JP6963545B2 - 癌を治療するための併用療法 - Google Patents

Description

関連出願
本出願は、２０１５年１０月６日に出願された米国特許仮出願第６２／２３７，９２５号の利益及び優先権を主張し、その開示全体は、参照によりその全体が組み込まれる。

癌は、異常細胞の制御不能な成長及び拡がりを特徴とする疾患の群である。多くの異なる種類の癌治療があり、伝統的療法（手術、化学療法、及び放射線療法など）、より新しい形態の治療（標的療法）、並びに補完及び代替療法が含まれる。癌が多数の異なる分子経路に依存し、単剤での療法に対する多様な抵抗機序を発達させ得ることが益々明白になっている。したがって、併用レジメンは、永続性のある効果を伴う有効な療法に対して最善の希望を提供し得る。

癌を治療するための併用療法が、本明細書において開示される。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗浸潤効果を有するという利点を提供する。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗遊走効果を有するという利点を提供する。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗転移効果を有するという利点を提供する。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗増殖効果を有するという利点を提供する。一実施形態において、癌細胞に対する増強された抗増殖効果は、化合物のうちの１つ以上の、腫瘍細胞、間質細胞、又は両方におけるサイトカインの生成又は過剰発現を減少又は停止させる能力の結果である。一実施形態において、化合物によって影響を受けるサイトカインは、インターロイキン−６（ＩＬ−６）である。

一実施形態において、本発明の各薬剤は単独で、抗浸潤効果、抗遊走効果、抗転移効果、抗増殖効果、及びアポトーシスのうちの少なくとも１つが可能であり、本発明の２種以上の薬剤の組み合わせが、相乗的に、細胞成長を阻害し、アポトーシスを増加させる。

本開示の併用療法は、細胞毒性における相乗的利益を提供し得ることが企図される。例えば、併用治療の細胞毒性は、単独で投与される化合物の個々の治療の相加効果よりも優れ得る。加えて又は代替的に、本開示の併用療法は、許容される細胞毒性を提供し得るが、化合物単独の個々の治療の低減した投与量においてである。これは、治療プロトコル中により少ない有害な副作用をもたらし得るが、治療される癌に対して同じか又はより良い効能を有する。

一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、表１の薬剤から選択される少なくとも第２の薬剤、又はその類似体と組み合わせた第１の薬剤と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む。抗癌剤の可能性のある組み合わせは、標準治療（例えば、化学療法、標的剤、及び免疫調節剤）を伴う／伴わない、表１から選択される薬剤の様々な順列を含む。

本発明の方法は、第１の薬剤を、表１の薬剤から選択される第２の薬剤、又はその類似体と組み合わせて、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。一実施形態において、方法は、表１の薬剤から選択される第３の薬剤を投与することを更に含む。一実施形態において、方法は、表１の薬剤から選択される第４の薬剤を投与することを更に含む。一実施形態において、方法は、表１の薬剤から選択される第５の薬剤を投与することを更に含む。一実施形態において、方法は、表１の薬剤から選択される第６の薬剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、表１の薬剤から選択される２種の薬剤、又はそれらの類似体を、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、表１の薬剤から選択される３種の薬剤、又はそれらの類似体を、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、表１の薬剤から選択される４種の薬剤、又はそれらの類似体を、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、表１の薬剤から選択される５種の薬剤、又はそれらの類似体を、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、表１の薬剤から選択される６種の薬剤、又はそれらの類似体を、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。本開示において、発明者らは、表１に列挙される薬剤のうちの２種以上の臨床併用が、単一薬物単独の、より強力なバージョンとして作用し得ることを見出した。いくつかの実施形態において、表１から選択される薬剤の様々な順列を含む、表１に列挙される抗癌剤の組み合わせの所望の効果（複数可）は、単独で投与される各単剤の効果よりも著しく高い。本開示の併用療法は、２つの一般的な方法で相互作用すると仮定され得る。（ａ）ある薬剤が、別の薬剤の作用を強化し得る、又は（ｂ）２種の薬物が組み合わさって、いずれか個々の化合物とは異なる効果を発揮する。

一実施形態において、膵臓癌を有するか又は有する疑いのある患者における膵臓癌の成長及び増殖を制限する方法は、表１からの少なくとも２種の薬物を患者に同時投与することを含み、組み合わせの薬物の量は、癌細胞の成長及び増殖の制限を達成するために有効である。一実施形態において、投与は、同時である。一実施形態において、投与は順次である。

本明細書において例示される態様に従い、リファブチン、クロファザミン、及びクラリスロマイシンのうちの２つ以上の有効な量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、併用癌療法が開示される。一実施形態において、有効な量のリファブチン、クロファザミン、及びクラリスロマイシンは、血清中のＩＬ−６レベルが正常よりも高い癌患者に投与され、リファブチン、クロファザミン、及びクラリスロマイシンでの有効な治療期間の後に、患者におけるＩＬ−６の血清濃度は、初期レベルから減少し、癌進行の低減又は抑制をもたらした。

本明細書において例示される態様に従い、リファブチン、クロファザミン、及びクラリスロマイシンからなる群から選択される少なくとも１種の抗生物質を、セリンプロテアーゼ阻害剤、ヌクレオシド類似体、又はスフィンゴシンキナーゼ阻害剤のうちの少なくとも１つと共に含む、併用癌療法が開示される。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタット（upamostat）である。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、アリールアダマンタン化合物である。

本明細書において例示される態様に従い、癌を有する患者を治療するための方法は、クロファジミン、リファブチン、又はクラリスロマイシンのうちの少なくとも１つを、アパモスタット、ブリブジン、又はアリールアダマンタン化合物のうちの少なくとも１つと組み合わせて、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む。一実施形態において、投与方法は、治療上有効な量の薬剤を、治療効能のある投与量に達するように１日当たり複数回、患者に投与することを含む。一実施形態において、治療上有効な量のクラリスロマイシンは、１日約９５ｍｇ〜約１０００ｍｇである。一実施形態において、クラリスロマイシンは、固体剤形として１日１回以上、経口投与される。一実施形態において、クラリスロマイシンの治療上有効な量は、成体の場合、最大で１日１グラムである。一実施形態において、２用量の５００ｍｇのクラリスロマイシンが、約２ｍｇ／ｍＬの溶液濃度を使用して、ＩＶ注射として投与される。１日１グラムのクラリスロマイシンが、２日〜５日の期間にわたってＩＶ注射として投与され得る。一実施形態において、１日１グラムのクラリスロマイシンが、３日の期間にわたってＩＶ注射として投与され得る。一実施形態において、リファブチンの治療上有効な量は、１日約４５ｍｇ〜約４５０ｍｇである。一実施形態において、リファブチンは、固体剤形として１日１回以上、経口投与される。一実施形態において、クロファジミンの治療上有効な量は、１日約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇである。一実施形態において、クロファジミンは、固体剤形として１日１回以上、経口投与される。ブリブジンは、活性代謝物、塩として、又は保護形態若しくはプロドラッグ形態で投与され得る。一実施形態において、治療上有効な量のＢＶＤＵは、最大で６００ｍｇ／日である。一実施形態において、６００ｍｇは、単一経口投与形態として１日１回投与される。一実施形態において、６００ｍｇは、１日４回摂取される１５０ｍｇの単一経口投与形態として投与される。一実施形態において、治療上有効な量のＢＶＤＵは、成体の場合、最大で５００ｍｇ／日である。一実施形態において、５００ｍｇは、単一経口投与形態として１日１回投与される。一実施形態において、５００ｍｇは、１日４回摂取される１２５ｍｇの単一経口投与形態として投与される。本開示の一実施形態において、アパモスタットは、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１．１ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜４００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約１５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約３００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約３５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約４００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約４５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約５００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜５００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜４５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜３５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜３００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜２５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約５００ｍｇ〜１０００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約７５０ｍｇ〜１０００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約５００ｍｇ〜７５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物の治療上有効な量は、１日０．５グラム〜３．５グラムである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、１日１．５グラムの日用量で経口投与される。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、１日２．０グラムの日用量で経口投与される。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、１日２．５グラムの日用量で経口投与される。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、１日３．０グラムの日用量で経口投与される。

一実施形態において、本開示の組み合わせは、構造（Ｉ）の化合物

（Ｉ）
又はその薬学的に許容される塩、及び構造（ＩＩ）の化合物

又はその薬学的に許容される塩を含む。一実施形態において、構造（ＩＩＩ）の化合物

又はその薬学的に許容される塩を更に含む。一実施形態において、構造（ＩＶ）の化合物

又はその薬学的に許容される塩を更に含む。

一実施形態において、癌の治療又は癌の再発若しくは進行の予防を必要とするヒトにおいて、それを行うための方法は、治療上有効な量の少なくとも１種の抗生物質及びアリールアダマンタン化合物を、同時に又は順次ヒトに投与することを特徴とする。

４つの腫瘍モデルにおける単剤療法でのＲＨＢ−１０４の効能を示す。全ての実験について最小Ｔ／Ｃ値が示される。転換点として、６５％の最小Ｔ／Ｃ値（境界抗腫瘍効能の上限）を選択した。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ ５４６）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。相対腫瘍体積中央値を時間の関数として示す。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ ５４６）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。２８日目（最小Ｔ／Ｃ値の日）の個々の相対腫瘍体積を示す（ＬＯＣＦ値を含む）。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ ７３６）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。相対腫瘍体積中央値を時間の関数として示す。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ ７３６）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。２８日目（最小Ｔ／Ｃ値の日）の個々の相対腫瘍体積を示す（ＬＯＣＦ値を含む）。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ １８７２）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。相対腫瘍体積中央値を時間の関数として示す。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ １８７２）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。２８日目（最小Ｔ／Ｃ値の日）の個々の相対腫瘍体積を示す（ＬＯＣＦ値を含む）。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ １９９８）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。相対腫瘍体積中央値を時間の関数として示す。 単剤療法（ＰＤＸ：ＰＡＸＦ １９９８）におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を示す。２８日目（最小Ｔ／Ｃ値の日）の個々の相対腫瘍体積を示す（ＬＯＣＦ値を含む）。 マウスの体重に対する治療の影響を示す。全実験の経時的な相対体重群中央値が示される。 マウスの体重に対する治療の影響を示す。４つの異なる患者由来膵臓癌腫瘍異種移植片の各々について経時的な相対体重群中央値が示される。 マウスの体重に対する治療の影響を示す。４つの異なる患者由来膵臓癌腫瘍異種移植片の各々について経時的な相対体重群中央値が示される。 マウスの体重に対する治療の影響を示す。４つの異なる患者由来膵臓癌腫瘍異種移植片の各々について経時的な相対体重群中央値が示される。 マウスの体重に対する治療の影響を示す。４つの異なる患者由来膵臓癌腫瘍異種移植片の各々について経時的な相対体重群中央値が示される。 雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスへのベヒクル（負の対照）、デキサメタゾン（正の対照）、又はＲＨＢ−１０４の投与に続いてＬＰＳ注入後の、マウス血清中のＩＬ−６の濃度を示す棒グラフである。 雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスへのベヒクル（負の対照）、デキサメタゾン（正の対照）、又はＲＨＢ−１０４の投与に続いてＬＰＳ注入後の、マウス血清中のＴＮＦの濃度を示す棒グラフである。 雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスへのベヒクル（負の対照）、デキサメタゾン（正の対照）、又はＲＨＢ−１０４の投与に続いてＬＰＳ注入後の、マウス血清中のＩＬ−１０の濃度を示す棒グラフである。

本発明で使用される場合、「薬剤」という用語は、患者に対する薬理活性又は効果を有する化合物を指す。「薬剤」、「活性成分」、「化合物」、及び「薬物」という用語は、本明細書において互換的に使用される。

「投与」又は「投与する」という用語は、それらの意図された機能を実行するために対象に本発明の化合物を導入する経路を含む。使用され得る投与経路の例としては、注入（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）、経口、吸入、直腸、及び経皮が挙げられる。薬学的調製物は、各投与経路に好適な形態によって与えられ得る。例えば、これらの調製物は、錠剤又はカプセル形態で、注入によって、及び坐薬によって直腸的に投与される。経口投与が好ましい。注入は、ボーラスであり得るか、又は持続点滴であり得る。投与経路に応じて、本発明の化合物は、その意図された機能を実行する能力に悪影響を及ぼし得る自然条件からそれを保護するために、選択された材料でコーティングされ得るか、又はその中に配設され得る。本発明の化合物は、薬学的に許容される担体と併せて投与され得る。更に、本発明の化合物はまた、インビボで、その活性代謝物又はより活性な代謝物に変換されるプロドラッグ形態で投与され得る。

「アポトーシス」（プログラムされた細胞死）は、異常な癌細胞のアポトーシスを誘導する薬剤を用いることによって、癌の予防及び癌の治療において重要な役割を果たすプロセスである。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、個体においてアポトーシスを誘導する能力を有する。いくつかのインビトロアッセイを用いて、アポトーシスを誘導する本開示の薬剤の効能を試験することができ、血漿膜、ミトコンドリア、カスパーゼ、核アポトーシス、及びマルチパラメトリックアポトーシスのうちの１つから選択されるフローサイトメトリー；カスパーゼ活性、ＤＮＡ断片化及び形態、アネキシンＶ染色、膜電位、及び他のミトコンドリアアッセイのうちの１つから選択される顕微鏡法；ハイコンテント解析法；及びカスパーゼ活性を測定するための集団ベースアッセイ等のマイクロプレートアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明で使用される場合、「抗浸潤効果」という用語は、本発明の１種又は複数の薬剤が、個体において、癌浸潤を予防するか又は腫瘍浸潤の発生率を低減する能力を意味する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約１％〜約９９．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約５％〜約９５．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約１０％〜約９０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約２０％〜約８０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約３０％〜約７０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約４０％〜約６０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗浸潤効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍浸潤の発生率を約５０％低減する。

本発明で使用される場合、「抗遊走効果」という用語は、本発明の１種又は複数の薬剤が、個体において、癌細胞遊走を予防するか又は腫瘍細胞遊走の発生率を低減する能力を意味し、腫瘍細胞が周囲組織に浸透する能力を獲得すると、これらの移動する細胞が基底膜及び細胞外マトリックスに浸透したときに浸潤のプロセスが開始され、それらがリンパ又は血管循環に浸透したときに血管内異物侵入へと進行する。次いで、転移細胞は、循環系を通して移動し、血管外遊出のプロセスにおいて血管基底膜及び細胞外マトリックスに浸潤する。最終的に、これらの細胞は、新しい位置に付着し、増殖して二次腫瘍を生成する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約１％〜約９９．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約５％〜約９５．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約１０％〜約９０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約２０％〜約８０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約３０％〜約７０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約４０％〜約６０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗遊走効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における腫瘍細胞遊走の発生率を約５０％低減する。

本発明で使用される場合、「抗転移効果」という用語は、転移プロセスにおける以下の工程、（１）原発部位からの癌細胞の脱離、（２）新しい血管への誘導及び浸潤、（３）血液循環からの流出、及び（４）遠隔部位における新しいコロニーの確立のうちの少なくとも１つを予防するか又はその発生率を低減する、本発明の１種又は複数の薬剤の能力を意味する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約１％〜約９９．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約５％〜約９５．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約１０％〜約９０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約２０％〜約８０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約３０％〜約７０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約４０％〜約６０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗転移効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における転移プロセスの工程のうちの１つの発生率を約５０％低減する。いくつかのインビトロアッセイを使用して、転移の進行を予防するか又は遅延させる本開示の薬剤の効能を試験することができ、スクラッチ又は創傷治癒アッセイ、経膜遊走アッセイ（修正ボイデンチャンバー）、ギャップ・クロージャ又は排除区域アッセイ、並びにマイクロ流体デバイス（ＭＦＤ）を使用する遊走アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「新生物」という用語は、細胞又は組織の異常な成長を指し、良性、即ち非癌性成長、及び悪性、即ち癌性成長を含むことが理解される。「新生物性」という用語は、新生物を意味するか又はそれに関連する。「抗新生物薬」という用語は、組織、システム、動物、哺乳類、ヒト、又は他の対象において抗新生物効果をもたらす物質を意味することが理解される。

本発明で使用される場合、「抗増殖効果」という用語は、個体において、癌細胞成長及び細胞分裂を阻害するか又は癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を低減する、本発明の１種又は複数の薬剤の能力を意味する。一実施形態において、本発明の薬剤は、サイトカイン生成に影響を及ぼすことによって抗増殖効果をもたらす。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約１％〜約９９．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約５％〜約９５．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約１０％〜約９０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約２０％〜約８０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約３０％〜約７０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約４０％〜約６０．０％低減する。一実施形態において、本発明の１種又は複数の薬剤は、抗増殖効果を有することが知られている既存の薬物と比較して、個体における癌細胞成長及び細胞分裂の発生率を約５０％低減する。いくつかのインビトロアッセイを使用して、細胞成長及び細胞分裂を予防するか又は遅延させる、本開示の薬剤の効能を試験することができ、ＤＮＡ合成を測定する細胞増殖アッセイ、代謝活性を測定する細胞増殖アッセイ、細胞増殖と関連した抗原を測定する細胞増殖アッセイ、及びＡＴＰ濃度を測定する細胞増殖アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

「サイトカイン」という用語は、生理学的条件下、様々な体組織内で細胞間コミュニケーションを制御する、機能性低分子ペプチドを指す。サイトカインはまた、インターロイキン、モノカイン、リンホカイン、ケモカイン、及び成長因子と呼ばれる。局所組織又は循環サイトカインレベルは、多数の癌において変更されることが観察され、これが発達／進展、治療、及び予後判定に影響を及ぼし得る。例えば、上昇したサイトカインレベルは、様々な治療の抗癌活性の低減と関連付けられてきた。サイトカインはまた、化学療法の毒性効果を悪化させ、薬物代謝に影響を及ぼすことが明示された。腫瘍微小環境においてもたらされたインターフェロン及びインターロイキンなどの炎症性サイトカインは、疾患進行の刺激又は阻害において役割を果たす。

本発明の化合物を用いて治療され得る疾患としては、癌性腫瘍などの癌が挙げられるが、これらに限定されない。「癌」は、不適切に高いレベルの細胞分裂、不適切に低いレベルのアポトーシス、又は両方によって引き起こされるか又はそれをもたらす任意の疾患を指すことを意味する。一実施形態において、癌は、ウイルス感染などの感染性疾患の結果である。一実施形態において、癌は、細菌又は寄生虫感染などの感染性疾患の結果である。一実施形態において、癌は、遺伝子突然変異によって引き起こされる。治療され得る癌としては、乳癌、膵臓癌、腎臓癌、結腸癌、直腸癌、卵巣癌、胃癌、子宮癌、上皮内癌、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明で使用される場合、「膵臓癌」という用語は、その起源を膵臓細胞内に有する任意の癌を指し、膵臓癌の転移及び局所形態を含む。２０１２年において、全ての種類の膵臓癌は、癌死の７番目に多い原因であり、世界的に３３０，０００人の死者数をもたらした。米国において、膵臓癌は、癌に起因する死亡の４番目に多い原因である。ある特定の一実施形態において、膵臓癌を有する患者の特定の下位集団は、本発明の併用療法に従って治療され得る。本発明の薬剤の組み合わせを利用して、効能を強化し、効能を達成するために必要とされるいずれかの薬剤の量を低減し得る。

「患者」は、ヒト等の霊長類等の任意の動物を指す。任意の動物は、本発明の方法及び組成物を用いて治療され得る。

本発明で使用される場合、「好適な期間」という用語は、対象が本開示の方法を使用して癌の診断に対する治療を始めるときに開始し、治療を通して、対象が治療を停止するときまでの期間を指す。一実施形態において、好適な期間は、１週間である。一実施形態において、好適な期間は、１週間〜２週間である。一実施形態において、好適な期間は、２週間である。一実施形態において、好適な期間は、２週間〜３週間である。一実施形態において、好適な期間は、３週間である。一実施形態において、好適な期間は、３週間〜４週間である。一実施形態において、好適な期間は、４週間である。一実施形態において、好適な期間は、４週間〜５週間である。一実施形態において、好適な期間は、５週間である。一実施形態において、好適な期間は、５週間〜６週間である。一実施形態において、好適な期間は、６週間である。一実施形態において、好適な期間は、６週間〜７週間である。一実施形態において、好適な期間は、７週間である。一実施形態において、好適な期間は、７週間〜８週間である。一実施形態において、好適な期間は、８週間である。

「治療上許容される」という用語は、過度の毒性、刺激、及びアレルギー応答なしに患者の組織に接触して使用するために好適であり、適度な利益／リスク比に相応し、それらの意図された使用に有効である化合物（又は塩、プロドラッグ、互変異性体、双性イオン形態など）を指す。

「有効な量」又は「治療上有効な量」とは、臨床的に関連する様式で癌を有する患者を治療するために必要とされる、単独の又は別の治療レジメンと組み合わせた化合物の量を意味する。この量は、疾患又は傷害を低減又は排除する目標を達成する。癌によって引き起こされる病態の治療的処置のために、本発明を実施するために使用される活性化合物の十分な量は、投与の様式、患者の年齢、体重、及び全身健康状態に応じて異なる。最終的に、処方者が、適切な量及び投与レジメンを決定することになる。本発明の併用療法において、薬剤の有効な量は、非併用（単剤）療法において薬剤が投与された場合の有効な量より少なくてもよい。加えて、有効な量は、規制当局（米国食品医薬品局など）によって決定され、承認される、癌を有する患者の治療において各薬剤単独よりも安全かつ有効な本発明の併用療法における薬剤の量であり得る。

「より有効な」とは、治療がより優れた効能を示すか、又は比較される別の治療よりも毒性が低い、安全である、便利である、又は安価であることを意味する。効能は、所与の適応症に適切な任意の標準方法を用いて、熟練した施術者によって測定され得る。

「最小化する」若しくは「低減する」という用語、又はその派生語は、指定された生物学的効果（最小化するという用語が使用される文脈から明らかである）の完全又は部分的阻害を含む。

「調節する」という用語は、例えば、本発明の化合物への曝露に応答して増殖する細胞の能力の増加又は減少、例えば、所望の最終結果、例えば、治療結果が達成されるような、動物における細胞の少なくとも下位集団の増殖の阻害を指す。一実施形態において、調節は、阻害である。「阻害」という用語は、標的活性、例えば、細胞増殖の減少、抑制、減衰、縮小、停止、又は安定化を意味する。

「併用療法」という用語は、癌を治療するための、本発明の２種以上の薬剤の投与を意味する。一実施形態において、薬剤の各々は、癌細胞のシグナル伝達経路の異なる部分を標的とする。一実施形態において、薬剤の各々は、癌細胞の組織環境との関係を標的とする。一実施形態において、１種の薬剤は、癌細胞のシグナル伝達経路を標的とし、１種の薬剤は、癌細胞と組織環境との関係を標的とする。そのような投与は、実質的に同時の、例えば、固定比の活性成分（「固定用量」）を有する単一カプセル、又は各活性成分に関して複数の別個のカプセル若しくは錠剤での、これらの薬剤の同時投与を包含する。更に、そのような投与はまた、各種薬剤の順次使用を包含する。いずれかの場合において、治療レジメンは、本明細書に記載される病態又は障害を治療する際に、薬物の組み合わせの有益な効果を提供する。一実施形態において、本発明の併用療法は、２種以上の薬剤の少なくとも１つの固定用量の組み合わせを含む。固定用量は、併用療法の利点を提供する一方で、処方薬の数及び管理費を低減する。一実施形態において、本発明の併用療法は、相乗又は相加効果に起因して、各薬物をより低い濃度で用いる。一実施形態において、より低い濃度の各薬物の使用は（薬物の単剤療法アプローチと比較して）、低減した有害事象及びより高い治療比又は指数につながる。

「同時に」とは、（１）時間的に同時、又は（２）一連の共通治療計画中の異なる時点を意味する。

「順次」とは、この方法で用いられる１種の活性剤の投与の後に、別の活性剤の投与が続くことを指す。１種の活性剤の投与後に、その第１の活性剤の実質的に直後に次の活性剤が投与され得るか、又は第１の活性剤の後に有効な期間を経て、次の活性剤が投与され得る。この有効な期間は、第１の活性剤の投与から最大利益を実現するために与えられる時間の量である。

併用療法は、「相乗効果」を提供し、「相乗性」を証明することができる。すなわち、その効果は、併せて用いられる活性成分が、化合物を個別に用いることから生じる効果の総和より優れている場合に達成される。相乗効果は、活性成分が、（１）同時に製剤化され、複合単位投与製剤中で同時に投与又は送達されるとき、（２）個別の製剤として交互又は同時に送達されるとき、あるいは（３）いくつかの他のレジメンによって得ることができる。交互療法で送達される場合、相乗効果は、化合物が、例えば、個別の注射器での異なる注入によって、個別のピル若しくはカプセルの投与によって、又は個別の注射によって、順次投与又は送達されるときに得ることができる。一般的に、交互療法中、有効な投与量の各活性成分は、順次、即ち一続きで投与されるが、併用療法では、有効な投与量の２種以上の活性成分が併せて投与される。

本発明の薬剤は、癌の治療のための既存の標準治療との併用療法の一部として特に有用であると予想される。一実施形態において、本開示の併用療法は、本発明の少なくとも２種の薬剤を投与すること、及び本発明の薬剤を、標準治療の化学療法剤と共に同時投与することを更に含む。一実施形態において、本開示の併用療法は、罹患した組織の外科的切除、本発明の少なくとも２種の薬剤を投与すること、及び本発明の薬剤を、標準治療の化学療法又は放射線治療と共に同時投与することを更に含む。現在の標準治療化学療法剤としては、抗血管新生剤、細胞増殖抑制剤、及び抗増殖／抗新生物剤、並びにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、膵臓癌を管理する際に用いられる抗新生物剤及び薬剤の組み合わせとしては、ゲムシタビン、ゲムシタビン／デセタキセル／カペシタビン、ゲムシタビン／カペシタビン、ゲムシタビン／アルブミン結合パクリタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ＬＶ５−ＦＵ／オキサリプラチン／イリノテカン、パクリタキセル／ゲムシタビン、エルロチニブ、エルロチニブ／ゲムシタビン、及びカペシタビンの単独又は組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。そのような薬剤は、膵臓癌における生存を延長することが示された。一実施形態において、本発明の少なくとも２種の薬剤は更に、これらの標準治療化学療法剤のうちの１種以上と同時投与される。

一実施形態において、本開示の併用療法は、本発明の少なくとも２種の薬剤を投与することと、更に本発明の薬剤を免疫調節剤と同時投与することと、を含む。免疫調節剤は、免疫療法で用いられる活性剤であり、免疫系の免疫応答を修飾し、多様な組み換え、合成、及び天然調製物を含み得る。免疫調節剤の例としては、インターロイキン、サイトカイン、ケモカイン、及び免疫調節イミド薬が挙げられるが、これらに限定されない。

一実施形態において、本開示の併用療法は、本発明の少なくとも２種の薬剤を投与することと、更に本発明の薬剤を免疫チェックポイント阻害剤と同時投与することと、を含む。阻害性チェックポイント分子を阻害／遮断する薬物又は薬物候補は、免疫チェックポイント阻害剤として知られている。

一実施形態において、本開示の併用療法は、本発明の少なくとも２種の薬剤を投与することと、更に本発明の薬剤をマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（ＭＭＰＩ）と同時投与することと、を含む。ＭＭＰＩは、細胞遊走を阻害し、潜在的な抗血管新生効果を有する。ＭＭＰＩの例としては、外因性ＭＭＰＩが含まれ、タノマスタット、プリノマスタット、バチマスタット、及びマリマスタットが挙げられるが、これらに限定されない。

「同時投与する」又は「同時投与」という用語は、療法の同時又は順次投与を包含することが意図される。例えば、同時投与は、本発明のヌクレオシド類似体及びセリンプロテアーゼ阻害剤の両方を単一組成物で投与することを含み得る。また、複数のそのような組成物の同時投与も含み得る。代替的に、同時投与は、同じ期間中の異なる時点での複数のそのような組成物の投与を含み得る。

薬剤又は他の化学部分の「類似体」という用語には、薬剤に構造的に類似しているか、又は薬剤と同じ一般化学クラスにある化合物が含まれるが、これらに限定されない。薬剤の類似体は、その薬剤の類似した化学及び／又は物理特性（例えば、機能性を含む）を保持する。

「薬学的に許容される担体」という表現には、薬学的に許容される材料、組成物、又はベヒクル、例えばある臓器又は体の部分から別の臓器又は体の部分への１種又は複数の活性剤の運搬又は輸送に関与する、液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、又は封入材料が含まれる。各担体は、製剤の他の成分と相溶性であり、かつ患者に有害でないという意味で「許容される」。薬学的に許容される担体として機能し得るいくつかの材料の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。（１）ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖；（２）トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン；（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体；（４）トラガカント末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバター及び坐薬ワックスなどの賦形剤；（９）ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油などの油；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなどのポリオール；（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）アガー；（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンガー液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；及び（２１）薬学的製剤に用いられる他の非毒性相溶性物質。

本発明で使用される場合、「癌を治療する」、「治療する」、及び「治療」は、癌の発達を予防若しくは低減すること、癌の症状を低減すること、確立した癌の成長を抑制若しくは阻害すること、既存の癌の転移及び／若しくは浸潤を予防すること、癌の後退を促進若しくは誘導すること、癌性細胞の増殖を阻害若しくは抑制すること、血管新生を低減すること、悪性若しくは癌性腫瘍細胞を死滅させること、又はアポトーシス癌細胞の量を増加させることを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、癌を発達させるリスクを低減する目的のために、癌を発達させるリスクのある対象に投与される。癌細胞の「成長を阻害する」又は「増殖を阻害する」という表現は、その成長及び転移の減速、中断、阻止、又は停止を指し、必ずしも新生物成長の完全排除を示すとは限らない。

「治療を必要とする患者」は、本明細書で使用される場合、治療を必要とすると特定される患者を意味する。例えば、癌治療を必要とする患者は、癌を有すると特定されるか又は癌を発達させるリスクのある患者である。患者は、健康管理専門職によって及び／又は１種以上の診断アッセイを行うことによって治療を必要とすると診断され得る。例えば、癌治療を必要とする患者は、健康管理専門職によって癌と診断されたか又は癌のリスクがあると診断された患者であり得る。患者が癌を有するか又は癌を発達させるリスクがあるかを評価するための診断アッセイは、当該技術分野において既知である。

これらの方法が、複数の活性剤を患者に投与することを含む場合、薬剤は、７、６、５、４、３、２、若しくは１日以内、２４、１２、６、５、４、３、２、若しくは１時間以内、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、若しくは１分以内、又は実質的に同時に投与され得る。本発明の方法は、経口、全身、非経口、局所、静脈内、吸入、又は筋肉内投与によって患者に１種以上の薬剤を投与することを含み得る。

本発明の方法は、第１の薬剤を、表１の薬剤から選択される第２の薬剤、又はその類似体と組み合わせて、患者を治療するために有効な量で患者に投与することを含む。一実施形態において、方法は、表１の薬剤から選択される第３の薬剤を投与することを更に含む。本開示において、発明者らは、表１に列挙される薬剤が臨床併用で共働する機序が、単剤単独のより強力なバージョンとして作用し得ることを見出した。本開示の併用療法は、２つの一般的な方法で相互作用すると仮定され得る。（ａ）ある薬剤が、別の薬剤の作用を強化し得る、又は（ｂ）２種の薬物が組み合わさって、いずれか個々の化合物とは異なる効果を発揮する。

表１

表１の薬剤は、７、６、５、４、３、２、若しくは１日以内、２４、１２、６、５、４、３、２、若しくは１時間以内、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、若しくは１分以内、又は実質的に同時に投与され得る。本発明の方法は、経口、全身、非経口、局所、静脈内、吸入、又は筋肉内投与によって患者に表１からの薬剤を投与することを含み得る。一実施形態において、本発明の方法は、経口投与によって患者に表１からの薬剤を投与することを含む。

一実施形態において、本開示は、表１の薬剤から選択される２種以上の薬剤を含む癌併用療法について説明する。一実施形態において、２種以上の薬剤は、患者に併せて投与されたときに、患者を治療するために有効な量で存在する。一実施形態において、この組成物は、活性成分及び賦形剤からなり、活性成分は、表１の薬剤から選択される２種以上の薬剤からなる。

本発明において有用な活性成分又は薬剤は、本明細書に記載されるものを、それらの薬学的に許容される形態のうちのいずれかで含み、その異性体、塩、溶媒和物、及び多形、並びにラセミ混合物及びプロドラッグが挙げられる。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗浸潤効果を有するという利点を提供する。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗遊走効果を有するという利点を提供する。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗転移効果を有するという利点を提供する。

一実施形態において、癌を治療するための本開示の併用療法は、その組み合わせのうちの単一化合物を投与することのみを含む療法と比較して、癌細胞に対して増強された抗増殖効果を有するという利点を提供する。一実施形態において、癌細胞に対する増強された抗増殖効果は、化合物のうちの１つ以上の、腫瘍細胞、間質細胞、又は両方におけるサイトカインの生成又は過剰発現を減少又は停止させる能力の結果である。一実施形態において、化合物によって影響を受けるサイトカインは、インターロイキン−６（ＩＬ−６）である。ＩＬ−６は、様々な悪性腫瘍細胞の増殖及び分化に関与することが示されている。加えて、様々な癌において、ＩＬ−６及びその受容体（ＩＬ−６Ｒ及びｓＩＬ−６Ｒ）の両方の過剰発現が見出されている。多剤耐性細胞株の培養上清において、上昇レベルのＩＬ−６が見出され、癌患者の血清における上昇したＩＬ−６レベルは、不良な臨床転帰と関連付けられている。

一実施形態において、本発明の各薬剤は単独で、抗浸潤効果、抗遊走効果、抗転移効果、抗増殖効果、及びアポトーシス誘導のうちの少なくとも１つが可能であり、本発明の２種以上の薬剤の組み合わせが、相乗的に、細胞成長を阻害し、アポトーシスを増加させる。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のクラリスロマイシン及び治療上有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤の投与を含む。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のクラリスロマイシン及び治療上有効な量のヌクレオシド類似体の投与を含む。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のクラリスロマイシン、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のクラリスロマイシン、治療上有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤、及び治療上有効な量のヌクレオシド類似体の投与を含む。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のクラリスロマイシン、治療上有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のクラリスロマイシン、治療上有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤、治療上有効な量のヌクレオシド類似体、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤及び治療上有効な量のヌクレオシド類似体の投与を含む。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のヌクレオシド類似体、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のヌクレオシド類似体、治療上有効な量のセリンプロテアーゼ、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。一実施形態において、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、治療上有効な量のヌクレオシド類似体、及びスフィンゴシンキナーゼ１（ＳＫ１）又はスフィンゴシンキナーゼ２（ＳＫ２）のいずれかのスフィンゴシンキナーゼの阻害剤である、治療上有効な量のアリールアダマンタン化合物の投与を含む。一実施形態において、ヌクレオシド類似体は、ブリブジンである。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、「ＡＢＣ２９４６４０」としても知られる［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］である。一実施形態において、アリールアダマンタン化合物は、ＡＢＣ２９４７３５である。

一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、２種以上の薬剤を、それらの１種以上の薬学的に許容される担体、及び任意選択で１種以上の他の治療成分と共に含む。担体は、製剤の他の成分と相溶性であり、かつそのレシピエントに有害でないという意味で「許容され」なければならない。適切な製剤は、選択された投与経路に依存する。周知の技法、担体、及び賦形剤のうちのいずれも、好適に、かつ当該技術分野において、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおいて理解されるように用いられ得る。本開示の薬学的組成物は、それ自体が既知の方法で、例えば、従来の混合、溶解、造粒、湿式粉砕、乳化、封入、捕捉、又は圧縮プロセスによって製造され得る。

一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、単位剤形で好都合に提示され得、かつ調剤の技術分野において周知の方法のうちのいずれかによって調製され得る。全ての方法は、対象開示の薬剤又はその薬学的に許容される塩、エステル、類似体、プロドラッグ、又は溶媒和物（「活性成分」）を、１種以上の副成分からなる担体と会合させる工程を含む。一般に、組成物は、活性成分を液体担体又は細分された固体担体又は両方と均一かつ密接に会合させ、次いで必要に応じて生成物を所望の組成物に成形することによって調製される。

一実施形態において、経口投与に好適な本開示の薬学的組成物は、各々が既定量の活性成分を含有するカプセル、カシェット、若しくは錠剤などの別個の単位として、粉末若しくは顆粒として、水性液体若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油液体エマルジョン若しくは油中水液体エマルジョンとして提示され得る。

経口的に用いられ得る薬学的調製物としては、錠剤、ゼラチンで作製されたプッシュフィット（push-fit）カプセル、並びにゼラチンで作製された軟質の封止カプセル、及びグリセロール又はソルビトールなどの可塑剤が挙げられる。錠剤は、圧縮又は成形によって、任意選択で１種以上の副成分と共に作製され得る。圧縮錠剤は、任意選択で、結合剤、不活性希釈剤、又は潤滑表面活性若しくは分散剤と混合された粉末又は顆粒などの流動性形態の活性成分を、好適な機械において圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を、好適な機械において成形することによって作製され得る。錠剤は、任意選択で、コーティング又はスコアされてもよく、活性成分の徐放又は制御放出を内部で提供するように製剤化され得る。経口投与のための全ての組成物は、そのような投与に好適な投与量であるべきである。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、及び／又はタルク若しくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び任意選択で安定化剤との混和物中に活性成分を含有し得る。軟質カプセルにおいて、活性化合物は、脂肪油、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体に溶解又は懸濁され得る。加えて、安定化剤が添加されてもよい。ドラジェコアには、好適なコーティングが提供される。この目的で、濃縮糖溶液が用いられてもよく、任意選択で、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー液、並びに好適な有機溶媒又は溶媒混合物を含有し得る。色素又は顔料は、活性化合物用量の異なる組み合わせを特定する又は特徴付けるために、錠剤又はドラジェコーティングに添加され得る。

本発明の薬剤
５位置換ヌクレオシド
本開示の５位置換ヌクレオシドの非限定例として、以下の、５−（２−ブロモビニル−２’−デオキシウリジン（ＢＶＤＵ）、（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル−２’−デオキシ−４’−チオウリジン、５−ヨード−２’−デオキシシチジン、５−ヨード−２’−デオキシウリジン、及び２’−デオキシ−５−トリフルオロメチルウリジンが提示される。ブリブジン（ＢＶＤＵ）及び（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル−）ウラシル（ＢＶＵ）が特に好ましい。ＢＶＤＵは、その塩形態で、保護形態で、又はプロドラッグ形態で使用され得る。

ブリブジン（ブロモビニルデオキシウリジン又は短縮してＢＶＤＵ）は、ＨｓｐＢ１のＮ末端ドメインにおける２つのフェニルアラニン残基（Ｐｈｅ２９及びＰｈｅ３３）と相互作用するヌクレオシド類似体である。薬物の完全な化学説明は、（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−２−デオキシウリジンである。ブリブジンは、細胞増殖抑制剤での治療に対する耐性形成を予防又は低減するための有効な物質であることが示された。「薬物耐性」の発生は、癌化学療法における失敗の主な理由である。最初に細胞増殖抑制剤に対して敏感に反応する腫瘍は、ある特定の治療時間の後に非常に頻繁に回復し、次いで様々な種類の抗新生物薬の効果に耐性となる。

ＢＶＤＵのプロドラッグ形態の非限定例を以下に表す。

ブリブジンを以下に表す。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、癌を有し、治療を必要とする患者に、ブリブジン、その塩、又は保護形態若しくはプロドラッグ形態のＢＶＤＵを、表１から選択される少なくとも１つの添加剤と共に、またアルカロイド、アルキル化剤、抗代謝物、抗生物質、又はシスプラチンのうちの１つ以上から選択される少なくとも１つの細胞増殖抑制剤と組み合わせて同時投与することを含む。ＢＶＤＵを含む併用療法で癌を治療する方法の間、ＢＶＤＵは、０．０２μｇ／ｍＬ〜１０．０μｇ／ｍＬの血中濃度をもたらすために有効な量で投与され得る。ＢＶＤＵを含む併用療法で癌を治療する方法の間、ＢＶＤＵは、０．０５μｇ／ｍＬ〜５μｇ／ｍＬの血中濃度をもたらすために有効な量で投与され得る。

一実施形態において、細胞増殖抑制治療において耐性を低減するための本開示の癌併用療法は、患者に、治療上有効な量の少なくとも１つの細胞増殖抑制剤、治療上有効な量のＢＶＤＵ、その塩、又は保護形態若しくはプロドラッグ形態のＢＶＤＵ、及び治療上有効な量の、表１から選択される少なくとも１つの追加の薬剤を送達することを含む。

一実施形態において、化学療法後の細胞増殖抑制剤のアポトーシス効果を高めるための本開示の癌併用療法は、（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン（ＢＶＤＵ）、ＢＶＤＵ塩、若しくはＢＶＤＵプロドラッグ、又はその混合物を投与することを含み、この投与は、細胞増殖抑制化学療法サイクル後の回復相の間に細胞増殖抑制剤の投与を含まず、この細胞増殖抑制化学療法サイクルは、（ａ）ＢＶＤＵ、一般式Ｉのプロドラッグ、若しくはＢＶＤＵ塩、又はそれらの混合物、（ｂ）表１から選択される少なくとも１つの追加の薬剤、及び（ｃ）細胞増殖抑制剤の投与を含む。一実施形態において、細胞増殖抑制化学療法サイクルの間に、細胞増殖抑制剤の投与量は、細胞増殖抑制化学療法サイクルにわたって増加し、ＢＶＤＵ、ＢＶＤＵ塩、若しくはプロドラッグ、又はそれらの混合物の投与量は、一定である。一実施形態において、細胞増殖抑制化学療法サイクルは、７〜６０日の期間を有する。一実施形態において、回復相は、３〜１０日の期間を有する。

ウロキナーゼ阻害剤
アパモスタット（「ＷＸ−６７１」又は「メスプロン」）は、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性因子（ｕＰＡ）系を阻害することが示された。アパモスタットは、セリンプロテアーゼ阻害剤である。経口投与後に、セリンプロテアーゼ阻害剤ＷＸ−６７１は、いくつかのセリンプロテアーゼ、特にｕＰＡを阻害する、活性Ｎα−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−アミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトキシカルボニルピペラジド（「ＷＸ−ＵＫ１」）に変換される。この薬物の完全な化学説明は、（Ｓ）−エチル４−（３−（３−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）フェニル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホンアミド）プロパノイル）ピペラジン−１−カルボキシレートである。

アパモスタットは、以下の式によって表される。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、癌を有し、治療を必要とする患者に、アパモスタットを、表１から選択される少なくとも１つの追加の薬剤と共に同時投与することを含む。アパモスタットを含む併用療法で癌を治療する方法の間に、アパモスタットを、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１．１ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与され得る。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜４００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約１５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約３００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約３５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約４００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約４５０ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約５００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜５５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜５００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜４５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜３５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜３００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約２００ｍｇ〜２５０ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約５００ｍｇ〜１０００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約７５０ｍｇ〜１０００ｍｇの日用量で経口投与される。一実施形態において、アパモスタットは、約５００ｍｇ〜７５０ｍｇの日用量で経口投与される。

クロファジミン
抗ハンセン病薬クロファジミンは、呼吸機能を阻害し、したがって酵母及び形質転換線維芽細胞におけるエネルギー代謝を阻害することが知られている。クロファジミンは、以下の式によって表される。

クロファジミンは、インビトロ及びインビボの両方で腫瘍細胞の成長率を阻害することが示された。一実施形態において、本開示の併用癌療法は、癌を有し、治療を必要とする患者に、クロファザミンを、表１から選択される少なくとも１つの追加の薬剤と共に同時投与することを含む。一実施形態において、クロファザミンは、固体形態剤形の構成成分として患者に経口投与される。一実施形態において、１日当たりのクロファザミンの投与量は、約５０ｍｇ／日〜約５８０ｍｇ／日である。一実施形態において、クロファザミンの最大投与量は、回復まで１００ｍｇ／日である。

リファブチン
リファブチンは、以下の式によって表される。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、癌を有し、治療を必要とする患者に、リファブチンを、表１から選択される少なくとも１種の追加の薬剤と共に同時投与することを含む。一実施形態において、リファブチンは、固体形態剤形の構成成分として患者に経口投与される。一実施形態において、１日当たりのリファブチンの投与量は、約８０ｍｇ／日〜約４８０ｍｇ／日である。一実施形態において、リファブチンの最大投与量は、回復まで４８０ｍｇ／日である。一実施形態において、リファブチンは、１５０ｍｇ錠剤として１日２回経口投与される。一実施形態において、リファブチンは、３００ｍｇ錠剤として１日１回経口投与される。一実施形態において、リファブチンは、１剤形当たり４５ｍｇ〜６０ｍｇのリファブチンを含む固体経口剤形の構成成分として、最大で１日６回投与される。

クラリスロマイシン
クラリスロマイシンは、以下の式によって表される。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、癌を有し、治療を必要とする患者に、クラリスロマイシンを、表１から選択される少なくとも１つの追加の薬剤と共に同時投与することを含む。一実施形態において、クラリスロマイシンは、固体形態剤形の構成成分として患者に経口投与される。一実施形態において、クラリスロマイシンは、静脈内注射として患者に投与される。

一実施形態において、１日当たりのクラリスロマイシンの投与量は、回復まで約１８０ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日である。一実施形態において、クラリスロマイシンの最大投与量は、回復まで９８０〜１０００ｍｇ／日である。一実施形態において、２用量の５００ｍｇのクラリスロマイシンが、約２ｍｇ／ｍＬの溶液濃度を用いて、静脈内（ＩＶ）注射として投与される。一実施形態において、１日１グラムのクラリスロマイシンが、２日〜５日の期間にわたって静脈内（ＩＶ）注射として投与され得る。一実施形態において、１日１グラムのクラリスロマイシンが、３日の期間にわたって静脈内（ＩＶ）注射として投与され得る。一実施形態において、クラリスロマイシンは、５００ｍｇの錠剤として１日２回経口投与される。一実施形態において、クラリスロマイシンは、１剤形当たり９５ｍｇ〜１２５ｍｇのクラリスロマイシンを含む固体経口剤形の構成成分として投与される。

一実施形態において、本開示の併用癌療法は、癌を有し、治療を必要とする患者に、リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファジミンを単一固体経口剤形として投与することを含む。一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、リファブチン、クラリスロマイシン、クロファジミン、及び薬学的に許容される担体を含み、クロファジミンの量は、クラリスロマイシンの量に対して５〜１８ｗ／ｗ％（例えば、７〜１６％、９〜１４％、９〜１２％、１０〜１５％、又は０〜１１ｗ／ｗ％）であり、リファブチンの量に対して１０〜２５ｗ／ｗ％（例えば、１２〜２５％、１２〜２３％、１５〜２５％、１５〜２３％、１８〜２５％、１８〜２３％、２０〜２５％、２０〜２３％、又は２１〜２３ｗ／ｗ％）である。

一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファジミンを、８〜１０：１８〜２０：１〜２．５ｗ／ｗ／ｗの比で含む（例えば、８．５〜９．５：１８．５〜１９．５：１．５〜２．５ｗ／ｗ／ｗの比又は９：１９：２の比、各変数は、±０．５又は０．２５で自由に変動する）。一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファジミンを、約９：１９：２ｗ／ｗ／ｗの比で含み、変数の各々は、±２、１、０．５、又は０．２５（例えば、９±０．５：１９±５：２±０．５）で自由に変動する。例えば、一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、９０ｍｇのリファブチン（±３０、２０、１０、５、２、又は１ｍｇ）、１９０ｍｇのクラリスロマイシン（±６０、４０、２０、１０、５、２、又は１ｍｇ）、及び２０ｍｇのクロファジミン（±１０、７、５、２、又は１ｍｇ）を含む。一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、４５ｍｇのリファブチン（±１５、１０、７、５、２、又は１ｍｇ）、９５ｍｇのクラリスロマイシン（±３０、２０、１０、５、２、又は１ｍｇ）、及び１０ｍｇのクロファジミン（±６、５、２、又は１ｍｇ）を含む。

一実施形態において、リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファザミンを有する本開示の固体経口剤形は、活性成分のうちの１種以上の生物学的利用能を改善し得る吸収増強剤を更に含む。吸収増強剤の量は、クロファジミンの量に対して３００〜７００ｗ／ｗ％（４００〜６００％又は４５０〜５５０％又は４７５〜５２５％を含む）であり得る。ある特定の実施形態において、吸収増強剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり、例えば、ポリエチレングリコールは、２００〜２０，０００の平均分子量（１０００〜１５０００又は５０００〜１２０００又は７０００〜９０００又は７５００〜８５００を含む）を有し、例えばＰＥＧ８０００である。

一実施形態において、リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファザミンを含む本開示の固体経口剤形は、１種以上の追加の賦形剤、例えばＭＣＣ−Ｔａｂｕｌｏｓｅ ２００型、ステアリン酸マグネシウム、ＳＬＳ−Ｅｍａｌ １０Ｐｗｄ ＨＤ、ポリソルベート（ポリソルベート８０など）、又はそれらの全てを含むそれらの組み合わせを更に含む。場合によっては、本組成物は、ポリエチレングリコール、及びポリソルベート８０などのポリソルベートの両方を含み、ポリソルベートの量は、クロファジミンの量に対して３０〜１２０ｗ／ｗ％（例えば、５０〜１００％、５０〜８５％、又は６０〜７５％）である。

一実施形態において、リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファザミンを含む本開示の固体経口剤形は、１種以上の追加の賦形剤、例えば微結晶セルロース（ＭＣＣ）ＴＡＢＵＬＯＳＥ（登録商標）ＳＣ ２００、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）ＥＭＡＬ（登録商標）１０Ｐｗｄ ＨＤ、ポリソルベート（ポリソルベート８０など）、又はそれらの全てを含むそれらの組み合わせを更に含む。場合によっては、本組成物は、ポリエチレングリコール、及びポリソルベート８０などのポリソルベートの両方を含み、ポリソルベートの量は、クロファジミンの量に対して３０〜１２０ｗ／ｗ％ （例えば、５０〜１００％、５０〜８５％、又は６０〜７５％）である。

一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、１０ｍｇのクロファザミン、９５ｍｇのクラリスロマイシン、及び４５ｍｆのリファブチンを、ＲＨＢ−１０４として知られる様々な賦形剤と併せて有するカプセルを含む。一実施形態において、本発明のＲＨＢ−１０４カプセルは、以下の構成成分を含む。

ＲＨＢ−１０４カプセルの組成

一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、粉末形態の活性剤を含有する錠剤又はカプセルの形態で入手可能である。一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、マイクロカプセル化形態の活性剤を含有する錠剤又はカプセルの形態である。一実施形態において、本開示の固体経口剤形は、微粒形態の活性剤を含有する錠剤又はカプセルの形態である。

スフィンゴシンキナーゼ阻害剤
本発明のアリールアダマンタン化合物は、インビトロでＳＫ２活性を選択的に阻害可能であることが示された。本発明のアリールアダマンタン化合物の例は、一般に以下の式によって表されるもの

及びその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｌは、結合であるか又は−Ｃ（Ｒ_３，Ｒ_４）−であり、
Ｘは、−Ｃ（Ｒ_３Ｒ_４）Ｎ（Ｒ_５）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_４）−、−Ｎ（Ｒ_４）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ_４，Ｒ_５）−、−Ｎ（Ｒ_４）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_４）−、又は−Ｎ（Ｒ_４）Ｓ（Ｏ）_２−であり、
Ｒ_１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、又はモノ若しくはジアルキルチオカルバモイルであり、
Ｒ_２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、モノ若しくはジアルキルチオカルバモイル、アルキル−Ｓ−アルキル、−ヘテロアリール−アリール、−アルキル−ヘテロアリール−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−アリール、−アルケニル−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、又は−アルケニル−ヘテロアリール−アリールであり、
Ｒ_３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、オキソ（＝Ｏ）、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、又はモノ若しくはジアルキルチオカルバモイルであり、
上記Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_３基の各々のアルキル及び環部分は、任意選択で最大５つの基で置換され、それらは独立して（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシアルキル、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＳＯＲ’Ｒ”、−ＳＯ_２Ｒ’、−ＮＯ_２、又はＮＲ’Ｒ”であり、Ｒ’及びＲ”は独立して、Ｈ又は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルであり、置換基の各アルキル部分は、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、及びＮＨ_２から独立して選択される１、２、又は３つの基で更に置換され、
Ｒ_３及びＲ_４が同じ炭素上にあり、かつＲ_３がオキソである場合、Ｒ_４は不在であることを条件として、Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ又はアルキルである。

アリールアダマンタン化合物は、以下の式Ｉ−Ｉの化合物

及びその薬学的に許容される塩を含み、式中、
Ｒ_１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキルアルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、又はモノ若しくはジアルキルチオカルバモイルであり、
Ｒ_２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、モノ若しくはジアルキルチオカルバモイル、アルキル−Ｓ−アルキル、−ヘテロアリール−アリール、−アルキル−ヘテロアリール−アリール、ＮＨ−アリール、−アルケニル−ヘテロアリール、−ヘテロアリール、−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−シクロアルキル、又は−アルケニル−ヘテロアリール−アリールであり、
上記Ｒ_１及びＲ_２基の各々のアルキル及び環部分は、任意選択で最大５つの基で置換され、それらは独立して（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシアルキル、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＳＯＲ’Ｒ”、−ＳＯ_２Ｒ’、−ＮＯ_２、又はＮＲ’Ｒ”であり、Ｒ’及びＲ”は独立して、Ｈ又は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルであり、置換基の各アルキル部分は、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、及びＮＨ_２から独立して選択される１、２、又は３つの基で更に置換される。

アリールアダマンタン化合物は、式ＩＩの化合物

及びその薬学的に許容される塩を含み、式中、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ_４Ｒ_５）−、−Ｎ（Ｒ_４）−、−Ｏ−、又は−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ_１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、又はモノ若しくはジアルキルチオカルバモイルであり、
Ｒ_２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、モノ若しくはジアルキルチオカルバモイル、アルキル−Ｓ−アルキル、−ヘテロアリール−アリール、−アルキル−ヘテロアリ−ル−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−アリール、−アルケニル−ヘテロアリ−ル、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、又は−アルケニル−ヘテロアリール−アリールであり、
Ｒ_３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、オキソ（＝Ｏ）、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、又はモノ若しくはジアルキルチオカルバモイルであり、
上記Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_３基の各々のアルキル及び環部分は、任意選択で最大５つの基で置換され、それらは独立して（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシアルキル、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＳＯＲ’Ｒ”、−ＳＯ_２Ｒ’、−ＮＯ_２、又はＮＲ’Ｒ”であり、Ｒ’及びＲ”は独立して、Ｈ又は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルであり、置換基の各アルキル部分は、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、及びＮＨ_２から独立して選択される１、２、又は３つの基で更に置換され、
Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ又はアルキルである。

式ＩＩの化合物は、以下の化合物を含み、式中、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ_４Ｒ_５）−又はＮ（Ｒ_４）−であり、
Ｒ_１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、又はモノ若しくはジアルキルチオカルバモイルであり、
Ｒ_２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アルキルアリール、アルケニルアリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキル−ヘテロシクロアルキル、アシル、アロイル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、アルカノイル、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、−ＣＯ_２（アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、カルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノカルバモイル、モノ若しくはジアルキルカルバモイル、モノ若しくはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ若しくはジアルキルアミノアルキル、チオカルバモイル、モノ若しくはジアルキルチオカルバモイル、アルキル−Ｓ−アルキル、−ヘテロアリール−アリール、−アルキル−ヘテロアリール−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−アリール、−アルケニル−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、又は−アルケニル−ヘテロアリール−アリールであり、
上記Ｒ_１及びＲ_２基の各々のアルキル及び環部分は、任意選択で最大５つの基で置換され、それらは独立して、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮＲ_４Ｒ_５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ_４Ｒ_５、−ＮＲ_４Ｃ（Ｏ）Ｒ_５、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシアルキル、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−ＳＯＲ_４Ｒ_５、−ＳＯ_２Ｒ_４Ｒ_５、−ＮＯ_２、又はＮＲ_４Ｒ_５であり、置換基の各アルキル部分は、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ_２から独立して選択される１、２、又は３つの基で更に置換され、
Ｒ_３は、Ｈ、アルキル、又はオキソ（＝Ｏ）であり、かつ
Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ又は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルである。

代表的な式ＩＩの化合物としては、以下が挙げられる。

代表的な式Ｉ−Ｉの化合物としては、以下が挙げられる。

本発明の特に好ましいアリールアダマンタン化合物は、以下に例示され、ＡＢＣ２９４６４０［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］と称される。

一実施形態において、本発明のアリールアダマンタン化合物は、式８の化合物

式８
及びその薬学的に許容される塩から選択され、式中、
Ｒ_１は、Ｈ、Ｃｌ、又はＦであり、
Ｒ_２は、Ｈ又はアルキルであり、
ｍは、０、１、又は２であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５であり、
各Ｒ_３は独立して、少なくとも１つのＲ_３がＨでないことを条件として、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｒ_４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ_５Ｒ_６、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ_７）_２、又はグルコシルであり、
式中、
Ｒ_４は、天然アミノ酸、又はエステルとしてカルボキシル部分を介して連結された非天然アミノ酸であり、
Ｒ_５は、Ｈ又はアルキルであり、
Ｒ_６は、Ｈ又はアルキルであり、
各Ｒ_７は独立して、Ｈ又はアルキルである。

上記の式（Ｉ）の化合物のある特定の実施形態において、

部分は、少なくとも１つのカテコール−ＯＨ置換を有するカテコールである。例えば、一実施形態において、

部分は、以下の構造を有する。

上記の式（Ｉ）の化合物の特に好ましい一実施形態において、

部分は、以下の構造を有する。

本発明の特に好ましい一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ_１＝Ｃｌ、Ｒ_２＝Ｈ、ｍ＝２、ｎ＝２を有し、各Ｒ_３＝−Ｃ（Ｏ）アルキル、特にＣ（Ｏ）ＣＨ_３である。

例えば、本発明の化合物は、以下を含む。
・酢酸２−アセトキシ−５−（２−｛［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボニル］−アミノ｝エチル）フェニルエステル、
・プロピオン酸２−プロピオニルオキシ−５−（２−｛［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボニル］−アミノ｝エチル）フェニルエステル、
・ブチル酸２−ブチリルオキシ−５−（２−｛［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボニル］−アミノ｝エチル）フェニルエステル、
・イソブチル酸５−（２−｛［３−（４−クロロフェニル）アダマンタン−１−カルボニル｛アミノ｝エチル）−２−ヒドロキシフェニルエステル、及び
２−アミノ−３−メチル−ブチル酸５−（２−｛［３−（４−クロロフェニル）アダマンタン−１−カルボニル］アミノ｝エチル）−２−ヒドロキシフェニルエステル。

本発明の特に好ましいアリールアダマンタン化合物は、以下に例示され、ＡＢＣ２９４７３５と称される。

経口投与のための固体形態は、薬学的に許容される結合剤、甘味剤、崩壊剤、希釈剤、香味剤、コーティング剤、保存剤、潤滑剤、及び／又は遅延剤を含有し得る。好適な結合剤には、アカシアガム、ゼラチン、トウモロコシデンプン、トラガカントガム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。好適な甘味剤には、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテーム、又はサッカリンが含まれる。好適な崩壊剤には、トウモロコシデンプン、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸、又はアガーが含まれる。好適な希釈剤には、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリン、セルロース、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、又はリン酸二カルシウムが含まれる。好適な香味剤には、ペパーミント油、ウィンターグリーン、チェリー、オレンジ、又はラズベリー香味の油が含まれる。好適なコーティング剤には、アクリル酸及び／若しくはメタクリル酸のポリマー若しくはコポリマー、並びに／又はそれらのエステル、蝋、脂肪アルコール、ゼイン、シェラック、又はグルテンが含まれる。好適な保存剤には、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、α−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、又は二硫酸ナトリウムが含まれる。好適な潤滑剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、又はタルクが含まれる。好適な遅延剤には、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートが含まれる。

経口投与のための固体形態は、薬学的に許容される結合剤、甘味剤、崩壊剤、希釈剤、香味剤、コーティング剤、保存剤、潤滑剤、及び／又は遅延剤を含有し得る。好適な結合剤には、アカシアガム、ゼラチン、トウモロコシデンプン、トラガカントガム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。好適な甘味剤には、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテーム、又はサッカリンが含まれる。好適な崩壊剤には、トウモロコシデンプン、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸、又はアガーが含まれる。好適な希釈剤には、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリン、セルロース、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、又はリン酸二カルシウムが含まれる。好適な香味剤には、ペパーミント油、ウィンターグリーン、チェリー、オレンジ、又はラズベリー香味の油が含まれる。好適なコーティング剤には、アクリル酸及び／若しくはメタクリル酸のポリマー若しくはコポリマー、並びに／又はそれらのエステル、蝋、脂肪アルコール、ゼイン、シェラック、又はグルテンが含まれる。好適な保存剤には、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、α−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、又は二硫酸ナトリウムが含まれる。好適な潤滑剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、又はタルクが含まれる。好適な遅延剤には、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートが含まれる。

動物、例えば齧歯類、イヌ、及びサルにおける疾患又は障害の予防又は治療に有効であると決定された本発明の化合物は、ヒトにおける腫瘍の治療においても有用であり得る。ヒトにおける腫瘍治療の当業者であれば、動物研究において得られたデータに基づいて、ヒトへの化合物の投与量及び投与経路が分かるであろう。一般に、ヒトにおける投与量及び投与経路は、動物における投与量及び投与経路に類似すると予想される。

対象における治療の効能を評価する方法は、当該技術分野において周知の方法（例えば、腫瘍寸法の決定又は癌マーカーのスクリーニング）によって癌の前治療の程度を決定すること、次いで対象に本発明の癌療法を投与することを含む。併用療法の投与後の有効な治療期間（例えば、１日、１週間、２週間、１ヶ月、６ヶ月）の後に、癌の程度を再度決定する。一実施形態において、癌の浸潤性の程度の調節（例えば、減少）は、治療の効能を示す。癌の程度又は浸潤性は、治療を通して定期的に決定され得る。例えば、癌の程度又は浸潤性を、数時間又は数週間毎にチェックして、治療の更なる効能を評価することができる。癌の程度又は浸潤性の減少は、治療が有効であることを示す。

リファブチン、クラリスロマイシン、及びクロファザミンを含む本開示の併用癌療法に対する感受性についての４つの選択された患者由来膵臓癌異種移植片のインビボスクリーニング
ＲＨＢ−１０４は、３種の抗生物質、リファブチン、クロファザミン、及びクラリスロマイシン（ＲｅｄＨｉｌｌ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｌｔｄ、及び上記）で構成された併用薬カプセルである。本研究において、４つの異なる患者由来膵臓癌腫瘍異種移植片（患者由来腫瘍異種移植片、ＰＤＸ）が皮下的に埋め込まれたヌードマウスにおいて、ＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能及び耐容能をインビボでスクリーニングした。ＩＬ６及びＩＬ８の発現、並びに標準治療（ＳｏＣ）化合物ゲムシタビンに対する感受性に基づいて、４つのＰＡＸＦモデルを選択した。４つの効能実験の前に、無腫瘍マウスにおいて用量設定試験を行った。

効能研究の目的は、４つの異なる腫瘍モデルにおいて、単剤療法としてのＲＨＢ−１０４による治療に対する腫瘍の感受性をスクリーニングすることであった。選択された腫瘍モデルは、ＰＡＸＦ ５４６、ＰＡＸＦ ７３６、ＰＡＸＦ １８７２、及びＰＡＸＦ １９９であった。各実験は、ＲＨＢ−１０４又はＲＨＢ−１０４のベヒクルでの経口治療を受ける３匹の動物の２つの群で構成された。治療は、１日２回、２週間にわたって経口的に与えられ、２週間の観察期間を続けた。対照（Ｃ）及び治療（Ｔ）マウスについて、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）を算出した。各研究の対照及び治療マウスの平均ＲＴＶを算出し、ＲＴＶ及びベヒクル群に基づいた最小Ｔ／Ｃ値を、最小Ｔ／Ｃの日における抗腫瘍効能の評価に用いた。実験の最後に、腫瘍を採取し、更なる分析のために急速冷凍した。この実験は、腫瘍成長遅延の算出を可能にした。
用量設定実験の研究設計

ＲＨＢ−１０４のベヒクル：ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）
効能実験の研究設計

ＲＨＢ−１０４のベヒクル：ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）
試料採取の詳細

ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）（経口懸濁ベヒクル）：Ｐｅｒｒｉｇｏ、Ｈａｂａｒｉから溶液として提供される。周囲温度で出荷及び保管される。

ＲＨＢ−１０４：Ｃｏｒｅａｌｉｓ Ｐｈａｒｍａからピルとして提供される。周囲温度で出荷される。ピルを乳棒と乳鉢で粉砕し、粉末を併せて使用まで周囲温度で保管する。

ＲＨＢ−１０４（効能研究）：３６ｍｇ／ｋｇ／用量でのＲＨＢ−１０４の投与のために、３．６ｍｇ／ｍＬの濃度を有する投与溶液を、２６．２７ｍｇの乾燥物質（８．６４ｍｇのＡＰＩに対応する）を２．４ミリリットルのＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）に溶解することによって毎日調製し、室温で５分間撹拌し（渦動させ）、その後に均質な懸濁液が達成されるまで超音波処理した。投与溶液を周囲温度で保管し、光から保護して、同じ投与日に使用した（２回目の適用前に再度渦動させる）。

ＲＨＢ−１０４（用量設定研究）：３６ｍｇ／ｋｇ／用量でのＲＨＢ−１０４の投与のために、３．６ｍｇ／ｍＬの濃度を有する投与溶液を、３９．４ｍｇの乾燥物質（１２．９６ｍｇのＡＰＩに対応する）を３．６ミリリットルのＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）に溶解することによって毎日調製し、室温で５分間撹拌し（渦動させ）、その後に均質な懸濁液が達成されるまで超音波処理した。投与溶液を周囲温度で保管し、光から保護して、同じ投与日に使用した（２回目の適用前に再度渦動させる）。

ＲＨＢ−１０４（用量設定研究）：５４ｍｇ／ｋｇ／用量でのＲＨＢ−１０４の投与のために、５．４ｍｇ／ｍＬの濃度を有する投与溶液を、３９．４ｍｇの乾燥物質（１２．９６ｍｇのＡＰＩに対応する）を２．４ミリリットルのＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）に溶解することによって毎日調製し、室温で５分間撹拌し（渦動させ）、その後に均質な懸濁液が達成されるまで超音波処理した。投与溶液を周囲温度で保管し、光から保護して、同じ投与日に使用した（２回目の適用前に再度渦動させる）。

全ての投与溶液を、１０ｍＬ／ｋｇの用量体積で投与した。

免疫不全の齧歯類は、ヒト腫瘍の異種移植及び成長を可能にする。皮下腫瘍移植は、腫瘍成長の可視化及び定量化を可能にする十分に説明された方法である。通常は、雌の免疫不全ＮＭＲＩ−Ｆｏｘｎ１^ｎｕマウスが用いられる。雄動物は、腫瘍モデル（例えば、前立腺癌）によって必要とされる場合のみ、又は他の科学的理由で用いられる。動物は、４〜６週齢で送達され、少なくとも１週間の隔離後に移植に用いられる。異論のない健康状態の動物のみを選択して、試験手順を行う。用いた動物は、ＮＭＲＩ ｎｕ／ｎｕであった。

腫瘍異種移植片は、癌患者からの摘出標本に由来するものであった。手術での切除に続いて、腫瘍片を、免疫不全マウスに皮下的に移植し、したがってヌードマウスにおいて皮下的に継代された患者腫瘍外植片、又は患者由来腫瘍異種移植片（ＰＤＸ）と称される。ＰＤＸの確立及び特徴付けは、免疫不全マウスへのそれらの一次移植（継代１）に続いて行われる。腫瘍異種移植片は、安定した成長パターンの確立まで継代される。その時点で、早期継代ＰＤＸのマスターストックを液体窒素中で冷凍する。通常は、特定のストックバッチのみが限定数の更なる継代に用いられる。

腫瘍断片は、ヌードマウスにおける連続継代の異種移植片から入手した。ドナーマウスから除去した後に、腫瘍を断片（３〜４ｍｍの縁部長さ）に切断し、１０％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＰＢＳに入れた。イソフルランの吸入によってレシピエント動物に麻酔をかけ、横腹において皮下的に片側又は両側腫瘍移植を行った。６５％未満の生着率を有する腫瘍異種移植片（表２）を、マウス１匹当たり１つ又は２つの腫瘍と共に移植し、両側生着の場合は、これらの腫瘍のうちの１つをランダム化の前に外移植した。
表２．実験の概要

^１ Ｎに先行する数は、継代の総数を表し、Ｎに続く数は、最後の冷凍／解凍サイクル後の継代数を表す。
^２ ランダム化における範囲［ｍｍ^３］

固形腫瘍成長の始まりの明らかな兆候が、十分な数の動物において検出可能になるまで、動物及び腫瘍移植片を毎日監視した。ランダム化において、成長する腫瘍の体積を決定した。次いで、ランダム化基準を満たす動物（すなわち、５０〜２５０ｍｍ^３、好ましくは８０〜２００ｍｍ^３の腫瘍を担持する）を実験群に分配し、およそ１００〜１２０ｍｍ^３の相当する中央値及び平均群腫瘍体積を目指した。ランダム化されない動物を安楽死させる。ランダム化の日を実験の０日目と指定する。

標準体積でのランダム化に好適な全ての腫瘍移植片のパーセンテージは、以下の等式に従い、生着率として定義される。

特徴付けの目的で、生着率中央値を算出した（本研究において用いられたＰＤＸの生着率中央値については、表３を参照されたい）。移植において必要とされる動物及び腫瘍断片の数の算出のために、この生着率中央値を考慮した。

移植から標準腫瘍体積におけるランダム化までの時間は、「誘導時間（ＩＴ）」として日数で表す。特徴付けの目的で、ＩＴ中央値を算出する（本研究において用いられたＰＤＸのＩＴ中央値については、表２を参照されたい）。

表３．ヒト腫瘍異種移植片の特徴付け

ＴＲ生着率、ＩＴ誘導時間、Ｔｄ腫瘍体積倍加時間：典型値（中央値）

１５％を超える体重損失が記録された場合、動物を週２回又は毎日計量した。Ｘ日目の個々の体重（ＢＷ_ｘ）を０日目の個々の体重（ＢＷ_０）で除し、１００％を掛けることによって、個々の動物の相対体重を算出した。

問題の日に生存していた動物のみを考慮して、相対体重群中央値も同様に算出した。

ランダム化の日に、かつその後週２回、カリパスでの２次元測定によって絶対腫瘍体積（ＡＴＶ）を決定した。以下の式に従って腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積＝（ａ×ｂ^２）×０．５
式中、ａは最大値を表し、ｂは理想とされる楕円を表す腫瘍の垂直腫瘍直径を表す。

ｘ日目の個々の絶対腫瘍体積（Ｔ_ｘ）を０日目の同じ腫瘍の個々の絶対腫瘍体積（Ｔ_０）で除し、１００％を掛けることによって、ｘ日目の個々の腫瘍の相対体積（個々のＲＴＶ）を算出した。

成長曲線を描くため、及び群中の動物の少なくとも５０％又は最小で３匹の動物が生存している間の治療評価のために、ＲＴＶ群中央値を用いた。

腫瘍体積群中央値の算出のために、問題の日に生存していた動物からの値を考慮した。加えて、この増加が腫瘍体積群中央値を増加させる間、最後に観測された値で補完する（ＬＯＣＦ）方法を用いて、腫瘍負荷に起因して安楽死させた動物の腫瘍体積を補完した。

本研究における投与は、表４に記載されるように行った。投与の初日は、表４に見られるように、ランダム化の日（０日目、以下を参照されたい）又は翌日（１日目、但しランダム化後２４時間以内）のいずれかである。

投与日における最初の投与時間は、ｈ：０と指定する。同じ試薬の複数回連日投与は、療法間の時間間隔、例えばｈ：０＋１２で示される。他の試薬での療法は、該当箇所で、最初の日用量に関連して、例えばｈ：８と示される。
表４．抗腫瘍効能

ｎ／ａ該当なし、ｎ．ｒ．到達せず（すなわち、ＲＴＶ群中央値が常に２００％／４００％未満である）
効能格付け：＋＋＋＋Ｔ／Ｃ＜５％未満、＋＋＋Ｔ／Ｃ ５〜＜１０％未満、＋＋Ｔ／Ｃ １０〜＜２５％未満、＋Ｔ／Ｃ ２５〜＜５０％未満、＋／−Ｔ／Ｃ ５０〜６５％、−Ｔ／Ｃ≧６５％
１ ＲＨＢ−１０４のベヒクル：ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）
２ 最小Ｔ／Ｃは、中央値に基づいて算出される。

効能研究において相当の体重損失が記録された場合、以下の対策を施す。
体重損失が２０％を超える個々の動物には治療を行わない。
毎日の体重測定値が１５％を超える体重損失を伴う個々の動物には、体重損失が２０％を超える動物に対して食餌及び水へのアクセスを促す。
個々の動物が少なくとも８５％の相対体重を取り戻した場合は投与を再開する。

効能実験は、一般的に、治療の終了後２週間の標準観測期間を含めて、投与の開始後最短で４週間で終了した。

最大耐量（ＭＴＤ）は、本明細書において、用量調整又は終了基準を適用することなく、意図されるスケジュールに従ってそれぞれの化合物による動物の不断の治療を可能にするであろう用量として定義される。この定義は、併用療法レジメンにも適用され得る。用量設定研究は、無腫瘍動物において行われる。

全体生存率（表５）は、各群の最後の実験日を超えて生存していた動物の数を数え、それらをその群の動物の総数で除することによって算出した。試料採取又は群の終了以外の任意の理由で、群の最終日に死亡したか又は安楽死させた動物は、生存と見なさなれなかった。表６における補正生存率は、腫瘍に関連した理由で安楽死させた動物を含む全ての生存動物を数え、それらをその群の動物の総数で除することによって算出した。以下の安楽死の理由が腫瘍関連として分類される。１）副腫瘍を含む体積に関連した終了基準を満たす腫瘍、２）潰瘍化腫瘍。腫瘍性悪液質の症状に起因する動物の安楽死は、腫瘍関連と見なされない。
表５．体重損失及び生存率

ＲＨＢ−１０４のベヒクル：ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）
１ 最小体重中央値が記録された日、ｎ．ｒ．関連なし、体重損失が記録されなかった（すなわち、ＲＢＷ群中央値が常に１００％超であった）
２ 群の動物の総数における最終実験日を超えて生存していた動物の数
３ 腫瘍に関連した理由で安楽死させた全ての動物について補正した（すなわち、数に入れない）生存率

ＲＨＢ−１０４のベヒクル：ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）
１ 最小体重中央値が記録された日、ｎ．ｒ．関連なし、体重損失が記録されなかった（すなわち、ＲＢＷ群中央値が常に１００％超であった）。
２ 群の動物の総数における最終実験日を超えて生存していた動物の数。
３ 腫瘍に関連した理由で安楽死させた全ての動物について補正した（すなわち、数に入れない）生存率

試験及び対照群の腫瘍体積倍加／四倍加時間（Ｔｄ／Ｔｑ）は、群が２００％／４００％のＲＴＶ中央値に到達するために必要とされる時間間隔（日数）として定義される。データを表４に表す。

特定の日の対照群に対する試験群の値（Ｔ／Ｃ％）は、ｘ日目の対照群に対する試験群のＲＴＶ中央値の比率に１００％を掛けて算出される。

実験中に特定の試験群について記録された最小Ｔ／Ｃ値は、それぞれの治療の最大抗腫瘍効能を表す。最小Ｔ／Ｃ値は、試験群及び対照群におけるランダム化動物の少なくとも５０％及び少なくとも３匹が、問題の日に生存していた場合に算出される。最小Ｔ／Ｃ値は常に、ＬＯＣＦ方法論を用いることなく算出される。

群最小Ｔ／Ｃ値は、以下のように効能格付けに用いられる。

抗腫瘍効能の統計的有意性は、ノンパラメトリックなクラスカル・ウォリス検定に続いてＤｕｎｎの事後検定によって評価した。試験群及び対照群の個々のＲＴＶを、関連試験群において最小Ｔ／Ｃ値が達成された日に比較する。通常は、関連群における最初にランダム化した動物（及び少なくとも４匹の動物）の少なくとも５０％が依然として生存している場合、統計的分析のみを実行する。この研究において、群のサイズはランダム化の時点でわずか３匹であり、したがって統計評価の結果は、より大きな群サイズでの研究における結果より信頼性が低い。慣例では、ｐ値≦０．０５は、腫瘍阻害の有意性を示す。

実験の概要を表３に示す。結果を表４及び図１〜図５に要約する。

この研究において、４つの異なる膵臓ＰＤＸを皮下的に移植した免疫不全マウスにおいて、単剤療法におけるＲＨＢ−１０４の抗腫瘍効能を評価した。３匹のマウスの群に、化合物を１日２回、２週間にわたって経口投与し、その後に２週間の観測が続いた。実験の最後に、全ての動物から腫瘍を採取し、更なる分析のために急速冷凍した。抗腫瘍効能を、最小Ｔ／Ｃ値として評価し、ＲＨＢ−１０４のベヒクル（ＯＲＡ−Ｐｌｕｓ）を受けた対照群と比較して、治療群における相対腫瘍体積（ＲＴＶ）群中央値から算出した。腫瘍成長阻害の統計的有意性を、最小Ｔ／Ｃの日に、相対腫瘍体積のクラスカル・ウォリス検定によって、その後にＤｕｎｎの事後検定によって評価した。無腫瘍マウスにおいて、効能実験の前に用量設定研究を行った。３匹のマウスの群を、ＲＨＢ−１０４で３週間にわたって３つの異なるレジメンで経口的に治療した。３６ｍｇ／ｋｇの用量レベルを１日１回与えるか、又は３６ｍｇ／ｋｇ若しくは５４ｍｇ／ｋｇの用量レベルを１日２回与えるかのいずれかであった。追加として、１つの群を、ＲＨＢ−１０４のベヒクルであるＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）で治療した（群１）。図６Ａ〜図６Ｅに例示されるように、ＲＨＢ−１０４は、無腫瘍マウスにおいて、体重損失及び生存率に関して良好な耐性を示した。図６Ａに見られるように、３６ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１日１回治療された群（群２）について、研究の１日目に２．４％のわずかなＢＷＬが観測され、他の群ではＢＷＬは観測されず、生存率は４群全てにおいて１００％であった。これらの観測に基づいて、腫瘍担持マウスでの効能実験において、３６ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１日２回、ＲＨＢ−１０４を投与することが決定された。

ＲＨＢ−１０４での治療に対する最高の感受性は、ＰＡＸＦ １８７２腫瘍モデルにおいて観測され、この場合、５８．３％の最小Ｔ／Ｃ値は、治療の最終日に到達し、抗腫瘍効能として格付けされた。他の３つの腫瘍モデルにおけるＲＨＢ−１０４での治療は、ＰＡＸＦ ５４６、ＰＡＸＦ ７３６、及びＰＡＸＦ １９９８腫瘍モデルについて、それぞれ６７．７％、７１．１％、及び８６．４％の最小Ｔ／Ｃ値をもたらした。

表４及び図６Ａ〜図６Ｅは、体重変化、生存率、及び観測の結果を要約する。ＲＨＢ−１０４での治療は、４つの腫瘍モデル全てにおいて、ＢＷＬ≦０．７％及び補正生存率１００％で良好な耐性を示した。ＰＡＸＦ ５４６腫瘍モデルは、悪液質を誘導することが知られており、ここで６．８％の中度のＢＷＬが、ベヒクル対照群において観測された。

ＲＨＢ−１０４での治療は、４つの腫瘍モデル全てにおいて、ＢＷＬ＜０．７％及び補正生存率１００％で良好な耐性を示した。

ＲＨＢ−１０４は、３匹のマウス群において、１日２回、３６ｍｇ／ｋｇの用量レベルで経口的に試験し、抗腫瘍効能を、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）群中央値に基づいて、最小Ｔ／Ｃ値として評価した。統計的有意性は、ＲＨＢ−１０４のベヒクルを受けた対照群と比較して、最小Ｔ／Ｃの日に、ＲＴＶのクラスカル・ウォリス検定によって評価した。効能実験において、治療期間は２週間継続し、その後に２週間の観測期間が続き、後に腫瘍を採取して、更なる分析のために急速冷凍した。用量設定実験において、治療を３週間継続し、その後に１週間の観測期間が続いた。用量設定研究において、ＲＨＢ−１０４の良好な耐性が観測され、３匹のマウスの群において３つの異なるレジメンでＲＨＢ−１０４を試験し、追加として、３匹のマウスの１群は、ＲＨＢ−１０４のベヒクルであるＯＲＡ−Ｐｌｕｓ（登録商標）を受けた。４群全てが、ＢＷＬ≦２．４％及び補正生存率１００％を示した。

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＬＰＳ誘導性サイトカイン生成に対するＲＨＢ−１０４の効果
この研究を行い、マウスにおけるリポ多糖（ＬＰＳ）誘導性サイトカイン生成に対する１０８ｍｇ／ｋｇで経口投与されたＲＨＢ−１０４（上に詳述される）の効果を評価した。マウスにおけるＬＰＳ誘導性サイトカイン生成モデルを一般に使用して、インビボでの炎症促進サイトカインＴＮＦ及びＩＬ−６の生成を抑制する化合物の能力を試験する。

このモデルにおいて、ＬＰＳは、腹腔内的（ｉ．ｐ．）又は静脈内的にマウスに注入される。ＬＰＳ注入の２時間後に、ＩＬ−６及びＴＮＦの濃度は、注入されたマウスの血清中でピークレベルに到達する。その時点において、抗炎症サイトカインＩＬ−１０の濃度も増加するが、ＩＬ−１０の血清濃度は、ＬＰＳ投与のおよそ６時間後にピークに達する。

３０匹の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１１週齢）に、ＲＨＢ−１０４を１回投与し、次いで１時間後にＬＰＳを注入した。ＬＰＳ注入の２時間後に、マウスから採血し、血清を単離した。血清中のサイトカイン濃度を測定した。５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与されたデキサメタゾンを、免疫応答の抑制についての正の対照として用いた。デキサメタゾンは、炎症促進サイトカインＴＮＦの生成を抑制し、ＩＬ−６は、抗炎症サイトカインＩＬ−１０の生成を増加させる。

この研究では、以下の表７に従う３群が存在した。
表７．研究設計

ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦの血清濃度を、サイトカインビーズ分析（ＣＢＡ）Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７キット（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて測定した。群間の血清中のサイトカイン濃度を、両側スチューデントｔ検定を用いて比較した。

ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γの血清濃度は、このモデルについて予想されたように、全群において検出レベルを下回っていた。ＩＬ−６、ＴＮＦ、及びＩＬ−１０の血清濃度を、以下の表８並びに図７、図８、及び図９に示す。
表８．サイトカインの血清濃度

ｐ＜０．０５

ベヒクルで治療したマウスの血清において、ＩＬ−６、ＴＮＦ、及びＩＬ−１０の濃度は、このモデルについて予想されるとおりであった（図７〜図９）。

デキサメタゾン治療群において、炎症促進サイトカインＩＬ−６及びＴＮＦの血清濃度は、予想したとおり、ベヒクルで治療した群より著しく低かった（図７及び図８）。ＩＬ−１０濃度は、ベヒクル群よりも高いが、この差は、統計的に有意でなかった（図９）。これらの結果は、デキサメタゾンが正の対照として作用したことを確認する。

ＲＨＢ−１０４で治療したマウスは、ベヒクル治療群より著しく低いＩＬ−６及びＴＮＦの血清濃度を有していた（図７及び図８）。ＩＬ−１０の濃度は、ベヒクル対照マウスと著しく異なっていなかった（図９）。

インビトロ細胞毒性アッセイ
以下の実験を行い、本開示の併用剤の可能性を、それらが膵臓癌細胞の成長又は増殖を阻害する能力について評価し、膵臓癌細胞を、有効な量の薬剤と単独で及び組み合わせて接触させ、それによって膵臓癌細胞の成長又は増殖を阻害することを含む。

本研究は、クラリスロマイシン＋リファブチン＋クロファザミン（「コンボ」）が、ＭＩＡ ＰａＣａ−２、ＰＡＮＣ−１、及びＨｓ ７６６Ｔ膵臓癌細胞株に対して、［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］（「ＡＢＣ２９４６４０」）と相乗性であるかどうかを調査した。Ｈｓ ７６６Ｔは、膵臓癌を有する６４歳男性のリンパ節転移から誘導された細胞株である。ＭＩＡ ＰａＣａ−２は、６ヶ月にわたる腹痛及び触知できる上腹部腫瘤を提示した６５歳男性の膵臓腺癌から誘導された細胞株である。ＰＡＮＣ−１は、十二指腸壁に浸潤した膵臓の頭部に腺癌を有する５６歳男性から培養した。

これらの種類の材料は、細胞生存性及び成長を刺激又は阻害すると予想されるため、ＭＴＴアッセイを一般に用いて、潜在的な医薬剤の細胞毒性を決定する。簡潔に言えば、１ウェル当たり３，０００個の細胞（１００μＬ／ウェル）を播種した。一晩経った後、アッセイ前に５０μＬの上清を各ウェルから除去した。各薬物を、最終濃度の４倍で付加した（５０μＬ中）。各ウェルの総容積は２００μＬであった。４つのウェルを対照として用い、細胞を全く含有させなかった。３７℃で３日間インキュベートした後、プレートを発達させた。２０μＬのＰｒｏｍｅｇａ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ試薬を各ウェルに付加し、３７℃でインキュベートして、４９０ｎｍでのＯＤを読み取った。ＭＴＴ試験は、死細胞においてではなく、生きた代謝的活性細胞における、テトラゾリウム塩ＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド＋＋＋］の酵素還元に基づく。この反応をマルチウェルプレートにおいて原位置で実行し、反応生成物であるジメチルスルホキシド中に溶解可能な紫色のホルマザンを、マルチウェルプレートリーダーを用いて比色測定的に測定する。
Ｈｓ ７６６Ｔの結果

ＭＩＡ ＰａＣａ−２の結果

ＰＡＮＣ−１の結果

発明者らは、ＭＴＴアッセイによって全ての３つの細胞株において試験された薬剤の相乗性抗腫瘍相互作用に対する添加剤を見出した。これらの薬剤を用いる併用療法は、これらの薬物に対する異なる癌の応答率を強化し得、より低い治療用量が投与されるのを許すことによって副作用を著しく低減し得る。これらの新規の組み合わせは、個々の薬物と比較して、毒性プロファイルを増加させることなく癌細胞成長を相乗的に減少させる。

ラットにおける腫瘍拡散、腫瘍成長、及び転移に関するｕＰＡ阻害剤プロドラッグＷＸ−６７１のインビボアッセイ
乳癌モデル
ドナー動物からの１０〜２５ｍｍ^３のＢＮ４７２乳癌の断片（Ｋｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ７２，７０９〜７１３，１９８４）を、７〜８週齢の雌の茶色ノルウェーラットの群（ｎ＝１５／群）の乳腺の脂肪体の下に移植した。腫瘍移植の７２時間後に治療を開始し、３０日後に動物を犠牲死させるまで毎日繰り返した。対照群（Ａ）は、水中の５％ エタノール、５％ Ｄ−マンニトール、及び５％ Ｔｗｅｅｎ ２０からなる０．７５ｍＬの物質不含物質担体溶液を、経管栄養によって経口的に受容した。治療群（Ｂ及びＣ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中１ｍｇ／ｋｇ（群Ｂ）又は５ｍｇ／ｋｇ（群Ｃ）のＷＸ−６７１のいずれかを、経管栄養によって経口的に受容した。比較群Ｄは、５％ Ｄ−マンニトールに溶解された１ｍｇ／ｋｇ ＷＸ−ＵＫ１を、腹腔内注入によって受けた。

播種した腫瘍の成長は、スライドゲージを用いて週２回、長さ及び幅寸法を決定した。動物を犠牲死させた後に、治療のエンドポイント、腫瘍重量、腋窩及び腹腔内リンパ節の重量、並びに巨視的な肺転移の数を決定した。

全ての実験において、ＷＸ−６７１での治療は、対照群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の大幅な低減を達成した。哺乳動物腫瘍モデルにおいて、治療の最後における平均腫瘍重量は、ＷＸ−６７１治療群において、対照と比較して６６％低減したが（経口投与）、比較阻害物質ＷＸ−ＵＫ１での腹腔内治療は、およそ５％の低減を達成しただけであった。阻害剤プロドラッグ治療群における肺病巣の数は、４２％より多く低減し（経口投与）、腋窩リンパ節の平均重量は、６３％より多く低減した（経口投与）。

体重増加の発達及び阻害剤治療群とベヒクル治療群との間の臓器重量の比較は、記載される条件下での阻害剤の考えられる相当の毒性の兆候を示さなかった。

予言的実施例−ラットにおける腫瘍拡散、腫瘍成長、及び転移に関するＳＫ２阻害剤ＡＢＣ２９４６４０及びｕＰＡ阻害剤プロドラッグＷＸ−６７１のインビボアッセイ
乳癌モデル
ドナー動物からの１０〜２５ｍｍ^３のＢＮ４７２乳癌の断片（Ｋｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ７２，７０９〜７１３，１９８４）を、７〜８週齢の雌の茶色ノルウェーラットの群（ｎ＝１５／群）の乳腺の脂肪体の下に移植する。腫瘍移植の７２時間後に治療を開始し、３０日後に動物を犠牲死させるまで毎日繰り返す。対照群（Ａ）は、水中の５％ エタノール、５％ Ｄ−マンニトール、及び５％ Ｔｗｅｅｎ ２０からなる０．７５ｍＬの物質不含物質担体溶液を、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｂ及びＣ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中５０ｍｇ／ｋｇ（群Ｂ）又は１００ｍｇ／ｋｇ（群Ｃ）のＡＢＣ２９４６４０のいずれかを、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｄ及びＥ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中１ｍｇ／ｋｇ（群Ｄ）又は５ｍｇ／ｋｇ（群Ｅ）のＷＸ−６７１のいずれかを、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｆ及びＧ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中１ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を、５０ｍｇ／ｋｇのＡＢＣ２９４６４０と共に（群Ｆ）、又は０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中５ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を、１００ｍｇ／ｋｇのＡＢＣ２９４６４０と共に（群Ｇ）、経管栄養によって経口的に受容する。

播種された腫瘍の成長は、スライドゲージを用いて週２回、長さ及び幅寸法を決定する。動物を犠牲死させた後に、治療のエンドポイント、腫瘍重量、腋窩及び腹腔内リンパ節の重量、並びに巨視的な肺転移の数を決定する。

ＷＸ−６７１及びＡＢＣ２９４６４０の組み合わせによる治療は、いずれかの薬剤を単独で受容する治療群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の大幅な低減を達成すると考えられる。いくつかの実施形態において、併用療法は、いずれかの薬剤を単独で受容する治療群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の約１０％以上の低減、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９９％以上の低減をもたらす。

予言的実施例−ラットにおける腫瘍拡散、腫瘍成長、及び転移に関するｕＰＡ阻害剤プロドラッグＷＸ−６７１及びクラリスロマイシンのインビボアッセイ
乳癌モデル
ドナー動物からの１０〜２５ｍｍ^３のＢＮ４７２乳癌の断片（Ｋｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ７２，７０９〜７１３，１９８４）を、７〜８週齢の雌の茶色ノルウェーラットの群（ｎ＝１５／群）の乳腺の脂肪体の下に移植する。腫瘍移植の７２時間後に治療を開始し、３０日後に動物を犠牲死させるまで毎日繰り返す。対照群（Ａ）は、水中の５％のエタノール、５％のＤ−マンニトール、及び５％のＴｗｅｅｎ ２０からなる０．７５ｍＬの物質不含物質担体溶液を、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｂ及びＣ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中１ｍｇ／ｋｇ（群Ｂ）又は５ｍｇ／ｋｇ（群Ｃ）のＷＸ−６７１のいずれかを、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｄ及びＥ）は、１０ｍｇ／ｋｇ／日（群Ｄ）又は５０ｍｇ／ｋｇ／日（群Ｅ）ＣＡＭのいずれかを、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｆ及びＧ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中１ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を、１０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＡＭと共に（群Ｆ）、又は０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中５ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を、５０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＡＭと共に（群Ｇ）、経管栄養によって経口的に受容する。

播種された腫瘍の成長は、スライドゲージを用いて週２回、長さ及び幅寸法を決定する。動物を犠牲死させた後に、治療のエンドポイント、腫瘍重量、腋窩及び腹腔内リンパ節の重量、並びに巨視的な肺転移の数を決定する。

ＷＸ−６７１及びＣＡＭの組み合わせによる治療は、いずれかの薬剤を単独で受容する治療群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の大幅な低減を達成すると考えられる。

いくつかの実施形態において、併用療法は、いずれかの薬剤を単独で受容する治療群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の約１０％以上の低減、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９９％以上の低減をもたらす。

予言的実施例−ラットにおける腫瘍拡散、腫瘍成長、及び転移に関するＳＫ２阻害剤ＡＢＣ２９４６４０及びクラリスロマイシンのインビボアッセイ
乳癌モデル
ドナー動物からの１０〜２５ｍｍのＢＮ４７２乳癌の断片（Ｋｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ７２，７０９〜７１３，１９８４）を、７〜８週齢の雌の茶色ノルウェーラットの群（ｎ＝１５／群）の乳腺の脂肪体の下に移植する。腫瘍移植の７２時間後に治療を開始し、３０日後に動物を犠牲死させるまで毎日繰り返す。対照群（Ａ）は、水中の５％のエタノール、５％のＤ−マンニトール、及び５％のＴｗｅｅｎ ２０からなる０．７５ｍＬの物質不含物質担体溶液を、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｂ及びＣ）は、０．７５ｍＬの物質担体溶液の体積中５０ｍｇ／ｋｇ（群Ｂ）又は１００ｍｇ／ｋｇ（群Ｃ）のＡＢＣ２９４６４０のいずれかを、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｄ及びＥ）は、１０ｍｇ／ｋｇ／日（群Ｄ）又は５０ｍｇ／ｋｇ／日（群Ｅ）ＣＡＭのいずれかを、経管栄養によって経口的に受容する。治療群（Ｆ及びＧ）は、５０ｍｇ／ｋｇのＡＢＣ２９４６４０を、１０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＡＭと共に（群Ｆ）、又は１００ｍｇ／ｋｇのＡＢＣ２９４６４０を、５０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＡＭと共に（群Ｇ）、経管栄養によって経口的に受容する。

播種された腫瘍の成長は、スライドゲージを用いて週２回、長さ及び幅寸法を決定する。動物を犠牲死させた後に、治療のエンドポイント、腫瘍重量、腋窩及び腹腔内リンパ節の重量、並びに巨視的な肺転移の数を決定する。

ＡＢＣ２９４６４０及びＣＡＭの組み合わせによる治療は、いずれかの薬剤を単独で受容する治療群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の大幅な低減を達成すると考えられる。

いくつかの実施形態において、併用療法は、いずれかの薬剤を単独で受容する治療群と比較して、寸法、及びそれぞれ、腫瘍の重量と数、及びそれぞれ、転移の質量の約１０％以上の低減、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９９％以上の低減をもたらす。

結腸癌モデルＣＣ５３１におけるＷＸ−６７１の有効性のインビボ試験
ＷＸ−６７１の抗腫瘍効能は、移植可能なラット結腸癌ＣＣ５３１を用いて明示された。６〜７週齢の雌の動物（ｎ＝１８／群、体重範囲１００〜１３０ｇ）は、腫瘍播種後３日目以降に０．０３、０．３、又は３．０ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を受容した。対照動物は、ベヒクル（水中の５％エタノール、５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、５％ Ｄ−マンニトール）を受容した。腫瘍移植から７週間後に動物を死亡させ、原発腫瘍重量及び転移エンドポイントに関して評価した。

ベヒクル群に対する治療群の最終腫瘍重量中央値は、０．０３ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を受容した群において変化せず、０．３ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を受容した群では６％と有意に低減せず、３ｍｇ／ｋｇで治療した群では１５％と有意に低減した（ｐ＝０．０１５）。しかしながら、０．３ｍｇ／ｋｇ群及び３．０ｍｇ／ｋｇ群における終端腫瘍寸法の差は有意でなかった。転移エンドポイントに関して、巨視的な肺病巣数の中央値は、それぞれ０．０３、０．３、及び３．０ｍｇ／ｋｇを受容する治療群における対照に対して３７％、６４％、及び５７％と有意に低減した（Ｐ＜０．０００１）。腹腔内リンパ節重量中央値は、３つの治療群における対照に対して３１％、４１％、及び４６％低減し、後者２つの低減は、統計的に有意であった（Ｐ＜０．００１）。

巨視的な肺病巣数の非常に有意な低減は、全ての治療群において明らかであり、最低用量（０．０３ｍｇ／ｋｇ、３７％の低減）が最も効能が低い。０．３ｍｇ／ｋｇにおいて、効果は最大であり（６４％の低減）、１０倍用量、すなわち３．０ｍｇ／ｋｇのＷＸ−６７１を受容した群において改善されなかった（５７％の低減）。同様のパターンは、腹腔内リンパ節の重量に関して明らかであった。０．０３ｍｇ／ｋｇで３１％（有意でない）、中間及び高い用量レベルでそれぞれ４１％及び４６％の重量低減中央値が達成された。

膵臓腺癌モデルＣＡ２０９４８におけるＷＸ−６７１の有効性のインビボ試験
ＷＸ−６７１の抗腫瘍効能は、転移性ラット膵臓腫瘍モデルＣＡ２０９４８においてアッセイした。１８匹のラットの群に、ドナーラットから採取した固形腫瘍から調製した腫瘍細胞懸濁液の腹腔内注入によって腫瘍を播種した。

このモデルにおいて、腹腔内移植された細胞は、膵臓に遊走して膵臓と密接に関連した膵臓腫瘍を形成する。３週間以内に、腫瘍は典型的に肝臓まで広がり、数えることができる転移病巣を形成する。０．０３、０．３、及び３．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの１日１回の治療は、３日目以降に経口的に適用された。１つの群は、対照としてベヒクルを受容し、１つの群は、腹腔内注入によって０．３ｍｇ／ｋｇのＷＸ−ＵＫ１を受容した。

以下の表は、対照に対する腫瘍エンドポイント中央値のそれぞれの低減率を列挙する。全ての治療スケジュールは、最終の腹腔内移植された腫瘍＋膵臓質量に対して、及び対照と比較した巨視的肝臓病巣に対して非常に有意な効果を有していた。肝臓転移の低減は、用量依存的であると思われた。

治療が肝臓病巣数だけでなく転移病巣の成長率にも影響を及ぼすかどうか評価するために、様々な群における大きな転移（２ｍｍ超）の相対量を評価した。大きな肝臓病巣のパーセンテージは、大きな病巣の数を肝臓上で検出された総病巣数で除することによって決定した。結果を以下の表に列挙する。ベヒクル群において、大きな転移のパーセンテージは、３０．７％であったが、治療群において、大きな肝臓病巣のパーセンテージは、均一に小さくなった。これは、ＷＸ−６７１（及びＷＸ−ＵＫ１）での治療が、肝臓病巣の数を低減しただけでなく、転移病巣の成長率に対して阻害活性も有し得ることを示す。

０．３ｍｇ／ｋｇの腹腔内ＷＸ−ＵＫ１の抗腫瘍効能は、同じ用量以上の経口ＷＸ−６７１の効能と同様であった。

ＡＢＣ２９４６４０の細胞毒性プロファイル
無傷の細胞におけるＡＢＣ２９４６４０の生物学的効能を評価するために、ＡＢＣ２９４６４０を、ヒト癌細胞株を用いて細胞毒性について評価した。これらの実感は包括的に用いられてきた方法に従った。試験された細胞株には、ＭＣＦ−７ヒト乳腺癌細胞及びＭＣＦ−１０Ａ非形質転換ヒト乳腺上皮細胞が含まれる。示された細胞株を、異なる用量のＡＢＣ２９４６４０で４８時間処置した。次いで細胞生存率を、ＳＲＢ結合アッセイを使用して決定し（Ｓｋｅｈａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ８２：１１０７）、増殖を５０％阻害した（ＩＣ_５０）ＡＢＣ２９４６４０の濃度を算出した。ＭＣＦ−７ヒト乳腺癌細胞において、ＩＣ_５０は１７μＭであった（複製治験の平均±標準偏差を表す）。ＭＣＦ−１０Ａ非形質転換ヒト乳腺上皮細胞において、ＩＣ_５０は２１μＭであった（複製治験の平均±標準偏差を表す）。ＡＢＣ２９４６４０は、マイクロモル以下〜低マイクロモルにおいて抗増殖性である。形質転換ＭＣＦ−７細胞は、非形質転換ＭＣＦ−１０Ａ細胞より著しく感受性が高かった。これは、ＡＢＣ２９４６４０が、患者において正常細胞に対する毒性を誘導することなく、腫瘍細胞の成長を阻害することを示す。全体的に、データは、ＡＢＣ２９４６４０が、無傷の細胞に進入し、それらの増殖を予防可能であることを明示した。

ＡＢＣ２９４６４０の抗癌活性の調査
上に提供されたデータは、ヒト乳癌細胞の増殖を阻害するＡＢＣ２９４６４０の能力を明示する。抗癌の範囲を調べるために、いくつかの主要な腫瘍型を表す様々なヒト腫瘍細胞株のパネルに対するＡＢＣ２９４６４０の化学療法能を決定した。データを以下に記載し、ＡＢＣ２９４６４０が、多様な癌に対して抗癌活性を有することを明示する。

まばらに播種した細胞を、ＳＫ阻害剤で４８時間処置し、スルホローダミンＢ染色を用いて細胞生存性を決定し、ベヒクル（ＤＭＳＯ）処置細胞と比較した。
値は、少なくとも３つの個別の実験の平均±標準偏差である。

ＡＢＣ２９４６４０のインビボ毒性
ＡＢＣ２９４６４０は、ＤＭＳＯ：腹腔内（ＩＰ）投与の場合ＰＢＳ、又は経口投与の場合ＰＥＧ４００中に少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ（約３０〜４０ｍＭ）まで溶解可能であることが見出された。ＩＰ投与を用いる急性毒性研究は、少なくとも５０ｍｇ／ｋｇまでのＡＢＣ２９４６４０で治療されたスイス・ウェブスターマウスにおいて即時又は遅延毒性を明示しなかった。同じマウスにおける１５日にわたる１日おきの繰り返し注入は、同様の毒性の欠失を示した。ＡＢＣ２９４６４０もまた、顕著な毒性なしに少なくとも１００ｍｇ／ｋｇまでの用量でマウスに経口投与され得る。

ＡＢＣ２９４６４０の抗腫瘍活性
ＡＢＣ２９４６４０の抗腫瘍活性は、免疫適格性Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて皮下的に成長するマウスＪＣ乳腺癌細胞株を用いる相乗腫瘍モデルを用いて評価した（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｓ １４：４９）。これらの細胞は、非形質転換細胞に対して上昇レベルのＳＫ活性、並びにＰ−糖タンパク質活性に起因する多剤耐性表現型を表す。

６〜８週齢のＢａｌｂ／ｃマウスに、リン酸緩衝生理食塩水に懸濁された１０^６ ＪＣ細胞を皮下注入した。ＡＢＣ２９４６４０をＰＥＧ４００に溶解し、１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日おきにマウスに投与した。体重及び腫瘍体積を毎日モニタリングした。ＡＢＣ２９４６４０で治療した動物における腫瘍成長は、対照動物における腫瘍成長より著しく低かった（１６日目に７０％超減少した）。ＡＢＣ２９４６４０は、対照に対して６９％腫瘍成長を阻害した。ＡＢＣ２９４６４０での用量応答研究は、３５ｍｇ／ｋｇ以上の用量で経口投与された場合、化合物が抗腫瘍活性を有することを明示した。

ＢＶＤＵの同時投与による、細胞増殖抑制剤での治療に対するヒト及び動物腫瘍細胞における「多剤耐性」（ＭＤＲ）の形成の予防
ヒト腫瘍細胞株Ｋ５６２−ＷＴ及びマウスの腫瘍細胞株Ｆ４６−ＷＴ（ＷＴ＝野生型＝細胞増殖抑制治療に対して感受性＝ＭＤＲ遺伝子の増殖なし）を、逓増濃度のアドリアマイシンで数週間にわたって治療する。治療中に、細胞はこの治療に対する耐性を獲得する。非耐性細胞では、４日の治療時間における２０ｎｇ／ｍＬのアドリアマイシンは、重度の毒性効果を有し、逓増濃度での長期治療後の細胞は、２０ｎｇ／ｍＬのアドリアマイシンに対して完全に非感受性になる。耐性の形成は、ＭＤＲ遺伝子の増殖に基づいている。０．５μｇ／ｍＬ又は１μｇ／ｍＬいずれかのＢＶＤＵが共に与えられるアドリアマイシンでの平行実験において（ＢＶＤＵは、ヒト腫瘍細胞において、約１０μｇ／ｍＬからのみ毒性様式で作用し、マウス細胞において約８μｇ／ｍＬから作用する）、ＢＶＤＵは、アドリアマイシンに対する耐性の形成を予防する。腫瘍細胞は、依然として細胞増殖抑制治療に対して感受性であり、死滅する。ＢＶＤＵの効果はあまりに強力であり、休止期（物質なしの成長）によって治療を中断しなければならないため、実験は６〜８週間に及ぶ。

ＢＶＤＵ＋アドリアマイシン治療は、アドリアマイシン治療単独よりも大幅に弱いＭＤＲ遺伝子の増殖につながる。治療の最後に、アドリアマイシン治療に対して少なくともある程度の耐性を獲得した細胞のみが残る。ＢＶＤＵ治療の結果として非耐性のままであった細胞は、既に死滅していた。

ヒト腫瘍における細胞増殖抑制治療に対する耐性の形成も同様に、ＭＤＲ遺伝子の増殖に基づいているため、ＢＶＤＵと任意選択の細胞増殖抑制剤との組み合わせは、以前よりも低用量かつ長期間にわたって治療を実行する可能性を提供する。

抗組み換え誘導のＢＶＤＵの同時投与による、細胞増殖抑制治療に対する腫瘍細胞における「多剤耐性」（ＭＤＲ）の形成の予防
マウスの腫瘍細胞株Ｆ４−６−ＷＴ（ＷＴ＝野生型＝細胞増殖抑制治療に対して感受性＝ＭＤＲ遺伝子の増殖なし）を、逓増濃度のアドリアマイシンで数週間にわたって治療する。治療中に、細胞はこの治療に対する耐性を獲得する。４日の治療時間における２０ｎｇ／ｍＬのアドリアマイシンは、非耐性細胞に対して極めて毒性の効果を有し、逓増濃度での長期治療後の細胞は、２０ｎｇ／ｍＬのアドリアマイシンに対して完全に非感受性になる。耐性の形成は、ＭＤＲ遺伝子の増殖に基づいている。β−アクチンＭＲＮＡのレベルも同様に、比較として分析し、β−アクチンをＲＮＡ量の内部対照として用いる。

平行実験において、アドリアマイシンは、１μｇ／ｍＬのＢＶＤＵと共に投与され、アドリアマイシンに対する耐性の形成を予防する。腫瘍細胞は、依然として細胞増殖抑制治療に対して感受性であり、死滅する。ＢＶＤＵの効果はあまりに強力であり、休止段階（物質なしの成長）によって治療を中断しなければならないため、実験は６〜８週間に及ぶ。

ＢＶＤＵ治療は、化学療法誘導性アポトーシスに対するＡＨ１３ｒ肉腫細胞の感受性を増加させる。この効果は、いわゆる回復段階における細胞増殖抑制剤の中断後も維持される。
ＡＨ１３ｒ細胞は、漸増用量の細胞増殖抑制剤ミトマイシンＣ（ＭＭＣ）を受けた。ＢＶＤＵは、単独で与えられると、毒性効果を示さなかった。ＭＭＣ＋ＢＶＤＵ治療は、３つの治療サイクル後、ＭＭＣ単独での治療と比較して、細胞数の低減をもたらした。この阻害効果は、いわゆる回復段階において、次のサイクルでの細胞増殖抑制剤の中断後も維持された。ＭＭＣ及びＢＶＤＵなしの細胞は、阻害なしに成長し続けた。しかしながら、ＢＶＤＵを受容し続けた細胞は、それらの成長が著しく阻害された。対応する結果は、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ドキソルビシン（ＤＯＸ）、及びミトキサントロン（ＭＸＡ）で達成された。細胞数の低減がアポトーシスに基づいているという兆候は、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８／ヨウ化プロピジウム（Ｈｏｐｉ）二重彩色によって検出された。

予言的実施例：本発明の化合物をスクリーニングして細胞周期及び細胞生存性に対する効果を決定する
この研究のねらいは、ヒト癌細胞株における細胞周期及び細胞生存性に対する本発明の薬剤の効果を決定することである。ヒト癌細胞株を、様々な濃度の各薬剤で４８、７２、及び９６時間にわたって個々に処理する。細胞生存性は、当該技術分野において既知の技法を用いてモニタリングする。例えば、細胞生存性は、細胞生存性をモニタリングするための均質な蛍光ベースの方法を提供する、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）細胞生存性アッセイ（＃Ｇ８０８１，Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて評価され得る。細胞周期は、フローサイトメトリーを用いて分析することができ、アポトーシス細胞は、終端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介型ｄＵＴＰニックラベリング（ＴＵＮＥｌ）によって、及びＤＡＰＩによって特定され得る。

予言的実施例：本発明の化合物をスクリーニングしてサイトカイン生成に対する効果を決定する
この実験において、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、及びＴＮＦαのうちの少なくともいくつかを含む、広範囲のサイトカインのレベルを、ヒト癌細胞株上清において、市販のＥＬＩＳＡキットを用いてモニタリングする。より具体的には、ヒト癌細胞株が、本発明の薬剤と共に様々な濃度で播種された後にサイトカインを生成するそれらの能力の下方調節を示すかどうかを確認する。

薬物の組み合わせに基づく癌患者の治療のための新規戦略が本明細書に開示される。

癌の治療に用いるための５位置換ヌクレオシド及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）５位置換ヌクレオシドを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の期間が重なる。一実施形態において、５位置換ヌクレオシドは、ブリブジンである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

５位置換ヌクレオシド及びクロファザミンの組み合わせ。この場合、（ａ）５位置換ヌクレオシドを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）クロファザミンを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の期間が重なる。一実施形態において、５位置換ヌクレオシドは、ブリブジンである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるための５位置換ヌクレオシド、クロファザミン、及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）５位置換ヌクレオシドを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）クロファザミンを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｃ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びにｄ）ａ）及びｂ）の期間が重なる。一実施形態において、５位置換ヌクレオシドは、ブリブジンである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるための５位置換ヌクレオシド、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤、及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）５位置換ヌクレオシドを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｃ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）の期間が重なる。一実施形態において、５位置換ヌクレオシドは、ブリブジンである。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、ＡＢＣ２９４６４０である。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるための５位置換ヌクレオシド、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤、ウロキナーゼ阻害剤、及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）５位置換ヌクレオシドを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｃ）ウロキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｄ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びにｅ）ａ）、ｂ）、ｃ）、及びｄ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、５位置換ヌクレオシドは、ブリブジンである。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、ＡＢＣ２９４６４０である。一実施形態において、ウロキナーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるためのスフィンゴシンキナーゼ阻害剤及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。及び（ｂ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、ＡＢＣ２９４６４０である。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるためのウロキナーゼ阻害剤及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。及び（ｂ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、ウロキナーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるためのスフィンゴシンキナーゼ阻害剤、クロファザミン、及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）クロファザミンを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｃ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びにｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）の期間が重なる。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、ＡＢＣ２９４６４０である。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

スフィンゴシンキナーゼ阻害剤及びクロファザミンの組み合わせ。この場合、（ａ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）クロファザミンを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の期間が重なる。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、ＡＢＣ２９４６４０である。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるためのスフィンゴシンキナーゼ阻害剤、ウロキナーゼ阻害剤、及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）ウロキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｃ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びにｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤は、ＡＢＣ２９４６４０である。一実施形態において、ウロキナーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるためのウロキナーゼ阻害剤及びクロファザミンの組み合わせ。この場合、（ａ）ウロキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。及び（ｂ）クロファザミンを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、ウロキナーゼ阻害剤は、アパモスタットである。

癌の治療に用いるためのウロキナーゼ阻害剤、少なくとも１種の抗生物質、及びクロファザミンの組み合わせ。この場合、（ａ）ウロキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｂ）少なくとも１種の抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。（ｃ）クロファザミンを１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びにｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、ウロキナーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

癌の治療に用いるためのウロキナーゼ阻害剤及び少なくとも１種の抗生物質の組み合わせ。この場合、（ａ）スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。及び（ｂ）抗生物質を１つ以上の用量で患者に投与して、少なくとも１週間の期間にわたって治療上有効な血漿レベルを確立する。並びに（ｃ）ａ）及びｂ）の前述の期間が重なる。一実施形態において、ウロキナーゼ阻害剤は、アパモスタットである。一実施形態において、少なくとも１種の抗生物質は、殺菌性抗生物質又はマクロライド抗生物質のうちの１つから選択される。一実施形態において、細菌性抗生物質は、リファブチンである。一実施形態において、マクロライド抗生物質は、クラリスロマイシンである。一実施形態において、組成物は、クロファザミンを更に含む。一実施形態において、組成物は、化学療法剤、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、免疫毒性剤、及び放射線療法からなる群から選択される少なくとも１つの抗癌剤を更に含む。

Claims (13)

1. （ｉ）構造（Ｉ）の化合物
   

   

   又はその薬学的に許容される塩と、
   （ｉｉ）構造（ＩＩ）の化合物
   

   

   又はその薬学的に許容される塩と、
   （ｉｉｉ）構造（ＩＶ）の化合物
   

   

   又はその薬学的に許容される塩とを含む、癌の治療、又は癌の再発若しくは進行の予防を、それを必要とするヒトにおいて行うための組み合わせ医薬。
2. 癌の治療、又は癌の再発若しくは進行の予防を、それを必要とするヒトにおいて行うための薬剤であって、治療上有効な量の（ｉ）少なくとも１種の抗生物質であって、前記少なくとも１種の抗生物質が、クロファジミンであるもの、（ｉｉ）アリールアダマンタン化合物であって、前記アリールアダマンタン化合物が、［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］であるもの、及び（ｉｉｉ）セリンプロテアーゼ阻害剤であって、前記セリンプロテアーゼ阻害剤が、（Ｓ）−エチル４−（３−（３−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）フェニル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホンアミド）プロパノイル）ピペラジン−１−カルボキシレートであるものを、同時に又は順次ヒトに投与することを特徴とする、薬剤。
3. 前記少なくとも１種の抗生物質、前記アリールアダマンタン化合物及び前記セリンプロテアーゼ阻害剤が、同時に投与される、請求項２に記載の薬剤。
4. 前記少なくとも１種の抗生物質、前記アリールアダマンタン化合物及び前記セリンプロテアーゼ阻害剤が、順次投与される、請求項２に記載の薬剤。
5. 前記癌が、固形腫瘍である、請求項２に記載の薬剤。
6. 前記固形腫瘍が、肺癌、肺転移、結腸癌、及び膵管腺癌からなる群から選択される、請求項５に記載の薬剤。
7. 抗新生物剤を前記ヒトに投与することを更に含む、請求項２に記載の薬剤。
8. 免疫調節剤を前記ヒトに投与することを更に含む、請求項２に記載の薬剤。
9. 免疫チェックポイント阻害剤を前記ヒトに投与することを更に含む、請求項２に記載の薬剤。
10. マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を前記ヒトに投与することを更に含む、請求項２に記載の薬剤。
11. 癌における癌細胞の成長又は増殖を阻害する薬剤であって、癌細胞を、有効な量の少なくとも１種の抗生物質、有効な量のアリールアダマンタン化合物及び有効な量のセリンプロテアーゼ阻害剤と接触させ、それにより前記癌細胞の前記成長又は増殖を阻害することを特徴とし、前記少なくとも１種の抗生物質が、クロファジミンであり、前記アリールアダマンタン化合物が、［３−（４−クロロフェニル）−アダマンタン−１−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド］であり、前記セリンプロテアーゼ阻害剤が、（Ｓ）−エチル４−（３−（３−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）フェニル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホンアミド）プロパノイル）ピペラジン−１−カルボキシレートである、薬剤。
12. 前記癌細胞が、膵臓癌細胞である、請求項１１に記載の薬剤。
13. 前記癌細胞の代謝活性が、インビトロ細胞増殖アッセイを用いて測定されるものである、請求項１１に記載の薬剤。

Images