KR20080078675A

KR20080078675A - 급성 관상동맥 증후군의 예후 예측 방법

Info

Publication number: KR20080078675A
Application number: KR1020087014796A
Authority: KR
Inventors: 노리아키 구메; 고로 고미나미
Original assignee: 시오노기 앤드 컴파니, 리미티드
Priority date: 2005-12-22
Filing date: 2006-12-21
Publication date: 2008-08-27
Also published as: EP1975614A4; EP1975614A1; JPWO2007072896A1; CA2639624A1; AU2006328412A1; WO2007072896A1; AU2006328412B2; TW200739077A; CN101341406A; US20110045504A1

Abstract

본 발명의 목적은 급성 관상동맥 증후군의 예후 예측을 위한 진단용 표지자를 제공하는 것이다. 이를 위해, 본 발명은 혈액내 가용성 LOX-1의 농도를 측정함으로써 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험을 예측하는 방법을 제공한다.

Description

급성 관상동맥 증후군의 예후 예측 방법{METHOD FOR PREDICTION OF PROGNOSIS OF ACUTE CORONARY SYNDROME}

본 발명은 급성 관상동맥 증후군의 미래 재발 위험을 예측하는 방법 및 이러한 방법을 실행하기 위한 키트에 관한 것이다.

불안정성 협심증 내지 급성 심근 경색증, 및, 나아가, 이에 의해 악화되는 급성 심장사의 일련의 상태는 포괄적으로 급성 관상동맥 증후군(ACS)으로 지칭된다. 이들은 모두 심장에 영양을 공급하는 관상동맥의 동맥경화를 통해 발병하는 죽종(플라크) 파열의 결과로서 관상동맥의 협착 또는 폐색이 발생하는 상태로 간주된다. 현대 사회에서 급성 관상동맥 증후군은 현재 증가 일로에 있는 반면에, 대부분의 경우 갑작스럽게 전조도 없이 발생하므로, 이들은 종종 소생될 수 없고 돌연사를 야기한다. 심지어 환자가 신속히 병원에 수용된 경우에도, 환자의 생명을 구하기 위하여 응급 심장 수술 또는 응급 경피적 관상동맥 혈관 재건술(경피적 관상동맥 중재술; PCI) 등이 종종 요구되고, 의료 경제 부담은 계산하기 어렵다.

현재 급성 관상동맥 증후군의 재발은 항혈전제 및 콜레스테롤-저하제(스타 틴) 등을 사용한 치료를 통해 어느 정도 예방될 수 있지만, 대규모 임상 시험은 스탄틴이 약 30%의 환자의 재발을 감소시키는 반면, 상기 종류의 약제를 사용한 치료에 의해서는 나머지 70%의 환자의 재발은 예방할 수 없음을 나타낸다. 결과적으로, 급성 관상동맥 증후군의 재발을 완전히 예방하는 신규한 치료 프로토콜이 요구되지만, 현재 그러한 치료법은 존재하지 않는다. 이러한 상황하에, 고위험 사례의 정확한 식별 및 집중적 관리를 통한 발증의 예방, 또는 이것이 안된다면, 급작스러운 병원외 발증의 예방이 구명 및 예후의 개선에 유용할 것으로 여겨진다.

현재, 재발의 예후는 기계적인 검사, 예컨대 관상동맥 조영술 또는 좌심실 조영술을 비롯한 심장 카테터 검사, 또는 바이오마커를 사용하여 임상적으로 행해진다. 그러나, 전자는 시간 및 비용면에서 실행하기에 용이하지 않고, 결과적으로 환자에게 무거운 부담을 안긴다. 또한, 이들은 재발 예측의 관점에서 완전한 정보를 제공하지 않는다. 예를 들어, 현재까지의 연구는 재발의 위험이 관상동맥 조영술에서의 관상동맥의 협착도에 의해서는 예측될 수 없음을 나타낸다(하기 문헌 4 참조). 후자에서는, 급성 단계 표지자, 예컨대, 트로포닌 T, H-FABP 및 고감도 CRP 등, 또는 위험 인자 표지자, 예컨대, 총 콜레스테롤, 트라이글리세라이드, HDL 콜레스테롤, 및 잔여 지단백질(RPL) 콜레스테롤 등이 사용되지만, 이들은 감도 및 특이성의 이유 때문에 재발을 예측하는 표지자로서 충분히 효과적이지 못하다(하기 문헌 5 참조).

최근에, 급성 관상동맥 증후군 에피소드가 폐색성 죽상경화 플라크의 파열 또는 연속적인 침식에 의해 생성된 폐색 혈전의 형성에 기인하는 것으로 밝혀졌다. 혈관벽에서의 염증성 반응 및 산화적 스트레스는 플라크 파열 및 침식에 결정적인 역할을 하지만, 이들중에서 옥사이드-변성된 LDL(저밀도 지단백질)에 의해 개시된, 혈관벽의 기능성 장애, 근본적으로 증가된 단백질 분해효소 활성 및 아포프토시스(세포 자멸)가 주요한 원인으로 공지되어 있다. LOX-1(렉틴-유사 산화된 저밀도 지단백질 수용체-1)은 이들 산화된 LDL에 대한 수용체 단백질로서 확인되었다(하기 문헌 1 참조). 신체에서, 이러한 LOX-1은 통상적인 막 단백질로서 세포 표면상에서 발현되지만, 단백질 분해 효소 작용이 가용성 LOX-1로서 막 통과 부위의 세포외 영역에서 이들을 분열하는 것이 공지되어 있다(하기 문헌 2 참조). 이러한 가용성 LOX-1은, 이들의 혈중 농도가 급성 관상동맥 증후군의 급성 상태에서 현저하게 증가하므로, 급성 관상동맥 증후군의 주요한 진단용 표지자일 수 있음이 보고되었다(하기 문헌 3 참조). 그러나, 이의 효능은 공지되어 있지 않다.

[문헌 1] Nature, 1997, Vol. 386, pp. 73-77

[문헌 2] Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2000, 20(3), pp. 715-720

[문헌 3] Circulation, 2005, 112(6), pp. 812-818

[문헌 4] Levine GN, et al.: N. Engl. J. Med., 1995, Vol. 332, pp. 512-521: Libby, Circulation, 1995, Vol. 91, pp. 2844-2850

[문헌 5] M. Panteghini, Role and importance of biochemical markers in clinical cardiology: European Heart J., 2004, Vol.25, pp. 1187-1196

도 1은 인간 가용성 LOX-1의 표준 곡선이다.

도 2는 급성 관상동맥 증후군이 재발하지 않은 환자 군과 급성 관상동맥 증후군이 재발하거나 사망한 환자 군에서의 인간 가용성 LOX-1의 측정 결과의 중간치, 10번째, 25번째, 75번째 및 90번째 백분위수를 도시한 그래프이다.

도 3은 급성 관상동맥 증후군이 재발하지 않은 환자 군과 급성 관상동맥 증후군이 재발하거나 사망한 환자 군에서의 고감도 CRP의 측정 결과의 중간치, 10번째, 25번째, 75번째 및 90번째 백분위수를 도시한 그래프이다.

도 4는 급성 관상동맥 증후군이 재발하지 않은 환자 군과 급성 관상동맥 증후군이 재발하거나 사망한 환자 군에서의 심장 초음파 검사에 의한 좌심실 박출 계수(LVEF)의 측정 결과의 중간치, 10번째, 25번째, 75번째 및 90번째 백분위수를 도시한 그래프이다.

도 5는 급성 관상동맥 증후군이 재발하지 않은 환자 군과 급성 관상동맥 증후군이 재발하거나 사망한 환자 군에서의 트로포닌 T의 측정 결과의 중간치, 10번째, 25번째, 75번째 및 90번째 백분위수를 도시한 그래프이다.

도 6은 인간 가용성 LOX-1의 혈중 농도의 분별치(cutoff)가 5ng/mL로 고정된 경우에서의, 급성 관상동맥 증후군의 재발(사망을 포함)의 추적 결과를 도시한 카플란-메이어(Kaplan-Meir) 곡선이다.

도 7은 인간 가용성 LOX-1의 혈중 농도의 분별치가 3ng/mL로 고정된 경우에서의, 급성 관상동맥 증후군의 재발(사망을 포함)의 추적 결과를 도시한 카플란-메이어 곡선이다.

본 발명의 목적은 급성 관상동맥 증후군의 재발을 예방하기 위한 고감도 예후 예측 방법을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 가용성 LOX-1의 혈중 농도와 급성 관상동맥 증후군의 재발률의 상관 관계를 연구하기 위하여, 약 7년 동안 급성 관상동맥 증후군을 앓고 있는 환자의 예후를 추적하였다. 그 결과로서, 본 발명자들은 가용성 LOX-1 농도 및 급성 관상동맥 증후군의 재발률 사이의 높은 상관 관계를 발견하여, 본 발명에 이르렀다.

본 발명에 따라서, 시험 대상으로부터 채취한 시험 시료의 가용성 LOX-1 농도를 측정함으로써 급성 관상동맥 증후군의 재발을 예측하는 것이 가능하다.

본 발명은 시험 대상으로부터 채취한 시험 시료의 가용성 LOX-1의 농도를 측정하는 공정을 포함하는, 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 시험 대상을 선별하는 방법으로서, 이때, 시험 시료에서의 상기 농도가 기준치보다 높은 상태가 시험 대상의 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 상태임을 나타내는 표지자로서 해석되는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법이 사용되는 경우, 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 시험 대상을 용이하게 선별할 수 있고, 이러한 발생의 위험을 예측할 수 있다.

구체적으로, 본 발명은 시험 대상으로부터 채취한 시험 시료의 가용성 LOX-1 농도를 측정하는 공정을 포함하다. "시험 대상"은, 비제한적으로, 바람직하게는, 급성 관상동맥 증후군에 걸리기 쉬운 사람(측정의 결과로서 이 병을 앓고 있는 것으로 간주되는 사람을 포함함) 또는 급성 관상동맥 증후군에 걸리기 쉬운 것으로 의심되는 사람이다.

상기 시험 대상으로부터의 시료(이하, "시험 시료"라 함)를 수집한다. 시험 시료는 소변, 전혈, 혈장, 혈청 또는 혈액을 포함하되, 혈장 또는 혈청이 바람직하다.

이어서, 상기 시험 시료의 가용성 LOX-1 농도를 측정한다. 본 발명에서 가용성 LOX-1은, 예를 들어, 서열 번호 1의 아미노산 서열에 도시된 인간 LOX-1의 세포외 영역의 일부분을 분열하는 단백질 분해효소를 사용하여 생성된다. 분열 지점에 따라 상이해지는 다양한 가용성 LOX-1이 혈액내에 존재한다. 상기 아미노산 서열의 전형적인 예는, 예를 들어, 서열 번호 2 및 3에 열거된 것들을 포함하지만, 이들에 대해 1 내지 5개의 아미노산이 삭제되거나, 첨가되거나, 또는 치환될 수 있다. 이러한 관점에서, 당업자에게 공지된 다양한 방법(예컨대, 웨스턴 블롯팅(western blotting), 방사 면역측정법)에 의해 가용성 LOX-1 농도를 측정하는 것이 가능하지만, 인간 가용성 LOX-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편을 사용하는 ELISA가 일반적으로 바람직하다. 항체는 가용성 LOX-1 폴리펩타이드 또는 이들의 일부분을 특이적으로 인식한다. 상기 항체는 통상적인 방법에 의해 수득될 수 있다(예컨대, 문헌[Shin Seikagaku Shiken Kouza 1, Protein 1, p. 389, 1992]). 또한, 단클론성 항체도 통상적으로 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다(예컨대, 문헌[Tankuron Koutai, Kodansha Scientific, 1983]). 이어서, 시험 시료의 가용성 LOX-1 농도를 측정하기 위한 진단용 키트의 구성요소로서 상기 항체를 사용하는 것이 가능하다.

ELISA의 원리를 더욱 상세히 설명하면, 이는 효소 면역측정법에 기초한다. 즉, 이러한 방법을 사용하여, 예를 들어, 먼저 항-인간 가용성 LOX-1 항체, 바람직하게는 단클론성 항체(제 1 항체)가 고체 지지체(예를 들어, 플레이트)상에 고체상화되고, 이어서, 비특이적인 단백질(예를 들어, 소 혈청 알부민)로 차단되어 비특이적 흡착을 방지한다. 이어서, 인간 가용성 LOX-1 표준 용액 또는 시험 시료를 상기 고체상화된 플레이트에 첨가하고 반응시킨다. 반응 후, 플레이트를 세정하고, 효소 표지자-표지된 항-인간 가용성 LOX-1 항체(제 2 항체)를 첨가하고 반응시킨다. 플레이트를 세정한 후, 매트릭스를 첨가하여 효소 반응을 수행하고, 플레이트상에 잔류하는 효소 활성을 흡광도로서 판독한다.

상기에 있어서, 다클론성 항체가 제 1 항체로서 사용될 수 있고, 단클론성 항체가 제 2 항체로서 사용될 수 있다. 상기 방법에 따라서, 사용된 표준 용액 또는 시험 시료의 가용성 LOX-1 농도가 높을수록, 효소 활성(흡광도)이 강한 것으로 간주한다. 상기 표준 용액의 흡광도를 도시하여 표준 곡선(교정 곡선)을 작성하고, 시험 시료의 흡광도를 상기 표준 곡선과 비교함으로써, 시험 시료에 함유된 가용성 LOX-1의 농도를 용이하게 판독할 수 있다. 시험 대상에서 급성 관상동맥 증후군이 발병할 위험은 상기 값을 미리 설정된 기준치(분별치)와 비교함으로써 용이하게 판단될 수 있다.

구체적으로, 수득된 측정치를 기준치와 비교하여 기준치보다 높은 경우에, 시험 대상은 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 군으로서 식별된다, 즉, 고-위험 군으로서 선별된다. 기준치는 시험 대상의 연령, 성별, 앓고 있는 다른 병 등에 따라 다르지만, 당업자라면 각각의 개별 환자에게 허용될 수 있는 가양성(false-positive) 및 가음성(false-negative) 결과에 상응하는 다른 기준치를 설정할 수 있다. 예를 들어, 혈청이 급성 관상동맥 증후군의 급성 상태에 있는 시험 대상으로부터 유래하고 시험 샘플로서 사용되는 경우, 3ng/mL가 기준치로서 설정될 수 있다. 기준치를 초과하는 시험 대상은 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 매우 높다고 할 수 있다. 또한, 과거에 급성 관상동맥 증후군을 결코 앓은 적이 없는 임의의 사람들의 대조군의 측정 치, 또는 동일한 환자에 대해 미리 측정된 값을 위험을 예측하기 위한 기준치로서 사용할 수도 있다.

상기한 바와 같이, 본 발명은 급성 관상동맥 증후군의 재발을 예측하기 위한 매우 유용한 정보를 제공할 수 있다. 본 발명은 가용성 LOX-1의 농도를 측정하는 공정을 포함하는, 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 시험 대상을 선별하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 급성 관상동맥 증후군의 재발을 예측하기 위한 표지자로서 가용성 LOX-1의 용도에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 상기 방법을 실행할 수 있는 키트에 관한 것이다. 본 키트는 인간 가용성 LOX-1에 대한 특이적인 항체, 및 이의 단편을 포함한다. 본 발명의 키트 및 이를 사용하여 시험 시료의 가용성 LOX-1 농도를 측정하는 방법은 하기에서 상세히 기술될 것이다.

본 발명의 키트를 사용하는 측정 방법의 시험 시료로서 혈청 또는 혈장을 사용하는 것이 바람직하고, 이들은 통상적인 방법에 따라 회수된 혈액으로부터 제조될 수 있다. 인간 가용성 LOX-1 단클론성 항체 또는 다클론성 항체(항-인간 가용성 LOX-1 항체)는 본 발명의 키트의 필수 구성요소이고, 이들은 각각 가용성 LOX-1에 대한 다클론성 항체 또는 단클론성 항체와 조합되거나, 또는 2개 형태의 단클론성 항체와 조합되는 것이 바람직하다. 플레이트상에 고체화된 항체는 단클론성 항체가 바람직하고, 이것은 예비-고체화된 플레이트 형태로 사용될 수 있다. 이것은 또한 이의 원래의 친화성 겔 형태로 사용될 수 있거나, 또는 진탕하거나 원심분리할 수 있는 적합한 용기 또는 시험관에서 이를 제조하여 친화성 겔의 비결합 분획을 제거하는 것이 가능하다.

또한, 상기 고체상화된 플레이트 또는 겔을 미리 적합한 완충 용액으로 완충하는 것이 바람직하다. 나아가, 상기 고체상화된 플레이트 또는 겔은 통상적인 방부제, 예컨대 프로클린(ProClin) 150 등을 포함할 수도 있다. 효소-표지된 항-인간 가용성 LOX-1 항체를 본 발명의 키트의 구성요소인 ELISA를 위한 제 2 항체로서 공급하는 것이 더욱 바람직하다. 또한, 안정화제 및/또는 방부제, 예컨대 소 혈청 알부민 등이 필요에 따라 본 발명의 키트에 혼합될 수도 있다. 이러한 방부제는, 키트에 사용될 경우, 시험 값에 영향을 주지 않을 것들로부터 선택되어야 한다.

본 발명의 키트는 또한 흡착을 방지하기 위한 계면활성제, 예컨대, 3-[(3-콜아미도프로필) 다이메틸암모니오] 프로판 설폰산 등, 또는 수용성 또는 수혼화성 글리세린, 알콜, 또는 글리콜을 함유할 수 있고, 혼합된 유기 용매 등, 예컨대, 에탄올 및 다이에틸에터, 또는 클로로포름 및 메탄올을 탈지제로서 함유할 수 있다.

실시예 1

(1) 가용성 LOX-1을 표지하기 위한 다클론성 항체의 제조

인간 LOX-1 세포외 영역을 발현시키는 대장균(E. coli)(히스-태그(his-tag)를 붙임)을 배양하였고, Ni-NTA 겔 컬럼을 사용하여 상기 대장균으로부터 인간 LOX-1 세포외 영역 단백질을 정제하였다. 약 0.8mg/mL의 상기 단백질을 함유하는 생리적 식염수 용액을 등량의 프로인트(Freund) 완전 보조제와 완전히 혼합하여 유상액을 제조하였다. 이어서, 상기 유상액 0.5mL를 3주 간격으로 6회 토끼(일본 화이트종, 암컷)의 등에 접종하였다. 최종 접종이 완료된 후 10번째 날에 토끼로부터 피를 뽑아 항혈청을 수득하였다.

(2) 효소-표지된 항체의 제조

4.61mg의 효소(겨자무 과산화효소)를 0.4mL의 0.1몰/L 인산염 완충 용액(pH 6.0)에 용해시키고, 0.4mg의 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트를 첨가하고, 30℃에서 60분 동안 반응시켰다. 반응 용액을 겔 여과 컬럼을 사용하여 정제하여 3.10mg의 말레이미드-활성화된 효소를 수득하였다.

한편, IgG 분획을 펩신 소화한 후, 항혈청을 겔 여과 컬럼으로 정제하여 F(ab')₂ 단편을 수득하였다. 이어서, 머캡토에틸아민으로 F(ab')₂ 단편을 환원시키고, 겔 여과 HPLC로 이를 정제하여 Fab' 단편을 수득하였다. 3.10mg의 수득된 말레이미드-활성화된 효소와 3.11mg의 Fab' 단편을 0.52mL의 0.1몰/L 인산염 완충 용 액(pH 6.0)에서 4℃에서 18시간 동안 반응시킨 후, 겔 여과 HPLC로 정제하여 3.47mg의 효소-표지된 항체를 수득하였다. 생성된 효소-표지된 항체의 Fab' 단편 1분자 당 평균 1.0개의 효소 분자를 도입하였다. 프로클린 150을 0.1부피%까지 효소-표지된 항체 용액에 방부제로서 첨가한 후, 용액을 나누어 -80℃에서 냉동 저장하였다.

(3) 항체 고체상화된 플레이트의 제조

항혈청의 IgG 분획 0.1mg을 0.1부피%의 프로클린 150을 함유하는 10mL의 0.1몰/L 인산염 완충 용액(pH 7.0)에 혼합한 후, 0.1mL를 96-웰 마이크로플레이트의 각각의 웰에 첨가하고 실온에서 밤새 방치하였다. 이를 약 0.2mL의 측정 완충 용액(0.5g/dL 소 혈청 알부민, 0.1g/dL 3-[(3-콜아미드프로필) 다이메틸암모니오] 프로판 황산, 및 0.1부피% 프로클린 150을 함유하는 0.1몰/L 인산염 완충 용액(pH 7.0))으로 2회 세정한 후, 0.2mL의 측정 완충 용액을 첨가하고, 실온에서 2시간 이상 블록킹(blocking)하였다.

(4) ELISA

0.1mL의 측정 완충 용액 및 0.01mL의 표준 견본 용액 또는 인간 혈청 시료를 항체 고체상화된 플레이트의 웰에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 배양한 후, 웰을 약 0.2mL의 측정 완충 용액으로 2회 세정하였다. 이어서, 0.1mL의 효소-표지된 항체 용액 희석액(약 900ng/mL)을 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 배양한 후, 약 0.2mL의 측정 완충 용액으로 2회 세정하고, 이어서, 0.1mL의 매트릭스 용액(예컨대, 다코(DAKO)에서 제조된 TMB+)을 첨가하고 실온에서 정확히 30분 동안 방치하고 차광하였다. 0.1mL의 0.5몰/L 황산을 사용하여 반응을 정지시키고, 플레이트 판독기를 사용하여 460nm 흡광도를 측정하였다.

(5) ELISA 표준 곡선

인간 혈청의 가용성 LOX-1을 측정할 수 있는 ELISA 방법을 1ng/mL 정량 한계 및 1 내지 100ng/mL 정량 범위로 평가하였다. 견본 표준 곡선을 도 1에 도시하였다.

실시예 2

급성 관상동맥 증후군 에피소드 후 재발의 예후에서의 가용성 LOX-1의 유용성

상기 ELISA 방법을 사용하여 급성 관상동맥 증후군의 최초 발병의 급성 상태 동안에 급성 관상동맥 증후군 환자(107 사례)로부터 수집한 말초 정맥 혈액에 함유된 가용성 LOX-1 농도를 측정하였다. 이어서, 상기 모든 환자의 이후의 임상적인 경과를 최대 약 7년 동안 추적하고, 이러한 결과에 기초하여, 급성 관상동맥 증후군이 재발한 환자의 군(결과적으로 사망한 환자를 포함함)(15 사례) 및 재발하지 않은 환자의 군(88 사례)으로 나누었다. 그리고, 크루스칼-왈리스 시험(Kruskal-Wallis testing)(문헌[Shinban Igakuheno toukeigaku, Asakura Syoten, 1993)을 각각의 군의 가용성 LOX-1 농도의 상관 관계에 적용하였다. 나아가, 급성 관상동맥 증후군의 주요한 임상적인 표지자로서 사용된 혈중 트로포닌 T 농도(89 사례), 혈중 고감도 CRP 수준(71 사례) 및 좌심실 박출 계수(LVEF)(88 사례)를 가용성 LOX-1과 비교하였다. 이때, 트로포닌 T를 전기화학적 광 방사 면역측정 키트(로슈(Roche))를 사용하여 측정하였고, 고감도 CRP를 면역혼탁계측 기(immunonephelometry) 측정 키트(다데 베어링(Dade Behring))를 사용하여 측정하였고, LVEF를 심장 초음파 검사를 사용하여 측정하였다. 구체적인 측정 기법에 대해서는 제조사의 지침을 따랐다.

시험 결과, 가용성 LOX-1의 혈중 농도는 재발 군 및 비재발 군에서 P<0.003의 통계학적 유의성(statistical significance)을 나타냈다(도 2). 반면에, 혈중 고감도 CRP 수준(0.348), 혈중 트로포닌 T 농도(0.782), 및 좌심실 박출 계수(LVEF)(0.782)와 같은 다른 표지자 및 검사 방법은 어떠한 유의성도 나타내지 않았다(도 3 내지 5). 이렇게 하여, 다른 표지자 및 검사 방법과는 달리, 단지 가용성 LOX-1만이 급성 관상동맥 증후군과의 높은 상관 관계를 나타낼 수 있었다(결과적으로 사망한 환자를 포함함).

실시예 3

재발 또는 사망까지의 시간을 고려한 통계학적 처리에 근거하여 가용성 LOX-1에 대한 카플란-메이어 곡선(문헌[Shinban Igakuheno toukeigaku, Asakura Syoten, 1993])을 측정하였다. 분별치를 3ng/mL 또는 5ng/mL로 설정하였다. 분별치가 3ng/mL 또는 5ng/mL 어느 쪽이든지, 양성 환자의 군이 음성으로 시험된 환자의 군보다 높은 빈도로 초기-단계의 급성 관상동맥 증후군의 재발, 또는 사망에 이르는 재발을 겪었다(도 6, 도 7). 이러한 결과는 가용성 LOX-1이 주요한 진단용 표지자로서 유용할 뿐만 아니라, 급성 관상동맥 증후군의 재발을 예측(예후 예측)하는 표지자로서 유효함을 나타낸다.

본 발명은 미래에 환자의 수가 증가될 것으로 예상되는 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 환자를 정확히 식별하고, 집중적으로 관리하는 것을 가능하게 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Shionogi & Co., Ltd. <120> Method for prediction of prognosis of acute coronary syndrome <130> 667216 <150> JP 2005-370030 <151> 2005-12-22 <160> 3 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 273 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Thr Phe Asp Asp Leu Lys Ile Gln Thr Val Lys Asp Gln Pro Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ser Asn Gly Lys Lys Ala Lys Gly Leu Gln Phe Leu Tyr Ser 20 25 30 Pro Trp Trp Cys Leu Ala Ala Ala Thr Leu Gly Val Leu Cys Leu Gly 35 40 45 Leu Val Val Thr Ile Met Val Leu Gly Met Gln Leu Ser Gln Val Ser 50 55 60 Asp Leu Leu Thr Gln Glu Gln Ala Asn Leu Thr His Gln Lys Lys Lys 65 70 75 80 Leu Glu Gly Gln Ile Ser Ala Arg Gln Gln Ala Glu Glu Ala Ser Gln 85 90 95 Glu Ser Glu Asn Glu Leu Lys Glu Met Ile Glu Thr Leu Ala Arg Lys 100 105 110 Leu Asn Glu Lys Ser Lys Glu Gln Met Glu Leu His His Gln Asn Leu 115 120 125 Asn Leu Gln Glu Thr Leu Lys Arg Val Ala Asn Cys Ser Ala Pro Cys 130 135 140 Pro Gln Asp Trp Ile Trp His Gly Glu Asn Cys Tyr Leu Phe Ser Ser 145 150 155 160 Gly Ser Phe Asn Trp Glu Lys Ser Gln Glu Lys Cys Leu Ser Leu Asp 165 170 175 Ala Lys Leu Leu Lys Ile Asn Ser Thr Ala Asp Leu Asp Phe Ile Gln 180 185 190 Gln Ala Ile Ser Tyr Ser Ser Phe Pro Phe Trp Met Gly Leu Ser Arg 195 200 205 Arg Asn Pro Ser Tyr Pro Trp Leu Trp Glu Asp Gly Ser Pro Leu Met 210 215 220 Pro His Leu Phe Arg Val Arg Gly Ala Val Ser Gln Thr Tyr Pro Ser 225 230 235 240 Gly Thr Cys Ala Tyr Ile Gln Arg Gly Ala Val Tyr Ala Glu Asn Cys 245 250 255 Ile Leu Ala Ala Phe Ser Ile Cys Gln Lys Lys Ala Asn Leu Arg Ala 260 265 270 Gln <210> 2 <211> 186 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Arg Gln Gln Ala Glu Glu Ala Ser Gln Glu Ser Glu Asn Glu Leu Lys 1 5 10 15 Glu Met Ile Glu Thr Leu Ala Arg Lys Leu Asn Glu Lys Ser Lys Glu 20 25 30 Gln Met Glu Leu His His Gln Asn Leu Asn Leu Gln Glu Thr Leu Lys 35 40 45 Arg Val Ala Asn Cys Ser Ala Pro Cys Pro Gln Asp Trp Ile Trp His 50 55 60 Gly Glu Asn Cys Tyr Leu Phe Ser Ser Gly Ser Phe Asn Trp Glu Lys 65 70 75 80 Ser Gln Glu Lys Cys Leu Ser Leu Asp Ala Lys Leu Leu Lys Ile Asn 85 90 95 Ser Thr Ala Asp Leu Asp Phe Ile Gln Gln Ala Ile Ser Tyr Ser Ser 100 105 110 Phe Pro Phe Trp Met Gly Leu Ser Arg Arg Asn Pro Ser Tyr Pro Trp 115 120 125 Leu Trp Glu Asp Gly Ser Pro Leu Met Pro His Leu Phe Arg Val Arg 130 135 140 Gly Ala Val Ser Gln Thr Tyr Pro Ser Gly Thr Cys Ala Tyr Ile Gln 145 150 155 160 Arg Gly Ala Val Tyr Ala Glu Asn Cys Ile Leu Ala Ala Phe Ser Ile 165 170 175 Cys Gln Lys Lys Ala Asn Leu Arg Ala Gln 180 185 <210> 3 <211> 182 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Glu Glu Ala Ser Gln Glu Ser Glu Asn Glu Leu Lys Glu Met Ile Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ala Arg Lys Leu Asn Glu Lys Ser Lys Glu Gln Met Glu Leu 20 25 30 His His Gln Asn Leu Asn Leu Gln Glu Thr Leu Lys Arg Val Ala Asn 35 40 45 Cys Ser Ala Pro Cys Pro Gln Asp Trp Ile Trp His Gly Glu Asn Cys 50 55 60 Tyr Leu Phe Ser Ser Gly Ser Phe Asn Trp Glu Lys Ser Gln Glu Lys 65 70 75 80 Cys Leu Ser Leu Asp Ala Lys Leu Leu Lys Ile Asn Ser Thr Ala Asp 85 90 95 Leu Asp Phe Ile Gln Gln Ala Ile Ser Tyr Ser Ser Phe Pro Phe Trp 100 105 110 Met Gly Leu Ser Arg Arg Asn Pro Ser Tyr Pro Trp Leu Trp Glu Asp 115 120 125 Gly Ser Pro Leu Met Pro His Leu Phe Arg Val Arg Gly Ala Val Ser 130 135 140 Gln Thr Tyr Pro Ser Gly Thr Cys Ala Tyr Ile Gln Arg Gly Ala Val 145 150 155 160 Tyr Ala Glu Asn Cys Ile Leu Ala Ala Phe Ser Ile Cys Gln Lys Lys 165 170 175 Ala Asn Leu Arg Ala Gln 180

Claims

시험 대상으로부터 채취한 시험 시료의 가용성 LOX-1의 농도를 측정하는 공정을 포함하는, 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 시험 대상을 식별하는 방법으로서,

상기 농도를 급성 관상동맥 증후군의 재발의 표지자로서 해석하는 방법.
제 1 항에 있어서,

농도가 기준치보다 높은 상태를 시험 대상의 급성 관상동맥 증후군의 재발 위험이 높은 것으로 해석하는 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

측정을 인간 가용성 LOX-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편을 사용하여 수행하는 방법.
제 3 항에 있어서,

측정을 효소 면역측정법(ELISA)을 사용하여 수행하는 방법.
제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 따른 방법을 실행하기 위한 키트.
급성 관상동맥 증후군의 재발의 예후에 대한 표지자로서의 가용성 LOX-1의 용도.