 이 균주의 배 양 여액을 유효 성분으로 하는 가축 생균제를 가축 사료에 첨가하여 가축 사료 첨가제로 사용하는 것이 바람직한데, 구체적으로 TMR(완전배합사료) 또는 사일리지 사료에 첨가하여 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 배양 여액을 원액 또는 물로 희석한 후, 통상의 화장지 제조 공정에서 생산되는 화장지에 분무하여 항균성을 부여한 화장지를 제공할 수 있게 하는데, 구체적으로 펄프 가공- 권취- 절단- 포장 공정에서 권취 공정 이후에 상기 배양 여액의 원액 또는 희석액을 분무하여 화장지를 제조하는 것이 바람직하다.
하지만, 본 발명이 상술한 항균성 화장지의 제조방법으로 국한되는 것은 아니며 화장지 제조 방법이나 조건 등에 따라 변경될 수 있으며, 이는 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 자명한 사항으로 구체적인 설명은 생략하기로 한다.
그리고, 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주 또는 이 균주의 배양 여액은 식물 병원균 방제제로 사용할 수 있는데, 특히 잔디나 농작물 재배에 피해를 주는 식물 병원성 균주인 라이족토니아 솔라니, 라이족토니아 세레아리스 및 파시움속에 대한 우수한 방제 효과를 나타낸다. 하지만, 본 발명에 따른 식물 병원균 방제제는 상술한 식물 병원균의 방제 효과로 국한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 구체적인 실시예에 의해 보다 더 상세히 설명하고자 한다. 하지만, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 사상과 범위 내에서 여러가지 변형 또는 수정할 수 있음은 이 분야에서 당업자에게 명백한 것이다.
[
실시예
1]
돼지분변으로부터
락토바실러스
속
균주의 분리 및 동정
본 실시예는 돼지분변으로부터 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.）미생물을 분리하기 위하여, 돼지분변 시료를 0.02% 소디움 아자이드(NaN3） 가 포함되어 있는 MRS 아가 평판배지에 도말하고, 37℃에서 24시간 동안 배양하여 젖산균으로 추측되는 13개의 균주를 1차적으로 선발하였다.
상기에서 선발된 균주를 이용하여 다시 콜로니(colony) 형태 및 그램 양성 등을 기준으로 하여 2차적으로 5개의 균주를 분리하였다. 이들 중 생육이 뛰어난 1개 균주를 분리한 다음, API 50 CHL 키트 (바이오메리우, 프랑스)를 사용하여 당 발효 실험을 수행하고 락토바실러스 속 균주로 동정하였다.
이의 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
이와 같이 선택한 락토바실러스 속 균주는 다시 3 ~ 4회 걸친 계대 배양으로 활성화시켰다. 상기 균주는 MRS 배지를 사용하여 배양하였고, 37℃에서 24시간 동안 배양하여 다음 실험을 위하여 글리세롤 저장법 (glycerol stock)으로 보존하였다.
구체적으로, 본 발명에서 분리한 락토바실러스 속 균주는 통상의 혐기성 균주이면서 그램 양성 구균인 것으로 확인되었다. 또한, 이 락토바실러스 속 균주 중에서도 락토바실러스 코르니포미스(Lactobacillus coryniformis)(99.9%)인 것으로 확인되었다.
또한, 상기 락토바실러스 속 균주로부터 DNA를 추출하여 27F 프라이머(AgAgTTTgATCMTGGCTCAg)와 1492R 프라이머(TACggYTACCTTgTTACgACTT)를 이용하여 94℃에서 45초, 55℃에서 60초, 72℃에서 60초로 된 35 사이클의 PCR(중합효소 연쇄반응)을 통해 증폭하고 PC컴퓨터에서 BLAST라는 프로그램을 이용하여 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과, 서열번호 1에 표시한 바와 같이 락토바실러스 속 균주의 1,360개의 염기 서열이 락토바실러스 코르니포미스 균주와 상동성(similarity)이 가장 높은 것으로 다시 확인되었다.
따라서, 본 발명의 락토바실러스 속 균주는 미생물 제제로서 사용할 수 있는 안전성이 탁월한 젖산균인 것을 알 수 있었다.
또한, 본 발명에서 분리 및 동정한 락토바실러스 속 균주는 락토바실러스 코르니포미스 HD-02라 명명하고, 이를 2006년 5월 1일자로 국제기탁기관인 한국 미생물 보존 센터에 수탁하여 기탁번호 KCCM-10751를 부여받았다.
[
실시예
2]
락토바실러스
코르니포미스
HD-02
균주의 성장 특성 조사
본 실시예는 상기 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 성장 곡선을 조사하기 위하여, MRS 액상배지를 사용하여 ７리터 발효기(Jar fermenter)에서 pH를 조절하지 않고 37℃에서 48시간 동안 배양하였다.
또한, 상기 락토바실러스 속 균주의 총 생균수를 측정하기 위하여, 6시간 가격으로 배양액을 채취하여 0.85% NaCl 용액을 사용하여 10배씩 연속적으로 희석시킨 다음 MRS 아가 평판배지에 0.1 mL씩 분주하여 도말하였다. 도말한 평판배지를 37℃에서 24시간 동안 배양하고 이로부터 콜로니 형성 단위 (colony forming unit)를 측정하였다.
상기 락토바실러스 속 균주의 최적의 성장 조건을 조사한 결과, 도 1에 도시한 바와 같이, 12시간 동안 배양하였을 때 4.3×1010 CFU/ml로 최고점, 즉 정상기에 이르는 것으로 조사되었다. 하지만, 대수기인 6시간부터 12시간 사이의 균주를 회수하여 사용하는 것이 미생물 제품화의 측면에서 바람직할 것으로 판단되었다.
실시예
3.
락토바실러스
코르니포미스
HD-02 균주의 효소 생성 조사
본 발명은 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 효소 생성 여부를 조사하기 위하여, 상기 균체를 하기 표 2에 나타낸 바와 같이 검색 배지를 이용하여 나타나는 투명환(clear zone)의 유무로 특정 효소의 분비 여부를 검사하였다. 이때, 파이타아제 검색 배지는 표 3과 같이 조성하여 검사하였다. 구체적으로, 프로테아제(protease), 자일라나아제(xylanase) 및 파이타아제(phytase)는 상기 균체 배양 직후 바로 투명환의 유무를 확인하였고, 셀룰라아제(cellulase)의 경우는 0.2%(w/v) 콩고 레드(congo red)액으로 염색하고 1 M NaCl 로 씻어 내어 투명환을 확인하였다. 또한, α-아밀라제(α-amylase)의 경우는 0.2%(w/v) I2 와 4%(w/v) KI를 포함하는 용액으로 염색하여 투명환의 생성 여부를 확인하였다.
이의 결과 도 2에 도시한 바와 같이, 각 효소의 기질로 첨가한 검색 배지 상의 투명환의 크기로 볼 때, 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 자일라나아제를 제외하고 아밀라아제와 셀룰라아제, 프로테아제, 파이타아제의 활성을 포함하고 있는 것으로 나타났다. 특히, 아밀라아제 및 셀룰라아제, 프로테아제의 활성이 탁월하여 사료용 생균제로 사용할 수 있음을 확인할 수 있었다.
[
실시예
4]
락토바실러스
코르니포미스
HD-02 균주의
내산성
, 내열성 및 내
담즙산성
특성 조사
본 발명은 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 다양한 특성을 조사하기 위하여, 먼저 상기 균체를 MRS 배지에 1% 되도록 접종하고 37℃에서 24시간 동안 배양한 다음 0.1 N HCl 을 사용하여 pH 5.0, 4.0, 3.0 및 2.0에서 30분 동안 정치시키고 잔존한 미생물 수를 측정하여 내산성 여부를 조사하였다.
또한, 상기 균체를 배양하고 그 배양액을 각각 30℃, 40℃, 50℃ 및 60℃에서 10분 동안 정치시킨 다음 생존한 미생물 수를 측정하여 내열성을 분석하였다. 또한, 담즙 염 (bile salt)을 각각 0, 0.1, 0.3, 0.5 및 1%(w/v) 농도로 첨가한 MRS 배지에 상기 균주를 접종하고 37℃에서 6시간 동안 방치한 다음 각 배지 0.1 mL 을 MRS 고체 배지에 도말하여 나타난 미생물 수를 측정하여 내담즙산성을 조사하였다.
이의 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 pH 2에서는 사멸하지만, pH 3 에서도 1.1× 106 CFU/ml의 균수가 측정되었으므로 활용이 가능하다고 판단되었다. 또한, 도 4 에 나타난 바와 같이 60℃에서도 1.0×104 CFU/ml의 균수가 측정되어 내열성도 있는 것으로 확인되었다. 또한, 도 5에 도시한 바와 같이 담즙 염 1% 에서도 높은 생균수를 나타내어 내담즙산성이 우수한 것으로 조사되었다.
[
실시예
5]
락토바실러스
코르니포미스
HD-02 균주의 대장균 생육 억제 효과 조사
본 발명은 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 대장균 생육 억제 효과를 조사하기 위하여, 대장균 생육억제 효과를 측정하기 위해 사용할 균주인 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 및 대장균(Escherichia coli, KCTC1041)를 각각 해당되는 액상배지(broth)를 사용하여 24시간 동안 배양하였다. 이 때 Nutrient broth 에는 대조군인 대장균만 접종하고, MRS broth에는 락토바실러스 속 균주 함께 대장균을 각각 1% 씩 혼합 접종하였다. 접종된 액상 배지를 37℃에서 150 rpm으로 진탕 배양하면서 3시간 간격으로 배양액을 채취하였고, 이렇게 얻은 채취액은 다시 멸균 생리식염수로 10배씩 단계별 희석하여 Nutrient 아가 평판배지에 도말하였다. 이 배지를 37℃에서 24시간 동안 배양하여 나타난 군락으로부터 대장균 수를 측정하여 대장균 생육 억제 정도를 조사하였다.
이의 결과 도 6에 도시한 바와 같이, 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 12시간 만에 대장균을 완전히 사멸시키는 것을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 대장균의 생육 억제 효과가 우수하여 항균 효능을 입증할 수 있었다.
[
실시예
6]
락토바실러스
코르니포미스
HD-02 균주의 곰팡이 생육 억제 효과 조사
PDA고체배지에 paper disk를 올려놓고 MRS배양액(본균을 107 CFU/ml 함유)을 50ul를 첨가하고 대조구에는 본 균이 없는 MRS배양액을 첨가하고 또 다른 반대편에는 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani) AG-1 KACC40101, 라이족토니아 세레아리스(Rhizoctonia cerealis) KACC40153, 피시움 속(Pythium sp.) KACC40581, 실린드로카르폰 데스트룩탄스(Cylindrocarpon destructans) KACC41077, 리조푸스 속(Rhizopus sp.) KACC6942, 아스퍼질러스 파라스티쿠스(Aspergillus parasticus) KACC41862 등의 피검균종 곰팡이 포자를 첨가하여 30℃에 2일간 배양하였다. 그런 다음, 배양 후 처리구와 대조구를 비교하여 곰팡이 증식저지 작용에 대하여 판정하였다.
이의 결과, 도 7에 도시한 바와 같이 잔디와 작물 질병의 원인균인 라이족토니아 솔라니와 라이족토니아 세레아리스 균주와, 피시움 속에 대해서 특히 강한 저지작용을 나타냄을 알 수 있었다.
[
실시예
6]
락토바실러스
코르니포미스
HD-02 균주를 포함한
TMR
사료의 특성과 곰팡이 및 곰팡이독소 생성 억제 효과 조사
본 발명의 균주를 가축용 사료에 첨가하여 가축용 사료의 곰팡이 번식을 방제할 수 있는 지에 대하여 다음과 같은 조건 하에서 시험하였다.
TMR 제조는 하기 표 4의 구성 성분별 조성비로 나타낸 원료에 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주를 포함하는 액상 미생물을 0.1% 첨가하여 제조하였고, 각 처리별로 1kg의 시료를 1mm 두께의 비닐백에 넣은 후 밀봉상태로 저장하였다. 이때, 시료의 저장은 평균온도가 10℃되는 실내에서 하였으며, 저장기일은 14일로 하였다.
그리고, 저장 후 1일, 3일, 5일, 7일, 14일째에 시료를 채취하여 외관적 상태, 미생물수와 아플라톡신(Aflatoxin B1)량을 조사하였다.
이중, 아플라톡신 B1의 분석은 먼저, 사료를 100g 분쇄하고 그 중 20g을 취하여 80% 메탄올 용액 60㎖를 가하여 혼합하였다. 그리고, 약 3분간 호모게나이저로 균질화시킨 후 와트만 여과지(No.1)로 여과한 여액을 시료용액으로 하였다. ELISA plate의 well에 음성대조구, 각 표준품, 시료를 각각 2개씩 50㎕분주하였다. 각 well에 중합(conjugate) 시약 50㎕를 가하고 20분간 방치하였다. 그리고, well의 내용물을 버리고 세정 완충액을 첨가한 후 5∼10초 후 well을 뒤집어 세정 완충액을 버리는 것을 4회 반복하고 마지막 세척 후에는 paper towel위에 여러 번 쳐서 세정 완충액을 완전히 없앤 후 기질/발색약 혼합용액 100㎕를 각각의 well에 투입하여 상온에서 20분간 방치하고, 각각의 well에 반응정지액을 50㎕식 투입한 후 450nm에서 ELISA reader(EL 310, Neogen CO.)로 결과를 측정하였다. 이때, 아플라톡신 B1의 분석은 경쟁형의 ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)를 적용한 키트 (Transia Plate, 프랑스 Diffchamb)를 사용하였다.
이의 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
TMR사료를 제조후 0, 1, 3, 7, 14일 간격으로 시료를 취하여 측정하였을 때, 수분은 전구간 약 36%로 동일하게 유지하였으며 pH는 5.97, 5.72, 4.76, 4.32, 4.25로 각각 낮아져 TMR사료로 적합한 것으로 나타났다(미도시).
유산균수는 0.1% 락토바실러스 코르니포미스 첨가구의 TMR사료는 초기에 3.5×105 CFU/g 이던 것이 시간이 지남에 따라 증가하여 7일 후 6.2×109 CFU/g로 최대 성장을 나타냈고 14일 후 까지 같은 수준을 유지하고 있음을 알 수 있었다.
대장균은 초기에 4.5×103 CFU/g 이던 것이 락토바실러스 코르니포미스를 첨가하지 않은 경우는 점점 증가하여 9.1×106 CFU/g로 증가한 반면, 본 발명의 락토바실러스 로크니포미스를 첨가한 경우에는 3일 이후 대장균이 모두 사멸되었다.
곰팡이수는 락토바실러스 코르니포미스를 첨가하지 않은 경우는 초기에 3.1×103 CFU/g 이던 것이 14일 후에 8.4×105 CFU/g로 증가였고 첨가한 경우는 완전히 사라지지는 않았으나 1.8×103 CFU/g로 나타나 증식이 억제된 것으로 확인되었다.
또한, 사료에 생성되는 곰팡이 독소인 아프라톡신 B1의 사료속 잔존량을 측정하였을 때 락토바실러스 코르니포미스를 첨가한 경우 초기에 2.0 ppb 이던 것이 14일 후에 0.6 ppb로 나타나 곰팡이의 생성억제에 비례하여 아프라톡신 B1의 량도 증가하지 않는 것으로 나타났다.
상술한 바와 같이, 본 발명은 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주는 젖산균으로서 생균 활성이 뛰어나며 사료의 가공 저장중에 일어날 수 있는 곰팡이의 오 염을 효과적으로 방지하여 2차적인 부패 및 독성 등을 억제함으로써, 가축 생균제, 젖산균 발효유 스타터, 항균성 화장지, 기능성 사료 첨가제, 식물 병원균 방제제 등으로 널리 사용할 수 있게 되었다.
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<213> Lactobacillus coryniformis HD-02
<400> 1
ctggcggcgt gcctaataca tgcaagtcga acgcactgac gtcgaccgaa gctgcttgca 60
gtggacgttg attgacgtga gtggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctaccctta 120
agtgggggat aacatttgga aacagatgct aataccgcat aaccattcag accacatggt 180
ctgaatgtaa aagacggcct ttggctgtca cttttggacg gacccgcggc gtattagtta 240
gttggtaagg taacggctta ccaagacaat gatacgtagc cgacctgaga gggtaatcgg 300
ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc 360
acaatggacg aaagtctgat ggagcaacgc cgcgtgagtg aagaaggttt taggatcgta 420
aaactctgtt gttggagaag aacagggact agagtaactg ttagtccttt gacggtatcc 480
aaccagaaag ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg 540
ttgtccggat ttattgggcg taaagcgagc gcaggcggtt ttttaagtct gatgtgaaag 600
ccttcggctt aaccgaagaa gtgcattaga aactgggaaa cttgagtgca gaagaggaca 660
gtggaactcc atgtgtagcg gtgaaatgcg tagatatatg gaagaacacc agtggcgaag 720
gcggctgtct ggtctgtaac tgacgctgag gctcgaaagt atggggagcg aacaggatta 780
gataccctgg tagtccatac cgtaaacgat gaatgctaag tgttggaggg tttccgccct 840
tcagtgctgc agctaacgca ttaagcattc cgcctgggga gtacgaccgc aaggttgaaa 900
ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa 960
cgcgaagaac cttaccaggt cttgacatcc tttgaccact gtagagatac agctttccct 1020
tcggggacaa agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg 1080
ttaagtcccg caacgagcgc aacccttatg actagttgcc agcatttagt tgggcactct 1140
agtaagactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc agcatgcccc 1200
ttatgacctg ggctacacac gtgctacaat ggtcggtaca acgagttgcg aacccgcgag 1260
ggtaagctaa tctcttaaag ccgatctcag ttcggattgt aggctgcaac tcgcctacat 1320
gaagccngga atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc 1360
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 27F primer
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agagtttgat cmtggctcag 20
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1492R primer
<400> 3
tacggytacc ttgttacgac tt 22
Claims (6)
- 항균과 생균 활성을 가지는 락토바실러스 코르니포미스 (Lactobacillus coryniformis)HD-02 균주(기탁번호: KCCM-10751P).
- 제 1 항 기재의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주 또는 이 균주의 배양 여액을 유효성분으로 함유하는 가축 생균제.
- 제 2 항에 있어서,TMR 및 사일리지에 첨가하여 사료 첨가제로 사용하는 것을 특징으로 하는 가축 생균제.
- 제 1 항 기재의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주를 함유하는 젖산균 발효유 스타터.
- 제 1 항 기재의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주의 배양 여액을 함유한 항균성 화장지.
- 제 1 항 기재의 락토바실러스 코르니포미스 HD-02 균주 또는 이 균주의 배양 여액을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제제.
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2007
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