KR20080027330A - ＩｇＧ의 선택적 흡착용 크로마토그래피 흡착제로서의［１,２,４］트리아졸로［１,５―ａ］피리미딘 유도체 - Google Patents
ＩｇＧ의 선택적 흡착용 크로마토그래피 흡착제로서의［１,２,４］트리아졸로［１,５―ａ］피리미딘 유도체 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 하기 화학식 및 그의 상응하는 엔올형을 포함하는, IgG의 선택적 흡착용 크로마토그래피 흡착제에 관한 것이다.
식 중,
X는 O, S, 또는 NH를 나타내며;
R1은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬, Ar, -C(O)NHR3, -C(O)-R3 또는 할로를 나타내고;
R2는 H, C1 -3 알킬 또는 할로를 나타내고;
R3은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬 또는 Ar을 나타내고;
n은 0, 1, 2 또는 3을 나타내고;
Y는 캐리어를 나타낸다.
본 발명은 또한 상기 흡착제의 제조 방법, 및 친화성 크로마토그래피에 의해 물질들을 분리하기 위한 그 용도에 관한 것이다.
IgG, 크로마토그래피 흡착제, 선택적 흡착, 친화성 크로마토그래피
Description
본 발명은 생체분자의 크로마토그래피 분리 분야에 속한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 IgG를 선택적으로 흡착하는 신규한 리간드를 포함하는 크로마토그래피 흡착제 및 상기 크로마토그래피 흡착제의 제조 방법 및 친화성 크로마토그래피를 위한 그 용도에 관한 것이다.
모노클로날 항체 기술의 개발은 연구, 진단 및 치료를 실행하는데 있어서의 과학 및 의약에 대해 엄청난 기회를 제공해왔다. 모노클로날 항체는, 예를 들면, 인간 질환의 생체 외 및 생체 내 진단 및 면역 요법에 사용된다. 현재, 개발 중인 생명 공학-유도된 약제의 대부분은 유형 G의 모노클로날 항체를 기초로 한다.
IgG는 통상적으로 표준 기술에 따라 세포 발현 시스템 내에서 다량으로 제조된다. 가장 널리 사용되는 제조 방법은 크로마토그래피에 의한 정제를 포함하는데, 이는 그 다용도성 및 화합물에 대한 민감성으로 인해 종종 생체분자의 관점에서 바람직한 정제 방법이다.
친화성 크로마토그래피 분야에 있어서, 박테리아 스타필로코커스 아우레우 스(Staphylococcus aureus)의 IgG-결합 세포벽 단백질인 단백질 A, 및 그의 리간드로서의 용도에 관한 다양한 특허 및 특허 출원들이 존재한이다. 예를 들면, PCT/SE83/00297(파마시아 바이오테크 AB(Pharmacia Biotech AB))은 단백질 A의 재조합 형태를 개시하는데, 이때 시스테인 잔기가 단백질 A 분자에 첨가되어 친화성 리간드로서의 후속 사용을 위해 단백질 A 분자가 분리 매트릭스에 커플링되는 것을 향상시킨다. 또한, US 특허 제6,197,927호(제넨테크 인코포레이티드(Genentech Inc.))은 야생형 Z 도메인과 동등한 IgG-결합 능력을 나타내지만 현저히 감소된 크기를 보이는 스타필로코칼(Staphylococcal) 단백질 A의 Z 도메인 변이체를 개시한다. 그러나, 단백질 A는 프로테아제 감수성이라고 밝혀졌다. 또한, 단백질 A계 친화성 리간드는 산성 및 염기성 조건하에 불안정하다고 알려져 왔으며, 이 불안정성 때문에 정제 공정 도중에 생성물을 오염시키고 정제 시스템의 품질을 손상시킬 리간드의 바람직하지 않은 누설이 초래될 수 있다.
선행 기술 내에서, IgG에 대한 친화성을 가지는 소분자 리간드를 기술하는 다수의 특허 출원이 존재한다:
WO 2004039765(아머샴 바이오사이언시스 AB(Amersham Biosciences AB))는 카파-형의 경쇄를 가지는 IgG 및 Fab 단편에 대한 크로마토그래피 친화성 리간드로서의 페닐 우레아 스캐폴드계 소분자의 용도를 기술한다.
US 6610630(시페르겐 바이오시스템즈 인코포레이티드(Ciphergen Biosystems Inc.))은 IgG의 선택적 흡착용 의사(pseudo) 생친화성 크로마토그래피 매질로서의, 고체 지지체에 부착된 2-머캅토이미다졸 및 그의 유도체의 용도를 기술한다.
US 6117996(노보 노르디스크 A/S(Novo Nordisk A/S))은 트리아진계 구조의 제조 및 다양한 단백질성 물질들의 정제에서의 그의 용도를 기술한다.
US 20030166002(창(Chang) 등)는 수지에 부착하기에 적합한 링커(linker)를 가지는 트리아진 구조계 활성 화합물의 합성 및 선택을 기술한다.
EP 1500431(영국의 밀리포어 UK 리미티드(Millipore UK, Ltd))은 고체 지지체 및 이에 부착된, 2-아미노벤즈이미다졸 및 2-아미노메틸벤즈이미다졸로부터 선택된 1개 이상의 친화성 크로마토그래피 리간드를 포함하는 매질에 관한 것이다. 발명의 친화성 리간드가 IgG 정제에 사용된다.
IgG 결합용 단백질 A의 대용물들이 존재하지만, 보다 유리한 성질의 신규한 IgG-결합 리간드가 여전히 필요하다. 상기 신규한 리간드는 상기 논의한 결점을 갖지 않아야 하며, 바람직하게는 지금까지 제안된 리간드보다 바람직한 결합 성질을 또한 가져야 한다.
<발명의 요약>
본 발명자들은 크로마토그래피 수지에 부착되는 경우 IgG의 일반 결합(generic binding)을 가지는 퓨린-관련 구조계 작은 유기 분자를 발견하였다. 그것은 IgG 정제 공정에 있어서 친화성 리간드로 사용될 수 있다.
제1 태양에 있어서, 본 발명은 하기 화학식 및 그의 상응하는 엔올형을 포함하는, IgG의 선택적 흡착용 크로마토그래피 흡착제에 관한 것이다.
식 중,
X는 O, S, 또는 NH를 나타내며;
R1은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬, Ar, -C(O)NHR3, -C(O)-R3 또는 할로를 나타내고;
R2는 H, C1 -3 알킬 또는 할로를 나타내고;
R3은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬 또는 Ar을 나타내고;
n은 0, 1, 2 또는 3을 나타내고;
Y는 캐리어를 나타내고;
Ar은 -OH, 시아노, 할로, 니트로, C1 -6 알킬 및 알콕시로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되는 C6 -10 아릴기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도를 포함한다.
달리 특정하지 않으면, 본원에 정의된 알킬기, 및 알콕시 및 알콕시알킬의 알킬 부분은 직쇄일 수 있거나, 또는 탄소 원자의 수가 충분하다면(즉, 최소 3개라면) 분지쇄, 및/또는 환식일 수 있다. 또한, 탄소 원자의 수가 충분하다면(즉, 최소 4개라면), 상기 기들은 또한 부분 환식/비환식일 수 있다. 상기 알킬기, 및 알콕시 및 알콕시알킬기의 알킬 부분은 포화될 수 있거나, 또는 탄소 원자의 수가 충분하다면(즉, 최소 2개라면) 불포화될 있다. 달리 특정되지 않는다면, 상기 기들은 1개 이상의 할로, 및 특히 플루오로 원자로 치환될 수 있다.
의심할 여지 없이, 알콕시기는 이 기 내의 산소 원자를 통해 나머지 분자에 부착된다. 이 점에 있어서, 본 발명의 화합물은 호변 이상을 보일 수 있다. 모든 호변 이성질체들 및 이들의 혼합물은 본 발명의 범위에 포함된다.
상기 화학식에 있어서, 캐리어 Y는 셀룰로오스, 전분, 덱스트란, 한천, 아가로스, 폴리아크릴아미드, 폴리(메트)아크릴레이트, 폴리비닐 친수성 중합체, 폴리스티렌 및 폴리술폰, 실리카, 알루미나, 티타니아 산화물, 지르코니아 산화물, 폴리사카라이드-합성 중합체, 폴리사카라이드-광물 구조, 또는 합성 중합체-광물 구조로부터 선택된다.
본 발명에 따른 바람직한 실시태양에 있어서, 상기 화학식에서 R1은 H를 나타내며, n은 0을 나타내며, X는 NH를 나타내며 Y는 아가로스를 나타낸다.
임의로, 상기 화학식에 있어서, 스페이서(spacer) 분자가 X와 Y 사이에 위치하며, 그 예는 헥사메틸렌디아민 또는 아미노카프론산이다.
추가의 바람직한 실시태양에 있어서, R1은 H를 나타내며, n은 0을 나타내며, X는 NH를 나타내며, Y는 HP-세파로스를 나타내며, 및 스페이서 분자는, 만약 존재한다면, 헥사메틸렌디아민이다.
캐리어 물질 Y는 임의의 형상의 크로마토그래피 캐리어 물질이며 비드, 불규칙적 형상의 입자, 섬유, 막, 평평한 구조 또는 다공성 광물 물질의 형태일 수 있다.
제2 태양에 있어서, 본 발명은
a) 크로마토그래피 캐리어 물질 Y를 제공하고;
b) 리간드를 상기 캐리어 물질의 표면 상에 커플링시켜
하기 화학식 및 그의 상응하는 엔올형의 흡착제를 제조하는 단계
를 포함하는, 상기 기술한 크로마토그래피 흡착제의 제조 방법에 관한 것이다.
식 중,
X는 O, S, 또는 NH를 나타내며;
R1은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬, Ar, -C(O)NHR3, -C(O)-R3 또는 할로를 나타내고;
R2는 H, C1 -3 알킬 또는 할로를 나타내고;
R3은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬 또는 Ar을 나타내고;
n은 0, 1, 2 또는 3을 나타내고;
Y는 캐리어를 나타내고;
Ar은 -OH, 시아노, 할로, 니트로, C1 -6 알킬 및 알콕시로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되는 C6 -10 아릴기를 나타낸다.
캐리어 Y는 X = NH2 또는 SH, 또는 OH로 치환된다. 바람직하게는, 캐리어 Y는 아민을 가지는 매트릭스이다. 캐리어는 티올을 가지는 매트릭스 또는 히드록실을 가지는 매트릭스일 수 있다. 보다 바람직하게는, 캐리어 Y는 헥사메틸렌디아민에 의해 연장된 에피클로로히드린 활성화된 HP-세파로스이다.
제3 태양에 있어서, 본 발명은 친화성 크로마토그래피에 의해 물질들을 분리하기 위한 상기 기술한 흡착제의 용도에 관한 것이다. 바람직한 용도는 IgG, 그의 단편 및/또는 IgG 또는 그의 단편을 포함하는 복합체를 분리하기 위한 용도이다. IgG는 모노클로날 IgG, 폴리클로날 IgG, 또는 재조합 IgG 또는 그의 단편일 수 있다. 복합체는 IgG를 포함하는 면역 복합체 또는 융합 단백질일 수 있다. 흡착제는 모두 하위 분류의 IgG 및 그의 단편들에 대해 사용될 수 있다. 분리된 IgG는 치료, 진단, 연구 및 개발 목적으로 사용될 수 있거나 또는 예를 들면 크로마토그래피에서 친화성 핸들(handle)로서 사용될 수 있다.
인실리코(in silico) 기술이 IgG의 Fc-부분 상의 적합하고 보존된 일반 결합 파열(cleft)을 동정하는데 사용되었다. 그 후, 상업적으로 입수가능한 물질들의 가상 스크리닝이 상기 파열에 대한 잠재적인 바인더의 동정을 위해 수행되었다. 잠재적인 결합 구조의 순서를 매기고 STD-NMR 및 표면 플라스몬 공명(SPR) 분석에 기초한 생체 외 절차를 사용하여 결합 및 선택도를 시험하였다. 상기 절차는 흥미있는 크로마토그래피 성질들을 나타내는 하나의 구조를 동정하였다. 동정된 결합 구조는 크로마토그래피 수지에 부착되었고 IgG에 대한 결합을 평가하였다. 리간드가 IgG에 대한 일반 결합을 보임이 밝혀졌다.
IgG의 일반 결합은 모든 IgG 하위 분류, 즉, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4의 결합을 의미한다.
<발명의 상세한 설명>
본 발명은 인 실리코 및 습윤 실험과 관련하여 보다 자세히 기술될 것이다.
적합한
IgG
결합 부위의 동정
코드 1dn2를 가지는 프로틴 데이터 뱅크(Protein Data Bank: pdb)를 사용한 분자 모델링 기술에 의해 단백질 표면을 스크리닝하는 것에 의해 인간 IgG의 Fc 단편 상의 파열을 작은 유기 분자에 대한 추정 표적 결합 부위로서 동정하였다(델라노(Delano) 등, 2000).
대칭 관련 분자들 사이의 경계면에서, 보다 깊은 파열에서 기인한 2개의 대칭-관련 채널들이 동정되었다. 상기 파열은 다소 친수성이며 그 표면 상에 극성기를 함유한다. 2개의 대칭 관련 파열들 각각은 가상 스크리닝에 대한 (동등) 부위들로서 사용될 수 있다. 동정된 부위는 인간 공급원으로부터의 IgG 패밀리의 구성원들 중에서 실질적으로 보존되었다.
결합 모의 실험
가상 스크리닝을 위한 데이터베이스로부터의 화합물들을 동정된 파열에 결합시켰고 추정 바인더로서 동정된 총 119개의 다양한 화합물이 초래되었다. 결합 모의 실험에 사용된 단백질 구조는 Z34C(pdb 코드 116x; 이두소지(Idusogie) 등, 2000)와 복합체를 형성한 Fc의 1.65 Å 구조였는데, 이는 이것의 분해능이 우수하기 때문이었다. 프로그램 O를 사용하여 결정학적 대칭으로부터 이량체가 생성되었다(존스(Jones) 등, 1991). 가장 등급이 높은 배좌 및 그의 플렉스X(FlexX)(라레이(Rarey) 등, 1996) 스코어가 각각의 분자에 대해 저장되었다.
결합된
분자(
리간드
분자)의 선택
-20 kJ/mol보다 더 마이너스인 추측 자유 결합 에너지를 가지는 결합 배좌를 생성하는 모든 화합물들을 파열의 표면에 대한 상보성의 관점에서 소수성, 수소 결합 패턴, 전하 및 배좌에 있어 육안으로 검사하였다. 또한, 강성은 이로운 것으로 간주되는 반면에 짧은 접촉 및 긴장 구조는 불리한 것으로 간주되었다.
잠재적
리간드의
NMR
및
SPR
스크리닝
가상 스크리닝으로부터, 166개의 화합물들이 동정된 파열에 대한 잠재적인 바인더로서 제안되었다. 추가의 수동 선택(가정 안정성, 반응성 및 입수가능성에 기초함) 후에, 시험을 위해 화합물들의 순서를 매겼다. 결국 69개의 화합물들에 도달하였고 이들에 대해 스크리닝 절차에 들어가기에 앞서 개별적인 내부 동정 번호를 부여하였다.
스크리닝 절차는, 포화 차이 전달 NMR(STD NMR) 및 표면 플라스몬 공명(SPR) 방법에 의존하는 2개의 독립적인 용액 중 분석 기술을 사용한 생체 외 스크리닝에 기초하였다.
NMR 스크리닝에 있어서, 69개의 물질들에 대해 2개의 상이한 모노클로날 항체(MAb) 및 상업적으로 입수가능한 Fc-단편에 대한 친화성을 시험하였다. 비특이적 단백질 결합을 α-아밀라아제에 대한 친화성 시험에 의해 조사하였다. 3개의 IgG 관련 단백질 모두에 대해 친화성을 가지지만 α-아밀라아제에 대한 친화성은 가지지 않는 것으로 밝혀진 화합물들을 IgG의 Fc-부분에 대한 친화성 리간드에 대한 잠재적인 후보로 배정하였다.
SPR 스크리닝에 있어서, 53개의 화합물들에 대해(비가용성 물질들은 제외함) 모노클로날 항체 및 상업적으로 입수가능한 Fc-단편에 대한 친화성을 시험하였다. 분석 데이터를 상이한 분자량에 대해 보정하였고 이론적인 최대 반응의 백분율로서 나타내었다.
추가의 조사를 위한 잠재적인 후보를 선택하기 위해, Fc 단편 및 IgG 모두에 대해 10% 초과의 반응을 가지는 모든 물질들이 잠재적 후보로 선택되도록 SPR 데이터를 배열하였다. 이들 화합물들을 NMR-스크리닝에 의해 나타낸 것들과 비교하였다. 대부분의 SPR 유도된 히트(hit)들은 α-아밀라아제에 대한 비특이적 결합으로 인해 NMR 스크리닝에서 거부되었다고 밝혀졌다. 하나의 화합물을 2개의 방법들에 의해 잠재적인 친화성 후보로서 선택하였다(하기 화학식 I의 화합물(화합물 I)).
친화성 리간드 후보를 최적화하기 위해 화합물 I 주변의 추가의 구조(상업적으로 입수가능한 화합물)를 용액 중에서 조사하였다. 이 화합물에 대해 상기 나타낸 바와 같은 친화성에 대한 상응하는 SPR 및 NMR 분석을 하였다. 그러나, 이번에는 단지 Fc-단편만을 NMR 스크리닝에 사용하였고, SPR 분석은 제1 선택에서처럼 상응하는 시험 단백질을 사용하여 수행하였다.
선택된 구조는 NMR에 의해 명확해야 하며 또한 SPR에 의해 나타낸 IgG 분자에 대한 친화성에 대한 등급이 높아야 하며, Fc-단편에 대한 친화성에 대한 등급은 적어도 중간 이상이어야 한다. HSA에 대해 비특이적인 결합을 나타내는 화합물들을 배제하였다. 이 선택은 최종 후보인 하기 화학식 II의 화합물(화합물 II)에서 나타났다. 이 화합물은 또한 (에스테르 보호된) 카르복실산 관능기를 통해 허용되는 직접 커플링 화학에 대한 가능성을 가졌다.
라이브러리로부터의 히트 화합물인 리간드 II는 케토형이다. 용액 중에서 스크리닝되고 겔에 커플링된 리간드는 케토형 및 엔올형 사이에서 평형인 채 존재한다.
케토형과 엔올형 사이의 관계는 몇몇 파라미터, 예컨대 용매, 농도 및 온도에 의해 영향을 받는다. 모든 호변 이성질체 형태들 및 이들의 혼합물이 본 발명의 범위 내에 포함된다.
도 1은 본 발명에 따른 흡착제 상에서의 주입된 폴리클로날 IgG의 용리 단백질 프로파일을 도시한다. 점선은 용리액 중의 pH를 나타낸다.
크로마토그래피 흡착제의 제조
본 발명의 흡착제의 제조를 예시적인 비제한적 방법으로 기재하였다. 커플링제 및 캐리어의 선택은 넓은 범위 내에서 변할 수 있으며 당업자에게 공지되어 있다.
선택된
리간드(화합물 II)의
크로마토그래피 매트릭스(
캐리어
)에 대한 커플링
동정된 후보 화합물 II는 상업적으로 입수가능하였고 커플링에 사용하였다. 적합한 염기, 예컨대 디이소프로필에틸 아민, 트리에틸 아민 또는 탄산칼륨의 존재하에 임의의 통상적인 아미드 구성 시약, 예컨대 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU), N,N'-디시클로헥실카르보디이미드(DCC), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드(EDC), 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt), 산 클로라이드 형성 시약 또는 이들의 혼합물을 사용하여, 화합물 II를 그의 카르복실산 관능기를 통해 아민을 가지는 매트릭스 또는 캐리어에 부착하였다. 사용된 캐리어는 헥사메틸렌디아민에 의해 연장된 에피클로로히드린 활성화된 HP-세파로스 비드였다. 커플링은 화합물 II로부터의 에스테르 관능기를 아미드 관능기로 변환시켰으며, 이는 용액 중 시험한 에스테르 관능기로부터의 최소한의 입체적 및 전자적 변화를 초래하였다.
흡착제 A의 상기 평형식에 기술된 바와 같이, 흡착제 A는 케토형 또는 엔올형 중 어느 하나, 또는 케토형 및 엔올형의 혼합물을 포함하였다.
커플링의 결과를 표준 MAS NMR 방법에 따라 측정하였고, 그 결과는 7 μmol/㎖였다.
흡착제 A를 사용한 크로마토그래피
0.5 ㎖의 흡착제 A를 트리콘(Tricorn) 5/20 칼럼 내에 충전하고 0.1 M 아세테이트, 0.137 M NaCl, pH 5.0을 사용하여 평형으로 만들었다.
폴리클로날 IgG(감마놈(Gammanorm))(1 ㎖ 완충액 중 1 ㎎)를 0.1 M 아세테이트, 0.137 M NaCl, pH 5.0을 결합 완충액으로 사용하여 흡착제 A-칼럼에 주입하였다.
도 1의 1 ㎖에서의 피크는 칼럼을 우회하여 주입한 단백질을 나타내었다. 폴리클로날 IgG의 일반 결합을 관찰하였다. 56 내지 65%의 폴리클로날 IgG를 18 ㎖에서 PBS, pH 7.4를 사용하여 용리시켰다. 수집된 분획 중의 단백질 농도의 계산 및 용리된 피크 면적과 우회 피크 면적 사이의 비율의 적분 및 계산에 의해 회수율을 측정하였다. 나머지 결합 단백질을 23 ㎖에서 가파른 피크 중에서 CIP 동안 방출하였다. 점선은 용리액 중 pH를 나타내었다.
다른 완충 시스템(0.1 M HAc, 50 mM 포스페이트, pH 5.0) 중에서, 동적 결합 능력을 측정하였고 그 결과는 24 ㎎/㎖였다.
도 1의 결과는 본 발명의 흡착제가 IgG의 일반 결합에 사용될 수 있음을 보여주었다.
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Claims (11)
- 하기 화학식 및 그의 상응하는 엔올형을 포함하는, IgG의 선택적 흡착용 크로마토그래피 흡착제.
식 중,X는 O, S, 또는 NH를 나타내며;R1은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬, Ar, -C(O)NHR3, -C(O)-R3 또는 할로를 나타내고;R2는 H, C1 -3 알킬 또는 할로를 나타내고;R3은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬 또는 Ar을 나타내고;n은 0, 1, 2 또는 3을 나타내고;Y는 캐리어를 나타내고;Ar은 -OH, 시아노, 할로, 니트로, C1 -6 알킬 및 알콕시로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되는 C6 -10 아릴기를 나타낸다. - 제1항에 있어서, 캐리어 Y가 셀룰로오스, 전분, 덱스트란, 한천, 아가로스, 폴리아크릴아미드, 폴리(메트)아크릴레이트, 폴리비닐 친수성 중합체, 폴리스티렌 및 폴리술폰, 실리카, 알루미나, 티타니아 산화물, 지르코니아 산화물, 폴리사카라이드-합성 중합체, 폴리사카라이드-광물 구조, 또는 합성 중합체-광물 구조로부터 선택되는 흡착제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, R1이 H를 나타내며, n이 0을 나타내며, X가 NH를 나타내며 Y가 아가로스를 나타내는 흡착제.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, X와 Y 사이에 스페이서 분자를 포함하는 흡착제.
- 제3항 또는 제4항에 있어서, R1이 H를 나타내며, n이 0을 나타내며, X가 NH를 나타내며, Y가 HP-세파로스를 나타내며, 스페이서 분자가 헥사메틸렌디아민인 흡착제.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 캐리어 물질 Y가 비드, 불규칙적 형상의 입자, 섬유, 막, 평평한 구조 또는 다공성 광물 물질의 형태인 흡착제.
- a) 크로마토그래피 캐리어 물질 Y를 제공하고;b) 리간드를 상기 캐리어 물질의 표면 상에 커플링시켜하기 화학식 및 그의 상응하는 엔올형의 흡착제를 제조하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 크로마토그래피 흡착제의 제조 방법.
식 중,X는 O, S, 또는 NH를 나타내며;R1은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬, Ar, -C(O)NHR3, -C(O)-R3 또는 할로를 나타내고;R2는 H, C1 -3 알킬 또는 할로를 나타내고;R3은 H, C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 알콕시-C1 -6 알킬 또는 Ar을 나타내고;n은 0, 1, 2 또는 3을 나타내고;Y는 캐리어를 나타내고;Ar은 -OH, 시아노, 할로, 니트로, C1 -6 알킬 및 알콕시로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되는 C6 -10 아릴기를 나타낸다. - 제7항에 있어서, 캐리어 Y가 아민을 가지는 매트릭스인 방법.
- 제8항에 있어서, 캐리어 Y가 헥사메틸렌디아민에 의해 연장된 에피클로로히드린 활성화된 HP-세파로스인 방법.
- 친화성 크로마토그래피에 의해 물질들을 분리하기 위한 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 흡착제의 용도.
- 제10항에 있어서, IgG, 그의 단편 및/또는 IgG 또는 그의 단편을 포함하는 복합체를 분리하기 위한 용도.
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