JP2008527017A

JP2008527017A - 神経ペプチド−２レセプター（ｙ２ｒ）アゴニスト活性を有するペプチド

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Publication number: JP2008527017A
Application number: JP2007551586A
Authority: JP
Inventors: ダンホ，ウォリード; エーリック，ジョージ; フライ，デイビッド・シー; カーン，ワジハ; スウィストク，ジョセフ
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2005-01-18
Filing date: 2006-01-11
Publication date: 2008-07-24
Anticipated expiration: 2026-01-11
Also published as: BRPI0606675A2; EP1844070B1; RU2007131504A; AU2006207659B2; WO2006077035A1; ATE500268T1; KR20070095422A; TWI309653B; DE602006020407D1; KR100905380B1; RU2383553C2; DK1844070T3; PL1844070T3; AU2006207659A1; US7410949B2; CA2594423A1; CN101107266A; JP4633804B2; IL184428A0; US20060160742A1

Abstract

本発明は、式（Ｉ）の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト：Ｙ−Ｒ_１−Ｒ_２−Ｘ−Ｒ_３−Ｒ_４−Ｒ_５−Ｒ_６−Ｒ_７−Ｒ_８−Ｒ_９−Ｒ₁₀−Ｒ₁₁−Ｒ₁₂−Ｒ₁₃−Ｒ₁₄−ＮＨ_２（Ｉ）；ならびに薬学的に許容されるそれらの塩、それらの誘導体および断片であって、その置換基が明細書中に開示されたもの、に関する。これらの化合物およびそれらを含む医薬品組成物は、例えば肥満などの疾病の治療に有用である。
【選択図】なし

Description

本発明は、式（Ｉ）：

（式中、Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、Ｒ₁は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、Ｒ₂は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、Ｒ₃は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ)Ａｒｇ、Ｎ-メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、Ｒ₄は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｈｉｓ、Ｎ-メチルＨｉｓ、４-ＭｅＯＡｐｃ、３-Ｐａｌまたは４-Ｐａｌであり、Ｒ₅は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｔｙｒ、Ｎ-メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１)Ｎａｌ、（２)Ｎａｌ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、Ｒ₆は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、Ｒ₇はＡｓｎ、Ａｌａ、または（Ｄ)Ａｓｎであり、Ｒ₈はＬｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、Ｒ₉はＶａｌ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｖａｌ、またはＮ-メチルＶａｌであり、Ｒ₁₀はＴｈｒ、ＡｌａまたはＮ-メチルＴｈｒであり、Ｒ₁₁はＡｒｇ、（Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、Ｒ₁₂はＧｌｎまたはＡｌａであり、Ｒ₁₃はＡｒｇ、(Ｄ)Ａｒｇ、またはＮ-メチルＡｒｇであり、およびＲ₁₄は、Ｔｙｒ、(Ｄ)Ｔｙｒ、またはＮ-メチルＴｙｒである）のＰＹＹ_3-36の短縮された類似物質、あるいはそれらの薬学的に許容される塩に関する。

類似物質は、ニューロペプチド−２レセプターアゴニストであって、例えば肥満などの代謝障害の治療に有用である。本明細書に引用されるすべての文献は、ここに明確に参照により本明細書に組み入れられる。

肥満は、先進国にとって重大な健康問題であると広く認識されており、米国では流行病の状態に達している。最近の研究によれば、米国の人口の５０％以上が体重超過であり、２５％以上が医学的に肥満であると診断されて、心臓病、インスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、高血圧症およびある癌の相当な危険に瀕していると考えられる。この流行病は、米国だけで推定毎年７００億ドル以上の肥満治療費用が予想され、医療制度上の重要な負担を呈示している。肥満を治療する戦略として、食物摂取の減少およびエネルギー消費の増強が挙げられる。

神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）は、３６アミノ酸のペプチド神経伝達物質であり、末梢および中枢神経系の両方に存在することが示されている膵臓ポリペプチド類の一員である神経伝達物質／神経ホルモンである。ＮＰＹは最も強力な既知の食欲増進剤の１つであり、ヒトを含む動物中の食物摂取の調節に主要な役割を果たしていることが示されている。

５つの神経ペプチドＹレセプター（ＮＰＹ）、Ｙ１−、Ｙ２−、Ｙ３−、Ｙ４−、Ｙ５−およびＹ６−サブタイプ、がクローニングされており、それらは、ロドプシン様Ｇタンパク質共役膜貫通７本ヘリックス型レセプター（ＧＰＣＲ）に属する。ＮＰＹＹ２レセプター（Ｙ２Ｒ）は、他の既知のＮＰＹレセプターと低い相同性を有し、Ｇ_iによってアデニルシクラーゼの活性化を阻害する３８１個のアミノ酸である。ラットおよびヒトのＹ２レセプター間で、９８％のアミノ酸同一性を有する高度の保存性が存在する。

Ｙ２Ｒレセプターは、げっ歯動物およびヒトの両方で中枢神経系内に広く分布している。視床下部では、Ｙ２ｍＲＮＡは、弓状核、視束前核および背内側核中に局在している。ヒトの脳では、Ｙ２Ｒが主要なＹ-レセプターサブタイプである。弓状核内では、ＮＰＹニューロンの８０％以上がＹ２ＲｍＲＮＡを共発現する。インビトロで、Ｙ２選択的アゴニストの適用が視床下部切片からのＮＰＹの放出を減少させることが示され、一方で、Ｙ２の非ペプチドアンタゴニストＢIIＥ０２４６は、ＮＰＹ放出を増加させる。これらの発見は、Ｙ２Ｒがシナプス前自己受容体としてＮＰＹ放出を調節する役割を有し、従って摂食の調節に関係している可能性があることを支持する(Poter, E.K., et al. Eur. J. Pharmac. 267,253-262 (1994))。

ペプチドＹＹ_3-36（ＰＹＹ_3-36）は、神経ペプチドＹ２（ＮＰＹ２Ｒ）に特異的なアゴニスト活性を有する３３アミノ酸の直鎖状ペプチドである。ＰＹＹ_3-36の弓状核内（ＩＣ）または腹腔内（ＩＰ）注射は、ラットの摂食を減少させ、長期間処理は体重増加を減少させることが実証された。ＰＹＹ_3-36の９０分間の静脈内（ＩＶ）注入（０.８pmol/kg/分）が、肥満のおよび正常なヒト被験者の食物摂取を２４時間に亘り３３％減少させた。

これらの発見は、ＰＹＹシステムが肥満治療の治療標的である可能性を示唆する(Bloom, S. et al, Nature Vol.418, 8 August 2002, P.650-654)。さらに、残基５〜２４が長さ５〜８個の炭素のメチレン鎖によって置換された、ＰＹＹのＣｙｓ²-(Ｄ)Ｃｙｓ²⁷環化型が腸のＰＹＹレセプターを活性化することが、ラット空腸の電位固定粘膜試料を横切る電流の減少によって証拠付けられて、示された（Krstenansky, et al. in Peptides, Proceedings of the Twelfth American Peptide Symposium. J. Smith and J. Rivier Editors, ESCOM. Leiden Page 136-137)。

さらに、ポリ（エチレングリコール）またはポリ（エチレンオキシド）（両方をＰＥＧと呼ぶ）によってタンパク質が共有結合的に修飾されることが、スーパーオキシドディスムターゼ（Somack, R, et al.,(1991) Free Rad Res Commun 12-13:553-562; U.S. Pat. Nos. 5,283,317 および 5,468,478）について、および他の型のタンパク質、例えばサイトカイン（Saifer, M G P, et al., (1997) Polym Preprints 38:576-577; Sherman, M R, et al., (1997) in J M Harris, et al., (Eds.), Poly(ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications. ACS Symposium Series 680 (pp. 155-169) Washington, D. C：American Chemical Society）について実証された。

しかし、既存のＹ２Ｒアゴニストと等しいかまたはより優れた性能、薬物動態学的特性および薬理学的性質を所持する一方で有意により低分子量の、新規なＰＹＹの人工的類似体の必要性が存在する。さらに、例えば、そのようなアゴニストを必要とする患者におけるペプチド半減期を増大させ、免疫原性を減少させるために、ＰＹＹのＰＥＧ化類似体の必要性が存在する。

本発明の化合物はまた、ＰＹＹ_3-36の短縮型であるので、有利である。例えば、より短いペプチドは、合成および精製がより容易なだけでなく、製造手順を改善し経費を減少させる。さらに本発明の化合物は、好ましくはＰＹＹレセプターと相互作用し、ＮＰＹＹ１、Ｙ４およびＹ５などの相同のレセプターとは相互作用しない。それによって、望ましくないアゴニストまたはアンタゴニストの副反応は、最小限にされる。

本明細書で言及する全てのペプチド配列を、別に指摘しない限り、通常の従来方式に従って、Ｎ末端アミノ酸を左側に、またＣ末端アミノ酸を右側に書く。２つのアミノ酸残基間の短い線はペプチド結合を示す。アミノ酸が異性体を有する場合は、はっきりとそうでないと示さない限り、表わされるのはアミノ酸のＬ型である。本発明の記述の便宜上、様々なアミノ酸の普通に用いるおよび普通には用いられない省略形を使用する。これらの省略形は、当業者にはよく知られているが、明確のために下に列挙する：

Ａｓｐ＝Ｄ＝アスパラギン酸；Ａｌａ＝Ａ＝アラニン；Ａｒｇ＝Ｒ＝アルギニン；Ａｓｎ＝Ｎ＝アスパラギン；Ｇｌｙ＝Ｇ＝グリシン；Ｇｌｕ＝Ｅ＝グルタミン酸；Ｇｌｎ＝Ｑ＝グルタミン；Ｈｉｓ＝Ｈ＝ヒスチジン；Ｉｌｅ＝Ｉ＝イソロイシン；Ｌｅｕ＝Ｌ＝ロイシン；Ｌｙｓ＝Ｋ＝リジン；Ｍｅｔ＝Ｍ＝メチオニン；Ｐｈｅ＝Ｆ＝フェニルアラニン；Ｐｒｏ＝Ｐ＝プロリン；Ｓｅｒ＝Ｓ＝セリン；Ｔｈｒ＝Ｔ＝スレオニン；Ｔｒｐ＝Ｗ＝トリプトファン；Ｔｙｒ＝Ｙ＝チロシン；およびＶａｌ＝Ｖ＝バリン。

さらに便宜上、および当業者に容易に分かるように、次の省略形または記号を、本発明中で用いる部分、試薬、その他を表わすために用いる：

本明細書に用いられる用語「アルキル」とは、分岐または非分岐の、環式または非環式の、飽和または不飽和の（例えばアルケニルまたはアルキニルの）炭化水素ラジカルを意味し、それは置換されていても非置換でもよい。環式の場合は、アルキル基は好ましくはＣ_３〜Ｃ₁₂であり、より好ましくはＣ_５〜Ｃ₁₀、さらに好ましくはＣ_５〜Ｃ_７である。非環式の場合は、アルキル基は好ましくはＣ_１〜Ｃ₁₀、より好ましくはＣ_１〜Ｃ_６であり、より好ましくはメチル、エチル、プロピル（ｎ-プロピルまたはイソプロピル）、ブチル（ｎ−ブチル、イソブチル、またはtert−ブチル）、またはペンチル（ｎ-ペンチルおよびイソペンチルを含む）であり、さらに好ましくは、メチルである。したがって、本明細書で用いられる用語「アルキル」には、アルキル（分岐または非分岐の）、置換アルキル（分岐または非分岐の）、アルケニル（分岐または非分岐の）、置換アルケニル（分岐または非分岐の）、アルキニル（分岐または非分岐の）、置換アルキニル（分岐または非分岐の）、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、シクロアルキニルおよび置換シクロアルキニルが含まれると理解するべきである。

本明細書で用いられる用語「低級アルキル」とは、分岐または非分岐の、環式または非環式の、飽和または不飽和の（例えばアルケニルまたはアルキニルの）炭化水素ラジカルであって、前記環式低級アルキル基はＣ_５、Ｃ_６またはＣ_７であり、前記非環式低級アルキル基はＣ_１、Ｃ_２、Ｃ_３またはＣ_４であって、好ましくはメチル、エチル、プロピル（ｎ-プロピルまたはイソプロピル）またはブチル（ｎ-ブチル、イソブチル、またはtert−ブチル）から選ばれることを意味する。したがって、本明細書で使用する用語「低級アルキル」には、低級アルキル（分岐または非分岐の）、低級アルケニル（分岐または非分岐の）、低級アルキニル（分岐または非分岐の）、シクロ低級アルキル、シクロ低級アルケニルおよびシクロ低級アルキニルが含まれると理解するべきである。

本明細書で用いられる用語「アリール」は、フェニルまたはナフチルなどの置換または非置換炭素環式芳香族基を、またはピリジル、ピロリル、フラニル、チエニル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリル、インダゾリル、キノリル、キナゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソオキサゾリルおよびベンズイソチアゾリルなどの１つ以上の、好ましくは１つのヘテロ原子を含む置換または非置換ヘテロ芳香族基を意味する。

アルキルおよびアリール基は、置換されていても、非置換でもよい。置換された場合は、一般に１〜３の置換基が、好ましくは１つの置換基が存在することになる。置換基には：アルキル、アリール、アリールアルキル（例えば、置換または非置換フェニル、置換または非置換ベンジル）などの炭素を含む基；ハロゲン原子、およびハロアルキル（例えばトリフルオロメチル）などのハロゲンを含む基；アルコール（例えばヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アリール（ヒドロキシル）アルキル）、エーテル（例えばアルコキシ、アリールオキシ、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキル）、アルデヒド（例えばカルボキシアルデヒド）、ケトン（例えばアルキルカルボニル、アルキルカルボニルアルキル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニルアルキル）、酸（例えばカルボキシ、カルボキシアルキル）、エステル（例えばアルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルキルカルボニルオキシ、アルキルカルボニルオキシアルキル）などの酸誘導体、アミド（例えば、アミノカルボニル、モノ-またはジ-アルキルアミノカルボニル、アミノカルボニルアルキル、モノ-またはジ-アルキルアミノカルボニルアルキル、アリールアミノカルボニル）、カルバメート（例えばアルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、モノ-またはジ-アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、および尿素（例えば、モノ-またはジ-アルキルアミノカルボニルアミノまたはアリールアミノカルボニルアミノ）などの酸素を含む基；アミン（例えばアミノ、モノ-またはジ-アルキルアミノ、アミノアルキル、モノ-またはジ-アルキルアミノアルキル）、アジド、ニトリル（例えばシアノ、シアノアルキル）、ニトロなどの窒素を含む基；チオール、チオエテール、スルホキシド、およびスルホン（例えば、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキルチオアルキル、アルキルスルフィニルアルキル、アルキルスルホニルアルキル、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アリールチオアルキル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアルキル）などの硫黄を含む基；および１つ以上の、好ましくは１つのヘテロ原子を含む複素環基（例えば、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、ピロニル、ピリジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピペリジル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、モルホリニル、チアナフチル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、インドリル、オキシインドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリニル、７-アザインドリル、ベンゾピラニル、クマリニル、イソクマリニル、キノリニル、イソキノリニル、ナフトリジニル、シンノリニル、キナゾリニル、ピリドピリジル、ベンゾオキサジニル、キノキサリニル、クロメニル、クロマニル、イソクロマニル、フタラジニルおよびカルボリニル）、が含まれる。

低級アルキル基は置換されても、非置換でもよく、好ましくは非置換である。置換される場合は、一般に１〜３個の置換基が、好ましくは１つの置換基、が存在するであろう。置換基には、アルキル、アリール、およびアリールアルキル以外に、上に挙げた置換基が含まれる。

本明細書で用いられる用語「アルコキシ」はアルキル-Ｏ-を意味し、「アルコイル」はアルキル-ＣＯ-を意味する。アルコキシ置換基またはアルコキシを含む置換基は、１つ以上のアルキル基によって置換されてもよい。

本明細書で用いられる用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素ラジカルを、好ましくはフッ素、塩素または臭素ラジカルを、そしてより好ましくはフッ素または塩素ラジカルを意味する。

本明細書で用いられる、用語「薬学的に許容される塩」は、式（Ｉ）の化合物の任意の薬学的に許容される塩を意味する。塩は、無機および有機の酸および塩基を含む、薬学的に許容される無毒な酸および塩基から調製することができる。そのような酸としては、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンフルスルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ジクロロ酢酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、シュウ酸、パモン酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、シュウ酸、ｐ-トルエンスルホン酸その他が挙げられる。特に好ましいのは、フマル酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、コハク酸、硫酸およびメタンスルホン酸である。許容される塩基塩には、アルカリ金属（例えばナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例えばカルシウム、マグネシウム）およびアルミニウムの塩が含まれる。

本発明の実施態様の１つでは、式（Ｉ）：

（式中、Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ)Ａｒｇ、Ｎ-メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｈｉｓ、Ｎ-メチルＨｉｓ、４-ＭｅＯＡｐｃ、３-Ｐａｌまたは４-Ｐａｌであり、Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｔｙｒ、Ｎ-メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１)Ｎａｌ、（２)Ｎａｌ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、Ｒ_７はＡｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ)Ａｓｎであり、Ｒ_８はＬｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、Ｒ_９はＶａｌ、Ａｌａ、（Ｄ)ＶａｌまたはＮ-メチルＶａｌであり、Ｒ₁₀はＴｈｒ、ＡｌａまたはＮ-メチルＴｈｒであり、Ｒ₁₁はＡｒｇ、（Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、Ｒ₁₂はＧｌｎまたはＡｌａであり、Ｒ₁₃はＡｒｇ、(Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、およびＲ₁₄は、Ｔｙｒ、(Ｄ)ＴｙｒまたはＮ-メチルＴｙｒである）の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいはその薬学的に許容される塩が提供される。

本発明の別の実施態様では、式（II）：

（式中、Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれる部分であり、Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）である）の神経ペプチド−２レセプターアゴニストあるいはその薬学的に許容される塩が提供される。

本発明のさらに別の実施態様では、式（III）：

（式中、Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ部分であり、Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分である）の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいはその薬学的に許容される塩が提供される。

上に定義された好ましい神経ペプチド−２レセプターアゴニストでは、ＸがＰｑａのものである。上に定義された他の好ましい神経ペプチド−２レセプターアゴニストでは、ＸがＣｍｓのものである。好ましくは、ＹはＨまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６)アルキルであり、より好ましくは、Ｙは（Ｃ_１〜Ｃ_６)アルキル部分である。

上に定義された好ましい神経ペプチド−２レセプターアゴニストは、次から成る群より選ばれるものである：

上に定義された、より好ましい神経ペプチド−２レセプターアゴニストは、次のペプチドから成る群より選ばれるものである：

上に言及したすべての神経ペプチド−２レセプターアゴニストは、個々に、別々の好ましい実施態様を構成する。

本発明のさらなる実施態様では、その必要がある患者の肥満を治療する方法を提供し、その方法は、前記患者に治療上有効な量の式（Ｉ）：

（式中、Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ)Ａｒｇ、Ｎ-メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅ、または２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｈｉｓ、Ｎ-メチルＨｉｓ、４-ＭｅＯＡｐｃ、３-Ｐａｌまたは４-Ｐａｌであり、Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｔｙｒ、Ｎ-メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１)Ｎａｌ、（２)Ｎａｌ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、Ｒ_７はＡｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ)Ａｓｎであり、Ｒ_８はＬｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、Ｒ_９はＶａｌ、Ａｌａ、（Ｄ)ＶａｌまたはＮ-メチルＶａｌであり、Ｒ₁₀はＴｈｒ、ＡｌａまたはＮ-メチルＴｈｒであり、Ｒ₁₁はＡｒｇ、（Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、Ｒ₁₂はＧｌｎまたはＡｌａであり、Ｒ₁₃はＡｒｇ、(Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、およびＲ₁₄は、Ｔｙｒ、(Ｄ)ＴｙｒまたはＮ-メチルＴｙｒである）の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいはその薬学的に許容される塩、を投与する工程を有する。

上に記述された方法において、前記神経ペプチド−２レセプターアゴニストを前記患者に３日毎に一回投与するのが好ましい。好ましくは、前記神経ペプチド−２レセプターアゴニストを前記患者に週に一度投与する。

好ましいのは、上述の方法において、前記神経ペプチド−２レセプターアゴニストを、前記患者に経口的に、鼻腔内に、静脈内に、皮下に、非経口的に、経皮的に、腹腔内に、または直腸に投与する方法である。好ましくは、前記神経ペプチド-２レセプターアゴニストを鼻腔内に投与する。前記神経ペプチド-２レセプターアゴニストを皮下に投与するのも好ましい。

上述の好ましい方法では、前記神経ペプチド-２レセプターアゴニストを、約２.５〜約１０mg/kg、より好ましくは約２.５〜約５mg/kgの用量で投与する。前記神経ペプチド-２レセプターアゴニストを、約５〜約１０mg/kgの用量で投与する方法も好ましい。

上述の方法において、神経ペプチド-２レセプターアゴニストは、Ｘを、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジン、から成る群より選ぶのが好ましい。

本発明のまたさらなる実施態様では、アミノ酸残基５〜２４が、長さ約８〜約１１オングストロームの部分と置換されたＰＹＹ_3-36誘導体を有する神経ペプチド-２レセプターアゴニストが提供される。

本発明をここで、次の詳細な記述および付随した図により、さらに説明する。それによりさらなる実施態様、特徴、および長所が得られよう。

本発明は、アミノ酸残基５〜２４が、例えばＰｑａまたはＣｍｓなどの部分と置換されたＰＹＹ_3-36類似体に関する。例えば、本発明は、式ＰＹＹ_3-4−Ｐｑａ−ＰＹＹ_25-36：

および式ＰＹＹ_3-4−Ｃｍｓ−ＰＹＹ_25-36：

の化合物を提供する。

本発明は、さらに式：

、
の化合物を提供する。

上記の構造で、基−Ｘ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−Ｘ−は、一般的命名法により、ポリエチレングリコール部分の反復グリコール単位、すなわち基−(ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ)_ｎ−を指す。従って「ｎ」は、望みのポリエチレングリコール単位の望みの分子量、好ましくは約１０,０００（ｎはおよそ２２７）、または約３０,０００（ｎはおよそ６８２）、を達成するように選ばれる。指標としてＮＭＲから導かれた自然のＰＹＹ_3-36の構造を用いて、ＰＹＹ_3-36のアミノ酸残基５〜２４置換部分を有する類似体を、ここに提示する。そのような部分の例としては、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４−(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）およびＮ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）が挙げられる。この部分は通常は堅くて、有利に分子の三次構造を安定させ、それによって、望みの性能および薬物動態学的、薬理学的性質を備えた短縮された類似体が生じる。その部分は、通常は長さ約８〜１１オングストローム、好ましくは長さ約９〜１１オングストローム、より好ましくは長さ約９〜約１０オングストローム、さらにより好ましくは長さ約８〜約１０オングストローム、さらにもっと好ましくは長さ約８〜約９オングストロームである。

本発明は、本明細書に記述される本発明の特定の実施態様に制限されず、特定の実施態様の変形を作ることができるが、それらは依然として添付した特許請求の範囲の範囲内に有ると理解するべきである。さらに、使用した用語は、特定の実施態様について記述するためのものであり、制限を意図するものではないと理解するべきである。その代わりに、添付した特許請求の範囲が、本発明の範囲を確立することになろう。

本明細書に記述されたものに似ているかまたは等価である任意の方法、装置および材料を、本発明の実施または試験の中で用いることができるが、好ましい方法、装置および材料について、ここで記述する。

本発明の代表的な化合物を、アミノ酸間のペプチド結合形成のための任意の既知の従来手法により、容易に合成することができる。そのような従来手法には、例えば、カルボキシル基および他の反応基を保護されたアミノ酸またはアミノ酸残基のフリーのαアミノ基と、アミノ基または他の反応基を保護された別のアミノ酸またはアミノ酸残基のフリーの一級カルボキシル基との間の縮合を可能にする、任意の溶液相の手法が含まれる。

本発明の新規な化合物を合成するためのそのような従来手法には、例えば任意の固層ペプチド合成法も含まれる。そのような方法では、固相法の一般的な原則にしたがって、成長しているペプチド鎖に望みのアミノ酸残基を一度に１個ずつ順次組み込むことにより、新規な化合物の合成を行なうことができる。そのような方法は、例えば、Merrifield, R. B., J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963); Barany et al, The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284 (1980)に開示されており、それらは、参照により本明細書に組み入れられる。

ペプチドの化学合成に共通なのは、適当な保護基による様々なアミノ酸部分の反応性側鎖基の保護であり、保護基は最後に除去されるまで、化学反応がその部位で生じるのを阻止することになる。さらに通常共通なのは、その物がカルボキシル基で反応している間は、アミノ酸または断片上のαアミノ基を保護し、続いてαアミノ保護基の選択的な除去によって、次の反応がその部位で起こることを可能にすることである。固相合成法に関して特異的な保護基が開示されているが、溶液相合成では、それぞれのアミノ酸に従来から用いられている保護基によって、それぞれのアミノ酸を保護することができることに注目するべきである。

αアミノ基は、アリールオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）およびｐ-クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ-ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ-ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ-ビフェニル-イソプロピルオキシカルボニル、９-フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）およびｐ-メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）のような置換されたベンジルオキシカルボニル、などの芳香族ウレタン型保護基；ｔ-ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、およびアリールオキシカルボニルなどの脂肪族ウレタン型保護基、より選ばれる適当な保護基によって保護することができる。ここでは、Ｆｍｏｃがαアミノ保護用に最も好ましい。

グアニジノ基は、ニトロ、ｐ-トルエンスルフォニル（Ｔｏｓ）、（Ｚ）、ペンタメチルクロマンスルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メトキシ−２,３,６−トリメチルベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、（Ｐｍｃ）、より選ばれる適当な保護基によって保護することができ、アルギニン（Ａｒｇ）に対しては（Ｍｔｒ）が最も好ましい。

ε-アミノ基は、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２-Ｃｌ-Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２-Ｂｒ-Z）、およびｔ-ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）より選ばれる適当な保護基によって保護することができる。（Ｌｙｓ）に対してはＢｏｃが最も好ましい。

水酸基（ＯＨ）は、ベンジル（Ｂｚｌ）、２,６-ジクロロベンジル（２,６ｄｉＣｌ-Ｂｚｌ）、およびtert-ブチル（ｔ-Ｂｕ）より選ばれる適当な保護基によって保護することができ、（ｔ-Ｂｕ）が（Ｔｙｒ）、（Ｓｅｒ）および（Ｔｈｒ）に対して最も好ましい。

β-およびγ-アミド基は、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、２,４,６−トリメトキシベンジル（Ｔｍｏｂ）、４,４−ジメトキシジチルビス−(４−メトキシフェニル)−メチル（Ｄｏｄ）、およびトリチル（Ｔｒｔ）より選ばれる適当な保護基によって保護することができる。Ｔｒｔが（Ａｓｎ）および（Ｇｌｎ）に対して最も好ましい。

インドール基は、ホルミル（Ｆｏｒ）、メシチル−２−スルホニル（Ｍｔ）およびｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）より選ばれる適当な保護基によって保護することができる。（Ｔｒｐ）に対してはＢｏｃが最も好ましい。

イミダゾール基は、ベンジル（Ｂｚｌ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびトリチル（Ｔｒｔ）より選ばれる適当な保護基によって保護することができる。（Ｈｉｓ）に対してはＴｒｔが最も好ましい。

すべての溶媒、イソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）、塩化メチレン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、およびＮ−メチルピロリノン（ＮＭＰ）を、FisherまたはBurdick & Jacksonから購入し、追加の蒸留をしないで用いた。トリフルオロ酢酸をHalocarbonまたはFlukaから購入し、それ以上精製しないで用いた。

ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）をFlukaまたはAldrichから購入し、それ以上精製しないで用いた。ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、硫化ジメチル（ＤＭＳ）および１,２−エタンジチオール（ＥＤＴ）をSigma Chemical Co.から購入し、それ以上精製しないで用いた。保護されたアミノ酸は一般にＬ配位で、BachemまたはNeosystemから購入した。これらの試薬の純度を、使用に先立って薄層クロマトグラフィー、ＮＭＲ、および融点によって確認した。ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）は、BachemまたはAdvanced Chemtechから得たスチレン−１％ジビニルベンゼンのコポリマー（メッシュ１００〜２００または２００〜４００）であった。これらの樹脂の全窒素含有量は一般に、０.３〜１.２meq/gであった。

高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を、Ｃｏｎｓｔａｍｅｔｒｉｃ IおよびIIIポンプ、ＧｒａｄｉｅｎｔＭａｓｔｅｒ溶媒プログラマ−およびミキサー、ならびにＳｐｅｃｔｒｏｍｏｎｉｔｏｒ III可変波長ＵＶ検出器から成るＬＤＣ装置で行った。分析用ＨＰＬＣを、ＶｙｄａｃＣ₁₈カラム（０.４×３０cm）を用いて、逆相モードで行なった。調製用のＨＰＬＣ分離を、Ｖａｙｄａｃカラム（２×２５ｃｍ）で行なった。

好ましい実施態様では、ペプチドを、前に言及したように公知技術の他の等価な化学合成を用いることもできたが、固相法を用い、Merrifield(J. Amer. Chem. Soc, 85, 2149 (1963)）によって一般に記述された方法により調製した。固相合成を、保護されたαアミノ酸を適当な樹脂に連結することにより、ペプチドのＣ末端から開始する。そのような出発物質を、α-アミノ保護アミノ酸を、エステル結合によってｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Wang）樹脂へ連結することにより、またはｐ−((Ｒ,Ｓ)−α−(１−(９Ｈ−フルオレン−９−イル)−メトキシホルムアミド)−２,４−ジメチルオキシベンジル)−フェノキシ酢酸（Rinkリンカー）のようなＦｍｏｃ-リンカーとのアミド結合によってベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂へ連結することにより、調製することができる。ヒドロキシメチル樹脂の調製は当技術分野において周知である。Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂支持体は市販されており、合成する望みのペプチドが非置換アミドをＣ末端に有している場合に一般に用いられる。

通常は、アミノ酸または模倣物は、Ｆｍｏｃリンカー−ＢＨＡ樹脂上へ、アミノ酸または模倣物のＦｍｏｃ保護型を用い、２〜５当量のアミノ酸および適当なカップリング試薬を使用して連結する。連結後、樹脂を洗浄し真空下で乾燥することができる。樹脂へのアミノ酸の添加を、Ｆｍｏｃアミノ酸樹脂の一部のアミノ酸分析またはＵＶ分析によるＦｍｏｃ基の測定により、決定することができる。反応しなかったアミノ基があれば、それを塩化メチレン中で樹脂を無水酢酸およびジイソプロピルエチルアミンと反応させることにより、覆うことができる。

樹脂に数回の反復サイクルを行って、アミノ酸を順次付加する。αアミノＦｍｏｃ保護基を、塩基条件下で除去する。ＤＭＦ中のピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン（２０〜４０％v/v）をこの目的に用いることができる。好ましくは、ＤＭＦ中の４０％ピペリジンを利用する。

αアミノ保護基の除去に続いて、次の保護されたアミノ酸を、段階的に望ましい順序で連結し、中間体である保護されたペプチド−樹脂を得る。ペプチドの固相合成でのアミノ酸の連結のために用いられる活性化剤は、当技術分野において周知である。例えば、そのような合成用の適切な試薬は：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリ−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（ＢＯＰ）、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロ燐酸（ＰｙＢｒｏＰ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）、およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）である。ここで好ましいのはＨＢＴＵおよびＤＩＣである。Barany and Merrifield (in The Peptides, Vol. 2, J. Meienhofer, ed., Academic Press, 1979, pp 1-284) によって記述されている他の活性化剤を使用してもよい。１ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）および３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢＴ）などの様々な試薬を、合成サイクルを最適化するために連結用混合物に加えてもよい。ここで好ましいのはＨＯＢＴである。

典型的な合成サイクルのプロトコルは、以下のとおりである：

すべての洗浄および連結のための溶媒の体積は、１０〜２０ml/g樹脂と測定された。合成全体にわたり、連結反応をＫａｉｓｅｒニンヒドリンテストによりモニターし、完了の程度を決定した（Kaiser et aｌ. Anal.Biochem.34, 595-598 (1970)）。遅い反応動力学が、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）について、および立体的に妨害された酸による第二級アミンへの連結について観察された。少しでも不完全な連結反応があれば、新しく調製した活性化アミノ酸と再連結させるか、または上述のように無水酢酸でペプチド-樹脂を処理することにより覆うかした。完全に組み立てたペプチド樹脂を、数時間真空中で乾燥させた。

各化合物について、保護基を取り除き、樹脂からペプチドを切り離した。例えば、ペプチド−樹脂を、樹脂１グラム当たり、１００μLのエタンジチオール、１００μLの硫化ジメチル、３００μLのアニソールおよび９.５mLのトリフルオロ酢酸で、室温で１８０分間処理した。あるいはそれに代わって、ペプチド−樹脂を、樹脂１グラム当たり、１.０mLのトリイソプロピルシランおよび９.５mLのトリフルオロ酢酸で、室温で１８０分間処理した。樹脂をろ過し、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させる。沈殿を遠心し、エーテル層をデカントする。

残渣を２または３容量のＥｔ_２Ｏで洗浄し、再遠心した。粗生成物を真空下で乾燥させた。

粗製ペプチドの精製を、島津製作所ＬＣ−８Ａシステムで、逆相ＶｙｄａｃＣ−１８カラム（５０×２５０mm、３００Ａ、１０〜１５μm）上の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により行なった。ペプチドを最少容量の０.１ＡｃＯＨ／Ｈ_２ＯまたはＣＨ_３ＣＨ／Ｈ_２Ｏのいずれかに入れてカラムへ注入した。勾配溶出法を、一般に２％のＢ緩衝液で開始し、２％〜７０％のＢで７０分間に亘って、５０ml／分の流量で行った（緩衝液Ａ：０.１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、緩衝液Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）。ＵＶによる検出を２２０／２８０nmで行った。生成物を含む分画を分離し、それらの純度を、島津製作所のＬＣ−１０ＡＴ分析システムで、２ml／分の流量、勾配（２〜７０％）（緩衝液Ａ：０.１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、緩衝液Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）、１０分間に亘る逆相ＡｃｅＣ１８カラム（４.６×５０mm）を用いて判断した。高純度であると判断した画分を集め、凍結乾燥した。

最終生成物の純度を、上述のように逆相カラム上の分析的ＨＰＬＣにより、検査した。すべての生成物の純度は、およそ９５〜９９％であると判断した。また、すべての最終生成物を、高速原子衝突質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）またはエレクトロスプレー質量分析（ＥＳ−ＭＳ）に付した。すべて生成物が、許容限界内の予期した親のＭ＋Ｈイオンを生じた。

Ｙ２Ｒのアゴニストが、ヒトの肥満のマウスモデルの食物摂取の減少を引き起こす。したがって、これらの化合物の投与は、Ｙ２レセプターをアゴニストとして活性化し、それは食物摂取の減少および体重の調節に重要である。実施例７８のインビボの活性実験により、食物摂取の減少が、本発明の選択された類似体（実施例５、４４、７３および７４のもの）について実証され、結果が図７、８、９および１０にまとめられている。

本発明の化合物を、薬学的に許容される塩の形で提供することができる。好ましい塩の例が、例えば、酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、またはパモン酸、およびタンニン酸またはカルボキシメチルセルロースのようなポリマー酸、などの薬学的に許容される有機酸との間で形成された塩、ならびにハロゲン化水素酸（例えば塩酸）、硫酸、またはリン酸、その他の無機酸との塩である。当業者に知られている薬学的に許容される塩を得るための任意の手続きを用いることができる。

上述のように、本発明の新規な化合物は、神経ペプチド−２レセプターアゴニストであることが分かった。したがって本発明の化合物を、神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病、特に肥満の治療および／または予防に用いることができる。

したがって本発明はまた、上に定義された化合物および薬学的に許容される担体および／またはアジュバントを含む医薬品組成物に関する。

本発明は同様に、上述の化合物を、治療用活性物質として、特に神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防用の治療用活性物質として特に肥満の治療および／または予防のための治療用活性物質として使用するために、包含する。

別の好ましい実施態様では、本発明は神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防療法のための、特に肥満の治療および／または予防療法のための方法に関し、その方法は、ヒトまたは動物に上に定義した化合物を投与する工程を含む。

本発明はまた、神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防療法のための、特に肥満の治療および／または予防療法のための、上に定義した化合物の使用を包含する。

本発明はまた、神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療のおよび／または予防療法のための薬物の調製、特に肥満の治療および／または予防療法のための薬物の調製のための、上述の化合物の使用に関する。そのような薬物は上述の化合物を含む。

本発明の方法の実施において、本発明のいずれか１つのペプチドの有効量、または本発明の任意のペプチドの組合せ、あるいはそれらの薬学的に許容される塩を、公知技術の任意の通常の許容される方法により、単独にまたは組合せて投与する。化合物または組成物を、経口的に（例えば口腔内）、舌下に、非経口的に（例えば筋肉内、静脈内、または皮下に）、直腸に（例えば坐薬または洗液により）、経皮的に（例えば、皮膚エレクトロポレーションで）または吸入により（例えばエアロゾルにより）、錠剤および懸濁液を含む、固体、液体または気体投与の形で、投与することができる。投与は、単一単位剤形の連続療法で、または一回投与療法で適宜に行うことができる。治療用組成物はまた、パモン酸のような脂肪親和性塩と一緒の油乳濁液または分散液の形に、または皮下または筋内投与のための生物分解性の徐放性組成物の形にすることができる。

したがって、症状の軽減が特に必要であるか、恐らく切迫している場合に、本発明の方法を実施する。あるいは、本発明の方法を、連続的治療法または予防療法として有効に実施する。

本発明の組成物調製のための有用な薬剤担体は、固体、液体または気体でありえる；したがって組成物は、錠剤、丸薬、カプセル剤、坐剤、散剤、腸溶性にコートされた、または他の保護された製剤（例えばイオン交換樹脂への結合、または脂質-タンパク質小胞への封入）、徐放性製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアゾール剤、その他、の形を採ることができる。担体を、石油、動物油、蔬菜類の油、または合成起源の油、例えばピーナツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油、その他の様々な油から選ぶことができる。水、食塩水、デキストロース水溶液、およびグリコールが、特に（血液と等張の場合）注射剤のために、好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与用の製剤は、水に固体の有効成分を溶解して水溶液を生成し、溶液を滅菌にすることによって調製される有効成分の無菌水溶液を含む。適当な製薬用賦形剤には、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、タルク、ゼラチン、麦芽、コメ、コムギ粉、白亜、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、その他が含まれる。組成物に、保存剤、安定化剤、湿潤化または乳化剤、浸透圧調節用塩類、緩衝液その他の、従来の医薬品添加物を添加してもよい。適当な薬剤担体およびそれらの処方について、Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martinに記述されている。そのような組成物は少なくとも、有効量の活性化合物を、受容者へ適切な投与をするのに適切な剤形を調製するための適当な担体と一緒に含むであろう。

本発明の化合物の用量は、例えば投与方法、対象の年齢および体重、ならびに治療される対象の条件などの多くの因子に依存し、最終的には主治医または獣医によって決定されることになろう。主治医または獣医によって決定されるそのような量の活性化合物を、本明細書および特許請求の範囲で「有効量」と呼ぶ。例えば、鼻腔内投与のための用量は、通常は約１〜約１００mg/kg体重の範囲であり；また、皮下投与のための用量は、通常は約０.００１〜約５０mg/kg体重の範囲である。

好ましくは、本発明の化合物の用量は、約２.５〜約１０mg/kgである。最も好ましくは、用量は約２.５、約５、および約１０mg/kgである。

本発明についてさらにここで、以下の実施例に記述することにする。それは説明のみを意図するもので、本発明の範囲を制限するものではない。

実施例１
Ｆｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂の調製
ベンズヒドリルアミンコポリスチレン−１％ジビニルベンゼン架橋樹脂（１０．０ｇ、９．３当量、１００〜２００ASTMメッシュ、Advanced ChemTech）をＣＨ_２Ｃｌ_２１００mL中で膨張させ、濾過し、ＣＨ_２Ｃｌ_２、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）各１００mLで連続して洗浄した。樹脂を２５％ＤＭＦ／ＣＨ_２Ｃｌ_２１００mL中のｐ−（（Ｒ，Ｓ）−α−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド）−２，４−ジメトキシベンジル）−フェノキシ酢酸（Ｆｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ）（７．０１ｇ、１３．０mmole）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．１６ｇ、１６．０mmole）及びジイソプロピル−カルボジイミド（２．０４mL、１３．０mmol）にて室温で２４時間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、イソプロパノール（２回）、ＤＭＦ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３回）各１００mLで連続して洗浄した。Kaiserニンヒドリン分析は陰性であった。樹脂を減圧下で乾燥して、Ｆｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂１６．１２gを得た。この樹脂の一部分（３．５mg）をＦｍｏｃ脱保護に付し、定量ＵＶ分析は、０．５６mmol/gのローディングを示した。

実施例２
フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学を用いるApplied Biosystem社 433A合成器によるペプチド合成のプロトコール
Applied Biosystem社 433A合成器（カリフォルニア州、Foster City）による０．２５mmolスケールのペプチド合成のため、ＦａｓｔＭｏｃ０．２５mmoleサイクルを、樹脂サンプリング又は非樹脂サンプリングのいずれか、４１mL反応容器とともに使用した。Ｆｍｏｃ−アミノ酸樹脂をＮＭＰ２．１ｇ、ＤＭＦ中の０．４５ＭＨＯＢＴ／ＨＢＴＵ２g及び２ＭＤＩＥＡとともに溶解し、次に反応容器に移動した。

塩基性ＦａｓｔＭｏｃカップリングサイクルは、モジュール“ＢＡＤＥＩＦＤ”により表される。各文字はモジュールを表している。
例：

Ｂは、２０％ピペリジン／ＮＭＰを使用するＦｍｏｃの脱保護ならびに関連する洗浄及び３０分間の読み取り（ＵＶ監視又は電気伝導のいずれか）のモジュールを表している。

Ａは、０．４５ＭＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ及び２．０ＭＤＩＥＡを用いるカートリッジ内でのアミノ酸の活性化及びＮ_２を泡立てて混合するためのモジュールを表している。

Ｄは、反応容器内での樹脂のＮＭＰ洗浄のモジュールを表している。

Ｅは、カップリングのための活性アミノ酸の反応容器への移動のモジュールを表している。

Ｉは、反応容器のボルテックスをオンオフしながらの１０分間の待機時間のモジュールを表している。

Ｆは、カートリッジの清浄、約１０分間のカップリング及び反応容器の水抜きのモジュールを表している。

カップリングは通常、モジュール“Ｉ”を１回又は複数回加えることにより伸長させた。例えば，ダブルカップリングは、手順“ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤ”の手順を行うことにより実施した。その他のｃのようなモジュールは、塩化メチレン洗浄に利用可能であった。「Ｃ」は、無水酢酸を用いたキャッピングを意味する。個々のモジュールも、移動させる溶媒又は試薬の量を変化させるために、例えば、移動時間のような種々の機能のタイミングを変えることにより変更可能であった。

上記サイクルは通常、１個のアミノ酸をカップリングするために使用した。しかし、テトラペプチドを合成するために、サイクルを繰り返し、つなぎ合わせた。例えば、ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを使用して第一のアミノ酸をカップリングし、続いてＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを使用して第二のアミノ酸をカップリングし、続いてＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを使用して第三のアミノ酸をカップリングし、続いてＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを使用して第四のアミノ酸をカップリングし、続いてＢＩＤＤｃｃを使用して最終的に脱保護し、洗浄した。

実施例３
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（ＰＹＹ_１−３６）（配列番号：３）の調製

上記ペプチドを、Ｆｍｏｃ化学を使用して、Applied Biosystem社 433A合成器上で合成した。合成器を、実施例２に記載のモジュールを使用して、ダブルカップリング用に調整した。合成を、実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を使用して、０．２５mmolスケールで実施した。開裂のため、合成の最後に、樹脂を振とう機上の反応容器に移動した。ペプチドを、９７％ＴＦＡ／３％Ｈ_２Ｏ１３．５mL及びトリイソプロピルシラン１．５mLを使用して、室温で１８０分間、樹脂から開裂した。脱保護溶液を冷ＥＴ_２Ｏ１００mLに加え、ＴＦＡ１mL及び冷ＥＴ_２Ｏ３０mLで洗浄し、ペプチドを沈殿した。ペプチドを２×５０mLポリプロピレン管で遠心分離した。個々の管内の沈殿物を単一の管に合わせ、冷ＥＴ_２Ｏで３回洗浄し、実験室備付け配管につないだデシケーター内で乾燥した。

粗物質を、PursuitＣ_１８カラム（２５０×５０mm、１０μm粒子サイズ）上の分取ＨＰＬＣにより精製し、２〜７０％Ｂ（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ；緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）の直線勾配にて９０分間で溶離した。流速６０mL／分、及び検出２２０／２８０nm。画分を回収し、ＨＰＬＣ分析により確認した。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、白色の無定形粉末６５mg（６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１９４Ｈ_２９５Ｎ_５５Ｏ_５７の計算値４３０９．８５、実測値４３０９．１５。

実施例４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−ＡＩa−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（ＰＹＹ_３−３６）（配列番号：４）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成及び精製に付して、白色の無定形粉末１５１mg（１５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１８０Ｈ_２７９Ｎ_５３Ｏ_５４の計算値４０４９．５５、実測値４０５０．４０。

実施例５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成及び精製に付して、白色の無定形粉末１４８mg（９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１３１．５３、実測値２１３０．５６。

実施例６
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（アセチル化サイクルをＡＢＩプロトコールに加えた）及び精製に付して、白色の無定形粉末１５０mg（２７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５７Ｎ_３３Ｏ_２２の計算値２１７１．５７、実測値２１７１．４。

実施例７
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：６）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置３４に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１４２mg（２７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９６Ｈ_１５０Ｎ_３２Ｏ_２０の計算値２０７２．４７、実測値２０７２．４。

実施例８
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：７）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置３２に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１６７mg（３２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９７Ｈ_１５１Ｎ_３３Ｏ_２０の計算値２０９９．４９、実測値２１００．３。

実施例９
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：８）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置３１に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１０５mg（２０％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９６Ｈ_１４９Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１０１．４７、実測値２１０２．１。

実施例１０
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：９）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置３０に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１６７mg（２７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９５Ｈ_１４７Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２０８７．４４、実測値２０８７．７。

実施例１１
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１０）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置２９に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１４２mg（２７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９７Ｈ_１５２Ｎ_３２Ｏ_２０の計算値２０８６．５０、実測値２０８６．５０。

実施例１２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１１）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置２８に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１６４mg（３１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９５Ｈ_１４７Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２０８７．４４、実測値２０８７．４０。

実施例１３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１２）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１３２mg（２６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９２Ｈ_１４９Ｎ_３３Ｏ_２０の計算値２０３７．４２、実測値２０３７．６０。

実施例１４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１３）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置２６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末７６mg（１５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９５Ｈ_１５１Ｎ_３１Ｏ_２１の計算値２０６３．４６、実測値２０６４．０。

実施例１５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１４）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置２５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１５２mg（３０％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９５Ｈ_１４６Ｎ_３０Ｏ_２１の計算値２０４３．１３、実測値２０４３．４。

実施例１６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置４に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末７２mg（１４％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９５Ｈ_１４６Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２０７２．４４、実測値２０７１．２。

実施例１７
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１６のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（アセチル化サイクルをプロトコールに加えた）及び精製に付して、白色の無定形粉末２３４mg（４４％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９７Ｈ_１４８Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１１４．４６、実測値２１１４．７。

実施例１８
Ｈ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａを配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１９６mg（３８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９５Ｈ_１４７Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２０８７．４５、実測値２０８６．５。

実施例１９
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−（Ｄ）Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｔｙｒを配列の位置３６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１１４mg（２１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５２、実測値２１２９．１０。

実施例２０
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（Ｄ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ａｒｇを配列の位置３５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末２２１mg（４２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５２、実測値２１２９．１０。

実施例２１
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−（Ｄ）Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ａｒｇを位置３３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１７４mg（３２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５２、実測値２１２８．４。

実施例２２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−（Ｄ）Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｖａｌを配列の位置３１に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末６７mg（１２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５２、実測値２１２９．１０。

実施例２３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｌｅｕを配列の位置３０に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１９０mg（３６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５２、実測値２１２９．１０。

実施例２４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−（Ｄ）Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ａｓｎを配列の位置２９に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末５０mg（１０％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２８．８０。

実施例２５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−（Ｄ）Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｌｅｕを配列の位置２８に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１８８mg（３５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２９．４０。

実施例２６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｔｙｒを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１１９mg（２２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２９．７０。

実施例２７
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−（Ｄ）Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｈｉｓを配列の位置２６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８４mg（１６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２８．８０。

実施例２８
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−（Ｄ）Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ａｒｇを配列の位置２５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８５mg（１６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２８．８０。

実施例２９
Ｈ−Ｉｌｅ−（Ｄ）Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｌｙｓを配列の位置４に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１６５mg（３１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２９．１０。

実施例３０
Ｈ−（Ｄ）Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｉｌｅを配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８４mg（８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１２９．５３、実測値２１２９．４０。

実施例３１
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−（ＮＭｅ）Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＴｙｒを配列の位置３６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末９０mg（１７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５７Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．５０。

実施例３２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１６）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＡｒｇを配列の位置３５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末３２mg（６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．５０。

実施例３３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１７）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＡｒｇを配列の位置３３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末４０mg（７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．２０。

実施例３４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−（ＮＭｅ）Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１８）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＴｈｒを配列の位置３２に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１１５mg（２１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．２０。

実施例３５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−（ＮＭｅ）Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１９）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＶａｌを配列の位置３１に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末６０mg（１１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．２０。

実施例３６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−（ＮＭｅ）Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２０）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルｌｅｕを配列の位置３０に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末９１mg（１７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４２．９０。

実施例３７
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−（ＮＭｅ）Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２１）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルｌｅｕを配列の位置２８に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１５３mg（２８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４２．９０。

実施例３８
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−（ＮＭｅ）Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２２）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＴｙｒを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末７６mg（１４％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４２．９０。

実施例３９
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−（ＮＭｅ）Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２３）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＨｉｓを配列の位置２６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末９３mg（７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５３、実測値２１４３．５０。

実施例４０
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２４）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＡｒｇを配列の位置２５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末３３mg（６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．５０。

実施例４１
Ｈ−Ｉｌｅ−ＮＭｅＬｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＬｙｓを配列の位置４に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１５６mg（２９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．２０。

実施例４２
Ｈ−ＮＭｅＩｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＩｌｅを配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末２０３mg（３８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１の計算値２１４３．５６、実測値２１４３．２０。

実施例４３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎｌｅを配列の位置４に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末６０mg（１１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５３Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２１１４．５２、実測値２１１３．８０。

実施例４４
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（アセチル化サイクルをプロトコールに加えた）及び精製に付して、白色の無定形粉末４１mg（８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５４Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１５６．５６、実測値２１５６．１０。

実施例４５
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｐｈｅを配列の位置２５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末９２mg（７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０３Ｈ_１５１Ｎ_２９Ｏ_２２の計算値２１４７．５３、実測値２１４８．００。

実施例４６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２６）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｔｒｐを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末３０mg（６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５４Ｎ_３４Ｏ_２０の計算値２１５３．５６、実測値２１５２．２０。

実施例４７
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２７）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｌａ２５及びＴｒｐ２７を配列に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末５０mg（９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９７Ｈ_１４７Ｎ_３１Ｏ_２０の計算値２０６７．４６、実測値２０６７．３０。

実施例４８
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−（Ｄ）Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ｄ）Ｔｙｒを配列の位置３６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１０４mg（１９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５４Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１５６．５４、実測値２１５７．００。

実施例４９
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｎ−メチルＴｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：１５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｎ−メチルＴｙｒを配列の位置３６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末２８mg（５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０１Ｈ_１５６Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１７０．５７、実測値２１７０．５０。

実施例５０
シクロＬｙｓ２８−Ａｓｐ３２Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２８）の調製

ペプチドを、標準プロトコールを使用したABI433合成器での自動合成及び０．２５mMスケールでの手動合成を組み合わせて調製した。フラグメントＦｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（２Ｐｉｐ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＢＨＡ樹脂（配列番号：２９）をＡＢＩプロトコールを使用して合成し、次に手動で伸張して、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−Ｌｙｓ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＢＨＡ樹脂（配列番号：３０）を得た。自動合成の完了後、ペプチド樹脂を手動固相容器に移動し、塩化メチレン及びＤＭＦで複数回洗浄した。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）１．２g（２．０mM、８当量）を固体として加え、ＤＭＦ１５mL、続いてＤｉｃ１．２mL（７mM、２８当量）を加えた。ニンヒドリンが陰性又はほぼ陰性になるまでカップリングを続けた。ニンヒドリンが陰性にならなかった場合、樹脂を、Ａｃ_２Ｏ６mL、ＤＩＥＡ１mL及びＤＭＦ１８mLで３０分間アセチル化し、完了をニンヒドリンで確認した。次に、樹脂をＤＭＦ（３Ｘ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（４Ｘ）で洗浄した。Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）及びＡｓｐ（２Ｐｉｐ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２中の２％ＴＦＡを使用して１０回脱保護した。脱保護後、ペプチド樹脂をＣＨ_２Ｃｌ_２（２Ｘ）、６％ＴＦＡ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（２Ｘ）、６％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ（２Ｘ）及びＤＭＦ（２Ｘ）で洗浄した。側鎖をＨＡＴＵ（２４０mg、０．６２５mM（２．５当量））及びＤＩＥＡ（１７５μL、１．０mM（４当量））で環化し、ニンヒドリンで陰性になるまで監視した。

環化の完了後、ペプチド樹脂をＡＢＩ容器に移動して、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−Ｌｙｓ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＢＨＡ樹脂（配列番号：３０）に伸張した。Ｆｍｏｃ−Ｐｇａ−ＯＨ（１６０mg、３１３mM（１．２５当量））及びＨＯＢｔ（５mg、３１３mM（１．２５当量））を固体として加え、ＤＭＦ１５mL、続いてＤｉｃ１．２mL（７mM、２８当量）を加えた。カップリングを室温で一晩（通例１８時間）実施した。ＤＭＦで４回洗浄した後、カップリングをニンヒドリンで監視すると、通例陰性であった。標準的な脱保護及び洗浄の後、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ（１．２ｇ、３．０mM（１２当量））をＤＭＦ中の０．４５ＭＨＢＴＴ／ＨＯＢｔ６．６mLで３分間事前に活性化し、ペプチド樹脂に加えた。カップリングを３〜４時間続け、反応容器を空にし、ＤＭＦで４回洗浄した。このカップリングをchlorinal（ＤＭＡｃ中の２％アセトアルデヒド及び２％テトラクロロ−１，４−ベンゾキノン）で監視した。カップリングが不完全であると判断した場合、樹脂を一晩再カップリングした。カップリングが完了したとき、樹脂を脱保護し、洗浄し、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ（１．２ｇ、３．０mM（１２当量））をＤＭＦ中の０．４５ＭＨＢＴＴ／ＨＯＢｔ６．６mLで３分間事前に活性化し、ペプチド樹脂に加えた。カップリングを３〜４時間続け、反応容器を空にし、ＤＭＦで４回洗浄した。このカップリングをニンヒドリンで監視すると、通例陰性であった。樹脂を脱保護し、洗浄し、Ａｃ_２Ｏ６mL、ＤＩＥＡ１mL及びＤＭＦ１８mLで３０分間アセチル化し、ニンヒドリンが陰性又はほぼ陰性になるまで、完了を確認した。ニンヒドリンが陰性でなかった場合、樹脂をＡｃ_２Ｏ６mL、ＤＩＥＡ１mL及びＤＭＦ１８mLで３０分間アセチル化し、完了をニンヒドリンで確認した。

合成の完了後、樹脂をＣＨ_２Ｃｌ_２で４回洗浄し、Ｎ_２流下で乾燥した。ペプチドを脱保護し、トリイソプロピルシラン１．５mL及び９７％ＴＦＡ／３％Ｈ_２Ｏ１３．５mLで１８０分間樹脂から開裂した。脱保護溶液を冷ＥＴ_２Ｏ１００mLに加え、ＴＦＡ１mL及び冷ＥＴ_２Ｏ３０mLで洗浄して、ペプチドを沈殿し、次に遠心分離し、実験室備付け配管につないだデシケーター内で乾燥した。

実施例３に記載の手順に従って、粗ペプチドを精製し、凍結乾燥して、白色の無定形粉末４９mg（９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５１Ｎ_３３Ｏ_２２の計算値２１６７．５３、実測値２１６７．８０。

実施例５１
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｃｍｓ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成及び精製に付して、白色の無定形粉末４４mg（８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９６Ｈ_１５１Ｎ_３１Ｏ_２１の計算値２０７５．４７、実測値２０７４．８０。

実施例５２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｃｍｓ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成及び精製に付して、白色の無定形粉末１２９mg（２４％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５４Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１３２．５２、実測値２１３３．００。

実施例５３
シクロＬｙｓ２８−Ａｓｐｕ３２Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｃｍｓ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：２８）の調製

このペプチドを、実施例５０に開示した手順に従って、ABI433での自動合成及び０．２５mMスケールでの手動合成を組み合わせて調製した。Ｆｍｏｃ−Ｃｍｓ−ＯＨ（１５１mg、３１３mM（１．２５当量））及びＨＯＢｔ（４５mg、３１３mM（１．２５当量））を固体として加え、ＤＭＦ１５mL、続いてＤｉｃ（７mM、２８当量）１．２mLを加えた。カップリングを室温で一晩実施した（通例１８時間）。粗ペプチドを精製し、凍結乾燥して、白色の無定形粉末１９mg（９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１４９Ｎ_３１Ｏ_２２の計算値２１１３．４７、実測値２１１３．８０。

実施例５４
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｉｃ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３１）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｔｉｃを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８７mg（１６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０１Ｈ_１５４Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２１５２．５６、実測値２１５２．５０。

実施例５５
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｂｉｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３２）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｂｉｐを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末９０mg（１６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０６Ｈ_１５８Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２２１６．６４、実測値２２１７．００。

実施例５６
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｄｉｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３３）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ｄｉｐを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８４mg（１５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０６Ｈ_１５８Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２２１６．６４、実測値２２１７．３０。

実施例５７
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−（１）Ｎａｌ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３４）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（１）Ｎａｌを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８８mg（１６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０４Ｈ_１５６Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２１９０．６０、実測値２１９０．６１。

実施例５８
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−（２）Ｎａｌ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（２）Ｎａｌを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末４０mg（７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０４Ｈ_１５６Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２１９０．６０、実測値２１９１．２０。

実施例５９
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−（３，４，５トリフルオロＰｈｅ）−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３６）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（３，４，５，トリフルオロＰｈｅを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１０１．４mg（１８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５１Ｆ_３Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２１９４．５２、実測値２１９４．２０。

実施例６０
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−（２，３，４，５，６ペンタフルオロＰｈｅ）−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３７）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（２，３，４，５，６ペンタフルオロＰｈｅを配列の位置２７に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１２２．５mg（２２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１４９Ｆ_５Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２２３０．５０、実測値２２３０．５０。

実施例６１
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−（４−ＭｅＯＡｐｃ）−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３８）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（４−ＭｅＯ−Ａｐｃ）を配列の位置２６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末４３mg（８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０８Ｈ_１６４Ｎ_３０Ｏ_２３の計算値２２５０．７０、実測値２２５０．６０。

実施例６２
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−（３−Ｐａｌ）−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：３９）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（３−Ｐａｌ）を配列の位置２６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１１２mg（２１％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０２Ｈ_１５５Ｎ_３１Ｏ_２２の計算値２１６７．５７、実測値２１６７．２０。

実施例６３
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−（４−Ｐａｌ）−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：４０）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（４−Ｐａｌ）を配列の位置２６に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１４６mg（２７％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０２Ｈ_１５５Ｎ_３１Ｏ_２２の計算値２１６７．５７、実測値２１６７．２０。

実施例６４
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−（３，４，５トリフルオロＰｈｅ）−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：４１）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（３，４，５トリフルオロＰｈｅ）を配列の位置２５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末５５mg（１０％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０３Ｈ_１４８Ｆ_３Ｎ_２９Ｏ_２２の計算値２２０１．５０、実測値２２０１．４０。

実施例６５
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−（２，３，４，５，６ペンタフルオロＰｈｅ）−ＨｉｓＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：４２）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（２，３，４，５，６ペンタフルオロＰｈｅ）を配列の位置２５に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末６５mg（１２％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０３Ｈ_１４６Ｆ_５Ｎ_２９Ｏ_２２の計算値２２３７．４９、実測値２２３７．７０。

実施例６６
Ａｃ−Ａｉｂ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（Ａｉｂ）を配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末３２mg（６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５０Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１２８．４９、実測値２１２８．００。

実施例６７
Ａｃ−１，１−Ａｉｃ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（１，１Ａｉｃ）を配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、ＰｋＡとして分離したラセミ混合物：白色の無定形粉末３１mg（６％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０４Ｈ_１５２Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２２０２．５７、実測値２２０２．６０。

実施例６８
Ａｃ−１，１−Ａｉｃ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（１，１Ａｉｃ）を配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、Ｐｋ．Ｂとして分離したラセミ混合物：白色の無定形粉末４６mg（８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０４Ｈ_１５２Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２２０２．５７、実測値２２０２．６０。

実施例６９
Ａｃ−２，２−Ａｉｃ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（（２，２Ａｉｃ）を配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末１０３mg（１９％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０４Ｈ_１５２Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２２０２．５７、実測値２２０２．３０。

実施例７０
Ａｃ−Ａｃｈ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｃｈを配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末８１mg（１５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１０１Ｈ_１５４Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１６８．５５、実測値２１６８．１０。

実施例７１
Ａｃ−Ａｃｐ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成（Ａｃｐを配列の位置３に挿入した）及び精製に付して、白色の無定形粉末９５mg（１８％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_１００Ｈ_１５２Ｎ_３２Ｏ_２２の計算値２１５４．５３、実測値２１５４．３０。

実施例７２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

実施例１のＦｍｏｃ−Ｌｉｎｋｅｒ−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を、実施例３の手順に従って固相合成及び精製に付して、白色の無定形粉末８０mg（１５％）を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳｍ／ｅＣ_９８Ｈ_１５２Ｎ_３２Ｏ_２１の計算値２１１４．５１、実測値２１１３．８０。

実施例７３
ＰＥＧ（１０，０００）−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製。

上記の構造においては、一般的な命名法に従い、基−Ｘ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−Ｘ−はポリエチレングリコール部分の反復グリコール単位、即ち、基−（ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ）_ｎ−を表す。「ｎ」は、所望のポリエチレングリコール単位の所望の重量を得るのに応じて選択される。実施例７２のペプチド１５mgを計量し、ホウ酸塩５０mM、pＨ７．４緩衝液に溶解した。ＰＥＧ−ＳＰＡ−ＮＨＳ（Nektar社）１０kDa １０７mgを計り、２：１ＰＥＧ：ペプチドのモル比を得て、溶解したペプチドに加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その後それをＮaＯＡｃ２０mM、pＨ４．５緩衝液中で１０倍に希釈し、S−Sepharose（Amersham社）上の陽イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。図１はＰＥＧ−ＰＹＹペプチド１０KDaのＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により、ペプチド１０kDa ６７．８％を得た。

モノ−ポリエチレングリコール化ＰＹＹペプチドを段階的ＮａＣｌ勾配を用いて溶離した。通例、所望のモノ−ポリエチレングリコール化ペプチドはＮａＣｌ１２５mMで溶離した。溶離したＰＥＧ−ＰＹＹ様のペプチドを、ＭＷ１０kDaのカットオフ膜を用いて、Amicon社限外濾過細胞中で濃縮した。次に、それをＰＢＳで１回、１０倍に逆方向濾過（diafilter）した。

実施例７３の濃縮ペプチドを分析に付し、アッセイし、−２０℃で保存した。図２は、精製したＰＥＧ−ＰＹＹペプチド１０kDaのＨＰＬＣクロマトグラムである。ペプチド１０kDaの純度は９７．６％であった。図３は、ＰＥＧ−ＰＹＹペプチド１０kDaのMALDI-TOFを実施し、分子量を確認したことを表したグラフである。

実施例７４
ＰＥＧ（３０，０００）−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（配列番号：５）の調製

上記の構造においては、一般的な命名法に従い、基−Ｘ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−Ｘ−はポリエチレングリコール部分の反復グリコール単位、即ち、基−（ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ）_ｎ−を表す。「ｎ」は、所望のポリエチレングリコール単位の所望の重量を得るのに応じて選択される。実施例７２のペプチド１５mgを計量し、ホウ酸塩５０mM、pＨ７．４緩衝液に溶解した。ＰＥＧ−ＳＰＡ−ＮＨＳ３０kDa ２４４mgを計り、２：１ＰＥＧ：ペプチドのモル比を得て、溶解したペプチドに加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し（図４）、その後それをＮaＯＡｃ２０mM、pＨ４．５緩衝液中で１０倍に希釈し、S−Sepharose（Amersham社）上の陽イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。図４はＰＥＧ−ＰＹＹペプチド３０KDaのＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により、ペプチド３０kDa ８８．３％を得た。

モノ−ポリエチレングリコール化ＰＹＹペプチドを段階的ＮａＣｌ勾配を用いて溶離した。通例、所望のモノ−ポリエチレングリコール化ＰＹＹペプチドはＮａＣｌ１２５mMで溶離した。溶離したＰＥＧ−ＰＹＹ様のペプチドを、ＭＷ１０kDaのカットオフ膜を用いて、Amicon社限外濾過細胞中で濃縮した。次に、それをＰＢＳで１回、１０倍に逆方向濾過した。濃縮ペプチドを分析に付し、アッセイし、−２０℃で保存した。図５は、精製したＰＥＧ−ＰＹＹペプチド３０kDaのＨＰＬＣクロマトグラムである。ペプチド３０kDaの純度は９８．４％であった。図６は、ＰＥＧ−ＰＹＹペプチド３０kDaのMALDI-TOFを実施し、分子量を確認したことを表す。

実施例７５
実施例４９の化合物の血漿安定性
実施例４９のペプチドのヒト及びマウスの血漿安定性を測定した。この実施例において、実施例４９のペプチド１４０μgを、３７．５℃で０、４０、９０及び１５０分間、ヒト又はマウスのいずれかの血漿３００μLでインキュベートした。ＰＯＳＲインキュベーション各サンプルを水中の０．１％酢酸中で５０倍に希釈した。次に、希釈したサンプルをＬＣ／ＵＶ／ＭＳにより分析すると、安定していた。

実施例７６
実施例３２の化合物の血漿安定性
実施例３２のペプチドのヒト及びマウスの血漿安定性を測定した。この実施例において、実施例３２のペプチド５１μgを、３７．５℃で０、４０、９０及び１５０分間、ヒト又はマウスのいずれかの血漿３００μLでインキュベートした。ＰＯＳＲインキュベーション各サンプルを水中の０．１％酢酸中で５０倍に希釈した。次に、希釈したサンプルをＬＣ／ＵＶ／ＭＳにより分析すると、安定していた。

実施例７７
cAMPアゴニストアッセイ
この実施例において、下記の物質を使用した：３８４−ウェルプレート；Tropix、cAMPスクリーンキット；cAMP ELISAシステム（Applied Biosystems社、,cat. #T1505;CS 20000）；Forskolin（Calbiochem cat. # 344270）；細胞：HEK293/hNPY2R；成長培地：ダルベッコー修飾イーグル培地（(D-MEM、Gibco)；１０％ウシ胎仔血清（EBS、Gibco）、熱不活性化；１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ペニシリン１００００単位／ml：ストレプトマイシン１００００mg／ml、Gibco）；G418 ５００mg／ml（Geneticin、Gibco cat. # 11811-031）；及びプレート培地：DMEM／F12 w／o フェノールレッド（Gibco）；１０％ FBS （Gibco, cat. # 10082-147）、熱不活性化；１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Gibco, cat. # 15140-122）；G418 ５００ mg／ml（Geneticin, Gibco, cat. # 11811-031）。

１日目に、培地を廃棄し、単層細胞を１フラスコ（T225）当たりＰＢＳ１０mlで洗浄した。ＰＢＳでデカントした後、VERSENE(Gibco,cat#1504006)５mlを使用して、細胞を除去した（３７℃で５分間）。フラスコを穏やかにたたいて、細胞懸濁液をプールした。各フラスコをプレート培地１０mlですすぎ、５分間１０００rpmで遠心分離した。懸濁液をプールし、計数した。

懸濁液を、HEK293／hNPY2Rの２．０×１０^５個の細胞／mlの密度のプレート培地中で再懸濁した。マルチドロップディスペンサ（Multi-drop dispenser）を用いて、細胞５０μl（HEK293／hNPY2R＿１０，０００細胞／ウェル）を３８４−ウェルプレートに移動した。プレートを３７℃一晩インキュベートした。

２日目に、７５〜８５％の集合体について細胞を確認した。培地及び試薬を室温にした。希釈物を調整する前に、ジメチルスルホキシド(DMSO, Sigma, cat#D2650)中の刺激化合物の原液を５〜１０分間３２℃まで温めた。希釈物をＤＭＥＭ／Ｆ１２中で、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（IBMX, Calbiochem, cat#410957）０．５mM及びＢＳＡ０．５mg／mLとともに調製した。刺激培地中の最終的なＤＭＳＯ濃度は１．１％であり、ホルスコリン濃度は５μMであった。

細胞プレートを穏やかに裏返して、細胞培地を紙タオル上に取り出した。刺激培地５０μLをウェル毎に置いた（各濃度を４重で行った）。プレートを室温で３０分間インキュベートし、毒性について、細胞を顕微鏡で確認した。

３０分間の処理後、刺激培地を廃棄し、アッセイ溶解緩衝液（Tropixキット内に供給）５０μl／ウェルを加えた。プレートを３７℃で４５分間インキュベートした。

溶解物２０μLを刺激プレートからTropixキットのあらかじめコートされた抗体プレート（３８４−ウェル）内に移動した。ＡＰコンジュゲート１０μL及びアンチcAMP抗体２０μLを加えた。１時間振とうしながら、プレートを室温でインキュベートした。次に、プレートを、各洗浄剤につきウェル毎に７０μLのWash Bufferで５回洗浄した。プレートをたたいて乾燥した。CSPD/Saphire-IIRTU 基質／エンハンサー溶液３０μL／ウェルを加え、室温で４５分インキュベートした（振とう）。Luminometer (VICTOR-V)中の１秒／ウェルの信号を計測した。

実施例７８
食物摂取アッセイのインビボでの減少
この実施例においては、４回の実験で、実施例５，４４，７３及び７４の化合物を４組のマウスに投与して、食物摂取の効果を計測した。８匹のマウスの実験グループとして、C57BL/6J雄マウス又はDIO(食餌誘発肥満)雄マウスを実験内で用いた。マウスは規則的な明サイクル（午前６時オン；午後６時オフ）で維持した。試験に先立ち、水を自由に与えてマウスを２４時間絶食させた。試験の間、マウスはケージ毎に１匹で収容した。

実施例５及び４４の化合物を腹膜内投与し、実施例７３及び７４の化合物を皮下投与した。投与してから１，２，４，６，及び２４時間後に、食物摂取を計測した。結果を表７〜１０に示す。実施例７３及び７４の化合物については、食物摂取をより長い間隔で計測し、表９及び１０に示した。各図においては、累積及び時間間隔での食物消費量を個々のマウスについて計測した。平均食物消費量及ビヒクルからの率の変化を各時間間隔毎に計算した。データを、両側ｔ−検定（two−tailed Student t−test）を使用して分析した。表７〜１０は、いかに、本発明の化合物が対照と比較して、食物摂取を減少させる上で効果的であるかを示している。

実施例７９
CaFluxアッセイ
Ｈｅｋ−２９３細胞をＧタンパク質キメラGaqi9で安定的にトランスフェクトし、ハイグロマイシン−Ｂ耐性遺伝子を、ヒトＮＰＹ２レセプター及びＧ４１８抗生物質選択で更にトランスフェクトした。両ハイグロマイシン−Ｂ及びＧ４１８の選択に従って、個々のクローンを、そのＰＹＹに対する反応についてアッセイした。トランスフェクトした細胞を、１０％胎仔血清、５０μg／mLのハイグロマイシン−Ｂ、２mMのグルタミン、ペニシリン１００Ｕ／mL、ストレプトマイシン１００μg／mL及び２５０μg／mLのＧ４１８を補充したＤＭＥＭ培地中で培養した。細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで回収し、ViaCount試薬を用いて計数した。細胞懸濁液の容積を完全成長培地で４．８×１０^５細胞／mLに調整した。２５μLのアリコートを３８４ウェルポリ−Ｄリシンでコートした黒色／透明なマイクロプレート（Falcon社）内に分与し、マイクロプレートを３７℃ ＣＯ_２インキュベータ内で一晩置いた。

１個のバイアル（Expressキット）の内容物を、ＨＥＰＥＳ２０mM及びプロベネシド５mMを含有するハンクス液１０００Mlに溶解することにより、ローディングバッファー（カルシウム−３アッセイキット、Molecular Devices）を調製した。希釈した染料の２５μLのアリコートを細胞プレートに分与し、次にプレートを３７℃で１時間インキュベートした。インキュベーションの間、試験化合物を、ＨＢＳＳ（ＨＥＰＥＳ２０mM）／０．０５％ＢＳＡ／１％ＤＭＳＯ中で、３．５Ｘ所望の濃度で調製し、３８４ウェルプレートに移動し、ＥＬＩＰＲ上で使用した。

インキュベーション後、両細胞及び化合物プレートをＦＬＩＰＲに導き、希釈化合物２０μLをＥＬＩＰＲにより細胞プレートに移動した。アッセイの間、細胞プレートの３８４ウェル全てから、１．５秒毎に蛍光を同時に読み取った。安定した基準を構築するために、５回の読み取りを行い、次にサンプル２０μLを迅速（３０μL／sec）かつ同時に細胞プレートの各ウェルに加えた。総経過時間１００秒の間、サンプルの添加前、添加中及び添加後、蛍光を連続して監視した。添加後の各ウェル内の反応（ピーク蛍光の増強）を測定した。リガンドの刺激に先立って各ウェルの最初に読み取った蛍光を、そのウェルからのデータについてのゼロ基準として使用した。反応は、陽性対照の最大限の反応のパーセントとして示される。

本発明の化合物は、cAMPアッセイ（実施例７７）及びCaFluxアッセイ（ＥＬＩＰＲ）（実施例７８）に示したように、インビトロでの選択的ニューロペプチド−２レセプター活性を示す。インビトロの結果である、実施例３〜７４のＩＣ５０及びＥＣ５０の概要を下記の表１に例示する。

本発明は上記本発明の特定の実施態様に限定されず、特定の実施態様の変更が可能であり、依然として添付の請求項の範囲内にあることは理解されるべきである。

実施例Ａ
下記の成分を含有するフィルムコーティング剤は常法により製造することができる：
成分１錠当たり
核：
式（Ｉ）の化合物１０．０mg ２００．０mg
微晶質セルロース２３．５mg ４３．５mg
含水乳糖６０．０mg ７０．０mg
ポビドンK30 １２．５mg １５．０mg
グリコールデンプンナトリウム１２．５mg １７．０mg
ステアリン酸マグネシウム１．５mg ４．５mg
（核重量）１２０．０mg ３５０．０mg
フィルムコート：
ヒドロキシプロピルメチルセルロース３．５mg ７．０mg
ポリエチレングリコール6000 ０．８mg １．６mg
タルク１．３mg ２．６mg
酸化鉄（黄色）０．８mg １．６mg
二酸化チタン０．８mg １．６mg

活性成分を篩にかけ、微晶質セルロースと混合し、混合物を水中のポリビニルピロリドンの溶液で造粒する。顆粒をグリコールデンプンナトリウム及びステアリン酸マグネシウムと混合し、圧縮して、それぞれ１２０又は３５０mgの核を得る。上記のフィルムコートの水溶液／懸濁液を核に塗布する。

実施例Ｂ
下記の成分を含有するカプセル剤は、常法により製造することができる：
成分１カプセル当たり
式（Ｉ）の化合物２５．０mg
乳糖１５０．０mg
トウモロコシデンプン２０．０mg
タルク５．０mg
成分を篩にかけ、混合し、サイズ２のカプセルに充填する。

実施例Ｃ
注射剤は下記の組成を有することができる：
式（Ｉ）の化合物３．０mg
ポリエチレングリコール400 １５０．０mg
酢酸ｐＨ５．０にするのに十分な量
注射用水全量を１．０mlにする量
活性成分を、ポリエチレングリコール400と注射用水（一部）の混合物に溶解する。酢酸によりｐＨを５．０に調整する。水の残量を加えて、容量を１．０mlに調整する。溶液を濾過し、適切な過剰量を使用してバイアルに充填し、滅菌する。

実施例Ｄ
下記の成分を含有する軟ゼラチンカプセル剤は常法により製造できる：
カプセル剤内容
式（Ｉ）の化合物５．０mg
黄ろう８．０mg
硬化大豆油８．０mg
部分的硬化植物油３４．０mg
大豆油１１０．０mg
カプセル剤の重量１６５．０mg
ゼラチンカプセル剤
ゼラチン７５．０mg
グリセロール８５％３２．０mg
Karion 83 ８．０mg（乾物）
二酸化チタン０．４mg
酸化鉄黄１．１mg
活性成分を、温かく溶融している他の成分に溶解し、混合物を適切な大きさの軟ゼラチンカプセルに充填する。充填された軟ゼラチンカプセル剤を、通常の手順に従って処理する。

実施例Ｅ
下記の成分を含有するサッシェは常法により製造できる。
式（Ｉ）の化合物５０．０mg
乳糖、微細粉末１０１５．０mg
微晶質セルロース（AVICEL PH 102）１４００．０mg
カルボキシメチルセルロースナトリウム１４．０mg
ポリビニルピロリドンK 30 １０．０mg
ステアリン酸マグネシウム１０．０mg
風味添加剤１．０mg
活性成分を、乳糖、微晶質セルロース及びカルボキシメチルセルロースナトリウムと混合し、水中のポリビニルピロリドンの混合物と共に造粒する。顆粒をステアリン酸マグネシウム及び風味添加剤と混合し、サッシェに充填する。

本発明の化合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。本発明の化合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。本発明の化合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを示す。本発明の別の化合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。本発明の化合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。本発明の化合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを示す。本発明の化合物の投与後の食物摂取に対する効果の図表を示す。本発明の別の化合物の投与後の食物摂取に対する効果の図表を示す。本発明のまた別の化合物の投与後の食物摂取に対する効果の図表を示す。本発明のさらに別の化合物の投与後の食物摂取に対する効果の図表を示す。

Claims

式（Ｉ）：

（式中：
Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、
Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、
Ｒ₁は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
Ｒ₂は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
Ｒ₃は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ)Ａｒｇ、Ｎ-メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ₄は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｈｉｓ、Ｎ-メチルＨｉｓ、４-ＭｅＯＡｐｃ、３-Ｐａｌまたは４-Ｐａｌであり、
Ｒ₅は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｔｙｒ、Ｎ-メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１)Ｎａｌ、（２)Ｎａｌ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ₆は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、
Ｒ₇はＡｓｎ、Ａｌａ、または（Ｄ)Ａｓｎであり、
Ｒ₈はＬｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、
Ｒ₉はＶａｌ、Ａｌａ、（Ｄ)ＶａｌまたはＮ-メチルＶａｌであり、
Ｒ₁₀はＴｈｒ、ＡｌａまたはＮ-メチルＴｈｒであり、
Ｒ₁₁はＡｒｇ、（Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、
Ｒ₁₂はＧｌｎまたはＡｌａであり、
Ｒ₁₃はＡｒｇ、(Ｄ)Ａｒｇ、またはＮ-メチルＡｒｇであり、および
Ｒ₁₄は、Ｔｙｒ、(Ｄ)Ｔｙｒ、またはＮ-メチルＴｙｒである）
の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいは薬学的に許容されるそれらの塩。
ＸがＰｑａである、請求項１記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
ＸがＣｍｓである、請求項１記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
Ｙが（Ｃ_１〜Ｃ_６）のアルキル部分である、請求項１記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
式（II）：

（式中、
Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれる部分であり、
Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、
Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、および
Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）である）
の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいは薬学的に許容されるそれらの塩。
ＸがＰｑａである、請求項５記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
ＸがＣｍｓである、請求項５記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
式（III）：
Ｙ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｘ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（III）
（式中、
Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、
Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分である）
の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいは薬学的に許容されるそれらの塩。
ＸがＰｑａである、請求項８記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
ＸがＣｍｓである、請求項８記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
から成る群より選ばれる、請求項１〜１０のいずれか１項記載の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
から成る群より選ばれる、請求項１〜１１のいずれか１項記載の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
アミノ酸残基５〜２４が長さ約８〜約１１オングストロームの部分と置換された
ＰＹＹ_3-36誘導体を含む、神経ペプチド-２レセプターアゴニスト。
前記部分が長さ約９〜約１１オングストロームである、請求項１３記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
前記部分が長さ約９〜約１０オングストロームである、請求項１４記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
前記部分が長さ約８〜約１０オングストロームである、請求項１５記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
前記部分が長さ約８〜約９オングストロームである、請求項１６記載の神経ペプチド−２レセプターアゴニスト。
請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物ならびに薬学的に許容される担体および／またはアジュバントを含む、医薬組成物。
治療用活性物質として使用するための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物。
神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防のための治療用活性物質として使用するための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物。
神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防療法のための、特に肥満の治療および／または予防療法のための方法であって、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物をヒトまたは動物に投与する工程を含む方法。
神経ペプチド−２レセプターアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防療法のための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物の使用。
肥満の治療および／または予防療法のための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物の使用。
神経ペプチド−２レセプターのアゴニストによってモジュレートされる疾病の治療および／または予防療法のための薬物の調製のための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物の使用。
肥満の治療および／または予防療法のための薬物の調製のための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物の使用。
これより後に定義された発明。