KR20070095422A

KR20070095422A - 신경펩타이드-2 수용체(ｙ２ｒ) 작용물질 활성을 갖는펩타이드

Info

Publication number: KR20070095422A
Application number: KR1020077018848A
Authority: KR
Inventors: 와리드 단호; 조지 에흐리츠; 데이비드 씨 프라이; 와지하 칸; 조셉 스위스톡
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2005-01-18
Filing date: 2006-01-11
Publication date: 2007-09-28
Also published as: BRPI0606675A2; KR100905380B1; CA2594423A1; DE602006020407D1; US20060160742A1; WO2006077035A9; JP2008527017A; AU2006207659B2; WO2006077035A1; CN101107266A; EP1844070B1; ZA200705674B; TWI309653B; NO20073664L; US7410949B2; ATE500268T1; PT1844070E; DK1844070T3; RU2383553C2; JP4633804B2

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질, 및 그의 약학적으로 허용되는 염, 유도체 및 단편에 관한 것이다:

화학식 I

상기에서, 치환체들은 명세서에 개시된 바와 같다.

상기 화합물 및 그를 함유하는 약학 조성물은, 예를 들면, 비만과 같은 질환의 치료에 유용하다.

Description

신경펩타이드-2 수용체(Ｙ２Ｒ) 작용물질 활성을 갖는 펩타이드{PEPTIDES WITH NEUROPEPTIDE-2 RECEPTOR(Y2R) AGONIST ACTIVITY}

본 발명은 하기 화학식 I의 PYY₃ _-36의 절단 유사체, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:

상기에서,

X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴노졸리논-3-아세트산(Pqa), N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌(Cms), 4-(2-아미노메틸)-6-다이벤조퓨란프로파노산, 4-(1-피페리딘-4-일)-뷰타노산 및 4-(2-아미노에틸)-1-카복시메틸 피페라진으로 이루어진 군에서 선택되고;

Y는 H, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 저급 알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 알콕시, 또는 폴리(에틸렌)글라이콜 잔기이고;

R₁은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1Aic, 2-2Aic, Ach 또는 Acp이고;

R₂는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고;

R₃은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고;

R₄는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고;

R₅는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고;

R₆은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₇은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고;

R₈은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₉는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고;

R₁₀은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고;

R₁₁은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₂는 Gln 또는 Ala이고;

R₁₃은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₄는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr이다.

상기 유사체는 신경펩타이드-2 수용체의 작용물질이며, 예를 들면, 비만과 같은 대사 장애의 치료에 유용하다. 본원에 인용된 모든 문헌은 본원에 참고로 인 용된다.

비만은 선진국에서 심각한 건강 문제로 널리 인지되고 있으며, 미국에서는 유행병 수준에 이르렀다. 최근의 연구에 따르면, 미국 인구의 50% 이상이 과체중으로 간주되며, 25% 이상이 임상적으로 비만하며 심장 질환, 비-인슐린 의존성 당뇨병(NIDDM), 고혈압 및 특정 암에 상당히 위험한 상태인 것으로 진단된다. 이러한 유행은 매년 700 억 달러 이상의 예산 비만 치료 비용이 미국에서만 예상되므로 건강 관리 시스템에 상당한 부담을 제공한다. 비만을 치료하기 위한 전략은 음식 섭취량의 감소 및 에너지 소비의 증대를 포함한다.

36개 아미노산의 펩타이드 신경전달물질인 신경펩타이드 Y(NPY)는 말초 및 중추 신경계 둘 다에 존재하는 것으로 밝혀진 신경전달물질/신경호르몬의 췌장 폴리펩타이드 부류의 일원이다. NPY는 알려진 가장 유효한 식욕증진제중 하나이며, 인간을 포함하여 동물에서 음식물 섭취량 조절에 주요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다.

5개의 신경펩타이드 Y 수용체(NPY), 즉 Y1-, Y2-, Y3-, Y4-, 및 Y5- 및 Y6-아형이 클로닝되었으며, 이들은 로돕신(rhodopsin)-유사 G-단백질 커플링된 7개-막통과 나선형 수용체(7-transmembrane helix-spanning receptor)(GPCR)에 속한다. NPY Y2 수용체(Y2R)는 다른 공지된 NPY 수용체와 낮은 상동성을 가지면서 G_i에 의해 아데닐 사이클라제의 활성화를 억제하는 381개 아미노산이다. 래트와 인간 Y2 수용체간에 98% 아미노산 동일성하에 고도의 보존성이 있다.

Y2R 수용체는 설치류 및 인간 모두에서 중추 신경계 내에 널리 분포되어 있다. 시상하부에서, Y2 mRNA는 궁상핵, 시삭전핵 및 등쪽내측핵에 편재화된다. 인간의 뇌에서, Y2R은 우세한 Y 수용체 아형이다. 궁상핵내에서, NPY 뉴런의 80% 이상이 Y2R mRNA를 공-발현시킨다. Y2-선택적 작용물질의 적용은 시험관내에서 시상하부 절편으로부터 NPY의 방출을 감소시키는 것으로 밝혀진 반면, Y2 비-펩타이드 길항물질 BIIE0246은 NPY 방출을 증가시킨다. 이러한 연구결과는 NPY 방출을 조절하므로 음식섭취의 조절에 수반될 수 있는 시냅전 자가수용체로서 Y2R의 역할을 지지한다[Poter, E.K. et al., Eur. J. Pharmac., 267, 253-262, 1994].

펩타이드 YY_3-36(PYY_3-36)은 특정한 신경펩타이드 Y2(NPY2R) 작용물질 활성을 갖는 33개 아미노산의 선형 펩타이드이다. PYY_3-36의 궁상내(Intra-arcuate, IC) 또는 복강내(IP) 주입에 의해 래트에서 음식섭취가 감소되었고, 만성 치료로서 체중 증가가 감소된 것이 입증되었다. 90 분동안 PYY_3-36을 정맥내(IV) 주입(0.8 피코몰/kg/분)에 의해 비만 및 정상 인간 대상에서 음식물 섭취가 24 시간에 걸쳐 33% 감소되었다. 이러한 연구결과는 PYY 시스템이 비만 치료에 치료 표적이 될 수 있음을 시사한다[Bloom, S. et al., Nature, Vol. 418, p.650-654, 8 August 2002]. 또한, 잔기 5 내지 24가 탄소 5 내지 8개 길이의 메틸렌-쇄로 치환된 PYY의 Cys²- (D)Cys²⁷-환화된 변이체는, 래트 공장(jejunum)의 전압-고정된 점막 제제 전역에서 감소된 전류에 의해 입증되듯이, 장 PYY 수용체의 활성화를 나타내었다[Krstenansky, et al., Peptides, Proceedings of the Twelfth American Peptide Symposium, J. Smith and J. Rivier Editors, ESCOM., Leiden Page 136-137].

또한, 폴리(에틸렌 글라이콜) 또는 폴리(에틸렌 옥사이드)(둘 다 PEG로 지칭됨)에 의한 단백질의 공유적 변형이 슈퍼옥사이드 디스뮤타제에 의해서(문헌 [Somack, R., et al., Free Rad Res Commun, 12-13:553-562, 1991]; 미국 특허 제 5,283,317 및 5,468,478 호) 및 다른 유형의 단백질, 예를 들면, 사이토카인[Saifer, M G P, et al., Polym Preprints, 38:576-577, 1997; Sherman, MR, et al., JM Harris, et al.(Eds), Poly(ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications, ACS Symposium Series 680, pp.155-169, Washington, D.C.; American Chemical Society, 1997]에 대해 입증되었다.

그러나, 기존 Y2R 작용물질과 동등하거나 더 우수한 효능, 약물동력학적 성질 및 약리학적 성질을 가지면서 훨씬 더 낮은 분자량을 갖는 PYY의 신규 제작 유사체에 대한 요구가 존재한다. 예를 들면, 상기 작용물질이 필요한 대상에서 펩타이드 반감기를 증가시키고 면역원성을 감소시키기 위해 PYY의 PEG화(pegylated) 유사체에 대한 요구도 또한 존재한다.

본 발명의 화합물은 PYY_3-36의 절단 변이체이기 때문에 또한 유리하다. 따라서, 보다 짧은 펩타이드는 화합물의 보다 용이한 합성 및 정제를 촉진할 뿐 아니라 제조 절차 및 비용을 개선하고 감소시킨다. 또한, 본 발명의 화합물은 바람직하게는 PYY 수용체와 상호작용하지만 NPY Y1, Y4 및 Y5와 같은 동종 유사체와는 상호작용하지 않는다. 이로써 원하지 않는 작용물질 또는 길항물질 부반응이 최소화된다.

본원에서 언급된 모든 펩타이드 서열은 통상적인 관례에 따라 표기되며, 이때 달리 언급하지 않는 한 N-말단 아미노산은 좌측에, C-말단 아미노산은 우측에 존재한다. 두 아미노산 잔기 사이의 짧은 선은 펩타이드 결합을 나타낸다. 아미노산이 이성질체 형태를 갖는 경우, 상기 이성질체 형태는 달리 언급하지 않는 한 나타낸 아미노산의 L 형태이다. 본 발명을 기술함에 있어 편의상, 다양한 아미노산에 대해 통상적 및 비통상적 약어를 사용한다. 이들 약어는 당해 분야에 숙련된 자에게 익숙하지만, 명확히 하기 위해 하기에 열거한다:

Asp=D=아스파트산; Ala=A=알라닌; Arg=R=아르기닌; Asn=N=아스파라긴;

Gly=G=글라이신; Glu=E=글루탐산; Gln=Q=글루타민; His=H=히스티딘;

Ile=I=아이소류신; Leu=L=류신; Lys=K=라이신; Met=M=메티오닌;

Phe=F=페닐알라닌; Pro=P=프롤린; Ser=S=세린; Thr=T=트레오닌;

Trp=W=트립토판; Tyr=Y=티로신; 및 Val=V=발린.

또한, 편의상 및 당해 분야에 숙련된 자에게 용이하게 알려지듯이, 하기의 약어 또는 기호를 사용하여 본 발명에 사용된 잔기, 시약 등을 나타낸다:

Pqa: N-피페라진-1-일-4-(3H)-퀴나졸리논-3-아세트산;

Cms: N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌;

3,4,5,F3-Phe: 3,4,5-트라이플루오로 페닐알라닌;

2,3,4,5,6,F5-Phe: 2,3,4,5,6-펜타플루오로 페닐알라닌;

4-MeO-Apc: 4-메톡시-1-아미노-4-페닐사이클로헥세인 카복실산;

3-Pal: 3-피리딜 알라닌;

4-Pal: 4-피리딜 알라닌;

Aib: 아미노 아이소뷰티르산;

1-1-Aic: 1 아미노-인단 1-카복실산;

2-2-Aic: 2 아미노-인단 2-카복실산;

Ach: 1-아미노 사이클로헥실 카복실산;

Acp: 1-아미노 사이클로펜틸 카복실산;

Fmoc: 9-플루오레닐메틸옥시카보닐;

Allyl: 알릴 에스터;

Aloc: 알릴옥시카보닐;

Mtt: 4-메틸트리틸;

2Pip: 2-페닐아이소프로필 에스터;

Pmc: 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐;

CH₂Cl₂: 메틸렌 클로라이드;

A2O: 아세트산 무수물;

CH₃CN: 아세토나이트릴;

DMAc: 다이메틸아세트아마이드;

DMF: 다이메틸폼아마이드;

DIPEA: N,N-다이아이소프로필에틸아민;

TFA: 트라이플루오로아세트산;

HOBT: N-하이드록시벤조트리아졸;

DIC: N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드;

BOP: 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스-(다이메틸아미노)포스포늄-헥사플루오로포스페이트;

HBTU: 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄-헥사플루오로포스페이트;

NMP: 1-메틸 2-피롤리덴온;

Bip: 바이페닐알라닌 또는 4-페닐-펜틸알라닌;

Dip: 다이페닐알라닌;

Tic: 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산;

FAB-MS: 고속 원자 충격 질량 분석법; 및

ES-MS: 전기 분무 질량 분석법.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 치환되거나 비치환될 수 있는, 분지 또는 비-분지, 사이클릭 또는 비-사이클릭, 포화 또는 불포화(예를 들면, 알케닐 또는 알키닐) 하이드로카빌 라디칼을 의미한다. 사이클릭인 경우, 알킬기는 바람직하게는 C₃ 내지 C₁₂, 보다 바람직하게는 C₅ 내지 C₁₀, 보다 더 바람직하게는 C₅ 내지 C₇이다. 비-사이클릭인 경우, 알킬기는 바람직하게는 C₁ 내지 C₁₀, 보다 바람직하게는 C₁ 내지 C₆, 보다 더 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필(n-프로필 또는 아이소프로필), 뷰틸(n-뷰틸, 아이소뷰틸 또는 3급-뷰틸) 또는 펜틸(n-펜틸 및 아이소펜틸 포함), 보다 더 바람직하게는 메틸이다. 그러므로, 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "알킬"에는 알킬(분지 또는 비-분지), 치환된 알킬(분지 또는 비-분지), 알케닐(분지 또는 비-분지), 치환된 알케닐(분지 또는 비-분지), 알키닐(분지 또는 비-분지), 치환된 알키닐(분지 또는 비-분지), 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 사이클로알키닐 및 치환된 사이클로알키닐이 포함됨을 인지할 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "저급 알킬"은 분지 또는 비-분지, 사이클릭 또는 비-사이클릭, 포화 또는 불포화(예를 들면, 알케닐 또는 알키닐) 하이드로카빌 라디칼을 의미하며, 이때 상기 사이클릭 저급 알킬기는 C₅, C₆ 또는 C₇이고, 상기 비-사이클릭 저급 알킬기는 C₁, C₂, C₃ 또는 C₄이며, 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필(n-프로필 또는 아이소프로필) 또는 뷰틸(n-뷰틸, 아이소뷰틸 또는 3급-뷰틸)로부터 선택된다. 그러므로, 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "저급 알킬"에는 저급 알킬(분지 또는 비-분지), 저급 알케닐(분지 또는 비-분지), 저급 알키닐(분지 또는 비-분지), 사이클로저급알킬, 사이클로저급알케닐 및 사이클로저급알키닐이 포함됨을 인지할 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "아릴"은 치환되거나 비치환된 카보사이클릭 방향족 기, 예를 들면, 페닐 또는 나프틸, 또는 하나 이상, 바람직하게는 하나의 헤테로원자를 함유하는 치환되거나 비치환된 헤테로방향족 기, 예를 들면, 피리딜, 피롤릴, 퓨라닐, 티에닐, 티아졸릴, 아이소티아졸릴, 옥사졸릴, 아이소옥사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 트리아졸릴, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 트리아지닐, 인돌릴, 인다졸릴, 퀴놀릴, 퀴나졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈아이소옥사졸릴 및 벤즈아이소티아졸릴을 의미한다.

알킬 및 아릴기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환된 경우, 일반적으로 1 내지 3개의 치환체, 바람직하게는 1개의 치환체가 존재한다. 치환체로는 다음이 포함될 수 있다: 탄소-함유 기, 예를 들면, 알킬, 아릴, 아릴알킬(예, 치환 및 비치환된 페닐, 치환 및 비치환된 벤질); 할로겐 원자 및 할로겐-함유 기, 예를 들면, 할로알킬(예, 트라이플루오로메틸); 산소-함유 기, 예를 들면, 알콜(예, 하이드록실, 하이드록시알킬, 아릴(하이드록실)알킬), 에테르(예, 알콕시, 아릴옥시, 알콕시알킬, 아릴옥시알킬), 알데하이드(예, 카복스알데하이드), 케톤(예, 알킬카보닐, 알킬카보닐알킬, 아릴카보닐, 아릴알킬카보닐, 아릴카보닐알킬), 산(예, 카복시, 카복시알킬), 산 유도체, 예를 들면, 에스터(예, 알콕시카보닐, 알콕시카보닐알킬, 알킬카보닐옥시, 알킬카보닐옥시알킬), 아마이드(예, 아미노카보닐, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐, 아미노카보닐알킬, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐알킬, 아릴아미노카보닐), 카바메이트(예, 알콕시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 아미노카보닐옥시, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐옥시, 아릴아미노카보닐옥시) 및 유레아(예, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐아미노 또는 아릴아미노카보닐아미노); 질소-함유 기, 예를 들면, 아민(예, 아미노, 모노- 또는 다이-알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이-알킬아미노알킬), 아지드, 나이트릴(예, 사이아노, 사이아노알킬), 나이트로; 황-함유 기, 예를 들면, 아스티올, 티오에테르, 설폭사이드 및 설폰(예, 알킬티오, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 알킬티오알킬, 알킬설피닐알킬, 알킬설포닐알킬, 아릴티오, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아릴티오알킬, 아릴설피닐알킬, 아릴설포닐알킬); 및 하나 이상, 바람직하게는 하나의 헤테로원자를 함유하는 헤테로사이클릭기(예, 티에닐, 퓨라닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 아이소티아졸릴, 옥사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 아지리디닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피롤리닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 피라닐, 피로닐, 피리딜, 피라지닐, 피리다지닐, 피페리딜, 헥사하이드로아제피닐, 페페라지닐, 모폴리닐, 티아나프틸, 벤조퓨라닐, 아이소벤조퓨라닐, 인돌릴, 옥시인돌릴, 아이소인돌릴, 인다졸릴, 인돌리닐, 7-아자인돌릴, 벤조피라닐, 쿠마리닐, 아이소쿠마리닐, 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 나프티리디닐, 신놀리닐, 퀴나졸리닐, 피리도피리딜, 벤즈옥사지닐, 퀴녹살리닐, 크로메닐, 크로마닐, 아이소크로마닐, 프탈라지닐 및 카볼리닐).

저급 알킬기는 치환되거나 비치환될 수 있으며, 바람직하게는 비치환된다. 치환된 경우, 일반적으로 1 내지 3개의 치환체, 바람직하게는 1개의 치환체가 존재한다. 치환체로는 알킬, 아릴 및 아릴알킬 이외의 다른 상기 열거한 치환체 기들이 포함된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "알콕시"는 알킬-O-를 의미하고, "알코일"은 알킬-CO-를 의미한다. 알콕시 치환체 기 또는 알콕시-함유 치환체 기는 하나 이상의 알킬기로 치환될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "할로겐"은 플루오르, 염소, 브롬 또는 요오드 라디칼, 바람직하게는 플루오르, 염소 또는 브롬 라디칼, 보다 바람직하게는 플루오르 또는 염소 라디칼을 의미한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용되는 염"은 화학식 I 화합물의 임의의 약학적으로 허용되는 염을 의미한다. 염은 무기 및 유기 산 및 염기를 포함하여 약학적으로 허용되는 무독성 산 및 염기로부터 제조될 수 있다. 상기 산으로는 아세트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 캄포설폰산, 시트르산, 에테인설폰산, 다이클로로아세트산, 폼산, 퓨마르산, 글루콘산, 글루탐산, 히푸르산, 브롬화수소산, 염산, 이세티온산, 락트산, 말레산, 말산, 만델산, 메테인설폰산, 무크산, 질산, 옥살산, 파모산, 판토텐산, 인산, 석신산, 황산, 타르타르산, 옥살산, p-톨루엔설폰산 등이 포함된다. 퓨마르산, 염산, 브롬화수소산, 인산, 석신산, 황산 및 메테인설폰산이 특히 바람직하다. 허용되는 염기 염으로는 알칼리 금속(예, 나트륨, 칼륨), 알칼리 토금속(예, 칼슘, 마그네슘) 및 알루미늄 염이 포함된다.

본 발명의 한 태양에서, 하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 제공된다:

화학식 I

상기에서,

R₂는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고;

R₄는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고;

R₅는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고;

R₆은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₇은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고;

R₈은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₉는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고;

R₁₀은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고;

R₁₁은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₂는 Gln 또는 Ala이고;

R₁₃은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₄는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr이다.

본 발명의 또 다른 태양에서, 하기 화학식 II(서열번호: 1)의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 제공된다:

상기에서,

X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴노졸리논-3-아세트산(Pqa), N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌(Cms), 4-(2-아미노메틸)-6-다이벤조퓨란프로파노산, 4-(1-피페리딘-4-일)-뷰타노산 및 4-(2-아미노에틸)-1-카복시메틸 피페라진으로 이루어진 군에서 선택된 잔기이고;

R₂는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이다.

본 발명의 또 다른 태양에서, 하기 화학식 III(서열번호: 2)의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 제공된다:

상기에서,

Y는 H, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 저급 알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 알콕시, 또는 폴리(에틸렌)글라이콜 잔기이다.

상기 정의한 바와 같은 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 X가 Pqa인 화합물이다. 상기 정의한 바와 같은 다른 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 X가 Cms인 화합물이다. 바람직하게, Y는 H 또는 (C₁-C₆)알킬이고, 보다 바람직하게, Y는 (C₁-C₆)알킬 잔기이다.

상기 정의한 바와 같은 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 다음으로 이루어진 군에서 선택된 화합물이다:

상기 정의한 바와 같은 보다 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 다음으로 이루어진 군에서 선택된 화합물이다:

상기 언급한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 모두 개별적으로 별도의 바람직한 태양을 구성한다.

본 발명의 또 다른 태양에서, 치료 효과량의 하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 비만 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자에서 비만을 치료하는 방법이 제공된다:

화학식 I

상기에서,

R₂는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고;

R₄는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고;

R₆은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₇은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고;

R₈은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₉는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고;

R₁₀은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고;

R₁₁은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₂는 Gln 또는 Ala이고;

R₁₃은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₄는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr이다.

상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 상기 환자에게 3 일마다 한번씩 투 여하는 전술한 바와 같은 방법이 바람직하다. 바람직하게, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 상기 환자에게 일주일에 한번 투여된다.

상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 상기 환자에게 경구, 비내, 정맥내, 피하, 비경구, 경피, 복강내 또는 직장내로 투여하는 전술한 바와 같은 방법이 바람직하다. 바람직하게, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 비내로 투여한다. 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 피하로 투여하는 것도 또한 바람직하다.

전술한 바와 같은 바람직한 방법에서, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 약 2.5 내지 약 10 mg/kg, 보다 바람직하게는 약 2.5 내지 약 5 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 약 5 내지 약 10 mg/kg의 투여량으로 투여하는 방법도 또한 바람직하다.

전술한 바와 같은 방법에서, X가 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴노졸리논-3-아세트산(Pqg), N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌(Cms), 4-(2-아미노메틸)-6-다이벤조퓨란프로파노산, 4-(1-피페리딘-4-일)-뷰타노산 및 4-(2-아미노에틸)-1-카복시메틸 피페라진으로 이루어진 군에서 선택되는 신경펩타이드-2 수용체 작용물질이 바람직하다.

본 발명의 또 다른 태양에서, 아미노산 잔기 5 내지 24가 약 8 내지 약 11 Å 길이의 잔기로 치환된 PYY_3-36 유도체를 갖는 신경펩타이드-2 수용체 작용물질이 제공된다.

이제 본 발명을 하기의 상세한 설명 및 첨부한 도면에 의해 더 예시하며, 이 들로부터 다른 태양, 특징 및 이점을 취할 수 있다.

본 발명은 아미노산 잔기 5 내지 24가, 예를 들면, Pqa 또는 Cms와 같은 잔기로 치환된 PYY_3-36의 유사체에 관한 것이다. 예를 들면, 본 발명은 하기 화학식 PYY_3-4-Pqa-PYY_25-36:

및, 화학식 PYY_3-4-Cms-PYY_25-36의 화합물을 제공한다:

본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:

상기 구조에서, 기 -X-CH₂-CH₂-O-X-는, 일반적인 명명법에 따라서, 폴리에틸렌글라이콜 잔기의 반복되는 글라이콜 단위, 즉, 기 -(CH₂-CH₂-O)_n-을 말한다. 따라서, "n"은 목적하는 폴리에틸렌 글라이콜 단위의 목적하는 분자량, 바람직하게는 약 10,000(n이 약 227) 또는 약 30,000(n이 약 682)을 달성하도록 선택된다. 가이 드로서 천연 PYY_3-36의 NMR-유도된 구조를 이용하여, PYY_3-36의 아미노산 잔기 5 내지 24를 치환하는 잔기를 갖는 유사체를 본원에 나타내었다. 상기 잔기의 예로는 N-피페라진-1-일-4-(3H)-퀸아졸리논-3-아세트산(Pqa) 및 N-(5-O-카복시메틸)-세라토닌(Cms)이 포함된다. 상기 잔기는 전형적으로 강성이며 유리하게 분자의 3차 구조를 안정화시켜 목적하는 효능 및 약물동력학적 및 약리학적 성질을 갖는 절단 유사체를 제공한다. 상기 잔기는 전형적으로 길이가 약 8 내지 약 11 Å, 바람직하게는 길이가 약 9 내지 약 11 Å, 보다 바람직하게는 길이가 약 9 내지 약 10 Å, 보다 더 바람직하게는 길이가 약 8 내지 약 10 Å, 훨씬 더 바람직하게는 길이가 약 8 내지 약 9 Å이다.

본 발명은, 특정 태양들의 변형이 이루어질 수 있고 첨부된 청구의 범위의 범주내에 속하므로, 본원에 기술된 본 발명의 특정 태양으로 한정되지 않음을 주지해야 한다. 사용된 용어는 특정 태양을 설명하기 위한 것이며 제한하려는 것이 아님도 또한 주지해야 한다. 대신, 본 발명의 범위는 첨부된 청구의 범위에 의해 확인될 것이다.

본원에 기술된 바와 유사하거나 동등한 임의의 방법, 장치 및 물질을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있지만, 바람직한 방법, 장치 및 물질을 이제 설명한다.

본 발명의 대표적인 화합물은 아미노산 사이의 펩타이드 결합을 생성하는 임의의 공지된 통상적인 절차에 의해 용이하게 합성될 수 있다. 상기 통상적인 절차 로는, 예를 들면, 카복실기 및 보호된 다른 반응기를 갖는 아미노산 또는 그의 잔기의 유리 알파 아미노기와, 아미노기 또는 보호된 다른 반응기를 갖는 또 다른 아미노산 또는 그의 잔기의 유리 1급 카복실기 사이에 축합을 가능케하는 임의의 용액상 절차가 포함된다.

본 발명의 신규 화합물을 합성하는 상기 통상적인 절차로는, 예를 들면, 임의의 고체상 펩타이드 합성 방법이 포함된다. 상기 방법에서, 신규 화합물의 합성은 고체상 방법의 일반 원리에 따라 목적하는 아미노산 잔기를 한번에 하나씩 성장하는 펩타이드 쇄에 차례로 혼입함으로써 수행될 수 있다. 상기 방법은, 예를 들면, 본원에 참고로 인용된 문헌 [Merrifield, R.B., J. Amer. Chem. Soc., 85, 2149-2154, 1963; Barany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press, 1-284, 1980]에 개시되어 있다.

적당한 보호기로 다양한 아미노산 잔기의 반응성 측쇄기를 보호하여 보호기가 결국 제거될 때까지 그 부위에서 화학 반응이 일어나는 것을 방지하는 것이 펩타이드의 화학 합성에 통상적이다. 통상적으로, 아미노산 또는 단편 상의 알파 아미노기가 카복실기에서 반응하는 동안 상기 알파 아미노기를 보호한 후, 알파 아미노 보호기를 선택적으로 제거하여 그 부위에서 후속 반응이 일어나게 하는 것도 또한 보편적이다. 고체상 합성 방법과 관련하여 특정한 보호기가 개시되었지만, 각각의 아미노산은 용액상 합성에서 각각의 아미노산에 통상적으로 사용되는 보호기로 보호될 수 있음을 주지해야 한다.

알파 아미노기는 방향족 우레탄-형 보호기, 예를 들면, 알릴옥시카보닐, 벤질옥시카보닐(Z) 및 치환된 벤질옥시카보닐, 예를 들면, p-클로로벤질옥시카보닐, p-나이트로벤질옥시카보닐, p-브로모벤질옥시카보닐, p-바이페닐-아이소프로필옥시카보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc) 및 p-메톡시벤질옥시카보닐(Moz); 지방족 우레탄-형 보호기, 예를 들면, t-뷰틸옥시카보닐(Boc), 다이아이소프로필메틸옥시카보닐, 아이소프로필옥시카보닐 및 알릴옥시카보닐로부터 선택된 적당한 보호기로 보호될 수 있다. 본 발명에서, Fmoc가 알파 아미노 보호에 가장 바람직하다.

구아니디노기는 나이트로, p-톨루엔설포닐(Tos), (Z)펜타메틸클로만설포닐(Pmc), 4-메톡시-2,3,6-트라이메틸벤젠설포닐(Mtr)로부터 선택된 적당한 보호기로 보호될 수 있으며, 아르기닌(Arg)에 대해서는 (Pmc) 및 (Mtr)이 가장 바람직하다.

ε-아미노기는 2-클로로 벤질옥시카보닐(2-Cl-Z), 2-브로모 벤질옥시카보닐(2-Br-Z)- 및 t-뷰틸옥시카보닐(Boc)로부터 선택된 적절한 보호기로 보호될 수 있다. Boc가 (Lys)에 가장 바람직하다.

하이드록실기(OH)는 벤질(Bzl), 2,6-다이클로로벤질(2,6 다이Cl-Bzl) 및 3급 뷰틸(t-Bu)로부터 선택된 적절한 보호기로 보호될 수 있으며, (tBu)가 (Tyr), (Ser) 및 (Thr)에 대해 가장 바람직하다.

β- 및 γ-아마이드기는 4-메틸트리틸(Mtt), 2,4,6-트라이메톡시벤질(Tmob), 4,4-다이메톡시다이틸비스-(4-메톡시페닐)-메틸(Dod) 및 트리틸(Trt)로부터 선택된 적절한 보호기로 보호될 수 있다. Trt가 (Asn) 및 (Gln)에 대해 가장 바람직하다.

인돌기는 포밀(For), 메시틸-2-설포닐(Mts) 및 t-뷰틸옥시카보닐(Boc)로부터 선택된 적절한 보호기로 보호될 수 있다. Boc가 (Trp)에 대해 가장 바람직하다.

이미다졸기는 벤질(Bzl), t-뷰틸옥시카보닐(Boc) 및 트리틸(Trt)로부터 선택된 적절한 보호기로 보호될 수 있다. Trt가 (His)에 대해 가장 바람직하다.

모든 용매, 아이소프로판올(iPrOH), 메틸렌 클로라이드(CH₂Cl₂), 다이메틸폼아마이드(DMF) 및 N-메틸피롤리논(NMP)은 피셔(Fisher) 또는 버딕 앤 잭슨(Burdick & Jackson)에서 구입하였으며, 더 증류하지 않고 사용하였다. 트라이플루오로아세트산은 할로카본(Halocarbon) 또는 플루카(Fluka)에서 구입하였으며 더 정제하지 않고 사용하였다.

다이아이소프로필카보다이이미드(DIC) 및 다이아이소프로필에틸아미노(DIPEA)는 플루카 또는 알드리치(Aldrich)에서 구입하였으며 더 정제하지 않고 사용하였다. 하이드록시벤조트리아졸(HOBT), 다이메틸설파이드(DMS) 및 1,2-에테인다이티올(EDT)은 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Co.)에서 구입하였으며 더 정제하지 않고 사용하였다. 보호된 아미노산은 일반적으로 L 구조이며, 바켐(Bachem) 또는 네오시스템(Newsystem)에서 상업적으로 입수하였다. 이들 시약의 순도는 사용하기 전에 박층 크로마토그래피, NMR 및 융점으로 확인하였다. 벤질하이드릴아민 수지(BHA)는 바켐 또는 어드밴스드 켐테크(Advanced Chemtech)에서 구입한 스타이렌 - 1% 다이비닐벤젠(100 내지 200 또는 200 내지 400 메쉬)의 공중합체이다. 이들 수지의 전체 질소 함량은 일반적으로 0.3 내지 1.2 meq/g이었다.

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 콘스타메트릭(Constametric) I 및 III 펌프, 그래디언트 마스터(Gradient Master) 용매 프로그래머 및 혼합기, 및 스펙트로모니터(Spectromonitor) III 가변 파장 UV 검출기로 이루어진 LDC 장치상에서 수행하였다. 분석용 HPLC는 비닥(Vydac) C₁₈ 컬럼(0.4 x 30 cm)을 사용하여 역상 방식으로 수행하였다. 예비 HPLC 분리는 비닥 컬럼(2 x 25 cm)에서 수행하였다. 바람직한 태양에서, 펩타이드는 메리필드(Merrifield)가 일반적으로 기술한 방법[J. Amer. Chem. Soc., 85, 2149, 1963]에 의해 고체상 합성을 이용하여 제조하였지만, 당해 분야에 공지된 다른 등가의 화학 합성법도 전술한 바와 같이 이용할 수 있다. 고체상 합성은 보호된 알파-아미노산을 적절한 수지에 커플링시켜 펩타이드의 C-말단으로부터 개시된다. 상기 출발 물질은 알파-아미노 보호된 아미노산을 에스터 결합에 의해 p-벤질옥시벤질 알콜(왕(Wang)) 수지에 결합시키거나, 또는 Fmoc-링커, 예를 들면, p-((R,S)-α-(1-(9H-플루오렌-9-일)-메톡시폼아미도)-2,4-다이메틸옥시벤질)-페녹시아세트산(링크(Rink) 링커) 사이의 아마이드 결합에 의해 벤질하이드릴아민(BHA) 수지에 결합시킴으로써 제조할 수 있다. 하이드록시메틸 수지의 제조는 당해 분야에 공지되어 있다. Fmoc-링커-BHA 수지 지지체는 상업적으로 시판하며 일반적으로, 합성되는 목적 펩타이드가 C-말단에 비치환된 아마이드를 갖는 경우에 사용된다.

전형적으로, 아미노산 또는 유사체는, 2 내지 5 당량의 아미노산 및 적당한 커플링제를 사용하여, 아미노산 또는 유사체의 Fmoc 보호된 형태를 이용하여 Fmoc- 링커-BHA 수지상에 커플링시킨다. 커플링후에, 수지를 세척하고 진공하에 건조할 수 있다. 아미노산이 수지상에 부하된 것은 일정량의 Fmoc-아미노산 수지의 아미노산 분석에 의해 또는 UV 분석에 의한 Fmoc 기의 측정에 의해 측정할 수 있다. 임의의 미반응 아미노기는 수지를 메틸렌 클로라이드 중에서 아세트산 무수물 및 다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 캡핑할 수 있다.

수지는 수회의 반복 사이클을 통해 아미노산을 순차적으로 부가할 수 있다. 알파 아미노 Fmoc 보호기는 염기성 조건하에서 제거된다. DMF 중 피페리딘, 피페라진 또는 모폴린(20 내지 40%, v/v)을 상기 목적으로 사용할 수 있다. 바람직하게, DMF중 40% 피페리딘을 사용한다.

알파 아미노 보호기를 제거한 후, 후속 보호된 아미노산을 중간체인 보호된 펩타이드-수지를 수득하기 위해 바람직한 순서로 단계적으로 커플링시킨다. 펩타이드의 고체상 합성에서 아미노산의 커플링에 사용되는 활성화 시약은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 상기 합성에 적절한 시약은 벤조트리아졸-1-일옥시-트라이-(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), 브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBroP) 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU) 및 다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)이다. 여기서, HBTU 및 DIC가 바람직하다. 문헌 [Barany and Merrifield, The Peptides, Vol. 2, J. Meienhofer, ed., Academic Press, pp.1-284, 1979]에 기술된 다른 활성화제를 사용할 수도 있다. 합성 사이클을 최적화하기 위해 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBT), N-하이드록시석신이미드(HOSu) 및 3,4- 다이하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진(HOOBT)과 같은 다양한 시약들을 커플링 혼합물에 가할 수 있다. 여기서, HOBT가 바람직하다.

전형적인 합성 사이클에 대한 프로토콜은 다음과 같다:

모든 세척 및 커플링을 위한 용매는 10 내지 20 ml/g 수지의 부피로 측정하였다. 합성 전체에 걸쳐 커플링 반응은 카이저 닌하이드린(Kaiser Ninhydrin) 시험으로 모니터하여 완료 정도를 측정하였다[Kaiser et al., Anal. Biochem., 34, 595-598, 1970]. Fmoc-Arg(Pmc)에 대해서 및 입체 장애를 갖는 산에 의한 2급 아민에 대한 커플링에 대해 느린 반응 역학이 관찰되었다. 임의의 불완전환 커플링 반응은 새로 제조된 활성화된 아미노산과 커플링시키거나, 또는 전술한 바와 같은 아세트산 무수물로 펩타이드 수지를 처리하여 캡핑하였다. 완전히 결합된 펩타이드-수지는 진공하에 수시간동안 건조하였다.

각각의 화합물에 대해, 차단 기를 제거하고 펩타이드를 수지로부터 분리하였다. 예를 들면, 펩타이드-수지를 실온에서 수지 1 g 당 100 μl의 에테인다이티올, 100 μl의 다이메틸설파이드, 300 μl의 아니솔 및 9.5 ml의 트라이플루오로아 세트산으로 180 분간 처리하였다. 또는, 펩타이드-수지를 실온에서 수지 1 g 당 1.0 ml의 트라이아이소프로필 실란 및 9.5 ml의 트라이플루오로아세트산으로 180 분간 처리하였다. 수지를 여과시키고 여액을 냉장시킨 에틸 에테르중에서 침전시켰다. 침전물을 원심분리하고 에테르 층을 경사분리하였다.

잔사를 2 또는 3 부피의 Et₂O로 세척하고 재원심분리하였다. 조 생성물을 진공하에 건조하였다.

조 펩타이드의 정제는 역상 비닥 C-18 컬럼(50 x 250 mm, 300 Å, 10 내지 15 μm) 상에서 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 시마주(Shimazu LC-8A 시스템 상에서 수행하였다. 펩타이드를 최소 부피의 0.1% AcOH/H₂O 또는 CH₃CH/H₂O 중에서 컬럼에 주입하였다. 구배 용출은 일반적으로 50 ml/분의 유량으로 2% B 완충액에서 시작하여, 70 분에 걸쳐 2%에서 70% B로 행하였다(완충액 A: 0.1% TFA/H₂O, 완충액 B: 0.1% TFA/CH₃CN). UV 검출은 220/280 nm에서 행하였다. 생성물을 함유하는 분획을 분리하고 그 순도를 2 ml/분의 유량에서 10 분에 걸친 구배(2 내지 70%)(완충액 A: 0.1% TFA/H₂O, 완충액 B: 0.1% TFA/CH₃CN)로 역상 에이스(Ace) C18 컬럼(4.6 x 50 mm)을 사용하여 시마주 CL-10AT 분석 시스템상에서 판정하였다. 고 순도인 것으로 판정된 분획을 모아서 동결건조하였다.

최종 생성물의 순도는 상기 언급한 바와 같이 역상 컬럼상에서 분석용 HPLC로 검사하였다. 모든 생성물의 순도는 약 95 내지 99%인 것으로 판정되었다. 모든 최종 생성물은 또한 고속 원자 충격 질량 분광법(fast atom bombardment mass spectrometry, FAB-MS) 또는 전기분무 질량 분광법(electrospray mass spectrometry, ES-MS)에 적용하였다. 모든 생성물은 허용되는 한계내에서 예상된 모 M+H 이온을 생성하였다.

Y2R의 작용물질은 인간 비만의 마우스 모델에서 음식물 섭취량의 감소를 야기한다. 그러므로, 이들 화합물의 투여는 Y2 수용체 활성을 작용화시켜 음식물 섭취량의 감소 및 체중 조절에 중요하다. 실시예 78에서의 생체내 활성 실험에 따르면, 음식물 섭취량의 감소가 본 발명의 선택된 유사체(실시예 5, 44, 73 및 74의 유사체)에 대해 입증되었으며, 결과는 도 7, 8, 9 및 10에 요약하였다.

본 발명의 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 제공될 수 있다. 바람직한 염의 예는 약학적으로 허용되는 유기 산, 예를 들면, 아세트산, 락트산, 말레산, 시트르산, 말산, 아스콜브산, 석신산, 벤조산, 살리실산, 메테인설폰산, 톨루엔설폰산, 트라이플루오로아세트산 또는 파모산, 및 중합체 산, 예를 들면, 타닌산 또는 카복시메틸 셀룰로스에 의해 생성된 염, 및 무기 산, 예를 들면, 하이드로할산(예, 염산), 황산 또는 인산 등에 의한 염이다. 숙련된 전문가에게 공지된 약학적으로 허용되는 염을 수득하기 위한 임의의 절차를 이용할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명의 신규 화합물은 신경펩타이드-2 수용체의 작용물질인 것으로 밝혀졌다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환, 특히 비만의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다.

그러므로, 본 발명은 또한 상기 정의한 바와 같은 화합물 및 약학적으로 허 용되는 담체 및/또는 보조제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 치료 활성 물질, 특히 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 치료 활성 물질, 특히 비만의 치료 및/또는 예방을 위한 치료 활성 물질로 사용하기 위한 전술한 바와 같은 화합물을 포함한다.

또 다른 바람직한 태양에서, 본 발명은 상기 정의한 바와 같은 화합물을 인간 또는 동물에게 투여하는 것을 포함하는, 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방적 처치, 특히 비만의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방적 처치, 특히 비만의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한 상기 정의한 바와 같은 화합물의 용도를 포함한다.

본 발명은 또한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방적 처치, 특히 비만의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한 약제를 제조하기 위한 전술한 바와 같은 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 약제는 전술한 바와 같은 화합물을 포함한다.

본 발명 방법의 실시에 있어, 효과량의 본 발명의 임의의 하나의 펩타이드 또는 본 발명의 임의의 펩타이드의 혼합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 당해 분야에 공지된 임의의 통상적이고 허용되는 방법에 의해 단독으로 또는 함께 투여한다. 따라서, 상기 화합물 또는 조성물은 경구적으로(예를 들면, 구강내), 설 하로, 비경구적으로(예를 들면, 근육내, 정맥내 또는 피하), 직장내로(예를 들면, 좌약 또는 세척액에 의해), 경피적으로(예를 들면, 피부 전기천공) 또는 흡입에 의해(예를 들면, 에어로졸에 의해), 및 정제 및 좌약을 포함하여 고체, 액체 또는 기체상 투여 형태로 투여될 수 있다. 투여는 지속 요법하에 단일 단위 투여형으로 또는 임의로 단일 용량 요법으로 수행할 수 있다. 치료 조성물은 또한 파모산과 같은 친유성 염과 함께 유성 유화액 또는 분산액의 형태, 또는 피하 또는 근육내 투여를 위한 생분해성 서방형 조성물의 형태일 수 있다.

따라서, 본 발명의 방법은 증상의 완화가 특히 필요하거나 아마도 절실한 경우 실시된다. 또는, 본 발명의 방법은 지속적 또는 예방적 치료로서 효과적으로 실행된다.

본 발명 조성물의 제조에 유용한 약학적 담체는 고체, 액체 또는 기체일 수 있으므로; 상기 조성물은 정제, 환제, 캡슐, 좌약, 분말, 장용 코팅 또는 다른 보호된 제형(예를 들면, 이온-교환 수지상에 결합되거나 또는 지질-단백질 소낭에 포장), 서방형 제형, 용액, 현탁액, 엘릭시르제, 에어로졸 등의 형태를 가질 수 있다. 담체는 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 오일, 예를 들면, 낙화생유, 대두유, 광유, 호마유 등을 포함하여 다양한 오일로부터 선택될 수 있다. 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글라이콜이 바람직한 액체 담체이며, 특히 (혈액과 등장성인 경우) 주사액에 바람직한 액체 담체이다. 예를 들면, 정맥내 투여용 제형은 고체 활성 성분(들)을 물에 용해시켜 수용액을 생성하고 용액을 멸균시켜 제조된 활성 성분(들)의 멸균 수용액을 포함한다. 적당한 약학적 부형제로는 전분, 셀룰로스, 활 석, 글루코스, 락토스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 곡분, 초크, 실리카, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌 글라이콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 조성물은 통상적인 약학적 첨가제, 예를 들면, 방부제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 삼투압 조절용 염, 완충제 등에 적용될 수 있다. 적당한 약학적 담체 또는 그의 제형은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences by E.W. Martin]에 기술되어 있다. 상기 조성물은 어느 경우에든 수용자에게 적절히 투여하기 위한 적절한 투여형을 제조하기 위해 적절한 담체와 함께 효과량의 활성 화합물을 함유한다.

본 발명 화합물의 용량은 많은 요인, 예를 들면, 투여 방식, 대상의 연령 및 체중, 및 치료될 대상의 상태에 따라 달라지며, 궁극적으로 주치의 또는 수의사에 의해 결정될 것이다. 주치의 또는 수의사에 의해 결정되는 바와 같은 활성 화합물의 상기 양을 본원에서 및 청구의 범위에서 "효과량"으로 칭한다. 예를 들면, 비내 투여용 용량은 전형적으로 약 1 내지 약 100 mg/kg 체중의 범위이며; 피하 투여용 용량은 전형적으로 약 0.001 내지 약 50 mg/kg 체중의 범위이다.

바람직하게, 본 발명 화합물의 용량은 약 2.5 내지 약 10 mg/kg이다. 가장 바람직하게, 투여량은 약 2.5, 약 5 및 약 10 mg/kg이다.

본 발명을 이제 하기 실시예에서 더 기술하며, 이들 실시예는 단지 예시로서 나타낸 것이며 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.

도 1은 본 발명 화합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.

도 2는 본 발명 화합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.

도 3은 본 발명 화합물의 MALDI-TOF를 나타낸 것이다.

도 4는 본 발명의 또 다른 화합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.

도 5는 본 발명 화합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.

도 6은 본 발명 화합물의 MALDI-TOF를 나타낸 것이다.

도 7은 본 발명의 화합물 투여후 음식물 섭취에 대한 영향을 나타낸 도표이다.

도 8은 본 발명의 다른 화합물 투여후 음식물 섭취에 대한 영향을 나타낸 도표이다.

도 9는 본 발명의 또 다른 화합물 투여후 음식물 섭취에 대한 영향을 나타낸 도표이다.

도 10은 본 발명의 또 다른 화합물 투여후 음식물 섭취에 대한 영향을 나타낸 도표이다.

실시예 1

Fmoc-링커-BHA 수지의 제조

벤즈하이드릴아민 코폴리스타이렌-1% 다이비닐벤젠 가교결합 수지(10.0 g, 9.3 몰당량, 100 내지 200 ASTM 메쉬, 어드밴스드 켐테크)를 100 ml의 CH₂Cl₂ 중에서 팽윤시키고 여과하고 각각 100 ml의 CH₂Cl₂, 6% DIPEA/CH₂CL₂(2회), CH₂Cl₂(2회)로 연속하여 세척하였다. 수지를 실온에서 100 ml의 25% DMF/CH₂Cl₂ 중에서 p-((R,S)-α-(1-(9H-플루오렌-9-일)-메톡시폼아미도)-2,4-다이메톡시벤질)-페녹시아세트산(Fmoc-링커)(7.01 g, 13.0 밀리몰), N-하이드록시벤조트리아졸(2.16 g, 16.0 밀리몰) 및 다이아이소프로필-카보다이이미드(2.04 ml, 13.0 밀리몰)로 24 시간동안 처리하였다. 수지를 여과하고 각각 100 ml의 CH₂Cl₂(2회), 아이소프로판올(2회), DMF 및 CH₂Cl₂(3회)로 연속하여 세척하였다. 카이저 닌하이드린 분석은 음성이었다. 수지를 진공하에 건조하여 16.12 g의 Fmoc-링커-BHA 수지를 수득하였다. 상기 수지의 일부(3.5 mg)를 Fmoc 탈보호시키고 정량적 UV 분석에 적용한 결과 0.56 밀리몰/g의 부하를 나타내었다.

실시예 2

플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc) 화학을 이용하여 어플라이드 바이오시스템 433A 합성기에 의한 펩타이드 합성에 대한 프로토콜

어플라이드 바이오시스템(Applied Biosystem) 433A 합성기(캘리포니아주 포스터 시티)에 의한 0.25 밀리몰 스케일의 펩타이드 합성을 위해, 패스트모크(FastMoc) 0.25 밀리몰 사이클을 41 ml 반응 용기에서 수지를 샘플링하거나 샘플링하지 않고 사용하였다. Fmoc-아미노산 수지를 2.1 g의 NMP, 2 g의 0.45M HOBT/HBTU와 함께 DMF 및 2M DIEA에 용해시킨 후 반응 용기로 옮겼다.

기본 패스트모크 커플링 사이클은 모듈 "BADEIFD"로 나타내었으며, 이때 각각의 문자는 모듈을 나타낸다. 예를 들면:

B는 20% 피페리딘/NMP를 사용한 Fmoc 탈보호 및 관련 세척 및 30 분간의 판독(UV 모니터링 또는 전도율)에 대한 모듈을 나타내고;

A는 0.45M HBTU/HOBt 및 2.0M DIEA에 의한 카트리지내 아미노산의 활성화 및 N₂ 버블링하의 혼합에 대한 모듈을 나타내고;

D는 반응 용기에서 수지의 NMP 세척에 대한 모듈을 나타내고;

E는 활성화된 아미노산을 커플링을 위해 반응 용기로 옮기는 것에 대한 모듈을 나타내고;

I는 반응 용기를 볼텍싱하거나 하지 않은 상태에서 10 분의 대기 기간에 대한 모듈을 나타내고;

F는 카트리지를 세척하고 약 10 분간 커플링시키고 반응 용기를 배출시키는 것에 대한 모듈을 나타낸다.

커플링은 전형적으로 1회 또는 수회 모듈 "T"의 부가에 의해 연장되었다. 예를 들면, 이중 커플링은 절차 "BADEIIADEIFD"를 수행함으로써 수행되었다. 다른 모듈, 예를 들면, 메틸렌 클로라이드 세척에 대한 c 및 아세트산 무수물에 의한 캡핑에 대한 "C"와 같은 모듈이 이용가능하다. 개개의 모듈은 또한, 예를 들면, 옮겨진 용매 또는 시약의 양을 변화시키기 위해 다양한 함수, 예를 들면, 전달 시간 의 타이밍을 변화시킴으로써 변형가능하였다.

상기 사이클은 전형적으로 하나의 아미노산을 커플링시키는데 사용되었다. 그러나, 테트라 펩타이드를 합성하기 위해서는, 사이클을 반복하고, 연결시켰다. 예를 들면, BADEIIADEIFD를 이용하여 첫 번째 아미노산을 커플링한 다음, BADEIIADEIFD에 의해 두 번째 아미노산을 커플링시킨 후, BADEIIADEIFD에 의해 세 번째 아미노산을 커플링시키고, 이어서 BADEIIADEIFD에 의해 4 번째 아미노산을 커플링시킨 후, BIDDcc에 의해 최종 탈보호 및 세척을 수행하였다.

실시예 3

상기 펩타이드를 어플라이드 바이오시스템 433A 합성기상에서 Fmoc 화학작용을 이용하여 합성하였다. 합성기는 실시예 2에 기술된 모듈을 사용하여 이중 커플링에 대해 프로그램을 설정하였다. 합성은 실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 사용하여 0.25 밀리몰 스케일로 수행하였다. 합성 종료시, 수지를 분리를 위해 진탕기상의 반응 용기로 옮겼다. 펩타이드를 13.5 ml의 97% TFA/3% H₂O 및 1.5 ml의 트라이아이소프로필실란을 사용하여 실온에서 180 분간 수지로부터 분리하였다. 탈보호 용액을 100 ml의 냉 ET₂O에 가하고, 1 ml의 TFA 및 30 ml의 냉 ET₂O로 세척하여 펩타이드를 침전시켰다. 펩타이드를 2 x 50 ml 폴리프로필렌 튜브를 사용하여 원심분리하였다. 개개 튜브로부터 수득된 침전물을 단일 튜브에 합하고 냉 ET₂O로 3회 세척하고 하우스 진공하에 데시케이터에서 건조시켰다.

조 물질을 퍼슈트(Pursuit) C18-컬럼(250 x 50 mm, 10 μm 입자 크기) 상에서 예비 HPLC로 정제하고 60 ml/분의 유량으로 220/280 nm의 검출파장에서 90 분내에 2 내지 70% B(완충액 A: 0.1% TFA/H₂O; 완충액 B: 0.1% TF/CH₃CN)의 선형 구배로 용출시켰다. 분획들을 수거하여 분석용 HPLC로 조사하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 합하고 동결건조시켜 65 mg(6%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₉₄H₂₉₅N₅₅O₅₇에 대한 계산치 4309.85, 실측치 4309.15.

실시예 4

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 151 mg(15%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₈₀H₂₇₉N₅₃O₅₄에 대한 계산치 4049.55, 실측치 4050.40.

실시예 5

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 148 mg(9%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2131.53, 실측치 2130.56.

실시예 6

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(아실화 사이클을 ABI-프로토콜에 부가하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 150 mg(27%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₅₇N₃₃O₂₂에 대한 계산치 2171.57, 실측치 2171.4.

실시예 7

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 34번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 142 mg(27%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₆H₁₅₀N₃₂O₂₀에 대한 계산치 2072.47, 실측치 2072.4.

실시예 8

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 32번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 167 mg(32%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₇H₁₅₁N₃₃O₂₀에 대한 계산치 2099.49, 실측치 2100.3.

실시예 9

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 31번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 105 mg(20%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₆H₁₄₉N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2101.47, 실측치 2102.1.

실시예 10

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 30번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 167 mg(27%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₅H₁₄₇N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2087.44, 실측치 2087.7.

실시예 11

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 29번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 142 mg(27%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₇H₁₅₂N₃₃O₂₀에 대한 계산치 2086.50, 실측치 2086.50.

실시예 12

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 28번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 164 mg(31%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₅H₁₄₇N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2087.44, 실측치 2087.40.

실시예 13

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 132 mg(26%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₂H₁₄₉N₃₃O₂₀에 대한 계산치 2037.42, 실측치 2037.60.

실시예 14

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 26번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 76 mg(15%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₅H₁₅₁N₃₁O₂₁에 대한 계산치 2063.46, 실측치 2064.0.

실시예 15

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 25번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 152 mg(30%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₅H₁₄₆N₃₀O₂₁에 대한 계산치 2043.13, 실측치 2043.4.

실시예 16

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 4번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 72 mg(14%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₅H₁₄₆N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2072.44, 실측치 2071.2.

실시예 17

실시예 16으로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성에 적용하고, 이때 아실화 사이클을 프로토콜에 부가하였으며, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 234 mg(44%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₇H₁₄₈N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2114.46, 실측치 2114.7.

실시예 18

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 196 mg(38%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₅H₁₄₇N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2087.45, 실측치 2086.5.

실시예 19

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Tyr을 서열의 36번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 114 mg(21%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.52, 실측치 2129.10.

실시예 20

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Arg을 서열의 35번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 221 mg(42%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.52, 실측치 2129.10.

실시예 21

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Arg을 서열의 33번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 174 mg(32%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.52, 실측치 2128.4.

실시예 22

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Val을 서열의 31번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 67 mg(12%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.52, 실측치 2129.10.

실시예 23

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Leu를 서열의 30번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 190 mg(36%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.52, 실측치 2129.10.

실시예 24

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Asn을 서열의 29번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 50 mg(10%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2128.80.

실시예 25

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Leu를 서열의 28번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 188 mg(35%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2129.40.

실시예 26

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Tyr을 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 119 mg(22%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2129.70.

실시예 27

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)His를 서열의 26번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 84 mg(16%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2128.80.

실시예 28

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Arg을 서열의 25번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 85 mg(16%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2128.80.

실시예 29

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Lys를 서열의 4번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 165 mg(31%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2129.10.

실시예 30

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Ile를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 84 mg(8%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2129.53, 실측치 2129.40.

실시예 31

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Tyr을 서열의 36번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 90 mg(17%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₇N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.50.

실시예 32

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Arg를 서열의 35번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 32 mg(6%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.50.

실시예 33

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Arg를 서열의 33번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 40 mg(7%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.20.

실시예 34

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Thr을 서열의 32번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 115 mg(21%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.20.

실시예 35

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Val을 서열의 31번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 60 mg(11%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.20.

실시예 36

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 leu를 서열의 30번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 91 mg(17%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2142.90.

실시예 37

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 leu를 서열의 28번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 153 mg(28%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2142.90.

실시예 38

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Tyr을 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 76 mg(14%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2142.90.

실시예 39

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 His를 서열의 26번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 93 mg(7%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.53, 실측치 2143.50.

실시예 40

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Arg를 서열의 25번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 33 mg(6%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.50.

실시예 41

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Lys를 서열의 4번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 156 mg(29%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.20.

실시예 42

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Ile를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 203 mg(38%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₉H₁₅₅N₃₃O₂₁에 대한 계산치 2143.56, 실측치 2143.20.

실시예 43

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Nle를 서열의 4번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 60 mg(11%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₃N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2114.52, 실측치 2113.80.

실시예 44

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(아실화 사이클을 프로토콜에 부가하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 41 mg(8%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₅₄N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2156.56, 실측치 2156.10.

실시예 45

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Phe를 서열의 25번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 92 mg(7%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₃H₁₅₁N₂₉O₂₂에 대한 계산치 2147.53, 실측치 2148.00.

실시예 46

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Trp를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 30 mg(6%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₅₄N₃₄O₂₀에 대한 계산치 2153.56, 실측치 2152.20.

실시예 47

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ala25 및 Trp27을 서열에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 50 mg(9%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₇H₁₄₇N₃₁O₂₀에 대한 계산치 2067.46, 실측치 2067.30.

실시예 48

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((D)Tyr를 서열의 36번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 104 mg(19%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₅₄N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2156.54, 실측치 2157.00.

실시예 49

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(N-메틸 Tyr을 서열의 36번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 28 mg(5%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₁H₁₅₆N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2170.57, 실측치 2170.50.

실시예 50

0.25 mM 스케일로 표준 프로토콜을 이용한 ABI433 합성기상에서의 자동화 합성과 수동 합성의 조합을 통해 펩타이드를 제조하였다. 단편 Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Val-Asp(2Pip)-Arg(Pmc)-Gln(Trt)-Arg(Pmc)-Tyr(OBut)-BHA 수지(서열번호: 29)를 ABI 프로토콜을 사용하여 합성한 다음, 수동으로 연장시켜 Fmoc-Ile-Nle-Pqa-Arg(Pmc)-His(Trt)-Tyr(OBut)-Lys-Asn(Trt)-Leu-Val-Asp-Arg(Pmc)-Gln(Trt)-Arg(Pmc)-Tyr(OBtu)-BHA 수지(서열번호: 30)를 수득하였다. 자동화 합성 완료후, 펩타이드 수지를 수동 고체상 용기로 옮기고 메틸렌 클로라이드 및 DMF로 수회 세척하였다. Fmoc-Lys(Mtt) 1.2 g(2.0 mM, 8 당량)을 고체로서 가하고 15 ml의 DMF를 가한 후 1.2 ml의 Dic(7 mM, 28 당량)를 가하였다. 음성 또는 거의 음성 닌하이드린이 수득될 때까지 커플링을 진행시켰다. 음성 닌하이드린이 수득되지 않은 경우, 수지를 6 ml의 Ac₂O, 1 ml의 DIEA 및 18 ml의 DMF로 30 분간 아세틸화시키고, 종료를 닌하이드린으로 조사하였다. 이어서, 수지를 3 x DMF 및 4 x CH₂Cl₂로 세척하였다. Lys(Mtt) 및 Asp(2Pip)를 CH₂Cl₂ 중의 2% TFA를 사용하여 10회 탈보호시켰 다. 탈보호후, 펩타이드 수지를 2 x CH₂Cl₂; 2 x 6% TFA/CH₂Cl₂; 2 x 6% DIEA/DMF 및 2 x DMF로 세척하였다. 측쇄를 HATU(240 mg, 0.625 mM(2.5 당량)) 및 DIEA(175 μl, 1.0 mM(4 당량))로 환화시키고 음성이 될 때까지 닌하이드린으로 모니터하였다.

환화 완료후, 펩타이드 수지를 Fmoc-Arg(Pmc)-His(Trt)-Tyr(OBut)-Lys- Asn(Trt)-Leu-Val-Asp-Arg(Pmc)-Gln(Trt)-Arg(Pmc)-Tyr(OBut)-BHA 수지(서열번호: 30)로 연장시키기 위해 ABI 용기로 옮겼다. Fmoc-Pga-OH(160 mg, 313 mM(1.25 당량)) 및 HOBt(5 mg, 313 mM(1.25 당량))를 고체로서 가하고 15 ml DMF를 가한 후 1.2 ml의 Dic(7 mM, 28 당량)를 가하였다. 커플링을 실온에서 밤새(일반적으로 18 시간) 수행하였다. DMF로 4회 세척한 후, 커플링을 닌하이드린으로 조사하였으며, 일반적으로 음성이었다. 표준 탈보호 및 세척 후에, Fmon-Nle-OH(1.2 g, 3.0 mM(12 당량))를 DMF 중 0.45 M HBTT/HOBt 6.6 ml로 3 분간 미리 활성화시키고 펩타이드 수지에 가하였다. 커플링을 3 또는 4 시간동안 수행하고, 반응 용기를 배출시키고 DMF로 4회 세척하였다. 커플링을 클로리날(DMAc 중 2% 아세트알데하이드 및 2% 테트라클로로-1,4-벤조퀴논)로 모니터하였다. 커플링이 불완전한 것으로 판정되는 경우, 수지를 밤새 재커플링시켰다. 커플링이 완료된 경우, 수지를 탈보호시키고 세척하고 Fmoc-Ile(1.2 g, 3.0 mM(12 당량))를 DMF 중 0.45 M HBTT/HOBt 6.6 ml로 3 분간 미리 활성화시키고 펩타이드 수지에 가하였다. 커플링을 3 또는 4 시간동안 수행하고, 반응 용기를 배출시키고 DMF로 4회 세척하였다. 상기 커플 링은 닌하이드린으로 조사하였으며, 일반적으로 음성이었다. 수지를 탈보호시키고 세척하고 6 ml의 Ac₂O, 1 ml의 DIEA 및 18 ml의 DMF로 30 분간 아세틸화시키고, 음성 또는 거의 음성 닌하이드린이 수득될 때까지 종료를 조사하였다. 음성 닌하이드린이 수득되지 않은 경우, 상기 수지는 6 ml의 Ac₂O, 1 ml의 DIEA 및 18 ml의 DMF로 30 분간 아세틸화시키고, 종료를 닌하이드린으로 조사하였다.

합성 완료후, 수지를 CH₂Cl₂로 4회 세척하고 N₂ 스트림하에 건조시켰다. 펩타이드를 탈보호시키고 수지로부터 1.5 ml의 트라이아이소프로필실란 및 13.5 ml의 97% TFA/3% H₂O로 180 분간 분리시켰다. 탈보호 용액을 100 ml의 냉 ET₂O에 가하고 1 ml의 TFA 및 30 ml의 냉 ET₂O로 세척하여 펩타이드를 침전시킨 후 원심분리하고 하우스 진공하에 데시케이터에서 건조시켰다.

조 펩타이드를 실시예 3에 기술된 절차에 따라 정제 및 동결건조하여 49 mg(9%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS C₁₀₀H₁₅₁N₃₃O₂₂에 대한 계산치: 2167.53 실측치: 2167.80.

실시예 51

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 44 mg(8%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₆H₁₅₁N₃₁O₂₁에 대한 계산치 2075.47, 실측치 2074.80.

실시예 52

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 129 mg(24%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₄N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2132.52, 실측치 2133.00.

실시예 53

실시예 50에 개시된 절차에 따라 0.25 mM 스케일로 ABI 433 상에서의 자동화 합성과 수동 합성의 조합을 통해 상기 펩타이드를 제조하였다. Fmoc-Cms-OH(151 mg, 313 mM(1.25 당량)) 및 HOBt(45 mg, 313 mM(1.25 당량))를 고체로서 가하고 15 ml의 DMF를 가한 후 1.2 ml의 Dic(7 mM, 28 당량)를 가하였다. 커플링을 실온에서 밤새(일반적으로 18 시간) 수행하였다. 조 펩타이드를 정제하고 동결건조하여 19 mg(9%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₄₉N₃₁O₂₂에 대한 계산치 2113.47, 실측치 2113.80.

실시예 54

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Tic를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정 제하여 87 mg(16%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₁H₁₅₄N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2152.56, 실측치 2152.50.

실시예 55

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Bip를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 90 mg(16%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₆H₁₅₈N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2216.64, 실측치 2217.00.

실시예 56

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Dip를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 84 mg(15%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₆H₁₅₈N₃₂O₂₁ 에 대한 계산치 2216.64, 실측치 2217.30.

실시예 57

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((1)Nal을 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 88 mg(16%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₄H₁₅₆N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2190.60, 실측치 2190.61.

실시예 58

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((2)Nal을 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 40 mg(7%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₄H₁₅₆N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2190.60, 실측치 2191.20.

실시예 59

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(3,4,5 트라이플루오로 Phe를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 101.4 mg(18%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₅₁F₃N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2194.52, 실측치 2194.20.

실시예 60

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(2,3,4,5,6 펜타플루오로 Phe를 서열의 27번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 122.5 mg(22%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₄₉F₅N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2230.50, 실측치 2230.50.

실시예 61

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((4-MeO-Apc)를 서열의 26번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 43 mg(8%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₈H₁₆₄N₃₀O₂₃에 대한 계산치 2250.70, 실측치 2250.60.

실시예 62

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((3-Pal)을 서열의 26번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 112 mg(21%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₂H₁₅₅N₃₁O₂₂에 대한 계산치 2167.57, 실측치 2167.20.

실시예 63

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((4-Pal)을 서열의 26번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 146 mg(27%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₂H₁₅₅N₃₁O₂₂에 대한 계산치 2167.57, 실측치 2167.20.

실시예 64

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((3,4,5 트라이플루오로 Phe)를 서열의 25번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 55 mg(10%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₃H₁₄₈F₃N₂₉O₂₂에 대한 계산치 2201.50, 실측치 2201.40.

실시예 65

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((2,3,4,5,6 펜타플루오로 Phe)를 서열의 25번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 65 mg(12%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₃H₁₄₆F₅N₂₉O₂₂에 대한 계산치 2237.49, 실측치 2237.70.

실시예 66

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((Aib)를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 32 mg(6%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₀N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2128.49, 실측치 2128.00.

실시예 67

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((1,1 Aic)를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 Pk A로 분리된 라세미 혼합물을 31 mg(6%)의 백색 무정형 분말로 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₄H₁₅₂N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2202.57, 실측치 2202.60.

실시예 68

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((1,1 Aic)를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 Pk B로 분리된 라세미 혼합물을 46 mg(8%)의 백색 무정형 분말로 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₄H₁₅₂N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2202.57, 실측치 2202.60.

실시예 69

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성((2,2 Aic)를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 103 mg(19%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₄H₁₅₂N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2202.57, 실측치 2202.30.

실시예 70

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Ach를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 81 mg(15%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₁H₁₅₄N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2168.55, 실측치 2168.10.

실시예 71

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성(Acp를 서열의 3번 위치에 삽입하였다)에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 95 mg(18%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₁₀₀H₁₅₂N₃₂O₂₂에 대한 계산치 2154.53, 실측치 2154.30.

실시예 72

실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 mg, 0.25 밀리몰)를 고체상 합성에 적용하고, 실시예 3의 절차에 따라 정제하여 80 mg(15%)의 백색 무정형 분말을 수득하였다. (ES)+-LCMS m/e C₉₈H₁₅₂N₃₂O₂₁에 대한 계산치 2114.51, 실측치 2113.80.

실시예 73

상기 구조에서, 기 -X-CH₂-CH₂-O-X-는, 일반적인 명명법에 따라서, 폴리에틸렌글라이콜 잔기의 반복되는 글라이콜 단위, 즉, 기 -(CH₂-CH₂-O)_n-을 말한다. 따라서, "n"은 목적하는 폴리에틸렌 글라이콜 단위의 목적하는 분자량을 달성하도록 선택된다. 실시예 72의 펩타이드 15 mg를 계량하여 50 mM 보레이트, pH 7.4 완충액에 용해시켰다. 107 mg의 10 kDa PEG-SPA-NHS(넥타(Nektar))를 2:1 PEG:펩타이드 몰 비를 이루도록 계량하고 가하여 펩타이드를 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간동안 진탕한 후 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에 10-배로 희석하고, S-세파로스(S-Sepharose)(아머샴(Amersham)) 상에서 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 도 1은 10 kDa PEG-PYY 펩타이드의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응에 의해 67.8%의 10 kDa 펩타이드가 수득되었다.

모노-PEG화 PYY 펩타이드를 단계적 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로, 목적하는 모노-PEG화 펩타이드는 125 mM NaCl로 용출되었다. 용출된 PEG-PYY 유사 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 막을 사용하여 아미콘(Amicon) 한외여과 셀에서 농축하였다. 이어서, PBS로 1회 10-배로 투석여과(diafilter)하였다.

농축된 실시예 73의 펩타이드를 분석을 위해 제공하고 분석하고 -20 ℃에서 저장하였다. 도 2는 정제된 10 kDa PEG-PYY 펩타이드의 HPLC 크로마토그램이다. 10 kDa 펩타이드의 순도는 97.6%인 것으로 측정되었다. 도 3은 분자량을 확인하기 위해 수행된 10 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF를 나타내는 그래프이다.

실시예 74

상기 구조에서, 기 -X-CH₂-CH₂-O-X-는 일반적인 명명법에 따라서, 폴리에틸렌글라이콜 잔기의 반복되는 글라이콜 단위, 즉, 기 -(CH₂-CH₂-O)_n-을 말한다. 따라서, "n"은 목적하는 폴리에틸렌 글라이콜 단위의 목적하는 분자량을 달성하도록 선택된다. 실시예 72의 펩타이드 15 mg를 계량하여 50 mM 보레이트, pH 7.4 완충액에 용해시켰다. 244 mg의 30 kDa PEG-SPA-NHS를 2:1 PEG:펩타이드 몰 비를 이루도록 계량하고 가하여 펩타이드를 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간동안 진탕(도 4)한 후 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에 10-배로 희석하고 S-세파로스(아머샴) 상에서 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 도 4는 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응에 의해 88.3%의 30 kDa 펩타이드가 수득되었다.

모노-PEG화 PYY 펩타이드를 단계적 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로, 목적하는 모노-PEG화 PYY 펩타이드는 125 mM NaCl로 용출되었다. 용출된 PEG-PYY 유사 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 막을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축하였다. 이어서, PBS로 1회 10-배로 투석여과하였다. 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고 분석하고 -20 ℃에서 저장하였다. 도 5는 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 98.4%인 것으로 측정되었다. 도 6은 분자량을 확인하기 위해 수행된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF를 나타낸다.

실시예 75

실시예 49의 화합물의 혈장내 안정성

실시예 49의 펩타이드의 인간 및 마우스 혈장 안정성을 측정하였다. 본 실시예에서는, 실시예 49의 펩타이드 140 μg를 37.5 ℃에서 300 μl의 인간 또는 마우스 혈장과 함께 0, 40, 90 및 150 분 동안 배양하였다. 배양후, 각각의 샘플을 물 중의 0.1% 아세트산에 50 배로 희석하였다. 이어서, 희석된 샘플은 LC/UV/MS로 분석하여 안정한 것으로 밝혀졌다.

실시예 76

실시예 32의 화합물의 혈장내 안정성

실시예 32의 펩타이드의 인간 및 마우스 혈장 안정성을 측정하였다. 본 실시예에서는, 실시예 32의 펩타이드 51 μg를 37.5 ℃에서 300 μl의 인간 또는 마우스 혈장과 함께 0, 40, 90 및 150 분 동안 배양하였다. 배양후, 각각의 샘플을 물 중의 0.1% 아세트산에 50 배로 희석하였다. 이어서, 희석된 샘플은 LC/UV/MS로 분석하여 안정한 것으로 밝혀졌다.

실시예 77

cAMP 작용물질 분석

본 실시예에서는, 다음의 물질을 사용하였다: 384-웰 플레이트; 트로픽스(Tropix) cAMP-스크린 키트; cAMP ELISA 시스템(어플라이드 바이오시스템즈, cat.# T1505; CS 20000); 포스콜린(Forskolin)(칼바이오켐(Calbiochem) cat.# 344270); 세포: HEK293/hNPY2R; 성장 배지: 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified eagle medium, D-MEM, 깁코(Gibco)); 열-불활성화된 10% 소 태아 혈청(FBS, 깁코); 1% 페니실린/스트렙토마이신(페니실린 10000 단위/ml; 스트렙토마이신 10000 mg/ml, 깁코); 500 mg/ml G418(제네티신(Geneticin), 깁코 cat.# 11811-031); 및 평판 배지: DMEM/F12 w/o 페놀 레드(깁코); 열-불활성화된 10% FBS(깁코, cat.# 10082-147); 1% 페니실린/스트렙토마이신(깁코, cat.# 15140-122); 500 mg/ml G418(제네티신, 깁코, cat.# 11811-031).

제 1 일에, 배지를 폐기하고, 단층 세포를 플라스크(T225)당 10 ml의 PBS로 세척하였다. PBS로 경사분리한 후, 5 ml의 베르센(VERSENE)(깁코, cat# 1504006)을 사용하여 세포를 제거하였다(37 ℃에서 5 분). 플라스크를 살짝 비워내고 세포 현탁액을 모았다. 각각의 플라스크를 10 ml의 평판 배지로 헹구고 1000 rpm으로 5 분간 원심분리하였다. 현탁액을 모아 계수하였다.

현탁액을 HEK293/hNPY2R에 대해 2.0 x 10⁵ 세포/ml의 밀도로 평판 배지에 재현탁하였다. 50 μl의 세포(HEK293/hNPY2R - 10,000 세포/웰)를 멀티-드롭(Multi-drop) 분배기를 사용하여 384-웰 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 37 ℃에서 밤새 배양하였다.

제 2 일에, 세포를 75 내지 85% 컨플루언스(confluence)에 대해 조사하였다. 배지 및 시약을 실온이 되게 하였다. 희석물을 만들기 전에, 다이메틸 설폭사이드(DMSO, 시그마, cat# D2650) 중 화합물을 촉진하는 저장 용액을 5 내지 10 분 동안 32 ℃까지 가온시켰다. 0.5 mM 3-아이소뷰틸-1-메틸잔틴(IBMX, 칼바이오켐, cat#410957) 및 0.5 mg/ml BSA를 함유한 DMEM/F12에 희석물을 제조하였다. 촉진 배지중 최종 DMSO 농도는 5 μM의 포스콜린 농도하에 1.1%이었다.

종이 타올 위에 세포 플레이트를 약하게 뒤집어 세포 배지를 비워냈다. 웰 당 50 μl의 촉진 배지를 채웠다(각각의 농도는 4중으로 행하였다). 플레이트를 실온에서 30 분간 배양하고, 세포를 현미경하에 독성에 대해 조사하였다.

30 분간 처리한 후, 촉진 배지를 폐기하고 50 μl/웰의 분석 용해 완충액(Assay Lysis Buffer)(트로픽스 키트에서 제공)을 채웠다. 플레이트를 37 ℃에서 45 분간 배양하였다.

20 μl의 용해물을 촉진 플레이트로부터 트로픽스 키트의 미리-코팅된 항체 플레이트(384 웰)로 옮겼다. 10 μl의 AP 결합체 및 20 μl의 항-cAMP 항체를 가하였다. 플레이트를 1 시간동안 진탕시키면서 실온에서 배양하였다. 이어서, 플 레이트를 각 세척에 대해 웰 당 70 μl의 세척 완충액으로 5회 세척하였다. 플레이트를 비워 건조시켰다. 30 μl/웰의 CSPD/사피어(Saphire)-II RTU 기질/증강제 용액을 가하고 실온에서(진탕) 45 분간 배양하였다. 루미노미터(luminometer)(빅터(VICTOR)-V)에서 1 초/웰에 대한 신호를 측정하였다.

실시예 78

음식물 섭취량의 생체내 감소 분석

본 실시예에서는, 실시예 5, 44, 73 및 74의 화합물을 4개의 별도 실험에서 4 세트의 마우스에 투여하여 음식물 섭취량에 대한 영향을 측정하였다. C57BL/6J 수컷 마우스 또는 DIO(식이-유발성 비만) 수컷 마우스를 실험군당 8 마리의 마우스로 실험에 사용하였다. 마우스는 규칙적인 밝음 주기(오전 6시 온; 오후 6시 오프)로 유지하였다. 마우스는 시험전 24 시간동안 물은 자유롭게 공급하면서 굶겼다. 시험동안, 마우스는 우리당 한 마리를 수용하였다.

실시예 5 및 44의 화합물은 복강내로 투여하고; 실시예 73 및 74의 화합물은 피하 투여하였다. 음식물 섭취량은 투여후 1, 2, 4, 6 및 24 시간에 측정하였으며, 결과는 도 7 내지 10에 나타내었다. 음식물 섭취량은 실시예 73 및 74의 화합물에 대해 더 긴 시간 간격동안 측정하였으며, 도 9 및 10에 나타내었다. 각각의 도면에서, 누적 및 시간 간격 음식물 소비를 개개 마우스에서 측정하였다. 평균 음식물 소비량 및 비히클로부터의 변화율(%)을 각각의 시간 간격에 대해 계산하였다. 양측 스튜던트 t-검정(two-tailed Student's t-test)을 이용하여 데이터를 분석하였다. 도 7 내지 10은 본 발명의 화합물이 대조용에 비해 음식물 섭취량을 감 소시키는데 효과적임을 보여준다.

실시예 79

Ca 플럭스 분석

Hek-293 세포를 G 단백질 키메라 Gaqi9로 안정하게 형질감염시키고 하이그로마이신-B 내성 유전자를 인간 NPY2 수용체 및 G418 항생물질 선택하에 더 형질감염시켰다. 하이그로마이신-B 및 G418 둘 다에서 선택 후, 개개 클론을 PYY에 대한 그 반응에 대해 분석하였다. 형질감염된 세포를 10% 소 태아 혈청, 50 μg/ml 하이그로마이신-B 2 mM 글루타민, 100 U/ml 페니실린, 100 μg/ml 스트렙토마이신 및 250 μg/ml G418로 보충된 DMEM 배지에서 배양하였다. 세포를 트립신-EDTA를 사용하여 수확하고 비아카운트(ViaCount) 시약을 사용하여 계수하였다. 세포 현탁액 부피를 완전 성장 배지로 4.8 x 10⁵ 세포/ml로 조정하였다. 25 μl의 분취량을 384 웰 폴리-D 라이신 코팅된 블랙/투명 마이크로플레이트(팔콘(Falcon))에 분배하고 마이크로플레이트를 37 ℃ CO₂ 배양기에 밤새 넣어두었다.

한 바이알(익스프레스 키트(Express Kit))의 내용물을 20 mM HEPES 및 5 mM 프로베네시드를 함유하는 1000 ml의 행크 균형 염 용액(Hank's Balanced Salt Solution)에 용해시켜 부하 완충액(칼슘-3 분석 키트, 몰레큘라 디바이시즈(Molecular Devices))을 제조하였다. 25 μl 분취량의 희석된 염료를 세포 플레이트에 분배한 다음 플레이트를 37 ℃에서 1 시간동안 배양하였다.

배양시에, 시험 화합물은 HBSS(20 mM HEPES)/0.05% BSA/1% DMSO에 목적하는 농도의 3.5배로 제조하고 FLIPR 상에서 사용하기 위해 384 웰로 옮겼다.

배양후에, 세포 및 화합물 플레이트를 둘 다 FLIPR로 가져오고 20 μl의 희석시킨 화합물을 FLIPR에 의해 세포 플레이트로 옮겼다. 분석시에, 형광성 판독치를 1.5 초마다 세포 플레이트의 384 웰 모두로부터 동시에 취하였다. 5 개의 판독치를 취하여 안정한 기준선을 설정한 다음, 20 μl의 샘플을 신속하게(30 μl/초) 동시에 세포 플레이트의 각 웰에 가하였다. 100 초의 총 경과 시간동안 샘플 첨가 전, 첨가 중 및 첨가 후에 연속적으로 형광성을 모니터하였다. 첨가후 각 웰에서의 반응(피크 형광성의 증가)을 측정하였다. 리간드 자극 전 각 웰로부터의 초기 형광성 판독치를 그 웰로부터의 데이터에 대한 제로(0) 기준선 값으로 이용하였다. 반응은 양성 대조군의 최대 반응 %로 나타내었다.

본 발명의 화합물은 cAMP 분석(실시예 77) 및 Ca 플럭스 분석(FLIPR)(실시예 78)에서 입증되듯이, 시험관내에서 선택적인 신경펩타이드-2 수용체 활성을 나타내었다. 실시예 3 내지 74에 대한 시험관내 결과, IC50 및 EC50의 요약을 하기 표 1에 나타내었다.

본 발명은, 특정 태양들의 변형이 이루어 질 수 있고 첨부한 청구의 범위의 범주내에 속하므로, 전술한 본 발명의 특정 태양으로 한정되지 않음을 주지해야 한다.

실시예 A

하기 성분들을 함유하는 필름 코팅정을 통상적인 방법으로 제조할 수 있다:

활성 성분을 체질하고 미세결정질 셀룰로스와 혼합하고 혼합물을 물 중의 폴리비닐피롤리돈의 용액으로 과립화하였다. 과립을 나트륨 전분 글라이콜레이트 및 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고 압축하여 각각 120 또는 350 mg의 핵을 수득하였다. 핵을 상기 언급한 필름 코팅의 수성 용액/현탁액으로 코팅하였다.

실시예 B

하기 성분들을 함유하는 캡슐을 통상적인 방법으로 제조할 수 있다:

성분들을 체질하고 혼합하고 크기 2의 캡슐에 충전하였다.

실시예 C

주사액은 하기의 조성을 가질 수 있다:

활성 성분들을 폴리에틸렌 글라이콜 400과 주입용 물(일부)의 혼합물에 용해시켰다. 아세트산을 첨가하여 pH를 5.0으로 조정하였다. 나머지 량의 물을 가하여 부피를 1.0 ml로 조정하였다. 용액을 여과하고 적절한 과량을 이용하여 바이알에 충전하고 멸균하였다.

실시예 D

하기 성분들을 함유하는 연질 젤라틴 캡슐을 통상적인 방법으로 제조할 수 있다:

활성 성분을 다른 성분들의 따뜻한 용융물에 용해시키고 혼합물을 적절한 크기의 연질 젤라틴 캡슐에 충전시켰다. 충전된 연질 젤라틴 캡슐을 통상적인 절차에 따라 처리하였다.

실시예 E

하기 성분을 함유하는 사세제(sachet)를 통상적인 방법으로 제조할 수 있다:

활성 성분을 락토스, 미세결정질 셀룰로스 및 나트륨 카복시메틸 셀룰로스와 혼합하고 물 중의 폴리비닐피롤리돈의 혼합물로 과립화하였다. 과립을 마그네슘스테아레이트와 혼합하고 향료 첨가제를 사세제에 충전시켰다.

SEQUENCE LISTING <110> F. HOFFMANN-LA ROCHE AG <120> PEPTIDES WITH NEUROPEPTIDE-2 RECEPTOR (Y2R) AGONIST ACTIVITY <130> 22849 <140> 60/644,840 <141> 2005-01-18 <160> 42 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> C-term amidated <400> 1 Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> C-term amidated <400> 2 Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 3 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> C-term amidated <400> 3 Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 4 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial 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Sequence: Synthetic peptide <220> <223> C-term amidated <400> 13 Arg Ala Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> C-term amidated <400> 14 Ala His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 15 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> (NMe)Tyr <220> <223> C-term amidated <400> 15 Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> (NMe)Arg <220> <223> C-term amidated <400> 16 Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (9) 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35 Arg His Xaa Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 36 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> (3,4,5 Trifluoro Phe) <220> <223> C-term amidated <400> 36 Arg His Xaa Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 37 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> (2,3,4,5,6 Pentafluoro Phe) <220> <223> C-term amidated <400> 37 Arg His Xaa Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 38 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> (4-MeOApc) <220> <223> C-term amidated <400> 38 Arg Xaa Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 39 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> (3-Pal) <220> <223> C-term amidated <400> 39 Arg Xaa Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 40 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> (4-Pal) <220> <223> C-term amidated <400> 40 Arg Xaa Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 41 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> (3,4,5 Trifluoro Phe) <220> <223> C-term amidated <400> 41 Xaa His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 42 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> (2,3,4,5,6 Pentafluoro Phe) <220> <223> C-term amidated <400> 42 Xaa His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10

Claims

하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염:

화학식 I

상기에서,

X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴노졸리논-3-아세트산(Pqa), N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌(Cms), 4-(2-아미노메틸)-6-다이벤조퓨란프로파노산, 4-(1-피페리딘-4-일)-뷰타노산 및 4-(2-아미노에틸)-1-카복시메틸 피페라진으로 이루어진 군에서 선택되고;

Y는 H, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 저급 알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 알콕시, 또는 폴리(에틸렌)글라이콜 잔기이고;

R₁은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1 Aic, 2-2 Aic, Ach 또는 Acp이고;

R₂는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고;

R₃은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고;

R₄는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고;

R₅는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고;

R₆은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₇은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고;

R₈은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고;

R₉는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고;

R₁₀은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고;

R₁₁은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₂는 Gln 또는 Ala이고;

R₁₃은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고;

R₁₄는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr이다.
제 1 항에 있어서,

X가 Pqa인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 1 항에 있어서,

X가 Cms인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 1 항에 있어서,

Y가 (C₁-C₆) 알킬 잔기인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
하기 화학식 II의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염:

화학식 II

상기에서,

X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴노졸리논-3-아세트산(Pqa), N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌(Cms), 4-(2-아미노메틸)-6-다이벤조퓨란프로파노산, 4-(1-피페리딘-4-일)-뷰타노산 및 4-(2-아미노에틸)-1-카복시메틸 피페라진으로 이루어진 군에서 선택된 잔기이고;

Y는 H, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 저급 알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 알콕시, 또는 폴리(에틸렌)글라이콜 잔기이고;

R₁은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1 Aic, 2-2 Aic, Ach 또는 Acp이고;

R₂는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이다.
제 5 항에 있어서,

X가 Pqa인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 5 항에 있어서,

X가 Cms인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
하기 화학식 III의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염:

화학식 III

상기에서,

X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴노졸리논-3-아세트산(Pqa), N-(5-O-카복시메틸)-세로토닌(Cms), 4-(2-아미노메틸)-6-다이벤조퓨란프로파노산, 4-(1-피페리딘-4-일)-뷰타노산 및 4-(2-아미노에틸)-1-카복시메틸 피페라진으로 이루어진 군에서 선택되고;

Y는 H, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 저급 알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 알콕시, 또는 폴리(에틸렌)글라이콜 잔 기이다.
제 8 항에 있어서,

X가 Pqa인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 8 항에 있어서,

X가 Cms인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,

다음으로 이루어진 군에서 선택된 신경펩타이드-2 수용체 작용물질:
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,

다음으로 이루어진 군에서 선택된 신경펩타이드-2 수용체 작용물질:
길이가 약 8 내지 약 11 Å인 잔기로 치환된 아미노산 잔기 5 내지 24를 갖는 PYY_3-36 유도체를 포함하는 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 13 항에 있어서,

상기 잔기가 길이가 약 9 내지 약 11 Å인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 14 항에 있어서,

상기 잔기가 길이가 약 9 내지 약 10 Å인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 15 항에 있어서,

상기 잔기가 길이가 약 8 내지 약 10 Å인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 16 항에 있어서,

상기 잔기가 길이가 약 8 내지 약 9 Å인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 보조제를 포함하는 약학 조성물.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

치료 활성 물질로 사용하기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 치료 활성 물질로 사용하기 위한 화합물.
인간 또는 동물에게 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방적 처치, 특히 비만의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한 방법.
신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한, 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
비만의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한, 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질환의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한 약제를 제조하기 위한, 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
비만의 치료 및/또는 예방적 처치를 위한 약제를 제조하기 위한, 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
상기에 정의된 바와 같은 본 발명.