KR20080095895A

KR20080095895A - Ｎ―포르밀 히드록실아민 화합물

Info

Publication number: KR20080095895A
Application number: KR1020087021464A
Authority: KR
Inventors: 광호 이; 제니퍼 리즈
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2006-03-03
Filing date: 2007-03-02
Publication date: 2008-10-29
Also published as: ECSP088712A; CN101395148A; US20090062537A1; MX2008011128A; WO2007106670A2; MA30285B1; JP2009529008A; NO20084069L; IL193524A0; AU2007226715A1; TNSN08344A1; WO2007106670A3; RU2008139192A; BRPI0708524A2; GT200800170A; EP1994027A2; CR10251A; ZA200807054B; CA2643267A1

Abstract

본 발명은 신규 N-포르밀 히드록실아민 화합물 및 그의 유도체를 개시하고 있다. 이들 N-포르밀 히드록실아민 화합물은 원핵생물에 존재하는 효소인 펩티딜 데포르밀라제 (PDF)를 억제한다. 이 화합물은 항미생물제 및 항생제로서 유용하다. 본 발명의 화합물은 MMP와 같은 여타의 메탈로프로테이나제에 대하여 펩티딜 데포르밀라제의 선택적 억제를 나타낸다. 화합물의 제조 방법 및 용도 또한 개시하고 있다.

Ｎ―포르밀 히드록실아민, 펩티딜 데포르밀라제, 세균성 감염

Description

Ｎ―포르밀 히드록실아민 화합물 {N-FORMYL HYDROXYLAMINE COMPOUNDS}

본 발명은 신규 N-포르밀 히드록실아민 화합물, 세균성 감염의 치료와 같이 펩티딜 데포르밀라제(peptidyl deformylase) 억제제에 의해 치료가 용이한 장애의 치료를 비롯한 다양한 의약적 용도에 있어서 이들 화합물의 용도, 및 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

숙주 유기체의 미생물 감염의 치료에는 가능한 한 숙주에게 적은 해를 끼치면서 미생물을 사멸시키는 효과적인 수단이 요구된다. 따라서, 병증-유발 미생물에 대한 고유 특성들을 표적화하는 작용제가 치료에 바람직하다.

펩티드 데포르밀라제는 세균과 같은 원핵생물 유기체에서 발견되는 메탈로펩티다제이다. 원핵생물 유기체에서의 단백질 합성은 N-포르밀 메티오닌 (fMet)으로 시작한다. 단백질 합성 개시 후, 포르밀기는 효소 펩티드 데포르밀라제 (PDF)에 의해 제거되며, 이러한 활성은 단백질의 성숙에 필수적이다.

메탈로프로테이나제는 정상 대사의 많은 측면에 있어서 중요하다. 메탈로프로테이나제와 관련된 장애는 여러 질환, 예컨대, 암, 관절염 및 자가면역질환과 관련되어 있다. 정상적인 생리 과정에서의 MMP의 중요성 때문에, MMP의 현저한 억제를 방지하면서 PDF를 억제하는 작용제를 개발하는 것이 바람직할 것이다. 다르 게는, MMP도 억제하는 PDF 억제제를, PDF를 억제하는 치료적 잇점이 MMP 억제로 인한 부작용의 위험을 능가하는 경우에 사용할 수 있다.

PDF의 억제제에 대한 연구는 MMP의 억제제에 대한 연구보다 훨씬 덜 광범위하다. N-포르밀 히드록실아민 유도체가 국제 특허 출원 WO 99/39704호 및 WO 02/102790호에 기재되어 있다. 기존의 항생제에 대해 내성인 세균을 치료하기 위한 새로운 항생제를 확인하는 것이 중요하다는 점에서, 항균제 및 항미생물제로서 평가 및 사용하기 위한 PDF의 신규 억제제를 개발하는 것이 바람직하다. 본 발명은 이러한 요구를 충족시킨다.

특히, 본 발명은 N-포르밀 히드록실아민 유도체 (본원에서 총괄적으로, "본 발명의 화합물"로 지칭함), 그의 염 또는 전구약물, 예를 들어, 하기 화학식 I의 화합물, 그의 염 또는 전구약물을 제공한다.

상기 식에서,

R1은 수소, 알킬, 헤테로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이고;

R3는 수소, 할로겐 또는 알콕시이고;

R4는 아릴 또는 헤테로아릴이고;

n은 0 내지 3이다.

하나의 측면에서, R4는 하기 화학식 II의 헤테로아릴이다.

상기 식에서, R₆, R₇, R₈ 및R₉은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 페닐, 할로겐, 히드록시 또는 알콕시이며, 예를 들어,

a.) R₆ 및R₈은 수소이고, R₉은 수소 또는 알킬이며, R₇은 알킬, 치환된 알킬 또는 페닐이거나;

b.) R₆, R₇ 및R₉은 수소이고, R₈은 할로겐, 알킬 또는 치환된 알킬이거나;

c.) R₇, R₈ 및R₉은 수소이고, R₆는 히드록실이다.

특히 유용한 측면에서, 상기 헤테로아릴은 하기 화학식 II1이다.

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₉은 화학식 II에서 앞서 정의한 바와 같고, R₈은 할로겐, 예를 들어, 플루오로이다.

또 다른 측면에서, R4는 하기 화학식 II2이다.

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 상기 화학식 II에서 앞서 정의한 바와 같다.

또 다른 측면에서, R4는 하기 화학식 II3이다.

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 화학식 II에서 앞서 정의한 바와 같다.

또 다른 측면에서, R4는 하기 화학식 II4이다.

또 다른 측면에서, R4는 하기 화학식 II5이다.

또 다른 측면에서, R₄는 하기 화학식 III의 헤테로아릴이다.

d.) 상기 식에서, R₆, R₇, R₈ 및 R₉은 화학식 II에서 앞서 정의한 바와 같다.

달리 언급하지 않는다면, 본 명세서에서 사용되는 하기 용어는 다음의 의미를 갖는다.

용어 "시클로알칸" 또는 "시클로알킬"은 3 내지 7개의 고리 탄소 원자를 함유하고, 바람직하게는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실이다.

용어 "지방족기"는 포화 또는 불포화 지방족기, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 직쇄, 분지쇄 및 시클릭 기를 비롯한 알킬, 알케닐 또는 알키닐, 시클로알킬 또는 치환된 알킬을 지칭한다. 용어 "알킬" 또는 "알크"는, 어느 경우에 나, 탄소 원자수 1 내지 10의 포화된 직쇄 또는 분지쇄 지방족 기 또는 탄소 원자수 3 내지 10의 시클로알킬이고, 보다 바람직하게는, 알킬기는 C₁-C₇알킬, 특히 C₁ _-C₄알킬이다. "알킬" 또는 "알크"의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥실 또는 n-헵틸, 시클로프로필, 특히 n-부틸이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

용어 "치환된 알킬"은 할로겐, 저급 알콕시, 히드록시, 메르캅토, 카르복시, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 등과 같은 치환기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 1개 이상의 치환기, 바람직하게는 1 내지 3개의 치환기로 치환된 알킬기를 지칭한다. 치환된 알킬기의 예로는 -CF₃, -CF₂-CF₃, 히드록시메틸, 1- 또는 2-히드록시에틸, 메톡시메틸, 1- 또는 2-에톡시에틸, 카르복시메틸, 1- 또는 2-카르복시에틸 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

용어 "아릴" 또는 "Ar"은 단일 고리 (페닐과 같은 기를 포함하나, 이에 제한되지는 않음) 또는 다중 축합 고리 (나프틸 또는 안트릴과 같은 기를 포함하나, 이에 제한되지는 않음)를 갖는 탄소 원자수 6 내지 14의 방향족 카르보시클릭 기를 지칭하며, 특히 페닐이다.

용어 "헤테로아릴" 또는 "HetAr"은 4- 내지 7-원 모노시클릭 방향족 헤테로사이클, 또는 4- 내지 7-원 모노시클릭 방향족 헤테로사이클 및 이에 융합된 벤젠 고리로 이루어진 비사이클을 지칭한다. 헤테로아릴은 고리 내에 N, O 및 S와 같은 헤테로원자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 헤테로 원자, 바람직하 게는 2개 이상의 헤테로원자를 갖는다. 바람직한 헤테로아릴 잔기는 고리 내에 2, 3 또는 4개의 질소 헤테로원자를 갖는 6원 모노시클릭 헤테로사이클이다. 헤테로아릴기의 예는 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 피리다지닐 N-옥시드 또는 벤즈디옥솔라닐, 트리아진 또는 테트라진이다.

아릴 또는 헤테로아릴은 치환되지 않거나, C₁ _- ₇알킬, 특히 C₁ _-4 알킬, 예컨대 메틸, 히드록시, 알콕시, 아실, 아실옥시, SCN, 시아노, 니트로, 티오알콕시, 페닐, 헤테로알킬아릴, 알킬술포닐, 할로겐 및 포르밀을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 치환기에 의해 치환될 수 있다.

용어 "헤테로알킬"은 앞서 정의한 바와 같은 포화 또는 불포화 C₁ _-8 알킬, 특히, 기 내에 주쇄, 분지쇄 또는 고리쇄의 일부로서 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 C₁ _-4 헤테로알킬을 지칭한다. 헤테로원자는 독립적으로 -NR- (여기서, R은 수소 또는 알킬임), -S-, -O- 및 -P-, 바람직하게는 -NR- (여기서, R은 수소 또는 알킬임) 및/또는 -O-로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 헤테로알킬기는 헤테로원자 (원자가가 가능한 경우) 또는 탄소 원자에서 분자의 나머지 부분에 결합될 수 있다. 헤테로알킬기의 예로는 -0-CH₃, -CH₂-O-CH₃, -CH₂-CH₂-O-CH₃, -S-CH₂-CH₂-CH₃, -CH₂-CH(CH₃)-S-CH₃ 및 -CH₂-CH₂-NH-CH₂-CH₂-와 같은 기가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

헤테로알킬기는 치환되지 않거나, 알킬, 할로겐, 알콕시, 히드록실, 메르캅 토, 카르복시, 및 특히 페닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 치환기, 바람직하게는 1 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다. 상기 기의 탄소 원자 뿐만 아니라 헤테로원자(들)도 치환될 수 있다. 헤테로원자(들)는 산화된 형태일 수도 있다.

본원에서 사용되는 용어 "알콕시"는 산소 원자에 결합된 C₁ _-10 알킬, 바람직하게는 C₁ _-7 알콕시, 보다 바람직하게는 C₁ _-4 알콕시를 지칭한다. 알콕시기의 예로는 메톡시, 에톡시, n-부톡시, tert-부톡시 및 알릴옥시와 같은 기가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 염소, 브롬, 불소, 요오드를 지칭하며, 특히 불소이다.

"보호기"는 하기 특징을 나타내는 화학기를 지칭한다.

1) 목적하는 관능기와 양호한 수율로 선택적으로 반응하여, 보호가 요구되는 계획된 반응에 대해 안정한 보호된 기질을 제공하고; 2) 목적하는 관능기를 제공하기 위해, 보호된 기질로부터 선택적으로 제거 가능하고; 3) 상기 계획된 반응에서 존재하거나 생성되는 다른 관능기(들)와 상용성인 반응물에 의해 양호한 수율로 제거가 가능하다. 적절한 보호기의 예는 문헌 [Greene et al., "Protective Groups in Organic Synthesis", 2nd Ed., John Wiley ＆ Sons, Inc., New York (1991)]에서 찾을 수 있다. 바람직한 아미노 보호기로는 벤질옥시카르보닐 (CBz), t-부틸-옥시카르보닐 (Boc), t-부틸디메틸실릴 (TBDMS), 9-플루오레닐메틸-옥시-카르보닐 (Fmoc) 또는 적절한 광불안정(photolabile) 보호기, 예컨대 6-니트로베라트릴옥시 카르보닐 (Nvoc), 니트로피페로닐, 피레닐메톡시카르보닐, 니트로벤질, 디메틸 디메톡시벤질, 5-브로모-7-니트로인돌리닐 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 히드록시 보호기로는 Fmoc, TBDMS, 광불안정 보호기 (예컨대, 니트로베라트릴 옥시메틸 에테르 (Nvom)), Mom (메톡시 메틸 에테르) 및 Mem (메톡시 에톡시 메틸 에테르)이 포함된다. 특히 바람직한 보호기로는 NPEOC (4-니트로펜에틸옥시카르보닐) 및 NPEOM (4-니트로펜에틸옥시-메틸옥시카르보닐)이 포함된다.

화학식 I의 화합물이 광학이성질체, 라세메이트 또는 부분입체이성질체의 형태로 존재할 수 있다는 것이 인지될 것이다. 예를 들어, R3가 R- 또는 S- 배위로 존재할 수 있는 화학식 I의 화합물이 있다. 본 발명이 모든 거울상이성질체 및 그들의 혼합물을 포함함은 물론일 것이다. 언급된 바와 같이 비대칭 탄소 원자를 나타내는 출발 물질과 관련하여 유사하게 고려한다.

본 발명의 화합물은 고체 결정질 염의 형태로 존재할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 염은 금속염이고, 일부 화합물에 있어서는 Na과 같은 단원자가 카운터 이온을 사용함으로써 결정질 고체를 형성하는 것도 가능하지만, 바람직하게는 2가 금속염이다. 카운터 이온은 바람직하게는 Mg, Ca 또는 Zn이다.

본 발명의 화합물은 전형적으로 수화물 또는 혼합된 용매화물/수화물의 형태일 수 있다. 전형적으로, 본 발명의 결정질 염은 약 2 내지 8 분자의 수화수, 보다 전형적으로 약 2 내지 6 분자의 수화수, 보다 더 전형적으로 약 2 내지 4 분자의 수화수를 함유한다. 따라서, 본 발명의 결정질 염은 전형적으로 수분 2％ 초 과, 보다 전형적으로 수분 약 4 내지 약 12％, 보다 더 전형적으로 수분 약 8 내지 약 9％를 포함한다. 용매화물은 1종 이상의 유기 용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 또는 이들의 혼합물과 같은 저급 알킬 알코올의 용매화물일 수 있다.

본 발명의 화합물, 예를 들어, 화학식 I의 화합물은 유리 형태 또는 염 형태, 예를 들어, 제약상 허용가능한 염 형태로 존재할 수 있다. 화합물의 "제약상 허용가능한 염"이란 원하는 모 화합물의 약리 활성을 가지고, 원치않는 독성학적 효과를 주지 않는 생리적 및 제약상 허용가능한 염을 의미한다. 이러한 염은 다음을 포함한다.

(1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되는 산부가염; 또는 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 시클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄-디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 4-클로로벤젠-술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 4-톨루엔술폰산, 캠포술폰산, 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 3급 부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프톤산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 같은 유기산으로 형성되는 산부가염; 또는

(2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온, 알칼리 토류 이온 또는 알루미늄 이온에 의해 대체되거나, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등과 같은 유기 염기와 배 위결합 하는 경우에 형성되는 염.

본 발명의 화합물, 예를 들어 화학식 I의 화합물은 전구약물로서 작용할 수 있다. "전구약물"이란 포유동물 대상체에 투여되는 경우, 생체내에서 화학식 I에 따른 활성 모 약물이 방출되는 임의의 화합물을 의미한다. 화학식 I의 화합물의 전구약물은 생체내에서 변형물이 분해되어 모 화합물을 방출하도록 화학식 I의 화합물에 존재하는 관능기를 변형시킴으로써 제조된다. 전구약물은 히드록시, 아미노 또는 술프히드릴 기가 생체내에서 분해될 수 있는 임의의 기에 결합하여 각각 유리 히드록실, 아미노 또는 술프히드릴 기를 재생시키는, 화학식 I의 화합물을 포함한다. 전구약물의 예로는 화학식 I의 화합물의 히드록시 관능기의 에스테르 (예를 들어, 아세테이트, 포르메이트 및 벤조에이트 유도체), 카르바메이트 (예를 들어, N,N-디메틸아미노-카르보닐) 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

화학식 I의 화합물에서, 하기 의미는 개별적으로 또는 임의의 하위조합으로서 바람직하다.

1. R4는 화학식 II1의 헤테로아릴 (여기서 R₆, R₇ 및 R₉은 수소이고, R₈은 플루오로이거나; R₆, R₇ 및R₉은 수소이고, R₈은 메틸 또는 트리플루오로메틸이거나; R₆, R₇ 및R₈은 수소이고, R₉은 플루오로이거나; R₆, R₈ 및R₉은 수소이고, R₇은 에틸 또는 메톡시이거나; R₇, R₈ 및R₉은 수소이고, R₆는 히드록시이거나; R₇ 및R₈은 수소이고, R₆는 메톡시이고, R₉은 메틸임)이거나; R4는 화학식 II2의 헤테로아릴 (여기 서, R₆, R₇ 및R₈은 수소임)이거나; R4는 화학식 II3의 헤테로아릴 (여기서, R₆, R₇ 및R₈은 수소임)이거나; R4는 화학식 II4의 헤테로아릴 (여기서, R₆, R₇ 및R₈은 수소임)이거나; R4는 화학식 II5의 헤테로아릴 (여기서, R₆, R₇ 및R₈은 수소임)이다.

2. R1은 알킬, 바람직하게는 n-부틸 또는 시클로알킬, 바람직하게는 C₃ _-7 시클로알킬, 예컨대 시클로헥실, 시클로프로필 또는 시클로펜틸이다.

4. R3는 할로겐, 바람직하게는 플루오로이다.

용도

본 발명의 화합물은 각종 세균 또는 원핵생물 유기체에 의해 유발되는 감염성 장애의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 그 예로는, 스타필로코쿠스(Staphylococcus), 예를 들어, 에스. 오레우스(S. aureus) 및 에스. 에피데르미디스(S. epidermidis); 엔터로코쿠스(Enterococcus), 예를 들어, 이. 파에칼리스(E. faecalis) 및 이. 파에시움(E. faecium); 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 예를 들어, 에스. 뉴모니애(S. pneumoniae); 해모필루스(Haemophilus), 예를 들어, 에이치. 인플루엔자(H. influenza); 모락셀라(Moraxella), 예를 들어, 엠. 카타르할리스(M. catarrhalis); 및 에스케리치아(Escherichia), 예를 들어, 이. 콜라이(E. coli)를 비롯한 그램 양성 및 그램 음성 호기성 및 혐기성 세균이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 그 밖의 예로는, 마이코박테리아(Mycobacteria), 예를 들어, 엠. 투베르쿨로시스(M. tuberculosis); 세포간 미생물, 예를 들어, 클라미디아(Chlamydia) 및 리켓치애(Rickettsiae); 및 마이코플라스마( Mycoplasma), 예를 들어, 엠. 뉴모니애(M. pneumoniae ); 및 슈도모나스(Pseudomonas), 예를 들어, 피. 에어루기노사(P. aeruginosa); 에이치. 파일로리(H. pylori); 및 기생충, 예를 들어, 플라스모듐 팔시파룸(Pasmodium falciparum)이 포함된다.

본 발명의 화합물은 바람직하게는 그램 양성 또는 그램 음성 세균에 대한 항미생물 효능에 있어서 상당한 개선이 있다. 특히, 본 발명의 화합물은 에이치. 인플루엔자 및 에스. 뉴모니애와 같은 그램 음성 및/또는 그램 양성 세균의 억제가 향상됨으로써 활성의 항균 스펙트럼에 있어서 상당한 향상이 있다. 예를 들어, 하나의 실시예에서, 평균 비교 지수 (ACI)가 에이치. 인플루엔자의 향상된 억제에 있어서 3 희석 단계를 초과하고, 또한 에스. 뉴모니애의 향상된 억제에 있어서 0.4 희석 단계의 ACI를 나타낸다. 다른 실시예에서, ACI가 에스. 뉴모니애의 향상된 억제에 있어서 3 희석 단계이고, 또한 에이치. 인플루엔자의 향상된 억제에 있어서 1.2 희석 단계의 ACI를 나타낸다.

본 발명의 화합물은 또한 바람직하게는 개선된 안정성, 독성 및 약동학적 특성을 가지며, 예를 들어, 종래 기술의 화합물과 관련된 인간에서의 잠재적 유해 작용이 감소 또는 제거되었다.

하나의 측면에서, 감염성 장애를 치료 또는 예방하기 위한, 본 발명의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구약물을 포함하는 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 제약상 허용가능한 담체와 조합되어 제공된다. 또 다른 실시태양에서, 이러한 조성물은 추가로 또 다른 치료제를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구 약물의 투여량은 본원에 기재된 바와 같이 감염성 장애와 같은 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위한 유효량으로 제공된다. 이러한 화합물 또는 그의 유도체는 상이한 미생물제에 대한 활성이 스크리닝될 수 있고, 적절한 투여량은 당업계에서 이용되는 방법을 사용하여 결정될 수 있다.

본 발명의 화합물은 중증 감염을 치료, 예방 또는 경감시키기 위하여 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 대상체로는, 동물, 식물, 혈액 부산물, 배양물 및 표면, 예컨대 의료용 또는 연구용 기기의 유리 등의 표면, 바늘, 수술용 장비 및 관, 및 유기체 내로 일시적 또는 영구적으로 이식하고자 하는 물체가 포함된다. 바람직한 동물로는 포유동물, 예를 들어, 마우스, 랫트, 고양이, 개, 소, 양, 돼지, 말, 돼지류, 영장류, 예컨대 붉은털 원숭이, 침팬지, 고릴라, 가장 바람직하게는 인간이 포함된다. 대상체를 치료하는 것에는 미생물에 의한 대상체 감염에 의해 유발된 임상 증상을 예방, 경감 또는 제거하는 것; 미생물에 의한 대상체 감염을 예방, 경감 또는 제거하는 것; 또는 미생물에 의한 대상체의 오염을 예방, 경감 또는 제거하는 것이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 이와 관련된 미생물은 바람직하게는 원핵생물, 보다 바람직하게는 세균이다.

하나의 측면에서, 펩티딜 데포르밀라제의 억제에 반응하는, 인간 또는 다른 동물 대상체와 같은 대상체의 감염성 장애를 치료 또는 예방하기 위한 방법은 본 발명의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구약물을 펩티딜 데포르밀라제 억제 유효량으로 대상체에 투여함으로써 제공된다. 하나의 실시태양에서, 화합물 또는 그의 유도체는 제약상 허용가능한 형태로, 임의로는 제약상 허용가능한 담체 와 함께 투여된다. 본 발명의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구약물은 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합되어 투여될 수 있다. 이러한 치료제의 예로는 β-락탐, 퀴놀론, 마크롤라이드, 글리코펩티드 및 옥사졸리디논이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용되는 용어 "감염성 장애"는 미생물 감염의 존재, 예컨대 세균의 존재를 특징으로 하는 임의의 장애이다. 이러한 감염성 장애로는, 예를 들어, 중추신경계 감염, 외이 감염, 중이 감염, 예컨대 급성 중이염, 경막정맥동 감염, 안구 감염, 구강 감염, 예컨대 치아, 잇몸 및 점막 감염, 상기도 감염, 하기도 감염, 비뇨생식기 감염, 위장관 감염, 부인과감염, 패혈증, 골 및 관절 감염, 피부 및 피부 구조 감염, 세균성 심내막염, 화상, 외과 영역에서 항균제 예방요법, 면역억제 환자, 예컨대, 암 화학요법을 받고 있는 환자, 또는 기관 이식 환자에서의 항균제 예방요법, 및 감염성 유기체에 의해 유발된 만성 질환, 예컨대 동맥경화증이 포함된다. 화합물 및 화합물을 포함하는 조성물은 국소, 국부 또는 전신과 같은 경로로 투여될 수 있다. 전신적 사용에는 화합물을 신체의 조직에 도입하는 임의의 방법, 예를 들어, 경막내, 경막외, 근육내, 경피, 정맥내, 복강내, 피하, 설하, 비강내, 질내, 직장내 및 경구 투여가 포함된다. 투여될 항미생물제의 구체적인 투여량 및 치료기간은 필요에 따라 조절될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 펩티딜 데포르밀라제를 억제하기 위한 방법이 제공된다. 하나의 실시태양에서, 이 방법은 화학식 I의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구약물을 필요로 하는 대상체에 펩티딜 데포르밀라제를 억제하기 위한 유효량으로 투여하는 것을 포함한다. 용어 "대상체" 및 "펩티딜 데포르밀라 제 억제 유효량"은 앞서 정의한 바와 같다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 앞서 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구약물의, 펩티딜 데포르밀라제에 의해 매개되는 질환의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의 용도가 또한 제공된다.

투여 및 제약 조성물

본 발명은 또한 생물활성 N-포르밀 히드록실아민 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염 또는 전구약물, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 경구, 국소적 또는 비경구적 사용에 적절한 형태의 조성물을 포함하고, 대상체, 예컨대 동물, 바람직하게는, 포유동물, 보다 바람직하게는 인간의 세균성 감염을 치료하는데 사용될 수 있다. 제약 조성물은 또한 하기하는 바와 같이 또 다른 치료제를 포함할 수 있다.

본원에서 항미생물 화합물로도 지칭하는 본 발명에 따르는 항생제 화합물은 다른 항생제와 유사하게, 인간 의학 또는 수의학에서 사용하기 위한 임의의 편리한 방법으로 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Remington's pharmaceutical Sciences, Easton, PA: Mack Publishing Co.] 참조), 본원에서는 상세히 기재하지 않는다.

조성물은 피하, 흡입, 경구, 국소적 또는 비경구적 경로와 같이 당업계에 공지되어 있는 임의의 경로에 의해 투여되도록 제형화될 수 있다. 조성물은 정제, 캡슐제, 웨이퍼, 고속 용융물 (웨이퍼를 수반하지 않음), 산제, 과립제, 로젠지제, 크림제 또는 액상 제제, 예컨대 경구 또는 멸균 비경구용 용액제 또는 현탁액제를 비롯하나, 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지되어 있는 임의의 형태일 수 있다. 본 화합물은 또한 리포솜, 미셀 또는 미세에멀젼 제형으로 투여될 수 있다. 본 화합물은 또한 전구약물로서 투여될 수 있으며, 이때 투여되는 전구약물은 치료받는 포유동물에서 생체내 변환을 통해 생물학적 활성 형태가 된다.

본 발명의 국소용 제형은, 예를 들어 연고제, 크림제 또는 로션제, 용액제, 고약, 에멀젼제, 석고, 안과용 연고제, 점안제 또는 점비제, 함침 드레싱, 경피용 패취, 분무제 및 에어로졸제로서 존재할 수 있으며, 적절한 통상적인 첨가제, 예컨대 방부제, 약물의 침투를 촉진시키는 용매, 및 연고제 및 크림제에서의 유연제를 함유할 수 있다.

상기 제형은 또한 혼화성의 통상적인 담체, 예컨대 크림제 또는 연고제 기재, 및 로션제용 에탄올 또는 올레일 알코올을 함유할 수 있다. 이러한 담체는, 예를 들어, 제형 중에 약 1％ 내지 약 99％ 이하로 존재할 수 있다. 예를 들어, 이들은 제형 중 최대 약 80％를 구성할 수 있다.

경구 투여용 정제 및 캡슐제는 단위 용량 제공 형태일 수 있고, 통상적인 부형제, 예를 들어 결합제, 예를 들어 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트 또는 폴리비닐피롤리돈; 충전제, 예를 들어 락토스, 당, 옥수수 전분, 인산칼슘, 소르비톨 또는 글리신; 정제화 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실리카; 붕해제, 예를 들어 감자 전분; 또는 허용 가능한 습윤제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트를 함유할 수 있다. 정제는 표준 제약 관행에서 주지된 방법에 따라 코팅될 수 있다.

경구용 액상 제제는, 예를 들어 수성 또는 오일 현탁액제, 용액제, 에멀젼제, 시럽 또는 엘릭시르제의 형태일 수 있고, 또는 사용하기 전에 물 또는 또 다른 적합한 비히클로 재구성하기 위하여 건조 생성물로서 존재할 수 있다. 이러한 액상 제제는 통상적인 첨가제, 예컨대 현탁화제, 예를 들어 소르비톨, 메틸 셀룰로스, 글루코스 시럽, 젤라틴, 히드록시에틸 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 알루미늄 스테아레이트 겔 또는 수소화 식용 지방; 유화제, 예를 들어 레시틴, 소르비탄 모노올레에이트 또는 아카시아; 비-수성 비히클(식용 오일을 포함할 수 있음), 예를 들어 아몬드 오일, 오일 에스테르, 예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 에틸 알코올; 방부제, 예를 들어 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산, 및 필요하다면, 통상적인 향미제 또는 착색제를 함유할 수 있다.

비경구적 투여를 위하여, 유동성 단위 투여형은 본 화합물과 멸균 비히클 (물이 바람직함)을 사용하여 제조된다. 이러한 화합물은 사용되는 농도 및 비히클에 따라 비히클 또는 다른 적절한 용매에 현탁 또는 용해될 수 있다. 용액제의 제조에 있어서, 화합물은 주사용수에 용해되어, 적절한 바이알 또는 앰플 내로 충전하여 밀봉하기 전에 필터 멸균될 수 있다. 유리하게는, 국소 마취 방부제 및 완충제와 같은 작용제를 비히클에 용해시킬 수 있다. 안정성을 증강시키기 위하여, 조성물을 바이알 내로 충전시키고 물을 진공 하에 제거시킨 후에 동결건조시킬 수 있다. 그 다음, 무수 동결건조된 분말을 바이알 내에 밀봉시키고, 사용 전에 액상물을 재구성하기 위하여 수반되는 주사용수 바이알을 공급할 수 있다. 비경구용 현탁액제는 화합물을 용해시키는 것 대신 비히클에 현탁시키고, 여과에 의해 멸균을 수행할 수 없다는 점을 제외하고는 실질적으로 동일한 방법으로 제조된다. 화합물을 멸균 비히클에 현탁시키기 전에, 에틸렌 옥시드에 노출시킴으로써 멸균할 수 있다. 유리하게는, 화합물의 균일한 분포를 촉진하기 위해서 계면활성제 또는 습윤제가 본 조성물에 포함된다.

조성물은 투여 방법에 따라 활성 물질을, 예를 들어 약 0.1 중량％ 내지 약 99 중량％, 예를 들어 약 10 내지 60 중량％로 함유할 수 있다. 조성물이 투여량 단위를 포함하는 경우, 각 단위는, 예를 들어 활성 성분을 약 1 내지 1000 mg으로 함유할 것이다. 성인 치료에 사용되는 투여량은 투여 경로 및 빈도에 따라, 예를 들어 1일 약 1 내지 3000 mg 범위, 예를 들어 1일 1500 mg일 것이다. 이러한 투여량은 1일 약 0.015 내지 50 mg/kg에 상응한다. 적절하게는, 투여량은, 예를 들어 1일 약 5 내지 20 mg/kg이다.

화학식 I의 화합물을 함유하는 대표적인 제약 제형물은 이하에 기재되어 있다.

본 발명은 또한 하기 화학식 V의 화합물 또는 그의 관능성 유도체를 하기 화학식 VI의 화합물과 반응시키고, 필요에 따라 유리 형태로 수득된 생성 화합물을 염 형태로 또는 그 반대로 전환시키는 것을 포함하는, 본 발명의 화합물, 예를 들어 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.

상기 식에서, R1 및 R2는 앞서 정의한 바와 같고, Y는 히드록시 보호기이다.

상기 식에서, R₃ 및 R₄는 앞서 정의한 바와 같고, n은 1이다.

화학식 V의 화합물의 관능성 유도체는 예를 들어 산 염화물, 산 무수물 또는 활성화 에스테르를 포함한다,

상기 반응은 당업계에 공지된 방법에 따라 또는 아래 실시예에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 반응은 염기의 존재 하에 용이하게 수행될 수 있으며, 이어서, 바람직하게는 수소첨가 촉매의 존재 하에, 수소첨가시킨다. 적절한 염기로는 휴니히(Hunig) 염기 (즉, 디이소프로필에틸아민) 및 중탄산나트륨과 같은 무기 염기가 포함된다. 그 다음, 수소첨가 촉매, 바람직하게는 팔라듐 촉매, 예를 들어 탄소 상 팔라듐 또는 팔라듐 블랙을, 예를 들어, 농축 후에 생성물에 첨가하고, 수소 분위기 하에서, 예를 들어 약 16 내지 약 24시간 동안 교반한다. 팔라듐 촉매 는, 바람직하게는 농축된 생성물의 약 5 몰％ 내지 약 10 몰％로 첨가될 수 있다.

출발 물질로서 사용되는 화학식 V의 화합물은, 예를 들어 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 온화한 염기성 조건 하에서 하기 화학식 VII의 화합물을 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

상기 식에서, R₁, R₂, 및 Y는 앞서 정의한 바와 같다. 전형적으로, 이러한 반응은 화학식 VII의 화합물을, 예를 들어 불활성 용매, 예컨대 THF, DMF, 톨루엔, 디옥산 또는 CH₂Cl₂와 물의 혼합물 중에 용해시키고, 과산화수소, 그 다음 물 중 염기의 수용액을 상기 냉각시킨 혼합물에 가함으로써 수행될 수 있다. 염기의 예로는, 예를 들어 중탄산나트륨, 수산화리튬, 수산화나트륨 등이 포함된다. 염기는 바람직하게는 화학식 VII의 화합물에 대해 약 1.1 내지 약 1.5 당량으로 사용될 수 있다.

화학식 VII의 화합물은, 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 하기 화학식 VIII의 화합물(여기서, R₁, R₂ 및 Y는 앞서 정의한 바와 같음)과 포름산을 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이 반응은 전형적으로, 예를 들어 0℃에서 포름산 중 아세트산 무수물의 용액을 포름산 중 화학식 VIII의 화합물의 용액에 가함으로써 수 행될 수 있다.

화학식 VIII의 화합물은, 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 화학식 IX의 화합물(여기서, R₁, R₂ 및 Y는 앞서 정의한 바와 같음)을 불활성 유기 용매 중 p-톨루엔술폰산 용액 및 Na₂CO₃ 용액 (예를 들어, 1 M)과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 IX의 화합물은, 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 화학식 X의 화합물(여기서, R₁은 앞서 정의한 바와 같음)을 화학식 XI의 히드록시 보호된 화합물(여기서, Y는 아릴, 알킬, 아르알킬 또는 실릴임)과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 X의 화합물은, 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 화학식 XII의 화합물(여기서, R₄는 앞서 정의한 바와 같음)을 피발로일 클로라이드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

출발 물질의 제법을 특별히 기재하지 않는 한, 화합물은 공지되어 있거나, 당업계에 공지된 방법과 유사하게 또는 이하 실시예에 개시된 바와 같이 제조될 수 있다.

본 출원에 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 공보는, 각 개별 특허, 특허 출원 및 공보가 개별적으로 언급된 것과 같은 정도로, 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.

하기 약어를 사용한다.

AcOH, HOAc = 아세트산

Ac₂O = 아세트산 무수물

BOC, Boc = t-부틸옥시카르보닐

DCM = 디클로로메탄

DIEA = 디이소프로필에틸아민

DMF = 디메틸포름아미드

DMSO = 디메틸술폭시드

Et = 에틸

EtOAc = 에틸 아세테이트

Fmoc, FMOC = 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐

HATU = O-(7-아자-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루 오로포스페이트

MCPBA = 메타-클로로퍼옥시-벤조산

Me = 메틸

MeOH = 메탄올

MMP = 기질 메탈로프로테이나제

NVOM = 니트로베라트릴옥시메틸 에테르

p-TSA = p-톨루엔술폰산

RT = 실온

TFA = 트리플루오로아세트산

tBu = t-부틸

THF = 테트라히드로푸란

THP = 2-테트라히드로피라닐

TsOH 또는 p-TSA = 톨루엔술폰산

일반적 합성 반응

본 발명의 화합물은 아래에 나타낸 반응식에 나타낸 방법에 의해 제조될 수 있다.

이들 화합물의 제조에 사용되는 출발 물질 및 반응물은 알드리치 케미컬사(Aldrich Chemical Co.; 미국 위스콘신주 밀워키 소재), 바켐(Bachem; 미국 캘리포니아주 토랜스 소재), 엠카-케미(Emka-Chemie) 또는 시그마(Sigma; 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)와 같은 상업적 공급자로부터 입수가능하거나, 참고문헌, 예컨대 문헌 [Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-15 (John Wiley and Sons, 1991)]; [Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 and Supplementals (Elsevier Science Publishers, 1989)]; [Organic Reactions, Volumes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991)]; [March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 4th Edition)]; 및 [Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989)]에 나타나 있는 절차에 따라 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조된다. 이들 반응식은 단지 본 발명의 화합물을 합성할 수 있는 일부 방법의 예시이고, 이러한 개시를 참조로 다양한 변형이 이들 반응식에 대해 이루어질 수 있으며, 당업자에게 제안될 것이다.

반응의 출발 물질 및 중간체는, 필요하다면, 여과, 증류, 결정화, 크로마토그래피 등을 비롯하나, 이에 제한되지는 않는 통상적인 기술을 사용하여 단리 및 정제될 수 있다. 이러한 물질은 물리적 상수 및 스펙트럼 데이터를 비롯한 통상적인 수단을 사용하여 특성화될 수 있다.

화학식 I의 화합물의 제조

화학식 I의 화합물은 유기 화학 업계에 주지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물의 제조를 위한 대표적인 합성 과정은 이하에 상세히 설명 및 기재되어 있다. 예를 들어, 화학식 I의 화합물은 아래 반응식 A - B에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.

일반적 방법 A: 1-{2(R)-[( 포르밀히드록시아미노 )- 메틸 ]- 알카노일 }- 피롤리딘 -2(S)-카 르 복실산 아미드의 합성

단계 1: 2-n-부틸 아크릴산 (A-2)

에탄올 (200 mL) 중 알킬 말론산 A-1 (R = n-부틸) (107.4 mmol)의 용액에 피페리딘 (12.7 mL, 128.8 mmol, 1.2 당량) 및 37％ 수성 포름알데히드 (40.0 mL, 536.9 mmol, 5 당량)를 첨가하였다. 용액을 80℃로 가열하였고, 이 동안에 침전물이 생겼으며, 그 후 점진적으로 1시간에 걸쳐 재용해시켰다. 반응 혼합물을 밤새 80℃에서 교반한 후, 실온 (rt)으로 냉각시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 1 M HCl 및 염수로 연속하여 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜, 표제 화합물 A-2를 투명한 오일로서 수득하였다.

단계 2: 4-벤질-3-(2-부틸-아크릴로일)- 옥사졸리딘 -2-온 (A-3)

2-n-부틸 아크릴산 (9.90 g, 77.2 mmol, 1 당량)을 무수 THF (260 mL) 중에 용해시키고, 질소 블랭킷 하에 -78℃로 냉각시켰다. 휴니히 염기 (17.5 mL, 100.4 mmol, 1.3 당량) 및 피발로일 클로라이드 (9.5 mL, 77.2 mmol, 1 당량)를 온도가 -60℃ 미만으로 유지되는 속도에서 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 2시간 동안 실온으로 가온시키고, 마지막으로 -78℃로 다시 냉각시켰다.

별도의 플라스크에서, (S)-(-)-4-벤질-2-옥사졸리디논 (13.49 g, 77.24 mmol)을 무수 THF (150 mL) 중에 용해시키고, 질소 블랭킷 하에 -78℃로 냉각시켰다. n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M 용액, 30.9 mL, 77.2 mmol, 1 당량)을 -78℃에서 서서히 첨가하고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 음이온을 캐뉼라를 통해 최초 반응 용기로 서서히 옮겼다. 혼합물을 rt로 가온시키고, rt에서 밤새 교반하였다. 반응물을 1 M KHCO₃로 켄칭하고, 감압 하에 용매를 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜, 황색 오일을 수득하고, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (헥산:에틸 아세테이트 = 4:1)에 의해 정제하여, 표제 화합물 A-3를 백색 고체로서 수득하였다 (15.0 g, 52.2 mmol, 68％).

단계 3: 4-벤질-3-[2-( 벤질옥시아미노 - 메틸 )- 헥사노일 ]- 옥사졸리딘 -2-온 (p-톨루엔술폰산 염)

화합물 A-3 (8.25 g, 28.7 mmol)를 O-벤질히드록실아민 (7.07 g, 57.4 mmol, 2 당량)과 혼합하고, 질소 하에 rt에서 40시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, p-톨루엔술폰산 (21.84 g, 114.8 mmol, 4 당량)을 첨가하여, 잉여의 O-벤질히드록실아민을 백색 고체로서 침전시켰다. 백색 고체를 여과해 내고, 여과액을 농축시켜, 조질의 황색 오일을 수득하였다 (HPLC 분석은 극소량의 출발 물질의 나타냈음). 조질의 황색 오일을 과량의 디에틸 에테르로 충전시키고, 30분 동안 0℃로 냉각시켜 고체를 얻고, 이를 여과에 의해 수합하고, 진공에서 건조시켜, 표제 화합물을 백색 결정질 고체 (단일 부분입체이성질체)로서 수득하였다.

단계 4: 4-벤질-3-[2-( 벤질옥시아미노 - 메틸 )- 헥사노일 ]- 옥사졸리딘 -2-온 (A-5)

에틸 아세테이트 (400 mL) 중에 용해시킨 p-TSA 염 (22.9 g, 39 3 mmol)의 용액에, 1 M Na₂CO₃ (200 mL, 5 당량)를 첨가하고, 30분 동안 rt에서 교반하였다. 층을 분리시키고, 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜, 표제 화합물을 엷은 불투명 오일로서 수득하였다 (15.8 g, 38.6 mmol, 98％).

단계 5: N-[2-(4-벤질-2-옥소- 옥사졸리딘 -3-카르보닐)- 헥실 ]-N- 벤질옥시 - 포름아미드 (A-6)

포름산 (7.4 mL, 196.6 mmol, 15 당량) 중 화합물 A-5 (5.38 g, 13.1 mmol, 1 당량)의 용액을 질소 블랭킷 하에 0℃로 냉각시켰다. 별도의 플라스크에서, 포름산 (7.4 mL, 196.6 mmol, 15 당량)을 질소 블랭킷 하에 0℃로 냉각시키고, 아세 트산 무수물 (2.47 mL, 26.2 mmol, 2 당량)을 적가하였다. 용액을 15분 동안 0℃에서 교반하였다. 생성된 혼합 무수물을 시린지를 통해 최초 반응 용기로 서서히 옮겼다. 혼합물을 1시간 동안 0℃에서, 그 후 3시간 동안 rt에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 디클로로메탄 중에 녹이고, 포화 NaHCO₃ 및 염수로 연속하여 세척하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜, 불투명한 오일을 얻고, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (헥산:에틸 아세테이트 = 2:1, 이어서 디클로로메탄:아세톤 = 9:1)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 6: 2-[( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)- 메틸 ]- 헥산산 (A-7)

화합물 A-6 (0.163 g, 0.372 mmol, 1 당량)를 THF (4.5 mL) 및 물 (1.5 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 과산화수소 (물 중 30％, 228 μL, 2.23 mmol, 6 당량)를 적가한 다음, 물 (350 μL) 중 수산화리튬 (0.019 g, 0.446 mmol, 1.2 당량)의 용액을 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 0℃에서 교반하였다. 염기성 반응 혼합물을 0℃에서 pH 4 내지 5로 암베르라이트(Amberlite) IR-120 수지 (H⁺)로 켄칭하였다. 수지를 여과해 내고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 혼합물을 농축시켜, THF를 제거한 다음, 에틸 아세테이트 중에 녹였다. 수성층을 분리하고, 유기층을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜, 불투명한 오일을 얻고, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄: 아세톤 = 4:1, 이어서 아세톤: 메탄올 = 99:1)에 의해 정제하여, 표제 화합물 A-7을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 7(1): 1-{2-[( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카르복실산 아미드

무수 디옥산 (4 mL) 중 화합물 A-7 (0.190 g, 0.680 mmol, 1 당량)의 용액에, 질소 하에 rt에서 휴니히 염기 (391 μL, 2.24 mmol, 3.3 당량), 아민 A-8 (0.748 mmol, 1.1 당량) 및 HATU (0.284 g, 0.748 mmol, 1.1 당량)를 연속적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 22시간 동안 rt에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 10％ 시트르산 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수 및 포화 NaHCO₃로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄:아세톤 = 3:1)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 7(2): 1-{2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카르복실산 아미드 (A-9)

Pd-C (0.059 g, 0.1 당량)를 질소 블랭킷 하에 1:1 에틸 아세테이트/에탄올 용액 (12 mL) 중 상기 화합물 (0.550 mmol, 1 당량)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에 36시간 동안 교반하였다. 촉매를 셀라이트 패드를 통해 여과시켜 제거하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 정제용 TLC (디클로로메탄:아세톤 = 2:1)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 무정형 고체로서 수득하였다 (0.121 g, 0.334 mmol, 61％).

일반적 방법 B : 1-{2(R)-[( 포르밀히드록시아미노 )- 메틸 ]- 알카노일 }- 피롤리딘 -2(S)-카 르복실 레이트 에스테르의 합성

상기 식에서, X는 CH₂, -S-, -CH(OH)-, -CH(OR)-, -CF₂- 또는 -CH(F)-이고, n은 0 내지 3이다.

단계 1 : 1-{2-[( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카르복실산 에스테르

무수 디옥산 (4 mL) 중 화합물 A-7 (0.680 mmol, 1 당량)의 용액에, 질소 하에 rt에서 휴니히 염기 (391 μL, 2.24 mmol, 3.3 당량), 아민 A-10 (0.748 mmol, 1.1 당량) 및 HATU (0.284 g, 0.748 mmol, 1.1 당량)를 연속적으로 첨가하였다. 통상적으로 후처리하고, 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다.

단계 2: 1-{2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카르복실산 에스테르 (A-11)

Pd-C (0.059 g, 0.1 당량)를 질소 블랭킷 하에 1:1 에틸 아세테이트/에탄올 용액 (12 mL) 중 상기 화합물 (0.550 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에 36시간 동안 교반하였다. 촉매를 셀라이트 패드를 통해 여과시켜 제거하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 정제용 TLC (디클로로메탄:아세톤 = 2:1)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다.

일반적 방법 C : 피롤리딘 -2-S- 카르복실산 피리딘-2- 일아미드 (A-8) (X = CH ₂ , n = 1, R ₁ = 2- 피리딜 )의 제조

단계 1: 2-S-(피리딘-2- 일카르바모일 )- 피롤리딘 -1- 카르복실산 벤질 에스테르

피리딘 (40 mL) 중 Z-프로클로라이드 (5.0 g, 18.7 mmol, 1 당량)의 용액을 질소 블랭킷 하에 0℃로 냉각시켰다. 피리딘 (10 mL) 중 2-아미노피리딘 (5.27 g, 56.0 mmol, 3 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 4시간 동안 rt에서 교반한 후, 농축시켰다. 잔류 오일을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물, 10％ 시트르산, 포화 NaHCO₃ 및 염수로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜, 표제 화합물 (4.21 g, 13.0 mmol, 69％)을 불투명한 고체로서 수득하였다.

단계 2: 피롤리딘 -2-S- 카르복실산 (피리딘-2-일) 아미드 브롬화수소산 염

아세트산 (65 mL) 중 상기 화합물 (4.21 g, 13.0 mmol, 1 당량)의 용액을 rt 에서 HBr (5.7 M, 아세트산 중 33％, 110 mL, 649 mmol, 50 당량)로 처리하고, 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 과량의 디에틸 에테르로 충전시키고, 30분 동안 0℃로 냉각시켜, 고체를 얻고, 이를 여과에 의해 수합하고, 진공에서 건조시켜, 표제 화합물을 갈색이 도는 분말로서 수득하였다.

일반적 방법 D : 4-R-히드록시- 피롤리딘 -2-S- 카르복실산 (5- 메틸 -피리딘-2-일)-아미드

HATU (1.3 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸 아민 (5 mmol) 조건 하에 DMF (5 mL) 중 5-피콜린 (1.5 mmol)과 O-tert 부틸 보호된 프롤린 (1 mmol)을 커플링시킨 다음, TFA-디클로로에탄 (1:1)으로 O-tert 부틸을 제거하여, 표제 화합물을 85％ 수율로 수득하였다.

일반적 방법 E : 4-S- 플루오로 - 피롤리딘 -2-S- 카르복실산 (5- 메틸 -피리딘-2- 일)-아미드

메틸렌클로라이드 (20 mL) 중 상기 히드록시 화합물 (2 mmol)을 -70℃에서 N'N-디에틸아미노 술퍼 트리플루오라이드 (DAST; 4 mmol)로 처리하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반하고, 차가운 중탄산나트륨 수용액으로 세척하고, 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 상에서 정제하여, N-보호된 유도체를 얻고, 이를 HBr-AcOH로 처리하여, 아미노 화합물을 수득하였다.

일반적 방법 F : 4-S-히드록시- 피롤리딘 -1,2-디카르복실산 1- tert -부틸 에스테르-2- 메틸 에스테르

THF (10 mL) 중 트랜스-4-히드록시 화합물 (1 mmol), 트리페닐 포스핀 (1.5 mmol) 및 벤조산 (1.5 mmol)의 용액에 THF (5 mL) 중 N,N-디이소프로필-아조 디카르복실레이트 (1.5 mmol)를 0℃에서 적가하였다. rt에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 에테르에 용해시켰다. 빙냉시켜 포스핀 산화물을 침전시키고, 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 0℃에서 2시간 동안 메탄올성 나트륨 메톡시드로 처리하여, 표제의 시스-히드록시 화합물을 수득하였다.

일반적 방법 G : 4-R- 플루오로 - 피롤리딘 -2-S- 카르복실산 (5- 메틸 -피리딘-2- 일)-아미드

상기 시스-히드록시 화합물을 플루오르화하여, 트랜스-4-플루오로 유도체를 얻고, 이를 비누화하여, 상응하는 산을 수득하였다. HATU 조건 하에 4-R-플루오로-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 및 5-메틸-피리딘-2-일아민으로부터 프롤린 아미드 유도체를 얻고, 이를 디옥산 중 4 M HCl로 처리하여 목적하는 아민을 수득함으로써, 아민을 제조하였다.

실시예 1 : 1-[2- 시클로펜틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (5- 플루오로 -1- 옥시 -피리딘-2-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 3-(벤질옥시-포르밀-아미노)-2-시클로펜틸메틸-프로피온산 A-7 (R = 시클로펜틸메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리딘-2-일아미드 A-8 (X = CH₂, n = 1, R₁ = 5-플루오로-2-피리딜)으로부터 제조하였다.

2- 시클로펜틸메틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]-프로피온산은 하기와 같이 시클로펜틸메틸 말론산으로부터 제조하였다.

브로모메틸 -시클로펜탄

시클로펜탄 메탄올 (48.5 g, 484 mmol), Et₃N (88.0 mL, 631 mmol) 및 무수 THF (1 L)의 용액을 4℃로 냉각시키고, 질소 하에 교반하였다. 10℃를 유지하면서 메탄술포닐 클로라이드 (45.0 mL, 581 mmol)를 교반 용액에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 추가로 1시간 동안 교반하고, LiBr (300.0 g, 3454 mmol)을 서서히 첨가하였다 (발열). 반응 혼합물을 실온에서 추가로 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하여, 염을 용해시키고, 혼합물을 Et₂O로 추출하였다. Et₂O 층을 합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 조심스럽게 농축시켰다 (100 torr에서 25℃). 조 생성물을 진공 증류에 의해 정제하였다 (1 torr에서 35℃, 목적 화합물은 수합된 제1 분획임). 브로모메틸-시클로펜탄 (31.4 g, 40％ 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

2- 시클로펜틸메틸 -말론산

디에틸 말로네이트 (36.91 g, 230.4 mmol), 무수 메탄올 (400 mL) 및 NaOMe (메탄올 중 25％, 49.79 g, 230.4 mmol)의 용액을 질소 하에 1시간 동안 환류 하에 교반하였다. 브로모메틸-시클로펜탄 (31.31 g, 192.0 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 추가로 3시간 동안 교반하였다. 물 (400 mL) 중 NaOH (23.04 g, 576.0 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 환류 하에 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 물로 희석하고, 에테르로 추출하였다. 에테르층을 폐기하고, 수성층을 1 N HCl을 사용하여 pH 1로 산성화하였다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. EtOAc 층을 합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 2-시클로펜틸메틸-말론산 (21.0 g, 59％ 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

2- 시클로펜틸메틸 -아크릴산

2-시클로펜틸메틸-말론산 (24.90 g, 133.7 mmol), 피페리딘 (15.9 mL, 160.8 mmol), 37％ 수성 포름알데히드 (51.0 mL, 647.2 mmol) 및 EtOH (250 mL)의 혼합물을 16시간 동안 환류 하에 교반하였다. 반응물을 1 N HCl을 사용하여 pH 1로 켄칭하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. EtOAc 층을 합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, DCM 중 10％ 아세톤)에 의해 정제하여, 2-시클로펜틸메틸-아크릴산 (17.65 g, 86％ 수율)을 오일로서 수득하였다.

4-벤질-3-(2- 시클로펜틸메틸 -아크릴로일)- 옥사졸리딘 -2-온

2-시클로펜틸메틸-아크릴산 (17.65 g, 114.5 mmol)을 무수 THF (200 mL) 중에 용해시키고, 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (25.9 mL, 148.7 mmol) 및 트리메틸아세틸 클로라이드 (14.1 mL, 114.5 mmol)를 온도가 -60℃ 미만으로 유지되고 가스 방출이 제어되는 속도로 연속적으로 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 실온에서 2시간 동안 교반하고, -78℃로 다시 냉각시켰다.

별도의 플라스크에서, (S)-(-)-4-벤질-2-옥사졸리디논 (20.30 g, 114.6 mmole)을 무수 THF (400 mL) 중에 용해시키고, 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. BuLi (2.5 M, 45.8 mL, 114.5 mmole)을 -78℃에서 서서히 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 음이온을 캐뉼라를 통해 최초 반응 용기로 서서히 옮겼다. 혼합물을 실온으로 가온시키고, 실온에서 밤새 (16시간) 교반하였다. 반응 혼합물을 1 M KHCO₃로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 헥산 중 20％ EtOAc)에 의해 정제하여, 4-벤질-3-(2-시클로펜틸메틸-아크릴로일)-옥사졸리딘-2-온 (22.9 g, 64％)을 오일 로서 수득하였다.

4-벤질-3-[2- 시클로펜틸메틸 -3-( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시아미노 )- 프로피오닐 ]- 옥사졸리딘 -2-온

4-벤질-3-(2-시클로펜틸메틸-아크릴로일)-옥사졸리딘-2-온 (22.90 g, 73.1 mmol) 및 O-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-히드록실아민 (34.24 g, 292.3 mmol)을 질소 하에 48시간 동안 45℃에서 교반하면서 합하였다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 헥산 중 0 → 30％ EtOAc)에 의해 정제하여, 4-벤질-3-[2-시클로펜틸메틸-3-(테트라히드로-피란-2-일옥시아미노)-프로피오닐]-옥사졸리딘-2-온 (21.65 g, 69％ 수율)을 오일로서 수득하였다.

N-[3-(4-벤질-2-옥소- 옥사졸리딘 -3-일)-2- 시클로펜틸메틸 -3-옥소-프로필]-N- (테 트라히드로피란 -2- 일옥시 )- 포름아미드

포름산 (45.0 mL, 1193 mmol) 및 무수 아세트산 (90.0 mL, 952 mmol)의 혼합물을 질소 하에 1시간 동안 50℃에서 교반하였다. 제2 플라스크를 4-벤질-3-[2-시클로펜틸메틸-3-(테트라히드로-피란-2-일옥시아미노)-프로피오닐]-옥사졸리딘-2-온 (21.62 g, 50.2 mmol), Et₃N (170.0 mL, 1220 mmol) 및 무수 DCM (450 mL)으로 충전시켰다. 상기 제2 혼합물을 질소 하에 4℃로 냉각시키고, 10℃로 유지하면서, 혼합된 산 용액을 제2 플라스크에 서서히 첨가하였다. 합한 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반하고, 포화 NaHCO₃로 켄칭하고, NaHCO₃ 수용액으로 세척하고, DCM으로 추출하였다. DCM 층을 합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 헥산 중 50％ EtOAc)에 의해 정제하여, N-[3-(4-벤질-2-옥소-옥사졸리딘-3-일)-2-시클로펜틸메틸-3-옥소-프로필]-N-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-포름아미드 (20.10 g, 87％ 수율)를 오일로서 수득하였다.

2- 시클로펜틸메틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]-프로피온산

N-[3-(4-벤질-2-옥소-옥사졸리딘-3-일)-2-시클로펜틸메틸-3-옥소-프로필]-N-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-포름아미드 (3.65 g, 7.96 mmol), THF (125 mL) 및 물 (40 mL)을 4℃로 냉각시켰다. 상기 혼합물에, 30％ H₂O₂ (5.2 mL, 50.90 mmole) 및 LiOH 1수화물 (0.40 g, 9.53 mmol)을 각각 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0.5 M Na₂SO₃로 서서히 켄칭하면서, 빙욕으로 15℃ 미 만의 온도를 유지시켰다. 켄칭된 혼합물을 추가로 30분 동안 교반하고, THF 용매가 제거될 때까지 진공에서 농축시키고, EtOAc로 세척하였다. 염기성 반응 혼합물을 암베르라이트 IR-120 수지 (H+)로 pH 4.5로 산성화하였다. 염수를 산성 용액에 첨가하고, 합한 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 산성 용액 세척액으로부터의 유기층을 합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 2-시클로펜틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 (1.20 g, 50％ 수율)을 오일로서 수득하였다.

3-( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)-2- 시클로펜틸메틸 -프로피온산을 상응하는 O-THp 보호된 빌딩 블록의 합성에 대해 기재된 바와 같이, 2-시클로펜틸메틸-아크릴산 및 O-벤질 히드록스아민으로부터 제조하였다.

4-벤질-3-(3- 벤질옥시아미노 -2- 시클로펜틸메틸 - 프로피오닐 )- 옥사졸리딘 -2-온

N-[3-(4-벤질-2-옥소- 옥사졸리딘 -3-일)-2- 시클로펜틸메틸 -3-옥소-프로필]-N-벤질옥시- 포름아미드 (화합물 A-G, 여기서, R ₁ = 시클로펜틸메틸 , PG ₁ = 벤질)

3-( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)-2- 시클로펜틸메틸 -프로피온산

1-[3-( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)-2- 시클로펜틸메틸 - 프로피오닐 ]- 피롤리딘 -2-카르복실산 (5- 플루오로 -1- 옥시 -피리딘-2-일)-아미드

실시예 2 : 4- 플루오로 -1-{2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (5- 플루오로 -1- 옥시 -피리딘-2-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-[(벤질옥시-포르밀-아미노)-메틸]-헥산산 A-7 (R = n-부틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리딘-2-일아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 5-플루오로 2-피리딜)으로부터 제조하였다.

4-트랜스- 플루오로 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 -[2-아미노-5- 플루오로 -피리딘-2-일] 아미드

Boc-L-Pro-4-F-OH (2.5 g, 10.73 mmol, 1 당량)의 DMF 용액 (15 mL)에 휴니히 염기 (디이소프로필에틸아민, 약어 DIEA) (6.73 mL, 38.61 mmol, 3.6 당량)을 첨가하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 그 다음, 0℃에서 2-아미노-5-플루오로 피리딘 (1.44 g, 12.87 mmol, 1.2 당량) 및 HATU (4.89 g, 12.87 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 과량의 에틸 아세테이트와 10％ 시트르산 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수 및 포화 NaHCO₃로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산:에틸 아세테이트 = 1:0 - 7:3)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 무색 시럽 (2.5 g, 71％)으로서 수득하였다.

4-트랜스- 플루오로 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 -[2-아미노-5- 플루오로 -피리딘-2-일] 아미드 (염산염)

Boc-프롤린-4-플루오로-피리딘 아미드 (1 g, 3.06 mmol, 1 당량)를 실온에서 4 N HCl/디옥산 (30 mL, 120 mmol, 40 당량)으로 처리하고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 톨루엔으로 2회 공증발(coevaporate)시키고, 농축시켜, 자주색이 도는 분홍색 고체 (1 g)를 수득하였다.

1-{2-[( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }-4-트랜스- 플루오로 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 -(2-아미노-5- 플루오로 -피리딘-2-일)-아미드

트랜스-플루오로-프롤린-5-플루오로-아미노피리딘 아미드 HCl 염 (644 mg, 2.15 mmol, 1.2 당량)의 DMF 용액 (10 mL)에, 0℃에서 휴니히 염기 (2 mL, 10.8 mmol, 5 당량), 베르시액시드(Versiacid) VRI 172 (500 mg, 1.79 mmol, 1 당량) 및 HATU (818 mg, 2.15 mmol, 1.2 당량)를 연속적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 과량의 에틸 아세테이트와 10％ 시트르산 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수 및 포화 NaHCO₃로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 화합물을 DCM:아세톤 (1:0 - 86:14) 중 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 분말 (630 mg, 72％)로서 수득하였다. ES-MS: C₂₅H₃₀F₂N₄O₅에 대한 계산치 (504.53); 실측치: 505.4 [M+H]

1-{2-[( 벤질옥시 - 포르밀 -아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }-4-트랜스- 플루오로 - 피롤리 딘 -2- 카르복실산 -(2-아미노-5- 플루오로 -피리딘-N- 옥시드 -2-일)-아미드

상기 화합물 (1.25 g, 2.56 mmol, 1 당량)의 DCM 용액에, MCPBA (1.32 g, 7.68 mmol, 3 당량)를 0℃에서 연속적으로 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO₃와 DCM 층 사이에 분배시켰다. 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM:아세톤 (1:0 - 9:1)을 사용한 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (1.2 g)을 수득하였다.

실시예 3 : 1-{2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-[(벤질옥시-포르밀-아미노)-메틸]-헥산산 A-7 (R = n-부틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CH₂, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

실시예 4 : 1-{2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피롤리딘 -2- 카 르복실산 피리다진 -3- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-{[포르밀-(테트라히드로피란-2-일옥시)-아미노]-메틸}-헥산산 A-7 (R = n-부틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-3-아미드 A-8 (X = CH₂, n = 1, R₁ = 3-피리다지닐)으로부터 제조하였다.

단계 1: 피리다진 -3- 일아민

에탄올 (150 ml) 중 6-클로로-2-아미노-피리디아진 (4 g) 및 NaOH (분말, 1.4 g)의 용액에 10％ Pd/C (0.6 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 셀라이트를 통해 여과시키고, 용매를 농축시켰다. 생성된 잔류물을 에테르와 함께 분쇄하여, 공지된 아미노 화합물을 수득하였다.

단계 2: 2-( 피리다진 -3- 일카르바모일 )- 피롤리딘 -1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

0℃ 에서 DCM 중 Boc-Pro-OH (1 당량)의 용액에, 고세츠(Ghosez) 시약 (1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에 피리딘 중 아민 (1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 후 농축시켜, 모든 휘발물을 제거하고, 과량의 DCM 중에 재용해시켰다. 유기층을 10％ 시트르산, 염수 및 NaHCO₃로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10 내지 40％ 에틸 아세테이트를 사용한 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: YMC-Pak Pro C18, S-3 ㎛, 120A, 50 × 4.6 mm I.D. 컬럼; 8.5분에 걸쳐 구배 용리액 0％ - 90％ MeCN, 1.5 mL/분; 체류 시간 = 4.14 분.

ES-MS: C₁₄H₂₀N₄O₃에 대한 계산치 (292); 실측치 293 [M+H].

단계 2: 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리다진 -3- 일아미드

HPLC: YMC-Pak Pro C18, S-3 ㎛, 120A, 50 × 4.6 mm I.D. 컬럼; 8.5분에 걸쳐 구배 용리액 0％ - 90％ MeCN, 1.5 mL/분; 체류 시간 = 2.398 분.

ES-MS: C₉H₁₂N₄O에 대한 계산치 (192.1); 실측치 193.2 [M+H].

단계 3: 1-(2-{[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]- 메틸 }- 헥사노일 )- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리다진 -3- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 기재된 바와 같이 HATU 조건 하에 제조하였다.

HPLC: YMC-Pak Pro C18, S-3 ㎛, 120A, 50 × 4.6 mm I.D. 컬럼; 8.5분에 걸쳐 구배 용리액 20％ - 90％ MeCN, 1.5 mL/분; 체류 시간 = 3.655 분.

ES-MS: C₂₂H₃₃N₅O₅에 대한 계산치 (447); 실측치 448 [M+H].

실시예 5 : 1-[2- 시클로펜틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]-4-플루오로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (5- 플루오로 -1- 옥시 -피리딘-2-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로펜틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리딘-2-일아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 5-플루오로-2-피리딜)으로부터 제조하였다.

1-{2- 시클로펜틸메틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]- 프로 피오닐}-4- 플루오로 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 (5- 플루오로 -1- 옥시 -피리딘-2-일)-아미드

실시예 6 : 1-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리다진 -3- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로부틸메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-2-아미드 A-8 (X = CH₂, n = 1, R₁ = 3-피리다지닐)으로부터 제조하였다.

실시예 7 : 1-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로부틸메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CH₂, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

실시예 8 : 1-[2- 시클로펜틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로펜틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로펜틸메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CH₂, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

실시예 9 : 4- 플루오로 -1-{2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }- 피 롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-[(벤질옥시-포르밀-아미노)-메틸]-헥산산 A-7 (R = n-부틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

실시예 10 : 1-[2- 시클로펜틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 -4-플루오로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로펜틸메틸-3-(포르밀-히드록시-아미노)-프로피온산 A-7 (R = 시클로펜틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

실시예 11 : 1-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 -4-플루오로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로부틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산을 실시예 1에서 상응하는 시클로펜틸메틸 유도체의 합성에 대해 기재된 바와 같이 2-시클로부틸메틸 말론산으로부터 제조하였다.

2- 시클로부틸메틸 -말론산

표제 화합물을 (브로모메틸)시클로부탄으로부터 제조하였다.

2- 시클로부틸메틸 -아크릴산

4-벤질-3-(2- 시클로부틸메틸 -아크릴로일)- 옥사졸리딘 -2-온

4-벤질-3-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시아미노 )- 프로피오닐 ]- 옥사졸리딘 -2-온

N-[3-(4-벤질-2-옥소- 옥사졸리딘 -3-일)-2- 시클로부틸메틸 -3-옥소-프로필]-N-(테 트라히드로 -피란-2- 일옥시 )- 포름아미드

2- 시클로부틸메틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]-프로피온산

1-{2- 시클로부틸메틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]- 프로피오닐 }-4- 플루오로 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

실시예 12 : 1-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]-4-플 루오 로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리미딘-4- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로부틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리미딘-4-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 2-피리미디닐)으로부터 제조하였다.

실시예 13 : 1-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]-4-플 루오 로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리다진 -3- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히 드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로부틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-3-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1 , R₁ = 3-피리다지닐)으로부터 제조하였다.

(2S,4R)- tert -부틸 4- 플루오로 -2-( 피리다진 -3- 일카르바모일 ) 피롤리딘 -1- 카르복실레이트

0℃에서 DCM 중 Boc-Pro(F)-OH (5 g, 21.46 mmol, 1 당량)의 용액에, 고세츠 시약 (3.1 ml, 23.61 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에, 피리딘 중 아민 (2.65 g, 27.9 mmol, 1.3 당량)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 농축시켜 모든 휘발물을 제거하고, 과량의 DCM 중에 재용해시켰다. 유기층을 10％ 시트르산, NaCl(포화) 및 NaHCO₃(포화)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 디클로로메탄 중 10 내지 15％ 아세톤을 사용한 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다.

(2S,4R)-4- 플루오로 -N-( 피리다진 -3-일) 피롤리딘 -2- 카르복스아미드

Boc-보호된 아미드를 4 M HCl/디옥산에 녹이고, 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 에테르와 함께 분쇄하여, 표제 화합물을 수득하였다.

(2S,4R)-1-((2R)-3- 시클로부틸 -2-((N-( 테트라히드로 -2H-피란-2- 일옥시 ) 포름아미도 ) 메틸 ) 프로파노일 )-4- 플루오로 -N-( 피리다진 -3-일) 피롤리딘 -2- 카르복스아미드

베르시액시드 (500 mg, 1.77 mmol, 1 당량)의 차가운 DMF 용액 (15 mL)에, DIEA (1.7 ml, 9.72 mmol, 5.5 당량), 아민ㆍHCl 염 (550 mg, 1.943 mmol, 1.1 당량) 및 HATU (739 mg, 1.943 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 과량의 에틸 아세테이트와 10％ 시트르산 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 NaCl 및 포화 NaHCO₃로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 10 내지 25％ 아세톤을 사용한 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (53％)을 수득하였다.

실시예 14 : 1-[2- 시클로부틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]-4-플 루오 로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (2- 옥시 - 피리다진 -3-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로부틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로부틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-1-옥소-3-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 3-피리다지닐 N-옥시드)으로부터 제조하였다.

6-((2S,4R)-1-( tert - 부톡시카르보닐 )-4- 플루오로피롤리딘 -2- 카르복스아미도 )피리다진 1- 옥시드

0℃에서 DCM 중 Boc-Pro(F)-OH (2.047 g, 8.154 mmol, 1 당량)의 용액에, 고세츠 시약 (1.2 ml, 8.97 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에, 피리딘 중 아민 (1.27 g, 11.42 mmol, 1.4 당량)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 농축시켜 모든 휘발물을 제거하고, 잔류물을 과량의 DCM에 용해시켰다. 유기층을 10％ 시트르산, NaCl(포화) 및 NaHCO₃(포화)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 디클로로메탄 중 2 내지 15％ 아세톤을 사용한 플래 쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (61％)을 수득하였다.

6-((2S,4R)-4- 플루오로피롤리딘 -2- 카르복스아미도 ) 피리다진 1- 옥시드

Boc-보호된 아미드를 4 M HCl/디옥산 중에 녹이고, 반응물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 모든 휘발물을 제거하고, 잔류물을 에테르와 함께 분쇄하여 표제 화합물을 수득하였다.

6-((2S,4R)-1-((2R)-3- 시클로부틸 -2-((N-( 테트라히드로 -2H-피란- 2일옥시 ) 포름아미도 ) 메틸 ) 프로파노일 )-4- 플루오로피롤리딘 -2- 카르복스아미도 ) 피리다진 1- 옥시드

베르시액시드 (571 mg, 2 mmol, 1 당량)의 차가운 DMF 용액 (20 mL)에, DIEA (2.51 ml, 14.4 mmol, 6 당량), 아민ㆍHCl 염 (718 mg, 2.4 mmol, 1.2 당량) 및 HATU (913 mg, 2.4 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 과량의 에틸 아세테이트와 10％ 시트르산 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 NaCl 및 포화 NaHCO₃로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 10 내지 20％ 아세톤, 이어서 DCM 중 2 내지 8％ 메탄올을 사용한 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (44％)을 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d₆):

실시예 15 : 1-[2- 시클로펜틸메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 ]-4-플 루오 로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리다진 -3- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로펜틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시]-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로펜틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-2-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 3-피리다지닐)으로부터 제조하였다.

(2S,4R)-1-((2R)-3- 시클로펜틸 -2-((N-( 테트라히드로 -2H-피란-2- 일옥시 ) 포름아미도 ) 메틸 ) 프로파노일 )-4- 플루오로 -N-( 피리다진 -3-일) 피롤리딘 -2- 카르복스아미드

실시예 16 : 1-[2- 시클로펜틸메틸 -3-[ 포르밀 -히드록시-아미노]- 프로피오닐 ]- 4-플 루오 로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (2- 옥시 - 피리다진 -3-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로펜틸메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로펜틸 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-2-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 3-피리다지닐 N-옥시드)으로부터 제조하였다.

6- 아미노피리다진 1- 옥시드

아세톤 중 6-아미노피리다진의 용액에 아세톤 중 MCPBA (1 당량)의 용액을 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고, 에테르를 잔류물에 첨가하였다. 고체를 여과하고, 건조시켜, 표제 화합물을 수득하였다. 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

0℃에서 DCM 중 Boc-Pro(F)-OH (2.047 g, 8.154 mmol, 1 당량)의 용액에, 고세츠 시약 (1.2 ml, 8.97 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에, 피리딘 중 아민 (1.27 g, 11.42 mmol, 1.4 당량)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 농축시켜 모든 휘발물을 제거하고, 잔류물을 과량의 DCM에 용해시켰다. 유기층을 10％ 시트르산, NaCl(포화) 및 NaHCO₃(포화)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 디클로로메탄 중 2 내지 15％ 아세톤을 사용한 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (61％)을 수득하였다.

Boc-보호된 아미드를 4 M HCl/디옥산에 녹이고, 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 모든 휘발물을 제거하고, 잔류물을 에테르와 함께 분쇄하여, 표제 화합물을 수득하였다.

6-((2S,4R)-1-((2R)-3- 시클로펜틸 -2-((N-( 테트라히드로 -2H-피란-2- 일옥시 ) 포름아미도 ) 메틸 ) 프로파노일 )-4- 플루오로피롤리딘 -2- 카르복스아미도 ) 피리다진 1- 옥시 드

실시예 17 : 1-[2- 시클로헥실메틸 -3-( 포르밀 -히드록시-아미노)- 프로피오닐 -4-플루오로- 피롤리딘 -2- 카르복실산 피리다진 -3- 일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로헥실메틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로헥실 메틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피리다진-3-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 3-피리다지닐)으로부터 제조하였다.

2-시클로헥실메틸-3-(포르밀-히드록시-아미노)-프로피온산 빌딩 블록을 실시예 1에서 상응하는 시클로헥실메틸말론산의 합성에 대해 기재된 바와 같이, 2-시클로헥실메틸말론산으로부터 제조하였다.

2- 시클로헥실메틸 -말론산

표제 화합물을 (브로모메틸)시클로헥산으로부터 제조하였다.

2- 시클로헥실메틸 -아크릴산

4-벤질-3-(2- 시클로헥실메틸 -아크릴로일)- 옥사졸리딘 -2-온

4-벤질-3-[2- 시클로헥실메틸 -3-( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시아미노 )- 프로피오닐 ]- 옥사졸리딘 -2-온)

N-[3-(4-벤질-2-옥소- 옥사졸리딘 -3-일)-2- 시클로헥실메틸 -3-옥소-프로필]-N-(테 트라히드로 -피란-2- 일옥시 )- 포름아미드

실시예 18 : 1-{4- 시클로프로필 -2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 부티릴 }-4-플루오로-피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-일아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-시클로프로필에틸-3-[포르밀-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-아미노]-프로피온산 A-7 (R = 시클로프로필 에틸) 및 피롤리딘-2-카르복실산 피라진-2-아미드 A-8 (X = CHF, n = 1, R₁ = 2-피라지닐)으로부터 제조하였다.

2-시클로프로필에틸-3-(포르밀-히드록시-아미노)-프로피온산 빌딩 블록을 실시예 1에서 상응하는 시클로펜틸메틸메틸 말론산의 합성에 대해 기재된 바와 같이, 2-시클로프로필에틸말론산으로부터 제조하였다.

( 브로모에틸 ) 시클로프로판

표제 화합물을 2-시클로프로필에탄올로부터 제조하였다.

2- 시클로프로필에틸 -말론산

2- 시클로프로필에틸 -아크릴산

4-벤질-3-(2- 시클로프로필에틸 -아크릴로일)- 옥사졸리딘 -2-온

N-[3-(4-벤질-2-옥소- 옥사졸리딘 -3-일)-2- 시클로프로필에틸 -3-옥소-프로필]- N-(테 트라히드 로-피란-2- 일옥시 )- 포름아미드

2- 시클로프로필에틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]-프로피온산

1-{2- 시클로프로필에틸 -3-[ 포르밀 -( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )-아미노]- 프로피오닐 }-4- 플루오로 - 피롤리딘 -2- 카르복실산 피라진-2- 일아미드

실시예 19: 펩티드 데포르밀라제 활성의 억제

PDF/FDH 결합 분석 (문헌 [Lazennec et al., Anal. Biochem., Vol. 224, pp. 180-182 (1997)])을 사용하였다. 이 결합 분석에서, PDF에 의해 그의 기질 fMAS로부터 방출되는 포르메이트를 커플링 효소 FDH에 의해 산화시켜, NAD⁺ 한 분자를 NADH로 환원시켰으며, 이는 340 nM에서의 흡수 증가를 일으켰다. 모든 분석을 실 온에서, 반-영역(half-area) 96-웰 마이크로타이터 플레이트(코닝(Corning)) 내 50 mM HEPES (pH 7.2), 10 mM NaCl, 0.2 mg/mL BSA의 완충액 중에서 수행하였다. 0.5 유닛/mL FDH, 1 mM NAD⁺ 및 fMAS의 혼합물을 원하는 농도로 첨가하여, 반응을 개시하였다. IC₅₀ (효소 활성의 50％를 억제하는데 필요한 농도) 값을 측정하기 위해, PDF를 다양한 농도의 억제제와 함께 10분 동안 예비 배양시키고, 4 mM fMAS를 함유하는 반응 혼합물을 첨가함으로써 포르밀제거 반응을 개시하였다. 초기 반응 속도 y를 스펙트라맥스(SpectraMax) 플레이트 판독기(몰리큘라 디바이시즈(Molecular Devices); 캘리포니아주 서니베일 소재)를 사용하여 340 nM에서 흡수 증가의 초기 속도로서 측정하였다. 효소 활성의 50％가 억제되는 억제제 농도 [In]인 IC₅₀을 하기 식을 사용하여 계산하였다.

y = y₀/(1 + [In]/IC₅₀)

상기 식에서, y₀는 억제제가 없는 경우의 반응 속도이다.

y = y₀/2일 때 [In]인 IC₅₀에 대해 상기 식을 풀면 IC₅₀이 얻어진다. IC₅₀을 상용 소프트웨어 패키지(델타포인트, 인코포레이티드(Deltapoint, Inc.); 일리노이주 시카고 소재)를 사용하여 비선형 최소-자승 회귀법에 기초하여 계산하였다.

이 분석법을 사용하여, 다양한 화합물의 IC₅₀을 측정하였다. 다양한 화합물에 대한 IC₅₀을 금속 이온으로서 니켈 및 아연을 함유하는 데포르밀라제 효소에 대 하여 측정하였다. 아연-함유 데포르밀라제에 대하여 측정된 화학식 I의 바람직한 화합물의 IC₅₀ 값은 약 0.001 μM 내지 약 0.2 μM의 범위였다. 니켈-함유 데포르밀라제에 대하여 측정된 화학식 I의 바람직한 화합물의 IC₅₀ 값은 약 0.005 μM 내지 약 3 μM의 범위였다.

실시예 20: 항미생물 활성 시험에 대한 분석

최소 억제 농도 (MIC)를 96-웰 포맷 플레이트에서 미량희석법을 사용하여 측정하였다. 화합물을 5 또는 10 mg/mL에서 DMSO 중에 현탁시키고, 사용할 때까지 4℃에 보관하였다. 이를 뮬러 힌톤 브로쓰(Mueller-Hinton Broth, MHB) 또는 트립티카제 소이 브로쓰(Trypticase Soy Broth, TSB)에서 희석하고, MIC 측정에 사용하였다. 2배 희석 시스템을 사용하여 시험되는 농도의 범위는 64 내지 0.0625 μ g/mL 최종 농도였다.

접종원을 트립티카제 소이 한천 (TSA)상에 배양한 세포로부터 제조하고, 35℃에서 밤새 인큐베이션하고, 5 내지 10 콜로니를 MHB 또는 TSB 브로쓰에 접종하는데 사용하고, 배양물을 35℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 밤새 인큐베이션 한 배양물을 1:10으로 희석시키고, 35℃에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 적절한 접종원 크기로 희석하고, 브로쓰 및 시험 화합물을 함유하는 웰에 가하였다. 접종원 크기는 2 × 10⁴ CFU/mL였다.

플레이트를 48시간 동안 35℃에서 인큐베이션하고, 세균에 대해 인큐베이션 한 지 18시간 후에 MIC를 기록하였다. MIC는 인큐베이션 후 가시적 증식을 보이지 않는 화합물의 최저 농도로 정의된다.

화학식 I의 다양한 바람직한 화합물에 대한 최소 억제 농도는 에이치. 인플루엔자 (4 균주) 에 대해 약 0.25 μg/mL 내지 약 32 μg/mL; 에스. 오레우스 (4 균주)에 대해 약 0.001 μg/mL 내지 8 μg/mL 초과; 에스. 뉴모니애 (4 균주)에 대해 약 0.016 μg/mL 내지 약 16 μg/mL; 및 엠. 카타르할리스에 대해 약 0.008 μg/mL 내지 약 16 μg/mL의 범위였다. 데포르밀라제 효소는 이. 콜라이로부터 수득하였다.

다음은 화학식 I의 화합물을 함유하는 대표적인 제약 제형이다.

실시예 21: 정제 제형

하기 성분들을 친밀하게 혼합하고, 분할선이 하나인 정제로 압축하였다.

성분 당 양 정제 ( mg )

본 발명의 화합물 400

옥수수 전분 50

크로스카르멜로스 나트륨 25

락토오스 120

마그네슘 스테아레이트 5

실시예 22: 캡슐제 제형

하기 성분들을 친밀하게 혼합하고, 경질-쉘 젤라틴 캡슐에 충전하였다.

성분 당 양 캡슐 ( mg )

본 발명의 화합물 200

락토오스, 분무-건조 148

마그네슘 스테아레이트 2

실시예 23: 현탁액제 제형

하기 성분들을 혼합하여, 경구 투여용 현탁액을 형성하였다.

성분 양

본 발명의 화합물 1.0 g

푸마르산 0.5 g

염화 나트륨 2.0 g

메틸 파라벤 0.15 g

프로필 파라벤 0.05 g

과립 설탕 25.0 g

소르비톨 (70％ 용액) 13.00 g

비이검(Veegum) K

(반더빌트 코포레이션(Vanderbilt Co.)) 1.0 g

향미제 0.035 mL

착색제 0.5 mg

증류수 100 mL까지 충분량

실시예 24: 주사제 제형

하기 성분들을 혼합하여, 주사용 제형을 형성하였다.

성분 양

본 발명의 화합물 0.2-20 mg

아세트산나트륨 완충 용액, 0.4 M 20 mL

HCl (1 N) 또는 NaOH (1 N) 적절한 pH까지 충분량

물 (증류, 멸균) 20 mL까지 충분량

실시예 25: 좌제 제형

본 발명의 화합물과 위텝솔(Witepsol; 등록상표) H-5 (포화된 식물성 지방산의 트리글리세리드; 리치스-넬슨, 인코포레이티드(Riches-Nelson, Inc.); 뉴욕 소재)를 혼합하여 총 중량 2.5 g의 좌제를 제조하였고, 이는 하기 조성을 갖는다.

본 발명의 화합물 500 mg

위텝솔(등록상표) H-15

기타성분

실시예 26: (2S,4R)-1-{(R)-2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }-4-이소프로필- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (5- 플루오로 -피리딘-2-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-n-부틸-3-[포르밀-N-벤질옥시]-아미노-프로피온산 A-7 및 4-이소프로필-피롤리딘-2-카르복실산-[2-아미노-5-플루오로피리딘]으로부터 제조하였다.

실시예 27: (2S,4R)-1-{(R)-2-[( 포르밀 -히드록시-아미노)- 메틸 ]- 헥사노일 }-4-이소프로필- 피롤리딘 -2- 카르복실산 (5- 플루오로 -피리딘-2-일)-아미드

표제 화합물을 일반적 방법 A에 따라 2-n-부틸-3-[포르밀-N-벤질옥시]-아미노-프로피온산 A-7 및 4-이소프로필-피롤리딘-2-카르복실산-[2-아미노-5-플루오로 피리딘-N-옥시드]로부터 제조하였다.

실시예 28: 스트렙토코쿠스 뉴모니애 ( Streptococcus pneumoniae ) 펩티드 데포르밀라제 G70V /D 돌연변이의 생화학적 및 구조적 특성화

펩티드 데포르밀라제 활성은 에스. 뉴모니애의 성장에 필수적이다. NVP-LBM415에 대해 선별된 돌연변이는 시험관 내에서 성장하지 못하였고, 따라서 상기 화합물에 내성을 부여하는 defB에서의 돌연변이는 효소 활성을 극적으로 변경시킬 것으로 예상되지 못할 것이다. 상기 가정을 시험하기 위해, 펩티드 데포르밀라제 활성의 동역학을 기질 f-Met-Ala-Ser를 사용하여 측정하였다.

표 1에서의 데이터는 돌연변이 효소에서 선택된 변형은 펩티드 데포르밀라제 활성을 극적으로 변경시키지 않는다는 가정을 뒷받침해 준다. 돌연변이 효소가 에스. 뉴모니애의 정상적인 성장을 유지하면서 특정 PDF 억제제로부터의 일정 수준의 보호를 제공할 수 있음이 명백하다.

PDF G70V/D 돌연변이를 사용하는 일차 MIC 시험은 상기 돌연변이가 P3 N-옥시드 구성성분을 함유하는 관련 PDF 억제제의 하위 집단에 대해 상기 기가 없는 고도로 연관된 화합물에 대해서보다 덜 민감함을 시사하였다. 더 연구하기 위해서, 상기 특징에서만 차이가 있는 특정 쌍의 화합물의 IC₅₀ 및 MIC를 측정하였다. 표 2는 그 구조를 나타내며, 세 쌍의 유사 화합물과 본래의 선택 화합물인 NVP-LBM-415의 평균 IC₅₀ 및 MIC를 기술한다.

각 화합물의 P3 N-옥시드 치환기 이외의 측면으로부터 비롯되는 효소 억제에서의 가변성을 제거하도록 고안된 통계 분석을 각 쌍의 억제제에 대해 수행하였다. 모든 경우에, 각 쌍에서 N-옥시드를 함유하는 파트너에서의 평균 IC₅₀의 증가가 통계적으로 유의하였으며, 그 작용제에서의 증가된 MIC와도 상호관련되었다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 I>

상기 식에서,

R1은 수소, 알킬, 헤테로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이고,

R3는 알킬 또는 헤테로알킬이고,

R4는 아릴 또는 헤테로아릴이고,

n은 0 내지 3이되,

단, R1이 시클로알킬이고/이거나 R4가 고리 중 2, 3 또는 4개의 질소 헤테로원자를 가지며, 이들 고리 질소 헤테로원자 중 하나 이상이 임의로는 산화된 것인, 임의로 치환되는 6원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다.
제1항에 있어서, R3가 이소프로필인 화합물.
제1항에 있어서, R1이 시클로알킬인 화합물.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 II의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 II>

상기 식에서, R₆, R₇, R₈ 및 R₉은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 페닐, 할로겐, 히드록실 또는 알콕시이다.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 II1의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 II1>

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 수소이고, R8은 플루오로이다.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 II2의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 II2>

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 수소이다.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 II3의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 II3>

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 수소이다.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 II4의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 II4>

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 수소이다.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 II5의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

<화학식 II5>

상기 식에서, R₆, R₇ 및R₈은 수소이다.
제1항에 있어서, R1이 시클로헥실, 시클로펜틸, 시클로부틸 또는 시클로프로필로부터 선택되는 것인 화합물.
제1항에 있어서, R1이 n-부틸인 화합물.
제10항에 있어서, R4가 2-아미노, 5-플루오로피리딘 N-옥시드, 2-피라진, 3- 피리다진, 3-피리미딘, 4-피리미딘, 3-피리다진 N-옥시드, 또는 2-아미노, 5-플루오로피리딘으로부터 선택되는 것인 화합물.
제11항에 있어서, R4가 2-아미노, 5-플루오로피리딘 N-옥시드, 2-피라진, 3-피리다진, 3-피리미딘, 4-피리미딘, 3-피리다진 N-옥시드, 또는 2-아미노, 5-플루오로피리딘으로부터 선택되는 것인 화합물.
제10항에 있어서, R3가 이소프로필인 화합물.
제11항에 있어서, R3가 이소프로필인 화합물.
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 III의 헤테로아릴인 화합물.

<화학식 III>
제1항에 있어서, R4가 하기 화학식 III1의 헤테로아릴인 화합물, 그의 염 또는 전구약물.

상기 식에서, R₆, R₇, R₉는 수소이고, R₈은 플루오로이다.