KR20080053394A

KR20080053394A - 키나제 억제제

Info

Publication number: KR20080053394A
Application number: KR1020087010062A
Authority: KR
Inventors: 졸리 앤 배스티안; 제수스 안드레스 블라스 데 블라스; 알폰소 데 디오스; 케빈 존 허드지아크; 티에챠오 리; 베아뜨리츠 로뻬즈 데 우랄데-가르멘디아; 메리 마가렛 마더; 마이클 레이 마이어스; 마크 앤드류 포반즈; 추안 시; 보유 종
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2005-10-28
Filing date: 2006-10-25
Publication date: 2008-06-12
Also published as: SI1943243T1; RS51949B; TWI325423B; DOP2006000234A; BRPI0616901A2; WO2007053394A1; DK1943243T3; TW200800184A; CA2627673A1; ATE493403T1; US20080269244A1; AR056582A1; EA200801199A1; EA015189B1; PT1943243E; KR101004156B1; US7652015B2; TNSN08191A1; PL1943243T3; EP1943243A1

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 키나제 억제제 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다:

<화학식 I>

상기 식에서, R¹, R², X 및 Z는 본원에 기재한 바와 같다.

키나제 억제제, 사이토킨 억제제, 감수성 신생물, 전이, 류마티스성 관절염, 인터루킨-1β, 종양 괴사 인자 α

Description

키나제 억제제 {KINASE INHIBITORS}

p38 키나제는 세린/트레오닌 키나제 상과에 속하는 유사분열촉진인자-활성화 단백질 (MAP) 키나제이다. 상기 키나제는 열, UV광 및 삼투 스트레스 등과 같은 세포외 스트레스 뿐만이 아니라 지다당류 등과 같은 염증성 자극에 의해서도 활성화된다. 활성화되면, p38 키나제는 프로-염증성(pro-inflammatory) 사이토킨인 종양 괴사 인자 α (TNFα) 및 인터루킨-1β (IL-1β)의 생합성을 조절하는 세포내 단백질 기질을 인산화한다. 이들 사이토킨은 수많은 만성 염증 장애 ([Lee, et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, 149-170 (1993)], [Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8, 210-220 (1996)]), 심혈관 및 중추 신경계 장애 [Salituro, et al., Current Medicinal Chemistry, 6, 807-823 (1999)] 및 자가면역 장애 [Pargellis, et al., Nature Structural Biology, 9(4), 268-272 (2002)]의 병리와 관련이 있다. 또한, 유사분열촉진인자-활성화 단백질 키나제-단백질 키나제 2 (또는 pMAPKAPK2)의 인산화 형태는 p38 MAPK 경로에서의 키나제이기도 하며, p38 MAPK에 의해 직접 활성화될 수 있다. MAPKAPK2의 마우스 넉아웃 연구는 사이토킨 생성 감소를 보여주었고, 이는 MAPKAPK2가 염증 반응의 핵심 조절자일 수 있으며 이것이 소염 요법에 있어서의 잠재적 표적일 수도 있음을 시사한다 (WO 2005120509).

수많은 우레아 화합물 (예를 들어 WO 9923091, WO 01012188, WO 04004720, WO 04037789, WO 99/32111, US 2004/0058961, EP 1609789, WO 03072569 및 WO 0043384)이 p38 키나제 억제제 또는 사이토킨 억제제로서 확인되었다. p38 키나제 억제제 또는 사이토킨 억제제는 고가로 생성될 수 있고, 생체이용률 및 흡수면에서의 문제가 있을 수 있어서 생체내 효과 및 치료 용도를 제한한다. 따라서, 신규한 소분자(small molecule) 사이토킨 저해 약물, 즉 개선된 효력 및 더 우수한 생체이용률로 p38 키나제를 억제할 수 있는 화합물이 요구된다.

본 발명은 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태의 치료에 유용한 p38 키나제의 신규 억제제를 제공한다.

발명의 요약

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다:

상기 식에서,

Z는

로 구성된 군에서 선택되고,

X는

로 구성된 군에서 선택되고,

R¹은 할로 및 C₁-C₄ 알킬할로로 구성된 군에서 선택된 1개 내지 6개의 치환체로 임의로 치환된 C₁-C₇ 알킬; C₁-C₄ 알킬 및 트리플루오로메틸로 구성된 군에서 선택된 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환된 C₃-C₆ 시클로알킬; 또는 트리메틸실릴이고,

R²는 C₁-C₄ 알킬로 임의로 치환된 페닐, 또는 C₁-C₄ 알킬로 임의로 치환된 피리디닐이고,

Y는 수소, C₁-C₄ 알킬, 할로 또는 C₁-C₄ 알킬할로이고,

R³은 C₃-C₆ 시클로알킬로 임의로 치환된 C₁-C₇ 알킬; C₁-C₄ 알콕시; C₁-C₄ 알킬할로; C₁-C₄ 알킬 및 트리플루오로메틸의 군에서 선택된 1개 내지 4개의 치환체로 임의로 치환된 C₃-C₆ 시클로알킬; 또는 할로, 시아노, C₁-C₄ 알킬, C₁-C₄ 알킬할로 및 C₁-C₄ 알콕시로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 임의로 치환되고 임의로는 C₁-C₄ 알킬 및 할로로부터 선택된 제2 치환체로 추가로 치환된 피리딜, 페닐 또는 티에닐 이며,

R⁴는 수소 또는 C₁-C₄ 알킬이다.

본 발명은 또한 p38 키나제를 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 p38 키나제를 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 종양 괴사 인자 α (TNFα)의 생성을 저해하는 처치가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 종양 괴사 인자 α (TNFα)의 생성을 저해하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성을 저해하는 처치가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성을 저해하는 방법을 제공한다.

본 발명은 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태의 치료가 필요한 포유동물에게 사이토킨-저해량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태를 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

본 발명은 또한 감수성 신생물의 성장을 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 p38 억제량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 감수성 신생물의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 전이를 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 p38 억제량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 전이를 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 류마티스성 관절염의 치료가 필요한 포유동물에게 p38 억제량의 화학식 I의 화합물 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 류마티스성 관절염을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 제제를 제공한다.

본 발명은 또한 p38 키나제 억제용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 p38 키나제를 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, p38 키나제의 억제용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 종양 괴사 인자 α (TNFα) 생성의 저해용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 종양 괴사 인자 α (TNFα)의 생성을 저해하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상 의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 종양 괴사 인자 α (TNFα) 생성의 저해용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 인터루킨-1β (IL-1β) 생성의 저해용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성을 저해하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 인터루킨-1β (IL-1β) 생성의 저해용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태 치료용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태를 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태의 치료용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 감수성 신생물의 성장 억제용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 감수성 신생물의 성장을 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 감수성 신생물의 성장 억제용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 전이 억제용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 전이를 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 전이 억제용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 류마티스성 관절염 치료용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 류마티스성 관절염을 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 류마티스성 관절염의 치료용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.

용어 "p38 키나제"는 p38α 및/또는 p38β 키나제 이소형을 의미한다.

용어 "TNFα (IL-1β, 사이토킨)의 생성 저해"는 포유동물에서 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨의 과도한 생체내 수준을 정상 수준 또는 정상에 준하는 수준으로 감소시키는 것을 의미한다. 이것은, 대식세포를 비롯한 모든 세포에 의해 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨이 생체내 방출되는 것을 억제하거나, 포유동물에서 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨의 과도한 생체내 수준을 정상 수준 또는 정상에 준하는 수준으로 게놈 수준에서 하향 조절하거나, TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨의 합성을 번역후 사건으로서 억제하거나, 또는 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨을 번역 수준에서 하향 조절하여 달성될 수 있다.

당업자는 특정 화학식 I의 화합물이 1개 이상의 키랄 중심을 함유한다는 것을 알 것이다. 본 발명은 모든 개개의 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체 뿐만이 아니라 상기 화합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체의 혼합물, 예컨대 라세미체까지도 고려한다. 1개 이상의 키랄 중심을 함유하는 화학식 I의 화합물은 단일의 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로 존재하는 것이 바람직하다. 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체는 키랄 시약을 사용하여 시작하거나 입체선택적 또는 입체특이적 합성 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 별법으로, 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체는 표준 키랄 크로마토그래피 또는 결정화 기술에 의해서 혼합물로부터 단리될 수도 있다.

당업자라면 본 발명의 화합물이 산 부가 염을 형성할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 모든 경우에서, 모든 화합물의 제약상 허용가능한 염은 해당 화합물의 명칭에 포함된다. 본 발명의 화합물은 아민이기 때문에 수많은 무기산 및 유기산 중 임의의 것과도 반응하여 제약상 허용가능한 산 부가 염을 형성한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 염"은 살아있는 유기체에게 실질적으로 비독성인 화학식 I의 화합물의 염을 지칭한다. 전형적인 제약상 허용가능한 염은 본 발명의 화합물과 제약상 허용가능한 유기산 또는 무기산과의 반응으로 제조된 그러한 염을 포함한다. 이러한 염은 당업자에게 공지된 문헌 [Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977)]에 기재된 제약상 허용가능한 염을 포함한다. 화학식 I의 화합물의 메실레이트 염이 가장 바람직하다.

화학식 I의 화합물은 p38 키나제의 억제제이다. 따라서, 본 발명은 또한 p38 키나제를 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 p38 키나제-억제량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 p38 키나제를 억제하는 방법을 제공한다. 화학식 I의 화합물의 투여로 치료될 포유동물은 인간인 것이 바람직하다.

본 발명의 화합물은 p38 키나제의 억제제로서 프로-염증성 사이토킨인 종양 괴사 인자 α (TNFα) 및 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성 저해에 유용하기 때문에, 과도한 사이토킨 생성으로 인한 장애의 치료에도 유용하다. 따라서, 본 발명의 화합물은 습진, 아토피성 피부염, 류마티스성 관절염, 골관절염, 염증성 장 질환 및 독소 쇼크 증후군을 비롯한 염증 장애의 치료에 유용하다고 여겨진다. 본 발명의 화합물은 또한 심혈관 장애, 예를 들어 급성 심근 경색, 만성 심부전, 아테롬성동맥경화증, 바이러스성 심근염, 심장 동종이계이식 거부반응 및 패혈증-관련 심장 기능부전의 치료에도 유용하다고 여겨진다. 추가로, 본 발명의 화합물은 중추 신경계 장애, 예를 들어 수막염구균성 수막염, 알쯔하이머병, 파킨슨병 및 다발성 경화증의 치료에도 유용하다고 여겨진다. WO 99/32111, WO 9923091, WO 04004720, WO 03072569를 참조한다.

대부분의 충실성 종양은 악성 세포 및 간질 세포, 예를 들어 내피 세포의 증식을 통해 질량이 증가한다. 종양이 직경 2 내지 3 mm 초과로 성장하기 위해서는 혈관형성(angiogenesis)으로 알려진 과정을 통해 맥관구조를 형성해야 한다. 안지오스타틴 및 엔도스타틴에 의한 종양-유도된 혈관형성의 저해가 항-종양 활성을 일으킨다는 보고가 있었다 [O'Reilly, et al., Cell, 88, 277-285 (1997)]. 선택적인 p38 키나제 억제제인 SB22025는 혈관형성을 억제하는 것으로 나타났다 [J.R. Jackson, et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 284, 687 (1998)]. 혈관형성은 대부분의 충실성 종양의 질량 증대에 있어서 중대한 과정이기 때문에, 이 과정을 억제하는 새로운 p38 키나제 억제제의 개발은 항-종양 요법에 있어서의 유망한 접근법을 대표한다. 항-종양 요법에 대한 이러한 접근법은 통상적인 화학요법의 독성 부작용 또는 약물 내성-유발 특성이 없을 수 있다 [Judah Folkman, Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey Lectures, Series 92, pages 65-82, Wiley-Liss Inc., (1998)].

따라서, 본 발명의 화합물은 p38 키나제의 억제제로서 감수성 신생물의 성장을 억제하는데에도 유용하다 [Schultz, R. M. Potential of p38 MAP kinase inhibitors in the treatment of cancer. In:E. Jucker (ed.), Progress in Drug Research, 60, 59-92, (2003)]. 감수성 신생물은 그의 생존, 성장 또는 전이를 p38 키나제에 의존하는 신생물로 정의된다. 감수성 신생물은 뇌, 요생식로, 림프계, 위, 후두 및 폐의 종양을 포함한다 (미국 특허 제5,717,100호). 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "감수성 신생물"은 비-소세포 폐 암종 ([A. Greenberg, et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 26, 558 (2002)), 유방 암종 [J. Chen, et al., J. Biol. Chem., 276, 47901 (2001)], [B. Salh, et al., Int. J. Cancer, 98, 148 (2002)] 및 [S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)]), 위 암종 [Y.D. Jung, et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 43, 9 (2002)], 직장결장 암종 [S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)] 및 악성 흑색종 [C. Denkert, et al., Clin. Exp. Metastasis, 19, 79 (2002)]을 비롯한 인간의 암을 포함하는 것이 바람직하다.

TNFα의 저해로 혈관형성을 억제하는 것은 또한 전이의 억제 또는 예방에도 유용하다고 교시된 바 있다 (미국 특허 제6,414,150호, 미국 특허 제6,335,336호). 추가로, TNFα의 저해는 모든 암 환자의 약 절반이 경험하는 소모 증후군(wasting syndrome)인 악액질의 치료 및 예방을 위해서도 사용된다 [T. Yoneda, et al., J. Clin. Invest., 87, 977 (1991)].

추가로, p38 키나제의 억제는 인플루엔자 [K. Kujime, et al., J. Immunology., 164, 3222-3228 (2000)], 리노바이러스 [S. Griego, et al., J. Immunology, 165, 5211-5220 (2000)] 및 HIV [L. Shapiro, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 7422-7426 (1998)]와 같은 특정 바이러스 상태의 치료에 효과적일 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C₁-C₇ 알킬"은 1개 내지 7개 탄소 원자의 선형 또는 분지형의 1가 포화 지방족 쇄를 지칭하며, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실 및 헵틸 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 용어 "C₁-C₇ 알킬"은 그의 정의에 용어 "C₁-C₄ 알킬"을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C₁-C₄ 알콕시"는 산소 원자에 부착된 1개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬쇄를 지칭한다. 전형적인 C₁-C₄ 알콕시기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, tert-부톡시 등을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "할로"는 본원에서 달리 명시하지 않는다면 염소, 브롬, 요오드 또는 불소 원자를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C₁-C₄ 알킬할로"는 최대 5개까지의 할로 원자로 치환된 C₁-C₄ 알킬을 지칭한다. 전형적인 C₁-C₄ 알킬할로기는 메틸할로, 트리플루오로메틸, 에틸할로, 비스플루오로메틸 에틸, 프로필할로, 이소프로필할로, 부틸할로, tert-부틸할로 등을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C₃-C₆ 시클로알킬"은 탄소 및 수소 원자를 포함하는 완전 포화 고리를 의미하고, 시클로프로필 및 시클로부틸을 포함한다.

특정 부류의 화학식 I의 화합물은 바람직한 p38 키나제 억제제이다. 하기 단락은 이러한 바람직한 부류를 기재한다:

a) Z가

이다.

b) X가

이다.

c) R⁴가 수소이다.

d) Y가 메틸이다.

e) R¹이 C₁-C₇ 알킬이다.

f) R¹이 tert-부틸이다.

g) R²가 페닐 또는 피리디닐이며, 각각은 메틸로 임의로 치환된다.

h) R²가 4-톨릴이다.

i) R³이 페닐 또는 티에닐이며, 각각은 할로, 시아노, C₁-C₄ 알킬, C₁-C₄ 알킬할로 및 C₁-C₄ 알콕시로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 임의로 치환되고 임의로는 C₁-C₄ 알킬 및 할로로부터 선택된 제2 치환체로 추가로 치환된다.

j) R³이 할로로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 치환되고, C₁-C₄ 알킬 및 할로로부터 선택된 제2 치환체로 추가로 치환된 페닐이다.

k) 화학식 I의 화합물이 유리 염기이다.

l) 화학식 I의 화합물이 염이다.

m) 화학식 I의 화합물이 메실레이트 염이다.

본 발명의 바람직한 실시양태는 단락 a) 내지 단락 m)의 모든 조합을 포함한다. 다른 바람직한 화학식 I의 화합물은, X가 단락 b)에 기재된 바와 같고, R¹이 단락 e)에 기재된 바와 같고, R²가 단락 g)에 기재된 바와 같으며, R⁴가 단락 c)에 기재된 바와 같은 화합물이다.

또한, X가 단락 b)에 기재된 바와 같고, R¹이 단락 f)에 기재된 바와 같고, R²가 단락 h)에 기재된 바와 같고, R³이 단락 i)에 기재된 바와 같으며, R⁴가 단락 c)에 기재된 바와 같은 화합물도 바람직하다.

X가 단락 b)에 기재된 바와 같고, R²가 4-위치에서 C₁-C₄ 알킬로 치환된 페닐인 화합물이 특히 바람직하다.

X가 단락 b)에 기재된 바와 같은 화합물이 가장 바람직하다.

하기 화합물 역시 가장 특별하게 바람직하다:

.

본 발명의 화합물은 다양한 절차로 제조될 수 있으며, 이러한 절차 중 일부는 하기 반응식에 예시되어 있다. 당업자는, 하기 반응식의 개개의 단계가 화학식 I의 화합물이 제공되도록 변형될 수 있다는 것을 알 것이다. 화학식 I의 화합물 생성에 요구되는 단계들의 특별한 순서는 합성되는 특정 화합물, 출발 화합물, 및 치환된 잔기의 상대적 불안정성(lability)에 따라 달라진다. 일부의 치환체는 명확성을 위해 하기 반응식에서 생략되어 있으며, 어떠한 방식으로도 반응식의 교시내용을 제한하려는 것이 아니다.

화학식 I의 화합물 및 그의 중간체는 하기 반응식에 예시된 것과 같이 제조될 수 있으며, 여기서 R¹, R² 및 X는 앞서 정의한 바와 같다:

아민 (a)를 적절한 이소시아네이트 또는 카르바메이트, 예컨대 피라졸릴-2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트와 반응시켜 화학식 I의 화합물을 제공한다. 예를 들어, 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴 또는 디메틸술폭시드 (DMSO) 중 아민 (1 당량), 트리클로로에틸 카르바메이트 (1 당량) 및 적합한 염기, 예컨대 디이소프로필에틸아민 (2 당량) 또는 탄산칼륨의 용액을 가열한다. 이어서, 원하는 화합물을 단리할 수 있으며, 필요하고 원한다면 당업계 공지의 기술, 예컨대 크로마 토그래피를 이용하여 정제하여 화학식 I의 화합물을 제공한다.

필요한 아민은 하기 반응식 2에서 예시되는 바와 같이 제조되며, 여기서 X는 앞서 정의한 바와 같다:

니트로 잔기 (b)를 표준 환원 조건하에서, 예를 들어 적합한 용매, 예컨대 저급 알칸올 또는 에틸 아세테이트 중에서 팔라듐 촉매의 존재하에 수소를 사용하거나 염화니켈(II) 6수화물의 존재하에 수소화붕소나트륨을 사용하여 환원시켜 상응하는 아민 (a)를 제공한다. 이러한 환원 단계는 공지되어 있으며 당업계에 알려져 있다. 문헌 [Larock, R., "Comprehensive Organic Transformations," 412, VCH Publishing, Inc., New York, 1989]을 참조한다.

필요한 니트로 화합물은 하기 반응식 3에서 예시되는 바와 같이 제조되며, 여기서 Hal은 Cl 또는 F이고 X'는 C(O)R³ 또는 적합한 보호기 PG이다:

적합한 유기 용매, 예컨대 THF 중 2-할로-4-니트로-피리딘 (e)을 적절한 4-히드록시 피페리딘 및 수소화나트륨 또는 트리페닐포스핀과 반응시켜서 상응하는 치환된 피페리딘 b(i)을 제공한다. 별법으로, 2-할로-4-니트로-피리딘 (e)을 극성 용매, 예컨대 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드 (DMF) 또는 부탄올 중 적절한 피페라진 및 염기, 예컨대 탄산칼륨, 나트륨 tert-부톡시드 또는 트리에틸아민과 반응시켜서 상응하는 치환된 피페라진 b(ii)를 제공한다.

화학식 b(iii)의 아민은 적합한 용매, 예컨대 에탄올 중 2-할로-4-니트로-피리딘 (e)을 적합한 염기, 예컨대 탄산나트륨의 존재하에 적절한 아미노피페리딘과 반응시켜 제조한다.

당업자는 상기한 절차가 본 발명에서 고려되는 피리딜 이성질체의 형성에 이용될 수 있다는 것을 알 것이다.

필요한 피라졸릴 카르바메이트는 하기 반응식에 기재된 바와 같이 제조될 수 있으며, 여기서 R¹ 및 R²는 앞서 정의한 바와 같다:

3-아미노피라졸 (m)은 당업계에 공지된 조건으로 형성된다. 문헌 [Larock, R., "Comprehensive Organic Transformations," 79, VCH Publishing, Inc., New York, 1989]을 참조한다. 예를 들어, 적합한 유기 용매, 예컨대 에탄올 중 α-시아노케톤 (j) 및 적합한 히드라진 또는 히드라진 염 (k)을 승온에서 반응시킨다. 생성된 피라졸 (m)은 표준 기술, 예컨대 실리카겔 컬럼상 크로마토그래피을 이용하여 정제할 수 있다.

2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (n)을 적합한 용매, 예컨대 THF 또는 물/에틸 아세테이트 중 적절하게 치환된 3-아미노피라졸 (m) 및 염기, 예컨대 탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 피리딘과 반응시켜서 상응하는 2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (o)를 제공한다. 당업자는 상응하는 카르바메이트가 3-아미노피라졸을 다른 활성 탄산염과 반응시켜 제조될 수 있다는 것을 알 것이다.

화학식 I(i)의 화합물은 하기 반응식 5에서 입증된 바와 같이 제조될 수 있으며, 여기서 R¹, R², R³ 및 PG는 앞서 정의한 바와 같고 Z는 O, N 또는 결합이며 R⁵는 C 또는 N이다:

화학식 (f)의 화합물을 당업계에 공지된 조건하에 탈보호시킨다. 예를 들어, 보호기가 tert-부톡시 카르보닐인 경우에는 화학식 (f)의 화합물을 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 디클로로메탄 중에 용해하고, 예를 들어 디옥산 중 염산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 산으로 처리한다. N-보호된-피페리딘 치환된 우레아 (f)의 탈보호는 치환된 피페리딘 (g)를 제공하고, 이것을 유기산 및 유기 아민에 대한 표준 커플링 조건하에 적합한 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드 또는 아세토니트릴 중 커플링제, 예컨대 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDCI) 또는 디시클로헥실카르보디이미드 (DCC), 촉매량의 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸루로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 또는 트리에틸아민의 존재하에 치환된 카르복실산과 반응시켜 화학식 I(i)를 제공한다. 당업자는 화학식 I(i)의 예가 상이한 N-보호기, 예컨대 포르밀을 포함하는 다른 보호된 피페리딘으로 시작하여 제조될 수 있고, 이 경우에는 중간체 (g)를 형성하기 위해서 다른 탈보호 절차가 필요할 수 있다는 것을 알 것이다.

필요하거나 원한다면, 적합한 아미노 보호기 "Pg", 예컨대 tert-부톡시카르보닐 (BOC) 잔기가 이용될 수 있다. 이들 기를 도입하는 기술은 당업자에게 공지 되어 있다. 당업자는 보호기가 본 발명의 화합물 합성 중 임의의 편리한 시점에서 제거될 수 있다는 것을 알 것이다. 질소 및 산소 보호기를 도입하고 제거하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 [Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley and Sons, New York, (1999)]을 참조한다.

당업자는 화학식 I의 화합물의 모든 치환체가 화합물 합성에 이용되는 특정 반응 조건을 허용하는 것은 아님을 알 것이다. 이들 잔기는 합성 중 편리한 시점에 도입될 수도 있고, 또는 필요하거나 또는 원한다면 보호된 후에 탈보호될 수도 있다.

하기하는 실시예 및 검정에 사용된 약어, 부호 및 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다: n-BuOH = n-부탄올, DCC = 디시클로헥실카르보디이미드, DIEA = N,N-디-이소프로필에틸아민, DMSO = 디메틸술폭시드, DMF = N,N-디메틸포름아미드, h = 시간(들), HOBt = 1-히드록시벤조트리아졸, LDA = 리튬 디이소프로필아미드, EDCI = 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드, EtOAc = 에틸 아세테이트, EtOH = 에탄올, Et₂O = 디에틸 에테르, MeOH = 메탄올, NaBH(OAc)₃ = 트리아세톡시수소화붕소나트륨, TBAF = 테트라부틸 암모늄 플루오라이드, Tf₂O = 트리플루오로메탄술폰산 무수물, 및 THF = 테트라히드로푸란.

제조예

제조예 1

2- 클로로 -4- 메틸 -5-니트로-피리딘

4-메틸-5-니트로-피리딘-2-일아민 (3.0 mmol, 0.5 g)을 황산 0.5 mL 중에 용해하였다. 물 7.6 mL를 첨가하고, 상기 용액을 0℃로 냉각시켰다. 아질산나트륨 (4.5 mmol, 0.3 g)을 첨가하고, 상기 혼합물을 2시간 동안 교반하여 실온에 이르게 했다. 물로 희석하고, 염기성 pH가 될 때까지 10％ 수산화나트륨 수용액을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 중에 추출하고, 합한 유기 층을 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 4-메틸-5-니트로-피리딘-2-올을 수득하였다. MS (ES): m/z = 155 [M+H].

옥시염화인 (0.6 mmol, 0.05 mL) 및 펜타염화인 (0.6 mmol, 0.12 g)을 4-메틸-5-니트로-피리딘-2-올 (1.9 mmol, 0.3 g)에 첨가하였다. 120℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 냉각시켜 빙수를 첨가하고, CH₂Cl₂ 중에 추출하였다. 합한 유기 층을 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 2-클로로-4-메틸-5-니트로-피리딘을 수득하였다.

제조예 2

2,3- 디클로로 -5-니트로-피리딘

5-니트로-피리딘-2-올 (20 g, 143 mmol)을 진한 HCl (100 mL) 중에 넣었다. 50℃로 가열한 후에, 물 (100 mL) 중에 용해한 염소산칼륨 (6.13 g, 50 mmol)을 적 가하였다. 50℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 빙조에서 냉각시켰다. 고체를 여과해 내어 물로 세척하였다. 철저하게 건조시켜 3-클로로-5-니트로-피리딘-2-올 21.13 g을 수득하였다 (85％). MS (ES): m/z = 173 [M+H].

둥근 바닥 플라스크에 옥시염화인 (11.28 mL, 121 mmol)을 넣고 0℃로 냉각시켰다. 퀴놀린 (7.15 mL, 60.5 mmol)을 첨가한 후에 3-클로로-5-니트로-피리딘-2-올 (21.13 g, 121 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응물을 120℃로 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 얼음에 붓고 물로 연화처리(trituration)하였다. 고체를 여과해 내어 물로 세척하였다. 철저하게 건조시켜 표제 화합물 19.95 g을 수득하였다 (86％):

제조예 3

4-(5-아미노-6- 메틸 -피리딘-2-일)-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

n-BuOH (250 mL) 중 6-클로로-2-메틸-3-니트로-피리딘 (아심켐(Asymchem), 25.00 g, 144.9 mmol), tert-부틸 1-피페라진카르복실레이트 (29.68 g, 159.4 mmol) 및 트리에틸아민 (23.2 mL, 167 mmol)의 혼합물을 50℃에서 질소하에 4시간 동안 기계적으로 교반하고 65℃에서 2시간 동안 기계적으로 교반한 후에 실온에서 밤새 기계적으로 교반하였다. tert-부틸 1-피페라진카르복실레이트 (1.5 g)를 더 첨가하고, 반응물을 65℃에서 4시간 동안 가열하였다. 생성된 슬러리를 30℃로 냉 각시킨 후에 헥산 (75 mL)을 첨가하였다. 상기 슬러리를 실온으로 1 시간에 걸쳐 냉각시킨 후에 물 (150 mL)을 첨가하였다. 상기 슬러리가 45분 동안 방치되도록 한 후에 여과하였다. 케이크를 물 (4×100 mL)로 세척한 후에 헥산 (100 mL)으로 세척하고 밤새 공기 건조시켜서 4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 밝은 황색 결정으로 수득하였다 (46.30 g, 99％ 수율, MS (ES): m/z = 267 [M+H-C₄H₈]).

THF (750 mL) 중 4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (46.00 g, 142.7 mmol)의 슬러리를 실온에서 Pd/C (5％ 알드리치(Aldrich), 3.04 g, 1.43 mmol)와 혼합한 후에 수소 대기 (파르(Parr) 진탕기, 40 내지 45 psi)하에 6시간 동안 넣어 두었다. MeOH (250 mL)를 첨가하고, 상기 슬러리를 수소 대기에 4시간 동안 실온에서 적용하였다. 추가의 촉매 (3.04 g)를 첨가한 후에 상기 혼합물을 수소하에 7시간 동안 넣어 두었다. 상기 혼합물을 셀라이트(Celite) 521^® 패드를 통해 여과하고 THF 및 MeOH로 세척한 후에 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 옅은 분홍색 고체로서 수득하였다 (41.58 g, 99％ 수율, MS (ES+): m/z = 293 [M+H]).

상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 4	4-(5-아미노-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르	293
제조예 5	4-(5-아미노-3-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르	293.2

제조예 6

4-(5-아미노-피리딘-2-일)-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

2-클로로-5-니트로-피리딘 (1.0 g, 6.31 mmol), 피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.76 g, 9.45 mmol) 및 트리에틸아민 (1.76 mL, 12.6 mmol)을 n-부탄올 (20 mL) 중에 넣었다. 120℃로 17시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시켜 에틸 아세테이트 및 물을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 수집하여 Mg₂SO₄상에서 건조시키고 여과하여 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 20％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 1.14 g을 수득하였다 (58％). MS (ES): m/z = 309 [M+H].

4-(5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.14 g, 3.70 mmol)를 1:1 EtOAc:MeOH (20 mL) 중에 넣었다. EtOAc (5 mL)를 사용한 탄소상 10％ Pd를 첨가하였다. 반응물을 퍼징(purging)한 후에 수소를 첨가하였다. 퍼징/충전 주기를 2회 반복하고, 반응물을 수소 벌룬하에 넣어 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 상기 반응물을 셀라이트^® 패드를 통해 여과하고 필터 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 여액을 수집하고 감압하에 농축시켜 표제 화합물 1.01 g을 수득하였다 (98％). MS (ES): m/z = 279 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 7	4-(5-아미노-3-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르	293.4

제조예 8

4-(5-아미노-3- 클로로 -피리딘-2-일)-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

2,3-디클로로-5-니트로-피리딘 (2.0 g, 10.36 mmol), 피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.12 g, 11.40 mmol) 및 탄산칼륨 (1.72 g, 12.43 mmol)을 DMF (20 mL) 중에 넣었다. 80℃로 2.5일 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시켜 에틸 아세테이트 및 물을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 수집하고, Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 20％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(3-클로로-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 3.29 g을 수득하였다 (93％). MS (ES): m/z = 341 [M+H].

4-(3-클로로-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (3.09 g, 9.01 mmol)를 메탄올 (50 mL) 중에 넣었다. 염화니켈(II) 6수화물 (10.7 g, 45.1 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃로 냉각시켰다. 수소화붕소나트륨 (5.11 g, 135.15 mmol)을 조금씩 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. CH₂Cl₂를 첨가하고, 셀라이트^® 패드를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 CH₂Cl₂로 세 척하고 여액을 수집하였다. 상기 여액에 중탄산나트륨 포화 수용액을 첨가하고 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 CH₂Cl₂ (2×30 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하여 Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0％→70％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물 1.77 g을 수득하였다 (63％). MS (ES): m/z = 311.2 [M-H].

제조예 9

rac -[(트랜스)-4-(5-아미노-3- 메틸 -피리딘-2-일)-2,5-디메틸-피페라진-1-일]

- 시클로프로필 - 메타논

트랜스-2,5-디메틸피페라진 (500 mg, 4.37 mmol, 1.0 당량)을 무수 디클로로메탄 15 mL 중에 용해하였다. 디클로로메탄 5 mL 중 용해된 디-tert-부틸 2탄산염 (953 mg, 4.37 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 백색 고체를 여과하여 N-BOC-트랜스-2,5-디메틸피페라진 430 mg을 수득하였다 (50％ 수율).

2-클로로-3-메틸-5-니트로피리딘 (310 mg, 1.82 mmol, 1.0 당량) 및 N-BOC-트랜스-2,5-디메틸피페라진 (397 mg, 2.0 mmol, 1.1 당량)을 무수 DMF 5 mL 중에 용해하고, 탄산칼륨 (251 mg, 1.82 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 상기 혼합물을 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 상기 용액을 EtOAc 및 빙수의 1:1 v/v 혼합물에 부었다. 수성상을 EtOAc (2×20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 물 (3×20 mL) 및 포화 수성 염화나트륨 (30 mL)으로 세척하였다. 유기 용액을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜 조 rac-(트랜스)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다. MS (ES+): m/z = 251.2 (M+H).

디옥산 중 4 M HCl (4.2 mL)을 rac-(트랜스)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (0.15 g, 0.43 mmol)에 실온에서 첨가하고 교반하였다. 1시간 후에는 감압하에 농축시켜 rac-(트랜스)-2,5-디메틸-1-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진 2염산염 0.138 g을 백색 고체로서 수득하였다 (정량적). MS (ES): m/z = 251.2 [M+H].

실온에서 N₂ 대기하에 시클로프로필 카르복실산 (56 ㎕, 0.7 mmol)을 CH₂Cl₂ (5 mL) 중 EDCI (0.147 g, 0.77 mmol), HOBt (0.10 g, 0.77 mmol), rac-(트랜스)-2,5-디메틸-1-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진 2염산염 (0.16 g, 0.64 mmol)의 용액에 첨가한 후에 DIEA (0.22 mL, 1.28 mmol)를 첨가하였다. 1시간 후에는 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산:AcOEt 50％→70％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 rac-시클로프로필-[(트랜스)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-메타논 0.114 g을 수득하였다 (56％ 수율). MS (ES): m/z = 319.1 [M+H].

NH₄COOH (0.23 g, 3.5 mmol)를 EtOH (5 mL) 중 rac-시클로프로필-[(트랜스)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-메타논 (0.114 g, 0.35 mmol) 및 Pd/C 10％ (0.043 g)에 N₂ 대기하에 첨가하고, 80℃에서 가열하였다. 2시간 후에는 반응 혼합물을 냉각시키고 셀라이트^®를 통해 여과하였다. 감압하에 농축시켜 표제 화합물 0.1 g을 수득하였다 (정량적). MS (ES): m/z = 289.3 [M+H].

제조예 10

1-[4-(5-아미노-4- 메틸 -피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온

밀폐된 튜브 중 2-클로로-4-메틸-5-니트로-피리딘 (0.85 mmol, 0.15 g), 2,2-디메틸-1-피페라진-1-일-프로판-1-온 히드로클로라이드 (0.94 mmol, 0.16 g) 및 트리에틸아민 (2.12 mmol, 0.3 mL)의 용액을 80℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켜 CH₂Cl₂를 첨가하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 2,2-디메틸-1-[4-(4-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-프로판-1-온을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (30％→최대 60％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES): m/z = 307 [M+H].

포름산암모늄 (1.55 mmol, 0.1 g) 및 팔라듐 (탄소) 10％ (0.031 mmol)를 에탄올 2 mL 중 2,2-디메틸-1-[4-(4-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-프 로판-1-온 (0.31 mmol, 0.09 g)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 1시간 동안 90℃에서 교반하였다. 냉각시키고 셀라이트^® 패드를 통해 여과하여 감압하에 농축시켰다. 잔류물은 추가의 정제 없이 사용할 수 있었다. MS (ES): m/z = 277 [M+H].

상기한 2번째 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 11	[4-(5-아미노-4-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]- (1-메틸-시클로프로필)-메타논	275

제조예 12

1-[4-(5-아미노-4- 클로로 -피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온

단계 A: 톨루엔 중에 용해된 2,4-디클로로-피리딘 (6.7 mmol, 1 g), N-Boc 피페라진 (8.1 mmol, 1.5 g), 나트륨 tert-부톡시드 (9.5 mmol, 0.9 g), 아세트산팔라듐(II) (0.7 mmol, 0.15 g) 및 2-(디-t-부틸포스피노)비페닐 (0.7 mmol, 0.2 g)의 용액을 질소하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시켜 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 중에 추출하고 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농 축시켜 4-(4-클로로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 잔류물로서 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (10％→50％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES): m/z = 298 [M+H].

단계 B: CH₂Cl₂ (4 mL) 중 4-(4-클로로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (0.6 g, 1.9 mmol)의 실온 용액을 HCl (디옥산 중 4 N 용액, 1.5 mL, 5.9 mmol)로 처리하여 약간의 발열이 있었다. 상기 혼합물을 3시간 동안 교반하고, HCl (디옥산 중 4 N 용액, 1.5 mL, 5.9 mmol)을 더 첨가하여 밤새 교반하였다. 감압하에 농축시켜 1-(4-클로로-피리딘-2-일)-피페라진 히드로클로라이드를 수득한 후에 Et₂O (0.43 g)로 연화처리하였다. LCMS ES+ (m/z) 198 [M+H].

단계 C: 1-(4-클로로-피리딘-2-일)-피페라진 히드로클로라이드 (2.2 mmol, 0.4 g) 및 CH₂Cl₂ 13 mL 중 트리에틸아민 (7.6 mmol, 1.1 mL) 및 염화피발로일 (2.2 mmol, 0.3 mL)을 밤새 실온에서 교반하였다. CH₂Cl₂를 첨가하고, 포화 수성 염화나트륨 및 물로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 1-[4-(4-클로로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온을 수득하였다. MS (ES): m/z = 282 [M+H].

단계 D: 1-[4-(4-클로로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온 (1.6 mmol, 0.4 g)을 황산 (2.3 mL) 중에 용해하고, 상기 용액을 0℃로 냉각시켰다. 질산칼륨 (1.6 mmol, 0.2 g)을 첨가하고, 상기 혼합물을 교반하면서 밤새 실온에 이르게 하였다. 상기 혼합물을 물로 희석하고, 염기성 pH가 될 때까지 10 ％ 수산화나트륨을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 중에 추출하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 1-[4-(4-클로로-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온의 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트의 혼합물 (30％→최대 60％)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES): m/z = 327 [M+H].

단계 E: 테트라히드로푸란과 물의 1:1 혼합물 22 mL 및 암모니아 4 mL 중 1-[4-(4-클로로-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온 (0.9 mmol, 0.3 g)에 나트륨 디티오나이트 (4.5 mmol, 0.8 g)를 첨가하였다. 상기 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 감압하에 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 추출하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 수득한 잔류물을 추가의 정제없이 사용하였다. MS (ES): m/z = 297 [M+H].

상기한 단계 C 내지 단계 E와 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 하기 화합물을 제조하였다:

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 13	1-[4-(5-아미노-3-트리플루오로메틸-피리딘-2-일)- 피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온	331

제조예 14

[4-(5-아미노-6- 메틸 -피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-(2,6- 디플루오로 - 페닐 )- 메타논

22 L 플라스크에 아세트산 (5 L)을 충전하였다. 상기 반응물을 빙수조에 넣었다. 피페라진 (355.00 g, 2.0 당량, 4.06 mol)을 조금씩 첨가하며 교반하고, 온도를 약 40℃로 증가시켰다. 아세트산 5 L를 더 첨가하였다. 혼합물이 용액이 될 때까지 교반하였다. 냉각조를 약 13℃로 조정하였다. 2,6-디플루오로벤조일 클로라이드 (355.00 g, 1.00 당량, 2.01 mol, 253.39 mL)를 2시간의 기간에 걸쳐 적가하면서 반응 온도는 대략 13℃ 내지 15℃로 유지시켰다. 밤새 교반하였다. 감압하에 농축시키고, 잔류물을 빙수 2 L 중에 용해하였다. 플라스크를 빙수조에서 냉각시켰다. 5 N NaOH를 첨가하여 pH를 7.5로 조정하면서 반응물 온도는 30℃ 미만으로 유지시켰다. 약 10℃에서 여과하였다. 디클로로메탄 (4×2 L)을 사용하여, 여액으로부터 생성물을 추출하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 고체를 메탄올 1.5 L 중에 실온에서 용해하고 여과하였다. 메탄올 용액을 농축시킨 후에 톨루엔 2.0 L과의 용매 교환을 실시하여 순수한 생성물을 수득하였다. 여과하여 (2,6-디플루오로페닐)-피페라진-1-일-메타논을 수득하였다. 여액을 농축시켜 다시 여과하여 추가의 생성물을 수득하였다 (총 400 g).

오버헤드(overhead) 교반기가 장착된 5 L 플라스크에 (2,6-디플루오로-페닐)-피페라진-1-일-메타논 (1.07 당량, 1.55 mol, 350.00 g), 메탄올 (37.06 mol, 1.50 L, 1.19 kg), 트리에틸아민 (1.79 mol, 250.00 mL, 181.50 g), 6-클로로-2-메틸-3-니트로-피리딘 (1.00 당량, 1.45 mol, 250.00 g)을 충전하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 60℃로 서서히 가열하고, 60℃에서 밤새 계속 교반하였다. 물 (750 mL)을 적가하면서 온도는 60℃로 유지시켰다. 혼합물이 실온으로 냉각되도록 하였다. 여과하고, 케이크를 2:1 메탄올/물 150 mL로 세척한 후에 MTBE로 2회 세척하였다. 감압하에 45℃에서 건조시켜 (2,6-디플루오로-페닐)-[4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-메타논을 황색 고체로서 수득하였다 (535 g).

(2,6-디플루오로-페닐)-[4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-메타논 (1.00 당량, 1.44 mol, 520.00 g), 메탄올 (197.66 mol, 8.00 L, 6.33 kg) 및 THF 습윤 탄소상 5％ 팔라듐 (75.00 g)을 3 갤런 오토클레이브에 충전하였다. 반응물을 50 psi에서 실온에서 수소화하면서 온도는 30℃ 미만으로 유지시켰다. 0.5시간 후에 26℃로 냉각시키고 2시간 동안 유지시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켰다. 여과하여 고체를 수득하고, 메탄올로 헹군 후에 헵탄으로 헹구었다. 다시 여과하여 [4-(5-아미노-6-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-(2,6-디플루오로-페닐)-메타논의 제2 배치(batch)를 수득하였다. 45℃에서 감압하에 건조시켰다 (445 g).

제조예 15

[4-(5-아미노-3- 메틸 -피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-(2,6- 디플루오로 - 페닐 )- 메타논

무수 DMF (270 mL) 중 2-클로로-3-메틸-5-니트로-피리딘 (27.00 g, 0.156 mol) 및 피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (32.03 g, 0.172 mol)의 슬러리를 K₂CO₃ (34.55 g, 0.250 mol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 80℃에서 N₂하에 밤새 가열하였다. 생성된 반응 혼합물을 1/1 EtOAc/H₂O (3,000 mL)에 부어 층을 분리한 후에 수성 층을 EtOAc (1,000 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 포화 수성 염화나트륨 (각각 3×1,000 mL씩)으로 세척하고 MgSO₄에서 건조시켜 여과한 후에 감압하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 황색 고체를 헥산/EtOAc 중에 슬러리화한 후에 생성된 고체를 진공 여과로 회수하였다. 헥산으로 세척하고 진공 여과하여 4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (42.84 g)를 황색 고체로서 수득하였다. 여액을 감압하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 황색 고체를 헥산 중에 슬러리화한 후에 생성된 고체를 진공 여과로 회수하여 헥산으로 세척하고 진공 여과하에 건조시켜 4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 화합물을 황색 고체로서 더 (5.38 g) 수득하였다 (48.22 g, 95.9％ 수율).

디옥산 중 4 M HCl의 용액 (4 당량)을 DCM (73 mL) 중 4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (7.77 g, 24.13 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 디옥산 중 HCl 용액을 2 당량 더 첨가하였다. 출발 물질이 LCMS로 검출되지 않게 된 후에 고체를 여과하고 감압하에 건조시켜 1-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진 히드로클로라이드 6.91 g을 황색빛 고체로서 수득하였다 (97％ 수율). ES+ (m/z): 259 [M+1].

트리에틸아민 (3 당량)을 DCM (120 mL) 중 1-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진 히드로클로라이드 (6.91 g, 24.13 mmol)의 현탁액에 적가하였다. 2,6-디플루오로벤조일클로라이드 (1 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 추가의 2,6-디플루오로벤조일클로라이드 (1.6 mL) 및 트리에틸아민 (1.5 당량)을 첨가하여, 반응이 완결되도록 하였다. 반응물을 밤새 방치시켰다. DCM으로 희석하여 물로 여러회 추출하였다. 유기 층을 Na₂S₂O₄상에서 건조시켜 여과하고, 용매를 감압하에 제거하였다. 고체를 헥산으로 여러회 세척하여 (2,6-디플루오로-페닐)-[4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-메타논 8.08 g을 수득하였다 (93％ 수율). ES+ (m/z): 363 [M+1]

Na₂S₂O₄ (10 당량) 및 수성 암모니아 (3 mL/mmol, 32％)를 THF/H₂O (166 mL, 1:1) 중 (2,6-디플루오로-페닐)-[4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-메타논 (3 g, 8.29 mmol)의 용액에 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후에 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM, EtOAc 및 이소프로필 알콜/EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합하여 Na₂SO₄상에서 건조시키고 여과농축시키고, 용매를 감압하에 제거하였다. 조 물질을 배리언(Varian)™ SCX 컬럼에 적용하고, 상기 컬럼을 MeOH로 세척한 후에 생성물을 MeOH 중 2 M NH₃으로 세정해 내어, [4-(5-아미노-3-메틸-피리딘- 2-일)-피페라진-1-일]-(2,6-디플루오로-페닐)-메타논 1.2 g을 수득하였다 (44％ 수율). ES+ (m/z): 333 [M+1]

제조예 16

4-(5-아미노-6- 메틸 -피리딘-2- 일옥시 )-피페리딘-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

THF (25 mL) 중 6-메틸-5-니트로-피리딘-2-올 (1.54 g, 10.0 mmol), 4-히드록시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.05 g, 10.0 mmol) 및 트리페닐포스핀 (4.02 g, 15.3 mmol)의 차가운 혼합물에 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (3.0 mL, 15.5 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 첨가 완료 후, 냉각조를 치우고 상기 반응 혼합물을 22℃에서 밤새 교반하였다. 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 무색의 오일로서 수득하였다 (2.69 g, 80％ 수율). MS (ES): m/z = 338.2 [M+H].

에탄올 (60 mL) 중 4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.69 g, 8.0 mmol) 및 탄소상 10％ 팔라듐 (1.0 g)의 혼합물을 22℃에서 수소하에 2시간 동안 교반하였다. 팔라듐 촉매를 여과해 냈다. 여액을 농축시켜 무색의 오일을 수득하였다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 수득하였다 (2.19 g, 89％ 수율). MS (ES): m/z = 308.2 [M+H].

상기한 것과 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 하기 화합물을 제조하였다:

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H- BOC ]
제조예 17	4-(5-아미노-3-메틸-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1- 카르복실산 tert-부틸 에스테르	208.2

제조예 18

4-(5-아미노-피리딘-2- 일옥시 )-피페리딘-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

THF (2 mL) 중 사전 세척된 NaH (0.1 g, 2.48 mmol, 광유 중 60％ 분산액)의 현탁액을 무수 THF (3 mL) 중 4-히드록시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (0.5 g, 2.48 mmol)의 빙냉 용액 첨가하였다. 상기 혼합물이 20분 동안 교반되도록 한 후에 2-클로로-5-니트로-피리딘 (0.36 g, 2.26 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 첨가 완료 후에 냉각조를 치우고 상기 반응 혼합물을 22℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙조로 냉각시켜 중탄산나트륨 포화 수용액 (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (25 mL)와 증류수 (25 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하여 에틸 아세테이트 (3×35 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 백색 고체로서 수득하였다 (0.55 g, 75％ 수율). MS (ES): m/z = 324.2 [M+H].

에탄올 (100 mL) 중 4-(5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.7 g, 8.35 mmol) 및 탄소상 10％ 팔라듐 (0.5 g)의 혼합물을 실온에서 수소하에 4시간 동안 교반하였다. 여과하여 팔라듐 촉매를 제거하였다. 여액을 농축시키고, 생성된 무색의 오일로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (2.11 g, 86％, ES+ (m/z) 194.2 [M+H-BOC]).

제조예 19

[4-(5-아미노-3- 메틸 -피리딘-2- 일옥시 )-피페리딘-1-일]-(2- 플루오로 - 페닐 )- 메타논

THF (20 mL) 중 사전 세척된 NaH (1.27 g, 31.87 mmol, 광유 중 60％ 분산액)의 현탁액을 무수 THF (80 mL) 중 4-히드록시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (6.41 g, 31.87 mmol)의 빙냉 용액에 첨가하였다. 혼합물이 20분 동안 교반되도록 한 후에 2-클로로-3-메틸-5-니트로 피리딘 (5 g, 28.97 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 첨가 완료 후에 냉각조를 치우고 상기 반응 혼합물을 22℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙조로 냉각시켜 중탄산나트륨 포화 수용액 (50 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (350 mL)와 증류수 (150 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하여 에틸 아세테이트 (1×100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고 염화나트륨 포화 수용액 (2×150 mL)으로 세척하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(3-메틸-5-니트로-피리딘- 2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 백색 고체로서 수득하였다 (6.5 g, 67％ 수율). MS (ES): m/z = 360.3 [M+Na].

디클로로메탄 (450 mL) 중 4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (10.12 g, 30 mmol)의 차가운 용액에 트리플루오로아세트산 (150 mL)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 22℃에서 60분 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후에 잔류물을 1 N 수산화나트륨 (150 mL)으로 처리하고 디클로로메탄 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 3-메틸-5-니트로-2-(피페리딘-4-일옥시)-피리딘을 황색 고체로서 수득하였다 (6.9 g, 97％ 수율). MS (ES): m/z = 238.2 [M+H].

2-플루오로-벤조일 클로라이드 (1.74 g, 11.0 mmol)를 디클로로메탄 (50 mL) 및 트리에틸아민 (1.21 g, 12 mmol) 중 3-메틸-5-니트로-2-(피페리딘-4-일옥시)-피리딘의 용액에 적가하고, N₂하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수 (3×20 mL)로 세척한 후에 염화나트륨 포화 수용액 (1×20 mL)으로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켜 (2-플루오로-페닐)-[4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논을 황색 고체로서 수득하였다.

에탄올 (100 mL) 중 (2-플루오로-페닐)-[4-(3-메틸-5-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논 (3.58 g, 10 mmol) 및 탄소상 10％ 팔라듐 (358 mg)의 혼합물을 22℃에서 수소하에 밤새 교반하였다. 여과하여 촉매를 제거하였다. 여 액을 농축시켜 무색의 오일을 수득하였다. 오일로 헥산 및 에틸 아세테이트 (1:1)로 용출시킨 후에 70％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 황색 고체를 수득하였다 (2.27 g, 50％ 수율). MS (ES): m/z = 330.2 [M+H].

제조예 20

4-(4-아미노-피리딘-2- 일옥시 )-피페리딘-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

톨루엔 100 mL을 2-클로로-4-니트로-피리딘 (4.32 g, 27.2 mmol), tert-부틸 4-히드록시피페리딘 카르복실레이트 (11.0 g, 54.5 mmol), 탄산세슘 (13.3 g, 40.8 mmol), 아세트산팔라듐 (122 mg, 0.544 mmol) 및 2-(디-tert-부틸포스피노)-1,1'-비나프틸 (271 mg, 0.68 mmol)의 질소 퍼징된 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반한 후에 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배시켰다. 수성 층을 추가의 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시켜 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 헥산 중 0→20％ 에틸 아세테이트로 구배 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(4-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 백색 왁스상 고체로서 수득하였다 (5.37 g, 61％, LCMS ES+ (m/z) 268 [M-tBu]⁺).

EtOAc (150 mL) 중 4-(4-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (3.0 g, 9.28 mmol) 및 5％ Pd/C (151 mg)의 슬러리를 60 psi (파르 진탕기)의 수소 대기에 밤새 주변 온도에서 적용시켰다. 반응 혼합물을 셀 라이트^® 패드를 통해 여과하고 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (2.6 g, 95％ 수율). LCMS ES+ (m/z) 294 [M+H].

제조예 21

[4-(4-아미노-피리딘-2- 일옥시) -피페리딘-1- 일 ]-(2,6- 디플루오로 -페닐)-메타논

500 mL 플라스크에 2-클로로-4-니트로피리딘 3 g (18.9 mmol), 4-히드록시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 7.6 g (37.8 mmol), [1,1']비나프탈레닐-2-일-디-tert-부틸-포스판 188 mg (0.47 mmol), 아세트산팔라듐 85 mg (0.38 mmol) 및 탄산세슘 9.2 g (28.4 mmol)을 첨가하고, N₂로 10분 동안 퍼징하였다. 이어서, 무수 톨루엔 (500 mL)을 첨가하고, 실온에서 N₂ 대기하에 밤새 교반하였다. 반응물을 물과 EtOAc 사이 (각각 500 mL씩)에 분배시켰다. 유기 층을 분리하였다. MgSO₄에서 건조시켜 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물로 10배 컬럼 부피의 5％→20％ EtOAc 구배의 EtOAc:헥산 혼합물로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(4-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 표제 화합물 1.2 g을 백색 고체로서 수득하였다 (34％ 수율). ES+ (m/z) = 324 [M+H].

Et₂O 중 4 M HCl 용액 8 mL을 4-(4-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 1.2 g에 첨가하고, 상기 현탁액을 4시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고 남아있는 고체를 Et₂O로 연화처리하여 4-니트로-2-(피페 리딘-4-일옥시)-피리딘 디히드로클로라이드 1.1 g을 옅은 황색 고체로서 수득하였다 (100％ 수율) (ES+ (m/z) = 224 [M+H]).

트리에틸아민 (2.57 mL, 18.5 mmol)을 무수 디클로로메탄 (50 mL) 중 4-니트로-2-(피페리딘-4-일옥시)-피리딘 디히드로클로라이드 1.1 g (3.7 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 이어서, 2,6-디플루오로벤조일 클로라이드 0.512 mL (4.07 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물 (50 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. MgSO₄로 건조시키고 여과하였다. 용매를 증발시켜 (2,6-디플루오로-페닐)-[4-(4-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논 1.22 g을 황색 고체로서 수득하였다 (91％ 수율) (ES+ (m/z) = 364 [M+H]).

분말화된 철 (419 mg, 7.5 mmol)을 빙초산 (10 mL) 중 (2,6-디플루오로-페닐)-[4-(4-니트로-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논 1.1 g (3.0 mmol)의 용액에 첨가하고, 80℃에서 교반하였다. 15분 후에는 상기 혼합물이 실온에 이르게 하고, 셀라이트^®를 통해 여과하였다. 셀라이트^® 패드를 Et₂O 및 EtOAc로 세척하였다. 생성된 유기 층을 물, NaHCO₃ 포화 수용액 및 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 분리하여 MgSO₄에서 건조시키고, 용매를 증발시켜 표제 화합물 831 mg을 백색 고체로서 수득하였다 (83％ 수율). ES+ (m/z) = 334 [M+H].

제조예 22

4-(5-아미노-피리딘-2- 일아미노 )-피페리딘-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

N-Boc-4-아미노피페리딘 (0.9 g, 4.8 mmol)을 무수 에탄올 중에 용해하고, 고체 탄산나트륨 (0.8 g, 7.9 mmol)을 0℃에서 첨가한 후에 2-클로로-5-니트로-피리딘 (0.6 g, 3.9 mmol)을 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 밤새 교반한 후에 9℃에서 6시간 동안 가열하였다. 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압하에 증발시키고 조 혼합물을 EtOH와 물 사이에 분배시켰다. EtOAc로 추출하고 유기 층을 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 합하여 MgSO₄에서 건조시켰다. 여과하고 용매를 증발시켜 4-(5-니트로-피리딘-2-일아미노)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다.

SnCl₂.H₂O (11.8 mmol, 2,7 g)을 에틸 아세테이트 20 mL 중 4-(5-니트로-피리딘-2-일아미노)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.4 mmol, 0.8 g)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액의 pH가 염기성이 될 때까지 NaHCO₃ 수용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 현탁액을 셀라이트^® 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 합하고 포화 수성 염화나트륨으로 세척하여 황산나트륨상에서 건조시켰고, 여과하고 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. MS (ES): m/z = 293 [M+H].

제조예 23

메틸 1-메틸시클로헥산 카르복실레이트

MeOH (10 mL) 및 Et₂O (40 mL) 중 1-메틸시클로헥산 카르복실산 (7.11 g, 50.0 mmol)의 용액을 트리메틸실릴디아조메탄 (2.0 M/헥산, 26 mL, 52 mmol)으로 적가 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후에 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 투명한 옅은 황색 오일로서 수득하였다 (7.811 g, 50 mmol, 100％). MS (ES): m/z = 156 [M+H].

제조예 24

3-히드록시-2,2-디메틸-프로피온산 벤질 에스테르

수산화칼륨 (486.7 mmol, 32.1 g)을 DMF 300 mL 중 2,3-디히드록시-2-메틸-프로피온산 (423.2 mmol, 50 g)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 1시간 동안 100℃에서 교반한 후에 브롬화벤질을 첨가하였다. 상기 용액을 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 냉각시키고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 층을 물로 세척하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 여러회 세척하였다. 유기 층을 합하여 황산나트륨상에서 건조시키고 여과하여 감압하에 농축시켰다.

제조예 25

1- 플루오로메틸 - 시클로프로판카르복실산 에틸 에스테르

AgF (4.5 당량, 4.56 g)를 아세토니트릴 (22 mL) 및 물 (274 mL) 중 1-플루오로-시클로부탄카르복실산 에틸 에스테르 (1.6 g, 8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 밀폐된 튜브 중의 혼합물을 80℃에서 20시간 동안 가열하면서 격렬하게 교반하였다. 혼합물이 냉각되도록 하고 셀라이트^®를 통해 여과하였다. 용매를 감압하에 제거하여 표제 화합물을 오일로서 수득하였고 (0.81 g, 61％ 수율), 이것을 임의의 추가의 정제 없이 사용하였다. MS (ES): m/z = 147.1 [M+H].

제조예 26

1- 트리플루오로메틸 - 시클로프로판카르복실산 메틸 에스테르

헥산 중 2 M 디아조메탄 용액 (14.2 mL, 28.45 mmol)을 메탄올-헥산 중 1-트리플루오로메틸시클로프로판-1-카르복실산 (3.65 g, 23.7 mmol)의 용액 (2.5 mL 내지 22.5 mL)에 첨가하였다. 감압하에 농축시키고, 잔류물을 증류시켜 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (2.93 g, 73％ 수율). MS (ES): m/z = 169.1 [M+H].

제조예 27

3-옥소-3-(1- 트리플루오로메틸 - 시클로프로필 )-프로피오니트릴

THF 중 2 M LDA 용액 (19.15 mL, 38.3 mmol)을 THF (30 mL) 중 1-트리플루오로메틸-시클로프로판-1-카르복실산 메틸 에스테르 (2.93 g, 17.4 mmol) 및 아세토니트릴 (1.43 g mL, 34.8 mmol)의 드라이아이스-아세톤 냉각된 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 -70℃에서 1.5시간 동안 교반한 후에 22℃로 2시간 동안 가온되게 하였다. 농축시켜 헥산을 첨가하고, 여과하여 황색 고체를 수득하였다. 헥산으로 세척하여 디에틸 에테르 (250 mL)로 처리한 후에 2 N HCl (150 mL)로 처리하였다. 수성 층을 디에틸 에테르 (4×100 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 3-옥소-3-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-프로피오니트릴을 수득하였다 (2.99 g, 97％ 수율). MS (ES-): m/z = 176.1 [M+H].

표

제조예	화합물
제조예 28	4,4,5,5,5-펜타플루오로-3-옥소-펜탄 니트릴
제조예 29	5,5,5-트리플루오로-4-메틸-3-옥소-4-트리플루오로메틸-펜탄니트릴

제조예 30

5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-(6- 메틸 -피리딘-3-일)-2H- 피라졸 -3- 일아민

밀폐된 튜브 중 에탄올 (85 mL) 중의 3-옥소-3-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-프로피오니트릴 (2.66 g, 15.0 mmol), N-벤즈히드릴리덴-N'-(6-메틸-피리딘-3-일)-히드라진 [TL, 2002, 43, 2171-2173] (4.31 g, 15.0 mmol) 및 p-톨릴술폰산 (14.29 g, 75.0 mmol)의 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 용매를 제거한 후에 잔류물로 디클로로메탄 중 0→5％ 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 갈색 고체를 수득하였다 (2.29 g, 54％ 수율). MS (ES+): m/z = 283.2 [M+H].

제조예 31

5- 펜타플루오로에틸 -2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3- 일아민

밀폐된 튜브 장치 중 에탄올 (20 mL) 중의 4,4,5,5,5-펜타플루오로-3-옥소-펜탄니트릴 (4.0 g, 21.4 mmol) 및 p-톨릴-히드라진 (10 g, 64.1 mmol)의 혼합물을 95℃로 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에 용매를 감압하에 제거하여 황색 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 (250 mL), 증류수 (150 mL) 및 중탄산나트륨 포화 수용액 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하고 디클로로메탄 (100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조 및 농축시켜 짙은 금색 오일을 수득하였다. 오일로 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시 키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 밝은 갈색 고체를 수득하였다 (3.24 g, 52％ 수율). MS (ES+): m/z = 292.1 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 32	2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H- 피라졸-3-일아민	282.3
제조예 33	2-p-톨릴-5-(2,2,2-트리플루오로-1-메틸-1- 트리플루오로메틸-에틸)-2H-피라졸-3-일아민	338.3

제조예 34

[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-(6- 메틸 -피리딘-3-일)-2H- 피라졸 -3-일]- 카르밤산

2,2,2- 트리클로로 -에틸 에스테르

THF (10 mL) 중 2,2,2-트리클로로에틸클로로포르메이트 (1.80 g, 8.5 mmol)의 용액을 THF (30 mL) 중 5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (2.29 g, 8.1 mmol) 및 피리딘 (0.9 mL, 11 mmol)의 빙염(ice-salt) 냉각된 용액에 -15℃에서 적가하였다. -15℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에 22℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후에는 반응 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL)과 중탄산나트륨 포화 수용액 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하고 디클로로메탄 (각각 25 mL씩)으로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 백색 고체를 수득하였다 (2.46 g, 66％ 수율). MS (ES+): m/z = 457.2 [M+H].

상기한 것과 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 하기 화합물을 제조하였다: 표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 35	(5-펜타플루오로에틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르	466.1 [M+H]
제조예 36	[2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H- 피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르	458.2 [M+H]
제조예 37	[2-p-톨릴-5-(2,2,2-트리플루오로-1-메틸-1- 트리플루오로메틸-에틸)-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2- 트리클로로-에틸 에스테르	512.2 [M+H]

제조예 38

(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)- 카르밤산 , 2,2,2-

트리클로로 -에틸 에스테르

Na₂CO₃ (2.4 L) 포화 용액을 THF (8 L) 중 5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (400 g, 1.74 mol)의 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (406.77 g, 1.92 mol)를 적가하고, 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (3×6.5 L)로 추출하고, 무수 황산마그네슘상에서 건조시켜 농축시켰다. 고체를 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해하고, 과량의 헥산을 첨가하여 침전시켰다. 고체를 여과하여 수집하고 건조시켜서 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다 (586 g, 83％ 수율).

제조예 39

[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 카르밤산 2,2,2-

트리클로로에틸 에스테르

리튬 디이소프로필아미드 (LDA, 2.0 M/헵탄, 알드리치, 2.2 당량, 88 mmol, 44 mL)를 THF (1.5 mL/mmol, 60 mL)와 합하여 -78℃로 냉각시켰다. 메틸 1-메틸시클로프로판 카르복실레이트 (TCI US, 4.56 g, 40 mmol) 및 CH₃CN (4.20 mL, 80 mmol)을 THF (10 mL) 중에서 합하여 서서히 첨가하면서 교반하였다. 상기 혼합물을 -65℃ 내지 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후에 상기 조를 치우고 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 감압하에 슬러리로 농축시켰다. 헥산 (150 mL)을 첨가하여 슬러리로부터 침전물이 형성되었다. 진공 여과로 고체를 수집하고 헥산 (2×50 mL)으로 세척하였다. 상기 포획 플라스크를 깨끗한 것으로 대체하고, 프릿(frit)상의 고체를 2.5 M HCl 50 mL 중에 용해하고 플라스크에 수집하였다. 2.5 M HCl 20 mL로 헹군 후에 Et₂O 200 mL로 헹구었다. 여액 중의 층을 분리하고, 산성 상을 Et₂O (150 mL)로 추출하였다. Et₂O 유기상을 합하여 MgSO₄로 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 3-(1-메틸-시클로프로필)-3-옥소-프로피오니트릴을 투명한 호박색 오일로서 수득하였다 (3.58 g, 29.1 mmol, 73％). 톨릴히드라진 히드로클로라이드 (5.23 g, 33.0 mmol) 및 에탄올 (2 mL/mmol)과의 반응에 정제 없이 환류하에 20시간 동안 사용하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켜 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (250 mL)로 희석하고, 물 (2×60 mL), 포화 수성 NaHCO₃ (60 mL) 및 포화 수성 염화나트륨 (60 mL)으로 세척하였다. 유기상을 MgSO₄로 건조시켜 여과하고 회전 증발로 농축시켰다. 잔류물로 에틸 아세테이트 및 헥산으로 구배 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민을 수득하였다 (4.2238 g, 18.5 mmol, 46％). LCMS (ES+): m/z = 228.2 [M+H].

THF (3 mL/mmol) 중 5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (5.68 g, 25 mmol) 및 피리딘 (2.2 mL, 27.5 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액을 2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (3.7 mL, 27.5 mmol)로 처리하였다. 반응 온도를 0℃에서 유지시키고, 2시간 후에는 클로로포르메이트 (0.3 mL) 및 피리딘 (0.2 mL)을 조금씩 첨가하였다. 1시간 후에는 반응물을 물 (150 mL)로 희석하고, EtOAc (3×100 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 물 (100 mL), 포화 수성 NaHCO₃ (50 mL) 및 포화 수성 염화나트륨 (50 mL)으로 세척하였다. 조 시럽을 에틸 아세테이트/헥산으로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (8.18 g, 20.3 mmol, 81％). LCMS (ES+): m/z = 402.2/404.2 [M+H].

별법으로, 테트라히드로푸란 (105 mL) 및 포화 수성 탄산나트륨 (32 mL) 중 5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (4.75 g, 21 mmol)의 용액에 2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (3.0 mL, 23 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 상기 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 물에 붓고, 상을 분리하였다. 수성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다.

후처리 A: 유기 층을 합하여 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해하고, 탁해질 때까지 교반하면서 헥산을 첨가하였다. 표제 화합물을 결정화하고 백색 고체로 여과하였다.

후처리 B: 에틸 아세테이트 용매를 이소프로필 알콜 (91.56 mol)로 바꾸었다. 상기 슬러리를 0℃ 미만에서 2시간 동안 교반하여 여과하고, 차가운 이소프로필 알콜 (13.08 mol)로 세척하고 40℃에서 감압하에 밤새 건조시켜 표제 화합물을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.

표

제조예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
제조예 40	[5-(1-메틸-시클로헥실)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]- 카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르	442.2/444.2

제조예 41

[5-(1- 플루오로메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 카르밤산 2,2,2-

트리클로로 -에틸 에스테르

THF 12 mL 중 디이소프로필아민 (1.7 mL, 2.2 당량, 12.1 mmol) 및 n-BuLi (헥산 중 1.6 M, 7.5 mL, 2.2 당량, 12.1 mmol)으로부터 LDA 용액을 -78℃에서 30분 동안 N₂하에 제조하였다. THF 7 mL 중 1-플루오로메틸-시클로프로판카르복실산 에틸 에스테르 (0.81 g, 5.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하고 -78℃에서 실온으로 가온되도록 하고, 실온에서 5시간 동안 계속 교반하였다. NH₄Cl 포화 수용액 10 mL를 첨가하였다. AcOEt를 첨가하고 유기 층을 분리하여 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. Na₂SO₄상에서 건조시키고 용매를 제거하여 갈색 오일을 수득하였다 (0.42 g, 54％ 수율). 오일을 EtOH 10 mL 중에 용해하고, p-톨릴히드로진 (0.47 g, 1 당량, 3 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 밀폐된 튜브 중에서 90℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물이 냉각되도록 하고, 용매를 감압하에 제거하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산/AcOEt 15％→80％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 0.336 g을 오일로서 수득하였다. MS (ES+): m/z = 246.1 [M+H].

ClCO₂CH₂CCl₃ (1.00 당량, 717.49 μmol, 152.01 mg)을 THF 4 mL 중 5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (176 mg, 0.71 mmol) 및 피리딘의 용액에 질소하에 0℃에서 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 실온으로 5시간 동안 교반하였다. 불용성 물질을 여과하고 용매를 여액으로부터 감압하에 제거하여 오일을 수득하였다. 오일로 크로마토그래피 (hex/AcOEt 20％→80％)를 실시하여 표제 화합물 110 mg을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ES+): m/z = 420.0 [M+H].

제조예 42

(2-p- 톨릴 -5- 트리메틸실라닐 -2H- 피라졸 -3-일)- 카르밤산 2,2,2-

트리클로로 -에틸 에스테르

트리메틸실릴-디아조메탄 (THF 중 2 M) (25 mL, 50 mmol)을 THF (50 mL) 중에 넣었다. 반응물을 -78℃로 냉각시키고 리튬 디이소프로필아미드 (THF 중 2 M) (25 mL, 50 mmol)를 30분에 걸쳐 첨가하였다. 메틸 프로피올레이트 (4.45 mL, 50 mmol)를 첨가하고, -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 가온하고 18시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트, 물 및 1 N HCl을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 물질을 에틸 아세테이트 (2×25 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하여 Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0→60％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 5-트리메틸실라닐 -2H-피라졸-3-카르복실산 메틸 에스테르 3.59 g을 수득하였다 (36％).

5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-카르복실산 메틸 에스테르 (1.60 g, 8.07 mmol) 및 4-메틸페닐-1-보론산 (1.64 g, 12.1 mmol)을 CH₂Cl₂ (30 mL) 중에 넣었다. 4 Å 분자체 (1.50 g)를 첨가한 후에 아세트산구리 (II) (1.61 g, 8.88 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 트리에틸아민 (8 mL)을 첨가하고, 실온에서 2.5일 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트^® 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂로 세척하였다. 여액을 수집하고 포화 수성 염화암모늄을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 CH₂Cl₂ (2×20 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하여 Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0→30％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-카르복실산 메틸 에스테르 655 mg을 수득하였다 (29％). MS (ES+): m/z = 289.3 [M+H].

2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-카르복실산 메틸 에스테르 (665 mg, 2.30 mmol)를 메탄올 (25 mL) 중에 넣었다. 1 N NaOH (10 mL, 10 mmol)를 첨가하고, 50℃로 4시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시켜 감압하에 농축시켰다. 중탄산나트륨 포화 수용액 및 CH₂Cl₂를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 CH₂Cl₂ (2×25 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하여 Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-카르복실산 620 mg을 수득하였다 (98％). MS (ES+): m/z = 275.3 [M+H].

2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-카르복실산 (620 mg, 2.26 mmol)을 tert-부탄올 (5 mL) 및 톨루엔 (5 mL) 중에 넣었다. 트리에틸아민 (0.378 mL, 2.71 mmol)을 첨가한 후에 디페닐 포스포릴 아지드 (0.586 mL, 2.71 mmol)를 첨가하고, 60℃로 1시간 동안 가열하였다. 이어서, 100℃로 19시간 동안 가열하였다. 반응물을 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0→30％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 (2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 tert-부틸 에스테르 504 mg을 수득하였다 (65％). MS (ES+): m/z = 346.4 [M+H].

(2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (504 mg, 1.46 mmol)를 THF (10 mL) 중에 넣었다. 디옥산 중 4 M HCl (4 mL, 16 mmol)을 첨가하고, 60℃로 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 배리언™ SCX 컬럼에 로딩하였다. 상기 컬럼을 MeOH로 세척한 후에 생성물을 MeOH 중 2 M NH₃으로 세정해 냈다. 여액을 수집하고 감압하에 농축시켜 2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-일아민 175 mg을 수득하였다 (49％).

2-p-톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-일아민 (170 mg, 0.693 mmol)을 에틸 아세테이트 (10 mL) 중에 넣었다. 탄산칼륨 (191 mg, 1.38 mmol) 및 물 (2 mL)을 첨가하였다. 반응물을 교반하고 트리클로로에틸 클로로포르메이트 (0.114 mL, 0.831 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였 다. 유기 층을 수집하고, Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0→30％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물 280 mg을 수득하였다 (96％). MS (ES+): m/z = 420.2 [M+H].

제조예 43

[5-(2- 플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-

카르밤산 2,2,2- 트리클로로 -에틸 에스테르

H₂SO₄ (4.5 g)를 MeOH (1 L, HPLC 등급 용매) 중 3-히드록시-2-히드록시메틸-2-메틸-프로피온산 (100 g)의 현탁액에 첨가하고, 실온에서 주말 내내 (약 70시간) 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 EtOAc (1 L)와 H₂O (100 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층을 EtOAc로 재추출하고, 합한 유기 층을 MgSO₄상에서 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켜 3-히드록시-2-히드록시메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르를 수득하였다.

Tf₂O (80 mL)를 CH₂Cl₂ (400 mL) 중 3-히드록시-2-히드록시메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르 (32.5 g) 및 2,6-루티딘 (80 mL)의 차가운 (-78℃) 용액에 적가하였다. 반응물이 실온에 이르게 하고, TLC 분석에서 생성물 스팟만이 검출될 때까지 (약 2시간) 교반하였다. CH₂Cl₂ (400 mL)로 희석하고, HCl (3％ 수용액)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄상에서 건조시켜 여과하고 농축시켰다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트 5％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 2-메틸-2,3-비스-트리플루오로메탄술포닐옥시-프로피온산 메틸 에스테르를 무색의 오일로서 수득하였다.

1 M TBAF (132 mmol, 132 mL)를 0℃로 냉각시킨 무수 THF 500 mL 중 2-메틸-2,3-비스-트리플루오로메탄술포닐옥시-프로피온산 메틸 에스테르 (65.9 mmol, 26.3 g)의 용액에 첨가하였다. 밤새 교반하였다. 감압하에 농축시키고, CH₂Cl₂를 첨가하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 합하고 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르를 수득하였다.

-78℃로 냉각시킨 무수 THF 100 mL 중 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르 (28.2 mmol, 4.3 g)의 용액에 2.0 M LDA (62.0 mmol, 31 mL)를 첨가한 후에 무수 아세토니트릴 (56.4 mmol, 2.9 mL)을 첨가하였다. 2시간 동안 -78℃에서 교반하고, 상기 용액이 밤새 실온으로 가온되도록 하였다. 감압하에 농축시키고, CH₂Cl₂를 첨가하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨 및 수성 10％ HCl로 세척하였다. 유기 층을 합하고 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. p-톨릴히드라진 히드로클로라이드 (15.5 mmol, 2.5 g) 및 수득된 잔류물 (15.5 mmol, 2.5 g)을 에탄올 31 mL 중에서 90℃에서 밤새 교반하였다. 농축시키고, 잔류물을 물 중에 용해하였다. 10％ 수산화나트륨 용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트 중에 추출하였다. 유기 층을 합하여 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트 (15％→50％)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES+): m/z = 266 [M+H].

2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (8.1 mmol, 1.1 mL) 및 탄산나트륨 수용액 (4.8 mL)을 THF 37 mL 중 5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (7.3 mmol, 1.9 g)의 용액에 첨가하였다. 24시간 동안 교반하였다. 상기 용액을 물에 붓고, 에틸 아세테이트 중에 추출하였다. 유기 층을 합하여 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. MS (ES+): m/z = 440 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES +): m/z [M+H]
제조예 44	[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르	424

제조예 45

4-(5-{3-[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레이도 }-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

DMSO (0.25 M, 8 mL) 중 4-(5-아미노-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 4, 1.05 당량, 0.5845 g), [5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로에틸 에스테르 (제조예 39, 1.0 당량, 0.8054 g) 및 디이소프로필에틸아민 (2 당량, 0.7 mL)의 용액을 60℃로 6시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도로 냉각시켜 물 (20 mL)을 첨가하였다. EtOAc (2×25 mL)로 추출한 후에 합한 유기상을 물 (10 mL) 및 염화나트륨 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하였다. MgSO₄에서 건조시킨 후에 잔류물로 디클로로메탄 중 2 M 암모니아-메탄올로 구배 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. LCMS (ES+): m/z = 532.3 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES +): m/z [M+H]
제조예 46	4-(3-메틸-5-{3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-우레이도}-피리딘-2-일)-피페라진-1- 카르복실산 tert-부틸 에스테르	546
제조예 47	4-(6-메틸-5-{3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-우레이도}-피리딘-2-일)-피페라진-1- 카르복실산 tert-부틸 에스테르	546
제조예 48	4-(3-메틸-5-{3-[5-(1-메틸-시클로헥실)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-우레이도}-피리딘-2-일)-피페라진-1- 카르복실산 tert-부틸 에스테르	588.3

제조예 49

4-{5-[3-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)- 우레이도 ]-6- 메틸 -피리딘-2-일}-

피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

DMSO (500 mL) 중 4-(5-아미노-6-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 3, 41.20 g, 140.9 mmol), (5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 38, 57.03 g, 140.9 mmol) 및 DIEA (36.8 mL, 211.4 mmol)의 용액을 60℃ 내지 65℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 마지막 30분 동안에는 농후한 슬러리에 DMSO (100 mL)를 더 첨가하였다. 상기 슬러리를 실온으로 냉각시키고 밤새 방치되도록 하였다. 디에틸 에테르 (600 mL)를 첨가하고, 슬러리를 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 여과하고 디에틸 에테르 (5×300 mL)로 세척한 후에 공기 건조시켜 백색 고체를 수득하였다 (68.70 g, 89％ 수율 - DMSO에 대하여 미보정. 약 85 mol％의 DMSO 함유). LCMS (ES+): m/z = 548 [M+H].

제조예 50

1-[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-3-(2- 메틸 -6-피페라진-

1-일-피리딘-3-일)- 우레아

기체 염산을 1:1 에틸 아세테이트:디클로로메탄 (200 mL) 중 4-(6-메틸-5-{3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.74 mmol이라 추정됨)의 용액을 통해 3분 동안 버블링(bubbling)시켜 확실히 포화되도록 하였다. 상기 혼합물을 30분 동안 방치한 후에 감압하에 백색 고체로 농축시켰다. 상기 고체를 MeOH 중에 용해하고, 20 g 배리언 SCX 컬럼에 로딩하여 추가의 MeOH로 헹구었다. 1:1의 MeOH 중 2 M 암모니아:디클로로메탄을 사용하여 유리 염기를 용출시켰다. 상기 용액을 감압하에 농축시켜 백색 고체를 수득하였다 (1.21 g, 99％, 2 단계에 걸쳐 수행). LCMS (ES+): m/z = 446 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
제조예 51	1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3- (5-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아	446

제조예 52

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-(6-피페라진-1-일-

피리딘-3-일)- 우레아

4-(5-아미노-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (200 mg, 0.718 mmol), 디이소프로필에틸아민 (0.125 mL, 0.718 mmol) 및 (5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 38, 291 mg, 0.718 mmol)를 DMSO (5 mL) 중에 넣고, 75℃로 17시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시켜 EtOAc 및 물을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 수성 염화나트륨 (2×20 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 수집하고, Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0％→70％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-피리딘-2-일}-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 328 mg을 수득하였다 (85％). MS (ES+): m/z = 534.4 [M+H].

4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-피리딘-2-일}-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (565 mg, 1.06 mmol)를 THF (10 mL) 중에 넣었다. 디옥산 중 4 M HCl (2.65 mL, 10.6 mmol)을 첨가하고, 60℃로 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시켜 배리언™ SCX 컬럼에 로딩하였다. 상기 컬럼을 MeOH로 세척한 후에 생성물을 MeOH 중 2 M NH₃으로 세정해 냈다. 여액을 수집하고 감압하에 농축시켜 표제 화합물 411 mg을 수득하였다 (89％). MS (ES+): m/z = 434.2 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
제조예 53	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(5-메틸-6- 피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아	448.5
제조예 54	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(5-클로로-6- 피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 히드로클로라이드 (정제하지 않음)	468.4
제조예 55	1-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-3-(2-p-톨릴-5- 트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-일)-우레아	450.4

제조예 56

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-(2- 메틸 -6-피페라진-1-일-

피리딘-3-일)- 우레아

MeOH (600 mL) 중 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-6-메틸-피리딘-2-일}-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 49, 63.20 g, 115.4 mmol)의 22℃ 용액을 HCl (디옥산 중 4 N 용액, 300 mL, 1200 mmol)로 처리하였다. 상기 혼합물을 4시간 동안 교반한 후에 감압하에 농축 (실온, 약 10 torr, 3일)시켜 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 디히드로클로라이드를 회백색 분말로서 수득하였다 (62.2 g - 약 45 mol％의 디옥산을 함유함). LCMS (ES+): m/z = 448 [M+H].

MeOH 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 디히드로클로라이드 (10 g, 19.2 mmol)의 용액을 70 g 배 리언 SCX 컬럼에 로딩하고, MeOH (약 300 mL)로 헹구었다. 유리 염기를 1:1의 MeOH 중 2 M 암모니아:디클로로메탄 (150 mL)으로 용출시켰다. 감압하에 농축시켜 백색 고체를 수득하였다 (6.24 g). LCMS (ES+): m/z = 448 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
제조예 57	1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3- (6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아	432.2
제조예 58	1-[5-(1-메틸-시클로헥실)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3- (5-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아	488.5

제조예 59

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-[2- 메틸 -6-(피페리딘-4

- 일옥시 )-피리딘-3-일]- 우레아

DMSO (3 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 38, 608 mg, 1.5 mmol) 및 4-(5-아미노-6-메틸-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (453 mg, 1.5 mmol)의 용액을 통해 질소 기체를 5분 동안 버블링하였다. 다음으로, N,N-디이소프로필에틸아민 (500 ㎕, 3.0 mmol)을 첨가하였다. 60℃에서 밤새 교반한 후에 반응 혼 합물을 에틸 아세테이트 (25 mL)와 중탄산나트륨 포화 수용액 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하고 에틸 아세테이트 (각각 25 mL씩)로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-6-메틸-피리딘-2-일옥시}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 갈색 고체로서 수득하였다 (746 mg, 88％ 수율). MS (ES+): m/z = 563.3 [M+H].

디클로로메탄 (20 mL) 중 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-6-메틸-피리딘-2-일옥시}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (746 mg, 1.33 mmol)의 차가운 용액에 트리플루오로아세트산 (10 mL)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 22℃에서 25분 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후에 잔류물을 1 N 수산화나트륨 (20 mL)으로 처리하고, 디클로로메탄 (각각 20 mL씩)으로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 백색 고체를 수득하였다 (605 mg, 98％ 수율). MS (ES+): m/z = 463.2 [M+H].

표

제조예	화합물	MS ( ES +): m/z [M+H]
제조예 60	1-(5-tert-부틸-2-메틸-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(피페리딘-4- 일옥시)-피리딘-3-일]-우레아	373.3
제조예 61	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3- 일]-3-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아	449.2
제조예 62	1-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-3-[2-(6-메틸-피리딘- 3-일)-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H- 피라졸-3-일]-우레아	501.3
제조예 63	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(피페리딘-4- 일옥시)-피리딘-3-일]-우레아	449.2
제조예 64	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[5- 메틸-6-(피페리딘-4-일옥시)-피리딘-3-일]-우레아	463.2
제조예 65	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[5-클로로-6- (피페리딘-4-일옥시)-피리딘-3-일]-우레아	483.3
제조예 66	1-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-3-(5- 펜타플루오로에틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레아	510.4
제조예 67	1-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-3-[2-p-톨릴-5-(1- 트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아	510.4

제조예 68

1-[5-(2- 플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-3-

(2- 메틸 -6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)- 우레아 히드로클로라이드

[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (2.7 mmol, 1.2 g) 및 DIEA (2.9 mmol, 0.5 mL)를 DMSO 4 mL 중 4-(5-아미노-6-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.9 mmol, 0.9 g)의 용액에 첨가하고, 85℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시켜 물을 첨가하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 합하고 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 4-(5-{3-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-6-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테 르를 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (10％→50％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES+): m/z = 584 [M+H].

CH₂Cl₂ 5 mL 및 디옥산 (7.35 mmol, 1.8 mL) 중 4.0 M 염화수소 중 용해된 4-(5-{3-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-6-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.5 mmol, 0.9 g)를 실온에서 밤새 교반하였다. 농축시킨 후에 형성된 백색 고체를 디에틸 에테르로 연화처리하였다. MS (ES+): m/z = 484 [M+H].

표

제조예	화합물	MS (ES +): *m/z* [M+H]
제조예 69	1-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸- 3-일]-3-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 히드로클로라이드	466

제조예 70

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-[6-(피페리딘-4- 일아미노 )-

피리딘-3-일]- 우레아

(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 38, 2.0 mmol, 0.8 g)를 아세토니트릴 (25 mL) 중 4-(5-아미노-피리딘-2-일아미노)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.0 mmol, 0.6 g) 및 탄산칼륨 (2.20 mmol, 0.3 g)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 물을 첨가하고 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 CH₂Cl₂:MeOH로 구배 (0.5％→20％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-피리딘-2-일아미노}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다. MS (ES+): m/z = 548 [M+H].

Et₂O (5 mL) 중 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-피리딘-2-일아미노}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.1 mmol, 0.6 g)의 22℃ 용액을 HCl (디에틸 에테르 중 2.0 M 용액, 5 mL, 10 mmol)로 처리하였다. 상기 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득한 후에, 상기 잔류물을 메탄올 중 2.0 N 암모니아로 용출시키는 SCX 카트리지에 적용시켰다. 표제 화합물을 유리 염기로서 수득하였다. MS (ES): m/z = 488 [M+H].

제조예 71

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-[2-(피페리딘-4- 일옥시 )-

피리딘-4-일]- 우레아

DMSO (15 mL) 중 4-(4-아미노-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 20, 1 g, 3.41 mmol), (5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 38, 1.38 g, 3.41 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.2 mL, 6.82 mmol)의 용액을 60℃에서 5일 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 상 분리를 돕는 염화나트륨 포화 수용액을 사용하여 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배시켰다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 물로 2회 세척하여 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 디클로로메탄 중 에틸 아세테이트로 구배 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-{4-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-피리딘-2-일옥시}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 877 mg을 수득하였다 (43％ 수율). LCMS ES+ (m/z) 549 [M+H].

1:1 EtOAc:DCM (100 mL) 중 4-{4-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-피리딘-2-일옥시}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (877 mg, 1.6 mmol)의 용액을 HCl (g)의 버블링 스트림으로 3분 동안 처리하였다. 생성된 혼합물이 30분 동안 방치되도록 한 후에 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH 중에 용해하고, 20 g 배리언 SCX 컬럼에 로딩하여 MeOH로 잘 헹구었다. 1:1 DCM:MeOH 중 2 M 암모니아를 사용하여 상기 유리 염기를 용출시켰다. 상기 용액을 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 정량적 수율로 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 449 [M+H].

제조예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
제조예 72	1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-3-[2-(피페리딘-4-일옥시)-피리딘-4-일]-우레아	447

실시예 1

1-{6-[4-(2,2-디메틸- 펜타노일 )-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-3-[5-(1- 메틸 -

시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아

디클로로메탄 (약 0.1 M, 5 mL) 중 1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 (제조예 5, 1 당량, 0.1510 g), 2,2-디메틸 펜탄산 (1.15 당량, 0.0521 g) 및 촉매량의 DMAP (약 0.1 당량, 0.049 g)의 용액 또는 슬러리를 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC 1.15 당량, 0.0767 g)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 48시간 동안 교반한 후에 중탄산나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 정제 A: 디클로로메탄 중 2 M 암모니아-메탄올의 구배, 디클로로메탄 또는 헥산 중 에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 실리카겔로 정제하였다. 정제 B: 아세토니트릴 중 수성 10 mM 중탄산암모늄의 구배를 사용하는 크테라(Xterra) 30×75 mm 5 미크론 MS C18 컬럼에서 역상으로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS (ES+): m/z = 544. [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
2	1-{6-[4-(1-메틸-시클로헥산카르보닐)-피페라진-1-일]- 피리딘-3-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-우레아	556
3	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]- 우레아	572

실시예 4

1-(5- tert -부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일 )-3-{6-[4-(2,2- 디메틸 -프로피오닐)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트

디클로로메탄 (3.5 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 (제조예 56, 157 mg, 0.35 mmol), 트리메틸아세트산 (54 mg, 0.53 mmol) 및 촉매량의 DMAP (4 mg)의 혼합물을 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDCI, 101 mg, 0.53 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후에 중탄산나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 디클로로메탄 중 2 M 암모니아-메탄올로 구배 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 유리 염기로서 수득하였다. LCMS (ES+): m/z = 532 [M+H].

디클로로메탄 (5 mL) 중 유리 아민의 용액 또는 슬러리를 디클로로메탄 중 2 M 메탄 술폰산 (1 당량, 0.155 mL)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 교반하여 질소 스트림하에 농축시키고 감압하에 건조시켜 상기 염을 수득하였다.

표

실시예	화합물	LCMS ( ES +): *m/z* [M+H]
5	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6-디플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	588
6	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{2-메틸-6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	530
7	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,5-디플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	588
8	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,4-디플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	588
9	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,3-디플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	588
10	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3,4-디플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	588
11	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3,5-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	588

실시예	화합물	LCMS ( ES +): *m/z* [M+H]
12	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6-디메틸- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	580
13	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-플루오로-6- 메톡시-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	600
14	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-클로로-6- 플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	604
15	1-[6-(4-벤조일-피페라진-1-일)-2-메틸-피리딘-3-일]-3-(5-tert- 부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레아 메탄술포네이트	552
16	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	570
17	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-메틸- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	566
18	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-시아노- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	577
19	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-메톡시- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	582
20	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-클로로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	586
21	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2- 트리플루오로메틸-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	620
22	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	570
23	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-메틸-벤조일)- 피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	566
24	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-시아노- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	577
25	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-메톡시- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	582
26	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-클로로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	586
27	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3- 트리플루오로메틸-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	620
28	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(4-플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	570
29	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(4-메틸-벤조일)- 피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	566
30	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(4-메톡시- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	582
31	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{2-메틸-6-[4- (티오펜-3-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	558

실시예	화합물	LCMS ( ES +): *m/z* [M+H]
32	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{2-메틸-6-[4- (티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	558
33	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{2-메틸-6-[4-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	572
34	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{2-메틸-6-[4- (피리딘-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트	553
35	1-{6-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]- 우레아 메탄술포네이트	568
36	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메탄술포네이트	586
37	1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-{2- 메틸-6-[4-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	570
38	1-{6-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메탄술포네이트	530
39	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메탄술포네이트	586
40	1-{6-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메탄술포네이트	568
41	1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-{5- 메틸-6-[4-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘- 3-일}-우레아 메탄술포네이트	528
42	1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-{5- 메틸-6-[4-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘- 3-일}-우레아 메탄술포네이트	570
43	1-{6-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로헥실)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일] -우레아 메탄술포네이트	572
44	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3- 일}-3-[5-(1-메틸-시클로헥실)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]- 우레아 메탄술포네이트	628
45	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6-디클로로- 벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트 (반응 시간 = 5일, DMAP 대신 HOBt (0.59 mmol))	620

실시예 46

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{6-[4-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-

피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아

1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 (48 mg, 0.111 mmol), 2,6-디플루오로벤조산 (21 mg, 0.133 mmol) 및 4-N,N-디메틸아미노피리딘 (3 mg, 0.022 mmol)을 아세토니트릴 (5 mL) 중에 넣었다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸루로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) (50 mg, 0.133 mmol)를 첨가하고, 19시간 동안 70℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시켜 CH₂Cl₂ 및 물을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성물을 CH₂Cl₂ (2×25 mL)로 추출하였다. 유기물을 합하여 Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 0→60％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS (ES): m/z = 574.2 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
47	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6- 디클로로-벤조일)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	608
48	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(4- 시클로프로판카르보닐-피페라진-1-일)-피리딘-3-일]-우레아	502.2
49	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	558.3

실시예 50

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{6-[4-(2,2-디메틸- 프로피오닐 )-

피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아

1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 (200 mg, 0.461 mmol), 트리에틸아민 (0.071 mL, 0.507 mmol) 및 4-N,N-디메틸아미노피리딘 (6 mg, 0.051 mmol)을 CH₂Cl₂ (10 mL) 중에 넣었다. 2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (0.062 mL, 0.507 mmol)를 첨가하고, 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 잔류물로 0→100％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물 175 mg을 수득하였다 (73％). MS (ES+): m/z = 518.2 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
51	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2- 디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3-일}-우레아	532.3
52	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5- 클로로-6-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-피리딘- 3-일}-우레아	552.2

실시예 53

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{6-[4-(3- 메틸 - 펜타노일 )-

피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아

1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 (0.20 g, 0.46 mmol)를 혼합물 CH₂Cl₂/DMF (18/1 mL) 중에 현탁된 3-메틸-펜탄산 (0.059 g, 0.51 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (0.06 g, 0.46 mmol) 및 중합체 지지된 카르보디이미드 (0.83 g, 1.0 mmol)와 반응시켰다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후에 여과하고, 수지를 CH₂Cl₂로 세척하였다. 농축시키고, 잔류물을 2 N NH₄OH/CH₃OH로 용출시키는 SCX 카트리지로 정제하여 표제 화합물 135 mg (55％)을 옅은 분홍색 고체로서 수득하였다. MS (ES+): m/z = 532 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
54	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-시클로펜틸- 아세틸)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	544
55	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2,3,3- 테트라메틸-시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	558
56	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	516
57	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(4-시클로부탄카르보닐- 피페라진-1-일)-피리딘-3-일]-우레아	516
58	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(1-메틸- 시클로헥산카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	558
59	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2-디메틸- 펜타노일)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	546
60	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	516

실시예 61

피페라진-1-일]-5- 메틸 -피리딘-3-일}- 우레아

1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(5-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 (300 mg, 0.670 mmol), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보 디이미드 히드로클로라이드 (154 mg, 0.804 mmol), 2,6-디플루오로벤조산 (127 mg, 0.804 mmol) 및 4-N,N-디메틸아미노피리딘 (15 mg, 0.134 mmol)을 아세토니트릴 (10 mL) 중에 넣었다. 반응물을 18시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시켜 CH₂Cl₂ 및 물을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 CH₂Cl₂ (2×20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하여 Mg₂SO₄상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 10％→70％ EtOAc:헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 수득하였다. MS (ES+): m/z = 588.3 [M+H].

상기한 것과 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 하기 화합물을 제조하였다.

표

실시예	명칭	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
62	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(4- 시클로프로판카르보닐-피페라진-1-일)-5-메틸-피리딘-3-일]-우레아	516.3
63	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-메틸-6-[4-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	572.3
64	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-클로로-6-[4-(2,6- 디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	608.0
65	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[5-클로로-6-(4- 시클로프로판카르보닐-피페라진-1-일)-피리딘-3-일]-우레아	536.2
66	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-클로로-6-[4-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	592.0
67	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-3-(2-p- 톨릴-5-트리메틸실라닐-2H-피라졸-3-일)-우레아	590.2

실시예 68

피페라진-1-일]-2- 메틸 -피리딘-3-일}- 우레아 모노메탄술포네이트

오버헤드 교반기가 장착된 2개의 5 L 3구 플라스크에 [4-(5-아미노-6-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-(2,6-디플루오로-페닐)-메타논 (1.00 당량, 601.77 mmol, 200.00 g), 5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (1.00 당량, 602.88 mmol, 244.00 g), N,N-디메틸아미노피리딘 (60.47 mmol, 7.50 g), 디이소프로필에틸아민 (229.36 mmol, 40.00 mL, 29.64 g), DMSO (1.00 L)를 첨가하였다. 서서히 가열하고, 60℃ 내지 65℃에서 유지시켰다. DMSO (250 mL)를 첨가하고, 약 65℃에서 1시간 동안 계속 교반하였다. MTBE를 첨가한 후에 약 60℃에서 0.5시간 동안 유지시켰다. 실온으로 냉각시켰다. 여과하여 고체를 수집하고 합하였다. 상기 케이크를 MTBE로 헹구고, 감압하에 밤새 건조되도록 하였다. 상기 물질을 메탄올 9 L 중에 용해한 후에 환류하에 1시간 동안 활성탄 (65 g)으로 처리하였다. 상기 혼합물을 셀라이트^®를 통해 여과하였다. 여액을 농축시킨 후에 에틸 아세테이트로의 용매 교환을 실시하였다. 여과하여 에틸 아세테이트, 헵탄으로 헹구고 40℃에서 감압하에 건조시켜 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리 딘-3-일}-우레아를 수득하였다 (490 g).

5 L 플라스크에 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 (1.00 당량, 600.67 mmol, 353.00 g) 및 메탄올 (3.50 L)을 충전하였다. 상기 혼합물을 50℃ 내지 60℃로 가열하였다. 에틸 아세테이트 250 mL 중 메탄술폰산 (1.00 당량, 603.49 mmol, 39.56 mL, 58.00 g)을 적가하였다. 상기 용액을 0.5 시간 동안 약 50℃에서 교반한 후에 가열기를 치웠다. 5시간 동안 교반한 후에 여과하였다. 여액을 감압하에 농축시켰다. 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하고 감압하에 농축시켰다. 에틸 아세테이트를 300 mL 더 첨가하고 감압하에 농축시켰다. 디에틸 에테르 2 L를 첨가한 후에 15분 동안 교반하였다. 밤새 방치되도록 하였다. 3시간 동안 교반한 후에 여과하였다. 디에틸 에테르 및 헵탄으로 헹군 후에 감압하에 약 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다 (391.4 g).

실시예 69

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-[6-((트랜스)-4-

시클로프로판카르보닐 -2,5-디메틸-피페라진-1-일)-5- 메틸 -피리딘-3-일]- 우레아

화합물인 rac-[(트랜스)-4-(5-아미노-3-메틸-피리딘-2-일)-2,5-디메틸-피페 라진-1-일]-시클로프로필-메타논 (제조예 9, 0.1 g, 0.35 mmol) 및 5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (0.283 g, 0.7 mmol)를 DMSO (3 mL) 및 DIEA (0.12 mL, 0.7 mmol) 중에 용해하였다. 밀폐된 튜브 중에 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 냉각되도록 하여 빙수에 부었다. AcOEt로 여러회 추출하였다. 유기물을 합하여 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하고, Na₂SO₄상에서 건조시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산 중 AcOEt 50％→90％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 rac-1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-((트랜스)-4-시클로프로판카르보닐-2,5-디메틸-피페라진-1-일)-5-메틸-피리딘-3-일]-우레아 (47％ 수율) 0.09 g을 고체로서 수득하였다. MS (ES+): m/z = 544.5 [M+H].

조 물질로 헥산-DMEA 0.2％:EtOH 25％로 용출시키는 컬럼 키라파크 에이에스(Chirapack AS)를 사용한 키랄 크로마토그래피 분리를 실시하였다. t = 3.78분. MS (ES+): m/z = 544.5 [M+H].

실시예 70

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{6-[4-(2,2-디메틸- 프로피오닐 )

피페라진-1-일]-4- 메틸 -피리딘-3-일}- 우레아

(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산, 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 38, 0.32 mmol, 0.1 r)를 아세토니트릴 (3 mL) 중 1-[4-(5-아미노-4-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온 (0.3 mmol, 0.08 g) 및 탄산칼륨 (0.3 mmol, 0.05 g)의 용액에 첨가하고, 상기 용액을 4시간 동안 80℃에서 교반하였다. 물을 첨가하고 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (20％→80％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES+): m/z = 532 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES ): *m/z* [M+H]
71	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{4- 메틸-6-[4-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]- 피리딘-3-일}-우레아	530
72	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{4- 클로로-6-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]- 피리딘-3-일}-우레아	552
73	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2- 디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-5-트리플루오로메틸- 피리딘-3-일}-우레아	586.4

실시예 74

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{5- 클로로 -6-[4-(1- 메틸 -

시클로프로판카르보닐 )-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아

CH₂Cl₂ 5 mL 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-(5-클로로-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 히드로클로라이드 (1.6 mmol, 0.7 g)의 용액에 1-메틸-시클로프로판카르복실산 (1.6 mmol, 0.2 g), 1-히드록시-1H-벤조트리아졸 수화물 (1.8 mmol, 0.2 g), N-에틸-N'-(3-도메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드 (1.8 mmol, 0.3 g) 및 트리에틸아민 (4.8 mmol, 0.7 mL)을 첨가하였다. 상기 용액을 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 물을 첨가하고 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 합하여 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (20％→80％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES+): m/z = 550 [M+H].

표

실시예	명칭	LCMS ES+ (m/z) [M+H]
75	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-메틸-6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	530

실시예 76

피페리딘-4- 일아미노 ]-피리딘-3-일}- 우레아

11-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(피페리딘-4-일아미노)-피 리딘-3-일]-우레아 (0.22 mmol, 0.1 g), 2,6-디플루오로-벤조일 클로라이드 (0.2 mmol, 0.03 mL) 및 트리에틸아민 (0.2 mmol, 0.03 mL)을 아세토니트릴 3 mL 중에서 밤새 실온에서 교반하였다. CH₂Cl₂를 첨가하고, 포화 수성 염화나트륨 및 물로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 CH₂Cl₂:MeOH로 구배 (0.5％→10％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES+): m/z = 588 [M+H].

실시예 77

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{2- 메틸 -6-[1-(1- 메틸 -

시클로프로판카르보닐 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-피리딘-3-일}- 우레아

디클로로메탄 (2 mL) 중 4-{5-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-6-메틸-피리딘-2-일옥시}-피페리딘 (93 mg, 0.2 mmol), 1-메틸 시클로프로필 1-카르복실산 (40 mg, 0.4 mmol), HOBt (30 mg, 0.25 mmol) 및 DCC (80 mg, 0.4 mmol)의 반응 혼합물을 22℃에서 18시간 동안 교반하였다. 여과한 후에 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 백색 고체를 수득하였다 (111 mg, 100％ 수율). MS (ES+): m/z = 545.3 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
78	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2-플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아	585.3
79	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,6-디플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아	603.3
80	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,4-디플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아	603.3
81	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3-{2- 메틸-6-[4-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘- 3-일}-우레아	573.3
82	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3-{6- [4-(2-클로로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아	587.3
83	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3-{6- [4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아	571.2
84	1-{2-메틸-6-[4-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]- 피리딘-3-일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아	625.3
85	1-{6-[4-(2-클로로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아	639.3
86	1-{6-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아	623.3
87	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아	641.3
88	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2-플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}-우레아	571.3

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
89	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,6-디플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}-우레아	589.3
90	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,4-디플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}-우레아	589.3
91	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}-우레아	573.3
92	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(5-클로로- 티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}-우레아	593.0
93	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(1-시클로프로판 카르보닐-피페리딘-4-일옥시)-5-메틸-피리딘-3-일]-우레아	531.2
94	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,4-디플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-5-메틸-피리딘-3-일}-우레아	603.3
95	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-메틸-6-[1-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}-우레아	587.3
96	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(5-클로로- 티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-5-메틸-피리딘-3-일}-우레아	607.0
97	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,5-디클로로- 티오펜-3-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-5-메틸-피리딘-3-일}-우레아	641.0
98	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,4-디플루오로- 벤조일)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	574.0

실시예 99

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{5- 클로로 -6-[1-(2- 플루오로 - 벤조일 )-

피페리딘-4- 일옥시 ]-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트

상기 절차와 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 상기 유리 염기를 제조하였다. 디클로로메탄 (1 mL) 및 MeOH (5 mL) 중 유리 아민의 용액 또는 슬러리를 메탄 술폰산 (1 당량, 17.66 mg 0.183 mL)으로 처리하여 메실레이트 염으로 전환시켰다. 생성된 혼합물을 교반하여 농축시키고 감압하에 건조시켜 상기 염을 수득하였 다. MS (ES+): m/z = 605.0 [M+H] (유리 염기).

상기한 것과 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 하기하는 메실레이트 염을 제조하였다:

표

실시예	명칭	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
100	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-클로로-6-[1-(3- 메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트	607.0
101	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[5-클로로-6-(1- 시클로프로판카르보닐-피페리딘-4-일옥시)-피리딘-3-일]-우레아 메실레이트	551.2
102	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-(5-펜타플루오로에틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레아 메실레이트	650.0
103	1-{6-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]- 우레아 메실레이트	622.2
104	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]- 우레아 메실레이트	640.0
105	1-{6-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-5-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-p-톨릴-5-(2,2,2-트리플루오로-1-메틸-1-트리플루오로메틸- 에틸)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트	693.0
106	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3-{6-[4-(2,6- 디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트	589.3
107	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	585.3
108	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,6-디플루오로- 벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	603.3
109	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[1-(2,4-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	603.3
110	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3-{2- 메틸-6-[4-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트	573.3
111	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3-{6-[4-(2- 클로로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	587.3

실시예	명칭	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
112	1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3- 일]-3-{6-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘- 3-일}-우레아 메실레이트	571.2
113	1-{2-메틸-6-[4-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페라진-1-일]- 피리딘-3-일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트	625.3
114	1-{6-[4-(2-클로로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트	639.3
115	1-{6-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트	623.3
116	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3- 일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트	641.3

실시예 117

1-{6-[1-(2- 플루오로 - 벤조일 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-5- 메틸 -피리딘-3-일}-3-

[2-p- 톨릴 -5-(2,2,2- 트리플루오로 -1- 메틸 -1- 트리플루오로메틸 -에틸)-

2H- 피라졸 -3-일]- 우레아

DMSO (3 mL) 중 [2-p-톨릴-5-(2,2,2-트리플루오로-1-메틸-1-트리플루오로메틸-에틸)-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 37, 95 mg, 0.185 mmol) 및 [4-(5-아미노-3-메틸-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-일]-(2-플루오로-페닐)-메타논 (제조예 19, 61 mg, 0.185 mmol)의 용액을 통해 질소 기체 를 5분 동안 버블링하였다. 다음으로, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.08 mL, 0.463 mmol)을 첨가하였다. 70℃에서 밤새 교반한 후에 CH₂Cl₂ (75 mL)에 붓고 10 g SCX 메가본드(MegaBond) 용출 컬럼에서 세척하였다. 컬럼을 CH₂Cl₂ (3×35 mL), MeOH (2×50 mL) 및 MeOH 중 2 M NH₃ (3×50 mL)으로 세척하였다. 원하는 분획물을 합하고 농축시켰다. 잔류물로 CH₂Cl₂ 및 10％ MeOH + 90％ CH₂Cl₂ 용액으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (69 mg, 54％ 수율). MS (ES+): m/z = 693.5 [M+H].

실시예 118

1-{6-[4-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-피페라진-1-일]-2- 메틸 -피리딘-3-일}-3-[5-

(2- 플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아

CH₂Cl₂ 5 mL 중 1-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-(2-메틸-6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-우레아 히드로클로라이드 (0.85 mmol, 0.5 g), 2,6-디플루오로벤조일 클로라이드 (0.85 mmol, 0.1 mL) 및 트리에틸아민 (2.6 mmol, 0.4 mL)을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, CH₂Cl₂ 중에 추출하였다. 유기 층을 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 무수 황산나트륨상에서 건조시켜 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트 (20％→70％)를 사용하여 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. MS (ES): m/z = 624 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): m/z [M+H]
119	1-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴- 2H-피라졸-3-일]-3-{2-메틸-6-[4-(2-메틸-벤조일)- 피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아	602
120	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸- 피리딘-3-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2- p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아	606

실시예 121

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{6-[4-(2- 시클로펜틸 -아세틸)-

피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메탄술포네이트

CH₂Cl₂/MeOH (95/5) 중 1 N 메탄술폰산 용액 0.10 mL를 CH₂Cl₂/MeOH (95/5) 2 mL 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2-시클로펜틸-아세틸)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아의 교반된 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 후에 N₂ 세정으로 용매를 증발시켰다. 상기 염을 Et₂O로 연화처리하여 여과하고 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다. MS (ES+): m/z = 544 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
122	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[6-(4- 시클로부탄카르보닐-피페라진-1-일)-피리딘-3-일]- 우레아 메탄술포네이트	516
123	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(3-메틸-펜타노일)- 피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	532
124	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(1-메틸-시클로헥산 카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아 메탄술포네이트	558
125	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2-디메틸- 펜타노일)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	546
126	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2-디메틸- 프로피오닐)-피페라진-1-일]-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트	586
127	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,2-디메틸- 프로피오닐)피페라진-1-일]-4-메틸-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	532
128	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{4-메틸-6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트	530
129	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{4-클로로-6-[4-(2,2- 디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트 염	552
130	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-클로로-6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}- 우레아 메실레이트	550
131	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-메틸-6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	530
132	1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{5-메틸-6-[4-(1-메틸- 시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]-피리딘-3-일}-우레아 메실레이트	624
133	1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일} -3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아	606

실시예 134

1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{2-[1-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-

피페리딘-4- 일옥시 ]-피리딘-4-일}- 우레아 메탄술포네이트

디클로로메탄 (4 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[2-(피페리딘-4-일옥시)-피리딘-4-일]-우레아 (제조예 71, 179 mg, 400 mmol), 2,6-디플루오로벤조산 (76 mg, 0.48 mmol) 및 촉매량의 DMAP (5 mg)의 용액을 EDCI (92 mg, 0.48 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 밤새 주변 온도에서 교반한 후에 중탄산나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시키고 질소 스트림하에 농축시켰다. 잔류물을 수 mL의 DCM으로 처리하였다. 초음파처리 후에 백색 고체를 여과하고 감압하에 건조시켜 표제 화합물 162 mg을 유리 염기로서 수득하였다 (69％ 수율).

3:2 DCM:MeOH (5 mL) 중 유리 아민의 현탁액을 디클로로메탄 (1 당량, 0.138 mL) 중 2 M 메탄 술폰산으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 용액이 투명해질 때까지 교반한 후에 질소 스트림하에 농축시키고, 감압하에 건조시켜 표제 염을 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 589 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
135	1-{2-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 피리딘-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-우레아 메탄술포네이트	587

실시예 136

1-{2-[1-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-피리딘-4-일}-3-[5-(2-

플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아

DMSO 4 mL 중 [4-(4-아미노-피리딘-2-일옥시)-피페리딘-1-일]-(2,6-디플루오로-페닐)-메타논 (265 mg, 0.80 mmol), 5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (350 mg, 0.80 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (700 mL)의 용액을 60℃에서 16시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도로 냉각시키고 물을 첨가하였다. 침전물을 여과하여 물로 헹군 후에 펜탄으로 헹구고, 60℃의 진공 오븐에서 건조시켰다. 잔류물로 디클로로메탄 중 2 M 암모니아-메탄올로 구배 (0→2％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 생성물 85 mg을 수득하였다.

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
137	1-{2-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 피리딘-4-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)- 2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아	607
138	1-{2-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 피리딘-4-일}-3-[5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)- 2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아	605

실시예 139

플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-

우레아 메실레이트

DCM/MeOH (95:5) 중 새로 제조한 1 M MeSO₃H 용액 0.114 mL (0.114 mmol)를 95:5 DCM/MeOH 혼합물 2 mL 중 1-{2-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-피리딘-4-일}-3-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 71 mg (0.114 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 20분 동안 실온에서 교반한 후에 용매를 N₂ 스트림하에 증발시켰다. 잔류물을 Et₂O로 연화처리하여 표제 화합물을 수득하였다 (76 mg, 93％ 수율) (100％ 순도). ES+ (m/z) = 625 [M+H].

표

실시예	화합물	MS ( ES +): *m/z* [M+H]
140	1-{2-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 피리딘-4-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)- 2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트	607

실시예 141

1-{6-[4-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-피페라진-1-일]-5- 메틸 -피리딘-3-일}-3-[5-(2-

플루오로 -1,1-디메틸-에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아 메탄술포네이트

아세토니트릴 (12 mL) 중 [4-(5-아미노-3-메틸-피리딘-2-일)-피페라진-1-일]-(2,6-디플루오로-페닐)-메타논 (400 mg, 1.205 mmol) 및 [5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (1 당량)의 용액에 DIEA (2 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 밀폐된 튜브 중에서 80℃에서 교반하였다. 4일 후에 용매를 제거하였다. 조 물질을 DCM으로 희석하여 물로 추출하고, Na₂SO₄상에서 건조시켰다. 여과하고 용매를 감압하에 제거하였다. 고체로 헥산/아세톤 3:1로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 352 mg을 백색 고체로서 수득하였다 (48％ 수율). ES+ (m/z):606 [M+1].

유리 염기 1-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-5-메틸-피리딘-3-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 50 mg (0.083 mmol)을 DCM (0.5 mL) 중에 용해하였다. DCM (1 N) 중 트리플루오로메탄술폰산 1 당량을 첨가하였다. 30분 후에, 용매를 제거하여 백색 고체를 수득하였다. 에테르/DCM으로 여러회 세척한 후에 고체를 감압하에 건조시켜 표제 화합물 55 mg을 수득하였다 (95％ 수율). ES+ (m/z):606 [M+1].

p38 키나제의 억제

표준 용액 제조

1 M Tris-HCl (pH 7.5) 2.5 mL, 1 M 디티오트레이톨 0.1 mL, 1 M 염화마그네슘 1.0 mL 및 1％ Triton X-100 300 ㎕를 합하고 물을 사용하여 100 mL로 희석하여 키나제 완충액을 제조하였다. 상기 키나제 완충액 84 mL를 DMSO 16 mL와 합하여 16％ DMSO 용액을 제조하였다.

10 mM 수성 ATP 102.6 ㎕, ³³P-ATP 25 ㎕ 및 4 mM 수성 표피 성장 인자 펩티드 661-681 (바이오몰(Biomol), 카탈로그 번호 P-121) 163.5 ㎕를 키나제 완충액 5 mL 중에 첨가하여 200 μM ATP 용액을 제조하였다.

농축 효소 용액 (250 ng p38 효소/㎕ 키나제 완충액) 9.5 ㎕를 키나제 완충액 1536 ㎕ 중에 용해시켜 p38 키나제 효소 용액을 제조하였다.

샘플 제조

코스타(Costar) 96웰 미량역가 플레이트에서 디메틸술폭시드 중 각 시험 화합물 및 대조군 화합물의 10 mM 스톡(stock) 용액 2 ㎕를 상기 16％ DMSO 용액 248 ㎕ 중에 용해시켜 이들 각 화합물의 80 μM 용액을 제조하였다. 상기 플레이트를 테칸 제네시스(Tecan Genesis) 자동화 액체 핸들러(handler)에 넣어 1:3 계열 희석을 행하였다.

검정

벡크만(Beckman) 멀티메크(Multimek) 96웰 자동화 액체 핸들러를 사용하여 계열 희석된 화합물 10 ㎕를 검정 플레이트에 넣었다. 타이터테크(Titertek) 멀티드랍(Multidrop) 8-채널 액체 핸들러를 사용하여 200 μM ATP 용액 20 ㎕를 첨가하였다. p38 키나제 효소 용액 10 ㎕를 상기 멀티메크를 사용하여 검정 플레이트로 옮겼다. 상기 혼합물을 40분 동안 30℃에서 반응하도록 한 후에 새로 제조한 5％ 빙초산 60 ㎕를 멀티드랍으로 첨가하여 반응을 정지시켰다. 상기 용액 80 ㎕를 멀티메크로 "MAPH" 플레이트에 옮겼다. 상기 플레이트를 30분 동안 실온에 두었다가 새로 제조한 0.5％ 빙초산 (1×300 ㎕, 2×200 ㎕)을 사용하여 타이터테크 MAP 추출기에서 세척/흡인하였다. 상기 플레이트를 블럿팅하고 멀티드랍을 사용하여 마이크로신트(MicroScint)-20 섬광액 (패커드 바이오사이언스(Packard Bioscience)) 100 ㎕를 첨가하였다. 플레이트가 30분 동안 방치되도록 하고 PE/Wallac 마이크로베타 트릴룩스(Microbeta Trilux) 섬광 계수기에서 ³³P-동위원소에 대하여 계수하였다.

실시예 5에 예시된 화합물을 처음에는 10가지 농도 (20 μM 내지 1 nM, 1:3 계열 희석 사용)에서 시험하였다. IC₅₀ 값이 25 nM 미만인 화합물은 2 μM의 출발 농도 내지 0.1 nM (1:3 계열 희석)에서 다시 시험하였다. 각 화합물에 대한 IC₅₀ 값을 비-선형 회귀법으로 계산하였다 (IDBS 액티비티베이스(ActivityBase) 소프트웨어). 실시예 5를 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것이 p38 키나제 효소를 22 nM의 IC₅₀으로 억제함이 밝혀졌다.

p- MAPKAPK2 의 시험관내 억제

RAW 264.7 세포 (뮤린(murine) 단핵/대식세포주 ATCC)를 RPMI-1640 배지 및 10％ 소 태아 혈청 (FBS)을 함유하는 96웰 플레이트에 50,000개 세포/웰의 밀도로 접종하고, 48시간 동안 상기 세포가 가라앉아 웰의 바닥에 부착되도록 하였다. 전면성장에 도달한 후, 세포에 여러가지 화합물의 10가지 계열 희석물을 2시간 동안 처리하였다. 대조군 화합물은 언제나 포함시켰다. 2시간 후, 아니소마이신 (100 ㎍/mL)을 첨가하고, 세포를 30분 동안 37℃에서 5％ CO₂ 대기하에 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 고정시키고 과산화수소로 처리하여 내인성 퍼옥시다제를 제거하였다. 마지막으로, 플레이트를 FBS로 블러킹하여 세척하고, 항-포스포-MAPKAPK2 (Thr334, 셀 시그날링(Cell Signaling), 카탈로그 번호 3041) 항체 및 ahP-접합된 2차 항체를 사용하여 ELISA 검정을 수행하였다. 상기 반응은, 신속한 역학적 광 출력 및 높은 신호 강도를 생성하는 고감도 화학발광 기질 ahP인 FEMTO (피어스(Pierce))로 검출하였다.

예시된 화합물들을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것들이 300 nM 이하의 IC₅₀ 값을 갖는 것이 밝혀졌다. 실시예 111, 실시예 113, 실시예 114, 실시예 115, 실시예 119에서 제조한 화합물들을 본질적으로 상기한 바와 같이 100％ 혈청의 존재하에 시험하였고, 이것들이 500 nM 이하의 IC₅₀ 값을 갖는 것이 밝혀졌다. 하기하는 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것이 하기 하는 활성을 갖는 것이 밝혀졌다:

실시예	IC ₅₀ ( nM )
45	6.7
5	4.5
92	16
77	176
128	286

TNF α의 시험관내 억제

마우스 복막 대식세포

티오글리콜레이트 브로쓰 1 mL (증류수 1.0 L 중 효모 추출물 5.0 g , 카시톤 또는 트립티카제 15.0 g, 덱스트로스 5.0 g, 염화나트륨 2.5 g, L-시스틴 0.75 g, 나트륨 티오글리콜레이트 0.5 g, 레스아주린 1.0 mg 및 한천 0.75 g)를 Balb/C 암컷 마우스의 복강에 주사하였다. 주사후 제4일 또는 제5일에 상기 마우스를 희생시킨 다음, RPMI-1640 배지 (바이오위택커(BioWhittaker)) 4 mL를 i.p. 주사하고 복막 대식세포를 시린지로 빼내었다.

사이토킨 생성

마우스 복막 대식세포를 혈구계로 계수하고, 96웰 플레이트에서 10％ 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI-1640 배지 중에 5×10⁵개 세포/웰이 되도록 조정하였다. 96웰 플레이트에 200 ㎕/웰을 플레이팅하고, 3시간 이상 동안 상기 세포가 가라앉아 웰의 바닥에 부착되도록 하였다. 시험 화합물 또는 표준 p38 키나제 억제제를 일련의 8가지 농도로 1시간 동안 37℃에서 사전 처리하였다 (20 ㎕/웰). 상기 세포에 50 ng/mL 지다당류 (LPS) 및 10 U/mL 인터페론-γ의 혼합물을 18시간 동안 37 ℃에서 처리하였다 (20 ㎕/웰). 상기 조건화 배지를 수거하고, 루미넥스(Luminex) 검출 절차를 이용하여 TNFα 생성에 대하여 검정하였다.

TNF α/ 루미넥스 검출 검정

(바이오- 라드 ( Bio - Rad ) 바이오- 플렉스 ( Bio - Plex ) 키트

- 카탈로그 번호 171- G12221 )

동결건조시켜 사전 혼합된 TNFα 표준물 (1개의 표준 튜브/2개의 96웰 플레이트)을 멸균수 50 ㎕로 재구성하였다 (500,000 pg/mL). 샘플을 5초 동안 볼텍싱하여 빙상에서 30분 동안 인큐베이션하고, 사용 전에 5초 동안 볼텍싱하였다. 12개의 1.5 mL 튜브 세트에 #1에서 #12까지로 표시하고, 하기에 표시한 세포 배지의 양을 적절한 튜브에 첨가하였다 (표준 농도는 다음과 같았다: 50,000, 25,000, 12,500, 6,250, 3,125, 1,562.5, 781.3, 390.6, 195.3, 97.7, 48.8 및 24.4 pg/mL). 사전 혼합된 항-사이토킨 접합된 비드를 30초 동안 격렬하게 볼텍싱 (25×)하였다. 항-사이토킨 접합된 비드를 1× 바이오-플렉스 검정 완충제를 사용하여 1× 농도로 희석하였다. 매 플레이트마다 사전 혼합된 비드 240 ㎕를 바이오-플렉스 검정 완충제 5760 ㎕에 첨가하였다. 밀리포어(Millipore) 96웰 필터 플레이트를 블러킹 완충제 100 ㎕/웰로 블러킹하였다. 블러킹 완충제를 밀리포어 여과 시스템을 사용하여 여과한 후에 타월로 건조시켰다. 필터 플레이트에서 바이오-플렉스 검정 완충제 100 ㎕/웰로 2회 세척을 행하고 타월로 건조시켰다. 1× 항-사이토킨 접합된 비드를 15초 동안 볼텍싱하고 각 웰에 50 ㎕씩 첨가하였다. 이것을 여과하고 타월로 건조시켰다. 플레이트에서 바이오-플렉스 세척 완충제 100 ㎕/웰 로 2회 세척을 행하였다. 다시, 이것을 여과하고 타월로 건조시켰다. 각 샘플 웰에 샘플 또는 표준물 50 ㎕씩을 첨가하였다. 이것을 빛이 차단된 진탕기에서 60초 동안 6으로 설정하여 실온에서 인큐베이션한 후에 3으로 설정하여 30분 동안 인큐베이션하고, 이후에는 냉장고에 밤새 넣어 두었다. 바이오-플렉스 세척 완충제로 3회 세척을 행하였다. 여과하여 타월로 건조시켰다. 매 플레이트마다 사이토킨 검출 항체를 제조 (사용 전 약 10분)하고, 사전 혼합된 사이토킨 검출 항체 스톡 60 ㎕를 바이오-플렉스 검출 항체 희석제 5940 ㎕에 첨가하였다.

사이토킨 검출 항체 50 ㎕를 첨가하고, 이것을 빛이 차단된 진탕기에서 60초 동안 6으로 설정하여 실온에서 인큐베이션한 후에 3으로 설정하여 30분 동안 인큐베이션하였다. 바이오-플렉스 세척 완충제로 3회 세척을 행하였다. 여과하여 타월로 건조시켰다. 매 플레이트마다 스트렙트-PE(Strept-PE)를 제조 (사용 전 약 10분)하고, 바이오-플렉스 검정 완충제 5940 ㎕에 60 ㎕를 첨가하였다. 각 웰에 스트렙타비딘-PE 50 ㎕씩을 첨가하고, 이것을 빛이 차단된 진탕기에서 60초 동안 6으로 설정하여 실온에서 인큐베이션한 후에 3으로 설정하여 10분 동안 인큐베이션하였다. 바이오-플렉스 세척 완충제로 3회 세척을 행하였다. 이것을 여과하였다. 비드를 바이오-플렉스 검정 완충제 100 ㎕/웰 중에 재현탁하였다. 표준물 및 샘플을 루미넥스 기기에서 판독하였다. 이어서, 4-파라미터 로지스트 회귀 방법 (바이오-플렉스 매니저 2.0, 바이오-라드)을 이용하여 2벌로 생성된 12-점 표준 곡선을 기초로 하여 상기 강도 판독치를 pg/mL 단위로 전환시키고 IC₅₀을 계산하였다.

실시예 5에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것은 TNFα를 18 nM의 IC₅₀으로 시험관내 저해하였다.

TNF α의 생체내 억제

화합물을 암컷 Balb/c 마우스 (투여량 당 6 마리 마우스)에게 p.o. 투여하였다 (30, 10, 3 및 1 mg/kg). 4가지 투여량으로 화합물을 투여하고 1시간이 지난 후에 (P.O., 부피: 마우스 1 마리 당 0.1 mL, 비히클: 물 중 1％ NaCMC/0.25％ Tween-80), 마우스에게 LPS를 400 ㎍/kg로 IP-주사하였다. LPS 시험투여(challenge) 후 1.5시간이 지난 후에 마우스를 이소플루란으로 마취시키고, 심장 천자로 채혈하였다. 혈장 중 TNFα-수준을 알앤디 시스템즈(R＆D Systems)의 ELISA 키트로 측정하였고, 투여량-반응 ED₅₀을 결정하였다.

실시예 5에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것은 TNFα를 2.24 mg/kg의 TMED₅₀으로 생체내 저해하였다. 역치 최소 유효 투여량 (Threshold Minimum Effective Dose, TMED) 50은, 50％ 이상의 억제가 달성되고 통계적으로 대조군/위약과는 상이한 투여량이다.

경구 노출

화합물을 수컷 피셔(Fischer) 344 래트에서의 경구 노출에 대하여 스크리닝하였다. 동물들을 밤새 굶기고, Tween 80 (0.25％ v/v) 및 소포제 (0.1％ w/v)를 함유하는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 중의 현탁액 (1％ w/v)으로 제조한 시험 화합물을 투여하였다. 투여용 현탁액은 1 mg/mL로 제조되었고, 1 mL/kg로 가바즈 투 여되었다. 상기 투여량 투여 후 0.5시간 내지 7시간 사이에 혈액 샘플을 취하고, 원심분리로 혈장을 준비하였다. 혈장 샘플을 온라인 고상 추출 및 LC/MS/MS로 분석하였다.

실시예 5에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, Cmax는 9390 ng/mL이었고 AUC(0 내지 7시간)은 36800 ng.h/mL이었다.

관절내 LPS 유도된 TNF α에 대한 효과

래트 발목에 LPS를 관절내 주사하여 TNFα 합성을 유도하였고, 이것은 활막 세정액 중에서 측정할 수 있다. 높은 수준의 TNFα가 2시간 이내에 검출가능하였다. 관절은 관절염이 발병하는 부위이기 때문에, 이 모델은 경구 투여된 화합물이 활막에서의 염증 반응에 효과가 있는지 여부를 신속하게 결정할 수 있다.

6마리의 암컷 루이스(Lewis) 래트 (150 g 내지 200 g)를 각 처치군으로 분류하였다. 상기 동물에게 비히클 (1％ Na카르복시메틸셀룰로스-0.25％ Tween 80) 또는 시험 화합물 (1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg 및 30 mg/kg)을 경구 투여하였다. 1시간 후, LPS 10 ㎕ (10 ㎍)를 각 래트의 오른쪽 발목에 관절내 투여하였고, 왼쪽 발목에는 염수 10 ㎕를 투여하였다. 2시간 후, 각 발목을 염수 100 ㎕로 세정하였다. 세정액을 수집하여 -80℃에서 보관하였다.

- 제1군: 비히클 (1％ NaCMC-0.25％ Tween 80, 1 mL, PO)

- 제2군: 시험 화합물 (1 mg/kg, 1 mL, PO)

- 제3군: 시험 화합물 (3 mg/kg, 1 mL, PO)

- 제4군: 시험 화합물 (10 mg/kg, 1 mL, PO)

- 제5군: 시험 화합물 (30 mg/kg, 1 mL, PO)

TNFα는 시판되는 ELISA 키트 (알앤디, RTA00)로 측정하였다. 실시예 5에 예시된 화합물로 처치하면 활막 세정액 중에서 측정한 바와 같이 TNFα 합성의 투여량-반응 억제가 나타났고, TMED₅₀ = 3.57 mg/kg이었다.

유동세포계측법에 의한, 아니소마이신 -자극된 마우스의

생체외 포스포 - MAPKAPK2 억제 검정

8 내지 10주령의 암컷 Balb/c 마우스를 타코닉 인크.(Taconic Inc.)에서 구입하고, 0.2 mL 부피의 화합물을 30, 10, 3, 1 mg/kg의 농도로 po 투여하였다. 2시간 후 또는 달리 명시한 시간 간격으로 심장 천자를 수행하여 채혈하여 EDTA-함유 튜브에 수집하였다. 혈액 100 ㎕를 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 전혈을 FITC-접합된 래트 항-마우스 Ly-6G mAb (1:250) 및 APC-접합된 래트 항-마우스 CD11b mAb (1:100)와 혼합하고, 10 ㎍/mL 아니소마이신으로 자극하였다. 세포 표면 항원 염색 및 아니소마이신 자극 2가지 모두를 37℃에서 15분 동안 수행한 후에 용균/고정(Lyse/Fix) 완충제 (비디 바이오사이언시스(BD Biosciences), 카탈로그 번호 558049)를 10분 동안 실온에서 처치하였다. 용균시킨 혈액 샘플을 600×g에서 8분 동안 실온에서 회전시키면서 PBS 4 mL로 1회의 추가 세척을 행하였다. 투과화 배지 B (칼타그(Caltag), 카탈로그 번호 GAS002S-5) 중의 희석된 항-포스포-MAPKAPK-2 (Thr334) 항체 (1:100 희석) (셀 시그날링, 카탈로그 번호 3041) 및 마우스 BD Fc 블럭 (1:100 희석) (비디 바이오사이언시스, 553141) 200 ㎕를 혈 액 세포에 첨가하여 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에는 염색/세척 완충제 3 mL를 첨가하고, 세포를 상기한 바와 같이 회전시키면서 염색/세척 완충제 3 mL로 추가 세척을 행하였다. 이어서, 벡크만 콜터(Coulter) F500을 사용하여 세포로 유동세포계측 검정을 실시하였다. 게이팅된(gated) CD11b+Ly6G-세포에서 포스포노-MapKap-K2 염색의 평균 형광을 측정하였다. 데이타 분석은 JMP 프로그램으로 수행하였다. 실시예 5에 예시된 화합물로 처치하여 p-MAPKAPK2 합성의 투여량-반응 억제가 달성되었고, TMED₅₀ = 2.28 mg/kg이었다.

래트 콜라겐은 관절염 효능 모델을 유도함

암컷 루이스 래트 (약 190 g, 찰스 리버 랩스(Charles River Labs))를 동일 부피의 아쥬반트 (수산화알루미늄)으로 에멀젼화한 소 제II형 콜라겐 (2 mg/mL)으로 면역화하였다. 상기 래트를 꼬리 아래쪽 근처 등에서 상기 에멀젼 대략 0.3 mg으로 피내 면역화하였다. 7일 후에는 동일 프로토콜에 따라 모든 동물을 재면역화하였다. 제1 면역화 후 12일 내지 14일이 지난 후에 상기 래트에서는 관절염 (한쪽 발목 또는 양쪽 발목의 종창(swelling) 및 발적을 특징으로 함)이 발병하기 시작했다. 관절염의 첫번째 징후에서 래트를 5개 처치군으로 균등하게 분배하고, 각 래트에게 14일 동안 bid 투여하여 처치를 시작하였다.

처치군:

- 제1군: 비히클 (1％ Na카르복시메틸셀룰로스 + 0.25％ Tween 80) 1 mL, PO, bid×14일

- 제2군: 시험 화합물, 5 mg/kg, 1 mL, PO, bid×14

- 제3군: 시험 화합물, 15 mg/kg, 1 mL, PO, bid×14

- 제4군: 시험 화합물, 30 mg/kg, 1 mL, PO, bid×14

- 제5군: 프레드니솔론 10 mg/kg, 1 mL, PO, qd×14

칼리퍼스를 사용하여 발목 직경을 1주에 5일 측정하여 기록하였다. 데이타는 복합 염증 스코어 및 수행한 통계적 분석으로 생성된 곡선하면적 (AUC)으로 나타냈다. 실시예 5에 예시된 화합물은 TMED₅₀ = 5 mg/kg bid의 조직학을 나타냈다.

본 발명의 화합물은 경구 투여하는 것이 바람직하다. 그러나, 경구 투여가 유일한 경로이거나 심지어는 유일한 바람직한 경로인 것은 아니다. 예를 들어, 경구 의약을 복용하는 것을 잘 잊거나 경구 의약을 복용하는 것이 까다로운 환자에게는 경피 투여가 매우 바람직할 수도 있고, 편의성의 측면이나 경구 투여와 관련된 잠재적인 합병증을 피하기 위해서는 정맥내 경로가 바람직할 수도 있다. 화학식 I의 화합물은 특별한 상황에서는 경피, 근육내, 비내 또는 직장내 경로로 투여될 수도 있다. 투여 경로는 임의의 방식으로 달라질 수 있으며, 약물의 물성, 환자 및 돌보는 사람의 편의 및 다른 관련 환경에 따른 제약이 있다 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (1990)].

제약 조성물은 제약 업계에 공지된 방식으로 제조된다. 담체 또는 부형제는 활성 성분을 위한 비히클 또는 매질로 기능할 수 있는 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다. 적합한 담체 또는 부형제는 당업계에 공지되어 있다. 제약 조성물 은 경구, 흡입, 비경구 또는 국소 사용에 적합할 수 있고, 환자에게 정제, 캡슐제, 에어로졸제, 흡입제, 좌제, 용액제, 현탁액제 등의 형태로 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 예를 들어 불활성 희석제 또는 캡슐제를 사용하거나 또는 정제로 압축되어 경구 투여될 수 있다. 경구 치료 투여 목적을 위해, 화합물을 부형제와 함께 혼입시키고, 정제, 트로케제, 캡슐제, 엘릭시르제, 현탁액제, 시럽제, 웨이퍼제, 츄잉 검제 등의 형태로 사용할 수 있다. 이들 제제는 활성 성분인 본 발명의 화합물을 4％ 이상 함유해야 하지만, 이것은 특정 형태에 따라 달라질 수 있고, 편리하게는 단위의 4 중량％ 내지 약 70 중량％일 수 있다. 조성물에 존재하는 화합물의 양은 적합한 투여량이 달성되는 양이다. 본 발명의 바람직한 조성물 및 제제는 당업자에게 잘 공지된 방법으로 결정될 수 있다.

정제, 환제, 캡슐제, 트로케제 등은 하기하는 아쥬반트 중 1종 이상을 함유할 수도 있다: 결합제, 예컨대 포비돈, 히드록시프로필 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스 또는 젤라틴; 부형제 또는 희석제, 예컨대 전분, 락토스, 미세결정질 셀룰로스 또는 인산이칼슘; 붕해제, 예컨대 크로스카르멜로스, 크로스포비돈, 글리콜산나트륨 전분, 옥수수 전분 등; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 활석 또는 수소화된 식물성 오일; 활택제, 예컨대 콜로이드상 이산화규소; 습윤제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트 및 폴리소르베이트 80; 및 감미제, 예컨대 수크로스, 아스파르탐 또는 사카린 (첨가될 수 있음); 또는 향미제, 예컨대 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향미제. 투여량 단위 형태가 캡슐제인 경우에는 상기 유형의 물질 이외에도 액상 담체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방 오일을 함유할 수 있다. 다른 투여량 단위 형태는 투여량 단위의 물리적 형태를 개질하는 기타 각종 물질을 예를 들어 코팅물로서 함유할 수 있다. 따라서, 정제 또는 환제를 당, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 폴리메타크릴레이트 또는 다른 코팅제로 코팅할 수 있다. 시럽제는 본 발명의 화합물 이외에도 감미제로서의 수크로스 및 특정 보존제, 염료 및 착색제 및 향미제를 함유할 수 있다. 이러한 각종 조성물 제조에 사용되는 물질은 제약상 순수하고 사용되는 양에서 비독성이어야 한다. 바람직한 제제는 1％ Na카르복시메틸셀룰로스-0.25％ Tween을 화학식 I의 화합물의 원하는 투여량에 가하여 제조된다.

화학식 I의 화합물은 광범위한 투여량 범위에 걸쳐 일반적으로 유효하다. 예를 들어, 1일 투여량은 통상적으로 체중 1 kg 당 약 0.0001 mg 내지 약 30 mg의 범위 내에 속한다. 일부 예에서는 상기 범위의 하한 미만의 투여량 수준이 보다 더 적절할 수 있지만, 다른 경우에는 훨씬 더 많은 투여량이 어떠한 유해한 부작용도 야기하지 않으며 사용될 수 있고, 따라서 상기 투여량 범위는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다. 실제 투여되는 화합물의 양은 치료될 상태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물(들), 개개의 환자의 연령, 체중 및 반응, 및 환자 증상의 중증도를 비롯한 관련 상황을 확인하여 의사에 의해 결정된다는 것을 이해할 것이다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염:

<화학식 I>

상기 식에서,

Z는
로 구성된 군에서 선택되고,

X는
로 구성된 군에서 선택되고,

R¹은 할로 및 C₁-C₄ 알킬할로로 구성된 군에서 선택된 1개 내지 6개의 치환체로 임의로 치환된 C₁-C₇ 알킬; C₁-C₄ 알킬 및 트리플루오로메틸로 구성된 군에서 선택된 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환된 C₃-C₆ 시클로알킬; 또는 트리메틸실릴이고,

R²는 C₁-C₄ 알킬로 임의로 치환된 페닐, 또는 C₁-C₄ 알킬로 임의로 치환된 피 리디닐이고,

Y는 수소, C₁-C₄ 알킬, 할로 또는 C₁-C₄ 알킬할로이고,

R³은 C₃-C₆ 시클로알킬로 임의로 치환된 C₁-C₇ 알킬; C₁-C₄ 알콕시; C₁-C₄ 알킬할로; C₁-C₄ 알킬 및 트리플루오로메틸의 군에서 선택된 1개 내지 4개의 치환체로 임의로 치환된 C₃-C₆ 시클로알킬; 또는 할로, 시아노, C₁-C₄ 알킬, C₁-C₄ 알킬할로 및 C₁-C₄ 알콕시로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 임의로 치환되고 임의로는 C₁-C₄ 알킬 및 할로로부터 선택된 제2 치환체로 추가로 치환된 피리딜, 페닐 또는 티에닐이며,

R⁴는 수소 또는 C₁-C₄ 알킬이다.
제1항에 있어서, X가
인 화합물.
제1항에 있어서, R⁴가 수소인 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, R²가 4-톨릴인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 C₁-C₇ 알킬인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 tert-부틸인 화합물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R³이 2,6-디플루오로벤질인 화합물.
1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{6-[4-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]-2-메틸-피리딘-3-일}-우레아인 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 제제.