KR20070079637A - 자색고구마 색소 추출물을 포함하는 간 질환의 예방 및치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 간질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 아세트아미노펜과 같은 간 손상을 유발하는 화학물질의 대사에 관여된 간의 약물대사 효소인 시토크롬 P450의 효소들 (P450 1A1, P450 2E1)의 활성을 억제하고, 간 손상을 유발시키는 화학물질의 대사체의 포합반응을 통한 체외 방출을 촉진하는 해독효소를 증가시킴으로써, 간질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

자색고구마 색소 추출물, 간질환

Description

자색고구마 색소 추출물을 포함하는 간 질환의 예방 및 치료용 조성물{Composition comprising the extract of Purple-Fleshed sweet potato for treating and preventing liver diseases}

도 1은 자색고구마 색소 추출물이 간 손상 유발물질(아세트아미노펜)에 의해 손상된 간의 보호효과를 ALT와 AST의 활성으로 나타낸 도이며,

도 2는 자색고구마 색소 추출물을 처리한 실험동물의 간의 지질과산화 수준을 나타낸 도이고,

도 3은 자색고구마 색소 추출물을 처리한 실험동물의 간 조직 내 글루타티온 양을 나타낸 도이며,

도 4는 자색고구마 색소 추출물을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀 내의 시토크롬 P450 1A1 효소의 활성을 나타낸 도이고,

도 5는 자색고구마 색소 추출물을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀 내의 시토크롬 P450 2E1 효소의 활성을 나타낸 도이며,

도 6은 자색고구마 색소 추출물을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀을 이용하여 웨스턴 블롯을 수행한 도이고,

도 7은 정상 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀 내의 세포외 활성실험(in vitro)에서의 시토크롬 P450 1A1 효소의 활성에 대한 자색고구마 색소 추출물의 영 향을 나타낸 도이며,

도 8은 시토크롬 P450 1A1 효소를 유도하는 베타-나프타플라본을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀에서 세포외 활성실험에서의 자색고구마 색소 추출물의 시토크롬 P450 1A1 효소의 활성 저해 효과를 나타낸 도이고,

도 9는 정상 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀 내의 세포외 활성실험에서의 시토크롬 P450 2E1 효소의 활성에 대한 자색고구마 색소 추출물의 효소 활성 억제 효과를 나타낸 도이며,

도 10은 시토크롬 P450 2E1 효소를 유도하는 피리딘을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀에서 세포외 활성실험에서의 자색고구마 색소 추출물의 시토크롬 P450 2E1 효소의 활성 저해 효과를 나타낸 도이고,

도 11은 자색고구마 색소 추출물을 처리한 간에서 분리한 마이크로좀 내의 글루타티온-S-트란스페라제 효소활성을 나타낸 도이다.

본 발명은 간질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 함유하는 간질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

간 보호 활성에 관한 연구는 주로 두 가지 경로에 초점을 맞추어 이루어진 다. 한 가지는 사염화탄소 (CCl₄), 아세트아미노펜 (acetaminophen), 티오아세트아마이드 (thioacetamide), 타크린 (tacrine), 그리고 루브라톡신 B (rubratoxin B)와 과산화수소 (H₂O₂)와 같은 독성 간독소의 해독반응 뿐만 아니라, 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제 (superoxide dismutase), 카탈라아제 (catalase), 그리고 글루타치온 퍼록시다아제 (glutathione peroxidase)와 같은 신체 항산화 방어계를 함께 평가하는 것이고 다른 하나는 간 손상에 의해 방출된 혈청 글루타메이트 피루베이트 아미노기 전이효소 (serum glutamate pyruvate transaminase; GPT, alanine amino transferase; ALT)와 혈청 글루타메이트 옥살로아세테이트 아미노기전이효소 (serum glutamate oxaloacetate transaminase; GOT, aspartate alanine amino transferase; AST)를 포함하는 혈청조절효소의 수준과 활성을 평가하는 것이다. 시토크롬 P450 (Cytochrome P450) 시스템과 관련된 사염화탄소 (CCl₄) 물질대사인 트리클로로메틸 프리 라디칼 (trichloromethyl free radical, CCl₃·)과 트리클로로메틸퍼록시 라디칼 (trichloromethyl peroxy radicals, CCl₃OO·)같은 자유 라디칼 (free radicals)에 대한 소거 그리고/또는 억제활성은 산화 방지에 대한 세포기관과 세포막에서의 간 보호 활성과 연관 지을 수 있을 것이다(Hsiao et al., J. Agric. Food Chem., 51, pp 3302-3308, 2003 ; Song et al., J. Agric. Food Chem., 51, pp 1571-1577, 2003).

아세트아미노펜(Actaminophen)은 현재 새로운 간보호제 또는 치료제의 효과 를 검증하기 위한 표준적인 간독성 유발물질로 널리 이용되고 있다(D. J. Jollow et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 187, pp 195-202, 1973 ; J. R. Mitchell et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 187, pp 185-194, 1973). 아세트아미노펜은 치료적 용량으로 사용할 때 효과적인 해열, 진통제이지만, 과 용량으로 복용할 때에는 치명적인 간 손상을 유발하는 것으로 알려져 있다(B. H. Rumack, Hepatology 40, pp 10-15, 2004 ; W. M. Lee, Hepatology 40, pp 6-9, 2004). 아세트아미노펜의 과량복용에 따른 치명상은 광범위한 간세포의 괴사(Necrosis)를 특징으로 하는 이차적인 간 손상으로 설명된다(D. Zakin et al., Hepatology, W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA, pp 759-762, 1990). 이러한 독성은 아세트아미노펜이 간에서 시토크롬(cytochrome) P450에 의해 활성화된 부산물인 NAPQI (N-acetyl-p-benzoquinone imine)로 대사되고, 이 대사체가 간조직의 손상 및 괴사를 유발하여 발생한다.

아세트아미노펜이 치료적 용량으로 투여될 때 NAPQI는 GSH(glutathione)에 의해 효과적으로 해독화 되지만, 과량이 투여될 때에는 세포내 GSH가 고갈되어 NAPQI는 배설되지 못하고 인체 내 장기, 특히 간 조직에서 독성 작용을 나타낸다(J. D. Gibson et al., Chem. Res. Toxicol. 9, pp 580-585, 1996). 이에 따라 아세트아미노펜 유발성 간독성의 가장 특징적인 조직학적 지표인 간 중심 정맥주위 세포괴사(Hepatic Central Necrosis)를 나타내고, 간세포의 퇴화(Degeneration) 및 염증세포의 출현을 일으킨다(D. Zakin et al., Hepatology, W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA, pp 759-762, 1990). 또한 APAP를 과량 투여할 때 간 손상을 가장 특이적으로 나타내는 혈액학적 지표로서 ALT(Alanine aminotransferase)와 일반적 세포괴사를 지표하는 LDH (Lactate dehydrogenase)활성이 상승한다. 나아가, 인체 세포내 GSH가 고갈되어 있는 상황에서 아세트아미노펜을 과 복용하게 되면, 아세트아미노펜의 대사체인 NAPQI가 과량으로 생성되어 더욱 강력한 간 손상을 유발한다(J. D. Gibson et al., Chem. Res. Toxicol. 9, pp 580-585, 1996). 정상적인 상태에서 인체 GSH의 농도는 일정하게 유지되지만, 특별한 병적상황에서는 GSH 농도가 급격히 하락하여 독성물질에 대한 인체의 감수성을 증가시킨다(E. Y. Park et al., Chem. Biol. Interact. 155, pp 82-96, 2005). 이와 유사하게, 생체 GSH 농도가 감소할 때에는 바이러스 감염에 의한 간 손상도 증폭된다. 이러한 사실은 만성 HBV 또는 HCV 감염 환자의 간 조직 괴사가 생체 GSH의 감소를 수반하는 발견에 의해 뒷받침 된다(T. Tanyalcin et al., Hepatol. Res. 18, pp 104-109, 2000).

본 분야의 종래 기술에서는 일반적으로, 아세트아미노펜 독성의 치료를 위하여 NAC(N-acetylcysteine)이 거의 유일하게 사용되고 있는 약물이다. 따라서 NAC보다 더욱 효율적인 다른 대체약물의 개발이 시급한 실정이다.

한편, 자색고구마 (자미고구마; Purple-Fleshed sweet potato)는 1993년 가공용 다수성 품종 건미를 모본으로하고 자색 색소를 함유한 야마까와무라사끼를 부본으로 인공 교배하여 그 후대인 실생 개체선발 및 계통선발시험에서 색소용으로 선발된 계통(MI9308-11, 색소원료용 자색고구마의 평가방법과 육종 (1994. Kinnosuke Odake 등 8인, 일본) 기술보고 41(4), 287~293)으로, 생산력검정시험과 지역적응시험(목포29호)에서 다수성이 확인되어 품종교배를 통해 지난 1998년 자미, 2000년 보라미, 2001년에 신자미 등 3가지 신품종으로 육성되었다. 이들 신품종은 야생 고구마의 고유 성분은 모두 간직하고 있으면서 크기는 일반 고구마와 비슷한 반면 수확량은 야생보다 2배 이상 많고, 고구마 고유의 당질과 섬유소를 가지고 있다는 장점을 지니고 있다.

이러한 자색고구마의 주요 활성성분은 플라보노이드계의 색소인 안토시아닌으로 항산화작용(J Agric. Food Chem. 51, pp 628-633, 2003; J Nat. Prod. 62, p 802, 1999; J Med. Food. 4 pp 211-218, 2001), 항 당뇨(J Agric Food Chem. 49, pp 1948-1951, 2001), 항암작용(Cancer Lett. in press pp 1-12, 2005) 효과 등이 있는 것으로 보고되어 있다. 자색고구마의 색소추출물은 생체 중량대비 약 3.8 %를 함유하고 있어 표피층뿐만 아니라 육질 전체가 진한 자색을 띠고 있는데, 이 기능성 색소함량이 크린베리 보다는 10-60배, 포도보다는 5-7배 높아 천연 기능성 색소 원뿐만 아니라 기능성 식품소재로서 가치가 우수하다.

이에 본 발명은 안전하고 독성이 없는 천연물로부터 간 손상을 예방하고 만성 간 손상에 의한 간경화나 간질병을 치료하기 위한 소재를 찾던 중 자색고구마 색소 추출물이 간 내외부에서 유입되는 아세트아미노펜과 같은 간 손상을 유발시키는 화학물질의 대사에 관여하는 특정 시토크롬 P450 1A1 및 2E1 효소의 활성을 억제하면서 이들 화학물질의 대사에 의해 형성되는 유독성 화학물질 대사체의 체외 배출을 촉진하는 글루타티온-S-트란스페라제의 효소활성을 증가시키는 효과로 간독성을 억제함을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 간질환에 효과적인 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학조성물 및 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.

상기 자색고구마는 자미(목포 29호), 보라미(목포 35호), 신자미(목포 38호)의 품종인 것을 포함한다.

상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 등과 같은 극성용매 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.

상기 간질환은 자가 면역성 간질환, 약물유인성 간질환, 알코올성 간질환, 감염성 간질환, 선천성대사성 간질환, 급성간염, 만성간염, 간경변증, 간경화, 지방간, 간암을 포함한다.

이하, 상기 자색고구마 색소 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 자색고구마 추출물은, 생 자색고구마를 세절하여 무게(kg)의 약 1배 내지 20배, 바람직하게는 약 3배 내지 10배의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 에탄올로, 20℃ 내지 100℃, 바람직하게는 50℃ 내지 100℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간동안 냉침, 열수추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출방법을 이용하여 수득한 추 출액을 여과, 감압농축 또는 건조하여 수득할 수 있다.

상기 추출물을 100% 물에 20배(w/v) 희석한 후 HP-20 수지가 채워진 관을 통과시켜, 색소가 HP-20 수지에 결합할 수 있도록 하였으며, HP-20 수지에 결합한 자색의 색소를 다시 C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 에탄올을 이용하여 재 추출 한 후 감압, 농축 및 건조를 통해 순수 자색고구마 색소 추출물을 수득할 수 있다. 구입한 자색 색소분말을 정량적으로 취하여 흡광도 532 ㎚으로 측정하여 검량선을 작성하였고, 이 검량선을 이용하여 자색색소 추출물의 색소함량을 측정하여 순도 98％ 이상의 것을 이용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명은 상기 제법으로 얻어진 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 함유하고, 간질환의 예방 및 치료에 효과적인 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 자색고구마 색소 추출물을 0.01 ~ 99.9% 함유하는 것이 바람직하고, 0.1 ~ 90% 함유하는 것이 더욱 바람직하다. 그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 자색 고구마 색소 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 포함 하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 10 내지 1,000 mg/kg으로, 바람직하게는 10 내지 100 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 간질환의 예방의 효과를 나타내는 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 본 자색고구마 색소 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 자색고구마 색소 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 추출물은 간질환의 예방을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 자색 고구마 추출물의 제조

1-1. 자색고구마 조추출물의 제조

경남 함양군에서 제공한 목포 29호 자색고구마 육질전체 100g을 세절하여 20％ 에틸 알콜에 침지시킨 후 실온에서 추출액을 수득하고, 다시 에틸 알콜을 가하여 2회 더 추출하였고, 상기 각 추출액을 여과한 후, 여과액을 혼합하였다. 상기 에탄올 추출물을 감압, 농축 및 건조하여 총 추출물 12.3g을 수득하였다.

1-2. 자색고구마 색소 추출물의 제조

상기 실시예 1-1의 조추출물을 100% 물에 20배(w/v) 희석한 후 HP-20 수지가 채워진 관을 통과시켜, 색소가 HP-20 수지에 결합할 수 있도록 하였다. HP-20 수지에 결합한 자색의 색소를 다시 70% 에틸 알콜을 이용하여 제 추출 한 후 감압, 농축 및 건조를 통해 순수 자색고구마 색소 추출물 2.5 g 얻었다.

참고예 1. 실험동물 및 처리

실험동물은 (주)대한바이오링크로부터 구입한 SPF(특정병원균미감염) ICR(Institute of Cancer Research) 생후 8주된 25~30g의 수컷 마우스(mouse)를 사용하였고, 사료 (purina korea)와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였으며, 사육장의 온도는 21~24℃, 상대습도는 40~80%로 유지하였다. 또한 12 시간마다 낮과 밤이 반복되도록 사육장내 빛을 조절하였다.

아세트아미노펜 (Acetaminophen, APAP), 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 (alanine amino transferase, ALT)와 아스파레이트 아미노 트렌스퍼라제 (aspartate amino transferase, AST) 키트, 티오바비튜릭산 (Thiobarbituric acid, TBA), 프탈디알데하이드 (O-Phthaldiadehyde), 페닐메톡실 설포닐 플로라이드 (phenylmethoxyl sulfonylfloride)와 글루타티온 (Glutathione, GSH)은 시그마사 (Sigma chemical Co)에서 구입하였다.

실험예 1. 간 독성을 일으키는 물질에 대한 자색고구마 색소 추출물의 간 보호 효과

1-1. 자색고구마 색소 추출물 투여 및 화학물질들에 의한 간 손상 유발

실험동물 (ICR Mouse)에 자색고구마 색소 추출물을 200, 400, 800 mg/kg으로 생리 식염수(0.85％ NaCl)에 녹여 7일 동안 경구 투여하였다. 대조군은 생리 식염수(0.85％ NaCl)만을 경구 투여하였다. 각각의 실험군은 6마리의 동물을 사용하였다. 자색고구마 색소 추출물을 전 처리 한 후 아세트아미노펜 (APAP, 400 mg/kg)를 복강 투여하여 인위적인 간 손상을 유발시킨 다음, 18시간 지난 후에 마우스를 에테르로 마취 후 혈액과 간을 채취하였다.

1-2. 혈액 내 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 (ALT)와 아스파레이트 아미노 트랜스퍼 라제(AST)활성도 측정

간 손상시 혈액으로 유리되어 나오는 알라닌 아미노 트랜스퍼라제(ALT)와 아스파레이트 아미노 트랜스퍼라제(AST) 활성도 양을 라이만 플랭클린 (Reitman - Frankel)(J Ethnopharmacol. 66, pp 263-269, 1999; J Ethnopharmacol. 66, pp 355-361, 1999; J Nutr. Biochem. 11, pp 509-514, 2000) 방법에 준하여 측정하였다. 자색고구마 색소 추출물을 7일 동안 경구투여 후 아세트아미노펜을 복강투여로 처리하고 18시간 후에 심장으로부터 채취한 혈청을 ALT 및 AST 각각의 기질액과 37℃에서 30분 동안 반응시켜 피루빅산 (pyruvate)을 생성시킨 후, 발색액을 넣고, 20분 후 0.4 N-수산화나트륨 (NaOH)을 섞어서 동정색의 발색이 되면 505 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 표 1과 같다.

구 분	대조군	아세트 아미노펜 (APAP)
자색고구마 색소 추출물 (mg/kg)		0	200	400	800
혈청 ALT (Karmen Units/㎖)	3±1	372±44	93±12	37±10	15±5
혈청 AST (Karmen Units/㎖)	36±14	470±52	131±21	82±27	37±8

상기 표 1과 도 1은 아세트아미노펜에 의한 간 손상으로 간세포에서 혈청으로 유리된 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT)와 아스파레이트 아미노 트랜스퍼라제(AST) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 전 처리한 군들은 아세트아미노펜만을 단독 처리한 군에 비해 자색고구마 색소 추출물의 처리 농도에 의존적으로 간 손상 지표인 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT)와 아스파레이트 아미노 트랜스퍼라제(AST)활성이 감소하였으며, 특히 자색고구마 색소 추출물의 800 mg/kg을 전 처리한 군에서는 대조군과 유사한 정도의 간 보호 활성(ALT와 AST 활성 감소)을 나타내었다.

1-3. 간장의 지질과산화 측정

아세트아미노펜에 의하여 생성된 지질과산화에 대한 자색고구마 색소 추출물의 간 손상 보호효과를 확인하기 위해 간 100 mg을 10 ml의 완충액 (Tris-HCl)에 넣은 후 분쇄기 (homogenizer)로 부순 다음 과산화 지질의 분해 생성물인 말론디알데하이드 (malon-dialdehyde, MDA)의 양을 티오바비튜릭산 (2-Thiobarbituric acid, TBA)과 100℃에서 20분간 가열 반응시켜 생긴 티오바비튜릭산 색소를 532 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 표 2와 같다.

구 분	대조군	아세트 아미노펜 (APAP)
자색고구마 색소 추출물 (mg/kg)		0	200	400	800
간지질과산화 (MDA, nmol/g liver)	2.1±0.32	7.6±0.72	5.5±0.42	4.2±0.42	2.3±0.33

상기 표 2와 도 2는 아세트아미노펜에 의해 유발된 지질과산화 수준을 측정한 결과로 자색고구마 색소 추출물을 전 처리한 군들이 아세트아미노펜만을 단독 처리한 군에 비해 지질과산화 수준이 농도 의존적으로 감소하였으며, 자색고구마 색소 추출물을 800 mg/kg으로 전 처리한 경우 대조군과 유사한 정도의 간 보호 활성 (지질과산화 수준 억제)을 나타내었다.

실험예 2. 간 손상물질에 의해 감소된 글루타티온 ( Glutathione , GSH ) 양 회복

적출한 간을 증류수로 씻은 후에 잠시 건조 후 무게를 잰 다음 간의 일부분을 사용하여 글루타티온 양을 측정한다. 그 방법으로는 적출한 간 100 mg을 0.02M EDTA에 넣은 후 분쇄기 (Homogneizer)를 이용하여 조직을 잘게 부순다. 이 수용액을 12000 rpm에서 30분간 원심분리한 후 상등액 100 ul만 취한다. 이 상등액에 1.8 ml 포스페이트-이디티에이 (phosphate-EDTA) 완충액과 프탈디알데하이드 (O-Phthaldiadehyde) 100 ul를 넣은 후, 15분 후에 분광광도계(spectrophotometer)로 412 nm에서 흡광도를 측정한다. 그 결과는 표 3과 같다.

구 분	대조군	아세트 아미노펜 (APAP)
자색고구마 색소 추출물 (mg/kg)		0	200	400	800
GSH (μmole/g liver wt.)	8.1±0.88	3.6±0.42	5.2±0.45	6.5±0.71	8.3±0.93

상기 표 3과 도 3은 자색고구마 색소 추출물이 간 조직 내에서 아세트아미노펜 해독작용으로 소실된 글루타티온 결손 양의 증가효과를 확인하기 위해 간 조직 내 글루타티온(GSH) 양을 측정한 결과, 자색고구마 색소 추출물을 전 처리한 군들이 아세트아미노펜만을 처리한 군에 비해 농도 의존적으로 증가하였으며, 특히 자색고구마 색소 추출물 800 mg/kg을 전 처리한 경우 대조군의 글루타티온 양과 유사하게 측정되었다.

실험예 3. 간독성 유발물질의 대사활성에 관련된 시토크롬 P450 ( cytochrome P450 ) 약물대사 효소활성도 변화조사

3-1. 세포내 활성실험(in vivo)을 위한 실험동물 처리 후 마이크로좀 (microsome) 분리

자색 고구마 색소 추출물을 200, 400, 800 mg/kg으로 7일간 경구 투여한 간 100 mg을 10 ml의 호모게나이저 용액 (homogenizer buffer)에 넣은 후 분쇄기 (homogenizer)를 이용하여 조직을 잘게 부순다. 이 수용액을 9,000 xg에서 4℃ 30 분간 원심분리한 후, 상등액 만을 다시 초 원심분리 튜브 (ultracentrifuge tube)에 옮긴 후 100,000 xg에서 4℃ 한 시간 초 원심분리를 하였다. 초 원심분리 한 후 상등액인 시토졸 (cytosol)을 새 마이크로센트리퓨즈 튜브 (microcentrifuge tube)에 옮기고, 침전된 펠릿 (microsome)을 저장용액 (storage buffer ; 호모게나이저 용액 에 10% 글리세롤을 혼합한 용액) 1 ml을 넣고 피펫을 이용해서 잘 부유시킨 후 새 마이크로센트리퓨즈 튜브 (microcentrifuge tube)에 옮겨서 사용시까지 -80℃에서 보관하였다.

3-2. 시토크롬 P450 (cytochrome P450) 1A1 약물대사 효소에 대한 특이적 효소반응인 EROD (7-ethoxyresorufin- O -dealkylase) 효소 활성도 측정

0.1 M 인산칼륨(Potassium Phosphate, pH 7.4)에 2 mg/ml의 소혈청 단백질(bovine serum albumin), 10 ㎛ 디쿠마롤 (Dicoumarol), NADPH 재생계 (degeneration system) (5 mM 글루코스-6 포스페이트 (glucose-6-phospate), 5 unit/ml 글루코스-6-포스페이트 디하이드로제나제 (glucose-6-phospate dehydrogenase)), 10 ㎛ NADPH, 2.5 ㎛ 에톡실레졸루핀 (7-ethoxyresorufin)과 마이크로좀 (Microsome) 시료를 혼합한 후에 37℃에서 20분간 반응시켰다. 반응 후 형성된 레졸루핀 (resorufin)은 발광 (excitaion) 파장 550 nm, 방출 (emission) 파장 585 nm에서 형광분석측정기 (Flourometer)로 측정했다. 마이크로좀 시료내의 단백질의 농도는 로리 등의 방법으로 결정했다(J Ethnopharmacol. 66, pp 263-269, 1999; J Nutr. Biochem. 14, pp 452-458, 2003; Toxicon. 42, pp 367-372, 2003). 그 결과는 표 4와 같다.

구 분	대조군	자색고구마 색소 추출물 (㎎/㎏)
		200	400	800
EROD 활성 (nmole/mg protein/min)	14.34±0.96	12.26	6.48	4.14

상기 표 4와 도 4는 간장내로 유입된 아세트아미노펜 (Acetaminophen)을 비롯한 간 손상 화학물질들의 간 손상을 유발시키는 대사체들의 생성에 관여하는 간장내의 대사효소 P450 1A1에 대한 영향을 조사한 것으로, 아세트아미노펜의 대사체인 아세틸벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine)으로 전환시키는 효소 P450 1A1의 활성을 측정하기 위하여 P450 1A1에 특이적인 효소반응인 EROD (ethoxyresorufin O-deethylase) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 간장내의 EROD 활성이 감소하였다.

3-3. 시토크롬 P450 ( cytochrome P450 ) 2 E1 약물대사 효소에 대한 특이적 효소 반응인 AH(aniline hydroxylase) 효소 활성도 측정

아닐린 (aniline, 5∼20 mM)과 10 ㎛ NADPH, NADPH 재생산 시스템 (regenerating system) 및 마이크로좀 시료를 0.1 M 포타슘포스페이트 완충액 (potassium phosphate buffer, pH 7.4)에 혼합한 후 37 ℃ 항온 수조 (shacking water incubator)에서 20 분동안 반응시킨 다음, 20 % TCA를 가하여 반응을 종결시켰고 5 % 페놀과 2.5 N 수산화나트륨 (NaOH)을 가하여 혼합한 다음, 2.5 N 탄산나트륨 (Na₂CO₃)을 가하여 30분 동안 실온에서 방치하면서 발색 시켰다. 630 nm에서 흡광도를 측정하고 하이드로실 아닐린 (4-hydroxyaniline) 검량선으로부터 활성도를 계산했다. 그 결과는 표 5과 같다.

구 분	대조군	자색고구마 색소 추출물 (㎎/㎏)
		200	400	800
AH 활성 (nmole/㎎ protein/min)	11.34±1.2	6.23±0.71	4.16±0.33	2.65±0.32

상기 표 5와 도 5는 간장내로 유입된 아세트아미노펜 (Acetaminophen)을 비롯한 간 손상 화학물질들의 간 손상을 유발시키는 대사체들의 생성에 관여하는 간장내의 대사효소 P450 2E1에 대한 영향을 조사한 것으로, 아세트아미노펜의 대사체인 아세틸벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine)으로 전환시키는 효소 P450 2E1의 활성을 측정하기 위하여 P450 2E1에 특이적인 효소반응인 AH (aniline hydroxylase) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 간장내의 AH 효소 활성이 감소하였다.

3-4. 시토크롬 P450 (cytochrome P450) 2E1 약물대사 효소 발현 변화 조사

자색고구마 색소 추출물의 간 내 약물 대사 효소 시토크롬 P450 2E1 발현에 대한 영향을 조사하기 위하여 자색고구마 색소 추출물을 처리한 간에서 분리한 마이크로좀 (microsome)을 이용하여 시토크롬 P450 2E1에 대한 항체를 이용하여 웨스턴 블롯 (Western blot)을 수행하였다. 결과는 도 6과 같다. 도 6은 간장내로 유입된 아세트아미노펜 (Acetaminophen)을 비롯한 간 손상 화학물질들의 간 손상을 유발시키는 대사체들의 생성에 관여하는 간장내의 대사효소 P450 2E1 효소발현에 대한 영향을 조사한 것으로, 아세트아미노펜의 대사체인 아세틸벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine)으로 전환시키는 효소 P450 2E1의 발현이 자색고구마 색소 추출물의 처리 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다. 베타-액틴(β-actin)은 P450 2E1 단백질 발현에 대한 대조군으로 사용하였다.

3-5. 세포외 활성실험(in vitro)을 위한 실험동물 처리

실험동물은 (주)대한바이오링크로부터 구입한 SPF(특정병원균미감염) (Sprague-Dawley ; SD) 생후 8주된 250~280g의 수컷 랫트(rat)에 정상군은 무 처리 하였으며, 간장내의 P450 1A1 효소 유도는 베타-나프타플라본 (β-napthaflavone)을 그리고 P450 2E1 유도는 피리딘 (pyridine)을 3일 복강 투여하였다. 4일째, 랫트를 에테르로 마취 후, 간을 적출하여 위에서의 방법과 동일하게 간장내의 마이크로좀을 분리하고 사용시까지 -80℃에서 보관하였다.

3-6. 세포외 활성실험에서의 시토크롬 P450 (cytochrome P450) 1A1 약물대사 효소에 대한 특이적 효소 반응인 EROD (7-ethoxyresorufin-O-dealkylase) 효소 활성도 측정

세포내 활성실험에서의 EROD 활성도를 측정한 방법과 동일한 방법으로 실험을 수행하였다. 그 결과는 표 6, 도 7과 같다.

구 분	대조군	자색고구마 색소 추출물 (㎍/㎖)
		200	400	800
EROD 활성 (nmole/mg protein/min)	6.34±0.67	5.33±0.61	3.26±0.36	2.55±0.32

상기 표 6과 도 7은 간장내로 유입된 아세트아미노펜 (Acetaminophen)을 비롯한 간 손상 화학물질들의 간 손상을 유발시키는 대사체들의 생성에 관여하는 간장내의 대사효소 시토크롬 P450 1A1 효소활성에 대한 영향을 조사한 것으로, 아세트아미노펜의 대사체인 아세틸벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine)으로 전환시키는 효소 P450 1A1의 활성을 측정하기 위하여 정상 간으로부터 분리된 마이크로좀에 자색고구마 색소 추출물을 처리한 후 P450 1A1에 특이적인 효소반응인 EROD (ethoxyresorufin O-deethylase) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 EROD 효소 활성이 감소하였다.

구 분	베타-나프타플라본 (β-napthaflavone) 유도 간장 마이크로좀
자색고구마 색소 추출물 (㎍/㎖)	0	200	400	800
EROD 활성 (nmole/mg protein/min)	36.42±2.13	19.25±0.52	15.37±0.11	10.74±3.21

상기 표 7과 도 8은 시토크롬 P450 1A1 효소를 유도하는 베타-나프타플라본을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀에 세포외 활성실험에서의 자색고구마 색소 추출물에 의한 간 대사효소 시토크롬 P450 1A1 효소활성에 대한 영향을 조사한 것으로, P450 1A1에 특이적인 효소반응인 EROD (ethoxyresorufin O-deethylase) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 EROD 효소 활성이 감소하였다.

3-7. 세포외 활성실험에서의 시토크롬 P450 (cytochrome P450) 2E1 약물대사 효소에 대한 특이적 효소 반응인 AH (aniline hydroxylase) 효소 활성도 측정

세포내 활성실험에서의 AH 활성도를 측정한 방법과 동일한 방법으로 실험을 수행하였다. 그 결과는 표 8및 도 9와 같다.

구 분	대조군	자색고구마 색소 추출물 (㎍/㎖)
		200	400	800
AH 활성 (nmole/㎎ protein/min)	10.32±1.21	6.21±0.72	5.34±0.63	3.93±0.44

상기 표 8과 도 9는 간장내로 유입된 아세트아미노펜 (Acetaminophen)을 비롯한 간 손상 화학물질들의 간 손상을 유발시키는 대사체들의 생성에 관여하는 간장내의 대사효소 시토크롬 P450 2E1 효소활성에 대한 영향을 조사한 것으로, 아세트아미노펜의 대사체인 아세틸벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine)으로 전환시키는 효소 P450 2E1의 활성을 측정하기 위하여 정상 간으로부터 분리된 마이크로좀에 자색고구마 색소 추출물을 처리한 후 P450 2E1에 특이적인 효소반응인 AH (aniline hydroxylase) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 AH 효소 활성이 감소하였다.

구 분	피리딘 (pyridine) 유도 간장 마이크로좀
자색고구마 색소 추출물 (㎍/㎖)	0	200	400	800
AH 활성 (nmole/㎎ protein/min)	28.37±3.92	13.72±2.12	10.28±1.75	7.31±0.84

상기 표 9와 도 10은 시토크롬 P450 2E1 효소를 유도하는 피리딘을 처리한 실험동물의 간에서 분리한 마이크로좀에 세포 외 활성실험에서의 자색고구마 색소 추출물에 의한 간 대사효소 시토크롬 P450 2E1 효소활성에 대한 영향을 조사한 것으로, P450 2E1에 특이적인 효소반응인 AH (aniline hydroxylase) 활성도를 측정한 결과 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 AH 활성이 감소하였다.

실험예 4. 간독성 유발물질의 체외 배출과 관련된 글루타티온-S-트란스페라제((glutathione-S-Transferase ; GST) 효소 활성도 변화 조사

초 원심 분리하여 -80℃에서 보관하였던 간장의 시토졸 (cytosol)을 4℃에서 녹인 후에 글루타티온-S-트란스페라제 (glutathione-S-Transferase) 효소 활성도를 측정하였다. 시토졸 10㎕, 0.1M 인산칼륨 (0.1M potassium phosphate) 90 ㎕, 10mM GSH 50 ㎕, 10mM 시디엔비(cDNB; 1-chloro-2,4-dinitrobenzene) 50 ㎕를 혼합한 후에 37 ℃ 에서 반응시키면서, 5분 간격으로 15분 동안 분광광도계 (spectrophotometer)로 340 nm에서 흡광도를 측정하였다. 15 분 후에 4℃에서 5분간 방치하여 반응을 정지한 후, 로리 등의 방법으로 단백질을 정량하였다 (J Ethnopharmacol. 66, pp 263-269, 1999; J Nutr. Biochem. 14, pp 452-458, 2003; Toxicon. 42, pp 367-372, 2003). 15분 정량 값에서 5분 정량 값을 빼준 후, 시토졸 (cytosol) 내의 글루타티온-S-트란스페라제(glutathione-S-Transferase)의 활성도를 계산하였다. 그 결과는 표 10과 같다.

구 분	대조군	자색고구마 색소 추출물 (㎎/㎏)
		200	400	800
GST 활성 (nmole/㎎ protein/min)	98±10.2	224±33.2	316±43.4	268±62.4

상기 표 10과 도 11은 간장 내로 유입된 아세트아미노펜 (acetaminophen)을 비롯한 간 손상 화학물질들의 간 손상을 유발시키는 대사체들과 간장내의 글루타티온 (glutathione)과의 포합 (conjugation)반응을 통한 체외배설에 관여하는 간장내의 제2상 (Phase II) 대사효소 글루타티온-S-트란스페라제(glutathione-S-Transferase)의 활성에 대한 자색고구마 색소 추출물의 영향을 조사한 것으로 자색고구마 색소 추출물을 처리한 군들은 처리 농도에 의존적으로 간장내의 글루타티온-S-트란스페라제(glutathione-S-Transferase) 효소 활성이 증가함을 확인하였다.

위의 결과들을 종합해 볼 때, 아세트아미노펜에 의한 간세포 손상이 자색고구마 색소 추출물에 의해 회복됨을 혈청 내 효소들 (ALT, AST)과 간 세포내 지질과산화 수준을 통해 확인하였다. 또한 아세트아미노펜에 의해 생성된 간 독성 물질인 아세틸-파라-벤조퀴논이민의 세포외의 배출촉진과 관련된 간 손상을 방지하는 제2상 대사효소인 글루타티온-S-트란스페라제의 효소활성이 자색고구마 색소 추출물에 의해 증가되는 것이 확인하였다.

이러한 대사경로를 기초로 하여 자색고구마 색소 추출물의 회복 기작을 시토크롬 P450의 효소들과 글루타티온 결손효과를 조사한 결과로 먼저 마이크로좀내 P450 1A1 과 P450 2E1의 효소활성이 자색고구마 색소 추출물에 의해 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 아세트아미노펜에 의한 아세틸벤조퀴논 이민이 생성이 감소하여 간 독성을 저해한다고 추정할 수 있다.

이와는 별도의 해독과정으로는 글루타티온이 아세틸벤조퀴논 이민과 결합하여 해독하는 과정이 있다. 자색고구마 색소 추출물의 경우는 글루타티온의 양이 농도 의존적으로 증가함을 관찰하였다. 다만, P450 1A1와 P450 2E1의 효소활성의 저해로 아세틸벤조퀴논 이민생성이 저해되고 글루타티온과 아세틸-파라-벤조퀴논 이민 결합이 줄어들어, 간에 존재하는 글루타티온의 양의 결손을 줄임도 관찰할 수 있었다.

제제예 1. 주사제제의 제조

실시예 1의 자색고구마 색소 추출물.............10 mg

소디움 메타비설파이트.........................3.0 mg

메틸파라벤...................................0.8 mg

프로필파라벤.................................0.1 mg

주사용 멸균증류수..............................적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 2ml로 한 후, 2ml 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 1의 자색고구마 색소 추출...............200 mg

유당..........................................100 mg

전분..........................................100 mg

스테아린산 마그네슘.............................적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캡슐제의 제조

실시예 1의 자색고구마 색소 추출물..............10 mg

유당...........................................50 mg

전분...........................................50 mg

탈크............................................2 mg

스테아린산 마그네슘.............................적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 액제의 제조

실시예 1의 자색고구마 색소 추출물...........1000 mg

설탕...........................................20 g

이성화당......... .............................20 g

레몬향.........................................적량

정제수를 가하여 전체 1000ml 로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 5. 건강 식품의 제조

실시예 1의 자색고구마 색소 추출물 ..........1000 mg

비타민 혼합물..................................적량

비타민 A 아세테이트...........................70 ㎍

비타민 E.....................................1.0 mg

비타민 B1...................................0.13 mg

비타민 B2...................................0.15 mg

비타민 B6....................................0.5 mg

비타민 B12...................................0.2 mg

비타민 C......................................10 mg

비오틴........................................10 ㎍

니코틴산아미드...............................1.7 mg

엽산..........................................50 mg

판토텐산 칼슘................................0.5 mg

무기질 혼합물..................................적량

황산제1철...................................1.75 mg

산화아연....................................0.82 mg

탄산마그네슘................................25.3 mg

제1인산칼륨...................................15 mg

제2인산칼슘...................................55 mg

구연산칼륨....................................90 mg

탄산칼슘.....................................100 mg

염화마그네슘................................24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 6. 건강 음료의 제조

실시예 1의 자색고구마 색소 추출물 ..........1000 mg

구연산......................................1000 mg

올리고당......................................100 g

매실농축액......................................2 g

타우린..........................................1 g

정제수를 가하여 전체.........................900 ml

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 자색고구마 색소 추출물은 아세트아미노펜과 같은 외부 물질에 의해 손상된 간세포를 회복시키는 작용을 나타내어, 간 질환의 예방 또는 치료용 조성물로, 독성이 없는 천연약제로 구성된 의약품 및 건강기능식품으로 사용할 수 있다.

Claims (7)

1. 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 함유하는 간질환 예방 및 치료용 약학조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 자색고구마는 자미(목포 29호), 보라미(목포 35호) 또는 신자미(목포 38호) 품종인 약학조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 극성용매에 가용한 추출물인 약학조성물
4. 제 1항에 있어서, 상기 간질환은 자가면역성 간질환, 약물유인성 간질환, 알코올성 간질환, 감염성 간질환, 선천성대사성 간질환, 급성간염, 만성간염, 간경변증, 간경화, 지방간 또는 간암임을 특징으로 하는 약학조성물.
5. 제 1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.01 ~50%을 포함하는 약학조성물.
6. 간 질환의 예방 또는 개선 효과를 나타내는 자색고구마 색소 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품.
7. 제 6항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태인 건강기능식품.

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