KR20070083538A

KR20070083538A - Ｖｅｇｆ 억제

Info

Publication number: KR20070083538A
Application number: KR1020077005203A
Authority: KR
Inventors: 다비드 엘. 모리스; 모하메드 호세인 퓨어고라미
Original assignee: 뉴사우스 이노베이션즈 피티와이 리미티드
Priority date: 2004-08-31
Filing date: 2005-08-31
Publication date: 2007-08-24
Also published as: EP1784181A1; EP1784181B1; WO2006024092A1; PT1784181E; ES2425750T3; CA2576827A1; CN101035530A; HK1103651A1; JP5022220B2; US20090105317A1; JP2008511549A; PL1784181T3; CN101035530B; DK1784181T3; US8912225B2; EP1784181A4

Abstract

본 발명은 유효량의 화학식 I의 화합물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하여, 환자에서 VEGF의 생성 또는 분비를 억제하기 위한 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 비정상적 수준의 VEGF의 생성 또는 분비와 연관된 증상을 치료 또는 예방하기 위한 방법을 제공한다.

벤즈이미다졸 카바메이트, 알벤다졸, VEGF, 망막증, 복수, 흉수

Description

ＶＥＧＦ 억제{VEGF INHIBITION}

일반적으로, 본 발명은 비정상적 수준의 VEGF 생성 및/또는 분비와 연관된 증상의 치료를 위한 방법에 관한 것이다.

혈관내피세포성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF; 혈관투과인자(vascular permeability factor, VPF)로도 공지됨)은 고도로 보존된 강력한 다기능성 사이토킨(cytokine)이다. VEGF의 생성 또는 분비의 이상 수준은 다수의 질병 상태와 연관되어 있다. 예를 들어, 고농도의 생물학적 활성 VEGF가 암 환자의 흉수(pleural fluids) 및 복수(ascites)에서 검출되었다 (Zebrowski et al., 1999a, b).

복부강에서의 유체 축적물인 복수는 종양 및 기타 질환, 예를 들어 만성 간 질환을 포함한 다수의 증상으로부터 발생할 수 있다. 간경화가 대부분의 복수에 책임이 있으며, 일반적으로 예후가 좋지 않다.

악성 복수의 축적은 복막 암종증을 앓는 환자에서 이환 및 사망에 대한 중요 원인이다. 악성 복수의 형성 원인은 결장암, 위암, 췌장암, 자궁내막암 및 난소암 을 포함한다 (Smith and Jayson, 2003). 예를 들어, 난소암의 악성 진행은 주로 복강에 제한되며, 종종 복수 형성을 전개시킨다 (Ozols et al., 1980). 종양 크기와 복수의 축적 모두 생존과는 역으로 연관된다 (Hasumi et al., 2002). 진행 난소암을 앓는 환자에 대한 현행 치료법은 세포축소 수술 및 전신적 화학요법과 연관되며, 파클리탁셀과 시스플라틴의 배합물이 단계 III 및 IV에 대한 초기 화학요법으로 고려되고 있다 (Burbridge et al., 1999). 그러나, 진단되었을 때는 이미 환자의 2/3가 진행성 질환을 갖고 있으며, 좋지 않은 예후가 복수의 빠른 축적 및 고도로 침습적이고 다형성적인 세포 표현형과 연관된다. 복수 및 복수-연관 증상의 치료를 위한 효과적인 방법이 필요하다.

복수는 복막 및 종양 미세혈관 과투과성과 관련되며, 수개의 연구가 혈관 투과성의 증가를 통한 복수의 형성에서 VEGF에 대한 역할을 연루시켰다. 보다 일반적으로, VEGF는 새로운 혈관 형성의 유도를 포함하여 혈관 내피세포에 다수의 중요한 영향을 발휘한다. VEGF는 강력한 혈관 투과성-증진 활성을 지니며, VEGF 생성 또는 분비의 비정상적 수준은 미세혈관의 과투과성으로 이끈다. 현재, VEGF는 종양의 성장에 필요한 주요 인자로 인식되며, 당뇨병, 류마티스 관절염을 포함한 관절염, 건선, 자궁내막증, 뇌부종, 아테롬성 동맥경화증, 허혈성 심장병 및 예를 들어 나이와 연관된 황반 변성과 같은 망막증과 같은 많은 질환 상태와 관련된다.

VEGF의 종양 분비는 복수 축적에 필수적이다. 종양 세포가 통상 VEGF의 주요 요인을 나타내나, 종양-연관된 기질도 VEGF 생성에 중요한 부위이다. 예를 들어, VEGF 억제제를 사용한 종양 세포에 의한 VEGF 생성 또는 분비의 차단이, 동물 연구에서 복수 형성을 억제시키는 것으로 나타났다 (Zebrowski et al., 1999a, b; Xu et al., 2000). 또한, VEGF 생성 및 분비가 고형 종양에만 제한되지 않으며, VEGF 및 VEGF 수용체가 다양한 백혈병 및 기타 혈액학상 악성종양에 의해 발현된다는 증거가 증가하고 있다.

따라서, VEGF는 치료적 중재를 위한 관심을 끄는 표적물이며, 단일클론 항체, VEGF 수용체 길항제, 티로신 키나제 길항제 및 가용성 VEGF 수용체 (VEGF-trap)를 포함한, VEGF 활성을 차단하기 위한 수개의 전략이 고려되었다. 그러나, 여전히 VEGF 생성 및/또는 분비를 억제 및 VEGF 생성 및/또는 분비와 연관된 증상의 치료하기 위한 효과적인 방법이 필요하다.

본 발명은, 벤즈이미다졸 카바메이트 알벤다졸이 시험관 내에서 사람 난소암 세포에 의해 분비되는 VEGF 수준 및 생체 내에서 VEGF 수준에 강력한 효과를 나타내며, 비정상적 VEGF 수준과 연관된 다수의 증상에 중요한 억제 효과를 나타낸다는 발견에 근거하여 완성되었다.

본 발명은 단지 예시로써 하기 도면을 참조하여 설명될 것이다.

도 1은 복막 OVCAR-3 종양을 갖는 누드 마우스에서 복수 생성에 대한 복강 내 알벤다졸 처리 (150 mg/kg x 3/주, 4주 동안)의 영향을 나타낸다. 대조군 및 알벤다졸 (ABZ) 처리된 마우스에서 복수액 용적 (ml). 각각의 값은 6 내지 8개 측 정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸다.

도 2는 종양을 갖는 누드 마우스로부터 흡출된 복막 복수액에 존재하는 OVCAR-3 세포에 대한 알벤다졸의 영향을 나타낸다. 각각의 값은 6 내지 8개 측정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸다.

도 3은 누드 마우스로부터의 복막 종양의 총중량에 대한 알벤다졸의 영향을 나타낸다. 각각의 값은 6 내지 8개 측정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸다.

도 4는 누드 마우스로부터의 OVCAR-3 종양에서 CA-125 수준에 대한 알벤다졸의 영향을 나타낸다. 각각의 값은 6 내지 8개 측정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸다.

도 5는 복막 OVCAR-3 종양을 갖는 누드 마우스의 복막액 중의 VEGF 수준을 나타낸다. 각각의 값은 6 내지 8개 측정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸다.

도 6은 OVCAR-3 종양을 갖는 누드 마우스에서 혈장 VEGF에 대한 알벤다졸의 영향을 나타낸다. 각각의 값은 6 내지 8개 측정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸다.

도 7은 복막 OVCAR-3 종양을 갖는 누드 마우스의 복수액 또는 복막 세척물로부터 흡출된 세포로부터 추출된 다양한 VEGF mRNA 이소형태를 나타내는 RT-PCR을 나타낸다. A-C는 대조군 동물로부터의 세포이고, D-F는 복강내로 알벤다졸 처리된 (150 mg/kg x 3/주, 4주 동안) 동물로부터 추출된 세포이다.

도 8은 시험관 내 시험으로 SKOV-3 세포에서 VEGF 생성에 대한 6시간 알벤다졸 처리의 영향을 나타낸다. 각각의 값은 4개 측정치의 평균 ± 표준편차를 나타낸 다. A. 다양한 농도 (μM)의 알벤다졸의 존재 하에서의 VEGF 수준 (pg/10⁵개 세포). B. 6 ng/ml MMP-9로 공동-처리 후 다양한 농도 (μM)의 알벤다졸의 존재 하에서의 VEGF 수준 (pg/10⁵개 세포).

도 9는 DMSO, PBS 또는 다양한 농도의 알벤다졸 (0.1 μg, 1 μg 또는 10 μg, 2 μl 중)로 처리 후 정상 산소 및 과산소 (75% O₂) 조건 하의 마우스에서 망막 신혈관형성 (혈관 카운트)을 나타낸다.

도 10은 DMSO 중의 알벤다졸 (A) 또는 DMSO 단독 (B)으로 주사한 후 마우스 망막의 해마톡실린 및 에오신 염색 단면 (50 μm)에 대한 광학 현미경 사진이다.

발명의 요지

본 발명의 제1 목적에 따르면, 환자에게 VEGF 생성 또는 분비를 억제하는 방법이 제공되며, 이 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다.

하나의 양태에서, 상기 R₁은 5 또는 6 위치에서 치환된다.

상기 화합물은 화학식 II의 벤즈이미다졸 카바메이트일 수 있다:

상기 식에서,

R₂₁는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다.

상기 화합물은 화학식 III의 화합물일 수 있다:

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이다.

상기 화합물은 알벤다졸, 알벤다졸 설폭사이드, 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.

일 실시예에서, 상기 화합물은 알벤다졸 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체이다.

VEGF는 종양 세포에 의해 생성 또는 분비될 수 있다. 종양 세포는 난소, 직결장, 간, 췌장, 위, 자궁내막, 신장 또는 기타 원발성 또는 전이 종양 세포일 수 있다.

VEGF 생성 또는 분비는 환자의 체강내 유체, 예를 들어 복수 또는 흉수와 연관될 수 있다.

VEGF 생성 또는 분비는 망막증 신혈관형성, 예를 들어 증식성 망막증, 당뇨성 망막병증(proliferative retinopathy) 또는 황반 변성과 연관될 수 있다.

본 발명의 제2 목적에 따르면, 환자에서 VEGF 생성 또는 분비의 비정상적 수준과 연관된 증상을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되는데, 이 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

상기 증상은 증가된 혈관 투과성과 연관될 수 있다. 상기 증상은 복수, 경화증, 흉수, 뇌부종, 폐부종, 허혈성 심장 질환, 황반 변성, 증식성 망막병증, 당뇨성 망막증, 조숙 망막증, 건선, 자궁내막증 및 관절염, 예를 들어 류마티스 관절염으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.

상기 화합물은 치료되는 증상의 특성에 따라 전신적으로나 국부적으로 투여될 수 있다. 투여는 강내, 방광내, 근육내, 동맥내, 정맥내, 피하, 국소 또는 경구 투여될 수 있다. 강내 투여는 복강내 또는 흉막내일 수 있다.

본 발명의 제3 목적에 따르면, 환자에서 복수 또는 복수-연관된 증상을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되는데, 이 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

상기 복수는 악성 복수일 수 있다. 상기 복수-연관된 증상은 경화증일 수 있다.

상기 화합물은 전신적으로나 국부적으로 투여될 수 있다. 상기 화합물은 복강내 투여될 수 있다.

본 발명의 제4 목적에 따르면, 환자에서 망막증을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되는데, 이 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알 킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다.

상기 망막증은 증식성 망막증, 당뇨성 망막증, 조숙 망막증 및 황반 변성 중에서 선택될 수 있다.

본 발명의 상기한 목적 및 실시예에 따라, 상기 화합물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 조성물의 형태로 투여될 수 있다.

본 발명의 제5 목적에 따르면, 세포에 의한 VEGF 생성 또는 분비를 억제하는데 사용하기 위한 조성물이 제공되는데, 상기 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 화학식 I의 화합물을 포함한다.

본 발명의 제6 목적에 따르면, 복수 또는 복수와 연관된 증상을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 조성물이 제공되는데, 상기 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 화학식 I의 화합물을 포함한다.

본 발명의 제7 목적에 따르면, 망막증을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 조성물이 제공되는데, 상기 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 화학식 I의 화합물을 포함한다.

본 발명의 제8 목적에 따르면, VEGF의 생성 또는 분비와 연관된 증상을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 조성물이 제공되는데, 상기 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 화학식 I의 화합물을 포함한다.

본 발명의 제9 목적에 따르면, 환자를 위해 벤즈이미다졸 카바메이트 치료 요법을 고안하는 방법이 제공되는데, 이는 하나 이상의 후보 벤즈이미다졸 카바메이트의 존재 및 부재 하에 환자의 혈청 VEGF 농도를 모니터링하는 단계, 및 혈청 VEGF 농도의 감소를 달성하도록 벤즈이미다졸 카바메이트의 정체 (identity) 및/또는 용량을 조절하는 단계를 포함한다.

본 발명의 제10 목적에 따르면, 제9 목적에 따라 고안된 벤즈이미다졸 카바메이트 치료 요법을 이용하여 치료가 필요한 환자를 치료하는 방법이 제공된다.

또한, 화학식 I, II 및 III의 화합물의 입체 이성질체 및 기하 이성질체를 포함하는 이성질체 및 이들의 토우토머 형태가 상기 목적 및 실시예들 내에서 고려된다.

정의

본원에서, 용어 "포함하는"은 "원칙적으로 함유하나 반드시 단독적으로 함유하는 것은 아닌" 것을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는"의 변형, 예를 들어 "포함한다" 는 상응하게 변화된 의미를 갖는다.

VEGF 수준과 관련하여 본원에 사용된 용어 "억제하는"은 VEGF 생성 또는 분비를 방해하거나 감소시키거나 달리는 개선하는 것을 의미한다. 예를 들어, 치료 되는 증상의 특성을 포함한, 주변 상황에 따라, 억제가 VEGF 생성 또는 분비를 완전히 차단해야 하는 것이 필수적이지 않을 수 있으며, 목적하는 효과가 달성될 수 있기에 충분한 정도로 VEGF 생성을 감소시킬 수 있다.

본원에 사용된 용어 "치료하는" 및 "치료"는 증상 또는 증후군을 치료하거나, 증상 또는 질환의 확립을 방지하거나, 달리는 증상 또는 증후군의 진행 또는 기타 바람직하지 않은 증후군을 어떠한 방식으로든 예방, 지연 또는 역전시키는, 임의의 및 모든 이용을 언급한다.

본원에 사용된 용어 "복수-연관된 증상"은 적어도 부분적으로 복부 강에 과다한 유체의 축적과 연관된 증상을 언급한다. 이 증상은 이러한 축적으로 특징지어지거나, 직접적으로나 간접적으로 이러한 축적의 결과로서 발생하거나, 그 자체가 복부 강에 과다한 축적을 이끌 수 있다. 하나의 예시적인 복수-연관된 증상이 경화증이다.

본원에 사용된 용어 "유효량"은 이의 의미 내에 목적하는 효과를 제공할 제제 또는 화합물의 무독성이지만 충분한 양을 포함한다. 정확한 양은 치료되는 인종, 환자의 나이 및 일반적 상태, 치료되는 증상의 중증도, 투여되는 특정 제제 및 투여 방식 등과 같은 요인에 따라 환자마다 상이할 것이다. 따라서, 정확한 "유효량"을 특정할 수 없다. 그러나, 지정된 경우에 대해, 적합한 "유효량"은 단지 통상의 실험을 이용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "알킬"은 이의 의미 내에 1가의 포화된, 직쇄 및 측쇄 탄화수소 라디칼을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "알케닐"은 이의 의미 내에 하나 이상의 이중 결합을 갖는 1가의 직쇄 및 측쇄 탄화수소 라디칼을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "아릴"은 이의 의미 내에 1가의 단일, 다핵, 복합 (conjugatede) 및 융합된 (fused) 방향족 탄화수소 라디칼을 포함한다.

발명의 상세한 설명

벤즈이미다졸 카바메이트 화합물은, 사람을 포함한 포유동물에서 기생충의 구제를 위해 널리 사용되는 광범위한 스펙트럼의 구충약이다. 벤즈이미다졸 카바메이트의 주요 표적물은 튜블린이며, 이 화합물은 튜블린 중합화를 억제하고 미세소관을 불안정화하게 한다. 하나의 이러한 벤즈이미다졸 카바메이트가 알벤다졸 (메틸 5-프로필티오-1H-벤즈이미다졸-2-일 카바메이트)이다. 기타 벤즈이미다졸 카바메이트는 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸을 포함한다.

이전에, 본 발명자는 알벤다졸이 시험관 내에서 일정 범위의 암세포주 및 동물 모델 및 임상 연구에서 암에 대해 항증식 효과를 갖는다는 것을 밝혀내었다 (WO 02/076454, 이의 기술이 본원에 참조로 삽입됨). 본원에서 기술되는 바와 같이, 본 발명에 이르러, 본 발명자는 알벤다졸이 시험관 내에서 사람 난소암세포에 의해 분비되는 VEGF 수준, 복수 생성, 망막증 신혈관형성 및 생체 내에서 VEGF 수준에 강력한 효과를 갖는다는 것을 입증하였다.

따라서, 본 발명의 일 목적은 환자에서 VEGF 생성 또는 분비를 억제하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 동족체, 대사산물, 또는 유도체를 환자에게 투여함을 포함한다:

[화학식 I]

I

상기 식에서,

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/ 또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다.

통상적으로, 상기 화합물은 화학식 II 또는 화학식 III의 벤즈이미다졸 카바메이트이다:

[화학식 II]

II

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으 로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

[화학식 III]

III

상기 식에서,

당업자는 상술된 화합물의 입체이성체 및 기하 이성체를 포함한 이성체가 존재할 수 있으며, 이러한 이성체의 사용이 본 발명의 범위에 속한다는 것을 쉽게 알 것이다. 또한, 상기 화합물의 토우토머 형태의 사용이 또한 고려된다. 예를 들어, 치환된 벤즈이미다졸 그룹은 R₁ 치환체가 4 내지 7번 위치에 있는 것을 포함하여 다수의 토우토머 형태로 존재할 수 있다.

알벤다졸 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체 (예: 알벤다졸 설폭사이드 또는 알벤다졸 설폰)이 본 발명의 방법 및 조성물에 특히 유용한 하나의 벤즈이미다졸 카바메이트이다. 그러나, 당업자는 다른 벤즈이미다졸 카바메이트도 사용될 수 있다는 것을 쉽게 알 것이다. 예를 들어, 기타 적합한 벤즈이미다졸 카바메이트는, 이로 제한됨이 없이, 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸을 포함한다.

증상

상술된 화합물은 치료를 받는 환자의 세포로부터 VEGF의 세포성 생성을 억제하고/하거나 VEGF의 분비를 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명은, 상술된 바와 같은 화합물을 사용하여, 증가된 혈관 투과성과 연관된 증상을 포함하여, 비정상적인, 통상적으로 증가된 수준의 VEGF 생성 또는 분비와 연관된 증상의 치료 또는 예방을 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명의 방법 빛 조성물이 적용가능한 증상은, 이로 제한됨이 없이, 복수, 경화증 및 기타 복수-연관된 증상, 흉수, 뇌부종, 폐부종, 허혈성 심장 질환, 예를 들어 나이-연관된 황반 변성과 같은 황반 변 성, 증식성 망막증, 당뇨성 망막증, 조숙 망막증, 자궁내막증 및 예를 들어 류마티스 관절염과 같은 관절염을 포함한다.

본원에 기술되는 바와 같은 발명자는, 알벤다졸의 복강내 투여가 혈청 VEGF 수준을 신속히 감소시킨다는 것을 밝혀내었다. 따라서, 혈청 VEGF 수준의 모니터링은 이러한 치료가 필요한 환자에 대한 적합한 벤즈이미다졸 카바메이트 치료의 고안 및 수행을 가능하게 할 것이다. 따라서, 본 발명의 양태는 하나 이상의 후보 벤즈이미다졸 카바메이트의 존재 및 부재 하에 환자의 혈청 VEGF 농도를 모니터링하는 단계, 종양 또는 혈청 VEGF 농도의 감소를 달성하도록 벤즈이미다졸 카바메이트의 정체(identity) 및/또는 용량을 조절하는 단계를 포함하여, 환자를 위한 벤즈이미다졸 카바메이트 치료 요법을 고안하는 방법을 제공한다.

조성물 및 투여경로

본 발명의 실시예들은 환자에서 VEGF의 생성 또는 분비를 억제하거나 VEGF의 생성 또는 분비의 비정상적 수준과 연관된 증상의 치료 또는 예방을 위한 조성물을 고려한다.

본 발명에 따르면 화합물 및 조성물은 임의의 적합한 경로, 전신적, 국소적 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 임의의 지정된 환경에서 사용되는 투여의 특정 경로는, 치료되는 증상의 특성, 증상의 중증도 및 정도, 전달되는 특정 화합물의 필요 용량 및 화합물의 잠재적 부작용을 포함한 다수의 요인에 따를 것이다.

예를 들어, 목적하는 화합물의 적당한 농도가 치료되는 신체 내 부위에 직접 적으로 전달되는 환경에서, 투여는 전신보다는 국부적일 수 있다. 국부 투여는 필요한 부위에 바람직한 화합물의 매우 높은 국부 농도를 전달할 능력을 제공하며, 이로써 화합물에 대한 신체의 다른 기관의 노출을 피하면서 목적하는 치료적 또는 예방적 효과를 달성하여 잠정적으로 부작용을 감소시키기에 적합하다.

예를 들어, 본 발명에 따른 실시예들에 따른 투여는, 강내, 방광내, 근육내, 동맥내, 정맥내, 안내, 피하, 국소 또는 경구를 포함한, 임의의 표준 경로에 의해 달성될 수 있다. 강내 투여는 복강내 또는 흉막강내일 수 있다. 예를 들어, 복수의 치료에서, 목적하는 화합물은 복강내 투여될 수 있으며, 흉수의 치료를 위해서는 흉막강내 투여될 수 있다.

일반적으로, 적합한 조성물은 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있으며, 제약학적으로 허용되는 희석제, 보조제 및/또는 부형제를 포함할 수 있다. 희석제, 보조제 및 부형제는 조성물의 다른 성분들과 어울리고 이의 수령자에게 유해하지 않는다는 면에서 "허용적" 이어야 한다.

제약학적으로 허용되는 희석제는, 예를 들어 탈염수 또는 증류수; 염수 용액; 예를 들어 낙화생유(peanut oil), 홍화유, 올리브유, 면실유, 옥수수유, 참깨유, 아라키스유 (arachis oil) 또는 코코넛유와 같은 식물성 기재유; 예를 들어 메틸 폴리실록산, 페닐 폴리실록산 및 메틸페닐 폴리실록산과 같은 폴리실록산을 포함하는 실리콘유; 휘발성 실리콘; 예를 들어 액체 파라핀, 연성 파라핀 또는 스쿠알란과 같은 광유; 예를 들어 메틸 셀룰로즈, 에틸 셀룰로즈, 카복시메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 또는 히드록시프로필메틸셀룰로즈와 같은 셀룰로즈 유 도체; 예를 들어 에탄올 또는 이소프로판올과 같은 저급 알칸올; 저급 아르알칸올; 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜 또는 글리세린과 같은 저급 폴리알킬렌 글리콜 또는 저급 알킬렌 글리콜; 예를 들어 이소프로필 팔미테이트, 이소프로필 미리스테이트 또는 에틸 올레에이트와 같은 지방산 에스테르; 폴리비닐피롤리돈; 아가(agar); 카라게닌(carrageenan); 트라가칸트 검 또는 아라비아 검, 및 바셀린을 포함한다. 전형적으로, 담체는 조성물의 1 % 내지 99.9 %를 형성할 것이다.

주사 용액 또는 현탁물로 투여하기 위한, 무독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 담체는, 링거 용액, 중쇄 트리글리세라이드(MCT), 등장염수, 포스페이트 완충 염수, 에탄올 및 1,2-프로필 글리콜을 포함할 수 있다.

경구 사용을 위한 적합한 담체, 희석제, 부형제 및 보조제는 낙화생유, 액체 파라핀, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 나트륨 알기네이트, 아라비아 검, 트라가칸트 검, 덱스트로즈, 슈크로즈, 소르비톨, 만니톨, 젤라틴 및 레시틴을 포함한다. 또한, 이들 경구 제형물은 적합한 풍미제 및 착색제를 포함할 수 있다. 캡슐제 형태로 사용되는 경우, 캡슐은 붕해를 지연하는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 화합물로 코팅될 수 있다.

보조제는 통상적으로 연화제, 유화제, 농조화제, 방부제, 살균제 및 완충제를 포함한다.

경구 투여를 위한 고체 형태는 사람 및 척추동물의 제약학적 실시에 적합한 결합제, 감미제, 붕해제, 희석제, 풍미제, 코팅제, 방부제, 윤활제 및/또는 지연제 를 포함할 수 있다. 적합한 결합제는, 아라비아 검, 젤라틴, 옥수수 전분, 트라가칸트 검, 나트륨 알기네이트, 카복시메틸셀룰로즈 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 적합한 감미제는 슈크로즈, 락토즈, 글루코즈, 아스파탐 또는 사카린을 포함한다. 적합한 붕해제는 옥수수 전분, 메틸셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 구아 검, 잔탄 검, 벤토나이트, 알긴산 또는 아가를 포함한다. 적합한 희석제는 락토즈, 소르비톨, 만니톨, 덱스트로즈, 카올린, 셀룰로즈, 탄산칼슘, 규산칼슘 또는 인산이칼슘을 포함한다. 적합한 풍미제는 박하유, 동록유, 체리, 오렌지 또는 나무딸기(raspberry) 풍미제를 포함한다. 적합한 코팅제는 아크릴산 및/또는 메타크릴산의 중합체 또는 공중합체 및/또는 이들의 에스테르, 왁스, 지방산 알콜, 제인, 쉘락 또는 글루텐을 포함한다. 적합한 방부제는 나트륨 벤조에이트, 비타민 E, 알파-토코페롤, 아스코르브산, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤 또는 중아황산나트륨을 포함한다. 적합한 윤활제는 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산, 나트륨 올레에이트, 염화나트륨 또는 활석을 포함한다. 적합한 지연제는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 포함한다.

경구 투여를 위한 액체 형태는 상술한 제제 이외에 액체 담체를 포함할 수 있다. 적합한 액체 담체는 물, 오일, 예를 들어 올리브유, 낙화생유, 참깨유, 해바라기유, 홍화유, 아라키스유, 코코넛유, 액체 파라핀, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 글리세롤, 지방산 알콜, 트리글리세라이드 또는 이의 혼합물을 포함한다.

경구 투여를 위한 현탁물은 추가로 분산제 및/또는 현탁제를 포함할 수 있 다. 적합한 현탁제는 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 히드록시프로필메틸셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 나트륨 알기네이트 또는 아세틸 알콜을 포함한다. 적합한 분산제는 레시틴, 예를 들어 스테아르산과 같은 지방산의 폴리옥시에틸렌 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노- 또는 디-올레에이트, -스테아레이트 또는 -라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노- 또는 디-올레에이트, -스테아레이트 또는 -라우레이트 등을 포함한다.

경구 투여를 위한 에멀젼은 하나 이상의 유화제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 유화제는 상기 예시된 바와 같은 분산제 또는 예를 들어 구아 검, 아라비아 검 또는 트라가칸트 검과 같은 천연 검을 포함한다.

비경구 투여용 조성물을 제조하는 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 본원에 참조로 삽입됨]에 상세히 기술되어 있다.

상기 조성물은 임의의 적합한 계면활성제, 예를 들어 음이온성, 양이온성 또는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 소르비탄 에스테르 또는 이의 폴리옥시에틸렌 유도체를 포함할 수 있다. 현탁화제, 예를 들어 천연 검, 셀룰로즈 유도체 또는 무기 물질, 예를 들어 실리카 (silicaceous silicas), 및 기타 성분, 예를 들어 라놀린도 포함될 수 있다.

상기 조성물은 또한 리포좀의 형태로 투여될 수 있다. 리포좀은 일반적으로 인지질 또는 기타 지질 물질로부터 유도되며, 수성 매질 중에 분산되는 모노- 또는 멀티-라멜라의 수화된 액정에 의해 형성된다. 리포좀을 형성할 수 있는, 무독성의 생리학적으로 허용되고 대사가능한 지질이 사용될 수 있다. 리포좀 형태의 조성물은 안정화제, 방부제, 부형제 및 이와 동종의 것을 포함할 수 있다. 바람직한 지질은 인지질 및 포스파티딜 콜린 (레시틴)이며, 천연 및 합성 유래의 것이다. 리포좀을 형성하는 방법은 당 기술 분야에 공지되어 있으며, 이와 관련하여 문헌 [Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976) , p.33 이하 참조, 이의 내용물이 본원에 참조로 삽입된다]을 참조한다.

본원에 기술되는 화합물 및 조성물은 치료학적으로나 예방학적으로 투여될 수 있다. 치료학적 적용에서, 화합물 및 조성물은 증상 및 증후군 및/또는 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 억제하기에 충분한 양으로 증상을 이미 앓고 있는 환자에게 투여된다. 화합물 또는 조성물은 환자를 효과적으로 치료하기에 충분한 활성 화합물의 양을 제공해야 한다.

특정 환자를 위한 투여 화합물의 유효 용량 수준은, 의약 분야에서 널리 공지된 관련 인자들과 함께, 치료되는 증상의 유형 및 증상의 단계; 사용되는 화합물의 활성; 사용되는 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적 건강, 성별 및 식이요법; 투여 시간; 투여 경로; 화합물 제거 속도; 치료 기간; 배합 사용되거나 치료와 동시에 진행되는 약물을 포함한 다양한 인자에 따를 것이다.

당업자는, 통상의 실험에 의해, 적용 증상을 치료하는데 필요할 유효한 무독한 용량을 결정할 수 있을 것이다. 이는 매우 종종 경우마다 다르게 결정될 것이다.

일반적으로, 유효 용량은 약 0.0001 mg 내지 약 1000 mg/체중 kg/24시간; 통상적으로 약 0.001mg 내지 약 750mg/체중 kg/24시간; 약 0.01 mg 내지 약 500 mg/체중 kg/24시간; 약 0.1 mg 내지 약 500 mg/체중 kg/24시간; 약 0.1 mg 내지 약 250 mg/체중 kg/24시간; 또는 약 1.0 mg 내지 약 250 mg/체중 kg/24시간의 범위일 것이다. 보다 통상적으로, 유효 용량 범위는 약 10 mg 내지 약 200 mg/체중 kg/24시간의 범위일 수 있다.

달리, 유효 용량은 약 5000 mg/m² 이하 일 수 있다. 일반적으로, 유효 용량은 약 10 내지 약 5000 mg/m², 통상적으로 약 10 내지 약 2500 mg/m², 약 25 내지 약 2000 mg/m², 약 50 내지 약 1500 mg/m², 약 50 내지 약 1000 mg/m², 또는 약 75 내지 약 600 mg/m²의 범위일 수 있다.

또한, 당업자에게 분명한 바와 같이, 개별적 용량에 대한 최적량 및 간격은, 치료되는 증상의 특성 및 정도, 투여 형태, 경로 및 부위, 및 치료되는 특정 개인별 특성에 따라 결정될 것이다. 또한, 이러한 최적 조건은 통상의 기술로 결정될 수 있다.

또한, 당업자에게 분명한 바와 같이, 치료의 최적 과정, 예를 들어 제한된 수의 일수 동안 1일 당 조성물의 투여 횟수는, 치료 결정 시험에 대한 통상적 과정을 이용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다.

본 발명은 하기의 특정 실시예를 참고로 하여 보다 상세히 기술될 것이며, 이러한 실시예는 어떠한 경우에서든 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되지 않아야 한다.

실시예 1 - OVCAR -3 복막 종양을 갖는 누드 마우스의 알벤다졸 처리

세포주 NIH:OVCAR-3 (ATCC 수탁 번호 HTB 161)의 세포는 암컷 무흉선 누드 마우스에 복강내에서 성장하는 능력을 갖는다. 복강내 주입 후, 동물은 임상적 난소암의 전이 확산과 유사한 전이 확산을 전개시킨다. 질환의 진전은, 다량의 복수 생성, 광범위한 복강내 종양 및 폐 종양의 전개로 특징지어진다. 악성 복수 세포는 난소암 연관된 항원 CA-125를 발현한다. 마우스 모델은 사람 난소암과 일치하는 조직병리학적 및 발생학적 특징, 사람 질환과 유사한 재현 패턴의 전이, 치료 후 반응에 대한 적합한 마커 및 사람 난소암에 대한 것과 유사한 약물 민감성 프로필을 나타낸다 (Hamilton et al., 1984).

시험관 내에서 배양된 OVCAR-3 세포 (13 x 10⁶)를 누드 마우스에 피하 주입하였다. 8주 후, 종양을 절개하고, 저민 후, PBS로 3회 세척하였다. 배양된 세포를 5 x 10⁶개 세포/ml의 세포 밀도를 수득하기 위해 20 % 말 혈청, 페니실린 (100 u/ml), 스트렙토마이신 (2 mg/ml) 및 인슐린 3 u/ml, EGF 100 ng/ml, 아스파라긴 (0.l mg/ml) 및 DEAE 덱스트란 0.5 mg/ml로 보충된 RPMI 중의 0.3 % 박토 (Bacto) 아가에 현탁시켰다. 세포를 도말하기 직전, 2-머캅토에탄올을 50 μM의 농도로 가 하였다. 생성된 혼합물의 일부 (1 ml)를, 0.5 % 박터 아가 중의 광유-프라이밍된 BALB/c 마우스의 유착 비장 세포로 조건화된 배지 0.2 ml를 배합한 영양세포층에 가하였다. 배양물을 5 % CO₂ 하에 37 ℃에서 인큐베이션하였다. 5일 간격으로, EGF (10 ng/ml)를 갖는 성장 배지 0.8 ml로 아가로즈 표면에 층을 이루었다. 3주 후, 세포의 콜로니를 다량 수거하고, 75 cm² 플라스크에 플레이팅하였다. 이어서, 이들 세포를 마우스에 피하 주입하였다. 이들 피하 종양으로부터 수거된 50 x 10⁶개 종양 세포를 배지 1 ml에 현탁시키고, 각각의 캐리어 누드 마우스에 복강내 주입하였다. 복수액을 수집하고, 멸균 염수로 세척한 후, 5분 동안 4 ℃에서 300 g로 원심분리하였다.

복수액으로부터 수집되고 배지 (RPMI 1640) 1.0 ml에 현탁되는 1O X 10⁶개 생존 종양 세포를 각각의 시험 동물에 복강내 주입하였다. 모든 실험에 대해, 6 내지 8주령의 무흉선 암컷 Balb/c 누드 마우스 (Animal Resources Centre, Perth, Western no Australia)를 시험 동물로 사용하였다. 이들 동물은 뉴싸우쓰 웨일즈 대학 (University of New South Wales)의 생물 자원 센터 (Biological Resources Centre)에서 병원체가 없는 고립된 조건에서 수용하였으며, 오토클레이브된 펠렛 및 물을 임으로 공급하였다. 동물들의 일반적 건강 상태를 매일 점검하였다. 이용된 모든 프로토콜은 뉴싸우쓰 웨일즈 대학의 동물 윤리 위원회 (Animal Ethics Committee)에서 승인되었다.

상술된 바와 같이 복강내 접종된 마우스를 알벤다졸 처리된 그룹 또는 대조군 그룹으로 무작위로 나누었다. 약물 처리를 개시하였다 (4주 동안 1주당 3회). 0.5 % 카복시메틸셀룰로즈에 현탁된 알벤다졸을 모든 처리되는 동물에 150 mg/kg의 용량으로 투여하였다. 경구 투여를 위해 15 mg/ml의 현탁물을 제조하고 (0.1 ml/10 g 체중), 복강내 처리를 위해서는 3 mg/ml의 현탁물을 사용하였다 (3 mg/1 ml/20 g 마우스).

안락사 직전에, 동물을 펜토바비톤으로 마취하고, 혈액 샘플을 심장 천자를 통해 수집하였다. 이어서, 동물을 치사량의 마취 약물로 안락사시켰다. 복수액을 수집하기 위해, 생리학적 염수 2 ml를 복강내로 주입하고, 복강의 내용물을 반죽 (kneading)에 의해 혼합하였다. 이어서, 복막액을 회수하고, 이의 용적을 기록하며 (도 1), 존재하는 생존 종양 세포를 계수하였다 (도 2). 혈장 및 세포-비함유 복수액을 후속 분석을 위해 -80 ℃에서 저장하였다.

복강에 존재하는 종양을 절개하고, 중량을 잰 후 (도 3), 후속 분석을 위해 저장하였다. 또한, 동물의 폐, 간, 비장, 위 및 췌장에서의 전이 존재에 대해 점검하였다 (자료 미도시). 종양 마커 (CA-125) 수준 (도 4)는 세인트 조오지 병원 생화학 실험실 (St George Hospital Biochemistry laboratories)에서 분석하였다. 복수액 (도 5) 및 혈장 (도 6) 중 VEGF의 농도를 ELISA 키트 (Quantikine R&D systems)를 사용하여 측정하였다.

수득된 결과는 OVCAR-3 종양을 갖는 마우스에서 복강내 알벤다졸 처리가 복수의 용적 및 VEGF 수준의 극적인 감소를 이끈다는 것을 입증한다.

VEGF 이소형태

(상술한 바와 같이) 종양을 갖는 누드 마우스의 복수액으로부터 분리된 OVCAR-3 세포에 대해 RT-PCR에 의해 다양한 VEGF 이소형태 (VEGF₁₂₁, VEGF₁₆₅, VEGF₁₈₉, VEGF₂₀₆)에 대한 mRNA의 발현을 검사하였다. 세포를 원심분리 (5분, 1500 rpm)를 통해 분리시키고, 총 RNA를 제작자의 프로토콜에 따라 하이 퓨어 RNA 분리 키트 (High Pure RNA Isolation Kit; 로쉐 디애그토스틱사제(Roche Diagnostics Corporation))를 사용하여 나머지 세포 펠렛으로부터 분리하였다. RNA 농도를 쿼츠 스펙트로포토미터 셀 (Quartz Spectrophotometer Cell; BioRad)를 사용하여 260 nm의 파장에서 분광광도계로 측정하였다.

VEGF의 증폭을 위한 프라이머는 문헌 [Pellizzaro et. al., 2002]에 제시된 서열을 기초로 하여 제작되었다: VEGF 센스: 5'-CAC ATA GGA GAG ATG AGC TTC-3' (서열 1); VEGF 안티센스: 5'-CCG CCT CGG CTT GTC ACA T-3' (서열 2). 이들 프라이머는 하기 생성물을 증폭한다: VEGF₁₂₁에 대해 100 bp, VEGF₁₆₅에 대해 230 bp, VEGF₁₈₉에 대해 300 bp 및 VEGF₂₀₆에 대해 320 bp. 하기 프라이머를 사용하면서 내부 대조군 (202 bp)로서 β-액틴 유전자를 사용하였다: β-액틴 센스: 5'-CTT CCT GGG CAT GGA GTC CT-3' (서열 3); β-액틴 안티센스: 5'-GGA GCA ATG ATC TTG ATC TT-3' (서열 4) (Marchini et. al., l996).

250 ng/50 ng의 총 RNA를 사용하여 VEGF/β-액틴을 플래티늄®태크(Platinum ®Taq)를 갖는 슈퍼스크립트^TM원스텝(SuperScript^TMOne Step) RT-PCR (Invitrogen)로 증폭시켰다. RNA를 DEPC 처리된 물을 사용하여 하나의 RT-PCR 반응에 대해 11 μl의 최종 농도로 희석하였다. 12.5 μl 2x반응 혼합물 (최종 농도 lx), 1 μl 프라이머 혼합물 (40 μ1 DEPC-물, 5 μl 100 μM 센스 프라이머(Sense Primer), 5 μl 100 μM 안티센스 프라이머(Antisense Primer); 최종 프라이머-농도 0.2 μM) 및 0.5 μl RT/플래티늄®태크(Platinum®Taq)를 RNA 희석물 (하나의 반응에 대한 총 용적 = 25 μl)에 가하였다. 효소 (RNAse & Taq)를 불활성화시키기 위해, 모든 피펫-단계를 얼음 상에서 수행하였다. 30분 동안 54 ℃에서 초기 cDNA 합성 및 변성을 위해 94 ℃에서 5분 동안 처리한 후, Palm Cycler (Corbett Research)에서 증폭을 수행하였다. 이를 27회 반복 (1분 동안 94 ℃에서 변성, 1분 동안 60 ℃에서 프라이머 어닐링, 45초 동안 72 ℃에서 프라이머 연장)하고, 10분 동안 72 ℃에서 최종 연장하였다.

RT-PCR 생성물은 에티듐 브로마이드를 포함하는 1xTAE 완충액 중에서 2 % 아가로즈 겔 상에서의 전기영동 (25분, 120 V)으로 가시화하였다. 생성물의 크기를 정량화하기 위해서, 100 bp DNA 래더 (Invitrogen)를 샘플과 함께 수행하였다. 그 결과가 도 7에 나타나 있으며, 도 7은 복강내 알벤다졸 투여로 VEGF mRNA의 발현이 상당히 감소된다는 것을 입증한다.

실시예 2 - 시험관 내 VEGF 분비에 대한 알벤다졸의 효과

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC 수탁 번호 HTB 77)으로부터 수득된, SKOV-3 사람 낭생암종 세포주를 10 % FCS로 보충된, 1.5 mM L 글루타민, 100 단위/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 갖는 맥코이 (McCoy) 5a 배지에서 성장시켰다. 세포를 합류되게 성장시키고, 0.25 mg/ml 트립신/EDTA으로 트립신 처리하여 수거한 후, 플레이팅하기 전에 배지에 현탁시켰다. 이어서, 이들을 플라스틱 6-웰 코닝 (Corning) 배양 평판에 시딩하였다 (2 x 10⁵). 배양물을 95 % 0₂/5 % CO₂의 가습 대기의 37 ℃ 인큐베이터에 두었다. 24시간 후, 배지를 제거하였다. 서브합류 배양물을 포스페이트 완충액으로 3회 세척한 후 1 % 에탄올 중에 용해된 다양한 농도의 알벤다졸 (0, 0.1, 0.25 및 1.0 μM)을 포함하는 배양 배지를 사용하여 6시간 동안 인큐베이션하였다. 처리기간 완료 후, 웰(well)로부터의 배지를 개별적으로 수집하고, 가용성 VEGF₁₂₁ 및 VEGF₁₆₅ 이소형태를 검출하는 ELISA (효소-결합된 면역흡착 검정) (Quantikine R& D systems, Minneapolis, USA)을 이용하여 VEGF 농도를 분석하였다.

또 다른 세트의 시험으로, 모든 다른 조건은 일정하게 유지하면서, 알벤다졸로 처리하기 전에 VEGF 생성을 증가시키기 위해, 세포를 자극하는데 기질 메탈로프로테이나제 MMP-9 (6 ng/ml)를 사용하였다. MMP-9가 난소종양 세포의 배양 배지 및 난소 종양을 갖는 마우스의 복수에 있는 생물학적 활성 VEGF의 방출을 유도한다는 증거가 있다 (Belotti et al., 2003). SKOV-3 세포를 MMP-9의 재조합적 활성화된 형태에 노출시키고, 이를 다양한 농도의 알벤다졸을 함유하는 세포 배양 배지에 직접적으로 가하였다.

두 세트의 실험으로부터 수득된 결과가 도 8에 나타나 있다. 이들 결과로부터, 다양한 농도의 알벤다졸로 SKOV-3 세포 (구성적으로 VEGF를 방출함)를 처리하면 VEGF 분비가 용량-의존적으로 감소한다는 것이 명백하다. 혈구계산기 및 트립판 블루 배제 방법을 이용하여, (처리 기간의 말기에) 각각의 세포에 존재하는 세포의 생존성을 점검하고, VEGF 농도를 pg/10⁵개 세포로 계산하였다. 비록 알벤다졸의 항증식 작용 때문에, 세포가 6시간 초과로 길게 인큐베이션할 수는 없었지만, VEGF 농도의 용량-의존적 감소가 관측되었다. MMP-9의 부재 하에, 사용된 최고 알벤다졸 농도 (1.0 μM)에서, VEGF 농도가 64 % 감소하였다 (도 8A). 세포를 MMP-9 세포로 자극하여 6시간 내에 44.8 %의 VEGF 농도 증가를 이끌었다. MMP-9 자극된 세포의 알벤다졸 처리는 VEGF 농도의 상당한 감소를 이끌었고, 1μM 알벤다졸 처리된 세포에서의 VEGF 농도는 65 % 감소하였다. 이들 세포 및 기술된 조건 하에서, 0.1 μM 알벤다졸은 MMP-9 자극에 의해 유도된 과다한 VEGF 분비를 차단하였다.

이들 결과는 알벤다졸이 시험관 내에서 SKOV-3 사람 난소암 세포로부터 VEGF 분비를 상당히 감소시킨다는 것을 분명히 나타낸다.

실시예 3 - 증식성 망막증을 앓는 뮤린 모델에서 신혈관형성의 억제

나이-연관된 황반 변성 (AMD)의 잠재적인 억제제로서의 알벤다졸의 능력을, AMD에 관련되는, 망막 신혈관생성, ROP (조숙 망막증)에 대해 널리-확립된 뮤린 모 델에서 평가하였다.

후술되는 실험은 UNSW 동물 보호 및 윤리 위원회 (UNSW Animal Care and Ethics Committee)에 의해 승인되었다.

출생 후 6일된 (P6) C57BL/6 마우스를 퀀텀-에어 막시-실드 우리 (Quantum-Air Maxi-Sealed cages; Hereford,. UK)에서 4일 동안 과산소 (75 % 산소)에 노출시켰다. P10 마우스를 정상산소에 돌아오게하고, 마취한 후 (17 mg/kg 케타민 및 2.5 mg/kg 자일라진), DMSO 중의 0.1, 1 또는 10 μg; DMSO 단독 또는 lx PBS 단독을 포함하는 용적 2 μl의 볼루스(bolus) 정맥내(intravitreal) 주사물을 마이크로 주사기 (SGE International, Melbourne, Australia)에 부착된 26 게이지의 경사진 바늘을 사용하여 투여하였다. 마우스를 추가의 7일 동안 실내 산소에 두었다가, 눈을 적출하여 10 % 포르말린/PBS에 고정하였다. 일련의 단면 (50 마이크론)을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 각각의 그룹으로부터의 혈관을 광학 현미경 (400x) 하에서 계수하고, 평균± SEM로 나타내었다.

도 9에서 보여지는 바와 같이, 과산소-정상산소는 망막 신혈관형성을 2 내지 3배 증가시켰다. 알벤다졸은, 약물의 단일 정맥내 주사 후, 과산소-유도된 망막 혈관형성을 상당히 억제하였다. 억제는 용량-의존적이었으며, l μg 같이 적은 양으로도 관측되었다. DMSO (알벤다졸 비히클) 단독은 과산소-노출된 마우스에서 혈관 형성에 영향을 끼치지 않았으며, 혈관수는 PBS 그룹에서의 것과 다르지 않았다.

도 9에 그래프적으로 나타난 결과에 대한 통계학적 분석을 상이한 변차를 갖는 2-테일드 스튜던츠 t-시험 (2-tailed Student's t-test)을 이용하여 수행하였 다. (표 1)

알벤다졸 처리의 통계학적 유의성

DMSO v 10 μg 알벤다졸	P=0.000651889
DMSO v l μg 알벤다졸	P=0.000117785
DMSO v O.l μg 알벤다졸	P=0.305488779
1 μg v 10 μg 알벤다졸	P=0.654672771
l μg v 0.1 μg 알벤다졸	P=0.0000853701

헤마톡실린 및 에오신 염색부 (도 10)는, DMSO 단독 주사된 그룹 (도 10B) 및 알벤다졸 + DMSO 주사된 그룹 (도 10A) 사이에, 신혈관형성 이외의 다른 검출가능한 형태학적 차이가 없음을 보이며, 이는 이러한 연구의 범위 내에서 알벤다졸 및/또는 비히클, DMSO에 대한 어떠한 유해 반응 또는 독성 반응도 없다는 것을 제시한다.

실시예 4 - 치료를 위한 조성물

본원에 제공된 발명을 수행하기 위한 최선의 양태에 따라, 특정 조성물이 하기에 약술된다. 하기는 조성물에 대한 단지 설명적인 예시로 간주되어야 하며, 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되지 말아야 한다.

실시예 4(A) - 비경구 투여용 조성물

1 % 카복시메틸셀룰로즈 10 ml 내지 2 ℓ중 화학식 I의 화합물 (예: 알벤다졸) 0.05 mg 내지 5 g을 포함하는 비경구 주사용 조성물이 제조될 수 있었다.

마찬가지로, 정맥내 주사용 조성물은 멸균 링거 용액 250 ml 및 화학식 I의 화합물 0.05 mg 내지 5 g을 포함할 수 있다.

또한, 10 용적%의 프로필렌 글리콜 중의 1 중량%의 화합물과 물을 혼합하여, 주사에 의한 투여에 적합한 조성물이 제조될 수 있다. 이 용액을 여과시켜 멸균시킬 수 있다.

실시예 4(B) - 경구 투여용 조성물

분말 형태의 화합물 500 mg, 락토즈 100 mg, 활석 35 mg 및 마그네슘 스테아레이트 10 mg으로 표준 2조각 경질 젤라틴 캡슐을 충전시킴으로써 캡슐 형태의 화학식 I의 화합물의 조성물이 제조될 수 있다.

실시예 4(C) - 국소 투여용 조성물

국소 연고로서의 전달을 위한 통상의 조성물은 부드럽고 균질인 생성물을 생성하도록 분산된 화학식 I의 화합물 1.0 g (백색 연질 파라핀을 사용하여 100.0 g으로 만듬) 을 포함한다.

실시예 4(D) - 점안제 (eye drop) 조성물

점안제로 전달하기 위한 국소 조성물이 하기와 같이 개요된다:

적합한 화합물 0.3 g

메틸 히드록시벤조에이트 0.005 g

프로필 히드록시벤조에이트 0.06 g

정제수로 약 100.00 ml이 되게 한다.

메틸 및 프로필 히드록시벤조에이트를 75 ℃에서 70 ml 정제수에 용해시키고, 생성된 용액을 냉각시킨다. 이어서, 화합물을 가하고, 용액을 막 여과기 (0.22 μm 세공 크기)를 통해 여과시켜 멸균시키며, 멸균 용기에 무균적으로 포장한다.

참고문헌

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Claims

환자에서 VEGF (vascular endothelial growth factor) 생성 또는 분비를 억제하는 방법으로서, 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 이성체, 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여함을 포함하고:

I

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 환자에서 VEGF (vascular endothelial growth factor) 생성 또는 분비를 억제하는 방법.
제1항에 있어서,

상기 R₁이 5 또는 6 위치에서 치환되는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 II의 벤즈이미다졸 카바메이트이고:

II

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂₁는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클롤알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 III의 화합물이고:

III

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸, 알벤다졸 설폭사이드, 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
제5항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 VEGF가 종양 세포에 의해 생성 또는 분비되는 것인 방법.
제7항에 있어서,

상기 종양 세포가 난소, 직결장, 간, 췌장, 위, 자궁내막, 신장 또는 기타 원발성 또는 전이 종양 세포인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 VEGF 생성 또는 분비가 환자의 체강내 유체의 축적과 연관되는 것인 방법.
제9항에 있어서,

상기 체강내 유체의 축적이 복수 또는 흉수인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 VEGF 생성 또는 분비가 망막증 신혈관형성과 연관되는 것인 방법.
제11항에 있어서,

상기 망막증 신혈관형성이 증식성 망막증, 당뇨성 망막증, 조숙 망막증 또는 황반 변성과 연관되는 것인 방법.
환자에서 VEGF 생성 또는 분비의 비정상적 수준과 연관된 증상을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 이성체, 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여함을 포함하고:

I

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알 킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 환자에서 VEGF 생성 또는 분비의 비정상적 수준과 연관된 증상을 치료 또는 예방하는 방법.
제13항에 있어서,

상기 R₁이 5 또는 6 위치에서 치환되는 방법.
제13항 또는 제14항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 II의 벤즈이미다졸 카바메이트이고:

II

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으 로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂₁는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클롤알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 방법.
제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 III의 화합물인 방법:

III

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으 로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4인, 방법.
제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸, 알벤다졸 설폭사이드, 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
제17항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체인 방법.
제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 증상이 증가된 혈관 투과성과 연관되는 것인 방법.
제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 증상이 복수, 경화증, 흉수, 뇌부종, 폐부종, 허혈성 심장 질환, 황반 변성, 증식성 망막증, 당뇨성 망막증, 조숙 망막증, 건선, 자궁내막증 및 관절염으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것인 방법.
제20항에 있어서,

상기 관절염이 류마티스 관절염인 방법.
환자에서 복수 또는 복수-연관된 증상을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 이성체, 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여함을 포함하고:

I

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 환자에서 복수 또는 복수-연관된 증상을 치료 또는 예방하는 방법.
제22항에 있어서,

상기 R₁이 5 또는 6 위치에서 치환되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 II의 벤즈이미다졸 카바메이트이고:

II

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂₁는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클롤알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 방법.
제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 화학식 III의 화합물이고:

III

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4인, 방법.
제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸, 알벤다졸 설폭사이드, 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것인 방법.
제26항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체인 방법.
제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 복수가 악성 복수인 방법.
제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 복수-연관 증상이 경화증인 방법.
환자에서 망막증을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 이성체, 대사산물, 유도체 또는 동족체를 환자에게 투여함을 포함하고:

I

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂는 H 또는 치환되거나 비치환된 알킬이며;

R₃는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, O, S 및/또는 N 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환, SR₁₄, -OR₁₅, -SOR₁₆, -SO₂R₁₇, -SCN, -C(0)-R₁₈, -OR₁₉, 또는 NR₂₀COOR₂₁이고, 여기서 R₁₅ 내지 R₂₁은 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 환자에서 망막증을 치료 또는 예방하는 방법.
제30항에 있어서,

상기 R₁이 5 또는 6 위치에서 치환되는 방법.
제30항 또는 제31항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 II의 벤즈이미다졸 카바메이트이고:

II

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4이고;

R₂₁는 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클롤알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬인, 방법.
제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 화학식 III의 화합물이고:

III

상기 식에서,

R₁은 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴, 아릴알킬, -SR₇, -SOR₈, SO₂R₉, -SCN, B'(CH₂)_nBR₁₀, -C(0)-R₁₁ 또는 -OR₁₂, COOR₁₃, -NO₂, NR_13aCOOR_13b, 이소티오시아네이토, 또는 -CN이고, 여기서 R₇ 내지 R_13b는 각각 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된, 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알케닐, 알케닐알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬, 아릴 또는 아릴알킬이고, B 및 B'는 독립적으로 0, S, S(O) 또는 SO₂이며, n은 1 내지 4인, 방법.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸, 알벤다졸 설폭사이드, 메벤다졸, 플루벤다졸, 트리클라벤다졸, 옥스펜벤다졸, 룩사벤다졸, 캄벤다졸, 옥시벤다졸, 파르벤다졸, 티아벤다졸, 사이클로벤다졸, 드리벤다졸, 에티벤다졸 및 펜벤다졸로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
제34에 있어서,

상기 화합물이 알벤다졸 또는 이의 대사산물, 유도체 또는 동족체인 방법.
제30항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 망막증이 증식성 망막증, 당뇨성 망막증, 조숙 망막증 및 황반 변성 중에서 선택되는 것인 방법.
제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물이 전신적으로 또는 국부적으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 투여가 강내, 방광내, 근육내, 동맥내, 정맥내, 안내, 피하, 국소 또는 경구 투여인 방법.
제38항에 있어서,

상기 강내 투여가 복강내 또는 흉막강내 투여인 방법.
화학식 I, II 또는 III의 화합물을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 포함하는, 세포에 의한 VEGF 생성 또는 분비를 억제하는데 사용하기 위한 조성물.
화학식 I, II 또는 III의 화합물을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 포함하는, 복수 또는 복수와 연관된 증상을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 조성물.
화학식 I, II 또는 III의 화합물을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담 체, 희석제 또는 보조제와 함께 포함하는, 망막증을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 조성물.
화학식 I, II 또는 III의 화합물을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 보조제와 함께 포함하는, VEGF의 생성 또는 분비와 연관된 증상을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 조성물.
하나 이상의 후보 벤즈이미다졸 카바메이트의 존재 및 부재 하에 환자의 혈청 VEGF 농도를 모니터링하는 단계, 및 상기 혈청 VEGF 농도의 감소를 달성하도록 상기 벤즈이미다졸 카바메이트의 정체 (identity) 및/또는 용량을 조절하는 단계를 포함하는, 환자에게 벤즈이미다졸 카바메이트 치료 요법을 고안하는 방법.
제44항에 따라 고안된 벤즈이미다졸 카바메이트 치료 요법을 이용하여 치료가 필요한 환자를 치료하는 방법.