CN102202681A - 神经肽-2受体(y-2r)激动剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(I)的神经肽-2受体激动剂及其药用盐、衍生物和片段，其中取代基是在说明书中公开的那些。这些化合物和包含它们的药物组合物可用于治疗例如肥胖症和糖尿病的疾病。

Description

神经肽-2受体(Y-2R)激动剂及其用途
本发明提供PYY3-36的截短和脂质化(lipidated)类似物。所述类似物是神经肽-2受体的激动剂并且可用于治疗代谢性疾病和病症，诸如例如肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性和异常脂肪血症。
本发明特别地涉及式(I)的神经肽-2受体激动剂：
Figure BPA00001358693700011
其中：
L是脂质结构部分；
L′是脂质结构部分；
X是(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸(Pqa)；
Y是H、酰基结构部分或焦-Glu；
Z是间隔基结构部分或不存在；
Z′是间隔基结构部分或不存在；
R1是Ile，Ala，(D)Ile或N-甲基Ile；
R2是Lys，Ala，(D)Lys，N-甲基Lys，Nle或(Lys-Gly)；
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg或Phe；
R4是His，Ala，(D)His或N-甲基His；
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr或Trp；
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu；
R7是Asn，Ala或(D)Asn；
R8是Leu或Trp；
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val；
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr；
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg；
R12是Gln或Ala；
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg；且
R14是Tyr，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Phe或Trp；且
其中结构部分L-Z-和L’-Z’-不同时存在；
或其药用盐。
代谢性疾病和病症是发达国家已经广泛认识到的严重健康问题，其在美国已经达到流行病水平。例如，根据最近关于肥胖症的研究，超过50％的美国人口被认为是超重，超过25％在临床上被诊断为肥胖症并且有相当大的风险发展为心脏病、2型糖尿病和某些癌症。这些流行病成为保健系统的重大负担，因为每年仅在美国就有预计超过700亿美元的计划肥胖症治疗费用。治疗肥胖症的策略包括减少食物摄取并且增加能量消耗。
神经肽Y(NPY)，是一种36个氨基酸肽的神经递质，是已经显示存在于外周和中枢神经系统两者中的神经递质/神经激素的胰腺多肽类别的成员。NPY是已知的最有效的开胃剂之一并且显示在调节包括人的动物的食物摄取上具有重要作用。
已经克隆了6种NPY受体，Y1-、Y2-、Y3-、Y4、和Y5-和Y6-亚型，其属于视紫红质样G蛋白偶联的7-跨膜受体(GPCR)。NPY Y2受体(Y2R)是一种381个氨基酸的受体，其通过Gi抑制腺苷酸环化酶的激活，同时显示与其它已知NPY受体的低同源性。在大鼠和人Y2受体之间存在高度保守性，具有98％的氨基酸同一性。
Y2R受体广泛分布在啮齿动物和人的中枢神经系统中。在下丘脑中，Y2 mRNA定位在弓状核，视前核和背内侧核中。在人脑中，Y2R是主要的Y受体亚型。在弓状核中，超过80％的NPY神经元共表达Y2R mRNA。Y2-选择性激动剂的应用显示减少了体外来自下丘脑切片的NPY的释放，而Y2非肽拮抗剂BIIE0246增加NPY释放。这些发现支持Y2R作为突触前的自身受体的作用，该自身受体调节NPY释放并且因此可以涉及进食的调节。(Kaga T等，Peptides(肽)22：501-506(2001)和King PJ等，Eur J Pharmacol(欧洲药理学杂志)396：R1-3(2000))。
肽YY3-36(PYY3-36)是34个氨基酸的线性肽，其具有神经肽Y2激动剂活性。已经显示弓形核内(IC)或腹膜内(IP)注射PYY3-36减少了大鼠中的进食，并且作为长期治疗减少了体重增加。静脉内(IV)输注(0.8pmol/kg/min)PYY3-3690分钟，在24小时内减少了肥胖症和正常人受试者的食物摄取。这些发现显示PYY系统可以是肥胖症治疗的治疗靶标(Batterham RL等，Nature(自然)418：650-654(2002)；Batterham RL等，New Engl J Med(新英格兰医药杂志)349：941-948(2003))。此外，PYY的Cys2-(D)Cys27-环化形式，其中残基5-24被5-8个碳长度的亚甲基链替代，显示小肠PYY受体的激活，如通过大鼠空肠的电压钳粘膜制备物的电流减少所证实的。(Krstenansky，等.在Peptides，Proceedings of the Twelfth American Peptide Symposium(肽，第十二届美国肽专题讨论会)中，J.Smith和J.Rivier编辑，ESCOM.莱顿，第136-137页)。
此外，最近的数据显示Roux-enY胃旁路患者具有PYY水平的早期和过大的增加，其可能部分负责早期血糖控制和长期体重维持，说明这种肽在代谢性疾病的发病机制中的重要性。PYY的其它已知作用包括：减少的胃部排空和延迟的胃肠通过，其负责改善的餐后血糖控制。高血糖症的指标如HbA1C和果糖胺在2型糖尿病动物模型中在外周施用PYY3-36后显示剂量依赖性的减少。因此，这些结果显示PYY3-36或药用相关激动剂可以提供针对血糖和体重控制的长期治疗方法(Korner等，J Clin Endocrinol Metabol(临床内分泌代谢杂志)90：359-365(2005)；Chan JL等，肥胖症(肥胖症)14：194-198(2006)；Stratis C等，Obes Surg(肥胖症外科)16：752-758(2006)；Borg CM等，Br J Surg(英国外科学杂志)93：210-215(2006)；和Pittner RA等，Int J Obes(国际肥胖症杂志)28：963-971(2004))。
因此，需要新的改造的PYY类似物，其具有低分子量，同时具有相同或更好的针对Y1、Y4和Y5受体的效力和选择性、药物代谢动力学性质和药理学性质。
本发明的化合物优选用于治疗代谢性疾病和病症。此类代谢性疾病和病症包括例如：肥胖症，糖尿病，优选2型糖尿病，代谢综合征(也称为X综合征)，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损(impaired fasting glucose)和糖耐量降低(impaired glucose tolerance)。
在本发明的另一个实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含：治疗有效量的根据式I的神经肽-2受体激动剂或其盐，和药用载体。
本发明的化合物是有利的，因为例如它们是PYY3-36的截短形式。例如，该较短的肽不仅促进化合物的更容易合成和纯化，而且改善和减少了制造步骤和费用。此外，本发明的化合物将优选与Y2受体相互作用，并且不与同源的受体如NPY Y1、Y4和Y5相互作用。不希望有的激动或拮抗副反应由此被最小化。与天然肽相比，该截短的、脂质化的肽还显示较长的体内半衰期和有利的药代动力学特性，同时还保留了其生物活性和受体特异性。
应当理解，本发明不限于本文所述的本发明的具体实施方案，因为可以进行具体实施方案的改变并且仍落入后附权利要求的范围内。还应当理解，所用的术语是为了描述具体实施方案的目的而不意欲是限制性的。实际上，本发明的范围将由后附权利要求确定。
尽管与本文所述的那些相似或等价的任何方法、装置和材料可以用于本发明的实施或测试中，然而现在描述优选的方法、装置和材料。
根据一般约定书写本文提及的所有的肽序列，其中N端氨基酸在左边，而C端氨基酸在右边，除非另外指出。在两个氨基酸残基之间的短线指示肽键。当氨基酸具有同分异构形式时，其是表示的氨基酸的L形式，除非另外特别指出。为了描述本发明的方便，使用各种氨基酸的常规和非常规缩写。这些缩写是本领域技术人员熟悉的，但是为了清楚在下面列出：
Asp＝D＝天冬氨酸；Ala＝A＝丙氨酸；Arg＝R＝精氨酸；Asn＝N＝天冬酰胺；Gly＝G＝甘氨酸；Glu＝E＝谷氨酸；Gln＝Q＝谷氨酰胺；His＝H＝组氨酸；Ile＝I＝异亮氨酸；Leu＝L＝亮氨酸；Lys＝K＝赖氨酸；Met＝M＝甲硫氨酸；Phe＝F＝苯丙氨酸；Pro＝P＝脯氨酸；Ser＝S＝丝氨酸；Thr＝T＝苏氨酸；Trp＝W＝色氨酸；Tyr＝Y＝酪氨酸；Cys＝C＝半胱氨酸；和Val＝V＝缬氨酸。
还为了方便，使用下列的缩写或符号来表示本发明中使用的结构部分、试剂等：
Pqa是(4-氧(oxo)-6-哌嗪-1-基-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸；
6-Ahx是6-氨基己酸；
Cha是环己基丙氨酸；
(1)Nal是1-萘基丙氨酸；
(2)Nal是2-萘基丙氨酸；
Nle是正亮氨酸；
Alloc是烯丙氧基(Alloxy)羰基；
Fmoc是9-芴甲氧羰基；
Mtt是4-甲基三苯甲基；
Pmc是2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基；
Pbf是2，2，4，6，7-五甲基二氢-苯并呋喃-5-磺酰基
CH2Cl2是二氯甲烷；
A2O是乙酸酐；
CH3CN是乙腈；
DMAc是二甲基乙酰胺；
DMF是二甲基甲酰胺；
DIPEA是N，N-二异丙基乙胺；
TFA是三氟乙酸；
iPr3SiH是三异丙基甲硅烷；
HOBt是N-羟基苯并三唑；
DIC是N，N’-二异丙基碳二亚胺；
BOP是苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)磷鎓-六氟磷酸盐；
HBTU是2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓-六氟磷酸盐；
15-ATOPA是15-氨基-4，7，10，13，-四氧杂十五烷酸；
12-ATODA是12-氨基-4，7，10-三氧杂十二烷酸；
8-ADOSA是N-(8-氨基-3，6-二氧杂-辛基)-琥珀酰胺酸；
5-AOPSA是N-(5-氨基-3-氧杂-戊基)-琥珀酰胺酸；
NMP是1-甲基2-吡咯烷酮；
FAB-MS是快速原子轰击质谱；和
ES-MS是电喷雾质谱。
用于本文时，术语“脂质结构部分”指任选取代的具有4-24个碳原子、优选12-20个碳原子的直链或支链烷酰基。所述脂质结构部分可以是天然存在的或合成的。优选的脂质结构部分包括，但不限于己酰基-，月桂酰基-，肉豆蔻酰基-，棕榈酰基-，16-溴代十六烷酰基-，2-己基癸酰基-，二十烷酰基-等。
用于本文时，术语“酰基”指经由羰基结合的任选取代的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，并且包括以下基团，如乙酰基，丙酰基，苯甲酰基，3-吡啶基羰基，2-吗啉基羰基，4-羟基丁酰基，4-氟代苯甲酰基，2-萘酰基，2-苯基乙酰基，2-甲氧基乙酰基等。
用于本文时，单独或与其它基团组合的术语“烷基”，是指支链或直链的具有1-20个碳原子，优选1-16个碳原子，更优选1-10个碳原子的单价饱和脂族烃基。
术语“环烷基”指具有3-10个，优选3-6个碳原子的饱和的或不饱和的、单价单碳环-或多碳环基团。此术语进一步示例为诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、冰片基、金刚烷基等的基团。在优选的实施方案中，“环烷基”结构部分可以任选地被1个、2个、3个或4个取代基取代，要理解所述取代基又是未被进一步取代的，除非另外指明。环烷基结构部分的实例包括，但不限于，任选取代的环丙基，任选取代的环丁基，任选取代的环戊基，任选取代的环戊烯基，任选取代的环己基，任选取代的环己烯，任选取代的环庚基等或本文具体例举的那些。
术语“杂环烷基”表示单环或多环烷基环，其中一个、两个或三个碳环原子被杂原子诸如N、O或S替代。杂环烷基的实例包括，但不限于，吗啉基，硫代吗啉基，哌嗪基，哌啶基，吡咯烷基，四氢吡喃基，四氢呋喃基，1，3-二氧杂环己基(dioxanyl)等。杂环烷基可以是未取代的或被取代的，并且当适当时，可以通过它们的碳构架或通过它们的一个或多个杂原子连接，要理解所述取代基又是未被进一步取代的。
单独地或与其它基团组合的术语“低级烷基”，是指支链或直链的具有1-9个碳原子、优选1-6个碳原子的烷基。该术语进一步例举为诸如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，异丁基，叔丁基，正戊基，3-甲基丁基，正己基，2-乙基丁基等的基团。
术语“芳基”指具有至少一个芳环的6-12个碳原子的芳族单碳环或多碳环基团。此类基团的实例包括，但不限于，苯基，萘基，1，2，3，4-四氢化萘，1，2-二氢化萘，茚满基，1H-茚基等。
烷基，低级烷基和芳基可以是被取代的或未取代的。当被取代时，通常有，例如，1至4个取代基存在，要理解所述取代基又是未被进一步取代的，除非另外指明。这些取代基可以任选地与它们连接的烷基、低级烷基或芳基形成环。
术语“杂芳基”指5-12个原子的芳族单环或多环基团，其具有至少一个包含选自N，O，和S的一个、两个或三个环杂原子的芳环，并且余下的环原子是C。杂芳基的一个或两个环碳原子可以被羰基替代。
上述的杂芳基可以独立地用一个，两个或三个取代基取代，要理解所述取代基又是未被进一步取代的，除非另外指明。
式(I)化合物可以具有一个或多个不对称的碳原子并且可以以光学纯的对映体，对映体混合物诸如，例如，外消旋化合物，光学纯的非对映异构体，非对映异构体混合物，非对映异构体外消旋化合物或非对映异构体外消旋化合物的混合物的形式存在。旋光形式可以例如通过外消旋化合物的拆分，通过不对称合成或不对称色谱法(具有手性吸附剂或洗脱剂的色谱法)来获得。本发明涵盖所有这些形式以及所有区域异构形式(regioisomeric forms)。
优选这样的式(I)的神经肽-2受体激动剂，其中所述脂质结构部分是辛酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、16-溴代十六烷酰基、2-己基癸酰基或二十烷酰基。
进一步优选这样的式(I)的神经肽-2受体激动剂，其中所述间隔基结构部分是6-Ahx，Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，15-ATOPA，12-ATODA，8-ADOSA，5-AOPSA，Ser-Ser或Thr-Thr。
还优选这样的式(I)的神经肽-2受体激动剂，其中Z不存在。
进一步优选这样的式(I)的神经肽-2受体激动剂，其中Z’不存在。
此外，式(I)的神经肽-2受体激动剂优选具有式(II)：
Figure BPA00001358693700081
其中：
L是脂质结构部分；
L′是脂质结构部分；
X是(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸(Pqa)；
Y是H，酰基结构部分或焦-Glu；
Z是6-Ahx，Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，15-ATOPA，12-ATODA，
8-ADOSA，5-AOPSA，Ser-Ser，Thr-Thr或不存在；
Z′是6-Ahx，Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，15-ATOPA，12-ATODA，
8-ADOSA，5-AOPSA，Ser-Ser，Thr-Thr或不存在；且
其中结构部分L-Z-和L’-Z’-不同时存在。
进一步优选这样的式(II)的神经肽-2受体激动剂，其中所述脂质结构部分是辛酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、16-溴代十六烷酰基、2-己基癸酰基或二十烷酰基。
还优选这样的式(II)的神经肽-2受体激动剂，其中Z和Z’之一是Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，Ser-Ser或Thr-Thr。
还特别优选这样的根据式(II)的神经肽-2受体激动剂，其中Z不存在。
进一步特别优选这样的式(II)的神经肽-2受体激动剂，其中Z’不存在。
优选式(I)的神经肽-2受体激动剂选自由下列组成的组：
Ac-Ile-Lys(丁酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
Ac-Ile-Lys(辛酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
Ac-Ile-Lys(月桂酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(月桂酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(月桂酰基-β-Ala)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(月桂酰基-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(肉豆蔻酰基-6-Ahx)-Pro-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
Ac-Ile-Lys(棕榈酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
棕榈酰基-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
棕榈酰基-6-Ahx-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
棕榈酰基-6-Ahx-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Glu-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；和
H-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2。
进一步优选式(I)的神经肽-2受体激动剂，其选自由下列组成的组：
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(16-溴代十六烷酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
焦-Glu-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2
H-Ile-Lys(2-己基癸酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-15-ATOPA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-15-ATOPA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-12-ATODA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-12-ATODA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-8-ADOSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-8-ADOSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-5-AOPSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-5-AOPSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Ser-Ser)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-Ser-Ser)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Thr-Thr)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；和
H-Ile-Lys(二十烷酰基-Thr-Thr)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2。
本发明的代表性化合物可以通过用于在氨基酸之间形成肽键的任何已知常规方法容易地合成。这些常规方法包括例如任何溶液相方法，该方法允许氨基酸或其残基(它的羧基和其它反应性基团被保护)的游离α-氨基基团和另一个氨基酸或其残基(它的氨基或其它反应性基团被保护)的游离的伯羧基基团之间的缩合。
这些用于合成本发明新型化合物的常规方法包括例如任何固相肽合成法。在该方法中，新化合物的合成可以如下进行：按照固相法的一般原理，相继地将所需氨基酸残基每次一个地结合到生长的肽链上。这些方法公开在例如Merrifield，R.B.，J.Amer.Chem.Soc.(美国化学协会会志)85，2149-2154(1963)；Barany等，The Peptides，Analysis，Synthesis and Biology(肽，分析，合成和生物学)，卷2，Gross，E.和Meienhofer，J.，Eds.学术出版社(Academic Press)1-284(1980)中。
肽化学合成常见的是用适当的保护基将各种氨基酸结构部分的反应性侧链基团进行保护，这将防止在该位点的化学反应发生，直至保护基被最终去除。通常还常见的是在该实体在羧基上反应时，将氨基酸或其片段上的α氨基基团进行保护，接着选择性去除α氨基保护基，使得可以在该位点进行随后的反应。尽管关于固相合成法公开了特定的保护基，应当理解，在溶液相合成中每个氨基酸可以被常规用于各个氨基酸的保护基保护。
α氨基可以被选自下列的适当的保护基保护：芳族氨基甲酸乙酯类型的保护基，如烯丙氧羰基，苄氧羰基(Z)和取代的苄氧羰基，如对氯苄氧羰基，对硝基苄氧羰基，对溴苄氧羰基，对联苯基-异丙氧羰基，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)和对甲氧基苄氧羰基(Moz)；脂族氨基甲酸乙酯类型的保护基，如叔丁氧羰基(Boc)，二异丙基甲氧羰基和异丙氧羰基。这里，Fmoc最优选用于α氨基保护。
胍基可以通过适当保护基保护，所述保护基诸如硝基，对甲苯磺酰基(Tos)，(Z，)五甲基色烷磺酰基(Pmc)，4-甲氧基-2，3，6，-三甲基苯磺酰基(Mtr)，(Pmc)，(Mtr)和(Pbf)最优选用于精氨酸(Arg)。
ε-氨基基团可以通过适当保护基保护，诸如2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧羰基(2-Br-Z)-和叔-丁氧羰基(Boc)。对于(Lys)，Boc是最优选的。
羟基(OH)可以通过适当的保护基进行保护，诸如苄基(Bzl)，2，6二氯苄基(2，6-二Cl-Bzl)，和叔丁基(t-Bu)，对于(Tyr)，(Ser)和(Thr)，(tBu)是最优选的。
Asn和Gln的β-和γ-酰胺基团可以通过适当的保护基进行保护，所述保护基诸如4-甲基三苯甲基(Mtt)，2，4，6-三甲氧基苄基(Tmob)，4，4-二甲氧基二苯甲基双-(4-甲氧基苯基)-甲基(Dod)和三苯甲基(Trt)。对于(Asn)和(Gln)，Trt是最优选的。
吲哚基团可以通过选自下列的适当的保护基进行保护：甲酰基(For)，2，4，6-三甲苯基-2-磺酰基(Mts)和叔丁氧羰基(Boc)。对于(Trp)，Boc是最优选的。
咪唑基可以通过选自下列的适当的保护基进行保护：苄基(Bzl)，叔丁氧羰基(Boc)，和三苯甲基(Trt)。对于(His)，Trt是最优选的。
氨基酸Pqa的合成通过J.Hutchinson等(J.Med.Chem(医药化学杂志).1996，39，4583-4591)所述进行。Fmoc-Pqa衍生物购自NeoMPS公司(圣地亚哥CA)。
所有的溶剂，异丙醇(iPrOH)，二氯甲烷(CH2Cl2)，二甲基甲酰胺(DMF)和N-甲基吡咯啉酮(NMP)购自费雪(Fisher)或Burdick&Jackson并且在不另外处理的条件下使用。三氟乙酸商购自卤烃(Halocarbon)或Fluka并且在不进一步纯化下使用。
二异丙基碳二亚胺(DIC)和二异丙基乙胺(DIPEA)购自Fluka或阿德里奇(Aldrich)并且在不进一步纯化下使用。羟基苯并三唑(HOBT)、二甲硫(DMS)和1，2-乙二硫醇(EDT)购自希格玛化学公司(Sigma Chemical Co.)并且在不进一步纯化下使用。被保护的氨基酸通常是L构型并且商购自Bachem，或Neosystem。这些试剂的纯度在使用前通过薄层色谱法、NMR和熔点证实。二苯甲基胺树脂(BHA)是获自Bachem或Advanced Chemtech的苯乙烯-1％二乙烯基苯的共聚物(100-200或200-400目)。这些树脂的总氮含量通常为0.3-1.2meq/g。
在一个优选实施方案中，通过Merrifield，(美国化学协会(J.Amer.Chem.Soc.)，85，2149(1963))一般描述的方法，使用固相合成制备肽，但是如先前所述，可以使用本领域已知的其它等同的化学合成。固相合成从肽的C-末端开始，将被保护的α-氨基酸偶联至适当的树脂。该原材料可以通过将α-氨基-保护的氨基酸通过酯键连接到对-苄氧基苄基醇(Wang)树脂上，或通过Fmoc-接头，如对-((R，S)-α-(1-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰氨基)-2，4-二甲氧基苄基)-苯氧基乙酸(Rink接头)之间的酰胺键连接到二苯甲基胺(BHA)树脂来制备。羟甲基树脂的制备是本领域公知的。Fmoc-接头-BHA树脂支持体是可商购的并且通常当被合成的所需肽在C-末端具有未取代的酰胺时使用。
典型地，使用氨基酸或模拟物的Fmoc保护形式，用2-5当量的氨基酸和适当的偶联剂，将氨基酸或模拟物偶联到Fmoc-接头-BHA树脂上。在偶联后，可以洗涤树脂并在真空下干燥。氨基酸在树脂上的负载可以通过对等分试样的Fmoc-氨基酸树脂的氨基酸分析、或通过UV分析测定Fmoc基团来确定。任何未反应的氨基可以通过将树脂与在二氯甲烷中的乙酐和二异丙基乙胺反应来加帽。
在碱性条件下去除α氨基Fmoc保护基。在DMF中的哌啶、哌嗪或吗啉(20-40％v/v)可以用于该目的。优选使用DMF中的40％哌啶。
在去除α氨基保护基之后，将随后保护的氨基酸以所需顺序逐步偶联以获得中间体，保护的肽-树脂。在肽的固相合成中用于氨基酸偶联的活化试剂是本领域公知的。例如，用于该合成的适当试剂是苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)，三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBroP)，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，和二异丙基碳二亚胺(DIC)。这里优选HBTU和DIC。可以使用Barany和Merrifield描述的其它活化剂(在The Peptides(肽)，卷2，J.Meienhofer，ed.，学术出版社(Academic Press)，1979，第1-284页中)。可以将各种试剂如1-羟基苯并三唑(HOBT)，N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)和3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(HODhBT)加入偶联混合物中，以便最优化合成循环。这里优选HOBt。
为了制备N端乙酰基衍生物，通过用在DMF中的20％乙酐和5％的DIEA处理树脂结合肽，进行乙酰化作用。对于其它N端酰化作用，使用用DIC/HOBt原位活化的相应的羧酸进行酰化作用30分钟。
用于典型的合成循环的方案如下：
方案1
Figure BPA00001358693700141
将用于所有洗涤和偶联的溶剂量取至10-20mL/g树脂的体积。贯穿合成的偶联反应通过Kaiser Ninhydrin试验监视，以确定完成的程度(Kaiser等，分析生物化学(Anal.Biochem.)34，595-598(1970))。对于Fmoc-Arg(Pmc)和对于空间位阻的酸与仲胺的偶联，观察到缓慢反应动力学。任何不完全的偶联反应或者与新鲜制备的活化氨基酸重新偶联，或者如上所述通过用乙酐处理肽树脂来加帽。将完全装配的肽-树脂在真空中干燥数小时。
对于大多数化合物，去除封闭基团并从树脂上裂解肽。例如，每克树脂用100μL乙二硫醇，100μL二甲硫，300μL苯甲醚，和9.5mL三氟乙酸，在室温下处理肽树脂180分钟。或备选地，每克树脂用1.0mL三异丙基硅烷和9.5mL三氟乙酸，在室温下处理肽树脂180分钟。将树脂滤去，将滤液在猝冷的乙醚中沉淀。将沉淀物离心并滗析乙醚层。将残余物用两个或三个体积的Et2O洗涤并再离心。将粗产物在真空下干燥。
优选地，通过在反相C-18柱(50x250mm.
Figure BPA00001358693700151
10-15μm)上的高效液相色谱法(HPLC)在Shimadzu LC-8A系统上进行粗制肽的纯化。将肽在最小体积的0.1AcOH/H2O或CH3CH/H2O中注射到柱中。梯度洗脱通常以20％B缓冲液开始，70分钟内20％-80％B，(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)，流速50mL/min。在220/280nm下进行UV检测。分离含有产物的级分并在Shimadzu LC-10AT分析系统上判断它们的纯度，其中使用反相Ace C18柱(4.6x50mol)，流速为2mL/min.，10分钟内梯度(20-80％)(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN))。将判断为高纯度的级分合并和冻干。
最终产品的纯度通过在如上所述的反相柱上的分析性HPLC检查。所有产品的纯度据判断为大约95-99％。所有的终产品还进行快速原子轰击质谱(FAB-MS)或电雾化质谱(ES-MS)。所有产品产生了预期的在可接受范围内的母体M+H离子。
本发明的化合物可以以药用盐的形式提供。优选的盐的实例是与药用有机酸以及聚合酸形成的那些和与无机酸形成的盐，所述有机酸如乙酸、乳酸、马来酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸或双羟萘酸，所述聚合酸如鞣酸或羧甲基纤维素，所述无机酸如氢卤酸(例如，盐酸)，硫酸，或磷酸等。可以使用本领域技术人员已知的任何获得药用盐的方法。
本发明还涉及用作治疗活性物质的如上所述的神经肽-2受体激动剂。
包含如上所述的神经肽-2受体激动剂和治疗惰性载体的药物组合物也是本发明的目的。
此外，本发明涉及如上所述的神经肽-2受体激动剂在制备用于治疗或预防肥胖症、2型糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性或异常脂肪血症的药物中的用途。
本发明还涉及一种治疗或预防肥胖症、2型糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性或异常脂肪血症的方法，所述方法包括施用有效量的如上所述的神经肽-2受体激动剂。
在本发明方法的实施中，将有效量的任何本发明的肽或任何本发明的肽的组合或其药用盐经由任何常规的和本领域已知的可接受的方法，单独或者组合施用。施用可以例如进行一天一次，每三天一次或一周一次。化合物或组合物因此可以通过以下方式施用：口服(例如口腔)，舌下，肠胃外(例如，肌内，静脉内，或皮下)，直肠(例如，通过栓剂或洗剂)，透皮(例如，皮肤电穿孔)或通过吸入(例如通过气溶胶)，和以固体、液体或气体剂型的形式，包括片剂和混悬剂。给药可以以单一单位剂量形式连续治疗或随意以单一剂量治疗进行。治疗组合物还可以是与亲油性盐如双羟萘酸结合的油乳剂或分散体的形式，或者是用于皮下或肌内给药的生物可降解的缓释组合物的形式。
因此，当症状的减轻特别需要或可能危急时，实施本发明的方法。备选地，本发明的方法作为连续或预防性治疗而有效实施。
用于制备由此的组合物的有用药物载体可以是固体，液体或气体；因此，组合物可以采取片剂，丸剂，胶囊，栓剂，粉剂，肠溶包衣或其它保护的制剂(例如结合在离子-交换树脂上或包装在脂质-蛋白囊泡中)，缓释制剂，溶液剂，混悬剂，酏剂，气溶胶等形式。载体可以选自各种油类，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油，大豆油，矿物油，芝麻油等。水、盐水、葡萄糖溶液和二元醇是优选的液体载体，特别是(当与血液等渗时)用于注射液。例如，用于静脉内给药的制剂包括一种或多种活性成分的无菌水溶液，其制备如下：将一种或多种固体活性成分溶解在水中，产生水溶液，并使得溶液无菌。适当的药用赋形剂包括淀粉，纤维素，滑石，葡萄糖，乳糖，滑石，明胶，麦芽，大米，面粉，白垩，硅石，硬脂酸镁，硬脂酸钠，单硬脂酸甘油酯，氯化钠，干脱脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇等。组合物可以加入常规药物添加剂，如防腐剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，用于调节渗透压的盐，缓冲剂等。适当的药用载体和它们的制剂在E.W.Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)中描述。这些组合物在任何情况下将含有有效量的活性化合物以及适当的载体，以便制备用于适当给药于接受者的适当剂型。
本发明的化合物的剂量取决于许多因素，如例如，给药方式，受试者的年龄和体重，和待治疗的受试者的病症，并且最终将由主治医生或兽医所决定。这样的由主治医生或兽医确定的活性化合物的量在本文中和在权利要求中称为“有效量”。例如，用于鼻内给药的剂量典型地在约0.001至约0.1mg/kg体重的范围内。在人中，基于肽含量的优选的皮下剂量是从约0.001mg到约100mg；优选地从约0.1mg到约15mg。
现在将在以下列出的实施例中进一步描述本发明，所述实施例意在仅作为举例说明而不限制本发明的范围。
实施例
实施例1
制备Fmoc-接头-BHA树脂
将二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯基苯交联树脂(10.0g，9.3毫摩尔当量，100-200ASTM目，Advanced ChemTech)溶胀在100mL CH2Cl2中，过滤并连续用100mL的CH2Cl2，6％DIPEA/CH2Cl2(两次)，CH2Cl2(两次)中的每一种洗涤。树脂用在100mL 25％DMF/CH2Cl2中的对-((R，S)-α-(1-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰胺基)-2，4-二甲氧基苄基)-苯氧基乙酸(Fmoc-接头)(7.01g，13.0mmol)、N-羟基苯并三唑(2.16g，16.0mmol)和N，N’-二异丙基-碳二亚胺(2.04mL，13.0mmol)在室温下处理24小时。将树脂过滤并连续用100mL CH2Cl2(两次)，异丙醇(两次)，DMF，和CH2Cl2(三次)中的每一种洗涤。Kaiser茚三酮分析是阴性的。将树脂在真空下干燥，获得16.12g的Fmoc-接头-BHA树脂。将一部分该树脂(3.5mg)进行Fmoc脱保护和定量UV分析，其显示负载为0.56mmol/g。
实施例2
使用芴基甲氧羰基(Fmoc)化学，通过Applied Biosystem 433A合成仪合成肽的方案
对于通过Applied Biosystem 433A合成仪(福斯特城，CA)的0.25mmol规模的肽合成，使用FastMoc 0.25mmol循环，使用树脂取样或非树脂取样，41mL反应容器。将Fmoc-氨基酸树脂与2.1g NMP，2g的在DMF中的0.45M HOBT/HBTU和2M DIEA一起悬浮，然后转移到反应容器中。用“BADEIFD”表示基本的FastMoc偶联循环，其中每个字母表示一个模块(由Applied Biosystem定义)。例如：
B表示用于Fmoc脱保护的模块，使用20％哌啶/NMP和相关洗涤，并且读取30min(或者UV监测或电导率)；A表示用0.45M HBTU/HOBt和2.0M DIEA激活柱体中氨基酸并用N2鼓泡混合的模块；D表示在反应容器中树脂的NMP洗涤的模块；E表示将活化氨基酸转移至用于偶联的反应容器的模块；I表示反应容器的10分钟等待时期的模块，其中断断续续地涡旋；和F表示用于清洗柱体、偶联约10分钟和排干反应容器的模块。偶联典型地通过一次或多次增加模块“I”而延展。例如，通过执行程序“BADEIIADEIFD”进行双偶联。可以提供其它模块，例如用于二氯甲烷洗涤的c和用于用乙酐加帽的C”。单独的模块也是可更改的，例如通过改变各种功能的定时，如转移时间，以便改变被转移的溶剂或试剂的量。以上的循环典型地用于偶联一个氨基酸。然而对于合成四肽，重复循环并且连贯起来。例如，将BADEIIADEIFD用于偶联第一个氨基酸，接着BADEIIADEIFD偶联第二个氨基酸，接着BADEIIADEIFD偶联第三个氨基酸，接着BADEIIADEIFD偶联第四个氨基酸，接着BIDDcc用于最终脱保护和洗涤。
实施例3
H-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-The-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(PYY3-36)的制备
Figure BPA00001358693700191
使用Fmoc化学，在Applied Biosystem 433A合成仪上合成上述肽。使用实施例2所述的模块，对于双偶联对合成仪进行编程。合成在0.25mmol规模上进行，使用来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)。在合成结束时，将树脂转移到振荡器上的反应容器中进行裂解。在室温下使用13.5mL 97％TFA/3％H2O和1.5mL三异丙基硅烷，将肽从树脂上裂解180分钟。将脱保护溶液加入100mL冷ET2O中，用1mL TFA和30mL冷ET2O洗涤以沉淀肽。将肽在2x50mL聚丙烯管中离心。将来自单个管的沉淀合并在单个管中，并用冷ET2O洗涤3次，并在干燥器中在室内真空(house vacuum)下干燥。
将粗制物质在Pursuit C18-柱(250x50mm，10μm粒度)上通过制备性HPLC纯化，并在90分钟内用2-70％B(缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)的线性梯度洗脱，流速60mL/min，并在220/280nm检测。收集级分并通过分析性HPLC检查。将含有纯产物的级分合并和冻干，从而获得151mg(15％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(“calcd”)C180H279N53O54 4049.55，实测值4050.20。
实施例4
Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700201
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化粗制肽，获得68mg(12％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C106H156N34O22 2257.21实测值2257.19。
实施例5
Ac-Ile-Lys(丁酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700202
Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2，200mg溶解在5.0mL DMF和35uL NMM中，并加入250uL丁酸酐。将该溶液搅拌～16hr(过夜)。加入3.0mL 7N NH3/MeOH，并继续搅拌1/2hr。然后将产物在5.0mL Et2O中沉淀、离心、洗涤并真空干燥。粗制肽依照实施例3中的步骤纯化，得到18mg(9％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C110H162N34O23 2327.26实测值2327.26。
实施例6
Ac-Ile-Lys(辛酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700211
Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2，200mg溶解在5.0mL DMF和N-羟基苯并三唑(425mg，3.15mmol)中，DIEA(500uL，3.0mmol)和辛酰氯(2.8mL，2.75mmol)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至肽树脂。该溶液搅拌16hr(过夜)。加入3.0mL在MeOH中的7N NH3，并继续搅拌1/2hr。然后产物在5.0mL Et2O中沉淀、离心、洗涤并真空干燥。粗制肽依照实施例3中的步骤纯化，得到10mg(5％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C114H170N34O23 2383.32实测值2383.32。
实施例7
Ac-Ile-Lys(月桂酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700212
Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2，200mg溶解在5.0mL DMF和N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)中，DIEA(500uL，3.0mmol)和月桂酰氯(2.8mL，2.75mmol)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至肽树脂。该溶液搅拌16hr(过夜)。加入3.0mL在MeOH中的7N NH3，并继续搅拌1/2hr。然后产物在5.0mL Et2O中沉淀、离心、洗涤并真空干燥。将粗制物质在Pursuit C18-柱(50x250mm，10μm粒度)上通过制备性HPLC纯化，并在90分钟内用20-90％B(缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)的线性梯度洗脱，流速60mL/min，并在220/280nm检测。收集级分并通过分析性HPLC检查。将含有纯产物的级分合并和冻干，从而获得57mg(26％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C118H178N34O23 2439.38实测值2439.40。
实施例8
Boc-Ile-Lys(TFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂的制备。
将二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯基苯交联树脂(50.0g，55.0毫摩尔当量，100-200ASTM目，Advanced ChemTech目录号SB5003)溶胀在400mL CH2Cl2中，过滤并连续用100mL的CH2Cl2，6％DIPEA/CH2Cl2(两次)，CH2Cl2(两次)中的每一种洗涤。树脂用在400mL DMF中的对-[(R，S)-α-(1-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰胺基)-2，4-二甲氧基苄基]-苯氧基乙酸(Fmoc-接头)(37.1g，69.0mmol)、N-羟基苯并三唑(9.356g，69.0mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)在室温下处理24小时。
将树脂过滤并连续用400mL CH2Cl2(两次)，异丙醇(两次)，DMF，和CH2Cl2(三次)中的每一种洗涤。Kaiser茚三酮分析是阴性的。加入在400mLDMF中的Fmoc-Tyr(But)-OH(41.40g.，90mmol，N-羟基苯并三唑(12.2g.，90.0mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)，并使其在室温下反应24小时。反应没有结束，因此，加入25.0mL DIEA，使反应继续进行另外的
Figure BPA00001358693700221
。偶联仍没有结束，因此用25％Ac2O，5％DIEA/DMF进行酰化3/4hr，从而获得茚三酮阴性(完全反应)。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-NMeArg(Mtr)-OH(43.0g，69.0mmol)，N-羟基苯并三唑(9.356g，69.0mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(110.0mL，630mmol)，并使其反应24小时，从而使反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Gln(Trt)-OH(55.0g.，90.0mmol)，N-羟基苯并三唑(12.2g，90.0mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)，并使反应继续进行24小时。通过氯(chlorinal)试验确定反应结束。
将该树脂洗涤并干燥，对于不同的类似物保留25.0g(18.4％)。剩余的110.0g树脂(44.6mmol)继续往下进行，并加入400mL DMF中的1.55eqv.Fmoc-Arg(Pbf)-OH(45.0g，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，330mmol)，并使反应在室温下继续进行24小时，此时，通过茚三酮试验判断反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Thr(But)-OH(27.40g，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑.(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55mL，300mmol)，并使反应在室温下继续进行24小时，此时，通过茚三酮试验确定反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400DMF中的Fmoc-Val-OH(23.6g.73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)，并使其在室温下反应6小时，此时反应结束。
洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Trp-OH(29.50g.，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)。6小时后反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Asn(Trt)-OH(41.4g，，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55mL，300mmol)，并使其在室温下反应18小时，此时，反应结束。
洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Leu-OH(33.4g，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)，并使其反应6小时。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Tyr(But)-OH(41.40g，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)。18小时后反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-His(Trt)-OH(55.5g，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)。20小时后反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Arg(Pbf)-OH(58.4g，73.5mmol)，N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)。20小时后反应结束。
洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Pqa-OH(21.4g，73.5mmol，)N-羟基苯并三唑(5.7g，42.05mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)。16小时后反应结束。洗涤和去除Fmoc后，加入400mL DMF中的Fmoc-Lys(Alloc)-OH(18.5g.，73.5mmol)和N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)。通过氯试验确定，20小时后反应结束。洗涤和干燥后，保留一部分用于与Fmoc-Ile偶联以形成N-乙酰化类似物。剩余的肽树脂用400mL DMF中的Boc-Ile-OH(25.0g，73.5mmol)N-羟基苯并三唑(9.95g，73.5mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(55.0mL，300mmol)在室温下处理20小时。反应结束。
从Lys的ε-氨基去除Aloc基团：氩气鼓泡通过1.2g PdCl2(三苯基膦)2，5.0mL吗啉和10.0mL乙酸的混合物，然后加入25.0mL Bu3SnH。持续用Ar鼓泡直至黄色溶液变成淡红褐色。然后将反应混合物摇动1/2hr，并用DMF洗涤3次。第二次重复上述步骤(此次混合物从暗褐色转变为几乎黑色)并继续摇动1/2-3/4hr。该树脂用DMF洗涤2次，用5％DIEA/DMF洗涤2次，并用DMF/CH2Cl2洗涤3次。通过用加入至CH2Cl2的2.35mL TFA洗涤，赖氨酸的游离ε-胺转变为TFA盐。然后该树脂用CH2Cl2洗涤两次，用MeOH洗涤4次，并在真空下干燥至恒重。
实施例9
H-Ile-Lys(月桂酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700251
Boc-Ile-Lys(TFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和月桂酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到30mg(7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C122H187N35O23 2510.45实测值2510.44。
实施例10
H-Ile-Lys(月桂酰基-β-Ala)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700261
Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-βAla(325.0mg；1.0mmmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和月桂酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到20mg(4％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C119H181N35O23 2468.41，实测值2468.6.
实施例11
H-Ile-Lys(月桂酰基-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700262
Boc-Ile-Lys(ε-TFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-Glu(But)(325.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0mmol)和月桂酰氯(2.8mL，2.75mmol)在15mLCH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到30mg(7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C121H183N35O25 2526.41，实测值2526.40.
实施例12
H-He-Lys(肉豆蔻酰基-6Ahx)-Pro-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700271
Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将肉豆蔻酸(230mg，1mmol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联并搅拌过夜。用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mLEt2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到66mg(13％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C124H191N35O23 2538.49，实测值2538.47.
实施例13
Ac-He-Lys(棕榈酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700281
将Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2，200mg溶解在5.0mL DMF和N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)中，将DIEA(500uL，3.0mmol)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75mmol)在15mLCH2Cl2中反应5min并加入至肽树脂。将该溶液搅拌～16hr(过夜)。加入3.0mL 7N NH3/MeOH，并继续搅拌1/2hr。然后产物在5.0mL Et2O中沉淀、离心、洗涤并真空干燥。粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到42mg(19％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C122H186N34O232495.44，实测值2495.43.
实施例14
H-Ile-Lys(棕榈酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700291
将Boc-Ile-Lys(TFA ε盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0mmol)和棕榈酰氯(2.8mL，2.8mmol)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到46mg(10％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C120H184N34O22 2453.43，实测值2453.41.
实施例15
棕榈酰基-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700301
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成。合成根据实施例4中所述的一般步骤进行，直至获得N-末端被脱保护的15-mer，并用CH2Cl2中的棕榈酰氯(288uL，1.0mmol)和DIEA(200uL，1.15mmol)手工地酰化1/2hr。将该树脂裂解，且产物按照实施例7中的步骤纯化，获得55mg(9％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e C120H184N34O22计算值(calcd)2453.43，实测值2453.41.
实施例16
棕榈酰基-6-Ahx-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700302
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成。合成根据实施例4中所述的一般步骤进行，直至获得脱保护的15-mer并通过加入Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)，并使反应进行过夜而手工地偶联。去除Fmoc后，结合树脂的肽用CH2Cl2中的棕榈酰氯(288uL 1.0mmol)，DIEA(200uL，1.15mmol)酰化1/2hr。将该树脂裂解，且粗制肽按照实施例7中的步骤纯化，获得45mg(7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e C126H195N35O23计算值(calcd)2566.52，实测值2566.51.
实施例17
棕榈酰基-6-Ahx-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700311
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成。合成根据实施例4中所述的一般步骤进行，直至获得脱保护的15-mer，并用Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)手工地偶联过夜。去除Fmoc后，结合树脂的肽用CH2Cl2中的棕榈酰氯(288uL 1.0mmol)和DIEA(200uL，1.15mmol)酰化1/2hr。将该树脂裂解，且粗制肽按照实施例7中的步骤纯化，获得77mg(12％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C125H193N35O23 2552.50实测值2552.49.
实施例18
H-Ile-Lys(棕榈酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
将Boc-Ile-Lys(εTFA salt)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mLCH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到14mg(3％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C126H195N35O23 2566.51 实测值2566.50.
实施例19
H-Ile-Lys(棕榈酰基-6Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln--Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700321
Boc-Ile-Lys(alloc)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg-Tyr(tBu)-Knorr树脂(如实施例14中所制备)用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mLCH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化，得到52mg(15％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C125H193N35O23 2552.50实测值2552.49.
实施例20
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700331
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-β-Ala(312.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)，和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到20mg(4.4％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C123H189N35O23 2524.476，实测值2524.47.
实施例21
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700332
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-Glu(But)(312.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到14mg(3％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C125H191N35O25 2582.48，实测值2582.48.
实施例22
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700341
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-β-Ala(312.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，加入Fmoc-Glu(But)(312.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)，并使反应进行过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到29mg(6％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C128H196N36O26 2653.51，实测值2653.50.
实施例23
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Glu-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700351
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-Glu(But)426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，用Fmoc-Glu(But)(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到25mg(5％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C130H198N36O282711.52，实测值2711.51.
实施例24
H-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700361
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-γ-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mLCH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到28mg(6％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C125H191N35O25 2582.48，实测值2582.47.
实施例25
H-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700371
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-Glu-α-OBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，加入Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)，并使反应进行过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到40mg(8％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C130H198N36O28 2711.52，实测值2711.50.
实施例26
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700381
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc--Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，加入Fmoc-β-Ala(312.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)，并使反应进行过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到34mg(7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C128H196N36O26 2653.51，实测值2653.50.
实施例27
H-Ile-Lys(16-溴代十六烷酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700391
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，加入Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)，并使反应进行过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(150mg，1.15mmol)，N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)和16-溴代十六烷酸(336mg，1.0mmol)偶联过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到61mg(11％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C130H197BrN36O28 2789.43，实测值2789.41.
实施例28
焦-Glu-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700401
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护和中和后，与Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到58mg(8.3％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C135H203N37O30 2822.55，实测值2822.55.
实施例29
H-Ile-Lys(2-十六烷酰基-6Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700411
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(150mg，1.15mmol)，N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)和2-己基癸酸(286mg，1.0mmol)偶联过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到94mg(18％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(“calcd)C126H195N35O232566.52，实测值2566.51.
实施例30
H-Ile-Lys(二十烷酰基-6Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700412
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-6-氨基己酸(355.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将二十烷酸(315mg，1mmol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联并搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到75mg(14％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C130H203N35O23 2622.58，实测值2622.57.
实施例31
H-Ile-Lys(二十烷酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700421
将Boc-Ile-Lys(εTFA盐)-Pqa-Arg(Pbf)-His(Trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asn(Trt)-Trp-Val-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-NMe-Arg(Mtr)-Tyr(tBu)-Knorr树脂1.0g用5％DIEA/DMF洗涤并与Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，加入Fmoc-Glu-αOBut(426.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)，并使反应进行过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将二十烷酸(315mg，1mol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)加入至结合树脂的肽，并将该混合物搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mLEt2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到66mg(12％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C134H206N36O282767.58，实测值2767.58.
实施例32
H-Ile-Lys(棕榈酰基-15-ATOPA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700431
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸(488mg；1.0mm；)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到95mg(14％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C131H205N35O272700.57，实测值2700.56.
实施例33
H-Ile-Lys(二十烷酰基-15-ATOPA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700441
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸(488mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将二十烷酸(315mg，1mmol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联并搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到140mg(20％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C135H213N35O272756.64，实测值2756.62.
实施例34
H-Ile-Lys(棕榈酰基-12-ATODA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700451
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-12-氨基-4，7，10-三氧杂十二烷酸(488.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到134mg(20％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C129H201N35O262656.55，实测值2656.54.
实施例35
H-Ile-Lys(二十烷酰基-12-ATODA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700461
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-12-氨基-4，7，10-三氧杂十二烷酸(488.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将二十烷酸(315mg，1mmol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联并搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA 17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到128mg(19％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C133H209N35O262712.61，实测值2712.59.
实施例36
H-Ile-Lys(棕榈酰基-8-ADOSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700462
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-(8-氨基-3，6-二氧杂-辛基)琥珀酸(488.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到114mg(17％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C130H202N36O262683.56实测值2683.55.
实施例37
H-Ile-Lys(二十烷酰基-8-ADOSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700471
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在钯脱保护并中和后，与Fmoc-N-(8-氨基-3，6-二氧杂-辛基)琥珀酰胺酸(488.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将二十烷酸(315mg，1mmol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联并搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA 17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到110mg(16％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C134H210N36O26 2739.62，实测值2739.60.
实施例38
H-Ile-Lys(棕榈酰基-5-AOPSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700481
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与N-Fmoc-(5-氨基-3-氧杂-戊基)琥珀酰胺酸(427.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到158mg(24％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C128H198N36O252639.53，实测值2639.50.
实施例39
H-Ile-Lys(二十烷酰基-5-AOPSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700491
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-(5-氨基-3-氧杂-戊基)琥珀酰胺酸(427.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，加入二十烷酸(315mg，1mol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)并将该混合物搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到128mg(19％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C132H206N36O252695.60，实测值2695.59.
实施例40
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Ser-Ser)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-Ser(But)(384.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，结合树脂的肽再次与Fmoc-Ser(But)(384.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到98mg(15％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C126H194N36O262627.50，实测值2627.49.
实施例41
H-Ile-Lys(二十烷酰基-Ser-Ser)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700511
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-Ser(But)(384.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将树脂再次与Fmoc-Ser(But)(384.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。将二十烷酸(315mg，1mol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)与结合树脂的肽偶联过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA 17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到107mg(16％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C130H202N36O26 2683.56，实测值2683.55.
实施例42
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Thr-Thr)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700521
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-Thr(But)(398.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将树脂再次与Fmoc-Thr(But)(398.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将N-羟基苯并三唑(425mg，3.150mmol)，DIEA(500uL，3.0m)和棕榈酰氯(2.8mL，2.75m)在15mL CH2Cl2中反应5min并加入至该肽树脂。将反应混合物搅拌过夜并用DMF洗涤2次，用CH2Cl2洗涤3次，然后用TFA，17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到73mg(11％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e计算值(calcd)C128H198N36O262655.53，实测值2655.51.
实施例43
H-Ile-Lys(二十烷酰基-Thr-Thr)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure BPA00001358693700531
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成，其胺末端Boc-Ile和Lys(alloc)处在用于合适的侧链修饰的位置处。在如实施例8中所述进行钯催化脱保护并中和后，与Fmoc-Thr(But)(398.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。去除Fmoc并用DMF洗涤后，将树脂再次与Fmoc-Thr(But)(398.0mg；1.0mmol)，N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)偶联过夜。加入二十烷酸(315mg，1mmol)；N-羟基苯并三唑(150mg，1.11mmol)和N，N’-二异丙基碳二亚胺(1.50mL，2.0mmol)并将该混合物搅拌过夜。在用DMF洗涤2次和用CH2Cl2洗涤3次后，用TFA 17mL，400uL iPrSiH和800uL丙硫醇裂解6hr。将产物在100.0mL Et2O中沉淀，离心，洗涤并真空干燥。将粗制肽依照实施例7中的步骤纯化得到69mg(10％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(calcd)C132H206N36O262711.59，实测值2711.57
实施例44
cAMP激动剂测定
在本实施例中，使用下列材料：384-孔平板；Tropix cAMP-Screen试剂盒；cAMP ELISA系统(Applied Biosystems，目录号T1505；CS 20000)；毛喉素(Calbiochem目录号344270)；细胞：HEK293/hNPY2R；生长培养基：Dulbecco’s改进eagle培养基(D-MEM，Gibco)；10％胎牛血清(FBS，Gibco)，热-灭活；1％青霉素/链霉素(Pen 10000单位/mL：Strep 10000mg/mL，Gibco)；500mg/mL G418(遗传霉素，Gibco目录号11811-031)；和铺平板培养基：DMEM/F12w/o酚红(Gibco)；10％FBS(Gibco，目录号10082-147)，热-灭活；1％青霉素/链霉素(Gibco，目录号15140-122)；500mg/mL G418(遗传霉素，Gibco，目录号11811-031)。
在第一天，丢弃培养基，将单层细胞用10mL PBS/摇瓶(T225)洗涤。在用PBS滗析后，使用5mL VERSENE(Gibco，目录号1504006)以移动细胞(5min@37C)。将摇瓶轻微敲打并合并细胞悬浮液。每个摇瓶用10mL铺平板培养基漂洗，并在1000rpm下离心5分钟。将悬浮液合并和计数。对于HEK293/hNPY2R，将悬浮液重悬浮在铺平板培养基中，密度为2.0X105细胞/mL。使用Multi-drop分配器将50微升细胞(HEK293/hNPY2R-10,000细胞/孔)转移到384-孔平板中。将平板在37℃温育过夜。第二天，检查细胞的75-85％汇合。使得培养基和试剂达到室温。在制备稀释液之前，使得在二甲亚砜(DMSO，Sigma，目录号D2650)中的刺激化合物的贮液升温至32℃，5-10min。在DMEM/F12中用0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX，Calbiochem，目录号410957)和0.5mg/mL BSA制备稀释液。刺激培养基中的最终DMSO浓度是1.1％，毛喉素浓度为5μM。在纸巾上用细胞平板的轻微倒转使细胞培养基流出。每孔放置50μL刺激培养基(每个浓度四个平行测定)。将平板在室温下温育30分钟，在显微镜下检查细胞的毒性。在处理30分钟后，丢弃刺激培养基，加入50ml/孔测定裂解缓冲液(在Tropix试剂盒中提供)。将平板在37℃下温育45分钟。将20μL裂解物从刺激平板转移到来自Tropix试剂盒的预包被的抗体平板(384-孔)中。加入10μL的AP缀合物和20μL抗-cAMP抗体。将平板在室温下在振荡同时温育1小时。然后将平板用洗涤缓冲液洗涤5次，每次洗涤每孔70μL。将平板抽干。加入30μL/孔的CSPD/Saphire-II RTU底物/增强物溶液，并在RT(振荡)温育45分钟。测量在光度计(VICTOR-V)中1秒/孔的信号。
实施例45
钙流(CaFlux)测定
将Hek-293细胞用G蛋白嵌合体Gaqi9稳定转染，将潮霉素-B抗性基因进一步用人NPY2受体和G418抗生素选择转染。在潮霉素-B和G418两者中选择以后，测定单个克隆它们对PYY的反应。将转染的细胞在补充有10％胎牛血清、50μg/mL潮霉素-B、2mM谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和250μg/mL G418的DMEM培养基中培养。将细胞用胰蛋白酶-EDTA收获并使用ViaCount试剂计数。将细胞悬浮体积用完全生长培养基调节至4.8x105细胞/mL。将25μL等分试样分配到384孔聚-D赖氨酸包被的黑色/透明微量培养板(Falcon)中，将微量培养板在37℃CO2培养箱中放置过夜。通过将一小管的内容物(Express Kit)溶解在含有20mM HEPES和5mM的丙磺舒的1000mL Hank’s平衡盐溶液(HBSS)中来制备加样缓冲液(钙-3测定试剂盒，分子装置(Molecular Devices))。将25μL稀释染料的等分试样分配到细胞平板中，然后将平板在37℃下温育1小时。在温育期间，在HBSS(20mM HEPES)/0.05％BSA/1％DMSO中以3.5X所需浓度制备测试化合物，并转移到384孔平板中在FLIPR上使用。在温育后，将细胞和化合物平板两者放至FLIPR并通过FLIPR将20μL稀释的化合物转移到细胞培养板。在测定中，每1.5秒从细胞培养板的全部384个孔中自动获取荧光读数。获得5个读数以建立稳定的基线，然后将20μL样品迅速(30μL/秒)和同时加入细胞培养板的每个孔。在样品加入之前、期间和之后连续监视荧光总共100秒的消逝时间。测定在加入后每个孔中的响应(峰荧光的提高)。将在配体刺激之前来自每孔的初始荧光读数用作来自那个孔的数据的零基线值。响应表示为阳性对照的最大响应％。
本发明的化合物显示体外选择性神经肽-2受体活性，如在cAMP测定和钙流测定(FLIPR)中所证明。本发明的代表性化合物的体外结果、IC50和EC50的概述在下面的表1中说明：
表1
Figure BPA00001358693700551
Figure BPA00001358693700561
Figure BPA00001358693700571
Figure BPA00001358693700581
Figure BPA00001358693700591
根据式(I)的化合物在上面测定之一中具有0.001nM-10nM的活性(Y2R EC50)。最优选的式(I)化合物在上面测定之一中具有0.001nM-5nM，优选0.001nM-1nM的活性(Y2R EC50)。
实施例A
可以以常规方式制备含有下列组分的薄膜包衣片剂：
Figure BPA00001358693700601
筛分活性成分，与微晶纤维素混和，将混合物与聚乙烯吡咯烷酮的水溶液制粒。将颗粒与淀粉羟乙酸钠和硬脂酸镁混和，压制分别获得120或350mg的核心。将核心用上述薄膜包衣的水溶液/悬浮液包覆。
实施例B
可以以常规方式制备含有下列成分的胶囊：
Figure BPA00001358693700602
筛分各组分并混合和填充到2#胶囊中。
实施例C
注射液可以具有下列组成：
式(I)的化合物        3.0mg
聚乙二醇400          150.0mg
乙酸                 适量加至pH 5.0
注射液用水           加至1.0ml
将活性成分溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)混合物中。通过乙酸将pH调节至5.0。通过加入残余量的水将体积调节至1.0ml。将溶液过滤，使用适当超额装入小瓶中并灭菌。
实施例D
可以以常规方式制备含有下列成分的软明胶胶囊：
胶囊内容物
Figure BPA00001358693700611
明胶胶囊
Figure BPA00001358693700612
将活性成分溶解在其它成分的温热熔融体中，将混合物填充到适当尺寸的软明胶胶囊中。按照通常方法处理填充的软明胶胶囊。
实施例E
可以以常规方式制备含有下列成分的小药囊：
Figure BPA00001358693700613
将活性成分与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混和，与聚乙烯吡咯烷酮在水中的混合物一起制粒。
将颗粒与硬脂酸镁和调味添加剂混和并装入小药囊。
要理解的是本发明不限于上述本发明的具体实施方案，因为可以作出该具体实施方案的多种变型并且它们仍然包括在附带的权利要求的范围内。

Claims (17)

1.式(I)的神经肽-2受体激动剂，
Figure FPA00001358693600011
其中：
L是脂质结构部分；
L′是脂质结构部分；
X是(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸；
Y是H、酰基结构部分或焦-Glu；
Z是间隔基结构部分或不存在；
Z′是间隔基结构部分或不存在；
R1是Ile，Ala，(D)Ile或N-甲基Ile；
R2是Lys，Ala，(D)Lys，N-甲基Lys，Nle或(Lys-Gly)；
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg或Phe；
R4是His，Ala，(D)His或N-甲基His；
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr或Trp；
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu；
R7是Asn，Ala或(D)Asn；
R8是Leu或Trp；
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val；
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr；
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg；
R12是Gln或Ala；
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg；且
R14是Tyr，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Phe或Trp；且
其中结构部分L-Z-和L’-Z’-不同时存在；
或其药用盐。
2.根据权利要求1所述的神经肽-2受体激动剂，其中所述脂质结构部分是辛酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、16-溴代十六烷酰基、2-己基癸酰基或二十烷酰基。
3.根据权利要求1或2所述的神经肽-2受体激动剂，其中所述间隔基结构部分是6-Ahx，Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，15-ATOPA，12-ATODA，8-ADOSA，5-AOPSA，Ser-Ser或Thr-Thr。
4.根据权利要求1或2所述的神经肽-2受体激动剂，其中Z不存在。
5.根据权利要求1或2所述的神经肽-2受体激动剂，其中Z’不存在。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的神经肽-2受体激动剂，其具有式(II)：
Figure FPA00001358693600021
其中：
L是脂质结构部分；
L′是脂质结构部分；
X是(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸；
Y是H，酰基结构部分或焦-Glu；
Z是6-Ahx，Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，15-ATOPA，12-ATODA，
8-ADOSA，5-AOPSA，Ser-Ser，Thr-Thr或不存在；
Z′是6-Ahx，Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，15-ATOPA，12-ATODA，
8-ADOSA，5-AOPSA，Ser-Ser，Thr-Thr或不存在；且
其中结构部分L-Z-和L’-Z’-不同时存在。
7.根据权利要求6所述的神经肽-2受体激动剂，其中所述脂质结构部分是辛酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、16-溴代十六烷酰基、2-己基癸酰基或二十烷酰基。
8.根据权利要求6或7所述的神经肽-2受体激动剂，其中Z和Z’之一是Ala，Glu，Ala-Glu，Glu-Glu，Ser-Ser或Thr-Thr。
9.根据权利要求6或7所述的神经肽-2受体激动剂，其中Z不存在。
10.根据权利要求6或7所述的神经肽-2受体激动剂，其中Z’不存在。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的神经肽-2受体激动剂，其选自由下列组成的组：
Ac-Ile-Lys(丁酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
Ac-Ile-Lys(辛酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
Ac-Ile-Lys(月桂酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(月桂酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(月桂酰基-β-Ala)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(月桂酰基-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(肉豆蔻酰基-6-Ahx)-Pro-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
Ac-Ile-Lys(棕榈酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
棕榈酰基-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
棕榈酰基-6-Ahx-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
棕榈酰基-6-Ahx-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Glu-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；和
H-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的神经肽-2受体激动剂，其选自由下列组成的组：
H-Ile-Lys(棕榈酰基-β-Ala-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(16-溴代十六烷酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
焦-Glu-Ile-Lys(棕榈酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2
H-Ile-Lys(2-己基癸酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-6-Ahx)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-γ-Glu-γ-Glu-)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-15-ATOPA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-15-ATOPA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-12-ATODA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-12-ATODA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-8-ADOSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-8-ADOSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-5-AOPSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-5-AOPSA)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Ser-Ser)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(二十烷酰基-Ser-Ser)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；
H-Ile-Lys(棕榈酰基-Thr-Thr)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2；和
H-Ile-Lys(二十烷酰基-Thr-Thr)-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的神经肽-2受体激动剂，其用作治疗活性物质。
14.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-12中任一项所述的神经肽-2受体激动剂和治疗惰性载体。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的神经肽-2受体激动剂在制备用于治疗或预防肥胖症、2型糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性或异常脂肪血症的药物中的用途。
16.一种治疗或预防肥胖症、2型糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性或异常脂肪血症的方法，所述方法包括施用有效量的根据权利要求1-12中任一项所定义的神经肽-2受体激动剂。
17.如上文所述的发明。
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