KR20080038331A

KR20080038331A - 임신성과를 개선하기 위한 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR20080038331A
Application number: KR1020087002948A
Authority: KR
Inventors: 켈턴 폴 트레멜린
Original assignee: 아델라이드 퍼틸리티 센터 피티와이 리미티드
Priority date: 2005-07-05
Filing date: 2006-07-05
Publication date: 2008-05-06
Also published as: CA2614210A1; CA2642008A1; EP1909911A4; CN101282762A; EA200800260A1; NZ595393A; AU2006265777A1; US20090081177A1; EP1909911A1; AU2009100215A4; AU2006265777B2; WO2007003007A1; AU2008217001A1; JP2008544994A; AU2009100215B4

Abstract

본 발명은 여성 피험자에서 임신율을 증가시키는 방법에 관한 것이며, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자로 수정된다. 상기 방법은 수정 전에 남성 피험자에게 (i) 유효량의 항산화제; 및 (ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제를 투여하는 단계를 포함한다.

임신율, 임신성과, 수정능력, 정자, 난모세포, 생식, 테스토스테론, 생식관 염증, 불임, 항산화제, 마늘

Description

임신성과를 개선하기 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR IMPROVING PREGNANCY OUTCOME}

본 출원은 2005년 7월 5일자 제출된 미국 가 특허출원 제60/696,746호의 우선권을 주장하며, 이것의 내용은 본원에 참고자료로서 포함된다.

기술분야

본원 발명은 임신율을 개선하고 임신성과를 개선하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

또한, 본원 발명은 남성 피험자의 정자손상을 줄이기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

생식의학의 많은 진보에도 불구하고 남성의 수정능력의 감소로 인해 상당한 비율의 커플들이 임신하지 못하고 있다. 남성의 수정능력의 감소에는 많은 원인이 있지만, 자유 라디칼로 인한 정자손상이 수정능력 감소에 기여하는 주된 요인들 중 하나인 것으로 드러났다. 알려지지 않은 원인의 불임남성, 흡연자, 약한 정자운동성과 관련된 불임남성 및 정관복원수술을 받은 남성의 정액에서는 높은 수준의 자유 라디칼이 측정되었다.

자유 라디칼은 다음의 세 메커니즘 중 하나에 의해 수정능력을 방해할 수 있 다. 첫째, 자유 라디칼에 의한 정자 막의 손상이 정자꼬리의 기능을 방해하여 정자운동성을 감소시킨다. 둘째, 자유 라디칼에 의한 머리쪽 막의 손상이 첨단체반응, 난모세포-정자 융합에 중요한 자연적 반응 및 수정을 방해할 수 있다. 셋째, 정액의 자유 라디칼 수준이 매우 높을 경우 정자의 유전재료(DNA)가 손상되어 열등한 질의 배아 및 불임/유산을 초래할 수 있다. 많은 연구에서 아버지의 흡연으로 인한 정자 DNA 손상은 또한 그 자손에서 소아암의 발생과 연관되었다.

생식보조기술의 사용으로 인해 빈약한 수정능력을 치료하기 위한 개입이 가능해졌다. 그러나, 생식보조기술 분야의 많은 진보에도 불구하고 그 성공률은 아직도 일반적으로 낮다. 시험관수정(IVF), 세포질내 정자주입(ICSI) 및 자궁내 정액주입(IUI)과 같은 생식보조기술의 낮은 성공률은 일부분, 남성들에서 내생적으로 일어나는 자유 라디칼에 의한 정자손상 때문일 가능성이 있다.

따라서, 자연임신 및 보조임신에서 임신율 및 임신성과를 개선하기 위한 새로운 방법 및 조성물에 대한 필요성이 있다. 본 발명은 보조임신 및 자연임신에서 임신율 및 임신성과를 개선하기 위한 방법 및 조성물, 그리고 남성 피험자에서 생기는 정자손상을 줄이기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이며, 이것은 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합하여 항산화제를 남성에게 투여함으로써 이루어진다.

본원에서 선행기술로서 주어진 특허서류 또는 다른 문헌들에 대한 언급은 본원 청구범위 중 어느 것의 우선일 시점에서 그 서류 또는 문헌이 공지된 것이거나, 또는 그것이 담고 있는 정보가 보편적인 일반적 지식의 일부임을 승인하는 것으로 서 고려되는 것은 아니다.

발명의 개요

본 발명은 여성 피험자에서 임신율을 증가시키는 방법을 제공하며, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자로 수정되고, 상기 방법은 수정 전에 상기 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제.

또한, 본 발명은 여성 피험자에서 임신성과를 개선하는 방법을 제공하며, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자로 수정되고, 상기 방법은 수정 전에 상기 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 생기는 자유 라디칼에 의한 정자손상을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼 발생을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 백혈구 활성 및/또는 농도를 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 하나 이상의 염증 원인제의 수준 및/또는 생성을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 정자기능을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 정자운동성을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 정자생산을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 수정능력을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자의 불임을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해서 생긴 배아의 질을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자의 정자로 난모세포를 수정하기 전에 상기 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해서 생긴 배아의 발생과정을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자의 정자로 난모세포를 수정하기 전에 상기 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 피험자에서 피험자의 아버지로부터 유전된 DNA 손상도를 줄이는 방법을 제공하며, 상기 DNA 손상은 피험자의 아버지에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상으로 인한 것이고, 상기 방법은 상기 피험자의 임신 전에 아버지에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상으로 인해 피험자의 아버지로부터 유전된 DNA 손상과 관련된 질환 또는 상태를 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피험자의 임신 전에 아버지에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 테스토스테론의 농도를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 하기한 성분들을 포함하는 조성물을 제공한다:

비타민 E;

비타민 C, 또는 그것의 염;

리코펜;

셀레늄;

아연; 및

500mg 이상의 마늘, 또는 그것의 추출물 또는 오일, 또는 전술한 성분들 중 어느 것의 제약학적으로 허용되는 유도체; 상기 조성물은 선택적으로 엽산 또는 그것의 염, 및/또는 코엔자임 Q10을 더 포함한다.

약 400 I.U. 비타민 E;

약 100mg 비타민 C, 또는 그것의 염;

약 6mg 리코펜;

약 26㎍ 셀레늄;

약 25mg 아연;

약 40mg 코엔자임 Q10; 및

약 1000mg 마늘.

약 400 I.U. 비타민 E;

약 100mg 비타민 C, 또는 그것의 염;

약 6mg 리코펜;

약 26㎍ 셀레늄;

약 25mg 아연;

약 500㎍ 엽산염; 및

약 1000mg 마늘.

또한, 본 발명의 하기한 성분들을 포함하는 조합 제품을 제공한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

이때, 조합 제품 중의 상기 성분들은 동일하지 않으며, 상기 성분들은 피험자에게 개별 투여하기 위한 형태로, 또는 피험자에게 상기 성분들 중 하나 이상을 동시-투여하기 위한 형태로 제공된다.

또한, 본 발명은 하기 (i) 및 (ii)를 포함하는 조성물을 제공한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또한, 본 발명은 남성 피험자로부터 정자를 분리하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기 (i) ~ (iii)의 단계를 포함한다:

(i) 남성 피험자에게 유효량의 항산화제를 투여하는 단계;

(ii) 남성 피험자에게 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제를 투여하는 단계; 및

(iii) 남성 피험자로부터 정자를 분리하는 단계.

본 발명은 남성 생식관 염증 감소제(예를 들어, 남성 생식관에서 염증을 감소시키는 제제) 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 함께 적어도 하나의 항산화제를 포함하는 조성물이 남성 피험자에게 투여되었을 때, 상기 남성 피험자의 정자로 수정된 여성 피험자에서 자연임신율 및 보조임신율을 개선하는데 효과적이라는 발견으로부터 이루어졌다.

이론에 결부되지는 않지만, 임신율의 개선은 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여와 함께 적어도 하나의 항산화제를 투여하는 것이 남성 피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자손상을 줄이는데 효과적이며, 이로써 임신율이 증가한다는 점 때문이라고 여겨진다.

본 명세서 전체에서 사용되는 여러 용어들은 당업자에 의해 충분히 이해되는 의미를 가진다. 그러나, 참고로 이들 용어 중 일부를 정의한다.

본 명세서 전체에서 사용된 용어 "항산화제"는 산소 및/또는 자유 라디칼에 의한 세포손상 효과를 직접적으로 또는 간접적으로 감소시킬 수 있는 분자를 의미하는 것으로 이해되어야 하며, 산소와 반응하는 분자, 또는 자유 라디칼로부터 보호할 수 있으며 및/또는 자유 라디칼과 반응할 수 있는 분자를 포함한다.

이와 관련하여, 용어 "항산화제"는 피험자에게 투여되었을 때 항산화제 활성을 갖는 제제를 형성하거나, 또는 그러한 제제로 대사되는 프로드러그 또는 제제를 포함하는 것으로 이해된다. 또한, 본 발명은 예시된 항산화제들 각각에 대하여, 그 항산화제의 염(이용이 가능하다면), 또는 그 항산화제의 제약학적으로 허용되는 화학적 유도체를 포함하는 것으로 이해된다.

본 명세서 전체에서 사용된 용어 "남성 생식관 염증 감소제"는 남성 생식관의 염증을 직접적으로 또는 간접적으로 감소시키는 분자를 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 이와 같은 제제는, 예를 들어 남성 생식관에서 백혈구 수, 백혈구 증식 또는 백혈구 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 감소시킬 수 있고, 및/또는 피험자에게 투여되었을 때 백혈구에 의한 TNF-α 및 IL-1β와 같은 하나 이상의 염증성 사이토카인의 생산을 직접적으로 또는 간접적으로 감소시킬 수 있다. 이 용어는 피험자에게 투여되었을 때 남성 생식관 염증 감소제를 형성하거나, 또는 그러한 제제로 대사되는 프로드러그 또는 제제를 포함한다. 또한, 본 발명은 예시된 제제들 각각에 대하여, 그 제제의 염(이용이 가능하다면), 또는 그 제제의 제약학적으로 허용되는 화학적 유도체를 포함하는 것으로 이해된다.

이와 관련하여, 남성 생식관은 부고환, 음경, 전립선, 정낭, 고환, 정관 및 정액을 포함하는 것으로 이해된다.

본 명세서 전체에서 사용된 용어 "고환 테스토스테론 농도 증가제"는 고환에서 테스토스테론의 농도를 직접적으로 또는 간접적으로 증가시키는 분자를 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 이 용어는 피험자에게 투여되었을 때 고환 테스토스테론 농도 증가제를 형성하거나, 또는 그러한 제제로 대사되는 프로드러그 또는 제제를 포함한다. 또한, 본 발명은 예시된 제제들 각각에 대하여, 그 제제의 염(이용이 가능하다면), 또는 그 제제의 제약학적으로 허용되는 화학적 유도체를 포함하는 것으로 이해된다.

도면의 간단한 설명

도 1은 기지의 자유 라디칼 손상을 가진 남성들 그룹에서 전체 운동성 정자 수에 대한 OSMI 건강기능식품의 효과를 나타낸다.

도 2는 기지의 자유 라디칼 손상을 가진 남성들 그룹에서 HOST 분석을 이용한 정자 막 완전성에 대한 OSMI 건강기능식품의 효과를 나타낸다.

도 3은 기지의 자유 라디칼 손상을 가진 남성들 그룹에서 TUNEL을 이용한 정자 DNA 단편화에 대한 OSMI 건강기능식품의 효과를 나타낸다.

도 4는 TBARS 분석을 이용한 정자 막 지질 과산화에 대한 OSMI 건강기능식품의 효과를 나타낸다.

발명의 일반적인 설명

상기 설명한 대로, 한 구체예에서, 본 발명은 여성 피험자에서 임신율을 증가시키는 방법을 제공하며, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자로 수정되며, 상기 방법은 수정 전에 상기 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

본 발명은 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여와 함께, 남성 피험자에 적어도 하나의 항산화제를 투여하는 것이 상기 남성 피험자의 정자로 수정된 여성에서 자연임신 및 보조임신의 임신율 및 임신성과를 개선하는데 효과적이라는 발견에 기초한다.

따라서, 본 발명은 자연임신(자연적으로 수태된 임신) 및 보조임신(생식보조기술에 의해 야기된 임신)의 임신율 및 임신성과를 개선하는데 사용될 수 있다.

생식보조기술의 예는 인공정액주입, 시험관수정, 배우자난관내이식술(GIFT), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)을 포함한다. 수정될 난모세포를 분리하는 방법을 비롯하여, 인간 및 동물에서 생식보조기술을 사용하는 방법은 본 분야에 잘 알려져 있다.

임신율을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 임신율은 특정 여성 피험자에서 자연 또는 보조 수단에 의해 확인가능한 임신이 달성될 가능성의 척도이다. 확인가능한 임신은 양성 βHCCG와 같은 하나 이상의 특이적 성과, 또는 최초 3개월 초음파 상에서 살아있는 태아 심장의 검지에 의해 판정되는 성공적인 임신을 말한다(일반적으로 존속가능한 임신율이라고 한다).

따라서, 본 발명에 따른 치료를 받은 개개의 피험자에 대해서, 임신율은 피험자에서 수정 후 확인가능한 임신이 달성될 가능성이다. 임신율의 증가는 치료를 받지 않은 피험자의 상황과 비교하여 피험자에서 확인가능한 임신이 달성될 가능성의 개선을 의미한다.

피험자 집단에 대해서, 임신율은 본 발명의 치료를 받는 동안 확인가능한 임신이 달성된 여성 피험자의 비율이다. 예를 들어, IVF 임신의 경우, 임신율은 배아이식에 의해 획득된 존속가능한 임신의 비율로서 측정될 수 있다.

추가하여, 남성 파트너가 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여와 함께 적어도 하나의 항산화제로 사전에 치료받은 커플에서는 자연임신 및 보조임신에 대한 성과가 개선된다.

따라서, 또 다른 구체예에서, 본 발명은 여성 피험자에서 임신성과를 개선하는 방법을 제공하며, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자로 수정되고, 상기 방법은 수정 전에 상기 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

임신성과를 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 임신성과는 자연임신 또는 보조임신, 예를 들어 하나 이상의 특이적 파라미터(예를 들어, 양성 βHCCG, 또는 최초 3개월 초음파 상에서 살아있는 태아 심장의 검지), 출산예정일까지 임신이 유지될 가능성, 또는 유산되지 않을 가능성에 의해 판정되는 성공적인 임신과 관련된 확인가능한 결과이다.

남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여와 함께 남성 피험자에게 항산화제를 투여하는 것은 또한 자유 라디칼에 의한 남성 피험자의 정자손상을 줄일 수 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 생기는 자유 라디칼에 의한 정자손상을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 함께 항산화제를 투여하는 것은 또한 남성 생식관 및 정액의 자유 라디칼 수준을 줄일 수 있다.

따라서, 또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼의 발생을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

이론에 결부되지는 않지만, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여와 함께 항산화제를 투여하는 것은 자유 라디칼 손상을 줄이는데 효과적이라고 여겨지며, 이것은 하기한 메커니즘 (i) ~ (iii) 중 하나 이상에 의하여 이루어진다: (i) 남성 생식관 및/또는 정액의 자유 라디칼 수준을 직접적으로 감소시킴; (ii) 백혈구 염증성 사이토카인 생산을 감소시킴으로써, 백혈구에 의해 남성 생식관 및/또는 정액에서 생기는 자유 라디칼의 수준을 감소시킴; 및 (iii) 테스토스테론을 생산하는 Leydig 세포의 자유 라디칼에 의한 손상을 줄임으로써 고환에서 테스토스테론 농도를 증대시켜 테스토스테론 수준을 증가시키고 정자기능을 개선함.

남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 함께 항산화제를 투여하는 것은 또한 남성 피험자의 정자 수의 개선, 정자운동성의 개선, 정자 막 완전성의 개선, 및 정자의 DNA 손상의 감소를 가져올 수 있다.

또한, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 함께 항산화제로 사전에 치료받은 남성 피험자의 정자를 사용해서는, 예를 들어 포배를 형성하는 배아의 능력으로써 측정되는 배아의 질이 개선될 수도 있다고 여겨진다.

이와 관련하여, 본 발명은 자연임신 또는 생식보조기술로 인해 생긴 배아의 질을 개선하는데 사용될 수 있다.

일반적으로 알려지지 않은 원인의 불임남성, 흡연자, 약한 정자운동성과 관련된 불임남성 및 정관복원수술을 받은 남성의 정액에는 높은 수준의 자유 라디칼이 존재한다.

이론에 결부되지는 않지만, 자유 라디칼은 적어도 세 가지 메커니즘에 의해 남성의 수정능력을 직접적으로 방해할 수 있다고 여겨진다. 첫째, 자유 라디칼에 의한 정자 막의 손상이 정자꼬리의 기능을 방해하여 정자운동성을 감소시킨다. 둘째, 자유 라디칼에 의한 머리쪽의 손상이 첨단체반응, 난모세포-정자 융합에 중요한 자연적 반응 및 수정을 방해할 수 있다. 셋째, 정액의 자유 라디칼 수준이 충분히 높을 경우 정자의 유전재료가 손상되어 열등한 질의 배아 및 불임/유산을 초래할 수 있다.

추가하여, 정자 DNA 손상은 그 자손에서 소아암의 발생과 연관되었다. 몇몇 연구들, 예를 들어 Ji 등 (1997) J. Natl. Cancer Inst. 89(3):238-244 및 Sun 등 (1997) Biol. Reprod. 56:602-607은 아버지의 흡연으로 인한 정자의 DNA 손상이 그 자손에서 소아암의 발생과 연관된다는 것을 시사한다. 따라서, 본 발명에 따른 남성 피험자의 사전 치료는 남성 피험자의 자손에서 DNA 손상을 줄일 수 있으며, 그 결과 유전된 DNA 손상과 관련된 자손들에서 질환 및/또는 상태가 감소한다.

본 발명의 다양한 구체예에서 남성 피험자는, 예를 들어 인간 남성, 또는 영장류, 가축류(예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소), 반려동물(예를 들어, 개, 고양이), 연구시험용 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 기니아피그)를 포함하는 수컷 포유동물, 또는 생식관 및/또는 정액에서 백혈구에 의해 자유 라디칼이 생성되는 어떤 다른 수컷 동물일 수 있다. 한 구체예에서, 남성 피험자는 인간 남성이다.

따라서, 본 발명은 인간과 동물에서 모두 사용할 수 있도록 확장된다는 것이 인정되며, 이와 같이 본 발명은 인간 또는 동물에서 자연임신 목적 및 생식보조 임신 목적을 위해 사용될 수 있다.

이와 관련하여, 본 발명은 인공정액주입, 시험관수정(IVF; 난모세포를 추출하여 연구실에서 수정시킨 후 수용자에게 배아이식), 배우자난관내이식술(GIFT; 난관에 난모세포와 정자를 배치), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)과 같은 생식보조기술을 위해서 적합하다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따라 치료된 남성 피험자로부터 분리된 정자(및/또는 정액)을 제공한다. 이러한 정자(예를 들어, 분리된 정자로서 또는 정액 샘플의 형태로)는 인간과 동물에서 모두 생식보조기술에 사용될 수 있다. 인간 및 동물로부터 정자를 분리하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자로부터 정자를 분리하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기 (i) ~ (iii)의 단계를 포함한다.

(i) 남성 피험자에게 유효량의 항산화제를 투여하는 단계;

(iii) 남성 피험자로부터 정자를 분리하는 단계.

또한, 본 발명은 남성 피험자로부터 분리된 정자(또는 정액), 및 상기 정자로 인간이 아닌 동물의 암컷을 수정하여 생긴 사람이 아닌 동물, 또는 상기 정자로 난모세포를 수정하여 생긴 인간이 아닌 동물을 제공한다. 정자를 분리하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 수정에 의해서 인간이 아닌 동물을 생산하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다.

또한, 이렇게 분리된 정자는 냉동 및 해동의 영향을 더 잘 견딜 수도 있다. 이와 관련하여, 냉동보존 및 해동은 산화 스트레스에 의해 유발되는 정자운동성을 비롯한 정자기능의 상당한 감소와 관련된다. 따라서, 본 발명은 또한 남성 피험자를 유효량의 항산화제와 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제로 치료함으로써 정자의 동결보존을 개선하는 방법까지도 확장된다.

한 구체예에서, 본 발명의 남성 피험자는 말론다이알데하이드 또는 산화 스트레스의 다른 생화학적 마커들의 수준이 증가된 피험자를 포함한 정자 막 산화의 수준이 증가된 피험자; 흡연자; 약한 정자운동성으로 인한 수정능력의 감소, 또는 알수 없는 원인으로 인한 수정능력의 감소를 포함하여 수정능력이 감소된 피험자; 정관복원수술을 받은 피험자; 부고환염과 같은 생식관 감염을 가진 피험자; 및 정계정맥류를 가진 피험자로 구성된 군으로부터 선택된다.

한 구체예에서, 본 발명에서 정자에 발생하는 자유 라디칼 손상은 정액을 포함한 남성 생식계통에서 생성된 및/또는 거기에 존재하는 자유 라디칼에 의해 매개된 손상이다. 더 이상의 구체예에서, 자유 라디칼 손상은 남성 생식관 및/또는 정액에 있는 백혈구 및/또는 정자에 의해 생성된 자유 라디칼로 인한 손상이다.

자유 라디칼에 의한 정자손상의 정도를 평가하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, TBAR 분석법(이것은 정자 막 산화의 마커인 말론다이알데하이드의 측정을 수반한다) 또는 LPO-856 분광광도 분석법이 사용될 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어 Gomez 등 (1998) International Journal of Andrology 21(2):81-96 및 Aitken 등 (1993) Molecular Reproduction and Development 35:302-315에 설명된다.

한 구체예에서, 피험자에의 투여는 자유 라디칼로 인한 정자손상에 있어 투여 전과 비교하여 정자에서 측정된 말론다이알데하이드의 수준(10⁷ 정자당 pmol)을 10% 이상 감소시킨다. 또 다른 구체예에서, 피험자에의 투여는 자유 라디칼로 인한 정자손상에 있어 투여 전과 비교하여 정자에서 측정된 말론다이알데하이드의 수준(10⁷ 정자당 pmol)을 15% 이상 감소시킨다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제는 하나 이상의 개별 항산화제일 수 있다. 이와 관련하여, 항산화제는 산소 및/또는 자유 라디칼로 인한 세포손상 효과를 직접적으로 또는 간접적으로 줄일 수 있는 분자이며, 산소와 반응하는 분자, 또는 자유 라디칼로부터 보호할 수 있으며 및/또는 자유 라디칼과 반응할 수 있는 분자를 포함한다.

한 구체예에서, 항산화제는 리코펜(토마토 껍질 유래의 카로티노이드), 루테인, 및 제아크산틴을 비롯한 β-카로티노이드; 비타민 C; 비타민 E; 코엔자임 Q10; 셀레늄; 아연; L-카르니틴; 아세틸카르니틴; N-아세틸시스테인; 글루타치오닌; 피루베이트; 및 하이포타우린; 또는 전술한 제제들 중 어느 것의 염(이용이 가능하다면), 또는 제약학적으로 허용되는 유도체로 구성된 군 중의 하나 이상으로부터 선택된다.

다른 항산화제들은 일반적으로 Agarwal 등 (2004) Reproductive Biomedicine Online 8(6):616-27에 설명된 바와 같다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 하나 이상의 항산화제의 유효량은 그것이 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 항산화제(들)에 좌우될 것이다.

이와 관련하여, 본 발명의 다양한 구체예에서 다수의 항산화제에 대한 적합한 농도는 다음과 같다:

비타민 E(d-알파-토코페릴아세테이트): 40 내지 4000 I.U., 일반적인 범위는 200 내지 1200 I.U., 전형적으로는 200 내지 600 I.U.

비타민 C(아스코르브산 또는 그것의 염): 10 내지 1000mg, 일반적인 범위는 20 내지 200mg.

리코펜: 0.5 내지 50mg, 일반적인 범위는 1 내지 20mg, 및 2 내지 10mg.

코엔자임 Q10: 4 내지 400mg, 일반적인 범위는 10 내지 100mg.

셀레늄: 10 내지 250㎍, 일반적인 범위는 20 내지 50㎍.

아연: 2.5 내지 100mg, 일반적인 범위는 10 내지 50mg.

글루타치온: 100 내지 1000mg, 일반적인 범위는 400 내지 600mg.

L-카르니틴: 1 내지 5 그램, 일반적인 범위는 2 내지 3 그램.

펜톡시필린: 200 내지 1500mg, 일반적인 범위는 300 내지 1200mg.

한 구체예에서, 피험자에게 투여된 항산화제는 다음의 항산화제들의 조합이다: 리코펜, 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄 및 아연. 항산화제 코엔자임 Q10이 또한 투여될 수 있다.

한 구체예에서, 남성 생식관 염증 감소제는 백혈구 수, 증식 및/또는 생산을 감소시키는 제제, 및/또는 백혈구 사이토카인 생산을 억제하는 제제이다.

백혈구 사이토카인 생산을 억제하는 제제와 같은 남성 생식관 염증 감소제의 예는 하기한 것들을 포함한다:

마늘(Hodge 등 (2002) Cytometry 48:209-215에 설명됨), 또는 마늘 유래 오일, 추출물 또는 활성 화합물.

녹차, 또는 녹차 유래 추출물 또는 활성 화합물.

N-3 지방산(Weiss 등 (2002) British Journal of Nutrition 87(sup 1):S89-94에 설명됨).

도코사헥사엔산(Kelley 등 (1999) Lipids 34(4):317-24에 설명됨), 또는 그것의 염 또는 제약학적으로 허용되는 유도체.

생강 및 생강 유도체(예를 들어, 제룸본)(Murakami 등(2002) Carcinogenesis 23(5):795-802에 설명됨), 또는 생강 유래 추출물 또는 활성 화합물.

TNFα의 백혈구 생산을 감소시키는 제제, 예를 들어 펜톡시필린(Meiners 등 (2004) J Neural Transm 111(3):441-447에 설명됨).

일단 생성된 TNFα의 작용을 차단하는 제제, 예를 들어 인플릭시맵.

해양연체동물로부터의 지질추출물(리프리놀 - 블랙모어), 5-리폭시게나제 억제제(Dugas B (2000) Allerg Immunol (Paris) 32(7):284-9에 설명됨).

한 구체예에서, 남성 생식관 염증 감소제는 또한 백혈구의 증식을 억제한다. 이러한 제제의 예는 마늘(또는 마늘 유래의 오일, 추출물 또는 활성 화합물), 또는 생강(또는 생강 유래의 추출물, 유도체 또는 활성 화합물)이다.

본 발명의 다양한 구체예에서 고환 테스토스테론 농도 증가제의 예는 하기한 것들을 포함한다:

마늘(Oi 등 (2001) J. Nutr. 131(8):2150-2156에 설명됨), 마늘 유래 오일, 추출물 또는 활성 화합물.

아연(Fuse 등 (1999) Int. Urol Nephrol. 31(3):401-408에 설명됨).

아세틸카르니틴.

트리블러스 테레스트리스(Tribulus terrestris), 또는 추출물 또는 활성 화합물.

대식세포에서 유도성 산화질소 신타제(iNOS)를 감소시키는 제제, 예를 들어 마늘 유래의 활성 화합물인 알리신 또는 아조엔.

산화질소(NO) 생성을 감소시키는 제제.

한 구체예에서, 본 발명의 테스토스테론 농도 증가제는 또한 백혈구의 증식을 억제한다.

어떤 제제가 고환 테스토스테론 농도를 증가시키는 지의 여부를 결정하는 적합한 방법은, 예를 들어 Luboshitzky 등 (2002) Int. J. Androl. 25(6):345에 설명된 바와 같은, 정액장 중의 테스토스테론 농도를 측정하는 방식에 의한다.

한 구체예에서, 본 발명의 남성 생식관 염증 감소제와 고환 테스토스테론 농도 증가제는 양쪽 활성을 모두 갖는 동일한 제제이다. 이러한 제제의 예는 마늘과 아연이다.

남성 생식관 염증 감소제의 유효량 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 유효량은 그것이 원하는 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제에 좌우된다.

한 구체예에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 마늘, 마늘 오일, 마늘 추출물, 또는 알리신 및/또는 아조엔과 같은 마늘로부터 유래한 활성 화합물이다. 적합한 마늘 추출물은 신선한 마늘을 껍질을 벗겨 분쇄한 다음, 분쇄된 추출물을 일련의 필터를 통해 여과함으로써 제조될 수 있다.

마늘 오일의 경우에, 항산화제와 조합하여 투여하기 위한 유효량은 500mg 이상, 전형적으로는 501 내지 10,000mg이다. 한 구체예에서, 투여된 마늘 오일의 양은 1000mg 또는 대략 이 양이다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 적합한 투여섭생에 따라서 개별적으로 피험자에게 투여될 수도 있고, 또는 조합하여 투여될 수도 있다.

따라서, 투여는 순차적이거나 또는 동시적일 수 있으며, 제약 조성물이 특정된 시간 간격 동안 피험자 안에 존재함을 일반적으로 의미한다. 전형적으로, 어떤 제제가 첫 번째 제제의 반감기 이내에 투여된다면, 이 제제는 동시-투여되는 것으로 간주된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 다음의 성분들을 포함하는 조합 제품을 제공한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

이때, 조합 제품 중의 상기 성분들은 동일하지 않으며, 상기 성분들은 남성 피험자에게 개별 투여하기 위한 형태로, 또는 남성 피험자에게 상기 성분들 중 하나 이상을 동시-투여하기 위한 형태로 제공된다.

조합 제품은 본원에 설명된 본 발명의 다양한 용도에 사용될 수 있다.

한 구체예에서, 조합 제품은 본원에서 논의된 바와 같이, 임신율의 개선, 임신성과의 개선, 또는 남성 피험자에서 생기는 자유 라디칼에 의한 정자손상의 감소를 위해 사용된다.

본 발명의 다양한 조합 제품에서, 항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 앰플, 보틀, 또는 바이알과 같은 적합하게 멸균된 용기에 다회-용량 형태로 또는 단위 제형으로 개별적으로 포장될 수 있다. 용기는 일반적으로 충전 후 밀폐식 밀봉된다. 또는 달리, 하나 이상의 성분을 동시-투여하기에 알맞게 여러 성분이 함께 포장될 수도 있다. 여러 성분을 포장하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다.

한 구체예에서, 항산화제와 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 단일 조제의 형태로 조성물로서 피험자에게 투여된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 하기 (i) 및 (ii)를 포함하는 조성물을 제공한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

조성물은 본원에 설명된 본 발명의 다양한 용도에 사용될 수 있다.

한 구체예에서, 조성물은 본원에서 논의된 바와 같이, 임신율의 개선, 임신성과의 개선, 또는 남성 피험자에서 생기는 자유 라디칼에 의한 정자손상의 감소를 위해 사용된다.

앞서 본원에서 논의된 대로, 한 구체예에서, 남성 생식관 염증 감소제는 또한 백혈구의 증식을 억제한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 임신율의 개선, 임신성과의 개선, 남성 피험자에서 생기는 자유 라디칼에 의한 정자손상의 감소를 위한 것과 같은, 본원에 설명된 본 발명의 다양한 용도를 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

적합한 조성물(OSMI 조제라고 한다)은 다음과 같다:

비타민 E(d-알파-토코페릴아세테이트) 400 I.U.;

비타민 C(아스코르브산 또는 그것의 염) 100mg;

리코펜 6mg;

코엔자임 Q10 40mg;

셀레늄 26㎍;

아연 25mg; 및

마늘 오일 1000mg, 또는 상기 성분들의 대략의 상기 양을 갖는 조성물.

상기 조제(건강기능식품)는, 예를 들어 피험자에의 경구송달에 알맞은 캡슐의 형태로 투여될 수 있다.

본 발명의 다양한 구체예의 조성물 또는 조합 제품의 피험자에의 투여는 또한 다른 제제의 개별 투여 또는 동시-투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 남성 피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자손상의 정도를 감소시키기 위한 정자기능 강화제 및/또는 세포 DNA 합성에 연루되는 제제가 또한 피험자에게 투여될 수 있다. 정자기능을 개선하고 세포 DNA 합성에서 중요한 역할을 하는 제제의 예는 엽산염이다. 정자기능을 증대시키는 제제의 예는 L-카르니틴이다.

엽산염을 포함하는 적합한 조제(Menevit 조제라고 한다)는 다음과 같다:

비타민 E(d-알파-토코페릴아세테이트) 400 I.U.

비타민 C(아스코르브산 또는 그것의 염) 100mg

리코펜 6mg

엽산염 500㎍

셀레늄 26㎍

아연 25mg

상기 조제(건강기능식품)는, 예를 들어 피험자에의 경구송달에 알맞은 캡슐의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조제는 또한 코엔자임 Q10을 40mg 포함할 수 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 다음의 성분들을 포함하는 조성물을 제공한다:

비타민 E;

비타민 C, 또는 그것의 염;

리코펜;

셀레늄;

아연; 및

500mg 이상의 마늘, 또는 마늘 추출물 또는 오일; 상기 조성물은 선택적으로 엽산 또는 그것의 염, 및/또는 코엔자임 Q10; 또는 전술한 것들 중 어느 것의 제약학적으로 허용되는 유도체를 더 포함한다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 피험자에 대한 항산화제의 투여, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여는 임신율 또는 임신성과의 개선, 또는 자유 라디칼에 의한 정자손상의 감소와 같은, 원하는 결과를 행할 수 있는 적합한 형태일 것이다. 투여되는 항산화제 및 나머지 다른 제제들의 각각의 유효량은 그것이 일반적으로 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 나타내는 양 및 형태인 한 특별히 한정되지 않는다.

이와 관련하여, 항산화제와 나머지 다른 제제(들)의 유효량은, 예를 들어 치료될 감소된 수정능력의 종류 및 정도, 피험자의 연령 및 체중, 투여빈도, 및 다른 활성제들의 존재에 따라서 적합하게 선택될 수 있다.

한 구체예에서, 항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여빈도는 1일 1회 투여이다.

한 구체예에서, 투여섭생의 지속기간은 6주 이상이다. 다른 구체예에서, 투여섭생의 지속기간은 10주 이상이다. 더 이상의 구체예에서, 투여섭생의 지속기간은 12주 이상이다.

이와 관련하여, 다음의 조제들 중 어느 하나에 대한 적합한 투여섭생은 12주의 기간 동안 다음의 조제들 중 하나를 1일 1회 투여하는 것이다:

OSMI 조제:

비타민 E(d-알파-토코페릴아세테이트) 400 I.U.

비타민 C(아스코르브산 또는 그것의 염) 100mg

리코펜 6mg

코엔자임 Q10 40mg

셀레늄 26㎍

아연 25mg

마늘 오일 1000mg

Menevit 조제:

비타민 E(d-알파-토코페릴아세테이트) 400 I.U.

비타민 C(아스코르브산 또는 그것의 염) 100mg

리코펜 6mg

엽산염 500㎍

셀레늄 26㎍

아연 25mg

마늘 오일 1000mg

그러나, 본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제와 나머지 다른 제제들의 투여는 바람직한 효과를 야기하는데 적합한 어떤 시간 및 빈도의 범위 내에서 이루어질 수 있음이 인정된다. 항산화제와 나머지 다른 제제들은 경구, 비경구, 국소 또는 어떤 다른 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 제제들의 조제 및 그것의 투여는 본 분야에 공지된 적합한 방법에 의해 달성될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제 및 다른 제제들의 투여는 또한 투여될 여러 제제의 특정한 물리화학적 특성을 고려하여, 제약학적으로 허용되는 염, 아미노산, 폴리펩티드, 폴리머, 용매, 버퍼, 부형제 및 벌크화제를 포함하는 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 첨가제의 사용을 포함할 수 있다.

예를 들어, 항산화제 및 나머지 다른 제제들은, 예를 들어 수성 용액, 유성 조제물, 지방질 에멀젼, 에멀젼, 젤 등의 형태의 다양한 제약 조성물로 개별적으로 또는 함께 제조될 수 있으며, 이들 조제물은 근육내 또는 피하 주사로서, 또는 기관(심장을 포함하는)에 대한 주사로서, 또는 비강, 직장, 폐 등을 통한 내식형 조제물로서 또는 경점막 조제물로서 투여될 수 있다.

앞서 본원에서 논의된 대로, 본 발명의 다양한 구체예에서 제제들은 경구 조제물(예를 들어, 정제, 캡슐, 과립 또는 분말 등의 고상 조제물; 시럽, 에멀젼 또는 현탁액 등의 액상 조제물)의 형태로 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제와 나머지 다른 제제들을 개별적으로 또는 함께 함유하는 조성물은 또한 보존제, 안정제, 분산제, pH 조절제 또는 등장제를 함유할 수 있다. 본 발명의 다양한 구체예에서, 적합한 보존제의 예는 글리세린, 폴리에틸렌글리콜, 페놀 또는 벤질알코올이다. 본 발명의 다양한 구체예에서, 적합한 안정제의 예는 덱스트란, 젤라틴, a-토코페롤아세테이트 또는 알파티오글리세린이다. 본 발명의 다양한 구체예에서, 적합한 분산제의 예는 폴리옥시에틸렌(20), 소르비탄모노올레에이트(Tween 80), 소르비탄세스퀴올레에이트(Span 30), 폴리옥시에틸렌(160) 폴리옥시프로필렌(30) 글리콜(Pluronic F68) 또는 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 60을 포함한다. 본 발명의 다양한 구체예에서, 적합한 pH 조절제의 예는 염산, 수산화나트륨 등을 포함한다. 적합한 등장제의 예는 글루코오스, D-소르비톨 또는 D-만니톨이다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제 및 나머지 다른 제제들은 또한 투여될 항산화제 및 나머지 다른 제제들의 물리화학적 특성을 고려하여, 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제, 현탁제, 윤활제, 애쥬번트, 비히클, 송달시스템, 유화제, 붕해제, 흡수제, 보존제, 계면활성제, 착색제, 향미제 또는 감미제를 함유하는 조성물의 형태로 개별적으로 또는 함께 투여될 수 있다.

이들 목적을 위하여, 제제들은 경구, 비경구, 흡입 스프레이에 의해, 흡착, 흡수, 국소, 직장, 비강, 구강 경로, 종래의 제약학적으로 허용되는 비독성 담체를 함유하는 제형의 이식된 저장소에 의해, 또는 어떤 다른 편리한 제형에 의해 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "비경구"는 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 경막내, 흉골내, 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다.

비경구적으로 투여될 때, 항산화제 및 나머지 다른 제제들은 일반적으로, 제약학적으로 허용되는 담체를 사용하여 수용자의 혈액과 전형적으로 등장성으로 만든 멸균된 주사가능한 형태(용액, 현탁액 또는 에멀젼)의 단위 제형으로 개별적으로 또는 함께 투여된다. 이러한 멸균된 주사가능한 형태의 예는 멸균된 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액이다. 이들 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제와 현탁제를 사용하여 본 분야에 공지된 기술에 따라서 조제될 수 있다. 멸균된 주사가능한 형태는 또한, 예를 들어 1,3-부탄디올에 용해된 용액과 같은, 비경구적으로 허용되는 비독성 희석제 또는 용매의 주사가능한 멸균 용액 또는 현탁액일 수 있다. 본 발명의 다양한 구체예에서, 사용가능한 허용되는 비히클 및 용매는 특히 물, 식염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 염화나트륨 등장용액, 및 행크액이다. 추가하여, 멸균된 불휘발성 오일이 용매 또는 현탁매질로서 종래부터 사용되고 있다. 이 목적을 위하여, 합성 모노- 또는 다이-글리세라이드, 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 및 참기름을 포함하는 어떤 불휘발성 오일 블렌드가 사용될 수 있다. 에틸렌올레에이트, 이소프로필미리스테이트, 및 올레산 및 그것의 글리세라이드 유도체와 같은 지방산들은, 올리브유 및 피마자유를 포함해서, 특히 그것의 폴리옥시에틸화된 버전으로서 주사가능한 조제물에서 유용하다. 이들 오일 용액 또는 현탁액은 또한 장쇄 알코올 희석제 또는 분산제를 함유할 수 있다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 담체는, 예를 들어 버퍼 및 보존제 등, 용해성, 등장성, 및 화학적 안정성을 증진시키는 물질과 같은 첨가제를 소량 함유할 수 있다.

경구 투여될 때, 항상화제 및/또는 나머지 다른 제제들은 일반적으로 본 분야에 알려진 종래의 장치 및 기술을 이용하여, 정제, 교갑, 분말, 과립, 비즈, 저작가능한 마름모형 정제, 캡슐, 액체, 수성 현탁액 또는 용액, 또는 유사한 제형과 같은 단위 제형으로 조제된다. 이러한 조제는 전형적으로 고상, 반고상, 또는 액상 담체를 포함한다. 전형적인 담체는 락토오스, 덱스트로스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 녹말, 아카시아 검, 인산칼슘, 미네랄오일, 코코아버터, 카카오오일, 알기네이트, 트래거캔스, 젤라틴, 시럽, 메틸셀룰로오스, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 마그네슘 스테아레이트 등을 포함한다.

정제는 항산화제 및/또는 나머지 다른 제제들을 선택적으로 하나 이상의 보조 성분들과 함께 압착 또는 몰딩함으로써 제조할 수 있다. 압착 정제는 선택적으로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 표면활성제, 또는 분산제와 혼합된, 분말 또는 과립과 같은 자유-유동 형태의 활성 성분을 적합한 기계에서 압착함으로써 제조할 수 있다. 몰딩 정제는 불활성 액상 희석제로 축축하게 만든 분말 활성 성분과 적합한 담체의 혼합물을 적합한 기계에서 몰딩함으로써 제조할 수 있다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제 및/또는 나머지 다른 제제들의 투여는 또한 제어방출 기술을 이용할 수 있다. 항산화제 및/또는 나머지 다른 제제들은 또한 지속-방출 제약으로서 투여될 수 있다. 지속-방출 효과를 더 증가시키기 위하여, 항산화제 및/또는 나머지 다른 제제들은 다음과 같은 추가 성분들과 함께 조제될 수 있다: 식물유(예를 들어, 대두유, 참기름, 동백유, 피마자유, 땅콩유, 평지씨유); 중급 지방산 트라이글리세라이드; 에틸올레에이트와 같은 지방산 에스테르; 폴리실록산 유도체; 또는 달리, 수용성 고분자량 화합물, 예를 들어 히알루론산 또는 그 염(중량평균 분자량: 약 80,000 내지 2,000,000), 카르복시메틸셀룰로오스나트륨(중량평균 분자량: 약 20,000 내지 400,000), 히드록시프로필셀룰로오스(2% 수성용액 중의 점도: 3 내지 4,000 cps), 아테로콜라겐(중량평균 분자량: 약 300,000), 폴리에틸렌글리콜(중량평균 분자량: 약 400 내지 20,000), 폴리에틸렌옥시드(중량평균 분자량: 약 100,000 내지 9,000,000), 히드록시프로필메틸셀룰로오스(1% 수성용액 중의 점도: 4 내지 100,000 cSt), 메틸셀룰로오스(2% 수성용액 중의 점도: 15 내지 8,000cSt), 폴리비닐알코올(점도: 2 내지 100 cSt), 폴리비닐피롤리돈(중량평균 분자량: 25,000 내지 1,200,000).

또는 달리, 본 발명의 다양한 구체예에서, 항산화제 및 나머지 제제들은 개별적으로 또는 함께 어떤 기간에 걸친 제어방출을 위해 소수성 폴리머 매트릭스에 통합될 수 있다. 다음에, 항산화제 및/또는 나머지 제제들은 잦은 재투약의 필요 없이 항산화제와 나머지 제제들 중 어느 하나 또는 이들 모두를 연장된 시간 기간에 걸쳐 효과적인 농도로 제공하는데 적합한, 고상 임플란트, 또는 외부 도포용 패치로 성형될 수 있다. 이러한 제어방출 필름은 본 분야에 잘 공지되어 있다. 이 목적을 위해 보편적으로 사용될 수 있는 폴리머의 다른 예들은 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체를 포함하며, 이것들은 외부적으로 또는 내부적으로 사용될 수 있다. 또한, 폴리(히드록시에틸메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)과 같은 어떤 하이드로겔이 유용할 수 있지만, 이것들은 상기 언급된 것들과 같은 다른 폴리머 방출 시스템에 비해 더 짧은 방출 사이클에 알맞다.

본 발명의 다양한 구체예에서, 담체는 또한 적합한 시간 방출특성 및 방출반응속도를 가진 고체 생분해성 폴리머 또는 생분해성 폴리머들의 혼합물일 수 있다. 다음에, 항산화제 및/또는 나머지 제제들은 잦은 재투약의 필요 없이 항산화제 및/또는 나머지 제제들의 효과적인 농도를 연장된 시간 기간에 걸쳐 제공하는데 적합한 고상 임플란트로 성형될 수 있다. 항산화제 및/또는 나머지 제제들은 당업자에게 공지된 어떤 적합한 방식으로 생분해성 폴리머 또는 폴리머 혼합물에 통합될 수 있으며, 생분해성 폴리머와 균질 매트릭스를 형성할 수도 있고, 또는 폴리머 안에 어떤 방식으로 캡슐화될 수도 있고, 또는 고상 임플란트로 성형될 수도 있다.

본 발명의 다양한 구체예에서는 항산화제 및/또는 나머지 제제들의 다른 송달 방법도 고려된다는 것이 또한 인정되어야 한다. 예를 들어, 항산화제 및/또는 나머지 제제들이 단백질 종일 경우, 이것들은 개별적으로 또는 함께 적합한 표적세포에서 발현되는 핵산 또는 백터에 의해 송달될 수 있다. 예를 들어, 이것들은 남성 생식관의 표적세포에서 발현되는 바이러스 벡터에 의해 송달될 수 있다. 효소 항산화제의 예는 수퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제 및 글루타치온 퍼옥시다제를 포함한다.

앞서 본원에서 논의된 대로, 본 발명은 또한 남성 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼의 발생을 줄이는데 적합하다.

이와 관련하여, 남성 생식관은 부고환, 음경, 전립선, 정낭, 고환, 정관, 및 정액을 포함하는 것으로 이해된다.

남성 생식관의 자유 라디칼 수준을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 정자 또는 정액의 백혈구에 의한 자유 라디칼 생성이 화학발광분석(Kobayashi 등 (2001) J Androl 22(4):568-74에 설명됨)을 이용하여 직접 측정될 수 있다. 또는 달리, 정자 지질막의 손상과 관련된 자유 라디칼을 측정하는 분석법이 사용될 수 있다. 예를 들어, TBAR 분석법(이것은 정자 막 산화의 마커인 말론다이알데하이드의 측정을 포함한다) 또는 LPO-586 분광광도 분석법이 사용될 수 있다. 이들 방법은 Gomez 등 (1998) International Journal of Andrology 21(2): 81-96 및 Aitken 등 (1993) Molecular Reproduction and Development 35:302-315에 설명된다.

한 구체예에서, 자유 라디칼은 남성 생식관 및/또는 정액에 존재하는 백혈구 및/또는 정자에 의해 생성된다.

적합한 항산화제의 예는 앞서 본원에 설명된 바와 같다. 백혈구 사이토카인 생산 억제제, 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 예도 앞서 본원에 설명된 바와 같다.

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제의 유효량 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 양은 그것이 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 제제들의 적합한 농도는 앞서 본원에 설명된 바와 같다.

항산화제 및 나머지 다른 제제들의 유효량은, 예를 들어 치료될 감소된 수정능력의 종류 및 정도, 피험자의 연령 및 체중, 투여빈도, 및 다른 활성제들의 존재에 따라 적합하게 선택될 수 있다.

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 개별적으로 또는 조합하여 피험자에게 투여될 수 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼의 발생을 줄이기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

한 구체예에서, 항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 단일 조제 형태의 조성물로서 피험자에게 투여된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼의 발생을 줄이기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼의 발생을 줄이기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

적합한 조성물은 앞서 본원에 설명된 바와 같으며, 즉 OSMI 및 Menevit 조제이다.

항산화제의 투여 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여는 앞서 본원에서 설명된 바와 같다.

앞서 설명된 대로, 본 발명은 또한 남성 피험자의 생식관에서 백혈구의 활성 및/또는 농도를 줄이는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 백혈구의 활성 및/또는 농도를 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량은 고환 테스토스테론 증가제.

남성 생식관에서 밸혈구의 활성 및/또는 농도를 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 정액 세포 슬라이드 또는 CD45와 같은 백혈구 표면 항원에 대한 단클론성 항체의 퍼옥시다제 염색이 사용될 수 있다(Henkel 등 (2003) Andrologia 35(5):309-314에 설명됨). 또는 달리, IL-6과 같은, 산화 스트레스 및 정액 내의 백혈구 활성과 상관 있는 정액 사이토카인이 측정될 수 있다(Nallella 등 (2004) Urology 64(5):1010-3에 설명됨).

적합한 항산화제의 예는 앞서 본원에 설명된 바와 같다. 남성 생식관 염증 감소제, 및 고환 테스토스테론 농도 증가제의 예도 앞서 본원에 설명된 바와 같다.

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 유효량은 그것이 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

따라서, 또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 백혈구의 활성 및/또는 농도를 줄이기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 백혈구의 활성 및/또는 농도를 줄이기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관에서 백혈구의 활성 및/또는 농도를 줄이기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 남성 피험자의 생식관에서 염증성 사이토카인의 수준 및/또는 생산을 줄이는 등, 생식관에서 염증성 매개인자의 수준 및/또는 생산을 줄이는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 염증성 사이토카인의 수준 및/또는 생산을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

한 구체예에서, 염증성 사이토카인은 IL-1, IL-6, IL-8, TNF-α 및 인터페론-ν 중의 하나 이상이다.

남성 생식관에서 염증성 사이토카인의 수준을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 ELISA 분석을 이용하여 IL-1, IL-6, IL-8, TNF-α 및 인터페론-ν와 같은 전-염증성 사이토카인을 검출하며, 이것에 대해서는 Depuydt 등 (1996) J Andrology 17(6):699-707, Maegawa 등(2002) J Reprod Immunology 54:33-42, 및 Nallella 등 (2004) Urology 64(5):1010-3에 설명된다.

적합한 항산화제의 예는 앞서 본원에 설명된 바와 같다. 남성 생식관 염증 감소제 및 고환 테스토스테론 농도 증가제의 예도 앞서 본원에 설명된 바와 같다.

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 유효량은 그것이 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 염증성 사이토카인 생산을 줄이기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 염증성 사이토카인 생산을 줄이기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 생식관에서 염증성 사이토카인 생산을 줄이기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

본 발명은 또한 남성 피험자에서 정자기능을 개선하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자기능을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 것을 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

이와 관련하여, 용어 "정자기능"은 정자생리학의 어떤 중요한 구성요소로서, 난모세포를 향한 유영 활성(운동성), 난모세포의 외막(투명대)으로 침투하여 난모세포 막과 융합할 수 있도록 수정능을 갖추는 능력, 및 유성생식시에 기능적 남성 생식핵을 형성할 수 있도록 정자 DNA 완전성의 유지를 포함한다.

정자의 수준을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 적합한 방법들이 세계보건기구(WHO)의 사람 정액 및 정자-경관점액 상호작용 시험에 관한 실험 매뉴얼(4판, Cambridge University Press, 1999)에 상세히 설명된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자기능을 개선하기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자기능을 개선하기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자기능을 개선하기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 정자운동성을 개선하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자운동성을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

정자운동성을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 적합한 방법들이 세계보건기구(WHO)의 사람 정액 및 정자-경관점액 상호작용 시험에 관한 실험 매뉴얼(4판, Cambridge University Press, 1999)에 상세히 설명된다.

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제의 유효량 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 유효량은 그것이 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자운동성을 개선하기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자운동성을 개선하기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자운동성을 개선하기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 정자가 지닌 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

정자 DNA 운동성의 손상을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 정자 염색질구조 분석(SCSA), Comet 및 Tunel 분석이 모두 정자 DNA의 손상을 측정하는데 사용될 수 있으며, 이것에 대해서는 Evenson 등 (2002) J Andrology 23(1):25-43 및 Shen 등 (2000) Free Radical Biol Med 28(4):529-36에 설명된다.

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은 그것이 바람직한 효과 또는 치료학적 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

한 구체예에서, 본 발명의 이 형태는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여를 포함하지 않는다.

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i)과 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

한 구체예에서, 조성물은 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여를 포함하지 않는다.

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 정자생산을 개선하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자생산을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

정자생산을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자생산을 개선하기 위한 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자생산을 개선하기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자생산을 개선하기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따라서 치료된 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아에서 배아의 질을 개선하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 질을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

이와 관련하여, 용어 "배아의 질"은 지속가능한 임신을 형성할 수 있는 배아 잠재력의 척도로서 이해된다. 배아 형태가 배아 질의 가장 좋은 지시자라고 일반적으로 고려된다. 배아생성 후 2-3일째에, 배아 내 분할구의 수, 이것들의 서로에 대한 상대적 크기, 세포질 단편화 정도 및 핵 형태와 같은 형태학적 특징들이 모두 임신 가능성의 훌륭한 지시자들인 것으로 고려된다(Rienzi 등 (2005) Reproductive Biomedicine Online 10(5):669에 설명됨). 또한, 분할기(2-3일령)에서 포배(5일된 배아)로 진행하는 능력이 양질의 배아에 대한 마커로서 고려된다(Borini 등 (2005) Reproductive Biomedicine Online 10(5):653-658에 설명됨).

배아는 자연임신으로 생산된 배아, 또는 생식보조기술, 예를 들어 시험관수정, 배우자난관내이식술(GIFT), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)에 의해서 생산된 배아일 수 있다. 배아를 생산하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 생산된 분리된 배아, 및 상기 배아로부터 발생한 인간이 아닌 동물을 제공한다.

이렇게 생산된 개선된 질을 가진 배아는 또한 냉동 및 해동의 영향을 더 잘 견딜 수도 있다. 따라서, 본 발명은 또한 유효량의 항산화제와 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제로 치료된 남성 피험자로부터 분리된 정자로 난모세포를 수정시킴으로써 배아의 냉동보존을 개선하는 방법까지 확장된다.

배아는 인간 배아일 수도 있고, 또는 포유동물 배아, 예를 들어 영장류, 가축류(예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소), 반려동물(예를 들어, 개, 고양이), 연구시험용 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 기니아피그)의 배아일 수 있다. 한 구체예에서, 배아는 인간 배아이다.

따라서, 본 발명의 이 형태는 사람 및 동물에서 자연임신 목적 및 보조임신 목적을 위한 배아 질의 개선에 사용될 수 있음이 인정된다.

배아의 질을 측정하는 방법은 본 분야에 공지되어 있으며, 앞서 논의된 바와 같다.

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은 그것이 배아의 질을 개선하는 바람직한 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은, 예를 들어 피험자의 연령 및 체중, 투여빈도, 및 다른 활성제들의 존재에 따라 적합하게 선택될 수 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 질을 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 질을 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 또한 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 질을 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 발생단계를 개선하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 발생단계를 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

배아는 자연임신으로 생산된 배아, 또는 생식보조기술, 예를 들어 시험관수정, 배우자난관내이식술(GIFT), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)에 의해서 생산된 배아일 수 있다. 생식보조기술에 의해 배아를 생산하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 상기 형태에 따라 생산된 분리된 배아를 제공한다.

따라서, 본 발명의 이 형태는 사람 및 동물에서 자연임신 목적 및 보조임신 목적을 위한 배아 발생단계의 개선에 사용될 수 있음이 인정된다.

배아 발생단계를 평가하는 방법은 본 분야에 공지되어 있으며, 배아의 질과 관련하여 앞서 논의된 바와 같다.

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은 그것이 배아 발생단계를 개선하는 바람직한 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 발생단계를 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 발생단계를 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 또한 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 발생단계를 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

항산화제의 투여 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여는 앞서 설명된 바와 같다.

또한, 본 발명은 피험자의 아버지에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상으로 인한 피험자에서의 DNA 손상도를 줄이는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 피험자의 아버지에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상으로 인하여, 피험자의 아버지로부터 유전된 피험자의 DNA 손상도를 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피험자의 임신 전에 아버지에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

본 발명의 상기 형태는 남성 피험자의 자손에서 DNA 손상을 줄이는데 유용하다. 자손은 자연생식 또는 시험관수정, 배우자난관내이식술(GIFT), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)과 같은 보조생식기술에 의해 생길 수 있다.

본 발명의 이 형태는 자손의 임신 전에 피험자에게 다양한 제제를 투여함으로써 사람 및 동물에서 자손의 DNA 손상을 줄이는데 사용될 수 있음이 인정된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 자유 라디칼에 의한 남성 피험자의 정자 DNA 손상의 유전으로 인한, 남성 피험자 자손에서의 DNA 손상도를 줄이는 방법을 제공하며, 상기 방법은 자손의 임신 전에 상기 남성 피험자에게 하기한 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

피험자에서 DNA 손상도를 평가하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 정자 염색질구조 분석(SCSA), Comet 및 Tunel 분석이 모두 정자 DNA의 손상을 측정하는데 사용될 수 있으며, 이것에 대해서는 Evenson 등 (2002) J Andrology 23(1):25-43 및 Shen 등 (2000) Free Radical Biol Med 28(4):529-36에 설명된다.

항산화제, 및 나머지 제제들의 유효량은 그것이 바람직한 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우될 것이다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상으로 인한, 남성 피험자의 자손에서의 DNA 손상도를 줄이기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음의 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상으로 인한, 남성 피험자의 자손에서의 DNA 손상도를 줄이기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 또한 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상으로 인한, 남성 피험자의 자손에서의 DNA 손상도를 줄이기 위해 남성 피험자에게 투여되는 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 피험자의 아버지에서 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상과 관련된 피험자에서 발생하는 질환 또는 상태를 예방하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 정자 DNA의 자유 라디칼에 의한 손상으로 인하여 피험자의 아버지로부터 유전된 DNA 손상과 관련된, 피험자의 질환 또는 상태를 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피험자의 임신 전에 피험자의 아버지에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

본 발명의 이 구체예는 남성 피험자의 자손에서 질환 또는 상태를 예방하는데 유용하다. 아버지의 정자 DNA 손상은 이 DNA 손상이 자손에게 유전될 수 있으며(전-접합체 유전손상), 이것은 궁극적으로 자손에서 질환 또는 상태의 발생을 일으킬 수 있거나, 또는 최소한 발생에 기여할 수 있다. 인정되는 바와 같이 아버지는 자손의 임신 전에 치료된다.

본 발명의 이 구체예가 사람 또는 동물에서 질환을 예방하는데 사용될 수 있음이 인정된다. 피험자의 아버지에서 정자 DNA의 자유 라디칼 손상과 관련된 질환 및 상태의 예는 급성 림프구성 백혈병과 같은, 다양한 종류의 암을 포함한다.

한 구체예에서, 질환 또는 상태는 소아암, 예를 들어 15세 이전에 개시되는 소아암이다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼 손상과 관련된 남성 피험자의 자손에서 발생하는 질환 또는 상태를 예방하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼 손상과 관련된 남성 피험자의 자손에서 발생하는 질환 또는 상태를 예방하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 정자 DNA의 자유 라디칼 손상과 관련된 남성 피험자의 자손에서 발생하는 질환 또는 상태를 예방하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 수정능력을 개선하는데 적합하다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 수정능력을 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

이 방법은 또한 남성 피험자에서 불임을 치료하는데 사용될 수 있음이 인정된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 불임을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

이 구체예는 사람 및 동물에서 수정능력을 개선하는데 사용될 수 있음이 인정된다. 추가하여, 수정능력의 개선은 시험관내 또는 생체내에서 난모세포를 수정시키는 것에 대한 개선에 관한 것이다.

남성 수정능력을 평가하는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 일반적인 IVF (비 ICSI)가 시험관내에서 난모세포를 수정시키는 정자의 능력에 대한 우수한 시험을 제공한다. 정상적인 수정률은 60-70%이며, 더 낮은 수정률은 정자 또는 난모세포 기능에 문제가 있음을 시사한다. 정자-난모세포 수정능력에 대한 다른 시험관내 시험은 정자-투명대(ZP) 결합 시험 및 ZP-유도 첨단체반응 시험을 포함한다(Liu de 등 (2004) Fert Stenl 82(5):1251-630).

적합한 항산화제의 예는 앞서 설명된 바와 같다. 남성 생식관 염증 감소제, 및 고환 테스토스테론 농도 증가제의 예도 앞서 설명된 바와 같다.

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은 그것이 바람직한 효과를 가지는 한 특별히 한정되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우된다. 항산화제 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 피험자에게 개별적으로 또는 조합하여 투여될 수 있다.

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은, 예를 들어 피험자의 연령 및 체중, 투여빈도, 및 다른 활성제들의 존재에 따라서 적합하게 선택될 수 있다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 수정능력을 개선하기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

상기 조합 제품은 또한 남성 피험자에서 불임을 치료하는데 사용될 수 있음이 인정된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 수정능력을 개선하기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

상기 조성물은 또한 남성 피험자에서 불임을 치료하는데 사용될 수 있음이 인정된다.

따라서, 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 불임을 치료하기 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 하기 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

적합한 조성물은 앞서 설명된 바와 같으며, 즉 OSMI 및 Menevit 조제이다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 남성 피험자에서 수정능력을 개선하고 및/또는 불임을 치료하기 위한 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

항산화제의 투여, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여는 앞서 설명된 바와 같다.

또한, 항산화제의 투여, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여는 남성 피험자에서 테스토스테론 수준을 증가시키는데 적합할 수 있다는 것이 인정되었다.

따라서, 본 발명은 또한 남성 피험자에서 테스토스테론 농도를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 남성 피험자에게 하기 (i) 및 (ii)를 투여하는 단계를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

항산화제 및 나머지 제제들의 유효량은 그것이 바람직한 효과를 가지는 한 특별히 제한되지 않으며, 투여될 특정한 제제들에 좌우된다. 항산화 및 나머지 제제들의 적합한 농도는 앞서 설명된 바와 같다.

따라서, 본 발명은 또한 남성 피험자에서 테스토스테론 농도를 증가시키기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조합 제품을 제공하며, 상기 조합 제품은 다음 성분들을 포함한다:

항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제;

항산화제, 및 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제는 단일 조제 형태의 조성물로서 피험자에게 투여될 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 남성 피험자에서 테스토스테론 농도를 증가시키기 위해 남성 피험자에게 투여되는 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 (i) 및 (ii)를 포함한다:

(i) 유효량의 항산화제; 및

테스토스테론 농도를 증가시키기 위한 적합한 조성물은 앞서 설명된 바와 같으며, 즉 OSMI 및 Menevit 조제이다.

또한, 본 발명은 남성 피험자에서 테스토스테론 농도를 증가시키기 위해 남성 피험자에게 투여되는 의약의 제조에서, 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제와 조합된 항산화제의 사용을 제공한다.

바람직한 구체예의 설명

이제 본 발명의 상술한 일반적인 원리를 구현하는 실험에 대해서 언급할 것이다. 그러나, 다음 설명이 상기 설명의 보편성을 제한하지 않는다는 것이 이해되어야 한다.

실시예 1

기지의 자유 라디칼 손상을 가진 남성 피험자 그룹에서 OSMI 건강기능식품을 시험하기 위한 실험

기지의 자유 라디칼 손상을 가진 남성 그룹에서 OSMI 건강기능식품의 유용성을 시험하기 위한 소규모(n=17) 파일럿 연구를 수행하였다. 불임 남성들을 Gomez 등 (1998) International Journal of Andrology 21(2):81-96에 설명된 TBARS 분석을 이용하여 자유 라디칼 손상에 대해 스크리닝하였다. 정자 막 산화의 마커인 말론다이알데하이드(MDA)의 수준이 상당히 상승된 것으로 판명된 남성들이 실험에 등록되었다. 모든 환자는 활성 OSMI 의약(즉, 위약이 아닌)을 12주 동안 받았다.

OSMI 조제는 다음과 같다:

비타민 E(d-알파-토코페릴아세테이트) 400 I.U.

비타민 C(아스코르브산 또는 그것의 염) 100mg

리코펜 6mg

코엔자임 Q10 40mg

셀레늄 26㎍

아연 25mg

마늘 오일 1000mg

상기 조제는 캡슐로 제공되었으며, 1회 1 캡슐이 경구 투여된다.

실험기간 동안 정자 수, 정자운동성, 정자 막 완전성 및 정자 DNA 손상에 있어서의 변화를 분석하였다(등록일, 6주, 12주 시간 지점). 추가하여, 자유 라디칼 손상으로 인한 정자 막 지질 과산화의 어떤 변성을 검출하기 위해 MDA 수준의 변화를 모니터하였다.

정자 수 및 정자이동성은 세계보건기구(WHO)의 사람 정액 및 정자-경관점액 상호작용 시험에 관한 실험 매뉴얼(4판, Cambridge University Press, 1999)에 상세히 설명된 일반적인 실험기술들에 의해 평가하였다.

정자생명력(막 완전성)은 완전한 정자 막을 가진 정자 비율을 측정하는 HOST 시험에 의해 평가하였으며, 이것에 대해서는 세계보건기구(WHO)의 사람 정액 및 정자-경관점액 상호작용 시험에 관한 실험 매뉴얼(4판, Cambridge University Press, 1999)에 상세히 설명된다.

정자 DNA의 손상은 Lachaud 등 (2004) Hum Reprod 19(3):607-10에 의해 설명된 대로, 제자리 세포사 검출 키트, 플루오레세인(Roche Diagnostics)을 사용하여 정자 단편화(TUNEL) 분석에 의해 평가하였다. 간단히 말해서, 90% 퍼콜 분별하여 세정한 정자를 현미경 슬라이드 도말표본을 만들어 4% 파라포름알데하이드에 고정시키고, 퍼미어빌라이제이션(0.1% 트리톤 엑스, 0.1% 구연산나트륨)한 다음, TUNEL 인큐베이션 버퍼와 TdT 효소 말단 트랜스페라제 중에서 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하고, PBS 중에서 확실히 세척하여, 10㎍/mL 핵 프로피디움 요오드화물로 대조염색하였다.

다음에, 슬라이드를 Nikon TE2000E 에피-형광 현미경을 사용하여 처리하고, FITC 필터 여기 465-495nm, Barrier 필터 515-555nm, 사멸 채널 형광에 대한 505nm 색 선별 거울 및 PI 필터 여기 540-625nm, Barrier 필터 605-655nm, 565nm 색 선별 거울을 이용하는 Roper CS CCD 카메라로 영상화했다.

총 약 200개 이상의 세포가 무작위로 분석되었으며, 여러 장의 캡처 이미지들과 TUNEL 녹색 사멸 핵 형광을 적색 핵 PI 형광 위에 그래픽 방식으로 지도화하고, 중복되는 포지티브 스코어를 Scanalytics IP 랩 소프트웨어를 사용하여 개별적으로 정량한다. 단편화된 DNA를 가진 집단 내의 정자에 대한 최종 평균 퍼센트를 계산하고, 이것을 TUNEL % 라고 하여 기록하며, 3 미만의 평균 분석내 SEM이 발생한다.

정자 지질 과산화는 Gomez 등(1998) International Journal of Andrology 21 (2):81-96에 설명된 TBARS 분석에 의해 평가하였다.

12주 마크에 의한 이 연구의 결과는 다음과 같았다:

1. 운동성 있는 정자 수가 두배가 됨(25600만에서 53600만 마리), 도 1에 나타낸다.

2. HOST 시험에 의해 평가한 정자생명력의 현저한 개선(58% 대 67%). 자유 라디칼 손상 수준이 높을수록 HOST 퍼센트는 낮아진다. 이 데이터는 도 2에 나타낸다.

3. 정자 DNA 손상의 현저한 저하(28.8%에서 19.8%), 도 3에 나타낸다.

4. MDA의 감소, 자유 라디칼에 의한 정자 막 지질 과산화 손상의 감퇴를 반영, 도 4에 나타낸다.

실험의 중간-지점(6주) 시기까지는 정자 파라미터들이 약간 개선되었고, 완전히 유익한 효과는 12주에 달성되었다는 사실을 주목한다.

실시예 2

임신 및 IVF 배아 질에 대한 OSMI 건강기능식품의 효과

임신 및 IVF 배아 질이 초기 OSMI 실험의 일차 종료점은 아니었다. 그러나, 일부 환자들이 자연적으로 또는 IVF 보조수단에 의해 임신하였다. OSMI 치료 전과 치료하는 도중에 IVF를 받은 환자들이 OSMI 건강기능식품이 배아 질에 어떤 영향을 미칠 수 있는지에 대한 척도를 제공했다.

커플 A는 이전에 질이 좋지않은 배아로 여러 번의 IVF를 받았었다(OSMI 전의 IVF 사이클에서는 8개 배아 중에서 어느 것도 포배를 형성하지 못했다). 그러나, OSMI 건강기능식품을 받는 도중에는 9개 배아 중 3개가 포배로 진행되었으며, 결국 여성 파트너가 임신되었다. 배아가 3일 이상 생존하려면 양질의 배아 DNA가 필요하므로 포배 발생은 정자 DNA 건강의 좋은 마커가 된다.

실시예 3

정자기능 및 IVF 치료 도중의 임신성과에 대한 항산화제 의약( Menevit

)의 효과를 조사하기 위한 무작위 대조시험

정자기능의 훼손은 모든 불임 사례의 반을 차지한다. 남성 20명 중에서 1명은 훼손된 정자기능을 가질 것으로 추정되며, 현재 미국에서는 1200만명의 남성이 남성 관련 불임을 경험하고 있다고 추정된다. 종래, 남성의 불임치료에서는 근본적인 불임원인을 개선하려고 노력하기보다는, 자궁내 정액주입 또는 IVF-ICSI와 같은 "의학적인" 기술을 사용하여 정자기능의 결함을 피해왔다. 이들 두 기술은 높은 비율의 환자들에서는 틀림없이 성공적이지만, 작업이 간단하지 않거나, 다른 커플들에서는 매우 제한된 효율을 가진다. 많은 사례에서 ART 치료에도 불구하고 정자 DNA 단편화가 불량한 임신성과를 초래할 가능성이 있다. 정자 DNA 단편화를 예방할 수 있는 치료가 자연임신율 및 ART 관련 임신율 모두를 증대시킬 수 있다.

정자 DNA 손상의 원인은 충분히 밝혀지지 않았다. 정자 단편화를 감소시킬 수 있는 약물치료학적 경로를 제공하기 위해 Menevit 건강기능식품이 개발되었다. Menevit의 내용물을 표 1에 개략적으로 나타낸다. 현재 가능성 있는 무작위 위약-대조 실험은 이 가설을 시험하기 위해 설계되었다.

연구 캡슐 성분

1. Menevit 활성 캡슐 리코펜 6mg 비타민 E 400 i.u. 비타민 C 1OOmg 아연 25mg 셀레늄 26㎍m 엽산염 0.5mg 마늘 1000 g 팜유(비히클)

2. 위약 캡슐 팜유

재료 및 방법

이 연구의 참가자들은 Repromed, 아델라이드 대학 생식의학센터에서 IVF 치료를 받고 있는 커플들로부터 모집되었다. 등록 남성으로서 적합하려면 등록된 정액 샘플의 불량한 운동성(Aitken 등, 1993)이나 좋지않은 HOST 시험결과에 의해 시사되는 아마도 산화와 관련된 정자손상을 가지든지, 흡연자(Saleh 등, 2002)든지, 아니면 정계정맥류(Pasqualotto 등, 2000) 및 상당한 정자 DNA 단편화(TUNEL 분석에서 25%를 초과하는 정자 DNA 단편화)를 가져야 했다. 추가하여, 이들 남성의 파트너들은 등록 3개월 이내에 자극된 IVF 사이클을 받고, 정상적인 난소예비력을 가져야 했다. 우리는 실험결과에 영향을 미칠 수 있는 불량한 난소예비력과 같은 여성 요인들은 원하지 않았으며, 그래서 40세 이상의 여성, 이전의 IVF 반응이 좋지 않았던 여성(5개 미만의 난모세포) 또는 상승된 초기 난포기 FSH 결과(10 iu/L 초과)를 나타낸 여성들을 모두 배제했다. 모집은 2004년 12월에 시작했으며, 실험은 2006년 4월에 완료되었다. 모집시작 전에 이 연구는 여성아동병원 연구윤리위원회에 의해 승인되었다. 인구통계, 수정능력 및 임신력, 그리고 이전 IVF 치료성과에 대한 정보를 모든 환자들에서 수집하였으며, 이것은 표 2에 나타낸 바와 같다.

등록자격을 갖춘 피험자들을 2:1의 비율로 활성 Menevit 건강기능식품 또는 위약에 무작위로 배정하였다. 이 무작위 배정은 실험 전 환자조사에서 참가자들의 50%가 활성 항산화제 치료를 받을 기회를 가졌었고, 대부분은 처방전 없이 구입할 수 있는 항산화제로 자체 보충할 수 있었다고 나타났을 때 필요하다고 생각되었다. 이것은 2:1의 활성 대 위약 배정에서는 좀 덜 그런 것 같았다. 이 무작위 일정은 베이어 컨슈머 케어 오스트레일리아(Bayer Consumer Care Australia)에 의해 6개의 블럭들에서 컴퓨터에 의해 발생하였고, 캡슐을 넣은 병에 적절하게 번호를 붙여 임상 장소로 송달하였으며, 어떤 임상 참가자도 치료 순서를 알지 못했다. 환자들은 등록자격을 갖추게 되었을 때 다음 번호의 치료 패키지(1-60)를 배정받았다. 활성 Menevit 및 위약은 외형과 맛이 동일하였다.

남성 참가자들은 파트너의 IVF 난자채취 3개월 전부터 시작하여 1일 1 캡슐을 식후 복용하도록 요청받았다. 모든 참가자들은 IVF 사이클이 지연된 경우를 대비해 4개월분의 의약을 받았다. 다음에, 정자기능의 변화를 모니터하기 위해 남성들은 6주 및 12주 마크에서 정액 샘플을 제공하도록 요청받았다. 이들 샘플은 3-5일간의 금욕기간 후 마스터베이션에 의해 생긴 것으로서, WHO 가이드라인에 따라서 정자 수, 정자운동성 및 정자형태에 대해 분석하였다. 추가하여, 정자 막 완전성을 측정하기 위한 저삼투팽창시험(HOST)을 WHO 정액분석 매뉴얼에 개략적으로 제시된 바에 따라 수행하였다. 나머지 샘플은 이후의 정자 DNA 단편화 및 산화성 손상의 분석을 위해 냉동보존제 없이 순수한 상태로 냉동하였다.

현미경 TUNEL 분석법(Lopes 등 (1998) Hum Reprod. 13(4):896-900)을 사용하여 정자 DNA 단편화를 평가하였다. 45%/90% 퍼콜 밀도구배를 통한 밀도구배 원심분리(2000rpm, 20분)를 이용하여 정자를 획득하고, 폴리라이신 슬라이드 위에 도말표본을 만든 다음, 공기 건조시켜 PBS 중의 4% 파라포름알데하이드에 고정시켰다. 다음에, 0.5% 트리톤 엑스-100을 사용하여 정자를 퍼미어빌라이제이션하고, PBS로 세척한 다음, 제조자(독일 만하임 로쉐)의 지시에 따라 말단 데옥시리보뉴클레오티딜 트랜스페라제-매개 dUTP 닉-엔드 표지(TUNEL)와 함께 인큐베이션했다. 도말표본을 다시 세척하고, 프로피디움 요오드화물로 정자 핵을 염색하여 형광현미경으로 평가하였다. 정액 샘플의 밀도구배 원심분리는 현미경 TUNEL 평가를 어렵게 만드는 자가-형광 활성을 갖는 정액파편을 제거하기 위해 중요했다. 영상분석 소프트웨어를 사용하여 슬라이드당 총 200마리의 정자를 평가하였고, 정자 DNA 단편화 퍼센트를 정자 핵(적색)의 총 수에 대한 TUNEL 양성 핵(녹색)의 수로서 계산하였다. 양성 대조군은 TUNEL 혼합물과 함께 인큐베이션하기 전에 3 iu DNAse와 함께 인큐베이션한 정자를, 음성 대조군은 반응에서 말단 트랜스페라제를 제거한 것을 사용하였다.

Gomez 등(1998) Int J Androl. 21(2):81-94의 프로토콜에 따라서 LPO-586 분석을 수행하였으며, Bioxytech SA(프랑스 보뇨이 쉬르 마른느)로부터 구입하였다. LPO-586 분석은 발색시약(N-메틸-2-페니틴돌)과 지질 과산화 부산물, 말론알데하이드 및 4-히드록시알켄알이 반응하여 560nm에서 최대 흡광도를 갖는 안정한 발색단을 형성하는 것에 기초한다. 대부분의 정자샘플은 지질 과산화에 대해 낮은 베이스라인 수준을 가지므로, 0.04M 황산철 이온 촉진제를 사용하여 분석감도를 개선하였다. 정자농도는 1 x 10⁶/mL로 표준화했는데, 예외적인 경우로 순수한 샘플에서는 정자 수가 1 x 10⁶/mL 미만이었다. 여기서는 수학적인 비례축소법을 사용하여 1 x 10⁶/mL 정자당 지질 과산화 수준을 계산하였다.

IVF 과정은 선행 사이클의 황체기 중기에서 시작되는 GnRH 작용제(나페릴린 아세테이트 또는 류프롤라이드 아세테이트)를 사용한 전형적인 장기적 하향조절 프로토콜로 구성되었다. 자극 사이클 2일째에 여성은 연령 및 이전 IVF 반응에 따라서 150-300 iu의 rFSH(Organon의 퓨레곤 또는 Serono의 고날-에프)를 시작하였다. 골반 초음파 및 혈청 에스트라디올에 의해서 난소반응을 추적하였고, 충분한 에스트라디올 반응과 함께 적어도 2개의 난포의 크기가 18mm를 초과했을 때 5000 IU의 hCG(Organon의 프레그닐)를 투여하였다. hCG를 투여하고 36시간 진정시킨 후 질식 난자채취를 수행하고, 이어서 표준 IVF 또는 ICSI 수정과정을 수행하였다. 분할기 배아를 종래의 형태학적 기준(분할구 모양, 단편화 수 및 퍼센트)에 따라 등급 매긴 다음, 난자채취 후 2 또는 3일째에 초음파로 안내하여 자궁에 돌려보냈다. 남은 양질의 배아는 3일째에 냉동하였고, 질이 좋지않은 배아는 6일 정도 배양한 후 그것을 버릴지 결정하였다. 이 실험에서 소수의 환자에 대해서는 선택적 포배 배양 및 전달이 사용되었다. 모든 환자는 난자채취 후 6일째에 크리논 8% 질 프로게스테론(Serono)과 hCG의 단일 500 IV 주입의 조합을 사용하여 황체기 보강되었다. 생리기간이 아니라면 난자채취 후 16일째에 혈청 임신테스트를 수행하였다. 먼저, 임신 8주에 7.5MHz Toshiba 질식 스캐너를 사용하여 3개월 임신 초음파를 수행하였다.

난자채취일에 남성 파트너에 의해 완성된 질문지에 의해 피험자 순응 및 부작용 모니터링을 평가하였다. 모든 참가자들은 한번이라도 있다면 얼마나 자주 약 복용을 빠뜨렸는지, 그리고 치료 동안 어떤 부작용을 인지했는지에 대해 질문받는다. 데이터는 남성의 의약 순응에 상관없이 "인텐션-투-트리트(ITT)" 방식으로 분석하였다.

이 실험의 1차 결과는 임신 가능성의 합당한 대용 마커인 IVF 사이클당 생성된 양질의 배아의 수였다. 우리 연구실에서의 이전 관찰은 높은 DNA 손상을 가진 남성들에서는 분할기 배아 질이 감소됨을 시사한바 있다. 평균적으로 우리 IVF 센터에서 40세 미만의 여성들은 IVF 사이클당 3.6개의 양질의 배아를 생산한다. 파일럿 관찰은 높은 수준의 DNA 단편화를 가진 남성에 의해서 단지 2개의 양질의 배아가 생산되었음을 시사했다. 다음에, 시작된 IVF 사이클당 1개의 양질의 배아의 최소한의 증가(2에서 3개까지의 양질의 배아)를 검출하기 위한 도수 분석을 수행하였다. 80%의 도수를 가정하고, 5% 유의성 수준 및 10% IVF 탈락률에서의 양면 시험하여, 60회의 IVF 사이클의 실험에 의하여 그룹 간 임상적으로 유의한 차이가 검출될 수 있었다. 2차 결과는 정자기능(수, 운동성, 형태, HOST 결과, 정자 DNA 단편화, 정자 지질 과산화) 및 IVF 성과(수정률, 배아 질, 임신율)를 포함했다.

데이터는 시판용 소프트웨어(Statistical Package for the Social sciences 11.5.1; SPSS, 미국 일리노이 시카고)를 사용하여 분석했다. 그룹 간 인구통계 및 수정능력 베이스라인 관련 변수들을 연속변수 언페어드 티-테스트 및 범주형 변수 Chi-스퀘어를 사용하여 분석했다. 실험 동안 환자들의 정자기능의 차이를 배아 질의 페어드 티-테스트 차이에 의해 분석했으며, 임신성과는 Chi-스퀘어 분석에 의해 분석했다. 0.05 미만의 p 값을 유의 값으로 고려하였다.

결과

실험에 등록하기 위해 총 82명의 남성을 스크린하였는데, 정자 DNA 손상 수준이 낮거나 산화성 스트레스의 증거가 없는 22명이 배제되었다. 6명의 연구 참가자는 IVF 치료(2명은 활성 약, 4명은 위약)를 그만두려고 결심했기 때문에 실험을 완료하지 못했다. 5명의 취소자 중 한 남성은 실험 의약을 계속 복용하고 연구분석용 정액 샘플을 생산하였다. 활성 의약에 속한 한 참가자는 ICSI 직후의 난자용해로 인해 전달에 이용할 수 있는 배아가 없었기 때문에 배아 전달에 이르지 못했다. 이 여성은 IVF 치료시에 엄격한 칼로리 제한 다이어트 중이었다. 다이어트를 중단한 동안의 다음 번 사이클에서는 이 여성이 임신되었기 때문에(그녀의 남편은 항산화제를 계속 복용했지만 실험에서는 제외되었다), 항산화제 치료가 아니라 엄격한 다이어트로 인한 대사의 변화가 난자 용해를 초래한 것으로 생각되었다. 또 다른 활성 약 참가자는 심한 난소 과다자극으로 인해 신선한 배아 전달을 가질 수 없었다. 실험 종료 전에 자연임신으로 인해 연구에서 나간 피험자는 없었다. 그러나, 활성 Menevit 의약을 받은 두 참가자는 실험 종료 후 1개월 이내에 자연임신되었다(데이터는 연구분석에 포함시키지 않았다).

실험 참가자들의 베이스라인 특성을 표 2에 기록한다.

부모나이, 과거 생식력 및 불임원인과 같은 중요한 베이스라인 예후 특성들과 관련하여 활성 그룹과 위약 그룹 사이에 유의한 차이는 없었다. 더욱이, 그룹의 이전 IVF 경험은 이전 IVF 사이클수, 이전 IVF 사이클에서 수집된 난자수 및 결과의 배아 질을 고려할 때 유의한 차이를 만들지 않았다(표 2). 이것은 중요한 혼동 변수들을 두 그룹에 균등하게 분포시키는데 있어서 무작위가 성공적이었음을 시사한다.

임신성과는 위약 그룹과 비교하여 활성(Menevit) 치료그룹에서 상당히 더 좋았다(표 3).

Menevit 이식률은 위약의 거의 두배였으며(46.2% 대 24%, p=0.06), 임신 13주째 살아있는 태아 심장의 차이(38.5% 대 16%)는 통계적으로 유의했다. Repromed에서 38세 이하의 여성에 대한 베이스라인 이식률은 35%였으며, 오직 7%만이 2개 이상의 태낭을 가졌다. 이런 낮은 다중임신율은 최초 2 사이클의 IVF에 있는 36세 이하의 여성에서 거의 보편적인 단일배아 전달 정책으로 인한 것이다. 우리의 연구에서 이식률은 Menevit 그룹에 있는 여성 중 4명이 최초 3개월 초음파 상에서 쌍태낭을 가졌기 때문에 일반적인 IVF 집단에서보다 상당히 더 높았다(총 25개의 태낭에서 8개가 쌍태낭이었다 - 32%). 높은 쌍태낭 비율은 사이클당 전달된 배아의 평균수가 더 높았기 때문은 아니었다. 평균 1.39개의 배아가 활성 Menevit 그룹에 전달되었으며, 이것은 38세 이하의 여성에서 1회 전달당 Repromed 평균 1.3개의 배아와 크게 차이나지 않았다. 따라서, 활성 Menevit 그룹에서 전달된 배아는 이 연구의 위약 그룹 또는 일반적인 비-실험 IVF 집단으로부터 유래된 배아보다 더 높은 이식 잠재력을 가졌던 것 같다.

분할기 배아 질에 식별가능한 차이가 없었기 때문에 어던 이유로 Menevit 그룹으로부터의 배아가 위약 그룹과 비교하여 더 높은 이식 잠재력을 가졌는지는 불확실하다(표 4). 포배까지의 장기 배양이 수행되었을 때 배아 질의 차이가 검출될 수 있었다. 그러나, 포배 배양은 실험 환자 중 낮은 비율에서만 사용되었기 때문에 이런 분석이 불가능했다.

일반적인 정자 파라미터들에 대한 Menevit 건강기능식품의 효과분석은 그것이 정자농도, 정자운동성 또는 정자형태에 유의한 효과를 가지지 않았음을 나타냈다(표 5). 더욱이, 지질 과산화 손상이나 정자 막 완전성 시험(HOST)에 대한 LPO-586 분석은 자유 라디칼에 의한 정자 막 손상의 수준에 있어서 두 연구 그룹 간의 유의한 차이를 검출할 수 없었다. 위약 그룹과 Menevit 그룹 모두의 HOST 결과는 매우 적지만 통계적으로는 유의한 경시적 개선을 나타냈다. 이런 차이는 두 연구 그룹에서 동일했으며, 절대 기간 동안 매우 적었다. 포함되는 기준(정자 자유 라디칼 손상의 증거)으로서 낮은 HOST 결과가 주로 사용되었으므로, HOST 점수의 이런 적은 개선은 실제 생물학적 효과라기보다는 통계상의 "평균으로의 회귀"를 반영하는 것 같다.

실험 동안의 정자 DNA 단편화의 변화를 표 5 및 6에 개략적으로 나타낸다.

활성 Menevit 그룹과 위약 그룹에서 모두 정자 DNA 손상이 감소했다는 것에 주목하며, 두 그룹 간에 유의한 차이가 없다는 점도 주목한다. 두 그룹에서 정자 DNA 단편화의 저하는 정자 DNA에서의 어떤 개선이 실제 생물학적 반응이라기보다는 통계상의 평균으로의 회귀로 인한 것이었음을 시사한다.

총 59명의 남성이 최소 12주의 "약물치료"를 완료했으며, 55명이 부작용 질문지를 완성했다(93% 반환율). 전체 실험 동안 약물치료를 받는 것에 대한 순응은 96%의 참가자들에서 훌륭했으며, 캡슐을 빠뜨리는 것은 1주에 1 캡슐 미만이었다. 위약에 배정된 남성들은 모두 어떤 부작용도 언급하지 않았다. Menevit 그룹에서는 질문지를 반환한 37명의 남성들 중 3명(8%)이 약한 부작용을 언급했다. 보고된 부작용 중 두 건은 약한 위식도역류였고, 나머지 한 건은 변비였다. 부작용이 실험을 취소할 것을 고려할 만큼 중요했다고 느낀 참가자는 없었다.

토의

우리가 아는 최선에서, 이 연구는 항산화제가 IVF 치료 동안의 임신율을 증대시킬 수 있음을 나타낸 최초의 무작위 대조군 실험(RCT)이다.

이 실험에서 임신율의 개선규모는 우리의 예상을 초과했다. 이 연구를 계획했을 때, 종래의 25% 최소 임상개선을 위해서 매우 대규모의 연구가 필요하다는 것이 도수 계산에 의해 시사되었기 때문에, 우리는 1차 결과로서 임신을 선택하지 않았었다. 대신, 개선된 임신 가능성의 마커로서 분할기 배아 질이 사용되었다. 분할기 배아 질은 임신 가능성과 상호관련되며, 선행 연구는 정자 DNA 손상도가 높은 남성은 DNA 손상 수준이 낮은 남성에 비하여 열등한 분할기 배아 형태를 가진다는 것을 밝혔었다. 우리 연구에서는 임신율에서 관찰된 개선을 설명하는데 도움이 될 수 있는 분할기 배아 질에 대한 항산화 의약의 어떤 유의한 효과도 검출할 수 없었다. 분할기 평가보다는 포배 배양이 정자 DNA 완전성에 대한 더 좋은 마커일 것이다. 불행하게도, 포배 배양은 40세 이하의 여성에 대한 장기 배양을 수행할 수 있는 우리 센터에서의 보편적인 임상과정이 아니었기 때문에, 우리는 실험에서 포배 발생률을 분석할 수 없었다.

Menevit 항산화제 치료는 정자 수, 정자운동성 또는 정자형태에 유의한 효과를 가지지 않았다. 본 연구에서는 또한 위약과 비교하여 정자 DNA 손상을 줄일 수 있는 항산화제의 능력을 확인하지 못했다.

항산화제 보충으로 인한 임신성과의 큰 개선이 정자 DNA 단편화의 개선과 연결되지 않는다는 것이 명백해지자, 우리는 12주 DNA 단편화 결과와 임신성과의 상관성을 분석했다. 놀랍게도, 우리는 전체 12주 TUNEL 결과와 임신성과는 절대적으로 무관했다는 것을 알게 되었다(지속가능한 임신 = = 36% + 10% DNA 단편화, 지속가능하지 않은 임신 = 31% + 13%). 난모세포 정액주입에 사용된 정액 샘플에서 정자 DNA 단편화를 분석한 우리 연구실에서의 이전 작업은 TUNEL 결과와 임신성과 사이에 상당한 부정적인 상관성을 나타냈기 때문에 이것은 예상하지 못한 것이었다. 본 연구에서는 정액주입에 사용된 정액 샘플에 대한 정자 DNA 단편화 연구를 수행하지 않았는데, 이 연구분석이 샘플 대부분을 소비하는데다가, 임상용으로도 거의 남지 않았기 때문이다. IVF 용 정액 샘플을 생산하기 전에 평균 3주 더 항산화 치료를 받았으므로, 정자 DNA의 개선은 이후의 임상 정자 샘플에도 존재했을 가능성이 있으며, 이로써 임신율의 증가가 설명된다.

정자 DNA 단편화 수준 및 임신성과를 해석하려는 시도에 있어 두 가지 남은 문제는 밀도구배 "정규화"와 IVF-ICSI "빙산현상"이다(Makhlouf 및 Niederberger (2006) J Androl 27(3):316-23). 본 연구의 모든 환자에 대해 수정용 정자는 밀도구배 원심분리를 사용하여 제조되었다. 이런 종류의 정자 가공에서는, 구배 원심분리 전 일반적 정자집단의 전체적인 질과 무관하게, 일반적으로 양호한 질을 갖는 최고 밀도층의 정자가 수정에 사용되므로 "정규화 효과"를 가지게 된다. 두 연구에서는 밀도구배 원심분리가 TUNEL 연구에서 정자 DNA 완전성 결과를 2 내지 4배까지 개선하는 것으로 나타났다(Tomlinson 등 (2001) Hum Reprod. 16(10):2160-65); Morrell 등 (2004) J Assist Reprod Genet. 21(6):217-22). 따라서, 항산화제 치료가 순수한 샘플에서는 정자 DNA 질을 개선했지만, 이 차이는 밀도구배 원심분리를 이용한 "정규화" 후에는 더 이상 분명하지 않을 수 있다. 마지막으로, ICSI 치료 동안에는 소수의 최상위 질을 가진 정자만이 수정에 사용되며, 나머지 수백 개는 버려진다("빙산현상"). 따라서, 항산화제 치료가 최소량의 베이스라인 손상을 갖는 이들 최상위 질을 가진 정자의 DNA 질을 개선할 수는 있지만, 수정에 사용되지 않은 나머지 99.9%의 정자가 가진 DNA 손상에 대해서는 유의한 효과가 없기 때문에 이 개선은 전체적인 분석에서는 나타나지 않을 수 있다.

본 연구는 항산화제 건강기능식품(Menevit)이 IVF 치료 동안 임신율을 증대시키는 능력을 가진다는 것을 밝히기 위한 최초의 이중맹검 위약 대조군 무작위 연구이다. 이것이 발생하는 메커니즘은 현재 명확하지 않다. 그러나, 우리는 이것이 정자 DNA 손상의 개선에 의해 매개되는 것일 수 있으며, 이러한 개선을 검출할 수는 없었지만, 앞서 토의에 개략적으로 나타낸 많은 가능한 이유 때문에, 그럴 가능성이 가장 높다고 믿는다. 더 많은 고감도 분석을 사용하여 Menevit 건강기능식품의 효과를 시험할 앞으로의 연구가 임신율 개선 메커니즘에 빛을 비추기를 희망한다. 우리는 60명의 환자에 대한 우리의 연구가 비교적 적은 규모이며, 임신율에서의 관찰된 개선이 "통계상의 요행"(제1형 통계오차)일 수 있음을 안다. 그러나, 항산화제 치료 도중 우리의 장기 IVF 환자들 중에서 몇몇 "기적 같은" 임신이 발생한 것은 관찰된 유의한 임신율 개선이 통계상의 예외가 아니라 실제의 생물학적 현상임을 시사한다.

모든 신규 의약은 임상적 유효성, 비용 및 부작용 프로파일의 세 가지 주요 기준에 의해 평가되어야 한다. 본 연구는 Menevit 건강기능식품이 기본적인 정자 파라미터의 변화 없이 IVF 치료 동안 임신율 증대에 효과적임을 밝혔다. 마지막으로, Menevit 건강기능식품은 어떤 심각한 부작용으로부터 자유로웠으며, 소수의 환자만이 약한 위식도 부작용을 경험했을 뿐이다.

마지막으로, 본 발명의 범위 및 정신을 벗어나지 않는 본 발명의 설명된 방법 및 조성물의 다양한 변경 및 변화들이 당업자에게 자명하다는 것이 인정될 것이다. 본 발명은 특정한 바람직한 구체예에 관련하여 설명되었지만, 청구된 바의 본 발명은 이러한 특정한 구체예들에 과도하게 제한되지 않아야 한다는 것이 이해되어야 한다. 실제로, 본 발명을 수행하는 설명된 방식에 있어 당업자에게 자명한 다양한 변경들은 본 발명의 범위 안에 들어가도록 의도된다.

Claims

여성 피험자에서 임신율을 증가시키는 방법으로서, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자에 의해 수정되며, 상기 방법은 수정 전에 상기 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
여성 피험자에서 임신성과를 개선하는 방법으로서, 이 여성 피험자 또는 여성 피험자에 도입되는 난모세포는 남성 피험자의 정자에 의해 수정되며, 상기 방법은 수정 전에 상기 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 임신은 자연수태된 임신인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 임신은 생식보조기술에 의해 야기된 임신인 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, 인공정액주입, 시험관수정, 배우자난관내 이식술(GIFT), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)로 구성된 군 중 하나에서 생식보조기술을 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에 의해 생기는 자유 라디칼에 의한 정자 손상을 줄이는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼 발생을 줄이는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테 론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 백혈구 활성 및/또는 농도를 줄이는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 염증성 사이토카인의 생산을 줄이는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 정자기능을 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 정자운동성을 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상을 줄이는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 정자생산을 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해서 생긴 배아의 질을 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자의 정자로 난모세포를 수정하기 전에 상기 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해서 생긴 배아의 발생과정을 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해서 생긴 배아의 이식률을 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은 수정 전에 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 배아는 생식보조기술에 의해 생긴 배아인 것을 특징으로 하는 방법.
제 17 항에 있어서, 인공정액주입, 시험관수정, 배우자난관내 이식술(GIFT), 자궁내 정액주입(IUI), 세포질내 정자주입(ICSI), 고환정자추출술(TESE), 및 경피적 부고환정자흡인술(PESA)로 구성된 군 중 하나에서 생식보조기술을 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 수정능력을 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 불임을 예방 및/또는 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
남성 피험자에서 테스토스테론 농도를 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은 남성 피험자에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
피험자에서 피험자의 아버지로부터 유전된 DNA 손상도를 줄이는 방법으로서, 상기 DNA 손상은 피험자의 아버지에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상으로 인한 것이고, 상기 방법은 상기 피험자의 임신 전에 아버지에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상으로 인해 피험자의 아버지로부터 유전된 DNA 손상과 관련된 질환 또는 상태를 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 피험자의 임신 전에 아버지에게

(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제는 리코펜, 루테인 및 제아크산틴을 비롯한 β-카로티노이드; 비타민 C; 비타민 E; 코엔자임 Q10; 셀레늄; 아연; L-카르니틴; 아세틸카르니틴; N-아세틸시스테인; 글루타치오닌; 피루베이트; 및 하이포타우린으로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제는 리코펜, 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄, 아연, 및 선택적으로 코엔자임 Q10의 조합인 것을 특징으로 하는 방법.
제 25 항에 있어서, 피험자 투여는 0.5 내지 50mg 리코펜, 10 내지 1000mg 비타민 C, 40 내지 4000 I.U. 비타민 E, 10 내지 250㎍ 셀레늄, 2.5 내지 100mg 아연, 및 선택적으로 4 내지 400mg 코엔자임 Q10을 매일 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 26 항에 있어서, 피험자 투여는 2 내지 10mg 리코펜, 20 내지 200mg 비타민 C, 200 내지 600 I.U. 비타민 E, 20 내지 50㎍ 셀레늄, 10 내지 50mg 아연, 및 선택적으로 10 내지 100mg 코엔자임 Q10을 매일 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 27 항에 있어서, 피험자 투여는 약 6mg 리코펜, 약 100mg 비타민 C, 약 400 I.U. 비타민 E, 약 26㎍ 셀레늄, 약 25mg 아연, 및 선택적으로 약 40mg 코엔자임 Q10을 매일 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, 피험자 투여는 적어도 10주 기간 동안 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제 투여는 피험자에 게 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물; 녹차, 또는 녹차 유래 추출물 또는 활성 화합물; N-3 지방산; 도코사헥사엔산; 생강, 또는 생강 유래 추출물 또는 활성 화합물; 펜톡시필린을 포함한 TNFα의 백혈구 생산을 감소시키는 제제; 인플릭시맵을 포함한 일단 생성된 TNFα의 작용을 차단하는 제제; 및 해양연체동물로부터의 지질추출물로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서, 고환 테스토스테론 증가제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물; 아연; 트리블러스 테레스트리스, 또는 이것 유래 추출물 또는 활성 화합물; 대식세포에서 유도성 산화질소 신타제를 감소시키는 제제; 및 산화질소 생성을 감소시키는 제제로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 33 항에 있어서, 고환 테스토스테론 증가제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출 물, 오일 또는 활성 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.
제 34 항에 있어서, 피험자 투여는 500mg 이상의 마늘 오일을 매일 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 35 항에 있어서, 상기 방법은 약 1000mg 이상의 마늘 오일을 매일 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서, 피험자에 남성 생식관 염증 감소제의 투여는 적어도 10주의 기간 동안 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제의 투여 및/또는 고환 테스토스테론 농도 증가제의 투여는 경구 투여인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 엽산, 또는 그것의 염을 피험자에게 투여하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 39 항에 있어서, 상기 방법은 약 500㎍ 엽산염의 투여를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 피험자는 사람 피험자인 것을 특징으로 하는 방법.
제 41 항에 있어서, 남성 피험자는 증가한 수준의 말론다이알데하이드 또는 산화 스트레스의 다른 생화학적 마커들을 포함하여 증가한 수준의 정자 막 산화를 가진 피험자; 흡연자; 열등한 정자운동성으로 인한 수정능력 감소, 또는 알지 못하는 원인의 수정능력 감소를 포함하여 감소한 수정능력을 가진 피험자; 정관복원수술을 받은 피험자; 부고환과 같은 생식관 감염을 가진 피험자; 및 정계정맥류를 가진 피험자로 구성된 군으로부터 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 6 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항의 방법에 따라서 치료된 남성 피험자로부터 분리된 정액 또는 정자.
비타민 C, 또는 그것의 염;

리코펜;

셀레늄;

아연; 및

500mg 이상의 마늘, 또는 마늘 추출물 또는 오일; 또는 전술한 성분들 중 어느 것의 제약학적으로 허용되는 유도체를 포함하며, 선택적으로 엽산 또는 그것의 염, 및/또는 코엔자임 Q10을 더 포함하는 조성물.
제 44 항에 있어서, 조성물은 0.5 내지 50mg 리코펜, 10 내지 1000mg 비타민 C, 40 내지 4000 I. U. 비타민 E, 10 내지 250㎍ 셀레늄, 2.5 내지 100mg 아연, 및 선택적으로 4 내지 400mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 44 항에 있어서, 조성물은 2 내지 10mg 리코펜, 20 내지 200mg 비타민 C, 200 내지 600 I.U. 비타민 E, 20 내지 50㎍ 셀레늄, 10 내지 50mg 아연, 및 선택적으로 10 내지 100mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 44 항에 있어서, 조성물은 약 6mg 리코펜. 약 1OOmg 비타민 C, 약 400 I.U. 비타민 E, 약 26㎍ 셀레늄, 약 25mg 아연, 및 선택적으로 약 40mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 44 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 약 1000mg의 마늘 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 44 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 약 500㎍의 엽산염을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
약 400 I.U. 비타민 E; 약 100mg 비타민 C, 또는 그것의 염; 약 6mg 리코펜; 약 26㎍ 셀레늄; 약 25mg 아연; 약 40mg 코엔자임 Q10; 및 약 1000mg 마늘을 포함하는 조성물.
약 400 I.U. 비타민 E; 약 100mg 비타민 C, 또는 그것의 염; 약 6mg 리코펜; 약 26㎍ 셀레늄; 약 25mg 아연; 약 500㎍ 엽산염; 및 약 1000mg 마늘을 포함하는 조성물.
항산화제; 및

남성 생식관 염증 감소제; 및/또는

고환 테스토스테론 농도 증가제를 포함하는 조합 제품으로서,

조합 제품 중의 상기 성분들은 동일하지 않고, 성분들은 피험자에게 개별 투여하기 위한 형태로, 또는 피험자에게 성분들 중 하나 이상을 동시-투여하기 위한 형태로 제공되는 조합 제품.
제 52 항에 있어서, 항산화제는 리코펜, 루테인 및 제아크산틴을 비롯한 β-카로티노이드; 비타민 C; 비타민 E; 코엔자임 Q10; 셀레늄; 아연; L-카르니틴; 아세틸카르니틴; N-아세틸시스테인; 글루타치오닌; 피루베이트; 및 하이포타우린으로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 52 항 또는 제 53 항에 있어서, 항산화제는 리코펜, 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄, 아연 및 선택적으로 코엔자임 Q10의 조합인 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 54 항에 있어서, 조합 제품은 0.5 내지 50mg 리코펜, 10 내지 1000mg 비타민 C, 40 내지 4000 I.U. 비타민 E, 10 내지 250㎍ 셀레늄, 2.5 내지 100mg 아연, 및 선택적으로 4 내지 400mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 54 항에 있어서, 조합 제품이 2 내지 10mg 리코펜, 20 내지 200mg 비타민 C, 200 내지 600 I.U. 비타민 E, 20 내지 50㎍ 셀레늄, 10 내지 50mg 아연, 및 선택적으로 10 내지 100mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 54 항에 있어서, 조합 제품이 약 6mg 리코펜, 약 100mg 비타민 C, 약 400 I.U. 비타민 E, 약 26㎍ 셀레늄, 약 25mg 아연, 및 선택적으로 약 40mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 52 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물; 녹차, 또는 녹차 유래 추출물 또는 활성 화합물; N-3 지방산; 도코사헥사엔산; 생강, 또는 생강 유래 추 출물 또는 활성 화합물; 펜톡시필린을 포함한 TNFα의 백혈구 생산을 감소시키는 제제; 인플릭시맵을 포함한 일단 생성된 TNFα의 작용을 차단하는 제제; 및 해양연체동물로부터의 지질추출물로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 52 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 기름 또는 활성 화합물인 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 52 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서, 고환 테스토스테론 농도 증가제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물; 아연; 트리블러스 테레스트리스, 또는 이것 유래 추출물 또는 활성 화합물; 대식세포에서 유도성 산화질소 신타제를 감소시키는 제제; 및 산화질소 생성을 감소시키는 제제로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 60 항에 있어서, 고환 테스토스테론 농도 증가제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물인 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 59 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서, 조합 제품은 500mg 이상의 마늘 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 62 항에 있어서, 조합 제품은 약 1000mg의 마늘 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 52 항 내지 제 63 항 중 어느 한 항에 있어서, 조합 제품은 엽산, 또는 그것의 염을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 64 항에 있어서, 조합 제품은 약 500㎍의 엽산염을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조합 제품.
제 52 항 내지 제 65 항에 중 어느 한 항에 있어서, 조합 제품은 다음의 목적들 중 하나 이상을 위해 남성 피험자에게 투여하는데 사용되며, 상기 목적은 남성 피험자에서 생기는 자유 라디칼에 의한 정자손상의 감소; 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 자유 라디칼 발생의 감소; 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 백혈구 활성 및/또는 농도의 감소; 남성 피험자의 생식관 및/또는 정액에서 염증성 사이토카인 생산의 감소; 남성 피험자에서 정자기능의 개선; 남성 피험자에서 정자운동성의 개선; 남성 피험자에서 자유 라디칼에 의한 정자 DNA 손상 감소; 남성 피험자에서 정자생산 개선; 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 질 개선; 남성 피험자의 정자에 의한 난모세포의 수정에 의해 생긴 배아의 발생단계 개선; 남성 피험자에 의해 수정된 여성 파트너에서 임신성과 또는 임신율 개선; 남성 피험자에서의 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상으로 인한 남성 피험자의 자손에서의 DNA 손상도 감소; 남성 피험자에서의 자유 라디칼에 의한 정자 DNA의 손상으로 인해 남성 피험자의 자손에서 발생하는 질환 또는 상태의 예방; 남성 피험자에서 수정능력의 개선 및/또는 치료; 그리고 남성 피험자에서 테스토스테론 농도의 증가인 것을 특징으로 하는 조합 제품.
(i) 유효량의 항산화제; 및

(ii) 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제

를 포함하는 조성물.
제 67 항에 있어서, 항산화제는 리코펜, 루테인 및 제아크산틴을 비롯한 β-카로티노이드; 비타민 C; 비타민 E; 코엔자임 Q10; 셀레늄; 아연; L-카르니틴; 아세틸카르니틴; N-아세틸시스테인; 글루타치오닌; 피루베이트; 및 하이포타우린으로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 67 항 또는 제 68 항에 있어서, 항산화제는 리코펜, 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄, 아연 및 선택적으로 코엔자임 Q1O의 조합인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 69 항에 있어서, 조성물은 0.5 내지 50mg 리코펜, 10 내지 1000mg 비타민 C, 40 내지 4000 I.U. 비타민 E, 10 내지 250㎍ 셀레늄. 2.5 내지 100mg 아연, 및 선택적으로 4 내지 400mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 69 항에 있어서, 조성물은 2 내지 10mg 리코펜, 20 내지 200mg 비타민 C, 200 내지 600 I.U. 비타민 E, 20 내지 50㎍ 셀레늄, 10 내지 50mg 아연, 및 선택적으로 10 내지 100mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 69 항에 있어서, 조성물은 약 6mg 리코펜, 약 100mg 비타민 C, 약 400 I.U. 비타민 E, 약 26㎍ 셀레늄, 약 25mg 아연, 및 선택적으로 약 40mg 코엔자임 Q10을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 67 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물; 녹차, 또는 녹차 유래 추출물 또는 활성 화합물; N-3 지방산; 도코사헥사엔산; 생강, 또는 생강 유래 추출물 또는 활성 화합물; 펜톡시필린을 포함한 TNFα의 백혈구 생산을 감소시키는 제제; 인플릭시맵을 포함한 일단 생성된 TNFα의 작용을 차단하는 제제; 및 해양연체동물로부터의 지질추출물로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 67 항 내지 제 73 항 중 어느 한 항에 있어서, 남성 생식관 염증 감소제 는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 67 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서, 고환 테스토스테론 농도 증가제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물; 아연; 트리블러스 테레스트리스, 또는 이것 유래 추출물 또는 활성 화합물; 대식세포에서 유도성 산화질소 신타제를 감소시키는 제제; 및 산화질소 생성을 감소시키는 제제로 구성된 군 중 하나 이상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 75 항에 있어서, 고환 테스토스테론 농도 증가제는 마늘, 또는 마늘 유래 추출물, 오일 또는 활성 화합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 74 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 500mg 이상의 마늘 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 767 항에 있어서, 조성물은 약 1000mg의 마늘 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 67 항 내지 제 78 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 엽산, 또는 그것의 염을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 79 항에 있어서, 조성물은 약 500㎍ 엽산염을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
(i) 남성 피험자에게 유효량의 항산화제를 투여하는 단계;

(ii) 남성 피험자에게 유효량의 남성 생식관 염증 감소제 및/또는 유효량의 고환 테스토스테론 농도 증가제를 투여하는 단계; 및

(iii) 남성 피험자로부터 정자를 분리하는 단계

를 포함하는, 남성 피험자로부터 정자를 분리하는 방법.
제 81 항에 따라서 남성 피험자로부터 분리된 정자.
제 82 항에 따른 정자로 비-인간 동물의 암컷을 수정하여 발생한 비-인간 동물.