KR20080044844A - 피브린 막을 합성하는데 이용되는 동결 건조된 트롬빈과동결 건조된 피브리노겐의 키트 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
동결 건조된 트롬빈과 동결 건조된 피브리노겐의 키트는 피브린 막(fibrin membrane)을 합성하는데 이용되는 50-100 ㎎/㎖의 피브리노겐, 100-1000 IU/㎖의 트롬빈, 20-60 mmol/ℓ CaCl2를 포함한다. 동결 건조된 트롬빈과 동결 건조된 피브리노겐은 임상적 종양 수술(clinical tumor operation)후 종양 전이(tumor metastasis)의 위험을 감소시키기 위하여 상기 수술 동안 적용된다. 트롬빈과 피브리노겐의 용액은 종양의 표면 위에 발라지고, 여기서 이들 용액은 혼합되고, 종양 수술 동안 절개(incision)와 외상(trauma)에 의해 유발되는 종양 세포의 침투(pervasion)를 예방하는 고형-그물 세공(solid-meshy) 피브린 막을 형성함으로써 수술후 종양 재발(palindromia)과 전이(metabasis)의 위험을 감소시키고 환자의 수명(life span)을 연장시킨다.
키트
Description
본 발명은 동결 건조된 트롬빈과 동결 건조된 피브리노겐의 키트 및 종양 수술(tumor operation) 동안 절개(incision)와 외상(trauma)에 의해 유발되는 종양 세포 침투(tumor cell pervasion)를 예방하기 위한 이의 용도에 관계한다.
종양 수술 동안, 절개와 외상은 일반적으로, 종양 세포 침투를 유발하는데, 이러한 침투는 종양 수술후 종양 재발(palindromia)과 전이(metabasis)의 위험을 증가시키고 환자의 수명을 단축시킬 수 있다.
피브리노겐과 트롬빈의 화합물은 근원적인 유방(mamma)과 혹(lump) 절제이후 혹을 감소시키는데 이용되고 있다. 더욱 구체적으로, 유방 또는 혹이 제거되면 혹이 발생하는 경향이 있는데, 피브리노겐과 피브린의 화합물은 이들 부위에 발라지면 여기에서 형성되는 혹의 숫자 및/또는 크기를 감소시킨다. 또한, 상기 화합물은 화상 표면의 치료, 일반적인 수술의 복부 절개(abdominal incision), 간 수술 동안 혈액의 스며나옴(oozing), 혈관 수술(blood vessel surgery)에서 국소 지혈 약제(topical hemostasis drug)로서 이용되고 있다.
본 발명의 요약
본 발명에서, 피브리노겐과 트롬빈의 화합물은 분열성 종양 세포 침투(dissociative tumor cell pervasion)를 예방하는데 이용된다.
본 발명의 키트는 고형-그물 세공(solid-meshy) 피브린 막을 생성하여 분열성 종양 침투를 예방한다.
본 발명의 목적은 피브린 막을 합성하기 위한 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 동결 건조된 트롬빈과 동결 건조된 피브리노겐 및 물과 용매를 포함하는 키트의 종양 수술 동안 적용이다. 상기 키트는 키트의 사용설명서를 더욱 포함하는데, 이러한 사용설명서는 통상적으로, 키트 사용 매뉴얼이라 한다. 동결 건조된 트롬빈과 동결 건조된 피브리노겐은 피브린 막을 합성하는데 이용되는데, 여기서 키트는 50-100 ㎎/㎖의 피브리노겐(이에 대하여 물이 용매로서 이용될 수 있다), 100-1000 IU/㎖의 트롬빈 및 20-60 mmol/ℓ CaCl2(트롬빈에 대한 용매)를 포함한다. 트롬빈과 피브리노겐은 인간 혈액으로부터 유래된다. 키트는 종양 수술 동안 절개와 외상에 의해 유발되는 종양 세포의 침투를 예방하는데 적용된다. 피브린 막은 치료후 종양 재발과 전이의 위험을 감소시키고 환자의 수명을 연장할 수 있다. 피브린 막은 우수한 생물학적 화합성(biological compatibility)을 보유하고 이용이 편의하다.
본 발명의 다른 목적과 특징은 첨부된 도면과 연관하여 고려되는 아래의 상세한 설명으로부터 명백할 것이다. 하지만, 이들 도면은 예시를 목적으로 하고, 본 발명의 범위를 한정하지 않는다.
도 1과 도 2는 유리 슬라이드 상에서 동결 건조된 트롬빈의 용액과 동결 건조된 피브리노겐의 용액을 층층으로 바름으로써 합성된 피브린 막의 전자 현미경사진(electron micrograph)이다.
도 3A1과 도 3A2는 피브린 막 없는 대조(control)의 전자 현미경사진이다.
도 3B1과 도 3B2는 종양 세포 침투 실험에서 본 발명에 따른 피브린 막을 보유하는 물질 표면의 전자 현미경사진이다.
도 3C1과 도 3C2는 본 발명에 따른 피브린 막 처리를 수반하는 종양 세포 침투 실험에서 피브린 막의 전자 현미경사진이다.
아래의 실시예는 본 발명을 더욱 설명한다.
혈전증(thrombosis) 과정에 대한 피브리노겐과 트롬빈의 효과는 널리 공지되어 있다. 피브리노겐과 트롬빈으로부터 많은 산물이 존재하긴 하지만, 이들 산물은 대부분의 경우에 수술후 상처를 지혈하는데 이용된다. 본 발명에 따르면, 피브리노겐과 트롬빈에 의해 합성되는 고형-그물 세공 피브린 막은 종양 세포의 침투를 예방하는데 이용된다. 본 발명에 의해, 피브린 막을 위한 피브리노겐과 트롬빈의 키트가 제시된다. 피브리노겐과 트롬빈의 출처는 인간 혈액이고, 피브리노겐의 농도는 50-100 ㎎/㎖이고, 트롬빈의 농도는 100-1000 IU/㎖이고, CaCl2의 농도는 20-60 mmol/ℓ이다. 바람직한 구체예에서, 키트는 2㎖ 주사용수[(WFI)]의 용매를 포함하는 100-200 ㎎ 동결 건조된 피브리노겐의 병 및 2㎖ 20-60 mmol/ℓ CaCl2 용액의 용매를 포함하는 200-2000 IU 동결 건조된 트롬빈의 병을 포함한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 피브리노겐의 농도는 60-80 ㎎/㎖이고, 트롬빈의 농도는 300-800 IU/㎖이고, CaCl2의 농도는 30-50 mmol/ℓ CaCl2이다. 가장 바람직한 구체예에서, 피브리노겐의 농도는 70 ㎎/㎖이고, 트롬빈의 농도는 400-600 IU/㎖이고, CaCl2의 농도는 40 mmol/ℓ CaCl2이다. 상기 키트는 키트 사용 매뉴얼을 더욱 포함한다. 본 발명은 또한, 상기 키트를 이용하는 방법에 관계한다.
인간 혈액으로부터 유래되는 피브리노겐과 트롬빈은 동결 건조되고 별개의 용액 내에 투입된다. 본 발명을 이용한 실험에서, 피막(coating)을 형성하기 위하여, 피브리노겐 용액의 얇고 부드러운 층이 유리 슬라이드의 표면 위에, 또는 검사 키트 내에 세포 배양 삽입물(cell culture insert)의 바닥 표면 위에 발라진다. 대략 5초후, 트롬빈 용액의 얇고 부드러운 층이 피브리노겐 피막 위에 후속적으로 발라진다. 피브리노겐 용액과 트롬빈 용액의 이러한 순차적인 바름(daubing)은 대략 3-5회 반복한다. 고형-그물 세공 피브린 막이 신속하게 형성된다. 피브린 막 그물 세공(mesh)의 직경은 최대 크기에서 0.6 ㎛이하이고, 10-100 ㎛의 인간 종양 세포보다 훨씬 작다. 이러한 피브린 막은 인간 종양 세포를 억제하고 침투를 예방할 수 있다.
따라서, 피브리노겐과 트롬빈 용액은 한 번에 한 층씩, 종양 조직의 국소 표면 위에 교대로 발라진다. 국소 조직 표면 위에 형성되는 이러한 고형-그물 세공 피브린 막은 수술 동안 분열성 종양 세포 침투를 예방하고, 치료후 종양 재발과 전이의 위험을 감소시키고, 환자의 수명을 연장시킨다. 이러한 피브린 막은 우수한 생물학적 화합성(biological compatibility)을 보유하고 이용이 편의하다.
실시예 1
피브린 막의 산출
(1) 본 발명에 따른 키트의 피브리노겐 용액과 트롬빈 용액은 0.8㎝ x 0.8㎝ 고형 표면 위에 한 번에 한 층씩, 각 3회 교대로 발랐다(450 IU/㎖ 트롬빈과 40 mmol/ℓ CaCl2에 의해 합성됨).
(2) 피브리노겐 용액과 트롬빈 용액의 층은 자연 건조시키고 전자 현미경(electron microscope)으로 검사하였다.
도 l과 도 2는 건조된 피브리노겐과 트롬빈 층의 전자 현미경 사진이다. 배율(amplification ratio)은 5000이다. 이들 사진으로부터, 부드러운 피브린 막 표면이 관찰될 수 있다. FS 피브린 막 내에서 명확한 구멍은 관찰되지 않는다. 상기 배율로부터, 그물 세공 구멍 직경(mesh bore diameter)은 0.6 ㎛ 이하인 것으로 추론될 수 있다. 인간 종양 세포 크기는 10-100 ㎛이다. 따라서, 인간 혈액 피브리노겐과 트롬빈에 의해 합성되는 피브린 막은 인간 종양 세포를 억제하고 침투를 예방할 수 있다.
실시예 2
분열성 종양 세포 침투를 예방하기 위한 본 발명에 따른 피브린 막 키트로부터:
(1) 실시예 1의 방법을 이용하여 피막을 형성하기 위하여, Chemicon International(Temecula, California)로부터 상업적으로 구입가능한 세포 침입 검사 키트 ECM550의 조직 배양 평판(tissue culture plate)의 웰 내로 배치되는 세포 배양 삽입물의 바닥 표면 위에 얇고 부드러운 피브린 막을 생성하였다. 이후, 세포 침입 검사 키트에 동봉된 사용설명서에 따라 세포 침입 실험을 수행하였다. 삽입물 내로 배치된 세포 현탁액 내에서 침입 세포는 위 암종(carcinoma ventriculi) 세포주(위종양), 인간 위 선암종(human gastric adenocarcinoma) 세포주 KN45, AGS 배양된 인간 위 선암종 세포(Ruijing Hospital of Shanghai, China), 인간 유방암(human breast cancer) 세포 MDA-MB-231, 결장암(colon cancer) 세포 Ls174T(System Biosciences of Mountain View, California)를 포함하였다.
(2) 세포 침입 검사 키트에 동봉된 사용설명서에 따라, 소모된 배지는 폐기하고, 내부 막(inner membrane)은 끝에 솜이 달린 면봉을 이용하여 깨끗하게 하고, 삽입물은 20분간 염색하고 자연 건조시켰다. 조직 배양 평판의 대조 웰 내에서 피브리노겐 또는 트롬빈은 관찰되지 않았다.
(3) 도 3A1, 도 3A2, 도 3B1, 도 3B2, 도 3C1, 도 3C2의 전자 현미경사진을 비롯한 전자 현미경사진을 촬영하고, 기록을 작성하였다.
도 3A1, 도 3A2, 도 3B1, 도 3B2, 도 3C1, 도 3C2에서는 실시예 2의 피브린 막이 삽입물 내에서 분열성 종양 세포를 저지하고 피브린 막을 통하여 종양 세포 침투를 예방한다는 것을 입증하고, 따라서, 상기 피브린 막이 인간 종양 세포를 억제하고 침투를 예방할 수 있다는 결론을 뒷받침한다. 도 3A1과 3A2는 피브린 막이 존재하지 않는 경우에 세포 침입이 발생한다는 것을 보여주는, FS 피브린 막 없는 전자 현미경 사진이다. 도 3B1과 3B2는 FS 피브린 막의 내부 면에서 세포 침입의 예방을 보여주는 사진이다. 도3C는 FS 피브린 막의 외부 면에서 세포 침입의 예방을 보여주는 사진이다. 명백하게, 인간 혈액 피브리노겐과 트롬빈에 의해 합성되는 피브린 막은 인간 종양 세포를 억제하고 침투를 예방한다.
당업자가 인지하는 바와 같이, 본 발명의 기술적 사상과 범위를 벗어나지 않는, 본 명세서에 예시되고 기술된 구체예의 변형이 가능하다. 따라서, 상기한 상세한 설명은 예시이며, 본 발명의 진정한 범위는 첨부된 특허청구범위에 의해 결정된다.
Claims (8)
- 피브린 막(fibrin membrane)을 합성하는데 이용되는 키트에 있어서, 2㎖ 주사용수(water for injection)의 용매를 포함하는 100-200 ㎎ 동결 건조된 피브리노겐(fibrinogen)의 병 및 2㎖ 20-60 mmol/ℓ CaCl2 용액의 용매를 포함하는 200-2000 IU 동결 건조된 트롬빈(thrombin)의 병을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1에 있어서, 피브리노겐의 농도는 60-80 ㎎/㎖이고, 트롬빈의 농도는 300-800 IU/㎖이고, CaCl2의 농도는 30-50 mmol/ℓ CaCl2인 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1에 있어서, 피브리노겐의 농도는 70 ㎎/㎖이고, 트롬빈의 농도는 400-600 IU/㎖이고, CaCl2의 농도는 40 mmol/ℓ CaCl2인 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1 내지 청구항 3중 어느 한 항에 있어서, 트롬빈의 용액은 CaCl2와 트롬빈을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1 내지 청구항 3중 어느 한 항에 있어서, 트롬빈과 피브리노겐은 인간 혈액으로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1 내지 청구항 3중 어느 한 항에 있어서, 키트의 사용설명서를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1 내지 청구항 3중 어느 한 항에 있어서, 키트는 합성된 피브린 막을 생산하는데 적용되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 1 내지 청구항 3중 어느 한 항에 있어서, 키트는 임상 수술(clinical operation) 동안 분열성 종양 세포 침투(dissociative tumor cell pervasion)를 예방하는데 적용되는 것을 특징으로 하는 키트.
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